Возрастные особенности хроматина тканей с различной митотической активностью

Мозжухина, Татьяна Георгиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Возрастные особенности хроматина тканей с различной митотической активностью
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мозжухина, Татьяна Георгиевна

ВЕДЕНИЕ

ПАВА I. ИЗМЕНЕНИЯ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ ХРОМАТИНА ПРИ

СТАРЕНИИ /Обзор литературы/. II

1.1. Состав и структурная организация хроматина . II

1.2. Возрастные изменения соотношений основных компонентов хроматина.

1.3. Возрастные изменения структуры хроматина

1.4. Возрастные изменения гистонов и негистоновых белков хроматина

1.4. Возрастные изменения матричной активности зфомати

ПАВА П. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ПАВА Ш. СВОЙСТВА АКТИВНОЙ И НИЗК0АКГИВН0Й ФРАКЦИЙ ХРОМАТИНА ИНТАКТНОЙ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ СТАРЕНИИ

3.1. Макромолекулярный состав фракций хроматина печени взрослых и старых крыс

3.2. Физико-химические свойства фракций хроматина печени взрослых и старых крыс

3.2.а. Электрофоретический анализ

3.2.6. Термоденатурация.

3.3. Включение меченого предшественника в РНК фракций хроматина печени взрослых и старых крыс

3.4. Обобщение результатов

3.5. Выводы

ПАВА 1У. СВОЙСТВА АКТИВНОЙ И НИЗКОАКТИВНОЙ ФРАКЦИЙ ХРОМАТИНА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕЙ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ СТАРЕНИИ.

4.1. Зависимость уровня включения меченого предшествен

-3Стр. ника в РНК хроматина от времени регенерации печени взрослых и старых крыс

4.2. Макромолекулярный состав фракций хроматина регенерирующей печени взрослых и старых крыс

4.3. Физико-химические свойства фракций хроматина регенерирующей печени взрослых и старых крыс

4.3.а. Электрофоретический анализ

4.3.6. Термоденатурация

4.4. Включение меченого предшественника в РНК фракций хроматина регенерирующей печени взрослых и старых крыс в период активации транскрипции

4.5. Обобщение результатов

4.6. Выводы. ава у. свойства активной и низкоактивной фракций хроматина слизистой тонкого кишечника крыс при старении

5.1. Макромолекулярный состав фракций хроматина слизистой тонкого кишечника взрослых и старых крыс

5.2. Физико-химические свойства фракций хроматина слизистой тонкого кишечника взрослых и старых

5.2.а. Электрофоретический наллиз

5.2.6. Термоденатурация

5.3. Включение меченого предшественника в РНК фракций хроматина слизистой тонкого кишечника взрослых и старых крыс

5.4. Обобщение результатов

5.5. Выводы.

ШШЧЕНИЕ

УВОда.

ЖОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Возрастные особенности хроматина тканей с различной митотической активностью"

Старение целостного организма обусловлено специфическими из-энениями функций составляющих его клеток. В различных органах и канях выраженность этих изменений и их направленность во многом переделяется сдвигами в реализации генетической информации и регу-аровании ядерного генома /В.В.Фролькис, 1975/.

Поэтому изучение возрастных особенностей структуры и метабо-явма отдельных компонентов генетического аппарата клетки - ДНК, Ж и белков, исследование их изменений и взаимодействия в едином адмолекулярном комплексе - зфоматине, является центральной задачей кспериментальной геронтологии.

Исследованиями многих авторов были установлены значительные зменения физико-химических свойств и состава хроматина, такие как эвышение термостабильности препаратов хроматина некоторых тканей гарых животных, увеличение прочности связи гистонов и негистоно-ах белков с ДНК и ряд других изменений, которые, как предполагает-я, являются результатом модификации структуры хроматина при старели /Г.Д.Бердышев, 1972, 1977; В.Н.Никитин, 1972; Hahn , 1966,1969, Э70 ;Pyhtiia , Sherman , 1968; Cutler , 1974 и др./. Следствием озрастной реорганизации хроматина является снижение его ^ункцио-альных возможностей в физиологических условиях и при различных, эздействиях /Г.Д.Бердышев, 1970, 1972; Hill , 1976 ;Richardaon, Э81, 1982 и др./.

Экспериментальные данные, полученные при изучении свойств роматина цри старении,не всегда однозначны, а во многих случаях противоречивы,что, по-видимому, связано со структурно-функцио-альной гетерогенностью исследуемого объекта, тканевыми особенно-гями препаратов хроматина, а также различиями в условиях экспери-энтов и подборе возрастных групп. Функциональная гетерогенность эоматина определяет специфику обмена различных типов клеток: ДНК зех клеток одинакова, однако считывание генетической информации в азных клетках происходит только с тех последовательностей, кото-ле обеспечивают функцию данного типа клеток. Поэтому хроматин в оцрах клеток представлен двумя фракциями - активно транскрибируе-эй и репрессированной.

Цитологические и физиологические исследования свидетельству-р о том, что разные ткани организма "стареют" с различной скоро-гью. До настоящего времени по существу не решен вопрос о значимого в процессе старения целостного организма возрастных изменений эставляющих его клеточных популяций, различающихся по уровню мито-1ческой активности. По мнению одних исследователей, старение оп-эделяется изменением нормальной функции постмитотических клеток результате накопления продуктов метаболизма, дефектных макромо-экул и т.д., в то время как пролиферирующие клетки постоянно об-эвляются „и клеточные элементы, нарушающие клеточный метаболизм, шминируются. Противоположная точка зрения отстаивает в качестве эрвопричины старения снижение способности делящихся клеток к ролиферации /Evans, 1979; Shneider , 1979/,

Как правило, исследования генетического аппарата делящихся юток направлены на изучение процесса репликации, неделящихся -эанскрипции. Однако для того, чтобы установить вклад каждой из 1еточных популяций в процесс старения, необходимо детальное срав-1тельное исследование, сопоставление возрастных изменений генети-эского аппарата клеток с различной митотической активностью» Важ-)е значение в этом плане могут иметь исследования не отдельных зеньев генома, а хроматина как целостной регулирующей системы, ютемный подход в изучении возрастных изменений генома должен зодиться к изучению структуры и функции хроматина.

Все это обосновывает необходимость исследования структуры и зойств активной и неактивной фракций хроматина для выяснения мно-1х вопросов функционирования и регулирования генетического аппа-1та в процессе старения.

Дель и задачи исследования. Целью настоящего исследования зилось сравнительное изучение структурно-функциональных особенно-рей активной и низкоактивной фракций хроматина тканей с различной готической активностью при старении.

Фракции хроматина получали из ядер тканей, значительно разли-1ющихся по митотической активности - интактной печени /ткани с 1зкой митотической активностью/ и слизистой тонкого кишечника скани с высокой митотической активностью/, а также из ядер печени, симулированной к пролиферации частичной гепатэктомией.

Выбор регенерирующей печени как объекта исследования был обу-повлен не только возможностью сравнивать состояние хроматина по-эящихся /интактная печень/ и пролиферирующих /регенерирующая пе-энь/ клеток печени, но и необходимостью изучения возрастных осо-знностей функционирования хроматина в условиях тканевой регенера-Л1Л и повышенной функциональной нагрузки на орган, что может иметь зачение также для понимания проблем физиологии и практической эдицины.

В конкретные задачи исследования входило изучение и сравни-эльная характеристика следующих свойств активной и низкоактивной эакций хроматина интактной, регенерирующей печени и слизистой энного кишечника взрослых /6-8 мес./ и старых /24 - 26 мае./ рыс:

I/ количественного соотношения фракций хроматина;

2/ соотношения основных компонентов фракций хроматина: ДНК, Ж, суммарных, негистонсвых белков и гистонов;

3/ особенностей нуклеосомной организации (фракций хроматина;

4/ процесса тепловой денатурации фракций хроматина;

5/ особенностей включения in vivo меченого предшественника РНК фракций хроматина.

Научная новизна результатов исследования. В работе впервые юведено детальное сравнительное изучение и выявление особенно-:ей структуры и функциональных свойств хроматина тканей с различ-)й митотической активностью при старании.

Установлено, что независимо от возраста зфоматин тканей с выжой митотической активностью - регенерирующей печени и слизистой шкого кишечника по соотношению активной и низкоактивной фракций,

2+ 2+ фактеру тепловой денатурации и расщепления Са , MJ -зависимой здонуклеазой различается более значительно,чем хроматин интактной регенерирующей печени. Очевидно, особенности структурной органи-щии хроматина в большей мере зависят от функциональной специфи-1 ткани, чем от ее митотической активности.

Выявлено два независимых процесса, направленных на снижение щкциональной активности хроматина при старении. Первый характери-^ется частичным снижением активности хроматина, обусловленным пе-зходом части активного хроматина на более низкий уровень функцио-фования за счет уменьшения доли активной фракции при старении. ?о изменение наблюдается как в ткани с низкой митотической актив-зстью - печени, так и в ткани с высокой митотической активностью -шзистой тонкого кишечника. Второй состоит в снижении общей функ-юнальной активности зфоматина, определяемой по уменьшению вклю-эния меченого предшественника в РНК обеих фракций хроматина. Он 5наруживается в ткани с низкой митотической активностью и отсутствует в ткани с высокой митотической активностью.

Установлена зависимость изменений функциональных свойств хроатина при старении и тканевых особенностей этих изменений от груктурной перестройки хроматина, которая выражается в увеличении гепени его компактизации на наднуклеосомном уровне и затрагиваю-9Й нуклеосомный уровень организации.

Получены новые данные о структурно-функциональных особенно-гях фракционированного хроматина регенерирующей печени в период ктивации транскрипции. Показано, что в активной и низкоактивной эакциях хроматина регенерирующей печени взрослых крыс происходит величение количества участков дестабилизированной, свободной от элков ДНК, цри этом сохраняется основной тип структурной органи-ации хроматина. При регенерации печени старых крыс наблюдается экомпактизация и дестабилизация хроматина, что приводит к нивели-ованию возрастных различий.

Теоретическое и практическое значение работы. В работе полу-ены экспериментальные доказательства изменения структурной орга-изации хроматина при старении.

Выявлены общие и специфические возрастные изменения свойств роматина тканей, различающихся по митотической активности.

Показано, что активация хроматина печени на ранних этапах эгенерации выражена в большей степени у старых животных, что ве-эт к нивелированию возрастных различий в свойствах хроматина ре-энерирующей печени.

Полученные в работе данные вносят вклад в систему представле-йй о молекулярных механизмах возрастных изменений генетического ппарата клеток и, в конечном итоге, могут явиться основой для по-зка экспериментальных подходов целенаправленного воздействия на родолжительность жизни животных.

Основные положения, выносящиеся на защиту

I. В хроматине клеток интактной печени /ткани с низкой митоической активностью/ и слизистой тонкого кишечника /ткани с вы-окой митотической активностью/ при старении происходит стабилиза-ия связей ДНК-белок, вызывающая компактизацию структуры хроматина а наднуклеосомном уровне и сопровождающаяся снижением доли транс-рипционно активной фракции хроматина,

2, Выраженность возрастных изменений структуры в большей сте^ зни проявляется в хроматине печени, что, по-видимому, обусловли-ает снижение с возрастом матричной активности хроматина этой тка-я. В хроматине слизистой изменений матричной активности при ста-энии не обнаружено,

3, На модели регенерирующей печени выявляются возрастные осо-энности перестройки хроматина при активации генома. Увеличение атричной активности хроматина регенерирующей печени взрослых жи-отных сопровождается изменением соотношения активный/низкоактив-ай хроматин и локальными изменениями структурной организации хро-атина. Увеличение матричной активности хроматина при регенерации вчени старых крыс выражено в большей степени, чем взрослых и свя-ано со значительной тотальной декомпактизацией хроматина,

4, Перестройка структуры хроматина регенерирующей печени стаях крыс ведет к нивелированию возрастных различий, наблюдавшихся хроматине интактной печени.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Мозжухина, Татьяна Георгиевна

-161 -выводы

1. Хроматин тканей как с низкой, так и с высокой митотиче-ской активностью у взрослых и старых крыс имеет ряд общих свойств, отличающих активную фракцию от низкоактивной: а/ доля активной фракции в тотальном хроматине относительно невелика; б/ активная фракция обогащена белками и РНК, имеет более низкую температуру плавления и более широкий температурный интервал плавления; в/ уровень включения меченого предшественшка в РНК активной фракции значительно /в 3 - 5 раз/ выше, чем в РНК низкоактивной.

2. Активной и низкоактивной фракциями хроматина свойственен нуклеосомный тип организации. Однако фракции различаются по характеру организации структур более высокого порядка.

3. Независимо от возраста животных, различия мезду свойствами хроматина /соотношение активной и низкоактивной фракций, харак

2+ 2+ тер термоденатурации фракций и расщепления Са** , Mg -зависимой эндонуклеазой/ слизистой тонкого кишечника и регенерирующей печени выражены значительно больше, чем между соответствующими свойствами хроматина интактной и регенерирующей печени. По-видимому, особенности структурной организации хроматина в большей мере зависят от функциональной специфики ткани, чем от ее митотической активности.

4. При старении в хроматине интактной печени и слизистой тонкого кишечника снижается доля активной фракции и, соответственно, увеличивается относительное количество ниэкоактивной.

5. Цри старении увеличивается степень компактизации хроматина печени и слизистой тонкого кишечника, о чем свидетельствует

2+ 2+ снижение доступности хроматина этих тканей к действию Сал , Mg6 -зависимой эндонуклеазы. В низкоактивном хроматине печени старых крыс по сравнению со взрослыми увеличивается размер выщепляемых эндонуклеазой фрагментов, что указывает на более глубокое, затра

- 162 гивагощев мвжнуклеосомное взаимодействие, уплотнение хроматина.

6. Фракции низкоактивного и активного хроматина печени и слизистой тонкого кишечника старых крыс имеют более высокую Тпл по сравнению со взрослыми. Увеличение Тпл активной фракции более выражено, в результате чего у старых крыс нивелируются различия между Тпл низкоактивной и активной фракций,

7. Анализ расцределения процента гипрехромизма при плавлении низкоактивной и активной фракций хроматина печени и слизистой позволяет констатировать при старении: а/ в хроматине печени и слизистой снижается количество участков нестабилизированной нуклео-сомной и линкерной ДНК; б/ в обеих фракциях хроматина печени и особенно слизистой увеличивается количество участков ДНК, стабилизированной остаточными белками; в/ в активной фракции хроматина печени увеличивается количество стабилизированной нуклеосом-ной ДНК.

8ф С возрастом снижается уровень включения меченого предшественника в РНК активной и низкоактивной фракций хроматина печени, а в хроматине слизистой тонкого кишечника уровень матричной активности не изменяется.

9. Возрастные изменения матричной активности хроматина и их тканевые особенности зависят от сдвигов в структурной организации хроматина, обусловленных изменением ДНК-белкового взаимодействия.

10. При регенерации печени старых крыс активация хроматина ведет к декомпактизации его структуры и, как следствие, нивелированию возрастных различий, наблюдающихся в хроматине интактной печени.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Важность и актуальность исследований механизмов возрастной модификации структуры и функции хроматина определяется центральной ролью генетического аппарата в обеспечении жизнедеятельности и регуляции функции клетки. В ядрах клеток хроматин представляет собой сложную надмолекулярную систему, структурная организация и взаимодействие компонентов которой специфически определяет основную функцию генома - хранение и передачу генетической информации, а их изменение является основным путем реализации регуляторных влияний.

Результаты многочисленных работ, посвященных изучению возрастных особенностей состава и метаболизма основных компонентов хроматина - ДНК, РНК и белков, позволили сделать вывод о том, что "печать возраста" обнаруживается не столько на макромолекулах, составляющих хроматин, сколько на самом хроматине как целостной надмолекулярной структуре /В.Н.Никитин, 1972, 1979/.

С возрастом в хроматине увеличивается прочность связи ДНК с гистонами и негистоновыми белками /zhelabovskaya,Berdyshev ,1972; В.Н.Никитин и соавт., 1976; Pyhtila, 1969 ;Hahn , 1970/. По цитологическим наблюдениям, в ядрах клеток старых животных и человека происходит гетерохроматизация, уплотнение хроматиновых нитей /В.М.Шапошников, 1978; Т.А.Лежава, 1979; Mysliwski et al. , 1977; ?anno , Nair , 1984/. Изменения при старении структуры хроматина соцровождаются снижением транскрипционной активности /Britton et al. , 1972; Castle et al. , 1978; Benson, 1978 и др./, нарушением контроля и регуляции дифференциальной активности генов /опо, Cutler, 1978; Florine et al., 1980/.

Однако остается еще много * нерешенных вопросов, связанных с выяснением причин найденных изменений, их последовательности и сонкретных молекулярных механизмов.

Следует подчеркнуть, что исследования свойств хроматина в зозрастном аспекте проводились главным образом на суммарном хро-аатине или ядрах. Однако известно, что хроматин функционально не-)днороден и представлен в ядре двумя фракциями - активно транскрибируемой и репрессированной. Исследование структуры и свойств этих фракций хроматина представляется важным и информативным для выяс-1бния причин, вызывающих изменение функции* хроматина при старении,.

Согласно сложившимся представлениям, одним из характерных свойств старения является его гетерохронность. К причинам, опреде-1яющим гетерохронность и гетеротопность возраетных изменений в эазных органах и тканях, относят различия в митотической активно-зти клеток, этих тканей. Сравнительный анализ возрастных изменений сроматина тканей, отличающихся по митотической активности, может зпособствовать выяснению причин гетерохронности старения, роли различных клеточных популяций в развитии процесса старения на >фовне целостного организма.

Все выше сказанное и определило направление и построение на-зтоящей работы, целью которой явилось, сравнительное изучение звойств активной и низкоактивной фракций хроматина тканей с различной митотической активностью при старении.

Источником хроматина служили следующие ткани: интактная печень /ткань с низкой митотической активностью/, регенерирующая печень /ткань со стимулированной пролиферацией/, слизистая тонкого кишечника /ткань с высокой митотической активностью/.

Для фракционирования хроматина использовали метод /Г.И.Чихиржина и соавт., 1976/, основанный на последовательной фрагмен

2+ 2+ гации ядерного хроматина активированной эндогенной Ca-Mj, -зависимой эндонуклеазой и ультразвуком с последующей экстракцией зракций хроматина раствором низкой ионной силы.

Следует подчеркнуть, что настоящий метод, как и существующие [ные методы фракционирования хроматина, не дает возможности полу-еить чистые, беспримесные фракции активного и неактивного хрома-'ина. Поэтому названия "активный" и "низкоактивный" относятся к зракциям, обогащенным той или иной формой хроматина. Основным кри-1 ерием активности при данном подходе служит обогащенность фракции ювосинтезированной РНК. Однако, по данным В.И.Миронова и соавт.

О I Г) ,

1983/, фракция отделяемая после фрагментации хроматина Са ависимой эндонуклеазой обеднена специфическими последовательно-;тями по сравнению с фракциями, более прочно связанными со струк-'урами матрикса.

Сравнительный анализ состава, структурной организации и функ-даональной активности активной и низкоактивной фракций хроматина [нтактной, регенерирующей печени и слизистой тонкого кишечника :рыс позволяет охарактеризовать особенности состояния хроматина I зависимости от митотической активности ткани и выявить специфичность возрастных изменений.

Согласно полученным данным, активный хроматин составляет мень-[ую часть тотального хроматина. В интактной печени фракция актив-юго хроматина составляет 24$ /18$/./Здесь и далее первая цифра вносится к параметрам хроматина тканей взрослых крыс, цифра в ;кобках - старых/. Стимуляция клеточной пролиферации частичной ■епатэктомией вызывает сдвиг в соотношении фракций хроматина. Мак-!Имальное увеличение доли активного хроматина совпадает с периодом гаксимальной транскрипции. Относительное содержание активного хро-[атина в этот период составляет 30$ /31$/. Полученные данные со-'ласуются с результатами, полученными В.С.Дашкевич и Т.В.Аршино-юй, 1977; Е.М.Лейкиной и соавт., 1973, которые, применив иной етод фракционирования также нашли увеличение доли активной фрак-щ хроматина в регенерирующей печени цри активации транскрипции,

В хроматине слизистой тонкого кишечника доля активной фракии почти в два раза ниже, чем в интактной и регенерирующей пече-и и составляет 14% /&%/. Очевидно, соотношение активный-низкоак-ивный хроматин в значительной мере зависит от спектра метаболиче-кой активности ткани. Неоднозначность различий в содержании актив-ого хроматина пролиферирующих клеток слизистой и регенерирующей ечени по сравнению с хроматином постмитотических клеток интакт-ой печени в известной мере может быть связано с тем, что деление леток регенерирующей печени частично синхронизовано, генетические роцессы в них однонаправлены, а деление клеток слизистой несин-ронно,

В настоящее время существуют различные предположения относи-ельно внутриядерной локализации участков активной транскрипции, дна из точек зрения связывает активный хроматин со структурами дерного матрикса. Тот факт, что для отделения фракции активного роматина необходима ультразвуковая обработка, свидетельствует о есном контакте активной фракции хроматина с внутриядерными струк-урами.

Для исследования структуры хроматина в последнее время успешо применяются методы, сочетающие специфическую фрагментацию хроатина различными нуклеазами с электрофоретическим анализом обра

2+ 2+ ующихся фрагментов. Са -зависимая эндонуклеаза вызывает межуклеосомный гидролиз хроматина с образованием набора фрагментов -труктурных субединиц хроматина нуклеосом и кратных им по размеру лигомеров. Используемый в настоящей работе метод фракционирования роматина позволяет анализировать особенности организации активной низкоактивной фракций. Результаты электрофоретического разделеия этих фракций указывают на то, что нуклеосомный тип организа-;ии присущ обеим фракциям. Низкоактивный хроматин интактной и реге-:ерирующей печени представлен серией фрагментов - нуклеосом и их лигомеров, количество которых /судя по площади электрофоретиче-ких зон/ характеризует равномерное расщепление эндонуклеазой про-вжуточного цродукта /5-7 нуклеосом/ на более мелкие олигомеры и скопление мононуклеосом. Фракция активного хроматина более гете-огенна и представлена высокополимерным наднуклеосомным комплек-ом /до 12 нуклеосом/ и набором фрагментов меньшего размера /от н до 7н/, распределение которых отличается меньшим содержанием :ономеров. 0 большей гетерогенности фракции активного хроматина видетельствует и более широкий интервал плавления этой фракции.

При сравнении электрофореграмм фракций хроматина интактной [ечени и слизистой тонкого кишечника обращает на себя внимание начительно большая фрагментированность преператов хроматина сли-истой /относительное содержание мономерных фрагментов в низкоак-ивной и активной фракциях хроматина этой ткани в 2 раза выше, чем | соответствующих фракциях хроматина печени/, что свидетельствует | более развернутой конфермации хроматина пролиферирующей ткани и [одтверждается результатами, полученными Е.П.Харченко и Й.П.Ашма-»иным /1978/ при электрофорезе эндонуклеазных фрагментов хромати-[а селезенки - ткани с высокой митотической активностью. Однако I регенерирующей печени различия в характере фрагментации хромати-[а эндонуклеазой по сравнению с интактной печенью очень незначи-■ельны и проявляются лишь в активном хроматине.

Фракция активного хроматина всех тканей характеризуется более (ысоким содержанием суммарных белков, главным образом за счет кис-юторастворимых и кислотонерастворимых негистонов, что определяет-:я функциональной спецификой активной фракции хроматина по сравнеганию с низкоактивной.

Значительное содержание суммарных кислоторастворимых белков, шмного превышающее известные по данным литературы значения отно-иения гистон/ДНК, в активном хроматине связано, как показали дан-ше электрофоретического разделения препарата тотальных кислото-эастворимых белков, с наличием в этом препарате большой и гетерогенной фракции кислоторастворимых негистоновых белков, составляющих около 30$ от общего количества кислоторастворимых белков. В трепаратах кислоторастворимых белков, выделенных из неактивного «роматина, также присутствует примесь негистоновых белков, но их количество и спектр намного меньше, чем в активном хроматине.

Несмотря на высокое содержание белков в активной фракции хроматина, Тпл ее ниже, чем неактивной фаркции, что указывает на боль-пую лабильность связи белков хроматина активной фракции с ДНК. Аналогичные данные были получены Reek et al. /1972/, Berkowitz , Doty /1975/ исследовавшими цроцесс термоденатурации активной и неактивной фракций хроматина, разделенных с помощью других методов.

Как известно, функциональный статус хроматина зависит от структурной организации и взаимодействия составляющих его компонентов. Установленная структурно-композиционная гетерогенность и специфичность фракционированного хроматина разных тканей определяет различия матричной активности хроматина этих тканей.

0 матричной активности хроматина судили по уровню включения in vivo меченого предшественника -оротовой кислоты в РНК фракций хроматина. Низкий уровень включения метки в РНК слизистой вызвал необходимость значительно увеличить дозу вводимого предшественника.

Интенсивность включения метки в РНК активного хроматина печени в 5 раз выше, чем в РНК низкоактивного. В регенерирующей пеени и слизистой это соотношение ниже и равно 3, Судя по увеличе-мю УР РНК при регенерации, более выраженному в низкоактивной фракции хроматина - 7,8 /11,3/ раза, чем в активной - 5 /7,3/ раза, из-[енения регуляции и состояния хроматина клеток, связанные со стиму-:яцией пролиферации, в большей степени проявляются в низкоактивной ракции хроматина. По мнению Sippei et al/1967/, в хроматине поко-щихся клеток преобладает транскрипция с уникальных последователь-юстей, в хроматине делящихся - повторяющихся, локализованных, как юлагает Nagi /1974/ в неактивном хроматине.

В печени старых крыс значительно снижается доля активного роматина /на 25% по сравнению со взрослыми/, что подтверждает данные, полученные ранее И.Ю.Хилобок и соавт. /1977/. Изменение >тносительного содержания активной фракции хроматина печени не !вязано с изменением растворимости хроматина и отражает действительное перераспределение ДНП между фракцией низкоактивного и активного хроматина, так как количество ДНК, остающейся в осадке посте экстракции обеих фракций хроматина не изменяется с возрастом.

Активация хроматина старых крыс при регенерации печени выражена в большей степени, чем у взрослых и приводит к увеличению до-ш активного хроматина почти в два раза /на 42% относительно ин-?актной печени/. В результате соотношение активный-низкоактивный фоматин утрачивает возрастные резличия.

Значительно /на 40%/ снижается содержание активного хромати-ia слизистой при старении:. Таким образом, несмотря на различия, эбусловленные функциональной спецификой ткани, соотношение актив-1ый - неактивный хроматин в печени и слизистой изменяются при старении однонаправленно - в сторону уменьшения активной фракции.

Исследование электрофоретических свойств фракционированного фоматина выявило особенности структурных переходов хроматина зри старении.

При анализе денситограмм /электрофореграмм/•низкоактивной и штивной фракций хроматина печени и слизистой обращает на себя знимание увеличение площади денситометрических пиков, соответствующих олигомерным фрагментам в препаратах хроматина старых жи-зотных. Расчет соотношения моно- и полимерных фрагментов в препара ?ах хроматина печени и слизистой показывает значительное уменыне-ше относительного количества мономерных и увеличение, количества I порядка олигомеров в обеих фракциях хроматина печени и слизис-?ой старых крыс по сравнению со взрослыми.

Судя по электрофоретической подвижности фрагментов ДНП и ДНК шзкоактивного хроматина,размер частиц, выщепляемых эндонуклеазой з хроматине интактной печени старых крыс несколько больше, чем у ззрослых. При электрофорезе фрагментов хроматина регенерирующей течени и слизистой возрастных различий в их подвижности не наблюдается. Обнаруженные изменения в количественном соотношении фрагментов хроматина и их подвижности свидетельствуют об уплотнении, хомпактизации структуры хроматина старых животных. Результатом ракого уплотнения является снижение доступности хроматина к действию эндонуклеазы. Однако не исключалась и другая возможность -знижение активности самого фермента в тканях старых животных. Для решения этого вопроса была исследована скорость выхода суммарных

2+ 2+ растворимых ДНП-фрагментов при активации Ca ,Mg -зависимой эн-цонуклеазы в пределах 30-минутной инкубации, обычно применяемой лри фракционировании хроматина. В ходе исследования было установлено отсутствие возрастных различий в активности фермента. Следовательно, изменение электрофоретических свойств элементов струк-гуры хроматина - нуклеосом, связано с модификацией собственно структуры хроматина. По сравнению с хроматином печени, изменения структурной организации хроматина слизистой выражены в меньшей lepe, а в хроматине регенерирующей печени возрастные изменения ie наблюдаются. Наши данные согласуются с результатами Zongza, lathias/1979/, обнаружившими увеличение с возрастом /в начальной :тадии онтогенеза/ длины повтора ДНК в хроматине трех типов клеток [ечени, что рассматривается авторами как результат функциональных [вменений хроматина с возрастом. Повышение устойчивости хроматина юзга при старении к экзогенным эндонуклеазам - микрококковой и [НКазе I было установлено Kanungo /1981/, а хроматина печени к о. р. ндогенной Са ,Мй -зависимой эндонуклеазе и ДНКазе I -Tas , ifaiford /1982 б/, что также согласуется с нашими данными и свидетельствует об изменении плотности упаковки хроматина печени станах животных на наднуклеосомном уровне. Следует отметить также, сто по данным Tas,Waiford /1982 а/ при исследовании хроматина ми-'отически активной ткани - селезенки, выраженность возрастных из-юнений была ниже, чем в печени, что так же, как и наши данные о :труктуре хроматина слизистой, указывает на меньшую подверженность :роматина митотически активных тканей к возрастным изменениям. По [нению авторов, в возрастной компактизации хроматина решающую роль [грает увеличение дисульфидных связей белков остова хроматина 'скэффолд белки/.

Возрастная компактизация хроматина интактной печени и слизистой обусловлена изменением взаимодействия ДНК и белков хроматина, • чем свидетельствует увеличение Тпл низкоактивной и активной фракций хроматина этих тканей. Следует отметить, что увеличение 'пл при старении выражено в большей степени в активной фракции, | результате чего различия в Тпл активной и низкоактивной фракций роматина печени и слизистой утрачиваются. Возможно, более выра-;енное изменение Тпл активной фракции хроматина связано с увели-юнием цри старении в этой фракции относительного содержания белка, ito может способствовать дополнительной стабилизации активного фоматина.

При анализе интегральных кривых плавления было установлено, ito в обеих фракциях хроматина интактной печени старых крыс снижен процент гиперхромизма в интервалах температур плавления не-5табилизированной и линкерной ДНК и значительно увеличен в облас-?и высоких температур, соответствующих плавлению ДНК, прочно связанной с белками. В активной фракции хроматина увеличен процент 'иперхромизма в интервале температур, соответствующих плавлению 1уклеосомной ДНК, стабилизированной внутринуклеосомными гистонами. J хроматине слизистой тонкого кишечника наиболее выраженные сдви-'И процента гиперхромизма наблюдаются в области температур плав-шния ДНК, связанной с остаточными белками.

Представляется интересным и то, что при плавлении хроматина югенерирующей печени распределение процента гиперхромизма практически не отличается от интактной печени, за исключением увели-1бния при регенерации процента гиперхромизма в интервале температур, соответствующих плавлению свободной дестабилизированной ДНК, ito так же, как и данные электрофореза, свидетельствуют о неиз-юнности общей организации хроматина при регенерации печени. Уве-шчение гиперхромизма в интервале температур плавления свободной ЩК свидетельствует об увеличении в хроматине участков ДНК, свободной от белков или, как полагают Defer et al. /1977/, о появле-1ии белков, дестабилизирующих вторичную структуру ДНК и, возможно, участвующих в активации транскрипции.

Распределение процента гиперхромизма при плавлении фракций фоматина регенерирующей печени старых крыс не отличается от ззрослых и, соответственно, значительно отличается от распределе-шя процента гиперхромизма хроматина интактной печени старых крыс. аким образом, данные изучения процесса термоденатурации хромати-ia регенерирующей печени крыс свидетельствуют о дестабилизации :роматина печени старых крыс при стимулированной активащи транс-:рипции.

Структурная организация хроматина на нуклеосомном и наднукле-юомном уровне определяется взаимодействием и взаиморасположением истонов и ДНК. Изменение взаимодействия гистонов и негистоновых елков с ДНК было найдено в экспериментах по солевой депротеини-ации и термоденатурации хроматина /Berdyshev,Zhelabovekaya ,1972/,

Что касается выяснения природы этих изменений и белков, мо-яфикация которых с возрастом приводит к изменению взаимодействия елок-ДНК, то данные и мнения по этому вопросу противоречивы /см, л.З/. Ответственными за упрочение связи с ДНК считали богатые ар-инином гистоны /образование дополнительных связей по гуанидино-ым группам Hahn , 1970/, богатые лизином гистоны /дополнительная вязь по аминогруппам лизина, изменение молекулярных форм гистона : I, /В.А.Бердников, 1976; Medvedev et al. , 1977, 1978/, изменено скорости и степени постсинтетических модификаций гистонов и егистоновых белков /А.И.Клименко и соавт,, I976;Kanungo et al. , 977, 1979/ и т.д. Единая точка зрения, подтвержденная воспроизво-имыми экспериментальными результатами, отсутствует.

Одним из наиболее распространенных подходов к анализу гисто-ов хроматина является электрофоретическое разделение препарата отальных гистонов, экстрагированных кислотой из хроматина, в раз-ичных системах ШАГ /с мочевиной, ДЦС натрия, тритоном и т.д./ исследование электрофоретических свойств индивидуальных фракций истонов.

В настоящей работе препараты тотальных гистонов, экстрагиро-анные из соответствующих фракций зфоматина, разделяли электрофоретически в блоке градиентного /10-20$/ полиакриламидного геля в зистеме б М мочевина - уксусная кислота /Traub, Boeckmann , 1978/, Сенситометрические профили гистонов практически не имеют возраст-шх различий, так же, как и количественное соотношение электрофо-ретических зон гистонов. В целом, результаты электрофоретического анализа гистонов фракционированного хроматина не позволяют выяс-яить вопрос об участии гистонов в возрастных изменениях структуры хроматина и их тканевых особенностях. Возможно, при старении происходит не столько количественные, сколько качественные изменения Зелков хроматина. Наши данные подтверждаются и результатами работы Gaubatz , Chalkley /1979/.

На основании полученных данных, свидетельствующих о неодинаковой выраженности возрастных изменений структуры хроматина в различных тканях крыс, можно было ожидать, что функциональная активность хроматина этих тканей также по-разному изменяется с возрастом.

Учитывая возможность изменения при старении скорости поступления меченого предшественника в клетки, определяли радиоактивность кислоторастворимой фракции гомогенатов тканей, характеризующую суммарный внутриклеточный пул меченых предшественников и рассчитывали относительную удельную радиоактивность РНК.

В обеих фракциях хроматина печени старых крыс УР РНК значительно ниже, чем у взрослых. Это снижение не связано с изменением пула меченых предшественников, о чем свидетельствует одинаковый уровень радиоактивности кислоторастворимой фракции гомогената печени взрослых и старых крыс.

Принимая во внимание данные Kreamer /1979/ об отсутствии возрастных различий скорости метаболизма оротовой кислоты в клетках печени, можно полагать, что снижение уровня включения мечено

0 предшественника в РНК активной и низкоактивной фракций хроматина печени старых крыс связано с угнетением процесса транскрипции при старении.

При регенерации максимальное увеличение включения меченого гредшественника в РНК активной и низкоактивной фракций хроматина шступает одновременно в печени взрослых и старых крыс - через !5 часов после частичной гепатэктомии. Обращает на себя внимание >олее значительная активация включения метки в РНК обеих фракций роматина старых крыс, что приводит к сглаживанию возрастных раз

ИЧИЙ.

УР РНК хроматина слизистой старых крыс выше: УР РНК хроматина }зрослых, что указывает на увеличение матричной активности обеих эракций хроматина слизистой при старении. Однако в слизистой ста-)ых крыс значительно увеличивается уровень радиоактивности кисло-юрастворимой фракции гомогената. Очевидно, при старении увеличи-}ается проницаемость клеток слизистой для оротовой кислоты /как это установлено для ряда аминокислот, липидов и др. соединений, enzes , 1974/, что приводит к увеличению интенсивности включения штки в кислоторастворимую фракцию и РНК хроматина.ОУР РНК обеих ракций хроматина слизистой старых крыс не изменяется по сравнению : ОУР РНК хроматина взрослых животных.

Как полагает В.В.Фролькис /1982/ "молекулярные механизмы ста->ения клеток различных типов не универсальны. Нельзя объяснить мо-[екулярные механизмы старения одних клеток данными, полученными [ри изучении клеток другого типа; нельзя считать последователь-юсть изменений на молекулярном уровне в клетках одного типа об-{ей закономерностью старения для всех клеток".

Данные, полученные при сопоставлении возрастных изменений юобенностей структуры и функциональных свойств фракционированиео хроматина интактной, регенерирующей печени и слизистой тонкого кишечника крыс разного возраста могут служить частным цриме-ром этого общего положения.

Итак, полученные в работе данные приводят к выводу о том, ito возрастная реорганизация хроматина характеризуется двумя различными процессами.

Первый заключается в уменьшении доли активного хроматина, р.е. переходе части хроматина на более низкий уровень функционирования, результатом чего является частичное снижение функциональ-1ой активности генома. Этот процесс связан с определенными измене-зиями структуры хроматина /уплотнение на наднуклеосомном уровне/. Зн является общим для печени - ткани с низкой митотической актив--юстью слизистой - ткани с высокой митотической активностью.

Второй проявляется снижением уровня транскрипции в обеих фракциях хроматина /общее снижение функциональной активности ге--юма/. Этот процесс связан с более выраженными изменениями структуры хроматина, межнуклеосомной компактизацией. Он характерен для ючени и не обнаруживается в слизистой.

По-видимому, оба эти процесса имеют различные молекулярные механизмы.

При регенерации печени в предрепликативной фазе происходит резкая активация хроматина - увеличивается доля активной фракции, растет количество новосинтезированной РНК в обеих фракциях хроматина ; происходит дестабилизация структуры хроматина старых *рыс. Очевидно, для того, чтобы обеспечить процесс деления, уровень активации хроматина печени должен достигнуть какой-то определенной пороговой величины, без чего невозможны дальнейшие эта-ш деления - удвоение ДНК, митоз. Этим можно объяснить, по-видимому, столь значительные изменения структуры хроматина печени

5тарых крыс при регенерации, приближающие по основным характерис-?икам к хроматину взрослых животных. Снижение восстановительных 1роцессов в регенерирующей печени старых животных, наблюдаемое )азличными авторами /Adelman , 1920, 1971 ; Obenrader , 1974 ; limmelsbach et al., 1975/, может быть результатом "истощения" функциональных возможностей хроматина в условиях повышенной нагрузки.

Таким образом, полученные в настоящей работе данные позволи-ш выявить особенности структурной организации активной и низко-1ктивной фракций хроматина тканей, различающихся по митотической 1ктивности, а также установить общие и специфические возрастные вменения хроматина этих тканей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мозжухина, Татьяна Георгиевна, Киев

1. Бакаев,В.В., Шматченко В.В. Субнуклеосомы, белки HMG -типа и активный хроматин. Докл. АН СССР, 1979, т.245, № 3, с.734-736.

2. Батова И.Н., Содоре О.Ю., Федосеева Г.Е., Зеленин А.В. Необычное электрофоретическое поведение гистона HI при активации хроматина печени крысы. Докл. АН СССР, 1979, т.249, № 4, с.998-1002.

3. Блок Л.Н., Белоконь Н.С., Анохина Г.А., Никитин В.Н. ДНК-зависимый синтез РНК и белка в бесклеточной системе в присутствии ДНК печени крыс разного возраста. Журн.эволюцион.биохим.физиол., 1974, т.10, № 5, с.446-449.

4. Бердников В.А., Горёль Ф.Л., Шарыпов B.ffi. Изменения в субфракционном составе лизин-богатого гистона кур в процессе онтогенезе. Биохимия, 1976, т.41, № 5, с.847-853.

5. Бердышев Г.Д. Процесс транскрипции и его изменения на поздних этапах индивидуального развития животных. Успехи совр.биол., 1970, т.20, № 3 /6/, с.376-396.

6. Бердышев Г.Д, Эволюционное возникновение генетических механизмов старения, В кн.: Генетические механизмы старения и долголетия. Киев, 1977, с.33-39.

7. Бердышев Г.Д., Проценко Н.А. Содержание нуклеиновых кислот у высших организмов. Киев, Вища школа, 1978, 159 с.д, Бердышев Г.Д., Тюленев В.И., Череп Н.Н., Ковальчук А.Г.,

8. Пирский Л.И. Изменение содержания нуклеиновых кислот в процессе роста печени и кишечника крыс. Цитология и генетика, 1972, т.6, № 6, с.548-552.

9. Варшавский А.Я. Структурная организация хроматина. Успехи совр. биол., 1976, т.81, № 2, с.209-224.

10. Виленчик М.М. Молекулярные механизмы старения. М., Наука, 1970, 166 с.

11. С4. Ванюшин Б.Ф., Машарина Л.В., Белозерский А.Н. 0 распределении пиримидинов в дезоксирибонуклеиновых кислотах. Докл. АН СССР, 1962, т.147, с.958-961.

12. С5. Георгиев Г.П. Регуляция синтеза РНК в клетках животных. Успехи совр. биол., 1970, т.69, № 3, с.331-352.

13. Сб. Георгиев Г.П., Бакаев В.В. Три уровня структурной организации хромосом эукариот. Мол. биол., 1978, т.12, № 6, с.I205-1230.

14. Герасимова В.В., Хилобок И.Ю. Возрастные изменения макромоле-кулярной структуры ДНК в тканях с различной митотической активностью. В кн.: Ведущие факторы онтогенеза. Киев: Наукова думка, 1972, с.81-86.

15. Гольдштейн Б.И. Роль фрагментации ДНК в старении клетки. В кн.: Приспособительные возможности стареющего организма. Киев, 1968, с.106-118.

16. Дашкевич B.C., Аршинова Т.В. Транскрипция и репликация ДНК в активном и репрессированном хроматине регенерирующей печени крыс. Изв. Сиб. отд. АН СССР, 1977/, т.5, сер.биол., № I, с.83-87:

17. Епифанова О.И., Терских В.В., Полуновский В.А. Покоящиесяклетки. М.: Наука, 1983, 180 с.

18. Заварзин А.А. Синтез РНК и кинетика клеточных популяций в онтогенезе млекопитающих. Л.: Наука, 1967, 194 с.

19. Зильберман С.Ц., Паскевич И.Ф. Возрастные особенности синтеза и активности основных форн ДНК-зависимой РНК-полимеразы ядер клеток печени белых крыс. В кн.: Физиол. и молекул, аспекты онтогенеза. Киев: Наукова думка, 1977, с.68-74.

20. Канунго М. Биохимия старения. М.: Мир, 1982, 296 с.

21. Карвонен В.Н. Некоторые физико-химические параметры ДНК печени белых крыс разного возраста. Вестник Харьк. ун-та, 1970,39, Биология, № 2, с.19-22.

22. Клименко А.И. Белки ядер и хроматина клеток в возрастном развитии животных. Автореф. дисс. докт., Киев, 1983, 41 с.

23. Клименко А.И., Малышев А.Б., Никитин В.Н., Симиренка Л.Л. Возрастные особенности ацетилирования гистонов ядер клеток печени крыс. Биохимия, 1975, т.40, № 5, 1087-1090.

24. Клименко А.И., Малышев А.Б. Метилирование белков хроматина клеток печени на разных этапах постнатального развития белых крыс. Биохимия, 1976, т.41, № 12, с.2136-2139.

25. Клименко А.И., Малышев А.Б., Шевцова М.Я. Белковый состав фрагментированного хроматина печени крыс в постнатальном онтогенезе. Биохимия, 1978, т.43, № 10, с.1757-1765.

26. Клименко А.И., Малышев А.Б. Ацетилирование гистонов и кислых белков хроматинового комплекса клеток печени крыс в постнатальном онтогенезе. Укр. биохим. журнал., 1980, т.50, № I, с.10-14.

27. Клименко А.И., Тупчиенко Г.С. К вопросу о транскрипции генома в постнатальном онтогенезе белых крыс. Онтогенез, 1973, т.4, № I, с.80-83.

28. Кудряшова И.Б., Ванюшин Б.Ф. Метилирование in vitro . ядерной ДНК из разных органов крысы: тканевые и возрастные различия акцепторной способности ДНК. Биохимия, 1976, т.41, № 6, c.II06-III5.

29. Кувичкин В.В. Роль мембран в организации и эксцрессии генома прокариотов и эукариотов. I. ДНК-мембранные контакты. Данные о структуре и функциях. /Изд-во ВИНИТИ/, Пущино, 1982, 45 с.

30. Кучеренко Н.Е., Цудзевич Б.А., Блюм Я.Б., Бабенюк Ю.Д. Биохимическая модель регуляции активности хроматина. Киев: Наукова думка, 1983, 244 с.

31. Лебедева Л.М., Платонов О.М. Особенности транскрипции ядерного генома на ранних этапах регенерации печени. РНК-полимеразная активность изолированных ядер. Биохимия, 1980, т.45, № 6,с.974-978.

32. Левитина М.В. Современные представления о липидах клеточных ядер. Успехи совр. биол. 1975, т.80, № I, с.57-70.

33. Лежава Т.А. Гетерохроматинизация один из ведущих факторов старения. Цитология и генетика, 1980, т.14, № 3, с.71-76.

34. Лейкина Е.М., Романова Л.К., Спитковский Д.М. Изучение физико-химический свойств фракций хроматина ядер клеток нормальной и регенерирующей печени крыс. Бюлл. экспер. биол. мед., 1973, т.75, № 2, с.38^0.

35. Мурадян Х.К. Синтез фракций РНК в печени крыс разного возраста. В кн.: Геронтология и гериатрия, Киев, 1977, с.66-70.

36. Мхеян Э.Е., Кочарян К.М. Роль верхнего шейного симпатического узла в регуляции количества ядерных гистонов мозговых клеток. В кн.: Вопросы биохимии мозга, 1978, т.13, Ереван, Изд-во АН Арм. ССР, с.138-143.

37. Мюльберг А.А., Тищенко Л.И., Домкина Л.К. Сравнительная характеристика эндонуклеазных фрагментов хроматина. Биохимия, 1977/, т.42, № 5, с.850-859.

38. Мюльберг А.А., Тищенко Л.И. Малая нуклеосома как возможный структурный элемент хроматина, выявляемый Са, Мф. -зависимой эндонуклеазой. Докл. АН СССР, т.259, № 2, с.492-494.

39. Никитин В.Н. 0 некоторых биохимических основах процесса онтогенеза. В кн.: Труды НИИ биологии и биологического факультета ХГУ, Харьков, 1954, с.29-71.

40. Никитин В.Н. Макр(молекулярный аспект онтогенеза. В кн.: 9-й международный конгресс геронтологов. 2-7 июля 1972 г., Киев, СССР. Том I. Киев, 1972, с.22-25.

41. Никитин В.Н. Макромолекулярные аспекты старения. В кн.: Ведущие факторы онтогенеза. Киев: Наукова думка, 1972, с.6-43.

42. Никитин В.Н. Печать возраста на белоксинтезирующем аппарате клетки. В кн.: Геронтология и гериатрия. Киев: Наукова думка, 1977, с.18-26.

43. Никитин В.Н. Возрастные изменения хроматина и белоксинтези-рующего аппарата клетки. Успехи совр. биол. , 1978, т.86,3 /6/, с.331-339.

44. Никитин В.Н. Возрастные изменения хроматина и белоксинтезиру-ющего аппарата клетки. В кн.: Актуальные проблемы возрастной физиол. биохим. и биофиз. Киев: Наукова думка, 1979, с.3-20.

45. Никитин В.Н., Попова Л.Я., Аборнева Л.И. Возрастные особенности липидного спектра разных фракций хроматина печени.

46. В кн.: Актуальные проблемы возрастной физиол., биохим. и физиол. Киев: Наукова думка, 1979, с.32-36.

47. Никитин, Шерешевская Ц.М. Нуклеотидный состав рибонуклеиновой и дезоксирибонуклеиновой кислот печени животных разного возраста. Биохимия, 1961, т.26, № 6, с.1062-1064.

48. Носиков В.В., Брага Э.А. Гены рибосомных РНК. В кн.: Молекулярная биология /Итоги науки и техн. ВИНИТИ АН СССР/, т.18, стр.110-215.

49. Оболенская М.Ю. Возрастные особенности синтеза ДНК в регенерирующей печени белых крыс. Цитология, 1976, т.18, № 7,с.857-861.

50. Парина Е.В. Возраст и .обмен белков. Харьков, Изд-во ХГУ, 1967, 204 с.

51. Платонов О.М., Лисица Э.Г. Особенности транскрипции дцерного генома на ранних стадиях регенерации печени. Ядерные ДНК-подобные РНК, комплементарные уникальным и повторяющимся последовательностям. Биохимия, 1980, т.45, № 5, с.896-900.

52. Преображенская О.В., Карпов В.Л., Нагорская Т.В., Мирзабе-ков А.Д. Структура хроматина, активного в транскрипции. -Молекулярная биология, 1984, т.18, № I, с.8-21.

53. Ревич Г.Г., Савина М.И., Тогузов Р.Т. Изменение содержания различных типов ядерных белков и ДНК диплоидных и полиплоидных гепатоцитов в регенерирующей печени мышей. Биохимия, 1975, т.40, № 4, с.769-774.

54. Рябинина З.А., Бенюш В.А. Полиплоидия и гипертрофия клеток в процессах роста и восстановления. М.: Медицина, 1973, 208 с.

55. Смалько П.Я., Платонов О.М. Деяк1 характеристики апарата• н • • м • • г»трансляци на paHHix етепах регенераци печгнки щур1в. В кн.: Ш Украгнський б10Х1м1чний зн1зд /Тези стендових шшдомлень/ Донецьк, 1977, с.137-138.

56. Смирнова Н.В., Родионов В.М. Соотношение во времени между синтезом ДНК и гистонов в регенерирующей печени крыс. Биохимия, 1974, т.39, № б, с.1264-1269.

57. Статистические методы исследования в медицине и здравоохранении. Под ред. Л.К.Полякова, Л.: Медицина, 1971, 199 с.

58. Ткачук A.M., Кокунин В.А. Динамика обмена оротовой кислотыв тканях цыплят. Укр. биохим. журн. 1979, т.51, № I, с.66-72.

59. Францевич Л.И. Обработка результатов биологических экспериментов на микро ЭВМ "Электроника БЗ-21",Киев: Наукова думка, 1979, 90 с.

60. Фролькис В.В. Природа старения. М.: Наука, 1969, 182 с.

61. Фролькис В.В. Регулирование, приспособление и старение. Л.: Наука, 1970, 432 с.

62. Фролькис В.В. Старение и биологические возможности организма. М.: Наука, 1975, 271 с.

63. Фролькис В.В. Физиологические механизмы старения. В кн.: Физиологические механизмы старения. Л.: Наука, 1982, с.187-197.

64. Харченко Е.П., Ашмарин И.П. Органоспецифичность фрагментируе-мости хроматина эндонуклеазой. Биохимия, 1978, т.43, № I,с.146-149.

65. Харченко Е.П., Наливаева Н.Н., Колесникова Е.Ю., Федотова Е.А., Исследование гетерогенности эндонуклеазных фрагментов хроматина. Фракционирование методом ступенчатого эндонуклеаза. Биохимия, 1979, т.44, № 10, с.1768-1775.

66. Харченко Е.П. Организация различных структурных форм хромосом. Биохимия, 1981, т.46, № 3, с.387-400'.

67. Хилобок 1.Ю. Вивчення складу азотистих основ ДНК печ1нки 6i-лих щур1в р1зного В1ку. Укр. 6ioxiM. журн., 1967, т.39, № 3, с.252-255.

68. Хилобок И.Ю., Хилько O.K., Гольдштейн Н.Б., Францева Т.Г. Состояние хроматина печени крыс при старении. В кн.: Геронтология и гериатрия, Киев, 1977, с.78-81.

69. Шапошников В.М. Ультраструктурные изменения кровеносных капилляров надпочечников при старении. Автореф. дис. . канд. мед. наук, Харьков, 1978. - 24 с.

70. Adelman R.C. The independence of;; cell division and age-dependent modification of enzyme induction. Biochem. Bio-phys. Res. Commun., 1970, v. 38, N6, p. 1149-1153.

71. Adelman R.C. Age-dependent effects in enzyme induction: a biochemical expression of aging. Exp. Geront., 1971»6, N1, p. 75-88.

72. Allfrey V.G. Changes in chromosomal proteins at times of gene activation. Fed. Proc., 1970, v. 29, N12, p. 14471449.

73. Allfrey V.G. Functional and metabolic aspects of DNA-asso-ciated proteins. In: Histones and nucleohistones. Ed. by D.M.P. Phillips. - New York: Plenum Press, 1971, p. 241-294.

74. Arnold E.A., Young K.E. Heterogeneity of chromatin: fractionation of sonicated rat liver chromatin by partial precipi2+tation with Mg . Arch. Biochem. Biophys., 1974, v. 164, P. 73-89.

75. Babcock D.J., Rich M.A. Deoxyribonucleic acid-dependentribonucleic acid polymerases from murine spleen cells.- Biochem. J., 1973, v. 155, N4, p. 797-804.

76. Barakett L., Pillary D.T.N. Changes in polysomes and mDNA in aging soybean (Glycine max L.) cotyledons. Gerontology, 1982, v. 28, N1, p. 1-9.

77. Batova I.N. Certain structural differences between activated and non-activated rat liver chromatin. Докл.Болг AH1984, v. 37, N2, p. 253-255.

78. Benson R.W., Harker C.W. RNA polymerase activities in liver and brain tissues of aging mice. J. Gerontol., 1978,v. 33, N3, p. 323-328.

79. Berdyshev G.D., Zhelabovskaya S.M. Composition, template properties and thermostability of liver chromatin from rats of various age at deproteinization ny NaCI solutions. Exp. Gerontol., 1972, v. 7, N5, p. 321330.

80. Berkowitz E.M., Doty P. Chemical and physical properties of fractionated chromatin. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1975, v. 72, N9, P. 3328-3332.

81. Bernd A., Batke E., Lahn R., Muller Y/.G. Age-dependent gene induction of quail oviduct. XV. Alterations of the Poly (A)-associated protein pattern and the poly (A) chain length of mRNA. Mech. Ageing Develop., 1982, v. 19, N1, P. 361-377.

82. Bloom K.S., Anderson J.N. Fractionation of hen oviduct chromatin into transcriptionally active and inactive regions after selective micrococcal nuclease digestion. Cell., 1978, v. 15, N1, p. 141-150.

83. Blutti S.P., Ingles C.J., Lindell T.J., Morris P.W., Weaver R.F., Weinberg P., Rutter W.J. Structure and regulatory properties of eucaryotic RITA polymerase. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1970, v. 55, p. 649-657.

84. Bolla R., Denckla W.D. Effect of hypophysectomy on liver nuclear ribonucleic acid synthesis in aging rats. Biochem. J., 1979, v. 184, N7, p. 669-674.

85. Bonner J. Regulation of gene expression in higher organisms: how it all works. In: Structure and function of chromatin. - Amsterdam e.a., 1975» P- 515-555.

86. Bonner J., Dahmus M.E., Fainbrough D., Huang R.C., Maruchige K., Tuan D.Y.H. The biology of isolated chromatin. Science, 1968, v. 159, N5810, p. 47-55.

87. Bonner J., Garrard W.T. Biology of the histones. Life Sci., 1974, v. 14, N2, p. 209-211.

88. Bradbury E.M. Histone interactions, histone modifications and chromatin structure. Phil. Trans. Roy. Soc. London, 1978, v. 285, N997, p. 291-295.

89. Branson R.E., Irvin J.L. Histone phosphorylation in normal and regenerating rat liver. In: Protein. Phosphorylat. Contr. Mech., New York-London, 1973, p. 315-322.

90. Brash K. Age- and ploidy-related changes in rat liver nuclear proteins as assessed Ъу one- and two-dimensional gel electrophoresis. Can. J. Biochem., 1981, v. 60, ИЗ, p. 204-214.

91. Britten R.J., Kohne D.E. Repeated sequences in DNA. Science, 1968, v. 161, N3841, p. 529-5^0.

92. Britton V.J., Sherman F.G., Plorini J.R, Effect of age on RNA synthesis by nuclei and soluble RNA polymerases from liver and muscle of C57B1/6J mice. J. Gerontol., 1972, v. 27, N2, p. 188-192.

93. Bucala R., Model P., Cerami A. Modification of DNA by reducing sugars: a possible mechanism for nucleic acid aging and age-related dysfunction of gene expression. Proc. Nat. Acad. Sci. USA Biol. Sci., 1984, v. 81, N1, p. Ю5-109.

94. Bucher N.L.B., Swaffield M.N. Rate of incorporation of14

95. C/-orotic acid into uridine 5-triphosphate and cytidine 5-triphosphate and nuclear ribonucleic acid in regenerating rat liver. Biochim. Biophys. Acta, 1965, v. 108, N4, p. 551-567.

96. Callwitz D., Sekeris S. The acetylation of histone of rat liver nuclei in vitro by acetyl CoA. Hoppe-Seyler1s Z. Physiol. Chem., 1969, Bd 350, S. 150-154.

97. Gaplan A., Ord M.G., Stocken L.A. Chromatin structure through the cell cycle. Studies with regenerating liver.- Biochem. J., 1978, v. 174, N12, p. 475-483.

98. Castle Т., Katz A., Richardson A. Comparison of RNA synthesis by liver nuclei from rats of various ages. Mech. Ageing Develop., 1978, v. 8, N4, p. 383-395.

99. Chambon R. Eucaryotic nuclear RITA polymerases. Annu. Rev. Biochem., 1975, v. 44, p. 613-638.

100. Chang M.T., Garrard W.T., Bonner J. Purification and properties of a neutral protease from rat liver chromatin.- Biochemistry, 1974, v. 13, N25, p. 5128-5134.

101. Chatterjee В., Nath S.J., Roy A.K. Differentail regulation of the messenger rna for three major senescence marker proteins in male rat liver. J. Biol. Chem., 1981, v. 256, N12, p. 5939-5941.

102. Chen J.J., Brot N., Weissbach H. RNA and protein synthesis in cultured human fibroblasts derived from donors of various ages. Mech. Ageing Develop., 1980, v. 13, N3, p. 285-295.

103. Cole R.D. A minireview of microheterogeneity of H1 his-tone and its possible significance. Anal. Biochem., 1984, v. 136, N1, p. 24-30.

104. Colemann P.K., Caplan B.B., Asterburg H.H., Pinch C.E. Brain poly (A) RNA during aging: stability of yield and sequence complexity in two rat strains. J. Neurochem., 1980, v. 34, N2, p. 335-345.

105. Compton J.J., Bellard M., Cambon P. Biochemical evidence of variability in the DNA repeat length in the chromatin of higher eucaryotes. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1976, v. 73, N12, p. 4382-4386.

106. Covault J., Chalkley R. The identification of distinct populations of acetylated histone. J. Biol, Chera., 1980, v. 255, N19, p. 9110-9116.

107. Cowman M.K., Fasman G.D. Dependence of mononucleosome deoxyribonucleic acid length and H1/H5 content. Circular di-chroism and thermal denaturation studies. Biochemistry, 1980, v. 19, N3, p. 532-541.

108. Cox R., Damjanov J., Abanobi S.E., Sarma D.S.R. A method for measuring DNA damage and repair in the liver in vivo. Cancer Res., 1973, v. 33, N9, p. 2114-2121.

109. Curtis H. Cellular processes involved in ageing. Fed. Proc., 1964, v. 23, N3, p. 662-680.

110. Cutler R.G. Transcription of reiterated DNA sequence classes through the life-span of the mouse. In: Adv.in Gerontological Research, v. 4, New York, 1972, p. 219321.

111. Cutler R.G. Alteration with age in the informational storage and flow systems of mammalian cell. In: Bief Defects: Original Article Series. The National Foundation, 1978, v.14, N1, p. 463-498.

112. Cutler R.G., Blackman C.F., Prosowitz В., Hildebrandt A. The physiological state of aging mice as represented by qualitative RNA measurement. Proc. 8th Int. Congr. Ge-ront., Washington, D.C. 1969, v. VI, p. 183.

113. Das R., Kanungo M.S. In vitro phosphorylation of chromosomal proteins of the brain of rats of various ages and its modulation by epinephrine. Ind. J. Biochem. Biophys., 1980, v. 17, N1, p. 217-221.

114. Davie J.R., Candido E.P.M. Acetylated histone H4 is preferentially associated with template-active chromatin. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1978, v. 75, N8, p. 3574-3577.

115. Davie J.R., Candido E.P.M. DNAse I sensitive chromatin is enriched in the acetylated species of histone H4. FEBS Lett., 1980, v. 110, N2, p. 164-168.

116. Defer N., Kirzis A., Kruh J., Brahms S., Brahms J. Effect of non-histone proteins on thermal transition of chromatin and of DNA. Nucl Acid Res., 1977, v. 4, N7, p. 2293-2306.

117. Devi A., Lindsay P., Raina P.L., Sarkar N.K. Effect of age on some aspects of the synthesis of ribonucleic acid.- Nature, 1966, v. 212, N5061, p. 474-475.

118. Dolbeare P., Koenig H. Fractionation of rat liver chromatin. Effect ofс cations, hepatectomy and actinomycin D. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1970, v. 123, N3, p. 636-641.

119. Elgin S., Weintraub H. Chromosomal proteins and chromatin structure. Annu. Rev. Biochem., Vol. 44, 1975, Р» 725744.

120. Elgin S., Gloehner S.C., Smart J.S., Bonner J. The biology and chemistry of chromosomal proteins. Adv. Cell and Mol. Biol., 1971, v. 1, p. 1-57.

121. Enesko H.E. A cytophotometric analysis of DNA content of rat nuclei in ageing. J. Gerontol., 1967, v. 22, N4, p. 445-448.

122. Ermini M., Reichlmeier K., Romer W. Die Phosphorylier-barkeit der Histone im Chromatin verschiedener Gewebe in Abhangigkeit vom Lebensalter. Akt. Gerontol., 1977, Bd 7, N5, S. 239-245.

123. Evans C.H. Alterations in the ribonucleic acid metabolism of nuclei isolated from mouse fibroblast during aging and growth restriction in vitro. Biochem. Soc. Trans., 1976, v. 4, N4, p. 815-815.

124. Evans C.H.On the aging of organisms and their cells. Med. Hypoth., 1979, v. 5, N1, p. 55-66.

125. Evans C.H., Van Cansen P., Rasson I. Transcription in early and late passage embryotic mouse fibroblasts in primary culture: a correlated biochemical autoradiographical and ultrastructural study. Biol. Cell., 1978, v.33, N2, p. 117-127.

126. Faber A.J., Cook A., Hancook R. Characterization of a chromatin fraction bearing pulse-labelled RNA. 1. Nascent RNA, RNA polymerase В and transcribed ША sequence content.- Eur. J. Biochem., 1981, v. 120, N2, p. 357-361.

127. Pabrikont I.J, Size of proliferating pools in regenerating liver. Exp. Cell. Res., 1969, v. 55, N2, p. 277-279.

128. Parr R.M., Luckow V., Sundharadas G. Major non-histone proteins of bovine lymphocyte chromatin. Identification of tubulin and actin. Exp. Cell. Res., 1978, v. 121, N2, p. 428-432.

129. Felsenfeld G. Chromatin. Nature, 1978, v. 271, N5641, p. 115-122.

130. Plorine D.L., Ono Т., Cutler R.G., Getz M.J. Regulation of endogenous murine leukemia rirus-related nuclear and cytoplasmic RNA complexity in C57B1/6J mice of increasing age. Cancer Res., 1980, v. 40, N3, p. 519-523.

131. Рое V.E., Wilkinson L.E., Larid C.D. Comparative organization of active transcriptional units in Oncopeltus fascia-tus. Cell, 1976, v. 9, N1, p. 131-147.5

132. Fogg R., Pakkenberg H. Age-related changes in "H-uridine uptake in the mouse. J. Gerontol., 1981, v. 36, N6, p. 680-881.

133. Franke W., Scheer U., Trendelenburg H., Zentgraf H., Spring H. Morphology of transcriptionally active chromatin. Cold Spring Harbor Symp. Quantitative Biol. v. 42, Part 2, Cold Spring Harbor, 1978, p. 755-772.

134. Franke V/., Scheer U., Zentgraf H., Trendelennburg M.F., Muller U., Krohne G., Spring H. Organization of transcribed and nontranscribed chromatin. In: Differentiation and Neoplasia, v. 15, Ed. by R.G. McKinnel e.a., 1980, p. 15-36.

135. Prenster J.H., Allfray W.G., Mirsky A.E. Repressed and active chromatin isolated from interphase lymphocytes. -Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1963, v. 50, N6, p. 1026-1032.

136. Pry R.J., Lesher S., Kohn H.I. Age effect on all transit time in mouse jejunal epithelium. Am. J. Physiol., 1961, v. 201, N1, p. 213-216.

137. Gaubatz J.W., Cutler R.G. Age-related differences in the number of ribosomal RNA genes of mouse tissues. Gerontology, 1978, v. 24, N3, p. 179-207.

138. Gaubatz J.W., Ellis M., Chalkley R. The structural organization of mouse chromatin as a function of age. Fed. Proc., 1979, v. 38, N6, p. 1973-1978.

139. Gershey E.L., Haslett C.W., Vidali G., Allfrey V.G. Chemical studies of histone methylation: evidence for occurrence of 3-niethylhistidine in avian erythrocyte histonefractions. J. Biol. Chem., 1969, v. 244, N18, p. 48714877.

140. Goodwin G.H., Johns E.W. The non-histone proteins of chromatin. FEBS Lett., 1972, v. 21, N1, p. 103-112.

141. Goodwin G.H., Brown E., Walker J.M., Johns Е.7/. The isolation of three new high mobility group nuclear proteins.- Biochim. Biophys. Acta, 1980, v. 623, N2, p. 329-338.

142. Gottesfeld J.M., Garrard W.T., Bagi G., Wilson R.F., Bonner J. Partial purification of the template-active fraction of chromatin: a preliminary report. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, N6, p. 2193-2197.

143. Gottesfeld J.M., Murphy R.T., Bonner J. Structure of transcriptionally active chromatin. Proc. Nat. Acad. Sci. USA,1975, v. 72, N11, p. 4400-4408.

144. Gottesfeld J.M., Bagi G., Berg В., Bonner J. Sequence composition of the template-active fraction of rat liver chromatin. Biochemistry, 1976, v. 15, N11, p. 2472-2483.

145. Grady L.J., Campbell W.P., North A.B. Nonrepetitive DNA transcription in normal and regenerating rat liver.- Nucl. Acids Res., 1979, v. 7, N1, p. 259-269.

146. Grady L.J., Campbell W.P. Ageing studies in rat liver. 1. Complexity of RNA from two to ten months of age. Mech.

147. Ageing Develop., 1981, v. 15, N4, p. 415-421.

148. Groves W.E., Davis P.O., Sells B.H. Spectrophotometric determination of microgram quantities of protein without nucleic acid interference. Anal. Biochem., 1968, v. 22,N1, p. 195-210.

149. Guilfoyle T.J., Lin C.Y., Chen Y.M., Nagao R.T., Key J.L. Enhancement of soybean RITA polymerase I by auxin. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1975, v. 72, N1, p. 69-72.

150. Hahn H.P. van. Control of cellular ageing at the genome: the regulation of transcription. Proc. 8th Int. Congr. Gerontol., Washington, D.C., 1969, v. 1, p. 134-137.

151. Hahn H.P. von. Structural and functional changes in nucleo-protein during aging of the cell. Gerontologia, 1970,v. 16, N2, p. 116-128.

152. Hahn H.P. von, Fritz E. Age-related alterations in the structure of DNA. III. Thermal stability of rat liver DNA related to age, histone content and ionic strength. Gerontologia, 1966, v. 12, N4, p. 237-250.

153. Hahn H.P. von, Verzar P. Age-dependent thermal denaturati-on of DNA from bovine thymus. Gerontologia, 1967, v. 7, N7, p."104-107.

154. Hahn W., Larid C.D. Transcription of nonrepeated DNA in mouse t brain. Science, 1971, v. 173, N3992, p. 158-161.

155. Henson P. The presence of single-stranded regions in mammalian DNA. J. Mol. Biol., 1978, v. 119, N3, p. 487-491.

156. Higgins J., Anderson R. Experimental pathology of rat liver. Arch. Path., 1931, v. 12, N2, p. 186-202.

157. Hill B.T. Influence of age on chromatin transcription in murine tissues using an heterologous and an homologous

158. RNA polymerase. Gerontology, 1976, v. 22, ИЗ, p. 111-123.

159. Hill R.J., Poccia D.L., Dora P. Towards a total macromole-cular analysis of sea urchin embryo chromatin. J. Mol. Biol., 1971, v. 61, N5, p. 445-463.

160. Himmelsbach K.H., Loehr J., Muller V/.E.G. Ploidy classes and nuclear DNA content after 2/3 partial hepatectomy in young and old rats. Akt. Gerontol., 1975, v. 5, N11, p. 641-646.

161. Hirose M., Maki M., Anabuki K., Hasegawa K., Chiba H. Comparison of chromatin structure of rat mammary gland between the stage of lactation and regression after weaning. Agric. Biol. Chem., 1969, v. 43, N10, p. 2143-2149.

162. Hymer W.C., Kuff E.L. Isolation of nuclei from mammalian tissues through the use of Triton X-100. J. Histochem. Cytochem., 1964, v. 12, p. 359-580.

163. Hubermann J.A. Structure of chromosome fibers and chromosomes. Annu. Rev. Biochem., 1975, v. 42, p. 355-379.

164. Hurblert R.B., Potter V.R. A survey of the metabolism of orotic acid in the rat. J. Biol. Chem., 1952, v. 195, N1, p. 257-270.

165. Isenberg I. Histones. Annu. Rev. Biochem., 1979, v. 48, p. 159-161.

166. Itzhaki R.F., Hell A., Birnie G.D. Fractionation of chromatin by differential solubility in dilute salt. Nucl. Acids Res., 1978, v. 5, N3, p. 739-750.

167. Javaherian K., Sadeghi M., Liu L. Nonhistone proteins HMG1 and HMG2 unwind DNA double helix. Nucl. Acids Res., 1979, v. 6, N11, p. 3569-3580.

168. Johns E.W. Studies of histones. 7« Preparative methods for histone fractionation from calf thymus. Biochem. J., 1964, v. 92, N1, p. 55-59.

169. Johnson R., Strehler B.L. Loss of genes coding for riboso-mal RNA in ageing brain ©lis. Nature. - 1972, v. 240, N5581, p. 412-414.

170. Kanungo M.S., Chaturvedi M.M. Alterations in chromatin of the brain of rat during aging. Proc. 12th Int. Congr. Geront., Hamburg, 1981, v. 1, p. 82.

171. Kanungo M.S., Gandhi B.S. Induction of malate dehydrogenase isoenzymes in liver of young and old rats. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1972, v. 69, N8, p. 2035-2038.

172. Kanungo M.S., Koul 0., Reddy K.R. Concomitant studies on RNA and protein synthesis in tissues of rats of various ages. Exp. Gerontol., 1970, v. 5, N3, p. 261-269.

173. Kanungo M.S., Thakur M.K. Phosphorylation of chromosomal proteins as a function of age and its modulation by calcium. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977, v. 79, N4,p. 1031-1036.

174. Kanungo M.S., Thakur M.K. Modulation of acetylation of histones and transcription of chromatin sybotyric acid and 17 B-estradiol in the brain of rats of various ages.- Biochem. Biophys. Res. Communs., 1979, v. 87, N1, p. 266-271.

175. Karn J., Johnson E.M., Vidali G., Allfrey V.G. Differential phosphorylation and turnover of nuclear acidic proteins during the cell cycle of aynchronized HeLa cells.- J. Biol. Chem., 1974, v. 249, N3, p. 667-677.

176. Keichline L.D., Wassarman P.M. Development study of the structure of sea urchin embryo and sperm chromatin using micrococcal nuclease. Biochim. Biophys. Acta, 1977, v. 475-N1, p. 139-151.

177. Kitzis A., Leibovich S.A., Paris В., Tichonicky L., Kruh J. Thermal denaturation of DNA in the chromatin fragments released by mild micrococcal nuclease digestion of HTC cell nuclei. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1982, v. 109,1. N3, p. 612-618.

178. Kleinschmidt A.M., Martinson H.G. Role of histone tyrosines in nucleosome formation and histone-histone interaction.- J. Biol. Chem., 1984, v. 239, N1, p. 497-503.

179. Klienmith L.J., Stein G. Dephosphorylation of nonhistone proteins specifically alters the pattern of gene transcription in reconstitute chromatin. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1976, v. 73, N4, p. 1174-1178.

180. Klinge 0. Altersabhangige Beeintrackigung der Zellerver-mehung in der regenerierenden Rattenleber. Virchows Arch. Abt. B. Zellpath., 1968, Bd 1, S. 342-345.

181. Klingholz R., Stratling H. Digestion of chromatin to H1 depleted 166 basepair by Ca /Mg -dependent endonuclease.- FEBS Lett., 1982, N1, p. 105-108.

182. Kobayashi A., Kurokavva M., Murata M., Tsukada K., Sugano N. Non-histone chromatin protein in regenerating rat liver.- J. Biochem., 1981, v. 90, N2, p. 341-347.

183. Kornberg R.D. Chromatin structures a repeating unit of histones and DNA. Science, 1974, v. 184, N4139, p. 868

184. Kreamer W., Lorich N., Liu D., Richardson A. Effect of age on RITA synthesis by rat hepatocytes. Exp. Gerontol., 1979, v. 14, N1, p. 27-36.

185. Kurtz D.J., Russell A.P., Sinex P.M. Multiple peaks in the derivative melting curve of chromatin from animals of varying age. Mech. Ageing Develop., 1974, v. 3, N1, p. 3749.

186. Kurtz D.J., Sinex P.M. Age-related differences in the association of brain DNA and nuclear protein. Biochim. Biophys. Acta, 1967, v. 145, N4, p. 840-842.

187. Saffak G.M., Li H.J. Histone-dioxyribonucleic acid complex studied by thermal denaturation and circular dichroism study. Biochemistry, 1977, v. 16, N27, p. 5869-5878.

188. Lacks M.S., Jungmann R.A. Prereplicative modulation of nuclear proteins kinases in the regenerating rat liver.- Biochim. Biophys. Res. .Commun., 1980, v. 96, N2, p. 697703.

189. Lange R.J., de, Pambrough D.M., Smith E.L. Calf and pea histone IV. III. Complete amino acid sequences of pea seedling histone IV: comparison with the homologous calf thymus histone. J. Biol. Chem., 1969, v. 244, N20, p.5669-5679.

190. Laval M., Boutille M. Synthetic activity of isolated rat liver nuclei. I. Ultrastructural study of various steps of isolation. Exp. Cell. Res., 1975, v. 76, N2, p. 357-542.

191. Leblond C.P. Classification of cell populations on the basis of their proliferative behavior. In: Nat. Cancer Inst. Monograph, 1964, v. 14, p. 119-145.

192. Lee C.T., Duerre J.A. Changes in histone raethylase activity of rat brain and liver with ageing. Nature, 1974, v. 251, N5472, p. 240-242.

193. Lee M.P., Walker I.O., Peackock A.K. Thymus deoxyribonuc-leoprotein. IV. Thermal denaturation. Biochim. Biophys., Acta, 1965, v. 72, N2, p. 310-316.

194. Levy-Wilson В., Gjerset R.A., McCarthy B.J. Acetylation and phosphorylation of Drosophila histones. Distribution of acetate and phosphate groups in fractionated chromatin. Biochim. Biophys. Acta, 1977, v. 475, N1, p. 168-175.

195. Levy-Wilson В., Dixon G.H. A study of the localization of high mobility group proteins in chromatin. Canad. J. Biochem., 1978, v. 56, N6, p. 480-491.

196. Lewan L., Peterson J., Ingnerr T. Incorporation of orotic acid into nucleotides and RNA in mouse organs during 60 minutes. Hoppe-Seylers Z. Physiol. Chem., 1975, v. 356, N4, p. 425-429.

197. Lewis P.N. A thermal denaturation study of chromatin and nuclease-produced chromatin fragments. Canad. J. Biochem., 1977, v. 55, N7, p. 736-746.

198. Li H.J., Bonner J. Interaction of histone half-molecules with dioxyribonucleic acid. Biochemistry, 1971, v. 10,1. N8, p. 1461-1470.

199. Liew С.С., Gornall A.G. Covalent modification of nuclear proteins during aging. Fed. Proc., 1975» v« 34, N2, p. 186-187.

200. Lindell T.J., Duffy J.J., Byrnes B. Transcription in aging: the response of rat liver nuclear RNA polymerases to cycle-gexamide in vivo. Mech. Ageing Develop., 1982, v. 19, N1, p. 63-71.

201. Lipkin M., Sherlock P., Bell E. Cell proliferation kinetics in the gastrointestinal tract of man. In stomach, ileum, colon and rectum. Gastroenterology, 1963, v« 45, p. 721729.

202. Liu D.S.H., Ekstron R., Spicer J.W., Richardson A. Age-related changes in protein, RNA and DNA content and protein synthesis in rat testes. Exp. Gerontol., 1978, v. 13, N3/4, p. 197-205.

203. Lohr D., Kovacic R.T., Van Holde K.E. Quantitative analysis of the digestion of yeast chromatin by staphylococcal nuclease. Biochemistry, 1977, v. 16, N3, p. 463-471.

204. Lohr D., Tatchell K., Van Holde K.E. On the occurrence of nucleosome phasing in chromatin. Cell, 1979, v. 8, N4, p. 829-836.

205. Lohr Т., Heimer D. Zytophotometrische Untersuchungen uber altersabhangige Strukturveranderungen am Nucleoprotein Komplex von Leberzellkernen. Gerontologia, 1972, v. 18, N2-3, P. 122-130.

206. Louir A.Y., Dixon G.H. Histone phosphorylation, binding to dioxyribonucleic acid and chromosomal coiling. Biochem.

207. Soc. Trans., 1973, v. 1, N3, p. 682-684.

208. Lowry O.H., Rosebrough N., Parr A.L., Randall K. Protein measurement with the Polin phenol reagent. J. Biol. Chem.,1951, v. 193, N1, p. 265-273.

209. Lukacs J., Sekeris C.E. On the mechanism of hormone action. IX. Stimulation of RNA polymerase activity of rat liver nuclei by Cortisol in vitro. Biochim. Biophys. Acta, 1967, v. 134, p. 85-90.

210. Macieira-Coelho A., Loria E. Changes in RNA synthesis'during the life span of human fibroblast in vitro. Gerontology, 1976, v. 22, N1-2, p. 79-88.

211. Mainwaring W.J.P. Changes in the ribonucleic acid metabolism of aging mouse tissues with particular reference to prostate gland. Biochem. J., 1968, v. 110, N1, p. 79-86.

212. Marks D.B., Konefsky I., Keller B.J., Markis A.D. The presence of histone HI in human tissues. Cancer Res., 1975,v. 35, N4, p. 886-889.

213. Marsh W.H., Fitzgerald H. Pancreas acinar cell regenerating. XIII. Histone synthesis and modification. Fed. Proc., 1973, v. 32, N11, p. 2119-2125.

214. Martin D., Todd R.D., Lang D., Pei P.N., Garrard W.T. Heterogeneity in nucleosome spacing. J. Biol. Chem., 1977, v. 252, N22, p. 8269-8277.

215. Martin L., Martin H. Alternsabhangige Veranderunges der RNS-Synthese in der Dunndarmmukosa. Wiss. Z. Humboldt Univ. Berlin, 1975, Bd 24, N2, S. 248-249.

216. Martin" H., Martin R. RNA metabolism and ageing. Akt. Gerontol.', 1977, Bd 7, N5, s- 247-252.

217. Martinez-Sales V., Baguena J. Changes in non-histone proteins during mouse liver regeneration. Cell. Mol. Biol., 1981, v. 27, N2-3, p. 223-229.

218. Marushige K., Bonner J. Fractionation of liver chromatin.- Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1971, v. 68, N12, p. 29412944.

219. Mattews H.R., Bradbury E.M. Histone structure and function.- In: Struct. Funct. Relationships Proteins. Amsterdam e.a. 1976, N2618, p. 181-190.

220. Mayfield J.E., Bonner J. A partial sequence of nuclear events in regenerating rat liver. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1972, v. 69, N1, p. 7-10.

221. Mitsui Y., Sakagami H., Murota S.-J., Yamada M.-A. Age-related decline in histone N1 fraction in human diploid fibroblast cultures. Exp. bell. Res., 1980, v. 126, N2, p. 289-290.

222. Monahan J.J., Holl R.H. Fractionation of chromatin components. Canad. J. Biochem., 1973, v. 51, N5, p. 709-720.

223. Moore R.E., Goldsworthy T.L., Pitol H.C. Turnover of 3'-polyadenylate-containing RNA in livers from aged, partially hepatectomized, neonatal and Morris 51230 hepatoma-bearing rats. Cancer Res., 1980, v. 40, N4, p. 1449-1457.

224. Morris N.R. Nucleosome structure in Aspergillus nidulans. Cell, 1976, v. 8, N3, p. 357-363.

225. Morselt A.F.W., Frederiks W.M. Microphotometry of rat liver nuclear proteins. II. Microphotometry of rat liver nuclear proteins and RNA before and after partial hepat-ectomy. Histochemistry, 1974, v. 41, N2, p. 111-118.

226. Moudgil P.G., Cook J.R., Buetow D.E. The proportion of ribosomes active in protein synthesis and the content of polyribosomal poly(A)-containing RNA in adult and senescent rat livers. Gerontology, 1979, v. 25, N6, p. ^22-326.

227. Mysliwski A., Mysliwska A., Kmiec J. Age-changes in chromatin of liver cells nuclei of different ploidity. Biochemistry, 1977, v. 52, N1, p. 91-96.

228. Nagl W. Role of heterochromatin in the control of oell cycle duration. Nature, 1974, v. 429, N5452, p. 53-54.

229. Neelin J.M., Callahan P.X., Lamp D.C., Murray K. Specific histone from avain erythrocytes. Can. J. Biochem. Biophys., 1964, v. 42, N11, p. 1743-1751.

230. Neumeister J.A., Webster G.C. Changes in the levels and the rate of synthesis of transfer RNA in tissues of mice of different ages. Mech. Ageing Develop., 1981, v. 16, N4, p. 319-326.

231. Niednwiecka A., Kalinski A. Rola histonu HI w strukturze i funkcji chromatiny. Post Biochem., 1977, v. 23, N2, p. 175-188.

232. Noll M. DNA folding in nucleosome. J. Mol. Biol., 1977, v. 6, N1, p. 49-71.

233. Ono Т., Cutler R.G. Age-dependent relaxation of gene expression: increase of endogenous murine leukemia virus-related and globin RNA in brain and liver of mice. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1978, v. 73, N12, p. 4431-4435.

234. Ord M.G., Stocken L.A. Nucleosomes from normal and regenerating rat liver. Biochem. J., 1979, v. 178, N1, p.173.175.

235. Paik W.K., Kim S. Protein methylases during the development of rat brain. Biochim. Biophys. Acta, 1973» v. 313, N1, p. 181-189.

236. Palau J., Climent P., Aviles P.S., Morros A., Soliva M. Interactions of histones and histone peptides with DNA thermal denaturation and solubility studies. Biochim. Biophys. Acta, 1977, v. 476, N2, p. 108-121.

237. Panno J.P., Nai'r K.K. Chromatin condensation in the ageing housefly. Exp. Gerontol., 1984, v. 19, N1, p. 6372.259» Panyim S., Bilek D., Chalkley A. An electrophoretic comparison of vertebrate histones. J. Biol. Chem., 1971, v. 246, N13, p. 4206-4215.

238. Panyim S., Chalkley R. A new histone found only in mammalian tissues with little cell devision. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1969, v. 37, N6, p. 1042-1049.

239. Pederson T. Chromatin structure and gene transcription: nucleosomes permit a new synthesis. Int. Rev. Cytol., 1978, v. 55, New York e.a., p. 1-22.

240. Pehrson J.R., Cole R.D. Histone HI subfractions and HI0 turnover at different rates in nondividing cells. Biochemistry, 1982, v. 21, N2, p. 456-460.

241. Penzes L. Further data on the age-dependent intestinal absorption of dibasic amino acids. Exp. Gerontol., 1974, v. ЭЩ N5/6, p. 259-262.

242. Phillips J.R., Shephard E.A., Stein G.S. Phosphorylation and dephosphorylation of chromosomal proteins during in vitro transcription. Cell Differ., 1981, v. 10, N1, p. 23-51.

243. Piantanelli L., Ermini M., Ricciotti R. Chemical modifications of histones during cell replication. I. Rate of phosphorylation in phase S. Acta Vitaminol., 1974, v. 28, N6,p. 300-305.

244. Pomerai D.J., Chesterton C.J., Butterworth P.H.W. Preparation of chromatin. Variation in the template propertiesof chromatin dependent on the method of preparation. -Eur. J. Biochem., 1974, v. 46, N3, p. 461-471.

245. Pyhtila M.J., Sherman P.G. Studies on the histones and DNA of calf and old cow thymus. J. Gerontol., 1968, v. 23, N4, p. 450-453.

246. Pyhtila M.J., Sherman P.G. Age-associated studies on thermal stability and template effectiveness of DNA and nuc-leoproteins from thymus. Biochem. Biophys. Res.,Commun., 1968, v. 31, N3, p. 340-344.

247. Pyhtila M.J., Sherman P.G. Influence of age on rat liver and kidney chromatin. Gerontologia, 1969, v. 15, N3, p. 321-327.

248. Quastler H., Sherman P.G. Cell population kinetics in theintestinal epithelium of the mouse. Exp. Cell. Res., 1959» v. 17, N2, p. 420-438.

249. Razing S., Pfendt E.A., Matsumura Т., Hayflick L. Comparison of radiography of macromolecular biosynthesis in young and old human diploid fibroblast cultures. Mech. Ageing Develop., 1977, v. 6, N4, p. 379-384.

250. Reek G.R., Simpson R.T., Sober H.A. Resolution of a spectrum of nucleoprotein species in sonicated chromatin. Proc, Nat. Acad. Sci. USA, 1972, v. 69, N8, p. 2317-2521.

251. Reek G.R., Swanson E., Teller D.C. The evolution of histo-nes. J. Mol. Evol., 1978, v. 10, N4, p. 309-317.

252. Richards B.M., Pardon J.P., Lilley D.M.J., Cotter R.J., Wooley J.C., Worcester D.L. Nucleosome sub-structure during transcription and replication. Phil. Trans. R. Soc. Lond., 1978, v. B283, N997, P. 287-289.

253. Richardson A. Effect of aging on translation and transcription: protein and DNA synthesis by hepatocytes isolated from rats of various ages. Proc. 12th Int. Congr. Geront., Hamburg, 1981, v. 1, p. 83.

254. Richardson A., Birchenoll-Sporks M.C., Staecker J.L., Hard-wick J.P., Liu D.S.H. The transcription of various typesof ribonucleic acid by hepatocytes isolated from rats of various ages. J. Gerontol., 1982, v. 37, N6, p. 666-672.

255. Richardson A., Birchenall-Sparks M.C., Staecker J.L. Aging and transcription. Rev, Biol. Res. in Aging, 1983, v. 1, p. 275-294.

256. Rocey L.A., Byvoet P. Histone acetyltransferase in chromatin. Evidence for in vitro enzymatic transfer of acetatefrom acetylcoenzyme A to histones. Exp. Cell. Res., 1971, v. 64, N2, p. 366-370.

257. Rodrigues L.V., Becker P. Rat liver chromatin. Distribution of histone and nonhistone proteins in eu- and heterochroma-tin. Arch. Biochem. Biophys., 1976, v. 173, U2, p. 438447.

258. Samis H.V.S., Wulf V.J., Palzone J.A. The incorporation ofZ

259. H/-cytidine into ribonucleic acid of liver nuclei of young and old rats. Biochim. Biophys. Acta, 1964, v. 91, N1, p. 223-232.

260. Samis H.V., Wulf V.J. The template activity of rat liver chromatin. Exp. Gerontol., 1969, v. 4, N2, p. 111-117.

261. Shaper J.H., Pardoll D.M., Kaufmann S.H., Barrack E.R., Vogelstein В., Coffey D.S. The relationship of the nuclear matrix to cellular structure and function. Adv. in Enzyme Regulation, v. 17, 1979, p. 213-248.

262. Sharma R.C., Yamamoto 0. Base modification in adult animal liver DNA and similarity to radiation-induced base modification. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1980, v. 96, N2, p. 662-671.

263. Shirey T.L., Sobel H. Compositional and transcriptional properties of chromatins isolated from cardiac muscle of young mature and old dogs. Exp. Gerontol., 1972, v. 7,1. U1, p. 15-29.

264. Shlyapnikov S.V., Arutyunyan A.A., Kurochkin S.H. Investigations of the sites phosphorylated in lysine-rich histones by protein kinase from pig brain. FEBS Lett., 1975, v. 53, N3, p. 316-319.

265. Schneider E.L. Cell replication and aging: in vitro and in vivo studies. Fed. Proc., 1979» v. J8, N5, p. 1857-1861.

266. Schneider E.L., Mitsu Y., Tioe R., Shorr S., Brownschneider K. Alteration in cellular RNAs during the in vitro lifespan' of cultured human diploid fibroblasts. Mech. Ageing Develop., 1975a,v. 4, N5-6, p. 449-459.

267. Schneider E.L., Shorr S. Alteration of cellular RNAs during the in vitro lifespan of cultured human diploid fibroblasts. Cell, 1975b, v. 6, N2, p. 179-184.

268. Semsei I., Szeszak P., Zs.-Nagy J. In vivo studies on the age-dependent decrease of the rates of total and mRNA synthesis in the brain cortex of rats. Arch. Gerontol. Geri-atr., 1982, v. 1, N1, p. 29-42.

269. Southern E.M. Long range periodicites in mouse satellite DNA. J. Mol. Biol., 1975, v. 94, N1, p. 51-69.

270. Stein G.S., Wang P.L., Adelman R.C. Age-dependent changes in the structure and function of mammalian chromatin. I. Variations in chromatin template activity. Exp. Gerontol., 1975, v. 8, N5, p. 125-153.

271. Sterner R., Vidali G., Allfrey V.G. Studies of acetylatinn and deacetylation of the sites of acetylation in HMG-1.- J. Biol. Chem., 1979, v. 254, N22, p. 11577-11583.

272. Stramentioly G., Gualano M., Catto E., Algeri S. Tissue levels of 5-adenosyl-methionine in aging rats. J. Gerontol., 1977, v. 32, N4, p. 392-394.

273. Tas S. Involvement of disulfide bonds in the condensed structure of facultative heterochromatin and implications on cellular differentiation and aging. Gerontology, 1978, v. 24, N5, p. 358-364.

274. Tas S., Tam C.F., Walford R.L. Disulfide bonds and the structure of the chromatin complex in relation to aging.- Mech. Ageing Develop., 1980, v. 12-, N1, p. 65-80.

275. Tas S., Walford R.L. Increased disulfide-mediated condensation of the nuclear DNA-protein complex in lymphocytes during postnatal development and aging. Mech. Ageing Develop., 1982a, v. 19, N1, p. 73-84.

276. Tas S., Walford R.L. Influence of disulfide reducing agents on fractionation of the chromatin complex by endogenous nucleases and deoxyribonuclease I in aging mice. J. Ge-ront., 1982b, v. 37, N6, p. 673-679.

277. Tata J.R., Baker B. Sub-nuclear fractionation. Exp. Cell. Res., 1974, v. 83, N1, p. 111-124.

278. Teng C.S., Andrews G.K., Teng C.T. Studies.on the high mobility group non-histone proteins from hen oviduct. Biochem. J., 1979, v. 181, N3, p. 585-591.

279. Thakur M.K. Covalent modifications of chromosomal proteins during aging. Arch. Gerontol. Geriatr., 1983, v. 2, N1-2, p. 1-10.

280. Thakur M.K., Das R., Kanungo M.S. Modulation of acetylation of chromosomal proteins of the brain of r&ts of various ages by epinephrine and estradiol. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1978, v. 81, N3, p. 828-831.

281. Thakur M.K., Kanungo M.S. Methylation of chromosomal proteins and DNA of rat brain and its modulation by estradiol and calcium during aging. Exp. Gerontol., 1981, v. 16, H4, p. 331-337.

282. Thomas J.O., Thompson R.J. Variation in chromatin structure in two cell types from the same tissue: a short DNA repeat length in cerebral cortex neurons. Cell, 1977, v« 10, N4, p. 633-640.

283. Todd R.D., Garrard W. Overall pathway of mononucleosome production. J. Biol. Chem., 1979, v. 254, N8, p. 30743083.

284. Trasher J.D. Age and the cell cycle of the mouse colonic epithelium. Anat. Rec., 1967, v. 157, N4, p. 621-625.

285. Traub P., Boeckmann G. High resolution polyacrylamide gradient slab gel electrophoresis of histones H1, H3 and H4. Hoppe-SeylerTs Z. Physiol. Chem., 1978, v. 359, N5, p. 571-579.

286. Unger-Ullmann C., Modak S.P. Chromatin structure in aging mouse liver. Gerontology, 1979, v. 25, N3, p. 173-174.

287. Varricchio F. Postnatal increase in histone H1 in therat pancreas. Arch. Biochem. Biophys., 1977, v. 179, N2, p. 715-717.

288. Verzar P. Compensatory hypertrophy in old age. In: W. Novinsky, R« Gose (Eds.) Compensatory renal hypertrophy. New York-London, 1969, p. 271-282.

289. Wagner A.P., Jordachel M.C., Wagner L.P. Age changes in

290. H1 group of histones from rat liver. Exp. Gerontol., 1982, v. 17, N3, p. 173-177.

291. Wangh L., Ruiz-Carrilo A., Allfrey V.G. Separation and analysis of histone subfractions differing in their degree of acetylation: some correlation with genetic activity in development. Arch. Biochem. Biophys., 1972, v. 150, N2, p. 44-56.

292. Weinmann R., Roeder R.G. Role of DNA-dependent RNA polyme-merase III in the transcription of the tRNA and 5S genes. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, N5, p. 17901794.

293. Whatley S.A., Hill B.T, Influence of growth state on relationship between nuclear template activity andi in vitro "ageing". Gerontology, 1980, v. 26, N3, p. 129-139.

294. V/hatley S.A., Hill B.T. In vitro ageing and nuclear template function. Gerontology, 1980, v. 26, N3, p. 140-134.

295. Wheeler K.T., Lett J.T. On the possibility that ШЛ repair is related to age in nondividing cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, N3, p. 1862-1863.

296. Worcel A., Han S., Wong M.L. Assembly of newly replicated chromatin. Cell, 1978, v. 15, N4, p. 969-977.

297. Wu R.S., Bonner W. Pattern of histone-variant synthesis and implications for gene regulation. In: Eukaryotic Gene Expression. - New York-London, 1984, p. 37-67*

298. Wu C., Wong Y.-C., Elgin S.C.R. The chromatin structure of specific genes: II. Disruption of chromatin structure during gene activity. Cell, 1979, v. 16, N4, p. 807-814.

299. You P., Thorne A.W., Imai B.S., Mathews N.R., Bradbury E.M. Thermal denaturation studies of acetylated nucleosomes and oligonucleosomes. Eur. J. Biochem., 1982, v. 129, N1, p. 281-288.

Информация о работе

Мозжухина, Татьяна Георгиевна
кандидата биологических наук
Киев, 1985
ВАК 03.00.04

Диссертация

Возрастные особенности хроматина тканей с различной митотической активностью - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Возрастные особенности хроматина тканей с различной митотической активностью ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мозжухина, Татьяна Георгиевна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Возрастные особенности хроматина тканей с различной митотической активностью"

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Мозжухина, Татьяна Георгиевна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мозжухина, Татьяна Георгиевна, Киев

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Возрастные особенности хроматина тканей с различной митотической активностью
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия