Воздействие цитрата на свободнорадикальный гомеостаз в тканях крыс при патологических состояниях, сопряженных с окислительным стрессом

Саиди, Лайла

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Воздействие цитрата на свободнорадикальный гомеостаз в тканях крыс при патологических состояниях, сопряженных с окислительным стрессом
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Воздействие цитрата на свободнорадикальный гомеостаз в тканях крыс при патологических состояниях, сопряженных с окислительным стрессом"

На правах рукописи

Саиди Лайла

ВОЗДЕЙСТВИЕ ЦИТРАТА НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЙ ГОМЕОСТАЗ В ТКАНЯХ КРЫС ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ состояниях, СОПРЯЖЕННЫХ с ОКИСЛИТЕЛЬНЫМ СТРЕССОМ

Специальность 03.01.04. - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 2 ЯНВ Ш

005007316

Воронеж 2011

005007316

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Воронежский государственный университет»

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

Попова Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Ершова Антонина Николаевна

кандидат биологических наук Цветикова Любовь Николаевна

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-

исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии

Защита диссертации состоится 13 января 2012 года в 15 часов на заседании диссертационного совета Д.212.038.03 при Воронежском государственном университете по адресу: 394006 Воронеж, Университетская пл., 1, биолого-почвенный факультет, ауд. 59

Автореферат диссертации размещен на официальном сайте Минобрнауки Российской Федерации и на сайте Воронежского государственного университета www.vsu.ru

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского государственного университета

Автореферат разослан « » декабря 2011 года

Ученый секретарь диссертационного

совета, доктор биологических наук, профессор / Грабович М Ю

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. К настоящему времени накоплен значительный объем данных относительно участия процессов свободнорадикального окисления (СО) биомолекул в развитии различных патологических состояний, включая аутоиммунные болезни, хронические воспаления, сердечно-сосудистые, нейродегенеративные заболевания, болезни печени и другие (Осипов, 1990; Меньшикова, 2008; Попова, 2008). К числу свободнорадикальных патологий относят токсические поражения печени -широко распространенные и вызывающие серьезные осложнения заболевания, при которых развивается клиническая картина тяжелого гепатоза. Свободные радикалы, опосредующие нарушение структурно-функционального состояния печени, образуются в данном случае в ходе биотрансформации ксенобиотиков, в частности, хлорированных углеводородов, при участии микросомальных систем гепатоцитов (Recknagel, 1989; Wang, 2007).

Одним из распространенных патологических состояний эндокринной системы является гипертиреоз. Имеются сведения, что тиреоидные гормоны при больших концентрациях индуцируют окислительный стресс в тканях млекопитающих вследствие усиления клеточного дыхания и, как следствие, образования супероксид-радикала на уровне убихонона, а также активации некоторых прооксидантных ферментов (Fernandez, 1985; Asayama, 1987; Turrens, 1985). Среди многосистемных сдвигов, возникающих под действием данных гормонов в больших концентрациях, выделяют совокупность симптомов нарушений функционирования сердца, получивших название «тиреотоксическое сердце», и печени - «тиреотоксический гепатоз» (Дедов, 2008; Зефирова, 1999).

При заболеваниях подобного рода может иметь место дисбаланс между работой антиоксидантной системы, регулирующей интенсивность свободнорадикальных процессов, и образованием активных форм кислорода (АФК), в связи с чем поиск и исследование механизма действия соединений-протекторов с антиоксидантными свойствами, которые могут быть в дальнейшем использованы в терапии свободнорадикальных патологий, является одной из важнейших задач медицинской биохимии. Особый интерес в этом плане представляют естественные метаболиты клетки, один из которых -цитрат - участвует в протекании жизненно необходимых физиолого-биохимических процессов - цикла трикарбоновых кислот, биосинтеза жирных кислот и других. Кроме того, за счет наличия диссоциирующих карбоксильных групп цитрат проявляет свойства хелатора ионов металлов, способных участвовать в развитии каскадных реакций свободнорадикального характера, в связи с чем может быть отнесен к антиоксидантам. Показано, что цитрат защищает клетки почечного эпителия от повреждения, опосредованного ускоренным образованием АФК (Вуег, 2005). Изменение содержания данного клеточного метаболита наблюдается при ряде патологических состояний, связанных с гипоксией (Рубин, 1979; Freminet, 1981; Rafalowska, 1975). Таким образом, исследование возможностей применения цитрата в технологии

разработки новых лекарственных препаратов, выступающих в качестве антиоксидантных и энергообеспечивающих средств, представляется достаточно перспективным, в связи с чем интерес вызывает исследование влияния цитрата на свободнорадикальный гомеостаз организма при патологиях, сопряженных с развитием окислительного стресса, позволяющее оценить его возможное протекторное действие.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось исследование влияния цитрата на интенсивность свободнорадикальных процессов и активность антиоксидантной системы в тканях крыс при патологиях, сопряженных с развитием окислительного стресса - токсическом гепатите и гипертиреозе. В связи с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Исследование влияния цитрата на активность маркерных ферментов повреждения гепатоцитов в сыворотке крови крыс при экспериментальном токсическом гепатите (ЭТГ).

2. Анализ воздействия цитрата на интенсивность процессов СО и степень фрагментации ДНК в тканях животных с ЭТГ.

3. Оценка влияния цитрата на ферментативное и неферментативное звенья антиоксидантной системы (АОС) при токсическом поражении печени.

4. Исследование действия цитрата на активность ферментов окислительного метаболизма, способных участвовать в регуляции свободнорадикальных процессов, при патологии печени.

5. Оценка активности маркерных ферментов цитолиза клеток печени и сердца в сыворотке крови крыс при действии цитрата на фоне экспериментального гипертиреоза (ЭГТ).

6. Исследование влияния цитрата на уровень свободнорадикальных процессов в тканях крыс при ЭГТ.

7. Изучение функционирования системы антиоксидантной защиты в тканях крыс при введении цитрата на фоне развития тиреотоксикоза.

8. Оценка воздействия цитрата на активность некоторых ферментов окислительного метаболизма, функционирование которых сопряжено с работой АОС, в тканях животных с гипертиреозом.

9. Исследование влияния цитрата на активность ферментов глутатионовой АОС из печени крыс с токсическим гепатитом и гипертиреозом с использованием очищенных ферментных препаратов.

10. Создание гипотетической модели участия цитрата в регуляции свободнорадикального гомеостаза при патологиях, сопряженных с окислительным стрессом.

собой снижение степени мобилизации ферментативных и неферментативных звеньев антиоксидантной защиты организма. Вместе с тем, при введении цитрата животным с патологией имеет место изменение в сторону контроля активности ферментов окислительного метаболизма (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, НАДФ-изоцитратдегидрогеназы, аконитазы,

цитратсинтазы). Полученные данные могут представлять интерес для выявления показателей, наиболее информативно отражающих действие антиоксидантных препаратов, в частности, цитрата, на степень развития оксидативного стресса. Предложена гипотетическая схема влияния цитрата на свободнорадикальный гомеостаз организма на фоне патологических процессов, сопровождаемых окислительным стрессом.

Практическая значимость. Полученные данные о позитивном воздействии цитрата на свободнорадикальный гомеостаз в тканях млекопитающих в условиях развития патологических состояний, сопряженных с окислительным стрессом, свидетельствуют о возможности применения данного соединения для создания препаратов для комплексной терапии свободнорадикальных патологий. Результаты работы вносят вклад в решение проблемы по выявлению нарушений метаболизма и поиску оптимальных путей их коррекции в патологическом состоянии.

Материалы работы используются в учебном процессе на биолого-почвенном факультете Воронежского государственного университета при чтении курсов «Интеграция процессов обмена веществ в организме», «Свободнорадикальные процессы в биосистемах», спецкурсов по аналитической и клинической биохимии, энзимологии. Кроме того, они используются при проведении практикумов, выполнении курсовых, дипломных работ и магистерских диссертаций студентами ВГУ.

Апробация работы. Основные результаты, полученные при выполнении диссертационной работы, представлены на 1-ой и 4-й Всероссийских с международным участием научно-методических конференциях «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ (Воронеж, 2007, 2010), Всероссийской научной конференции «Диагностика, терапия, профилактика социально значимых заболеваний человека» Российской академии естествознания (2008), 12ой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2008), Международной студенческой биологической конференции (Ереван, 2009), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» (Уфа, 2010), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2010), Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Проблемы здоровьесбережения дошкольников, учащихся и студентов. Новые здоровьесберегающие тенденции в фармации и медицине» (Воронеж, 2011).

Публикации. Основные результаты диссертационной работы изложены в 18 публикациях - 8 статьях и 10 тезисах.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Выявлено протекторное действие цитрата при введении на фоне развития патологий, сопровождающихся окислительным стрессом (ЭТГ, ЭГТ). Данное соединение способствует улучшению маркерных показателей при исследуемых заболеваниях, торможению свободнорадикальных процессов и снижению степени фрагментации ДНК.

2. Введение цитрата животным на фоне развития ЭТГ и ЭГТ приводит к снижению степени мобилизации основных компонентов АОС организма.

3. Под влиянием цитрата происходит изменение в сторону контроля активности ферментов окислительного метаболизма, способных участвовать в регуляции интенсивности процессов СО, - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, НАДФ-изоцитратдегидрогеназы, аконитатгидратазы и цитратсинтазы.

4. На основе полученных данных предложена гипотетическая схема, отражающая возможное участие цитрата в регуляции свободнорадикального гомеостаза при патологиях, сопряженных с окислительным стрессом.

Структура и объем работы. Диссертация представлена на 202 страницах текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения полученных результатов (4 главы), заключения, выводов и списка литературы (375 источников). Иллюстративный материал включает 43 рисунка и 6 таблиц.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объект исследования. В качестве объекта исследования использовали белых лабораторных крыс-самцов массой 150-200 г. Крысы были разделены на 5 экспериментальных групп: 1 - контроль (интактные животные); 2 -животные с экспериментальным токсическим гепатитом; 3 группа животных, которым на фоне развития ЭТГ вводили цитрат; 4 - крысы с экспериментальным гипертиреозом; 5 - животные, которым на фоне развития ЭГТ вводили цитрат.

Создание моделей патологических состояний и введение цитрата. Для моделирования ЭТГ животным после суточной пищевой депривации однократно перорально вводили 33% раствор гепатотоксина СС14 в вазелиновом масле в дозе 0,064 мл на 100 г веса (Федорова, 1999; Карташова, 1975). Забой животных производили на 4 сутки после введения токсического агента.

Для индуцирования экспериментального гипертиреоза животным вводили внутрибрюшинно трийодтиронин в дозе 100 мкг на 100 г массы тела, инъекции осуществляли трижды в течение 6 дней (Fernandez, 1991).

Цитрат крысам с СС14-индуцированным повреждением печени и животным после индуцирования гипертиреоза вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг, ежедневно в течение 3-х дней, один раз в день.

Подготовка материала для исследования. Кровь животных забирали из сердца, помещали на 0,5 часа в термостат при 37°С, затем центрифугировали при 4000g в течение 10 мин. Навеску ткани печени гомогенизировали в

фарфоровой ступке в 4-х кратном, сердца - 3-х кратном объеме охлажденной среды выделения, фильтровали через слой капрона и центрифугировали при 5000§ в течение 10 мин. Осадок отбрасывали. Полученные гомогенаты тканей и сыворотку крови использовали для дальнейших исследований.

Оценку степени цитолиза гепато- и кардиомиоцитов проводили с помощью определения активностей аланин- и аспартатаминотрансфераз (АлАТ и АсАТ), а также креатинкиназы-МВ (КК-МВ) с использованием стандартных диагностических наборов.

Определение интенсивности свободнорадикальных процессов. Интегральные характеристики уровня свободнорадикальных процессов определеляли методом индуцированной пероксидом водорода с сульфатом железа биохемилюминесценции (БХЛ) на биохемилюминометре БХЛ-07 с программным обеспечением. Кинетическую кривую регистрировали в течение 30 с и анализировали светосумму БХЛ (Б), интенсивность максимальной вспышки (1тах), тангенс угла падения кинетической кривой

Содержание диеновых коньюгатов (ДК) определяли спектрофотометрическим методом при 233 нм (Стальная, 1972).

Степень фрагментации ДНК как показатель развития апоптоза оценивали электрофоретически после выделения ДНК феноль'но-хлороформным методом.

Определение активности ферментов проводили

спектрофотометрически. Активность выражали в единицах ферментативной активности (Е/ мл, Е/ г сырой массы) или в виде удельной активности.

Активность СОД определяли по ингибированию скорости восстановления нитросинего тетразолия в неэнзиматической системе феназинметасульфата и НАДН при 540 нм (Матюшин, 1991). Определение активности каталазы проводили по методу, основанному на образовании окрашенного комплекса пероксида водорода с молибдатом аммония, поглощающего при 410 нм (Королюк, 1985). О скорости ферментативных реакций, катализируемых ГР, Г6ФДГ, НАДФ-ИДГ, сопряженных с окислительно-восстановительными превращениями НАДФ, судили по убыли или приросту оптической плотности при 340 нм. Активность ГП измеряли по уменьшению оптической плотности при длине волны 340 нм в результате окисления НАДФН, протекающего за счет осуществления сопряженных ферментативных реакций: образования окисленного глутатиона под действием ГП и его последующего восстановления под действием ГР. Активность АГ определяли при 240 нм, ЦС - при 412 нм. Определение содержания белка проводили по методу Лоури при 750 нм (Ьоиту, 1951).

Определение содержания низкомолекулярных антиоксидантов. Концентрацию восстановленного глутатиона определяли по образованию тионитрофенильного аниона, имеющего максимум поглощения при длине волны 412 нм, в реакции с 5,5-дитио-бис-(2-нитробензойной) кислотой. Определение содержания а-токоферола проводили по образованию хромогенного комплексного соединения, поглощающего при 510 нм, при взаимодействии а-токоферола с РеС13 и ортофенантролином (Бузлама, 1997).

Очистка глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы из печени крыс и исследование свойств ферментов. Для получения очищенных ферментных препаратов ГП и ГР использовали стадии гомогенизации, гель-фильтрации на сефадексе 0-25, ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. В случае ГР после гомогенизации ткани печени проводили фракционирование белков с помощью сульфата аммония. Все операции проводили при температуре 0...+4°С. Кинетические и регуляторные свойства ГП и ГР исследовали с использованием очищенных препаратов фермента. Определение констант Михаэлиса осуществляли в двойных обратных координатах Лайнуивера-Берка (Диксон, 1982)

Статистическая обработка результатов. Опыты проводили в 8-10-кратной биологической и 2-4-кратной аналитической повторности. Результаты опытов сравнивали с контролем. Полученные данные обрабатывали с использованием ^критерия Стьюдента. Обсуждаются статистически достоверные различия при Р<0,05.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ЦИТРАТА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ ПРИ РАЗВИТИИ ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА И ГИПЕРТИРЕОЗА

Согласно полученным результатам, в сыворотке крови животных с ЭТГ, которым вводили цитрат, было отмечено снижение активности ферментов-маркеров степени поражения ткани печени - АлАТ и АсАТ, значительно возрастающих при патологии, в 1,6 и 1,4 раза, что может свидетельствовать о позитивном действии данного соединения на гепатоциты. В условиях введения цитрата на фоне развития гипертиреоза также было отмечено уменьшение активности аминотрансфераз и КК-МВ по сравнению с патологией.

С целью исследования влияния цитрата на уровень свободнорадикальных процессов в тканях крыс с патологиями был использован метод биохемилюминесценции. При введении цитрата животным с ЭТГ происходило снижение параметров БХЛ, отражающих степень протекания СО и возрастающих при патологии: Б хемилюминесценции в 1,9 раза, 1тах - в 2,0 раза в ткани печени крыс (рис. 1). В условиях действия цитрата на фоне развития гипертиреоза в гепатоцитах светосумма БХЛ уменьшалась в 1,2 раза, 1тн - в 1,5 раза, в ткани сердца данные показатели снижались в 1,4 и 1,3 раза соответственно по сравнению с патологией. Сходные изменения параметров биохемилюминесценции были отмечены и для сыворотки крови животных экспериментальных групп.

При введении цитрата на фоне развития ЭТГ было выявлено также снижение уровня продуктов ПОЛ в ткани печени и сыворотке крови крыс в 1,3 раза по сравнению с патологией. Уменьшение содержания ДК в тканях животных имело место и при действии цитрата в условиях гипертиреоза: в печени - в 1,1 раза, в сыворотке крови - в 1,2 раза.

Данные об изменениях параметров биохемилюминесценции и содержания диеновых коньюгатов при введении цитрата на фоне токсического

поражения четыреххлористым углеродом и гипертиреоза соотносятся с результатами оценки степени фрагментации ДНК в тканях экспериментальных животных: было отмечено снижение данного показателя по сравнению с картиной, наблюдающейся в условиях развития патологических состоянии. Полученные данные могут являться следствием проявления данным соединением антиоксидантных и антиапоптотических свойств.

И 40 2

Ш 20

со

и «

И 20

X ш

ел

1д

2 3

4 5

Группы ЖИВОТНЫХ

. . ,

2 3 4 5 Группы ЖИВОТНЫХ

I 4 5

Группы ЖИВОТНЫХ

(а)

(б)

(в)

-н

.л,

........

2 3 4 5

Группы ЖИВОТНЫХ

1 2 3 4 5

Группы ЖИВОТНЫХ

Й 3 щ 2

"" I

ними Л1ШШ 1ННШН ШШН; ШШШ: 11И11М

1 4 5

Группы животных

Рис. 1. Светосумма медленной вспышки и интенсивность максимальной вспышки биохемилюминесценции в печени (а), сыворотке крови (б) и сердце (в) крыс: в контроле (1); при экспериментальном токсическом гепатите (2); при введении цитрата животным с ЭТГ (3); при экспериментальном гипертиреозе (4); при введении цитрата животным с ЭГТ (5)

При введении цитрата животным с ЭТГ наблюдалось также изменение в сторону контроля значений tga2, характеризующего антиоксидантный статус и увеличивающегося при патологии: выявлено снижение данного параметра в печени в 1,6 раза, в сыворотке крови в 2,3 раза. В группе крыс с гипертиреозом, которым вводили данное соединение, также наблюдалось уменьшение величины БХЛ: в 1,1 раза в печени, в 1,2 - в сердце, в 1,9 раза - в сыворотке крови. Это также свидетельствует о том, что цитрат тормозит процессы СО и, как следствие, снижается степень мобилизации систем, отвечающих за регуляцию уровня свободнорадикальных реакций.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что цитрат способен оказывать позитивный эффект на состояние печени и сердца, вызывая торможение развития СО биосубстратов на фоне развития токсического гепатита и гипертиреоза.

ВЛИЯНИЕ ЦИТРАТА НА АКТИВНОСТЬ КОМПОНЕНТОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ПАТОЛОГИЯХ, СОПРЯЖЕННЫХ С ОКИСЛИТЕЛЬНЫМ СТРЕССОМ

Важнейшими компонентами антиоксидантной защиты организма являются ферменты СОД, каталаза, ГП и ГР, в связи с чем было проведено исследование влияние цитрата на изменение активности этих антиоксидантных ферментов. В условиях развития ЭТГ и ЭГТ имело место увеличение их активности по сравнению с контролем, что, по-видимому, играет важную роль в адаптации организма к усиленному образованию АФК и продуктов их взаимодействия с биомолекулами.

В группах животных с патологией, которым вводили цитрат, было отмечено снижение активности исследуемых ферментов-антиоксидантов, то есть наблюдалось изменение в сторону показателей интактных животных. Так, при действии цитрата на фоне развития гепатита происходило уменьшение удельной активности СОД в печени и сыворотке крови в 1,3 и 1,5 раза. При введении тестируемого соединения крысам с ЭГТ отмечалось снижение данного параметра в печени в 1,3 раза, в сердце - в 1,1 раза, в сыворотке крови -в 1,2 раза относительно значений при гипертиреозе.

Введение цитрата животным на фоне развивающегося повреждения печени, вызванного СС14, приводило к снижению в гепатоцитах активности каталазы, выраженной в виде Е/г сырой массы, в 1,3 раза по сравнению со значениями при патологии. Активность каталазы, выраженная в виде Е/ мл сыворотки крови, при этом уменьшалась в 1,7 раза. Действие цитрата на фоне развития гипертиреоза сопровождалось снижением активности данного фермента, выраженной в виде Е/ г сырой массы ткани печени или сердца, в 1,2 и 1,8 раза соответственно, а в виде Е/ мл сыворотки крови - в 1,6 раза по сравнению со значениями при патологии (рис. 2).

При введении цитрата на фоне развития токсического гепатита активность ГП и ГР, возрастающая при патологии, в печени крыс снижалась в 1,3 раза. Действие цитрата в условиях гипертиреоза сопровождалось

уменьшением активности ГП и ГР в печени, выраженной в Е/ г сырой массы, в 1,2 и 1,3 раза, в сердце - в 1,1 и 1,2 раза. В большинстве случаев активность данных ферментов в сыворотке крови также изменялась в сторону контрольных значений (табл. 1).

й ? '

К ш с

л 2 .......

и и

........

-1

2 3 Группы животных

(а)

1,5

о й-

§ з

ш и

ь м

4 5

2 3 4 5 Группы животных (б)

шлт

1 4 5

Группы животных (в)

Рис. 2. Активность каталазы в печени (а), сыворотке крови (б) и сердце (в) крыс: в контроле (1); при экспериментальном токсическом гепатите (2); при введении цитрата животным с ЭТГ (3); при экспериментальном гипертиреозе (4); при введении цитрата животным с ЭГТ (5)

Изменение активности ГР при введении цитрата соотносится в большинстве случаев с уменьшением содержания восстановленного глутатиона в тканях крыс относительно данных при патологии. Так, действие цитрата на фоне развития ЭТГ сопровождалось снижением уровня вБИ в печени в 1,8 раза, на фоне развития гипертиреоза - в печени на 15%, в сердце на 12%.

Вероятно, в основе снижения активности СОД, каталазы, ГП, ГР и содержания восстановленного глутатиона при введении цитрата на фоне развития патологических состояний, сопряженных с окислительным стрессом, лежит способность исследуемого вещества влиять на образование свободных радикалов и тем самым снижать нагрузку на антиоксидантные системы организма, проявляя протекторные свойства.

Таблица 1

Активность глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы в тканях крыс

Условия опыта Активность фермента, выраженная в виде Е/ г сырой массы Активность фермента, выраженная в виде Е/ мл сыворотки

Печень Сердце

ГП ГР ГП ГР ГП ГР

Контроль 0,135± 0,006 0,780+ 0,031 0,350+ 0,015 0,106+ 0,052 0,159+ 0,007 0,038+ 0,002

ЭТГ 0,620+ 0,025 1,193+ 0,048 - 0,250+ 0,011 0,052+ 0,002

ЭТГ+цитрат 0,460+ 0,021 0,934+ 0,042 0,200± 0,009 0,047± 0,002

ЭГТ 0,229+ 0,010 1,300+ 0,056 0,460± 0,019 0,160± 0,008 0,218+ 0,008 0,053+ 0,003

ЭГТ+цитрат 0,186± 0,008 1,037+ 0,047 0,422± 0,020 0,138+ 0,006 0,189± 0,009 0,046+ 0,002

Изменения содержания одного из важнейших низкомолекулярных антиоксидантов - а-токоферола - имели разнонаправленный характер при гепатите и гипертиреозе, однако и в том, и в другом случае при действии цитрата проявлялось изменение данного параметра в сторону контроля (рис. 3). Так, при введении животным с ЭТГ цитрата наблюдалось возрастание уровня а-токоферола в 1,3 раза относительно патологии. Это может являться следствием как снижения цитратом интенсивности свободнорадикальных процессов, так и прямого синергичного влияния данного соединения на содержание активной формы а-токоферола (Наш, 1997).

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЦИТРАТА НА АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ФЕРМЕНТОВ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО МЕТАБОЛИЗМА

В связи с тем, что основными поставщиками НАДФН для работы глутатионовой АОС являются Г6ФДГ и НАДФ-ИДГ, было изучено изменение активности этих ферментов в тканях крыс при введении цитрата на фоне развития ЭТГ и ЭГТ. В условиях патологических состояний их активность повышалась. При введении цитрата животным с СС14-индуцированным повреждением печени активность Г6ФДГ, выраженная в виде Е на г сырой массы, снижалась в печени крыс в 1,2 раза, НАДФ-ИДГ - в 1,4 раза по сравнению со значениями при патологии. При введении цитрата животным с ЭГТ было обнаружено снижение активности Г6ФДГ, выраженной в виде Е/ г сырой массы сердца, в 1,4 раза, печени - в 1,1 раза, в виде Е/ мл сыворотки - в 1,3 раза по сравнению с активностью при гипертиреозе. Для сыворотки крови были характерны сходные тенденции изменений активности данных

ферментов. По-видимому, при уменьшении степени мобилизации глутатионовой системы в условиях воздействия цитрата снижалась и потребность в поставке НАДФН для работы этой системы, осуществляемой Г6ФДГ и НАДФ-ИДГ.

600

400

800

600

400

200

.!.... -ь

>ИШ1

2 3 4 Группы животных

(а)

2 3 4 5 Группы животных (б)

I 5

1500

1000

I 4 5

Группы животных (в)

Рис. 3. Содержание а-токоферола в печени (а), сыворотке крови (б) и сердце (в) крыс: в контроле (1); при экспериментальном токсическом гепатите (2); при введении цитрата животным с ЭТГ (3); при экспериментальном гипертиреозе (4); при введении цитрата животным с ЭГТ (5)

При введении цитрата активность аконитазы - чувствительной мишени действия свободных радикалов - возрастала в сторону контроля. Так, при действии данного соединения на фоне ЭТГ удельная активность этого фермента в печени увеличивалась в 2,9 раза, в сыворотке крови - в 2,1 раза. Введение цитрата животным с гипертиреозом приводило к повышению данного параметра в ткани печени в 3,8 раза, сердца - в 1,9 раза, в сыворотке крови - в 2,2 раза по сравнению со значениями при патологии (рис. 4). Вероятно, нормализация активности АГ при введении цитрата на фоне развития патологических процессов происходила вследствие снижения уровня СО и реконструкции железо-серного кластера данного фермента. Кроме того, цитрат, являющийся субстратом аконитазной реакции, способен активировать фермент.

и 5

< я

•я 2 ,

и 15

О О

х а

< ¡2 0.5

0,2

I 2 3 4 5 Группы ЖИВОТНЫХ

(а)

1 2 3 4 5 Группы ЖИВОТНЫХ (б)

2,5

Г -4

и о

< 8

¡5 3

9. ®

о о

а з

? о

0.5

!ШШИ ИШШ

лщш ищи <ШМ)Ш жшш

1 4 5

Группы ЖИВОТНЫХ (в)

Рис. 4. Активность аконитазы в печени (а), сыворотке крови (б) и сердце (в) крыс: в контроле (1); при экспериментальном токсическом гепатите (2); при введении цитрата животным с ЭТГ (3); при экспериментальном гипсртиреозе (4); при введении цитрата животным с ЭГТ (5)

При ССЦ-индуцированном гепатите в тканях крыс происходило снижение активности ЦС. Так, активность фермента, выраженная в виде Е/ г сырой массы печени, при патологии снижалась в 1,3 раза, в виде Е/ мл сыворотки крови - в 1,1 раза по сравнению с контролем. Это может быть связано с изменением конформации молекулы фермента под действием АФК или интермедиатов клеточного метаболизма, концентрация которых при патологии может меняться. В литературе имеются сведения о снижении активности ЦС в миокарде при старении, сопровождающемся повышением уровня свободнорадикальных процессов (11, 1991). В группе животных с ЭТГ, которым вводили цитрат, было выявлено незначительное возрастание активности ЦС. Отсутствие значительных изменений данного параметра может быть объяснено с точки зрения ингибирующего влияния на ЦС цитрата, являющегося продуктом этой ферментативной реакции. В то же время при развитии гипертиреоза активность фермента возрастала, что соотносится с литературными данными относительно повышения активности ЦС при введении Т3 (У/уЫишеп, 1995). После введения цитрата отмечалось уменьшение исследуемого показателя по сравнению с патологией. Так, при

введении данного соединения активность фермента, выраженная в виде Е/ г сырой массы, в печени крыс снижалась в 1,6 раза, в сердце - в 1,4 раза, а активность ЦС, выраженная в виде Е/ мл сыворотки крови, - в 1,4 раза относительно значений при ЭГТ. По-видимому, для модификаций активности данного фермента характерны специфические особенности в зависимости от типа повреждающего агента и длительности воздействия.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЦИТРАТА НА АКТИВНОСТЬ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫС С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОЧИЩЕННЫХ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Совокупность выше описанных процедур позволила получить частично очищенные препараты ГП и ГР из печени крыс. Степень очистки полученных ферментных препаратов и выход на заключительной стадии очистки представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Результаты очистки ферментных препаратов глутатионпероксидазы и

глутатионредуктазы из печени крыс экспериментальных групп

Условия эксперимента ГП ГР

Выход, % Степень очистки Выход, % Степень очистки

Контроль 40,2 39,2 45,3 56,4

ЭТГ 29,1 44,1 29,2 48,8

ЭТГ + Цитрат 33,3 35,6 33,5 51,0

ЭГТ 30,1 31,5 35,9 62,3

ЭГТ + Цитрат 28,4 32,0 31,4 59,6

Очищенные ферментные препараты глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы из гепатоцитов крысы были использованы для изучения некоторых кинетических параметров каталитического действия ферментов. При гепатите и гипертиреозе происходило снижение Км ГП к восстановленному глутатиону (табл. 3). Для ГР отношение Ути/Км возрастало при патологиях (табл. 4). Это могло сказываться на увеличении активности данных ферментов по сравнению с контролем. В то же время при введении цитрата животным с патологиями, сопряженными с развитием окислительного стресса, не было отмечено достоверного изменения кинетических параметров каталитического действия ферментов по сравнению с ЭТГ и ЭГТ соответственно.

С использованием очищенных ферментных препаратов был обнаружен активирующий эффект цитрата на ГП и ГР 1« патологически измененной печени животных по сравнению с его действием на ферменты, выделенные из интактной ткани (рис. 5). По-видимому, в условиях развития гепатита и гипертиреоза более значительную роль может играть косвенное действие

цитрата на ферменты - при торможении процессов свободнорадикального окисления при его введении снижается нагрузка на компоненты антиоксидантной системы.

Таблица 3.

Значения Км глутатионпероксидазы из печени крыс исследуемых групп

Экспериментальная группа Значения Км, мМ

ОБН н202

Контроль 0,033+0,002 0,20810,010

ЭТГ 0,01110,001 0,18510,009

ЭТГ+цитрат 0,012±0,001 0,19410,008

ЭГТ 0,019+0,001 0,19610,008

ЭГТ+цитрат 0,020±0,001 0,200+0,006

Таблица 4.

Значения Км и Утах/Км глутатионредуктазы из печени крыс исследуемых групп

Экспериментальная группа Значения Км, мМ Значения Упих/Км

0880 НАДФН НАДФН

Контроль 0,2310,009 0,20810,010 3,9510,17 2,2910,11

ЭТГ 0,7110,025 1,73110,079 7,0410,29 4,8110,21

ЭТГ+цитрат 0,6810,022 1,76210,068 6,88+0,25 4,5810,23

ЭГТ 0,5910,024 1,27310,061 5,8210,25 3,6810,17

ЭГТ+цитрат 0,5610,019 1,26410,55 5,5910,21 3,5010,18

140 120 100 80 60 40 20 0

0,2 0,4

(С)

0,6

0,8 I [щлрат], мМ

[щтгрет], мМ

(б)

Рис. 5. Влияние цитрата на активность глутатионпероксидазы (а) и глутатионредуктазы (б) из печени контрольных животных (1), крыс с ЭТГ (2) и

ЭГТ (3)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно, что в основе целого ряда заболеваний лежит усиление процессов СО биомолекул, приводящее к структурным и функциональным нарушениям работы клеточных систем (Осипов, 1990; Зенков, 2001; Попова, 2008). Результаты измерения параметров БХЛ, содержания продуктов ПОЛ и оценки степени фрагментации ДНК подтверждают интенсификацию свободнорадикальных процессов в тканях животных, подвергнутых действию экзогенно вводимых ССЦ или Т3. В то же время введение цитрата сопровождается уменьшением степени выраженности данных процессов в организме по сравнению с патологией. Так, при действии цитрата на фоне развития ЭТГ имеет место снижение параметров БХЛ - Б и 1тах, в печени в 1,9 и 2,0 раза, в сыворотке крови в 2,0 и 2,5 раза. Антиоксидантный эффект цитрата подтверждается и изменением в сторону контроля уровня продуктов липопероксидации при его введении животным с патологией. Следует отметить, что при введении протектора на фоне развития патологического состояния снижается также степень фрагментации ДНК, являющаяся показателем вовлеченности в процесс патогенеза апоптотических процессов, индуцированных сверхпродукцией АФК.

непосредственного влияния данного соединения на активность ГП и ГР из печени животных экспериментальных групп с использованием очищенных ферментных препаратов выявило его активирующий эффект при патологии. В тканях экспериментальных животных с патологией, которым вводили цитрат, в большинстве случаев происходит также снижение концентрации восстановленного глутатиона, по-видимому, вследствие изменения активности ГР в сторону контроля.

Показано, что введение цитрата способствует повышению уровня а-токоферола в тканях крыс, значительно расходующегося при развитии гепатита, что может быть следствием как ингибирующего действия цитрата на процессы СО биомолекул, приводящего к снижению нагрузки на неферментативное звено АОС, так и непосредственного синергичного эффекта цитрата по отношению к витамину Е (Наш, 1997).

Введение цитрата на фоне развития ССЦ-индуцированного повреждения печени и действия в организме высоких доз Т3 приводило также к изменению активности некоторых ферментов окислительного метаболизма, способных участвовать в регуляции процессов СО. Так, активности Г6ФДГ и НАДФ-ИДГ, увеличивающиеся при патологии, по-видимому, вследствие возрастания потребности в НАДФН для восстановления глутатиона, используемого для обезвреживания АФК и липопероксидов, под действием цитрата снижались в сторону контроля. Вероятно, это явилось следствием снижения нагрузки на глутатионовую АОС за счет реализации антиоксидантного эффекта цитрата. В этих условиях отмечено также возрастание активности АГ, снижающейся при патологии. Эти результаты могут быть объяснены как меньшей степенью повреждения железо-серных кластеров фермента при снижении концентрации АФК, так и активирующим действием цитрата - субстрата реакции, на АГ. При введении цитрата на фоне развития гепатита и гипертиреоза было выявлено изменение в сторону контроля активности ЦС в тканях животных, что, по всей видимости, также происходит за счет влияния данного соединения на протекание процессов окисления биосубстратов, инициируемого свободными радикалами, в организме.

На основании проведенных исследований была предложена гипотетическая модель участия цитрата в регуляции свободнорадикального гомеостаза при патологиях, сопряженных с окислительным стрессом. Согласно данной схеме, представленной на рис. 6, воздействие гепатотоксина тетрахлорметана и высоких доз Т3 инициирует активацию каскадных процессов СО биомолекул, что сопровождается нарушением структурно-функциональных свойств биомембран, повреждением белков, выполняющих жизненно важные функции, в том числе и ферментов, а также других биомолекул, что в итоге приводит к нарушению метаболизма в целом и гибели клетки (Recknagel, 1989; Fernandez, 1985; Asayama, 1987). В основе такого действия СС14 может лежать образование продукта радикальной природы - СС13" - в результате метаболизма токсина с участием системы цитохрома Р450 гепатоцитов. Образующиеся радикалы обладают высокой реакционной способностью и способны эффективно взаимодействовать с биомолекулами различных классов,

инициируя их СО. Индуцирование окислительного стресса под действием тиреоидных гормонов в высоких концентрациях может быть вызвано усилением клеточного дыхания, сопровождающимся ускорением образования АФК (в частности, супероксидного анион-радикала) при работе электрон-транспортной цепи митохондрий, и активацией некоторых микросомальных ферментов, что также приводит к усилению генерации свободных радикалов (Fernandez, 1985).

Полученные данные по изменению маркерных ферментов развития патологического состояния, параметров БХЛ, содержания продуктов липопероксидации, степени фрагментации ДНК свидетельствуют о протекторном и антиоксидантном действии цитрата на фоне развития окислительного стресса при ЭТГ и гипертиреозе. В основе такого действия может лежать хелатирование ионов металлов, способных участвовать в развитии свободнорадикальных процессов - в первую очередь, ионов Fe и Са2+, отрицательно заряженными карбоксильными группами данного соединения. Это, по-видимому, способствует снижению интенсивности протекания реакций Фентона и Хабера-Вайса, приводящих к образованию самой агрессивной АФК - гидроксильного радикала, а также реакций разветвления ПОЛ, в которых ионы Fe2' выступают в качестве катализаторов. Хелатирование ионов Са2+, содержание которых в клетке при интенсификации свободнорадикальных процессов возрастает вследствие нарушения транспортных и барьерных функций биомембран, может также играть важную роль при развитии патологического процесса, так как эти ионы оказывают активирующее воздействие на НАДФН-оксидазу, фосфолипазы, протеиназы, что усугубляет повреждение клеточных структур. По-видимому, торможение свободнорадикальных процессов при введении цитрата животным с патологией способствует ослаблению нагрузки на компоненты АОС организма, что проявляется снижением активности СОД, каталазы, ГП и ГР, уровня восстановленного глутатиона, а также активности некоторых НАДФН-генерирующих ферментов по сравнению со значениями при патологии. Кроме этого, цитрат способен выступать активатором биосинтеза жирных кислот и поставщиком ацетильных фрагментов для протекания этого процесса, что может быть немаловажно в условиях интенсификации ПОЛ, когда требуются строительные блоки для репарации мембран. Исследуемый протектор может также повышать активность и защищать от инактивации АГ, субстратом которой он является (Матасова, 2008). Определенную роль в реализации протекторного эффекта данного соединения может играть и способность участвовать в переходе в активную форму а-токоферола, являющегося основным антиоксидантом липидной фазы мембран (Ham, 1997).

Таким образом, цитрат, благодаря своим антиоксидантным и протекторным свойствам, может рассматриваться как фактор регуляции свободнорадикального гомеостаза на различных уровнях при развитии патологического состояния. В связи с вышесказанным, использование данного соединения как средства для создания новых фармакологических препаратов для лечения заболеваний, сопряженных с окислительным стрессом, представляется достаточно перспективным.

Са

НАДФН-оксидаза

Цитрат

сод

а /

О,- -»

ЦИТ.Р450' ССЦ -=» СС1

СС1зОО

Окислительная модификащ белков

ИН О,

Белки

Липиды Л

Синтез жирных кислот

Механизмы репарации

4, 4

У — г -» ЯОО"

ЯООН яоон

ко* ^

^ ГС5Н -«V— НАДФН + Н ГП| ПР

НАДФ

Г6ФДГ, НАДФ-ИДГ

> неакт. форма

а-токоферол - акт. форма

% Цитрат М ' .................................................. ......,.....

Рис. б. Гипотетическая схема участия цитрата в регуляции свободнораднкального гомеостаза организма при патологаях. сопряженных с окислительным стрессом: из* антиоксидантные эффекты. снижение степени мобилизации АОС

ВЫВОДЫ

1. Введение цитрата животным на фоне развития токсического гепатита приводило к изменению в сторону контроля маркерных показателей повреждения печени (АлАТ, АсАТ), значительно возрастающих при патологии, что свидетельствует о наличии у него гепатопротекторных свойств. О проявлении антиоксидантного эффекта данным соединением свидетельствовало уменьшение параметров биохемилюминесценции, отражающих интенсивность свободнорадикальных процессов, содержания ДК, степени фрагментации ДНК относительно данных при повреждении печени. Так, при введении цитрата животным с ЭТГ Б и 1тах хемилюминесценции снижались в печени в 1,9 и 2,0 раза, в сыворотке крови в 2,0 и 2,5 раза соответственно.

2. При действии цитрата на фоне развития СС14-индуцированного повреждения печени происходило снижение степени мобилизации АОС организма: удельная активность СОД и каталазы уменьшалась в печени в 1,3 раза, в сыворотке крови - в 1,5 раза по сравнению со значениями при патологии, в сторону контроля изменялась также активность ГП и ГР. Было отмечено также снижение относительно данных при патологии значений tga2 хемилюминесценции, отражающего общую антиоксидантную активность.

3. Выявлено изменение содержания восстановленного глутатиона и а-токоферола в тканях крыс, которым на фоне развития токсического гепатита вводили цитрат, в сторону показателей интактных животных.

4. При введении цитрата наблюдалось возрастание удельной активности АГ, выступающей в качестве критической мишени действия свободных радикалов при интенсификации процессов СО биомолекул, индуцированной тетрахлорметаном, в ткани печени в 2,9 раза, в сыворотке крови - в 2,1 раза по сравнению со значениями при патологии. В этих условиях было также отмечено изменение в сторону контрольных значений активности ЦС и НАДФН-продуцирующих ферментов (Г6ФДГ и НАДФ-ИДГ).

5. Воздействие цитрата на фоне развития гипертиреоза сопровождалось снижением активности маркерных ферментов - показателей цитолиза кардио- и гепатоцитов. Наряду с этим, имело место снижение Б и 1тах биохемилюминесценции в 1,2 и 1,5 раза в печени, в 1,4 и 1,3 раза в сердце и сыворотке крови соответственно относительно значений при патологии. Введение цитрата животным с экспериментальным гипертиреозом приводило также к снижению содержания продуктов липопероксидации и степени фрагментации ДНК в тканях крыс, что свидетельствует о торможении свободнорадикальных процессов.

6. Показано, что под влиянием цитрата на фоне действия высоких доз Т3 происходило снижение активностей ферментативных компонентов АОС организма: СОД, каталазы, ГП, ГР, активация которых имела место в условиях развития патологического состояния. Уменьшение степени мобилизации антиоксидантов по сравнению с гипертиреозом подтверждалось также

изменением значений tga2 биохемилюминесценции в сторону контрольных значений.

7. Введение цитрата крысам с гипертиреозом сопровождалось снижением уровня восстановленного глутатиона и а-токоферола в печени в 1,1 и 1,4 раза, в сердце - в 1,1 и 1,3 раза, в сыворотке крови - в 1,2 и 1,3 раза по сравнению с патологией.

8. В условиях действия цитрата на фоне развития тиреотоксикоза отмечено изменение в сторону контроля активности ряда ферментов окислительного метаболизма, способных участвовать в регуляции уровня свободнорадикальных процессов - АГ, ЦС, Г6ФДГ, НАДФ-ИДГ.

9. Исследование влияния цитрата на активность ГП и ГР из ткани печени крыс с экспериментальным токсическим гепатитом и гипертиреозом, проведенное с использованием очищенных ферментных препаратов, позволило выявить активирующий эффект данного соединения по отношению к этим ферментам по сравнению с его действием на ГП и ГР, выделенных из интактной ткани.

10. На основании проведенных исследований предложена гипотетическая схема участия цитрата в регуляции свободнорадикального гомеостаза организма при развитии патологий, сопряженных с окислительным стрессом. По -видимому, изменение большинства показателей, характеризующих оксидативный статус организма, в сторону контрольных значений связано с проявлением цитратом антиоксидантных и протекторных свойств.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

1. Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди Л. Исследование гепатопротекторного действия цитрата при токсическом гепатите у крыс // 3-я Всероссийская научно-практическая конференция «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ (К 100-летию со дня рождения проф. Б.И. Михантьева)», Воронеж, 22-24 марта 2007 г.: тез. докл. - Воронеж, 2007. - Ч. 1. - С. 407-410.

2. Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди Л., Миронова И.С., Давыдова Н.П. Влияние цитрата на интенсивность свободнорадикального окисления в тканях крыс при экспериментальном гипертиреозе // Естествознание и гуманизм. - Т.4, №4. - Межвузовский сборник научных трудов «Современный мир, природа и человек». - Томск, 2007. - Раздел 3. - С. 26-27.

3. Сафонова O.A., Т.Н. Попова, Саиди Л. Активность каталазы в тканях крыс при введении цитрата на фоне развития патологических состояний, сопряженных с оксидативным стрессом // Владикавказский медико-биологический вестник. - 2007. - Т.7. - С. 303-306.

4. Сафонова O.A., Т.Н. Попова, Саиди Л. Активность некоторых НАДФН-продуцирующих ферментов в тканях крыс при токсическом гепатите и действии цитрата // Всероссийская научной конференция «Диагностика, терапия, профилактика социально значимых заболеваний человека»

Российской академии естествознания, 15-20 мая 2008 г.: тез. докл. // В журн. Фундаментальные исследования. - №7, Вып. 8. - С. 39-40.

5. Сафонова O.A., Т.Н. Попова, Саиди JI. Влияние цитрата на активность супероксиддисмутазы и каталазы в тканях крыс при экспериментальном гипертиреозе // 12-я международная Путинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века», Пущино, 10-14 ноября 2008 г.: тез. докл. - Пущино, 2008. - С. 150-151.

6. Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди JI. Влияние цитрата на функционирование глутатионовой антиоксидантной системы в тканях крыс при экспериментальной токсическом гепатите // Вестник ВГУ. - Серия Химия, Биология, Фармация. - 2008. - №2. - С.112-116.

7. Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди JI., Давыдова Н.П., Миронова И.С. Активность глутатионовой антиоксидантной системы в печени крыс при гипертиреозе и введении цитрата // Физиология и психофизиология мотиваций: межрегиональный сборник научных работ. - Вып. 9. - Воронеж: ИПЦВГУ, 2008.-С. 38-41.

8. Саиди Л., Сафонова O.A., Алексеева Е.В., Вершкова Ю.В., Юрьева М.Ю. Влияние цитрата на содержание диеновых конъюгатов в тканях крыс при гипертиреозе // Международная студенческая биологическая конференция, Ереван, 2-4 марта 2009 г.: тез. докл. - Ереван, 2009. - С. 121.

9. Сафонова O.A., Саиди Л., Вершкова Ю.В., Юрьева М.Ю. Влияние цитрата на функционирование глутатионовой антиоксидантной системы в сердце крыс при экспериментальном гипертиреозе // Всероссийская научно-практическая конференция с междунар. участием «Актуальные проблемы современной науки и образования, Уфа, февраль 2010 г.: тез. докл. - Уфа: РИЦ БашГУ, 2010. - Т. 2. - С. 325-329.

10.*Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди Л. Влияние цитрата на оксидативный статус тканей крыс при экспериментальном токсическом гепатите // Биомедицинская химия. - 2010. - Т. 56, вып. 4. - С. 490-498.

П.Сафонова O.A., Тарасова В.В., Саиди Л., Вершкова Ю.В. Влияние цитрата на содержание восстановленного глутатиона в сыворотке крови крыс при экспериментальном гипертиреозе, адреналиновом миокардите и ишемии/ реперфузии головного мозга // Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием, посвященная 1000-летию г. Ярославля «Актуальные вопросы медицинской науки»: сборник научных работ. - Ярославль: ООО «ЯрМедиаГруп», 2010. - С. 111.

12.Саиди Л., Сафонова O.A., Попова Т.Н. Активность глутатионовой антиоксидантной системы в сыворотке крови крыс при введении цитрата на фоне экспериментального гипертиреоза // 4-я Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Фармобразование-2010. Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Поиск новых физиологически активных веществ», Воронеж, 20-21 апреля 2010 г.: тез. докл. - Воронеж: ИПЦ ВГУ, 2010. - Ч. 2. - С. 331-334.

13.Тарасова В.В., Саиди Л., Сафонова O.A., Попова Т.Н. Влияние цитрата на содержание продуктов липопероксидации в тканях крыс при развитии

l i

оксидативного стресса // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Поиск новых физиологически активных веществ: материалы 4-й Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование-2010»: в 2 ч. / Под общ. ред. С.А. Боевой. - г. Воронеж, 20-21 апреля 2010. - Ч. II «Научные основы создания новых лекарственных средств». - Воронеж: ИПЦ ВГУ, 2010. - С 380-382.

14.Сафонова O.A., Попова Т.Н., Макеева A.B., Саиди Л. Оксидативный статус тканей крыс при введении цитрата на фоне экспериментального гипертиреоза // Журнал теоретической и практической медицины. - 2010. -Т. 8,№2.-С. 217-220.

15.*Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди JI. Функционирование глутатионпероксидазной/ глутатионредуктазной системы в тканях крыс при действии цитрата на фоне развития тиреотоксикоза // Вестник ВГУ. - Серия Химия, Биология, Фармация. - 2011. - №1. - С. 144-148.

16.Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди Л., Макеева A.B., Вершкова Ю.В. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и НАДФ-изоцитратдегидрогеназы в тканях крыс при поражениях печени различной этиологии и введении цитрата // Всероссийская с международным участием научно-методическая конференция «Проблемы здоровьесбережения дошкольников, учащихся и студентов. Новые здоровьесберегающие тенденции в фармации и медицине», Воронеж, 26-27 апреля 2011 г.: тез. докл. - Воронеж, 2011. - С. 432-435.

17.*Сафонова O.A., Шульгин К.К., Агарков A.A., Попова Т.Н., Саиди Л. Применение различных видов хроматографии для очистки глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы из патологически измененной печени крыс // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2011. - Т. 11, вып. 6.-С. 845-855.

18.*Сафонова O.A., Попова Т.Н., Саиди Л. Свободнорадикальный гомеостаз в тканях крыс при введении цитрата на фоне развития экспериментального тиреотоксикоза // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2011. - № 7. - С.33-36.

Статьи № 10, 15, 17, 18 опубликованы в печатных изданиях, состоящих в

списке журналов, рекомендованных ВАК.

Подписано в печать 08.12.11. Формат 60*84 Vi6. Усл. печ. л. 1,4. Тираж 100 экз. Заказ 1570.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии Издательско-иолжрафического центра Воронежского государственного университета. 394000, Воронеж, ул. Пушкинская, 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Саиди, Лайла

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Свободнорадикальное окисление биомолекул и антиоксидантные системы организма 14 1.1.1. Свободные радикалы: образование, роль в организме

1Л.2. Свободнорадикальное окисление биомолекул

1.1.2.1. Пероксидное окисление липидов и его роль в живых организмах

1.1.2.2. Окислительная модификация белков

1.1.2.3. Свободнорадикальное повреждение нуклеиновых кислот 25 1.1.3. Антиоксидантная система организма

1.1.3.1. Ферментативные антиоксиданты

1.1.3.2. Характеристика некоторых НАДФН-генерирующих ферментов

1.1.3.3. Макромолекулярные неферментативные антиоксиданты

1.1.3.4. Низкомолекулярные неферментативные антиоксиданты 45 1Л .4. Роль ионов некоторых металлов в протекании свободнорадикальных процессов

1.2. Токсические гепатиты: этиология, роль свободнорадикальных процессов в развитии 5 5 1.2.1. Роль апоптоза в развитии токсического повреждения печени

1.3. Гипертиреоз

1.3.1. Влияние тиреоидньтх гормонов на свободнорадикальное окисление и апоптоз

1.4. Цитрат: метаболизм, физиолого-биохимическое значение, ферменты, участвующие в метаболизме

I 1 1 < I И I I ! Е I НИ I >111 I НВ УВИ I т ъ МНЕ В , ! 5 <

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Создание моделей патологических состояний и введение цитрата

2.2.2. Получение сыворотки крови, гомогената печени и сердца крыс

2.2.3. Определение активности аланинаминотрансферазы и аспартат-аминотрансферазы

2.2.4. Определение активности креатинкиназы-МВ

2.2.5. Определение параметров биохемилюминесценции

2.2.6. Определение содержания диеновых коньюгатов

2.2.7. Исследование степени фрагментации ДНК

2.2.8. Определение активности ферментов

2.2.8.1. Определение активности глутатионпероксидазы

2.2.8.2. Определение активности глутатионредуктазы

2.2.8.3. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

2.2.8.4. Определение активности НАДФ-изоцитратдегидрогеназы

2.2.8.5. Определение активности супероксиддисмутазы

2.2.8.6. Определение активности каталазы

2.2.8.7. Определение активности аконитазы

2.2.8.8. Определение активности цитратсинтазы

2.2.9. Определение содержания глутатиона

2.2.10. Определение содержания а-токоферола

2.2.11. Определение содержания белка

2.2.12. Очистка глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы из печени крыс и исследование свойств ферментов

2.2.12.1. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония

2.2.12.2. Гель-фильтрация на сефадексе С

2.2.12.3. Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе

2.2.12.4. Исследование кинетических характеристик и регуляции активности фермента

2.3. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ СВОЙСТВ ЦИТРАТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ

3.1. Влияние цитрата на активность ферментов-маркеров цитолиза гепатоцитов в сыворотке крови крыс при токсическом поражении печени

3.2. Исследование интенсивности свободнорадикальных процессов в тканях крыс при действии цитрата на фоне развития токсического гепатита

3.3. Оценка степени фрагментации ДНК в печени крыс при тетрахлорметановом гепатите и введении цитрата

3.4. Активность супероксиддисмутазы и каталазы в тканях крыс при введении цитрата на фоне развития токсического гепатита

3.5. Влияние цитрата на активность глутатионовой антиоксидантной системы в тканях крыс при тетрахлорметановом гепатите

3.6. Влияние цитрата на активность НАДФН-генерирующих ферментов в тканях крыс при токсическом поражении печени

3.7. Активности аконитатгидратазы и цитратсинтазы в тканях крыс при тетрахлорметановом гепатите и введении цитрата

3.8. Влияние цитрата на содержание а-токоферола в печени и сыворотке крови крыс на фоне развития экспериментального токсического гепатита

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЦИТРАТА НА ОКСИДАТИВНЫЙ СТАТУС ТКАНЕЙ КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГИПЕРТИРЕОЗЕ 4.1. Влияние цитрата па активность ферментов-маркеров цитолитического синдрома в сыворотке крови животных с экспериментальным гипертиреозом J ^

4.2. Интенсивность свободнорадикальных процессов в тканях крыс при введении цитрата на фоне развития гипертиреоза

4.3. Влияние цитрата на активность супероксиддисмутазы и каталазы в тканях крыс при экспериментальном гипертиреозе

4.4. Влияние цитрата на активность глутатионового звена антиоксидантной системы в тканях крыс при гипертиреозе

4.5. Влияние цитрата на активность некоторых НАДФНпродуцирующих ферментов в тканях крыс при гипертиреозе ' ^

4.6. Влияние цитрата на активность аконитазы и цитратсинтазы в тканях крыс при гипертиреозе

4.7. Влияние цитрата на уровень а-токоферола в тканях крыс при гипертиреозе

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЦИТРАТА НА АКТИВНОСТЬ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫС С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОЧИЩЕННЫХ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

5.1. Очистка глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы из печени крыс экспериментальных групп

5.2. Оценка некоторых кинетических параметров каталитического действия глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы из печени крыс экспериментальных групп

5.3. Исследование влияния цитрата на активность глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы из печени крыс с токсическим гепатитом и гипертиреозом с использованием очищенных ферментных препаратов ^ ^

Введение Диссертация по биологии, на тему "Воздействие цитрата на свободнорадикальный гомеостаз в тканях крыс при патологических состояниях, сопряженных с окислительным стрессом"

Актуальность проблемы. К настоящему времени накоплен значительный объем данных относительно участия процессов свободнорадикального окисления (СО) биомолекул в развитии различных патологических состояний, включая аутоиммунные болезни, хронические воспаления, сердечно-сосудистые, нейродегенеративные заболевания, болезни печени и другие [92,50,90,106]. К числу свободнорадикальиых патологий относят токсические поражения печени - широко распространенные и вызывающие серьезные осложнения заболевания. При воздействии токсинов, в частности, хлорированных углеводородов, происходит повреждение паренхимы и нарушаются метаболические процессы в печени, в результате чего развивается клиническая картина тяжелого токсического гепатоза. Реализация этих эффектов может быть опосредована образованием активных промежуточных продуктов в ходе биотрансформации ксенобиотиков при участии микросомальных систем печени [268,292,300].

Одним из распространенных патологических состояний эндокринной системы является гипертиреоз, связанный с повышенным уровнем гормонов щитовидной железы. Имеются сведения, что тиреоидные гормоны (ТГ) при больших концентрациях индуцируют окислительный стресс в тканях млекопитающих вследствие усиления клеточного дыхания и, как следствие, образования супероксид-радикала на уровне убихонона, а также активации некоторых прооксидантных ферментов [206,258,354]. Синдром тиреотоксикоза проявляется поражениями сердечно-сосудистой и центральной нервной систем, печени, эндокринными и другими нарушениями вследствие избытка ТГ. Так, среди многосистемных сдвигов, возникающих под действием данных гормонов в больших концентрациях, выделяют совокупность симптомов нарушения функционирования сердца, I

I I I и, I получившего название «тиреотоксическое сердце», и печени -«тиреотоксический гепатоз» [38,51].

При патологиях подобного рода именно интенсификация образования свободных радикалов является одним из важнейших звеньев нарушения клеточного метаболизма вследствие повреждения белков, липидов, нуклеиновых кислот [66]. Интенсивность свободнорадикальных процессов регулируется сложной, многоступенчатой системой антиоксидантной защиты, включающей не только «классические» антиоксиданты, но и ряд метаболических систем клетки, способных косвенно участвовать в лимитировании уровня активных форм кислорода (АФК) [372,50,7].

В то же время при патологии может иметь место дисбаланс между работой антиоксидантной системы и образованием АФК, в связи с чем поиск и исследование механизма действия соединений-протекторов с антиоксидантными свойствами, которые могут быть в дальнейшем использованы в терапии свободнорадикальных патологий, является одной из важнейших задач медицинской биохимии. Особый интерес в этом плане представляют естественные метаболиты клетки, один из которых - цитрат -участвует в протекании жизненно необходимых физиолого-биохимических процессов. Так, данное соединение выступает в роли интермедиата цикла трикарбоновых кислот, регулятора скорости гликолиза, поставщика ацетильных групп и активатора биосинтеза жирных кислот. Кроме того, за счет наличия диссоциирующих карбоксильных групп цитрат проявляет свойства хелатора ионов металлов, способных участвовать в развитии каскадных реакций свободнорадикального характера, в связи с чем может быть отнесен к антиоксидантам. Данное соединение показало значимое антиоксидантное действие при использовании в качестве модели системы индуцированного реакцией Фентона пероксидного окисления липидов (ПОЛ) в искусственных мембранах липосом [117]. Показано, что цитрат защищает клетки почечного эпителия от повреждения, опосредованного ускоренным образованием АФК [160]. Изменение содержания данного клеточного

1 , , , «Ж Л11МИ1|И11Ш11ИШ.11«ИИИ1Ш111.и1Ш111Ш1Ш1И^Ш^И

10 метаболита наблюдается при ряде патологических состояний, связанных с^— гипоксией [53,207,307]. Таким образом, исследование возможносте£я: применения цитрата в технологии разработки новых лекарственных! препаратов, выступающих в качестве антиоксидантных и: энергообеспечивающих средств, представляется достаточно перспективным., в связи с чем интерес вызывает исследование влияния цитрата на, свободнорадикальный гомеостаз организма при патологиях, сопряженных с-развитием окислительного стресса, позволяющее оценить его возможное протекторное действие.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось» исследование влияния цитрата на интенсивность свободнорадикальных: процессов и активность антиоксидантной системы в тканях крыс при: патологиях, сопряженных с развитием окислительного стресса - токсическо^т гепатите и гипертиреозе. В связи с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Исследование влияния цитрата на активность маркерных ферментов повреждения гепатоцитов в сыворотке крови крыс при экспериментальном: токсическом гепатите (ЭТГ).

2. Анализ воздействия цитрата на интенсивность процессов СО и степень» фрагментации ДНК в тканях животных с ЭТГ.

3. Оценка влияния цитрата на ферментативное и неферментативное звенья: антиоксидантной системы (АОС) при токсическом поражении печени.

6. Исследование влияния цитрата на уровень свободнорадикальных процессов в тканях крыс при ЭГТ.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование влияния цитрата на интенсивность процессов СО, активность ферментативных и неферментативных компонентов АОС, а также ферментов окислительного метаболизма, способных участвовать в регуляции свободнорадикальных процессов, при патологиях, сопряженных с окислительным стрессом (ЭТГ, ЭГТ). Установлено, что введение цитрата на фоне развития патологии сопровождается торможением свободнорадикальных процессов, что влечет за собой снижение степени мобилизации ферментативных и неферментативных звеньев антиоксидантной защиты организма. Вместе с тем, при введении цитрата животным с патологией имеет место изменение в сторону контроля активности ферментов окислительного метаболизма (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, НАДФ-изоцитратдегидрогеназы, аконитазы, цитратсинтазы). Полученные данные могут представлять интерес для выявления показателей, наиболее информативно отражающих действие антиоксидантных препаратов, в частности, цитрата, на степень развития оксидативного стресса. Предложена гипотетическая схема влияния цитрата на свободнорадикальный гомеостаз организма на фоне патологических процессов, сопровождаемых окислительным стрессом. I —™«|И—1»!

I I I Ii il ill! I I I II i 111 ISR Mill I II IS i II II Ulli II I I ■ II. Iii II. ill I 11 ill

13 конференции «Проблемы здоровьесбережения дошкольников, учащихся и студентов. Новые здоровьесберегающие тенденции в фармации и медицине» (Воронеж, 2011).

Публикации. Основные результаты диссертационной работы изложены в 18 публикациях - 8 статьях и 10 тезисах.

На защиту выносятся следующие положения:

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Саиди, Лайла

166 выводы

1. Введение цитрата животным на фоне развития токсического гепатита приводило к изменению в сторону контроля маркерных показателей повреждения печени (АлАТ, АсАТ), значительно возрастающих при патологии, что свидетельствует о наличии у него гепатопротекторных свойств. О проявлении антиоксидантного эффекта данным соединением свидетельствовало уменьшение параметров биохемилюминесценции, отражающих интенсивность свободнорадикальных процессов, содержания ДК, степени фрагментации ДНК относительно данных при повреждении печени. Так, при введении цитрата животным с ЭТГ 8 и 1тах хемилюминесценции снижались в печени в 1,9 и 2,0 раза, в сыворотке крови в 2,0 и 2,5 раза соответственно.

2. При действии цитрата на фоне развития ССЦ-индуцированного повреждения печени происходило снижение степени мобилизации АОС организма: удельная активность СОД и каталазы уменьшалась в печени в 1,3 раза, в сыворотке крови - в 1,5 раза по сравнению со значениями при патологии, в сторону контроля изменялась также активность ГП и ГР. Было отмечено также снижение относительно данных при патологии значений tga2 хемилюминесценции, отражающего общую антиоксидантную активность.

4. При введении цитрата наблюдалось возрастание удельной активности АГ, выступающей в качестве критической мишени действия свободных радикалов при интенсификации процессов СО биомолекул, индуцированной тетрахлорметаном, в ткани печени в 2,9 раза, в сыворотке крови — в 2,1 раза по сравнению со значениями при патологии. В этих условиях было также отмечено изменение в сторону контрольных значений активности ЦС и НАДФН-продуцирующих ферментов (Г6ФДГ и НАДФ-ИДГ).

5. Воздействие цитрата на фоне развития гипертиреоза сопровождалось снижением активности маркерных ферментов - показателей цитолиза кардио-и гепатоцитов. Наряду с этим, имело место снижение Б и 1тах биохемилюминесценции в 1,2 и 1,5 раза в печени, в 1,4 и 1,3 раза в сердце и сыворотке крови соответственно относительно значений при патологии. Введение цитрата животным с экспериментальным гипертиреозом приводило также к снижению содержания продуктов липопероксидации и степени фрагментации ДНК в тканях крыс, что свидетельствует о торможении свободнорадикальных процессов.

7. Введение цитрата крысам с гипертиреозом сопровождалось снижением уровня восстановленного глутатиона и а-токоферола в печени в 1,1 и 1,4 раза, в сердце - в 1,1 и 1,3 раза, в сыворотке крови — в 1,2 и 1,3 раза по сравнению с патологией.

9. Исследование влияния цитрата на активность ГП и ГР из ткани печени крыс с экспериментальным токсическим гепатитом и гипертиреозом, проведенное с использованием очищенных ферментных препаратов, позволило выявить активирующий эффект данного соединения по ив ни! 11ш ннш I. уши I II а I I ни ■ шшш к, 1 1.1 тт им п и I к<м на .iiiii.it ,1 и \ н I н . ни шн I и»нп лип шяяи в и ■< ш

168 отношению к этим ферментам по сравнению с его действием на ГП и ГР, выделенных из интактной ткани.

10. На основании проведенных исследований предложена гипотетическая схема участия цитрата в регуляции свободнорадикального гомеостаза организма при развитии патологий, сопряженных с окислительным стрессом. По-видимому, изменение большинства показателей, характеризующих оксидативный статус организма, в сторону контрольных значений связано с проявлением цитратом антиоксидантных и протекторных свойств.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Согласно полученным результатам, в условиях интенсификации свободнорадикальных процессов, имеющей место при экспериментальном токсическом гепатите и гипертиреозе, введение цитрата оказывает позитивный эффект. Так, при действии данного соединения на фоне развития моделируемых патологических состояний происходит изменение в сторону контроля активности ферментов — показателей цитолиза гепато- и кардиомиоцитов. Введение цитрата животным с ЭТГ приводит к снижению в сыворотке крови активности АлАТ и АсАТ, значительно возрастающей при патологии, в 1,6 и 1,4 раза соответственно. При действии цитрата в условиях повышенной концентрации Т3 было выявлено уменьшение активности КК-МВ и АсАТ в сыворотке крови в 2,6 и 1,3 раза по сравнению с патологией.

Известно, что в основе целого ряда заболеваний лежит усиление процессов СО биомолекул, приводящее к структурным и функциональным нарушениям работы клеточных систем [92,106]. Результаты измерения параметров БХЛ, содержания продуктов ПОЛ и оценки степени фрагментации ДНК подтверждают интенсификацию свободнорадикальных процессов в тканях животных, подвергнутых действию экзогенно вводимых СС14 или Тз. В то же время введение цитрата сопровождается уменьшением степени выраженности данных процессов в организме по сравнению с патологией. Так, при действии цитрата на фоне развития ЭТГ имеет место снижение параметров БХЛ - Б и 1тах, в печени в 1,9 и 2,0 раза, в сыворотке крови в 2,0 и 2,5 раза. Антиоксидантный эффект цитрата подтверждается и изменением в сторону контроля уровня продуктов липопероксидации при его введении животным с патологией. Действие цитрата на фоне развития ЭТГ приводит к уменьшению содержания ДК в тканях крыс в 1,3 раза. Введение цитрата животным с ЭГТ также сопровождается изменением в сторону контроля данных показателей, отражающих скорость протекания процессов СО биомолекул. Следует отметить, что при введении протектора на фоне развития патологического состояния снижается также степень фрагментации ДНК, являющаяся показателем вовлеченности в процесс патогенеза апоптотических процессов, индуцированных сверхпродукцией АФК.

Под воздействием цитрата отмечается снижение степени мобилизации компонентов антиоксидантной системы по сравнению с патологией, что также может объясняться проявлением цитратом антиоксидантных свойств. Так, об этом свидетельствует уменьшение общего антиоксидантного потенциала, оцениваемого по значениям такого параметра биохемилюминесценции, как тангенс угла падения кинетической кривой Полученные данные подтверждаются и измерением активности отдельных компонентов АОС. При введении цитрата крысам с ЭТГ и ЭГТ удельная активность СОД в печени снижается в 1,3 раза, в сыворотке крови — в 1,5 и 1,2 раза соответственно. Сходные изменения были отмечены и для активности каталазы. Введение цитрата сопровождается и сдвигом активности компонентов ГП/ГР АОС в сторону контрольных значений. Так, активность ГП и ГР в ткани печени животных, выраженная в виде Е/ г сырой массы, при действии цитрата на фоне развития ЭТГ снижается в 1,3 и 1,2 раза соответственно. Данные параметры при введении тестируемого соединения животным с гипертиреозом также уменьшаются. Можно предположить, что причиной снижения активности ГП относительно патологии являлось уменьшение нагрузки на данный антиоксидантный фермент вследствие торможения процессов СО под влиянием цитрата, что сопровождалось замедлением накопления пероксидов неорганической и органической природы - субстратов ГП. При снижении потребности в поставке ОБН для работы данного фермента уменьшалась и активность ГР. По всей видимости, именно действие цитрата на интенсивность СО биосубстратов играет наиболее значительную роль с точки зрения воздействия на ферментативную активность, так как исследование непосредственного влияния данного соединения на активность ГП и ГР из печени животных экспериментальных групп с использованием очищенных ферментных препаратов выявило его шшшшшшшшштшшшшкш активирующий эффект при патологии. В тканях экспериментальных животных с патологией, которым вводили цитрат, в большинстве случаев происходит также снижение концентрации восстановленного глутатиона, по-видимому, вследствие изменения активности ГР в сторону контроля. Так, содержание ОБН в печени при действии протектора на фоне СС14-индуцированного гепатита в 1,8 раза, на фоне гипертиреоза - в 1,1 раза ниже данного параметра в условиях развития патологии.

Введение цитрата на фоне развития СС14-индуцированного повреждения печения и действия в организме высоких доз Т3 приводило также к изменению активности некоторых ферментов окислительного метаболизма, способных участвовать в регуляции процессов СО. Так, активности Г6ФДГ и НАДФ-ИДГ, увеличивающиеся при патологии, по-видимому, вследствие возрастания потребности в НАДФН для восстановления глутатиона, используемого для обезвреживания АФК и липопероксидов, под действием цитрата снижались в сторону контроля. Вероятно, это явилось следствием снижения нагрузки на глутатионовую АОС за счет реализации антиоксидантного эффекта цитрата. В этих условиях отмечено также возрастание активности АГ, снижающейся при патологии. Эти результаты могут быть объяснены как меньшей степенью повреждения железо-серных кластеров фермента при снижении концентрации АФК, так и активирующим действием цитрата - субстрата реакции, на АГ. При введении цитрата на фоне развития гепатита и гипертиреоза было выявлено изменение в сторону контроля активности ЦС в тканях животных, что, по всей видимости, также происходит за счет влияния данного соединения на протекание процессов окисления биосубстратов, инициируемого свободными радикалами, в организме.

На основании проведенных исследований была предложена гипотетическая модель участия цитрата в регуляции свободнорадикалыюго гомеостаза при патологиях, сопряженных с окислительным стрессом. Согласно данной схеме, представленной на рис. 43, воздействие гепатотоксина тетрахлорметана и высоких доз Т3 инициирует активацию каскадных процессов СО биомолекул, что сопровождается нарушением структурно-функциональных свойств биомембран, повреждением белков, выполняющих жизненно важные функции, в том числе и ферментов, а также других биомолекул, что в итоге приводит к нарушению метаболизма в целом и гибели клетки [268,292,300,206,258,354]. В основе такого действия СС14 может лежать образование продукта радикальной природы - СС1з" - в результате метаболизма токсина с участием системы цитохрома Р450 гепатоцитов. Образующиеся радикалы обладают высокой реакционной способностью и способны эффективно взаимодействовать с биомолекулами различных классов, инициируя их СО. Индуцирование окислительного стресса под действием тиреоидных гормонов в высоких концентрациях может быть вызвано усилением клеточного дыхания, сопровождающимся ускорением образования АФК (в частности, супероксидного анион-радикала) при работе электрон-транспортной цепи митохондрий, и активацией некоторых микросомальных ферментов, что также приводит к усилению генерации свободных радикалов.

Са2+, отрицательно заряженными карбоксильными группами данного соединения. Это, по-видимому, способствует снижению интенсивности протекания реакций Фентона и Хабера-Вайса, приводящих к образованию самой агрессивной АФК - гидроксилыюго радикала, а также реакций разветвления ПОЛ, в которых ионы Бе2 выступают в качестве катализаторов. Хелатирование ионов Са2*, содержание которых в клетке при интенсификации свободнорадикальных процессов возрастает вследствие нарушения транспортных и барьерных функций биомембран, может также играть важную роль при развитии патологического процесса, так как эти ионы оказывают активирующее воздействие на НАДФН-оксидазу, фосфолипазы, протеиназы, что усугубляет повреждение клеточных структур. По-видимому, торможение свободнорадикальных процессов при введении цитрата животным с патологией способствует ослаблению нагрузки на компоненты АОС организма, что проявляется снижением активности СОД, каталазы, ГП и ГР, уровня восстановленного глутатиона, а также активности некоторых НАДФН-генерирующих ферментов по сравнению со значениями при патологии. Кроме этого, цитрат способен выступать активатором биосинтеза жирных кислот и поставщиком ацетильных фрагментов для протекания этого процесса, что может быть немаловажно в условиях интенсификации ПОЛ, когда требуются строительные блоки для репарации мембран. Исследуемый протектор может также повышать активность и защищать от инактивации АГ, субстратом которой он является [211]. Определенную роль в реализации протекторного эффекта данного соединения может играть и способность участвовать в переходе в активную форму а-токоферола, являющегося основным антиоксидантом липидной фазы мембран [224].

ТТтгтят

Са

НАДФН-оксндаза

СОД каталаза 9 он

Окислительная модификащ белков Литшды А

Синтез жирных кислот Я / Механизмы репарации

МЮ*

Белы!

ЯН О. шо* — и*

4, | яоон коон

->1 4

0$Н ^НАДФН + Н^, ГР

НАДФ" -Л ГбФДГ. НАДФ-ИДГ нсокт. форма ■ а-токоферол акт форма Цитрат ^

Рис. б Гипотетическая схема участия цитрата в регуляции свободнорадикального гомеостаза организма при патологиях, сопряженных с окислительным стрессом: п=>антиоксндантные эффекты. снижение степени мобилизации АОС

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Саиди, Лайла, Воронеж

1. Абдулаев Н.Х. Печень при интоксикации гепатотропными ядами / Н.Х. Абдулаев, Х.Я. Каримов. Ташкент: Медицина УзСССР, 1989. -25 с. 4/ 1

2. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества / Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер. СПб.: Наука, 1985. - 230 с.

3. Адо А. Д. Патофизиология // А. Д. Адо. М.: Триада-Х, 2000. - 607 с.

4. Актуальные проблемы анестезиологии и реаниматологии / Под ред. проф. Э.В. Недашковского. — Архангельск — Тромсе, 1997. — 310 с.

5. Андреев Ю.А. Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях / Ю.А. Андреев, Ю.Е. Кушнарева, А.А.Старков // Биохимия. 2005. - Т. 70, № 2. - С. 246-264.

6. Антиоксидантные свойства производных 3-оксипиридина: мексидола, эмоксипина и проксипина / Г.И. Клебанов и др. // Вопросы мед. химии. -2001. № 3. - (bttp://medi.ru/doc/88.htm).

7. Аронов Д.М. Применение коэнзима Q10 в кардиологической практике / Д.М. Аронов // Российский медицинский журнал. 2004. — Т. 12, №15. — С. 905-909.

8. Артюхов В.Г. Биологические мембраны (структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами) / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 2000. - 296 с.

9. Афанасьев В.Г. К микрометоду определения лимонной кислоты в сыворотке крови с помошыо фотоэлектроколориметра / В.Г. Афанасьев, B.C. Зайцев, Т.И. Вольфсон // Лаб. дело. 1973. - №4. - С. 115-116.

10. Барабой В. А. Перекисное окисление и стресс / В. А. Барабой, И. И. Брехман, В. Г. Голотин и др. СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

11. Болдырев A.A. Роль активных форм кислорода в жизнедеятельности нейрона / A.A. Болдырев // Успехи физиологических наук. 2003. - Т.34, №3. - С.21-34.

12. Бузлама B.C. Методическое пособие по изучению процессов перекисного окисления липидов и систем антиоксидантной защиты у животных / B.C. Бузлама. Воронеж, 1997. - 41с.

13. Бурлакова Е.Б. Молекулярные механизмы действия антиоксидантов при лечении сердечно-сосудистых заболеваний / Е.Б. Бурлакова // Кардиология. 1980. - № 8. - С. 48-52.

14. Бустаманте Д. Метаболизм а-липоевой кислоты в печени при различных формах патологии/ Д. Бустаманте, Д. Лодж, Л. Маркоччи // Международный медицинский журнал. — 2001. №2 - С. 133 - 142.

15. Бышевский А.Ш. Биохимия для врача / А.Ш. Бышевский, O.A. Терсенов. Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994. - 384с.

16. Ванин А.Ф. Оксид азота регулятор клеточного метаболизма / А.Ф. Ванин // Соросовский образовательный журнал. - 2001. - Т.7, № 11,- С.7-12.

17. Вартанян Л.С. Карта белка супероксиддисмутазы / Л.С. Вартанян // Супероксиддисмутаза. (Iittp://humbio.ru/humbio/proteins/000fc6e4.htm).

18. Великий H.H. Транспорт цитрата в митохондриях печени крыс в условиях ингибирования липогенеза / H.H. Великий // Доклады АН УССР. — 1984.-Б, №5.-С. 53-55.

19. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, O.A. Азизова, А.И. Деев // Итоги науки и техники. Биофизика. 1992.-Т. 29.-С. 3-250.

20. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах/ Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М.: Наука, 1972. - 252 с.

21. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1987. - Т. 32, вып. 5. - С. 830-844.1Ш III II I ■■ III Bit Iii Iilb IUI I i

22. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестник РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-51.

23. Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнёв //Биофизика. 1989. - Т. 24. - С. 176-185.

24. Влияние железа, цинка, меди на процессы перекисного окисления липидов печени / E.H. Кухтина и др. // Биохимия. 1996. - Т. 61, вып.6. — С.993-997.

25. Влияние препаратов биоантиоксидантов на систему крови у животных с синдромом пероксидатщи / Г.А. Лобань и др. // Всесоюзная конференция "Биоантиоксидант". Черноголовка. - 1986. - Т.1. - С.57.

26. Влияние тироксина на хемилюминесценцию в микросомах печени крыс / Ю.А. Владимиров и др. // Бюл.экспер. биологии.-1977.- Т.83, №5 — С.558 — 561.

27. Выделение, очистка и некоторые свойства цитратсинтазы дрожжей Yarrowia (Candida) lipolytica продуцентов лимонной кислоты / И.Г. Моргунов и др. // Биохимия. - 1994. - Т. 59, № 9. - С. 1320 - 1328.

28. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена ишемизированного миокарда / В.В. Гацура. М.: Антекс, 1993. - 254с. 5* 15

29. Глотов H.A. Влияние гипоксии и глютаминовой кислоты на содержание кетокислот в миокарде и почках крыс / H.A. Глотов, Л.Т. Шмелева // Укр. биохим. журн. 1973. - №5. - С.605-608.

30. Гордеева A.B. Взаимосвязь между активными формами кислорода и кальцием в живых клетках /A.B. Гордеева, P.A. Звягильская, Ю.А. Лабас // Биохимия. 2003. - Т. 68, вып. 10. - С. 1318-1322.

31. Городецкая И.В. Значение тиреоидных гормонов в стрессиндуцированном синтезе белков теплового шока в миокарде / И.В. Городецкая, А.П. Божко, Л.Ю. Бахтина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2000. Т. 130, №12. - С.617-619.

32. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов / И.М. Грачева. -М.: Агропромиздат, 1987.— 335 с.

33. Губский Ю.И. Коррекция химических поражений печени / Ю.И. Губский. Киев: Здоровье, 1989. - 156 с.

34. Гулак ГТ.В. Гепатоцит: функционально-метаболические свойства / П.В. Гулак, A.M. Дудченко, В.В. Зайцев. М.: Наука, 1985. -268 с.

35. Гусев В. А. Супероксидный радикал и супероксиддисмутаза в свободнорадикальной теории старения / В.А. Гусев, Л.Ф. Панченко // Вопр. мед. химии. 1982. - № 4. - С. 8-25.

36. Дедов И.И. Эндокринология / И.И. Дедов. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2008. -432 с.

37. Диже Г.П. Тиреоидные гормоны и мелатонин как средства антиоксидантной терапии / Г.П. Диже, Р.В. Дятлов, A.A. Диже // Анестезиология и реаниматология. 2001, №4. - С. 43-46.

38. Диксон М. Ферменты: в 3-х т. / М. Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982. -Т. 2. - 515 с.

39. Диксон М. Ферменты: в 3-х т. / М. Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982. -Т. 3. - 605 с.

40. Долгов В.В. Лабораторная диагностика нарушений обмена железа / В.В. Долгов, С.А. Луговская, М.Е. Почтарь и др. СПб.: Витал Диагностике СПб, 2002. - 52 с.

41. Дубинина Е.Е. Антиоксидантная система плазмы крови / Е.Е. Дубинина // Укр. биохим. журн. 1992. - Т. 64, № 2. - С. 3-15.

42. Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и супероксиддисмутазы в тканях организма / Е.Е. Дубинина // Успехи соврем, биологии. 1989. - Т. 108, № 1(4). - С. 3-12.

43. Жеребцов H.A. Биохимия: учебник / H.A. Жеребцов, Т.Н. Попова, В.Г. Артюхов. Воронеж: Изд. Воронеж, ун-та, 2002. - 696 с.

44. Зайцев В.Г. Свободнорадикальные процессы в живых организмах электронная монография on-line., 2000. (http://froxi.nm.ru/).

45. Зайцев В.Г. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия/ В.Г. Зайцев, О.В. Островский, В.И. Закревский // Эксперим. клин, фармакол. 2003,— Т. 66, № 4 - С. 66-70.

46. Зайчик А.Ш. Основы патохимии / А.Ш.Зайчик, Л.П. Чурилов. СПб: ЭЛБИ-СПб, 2001. - С. 417-418.

47. Зенков H.A. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / H.A. Зенков, Е.Б. Меныцикова // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, вып. 3. - С. 286-296.

48. Зенков Н.К. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова. М.: МАИК "Наука / Интерпериодика", 2001. - 343 с.

49. Зефирова Г.С. Заболевания щитовидной железы / Г.С. Зефирова. — М.: Арт-Бизнес-Центр, 1999. — 215 с.

50. Иванов В.В. Соотношение интенсивности перекисного окисления липидов и рецепции инсулина в адипоцитах /В.В. Иванов, М.П. Стенникова // Вопр. мед. химии. 1993. - № 11— С. 23-25.

51. Изменения некоторых метаболитов цикла трикарбоновых кислот и гликолиза в различные стадии атеросклероза / В.И. Рубин и др. // Лаб. дело. -1979. №7.-С. 434-435.

52. Интенсивность свободнорадикальных процессов и регуляция активности цитоплазматической NADP-изоцитратдегидрогеназы в кардиомиоцитах крысы в норме и при ишемии / Л.В. Медведева и др. // Биохимия. 2002. - Т. 67, № 6. - С. 838-849.

53. Карташова О.Я. Моделирование патологических процессов в печени / О.Я. Карташова; Под ред. А.Ф. Блюгер. Рига: Звайгзне, 1975. - 180 с. 3/ 66

54. Кения М.В. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе / М.В. Кения, А.И. Лукаш, Е.П. Гуськов // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, № 4. - С. 456-470.

55. Коган А.Х. Антиоксидантная защита сердца при экспериментальном инфаркте миокарда / А.Х. Коган, А.Н. Кудрин, Н.И. Лосев. М., 1987. - 245 с.

56. Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии / Ю.Н. Кожевников // Вопр. мед. химии. 1985. - № 5. - С. 2-7.

57. Кольтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк / В.К. Кольтовер // Успехи геронтологии. — (http://www.posrednik.ru/forum/viewtopic.php?p=5008&sid=97c98bcfcc8f07d8e7 e98b8dldd56fm.

58. Кольтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: современное состояние и перспективы / В.К. Кольтовер // Успехи геронтологии. 1998. — В. 2.-С. 37-42.

59. Комов В.П. Биохимия / В.П. Комов, В.Н. Шведова. М.: Дрофа, 2008. - 640 с.

60. Костюк В.А. Биорадикалы и биоантиоксиданты / В.А. Костюк, А.И. Потапович. Минск: БГУ, 2004. - 179 с.

61. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии / Г.А. Кочетов. М.: Высш. шк., 1980. - 272 с.

62. Круглякова К.Е. Общие представления о механизме действия антиоксидантов / К.Е. Круглякова, JI.H. Шишкина // Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo: Сб. науч. статей. М.: Наука, 1992. - С.5-8.

63. Кузьменко А.И. Влияние витамина D3 и экдистерона на свободнорадикальное окисление липидов / А.И. Кузьменко и др. // Биохимия. 1997. -Т.62, №6. - С.712-715.

64. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул / В.И. Кулинский // Соросовский образовательный журнал. 1999. - № 1. - С. 2-8.

65. Кулинский В.И. Биологическая роль глутатиона / В.И. Кулинский, JI.C. Колесниченко // Успехи современной биологии. -1990. — Вып. 114. С.20-33.

66. Кулинский В.И. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы / В.И. Кулинский, J1.C. Колесниченко // Успехи современной биологии. 1993. - Т.113, №1. - С. 107-123.

67. Лакомкин B.JI. Защитное действие убихинона (коэнзим Q10) при ишемии и реперфузии сердца / В.Л.Лакомкин, О.В.Коркина // Кардиология. — 2002.-№ 12.-С. 51-55.

68. Ланкин В.З. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra / В.З.Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков // Кардиология. 2004. -№2.-С. 72-81.

69. Ланкин В.З. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы / В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков // Кардиология. 2000. - Т. 7. - С. 48-57.

70. Ланкин В.З. Ферментативное перекисное окисление липидов (ФПОЛ) / В.З. Ланкин //Укр. биохим. журн. 1984. - Т. 56, № 3. - С. 317-331.

71. Ленинджер А. Биохимия / А. Ленинджер. М.: Мир, 1977. - 957 с.

72. Ллойд Э. Справочник по прикладной статистике / Э. Ллойд, У. Ледсрман. М.: Финансы и статистика, 1990. - С. 493-513.

73. Лутцак В.И. Свободнорадикальное окисление белков и его связь с функциональным состоянием организма / В.И. Лущак // Биохимия. 2007. -Т.72, вып.8. - С. 995-1017.

74. Максименко A.B. Модифицированные препараты супероксиддисмутазы и каталазы для защиты сердечно-сосудистой системы и легких / A.B. Максименко // Успехи современ. биол. 1993. - Т. 113., вып. 3. - С. 351-363.

75. Матюшин Б.Н. Определение супероксиддисмутазной активности в материале пункционной биопсии печени при ее хроническом поражении / Б.Н. Матюшин, A.C. Логинов, В.Д. Ткачев // Лаборат. дело. 1991. - С. 16-19.

76. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1983. - 264 с.

77. Медицинский архив. (http://www.medved.kiev.ua/arhiv mg/st 2000 /00l6.htm).

78. Мелик-Адамян В.Р. Пространственная структура белков / В.Р. Мелик-Адамян, Э.Г. Арутюнян, K.M. Поляков // Природа. 1997. - №7. - С. 61-69.

79. Меныцикова Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. 1993. - Т.113, №4. - С.442-453.

80. Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. 1997. - Т.117, вып.2. - С.155 -165.

81. Мецлер Д.Э. Биохимия: В 3-х т. / Д.Э. Мецлер. — М: Мир, 2000. — Т. 1.-560 с.

82. Мешкова Н.П. Практикум по биохимии / Н.П. Мешкова, С.Е. Северин. М.: Мир, 1979. - 430 с.

83. Миллер Ю.И. Связывание ксенобиотиков альбумином сыворотки крови / Ю.И. Миллер // Клин. лаб. диагностика. 1993. - № 1. - С. 34-40.

84. Недоспасов A.A. Биогенный NO в конкурентных отношениях / A.A. Недоспасов // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 7. - С. 881-904.

85. Николайчик Е.А. Регуляция метаболизма клетки / Е.А. Николайчик. -Минск: БГУ, 2007.- 165 с.

86. Об участии свободных активных форм кислорода в ферментативном перекисном окислении липидов в биомембранах / В.Е. Каган и др. // Биофизика. 1979. - Т. 44, № 3. - С. 482-489.

87. Окислительный стресс: патологические состояния и заболевания / Е.Б. Меныцикова и др.. Новосибирск: APTA, 2008. - 284 с.

88. Оковитый C.B. Клиническая фармакология антиоксидантов / C.B. Оковитый // ФАРМиндекс-Практик. 2003. - В. 5. - С. 85-111.

89. Осипов А.Н. Активные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, O.A. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биологической химии. -1990.-Т. 31, №2.-С. 180-208.

90. Остерман JT.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / Л.А.Остерман. М: Наука, 1985. - 536 с.

91. Панасенко О.О. Структура и свойства малых белков теплового шока / О.О. Панасенко, М.В. Ким, Н.Б. Гусев // Успехи биологической химии. -2003.-T. 43.-С. 59-98.

92. Пентюк А. А. Поражение печени ксенобиотиками / А. А. Пентюк, Л. В. Мороз, О. В. Паламарчук // Соврем, проблемы токсикологии. 2001. - № 2. -С. 8-16.

93. Пентюк A.A. Активности глутатионзависимых ферментов, каталазы и СОД в печени и сердце крыс с дефицитом витамина А / A.A. Пентюк, O.A. Яковлева, Г.Г. Коновалова // Биохимия. 1987. - №6. - С. 1009.

94. Пентюк A.JI. Изучение новых функциональных свойств альбумина / A.JT. Пентюк, P.A. Мусин, Г.П. Марченко // Вопр. мед. химии. 1995. - № 3. -С. 11-13.

95. Петрович Ю.А. Глутатионпероксидазы в системе антиоксидантной защиты мембран / Ю.А. Петрович, Д.В. Гуткин // Пат. физиол. 1981. - № 5. -С. 76-78.

96. Петрович Ю.А. Свободно-радикальное окисление и роль в патогенезе воспаления, ишемии и стресса / Ю.А. Петрович, Д.В. Гуткин // Пат. физиол. -1986. № 5. - С. 85-92.

97. Поберёзкина Н.Б. Биологическая роль супер оксид дисмутазы / Н.Б. Поберёзкина, Л.Ф. Осинская // Укр. биохим. журн. 1989. - Т. 61, № 2. - С. 14-27.

98. Попова Т.Н. Изоцитратдегидрогеназы: форма, локализация, свойства и регуляция / Т.Н. Попова // Биохимия. 1993. - Т. 58, №12. - С. 1861-1879.

99. Прайер У. Свободные радикалы в биологии: в 2-х т. / У. Прайср. М.: Мир, 1979. - Т. 1. - 318 е.; Т. 2. - 328 с.

100. Роль церулоплазмина в устойчивости организма к рентгеновскому облучению / Н.К. Берлинских и др. // Радиобиология. 1984. - Т. 24. - С. 199-203.

101. Санина О.Л. Биологическая роль церулоплазмина и возможности его клинического применения / О.Л. Санина, Н.К. Бердинских // Вопросы мед. химии. 1986. - Т. 32, № 5. - С. 7-14.

102. Свободнорадикальные процессы в биосистемах / Т.Н. Попова и др.. — Ст.Оскол: ИПК «Кириллица». 2008. - 192 с.

103. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров и др. // Итоги науки и техники. Серия Биофизика. ВИНИТИ, 1991. Т. 29. - С. 1-252.

104. Семенихина A.B. Некоторые каталитические свойства глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из листьев гороха / A.B. Семенихина, Т.Н. Попова, Л.В. Матасова//Биохимия. 1999. - Т.64, № 8. - С. 1029-1033.

105. Сидорова В.Ф. Регенерация печени у млекопитающих / В.Ф. Сидорова, З.А. Рябинина, Е.М. Лейкина. М.¡Медицина, 1966. - 240с.

106. Скулачев В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций / В.П. Скулачев // Биохимия. 1998. - Т.63, №12. -С.1691-1694.

107. Скулачев В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло / В.П. Скулачев // Соросовский образовательный журнал. — 1996. №3. - С.4-10.

108. Скулачев В.П. Кислород и явления запрограммированной смерти / В.П. Скулачев. М.: ИБМХ РАМН, 2000. - 47с.

109. Соколовский В.В. Тиолдисульфидное соотношение крови как показатель состояния неспецифической резистентности организма: учебное пособие / В.В. Соколовский. СПб., 1996. - 30 с.

110. Спиричев В.Б. Жирорастворимые витамины и мембраны / В.Б. Спиричев, И.Л. Коль // Журн. Всесоюз. хим. общ-ва им. Д.И. Менделеева. -1978. Т. 23, № 4. - С. 425-434.

111. Стальная И. Д. Метод определения диеновой коньюгации ненасыщенных высших жирных кислот / И.Д. Стальная // Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. М.: Медицина, 1972. - С.63-64.

112. Супероксиддисмутазы // XuMuK.ru-Супероксиддисмутазы-Химическая энциклопедия. (http://www.xumuk.rU/encyklopedia/2/4288.html).

113. Таранда Н.И. Очистка и свойства НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеиазы из коры надпочечников быка / Н.И. Таранда, В.В. Виноградов, С.А. Струмило // Укр. биохим. журн. 1987. - Т. 59, №1. - С. 24-29.

114. Ткачук В. А. Клиническая биохимия / В. А. Ткачук. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004.-512 с.

115. Турков М.И. Супсроксиддисмутаза: свойства и функции / М.И. Турков // Успехи соврем, биологии. 1976. - Т. 81, № 3. - С. 341-354.

116. Федорова Н.Ю. Состояние системы глутатионпероксидазы-глутатионредуктазы в стимулированном к регенерации органе и ее роль в клеточной пролиферации: дис. . канд.биол. наук / Н.Ю. Федорова. -Воронеж, 1999.- 186 с.

117. Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода / И. Фридович // В кн.: Свободные радикалы в биологии / Под ред. У. Прайора. М.: Мир, 1979. - Т. 1. - С. 272-314.

118. Церулоплазмин. (http://www.iemrams.spb.ru:8100/russian/molgenru/

119. Чистяков Д.А. Гены антиоксидантной защиты и предрасположенность Сахарный диабет. 2000. - № 3. - (http://www.diabet.ru/Sdiabet/2000-03/2000

120. Шанин Ю.Н. Антиоксидантная терапия в клинической практике / Ю.Н.

121. Эффекты ионов кальция на вне- и внутриклеточные процессы A.B. Бизюкин и др. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1998. - Т. 126, JNa У.

122. Ярилин A.A. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном 48.• « ■ «Г!II 1 J \ Т!дегидрогеназ при стрессорных воздействиях / Д.И. Яшихня, И.И. Асобеков,

123. М.Я.Кузьмина // 5 Конференция биохимиков республик Средней Азии и Казахстана, Ташкент, 12-15 ноября 1991 г.: Тез. докл. Т. 1. - 348 с.

124. Abiaka С. Effect of prolonged storage on the activities of superoxide dismutase, glutathione reductase, and glutathione peroxidase / C. Abiaka, F. Al-Awadi, S. Olusi // Clin. Chem. 2000. - V. 46, № 4. - P. 566-567.

125. Abu-Zikri N. Is antioxidant enzymatic defence impaired in chronic liver disease (CLD)? / N. Abu-Zikri, Y. Abd-Elrahman // Clin. Lab. 2001. V. 47, № 11-12.-P. 600.

126. Aisen P. The stability constants of the Fe3+ conalbumin complexes / P. Aisen, A. Leibman // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1968. - V. 30, № 4. - P. 407-413.

127. Antioxidant and pro-oxidant activity of alpha-tocopherol in human plasma and low density lipoprotein / A. Kontush et.al. // J. Lipid Res. 1996. - V.37. -P.1436 -1448.

128. Antioxidant-sensitive triiodothyronine effects on characteristics of rat liver mitochondrial population / P. Venditti et al. // Cell Physiol. Biochem. -1999. -V. 9, №1. P.38-52.

129. Apoptosis in selected liver diseases / A. Kili9arslan et.al. // The Turkish J. of Gastroenterology. -2009. -V.20, № 3. -P.171-179.

130. Application of spin trapping to human phagocytic cells: in sight into conditions for formation and limitation of hydroxyl radical / M.S. Cohen et al. // Free Radic. Res. Commun. 1991. -V. 12/13, № 1. - P. 17-25.

131. Arrigo A.P. Gene expression and the thiol redox state / A.P. Arrigo // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V. 27. - P. 936-944.

132. I Nil i III I III II I LI I III IN III II Ell I It llllKii IS I I Hi ill JI I Will I m II11 I I l II 11XI ■ I L a 11.1« i HI HI El Mil ■■■181

133. Asayama K. Oxidative muscular injury and its relevance to hyperthyroidism / K. Asayama, K. Kato // Free Radic. Biol. Med. 1990. - V. 8. - P.293-303.

134. Ascorbic acid inhibits apoptosis induced by X irradiation in HL60 myeloid leukemia cells / B.Witenberg et al . // Radiat Res. 1999. - V.152, №5. - P.468-478.

135. Ascorbyl free-radical a noninvasive marker of oxidative stress in human open heart surgery / S. Pietri et al. // Free Radic. Biol. Med. - 1994. - V. 16. - P. 523-528.

136. Bannister J.V. The generation of hydroxyl radicals following superoxide production by neutrophil NADPH oxidase / J.V. Bannister // FEBS Lett. 1982. -V. 150.-P. 300-302.

137. Beeckmans S. Purification and physicochemical characterization of chicken heart citrate synthase / S. Beeckmans, L. Kanarek // Int. J. Biochem. 1983. - V. 15, №4.-P. 469-478.

138. Beffencown S. Analis quantitative da glutatiao-reductase eda glutatiao-peroxidase em plasma e eritrocytas humanos / S. Beffencown // Rev. Port. Farm. -1991. -V. 41, №3.-P. 9-14.

139. Berkson B. M. A conservative triple antioxidant approach to the treatment of hepatitis C. Combination of alpha lipoic acid (thioctic acid), silymarin, and selenium: three case histories / B. M. Berkson // Med. Klin. 1999. - V. 94. - P. 84-89.

140. Berlett B.S. Protein oxidation in aging, disease, and oxidative stress / B.S.Berlett, E.R. Stadtman// J. Biol. Chem. 1997. -V. 272. - P. 20313-20316.

141. Beutler E. Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: a historical nersnective / F. Rentier // Blood -2008 -V 111 -P 16-24

142. Bianchini A. Inhibition of endothelial nitric-oxide synthase by ceruloplasmin / A. Bianchmi. Ci. Musci. L. Calabrese // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. - P. 20265-20270.

143. Mim smmis itimmmiutm mhuhhi ■ waih182

144. Bidlack W.R. Fluorescent products of phospholipids during lipid peroxidation / W.R. Bidlack, A.L. Tappel // Lipids. 1973. - V. 8, № 4. - P. 203207.

145. Binding and inhibition of myeloperoxidase (MPO): a major function of ceruloplasmin? / M. Segelmark et al. // Clin. Exp. Immunol. 1997. - V. 108. -P. 167-174.

146. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation / R.T. Dean et al. // Biochem. J. 1997. - V. 324. -P. 1-18.

147. Biological potencies of a- and P-tocopherol and 5-methyltocol / J. Bungan et.al. //Br. J. Nutr. 1961. - V.15. -P.253-257.

148. Biomarkers of free radical damage applications in experimental animals and in humans / L.L. Zwart et al. // Free Radic. Biol. Med. -1999. -V. 26, №1-2. P. 202-226.

149. Boulton C.A. Regulatory studies on citrate synthase in Candida 107, an oleaginous yeast / C.A. Boulton, C. Ratledge // Microbiology. 1980. - V. 121. -P. 441-447.

150. Bowrv V.W. Vitamin E in human low-density lipoprotein. When and how this antioxidant becomes a pro-oxidant / V.W.Bowry, K.U.Ingold, B.Stocker // Biochem. 1992. - V.288. -P.341-344.

151. Bullen J J. The critical role of iron in some clinical infections /J.J. Bullen. CG Ward HS Rogers //Enr .1 Clin Microbiol Infect -1991 -V 10.№8.-P 613-617

152. Bver K. Citrate provides protection against oxalate and calcium oxalate crystal induced oxidative damaee to renal enithelium / K. Bver. S R. Khan // J. Urol. 2005. - V.173. № 2. -P.640-646.

153. Carnosine and related dipeptides protect human ceruloplasmin against peroxyl radical-mediated modification / J.H. Kang et al./ Mol. Cells. - 2002. -V. 13.-P. 498-502.

154. Cellular glutathione peroxidase knockout mice express normal levels of selenium-dependent plasma and phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidases in various tissues / W.H. Cheng et al. // J. Nutr. 1997. - V. 127. -P.1445-1450.

155. Ceruloplasmin gene expression in the murine central nervous system / L.W.J. Klomp et al. // J. Clin. Invest. 1996. - V. 98. - P. 207-215.

156. Characteristics of citrate synthase from Agave americana / M.J. Alejandre et al. // L. Leaves."Z. Pflavzenphysiol," 1979. - V. 94, № 1. - P. 85-93.

157. Characterization of the human mitochondrial aconitase gene (AC02) / D.B. Mirel et al.J // O ene. 1998. - V. 213, Issues 1-2. - P. 205-218.

158. Cliemiluminescent and respiratory responses related to thyroid hormoneinduced liver oxidative stress / V. Fernández et al. // Free Radie. Res. Commun. 1988 - V 5 -P 77-84

159. Chisan F.V. Virus, immunity, and cancer: lessons trom hepatitis B / KV. Chisan//Am. J. Pathol.-2000.-V. 156.-P. 1118-1132.

160. Citrate synthase- an immunochemical study / M.J. Danson et al. // Biochem Soc Trans -1987 -V. 15.№5.-P 836-837

161. Coban 1. Purification and investigation ot some kinetic properties ol ülucose-6-DhosDliate dehvdrogenase from parslev (Pelrosehmim Hortense) leaves / T Coban K Abdul M Ciftcietall // Pren Biochem And Biothechnol 2002 -V.32. №2.-P. 173-187

162. Cnmnarativp «jnprtral analvsi«; nf mammalian fnnaal anrl bartprial ralalases-Resonance Raman evidence for iron-tvrosinate coordination /KD Sharma et al . //J Biol Chem 1989 - V.264. №22. - P 12772-12779

163. Comparison of the effects of melatonin and pentoxifylline on carbon tetrachloride-induced liver toxicity in mice / T. Noyan et al. // Cell Biol. Toxicol. -2006. V. 22.-P. 381-391.

164. Cooper C.E. Nitric oxide and iron proteins / C.E. Cooper // Biochim. Biophys. Acta. 1999. - V. 1411, Issues 2-3. - P. 290-309.

165. Cooperation of yeast peroxiredoxins Tsalp and Tsa2p in the cellular defense against oxidative and nitrosative stress / W. Chi-Ming et al. // J. Biol. Chem. -2002. V. 277, Issue 7. - P. 5385-5394.

166. Cousins R.J. Absorption, transport, and hepatic metabolism of copper and zinc: special reference to metallothionein and ceruloplasmin / R.J. Cousins // Physiol. Rev. 1985. - V. 65. - P. 238-309.

167. Criteria and recommendations for vitamin C intake / M. Levine et al. // JAMA.-1999.-V. 281.-P. 1415-1423.

168. Czaja M.J. Induction and regulation of hepatocyte apoptosis by oxidative stress / M.J. Czaja // Antioxid. Redox Signal. 2002. - V. 4. - P. 759-767.

169. Das K. Modulation of rat liver mitochondrial antioxidant defence system by thyroid hormone / K. Das, G.B.N. Chainy // Biochim. Biophys. Acta. 2001. - V. 1537.-P. 1-13.

170. Delaval E. Age-related impairment of mitochondrial matrix aconitase and ATP-stimulated protease in rat liver and heart / E. Delaval, M. Perichon, B. Friguet // Eur. J. Biochem. 2004. - V. 271, № 22. - P. 4559-4564.

171. DeLeve L. Glutathione metabolism and its role in hepatotoxicity / L. Deleve, N. Kaplowitz // Pharmacol. 1991. - V.52. - P.287-305.

172. Differential effects of 3 beta blockers on lipid peroxidation in hyperthyroid muscle / K. Asayama et al. // Endocrinol. Jpn. -1990. -V. 37, №4. P.471-480.

173. Differential effects of experimental and cold-induced hyperthyroidism on factors inducing rat liver oxidative damage / P. Venditti et al. // Exp. Biol. -2006.-V. 9.-P. 817-825.

174. Differential evaluation of hepatocyte apoptosis and necrosis in acute liver injury / M. Onodera et al. // Hepatology Research. 2010. - V. 40. - P. 605-612.

175. Differential expression profiles of antioxidant enzymes and glutathione redox status in hyperthyroid rats: a temporal analysis / S. Chattopadhyay et al. // Comp. Biochem. Physiol. C Pharmacol. Toxicol. Endocrinol. 2007. - V. 146. -P. 383-391.

176. Distribution of CuZn superoxide dismutase in rat liver / W. Liou et al. // Free Rad. Biol. Med. 1993. - V. 14.-P. 201-207.

177. Does ceruloplasmin dismute superoxide? No. / J.V. Bannister et al. // FEBS Lett. 1980,-V. 188.-P. 127-129.

178. Donnes recentes sur metabolisme du fer: un etat de transition / E. Cadet et al. //Larevue de medecine interne. -2005. -V. 26. -P.315-324.

179. Dröge W. Free radicals in the physiological control of cell function / W. Dröge // Physiol. Rev. 2002. - № 82. - P. 47-95.

180. Effect of thyroid state on lipid peroxidation, antioxidant defences, and susceptibility to oxidative stress in rat tissues / P. Venditti et al. // Journal of Endocrinology. 1997. -V. 155. - P. 151-157.

181. Effect of thyroxine on antioxidant defense system in the liver of different aged rats/Z.S. Saicic et al. //Physiol. Res. -2006. V. 55. - P. 561-568. H3 11*

182. Effects of chronic inhibition of inducible nitric oxide synthase in hyperthyroid rats / I. Rodriguez-Gomez et al. // Am J. Physiol. Endocrinol. Metab. -2005. V. 288, № 6. — P. E1252—E1257.

183. Effects of hyperthyroidism on rat liver glutathione metabolism: Related enzymes activities, efflux, and turnover / V. Fernández et al. // Endocrinology. -1991.-V. 129.-P. 85-91.

184. LKIIIUI ■№■■■■ I 1 li EMI I I II I I 111 ■ B I I li III . KB 1» III I IM I 1« II, I £ III I nil ill I I I I III Id I lltl Hi liiiuuai186

185. Emptage M.H. Inactivation of aconitase and similar Fe-S containing enzymes by divalent metals / M.H. Emptage // 5th intern. Conf. Bioinorg. Chem.: In org. Chem. 1991. -V. 43. № 2-3. - P. 255.

186. Enhanced expression of glucose-6-phosphate dehydrogenase in human cells at sustaining oxidative stress / V. Ursini Matilde et al. // Biochem. J. 1997. - V. 323, №3. - P. 801-806.

187. Evaluation of oxidative stress during apoptosis and necrosis caused by carbon tetrachloride in rat liver / F. Sun et al. // Biochim. Biophys. Acta. 2001. -V. 1535.-P. 186-191.

188. Evidence for the assignment of the localisation AKi, AK3 and ACONS to chromosome 9 in man / S. Povey et al. // Hum. Genet. 1976. -V. 39, №4. - P. 413-422.

189. Evidence of hepatocyte apoptosis in rat liver after the administration of carbon tetrachloride / J. Shi et al. // Am. J. Pathol. 1998. - V. 153. - P. 515525.

190. Expression of a membrane-bound form of the ferroxidase ceruloplasmin by leptomeningeal cells / B. Mittal et al. // Glia. 2003. - V. 41. - P. 337-346.

191. Fabregat 1. Citrate synthase of Tetrahymena pyriformis: evolutionary and regulatory aspects / 1. Fabregat, J. Satrustegui, A. Machado // Arch. Biochem. and Biophys. 1983. - V. 220, № 2. - P. 354-360.

192. Feldman A.M. The effect of 3,3',5-triiodo-L-thyronine on the renal handling of citrate / A.M. Feldman, S. Grollman // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1975. -V.149, №2. - P. 494-499.

193. Feldmann G. Liver apoptosis / G. Feldmann // J. Hepatol. 1997. - V. 26, Suppl 2. - P. 1-11.

194. Fernandez V. Chemiluminescent and respiratory responses related to thyroid hormone-induced liver oxidative stress / V. Fernandez, S. Llesuy, L. Solari // Free Radic. Res. Commun. -1988. -V. 5, №2. P. 77-84.

195. Fernandez V. Effects of hyperthyroidism on rat liver glutathione metabolism: Related enzymes'activities, efflux, and turnover / V. Fernandez, K. Simizu, S.B.M.Barros // Endocrinology. 1991. - V.129. -P.85-91.

196. Freminet A. Carbohydrate and acid metabolism during acute hypoxia in rats blood and heart metabolites / A. Freminet // Comp. Biochem. And Physiol. 1981.- V.70, №3. P.427-430.

197. Fridovich I. Superoxide anion radical (02- radical anion), superoxide dismutases, and related matters / I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. -P. 18515-18517.

198. Fridovich J. Superoxide dismutase / J. Fridovich // Prog. Nucleic Acid Res.- 1991. V. 40.-P. 220-231.

199. Gardner P.R. Aconitase is a sensitive and critical target of oxygen poisoning in cultured mammalian cells and in rat lungs / P.R. Gardner, D.M. Nguyen, C.W. White // Proc. Nat. Acad. Sci. 1994. - V. 91, №25. - P. 12248-12252.

200. Gardner P.R. Inactivation-reactivation of aconitase in Escherichia coli / P.R. Gardner, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1992. - V.267, №13. - P. 8757-8763.

201. Gardner P.R. Superoxide radical and iron modulate aconitase activity in mammalian cells / P.R. Gardner, I. Raineri, L.B. Epstein // J. Biol. Chem. 1995.- V. 270, №22. P. 13399-13405.

202. Gitlin J.D. Transcriptional regulation of ceruloplasmin gene expression during inflammation / J.D. Gitlin // J. Biol. Chem. 1988. -V. 263. - P. 68216287.

203. Glutathione reductase from human erythrocytes: amino acid sequence of the structurally known FAD-binding domain / R. Untucht-Grau et al. / Eur. J. Biochem. 1981. - V. 120. - P. 407-419.

204. Glutathione reductase: comparison of steady-state and rapid reaction primary kinetic isotope effects exhibited by the yeast, spinach, and Escherichia coli enzymes / M.A.Vanoni et al. // Biochemistry. 1990. - V. 29. - P. 5790-5796.

205. Glutathione. In the liver: Biology and pathobiology, Second edition / A. Meister et.al. //New York: Baven Press. 1988. -P.401-417.

206. Gong H.B. Shengli Xuebao / H.B. Gong, Q.D. Han // Acta Physiol. Sin. -1996. V.l 18, №1. -P.48-52.

207. Greenblall G. A. Purification and partial characterization of citrate synthase from Rhaseolus vulgaris mitochondria / G. A. Greenblall, J. V. Sarkission // Phytochemistry. 1973. - V. 12, № 6. - P. 1249 - 1254.

208. Grootveld M. Measurement of allantoin and uric acid in human body fluids. A potential index of free-radical reactions in vivo? / M. Grootveld, B. Halliwell // Biochem. J. 1987. - V. 243. - P. 803-808.

209. Guicciardi M.E. Apoptosis: a mechanism of acute and chronic liver injury / M.E. Guicciardi, G.J. Gores// Gut. -2005. -V. 54. P. 1024-1033.

210. Guicciardi M.E. Apoptosis as a mechanism for liver disease progression / M.E. Guicciardi, GJ. Gores // Semin. Liver Dis. 2010. - V. 30, №4. - P. 402410.

211. Gutteridge J.M.C. Caeraloplasmin: physiological and pathological perspectrives / J.M.C. Gutteridge, J. Stocks // Cri. Rev. Clin. Lab. Sei. 1981. - P. 257-329.

212. Gutteridge J.M.C. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damages / J.M.C. Gutteridge // Clin. Chem. 1995. - V. 41, № 12b. - P. 1819-1828.

213. Ham A.J. Antioxidant reactions of vitamin E in the perfused rat liver: product distribution and effect of dietary vitamin E supplementation / A.J. Ham, D. C. Liebler // Arch. Biochem. Biophys. 1997. - V.339. - P.157-164.

214. Hino Y. Glucose-6-phosphate oxidation pathway in rat-liver microsomal vesicles. Stimulation under oxidative stress / Y. Hino, S. Ishio, Minakami // Eur. J. Biochem. 1987. - V.165. -P.195-199.

215. Hirling H. Mutational analysis of the 4Fe-4S.-cluster converting iron regulatory factor from its RNA-binding form to cytoplasmic aconitase / H. Hirling, B.R. Henderson, L.C. Kühn // EMBO J. 1994. - V. 13. - P. 453-461.

216. Human heart citrate synthase: purification, properties, kinetic and immunologic studies / T.C. Smitherman et al. // J. Mol. and Cell Cardiol. 1979. -V. 11, №2. -P. 149-160.

217. Hutter D. E. Redox state changes in density-dependent regulation of proliferation / Hutter, B.G. Till, J.J. Green // Exp. Cell. Res. V. 232. - P.435-438.

218. Hydroxy. and superoxide anion radical scavenging activities of natural source antioxidants using the computerized JES-FR30 ESR spectrometer system / Y. Noda et al.] // Biochem. Mol. Biol. Int. 1997. - V. 42, № 1. - P. 35-44.

219. Hyperthyroidism induces apoptosis in rat liver through activation of death receptor-mediated pathways / A. Kumar et al. // J. Hepatol. 2007. - V. 46, Issue 5. - P. 888-898

220. Identification of the prooxidant site of human ceruloplasmin: A model for oxidative damage by copper bound to protein surfaces / C.K. Mukhopadhyay et al. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - V. 94.-P. 11546-11551.

221. Imlay J.A. DNA damage and oxygen radical toxicity / J.A. Imlay, S. Linn // Science. 1988. - V.240. - P. 1302-1309.

222. Increase of lipid hydroperoxides in liver mitochondria and inhibition of cytochrome oxidase by carbon tetrachloride intoxication in rats / Ikeda K. et al. // Free. Radic. Res. 1998. - V.28, N.4. - P. 403-410.

223. Increased lipid peroxidation and mitochondrial dysfunction in aceruloplasminemia brains / H. Miyajima et al. // Blood. Cells. Mol. Dis. 2002. -V. 29.-P. 433-438.

224. Increased myocardial dysfunction after ischemia-reperfusion in mice lacking glucose-6-phosphate dehydrogenase / M.Jain et al. // Circulation. 2004. - V.109. -P. 898-903.

225. Increases in tumor necrosis factor-alpha in response to thyroid hormone-induced liver oxidative stress in the rat / V. Fernandez et al. // Free Radic. Res. -2002. -V.36, №7. P. 719-725.

226. Inhibition of carbon tetrachloride-mediated apoptosis and oxidative stress by melatonin in experimental liver fibrosis / M Ogeturk et al. // Toxicology and Industrial Health. 2008. - V. 24. - P. 201-208

227. Inhibition of superoxide and ferritin-dependent lipid peroxidation by ceruloplasmin / V.M. Samokyszyn et al. // J. Biol. Chem. 1989. - V. 264. -P. 21-26.

228. Iskra M. Activities of copper,zinc-superoxide dismutase in erythrocytes and ceruloplasmin in serum in chronic ischemia of lower limbs / M. Iskra, W. Majewski // Int. J. Clin. Lab. Res. 1999. - V. 29. - P. 64-67.

229. Jeffery D. Citrate synthase and malate dehydrogenase from tomato fruit / D. Jeffery, P.W. Goodenough, P.D.J. Weitzman // Phytochemistry. 1988. - V. 27, № 1.-P. 41-44.

230. Jennings G.T. Purification and properties of NADP-dependent isocitrate dehydrogenase from the corpus luteum / G.T. Jennings, J. W. Sadlieir, P.M. Stevenson // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V. 103, №2. - P. 219-227.

231. Ji L.L. Myocardial aging: antioxidant enzyme systems and related biochemical properties / L.L. Ji, D. Dillon, E. Wu // Am. J. Physiol. 1991. - V. 261 (Pt 2).-P. R386-392.

232. Jones D.P. Metabolism of hydrogen peroxide in isolated hepatocites / D.P. Jones, L. Erlow, H. Thor // Arch. Biochem. and Biophys. 1973. - V. 15, № 4. -P. 92-115.

233. Jörns A. Thyroxine induces pancreatic beta-cell apoptosis in rats / A. Jörns, M. Tiedge, S. Lenzen // Diabetologia. 2002. - V. 45. - P. 851-855. 21 *

234. Kahl R. Antioxidant enzymes and apoptosis / R. Kahl, A. Kampkotter, W. Wim // Drug Metab. Rev. 2004. - V. 36, № 3-4. - P. 747-762.

235. Kamal-Eldin A. The chemistry and antioxidant properties of tocopherols and tocotrienols / A. Kamal-Eldin, L.A. Appelqvist // Lipids. 1996. - V.31. - P.671-701.

236. Karplus P.A. Refined structure of glutathione reductase at 1.54 A° resolution /P.A. Karplus, G.E. Schulz//J. Mol. Biol. 1987. -V. 195. - P. 701-729.

237. Kelly G.S. Peripheral metabolism of thyroid hormones: a review / G.S. Kelly // Altern. Med. Rev. 2000. - V. 5, №4. - P. 306-333.

238. Kennedy M.C. Studies on aconitase by spectroscopy, crystallography and mutagenesis / M.C. Kennedy, H. Beinert, H. Lauble // J. Inorg. Chem. 1991. -V. 43, №2-3.-P. 234-240.

239. Kirkman H.N. The function of catalase-bound NADPH / H.N. Kirkman, S. Galiano, G.F. Gaetani // J. Biol. Chem. 1987. - V. 262. - P. 660-665.

240. Klebanoff S.J. The neutrophil: function and clinical disorders / S.J. Klebanoff, R.A. Clark. Amsterdam: North-Holland, 1978. - 313 p.

241. Kleber H.-P. Regulation of citrate synthase activity in Acinetobacter calcoaceticus / H.-P. Kleber, H. Tauchert // Acta Biol. Med. Ger. 1974. - V. 32, № 6. - P. 575-584.

242. Lee W. M. Drug-induced hepatotoxity / W.M. Lee // N. Eng. J. Med. 1995. -V. 333, №.17.- P. 1118-1127.

243. Lipid peroxidation and free radical scavengers in thyroid dysfunction in the rat: a possible mechanism of injury to heart and skeletal muscle in hyperthyroidism /K. Asayama etal. //Endocrinology. 1987. -V. 121, №6. - P. 2112-2118.

244. Lostanlen D. Modification of citrate and isocitrate metabolism in liver mitochondria of etanol-led rats / D. Lostanlen // Biochem. Pharmacol. 1975. -V.24, № 22. - P.2061-2068.

245. Luzzatto L. Glucose-6-phosphate dehydrogenase / L. Luzzatto // Italich J. of Biochem. 1986. -V. 35. - P. 375-383.

246. Magdoff-Fairchild B. An X-ray crystallographic study of ceruloplasmin. Determination of molecular weight / B. Magdoff-Fairchild, F.M. Lovell, B.W. Low // J. Biol. Chem. 1969. - V. 244. -P. 3497-3499.

247. Mallet R.T. Antioxidant properties of myocardial fuels / R.T. Mallet, J. Sun // Molecular and Cellular Biochemistry. 2003. - V. 253. - P. 103-111.1 HHeT

248. Manganese-containing superoxide dismutase signal sequence polymorphism associated with sporadic motor neuron disease / G.F. Landeghem et al. // J. of Neurol. 1999. -№ 26. - P. 639-644.

249. Manjula T.S. Effect of aspirin on heart mitochondrial enzymes in experimental myocardial infarction in rats / T.S. Manjula, D.S. Shyamala // Biochem. Arch. 1993. -V.9, №2. - P.101-109.

250. Marklund S. Human copper-containing superoxide dismutase of high molecular weight / S. Marklund // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1982. - V. 79. - P. 7634-7638.

251. Matsuoka Y. Kinetic studies of citrate synthase from rat kidney and rat brain / Y. Matsuoka, A. Paul // The J. of Biol. Chem. 1973. - V. 248, № 23. - P. 80228030.

252. May J.M. Protection and recycling of alpha-tocopherol in human erythrocytes by intracellular ascorbic acid / J.M. May, Z.C. Qu, S. Mendiratta // Arch. Biochem. Biophys. 1998. - V. 349. - P. 281-289.

253. Mechanisms of carbon tetrachloride toxicity / R.O. Recknagel et al. // Pharmacol. Ther. 1989. - V. 43. - P. 139-154.

254. Mercurio S.D. Selenium-dependent glutathione peroxidase inhibitors increase toxicity of prooxidant compounds in chicks / S.D. Mercurio, G.F. Combs // J. Nutr. 1986. - V. 116.-P. 1726-1734.

255. Mitochondrial calcium regulates rat liver regeneration through the modulation of apoptosis / M.T. Guerra et al. // Hepatology. 2011. - V. 54, Issue l.-P. 296-306.

256. Mitochondrial manganese-superoxide dismutase expression in ovarian cancer. Role in cell proliferation and response to oxidative stress / Y. Hu et al. // J. Biol. Chem. 2005. - V. 280, № 47. - P. 39485-39492.

257. Modulatory effects of ceruloplasmin on lymphocytes, neutrophils and monocytes of patients with altered immune status / E.L. Saenko et al. // Immunol. Invest. 1994. -V. 23. - P. 99-114.

258. Mukhopadhyay C.K. Role of hypoxia-inducible factor-1 in transcriptional activation of ceruloplasmin by iron deficiency / C.K. Mukhopadhyay, B. Mazumder, P.L. Fox//J. Biol. Chem. -2000. V. 275. - P. 21048-21054.

259. Muller K. Gpl20 of HIV-1 induces apoptosis in rat cortical cell cultures: prevention by memantine. / K. Muller // Eur. J. Pharmacol. 1992. - V. 226, N 6. -P. 209-214.

260. Murakami K. Inactivation of aconitase in yeast exposed to oxidative stress / K. Murakami, M. Yoshino // Biochem. Mol. Biol. Int. 1997. - V.41, №3. -P.481-486.

261. Myocardial release of citrate and lactate during atrial pacing-induced angina pectoris / J. Bagger et. al. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1981. - V.41. - P.431 -439.

262. Nohl H. Generation of activated oxygen species as side products of cell respiration / H. Nohl // Free Radic. Boil, and Med. 1990. - Suppl. № 1. -P.141.

263. Nomenclature of tocopherols and related compounds. Recomendations 1981 / IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature // Eur. J. Biochem. 1982. - V.123. -P.473^175.

264. Nuclear and nucleolar glutathione reductase, peroxidase and transferase activities in liver of male and female fischer-344 rats / K.R. Lynette et al. // Toxicological Sciences. -2002. V. 69. - P. 279-285.

265. Oka K.I. Differential effects of NADPH/NADP' ratio on the activities of hexose-6-phosphate degydrogenase and glucose-6-phosphate degydrogenase / K.I. Oka, T.I. Takanashi, S.H. Hori // Biochem. Biophys.Acta. 1981. - V.662. -P. 318-375.

266. Okuno H. Purification and properties of glucose-6-phosphate dehydrogenase from Bacillus stearothermophillus / H. Okuno, K. Nagotu, H. Nakajama // J. Appl. Biochem. 1985. - V.7, №3. - P. 192-201.

267. Olinescu R. Glutathione as possible medisier of hydrogen peroxide de composithione in erythrocytes / R. Olinescu // Rev. Roum. Biochem. 1974. - V. 11, № 1. - P. 49-59.

268. Oliveira L. Down-regulation of iron regulatory protein 1 gene expression by nitric oxide / L. Oliveira, J.C. Drapier // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V. 97, № 12.-P. 6550-6555

269. Osaki S. Kinetic studies of ferrous ion oxidation with crystalline human ferrooxidase (ceruloplasmin) / S. Osaki // J. Biol. Chem. 1966. - V. 241. - P. 5053-5059.

270. Oshino N. The role of H202 generation in perfused rat liver and reaction of catalase compound I and hydrogen donors / N. Oshino, B. Chance, H. Sies // Arch. Biochem. and Biophys. 1973.- V. 15, № 4.-P. 117-131.

271. Oxidant stress-induced liver injury in vivo: role of apoptosis, oncotic necrosis, and c-Jun NH2-terminal kinase activation / J.Y. Hong et al. // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2009. - V. 296. - P. G572-G581.

272. Oxidative damage to nuclear DNA in hyperthyroid rat liver: inability of vitamin C to prevent the damage / G. Andican et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 2004. - V. A67. - P. 413-420.

273. Oxidative modification of citrate synthase by peroxyl radicals and protection with novel antioxidants / N.L. Chepelev et al. // The J. of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2009. - V. 24, №6. - P. 1319-1331.

274. Oxidative stress-mediated apoptosis of hepatocytes exposed to acute ethanol intoxication /1. Kurose et al. // Hepatology. 1997. - V. 25. - P. 368-378.m&ffl&i Wi № W^'M&'MiiXi «¡813838»» f&t.mxvssmmm'.

275. Pacuet K.J. The carbon-tetrachloride-hepatotoxieity as a model of liver damage / K.J. Pacuet, U. Kamphausen // Acta Hepato-Gastroenterol. 1975. - V. 22. - P. 84-88.

276. Paller M.S. Hypothyroidism protects against free radical damage in ischemic acute renal failure / M.S. Paller // Kidney Int. -1986. -V. 29, №6. P. 1162-1166.

277. Pantiei E. Distribution of glutathione peroxidases and glutathione reductases in rat brain mitochondria / E. Pantiei, G. Sandri, L. Ernster // FEBS lett.- 1991. V. 290, № 1-2.-P. 35-37.

278. Passwater R.A. Lipoic Acid / R.A. Passwater // The Metabolic Antioxidant.- New Canaan, CT: Keats Publishing, Inc. 1995. - P. 1-47.

279. Peroxiredoxins in breast carcinoma / P. Karihtala et al. // Clinical Cancer Research. 2003. - V. 9. - P. 3418-3424.

280. Pharmacokinetics of extracellular superoxide dismutase in the vascular system / K. Karlsson et al. // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 14. - P. 185190.

281. Primary structure of porcine heart citrate synthase / D.C. Bloxham et al. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. Biol. Sei. 1981. -V. 78, № 9. - P. 5381-5985.

282. Prooxidant role of vitamin E in copper induced lipid peroxidation / M .Maiorino et al. //FEBS. 1993. - V. 330, №2. - P. 174-176.

283. Protective effects of melatonin against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in rats: a light microscopic and biochemical study / I. Kus et al. // Cell Biochem. Funct. 2005. - V. 23. - P. 169-174.

284. Protein measurement with the Folin-phenol reagent / O. Lowry, N. Rosenbrough, A. Farr et al. //J. Biol. Chem. 1951. - V. 194. - P. 265-275.

285. Protein oxidation in thyroid hormone-induced liver oxidative stress: relation to lipid peroxidation / G. Tapia et al. // Toxicol. Lett. 1999. - V. 106. - P. 209214.

286. Purification and comparative properties of isoenzymes of NADP-isocitrate dehydrogenase from rat heart and liver / M. Islam et al. // Biochem. J. 1972. -V. 129, №5.-P. 1003-1011.

287. Purification, properties and oligomeric structure of glutathione reductase from the cyanobacterium Spirulina maxima / J.L. Rendon et al. // Arch. Biochem. Biophys. 1986. - V. 1, № 248. - P. 215-223.

288. Rafalowska U. Molecular weight of NADP-dependent isocitrate dehydrogenase from rat brain cytosol under normoxia an hypoxia / U. Rafalowska, A. Pastuszko // Neurochem. Res. 1979. - V. 4, №2. - P. 241-247.

289. Rafalowska U. The effect of aspartate on citrate metabolism in the cytosolic fraction of brain under conditions of normoxia, hypoxia and anesthesia / U. Rafalowska, M. Erecinska, B. Chance // J. Neurochem. 1975. - V.25, №4. -P.497-501.

290. Rafalowska U. The effect of pyridine nucleotides on the activity of of NADP-dependent isocitrate dehydrogenase from rat brain cytosol / U. Rafalowska, A. Pastuszko, A. Gromek // FEBS Lett. 1974. -V. 42, №1. - P. 20-22.

291. Ramsay R.R. Molecular forms of aconitase and their interconversions / R.R. Ramsay, N.P. Signer // Biochem. J. 1984. - V.221, №2. - P.489-497.

292. Reactive oxygen species are critical in the oleic acid-mediated mitogenic signaling pathway in vascular smooth muscle cells / G. Lu et al. // Hypertension. 1998. -V. 32, № 6. - P.1003-1010.

293. Refined mapping of the gene for glutathione reductase on human chromosome 8 / W. Gutensohn et al. // Hum. Genet. 1978. - V.43. - P. 221224.

294. Regulation of hepatic glutathione synthesis: current concept and controversies / S.C. Lu / The FASEB Journal. 1999. - V. 13. - P. 1169-1183.

295. Regulation of human adipocyte gene expression by thyroid hormone / N. Viguerie et al. // J. Clin. Endocrinol. & Metab. 2002. - V. 87, №2. - P. 630634

296. Regulation of mitochondrial ATP synthesis by calcium: Evidence for a long-term metabolic priming / L.S. Jouaville et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1999. V. 96. - P. 13807-13812.

297. Regulation of mitochondrial NADP-isocitrate dehydrogenase in rat heart during ischemia / T.N. Popova et al. // Mol. and Cell. Biochem. 2007. - V. 294. -P. 97-105.

298. Relationship between the ubiquitin-dependent pathway and apoptosis in different cells of the central nervous system: effect of thyroid hormones / L.A. Pasquini et al. // Neurochemical Research. 2000. - V.25, №5. - P. 627-635.

299. Renal tubular cell damage and oxidative stress in renal stone patients and the effect of potassium citrate treatment / K. Tungsanga et al. // Urol. Res. 2005. -V. 33.-P. 65-69.

300. Reversible redox-dependent modulation of mitochondrial aconitase and proteolytic activity during in vivo cardiac ischemia/reperfusion / A.L. Bulteau et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - V. 102, №17. - P. 5987-5991.

301. Robbins A.H. Structure of activated aconitase: formation of the 4Fe-4S. cluster in the crystal / A.H. Robbins, C.D. Stout // Proc. Nat. Acad. Sci. 1989. -V. 86, № 10.-P. 3639-3643.

302. Rogallu T. Regulation of Hsp27 oligomerization, chaperon function and protective activity against oxidative stress / T. Rogallu, M. Ehrnsperger, H. Reville / Biol. Chem. 1999. - V. 277. - P. 947-956.

303. Ryan T.R. The role of iron in oxygen-mediated toxicities / T.R. Ryan, S.D. Aust // Crit. Rev. Toxicol. 1992. - V. 22, № 1. - P. 119.

304. Ryden L. Evidence for proteolytic fragments in commercial samples of human ceruloplasmin / L. Ryden // FEBS Lett. 1971. - V. 18. - P. 321-325.

305. Ryden L. Reinvestigation of some physicochemical and chemical properties of human ceruloplasmin (ferroxidase) / L. Ryden, I. Bjork // Biochemistry. 1976. -V.15.-P. 3411-3417.

306. Sastre J. Glutathione, oxidative stress and aging / J. Sastre, F.V. Pallardo, J. Vina //Age.- 1996. V. 19.-P. 129-139.

307. Sawant B.U. Changes in lipid peroxidation and free radical scavengers in kidney of hypothyroid and hyperthyroid rats / B.U. Sawant, G.D. Nadkarni, U.R. Thakare // Indian J. Exp. Biol. -2003. -V. 41, №11. P. 1334-1337.

308. Schulz G.E. FAD-binding site of glutathione reductase / G.E. Schulz, R.H. Schirmer, E.F. Pai // J. Mol. Biol. 1982. - V. 160. - P. 287-308.

309. Seelig G.F. Characterization of the physico-chemical and catalytic properties of human heart NADP-dependent isocitrate dehydrogenase / G.F. Seelig, R.F. Colman // Arch. Biochem. Biophys. 1978. - V. 188, №2. - P. 394-409.

310. Severe hyperthyroidism induces mitochondria-mediated apoptosis in rat liver / G. Upadhyay et al. // Hepatology. 2004. - V.39, Issue 4. - P. 1120-1130.

311. Seymen O. The effect of iron supplementation on GSH levels, GSH-Px, and SOD activities of erythrocytes in L-thyroxine administration / O. Seymen, A. Seven, G. Candan // Acta Med Okayama. -1997. -V. 51, №3. P. 129-133.

312. Shimizu M. Clinical results on the use of human ceruloplasmin in aplastic anemia / M. Shimizu // Transfusion. 1979. - V. 19. - P. 742-748.

313. Sholze H. Studies on aconitase species from Saccharomyces cerevisiae, porcine and bovine heart, obtained by a modified isolation method / H. Sholze // Biochim. Biophys. Acta. 1983. -V. 746. - P. 133-137.

314. Singh R. Regulation of hepatocyte apoptosis by oxidative stress / R. Singh, M.J. Czaja // J. Gastroenterol. Hepatol. 2007. - V. 22, Suppl. 1. - P. S45-S48.

315. Sites and mechanisms of aconitase inactivation by peroxynitrite: modulation by citrate and glutathione / D. Han et al. // Biochemistry. 2005. - V.44, №36. -P. 11986-11996.

316. Skulachev V.P. Mitochondrial physiology and pathology; concept of programmed death of organelles, cells and organisms / V.P. Skulachev // Mol. Aspects of Medicine. 1999. - V. 20. - P. 139-184.

317. Skulachev V.P. Role of uncoupled and non-coupled oxidations in maintenance of safely low levels of oxygen and its one-electrone reductants / V.P. Skulachev // Quant. Rev. Biophys. 1996. - V. 29. - P. 169-203.

318. Slaughter C.A. The distribution and properties of aconitase isozymes in man / C.A. Slaughter, D.A. Mophinson, H. Harris // Ann. Hum. Genet. 1977. - V. 40. №4.-P. 385-401.

319. Stadtman E.R. Protein oxidation / E.R. Stadtman, R.L. Levine // Ann. NY Acad. Sci. 2000. - V. 899. - P. 191-208.

320. Structural comparison of the flavoenzyme glutathione reductase with other proteins / G. Schulz et al. // Biomol. Struct., Conform., Funct. and Evol. Proc. Int., Symp., Madras. 1978. - V. 1, № 1. - P. 4-7.

321. Suh J. Anti- and pro-oxidant effects of ascorbate on iron-mediated oxidative damage to bovine serum albumin / J. Suh, B.Z. Zhu, B. Frei // Free Radie. Biol. Med. 1999. - V. 27. - P. 305-311.

322. Superoxide dependent release from ferritin in inflamatory disease / P. Biemond et al . // Free Radie. Biol. Med. 1988. - V. 4, № 1. - P. 185-198.

323. T3 increases mitochondrial ATP production in oxidative muscle despite increased exspression of UCP2 and 3 / K.R. Short et al. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. -2001. V.280. - P.761-769.

324. Takaiiashi N. Singíe-chain structure of human ceruloplasmin: The complete amino acid sequence of the whole molecule / N. Takahashi, T.L. Ortel, F.M. Pntnam //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - V. 81. - P. 390-394.

325. The effect of iron suDDlementation on GSH levels. GSH-Px. and SOD

326. Thyroid hormone, active oxygen, and lipid peroxidation. / V.Fernamdes et al. // In Handbook of Free Radicals and Antioxidants in Biomedicine, 1989. -P.105-115.

327. Thyroid hormones regulate development of energy metabolism enzymes in rat proximal convoluted tubule / A. Wijkhuisen et al. // Am. J. Physiol. -1995. -V.268, №24. -P. 634-642.

328. Toppel A.L. Vitamin E the biological lipid antioxidant / A.L. Toppel // Vitamin. Horn. V.20. -P.493-510.

329. Treffry A. The binding of ferric iron by ferritin / A. Treffry, P.M. Harrison // Biochem. J. 1979. - V. 181, № 3. - P. 709-716.

330. Tsao C.S. Vitamin C in Health and Disease / C.S. Tsao, L.Packer, J.Fuchs. -New York: Marcel Dekker, 1997. P. 25-58.

331. Tuirens J.F. Ubisemiquinone is the electron donor for superoxide formation by complex III of heart mitochondria / J.F. Turrens, A. Alexandre, A.L. Lehninger // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - V. 237, №2. - P. 408-414.

332. Uecyama N. Metalloenzymes and synthetic polymer complexes. Catalytic reaction by multielectron transfer / N. Uecyama, A. Nakamura // High Polym. -1990.-V. 39, №3,-P. 198-201.

333. Uptake, distribution, and elimination of carbon tetrachloride in rat tissues following inhalation and ingestion exposures / C.E. Dallas et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1997. -V. 143, №1. - P. 120-129.

334. Venditti P. Effect of thyroid state on H202 production by rat liver mitochondria / P. Venditti, R. De Rosa, S. Di Meo // Mol. Cell. Endocrinol. -2003.-V. 205.-P. 185-192.

335. Venditti P. Oxidative stress in cold-induced hyperthyroid state / P. Venditti, L. Di Stefano, S. Di Meo // J. Exp. Biol. -2010. V. 213, №17. - P. 2899-2911.

336. Venditti P. Thyroid hormone-induced oxidative stress / P. Venditti, S. Di Meo // Cell. Mol. Life Sci. 2006. - V. 63. - P. 414-434.

337. Videla L.A. Energy metabolism, thyroid calorigenesis, and oxidative stress: Functional and cytotoxic consequences / L.A. Videla // Redox Rep. 2000. - V. 5. -P. 265-275.1№н1к1ш1вшшякшнм * шньшшш Шт шжшшшжпш ш гшшаагшшшш &201

338. Walden W.E. From bacteria to mitochondria: Aconitase yields surprises / W.E. Walden // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - V. 99, №7. - P. 4138-1140.

339. Wang-Wei Cai. Purification and identification of glucose-6-phosphate dehydrogenase from human erythrocyte / Cai Wang-wei, Gnang-xin Ling, Li-chang Chen // Chin. Biochem. J. 1991. - V.7, № 6. - P. 747-750.

340. Weisiger R.A. Mitochondrial superoxide dismutase: site of synthesis and intramitochondrial location / R.A. Weisiger, I. Fridovicli // J. Biol. Chem. 1973. -V. 248.-P. 4793-4796.

341. Wen Fang. Активность Мп«еупероксиддисмутазы в эритроцитах больных эпителиальным раком яичника / Fang Wen, Wang Xiao-ning, Wei Yong-he // Zhongguo yike daxue xuebao. 2002. - V.31, № 6. - P. 452-454.

342. Wickler S.J. Seasonal changes in enzymes of aerobic heat production in the white-footed mouse / S.J. Wickler // Amer. J. Physiol. 1981. - V. 240, № 5. - P. 289-293.

343. Wiegand G. Citrate synthase: structure, control, and mechanism / G. Wiegand, S.J. Remington // Annu. Rev. Biophys. and Biophys. Chem. 1986. - V. 15.-P. 97-117.

344. Wiseman H. Damage to DNA by reactive oxygen and nitrogen species: role in inflammatory disease and progression to cancer / H. Wiseman, B. Halliwell // Biochem. J. 1996. - V. 313, № 1. - P. 17-29.

345. Woeber K.A. Update on the management of hyperthyroidism and hypothyroidism / K.A. Woeber // MD, FRCPE Arch. Intern. Med. 2000. - V. 160. -P. 1067-1071.

346. Yakes F.M. Mitochondrial DNA damage is more extensive and persists longer than nuclesr DNA damage in human cells following oxidative stress / F.M. Yakes, B. Vanhouten // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - V.94. - P.514-519.

347. Yen P.M. Physiological and molecular basis of thyroid hormone action / P.M. Yen//Physiological reviews.-2001,-V. 81, № 3. -P. 1097-1142.

348. Younes M. Glutathione S-transferase activities in rat liver: effect of some factors influencing the metabolism of xenobiotics / M. Younes, R. Schlichting, C.P. Siegers // Pharmacol. Res. Commun. 1980. V. 12. P. 115-129.

349. Young I.S. Antioxidants in health and disease / I.S. Young, J.V. Woodside // J.Clin. Pathol.- 2001. V. 54.-P. 176-186.

350. Yu H.S. Melatonin. Biosynthesis, physiological effects, and clinical applications / H.S. Yu, R.Y. Reiter // Broca Raton. 1993. - P. 572- 583.

351. Yuan X.M. Iron and LDL-oxidation in atherogenesis / X.M. Yuan, U.T. Brunk // APMIS. 1998. - V. 106, №4. -P. 825.

352. Zheng L. Binding of cytosolic aconitase to the iron responsive element of porcine mitochondrial aconitase mRNA / L. Zheng, M.C. Kennedy, G.A. Blondin // Arch. Biochem. Biophys. 1992. - V. 299. - P.356-360.

Информация о работе

Саиди, Лайла
кандидата биологических наук
Воронеж, 2011
ВАК 03.01.04

Диссертация

Воздействие цитрата на свободнорадикальный гомеостаз в тканях крыс при патологических состояниях, сопряженных с окислительным стрессом - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы