Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Возбудители заболеваний облепихи и изучение возможности использования микробиологического метода борьбы с ними в Монголии

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Возбудители заболеваний облепихи и изучение возможности использования микробиологического метода борьбы с ними в Монголии"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ИНСТИТУТ ШРОБШОГИИ К ВИРУСОЛОГИИ

на правах рукописи

ИКРАНБЕГКЙН РИЗА

ВОЗБУДИТЕЛИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОБЛЕПИХИ И ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО Ь'ЕТОДА БОРЬБЫ С НИЙИ В МОНГОЛИИ

03.00.07 - ииквобиоАогия

Автореферат диссертации но соискание ученой степени кандидата биологических наук

Алмо^Ата - 1992

Работа выполнена в Институте микробиологии и вирусологии Анадемии Наун Республики Казахстан

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: - доктор биологических наук

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: - член-корреспондент АК РК, профессоо

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: - ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ АН РЕСПУБЛИКИ

УЗБЕКИСТАН

Завита диссертации состоится " 17 "июля 1992 года но заседании специализированного совета К 008.01.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологических наук при Институте микробиологии и вирусологии АН РК по адресу: 480100, Алма-Ата, ул.Богенбай батыра, 103.

С диссертацией мсано ознакомиться в библиотеке Института викробиодогии и ьирусологии АН РК.

Автореферат разослан " 1592 г.

Ученый секретарь

специализированного сове-та,

К.А.ТУЛЕЫИСОВА

- кандидат биологических наук Н.Е.БЕШХАНОВА

Ц..Х.ШИГАЕВА - кандидат биологических наук Л-3.АБДИЛЬДИНА

кандидат биологических наук

ВВЕДЕНИЕ

Днтуольность темы. В последние десятиления проведены многочисленные исследования химического состава облепихи, показывающие нсллмле з них ценнейших биологически активных веществ, которые аказизайт лечебное действие но организм человека (Трибунская и ¿г., ¡570; О'лзийхутог, 1959 и до.).

'■стреОчость в плодах облепихи, используемых в качестве сырья для медицинской и пищевой промышленности, возрастает с кандым годом. С 1970 годо были начаты работы по организации специализированных хозяйств в Алтайском крае, Тувинской и Бурятской АР и далее в Монгольской Народной Республике (НПО."Облепиха" Увс-Нурского аикака).

9 процессе проиышленного освоения дикорастущих массивов и создания плантаций из отборных ее форм практики встретились с некоторыми опасными и не изученными заболеваниями облепихи. В публикациях до 1970-х годов приводились факты поврекдения плодов позой но больших площадях и в значительной степени (Прокофьев, 1966; Зоронков, 1970). Считалось, что облепиха порамается болезнями незначительно. Подробные сведения о болезнях растений и плодов облети приведены А.М.Жуковым (1979). Он не только получил данные о шдовом составе патогенных грибов и патогенезе ранее неизвестных . рибных заболеваний плодов, ветвей, листьев и стволов облепихи,но 1 изучил патогенные грибы, развивающиеся на других растениях. По то мнению только сведения о комплексе патогенных грибов, развиваю-ихся в облепиховых сообществах на травянистых и древесно-кустар-иковых растениях, могут выявить картину качественной и количест-енной динамики микрофлоры облепивников.

Следует отметить, что в Монгольской Народной Республике науч-о-исследовательские работы по изучению болезней облепихи не про-одились, хотя известно о массовом пораиении болезнями искусствен-ых и естественных зарослей облепихи. Конкретные меры борьбы про-ив них до сих пор не разработаны. Ущерб, причинявший ими госу-арству, с каждым годом растет. Только на плантациях НПО "Облепи-а" Увс-Нурсного аймака от болезней погибло в течение I985-I9B8 гг 00 га облепивников. Ущерб гоеударству в денеином исчислении состоял 2,3 млн. тугриков. Поэтому проблема защити облепихи от болез-вй и вредителей в настоящее время является актуальной;

Цель и задачи роботы. Целью настоящей работы явилось изучение изосферной и эпифитной микрофлор« облепихи в условиях Монголии,

выделение грибов - возбудителей болезней и выявление возможности использования микробиологических методов борьбы с ними.

В задачи исследований входило:

1. Изучить микроорганизмы, выделенные из ризосферы и растений облепихи.

2. Выявить наиболее распространенных возбудителей болезней облепихи.

3. Поиск микроорганизмов-антагонистов, подавляющих развитие патогенов облепихи, и выявление их антибиотической активности.

4. Отбор элективных культур грибов с антагонистической активностью в отношении патогенов облепихи и их испытание в лабораторных и полевых условиях.

Положения, выносимые на защиту.

1. Возбудители болезней облепихи - грибы, относящиеся к родам Fusarium Link ex. Fr., Cytospora Fr., Phoma Fr., Trichoteeium Link ex. Fr., Botrytis Pera. ex. Fr., среди которых Fusarium oxyspoi-uinSWi£!.2¿to6HapyieH впервые.

2. Способность грибов рода Триходерма синтезировать биологически активные вещества типа алкалоидов, обладающих антибиотической активностью в отношении фитопатогенов различных сельскохозяйственных растений, в тон числе облепихи.

3. Возможность использования микробиологического метода в борьбе с болезнями облепихи,.

Научная новизна и'практическое значение работы. Проведенное исследование позволило получить представление о микобиоте почв и растений облепишников Конголии и выявить возбудителей заболеваний облепихи. ,

Впервые среди возбудителей болезней облепихи найден нобый патоген Fusarium oxys-porum, сричиняющий значительный вред плантациям.

Показано антагонистическое действие грибов рода Триходерма на Еозбудителей болезней облепихи.

Виззлела алкаяоидообразуючая способность грибов рода Триходерма, обуславливавшая антагонистическую активность грибов этого вида на патогены.

Впеовые применен микробиологический метод борьбы с заболевании облепихи на территории НПО "Облепиха"-«KP. Показана целе-с^сб?:знссть использования биологического препарата триходериина 5; Ser ¡.бе с болезияви-обяеп'чхи^ -обеспечивающего, борьаув биологи,-

ческуга и техническую эффективность.

Но основании полученного положительного эффекта препарат три-ходермин будет рекомендован для широкого практического применения но территории облепиыников, что позволит не только снизить процент гибели растений облепихи, но и значительно оздоровит экологическую обстановку.

Публикации. По материалом диссертации опубликовано три работы.

Апробация роботы. Материалы диссертации были доложены на 1] Всесоюзно« семинаре "Актуальные направления в технологии получения антибиотиков и других биологически активных соединений микробного происхондения" (г.Степногорск, 1991);'на заседании секции сельскохозяйственной микробиологии и биотехнологии Института микробиологии и вирусологии АН РК.

Структура и объеи .роботы. Диссертация изложено на /СУстра-нпцах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований и выводов. Список литературы включает источников советских и зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 25 рисунками.

*+« •

Автор выракает глубокую признательность кандидату биологических наук, старшему научному сотруднику З.М.Базовой за помощь з идентификации выделенных культур грибов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ . Исследования проводились но плантации облепихи (ШррсрЬае гЬатпо1<1ев ь.) НПО "Облепиха" Увс-Нурского аймака МНР.

Заболевания облепихи выявлялись по методике фитопатологичес-кого обследования облепишников, разработанной Н.Г.Салатовой, Л.Н. Литвенчуком и А.М.Жуковым (1974).

Кроме Сборов ОбраЗЦОВ бОЛЬНЫХ ЭКЗеМПЛЯрОВ ШррорЬ.ае гНг.г;по1-Зеа ь.методом прямого микроскопирования под бинокулярной лупой (увеличение до 50), исследовали организмы, развивающиеся на поверхности растений (Билай, 1973).

Для обнаружения эндофитной микрофлоры образцы больных частей растений подвергали поверхностной стерилизации, для чего исппльзоза-ли сулему в разведении 1:1000. За ростом грибов наблюдали под бинокулярной лупой при 20-50 кратном увпличении. Из мицелия гриба и его спороноиения. выделяли чистую культуру на питательную среду.

Кроме растительных образцов,отбирали почвенные пробы с глубин: от 3 до 30 см в разных местах плантации и парников.

Грибы изолировали из почвы но питательные среды методами почвенных разведений Ваксмана и прямого посева почвы (Литвинов, 1969; Теппер и др., 1987).

Для более полного выявления видового состава грибов пэииеня-ли различные агаризованные питательные среды, в частности 'для Fusarium использовали агаризованную питательную среду , содержащую пентахлонитробензол, для Verticiilium - картсфельно-глкжсзныЛ с':р, для других грибов - Чапека-7 и сусло-агар.

Для идентификации грибов использовали определители билай З.И., 1955, 1977; Билай В.И., Курбацкой З.А., 1990; Ячевского A.A., ISI7; Ванина С.А. и др., 1950; Василевского H.H., Каракулина Б.П., 1950; Шварцман С.Р. и др., 1964, 1977; Бызовой З.М. и др., 1967-1970; Литвинова U.A., 1967; Migula Vi., 1934; Йарег К.Б., Thon Ch., 1949; Saccardo P.A., 1884, 1886, 1888, T89I, 1892, 1906, 1913, 1531 .

Выделенные культуры фотографировали под световым микроснопом "Folyvar" при увеличении х1250.

Исследование антагонистической активности Тг. lignorum проводили методом агаровых блоков (Егоров, 1986) и встречных колоний (Рудаков, 1971).

4ля определения алкалсидообразующей способности готовили экстракта из мицелия и культуральной жидкости отобранных грибов и исследовали их на "Siiufoi" пластинках и на незакреплэиных тонких слоях ai,Oj с использование« общеалкалоидных реактивов Ван-Урка, Лэагенлорфа и иодоплотинат калия в различных системах растворителе по общепринятой методике (Бекыахйнова и др., 1988).

Опитно-произзодственнуе испытания эффективности биологического препарата триходермина проводили в НПО "Облепиха" Увс-Нурского аймака ЧНР на резных сортах черенков облепихи, выращиваемых в парниках. Испытывали препарат в 3-х кратной обработке. Первую обра- . бстку проводили в дозе 6 г на 1м* плоцади. Препарат вносили в почву. Через сутки после посадки,прозодили вторую обработку, внесением его з лунки ,саиенцев{3г/аг). Через 2 месяца в дозе Зг/и* проводили третью обработку. Учет и {внелогические наблюдения проводили чорез нсдс-лз после 2-й и 3-й обработок. Контролем служил парник без обра-Сотки препаратом.

Полученные результаты подвергались математической обработке.

Для оценки рссхоядения при сравнении средних арифметических величин применяли общеизвестный критерий Стъюдента (Лакин, 1990). Результаты статистически обработаны на ЭВМ "Искра-1256".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫЯВЛЕНИЕ ЭПИФИТНОЙ И ПОЧВЕННОЙ МИКОФЛОРЫ ОБЛЕПИШНИКОВ МОНГОЛИИ

Для выявления источников инфекции и возбудителей заболеваний облепихи на территории Монголии было проведено обследование насая-дений и почзы питомника.

Кок указывалось выше, среди возбудителей заболеваний растений облепихи не было выявлено представителей бактериальной микрофлоры. Поэтому основное внимание наии уделено исследованию грибной §лоры.

Всего обследовоно более 150 образцов почвы и растений, в результате чего выявлено более рОО представителей патогенной и сапрофитной викофлоры облепишников.

Среди, патогенной яикофлори. вызивоюцей заболевания облепихи обнаруяены несовершенные грибы (Fungi inperfocti) или дейтероми-цеты (Deuteromyces). Они

представлены ПЯТЬй родами: Cytospora (C.hippophaes Thiimen), Phona (Ph. elaegnella Cooke), Trichotectum (T. roseun Link ex. Ft.), Botrytis(В.cinerea Pers. ex. Fr), Fusarium. Среди представителей рода Fusariua выделено три вида: F.oxysporumSeJift'^r}, F. sporo-trichiella Bilai И F. solani (Mart.) App. et Wr.

Гриб F.oxysporum ранее в литературе на облепихе не отмечался Внешние симптомы заболевания, вызываемого этим грибом, появляются в конце лета. Поравены 4-х годичные кусты. Болезнь, видимо, очаговая. ПЛОДЫ больные, Сверху ПОКРЫТЫ Черный налетом (Aspergillus wiser). в некоторых местах плодоносящие побеги следующего урояая чернеют и высыхают. Листья скручиваются, нелтеют, высыхоют. Но нор образуются трещинки. Но побегах отмечались язвочки длиной более или менее I си, шириной 0,8-1 см. К сбору урожая на кустах плоды полностью высыхали. В новый вегетационный период кусты полностью отиирали-

С целью выявления возбудителя, мы исследовали плоды, листья, корни, стебли и почву.

Во влажной камере во всех образцах был выделен в чистую культуру Fusarium охузрогиш Schlechtendohl ex. Fr., fig куЛЬТурольИО-иор^ологическшд признакам, принадлежащим к этому виду. На язвочках

- £ -

обнорувили Trichoteclum roseum и РЯД С0ПР0}ИТНЫХ грибов.

Корневая система облепихи поражается грибами рода Fusarium, которые вызывают инфекционное полегание - $узориоз С Жу-

ков , 1979).

Заболевания плодов и саженцев облепихи вызываются представителями других родов. К нии относятся: заболевания ветвей - цито-спороз (cytospora ), фомоз (phoma), местные некрозы ( Trichoteclum), серую ГНИЛЬ ПЛОДОВ (Botrytis).

Наиболее вредоносными являются патогены из родов Fusarium и Botrytis.

Грибы - сопро5иты на облепихе представлены сумчатыми (Asco-mycetes) И несовершенными (Deuteromycetes) ГРИЬС.ПИ , ОТНОСЯЩИМИСЯ К различный родам И видам: Chaetoniuro indieum Cda., Verticillium laterltium Berkeley, Cladosporium carpophllum ThUnu , Fusarium seœitectum Berk.

Представители микобиоты почвы относятся, в основной, к несовершенный грибам. К наиболее типичным относятся: Aspergiiius ochrace-us, A. niger, Pénicillium f reguentans, P.cyclopiun, P. purpyroeenum, P. carymbiferum, Alternaria tenuis, Trichoàerma lignorum..

Таким обоазом, при обследовании плантации НПО "Облепиха" обнаружено 23 наиболее типичных вида грибов. Семь из них являются па- • тогенными и развиваются на различных органах кивых растений.

АНТАГОНИСТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ГРИБОВ РОДА ТРИХОДЕРИА-

в отношении патогенов облепихи

Нами в работе было выделено 7 видов грибов, являющихся возбудителями различных заболеваний облепихи. Согласно литературным денным (Жуков, 1974) наиболее вредоносными являются представители эодов Fusarium и Botrytis' Поэтому в своей дальнейшей рабрте для изучения антагонистического действия грибов рода Триходерма нами бЫЯИ ВЫбрОНЫ Следующие патогены: F. oxysporum, F. sporotrlchiella, F. Bolani, Б. cinerea.

В качестве антагонистов в работе использовались 32 штамма грибов рода Триходерма, взятые из коллекции микроорганизмов лаборатории микробиологической защиты растений ■Института микробиологии и вирусологии ан РК, выделенные йз ризосферы различных сельскохозяйственных растений.

Исследован характер взаимодействия шести наиболее активных итамаов гриба рода Триходерма с некоторыми фитопатогенными грибами, выделенными из растений облепихи.

По степени мицелиального роста грибов-антагонистов на четвертые сутки культивирования только 21 штамм существенно превосходил остальные из 32 выделенных штаммов. По скорости спорообразования на данном этапе сравниваемые штаммы равноценны. Отмеченные преи-иуцества сохранились у 21 шг. и на 7 сутки культивирования, штамм Aj по скорости спорообразования уступал остальным штаммам.

Из трех сравниваемых культур рода Fusarium наиболее активным ростом в лабораторных условиях отличался гриб F. eporotrichiei-la. По интенсивности роста все исследуемые штаммы триходермы значительно опереиали патоген рода Fusarium и уяе на 7 сутки совместного культивирования колонии фитопатогенов и антагонистов встречались.

Отмечена следующая способность штаммов триходермы заселять колонии фузариумов (по трем культурам): 256 - 98%, 21 - 75?, X - 51?, А3 - 49%, 5/2 - 37?, I/I - 18?.

По способности сдеряивать рост В.cinerea исследуемые штаммы располагаются в следующей последовательности: 256 - 58?, 21 - 51?, 5/2 - 50?, I - 46-50?, А3 и 1/1 - 46-50?.

Из всех испытанных штаммов триходермы самыми перспективными, на наш взгляд, являются штаммы 256 и 21. Однако их защитный эффект необходимо проверить в условиях нестерильной почвы, где результаты .исследований могут быть иными.

Для большей наглядности в табл. I приводятся лишь выборочные данные измерения диаметра колоний грибов изолированной культуры, которые служили контролем,- и опытов, где совместно выращивали культуру триходермы и тест-организмор.

При этом было отмечено, что антимикробный спектр действия триходермы проявляется в массе на третьи и пятые сутки развития.

При сравнении колоний контрольных и опытных вариантов было отмечено, что изолированные культуры растут равномерно и формируют колонии нормальной конфигурации. При совместном росте с три-хадерной этого не происходит, колонии тест-грибов становятся рыхлыми, мицелий снученным, несколько приподнятым от субстрата и стянутым к центру колонии. Сильно понияается процесс спорообразования. При иикроснопировании гифы выглядят сильно деформированными, искривленными, с частыми перегородками.

Сопоставление полученных данных показало избирательность действия триходермы на тест-организиы, при которой каядый мз исследованных штаммов сильнее действует на один тзст-органиэа, -слабее на два или три.

Таблица I.

Антибиотическое действие триходериы в отношении различных тест-организыов (диаметр колонии, ми)

Отамм триходериы и|_Культура через

тест-организмы 24 ч 48 ч 72 ч 96 ч

ИЗ. с. ИЗ. с. ИЗ. с. ИЗ. с.

Штамм 21 21 19 64 62 100 100 100 100

В. cinerea 4 8 ' 7 13 13 21 51 25

Штамм Ж 21 25 47 64 80 82 100 100

F. sporotrlchlella 6 8 20 10 54 10 62 10

Штамм ; zSb 18 16 72 65 100 100 100 100

F. oxysporum 14 б 30 18 43 37 43 40

Штаим 5/2 21 20 63 60 81 83 100 100

Р. 3olani 8 7 20 13 32 17 44 22

Отаим А, 41 13 61 13 ■70 26 85 45

В. cinerea 21 20 63 '60 81 83 100 100

Штамм I/I 18 20 .54 . 55 100 100 100 100

?. охузрогип ' 66 • 18 86 27 100 48 100 50

Примечание: "из! - изолированная культура;

"с." - совместновыоаценная культура

ИЗУЧЕНИЕ АЛШОИДООБРАЗУЙЦИХ СВОЙСТВ АКТИВНЫХ ШТАММОВ ГРИБОВ РОДА.ТРИХОДЕРИЛ В последние годи ведутся широкие исследования по поиску новых продуцентов алкалоидов среди грибных культур. Интерес к работа в этой области объясняется ыирокии спектром биологической активности алкалоидов и их крайне важны« значение« в изучении вторичного ме-кболкзма у «икроорганизмав (Козловский, Соловьева, 1985).

3 нааих исследованиях объектами являлись представители грибов

относящиеся к роду Триходерма, выделенные из ризосферы сельскохозяйственных растений в ряде областей Казахстана (Алма-Атинской, Талды-Курганской, Джамбулской и Монголии (Увс-Нурсний аймаи). Была поставлена задача с лаиоцьга метода тонкослойной хроматографии выявить способность продуцировать грибами рода Триходерма алкалоиды.

Результаты исследования показывают (табл. 2), что у ряде культур T.llgnorun ШТ. 21, I, А3, 5/2, Kr, A.ochraceu3 25, p.cyciopium 947 алкалоиды были обнаружены как в фильтрате культуральной жидкости, так и a мицелии. У штаммов триходермы 256, 268, I/I - только в фильтрате культуральной жидности. Для некоторых атаммов (КП и 3) содержание алкалоидов было на уровне следов, остальные (шт. 10, 2, I, АН, 38, 2(1) не обнаружили способности проду цировать алкалоиды. На основании полученных результатов можно сделать вывод о большей вероятности наличия алналоидов в фильтрате культуральной жидкости, чем в мицелии.

Для характеристики веществ, разделенных на пластинках "Siiu-foi" были исследованы их спиртовые экстракты и получены спектры в видимом и ультрафиолетовом диапозоне для каждой фракции на предмет выявления специфических максимумов поглощения и возможной .идентификации алкалоидов. Результаты сопоставляли с данными био-автограмм и выявляли более активные фракции. Использовали в работе тест-культуры: Bact.caratovorura, Ps. heterocea, Ps. faseoli S'wlth, Erw. oaratovora, B. thuringen3is, Вас. mycoidea, St. aureus 209, F. oxysporuin, P. solani, F. охузрогцт J. melonis, F. sporotrichiella, Rh. adercholdii, A. tenuis, Botrytis cinerea, Sel. sclerotiorum.

Тест-культуры представляют в основном возбудителей болезней различных сельскохозяйственных культур, в том числе облепихи.

Хлороформенные и спиртовые экстракты из мицелия и культуральной жидкости гриба триходермы штамм 268, выращенного на модифицированной среде Аркачона давали положительные цветные реакции с вьшеприведениыми реактивами на пластинках силуфола з системе хло-роформ/метанол=2:1. Эти зоны имели также голубую и зеленую люми-нисценцию при облучении УФ-светом (Rf3 = 0,46, Hf^ =0,64, Rf- = 0,76, Rf6 =0,86), исключение составляли поглощаюцие зоны с Rfr = 0,034 и Rf2 =0,069. Фракции с Hf =0,64 и 0,86 показали антибиотическую активность в отношении следующих тест-культур: Рз. heterocca, Вас. thuringensia, Рз. glycines, В. caratovorum, Erw, caratovoriin, Sel. sclerotiorum, Staph, aureus.

Таблица 2

Результаты отбора алкалоидов среди исследованных микроскопических грибов

Микроорганизмы

Обнаруиение алкалоидов в хлороформен-ных экстрактах мотодом ТСХ_■

Силуфол, реактив Ван-Урка_

рН=8 | рН =3 рН=8

Окись алюминия, реан тив Драгендорфа

рН=3

|к.я. IМИЦIк.я. |ми| к.ж. |иицIк.я. |миц

А. асЬгасеий ат. 25 Р•сус1орхиш шт. 947 Тг. И^погиш шт. 10 шт. 21 . от. 2 шт. Ад от. К шт. 256 ит. 268 шт. 1/1 шт..КП шт. 2 ■ шт. I шт.5/2 вт. ан шт. 38 вт. 3 ат. 2П

♦ + +

+ ♦ +

+ +

¡зчзнйя: + -наличие;

- отсутствие окрашенных пятен

+

+

+

+

+

♦

Фракции с Rf =0,069; 0,76; 0,86; 0,9 подавляли рост B.ci-

rea, F. nelonis, Hh. adercholdil, A. tenuis, Helm, sativum.

У штамма триходермы 268 накопление алкалоидов с антибиотиче-ой активностью обнаружено и на среде с лимонной кислотой. Хлоро-рменный экстракт из культуральной лидкости гриба триходерма 8, выросшего на среде с лимонной кислотой, давал в системе хло-^орм/метанол - 7 зон, в то время как экстракт из мицелия давал зоны с реактивом Ван-Урка. Зоны, дающие окраску с алкалоидными активами Rf=0,1 и 0,26 обладали такие и антибиотической.актив-СТЬЮ против В. thuringensis И Erw. carotovora, F. solani. тибиотическая активность в основном сосредоточена в культуральной дкости. Следует отметить, что штамм 256 ранее отобран как актиз-й продуцент стимулирующих веществ (Амирханова, 1971). У штампа 6 накопление антибиотических веществ в культуральной нидкости и целии происходит в значительно меньшей степени, чем у штамма 8,кок ка среде с лимонной кислотой, так и на 'модифицированной еде Аркамона.

На незакрепленном тонком слое окиси алюминия 1У степени ак-вности в системе хлороформ/метанол - 1:4, хлороформенные экст-кты из культуральной яидкости штамма 268 давали зоны с Rf = 55; 0,64; 0,77, а экстракты из шт.-256 - зоны Rf -0,19 и 0,63. е эти зоны окрашивались общеолкалоидными реактивами Драгендор^а теыно-ораняевый, йодоплатината калия - в бордово-фиолетовый ет. Окраска не пропадала в течение 3 суток.

Таким образом, нами впервые получены результаты, свидетельст-■гащие о способности грибов рода Триходерма синтезировать биологи-!ски активные вещество типа алкалоидов, которые обладают анти-ютической активностью в отношении ряда фитопатогенов.

ОПЫТНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА ТРИХ0ДЕРМИНА НА ПОСАДКАХ ОБЛЕПИХИ На основании данных, полученных при изучении антагонистичес->й активности различных штаммов грибов рода Триходерма против меленных патогенов облепихи, были проведены произвбдственные :пытония препарата триходеряина, полученного на основе Тг. Lgnorum шт. 256.

Опыты были залояены в парниках НПО "Облепиха" с автоматичес->й'туманообразупщей установкой, предназначенной для выращивания )садочного материала для закладки новых плантаций облепихи.-Обработка проводилась по следующей схеме: 1-я обработка - бг/u' препарата триходериина,который вносился

под слой песка.

2-я оброботко - Зг/м' препорото в лунку какдого черенко.

3-я оброботко - через 2 иесяцо после высодни в грунт в дозе 3 г/и1 путей опрыскивания растений.

Повторность опыта трехкратная.

Анализ полученных данных показывает (табл. 3), что обработка препаратом триходермином черенков облепихи является эффективным приемом для снижения заболеваемости. Наибольоий эффект достигается после трехкратной обработки. Процент сникения болезни достигает 60-70%. Распространение заболеваний ровно Sí против 34% в контрольном варианте. Биологическая активность достигает 76S.

Наряду с лечебным эффектом наглядно прослекивается стимулирующее действие препарата на рост и развитие черенков облепихи. У черенков после трехкратной обработки отмечено усиленное формирование корневой системы (до 60 см в глубину), отмечен "вторичный" прирост и появление боковых побегов, активное формирование более мощной кроны растения. Техническая эффективность от применения препарата составила 90-95Х.

Интересно отметить изменения в составе почвенной викофлоры после применения триходермина. Если первоначально до внесения препарата в почвенных пробах преимущественно превалировали дейтеро-мицеты ИЗ родов: Aspergillus, PenicilUma, Phoma, Alternaria,Hel-mintosporium, ciadoEporium, Fueariua. To в контрольных вариантах отмечено отсутствие представителей родов Phoma, Alternaria, Fusarium, HelmintosporiuB, но значительно увеличилась численность представителей рода Peniciiliun.

Это свидетельствует о том, что препарат триходермин.способствует оздоровлению почвы, сникая численность патогенной и условно патогенной микрофлоры.

Таким образом,нами впервые получены половительные результаты от применения против заболеваний облепихи биологического средства защиты - препарата трйходермина, который можно рекомендовать для широкого использования в практике сельского хозяйства.

Таблица 3

Учет эффективности триходермина в борьбе с болезнями облепихи в парниках (плоцадь 6!)и')

Предшественник в Защищаемая Общее коли- Количество обследованиях растений по баллам, шт. Кол-во погиб- Развитие Расп-рост- Техническая Биологическая

Вариант севообороте площадь, мг чество обследованных 001 тении, шт. 0 I 2 3 4 ших растений за весь период вегета ции.шт оолез-ни, % ранение болез ни, X э{{ен- тионост % зф}ек-тианость,

Контроль Овощные 60 470 310 _ 160 _ 160 73 34 _

Опыт

I .После 2-х обработок Овощные 60 470 117 117 12,4 25 83 27

2.После 3-х обработок Овощные 60 470 38 38 4,04 8 94 76

- м -

выводы

1. Эпифитная и почвенная минрофлора плантации НПО "Облепиха" (JHP представлена 23 видами грибов. К патогенный организма« отнесены 7 видов.

Корневая система Облепихи поражается Fusarium oxysporum В11л1, F.sporotrlchiella Bllai, F.solani(Mart) App. et Кг. F.oxysporium Bllai - среди патогенов облепихи выделен впервые.

Зоболевоние плодов и саяенцев облепихи вызывается: Cytospora hlppophaes TUmen, Phoma elaegnella Cook, Trichotecium rosera Link ex. Fr, Botrytis cinerea Pers. ex. Fr.

Наибольший ущерб (70-80? гибели) плантациям облепихи Монголии причиняют грибы родов Fusarium u Botrytis.

2. Экспериментально установлено, что грибы рода Триходерма являются сильными антагонистами в отношении возбудителей болезней ОбЛеПИХИ. Из 32 ИССЛеДОВаННЫХ ШТаММОВ Trlchoderraa lignorun ноиболее активными оказались шесть. Перспективным для дальнейших испытании оказался производственный втаим 256.

3. Впервые у грибов рода Триходерио выявлена способность продуцировать биологически активные вещества типа алкалоидов. Накопление алкалоидов отмечено как в еицелии, ток и в культуральной жидкости, однако, основное количество сосредоточено в мицелии. Фракции алкалоидов, выделенные иетодом тонкослойной-хроматографии, оказались активными в отношении тест-культур, являющихся оснобмьши возбудителями болезней сельскохозяйственных культур, в том числе и облепихи. ■

4. Впервые в опытно-производственных испытаниях на плантациях НПО "Облепихо" испитоно биологическое средство борьбы с-заболеваниями - препарат триходериин, полученный на основе гриба Tricho-dernb lignorum uTQMU 256. Установлено, что биологическая эффективность от применения препарата триходериина составляет 70?, техническая - 90-95?.

Наряду с лечебным действием препарата триходермина, отмечен и стимулирующий эффект но растения облепихи.

5. Препарат триходермин рекомендуется нами впервые как биологическое средство для широкого производственного применения против различных заболеваний облепихи. Наибольшая эффективность достигается при трехкратном внесении препарата: I - почвенное,

в дозе 6 г/и1; 2-е - в лунки при посадке черенков в дозе 3 г/мг; 3 - опрыскивание растений в дозе 3 r/ii' через 2 месяца после высадки чгренков в' грунт.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1« Икринбсгийн Р., Тулемисова К.А., Момлеева И.П. Эффективность биопрепарата триходериина в борьбе с болезнями облепихи // Матер. 13 Всесоюзного семинара "Актуальные направления в технологии получения антибиотиков и других биологически активных соединений микроб-наго происхождения". - Степногорск. - 1991. - С.98.

2. Бекиаханова Н.Е., Тулемисова К.А., Ииранбегийн Р., Успаноз А.Я. Антибиотические свойство олколоидов микроскопических грибов, выделенных из ризосферы растений // Труды ИЫиВ АН РК. - Алма-Ата, 1992. - Том 37.

3. Икран^егий* Р., Лааган С. Чацарганы могонцорийн овчин, тууний Одоогнууд ньг // Ходоо Ан АкуЙ сзтгуул УБ - 1991. - 12.-С. 36-38.