Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства

Гордина, Екатерина Михайловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Внутривидовые особенности бактерий рода Staphylococcus, изолированных в условиях промышленного птицеводства"

На правах рукописи

Гордина Екатерина Михайловна

ВНУТРИВИДОВЫЕ ОСОБЕННОСТИ БАКТЕРИЙ РОДА STAPHYLOCOCCUS, ИЗОЛИРОВАННЫХ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОГО ПТИЦЕВОДСТВА

03.02.03. — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

13 МАЙ 2015

Пермь-2015

005568407

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии с курсом клинической лабораторной диагностики государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор,

Заслуженный деятель науки РФ Горовиц Эдуард Семенович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, доцент, заведующий

лабораторией по изучению механизмов микробиоценозов человека, директор Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН Черкасов Сергей Викторович

доктор медицинских наук, начальник отделения препаратов бактериотерапии филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» Несчисляев Валерий Александрович

Ведущая организация: государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64)

г— ,

Защита состоится «_£__» ¿-¿/С2015 г. в -Д7 часов на заседании диссертационного совета ДМ 004.019.01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Голева, д. 13. Факс: (342) 280 92 11.

Автореферат диссертации размещен на официальном сайге Министерства образования и науки РФ (http://vak.ed.gov.ru) и сайте Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (http://wvw.iegm.nl').

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИЭГМ УрО РАН и на сайте ИЭГМ УрО РАН (http://wmv.iegm.ru').

Автореферат разослан » ОС^у^се-с/ 2Q15 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Максимова Юлия Геннадьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Бактерии рода Staphylococcus относятся к числу широко распространенных микроорганизмов. Они колонизируют различные биотопы человека и животных, могут присутствовать в воде, в воздухе и на различных объектах окружающей среды (Бухарин, 2014; Esposito, et al., 2014; и др.). Стафилококки являются причиной различных заболеваний человека, начиная от банальных гнойничковых процессов и заканчивая инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи (Rijnders, et al., 2009; Asgeirsson, et al., 2011; May, et al., 2011; Касатов, 2013; Lamblet, et al., 2014; Shibao et al., 2014; и др.). Эта микроорганизмы издавна служат объектом изучения различных исследователей. Как следствие, их биологические свойства, в том числе и факторы вирулентности, описаны достаточно полно (Azimian et al., 2011; Павлова, 2013; Katayama, et al., 2013; Бакшеева, Сергеева, 2014; и др.).

Вместе с тем, если видовой состав и биологические характеристики стафилококков, вегетирующих у человека, изучены достаточно хорошо (Крамарь, 2012; Касатов, 2013; Пономаренко, 2013; Тимохина, 2014; Шаркова, 2014; и др.), то анализу видового разнообразия стафилококков, колонизирующих домашних птиц, и их свойствам посвящено ограниченное число исследований. При этом следует учитывать, что на эти показатели накладывают отпечаток географические особенности территории, различные антропогенные факторы, в том числе и специфика промышленного производства региона, а также другие условия внешней среды, окружающие птиц (Дехнич, 2002; Антонов, 2011; Поспелова, 2014; и др.).

Известно, что для штаммов стафилококков и прежде всего S. aureus, выделенных из различных источников, характерна определенная внутривидовая хозяиноспецифичность (Дерябин, 2000 и др.). Можно полагать, что такое своеобразие биологических свойств этих микроорганизмов, изолированных от различных хозяев, являются отражением их сродства к определенному макроорганизму (Самсонова, 1982; и др.). Насколько они будут выражены в условиях тесного и постоянного контакта человека и домашней птицы, меняются ли биологические свойства штаммов стафилококков при смене хозяев - эти вопросы остаются практически не изученными.

В условиях ограниченной, замкнутой системы, в частности птицефабрики, при тесном контакте сотрудников и домашней птицы, между ними возможна циркуляция различных видов стафилококков. В этих случаях источником микроорганизмов скорее всего могут быть как ппщы, так и люди. Учитывая, что штаммы стафилококков птиц могут обладать факторами вирулентности, они, вероятно, способны вызывать различные заболевания и у человека

Особенности технологического процесса выращивания домашней ппщы предполагают использование различных групп антибактериальных препаратов широкого спектра действия,

ЧЧХ

поэтому куры также могут быть источником полирезистентных штаммов (Febler, et al., 2011; Но, et al., 2012; Friese, et al., 2013; Maluping, et al., 2014; и др.).

Все это обусловливает необходимость изучения видового разнообразия стафилококков, циркулирующих в условиях замкнутой системы птицеводческих предприятий, возможности их передачи от птиц человеку, а также внутривидовых различий фено- и генотипических характеристик культур, изолированных от различных хозяев.

Цель настоящей работы - на основе изучения биологических свойств определить внутривидовые различия штаммов стафилококков, изолированных от сотрудников и домашней птицы, оценить возможность обмена этими микроорганизмами в условиях птицефабрики.

Основные задачи исследования:

1. Изучить видовой спектр стафилококков, колонизирующих сотрудников птицефабрики, домашних птиц и лиц, не связанных по своей профессиональной деятельности с птицами.

2. Сопоставить биологические свойства (факторы вирулентности, персистенции, ангибиотикочувствительность и др.) штаммов различных ввдов стафилококков, изолированных от сотрудников птицефабрик и птиц.

3. Изучить в сравнительном аспекте биологические свойства и чувствительность к типовым бактериофагам штаммов S. aureus, выделенных от сотрудников птицефабрики, птиц и практически здоровых лиц, на основе чего определить их принадлежность к различным эковариантам.

4. Изучить геномопрофиль и определить геномоварианты штаммов S. aureus, изолированных от различных хозяев.

5. На основании полученных фено- и генотипических характеристик культур стафилококков определить их внутривидовые различия в зависимости от источника выделения, а также возможность циркуляции между различными хозяевами в условиях птицефабрики.

Научная новизна.

Впервые проведен сравнительный анализ ввдового спектра стафилококков и биологических свойств штаммов - представителей различных видов, изолированных от сотрудников птицефабрики, лиц, не контактирующих с птицами, и птиц. Установлено, что видовой состав стафилококков птиц отличается наибольшим разнообразием.

Показано, что подавляющее большинство выделенных в условиях птицефабрики штаммов стафилококков, в том числе и КОС, независимо от источника получения, обладают определенным набором факторов вирулентности. При этом среди штаммов, изолированных от птиц, чаще регистрируются такие культуры, а также - полирезистентные к антибактериальным препаратам. Внутривидовые различия указанных биологических свойств чаще регистрировали у штаммов S. warneri.

Установлено, что практически все культуры стафилококков, выделенные от кур и сотрудников птицефабрики, обладали способностью образовывать биопленки, а также были резистентны к лизоциму. Наиболее выраженные внутривидовые различия, в отношении биомассы сформированных биопленок регистрировали у штаммов S. warneri и S. xylosus. Интенсивность биопленкообразования различных видов стафилококков, вне зависимости от источника выделения, снижалась при повышении температуры до 42°С (температуры тела птиц) и под влиянием лизоцима. При использовании специальных методов окраски биопленок (тетразолием MTS) большее количество живых клеток констатировали в составе биопленок, образованных S. aureus, выделенных от человека

Предложен оригинальный способ изучения устойчивости стафилококков к лизоциму, позволяющий оценить степень выраженности этого признака (приоритетная справка № 201414636 от 15.10.2014).

Впервые в сравнительном аспекте проведено генотипирование культур S. aureus, изолированных от птиц и обслуживающего персонала. Штаммы, выделенные от птиц, характеризовались большим разнообразием геномопрофиля.

На основании результатов фено- и генотипических исследований, показано наличие внутривидовых различий у культур стафилококков, изолированных из различных источников, а также возможность обмена стафилококками различных видов между домашними птицами и сотрудниками птицефабрики.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные данные расширяют представление об экологии стафилококков, об особенностях и различиях биологических свойств штаммов одного вида стафилококков, изолированных из различных источников.

В практическом плане - получены данные, свидетельствующие о возможности широкой циркуляции различных видов стафилококков, как S. aureus, так и КОС, в условиях птицефабрики, между птицами и обслуживающим персоналом. Наличие факторов вирулентности и полирезистентных штаммов среди стафилококков, колонизирующих птиц, представляет потенциальную угрозу для здоровья обслуживающего персонала.

Выделение штаммов стафилококков различных видов от домашних птиц с одинаковыми фено- и генотипическими характеристиками на протяжении нескольких лет наблюдений свидетельствует об их устойчивости не только к применяемым антибактериальным препаратам, но и к дезинфицирующим средствам, используемым на птицефабрике, что обусловливает необходимость периодической смены этих препаратов, целесообразность которой следует определять на основе регулярного микробиологического мониторинга.

Показано, что перснстенцня стафилококков, изолированных от человека и гггиц, в значительной мере обусловлена их способностью к биопленкообразованию, которой обладают практически все штаммы. Повышение интенсивности биопленкообразования у культур, выделенных от птиц, при более низких значениях температуры очевидно способствует выживанию этих изолятов во внешней среде.

Предложены модификации способов оценки влияния лизоцима на биопленкообразование стафилококков (удостоверение на рационализаторское предложение № 2670 от 10.02.2015г) и количественного определения ДНК-азной активности стафилококков (удостоверение на рационализаторское предложение № 2668 от 13.01.2015 г).

Положения, выносимые на защиту:

1. В условиях птицефабрики стафилококки, изолированные от сотрудников и главным образом от птиц, отличаются широким видовым разнообразием, наличием определенного набора факторов вирулентности и персистенции.

2. В условиях замкнутой системы на объектах промышленного птицеводства происходит обмен штаммами S. aureus между птицами и сотрудниками, что подтверждают результаты фаготипирования и определения эковаров изолированных культур.

3. Среди всех штаммов S. aureus, изолированных от сотрудников и птиц, установлено 15 геномовариантов, преобладали изоляты с индивидуальным RAPD-профилем. Вместе с тем, один из штаммов, выделенных от сотрудников, по своему геномопрофилю соответствует ряду изолятов птиц.

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертационной работы представлены и обсуждены на XIV-ой Научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и медицинская наука в XXI веке» (1-3 апреля 2013 г. - г. Киров); Научной сессии Пермской государственной медицинской академии имени академика Е. А. Вагнера (22-26 апреля

2013 г. - г. Пермь); 73 Всеукраинской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные аспекты медицины и фармации - 2013» (16-17 мая 2013 г. - г. Запорожье, Украина). Доклад отмечен сертификатом победителя в секции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и микробиологии»; Российском форуме с международным участием «Актуальные вопросы фундаментальной медицины» (23-25 октября

2014 г. - г. Екатеринбург); V Международной заочной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные аспекты современной науки» (30 ноября 2014г. - г. Белгород); на заседании Пермского филиала Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И. И. Мечникова (23 декабря 2014 г. - г. Пермь); Ежегодной итоговой научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины» (27 января 2015 г. - г. Гродно, Белоруссия).

Основные результаты исследования представлены в 14 печатных работах, из них 4 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ для опубликования материалов диссертационных исследований.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах, содержит 29 таблиц и 15 рисунков, состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов, трех глав собственных результатов исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка условных сокращений, списка литературы, включающего 233 источника, из них 78 отечественных и 155 зарубежных.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора.

Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГБОУ ВПО «Пермский государственный медицинский университет имени ак. Е. А. Вагнера» Минздрава России (номер государственной регистрации темы 0120.0800814).

Личный вклад автора состоит в планировании и организации исследований, разработке критериев включения/исключения сотрудников птицефабрики и практически здоровых лиц в исследование. Автор принимал участие во взятии материала для микробиологических исследований и в его проведении. Изучение факторов вирулентности стафилококков, их фаготипирование, определение эковариантов выполнено диссертантом лично. Изучение биопленкообразования и резистентности стафилококков к лизоциму, а также молекулярно-генетические исследования проведены на базе лабораторий ИЭГМ УрО РАН совместно с к.м.н. J1 М. Лемкиной и к.б.н. М. В. Кузнецовой. Искренне благодарим их, а также руководителей лабораторий к.м.н. В. П. Коробова и чл.-корр. РАН, профессора, д.м.н. В. А. Демакова за предоставленную возможность и содействие в проведении исследований. Обработка, анализ и интерпретация результатов исследований выполнены автором лично.

Внедрение результатов работы в практику. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедрах микробиологии и вирусологии с курсом клинической лабораторной диагностики, а также эпидемиологии с курсом гигиены и эпидемиологии дополнительного профессионального образования, как в лекционном курсе, так и при проведении практических занятий со студентами и врачами. Внедрены в работу ветеринарной службы ОАО «Птицефабрика Пермская».

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в течение 2012-2014 гг на кафедре микробиологии и вирусологии с курсом клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО Пермского государственного медицинского университета имени ак. Е. А. Вагнера Минздрава России, ряд исследований

проведен на базе лабораторий биохимии микроорганизмов и молекулярной микробиологии и биотехнологии ИЭГМ УрО РАН.

Выполнено бактериологическое исследование более 900 образцов различного биологического материала, в том числе - 159 проб смывов со слизистой оболочки носоглотки и кожи рук сотрудников птицефабрики, непосредственно связанных с выращиванием птицы; 39 проб смывов со слизистой оболочки носоглотки практически здоровых людей (студентов), а также 612 образцов патологического материала кур (печень, сердце, селезенка, легкие и др.), полученных при санитарном забое. Исследования проводили в соответствии со стандартами Хельсинской декларации 1975 г. и ее пересмотра 1983 г.

Бактериологическое исследование проводили традиционным методом (Приказ Минздрава СССР № 535 от 22.04.1985). Для выделения стафилококков посев осуществляли параллельно на желточно-солевой и кровяной агары. Выделенные культуры стафилококков идентифицировали на основании изучения биохимических свойств, используя «Staphytest 24» (ERBA LACHEMA, Чехия). Оценку результатов осуществляли с помощью компьютерной программы «Микроб-2».

Способность стафилококков коагулировать плазму, гемолитическую и лециговителлазную активность изучали общепринятым способом (Приказ Минздрава СССР № 535 от 22.04.1985). Определение ДНК-азной активности проводили на DNAse Test Agar (Испания), в соответствии с инструкцией производителя.

Количественную оценку степени выраженности гемолитической активности осуществляли по Ходаковой Н. Г. (Ходакова, 2008), а ДНК-азной - по модифицированной нами методике (удостоверение на рационализаторское предложение № 2668 от 13.01.2015 г).

У выделенных штаммов стафилококков исследовали также наличие факторов персистенции - биопленкообразование и резистентность к лизоциму. Биопленкообразующую способность штаммов определяли по методике O'Toole G. (O'Toole, 2011). Интенсивность окраски экстрактов биопленок определяли при длине волны 570 нм. Степень выраженности биопленкообразования стафилококков определяли в соответствии с критериями, разработанными S. Stepanovic (Stepanovic, et al., 2007). Для определения количества живых клеток в биогиенках использовали окраску тетразолием MTS (Коробов, 2011).

Изучали также влияние лизоцима и различных температурных режимов на биопленкообразование, изолированных штаммов стафилококков (удостоверение на рационализаторское предложение № 2670 от 10.02.2015г; Кузнецова, 2011).

Устойчивость изолятов к лизоциму определяли оригинальным методом (приоритетная справка № 2014141636 от 15.10.2014). В лунки вносили по 100 мкл бульона LB с лизоцимом в концентрации 12,5 мкг/мл, затем добавляли по 25 мкл исследуемой культуры стафилококков (107 КОЕ/мл). В контроле - 100 мкл бульона LB без лизоцима и 25 мкл культуры. Планшеты

инкубировали при температуре 37 °С. Через 2 и 4 часа инкубации измеряли оптическую плотность смесей (опыт и контроль) на ридере BenchmarkPlus (BioRad, США) при длине волны 600 нм. Далее рассчитывали коэффициент устойчивости к лизоциму по формуле:

УкхУлхСл* (Мо4 - М02)

К—_

МК4-МК2 *100'

где К — коэффициент устойчивости стафилококков к лизоциму;

Vk - объем бульонной культуры исследуемого штамма;

Vji - объем раствора лизоцима исходной концентрации;

Сл - концентрация лизоцима;

Мо4, М02- среднее значение оптической плотности опытных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма с лизоцимом через 4 часа и 2 часа инкубации;

Мк4, Мкг - среднее значение оптической плотности контрольных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма без лизоцима через 4 часа и 2 часа инкубации.

Значение К<0,49 определяли как низкую степень выраженности признака, в пределах 0,5 -2,49 - как среднюю и К>2,5 - как высокую степень выраженности.

Антибиотикочувствительность изолированных штаммов исследовали классическим диско-диффузионным методом на агаре Мюллера-Хинтона. В соответствии с требованиями стандартов Performans Standarts for Antimicrobial Suscepptibility Testing; Twenty-Fourth Informational Supplement (The Clinical Laboratory Standarts Institute, 2014) чувствительность стафилококков определяли к 3-м группам антибактериальных препаратов (АБП). Цефокситин, эритромицин и ко-тримоксазол - из первой группы, доксициклин и амикацин - из второй и гентамицин - из третьей. В качестве тестируемых использовали также линкомицин и левофлоксацин, так как они широко используются в промышленном птицеводстве. Таким образом, чувствительность выделенных культур стафилококков опредлеляли к следующим группам АБП: бета-лактамы (оксациллин, цефокситин); макролиды (эритромицин); линкозамиды (линкомицин); аминогликозиды (амикацин, гентамицин); тетрациклины (доксициклин); фторхинолоны (левофлоксацин), комбинированный АБП (ко-тримоксазол).

Для определения биовариантов MRSA использовали оксазолидиноны (линезолид).

Фаготипирование изолированных культур S. aureus осуществляли с помощью международного набора «Бактериофаги стафилококковые типовые диагностические сухие -Англия (Staphylococci typical diagnostic dried bacteriophags - England (international set))» набор «4», производства Медгамал (филиал ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН) в соответствии с инструкцией производителя.

Эковарианты штаммов 5. aureus определяли в соответствии со схемой Meyer-Witte (Самсонова, 1982) базируясь на результатах изучения их гемолитической и плазмокоагулирующей активности, отношения к бактериофагам набора «Ч» и типа колоний при посеве на мясо-пептонный агар с кристаллическим фиолетовым с добавлением лактозы (агар Чапмена-Бернса) (Акатов, 1983).

Родство выделенных штаммов S. aureus изучали методом RAPD-ПЦР, используя три праймера, рекомендованные для генотипирования стафилококков.

Тотальную ДНК S. aureus выделяли модифицированным методом, предложенным J. Marmur. В реакции амплификации использовали произвольные праймеры с различным процентом GC пар: праймер A (GTTTCGCTCC), праймер 6 (GAGACGCACA), праймер 7 (CAGCCCAGAG) (синтезированы в ООО «НПФ Синтол», г. Москва, Россия), рекомендованные для определения родства стафилококков (Антонов, 2011).

Амплификацию проводили на термоциклере DNA Engine Dyad Thermal Cycler («Bio-Rad», США). Протоколы ПЦР соответствовали рекомендациям авторов, предложивших используемые праймеры. Температурный режим реакции состоял из денатурации при 94°С в течение 30 сек, отжига праймеров при 36°С в течение 30 сек. Элонгацию проводили при 72°С в течение 120 сек. Электрофоретическое разделение продуктов реакции осуществляли в 1,2% агарозном геле при напряженности электрического поля 6 В/см. Визуализацию полос и документирование данных выполняли с помощью системы гельдокументации Gel-DocXR («BioRad», США). В качестве маркера использовали маркер молекулярных весов ДНК Ledder 100-1500 bp (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва). Результаты оценивали по наличию или отсутствию фрагментов ДНК определенного размера на диаграммах, построенных с применением компьютерного обеспечения Quantity One (версия 4.6.1, Bio-Rad Laboratories, США). Штаммы считали близкородственными в случае идентичности результатов амплификации продуктов ДНК изолятов по двум и более праймерам.

Для статистической обработки полученных данных использовали программу Statistica 6.0, также пакет статистического анализа Microsoft Exel-2010 в соответствии с рекомендуемыми методиками (Гланц, 1999; Реброва, 2002). Изученные количественные параметры представлены в виде М±ш, где М - среднее арифметическое, m - ошибка среднего арифметического.

Сравнение бинарных признаков осуществляли с помощью точного критерия Фишера однонаправленного (р) при построении четырехпольной таблицы сопряженности. В случаях, если распределение признака по критерию Шапиро-Уилкса не было нормальным, сравнение величин полученных значений проводили с помощью критерия Манна-Уитни (р). О статистически значимых различиях сравниваемых величин судили по величине цифровых значений р. За

критический уровень значимости принимали 0,05. Корреляционный анализ осуществляли путем расчета коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Видовой спектр и биологические свойства стафилококков.

Всего от сотрудников птицефабрики, практически здоровых людей и домашних птиц было выделено 535 штаммов стафилококков 29 видов. В том числе от сотрудников птицефабрики - 126 культур 16 видов, от студентов - 65 штаммов 13 видов и из патологического материала птиц - 344 штамма 28 видов (Таблица 1).

Таблица 1

Спектр бактерий рода Staphylococcus, выделенных из различных источников

Вид Количество выделенных культур (всего 535)

Сотрудники Студенты Птицы

1 S. aureus 10 (7,94±0,71%) 13 (20,00±2,48%) 73 (21,21±1,14%)

2 S. epidermidis 31 (24,60±2,19%) 28 (43,08±5,34%) 22 (6,42±0,42%)

3 S. warneri 21 (16,67±1,48%) 3 (4,62±0,57%) 10 (2,92±0,16%)

4 S. gallinarum 20(15,87±1,41%) 0 54 (15,73±0,85%)

5 S. xylosus 9 (7,14±0,64%) 1 (1,54±0,19%) 14 (4,13±0,22%)

6 S. piscifermentans 5 (3,97±0,35%) 1 (1,54±0,19%) 4 (1,22±0,06%)

7 S. lentus 7 (5,56±0,49%) 0 22 (6,94±0,42%)

8 S. equorum 5 (3,97±0,35%) 2 (3,08±0,38%) 10 (2,95±0,16%)

9 S. hominis 4 (3,17±0,28%) 3 (4,62±0,57%) 12 (3,54±0,19%)

10 S. cohnii 5 (3,97±0,35%) 0 34 (9,79±0,53%)

11 S. chromogenes 3 (2,38±0,21%) 3 (4,62±0,57%) 3 (0,90±0,05%)

12 S. saprophyticus 2(1,59±0,14%) 0 8 (2,40±0,13%)

13 S. intermedius 1 (0,79±0,07%) 2 (3,08±0,38%) 3 (0,90±0,05%)

14 S. sciuri 2 (0,79±0,07%) 0 30 (8,70±0,47%)

15 S. felis 3 (0,79±0,07%) 0 4 (1,20±0,06%)

16 S. schleifen 4 (0,79±0,07%) 0 1 (0,30±0,02%)

17 S. delphini 0 4 (6,15±0,76%) 0

18 S. lutrae 0 3 (4,62±0.57%) 2 (0,60±0,03%)

19 S. caprae 0 1 (1,54±0,19%) 3 (0,90±0,05%)

20 S. vitulinus 0 1 (1,54±0,19%) 0

Прочие 0 0 35 (10,17±0,52)

Итого 126 65 344

Независимо от источника выделения, стафилококки характеризовались значительным видовым разнообразием, преобладали КОС (27 видов). Наиболее широким видовым спектром отличались стафилококки, изолированные от птиц. Так, количество видов, изолированных от них, практически в 2 раза превышало число видов, выделенных от сотрудников (15). Что касается S. aureus, то они чаще колонизировали биотопы студентов и птиц. На этом фоне, обращает на себя внимание факт низкой инфицированности сотрудников этими микроорганизмами (7,94±0,71%).

Поскольку целью нашего исследования была сравнительная характеристика биологических свойств стафилококков, изолированных от различных хозяев, то для дальнейшего анализа биологических свойств были выбраны представители 4-х видов, наиболее часто встречающихся у сотрудников птицефабрики и у птиц. В результате объектом наблюдения служили 113 штаммов следующих видов: 27 - S. aureus-, 36 - 5. gallinarum; 23 - S. xylosus и 27 - 5". warneri. В числе основных биологических свойств штаммов стафилококков изучены факторы вирулентности (гемолитическая, лецитовителлазная и ДНК-азная активность), факторы персистенции (БПО и чувствительность к лизоциму), а также антибиотикочувствительность. Результаты изучения факторов вирулентности представлены в таблице 2.

Таблица 2

Факторы вирулентности бактерий рода Staphylococcus, выделенных от сотрудников и птиц

Вид n Частота встречаемости признака, %

Гемолитическая активность JIB активность ДНК-азная активность

% Р % Р % Р

S. aureus 17 60,00± 15,46 0,091 40,00± 15,46 0,031 80,00± 12,61 0,630

10 29,41±11,01 82,35±9,19 88,24±7,75

S. gallinarum 22 28,57±12,03 0,254 0 - 14,29±9,30 0,572

14 22,73±8,88 4,55±0,97 18,18±8,16

S. warneri 10 29,41±11,01 0,651 0 - 23,53±10,24 0,042

17 30,00±14,46 0 60,00±15,46

S. xylosus 14 11,11±10,43 0,452 0 - 11,11±10,43 0,112

9 21,43±10,92 21,43±10,92 42,86±13,19

Примечание: в числителе штаммы, выделенные от сотрудников, в знаменателе - от птиц; р -статистическая значимость различий частоты встречаемости признака у штаммов, изолированных от птиц и сотрудников.

Как и можно было ожидать независимо от источника выделения штаммы S. aureus чаще, чем представители КОС обладали факторами вирулентности. Среди КОС эти факторы в большей мере были присущи штаммам S. xylosus.

Анализ наличия внутривидовых различий у штаммов стафилококков в отношении частоты встречаемости факторов вирулентности показал, что «птичьи» изоляты всех видов, включая S. aureus, как правило, в большей степени характеризовались их наличием. Особенно

существенными эти различия были в отношении лецитовителлазной активности. «Птичьи» штаммы обладали данным признаком в 2 раза чаще.

Таким образом, в результате изучения частоты встречаемости ряда факторов вирулентности у стафилококков, изолированных от различных хозяев, выявлены определенные внутривидовые различия у штаммов в зависимости от источника выделения. Культуры, изолированные от птиц, чаще обладали изучаемыми факторами вирулентности. Близость по изученным фенотипическим признакам ряда штаммов, выделенных от сотрудников и птиц, предполагает возможность обмена этими микроорганизмами в условиях «производственного контакта».

Следующий фрагмент наших исследований был посвящен изучению наличия и степени выраженности факторов персистенции, которые, как известно, способствуют выживанию бактерий в неблагоприятных условиях (Gotz, 2002; Ильина, 2004: Kaplan, et al., 2005: Гостев. 2010: Бухарин. 2014; и др.).

Поскольку биопленки являются ключевой фазой бактериального развития, сопряженного с выживанием бактерий при воздействии неблагоприятных условий (Speziale et al.. 2008: Murugan, et al., 2010: Маянский, 2011; и др.), а лизоцим служит одним из факторов врожденного иммунитета слизистых носоглотки (Cucarella. et al., 2001; Tormo, et al., 2005: Hennig. et al.. 2007: Rohde, et al.. 2007; Vergara-lrigaray. et al., 2008: Vu et al.. 2009; Geoghegan, et al., 2010: Archer, et al., 2011: Soong, et al., 2011: и др.), то в этой связи представлялось целесообразным сделать акцент на изучении именно этих факторов персистенции. В качестве примера приводим фотографию биопленки суточной бульонной культуры S. aureus. Штамм № 656. после 24-х часовой инкубации на покровном стекле в чашке Петри (Рисунок 1).

Рисунок 1. Биопленка S. aureus, сформированная на покровном стекле. Окраска генцианвиолетом,увеличение 1 Ох.

Поскольку практически все изученные культуры (98.7%), изолированные от сотрудников и птиц, обладали способностью образовывать биопленки, то мы сопоставили интенсивность этого процесса у различных штаммов (Таблица 3).

Таблица 3

Результаты изучения степени выраженности биопленкообразующей способности бактерий рода Staphylococcus, выделенных от сотрудников и птиц

Вид n Степень выраженности БПО штаммов

Слабая Средняя Сильная

абс (%) Р абс (%) Р абс (%) Р

S. aureus 10 0 - 3 (30,00±9,49) 0,143 7 (70,00±22,14) 0,142

17 1 (5.88±1,43) 9 (52,94± 12,84) 7 (41,18±9,99)

S. gallinarum 14 0 - 2 (14,29±3,82) 0,093 12 (85,71±22,91) 0,054

22 1 (4,55±0,97) 9 (40,91 ±8,72) 12 (54,55±11,63)

S. warneri 17 0 - 1 (5,88±1,43) 0,004 1 (5,88±1,43) 0,133

10 15 (10,00±3,16) 6 (60,00± 18,97) 3 (30,00±9,49)

S. xylosus 9 0 - 1 (11,11±3,7) 0,180 8 (88,89±29,63) 0,010

14 4 (30,77±8,53) 5 (38,46±10,67) 2 (15,38±4,27)

Примечание: в числителе штаммы, выделенные от сотрудников, в знаменателе - от птиц; р - статистическая значимость различий между штаммами, изолированными от птиц и сотрудников (расчет для абсолютных показателей).

Как следует из представленных данных, внутривидовые различия по интенсивности биопленкообразования были выявлены только у представителей видов S. xylosus и S. warneri. Так, биомасса биопленок 5. xylosus, изолированных от сотрудников, была существенно больше. Напротив, представители S. warneri. выделенные от птиц, чаще обладали средней степенью выраженности признака.

Как уже указывалось, для регистрации биомассы пленок использовали 2 красителя: генцианвиолет и тетразолий MTS. Последний позволяет выявить клетки, вегетирующие в составе биопленки (Коробов. 2011). При окраске тетразолием установлено, что штаммы S. aureus. изолированные от сотрудников, характеризовались большим количеством живых клеток в составе биопленок, чем «птичьи» изоляты (/>=0.0005). В остальных случаях внутривидовые различия у изолятов в зависимости от источника получения не выявлены.

При исследовании устойчивости различных видов стафилококков к лизоциму был использован разработанный нами метод, дающий возможность определить как наличие, так и степень выраженности этого признака. Установлено, что все 113 изученных культур обладали резистентностью к действию лизоцима. При этом, внутривидовых различий по степени выраженности данного признака у изученных штаммов выявлено не было. Вместе с тем изоляты S. aureus чаще обладали высокой устойчивостью, в сравнении с КОС (р=0,0001).

Между интенсивностью БПО и устойчивостью к действию мурамидазы у штаммов как S. aureus, так и представителей КОС, независимо от источника выделения выявлена обратная коррелятивная зависимость. Эта зависимость была наиболее выражена (г=-0,61) для культур S. aureus, изолированных от сотрудников. Учитывая однонаправленность этих факторов персистенции, можно полагать, что они «компенсируют» друг друга.

Самостоятельный интерес представляют результаты сравнительного анализа наличия и частоты встречаемости факторов вирулентности у потенциальных этиопатогенов - штаммов S. aureus, выделенных из различных источников (Таблица 4).

Таблица 4

Факторы вирулентности S. aureus, выделенных из различных источников_

Источник Частота встречаемости признака

Гемолитическая активность ЛВ активность ДНК-азная активность

абс (%) абс (%) абс (%)

Птицы («=17) 5 (29,41±7,13) - 14 (82.35±19,92) - 14 (82.35±19,92) -

Сотрудники (и=10) 6 (60,00± 16.04) 0,121* 4 (40.00± 10.69) 0,032* 8 (80,00±21.38) 0.623*

Студенты («=13) 12 (92,31±25.60) 0,0007* 0.09** 5 (38,46±10.67) 0,021* 0.644** 12 (92.31±25,60) 0,401* 0.422**

Примечание: * - статистическая значимость различий частоты встречаемости признака в сравнении со штаммами, выделенными от птиц; ** - сравнение показателей у штаммов, выделенных от сотрудников и студентов (расчет для абсолютных показателей).

Как следует из представленных данных, штаммы, выделенные от птиц, чаще проявляли лецитовителлазную активность, в сравнении с другими изолятами. Тогда как штаммы, выделенные от студентов, статистически значимо чаще характеризовались наличием гемолитических свойств. В отношении частоты встречаемости ДНК-азной активности у изученных штаммов внутривидовых различий, в зависимости от источника выделения, выявлено не было.

Не было обнаружено также статистически значимых внутривидовых различий у штаммов S. aureus, выделенных от сотрудников, студентов и птиц, в отношении средних цифровых значений биомассы образуемых пленок. Аналогичные закономерности были выявлены при изучении у этих штаммов устойчивости к лизоциму.

Следующий фрагмент наших исследований был связан с изучением антибиотикочувствительности всех изолятов (113 штаммов, 4-х видов).

Антибиотикочувствителыюсть. При анализе антибиотикограмм изученных штаммов выявлены определенные закономерности. Подавляющее большинство штаммов независимо от

видовой принадлежности и источника выделения, как правило, проявляли резистентность к линкомицину и доксициклину - препаратам, используемым в промышленном птицеводстве в соответствии с технологией выращивания птицы. Прежде всего это касалось «птичьих» изолятов. лишь 10% из них оказались чувствительны к линкомицину. В качестве примера приводим результаты изучения чувствительности к АБП штаммов S. aureus, изолированных от сотрудников и птиц (Рисунок 2).

Окоациллин Доксициклин Линкомицин Эритромицин Амикацин Гентамицин Левофлсжсацин Ко-тримоксазол иефокситин

И Сотрудники И Птицы

Рисунок 2. Антибиотикочувствительность штаммов S. aureus, изолированных от сотрудников и птиц (М±т).

Следует также отметить, что среди всех изолятов £ aureus лишь I штамм был резистентен к бета-лактамным антибиотикам.

Если штаммы 5. aureus, выделенные от сотрудников, как правило, отличались более выраженной чувствительностью к тестируемым препаратам, то в отношении других видов стафилококков таких четких закономерностей выявлено не было.

Особый интерес представляет изучение антибиотикочувствительности штаммов 5. gallinarum - представителей нормофлоры птиц. Среди этих культур, выделенных от сотрудников и птиц, выявлены четкие внутривидовые различия в отношении чувствительности к линкомицину и к доксициклину. И вновь «птичьи» штаммы как правило характеризовались существенно большей резистентностью к данным АБП. применяемым при выращивании кур.

Важно отметить, что ряд культур различных видов стафилококков, выделенных от сотрудников, по своим антибиотикофенотипам практически не отличались от таковых штаммов птиц, что свидетельствует о широкой циркуляции этих микроорганизмов. При этом, наличие среди «птичьих» штаммов культур, резистентных к АБП, а также факторов вирулентности обусловливают их потенциальную угрозу для здоровья обслуживающего персонала. По мнению ряда авторов такие штаммы могут быть причиной различных гнойно-воспалительных заболеваний (Iwatsuki et al.. 2006: Barretti. et al.. 2009: и др.).

Важно подчеркнуть, что в качестве этиопатогенов могут выступать не только штаммы S. aureus, но и антибиотикорезистентные представители КОС, в том числе S. xylosus и S. warnen, значение которых в патологии человека с каждым годом возрастает (Buttery, et al., 1997; Biavasco, et al., 2000; Kintarak, et al., 2004; Rasmussen, et al., 2009; Ehsan, et al., 2013; Bochniarz, et al., 2014; и

ДР-)-

Определение эковариантов штаммов S. aureus.

Результаты изучения антибиотикочувствительности штаммов стафилококков, изолированных от сотрудников и птиц, так же как и некоторые фенотипические характеристики, свидетельствовали о широкой циркуляции этих микроорганизмов в условиях птицефабрики. В связи с этим представлялось целесообразным определить чувствительность штаммов S. aureus, выделенных из различных источников, к типовым бактериофагам набора «Ч», предназначенным для фаготипирования культур, изолированных от человека.

Как и следовало ожидать, 92,3±25,67% изолятов практически здоровых лиц были чувствительны к действию типовых бактериофагов данного набора. Вместе с тем 50,00±15,81% штаммов, выделенных от сотрудников не лизировались бактериофагами набора «Ч». Более того 35,29±8,56% культур, изолированных от птиц, были чувствительны к этим бактериофагам. При этом фагомозаика штаммов S. aureus, изолированных от студентов, существенно отличалась от таковой культур, выделенных в условиях птицефабрики.

Следовательно, и эти данные подтверждают ранее полученные о широкой циркуляции стафилококков между сотрудниками птицефабрики и птицами.

Известно, что S. aureus, изолированные от различных хозяев, в зависимости от особенностей своих биологических свойств (плазмокоагулирующая и гемолитическая активности, отношение к типовым бактериофагам, характер роста на среде с генцианвиолетом) относятся к соответствующим эковариангам (Самсонова, 1982; Акатов, Зуева, 1983; Дерябин, 2000).

Располагая необходимыми данными о биологических свойствах культур S. aureus, изолированных из различных источников, мы провели определение их принадлежности к тем или иным эковариантам.

Практически все штаммы (76,92±21,33%), изолированные от студентов, относились к биотипу А («человека»), В то же время, лишь 50,00^15,81% культур, изолированных от сотрудников, принадлежали к этому биотипу. Следует отметить, что к этому же эковарианту было отнесено более трети штаммов, изолированных от птиц. Вместе с тем, к эковарианту «куриный» (В) принадлежали только 52,94±12,84% изолятов птиц. К этому же биотипу отнесены и 50,00±15,81% штаммов, выделенных от сотрудников.

Таким образом, результаты определения эковариантов S. aureus, полученных от сотрудников и птиц, также свидетельствуют об обмене этими микроорганизмами. Возможность

циркуляции штаммов стафилококков в условиях птицефабрики между сотрудниками и птицами констатирует также в своих наблюдениях Самсонова Т.М. Изучая возможность обмена штаммами S. aureus между сотрудниками и птицами она показывает, что 10% изолятов птиц относятся к биотипу человека. По ее мнению это объясняется возможностью колонизации кур штаммами «человека».

Молекулярно-генетические исследования. В серии специальных наблюдений проведено определение генетической близости штаммов S. aureus, выделенных от птиц и сотрудников, с помощью метода RAjPD-ПЦР. Как уже указывалось, в реакции амплификации использовали праймеры с различным процентом пар пуриновых оснований, которые применяют для генотипирования стафилококков: праймер A (GTTTCGCTCC), праймер 6 (GAGACGCACA) и праймер 7 (CAGCCCAGAG). Штаммы S. aureus относили к одному геномоварианту при идентичности результатов продуктов амплификации ДНК не менее чем по двум праймерам.

В результате, штаммы S. aureus, выделенные от сотрудников (л=10), были разделены на 3 геномоварианта (I-Ш). К первому и второму были отнесены по 2 изолята, к третьему - 3. Три оставшихся штамма не входили ни в один из этих вариантов, поскольку обладали индивидуальными геномопрофилями.

Штаммы S. aureus, полученные от птиц (и=17), сгруппированы в 5 геномовариантов (соответственно IV-VIII). Четыре штамма обладали индивидуальными RAPD-профилями.

Семь штаммов S. aureus, в том числе 4 изолированных от птиц и 3 - от сотрудников, в соответствии с результатами генотипирования, были выделены в самостоятельные геномоварианты (EX-XV). Важно подчеркнуть, что один и тот же геномовариант штаммов стафилококков был выделен от сотрудников и птиц. Они были отнесены к разным геномовариантам (соответственно - ЕХ и VIII), поскольку получены из различных источников.

№№ 265 267 289 59 268 224 160 644 210 645

Рисунок 3. Электрофореграмма продуктов амплификации ДНК изолятов S. aureus с праймером 7.

Источники выделения штаммов: №№ 265, 267, 268, 289 - сотрудники, №№ 224, 160, 59, 644, 210, 645 - птицы, к - контроль, 1 - близкие штаммы.

Следовательно, от человека был выделен штамм S. aureus, по своим генетическим характеристикам близкий 4-м штаммам птиц. Таким образом, в условиях тесного производственного контакта «птичий» штамм колонизировал биотопы человека.

В то же время, практически все штаммы S. aureus, выделенные от человека и птиц, отличались по своему геномопрофилю, что указывает на их внутривидовые различия. Наличие внутривидовых различий у штаммов S. aureus подтверждается и генетической близостью большинства изолятов, выделенных от определенного хозяина.

В заключении были сопоставлены результаты изучения биологических свойств, фагочувствительности, эковариантов и генетических исследований штаммов S. aureus. Установлено, что 4 штамма из 17, выделенные от птиц (IV и V геномоварианты) и 4 из 10, изолированные от сотрудников (ПиШ геномовариант), характеризовались близкими свойствами. В то же время эти группы штаммов («птичьи» и «сотрудников») отличались между собой.

Вместе с тем, среди штаммов сотрудников присутствовали изоляты, принадлежащие к эковарианту В птиц. С другой стороны, от птиц выделяли штаммы эковарианта А.

Таким образом у ряда штаммов S. aureus, выделенных от различных хозяев, выявлены фено- и генотипические внутривидовые различия. В то же время, в условиях птицефабрики, за счет тесного производственного контакта между сотрудниками и птицами, циркулируют также штаммы S. aureus, характеризующиеся близкими фено- и генотипическими свойствами, несмотря на то, что они выделены от различных хозяев. Следовательно между сотрудниками птицефабрики и птицами происходит обмен микроорганизмами.

Поскольку «птичьи» изоляты различных видов стафилококков обладают набором факторов вирулентности, и среди них регистрируются полирезистентные культуры, они могут представлять потенциальную угрозу для здоровья сотрудников птицефабрики.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что видовой состав стафилококков, изолированных в условиях птицефабрики от сотрудников и домашних птиц, характеризуется широким спектром и представлен 30 видами. При этом, «птичьи» штаммы стафилококков отличаются наибольшим таксономическим разнообразием (28 видов).

2. Установлено, что «птичьи» изоляты S. aureus, так же как и представители КОС, как правило, отличаются большей частотой встречаемости факторов вирулентности, в сравнении с культурами аналогичных видов, выделенными от человека.

3. Выявлено, что все изученные штаммы стафилококков, независимо от источника выделения, обладают факторами персистенции - способностью образовывать биопленки и резистентностью к

люоциму. Культуры S. aureus, изолированные от сотрудников, чаще сохраняют жизнеспособность в биопленках, чем «птичьи» изоляты. Между интенсивностью БПО практически у всех выделенных штаммов стафилококков и уровнем резистентности к лизоциму выявлена обратная корреляционная связь.

4. Установлено, что среди изученных видов стафилококков большей чувствительностью к антибактериальным препаратам отличаются S. aureus, меньшей - S. warneri. Наиболее четкие внутривидовые различия между штаммами, выделенными из различных источников, прослеживаются в отношении чувствительности к антибиотикам, применяемым на птицефабрике (линкозамиды, макролиды, тетрациклины). «Птичьи» изоляты, как правило, были более резистентны к этим препаратам. Метищшлин-резистентные штаммы S. aureus выделены лишь в 1 случае.

5. На основании совокупности изученных биологических свойств, а также результатов фаготипирования, 76% штаммов S. aureus, изолированных от практически здоровых лиц, отнесены к эковару А (человека). Вместе с тем лишь половина культур, выделенных от сотрудников, принадлежит к этому же эковарианту, остальные - к эковару В (куриный). При этом, только 53% изолятов птиц относятся к соименному эковару, остальные - к эковару А. Полученные данные свидетельствуют о широкой циркуляции S. aureus в условиях птицефабрики.

6. По результатам ПЦР все штаммы S. aureus, изолированные от сотрудников и птиц, отнесены к 15 геномовариангам. Среди изолятов птиц определено 9 геномовариантов, человека -6. Преобладали индивидуальные геномопрофили. Таким образом, с помощью молекулярно-генетического анализа между штаммами S. aureus, изолированными от сотрудников и птиц, были выявлены внутривидовые различия. Вместе с тем, один штамм, выделенный от сотрудников, по своему геномопрофилю был идентичен 4-м «птичьим» изолятам, что еще раз подтверждает факт обмена штаммами стафилококков между сотрудниками и птицами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При проведении профилактических осмотров на объектах промышленного птицеводства, особое внимание следует уделять наличию гнойничковых заболеваний у лиц, непосредственно связанных с уходом за домашними птицами.

2. При наличии подобных заболеваний целесообразно проводить бактериологическое обследование с обязательным определением антибиотикочувствительности выделенных культур микроорганизмов.

3. В случаях назначения больным сотрудникам птицефабрики (независимо от нозологии) антибактериальных препаратов следует учитывать, какие антибиотики используются в условиях птицефабрики в соответствии с технологическим процессом.

4. Сотрудникам ветеринарной службы необходимо постоянно осуществлять мониторинг чувствительности микроорганизмов, выделяемых от птиц, к антибактериальным препаратам и дезинфектантам. С учетом полученных данных, чередовать применение этих средств.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК Минобрнауки РФ:

1. Условно-патогенная микрофлора цыплят-бройлеров как возможный источник инфицирования сотрудников птицефабрики / Хлызова JLA., Шавшукова О.А., Виноградов А.Б., Четвертных В.А., Афанасьевская Е.В., Гордина Е.М. // Пермский медицинский журнал. - 2013. -Том 30,№2. -С. 109-114.

2. Видовой спектр и биологические свойства стафилококков, изолированных от птиц, в условиях крупной птицефабрики / Гордина Е.М., Горовиц Э.С., Поспелова С.В., Афанасьевская Е.В. // Медицинский альманах. - 2014. - Том 16, №2. - С. 84-87.

3. Лактоферрин и антилактоферриновая активность стафилококков, изолированных от детей, проживающих в районах с различной техногенной нагрузкой / Поспелова С.В., Горовиц Э.С., Кривцов А.В., Тимашева О.А., Гордина Е.М. // Российский иммунологический журнал. - 2014. -Том 8, №3. - С. 858-861.

4. Фаготипирование штаммов Staphylococcus aureus, выделенных из различных источников / Гордина Е.М., Горовиц Э.С., Поспелова С.В., Тимашева О.А. // Проблемы медицинской микологии. - 2014. - Том 16, №2. - С. 58-59.

Публикации в других журналах и сборниках:

5. Гордина, Е.М. Изучение стафилококков, выделенных от сотрудников птицефабрики / Гордина Е.М. // Запор13ький державний медичний ушверситет«Актуальш питания фармацевтичноПмедичюн науки та пракпки». - 2013 (12) додаток 2. - С. 72-73.

6. Гордина, Е.М. Спектр и некоторые биологические свойства стафилококков, выделенных от сотрудников птицефабрики / Гордина Е.М. // Материалы VII Международной научной конференции молодых ученых. - Курск, 2013. - Том 1. - С. 300-303.

7. Гордина, Е.М. Сравнительная оценка ряда факторов патогенное™ стафилококков, выделенных от птиц и человека / Гордина Е.М. // Сборник трудов XIV-ой научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и медицинская наука в XXI веке». - Киров, 2013. - С. 130-132.

8. Изучение некоторых факторов патогенности стафилококков, выделенных от детей инфицированных микобакгериями туберкулеза / Селин А.Д., Городилова А.А., Гордина Е.М. // Научная сессия ПГМА им. ак. Е.А.Вагнера 2014. - Том 2. - С. 132.

9. Гордина Е.М. Антибиотикочувствительность стафилококков, выделенных из различных источников / Гордина Е.М. // Инфекция и иммунитет. - 2014. - Том 4, №1. - С. 60.

10. Гордина, Е.М. Изучение некоторых биологических свойств представителей рода Staphylococcus, изолированных от птиц и сотрудников птицефабрик / Гордина Е.М. // Научная сессия ПГМА им. ак. Е.А.Вагнера 2014. - Том 1. - С. 19-21.

11. Антибиотикочувсгвигельность Staphylococcus aureus, выделенных от человека и птиц / Афанасьевская Е.В., Гордина Е.М., Горовиц Э.С., Первова A.B. // Проблемы медицинской микологии. - 2014. - Том 16, №2. - С. 39.

12. Видовое разнообразие и факторы патогенности стафилококков, изолированных от детей, инфицированных микобактериями туберкулеза / Алиева J1.0., Щукина В.П., Гордина Е.М., Селин А.Д. // Сборник научных трудов по материалам V Международной заочной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные аспекты современной науки». - 2014. -4.2.-С. 7-9.

13. Гордина, Е.М. Видовое разнообразие стафилококков, изолированных от сотрудников птицефабрики / Гордина Е.М., Горовиц Э.С. // Materials of the X International Scientific and Practical Conference «Fundamental and Applied Science». - 2014. - Vol. 14. - P. 75-78.

14. Гордина, Е.М. Биопленкообразование коагулазоотрицательных стафилококков, циркулирующих в условиях птицефабрики / Гордина Е.М., Кидряева Л.М., Шиляева H.A. // Материалы ежегодной итоговой научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины», ГрГМУ. - 2015. - 4.1. - С. 162-164.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АБП - антибактериальный препарат

БПО - биопленкообразование

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

КОЕ - колониеобразующая единица

КОС - коагулазоотрицательные стафилококки

КПС - коагулазоположительные стафилококки

ЛВ - лецитовителлаза

ОП — оптическая плотность

ПЦР - полимеразная цепная реакция

CLSI - Clinical Laboratory Standarts Institute

RAPD-ПЦР - ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК