Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологическая характеристика диоксинора орального и его эффективность при колибактериозе птицы

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологическая характеристика диоксинора орального и его эффективность при колибактериозе птицы"

На правах рукописи

МИГАЕШ ВЛАДИМИР СЕМЁНОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИОКСИНОРА ОРАЛЬНОГО И ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ПТИЦЫ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

12 2013

ои

Воронеж-2013

005543304

Работа выполнена в отделе фармакологии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии.

Научный руководитель доктор биологических наук

Востроилова Галина Анатольевна

Официальные оппоненты: Аргунов Муаед Нурдинович

доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Воронежский аграрный университет им. императора Петра I», профессор кафедры терапии и фармакологии факультета ветеринарной медицины и технологии животноводства

Жуков Иван Васильевич

доктор ветеринарных наук, Липецкий филиал ОГБУ Тульская межобластная ветеринарная лаборатория, заместитель директора Ведущая организация: Государственное научное учреждение Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Защита состоится «20» декабря 2013 г. в 13°° часов на заседании диссертационного совета Д 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИВИПФиТ РАСХН) по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии.

Автореферат размещен на официальном сайте ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии - http://www.nivipat.ru и официальном сайте ВАК РФ -http://vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан «19» ноября 2013 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.б.н., доцент

Ермакова Т.И.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Птицеводство России является наиболее устойчивой, динамично развивающейся отраслью агропромышленного комплекса (С.А. Брайт с соавт., 2010; JI.A. Венгеренко, 2011; Н.В. Кожемяка с соавт., 2011). Несмотря на это в птицеводческих хозяйствах существуют определенные проблемы, которые снижают экономическую эффективность производства (Л.Ю. Лесниченко с соавт., 2011). В первую очередь, к ним следует отнести болезни птиц бактериальной этиологии, которые в структуре инфекционных заболеваний занимают 70% (A.A. Щербаков с соавт., 2003; Л. Борисенкова, 2004; И. Сегал с соавт., 2006; И.И. Уваров, 2009; Ю.Н. Шурахова с соавт., 2010).

В работах отечественных (H.H. Ванина, 2006; Б. Бессарабов с соавт., 2006; С.А. Брайт с соавт., 2010; И.К. Авдосьва с соавт., 2011; М. Добрина, 2011 и др.) и зарубежных авторов (D.M. Fallacara et al, 2001; J.K.P. Kwaga et al, 2004) показано, что колибактериоз занимает лидирующее положение в общей структуре болезней бактериальной этиологии у птицы и составляет 42-77%.

Меры борьбы с бактериальными инфекциями включают в себя комплекс ве-теринарно-санитарных мероприятий, среди которых немаловажную роль играет использование антибактериальных лекарственных средств (С. Лысенко, 2008; E.H. Елисеева, 2010; A.B. Лашин, 2010 и др.).

Бессистемное применение антибиотиков, не выдерживание доз и схем терапии, циклические методы лечения птицы одним и тем же препаратом, ведут к возникновению затяжных форм болезни и формированию устойчивых к антимикробным средствам популяций возбудителей, особенно в семействе энтеробакте-рий (Н.И. Малик с соавт., 2001; Т.В. Вершняк, А.Я. Самуйленко, 2003; Н. Лагут-кин, 2004; А. Борисенкова, 2004; Л. Шчука, 2005; Л. Хорошевская с соавт., 2010).

Развитие резистентности у микроорганизмов является основным фактором, ограничивающим эффективность химиотерапии. В связи с этим актуальным становится поиск новых путей предупреждения развития и борьбы с антибиотикоре-зистентностью, одним из которых является создание комплексных антимикробных препаратов, в состав которых входят отличающиеся по структуре и фармакологическому действию вещества, проявляющие различную степень антимикробной активности. Использование научно обоснованных комбинаций антибактериальных веществ является важным направлением современной химиотерапии бактериальных инфекций, позволяющим не только преодолеть проблему антибиоти-корезистентности, но и значительно расширить спектр антимикробного действия препаратов (C.B. Шабунин, 1999; П.С. Лобова, 2008; Г.А. Востроилова с соавт., 2011; Л.Ю. Сашнина, 2013 и др.).

Исходя из данных отечественной и зарубежной литературы о широкой распространенности колибактериоза в птицеводстве и больших экономических потерях, связанных с ним, был разработан удобный в применении и безопасный комплексный антибактериальный препарат на основе норфлоксацина и диоксидина, обладающий широким спектром действия. Использование его в птицеводстве позволит повысить эффективность лечения колибактериоза, а также в ассоциации с ним других инфекционных заболеваний птицы.

Цель и задачи исследований. Разработать новый комплексный антибактериальный препарат на основе норфлоксацина и диоксидина для лечения колибак-териоза птицы, определить его фармако-токсикологические свойства, терапевтическую и экономическую эффективность.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

> изучить специфическую активность норфлоксацина и диоксидина, экспериментально обосновать их оптимальное соотношение для разработки нового комплексного антибактериального препарата диоксинор оральный;

> изучить фармако-токсикологические свойства препарата диоксинор оральный;

> изучить фармакокинетику и сроки выведения остаточных количеств препарата диоксинор оральный из организма цыплят;

> изучить терапевтическую и экономическую эффективность препарата при колибактериозе птицы;

> разработать показания к применению диоксинора орального.

Научная новизна. Теоретически и экспериментально обоснован состав и рецептура нового комплексного антибактериального препарата диоксинор оральный на основе норфлоксацина и диоксидина. Установлено взаимоусиливающее действие компонентов препарата на эшерихии. Изучены его фармако-токсикологические свойства, доказывающие возможность безопасного использования лекарственного средства, и эффективность применения диоксинора орального при терапии колибактериоза птицы.

Практическая значимость работы. Разработан и внедрен в ветеринарную практику новый комплексный препарат диоксинор оральный для лечения колибактериоза птицы, дана оценка его терапевтической и экономической эффективности. Определены сроки выведения остаточных количеств препарата из организма птицы.

В Российской Федерации Россельхознадзором проведена регистрация препарата диоксинор оральный (регистрационный номер ПВР-2-3.0/02563) и утверждена инструкция по его применению.

Публикации. Основные научные результаты, включённые в диссертацию, опубликованы в 13 печатных работах, в том числе 4 статьи в журналах рекомендованных ВАК РФ («Вестник Воронежского ГАУ», «Ветеринария», «Птицеводство»).

Апробация работы. Основные положения и результаты исследования представлены и одобрены на: годовых отчетах по НИР ГНУ Всероссийский НИ-ВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН (Воронеж, 2011-2013); на Международных и Всероссийских научно-практических конференциях: Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях (Воронеж, 2010); Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки (Махачкала, 2010); Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчёл (Москва, 2011); III и IV съездах фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармаколо-

гии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011; Москва, 2013); VII Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2010); XVII международной конференции «Инновационные разработки и их освоение в промышленном птицеводстве» (Сергиев Посад, 2012).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 116 страницах, содержит 28 таблиц, 9 рисунков, включает в себя введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы и практические предложения, приложение. Список литературы содержит 257 источников, из них 59 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

- обоснование состава нового комплексного антибактериального препарата на основе норфлоксацина и диоксидина;

- фармако-токсикологические свойства препарата диоксинор оральный в опытах на лабораторных животных и цыплятах;

- фармакокинетика диоксинора орального и сроки выведения остаточных количеств препарата из организма цыплят после его применения;

- терапевтическая и экономическая эффективность диоксинора орального при ко-либактериозе цыплят.

2. МАТЕРИАЛ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в отделе фармакологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» Россельхозакадемии в период с 2008-2013 гг. в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданию 08.04.01. «Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых незаразных и вызываемых условно-патогенными микроорганизмами заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных» (№ гос. per. 15070.3666026906.06.8.001.2), программа фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации Россельхозакадемии на 2008-2013 гг.

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных и птицы в период проведения работы и учёта результатов (И.Т. Фролов, 1965). Перед экспериментом животные и птица выдерживались в течение двух недель в карантинных условиях на стандартном пищевом рационе (И.П. Западнюк с соавт., 1983). Для опытов животных и птицу брали в эксперимент после внутригрупповой адаптации. Доступ к воде и корму был свободным, световой режим естественным. Содержание, кормление и манипуляции над ними проводили в соответствии с положением Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используются в эксперименте (Страсбург, 1986) и правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ №267 от 2003 года).

При выполнении работы проводили токсикологические, фармакологические, гематологические, биохимические, иммунологические исследования с применением современных методов.

В опытах были использованы: беспородные белые мыши обоего пола массой 19-22 г. - 200 гол.; беспородные белые крысы обоего пола массой 180-235 г. -120 гол.; морские свинки массой 340-355 г. - 24 гол.; кролики массой 2,0-2,2 кг. -12 гол.; цыплята массой 342-850 г. - 210 гол.

Изучение антимикробной активности и оптимального соотношения компонентов в препарате диоксинор оральный в опытах in vitro проводились методом серийных разведений (Б.И. Антонов с соавт., 1986, М.А. Сидоров с соавт., 1995). В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей желудочно-кишечных болезней птицы, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясо-пептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА) не содержащие препарат.

Острую, хроническую и субхроническую токсичность оценивали несоответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утверждёнными ГУВ СССР (1991), аллергенную активность в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке аллергенных свойств фармакологических средств» (1988), эмбриотоксическую и тератогенную активность в соответствии с «Методическими рекомендациями по доклиническому изучению репродуктивной токсичности

фармакологических средств» (1997).

Определение параметров токсичности препарата в остром опыте проведены при однократном пероральном введении диоксинора орального. Одновременно на этих животных и птице изучили симптомы острого экспериментального отравления. Павших животных, птицу и особей с признаками отравления препаратом, подвергали патологоанатомическому вскрытию. Группы животных и птицы формировали по принципу аналогов, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Перед началом опытов животных выдерживали на карантине в течение 12 дней, а перед введением препарата не кормили в течение 12 часов. Наблюдение за животными и птицей проводили непрерывно на протяжении первого дня после введения препарата. В последующем состояние животных и птицы контролировали дважды в сутки в течение 14 дней. Регистрировали общий статус и поведение, состояние нервно-мышечных и вегетативных функций, поедание корма, потребление воды. Особое внимание уделяли развитию признаков токсикоза, оценивали их тяжесть, продолжительность, время выздоровления или гибели животных и птицы. Препарат вводили лабораторным животным непосредственно в желудок, металлическим зондом с оливой на конце, в объеме для белых мышей - 0,6 мл, для белых крыс - 6,0 мл (дозы являются предельно допустимыми по объему для

перорального введения), цыплятам - в утренние часы на голодный желудок, непосредственно в зоб при помощи резиновой трубки в дозах от 25500,0 до 36000,0 мг/кг. Кормление животных и птицы осуществляли спустя два часа после введения препарата.

Среднелетальную дозу - 1Л}50 - определяли аналитическим способом Спир-мена-Кербера (Лакин Г.Ф., 1990) и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы «Статистика +2003». Величины 1ЛЭ16 и 1Л}84 препаратов для белых мышей и белых крыс определяли графически на основании соответствующих пробитов и доз в мг/кг массы тела, показатель ошибки средней дозы эффекта - 81^50 - аналитически и графически.

Изучение подострой токсичности препарата проводили на 40 белых крысах-самцах с массой тела 180-200 г (по 10 голов в группе) и на 32 цыплятах (по 8 голов в группе) с массой тела 650-750 г в течение 21 дня. Расчет дозировок проводили по готовой лекарственной форме, исходя из ЛД50, установленной в остром опыте и с учетом плотности. В исследованиях использовали три дозы: 1/50, 1/20 и 1/10 ЯД» (0,6; 1,5 и 3,0 мл/кг). Крысам препарат задавался в смеси с кормом, цыплятам - в утренние часы, до кормления индивидуально непосредственно в зоб при помощи резиновой трубки. Общее токсическое действие препарата оценивали по динамике массы тела животных и птицы, гематологическим показателям и состоянию системы гемостаза - по окончании применения препарата и через неделю после восстановительного периода. В эти же сроки животные и птица были подвергнуты эвтаназии и произведено взвешивание внутренних органов для выявления органа-мишени действия препарата. После определения относительной массы органов были проведены их макроскопические и гистологические исследования.

В опытах использовали контрольную группу животных и птицы той же численности и состава, что и подопытные, им препарат не применяли.

Изучение субхронической токсичности диоксинора орального проводили на 30 цыплятах-бройлерах массой 342-352 г, находившихся в одинаковых условиях кормления и содержания. Подопытные цыплята по принципу аналогов были разделены на три группы (п=10). Диоксинор оральный вводили каждому цыпленку через зонд в зоб ежедневно в течение 15 дней в следующих дозах: 1-я группа -контроль; 2-я группа - 0,05 мл/кг (терапевтическая доза) и 3-я группа - 0,5 мл/кг (десятикратная терапевтическая доза). Наблюдение за клиническим состоянием птицы проводили на протяжении 20 дней от начала опыта. Токсическое действие препарата при его пероральном применении оценивали по клиническому состоянию, морфологическим и биохимическим показателям крови.

Опыты по определению эмбриотоксического и тератогенного действия диоксинора орального проведены по методике А.П. Шицковой с соавт. (1977) на самках белых крыс массой 210,0±20,0 г. Фазу полового цикла устанавливали путем исследования вагинального содержимого. Первым днем беременности считали день обнаружения спермиев после подсадки самцов к самкам. Животные были разделены на три группы: контрольная и две опытные. Крысам первой опытной группы - на 5-й день беременности (период имплантации) и второй опытной

группы - на 15-й день беременности (период органогенеза) вводили диоксинор оральный в дозе 3,0 мл/к г массы тела перорально. Для выявления повреждающего действия препарата на плод половину самок убивали на 19-20 день беременности. Проводили осмотр матки, плацент и плодов, подсчитывали количество желтых тел беременности, оценивали равномерность расположения плодов в рогах матки. Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным A.M. Малашенко и И.К. Егоровым (1977). В целях выявления патологии внутренних органов эмбрионов, материал фиксировали в жидкости Боуэна и 70° спирте. Аномалии скелета выявляли по методу Даусона (1984). Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили показатели гибели зародышей на пред - и пост-имплантационных стадиях развития (эмбриональный эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей.

Опыты по изучению раздражающего действия на кожу были проведены на кроликах с массой тела 2,0 -2,2 кг. Количество животных в опытных и контрольных группах составляло по б особей. Исследуемый препарат наносили на кожу в чистом виде. Площадь нанесения составляла 80-82 см (5% от общей поверхности тела животных). За два дня до эксперимента тщательно выстригали шерсть на спине, избегая механических повреждений кожных покровов. Препарат равномерно распределяли по поверхности участка в дозах от 0,02-0,12 мл/см . Экспозиция препарата составила 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченньм дистиллированной водой. Реакцию на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения.

Исследования аллергизирующих свойств диоксинора орального проводили согласно методическим рекомендациям, разработанным в НИИ медицины труда АМН РФ по единой схеме постановки токсико-аллергических экспериментов. В опытах использовали две группы морских свинок-аналогов массой тела 335-345 г, обоего пола белого цвета или имеющих крупные белые пятна на боках туловища. Морские свинки первой группы препарат не получали, они служили контролем. Морским свинкам второй группы вводили диоксинор оральный. Первичную оценку аллергизирующих свойств диоксинора орального проводили путем однократной внутрикожной сенсибилизации, которая позволяет в течение 10-12 дней установить наличие или отсутствие сенсибилизирующих свойств у препарата. Для этого в кожу наружной поверхности уха морских свинок опытной группы вводили 0,05 мл диоксинора орального. Контрольным животным вводили 0,05 мл растворителя. Выявление сенсибилизации проводили через 12 дней после однократного введения морским свинкам диоксинора орального путем накожного нанесения разрешающей дозы препарата. Для этого через 12 дней у всех животных были выстрижены участки тела размером 3x3 см и на эти участки в течение недели проводили 7 эпикутанных аппликаций (по 0,5 мл препарата). Через 24 часа после последней аппликации проводили учет реакции кожи и брали кровь для оценки иммунологических тестов. Через 24 часа после учета эпикутанных аппликаций были

поставлены тесты на аллерген in vitro: реакция специфической агломерации лейкоцитов (PCAJI) и реакция специфического лизиса лейкоцитов (PCJIJI).

С целью характеристики общего состояния животных были взяты пробы крови для проведения гематологических и биохимических исследований. Общее состояние животных оценивали общепринятыми методами (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982; И.П. Кондрахин с соавт., 2004). Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «АВХ Micros 60», биохимические исследования - на анализаторе «Hitachi-902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению биохимических методов исследований крови животных» (2005). Фракции белка определяли электрофорезом в агарозном геле, концентрацию общего белка и липидов наборами фирмы «Витал» (Санкт-Петербург).

Фармакокинетику диоксинора орального в крови изучали после однократного введения препарата цыплятам-бройлерам (п=18) в дозе 0,05 мл/кг массы тела по концентрации действующих веществ через 1, 3, 6, 9, 12 и 24 часа после его введения. Два цыпленка были контрольными и им препарат не вводили.

Определение сроков выведения остаточных количеств норфлоксацина и ди-оксидина из организма цыплят после курсового применения антибактериального препарата диоксинор оральный проводили на 18 цыплятах-бройлерах массой 750850 г. Препарат вводили в дозе 0,05 мл/кг в течение 5-ти суток (п=16). Два цыпленка, которых убили в конце опыта, были контрольными и им препарат не вводили. Через 1, 3, 5 и 7 суток после окончания применения препарата, убивали по 4 цыпленка и определяли содержание норфлоксацина и диоксидина в крови, печени, почках и бедренной мышце. Определение диоксидина проводили спектрофо-тометрическим методом с использованием калибровочных кривых. Определение содержания норфлоксацина проводили методом ВЭЖХ с использованием калибровочных кривых. Длина УФ - волны детектирования для норфлоксацина составила 277 нм. Предел количественного определения диоксидина составил 0,1 мкг/мл (кровь) и 0,3 мкг/г (печень, почки и мышцы). Значения пределов количественного определения норфлоксацина в экстрактах составил 0,025 мкг/мл (кровь) и 0,035 мкг/г (печень, почки и мышцы).

Изучение лечебной эффективности препарата проводили в условиях птицеводческих хозяйств ОАО «Куриное царство» бройлерный цех (БЦ) «Рамонский» Воронежской области (суточные цыплята, п=60000) и ООО «Рудничное» Липецкой области (цыплята 19-21-дневного возраста, п=148000).

Диагноз на заболевание устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования птицы, лабораторных исследований, патологоанато-мического вскрытия, с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

Цыплятам опытных групп применяли диоксинор оральный из расчёта 0,5 мл на 1 литр воды. Суточным цыплятам лечебный раствор применяли в течение пяти дней, а 19-21-дневным - в течение трёх дней. При групповом способе лечения птица получала только воду, содержащую диоксинор оральный. Лечебный раствор готовили ежедневно в объеме, рассчитанном на потребление в течение суток. Цыплятам контрольной группы применяли энроксил 10% в соответствии с инст-

рукцией по применению. За птицей вели ежедневное клиническое наблюдение, при этом учитывали общее состояние, падёж, скорость роста, сроки выздоровления.

Экономическую эффективность применения препарата определяли согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1997).

Статистическая обработка результатов проведена с пользованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», «Statistica 5,0» на PC «Pentium III». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стъюдента (Г.Ф. Лакин, 1990).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ЗЛ. Обоснование состава препарата в опытах in vitro

Для выявления оптимального соотношения диоксидина и норфлоксацина в препарате антимикробную активность различных их комбинаций сравнивали с активностью исходных действующих веществ. Как следует из данных, представленных на рисунке 1, минимальная бактериостатическая концентрация диоксидина в отношении Е. coli 57/853 составила 12,5 мкг/мл, а норфлоксацина - 3,12 мкг/мл. Наиболее выраженным антимикробным действием из трех изученных композиций (в масс.% норфлоксацина к диоксидину: 9:1; 9,5:0,5 и 8,5:1,5) обладала первая композиция, минимальная бактериостатическая концентрация которой в отношений эшерихий снизилась в 66 раз по сравнению с таковой у диоксидина, а по сравнению с норфлоксацином - в 16 раз. У композиций 2 и 3 МБсК снизилась соответственно в 32 раза и 8 раз.

Таким образом, совместное применение норфлоксацина и диоксидина в различных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатическую концентрацию препарата в отношении изученной культуры, что свидетельствует о синергидном действии составляющих компонентов. Наибольший эффект синергизма проявился в композиции 1 (К1).

В связи с этим в дальнейшей работе из изученных композиций выбрали

композицию 1, которая была названа - диоксинор оральный.

Изучение антимикробной активности на культуре эшерихий, как музейных, так и полевых штаммах показало, что минимальная бактериостатическая концентрация препарата составила 0,19-0,78 мкг/мл. Минимальная бактерицидная кон-

■ E.coli 57/853

Рис. 1. Антимикробная активность диоксидина, норфлоксацина и различных композиций

центрация препарата превышала бактериостатическую концентрацию в 2 раза. 3.2. Токсические свойства диоксинора орального 3.2.1. Острая токсичность диоксинора орального

В результате изучения острой токсичности препарата диоксинор оральный на лабораторных животных и птице было установлено, что препарат в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76 относится к IV классу опасности - вещества малоопасные (табл. 1).

Таблица 1

Параметры острой токсичности диоксинора орального при однократном внутри-

желудочном введении препарата лабораторным животным и птице

Вид животных Параметры токсичности (мг/кг)

МВД ЬБ16 иэ50 1ЛЭ84 ЬБюо

Белые мыши 23000,0 24345,5 26324,9 (25600-27100) 28416,0 29433,6 ±362,8

Белые крысы 26000,0 28123,7 31429,2 (30200-32700) 34808,1 36479,2 ±630,9

Цыплята 27000,0 28383,4 31138,7 (30000-32300) 33776,5 35124,8 ±573,4

При патоморфологическом исследовании по окончании эксперимента не выявлено нарушений в структурной организации внутренних органов белых крыс и цыплят.

3.2.2. Подострая токсичность диоксинора орального 3.2.2.1. Опыты на белых крысах

Проведенными исследованиями установлено, что многократное (21 день) введение диоксинора орального крысам в дозах 0,6, 1,5 и 3,0 мл/кг массы тела не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных. У крыс опытных групп, как в период применения диоксинора орального, так и через неделю после восстановительного периода клинические показатели оставались в пределах нормы. Гибели животных в опыте не установлено. За период наблюдения у животных опытных групп не выявлено нарушений функций пищеварения и мочеотделения. Крысы опытных групп оставались подвижными, рефлексы были сохранены.

Подопытным животным, которым вводили диоксинор оральный в дозах 0,6 и 1,5 мл/кг, не отличались от крыс контрольной группы по приросту массы тела, относительной массе внутренних органов, гематологическим и биохимическим показателям крови.

У крыс, которым препарат вводили в дозе 3,0 мл/кг массы тела, на протяжении всего опыта по сравнению с контролем отмечали снижение прироста массы тела, увеличение относительной массы печени на 34,5%, почек - на 25,0%, селезенки—на 11,4%.

Через 21 день у подопытных крыс, которым вводили диоксинор оральный в дозе 3,0 мл/кг, отмечали достоверное увеличение количества палочкоядерных и сегментоядерных лейкоцитов на 27,3 и 25,8%, моноцитов - на 28,1%, тенденцию уменьшения количества лимфоцитов на 8,7%. Возрастало содержание в сыворотке крови мочевины на 10,3%, креатинина - на 15,9%, активности АлАТ и АсАТ -на 31,8 и 16,9 % соответственно. Также отмечали увеличение уровня (5- и у- глобулинов на 27,9 и 23,2%, при умеренном снижении содержания в сыворотке крови крыс альбуминов на 19,7%. Однако средние значения этих показателей у крыс опытной группы не выходили за верхние границы нормы и через 10 дней после отмены препарата они восстанавливались до уровня показателей контрольных животных, то есть, все изменения имели обратимый характер.

С учетом полученных результатов при изучении подострой токсичности диоксинора орального и Ы^о, полученной при определении острой токсичности, рассчитали коэффициент кумуляции, который был больше единицы и составил 2,05, что свидетельствует об отсутствии выраженных кумулятивных свойств диоксинора орального.

3.2.2.2. Опыты на цыплятах

Проведенными исследованиями установлено, что введение диоксинора орального в течение 21 дня в дозах 0,6, 1,5 и 3,0 мл/кг массы тела не вызывает существенных изменений клинического состояния птицы. Как в период применения препарата, так и в течение одной недели после окончания применения диоксинора орального клинические показатели цыплят оставались в пределах нормы, а также не было гибели птицы. Подопытные цыплята оставались подвижными и активными, препарат не вызывал у них нарушения аппетита, динамика роста массы тела опытных цыплят не отличалась от контрольной птицы.

При исследовании крови цыплят, которым вводили диоксинор оральный в изученных дозах, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови по сравнению с показателями контрольной группы.

В крови цыплят, которым применяли диоксинор оральный в дозах 0,6 и 1,5 мл/кг массы тела, не отмечено достоверных изменений в биохимическом составе крови по сравнению с показателями птицы контрольной группы. Однако при увеличении дозы диоксинора орального (3,0 мл/кг) выявлена тенденция к более напряженному функционированию печени. Возрастала активность ферментов АсАТ и АлАТ - на 28,0% и 37,7 % соответственно, щелочной фосфатазы - на 13,8%, но средние значения этих показателей у цыплят опытной группы не выходили за рамки верхних границ нормы для птицы.

3.23. Изучение субхронической токсичности на птице

Диоксинор оральный в дозах 0,05 мл/кг (терапевтическая доза) и 0,5 мл/кг (в 10 раз превышающая терапевтическую), не оказывал существенного влияния на клинический статус, скорость роста, поведение и аппетит цыплят в течение 15

дней опыта, на протяжении которого птица была активна. При этом не было отмечено случаев гибели цыплят.

При многократном применении диоксинора орального в дозе 0,05 и 0,5 мл/кг массы тела морфологические и биохимические показатели крови также существенно не отличались от таковых у цыплят контрольной группы.

3.2.4. Эмбриотоксическое и тератогенное действие диоксинора орального

Результаты изучения эмбриотоксического действия диоксинора орального в дозе 3,0 мл/кг массы тела показали, что препарат не оказывал существенного влияния на плодовитость крыс опытных и контрольной групп. Крысята, рожденные от самок опытных групп, по всем показателям не отличались от крысят контрольных самок. Проведенные морфологические исследования показали отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытных групп.

3.2.5. Раздражающее действие диоксинора орального

При однократной аппликации диоксинора орального на кожные покровы кроликам при плотности нанесения от 0,020 до 0,12 мл/см2, он не вызывал повреждения кожи в виде эритемы или ее отека.

Клиническое состояние организма кроликов после нанесения на конъюнктиву глаз препарата оставалось в пределах нормы, т.е. не установлено изменения температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений.

При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век глаз кроликов установлено, что диоксинор оральный вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 1 час после закапывания, которое исчезало к 3-му часу.

Таким образом, диоксинор оральный не обладает выраженным раздражающим действием при наружном применении.

3.2.6. Аллергенные свойства диоксинора орального

Первичная оценка аллергенных свойств диоксинора орального показала, что через 15 минут после внутрикожного введения препарата опытным животным, он не вызывал видимых изменений со стороны ушных раковин. Через 12 суток, при нанесении на выстриженные участки разрешающей дозы препарата, видимая реакция (гиперемия, зуд, отек) отсутствовала. Таким образом, диоксинор оральный не оказывал раздражающего действия и не вызывал при многократных аппликациях контактного дерматита (покраснение, зуд, отек, шелушение кожи отсутствовали, вновь отрастающая шерсть была гладкой и блестящей).

Результаты изучения реакции специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ) и специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) у морских свинок, сенсибилизированных диоксинором оральным, представлены в таблице 2.

Исследование сенсибилизирующего действия диоксинора орального не выявило выраженной реакции на него иммунной системы подопытных животных.

Таблица 2

Влияние диоксинора орального на РСАЛ и РСЛЛ у морских свинок_

Показатель агломерации АО% : АК% Показатель РСЛЛ (%)

Диоксинор оральный Контроль Диоксинор оральный Контроль

1,48±0,16 1,38±0,14 5,15±1,21 3,35±1,31

Диоксинор оральный не вызывал контактного дерматита после многократных накожных аппликаций, реакции специфического лизиса лейкоцитов и специфической агломерации были отрицательными. Полученные данные позволяют сделать вывод об отсутствии аллергенного действия у диоксинора орального.

3.2.7. Влияние диоксинора орального на качество мясопродуктов

Проведенными исследованиями не было установлено существенных различий между качеством проб мяса и бульона цыплят контрольной и опытных групп. Пробы мяса имели хороший, свойственный продукту цвет и вид на разрезе, ароматный запах, приятный вкус, нежную консистенцию и достаточную сочность. Бульоны были прозрачные, слегка золотистого цвета с капельками жира, приятные на вкус и достаточно ароматные. Общая органолептическая оценка проб мяса и бульона - хорошая.

3.3. Изучение фармакокинетики препарата

При изучении фармакокинетики препарата диоксинор оральный было установлено, что диоксидин и норфлоксацин быстро всасываются из желудочно-кишечного тракта и попадают в кровь (рис. 2). Максимальная концентрация в крови диоксидина наблюдается через 1 час, а норфлоксацина - через 3 часа.

-«-Содержание диоксидина -я-Содержание норфлоксацина

Рис. 2. Содержание норфлоксацина и диоксидина в крови цыплят после применения диоксинора орального

Терапевтическая концентрация активно действующих веществ диоксинора орального в крови сохраняется до 24 часов, превышая минимальную бактериоста-тическую концентрацию норфлоксацина в 4,6 раза и диоксидина - 3,5 раза.

При изучении фармакокинетики диоксинора орального при постоянном поступлении его в течение 5 дней в организм цыплят установлено, что действующие вещества норфлоксацин и диоксидин обнаруживаются в крови на уровне 2,8-3,9 мкг/мл и 0,65-0,83 мкг/мл соответственно на протяжении всего срока исследования. Таким образом, данное содержание действующих веществ в крови птицы позволит сохранить его в терапевтических концентрациях в производственных условиях.

3.4. Определение остаточных количеств диоксинора орального в органах,

тканях и биологических жидкостях

При определении сроков выведения остаточных количеств препарата диок-синор оральный установлено, что входящие в состав препарата норфлоксацин и диоксидин не аккумулируются в органах и тканях и достаточно быстро выводятся из организма птицы.

Наибольшее количество диоксидина обнаружено через сутки после последнего применения препарата в почках (5,74±0,26 мкг/г), печени (4,33±0,26 мкг/г) и крови (2,80±0,13 мкг/мл), в меньшей степени в мышцах (0,37±0,03 мкг/г). В дальнейшем после курсового введения препарата содержание диоксидина начинает снижаться и к 3 суткам он регистрируется в печени на уровне - 0,20±0,03 мкг/г, почках - 0,23±0,03 мкг/г, крови - 0,07±0,04 мкг/мл. В мышцах остаточные количества диоксидина в этот срок выявляются в следовых количествах. На 5 сутки после последнего введения препарата диоксидин отсутствует в крови и во всех органах и тканях цыплят.

Норфлоксацин интенсивно выводится из организма цыплят также в первые трое суток. На третьи сутки норфлоксацин выявляется в крови (0,38±0,03 мкг/мл), в печени - 0,68±0,03 мкг/г, в почках - 0,89±0,06 мкг/г, в мышцах - в следовых количествах, ниже предела детектирования. На 5 сутки норфлоксацин в следовых количествах определяется в печени и почках, а в крови и мышцах не обнаруживается. Через 7 дней после последнего введения диоксинора орального норфлоксацин не регистрировали во всех объектах исследования.

На основании полученных данных, убой птицы на мясо разрешается не ранее, чем через 11 суток после последнего применения препарата.

3.5. Лечебная эффективность диоксинора орального при колибактернозе

цыплят- бройлеров

Изучение лечебной эффективности препарата проводили в условиях птицеводческих хозяйств ОАО «Куриное царство» бройлерный цех (БЦ) «Рамонский» Воронежской области (суточные цыплята) и ООО «Рудничное» Липецкой области (19-21 дн. цыплята).

Цыплятам опытных групп для лечения применяли диоксинор оральный исходя из расчета 0,5 мл на 1,0 л воды. Суточным цыплятам лечебный раствор при-меняводили в течение пяти дней, а 19-21-дневным - в течение трёх дней. Цыплятам контрольных групп применяли энроксил 10% в соответствии с инструкцией по применению.

При анализе результатов (табл. 3), полученных в БЦ «Рамонскии», установлено, что за период опыта в контрольной группе пало 1200 голов (4 %), в опытной

-390 голов (1,3%).

Сохранность птицы в опытной группе составила 98,7%, что на 2,7/о выше, чем в контрольной группе, где применяли энроксил 10 %. Также при применении диоксинора орального с лечебной целью отмечали увеличение среднесуточного

прироста цыплят на 0,3 г, что на 1,7 % выше, чем в контроле. г Таблица 3

_Терапевтическая эффективность диоксинора орального

БЦ «Рамонский» ОАО

Показатель «Куриное царство» «Рудничное»

Энроксил 10% Диоксинор оральный Энроксил 10% Диоксинор оральный

Количество птицы 30000 30000 73000 75000

Сохранность, цыплят % 28800 96,0 29610 98,7 71175 97,5 73650 98,2

Пало, цыплят % 1200 4,0 390 1,3 1825 2,5 1350 1,8

Среднесуточный прирост, г. % к контролю 18 100 18,3 101,7 57 100 59,7 104,7

ООО

Применение диоксинора орального в ООО «Рудничное» с лечебной целью обеспечило более высокую сохранность птицы опытной группы (98,2 %), что превысило на 0,7 % показатели контрольной группы. Кроме того, было отмечено повышение среднесуточного прироста на 2,7 г или 4,7 % по отношению к контрольной птице. В течение опыта в контрольной группе пало 1825 цыплят (2,5/о), в опытной - 1350 (1,8 %).

3.6. Экономическая эффективность применения диоксинора орального при лечении цыплят больных колибактернозом

Экономический эффект от применения диоксинора орального в ООО «Рудничное» составил 12,64 рубля на 1 рубль затрат, в БЦ «Рамонский» ОАО «Куриное царство» -10,9 рублей на рубль затрат.

4. ВЫВОДЫ

1. Диоксинор оральный, содержащий в качестве действующих^ веществ норфлоксацин и диоксидин, обладает выраженным антимикробным действием в отношении возбудителя колибактериоза. Минимальная бактериостатическая кон-

центрация препарата в отношении как музейных, так и полевых штаммов Е. соН составляет 0,19-0,78 мкг/мл, а минимальная бактерицидная концентрация - 0,391,56 мкг/мл.

2. Совместное применение норфлоксацина и диоксидина проявляет взаимо-усиливающее (синергидное) действие. Минимальная бактериостатическая концентрация препарата диоксинор оральный в отношении эшерихий снизилась в 66 раз по сравнению с таковой у диоксидина, а по сравнению с норфлоксацином - в 16 раз.

3. По степени воздействия на организм диоксинор оральный относится к веществам малоопасным, 4 класс опасности (ГОСТ 12.1.007-76). диоксинора орального при однократном внутрижелудочном введении для белых мышей составляет 26324,9 мг/кг, для белых крыс - 31429,2 мг/кг, для цыплят - 31138,7 мг/кг.

4. Пероральное введение диоксинора орального в течение 21 дня белым крысам и цыплятам в дозах 0,6 и 1,5 (1/50 и 1/20 от ЛД50) мл/кг не вызывает функциональных изменений в организме животных и птицы. Изменения гематологических и биохимических показателей крови крыс (увеличение палочкоядер-ных и сегментоядерных лейкоцитов на 27,3 и 25,8%, моноцитов - на 28,1%, уровня мочевины - на 10,3%, креатинина - на 15,9%, активности ферментов АсАТ и АлАТ - 31,8 и 16,9%, количества (3 и у- глобулинов - на 27,9 и 23,2%, уменьшение количества лимфоцитов - на 8,7%, альбуминов — на 19,7%) и цыплят (возрастание активности АсАТ и АлАТ - на 28,0% и 37,7 % соответственно, ЩФ - на 13,8%), получавших препарат в дозе 3,0 мл/кг (1/10) от ЛДзо были не достоверны и носили обратимый характер.

5. Диоксинор оральный не оказывает кумулятивного, эмбриотоксического, тератогенного действия, не обладает раздражающими и аллергенными свойствами.

6. Фармакокинетика диоксинора орального после однократного перорально-го введения препарата цыплятам-бройлерам в дозе 0,05 мл/кг массы тела характеризуется высоким значением максимальной концентрации действующих веществ 4,77±0,27 мкг/мл (норфлоксацин) и 1,36 мкг/мл (диоксидин), которые достигаются через 3 и 1 час соответственно и терапевтическими концентрациями, которые сохраняются в крови цыплят в течение 18-24 часов.

7. Применение диоксинора орального не вызывает изменение качества мясопродуктов. Использование продуктов убоя птицы разрешается не ранее, чем через 11 дней после окончания применения препарата.

8. Терапевтическая эффективность препарата диоксинор оральный в дозе 0,05 мл/кг массы тела или 50,0 мл на 100 л воды в ООО «Рудничное» составила 98,2 %, в ОАО «Куриное царство» - 98,7%.

9. Экономический эффект от применения диоксинора орального в ООО «Рудничное» составил 12,64 рубля на 1 рубль затрат, в ОАО «Куриное царство» -10,9 рубля на рубль затрат.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения колибактериоза у птицы диоксинор оральный применять в дозе 50 мл на 100 литров воды, в соответствии с инструкцией по применению.

2. Основные научные положения работы и ее практические результаты рекомендуется использовать в производственных условиях ветеринарными специалистами, а также в учебном процессе студентами, аспирантами и научными работниками ветеринарного профиля.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи, включенные в перечень научных изданий ВАК для опубликования результатов исследований

1. Мигает B.C. Субхроническая токсичность и лечебная эффективность диоксинора орального при применении птице / B.C. Мигаеш, Н.М.Фёдорова, С.Р. Мелешкина. // Вестник Воронежского ГАУ. - 2011. - Вып. 3. - С. 68-71.

2. Александров Д.Е. Комплексные антибактериальные препараты в промышленном птицеводстве / Д.Е. Александров, B.C. Мигаеш // Ветеринария. -2011. - №10. - С.13-15.

3. Долгополов В.Н. Роль персистентной микрофлоры в патогенезе эндогенных инфекций птиц / В.Н. Долгополов, Д.Е. Александров, B.C. Мигаеш, С.Р. Мелешкина // Вестник Воронежского ГАУ. - 2012. - Вып. 2. - С.187-189.

4. Мигаеш B.C. Лечебная эффективность диоксинора (оральный раствор) / B.C. Мигаеш, С.Р. Мелешкина // Птицеводство. - 2012. - №2. - С.41-42.

Статьи, опубликованные в журналах, материалах и сборниках конференций

5. Мигаеш B.C. Лечебная эффективность диоксинора орального при эше-рихиозе цыплят-бройлеров / B.C. Мигаеш // Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях: Матер, междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ГНУ ВНИВИПФиТ. - Воронеж: изд-во «Истоки», 2010. - С.153-154.

6. Мигаеш B.C. Субхроническая токсичность диоксинора орального в опыте на цыплятах / B.C. Мигаеш // Основные проблемы и перспективы развития ветеринарной медицины в обеспечении животноводства прикаспийского региона Российской федерации: В сб. науч. трудов междунар.науч-практ. конф. - Махачкала, 2010. - С.34-35.

7. Долгополов В.Н. Сравнительная эффективность антибактериальных обработок цыплят бройлеров / В.Н. Долгополов, Д.Е. Александров, B.C. Мигаеш и др. // Матер.УН Международного ветеринарного конгресса по птицеводству - М. изд-во «МЭЙЛЕР», 2010. - С.166-169.

8. Мелешкина С.Р. Роль микроклимата в этиологии бактериальных инфекций цыплят бройлеров / С.Р. Мелешкина, B.C. Мигаеш, В.Н. Долгополов, Д.Е. Александров // Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчёл: Матер, междунар. науч.-практ. конф. -М., 2011. - С.280-281.

9. Долгополов В.Н. Бактериологический мониторинг инкубатория / В.Н. Долгополов, Д.Е. Александров, B.C. Мигаеш // Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчёл: Матер, междунар. науч.-практ. конф. - М., 2011. - С.273.

10. Долгополов В.Н. Бактериологический мониторинг цыплят бройлеров / В.Н. Долгополов, Д.Е. Александров, B.C. Мигаеш // Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчёл: Матер, междунар. науч.-практ. конф. - М., 2011. - С. 270-271.

11. Мигаеш B.C. Эффективность антибактериальных препаратов при коли-бактериозе цыплят бройлеров / B.C. Мигаеш, В.Н. Долгополов, Д.Е. Александров // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер, третьего съезда фармакологов и токсикологов России. - СПб., 2011. - С. 330-332.

12. Долгополов В.Н. Латентное носительство колибактериоза среди цыплят бройлеров / В.Н. Долгополов, Д.Е. Александров, B.C. Мигаеш // XVII Международная конференция «Инновационные разработки и их освоение в промышленном птицеводстве». - Сергиев Посад, 2012. - С. 531-533.

13. Мигаеш B.C. Фармакокинетика антибактериального препарата диокси-нор оральный раствор и сроки его выведения из организма цыплят /B.C. Мигаеш, A.B. Топольницкая, Н.М. Фёдорова // Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер, четвёртого съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. - Воронеж: Изд-во «Истоки», 2013. - С. 419421.

Подписано в печать 19.11.2013. Формат 60 х 84 1/16 . Бумага офисная. Усл. печ. л. 1,2 Тираж 100 экз. Заказ №2979

Отпечатано в типографии Воронежский ЦНТИ - филиал ФГБУ «РЭА» Минэнерго России 394036, г. Воронеж, пр. Революции, 30

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Мигаеш, Владимир Семёнович, Воронеж

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ГНУ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ПАТОЛОГИИ, ФАРМАКОЛОГИИ

И ТЕРАПИИ

МИГАЕШ ВЛАДИМИР СЕМЁНОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИОКСИНОРА ОРАЛЬНОГО И ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ПТИЦЫ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

На правах рукописи

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор биологических наук Востроилова Г.А.

Воронеж - 2013

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ..........................................................................................................................................................5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................................................9

1.1. Распространение и эпиозотология колибактериоза птиц................................9

1.2. Этиологические факторы и патогенез колибактериоза птиц........................13

1.3. Профилактика и меры борьбы с колибактериозом птиц....................................15

1.4. Резистентность патогенной микрофлоры к антибактериальным препаратам ....................................................................................................................................................................18

1.5. Использование антибактериальных препаратов в птицеводстве................21

1.6. Заключение по обзору литературы........................................................................................36

2. МАТЕРИАЛ, ОБЪЁМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ......................................38

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ..........................................45

3.1. Изучение антимикробной активности диоксинора орального и оптимального соотношения компонентов в препарате......................................................45

3.1.1. Обоснование состава препарата в опытах in vitro................................................45

3.1.2. Изучение антимикробной активности препарата..................................................46

3.2. Токсические свойства диоксинора орального..............................................................47

3.2.1. Острая токсичность......................................................................................................................47

3.2.2. Подострая токсичность................................................................................................................52

3.2.3. Изучение субхронической токсичности на птице..............................................60

3.2.4. Эмбриотоксическое и тератогенное действие диоксинора орального....................................................................................................................................................................................62

3.2.5. Раздражающее действие диоксинора орального..................................................64

3.2.5.1. Действие препарата на кожные покровы................................................................64

3.2.5.2. Действие препарата на слизистые оболочки....................................................65

3.2.6. Аллергенные свойства диоксинора орального............. ..............................66

3.2.7. Влияние диоксинора орального на качество мясопродуктов..................68

3.3. Изучение фармакокинетики диоксинора орального..............................................69

3.4. Изучение сроков выведения остаточных количеств диоксинора

орального из организма птицы............................................................................................................72

3.5.Терапевтическая эффективность диоксинора орального в производственных условиях......................................................................................................................................73

3.6. Экономическая эффективность применения диоксинора орального при лечении колибактериоза цыплят............................................................................................76

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ................................................................................................77

5. ВЫВОДЫ..........................................................................................................................................................85

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ......................................................................................87

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ......................................................88

ПРИЛОЖЕНИЕ................................................................................................................................................11

6

АлАТ АсАТ у- ГТТ ЛД МПК

мик

МПА МПБ

мтд

МБсК

МБцК

НДТК

РСАЛ

РСЛЛ

ТР

ТУ

ФХ

ЩФ

ТХУ

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

- аланинаминотрансфераза

- аспартатаминотрансфераза

- у-глутамилтрансфераза

- летальная доза

- минимальная подавляющая концентрация

- минимальная ингибирующая концентрация

- мясопептонный агар

- мясопептонный бульон

- минимальная токсическая доза

- минимальная бактериостатическая концентрация

- минимальная бактерицидная концентрация

- непрямая реакция дегрануляции тучных клеток

- реакция специфической агломерации лейкоцитов

- реакция специфического лизиса лейкоцитов

- технический регламент

- технические условия

- фторхинолоны

- щелочная фосфатаза

- трихлоруксусная кислота

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Птицеводство России является наиболее устойчивой, динамично развивающейся отраслью агропромышленного комплекса (С.А. Брайт с соавт., 2010; Л.А. Венгеренко, 2011; Н.В. Кожемяка с соавт., 2011). Несмотря на это в птицеводческих хозяйствах существуют определенные проблемы, которые снижают экономическую эффективность производства (Л.Ю. Лесниченко с соавт., 2011). В первую очередь, к ним следует отнести болезни птиц бактериальной этиологии, которые в структуре инфекционных заболеваний занимают 70% (A.A. Щербаков с соавт., 2003; Л. Бори-сенкова, 2004; И. Сегал с соавт., 2006; И.И. Уваров, 2009; Ю.Н. Шурахова с соавт., 2010).

В работах отечественных (H.H. Ванина, 2006; Б. Бессарабов с соавт., 2006; С.А. Брайт с соавт., 2010; И.К. Авдосьва с соавт., 2011; М. Добрина, 2011 и др.) и зарубежных авторов (D.M. Fallacara et al, 2001; J.K.P. Kwaga et al, 2004) показано, что колибактериоз занимает лидирующее положение в общей структуре болезней бактериальной этиологии у птицы и составляет 42-77%.

Меры борьбы с бактериальными инфекциями включают в себя комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий, среди которых немаловажную роль играет использование антибактериальных лекарственных средств (С. Лысенко, 2008; E.H. Елисеева, 2010; A.B. Лашин, 2010 и др.).

Бессистемное применение антибиотиков, не выдерживание доз и схем терапии, циклические методы лечения птицы одним и тем же препаратом, ведут к возникновению затяжных форм болезни и формированию устойчивых к антимикробным средствам популяций возбудителей, особенно в семействе энтеробактерий (H.H. Малик с соавт., 2001; Т.В. Вершняк, А.Я. Ca-

муйленко, 2003; H. Ла1уткин, 2004; A. Борисенкова, 2004; JI. Шчука, 2005; Л. Хорошевская с соавт., 2010).

Развитие резистентности у микроорганизмов является основным фактором, ограничивающим эффективность химиотерапии. В связи с этим актуальным становится поиск новых путей предупреждения развития и борьбы с антибиотикорезистентностью, одним из которых является создание комплексных антимикробных препаратов, в состав которых входят отличающиеся по структуре и фармакологическому действию вещества, проявляющие различную степень антимикробной активности. Использование научно обоснованных комбинаций антибактериальных веществ является важным направлением современной химиотерапии бактериальных инфекций, позволяющим не только преодолеть проблему антибиотикорезистентности, но и значительно расширить спектр антимикробного действия препаратов (C.B. Шабунин, 1999; П.С. Лобова, 2008; Г.А. Востроилова с соавт., 2011; Л.Ю. Сашнина, 2013 и др.).

Исходя из данных отечественной и зарубежной литературы о широкой распространенности колибактериоза в птицеводстве и больших экономических потерях, связанных с ним, был разработан удобный в применении и безопасный комплексный антибактериальный препарат на основе норфлок-сацина и диоксидина, обладающий широким спектром действия. Использование его в птицеводстве позволит повысить эффективность лечения колибактериоза, а также в ассоциации с ним других инфекционных заболеваний птицы.

Цель и задачи исследований. Разработать новый комплексный антибактериальный препарат на основе норфлоксацина и диоксидина для лечения колибактериоза птицы, определить его фармако-токсикологические свойства, терапевтическую и экономическую эффективность.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

> изучить специфическую активность норфлоксацина и диоксиди-на, экспериментально обосновать их оптимальное соотношение для разработки нового комплексного антибактериального препарата диоксинор оральный;

> изучить фармако-токсикологические свойства препарата диоксинор оральный;

^ изучить фармакокинетику и сроки выведения остаточных количеств препарата диоксинор оральный из организма цыплят;

^ изучить терапевтическую и экономическую эффективность препарата при колибактериозе птицы;

> разработать показания к применению диоксинора орального.

Научная новизна. Теоретически и экспериментально обоснован состав

и рецептура нового комплексного антибактериального препарата диоксинор оральный на основе норфлоксацина и диоксидина. Установлено взаимоуси-ливающее действие компонентов препарата на эшерихии. Изучены его фармако-токсикологические свойства, доказывающие возможность безопасного использования лекарственного средства, и эффективность применения диоксинора орального при терапии колибактериоза птицы.

Практическая значимость работы. Разработан и внедрен в ветеринарную практику новый комплексный препарат диоксинор оральный для лечения колибактериоза птицы, дана оценка его терапевтической и экономической эффективности. Определены сроки выведения остаточных количеств препарата из организма птицы.

В Российской Федерации Россельхознадзором проведена регистрация препарата диоксинор оральный (регистрационный номер ПВР-2-3.0/02563) и утверждена инструкция по его применению.

Публикации. Основные научные результаты, включённые в диссертацию, опубликованы в 13 печатных работах, в том числе 4 статьи в журналах рекомендованных ВАК РФ («Вестник Воронежского ГАУ», «Ветеринария», «Птицеводство»).

Апробация работы. Основные положения и результаты исследования представлены и одобрены на: годовых отчетах по НИР ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН (Воронеж, 2011-2013); на Международных и Всероссийских научно-практических конференциях: Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях (Воронеж, 2010); Современные проблемы, перспективы и инновационные тенденции развития аграрной науки (Махачкала,

2010); Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчёл (Москва,

2011); III и IV съездах фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011; Москва, 2013); VII Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2010); XVII международной конференции «Инновационные разработки и их освоение в промышленном птицеводстве» (Сергиев Посад, 2012).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 116 страницах, содержит 28 таблиц, 9 рисунков, включает в себя введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы и практические предложения, приложение. Список литературы содержит 257 источников, из них 59 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

- обоснование состава нового комплексного антибактериального препарата на основе норфлоксацина и диоксидина;

- фармако-токсикологические свойства препарата диоксинор оральный в опытах на лабораторных животных и цыплятах;

- фармакокинетика диоксинора орального и сроки выведения остаточных количеств препарата из организма цыплят после его применения;

- терапевтическая и экономическая эффективность диоксинора орального при колибактериозе цыплят.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Распространение и эпизоотология колибактериоза птиц

Птицеводство наиболее устойчивая, динамично развивающаяся отрасль агропромышленного комплекса (В.И. Фисинин, 2009; Г.А. Бобылёва, 2010). Несмотря на это в птицеводческих хозяйствах существуют определённые проблемы, которые снижают экономическую эффективность данной отрасли. В первую очередь, к ним следует отнести болезни птиц бактериальной этиологии, которые в структуре инфекционных заболеваний занимают 70% (B.C. Гусев и др., 2003; A.A. Щербаков и др., 2006; И.Д. Игнатова и др., 2009; И.К. Рождественский и др., 2009).

По данным многих авторов колибактериоз занимает лидирующее положение в общей структуре болезней бактериальной природы у птиц, и составляет 42-77% (D.M. Fallacara et al., 2001; J.K.P. Kwaga et al., 2004; Н.Л. Андреева и др., 2004; А. Борисенкова, 2004; H.H. Ванина, 2006; И. Сегал и др., 2006; И.И. Уваров, 2009; Маркое Бентус, 2010; Ю.Н Шурахо-ва и др., 2010; Л.А Венгеренко., 2011; И.К. Авдосьва и др., 2011; М.Добрина, 2011; В.И. Фисинин, 2011; Н.В. Кожемяка, 2011).

По данным международных организаций здравоохранения, сотни тысяч людей в мире каждый год страдают из-за пищевых отравлений. Быстрые способы приготовления еды из полуфабрикатов требуют всё большего внимания к мерам профилактики и гигиены из-за риска потребления бактериального обсеменения продуктов птицеводства (А.О. Carter et al., 1987; H.A. Шкиль и др., 2006; Виргиниюс Слаусгальвис, 2010).

Особенностью инфекционной патологии в современных условиях является смешанный характер инфекции, в развитии которой участвуют представители разных токсономических групп, семейств микроорганизмов (бактерии, вирусы, простейшие, грибы) (Л.И.Ефанова и др., 2007; А. Киселёв и др., 2010; И.Ю. Лесничено, 2011).

В данной ситуации болезнь протекает в форме энзоотии, как смешанная инфекция. Каждая из составляющих микст - культур обладает рядом при-

знаков, сочетание которых может определять патогенный потенциал возбудителей в целом (Р.Н. Коровин и др., 1989; С. Федотов и др., 2010). Это резко снижает резистентность птицы в сравнении с моноинфекцией и оказывает антагонистическое действие на иммунобиологическую реактивность организма. При этом трудно поставить диагноз и своевременно осуществить про-тивоэпизоотические мероприятия (С. Лыско, 2004; С.А. Брайт и др., 2010).

М. Черных и др. в статьях опубликованых в 2008 - 2009г.г. дифференцировал причины выбраковки и падежа птицы на птицефабриках Алтайского края. В результате у 65,98% голов микрофлора выделялась в форме ассоциации, а у 34,02% - в виде монокультур.

При проведении мониторинга респираторного микоплазмоза в стадах молодняка и кур разных возрастов, С. Лыско (2004) в своих исследованиях выявил наиболее часто встречающиеся при этом заболевании ассоциации микроорганизмов. Это были: Escherichia coli, Diplococcus, Proteus, Citrobacter diversus. Как моноинфекция колибактериоз протекал в 2% случаев, в остальных - культуры микроорганизмов выделяли в ассоциациях и чаще всего с кишечной палочкой (72% случаев).

В работах зарубежных авторов (W.B. Groos, 1961; R.F. Gordon et al., 1985; A.B. el-Tayeb et al., 2001) показано, что колибактериоз может протекать в ассоциации с микоплазмозом, пуллорозом-тифом, пастереллёзом, инфекционным бронхитом, псевдочумой, инфекционным ларинготрахеитом, НБ, реже со стафилококкозом, оспой, кокцидиозом, аспергиллёзом и аскаридозом.

С. И. Федотов и др. (2010) из фолликул яичников кур в возрасте 150250 дней выделяли стафилококки (63,6%) в различных ассоциациях: с кишечной палочкой, стрептококком, протеем. Особенно часто (42% случаев) кишечная палочка выделялась со стафилококками (15,9% случаев). Эти данные подтверждаются в статьях С.Ионова и др. (2005, 2009), в которых показано, что в микробном пейзаже больных птиц, наряду с микоплазмами, присутствуют бактерии родов Escherichia (50%), Salmonella (21%), Staphylococcus (18%) и др.

Примером комбинированной инфекции является ринотрахеит птицы, осложнённый кишечной палочкой. В этой комбинации E.coli поражает подкожные полости головы птицы и среднее ухо (Е. Лозуткина, 2007; С. Каспарьянц и др., 2009; Борт Стоквис, 2010).

В последние годы часто диагностируется ассоциированное течение ко-либактериоза с эймериозом. (Р. Давлатов, 2008).

Колибактериоз птиц (Colibacteriosis avium) - остро и хронически про-текакющее инфекционное, энзоотическое заболевание с явлениями токсикоза.

В естественных условиях колибактериоз чаще встречается у цыплят, индюшат, гусят, утят и в меньшей степени у взрослых птиц этих видов. Случаи вспышек колибактериоза наблюдались также среди голубей, лебедей, страусов, пингвинов, аистов, постушек, куликов, сов, попугаев, воробьиных (П.М. Свинцов, 1951; Б.Ф. Бессарабов, 1970). В условиях птицеводческих хозяйств наиболее восприимчив к этому заболеванию молодняк кур 1-120 -дневного возраста (А.Б. Байдевлятов и др., 1992). У взрослой птицы болезнь имеет спорадический характер и часто является вторичной инфекцией при респираторном микоплазмозе, ИБ, ИЛТ (Ф.М. Орлов и др., 1971).

Возбудитель эшерихиоза характеризуется сложной антигенной структурой и множественными факторами вирулентности, такими как эндотоксин, веротоксины, термолабильный и термостабильный энтеротоксины, адгезивные антигены и гемолизины, которые обуславливают особенности течения и разнообразие клинических проявлений болезни. Наиболее часто колибактериоз птиц вызывают эшерихии серогрупп: Ol, 02, 08, Ol5, 018, 026, 055, 078, Olli, Ol 13, 0128, 0141 (Л.И. Ефанова и др., 2004; М.К. Пирожков и др., 2011). Эшерихии выделяют бактериоцины - колицины, вызывающие гибель (без лизиса) филогенетически родственных бактерий. Установлено, что колициногения более ха�