Внутривидовой полиморфизм грибов секции Sporotrichiella рода Fusarium и характер взаимоотношений их с серыми хлебами

Гаврилова, Ольга Павловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Внутривидовой полиморфизм грибов секции Sporotrichiella рода Fusarium и характер взаимоотношений их с серыми хлебами
ВАК РФ 03.02.12, Микология

Автореферат диссертации по теме "Внутривидовой полиморфизм грибов секции Sporotrichiella рода Fusarium и характер взаимоотношений их с серыми хлебами"

На правах рукописи

Гаврилова Ольга Павловна

ВНУТРИВИДОВОЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГРИБОВ СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA РОДА FUSARIUM И ХАРАКТЕР ВЗАИМООТНОШЕНИЙ ИХ С СЕРЫМИ ХЛЕБАМИ

Шифр и наименование специальности: 03.02.12 - Микология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 1 ОКТ ?ою

Санкт-Петербург 2010

004610802

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЗР Россельхозакадемии)

Научный руководитель: кандидат биологических наук Гагкаева Татьяна Юрьевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Михайлова Людмила Александровна

кандидат биологических наук Струнникова Ольга Кондратьевна

Ведущая организация:

Ботанический институт им. В.Л.Комарова РАН (ВИН РАН)

Защита состоится «28» октября 2010 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 006.015.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений по адресу: 196608, Санкт-Петербург, Пушкин, шоссе Подбельского, дом 3, факс (812)470-51-10, e-mail: vizrspb@mail333.com. web-сайт: vizrspb.narod.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений.

Автореферат разослан «17» сентября 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Г.А.Наседкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Виды F. sporotrichioides Sherb., F. роае (Peck) Wollenw., F. langsethiae Torp et Nirenberg относятся к секции Sporotrichiella Wollenw. (in Lewis, 1913) рода Fusarium Link (1809) и продуцируют опасные трихотеценовые микотоксины, вызывающие тяжелые заболевания людей и животных при их поступлении в организм с продуктами и кормами (Саркисов, 1954; Квашнина, 1972; Ту-тельян, Кравченко, 1985; Marasas et al., 1984; D'Mello et al., 1999). Многолетние исследования выявили виды F. sporotrichioides и F. poae в зерне серых хлебов повсеместно на территории России (Ячевский, 1917; Тупеневич, 1953; Левитин и др., 1994, 1998; Кононенко и др., 1999; Иващенко и др., 2000; Иващенко, Шипилова, 2004; Малиновская и др., 2004; Гагкаева и др., 2009). Вид F. langsethiae впервые выявлен на территории России в 2003 году в зерне ячменя, выращенного в Ленинградской области (Gagkaeva et al., 2006).

Виды грибов секции Sporotrichiella характеризуются значительным биоэкологическим, физиологическим и морфологическим разнообразием. Корректная идентификация этих видов Fusarium, основанная на вариабельных микроморфологических признаках и характере роста колоний, часто затруднена, поскольку культуры грибов нестабильны и таксономические признаки не всегда четко выражены (Райлло, 1950; Билай, 1977; Booth, 1971; Gerlach, Nirenberg, 1982; Torp, Nirenberg, 2004). Молекулярно-генетическая идентификация позволяет уточнить границы варьирования признаков, свойственных виду и охарактеризовать внутривидовой полиморфизм (Knutsen et al., 2004; Schmidt et al., 2004; Yli-Mattila et al, 2004).

Существуют различные методы борьбы с возбудителями фузариоза зерна, однако наиболее эффективным путем получения качественного зерна, свободного от микотоксинов, является использование устойчивых сортов. Исследования устойчивости зерновых культур к фузарио-зу активно ведутся во всем мире, однако большинство работ связано с пшеницей и, в меньшей степени, с ячменем (Колесников и др., 2001; Аблова, 2008; Клыков, 2010; Snjders, 1990; Chen et al, 1991; Mesterhazy, 1995, 2002; Gagkaeva et al, 2002; Steffenson, 2003). До недавнего времени овес, широко используемый в кормовой и пищевой промышленности, не оценивали по устойчивости к фузариозу зерна, и этот признак не учитывали в процессе селекции сортов (Tekauz et al, 2004). Поэтому оценка устойчивости к фузариозу возделываемых сортов овса и ячменя, а также поиск источников устойчивости, не поражаемых грибами и не накапливающих микотоксины в зерне, особенно актуальны.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - выявление внутривидового разнообразия трихотеценпродуцирующих грибов секции Sporotrichiella и характеристика особенностей взаимоотношений

овса и ячменя с грибами рода Fusarium.

В задачи исследований входило:

1. Провести мониторинг распространения основных видов грибов рода Fusarium на овсе и ячмене, выращенных на территории Северо-Запада России.

2. Выявить морфолого-культуральные особенности, патогенные и токсигенные свойства, а также ДНК-полиморфизм видов F. sporotrichioides, F. рoae и F. langsethiae.

3. Оценить устойчивость зерновых культур к фузариозу по следующим параметрам: зараженность зерна, количество микотоксинов и ДНК трихотеценпродуцирующих грибов.

4. Выявить источники устойчивости овса на основе параметров многокомпонентной устойчивости к фузариозу.

Научная новизна. Выявлены изменения видового состава грибов рода Fusarium на зерне овса и ячменя, возделываемых на территории Северо-Запада России. Установлены ареалы видов F. langsethiae и F. graminearum, ранее не встречавшихся на этой территории.

Впервые в России создана коллекция штаммов секции Sporotrichiella различного происхождения (428 штаммов), большинство из которых охарактеризованы по морфолого-культуральному и моле-кулярно-генетическому полиморфизму, патогенности и способности к токсинообразованию.

Для группы штаммов Fusarium sp.l, происходящих из Сибири и Дальнего Востока России, установлен таксономический статус, как нового для науки филогенетического вида, близкого к виду F. sporotrichioides.

Впервые использована совокупность параметров (зараженность зерна, количество микотоксинов и ДНК трихотеценпродуцирующих грибов) для оценки многокомпонентной устойчивости овса и ячменя сортов российской селекции к фузариозу. Впервые охарактеризована устойчивость к фузариозу образцов овса из коллекции ВИР им. Н.И. Вавилова и выявлены источники устойчивости к этому заболеванию.

Апробация работы. Результаты исследований докладывались на ежегодных методических комиссиях ГНУ ВИЗР Россельхозакадемии по аттестации аспирантов (Санкт-Петербург-Пушкин, 2007-2010); семинаре по грибам рода Fusarium (Вагенинген, Нидерланды, 2006); XV конгрессе европейских микологов (Санкт-Петербург, 2007); II съезде микологов России, (Москва, 2008); курсах для аспирантов "Fusarium, genes and toxins" (Ос, Норвегия, 2008); VIII международной конференции по овсу (Миннеаполис, США, 2008); X Международном совещании "Fusarium Genomics Workshop", (Альгеро, Италия, 2008); II Всероссийской конференции "Современные проблемы иммунитета растений к вредным организмам" (Санкт-Петербург, 2008); IV Международном конгрессе "Зерно и хлеб России" (Санкт-Петербург, 2008); конферен-

ции "Современные методы использования генетических ресурсов в селекции ячменя и овса" (Санкт-Петербург, 2009); семинаре "Nordforsk mould and mycotoxin" (Упсала, Швеция, 2009); Междисциплинарном микологическом форуме, (Москва, 2009, 2010); семинаре "Fusarium disease resistance, toxins and feed quality", (Аархус, Дания, 2009); научной конференции аспирантов и молодых ученых "Генетика и селекция" (Санкт-Петербург, 2010); IX микологической конференции "Биология грибов" (Эдинбург, Великобритания, 2010).

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, проект № 08-04-13668-офй_ц (2008-2009 гг.); Nordforsk, проект № 040291 "New emerging mycotoxins and toxigenic fungi in Northern Europe" (20052009 гг.); фонда ООО "Технологии. Внедрение. Наука", проект № 12650 "Разработка способа оценки генетического материала овса на устойчивость к фузариозу зерна по контролю ДНК токсигенных грибов рода Fusarium в зерне" (2010-2011 гг.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 24 работы, из них 8 в изданиях, рекомендуемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов, списка литературы, приложений, содержит 24 таблицы, 26 рисунков. Список библиографических источников включает 324 наименования, в том числе 248 на иностранных языках.

Место проведения работы. Научно-исследовательская работа проводилась в лаборатории микологии и фитопатологии ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений (ВИЗР) в период 2006-2010 гг. Некоторые разделы экспериментальных исследований были выполнены в лаборатории микотоксикологии сектора методов физико-химических исследований ВНИИВСГЭ (г. Москва) и лаборатории физиологии растений и молекулярной биологии Университета г. Турку (Финляндия).

Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории микотоксикологии ВНИИВСГЭ (г. Москва) - к.м.н. Буркину A.A. и д.б.н. Кононенко Г.П. за помощь в определении микотоксинов и предоставление штаммов грибов для изучения; заведующему отделом генетических ресурсов овса, ячменя и ржи ВИР им. Н.И. Вавилова (г. Санкт-Петербург) - д.б.н., проф. Лоскутову И.Г. за предоставленные коллекционные образцы овса; сотруднику лаборатории физиологии растений и молекулярной биологии Университета г. Турку (Финляндия) - доктору Т. Yli-Mattila за помощь в проведении молекулярно-генетических исследований; сотрудникам Ленинградского филиала ФГУ "Госсорткомиссии" за предоставленные образцы зерновых культур.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение

Обоснована актуальность темы диссертационной работы, сформулирована цель и основные задачи исследований.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Приведены аналитически обобщенные данные отечественной и зарубежной литературы по изучаемым вопросам. Представлены данные по распространенности видов секции Sporotrichiella рода Fusarium на зерновых культурах и сведения о состоянии исследований по таксономии трихотеценпродуцирующих видов этой секции. Обобщена существующая информация по проблеме устойчивости овса и ячменя к фузариозу.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектами исследований являлись штаммы грибов трихотеценпродуцирующих видов секции Sporotrichiella рода Fusarium, полевые образцы зерна овса и ячменя из различных областей России, образцы овса и ячменя, выращенные на Волосовском госсортоучастке (ГСУ) в Ленинградской области и образцы овса из коллекции ВИР им. Н.И.Вавилова.

Использованные в исследованиях штаммы хранятся в коллекции лаборатории микологии и фитопатологии ВИЗР при +4°С на питательной среде и при -80°С в 15% глицерине.

Мониторинг зараженности зерна грибами рода Fusarium проведен с использованием 122 образцов овса и 100 ячменя урожая 2007-2008 гг. (в 2007 г. всего проанализировано 76, в 2008 г. - 146 образцов). Образцы представлены 17 сортами овса и 26 сортами ячменя, выращенных на территории Калининградской, Ленинградской, Новгородской, Псковской, Вологодской и Кировской областей (в дальнейшем обозначенных как территория Северо-Запада России).

Анализ зараженности зерна проводили общепринятыми фитопато-логическими методами (Методы экспериментальной микологии, 1982). Зараженность зерна среднего образца оценивали с помощью следующих показателей, выраженных в процентах: общая зараженность зерна грибами рода Fusarium, зараженность зерна определенным видом гриба и доля вида в комплексе грибов рода Fusarium. Видовую идентификацию проводили с использованием определителей грибов рода Fusarium (Booth, 1971; Gerlach, Nirenberg, 1982).

Загрязненность зерна Т-2 токсином и дезоксиниваленолом (ДОН) определяли иммуноферментным методом (ИФА) по ГОСТ Р 524712005 с применением тест-систем, пределы определения которых составляли соответственно 4 и 20 мкг/кг. Предельно-допустимые концентрации (ПДК) трихотеценовых микотоксинов в России составляют 100 мкг/кг Т-2 токсина и 700-1000 мкг/кг ДОН, в зависимости от вида

используемой продукции (СанПиН 2.3.2.1078-01.).

Культуральные признаки моноспоровых штаммов описывали через 7 суток роста в темноте при 24°С на агаризованных питательных средах. Морфологические особенности штаммов характеризовали при выращивании на среде Ниренберг (SNA) в течение 10-14 суток (Booth, 1971; Samson et al., 2000). Уточнение видовой принадлежности штаммов подтверждали с помощью видоспецифичных праймеров (Konstantinova, Yli-Mattila, 2004; Wilson et al., 2004; Yli-Mattila et al., 2004). ДНК экстрагировали из культур грибов, выращенных на карто-фельно-сахарозной агаризованной среде (КСА) с использованием смеси хлороформа с октанолом (24:1) (Bulat et al., 1998, Paavanen-Huhtala et aL, 1999). Также для выделения ДНК применяли набор реагентов GenEluteTM Plant Genomic DNA Kit компании Sigma. Полимеразно-цепную реакцию (ПЦР) и визуализацию полученных результатов проводили согласно условиям, рекомендованными авторами используемых праймеров.

Способность штаммов грибов продуцировать Т-2 токсин и диацеток-сисцирпенол (ДАС) устанавливали методом ИФА с порогом чувствительности 4 нг/мл (Буркин и др., 2007). Штаммы выращивали в пеницил-линовых флаконах на 1 мл КСА при температуре 23°С в течение 7 суток.

Патогенные свойства штаммов оценивали в лабораторных условиях с помощью метода инокуляции суспензией конидий (5*106спор/мкл) отрезков листьев овса сорта Боррус по адаптированной нами методике (Левитин и др., 1981; Imathiu et al., 2008).

Молекулярно-генетический полиморфизм 20 штаммов видов секции Sporotrichiella оценивали методом секвенирования участка гена (678 пн) фактора элонгации EF-la (O'Donnell et al., 1998). Сравнительный анализ полученных нуклеотидных последовательностей с последовательностями базы данных ГенБанка проводили с помощью программы NCBI BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). Построение филогенетических деревьев проводили с использованием метода ближайшего связывания ("neighbor-joining" - NJ) (Saitou, Nei, 1987).

Устойчивость к фузариозу 21 сорта овса и 31 сорта ячменя оценивали по зараженности зерна и количеству микотоксинов на естественном инфекционном фоне. Исследования проводили в 2007-2009 гг. в условиях Волосовского ГСУ. Поскольку признак устойчивости к фузариозу количественный и зависит от условий окружающей среды, анализируемые сорта характеризовали по устойчивости относительно реакции стандартов - сортов овса Боррус и ячменя Инари.

На искусственном инфекционном фоне охарактеризованы по признаку устойчивости 318 образцов овса пленчатой и голозерной форм видов Avena abyssinica (2% от анализированных образцов), А. byzantina (5%), A. sativa (88%), A. strigosa (5%) различного географического происхождения из коллекции ВИР им. Н.И. Вавилова. Оценку проводили в 2007-2009 гг. на территории Тосненской опытной станции в Ленинградской области. На экспериментальном участке по поверхно-

сти почвы распределяли инокулюм (150 г/м2) - зерновую смесь, зараженную четырьмя штаммами гриба F. sporotrichioides. После ручного обмолота полученные образцы овса оценивали по параметрам устойчивости: зараженность зерна; количество ДНК трихотеценпродуци-рующих видов грибов рода Fusarium; сумма трихотеценовых микоток-синов. Зараженность зерна пленчатых образцов овса оценивали в цветковой пленке и после ее механического удаления.

Каждый образец в количестве 10 г размалывали, и полученную муку просеивали для отделения цветковых пленок. Анализ микотоксинов в муке (1 г) проводили методом ИФА (Кононенко, Буркин, 2002). ДНК экстрагировали из 200 мг муки, используя СТАВ-метод (European Commission, 2005). Измерение суммарного содержания ДНК трихоте-ценпродуцирующих видов грибов рода Fusarium проводили методом количественной ПЦР (Halstensen et al., 2006).

Обработку опытных данных проводили с использованием стандартных статистических программ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. МОНИТОРИНГ ФУЗАРИОЗА ЗЕРНА ОВСА И ЯЧМЕНЯ НА ТЕРРИТОРИИ СЕВЕРО-ЗАПАДА РОССИИ, 2007-2008 ГГ.

3.1. Анализ зараженности грибами рода Fusarium и содержания микотоксинов в зерне

Микологический анализ выявил присутствие грибов рода Fusarium в 2007 году в 91%, а в 2008 году - 88% анализированных образцов (табл. 1).

Таблица 1. Зараженность грибами рода Fusarium (%) образцов зерна овса

и ячменя, вьгращенных на территории Северо-Запада России, 2007-2008 гг.)

Области К-во образцов, зараженных грибами Зараженность образцов*

2007 2008 2007 2008

2007 2008 Ср Мд1 Ср Мд Пределы

Вологодская 100 89 15,1 14,6 5,1 4,3 2,8-34,7 1,0-15,7

Калининградская 100 95 22,9 20,0 10,6 6,4 11,4-45,7 1,0-30,0

Кировская 92 80 12,3 11,1 8,7 7Д 2,0-36,7 1,0-37,1

Ленинградская 82 78 9,2 4,1 14,3 3,6 2,0-57,1 1,0-68,6

Новгородская 100 100 11,9 8,2 22,0 21,4 2,0-33,3 1,0-37,1

Псковская 86 82 11,6 6,1 10,4 7,1 4,1-42,9 2,9-40,6

"Средняя (Ср), медиана (Мд), пределы варьирования.

Наибольшая зараженность зерна в 2007 году выявлена в Калининградской области (22,9% зараженность зерна в среднем), а в 2008 году - в Новгородской области (22,0% в среднем). Однако в каждой из исследованных областей выявлены образць: с различным уровнем зараженности.

Микотоксикологический анализ в 2007 году вывил Т-2 токсин в 50% исследованных образцов. Высокие уровни контаминации зерна Т-2 токсином, соответствующие и превышающие ПДК, обнаружены в 9% образцов из Вологодской, Кировской, Псковской и Калининградской областей (табл. 2). В 2008 году 46% образцов были загрязнены Т-2 токсином - количество образцов, содержавших этот микотоксин выше ПДК, составило 5%.

Микотоксин ДОН в 2007 г. выявили в 66% образцов зерна и в 2008 г. в 47% образцов. Количества ДОН, превышающие ПДК, отмечены в Вологодской, Кировской и Новгородской областях - 5 и 6% от всех анализированных образцов в 2007 г. и 2008 г., соответственно.

Таблица 2. Содержание микотоксинов в образцах зерна овса и ячменя, выращенных на территории Северо-Запада России, 2007-2008 гг.

К-во образцов, содержащих микотоксин, % и пределы накопления микотоксина, мкг/кг

Области Т-2 токсин ДОН

2007 2008 2007 2008

% мкг/кг % мкг/кг % мкг/кг % мкг/кг

Вологодская 73 54 114 67 54 114 82 384 3155 20 714 2390

Калининградская 100 25 4158 12 5- -13 67 32 456 41 61- -731

Кировская 77 94 228 56 54 182 85 244 1620 87 50- -397

Ленинградская 18 4 464 15 4- -72 14 20- -644 69 36- -141

Новгородская 20 12 419 62 44- 175 100 31- -998 47 684 2505

Псковская 86 44 141 35 5- -46 93 20- -397 82 39- -290

Результаты двухлетнего мониторинга показывают, что 87-90% образцов зерна, выращенного на территории Северо-Запада России, содержали грибы рода Fusarium. Трихотеценовые микотоксины, требующие обязательной токсикологической экспертизы, выявлены в 7276% анализируемых образцов.

3.2. Видовой состав

В комплексе грибов, выделенных из зерна овса, выявили 11 видов рода Fusarium: F. avenaceum (Fr.) Sacc., F. anguioides Sherb., F. dimerum Penz., F. equiseti (Corda) Sacc., F. graminearum Schwabe, F. heterosporum Nees et T. Nees, F. incarnatum (Desm.) Sacc., F. langsethiae Torp et Nirenberg, F. poae (Peck) Wollenw., F. sporotrichioides Sherb., F. tricinctum (Corda) Sacc. В зерне ячменя выявили 16 видов, кроме вышеперечисленных, также обнаружены F. acuminatum Ellis et Everh., F. cerealis (Cooke) Sacc., F. culmorum (W.G. Sm.) Sacc., F. oxysporum Schltdl, F. solani (Mart.) Sacc., F. subglutinans (Wollenw. et Reinking) P.E. Nelson, Toussoun et Marasas.

Показано, что виды секции Sporotrichiella являлись доминирующими в комплексе грибов зерна серых хлебов, выращенных на Северо-Западе России. Вид F. роае. занимал основную долю в комплексе грибов. Максимальная зараженность F. роае отмечена на овсе из Ленинградской области и достигала 51% в 2007 году и 56%) в 2008 году. Следующий по встречаемости вид F. sporotrichioides обнаруживали в зерне значительно реже. Максимальная зараженность F. sporotrichioides -12,9% выявлена в первый год исследования в зерне ячменя из Вологодской области, а во второй год - 15,7% в зерне овса из Калининградской области. Для этих двух видов характерно образование Т-2 токсина, но штаммы F. sporotrichioides продуцируют данный микотоксин в значительных количествах по сравнению со штаммами F. роае (Thrane, 2004; Kononenko, Burkin, 2006). По нашим данным, при обнаружении более 5% зерен, зараженных грибом F. sporotrichioides, есть основания предполагать наличие Т-2 токсина в образце, в то время как высокая зараженность зерна F. роае не приводит к накоплению значительных уровней Т-2 токсина. Штаммы F. роае способны образовывать другие высокотоксичные трихотеценовые микотоксины - нива-ленол и ДАС (Буркин и др., 2006, 2007; Sugiura, 1993; Thrane, 2004; Jestoi et al., 2008). Поскольку вид F. роае встречается на зерновых культурах с высокой частотой, то вполне вероятно, что в образцах зерна данные трихотеценовые метаболиты присутствуют в значительных количествах.

Гриб F. langsethiae, недавно выявленный на территории России (Gagkaeva et al., 2006), в настоящее время является постоянным компонентом комплекса патогенов зерновых культур в Вологодской, Калининградской, Ленинградской, Новгородской и Псковской областях. Максимальная зараженность зерна F. langsethiae достигала 5% в овсе из Вологодской области в 2007 г. Этот вид чаще выделяется из зерна овса, чем ячменя. Несмотря на относительно невысокую встречаемость данного вида, необходим ежегодный мониторинг гриба F. langsethiae, являющегося одним из основных продуцентов Т-2 токсина (Тогр, Nirenberg, 2004; Thrane et al, 2004).

Вид F. graminearum до 2003 года не был обнаружен на обследованной территории (Гагкаева и др, 2009). В 2007 году этот патоген впервые выделен из образцов зерна, полученных из Вологодской, Кировской и Новгородской областей, в 2008 году - из Калининградской и Псковской областей. Все образцы овса, зараженные грибом F. graminearum (3-16%) из Вологодской и Новгородской областей содержали в зерне ДОН, в количествах, превышающих ПДК (1100-2505 мкг/кг). Появление гриба F. graminearum в составе комплекса патогенов зерновых культур, выращиваемых на территории Северо-Запада России, вероятно, связано с изменением климата, способствующим его адаптации в данном регионе.

Глава 4. БИОРАЗНООБРАЗИЕ ТРИХОТЕЦЕНПРОДУЦИРУЮЩИХ ГРИБОВ СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA

4.1. Коллекция грибов рода Fusarium Создана и поддерживается коллекция штаммов грибов F. sporotrichioides, F. роае, F. langsethiae (табл. 3). Кроме того, в коллекции хранятся изоляты Fusarium sp.l, обладающие характерными для секции Sporotrichiella таксономическими признаками, но имеющие отличительные особенности от известных видов этой секции.

Таблица 3. Представленность в коллекции штаммов трихотеценпродуцируюгцих __видов секции Sporotrichiella _

Происхожде! гие

Виды K-bo Растение-хозяин Место сбора

штаммов зерновые другие Европейская Азиатская Другие

культуры часть РФ часть РФ страны

F. sporotrichioides 180 155 25 139 40 1

F. роае 179 177 1 122 55 2

F. langsethiae 54 54 0 33 1 20

Fusarium sp.l 15 15 0 1 14 0

Большинство изолятов выделены из зерновых злаковых культур. Однако 14% штаммов F. sporotrichioides от их общего количества и 1 штамм F. роае выделены из растений других систематических групп. С азиатской территории России выделены 26% коллекционных штаммов, остальные имеют происхождение из европейской части России и других стран Европы (69% и 5%, соответственно). Морфологическая идентификация видовой принадлежности 32% штаммов была подтверждена с помощью видоспецифичных молекулярных праймеров. Проведено секвенирование участка гена фактора элонгации 1а (678 пн) двадцати штаммов видов секции Sporotrichiella. Полученные нуклео-тидные последовательности штаммов видов F. sporotrichioides (FJ768703), F. langsethiae (FJ768701) и Fusarium sp.l (FJ768702) размещены в базе данных ГенБанка (http://www.ncbi.nlm.nih.gov).

4.2. Оценка разнообразия трихотеценпродупируюнщх видов секции

Sporotrichiella

Анализ морфолого-культуральных признаков штаммов грибов, видовая принадлежность которых была подтверждена с помощью видоспецифичных молекулярных праймеров, позволил уточнить диапазон варьирования признаков, характеризующих каждый вид. Основные морфолого-культуральные характеристики видов F. sporotrichioides, F. роае, F. langsethiae и Fusarium sp.l приведены в таблице 4. Наибольшее

разнообразие изученных признаков выявлено у вида Р. зрого^1сЫо1йе$. Оптимум температуры роста для штаммов всех видов составлял 24°С, однако дальнейшее повышение температуры до 30°С значительно угнетало рост ¥. 1апдзеМае, в отличие от F. ярогоЬчсктйгв и Г. роае.

Таблица 4. Морфолого-культуральные признаки видов секции Sporotrichiella

Признаки

sporotrichioides

F. роае

langsethiae.

Fusarium sp.l

Обильность воздушного мицелия, высота >3 мм Пигмент реверса Скорость роста (мм/сутки), 24°С Максимальная Минимальная Наличие макроконидий Размер одноклеточных микроконидий

Неразвлетвленые и развлетвлен-ные коиидионосцы Конидионосцы длиной >100 мкм Ампуловидные монофиалиды Цилиндрические изогнутые монофиалиды

Полифиалидные или полибласти-ческие конидиогенные клетки Стабильность фальшивых головок Наличие хламидоспор_

+ +

7,6±0,1 7,7

7,5

7,83 х 6,64

+/-6,5±0,9 7,4

5,2 +/-

7,53 х 6,11 +

+/-

5,1±0,4 6,3 4,0

6,36 х 5,28

+ (два и более

локуса) +

+ (два

локуса) +

+/-

5,7±0,7 7,4 3,9

i,38 х 5,62

« + » наличие признака; «-» отсутствие признака; « + /-» в зависимости от штамма возможно наличие или отсутствие признака.

Установлены различия видов по способности продуцировать мико-токсины: штаммы F. sporotrichioides, F. langsethiae и Fusarium sp.l, в отличие от F. роае, образуют Т-2 токсин в высоких концентрациях на всех использованных питательных средах. В среднем, штаммы F. langsethiae образуют более высокие количества ДАС, по сравнению со штаммами других видов (табл. 5).

Таблица 5. Способность к образованию микотоксинов на КСА штаммами

K-bo K-bo микотоксинов, мкг/мл

Виды штам- Т-2 токсин ДАС

мов Средняя Медиана Пределы Средняя Медиана Пределы

F. sporotrichioides 73 18,6 12,7 0,2- 72,5 0,2 0,05 0-2,5

F. роае 71 0,02 0,01 0-0,3 0,4 0,1 0-3,3

F. langsethiae 41 42,2 26,3 0,2-316,2 1,7 0,8 0,01-7,9

Fusarium sp.l 13 16,5 11,7 4,0-53,5 0,02 0,01 0,1-0,5

В результате оценки взаимодействия листьев овса сорта Боррус и грибов рода Fusarium установлено, что основной тип реакции растений на заражение штаммами F. роае, F. langsethiae и Fusarium sp.l является некроз. Штаммы F. sporotrichioides вызывали обширный хлороз (в среднем 28%), в отличие от штаммов других видов (в среднем 710%). На основании реакции взаимодействия показано, что F. sporotrichioides является более патогенным видом, по сравнению с другими оцениваемыми видами.

Сравнение последовательностей нуклеотидов, полученных в результате секвенирования участка гена фактора элонгации 1а показало соответствие кластеризации штаммов с их видовой идентификацией (рис. 1). Топология дерева подтверждает обособленность группы

штаммов Fusarium sp.l, происходящих из Сибири и Дальнего Востока, в самостоятельную филогенетическую группу, достоверно отличающуюся от групп, образованных штаммами других анализируемых ви-

53424 53432

53429 53423 1ВТ9959

53425

53421 53428 53431

53426

53430

53427

53422 BBAS4160 - 53435

¡379971 (8Т9949 IBTS903 |ВТ4000ГЛ 8BM242S 5М34 I

1ВТЭЙ01 53420 53413

1ВТЭ922 1ВГ40009 53412 53418 53411

1ВТ40005 IBTS951 IBT99S6 53410 53417 53439 5343В 53437 S343S 53408 53419

F. роае

Fusarium sp. 1

F. sporotrichioides

F. langsethiae

дов.

Рис. 1. Филогенетическое дерево, полученное на основе сравнительного анализа нук-леотидных последовательностей участка гена фактора элонгации 1а видов рода Fusarium с использованием алгоритма NJ

F. kyushuense

Анализ комплекса морфолого-культуральных, биоэкологических и физиологических признаков этих штаммов дал основание для обособления их в самостоятельный филогенетический вид (Yli-Mattila et al, 2010 а,б). Выявлено наибольшее родство вида Fusarium sp.l с видом F. sporotrichioides, несмотря на то, что по морфологическим признакам он имеет большее сходство с видами F. роае и F. langsethiae. Выделенный в 1998 г. в Норвегии штамм IBT9959, до настоящего времени не имеющий четкой видовой принадлежности (Knutsen et al, 2004; Thrane et al, 2004; Torp, Nirenberg, 2004; Yli-Mattila et al, 2004) по всем изученным признакам соответствовал группе штаммов Fusarium sp.l.

Глава 5. ОЦЕНКА УСТОЙЧИВОСТИ СОРТОВ ОВСА И ЯЧМЕНЯ К ФУЗАРИОЗУ ЗЕРНА

5.1 Оценка сортов овса и ячменя на естественном инфекционном фоне Средняя зараженность зерна овса в годы исследований варьировала от 9 до 12%, зерна ячменя 7-14% (табл. 6). Микотоксикологический анализ показал, что из двух нормированных трихотеценовых фуза-риотоксинов, Т-2 токсин выявлен в зерне в низких концентрациях -максимальное количество составило 36 мкг/кг (ячмень сорта Северянин, 2008 г.). Поэтому сорта овса и ячменя оценивали по накоплению ДОН в зерне.

Сорта овса Аргамак, Астор, Боррус, Конкур, Привет оценивали в течение трех лет; Анастасия, Вятский голозерный, Лев, Памяти Бала-вина, Рысак, Стайер, Султан, Эспрессо, Яков - в течение двух лет; Борец, Гунтер, Каприоль, Пушкинский, Тифон, Эклипс, Эффектив -одного года.

Таблица 6. Зараженность грибами рода Fusarium и количество накапливаемых ми_котоксинов в зерне овса и ячменя на Волосовском ГСУ (2007-2009 гг.)_

Годы

К-во сортов

Зараженность зерна гриба_ми, %

_Ср_

Мд | Пределы

Количество ДОН в зерне, мкг/кг

Ср | Мд |Пр

еделы

ОВЕС

2007 12 10 9 0 20 40 30 20 4 89

2008 14 12 11 1 21 423 329 0 + 1250

2009 15 9 9 3 - 14 241 107 0 - 1120

ЯЧМЕНЬ

2007 17 7 6 1 19 77 54 0 ^ 301

2008 18 13 9 0 39 91 55 0 ^ 330

2009 17 14 11 3 37 187 0 0 4 1440

"Средняя (Ср), медиана (Мд), пределы варьирования.

В 2007 году самыми восприимчивыми к заражению грибами рода Fusarium являлись два сорта овса - Анастасия и Лев (19% и 20%, соответственно). В зерне овса сорта Анастасия также выявлено максимальное количество ДОН - 89 мкг/кг. Показано, что к группе относительно устойчивых по зараженности зерна и накоплению микотокси-нов можно отнести сорта овса Астор и Привет. Наибольшая устойчивость по обоим параметрам выявлена у единственного сорта голозерной формы овса сорта Вятский голозерный.

В 2008 году самыми восприимчивыми к заражению грибами являлись сорта Конкур и Эспрессо (21%), однако по другому параметру устойчивости - накопление микотоксинов в зерне, наиболее восприимчивыми были сорта овса Аргамак, Боррус, Памяти Балавина (в зерне этих сортов обнаружено превышение ПДК микотоксипа ДОН). Сорта Анастасия, Астор, Вятский голозерный в 2008 г. показали относительную устойчивость по обоим параметрам.

В 2009 году сорта овса Аргамак и Тифон, имеющие зараженность зерна 14%, содержали ДОН в количествах, выше ПДК. В тоже время настолько же зараженный сорт Стайер, в отличие от них микотокси-нов не накапливал. На основе двух оцениваемых параметров выделены относительно устойчивые сорта - Астор, Каприоль, Эклипс.

Оценку устойчивости к фузариозу сортов ячменя Инари, Кринич-ный, Ленинградский кормовой, Суздалец, выращенных в условиях Во-лосовского ГСУ, проводили в течение трех лет; сортов Анакин, Анна-бель, Арбалет, Багрец, Белес, Двина, Джейби Мальтазия, Джейби Флэйва, Калита, Ксанаду, Родник Прикамья, Северянин, Слободской, Эльф - двух лет; сортов Агат, Атаман, Бином, Гонар, Карат, Максим, Пересвет, Святич, СД Долли, Тандем, Фариба, Фермер - одного года.

В 2007 г. самым восприимчивым к заражению грибами и накоплению микотоксинов оказался сорт ячменя Бином, параметры оценки данного сорта имели максимальные уровни (ФЗ - 19%, количество ДОН - 301 мкг/кг). В 2008-2009 гг. максимальную зараженность - 39 и 37%, соответственно, имел другой сорт ячменя - Суздалец, при этом количество микотоксинов в зерне этих образцов было в пределах установленных норм, что характеризует этот сорт как устойчивый к накоплению микотоксинов. Сорта Анакин, Атаман, Гонар, Джейби Мальтазия, Пересвет, СД Долли, Фермер, Эльф являлись относительно восприимчивыми к заражению грибами рода Fusarium. Превышения ПДК по микотоксину ДОН в зерне ячменя выявлено только в 2009 г. в образцах сортов Атаман и Ленинградский кормовой.

За годы исследований относительно высокую устойчивость по зараженности зерна и накоплению микотоксинов стабильно показывал сорт ячменя Багрец. Также к группе относительно устойчивых к фузариозу можно отнести сорта Белее, Двина, Инари, Калита, Кринич-ный, Ксанаду, Родник Прикамья, Святич.

5.2 Оценка устойчивости к фузариозу образцов овса из коллекции ВИР на искусственном инфекционном фоне

Самая низкая зараженность зерна среди всех анализированных образцов отмечена у группы овсов голозерной формы, в среднем 1,9% в 2007 году, 3% в 2008 году и 8% в 2009 г. (табл. 7). Максимальная зараженность зерна голозерных овсов составила 20% (к-14227, сорт Бег 2, Белоруссия, 2009 г.). Содержание микотоксинов и ДНК трихотеценпро-дуцирующих грибов рода Fusarium в образцах овса голозерной формы было значительно меньше, по сравнению с образцами, имеющими цветковую пленку. Следует активно применять овсы голозерной формы, характеризующиеся уникальной устойчивостью к фузариозу, в производстве пищевой продукции на основе овса.

Показано, что пленчатые формы овса более восприимчивы к фузариозу по сравнению с голозерными формами, несмотря на отсутствие у последних механического барьера в виде цветковой пленки. Зараженность зерна образцов овса пленчатой формы в 2007 г. составила

17,3% (варьирование параметра от 0 до 100%), в 2008 г. - 8% (0-24%), в 2009 г. - 15,8% (0-60%). Показано значительное различие зараженности зерна образцов пленчатой формы в пленке и без нее (после удаления пленки зараженность зерна уменьшается в 1,6-2 раза). Цветковая пленка играет важную роль в защите зерновки от проникновения патогена и является фактором пассивной устойчивости.

Таблица 7. Зараисенность зерна, количество микотоксинов и содержание ДНК гргь бов рода Fusarium в зерне овса голозерных и пленчатых форм из коллекции ВИР

Формы овса Год К-во об- ФЗ" К-во микотоксинов, мкг/кг ДНК trFws

разцов Ср Пределы Ср Мд Пределы Ср Мд Пределы

Пленчатые 2007 2008 91 59 9,6 4 0-98 0-22 1351 874 576 423 102-14730 63 - 5286 0,78 0,77 0,53 0,58 0 - 3,4 0 - 3,7

2009 93 9,8 0-33 93 58 10 - 577 - - -

2007 14 1,9 0-6 524 418 124-1422 0,25 0,24 0 - 0,57

Голозерные 2008 33 3 0-9 757 384 72 - 3808 0,38 0,31 0,043+1,7

2009 28 8 0-20 62 56 14 - 164 - - -

"Средняя (Ср), медиана (Мд), пределы варьирования.

"Зараженность грибами рода Fusarium зерна овса, очищенного от цветковой пленки, %; ***ДНК трихотеценпродуцирующих видов грибов рода Fusarium, нг/ мкл общей ДНК.

Группы образцов, выделенных по высоте растений, различались по зараженности зерна и накоплению микотоксинов (табл. 8). Высота растений образцов овса варьировала в следующих пределах: 41,2-140,9 см в 2007 году, 43,9-151,6 см в 2008 году и 66,2-146,8 см в 2009 году.

Таблица 8. Количество накапливаемых микотоксинов и ДНК грибов в зерне образцов овса из коллекции ВИР в зависимости от высоты растения, 2007 г.

Высота растений, см К-во ФЗ** К-во микотоксинов, мкг/кг ДНК trFus***

образцов Ср Мд Пределы Ср Мд Пределы Ср Мд Пределы

< 100 53 10 6 0-98 1808 731 102 -14730 0,87 0,53 0 - 3,4

> 100 42 5 2 0-20 498 385 102-1578 0,45 0,40 0 - 1,7

"Средняя (Ср), медиана (Мд), пределы варьирования.

"Зараженность грибами рода Fusarium зерна овса, очищенного от цветковой пленки,%;

В целом, группа короткостебельных образцов (до 100 см) имела более зараженное грибами зерно и накапливала микотоксинов в более значительных количествах, по сравнению с группой образцов, имеющих более высокую соломину (различия средних достоверны при р<0.05). Значимых различий но содержанию ДНК грибов не выявлено, однако образцы, характеризующиеся максимальным количеством ДНК грибов, встречались в группе короткостебельных образцов.

Выявлено, что скороспелость образцов также влияет на зараженность зерна, количество накапливаемых микотоксинов и ДНК грибов (табл. 9). В целом, группа позднеспелых образцов овса характеризовалась относительно высокими показателями зараженности зерна, содержанием мико-токсинощ и ДНК грибов, по сравнению с группами раннеспелых и среднеспелых образцов (различия средних достоверны при р<0.05).

Таблица 9. Количество накапливаемых микотоксинов в зерне образцов овса _"'..из коллекции ВИР в зависимости от скороспелости, 2007 г._

Образцы (шт.) Ф3*,% К-во микотоксинов, I ДНК trFus** мкг/кг 1 нг/ мкл

средняя/медиана, (пределы варьирования)

Раннеспелые (48) Среднеспелые (34) Позднеспелые (13) 6/4 (0 - 52) 8/3 (0 ч- 98) 13/8 (0 ^ 56) 718/371 (102 -845/669 (139 4118/1416 (497 - 5400) 5580) 14730) 0,41/0,39 (0 - 1,1) 0,95/0,56 (0 - 3,4) 1,0/0,81 (0,24 н- 3,4)

*3аражешгосгъ грибами рода Fusarium зерна овса, очищенного от цветковой пленки,%;

**ДНК трихотеценпродуцирующих видов грибов рода Fusarium, нг/мкл общей ДНК.

Анализ зараженности зерна, накопления в нем микотоксинов и ДНК грибов выявил отсутствие взаимосвязи между этими параметрами для каждого анализированного образца (г=0,07-0,49), что указывает на многокомпонентный характер устойчивости овса к фузариозу - такой же, как ранее был выявлен у пшеницы (Snijders, 1990; Mesterhazy, 2002; Boutigni et al., 2008).

При распределении образцов овса на группы по зараженности зерна, показано, что выделенные группы различаются по количеству накапливаемых микотоксинов и ДНК трихотеценпродуцирующих грибов рода Fusarium (рис. 2). Группы образцов, имеющих среднюю и высокую зараженность зерна, накапливали микотоксинов и ДНК грибов больше, по сравнению с группой низко зараженных образцов. Однако и в этой группе выявлены образцы, накапливающие значительные количества микотоксинов и ДНК грибов. Полученные результаты демонстрируют необходимость использования нескольких параметров оценки для характеристики устойчивости анализируемых образцов.

Высокая многокомпонентная устойчивость к фузариозу выявлена у образцов пленчатой формы вида A. sativa: сорта Kuromi (к-11632) и староместных образцов (к-2513, к-7766, к-8479), имеющих происхождение из Амурской области России, Китая, Монголии и Японии. Относительную устойчивость по всем изученным параметрам показали следующие образцы овса пленчатой формы, относящиеся к видам А. strigosa, A. sativa и A. abyssinica: сорт Крестьянский (к-7219) и староместные образцы (к-1770, к-1773, к-5200, к-5244, к-11012) различного географического происхождения (Агинско-Бурятский округ России, Испания, Португалия, США, Эфиопия).

Сумма микотоксинов

ДНК грибов

0-6 7-40 41-100

зараженность зерна, %

белый - до 500 мкг/кг белый

серый - до 1000 мкг/кг серый

черный - свыше 1000 мкг/кг черный

0-6 7-40 41-100

зараженность зерна,%

до 0,25 нг/мкл от 0,25 до 0,5 нг/мкл свыше 0,5 нг/мкл

Рис. 2. Распределение образцов овса по накоплению микотоксинов и ДНК трихоте-ценпродуцирующих грибов в группах, выделенных по зараженности зерна, 2007 год

ВЫВОДЫ

1. Виды секции Sporotrichiella с высокой частотой встречались в комплексе грибов рода Fusarium, вызывающих фузариоз зерна на территории Северо-Запада России в 2007-2008 гг. Суммарная доля F. sporotrichioides, F. poae и F. langsethiae в комплексе грибов составляет 82-84% на овсе и 36-46% на ячмене.

2. Выявлены опасные токсинопродуцирующие виды на территории Северо-Запада России: ранее не встречавшийся на этой территории F. graminearum (максимальная зараженность зерна 16%, овес, Новгородская обл., 2008 г.) и ранее выявленный только на территории Ленинградской области F. langsethiae (максимальная зараженность зерна 5%, овес, Вологодская обл., 2007 г.). Изоляты вида F. langsethiae обнаружены в образцах зерна, полученных из Вологодской, Калининградской, Ленинградской, Новгородской, Псковской, Орловской, Тюменской областей и Краснодарского края.

3. Показан внутривидовой полиморфизм грибов секции Sporotrichiella, по каждому из изученных морфолого-культуральных, биоэкологических и физиологических признаков. Вид F. sporotrichioides характеризуется наибольшим разнообразием проанализированных признаков.

дованных признаков дает основание для выделения этой группы в самостоятельный филогенетический вид, имеющий ближайшее родство с видом F. sporotrichioides.

5. Выявлен многокомпонентный характер устойчивости к фузарио-зу овса и ячменя на основе анализа взаимосвязей между параметрами оценки: зараженность зерна, количество ДНК трихотеценпродуци-рующих грибов рода Fusarium и микотоксинов.

6. Показано влияние пассивной устойчивости овса на параметры многокомпонентной устойчивости к фузариозу. Цветковая пленка препятствует проникновению патогенов в зерновку пленчатых форм овса. Увеличение высоты растений и раннеспелость образца повышают устойчивость растений к заболеванию.

7. Голозерные формы овса, по сравнению с пленчатыми формами, характеризуются высокой многокомпонентной устойчивостью к фузариозу зерна. На искусственном инфекционном фоне 68% овсов голозерной формы из коллекции ВИР (староместные образцы, сорта и линии) показали высокую устойчивость по всем оцениваемым параметрам.

8. Относительно устойчивыми к заражению грибами и накоплению микотоксинов являются возделываемые на территории России сорта овса Вятский голозерный, Аргамак, Астор, Привет и сорта ячменя Багрец, Белее, Двина, Инари, Калита, Криничный, Ксанаду и Родник Прикамья.

9. Многокомпонентная устойчивость к фузариозу выявлена у образцов овса пленчатой формы различного географического происхождения из коллекции ВИР: к-2513, к-7766, к-8479, к-11632, к-1770, к-1773, к-5107, к-5200, к-5244, к-7219, которые могут являться источниками устойчивости к заболеванию. Устойчивые образцы относятся к видам A. sativa (5 образцов), A. strigosa (4 образца) и A. abyssinica (1 образец) и являются староместными овсами, кроме сортов Kuromi (к-11632) и Крестьянский (к-7219).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Гаврилова, О.П. Современное состояние таксономии грибов рода Fusarium секции Sporotrichiella / Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П., Левитин М.М. // Микология и фитопатология. - СПб. - 2008. - Т. 42. - Вып. 3.- С.201-214.

2. Гаврилова, О.П. Географическое распространение и внутривидовое состояние гриба Fusarium дгатгпеагит / Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П. // Иммунология, аллергология, инфектология. - М. - 2009. - № 1. - С.74-75.

3. Гаврилова, О.П. Фузариоз зерновых культур на Волосовском государственном сортоучастке Ленинградской области / Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю., Буркин А.А., Кононенко Г.П. // Вестник защиты растений. - СПб. -2009. - №3. - С.37-43.

4. Гаврилова, О.П. Зараженность грибами рода Fusarium и контаминация микотоксинами зерна овса и ячменя на севере Нечерноземья / Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю., Буркин А.А., Кононенко Г.П. // Сельскохозяйственная биология. - М. - 2009. - № 6. - С.89-93.

5. Гаврилова, О.П. Фузариоз зерновых культур / Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П. // Защита и карантин растений. - М. - 2009. - №12. - С.13-16.

6. Гаврилова, О.П. Фузариоз зерна на севере Нечерноземья и в Калининградской области в 2007-2008 гг. / Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю. // Защита и карантин растений. - М. - 2010. - №2. - С. 23-25.

7. Гаврилова, О.П. Fusarium langsethiae на территории России / Гаврилова О.П., Гагкаева Т. Ю. // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - М. - 2010. - № 1. - С.6.

8. Гаврилова, О.П. Диагностика токсигенных грибов рода Fusarium методом количественной ПЦР / Стахеев А.А., Рязанцев Д.Ю., Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю., Завриев С.К. // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - М. - 2010. - № 1. - С.209.

9. Gavrilova, О. Characterization of distribution, cultural characters and T-2 toxin production oi F. sporotrichioides, F. poae and F. langsethiae from Russia / Gagkaeva T., Gavrilova O., Levitin M., Kononenko G., Burkin A. // Book of Abstracts for European Fusarium Seminar 19-22 September. Wageningen (Netherlands). - 2006. - P.49.

10. Gavrilova, O. Distribution, cultural characters and toxin production of Fusarium poae, F. sporotrichioides and F. langsethiae isolates / Gagkaeva T., Gavrilova O., Kononenko G„ Burkin A., Yli-Mattila T. // Abstracts for XV Congresss of European Mycologists 16-21 September. St.-Petersburg. - 2007. -P.277-278.

11. Гаврилова, О.П. Опасное заболевание овса - фузариоз метелки и зерна / Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю. // Сельскохозяйственные вести. -СПб. - 2008. - № 2. - С.40-41.

12. Гаврилова, О.П. Изучение коллекции грибов рода Fusarium секции Sporotrichiella / Гаврилова О.П. // Тезисы докладов 2 съезда микологов

России. - М. - 2008. - С.108-109.

13. Gavrilova, О. Susceptibility of oat germplasm to Fusarium infection and mycot.oxin accumulation in grains / Gavrilova O., Gagkaeva Т., Burkin A., Kononenko G., Loskutov I. // Book of Abstracts for IOC 2008 Minneapolis (USA). Session V - Effective Pest, 2008.

14. Gavrilova, O. P. Current distribution of Fusarium fungi on small grain cereals in Russia / Gagkaeva T.Yu., Gavrilova O.P. // J. of Plant Pathology, V.90. Abstract of presentations for 10th International Fusarium Workshop and Fusarium Genomics Workshop. 30 August - 2 September, 2008. Alghero, Sardinia (Italy).- 2008. - P.47-48.

15. Гаврилова, О.П. Восприимчивость овса к фузариозной инфекции и накоплению микотоксинов в зерне / Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю., Буркин A.A., Кононенко Г.П., Лоскутов И.Г. // Материалы II Всероссийской конференции "Современные проблемы иммунитета растений к вредным организмам". 29 сентября - 2 октября 2008 г. - СПб. - 2008. - С.118-120.

16. Гаврилова, О.П. Фузариоз зерна овса, ячменя и пшеницы, выращенных на Рождественском ГСУ в Ленинградской области / Гаврилова О.П., Чмиль О. В., Гагкаева Т.Ю. // Сборник материалов Международного Конгресса "Зерно и хлеб России", 11-13 ноября 2008 г. - СПб. - 2008. - С.115-116.

17. Гаврилова, О.П. Оценка устойчивости образцов овса из коллекции ВИР к фузариозу / Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю., Буркин A.A., Кононенко Г.П., Лоскутов И.Г. // Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. - СПб. - 2009. - Т. 165. - С.173-177.

18. Гаврилова, О.П. Фузариоз колоса и зерна ячменя / Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П. // Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. -СПб. - 2009. - Т.165. - С.39-44.

19. Гаврилова, О.П. Оценка фузариоза зерна на территории северо-запада РФ в 2008 году / Гаврилова О.П., Гагкаева Т.Ю. // Материалы Всероссийской научно-производственной конференции "Современные иммунологические исследования, их роль в создании новых сортов и интенсификации растениеводства", 18 ноября 2009 г., ВНИИФ. - Большие Вязе-мы. - 2009. - С.152-155.

20. Гаврилова, О.П. Изменение состава комплекса патогенов рода Fusarium на зерновых культурах в условиях северо-запада РФ / Гаврилова О.П. // Сборник материалов (Тезисы) IV региональной молодежной экологической конференции "Биоразнообразие и биоиндикация в естественных и трансформированных экосистемах Северо-Западного региона" 26-27 ноября 2009 г. - СПб. - 2009. - С.38-40.

21. Гаврилова, О.П. Разработать технологию выделения исходного иате-риала для селекции сортов овса устойчивых к фузариозу метелки и накоплению микотоксинов в зерне (08-04-13668) / Лоскутов И.Г., Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П., Кононенко Г.П., Конарев A.B., Лисицын А.Н., Буркин A.A., Блинова Е.В., Чмиль О.В. Смирнова Л.О. // Материалы конференции РАСХН-РФФИ "Ориентированные фундаментальные исследования и их

реализация в АПК России". - М. - 2009. - С.74-78.

22. Гаврилова, О.П. Метод ПЦР-диагностики фитопатогенных грибов родов Fusarium и Alternaria / Гагкаева Т.Ю., Ганнибал Ф.Б., Гаврилова О.П. // Высокопроизводительные и высокоточные технологии и методы фито-санитарного мониторинга. Приложение к журналу "Вестник защиты растений". - СПБ. - 2009. - С.4-14.

23. Гаврилова, О.П. Параметры устойчивости овса к фузариозу / Гаврилова О.П. // Материалы научной конференции аспирантов и молодых ученых "Генетика и селекция", 15 - 16 марта 2010 г., ВИР им. Н.И. Вавилова. - СПб.- 2010. - С.36-43.

24. Gavrilova, О. A novel clade of T-2-producing Fusarium isolates from Asia that are morphologically similar to F. poae but phylogenetically more closely related to F. sporotrichioid.es and to the two subgroups of F. langsethiae / Yli-Mattila Т., O'Donnell K., Ward Т., Proctor R.H., Gavrilova O, Gagkaeva T. // Book of abstracts of IMC 9, The Biology of Fungi. Edinburg, UK, 1-6 August 2010. - P.3.178

Научное издание. Я^О-печать ИННОВАЦИОННЫЙ ЦЕНТР ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ Лицензия ПЛД № 69-253. Подписано к печати 15 сентября 2010 г., тир. 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гаврилова, Ольга Павловна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Возбудители фузариоза зерна и их биоэкологические особенности.

1.1.1. Таксономическое состоянии секции Sporotrichiella.

1.1.2 Концепция вида грибов секции Sporotrichiella.

1.1.3 Распространение и биологические особенности грибов секции Sporotrichiella.

1.2 Фузариоз зерновых культур.

1.2.1 Распространение и вредоносность заболевания.

1.2.2. Особенности проявления заболевания на зерновых культурах.

1.3. Методы борьбы с возбудителями фузариоза зерна.

1.3.1. Приемы, используемые для ограничения численности возбудителей заболевания.

1.3.2. Устойчивость растений к заболеванию.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Мониторинг распространённости грибов рода Fusarium на зерновых культурах.

2.1.1 Оценка заражённости образцов зерна и определение видового состава грибов рода Fusarium.

2.1.2 Анализ микотоксинов в зерне.

2.2 Биоразнообразие грибов секции Sporotrichiella.

2.2.1 Создание и поддержание коллекции штаммов грибов.

2.2.2 Оценка влияния условий культивирования.

2.2.3 Оценка способности к токсинообразованию.

2.2.4 Оценка патогенности.

2.2.5. Молекулярно-генетическая характеристика.

2.2.5.1 Экстракция ДНК грибов.

2.2.5.2 Метод ПЦР со специфичными праймерами.

2.2.5.3 Электрофоретическое разделение амплифицированных фрагментов.

2.3.1.2 Объекты исследования - сорта овса и ячменя

2.3.1.3 Характеристика образцов овса по параметрам устойчивости к фузариозу

2.3.2 Оценка устойчивости к фузариозу образцов овса из коллекции ВИР им. Н.И.Вавилова на искусственном инфекционном фоне

2.3.2.1 Условия проведения эксперимента

2.3.2.2 Объекты исследования — образцы овса из коллекции ВИР

2.3.2.3 Создание инфекционного фузариозного фона

2.3.2.4 Характеристика образцов овса по скороспелости и высоте

2.3.2.5 Характеристика образцов овса по параметрам устойчивости к фузариозу

2.4, Статистическая обработка данных РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. МОНИТОРИНГ ЗАРАЖЁННОСТИ И КОЛИЧЕСТВ МИКОТОКСИНОВ В ЗЕРНЕ ОВСА И ЯЧМЕНЯ, ВЫРАЩЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ СЕВЕРО-ЗАПАДА РФ УРОЖАЯ 2007-2008 ГГ.

3.1. Заражённость грибами рода Fusarium и содержание микотоксинов в зерне

3.2. Видовой состав грибов рода Fusarium и их влияние на загрязненность микотоксинами зерна овса и ячменя

Глава 4. БИОРАЗНООБРАЗИЕ ТРИХОТЕЦЕНПРОДУЦИРУЮЩИХ ГРИБОВ СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA

4.1. Коллекция штаммов секции Sporotrichiella рода Fusarium

4.2 Морфологическая характеристика штаммов видов секции Sporotrichiella

4.3 Характеристика штаммов секции Sporotrichiella при различных условиях культивирования

4.4 Характеристика штаммов секции Sporotrichiella по способности к токсинообразованию

4.5 Характеристика штаммов секции Sporotrichiella по патогенности

4.6 Молекулярно-генетическая характеристика штаммов видов секции Sporotrichiella

4.6.1 Идентификация штаммов с помощью видоспецифичных праймеров

4.6.2 Характеристика штаммов методом секвенирования гена фактора элонгации 1 а

Глава 5. ОЦЕНКА УСТОЙЧИВОСТИ СОРТОВ ОВСА И ЯЧМЕНЯ

К ФУЗАРИОЗУ ЗЕРНА

5.1 Оценка сортов овса и ячменя на естественном инфекционном

5.2 Оценка устойчивости к фузариозу образцов овса из коллекции

ВИР на искусственном инфекционном фоне

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Внутривидовой полиморфизм грибов секции Sporotrichiella рода Fusarium и характер взаимоотношений их с серыми хлебами"

Актуальность темы. Виды Fusarium sporotrichioid.es Sherb., F. роае (Peck) Wollenw., F. langsethiae Torp et Nirenberg относятся к секции Sporotrichiella Wollenw. (in Lewis, 1913) рода Fusarium. Link (1809) и продуцируют опасные трихотеценовые микотоксины, вызывающие тяжелые заболевания людей и животных при их поступлении в организм с продуктами и кормами (Саркисов, 1954; Квашнина, 1972; Тутельян, Кравченко, 1985; Marasas et al., 1984; D'Mello et al., 1999). Многолетние исследования выявили виды F. sporotrichioides и F. роае в зерне серых хлебов повсеместно на территории России (Ячевский, 1917; Тупеневич, 1953; Левитин и др., 1994, 1998; Кононенко и др., 1999; Иващенко и др., 2000; Иващенко, Шипилова, 2004; Малиновская и др., 2004; Гагкаева и др., 2009). Вид F. langsethiae впервые выявлен на территории России в 2003 году в зерне ячменя, выращенного в Ленинградской области (Gagkaeva et al., 2006).

Виды грибов секции Sporotrichiella характеризуются значительным биоэкологическим, физиологическим и морфологическим разнообразием. Корректная идентификация этих видов' Fusarium, основанная на вариабельных микроморфологических признаках и характере роста колоний, часто затруднена, поскольку культуры грибов нестабильны и таксономические признаки не всегда четко выражены (Райлло, 1950; Билай, 1977; Booth, 1971; Gerlach, Nirenberg, 1982; Torp, Nirenberg, 2004). Молекулярно-генетическая идентификация позволяет уточнить границы варьирования признаков, свойственных виду и охарактеризовать внутривидовой полиморфизм (Knutsen et al., 2004; Schmidt et al., 2004; Yli-Mattila et al., 2004a).

Существуют различные методы борьбы с возбудителями фузариоза зерна, однако наиболее эффективным путем получения качественного зерна, свободного от микотоксинов, является использование устойчивых сортов. Исследования устойчивости зерновых культур к фузариозу активно ведутся во всем мире, однако большинство работ связано с пшеницей и, в меньшей степени, с ячменем (Колесников и др], 2001; Аблова, 2008; Клыков, 2010; Snijders, 1990; Chen et al., 1991; Mesterhazy, 1995, 2002; Gagkaeva et al., 2002; Steffenson, 2003). До недавнего времени овес, широко используемый в кормовой и пищевой промышленности, не оценивали по устойчивости к фузариозу зерна, и этот признак не учитывали в процессе селекции сортов (Tekauz et al., 2004). Поэтому оценка устойчивости к фузариозу возделываемых сортов овса и ячменя, а также поиск источников устойчивости, не поражаемых грибами и не накапливающих микотоксины в зерне, особенно актуальны.

В задачи исследований входило:

2. Выявить морфолого-культуральные особенности, патогенные и токсигенные свойства, а также ДНК-полиморфизм видов F. sporotrichioides, F. роае и F. langsethiae.

4. Выявить источники устойчивости овса на основе параметров многокомпонентной устойчивости к фузариозу.

Впервые в России создана коллекция штаммов секции Sporotrichiella различного происхождения (428 штаммов), большинство из которых охарактеризованы по морфолого-культуральному и молекулярно-генетическому полиморфизму, патогенности и способности к токсинообразованию.

Для группы штаммов Fusarium sp. 1, происходящих из Сибири и Дальнего Востока России, установлен таксономический статус, как нового для науки филогенетического вида, близкого к виду F. sporotrichioides.

Апробация работы. Результаты исследований докладывались на ежегодных методических комиссиях ГНУ ВИЗР Россельхозакадемии по аттестации аспирантов (Санкт-Петербург-Пушкин, 2007-2010); семинаре по грибам рода Fusarium (Вагенинген, Нидерланды, 2006); XV конгрессе европейских микологов (Санкт-Петербург, 2007); II съезде микологов России (Москва, 2008); курсах для аспирантов "Fusarium, genes and toxins" (Ос, Норвегия, 2008); VIII международной конференции по овсу (Миннеаполис, США, 2008); X Международном совещании "Fusarium Genomics Workshop", (Альгеро, Италия, 2008); II Всероссийской конференции "Современные проблемы иммунитета растений к вредным организмам" (Санкт-Петербург,

2008); IV Международном конгрессе "Зерно и хлеб России" (Санкт-Петербург, 2008); конференции "Современные методы использования генетических ресурсов в селекции ячменя и овса" (Санкт-Петербург, 2009); семинаре "Nordforsk mould and mycotoxin" (Упсала, Швеция, 2009); Междисциплинарном микологическом форуме (Москва, 2009, 2010); семинаре "Fusarium disease resistance, toxins and feed quality" (Аархус, Дания,

2009); научной конференции аспирантов и молодых ученых "Генетика и селекция" (Санкт-Петербург, 2010); IX микологической конференции

Биология грибов" (Эдинбург, Великобритания, 2010).

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, проект № 08-04I

13668-офиц "Разработать технологию выделения исходного иатериала для селекции сортов овса устойчивых к фузариозу метелки и накоплению микотоксинов в зерне" (2008-2009 гг.); Nordforsk, проект № 040291 "New emerging mycotoxins and toxigenic fungi in Northern Europe" (2005-2009 гг.); фонда ООО "Технологии. Внедрение. Наука", проект № 12650 "Разработка способа оценки генетического материала овса на устойчивость к фузариозу зерна по контролю ДНК токсигенных грибов рода Fusarium в зерне" (20102011 гг.).

Заключение Диссертация по теме "Микология", Гаврилова, Ольга Павловна

выводы

1. Виды секции Sporotrichiella с высокой частотой встречались в комплексе грибов рода Fusarium, вызывающих фузариоз зерна на территории ч

Северо-Запада России в 2007-2008 гг. Суммарная доля F. sporotrichioides, F. роае и F. langsethiae в комплексе грибов составляет 82-84% на овсе и 36-46% на ячмене.

3. Показан внутривидовой полиморфизм грибов секции Sporotrichiella, по каждому из изученных морфолого-культуральных, биоэкологических, и физиологических признаков. Вид F. sporotrichioides характеризуется наибольшим разнообразием проанализированных признаков.

4. Выявлена группа штаммов Fusarium sp.l, происхождением из Сибири и Дальнего Востока России, не соответствующих известным стандартам существующих видов рода Fusarium. Совокупность исследованных признаков дает основание для выделения этой группы в самостоятельный филогенетический вид, имеющий ближайшее родство с видом F. sporotrichioides.

5. Выявлен многокомпонентный характер устойчивости к фузариозу овса и ячменя на основе анализа взаимосвязей между параметрами оценки: зараженность зерна, количество ДНК трихотеценпродуцирующих грибов рода Fusarium и микотоксинов.

9. Многокомпонентная устойчивость к фузариозу выявлена у образцов овса пленчатой формы различного географического происхождения из коллекции ВИР: к-2513, к-7766, к-8479, к-11632, к-1770, к-1773, к-5107, к-5200, к-5244, к-7219, которые могут являться источниками устойчивости к заболеванию. Устойчивые образцы относятся к видам A. sativa (5 образцов), A. strigosa (4 образца) и A. ahyssinica (1 образец) и являются староместными овсами, кроме сортов Kuromi (к-11632) и Крестьянский (к-7219).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гаврилова, Ольга Павловна, Санкт-Петербург

1. Аблова И.Б. Принципы и методы создания сортов пшеницы, устойчивых к болезням (на примере фузариоза колоса) и их роль в становлении агросистем. Автореферат докт. дисс. Краснодар. 2008. 49 с.

2. Аблова И.Б., Грицай Т.И. Исходный материал для селекции озимой мягкой пшеницы на устойчивость к фузариозу колоса в Краснодарском крае // Пшеница и тритикале. Краснодар. 2001. С. 337-351.

3. Анпилогова JI.K., Сидоров И.А., Есаулепко Е.А., Соколов М.С. Загрязнение фузариотоксинами различных по толерантности к Fusarium graminearum Schwabe сортов озимой пшеницы // Агрохимия. 1996.10. С.100-104.

4. Ашмарина Л.Ф., Горобей И.М. Видовой состав возбудителей фузарнозов сельскохозяйственных культур в Западной Сибири // Сиб. вестн. с.-х. науки. 2008.12. С. 42-46.

5. Баталова Г.А. Овес. Технологии возделывания и селекция. Киров: НИИСХ Северо-Востока. 2000. 206 с.

6. Билай В.И. Биологически активные вещества микроскопических грибов и их применение. Киев: Наукова думка. 1965. 268 с.

7. Билай В.И. Фузарии. Киев: Наукова думка. 1977. 444 с.

8. Буркин А.А, Соболева H.A., Кононенко Г.П. Токсинообразующая способность штаммов Fusarium роае из зерна хлебных злаков Восточно-Сибирского и Дальневосточного регионов // Микология и фитопатология. 2008. 42 (4). С. 354-358.

9. Буркин A.A., Пирязева Е.А., Малиновская Л.С., Кононенко Г.П. Метаболический профиль грибов рода Fusarium Lk.: Потенциал биосинтеза Т-2 токсина и диацетоксисцирпенола // Успехи медицинской микологии. 2006. 7. С. 95-96.

10. Вавилов Н.И. Законы иммунитета растений к инфекционным заболеваниям. JI. 1967. 480 с.

11. Владимирский С. В. Фузариоз всходов сои // Зап. Ленинградского с. х. института. Л. 1938. Г. С71ГЫ 30. : --

12. Воронин Н.С. О "пьяном" хлебе в Южно-Уссурийском крае // Ботанические записки, издаваемые при Ботаническом саде. С-Пб. 1890-1892. 3. С.13-21.

13. Гагкаева Т.Ю., Богуславский Р.Л., Михайлова Л.А., Гультяева Е.И., Рустамов Х.Н. Оценка устойчивости образцов различных видов пшениц к фузариозу колоса // Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции. 1993. 147. С. 27-32.

14. Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П. Фузариоз колоса и зерна ячменя // Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2009. 165. С. 39-44.

15. Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П., Левитин М.М. Современное состояние таксономии грибов рода Fusarium секции Sporotrichiella II Микология и фитопатология. 2008. 42 (3). С. 201-213.

16. Гагкаева Т.Ю., Левитин М.М., Санин С.С., Назарова Л.Н. Зараженность зерна и видовой состав грибов рода Fusarium на территории РФ в 2004-2006 годах // Arpo XXI. 2009. 4-6. С. 4-6.

17. Гешеле Э.Э. Основы фитопатологической оценки в селекции растений. М. "Колос". 1978. 208 с.

18. ГОСТ Р 52471-2005. Корма. Иммуноферментный метод определения микотоксинов. 2008. 12 с.

19. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. М. 2009. 612 с.

20. Грушко Г.В., Ересько Л.Г., Жалиева Л.Д., Линченко С.Н. Современное состояние проблемы фузариоза колоса озимой пшеницы в Краснодарском крае и перспективы борьбы с ним // Фундаментальные исследования. 2005. 2. С. 102-103

21. Дьяков Ю.Т. Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Защита растений. 1983. 3. с. 5-90.

22. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Изд-во МГУ. 1994. 512 с.

23. Иванченко М. Я. Фузариоз колоса пшеницы и его вредоносность в условиях --------Северо-Осетинской АССР, // Труды Сев.-Осст. с.-х. ин-та. Орджоникидзе. 1960. 21. с.83-94.

24. Иващенко В.Г., Шипилова Н.П., Кирцидели И.Ю. Экологический мониторинг возбудителей фузариоза семян зерновых культур на северо-западе России // Микология и фитопатология. 1997. 31(2). С. 64-69.

25. Иващенко В.Г., Шипилова Н.П., Левитин М.М. Видовой состав грибов рода Fusarium на злаках в азиатской части России // Микология и фитопатология. 2000. 34 (4). С. 54-68.

26. Иващенко В.Г., Шипилова Н.П., Назаровская Л.А. Фузариоз колоса хлебных злаков. СПб. 2004. 164 с.

27. Иващенко В.Г., Шипилова Н.П., Нефедова Л.И., Гагкаева Т.Ю., Назаровская Л.А., Хлопунова Л.Б. Биологические и фитосанитариые аспекты исследования фузариоза колоса // Микология и фитопатология. 1997. 31(2). С. 58-63.

28. Калашников К.Я Предупреждение и подавление семенной инфекции кукурузы. Защита кукурузы от вредителей и болезней. М. Сельхозгиз. 1958. С. 119-124.

29. Кальвиш Т. К. Возбудители микозов некоторых листогрызущих насекомых Сибири и Казахстана// Микология и фитопатология. 1969. 3(5). С. 403-409.

30. Караджова Л.В. Фузариозы полевых культур. Кишинев: Штиинца. 1979. 256 с.

31. Каратыгин И.В. Строение патогена и его развитие в тканях растений-хозяев как критерий устойчивости растений к грибной инфекции // Микология и фитопатология. 1968. 2(5). С. 414-420.

32. Квашнина Е. С. Токсико-биологические свойства грибов рода Fusarium и вызываемые ими микотоксикозы животных. Автореф. докт. дисс. Л. 1972. 44 с.

33. Квашнина Е.С., Морфолого-культуральные свойства видов рода Fusarium секции Sporotrichiella и их ареал в СССР // Микология и фитопатология. 1979. 13(1). С. 3-9.

34. Квашнина Е.С. О токсинообразовании грибов из рода Fusarium на различных кормах // Бюлл. науч. техн. Информации. М. 1958. 3. С.51-52. j

35. Кириенкова А.Е. Фузариоз колоса зерновых в Краснодарском крае. В кн.: Фузариоз, колоса зерновых злаковых культур. Тезисы докладов. Под ред.: В.Т. Гончарова. Краснодар. 1992. С. 27-28.

36. Клечковская Е.А. Основные компоненты устойчивости к фузариозным- грибам // Сб. науч. трудов. Методы биотехнологии в селекции сельскохозяйственных растений. 1992. Одесса СГИ. С. 81-79.

37. Колесников Ф.А., Аблова И.Б., Беспалова Л.А., Давоян P.A. Подходы к селекции на устойчивость к фузариозу колоса в Краснодарском НИИ сельского хозяйства им. П.ПЛукьяненко. В кн.: Пшеница и тритикале. Краснодар. 2001. С. 318-329.

38. Кононенко Г. П., Буркин А. А. Фузариотоксины в зерновых кормах // Ветеринарная патология. 2002. 2. С. 128-132.

39. Кононенко Г. П., Буркин А. А., Соболева Н. А., Зотова Е.В. Иммуноферментный метод определения Т-2 токсина в контаминированном зерне // Прикладная биохимия и микробиология. 1999. 35. 4. С. 457-462.

40. Кононенко Г. П., Малиновская JI. С., Соболева Н. А., Пирязева Е. А., Зотова Е. В., Шалыганова О. Н. Распространенность и токсинообразующие свойства грибов хлебных злаков в Московской области // Микология и фитопатология. 1999. 33 (2). С. 118-123.

41. Кононенко Г П. Система микотоксикологического контроля объектов ветеринарно-санитарного и экологического надзора. Автореферат докт. дисс., М. 2005, 50 с.

42. Кривченко В.И., Ямалеева A.M., Исаев Р.Ф., Горбунова В.Ю. Влияние фактора пленчаюсти семян на устойчивость видов пшеницы к возбудителю твердой головни // Микология и фитопатология. 1979. 13(4). С. 330-335.

43. Крючкова JI.O., Райчук J1.B , Михайленко C.B. Возбудители фузариоза колоса. Захисм рослин. 2001. 36. С. 12-13.

44. Культурная флора. Овес. T. II. ч. 3. Под ред. В.Д. Кобылянского и В.Н. Солдатова. М.: Колос. 1994.367 с

45. Левитин М.М, Михайлова Л.А, Афанасенко О.С. Методические указания по изучению изменчивости популяций фитопагогенных грибов. Л.: Изд-во ВНИИ защиты растений. 1981. 56 с.

46. Литовка Ю.А. Видовой состав грибов рода Fusarium и их роль в патогенезе сеянцев хвойных в лесопитомниках Средней Сибири // Авгореф. на соискание степ. канд. биол. наук. Красноярск. 2003. 19 с.

47. Лоскутов И.Г. Овес (Avena L.) распространение, систематика, эволюция и селекционная ценность. СПб: ГНЦ РФ ВИР. 2007. 336 с.

48. Львова Л.С., Кизленко О.И., Шульгина А.П., Омельченко М.Д., Быстрякова З.К. Распределение дезоксиниваленола в продуктах переработки мягкой и твердой пшеницы и ячменя, пораженных фузариозом // Прикладная биохимия и микробиология. 1998. 34. С. 444-449.

49. Малиновская Л.С., Пирязева Е.А., Кислякова О.С. Выявление доминантных видов рода Fusarium в зерне из различных регионов РФ. Успехи медицинской микологии. Материалы Второго Всероссийского Конгресса по медицинской микологии. М. 2004. 3. С. 278-280.

50. Марикова М.И. Качество зерна сортов овса, выращенных в различных агроклиматических зонах юга Тюменской области // Инновационные технологии в растениеводстве. 2009. 4(11). С.11-15.

51. Методы экспериментальной микологии. Под ред. В.И. Билай. Киев: "Наукова думка". 1982. 550 с.

52. Мордвинкина Ф.И. Овес. Руководство по апробации сельскохозяйственных культур. М. 1966. 456 с.

53. Наумов H.A. Пьяный хлеб. Наблюдения над несколькими видами рода Fusarium. Труды бюро по микологии и фитопатологии ученого комитета. Петроград. 1916. 216 с.

54. Новикова И И., Литвиненко А.И., Бойкова И.В. Биологическая эффективность новых микробиологических препаратов Алиринов Б и С для защиты растений от болезней в различных природно-климатических зонах // Микология и фитопатология. 2003. 1(37). с. 92-98.

55. Пальчевский А. Болезни культурных злаков Южно-Уссурийского края. СПб. 1981.40 с.

56. Пирязева Е.А., Малиновская Л.С. Распространенность грибов рода Fusarium Link, поражающих зерно хлебных злаков в различных регионах Восточной Сибири // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. 2009. 2. С. 14-19.

57. Райлло А. И. Грибы рода Fusarium. М. 1950. 416 с.

58. Рекомендации по борьбе с фузариозом пшеницы и других зерновых культур, использованию пораженного зерна и определению содержания в нем микотоксинов. Под ред. B.C. Шевелухи. М. 1988. 52 с.

59. СанПиН 2.3.2.1078-01 Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. 2002.

60. Саркисов А. X. Микотоксикозы. М. 1954. 216 с.i

61. Саркисов А. X. Перезимовавшие под снегом зерновые культуры. М.: Изд-во Мин. сел.-хоз. СССР. 1948. 108 с.

62. Сверкунов В.К. Голозерный овес и ячмень в Иркутской области. Иркутск. 1950. 60с.

63. Селиванова Т.Н., Байбакова О.В., Черненко В.Ю. Фузариоз озимой пшеницы в ЦЧР // Фузариоз колоса зерновых злаковых культур. Тезисы докладов научно-коорд. совещания. Краснодар. 1992. С. 15-16.

64. Семенов А. Я., Федорова Р. Н. Инфекция семян хлебных злаков. М. Колос. 1984. 95 с.

65. Соколов М.С. Исследования СКНИИФ по эпифитотиологии фузариоза колоса и фузариотоксиногенезу // Фузариоз колоса зерновых злаковых культур. Тезисы докладов научно-коорд. совещания. Краснодар. 1992. С. 4-7.

66. Струиникова О. К., Шахназарова В. Ю., Вишневская Н. А., Чеботарь В. К., Тихонович И. А. Развитие и взаимоотношения Fusarium culmorum и Pseudomonas fluorescens в почве // Микробиология. 2007. 76 (5). С. 675-681.

67. Трофимовская А .Я. Ячмень (эволюция, классификация, селекция). J1. 1972. 296 с.

68. Тупеневич С.М. Фузариоз пшеницы и результаты его изучения. Труды Воронежской станции защиты растений. 1936. 1 (XII). 130 с.

69. Тупеневич СМ. Фузариоз пшеницы и результаты его изучения. Тр. Воронежской СТАЗР. Воронеж. 1953. С. 79-130.

70. Тутельяи В.А., Кравченко JI.B. Микотоксины (медицинские и биологические аспекты). М.: Медицина. 1985. 320 с.

71. Хохряков М.К., Потатосова Е.Г. О болезнях кукурузы в Советском Союзе. Защита кукурузы от вредителей и болезней. М. Сельхозгиз. 1958. С. 103-110.

72. Шевелуха B.C., Новожилов К.В., Захаренко В.А., Левитин М.М. Проблема фузариоза колоса хлебных злаков и пути её решения // Вестник РАСХН. 1994. 4. С. 41-43

73. Шипилова Н.П. Видовой состав и биоэкологические особенности возбудителей фузариоза семян зерновых культур. Автореф. канд. дисс. СПб. 1994. 20 с.

74. Шипилова Н.П., Гагкаева Т.Ю. Фузариоз колоса и зерна в северо-западном регионе России // Защита растений. 1992. 11. С. 7-8.

75. Шипилова Н.П., Нефедова Л.И., Иващенко В.Г. Диагностика фузариозного поражения колоса и заражения зерна на Северо-западе России. Сб. метод, рекоменд. по защите растений. 1998. С. 208-220.

76. Ячевский А.А. Ежегодник Сведений о болезнях и повреждениях культурных и дикорастущих полезных растений, 1911-1912. Т. VII — VIII. Петроград, Министерство земледелия. 1917. 464 с.

77. Ячевский А.А. О пьяном хлебе. Бюллетень о заболевании. 1904. 11. С. 89-92.

78. Ablova I.B., Slusarenko A.N. The problems associated with breeding winter wheat for head scab resistance // Proceeding of the Workshop on Fusarium Head Scab: Global Status and Future Prospects, CIMMYT, Mexico. 1996. P. 93-96.

79. Ali S., Francl L.J. Progression of Fusarium species on wheat leaves from seedling to adult stages in North Dakota // Proceeding of the National Fusarium Head Blight Forum. USA. 2001. P. 99.

80. Aoki Т., O'Donnell K. Fusarium kyushuense sp. nov. from Japan // Mycoscience. 1998. 39. P. 1-6.

81. Backhouse D., Burgess L.W., Summereil B.A. Biogeography of Fusarium. In book: Fusarium. Edit. By B.A. Sumerell et al. APS PRESS. 2001. P. 122-137.

82. Bai G.-H., Shaner G. Management and resistance in wheat and barley to Fusarium head blight // Annu. Rev. Phytopath. 2004. 42. P. 135-161.

83. Bai G.-H., Shaner G. Scab of wheat: Prospect for control // Plant Disease. 1994. 78. P. 760-766.

84. Balkandzhieva Yu., Karadzhova J. Genetic sources of resistance to Fusarium on the barley ears // Plant Sei. 1994. 31. P. 79-82.

85. Belisario A., Maccaroni M., Corazza L. Occurrence and etiology of brown apical necrosis on Persian (English) walnut fruit // Plant Disease. 2002. 86. P. 599-602.

86. Biel W., Bobko K., Maciorowski R. Chemical composition and nutritive value of husked and naked oats grain // J. of Cereal Sei. 2009. 49 (3). P. 413-418.

87. Birzele B., Meier A., Hindorf H., Kramer J., Dehne H.W. Epidemiology of Fusarium infection and deoxynivalenol content in winter wheat in the Rhineland, Germany // Eur. J. Plant Pathol. 2002. 108. P. 667-673.

88. Bjornstad Ä., Skinnes H. Resistance to Fusarium infection in oats (Avena sativa L.) // Cereal Res. Comm. 2008. 36. P. 57-61.

89. Booth C. 1971. The genus Fusarium. England: Common. Mycol. Inst. 237 p.

90. Bottalico A.,' Perrone G. Toxigenic Fusarium species and mycotoxins associated with head blight in small-grain cereals in Europe // Eur. J. of Plant Pathol. 2002. 108. P. 611-624.

91. Boutigny A.-L., Richard-Forget F., Barreau, C. Natural mechanisms for cereal resistance to the accumulation of Fusarium trichothecenes // Eur. J. of Plant Pathol. 2008. 121. P. 411-423.

92. Buerstmayr H. Lemmens M., Harti L., Doldi L., Steiner B., Ruckenbauer P. Molecular mapping of QTL for Fusarium head blight resistance in spring wheat // The proceeding. Healthy Cereals. L. Tvaruzek (edit.) Kromcriz. 2001. P. 15-18.

93. Buerstmayr H., Lemmens M., Grausgruber H., Ruckenbauer P. Scab resistance of international wheat germplasm // Cereal Res. Commun. 1996. 24. P. 195-202.

94. Bulat S.A., Lübeck M., Mironenko N.V., Jensen D.F., Lübeck P.S. UP-PCR analysis and ITS1 ribotyping of strains of Trichoderma and Gliocladium // Mycol. Res. 1998. 102(8). P.933-943.

95. Burgess L.W., Summerell' B.A. Mycogeography of Fusarium-, survey of Fusarium species in subtropical and semi-arid grassland soils from Queensland, Australia // Mycological Research. 1992. 96(9). P. 780-784.

96. Burmeister H. hR., Plattner R. D. Enniatin production by Fusarium tricinctum and effect on germinating wheat seeds // Phytopathol. 1987. 77. P. 1483-1487.

97. Bushell W.M.R., Ilazen B.E., Pritsch C. Histology and physiology of Fusarium head blight. In book: Fusarium head blight of wheat and barley. Edit, by Leonard K.J., Bushnell W.R'. APS PRESS. 2003. P. 44-83.

98. Cheeke P. R. Mycotoxin in cereal grains and protein supplements . In book: Natural Toxicants in Feed, Forages and Poisonous Plants. Ed: P. R. Cheeke. 1998. P. 87-136.

99. Chelkowski J. Formation of mycotoxins produced by Fusaria in head of wheat, triticale and rye. Fusarium: Mycotoxins, taxonomy and pathogenicity. Seminar, Warsaw, 8-10, sept., 1987. Amsterdam. 1989. P. 63-84.

100. Chen* X.M., Yang Y.-H., Gao D.-S. Primary identification of resistance to scab of Chinese barley germplasm sources (English summary) // Zhejiang Agric. Sci. 1991. 2. P. 91-97.

101. Clear R.M., Patrick S.K., Platford R.G., Desjardins, M. Occurrence and distribution of Fusarium species in barley and oat seed from Manitoba in 1993 and 1994 // Can. J. Plant Pathol. 1996.18. P. 409-414.

102. Clear R.M., Patrick S.K., Vowicki T., Gaba D., Edney M.,.Babb L.C. The effect of hull removal and pearling on Fusarium species and trichothecenes in hulless barley // Can. J. Plant Sci. 1997. 77. P. 161-166.

103. Commission regulation (EC) No 856/2005 of 6 June 2005 // Official J. of the European Union. 2005.

104. Compel P., Papp I., Bibo M., Felete C., Hornok L. Genetic interrelationship and genome organization of double-standed RNA elements of Fusarium poae II Virus Genes. 1999. 18. P. 49-56.

105. Cook R.J., Baker K.F. The nature and practice of biological control of plant pathogens // Amer. Phytopathol. APS Press. St Paul. Minn. 1983. 539 p.

106. Cummmings J., Kuntz J. E. Stem cancer on black walnut caused by Fusarium sporotrichioides ff Phytopathol. 1985. 75. P.1279.

107. D'Mello J.P.F., Placinta C.M., Macdonald, A.M.C. Fusarium mycotoxins: a review of global implications for animal health, welfare and productivity // Animal Feed Sci. and Technology. 1999. 80. P. 183-205.

108. Doohan F. M., Brennan J., Cooke B. M. Influence of climatic factors on Fusarium species pathogenic to cereals: a review // Eur. J. of Plant Pathol. 2003. 109. P. 755-768.

109. Edwards S.G., Barrier-Guillot B., Clasen P-E., Hietaniemi V., Pettersson H. Emerging issues of HT-2 and T-2 toxins in European cereal production // World Mycotoxin J. 2009. 2 (2). P.' 173-179.

110. Elen, O.N., Abrahamsen, U., Overi, A., Razzaghian, M.J. Effect of agricultural measures on the occurrence of Fusarium spp. in cereals in Norway. In: Nirenberg, H.I. (ed), 6th European Fusarium Seminar in Berlin. 2000. P. 105-106.

111. El-Gholl N. E., Schoulties C. L., Ridings W. H. Factors affecting perithecial production in Gibberella tricincta II Can. J. Bot. 1979. 57. P. 2497-2500.

112. European Commission. Event-specific for the quantification of maize line NK603 usingreal-time PCR // Community Reference Laboratory for GM Food and Feed. 2005. 17 p.

113. Fajola A. O. Seedbome fiingi of tobacco (Nicotiana tabacum) in Nigeria // Seed Res. 1983. 11. P. 77-81.

114. Fekete C., Giczey G., Papp I., Szabo L., Hornok L. High-frequency occurrence of viruslike particles with double-standed RNA genome in Fusarium poae II FEMS Microbiology Letters. 1995. 131. P. 295-299.

115. Fekete C., Hornok L. A repetitive DNA sequence associated with kariotype variability in Fusarium poae II Acta Phytopath. et Entopathol. Hungarica. 1997. 32. P. 29-38.

116. Fekete C., Logricco A., Giczey G:, Hornok L. Screening of fungi for presence of the trichodiene synthase encoding sequence by hybridization to the Tri5 gene cloned from Fusarium poae//Mycopathol. 1997. 138. P. 91-97.

117. Fekete C., Nagy R., Debets A. J. M , Hornok L. Electrophoretic karyotypes and gene mapping in eight species of the Fusarium sections Arthrosporiella and Sporotrichieila II Curr. Genetics. 1993. 24. P. 500-504.

118. Forsell J.H., Jensen R., Tai J.H., Witt M., Lin W.S. Pestka J.J. Comparison of acute toxicities of deoxynivalenol (vomitoxin) and 15-acetyl deoxynivalenol in the B6C3F1 mouse // Food Chem. Toxicol. 1987. 25. P. 155-162.

119. Francl L.J., Markeil S., Ali S., Friesen T.L. Gibberella zeae population dynamics: a progress report // Proceeding of the National Fusarium Head Blight Forum; USA. 2000. P. 144-146.

120. Fredlund E., Gidlund A., Pettersson H., Olsen M., Börjesson T. Real-time PCR detection of Fusarium species in Swedish oats and correlation to T-2 and HT-2 toxin content. // World Mycotoxin J. 2010. 3(1). P. 77-88.

121. Gagkaeva T.Y., Levitin M.M., Zuev E., Terentjeva I. Evaluation of genetic resources of wheat and barley from Far East of Russia for resistance to Fusarium head blight // J. Applied Genetics. 43A. 2002. P. 229-236.

122. Gale L. R. Population biology of Fusarium species causing head blight of grain crops. In book: Fusarium head blight of wheat and barley. Edit. K. J. Leonard, W. R. Bushnell. APS Press, 2003. P. 120-143.

123. Geiser D.M., Jimenez-Gasco M.D., Kang S.C., Makalowska I., Veeraraghavan N., Ward T.J., Zhang N. Kuldau G.A. et al. FUSARIUM-ID v. 1.0: A DNA sequence database for identifying Fusarium II Eur. J. of Plant Pathol. 2004. 110. p. 473-479.

124. Gerlach W., Nirenberg H. The genus Fusarium -a Pictorial Atlas. Mitt. Biol. Bundesanst. Ld. Berlin. 1982. 406 p.

125. Gilbert J. Current views on the occurrence and significance of Fusarium toxins // Journal of Appl. Bacteriology Symposium Supplement. 1989. p. 89-98.

126. Gonzales H.H.L., Molto G.A., Pacin A., Resnik S.L., Zelaya M.J., Masana M., Martinez E.J. Trichotecenes and mycoflora in wheat harvested in nine locations in Buenos Aires province, Argentina // Mycopathol. 2008. 165. P.105-114.

127. Gordon W.L. The occurence of Fusarium species in Canada. VI. Taxonomy and geographic distribution of Fusarium species on plants, insects and fungi // Can. J. of Botany. 1959. 37. P. 257-290.

128. Hall T.A. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT. //Nucleic Acids Symposium Series. 1999.41. P. 95-98.

129. Halstensen A.S., Nordby K.C.', Eduard W., Klemsdal S.S. Real-time PCR detection of toxigenic Fusarium in airborne and settled grain dust and associations with trichothecene mycotoxins //J. Environm. Monitoring. 2006. 8. P. 1235-1241.

130. Hart P., Ward R. Efficacy of fungicides on Fusarium head blight severity and levels of vomitoxinin // Proc. National Fusarium Head Blight Forum, St. Paul, MN. 1997. P. 40-41.

131. Harvey R.B., Edrington T.S., Kubena L.F., Elissalde 'M.H., Corrier D.E., Rottinghaus, G.E. Effect of aflatoxin and diacetoxyscirpenol in ewe lambs // Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1995. 54. P. 325-330.

132. Hietaniemi V., Ramo S., Koivisto T., Kartio M., Peltonen S. Fusarium toxins in oats in Finland since 1999 // Book of Abstracts. IOC 2008, Minneapolis. 2008. Session V. Effective Pest.

133. Hilton A.J., Jenkinson P., Hollins T.W., Parry D.W. Relationship between cultivar height and severity of Fusarium ear blight in wheat // Plant Pathol. 1999. 48. P. 202-208.

134. Hoindork S., Fehrmann H., Beck R. Effect of field application of tebuconazole on yield, yield components and the mycotoxin content of Fusarium-infected wheat grain // J. Phytopath. 2000. 148. P. 1-6.

135. Horberg H.M. Dispersal of mycotoxin producing Fusarium spp. Uppsala, Sweden: Swediden University of agricultural sciences. PhD thesiss. ISSN 1404-2347.

136. Jennings P.; Turner J.A. Towards the prediction of Fusarium ear blight epidemics in the UK the role of humidity in disease development // Brighton Crop Prot. Conf. Pests and Diseases. 1996. P. 233-238.

137. Joffe A.Z. Fusarium species: Their biology and toxicology. J. Wiley and Sons, New York, USA. 1986. 588 p.

138. Kachuei, R., Yadegari, M.H., Rezaie, S., Allameh, A., Safaie, N., Zaini F., Yazd, F.K., Investigation of stored mycoflora, reporting the Fusarium cf. langsethiae in three provinces of Iran during 2007 // Annals of Microbiology. 2009. 59 (2). P. 383-390.

139. Kanaan Y. M., Bahkali A. H. Frequency and cellulolytic activity of seed-borne Fusarium species isolated from Saudi Arabian cereal cultivars // Zeitschrift fur Pflanzekrankheiten and Pflanzenschutz. 1993. 100. P. 291-298.

140. Kerenyi Z., Moretti A., Waalwijk C., Olah B., Hornok L. Mating type sequences in asexually reproducing Fusarium species 11 Appl. Environm. Microbiol. 2004. 70. P. 4419- 4423.

141. Kiecana I., Mielniczuk E., Kaczmarek Z., Kostecki M., Golinski P. Scab response and moniliformin accumulation in kernels of oat genotypes inoculated with Fusarium avenaceum in Poland // Eur. J. Plant Pathol. 2002. 108. P. 245-251.

142. Kienh T. E., Nelson P. E., Bernard E. M., Edwards F. F., Koziner B., Armstrong D. Catheter associated fungemia' caused by Fusarium chlamydosporum in a patient with lymphocytic lymphoma// J. of Clinical Microbiol. 1985. 21. P. 501-504.

143. Kononenko G., Burkin A. T-2 toxin production as a possible taxonomy marker for Fusarium sporotrichioides and Fusarium poae species. Book of abstracts: European Fusarium Seminar. 19-22 September, Wageningen, the Netherlands. 2006. P. 51.

144. Konstantinova P., Yli-Mattila T. IGS-RFLP analysis and development of molecular markers for identification of F. poae, F. pulverosum, F. sporotrichioides and F. kyushuense II Intern. J. Food Microbiol. 2004. 95. P. 321-331.

145. Koshinsky • H.A., Khachalourians G.C. Trichocetene synergism, additivity andNantagonism //Natural Toxicology. 1992. 1. P. 47-48.

146. Kosiak B., Torp M., Skjerve E. The prevalence and "distribution of Fusarium species in Norwegian cereals: a survey // Acta Agriculturae Scandinavica Section B: Soil and-Plant Sei. '2003.53. P. 168-176.

147. Kristensen R., Torp M., Kosiak B., Hoist-Jensen A. Phylogeny and toxigenic potential-is correlated in Fusarium species as related by partial translation elongation factor 1 alpha» gene sequences//Mycol. Res. 2005. 109. P. 173-186.

148. Magan N., Hope R., Colleate A., Baxter E.S. Relationship between growth and mycotoxin production by Fusarium species, biocides and environment // Eur J. Plant Pathol. 2002. 108. P.685-690.

149. Marasas W. F. O., Nelson P. E., Toussoun T. A. Toxigenic Fusarium species. Identity and mycotoxicology. The Pennsylvania State Univ. Press, London. 1984. 328 p.

150. Martin R. A., Johnston H. W. Effects and control of Fusarium diseases of cereal grains in the Atlantic Provinces // Can. J. Plant Pathol. 1982. 4. P. 210-216.

151. McMullen, M.P., R. Jones and D. Gallenberg, Scab of wheat and barley: A re-emerging disease of devastating impact // Plant Dis., 81. 1997. P. 1340-1348.

152. Mesfin A., Smith K. P., Dill-Macky R., Evans C. K., WaughR. , Gustus C. D., Muehlbauer G. J. Quantitative trait loci for Fusarium head blight resistance in barley detected in a two-rowed by six-rowed population // Crop Sci. 2003. 43. P. 307-318.

153. Mesterhazy A. Methodology of resistance testing and breeding against Fusarium head blight in wheat and results of the selection // Cereal Res.Commun.1997. 25 (3/2). P.651-654.

154. Mesterhazy A. Theory and practice of the breeding for Fusarium head blight in wheat // J. Appl. Genetics. 2002. 43A. P. 289-302.

155. Mesterhazy A. Types and components resistance to Fusarium head blight of wheat // Plant Breed. 1995. 114. P. 377-386.

156. Miedaner T., Schilling A. Genetic variation of aggressiveness in individual field populations of Fusarium grciminearum and F. culmorum tested on winter rye 11 Eur. J. of Plant Pathol. 1996. 102. P. 823-830.

157. Mielniczuk E. The occurrence of Fusarium spp. on panicles of oat (A vena sativa L.) 11 J. of Plant Protect. Res. 2001. 41(2). P. 173-180.

158. Miller J.D., ApSimon J.W. Deoxynivalenol: a 25 year perspective on a trichothecene of agricultural importance. In book: Fusarium. Edit, by B.A. Sumerell et al. APS PRESS. 2001. P. 310-320.

159. Miller, J.D. Fungi and mycotoxins in grain: Implications for stored product research // J. Stored Prod. Res. 1995. 31. P.l-16.

160. Milus E.A., Parsons C.E. Evaluation of foliar fungicides for controlling Fusarium head blight of wheat // Plant Dis. 1994. 78. P. 697-699.

161. Mirocha Ch.J., Xie W., Filho E.R. Chemistry and detection of Fusarium Mycotoxins. In book: Fusarium head blight of wheat and barley. Ed. by K.J.Leonard and W.R.Bushnell. APD Press. 2003. P. 144-164.

162. Mule G. Genetic relatedness of toxigenic Fusarium species by DNA sequence analysis // Bull. Inst. Compr. Agr. Sci. Kinki Univ. 2001. 9. P. 57-63.

163. Muthomi J. W., Mutitu E. W. Occurrence of mycotoxin producing Fusarium species and other fungi on wheat kernels harvested in selected districts of Kenya. African crop science conference proceedings. 2003. 6. P. 290-294.

164. Muthomi J.W., Oerke E.-C., Dehne H.-W., Mutitu E.W. Susceptibility of kenyan wheat varieties to head blight, fungal invasion and deoxynivalenol accumulation inoculated with Fusarium graminearum II J. of Phytopathol. 2002. 150 (1). P. 30-36.

165. Nagy R., Taborhegyi E., Wittner A., Hordok L. Minichromosomes in Fusarium sporotrichioides are mosaics of dispersed repeats and unique sequences // Microbiology. 1995. 141. P. 713-719.

166. Nelson P.E., Toussoun T.A., Marasas W.F.O. Fusarium species: An Illustrated Manual for Identifications. The Pennsylvania State University Press. 1983. P. 193 p.

167. Nicholson P., Chandler E., Draeger R.C., Gosman N.E., Simpson D.R., Thomsett M., Wilson A.H. Molecular tools to study epidemiology and toxicology of Fusarium head blight of cereals I I Eur. J. of Plant Pathol. 2003. 109. P.691-703.

168. Nicolaisen M., Suproniene S., Nielsen L. K., Lazzaro I., Spliid N. H., Justesen A. F. Real-time PCR for quantification of eleven individual Fusarium species in cereals // J. of Microb. Methods. 2009. 76. P. 234-240.

169. Niessen L., Schmidt H., Vogel R. F. The use of tri5 gene sequences for PCR detection and taxonomy of trichothecene-producing species in the Fusarium section Sporotrichiella II Intern. J. Food Microbiol. 2004. 95. P. 305-319.

170. Niessen M.L., Vogel R.F. Group specific PCR- detection of potential trichothecene-producing Fusarium species in pure cultures and cereal samples // Syst. Appl. Microbiol. 1998. 21. P. 618-631.

171. Nirenberg H. I. Untersuchungen über die morphologische und biologische Differenzierung in der Fusarium-Sektion Liseola II Mill. Biolog. Bundesan. für Land- und Forstwirt. Berlin-Dahlem. 1976. 169. 117 p.

172. Nyvall R.F. Chlamydospoies of Fusarium roseum 'graminearum' as survival structures II Phytopath. 1970. 60. P. 1175-1177.

173. Paavanen-Huhtala S., Hyvönen J., Bulat S.A., Yli-Mattila T. RAPD-PCR, isozyme, rDNA RFLP and rDNA sequence analyses in identification of Finnish Fusarium oxysporum isolates // Mycological Res. 1999. 103, 625-634.

174. Parikka P., Hietaniemi V., Rämo S., Jalli H. Fusarium Infection and Mycotoxin Contens of Oats Under Different Tillage Treatments. Abstract V. Eighth International Oat Conference Minneapolis June 28-July 2. 2008.

175. Parikka, P., Hietaniemi, V., Rämö, S., Jalli, H. Fusarium langsethiae infection and mycotoxin contents of oats and barley // J. of Plant Pathol. 2008. 90 (2). S.3.86.

176. Parry D.W., Jenkins P., McLeod L. Fusarium ear blight (scab) in small grain cereals a review II Plant Pathol. 1995. 44. P. 207-238.

177. Petterson H. Nivalenol production by Fusariumpoae II Mycotoxin Res. 1991. 7A(1). P.26-30.

178. Pettersson H, Olvang H. Trichothecene production by Fusarium poae and its ecology // Sydowia, Special Issue. 1997. P. 217-218.

179. Pettersson H. Occurrence and Analysis of HT-2 and T-2 toxins in Oats. Book of Abstract. XV Congress of European Mycologists, St. Petersburg, 2007. P. 16

180. Pettersson H., Hedman R., Engstrom B., Elwinger K., Fossum O. Nivalenol in Swedish cereals occurrence, production and toxicity towards chickens // Food Additives and Contaminants. 1995. 12 (3). P.373-376

181. Placinta, C.M., D'Mello, J.P.F., MacDonald, A.M.C., 1999. A review of worldwide contamination of cereal grains and animal feed with Fusarium mycotoxins // Animal Feed Sei. and Technology. 78. P. 21-37.

182. Polisenska I., Nedomova L., Tvaruzek L. Fusarium Mycotoxins in Oat Varieties. Book of Abstracts, Session V Effective Pest, Eighth International Oat Conference Minneapolis June 28-July 2. 2008.

183. Proctor R.H., Desjardins A.E., McCornick S.P., Plattner R.D., Alexander N.J., Brown D.W. Genetic analysis of the role of trichothecene and fumanisin mycotoxins in the virulence of Fusarium II Eur. J. of Plant Pathol. 2002. 108. 7. P. 691-698.

184. Rahman M.F., Bilgrami K.S., Masood A. Cytotoxic effects of DON and T-2 toxin on plant cells//Mycopathol. 1993. 124. P. 95-97.

185. Saitou N., Nei M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees // Mol. Biol. Evol. 1987. 4. P. 406-425.

186. Samson R.A., Hoekstra E.S., Frisvad J.C., Filtenborg O. Introduction to food- and airborne fungi. 6 edition. The Netherlands, Utrecht: CBS. 2000. 389 p.

187. Samuels G.J., Nirenberg H.I., Seifert K.A. Perithecial species of Fusarium. In book: Fusarium. APS PRESS. 2001. P. 15-28.

188. Satou M., Ichinoe M., Fukumoto F., TezukaN., Horiuchi S. Fusarium blight of Kangaroo Paw (Anigozanthos spp.) caused by Fusarium chlamydosporum and Fusarium semitectum // J. Phytopath. 2001. 149 (3-4). P. 203-206.

189. Savard M. E., Miller J. D., Salleh B., Strange R. N. Chlamidosporol, a new metabolite from Fusarium chlamydosporum II Mycopathol. 1990. 110. P. 177-181.

190. Schafer W. Molecular mechanisms of fungal pathogenicity to plants // Annu. Rev. Phytopathol. 1994. 32. P. 461-477.

191. Schroeder H.W., Christensen J.J. Factor affecting resistance of wheat to scab caused by Gibberella zeae II Phytopathol. 1963. 53. P. 831-838.

192. Scott PM, Harwig J, Blanchfield BJ. Screening Fusarium strains isolated from overwintered Canadian grains for trichothecenes // Mycopathol. 1980. 72(3). P. 175-180.

193. Seemüller E. Untersuchungen über die morpfologische und biologische Differenzierung in der Fusarium-Sektion Sporotrichiella II Mitteikungen aus der Biologischen Bundesanstalt für Land- und Forstwirtschaft. Berlin Dahlem. 1968. 127. P. 1-93.

194. Segal B. H., Walsh T. J., Liu J. M., Wilson J. D., Kwon-Chung K. J. Invasive infection with Fusarium chlamydosporum in a patient with Aplastic Anemia // J. Clinical Microbiol. 1998. 36(6). P. 1772-1776.

195. Seifert K.A., Levesque C.A. Phylogeny and molecular diagnosis of mycotoxigenic fungi // Eur. J. of Plant Pathol. 2004. 110. P. 449-471.

196. Shen X., Zhou M., Lu W., Ohm H. Detection of Fusarium head blight resistance QTL in a wheat population using bulked segregant analysis // Theor. Appl. Genet. 2003.106. P. 1041-1047.

197. Shipilova N.P., Gagkaeva T.Yu. The forms of head blight manifestation on the seeds and heads of cereal crops // Cereal Res. Commun. 1997. 25. 3/2. P. 815-816.

198. Siranidou E., Buchenauer H. Chemical control of Fusarium head blight on wheat // Zeitschrift für Pflanzenkrankheiten and Pflanzenschutz. 2001. 108. P. 231-243.

199. Slikova S., Srobarova A., Sudyova V., Polisenska I., Gregova E., Mihalik D. Response of oat cultivars to Fusarium infection with a view to their suitability for food use // Biología. 2010. 65/4. P. 609-614.

200. Slikova S., Sudyova V., Gregova E., Mihalik D. Accumulation of desoxynivalenol mycotoxin in kernels of oats after artificial infection with Fusarium culmorum Sacc. // Cereal Res. Comm. 2008. 36. Suppl. B. P. 389-391.

201. Snijders C.H.A. Genetic variation for resistance to Fusarium head blight in bread wheat // Euphytica. 1990. 50. P. 171-179.

202. Snijders C.H.A., Krechting C.F. Inhibition of deoxynivalenol translocation and fungal colonization in Fusarium head blight resistant wheat // Can J. Botany. 1992. 70. P. 1570-1576.

203. Stenglein S.A. Fusarium poae. a pathogen that needs more attention // J. of Plant Pathol. 2009. 91 (1). P. 25-36.

204. Stranger N., Smith H . Specificity of choline and betaine as stimulants of Fusarium graminearum II Transactions of the British Mycological Soc. '1978. 70.P. 187-192.

205. Stranger N., Majer J. R., Smith H. The isolation and identification of choline and betaine as the two major components in anthers and wheat germ that stimulate Fusarium graminearum in vitro. Physiological Plant Pathol. 1974. 4. P. 277-290.

206. Sturz A.V., Johnson H.W. Early colonization of the ears of wheat and barley by Fusarium poae //Can. J. Plant Pathol. 1983. 5. P. 107-110.

207. Sugiura Y., Fukasaku K., Tanaka T., Matsui Y., Ueno Y. Fusarium poae and Fusarium crookwellense, fungi responsible for the natural nccurrence of nivalenol in Hokkaido // Appl. Environ. Microbiol. 1993. 59(10). P. 3334-3338.

208. Tamburic-Ilincic L., Fedak G., Schaafsma A.W. Study on deoxynivalenol (DON) and Fusarium head blight (FHB) resistance in a F2 winter wheat population // J. Appl. Genetics. 2002. 43A. P. 333-340.

209. Tan M.-K., Niessen L. M. Analysis of rDNA ITS sequences to determine genetic relationships among, and provide a basis for simplified diagnosis of Fusarium species causing crown rot and head blight of cereals // Mycol. Res. 2003. 107. P. 811-821.

210. Tekauz A., B. McCallum B., Ames N., Fetch J.M. Fusarium head blight of oat current status in western Canada // Can. J. Plant Pathol. 2004. 26. P. 473-479.

211. Tekauz A., Fetch J.M., Rossnagel B.G., Savard M.E. Progress in assessing the impact of Fusarium head blight on oat in western Canada and screening of Avena germplasm for resistance // Cereal Res. Comm. 36, Suppl. B. 8. 2008. P. 49-56.

212. Tekauz A., McCallum B., Gilbert J. Fusarium head blight of barley in western Canada // Can. Plant Pathol. 2000. 22. P. 9-16.

213. Thompson J.D., Gibson T.J., Plewniak F., Jeanmougin F., Higguns D.G. The CLUSTALX Windows Interface: Flexible stratgies for Multiple Sequene Alignment Aided by Quality Analysis Tools. Nucleic Acids Res. 1997. 24. P. 4876-4882.

214. Thrane U. Developments in the taxonomy of Fusarium specie based on secondary metabolites. In book: Fusarium. Edit. By B.A. Sumerell et al. APS PRESS. 2001. P. 29-49.

215. Thuvander A., Moller T., Barbieri H.E., Jansson A., Salomonsson A.-C., Olsen M. Dieaetary intake of some important mycotoxins by the Swedich population. // Food Addit. Contam. 2001. 18. P. 696-706.

216. Tinline R. D., Wildermuth G. B., Spurr D. T. Inoculum density of Cochlioboius sativus in soil and common root rot of wheat cultivars in Queensland //Australian J. Agricultural Res. 1988. 39. P. 569-577.

217. Torp M., Langseth W. Production of T-2 toxin by a Fusarium resembling Fusarium poae //Mycopathol. 1999. 147. P. 89-96.

218. Torp M., Nirenberg H. I. Fusarium Iangsethiae sp. nov. on cereals in Europe // Intern. J. Food Microbiol. 2004. 95. P. 247-256.

219. Turner A. S., Lees A. K., Rezanoor H. N., Nicholson P. Refinement of PCR-detection of Fusarium avenaceum and evidence from DNA marker studies for phenetic relatedness to Fusarium tricinctum II Plant Pathol. 1998. 47. P. 278-288.

220. Ueno Y. Ceneral toxicity. In book: Trichothccenes: Chemical, Biological and Toxicological Aspects. Ed. By Y.Ueno. Amsterdam. 1983. P. 135-146.

221. Vijayalakshmi M., Rao A. S. Toxigenic fungi associated with sunflower during development. In book: Trichothecenes and other mycotoxins. Edit, by J. Lacey. 1985. P. 33-45.

222. Visconti A., Solfrizzo M., Fruchier A., Ap-Simon J. W. Acuminatopyrone: revised structure and production by Fusarium chlamydosporum and Fusarium tricinctum II J. Natural Products. 1994. 57. P. 695-699.

223. Vogelgsang S., Sulyok M., Hecker A., Jenny E., Krska R., Schuhmacher R., Forrer H.-R. Toxigenicity and pathogenicity of Fusarium poae and Fusarium avenaceum on wheat // Eur J Plant Pathol. 2008b. 122 P.265-276.

224. Waalwijk C., Kastelein P., de Vries I., Kerenyi Z., van der Lee T., Hesselink T., Kohl J., Kema G. Major changes in Fusarium spp. in wheat in the Netherlands // Eur. J. of Plant Pathol.2003. 109. P.743-754.

225. Wang Z. G., Feng J., Tong Z. Human toxicosis caused by moldy rice contaminated with Fusarium and T-2 toxin // Biomedical and Environm. Sei. 1993. 6. P. 65-70.

226. Wiebe M. G ., Robson G. D., Trinci A. P. J . Effect of Choline on the Morphology, Growth and Phospholipid Composition of Fusarium graminearum II J. of General Microbiology. 1989. 135. 2 155-2 162.

227. Wilson A., Simpson D., Chandler E., Jennings P., Nicholson P. Development of PCR as assays for the detection and differentiation of Fusarium sporotrichioides and Fusarium Iangsethiae IIFEMS Microbiology Letter. 2004. 233. P. 69-76.

228. Windels С. E. Current status of Fusarium taxonomy //Phytopathol. 1991. 81/9. P. 1048-1051. Wollenweber H. W., Reinking O. A. Die Fusarium, ihre Beschreiburg, Schadwirkung und Bekampfung. Berlin: Paul Parey. 1935. 355 p.

229. Yagen, В., Joffe, A.Z., 1976. Screening of toxic isolates of Fusarium poae and Fusarium sporotrichioides involved in causing Alimentary Toxic Aleukia // Appl. Environm. Microbiol. 32. P. 423-427. , '

230. Yan W., Fregeau-Reid J., Rioux S., Pageau D., Xue A., Martin R., Fedak G., de Haan В., Lajeunesse J., Savard M. Response of Oat Genotypes to Fusarium Head Blight in Eastern Canada // Crop Sci. 2010. 50. P. 134-142.

231. Yli-MattilaM., Paavanen-Huhtala S., Parikka P., Konstantinova P., Gagkaeva Т., Eskola M., Jestoi M., Rizzo A. Occurrence of Fusarium fungi and their toxins in Finnish cereals in 1998 and 2000 // J. Applied Genetics. 2002. 43A, P. 207-214.

232. Yli-Mattila T., Paavanen-Huhtala S., Parikka P., Konstantinova P., Gagkaeva T. Molecular and morphological diversity of Fusarium fungi in Finnish and north-western Russia // Eur. J. of Plant Pathol. 2004. 110. P. 573-585.

233. Yli-Mattila T., Paavanen-Huhtala S., Parikka P., Konstantinova P., Gagkaeva T., 2004b. Molecular and morphological diversity of Fusarium species in Finland and northwestern Russia. II Eur. J. of Plant Pathol. 110. P. 573-585.

Информация о работе

Гаврилова, Ольга Павловна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2010
ВАК 03.02.12

Диссертация

Внутривидовой полиморфизм грибов секции Sporotrichiella рода Fusarium и характер взаимоотношений их с серыми хлебами - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы