Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину в зависимости от С-витаминной обеспеченности организма (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину в зависимости от С-витаминной обеспеченности организма (экспериментальное исследование)"

На правах рукописи

--

^«^ои^НУ 1 р

Багумян Эдуард Врежевич °

ВНУТРИСОСУДИСТОЕ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ С-ВИТАМИННОЙ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ ОРГАНИЗМА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03 00 04 - Биохимия

Автореферат диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Тюмень - 2007

003058718

Работа выполнена в ГОУ ЕПО «Тюменская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук профессор

Шаповалов Петр Яковлевич.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор

Соловьев Владимир Георгиевич

доктор медицинских наук профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО Башкортостанский

Государственный медицинский уи иверситет Росздрава

Защита состоится ^^ ^______2007 г в 9 часов на заседании

диссертационного Совета ДМ 2I3i.274.07 при ГОУ ВПО Тюменском государственном университете по адресу: г. Тюмень, ул. Пирогова. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале библиотеки Тюменского государственного университета

Автореферат разослан 2007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор биологических наук профессор

Е.А.Чирятьев

Общая характеристика работы

Витамин С - обязательный компонент питания для большинства представителей животного мира - определяет течение многих процессов жизнедеятельности [В В Ефремов, 1949, Б А Лавров, 1951, П Н Шараев, 2003, В П Мищенко и др , 2005, Chen С Y е а , 2005, Е С Kennett е а , 2006] Гемостаз также зависит от обеспеченности этим витамином, что и обусловило внимание к изучению связи гемостаз-витамин С Первоначально у больных со скорбутом не находили гипокоагулемии [В В Пашутин, 1902], но позже отметили позитивный эффект аскорбиновой кислота (АК) на свертываемость крови при С-гиповитаминозе [В М Новодворские 1928, Г Я Каган, 1953, Cooper М J е а, 2006, Kumari J е а 2006; Xie Zea, 2006] При некоторых формах кровоточивости дополнительное введение АК сокращало время свертывания крови и повышало активность ф II [А А Ахрарходжаев, 1961, Cotti, Larizza, 1936, Duckerhoff е а, 1940] Выяснилось, что скорбут сопровождается тромбоцитопенией [A JI Мясников, 1938, PBarchan еа, 1942], дефицитом фф I, II [В Копалейшвили и др, 1960] и гипокоагулемией С-витаминотерапия устраняла эти сдвиги, не влияя на те же показатели у лиц без дефицита витамина С, поэтому допускали нормализующее действие АК на некоторые прокоагулянты и общую свертываемость [С М Рысс и др , 1945, Duckerhoff Н еа, 1940], чему, однако, противоречили другие наблюдения [М В Игнатьева, 1963, К И Степашкина, 1939, Б И Рубинштейн и Е В Лебедева [1940]

Эффекты АК положительны при гинекологических и других видах кровоточивости [БИКузник и др , 1964, 1974, 1976,, Junghans, 1935 Vogt, 1935] Находили, однако, что АК, оказывая гемостатическое действие при климактерических кровотечениях, не влияет на время свертывания и содержания тромбоцитов [М М Домбровский, 1964], что связывали с действием АК на состояние сосудов [В Копалейшвили и др , 1960] Связь между С-гиповитаминозом и наклонностью к геморрагии подтвердилась экспериментально [И С Краевская,1940], а работы лаборатории проф БАКудряшова (МГУ) указали как на причину кровоточивости при С-дефицитах тромбоцитопению и малую тромбопластическую активность тромбоцитов [Г В Андреенко, Н П Сытина, 1959, Г В Андреенко, 1960, Г В Андреенко, ЛВЛютова, 1969] Подтверждалась возможность влияния АК на гемостаз при С-дефицитах и через изменение активности прокоагулянтов [В С Шевченко, 1969, Л В Лютова, 1971, Cotti Z , Lanzza, 1936, Sen е а , 1994] Находили, что АК не влияя заметно на свертываемость крови при нормальной обеспеченности витамином С, вызывает гипокоагулемию после длительного [В П Мищенко и др, 2005] и кратковременного введения в умеренных дозах АК у здоровых [А В Костинская, 1958] Находили небольшой рост уровня ф VIIIФВ и снижение активатора профибринолизина при дефиците витамина С [Toiler е а, 2000], установлена зависимость между ЛПО и уровнем маркеров ВТФ при аденоме простаты, атеросклерозе сосудов нижних конечностей, ИБС и токсическом зобе [И Физдель, 2004, ЭНСогрин, 2005, И Г Леонтьев, 2006, А В Фатеев, 2006], при введении половых стероидов и других прооксидантов [П Я Шаповалов, А И Бродер, 2002, И А Аптекарь, 2003] То же нашли у беременных и родильниц с поздним гестозом [Е А Винокурова, 2006] При всех этих состояниях препараты, содержащие витамин С, ограничивали сдвиги ЛПО и свертываемости крови

Выявлена роль С-витаминной обеспеченности в состоянии гемостаза при умеренной гомоцистеинемии, повышающей риск тромбозов через рост адгезивных свойств эндотелия - АК блокирует эффекты гомоцистеина [Labmjoh еа, 2001, Labinjoh еа, 2001] Нагрузки АК, не влияя на уровни активатора и ингибитора профибринолизина ткани, ФГ, ф VIII ФВ и на вязкость крови на фоне нормы, повышают уровень ф VIII ФВ [Toiler е а , 2000], снижают активность эндотелия, скорость ЛПО и активность

фибринолиза на фоне С-авитаминоза у пациентов с интолерантностью к глюкозе и у курильщиков [Antoniades еа, 2003, Tomiyama еа, 2003], усиливают ответ сосудов на вазодилататоры [Pellegrini е а , 2004], ка< впрочем, и другие антиоксиданты [Sumitra е а , 2001, Chen е а, 2005], предотвращают активацию тромбоцитов, увеличивая выход NO из полиморфноядерных лейкоцитов [Raghavan е а, 2003] Все эти данные, однако, не характеризуют общего состояния системы, ответственной за стабилизацию крови при экстремальных воздействиях, изменяющих ЛПО [В П Мищенко, 1981, А Ш Бышевский и др, 2004, 2005, 2006] и толерантность организма к тромбиногенезу [М К Умутбаева, 2005]

Так как нельзя составить ясного представления о характере влияния дефицита или избытка витамина С на непрерывное вьутрисосудистое свертывание, об интенсивности которого можно судить о наклонности к тромбообразованию или кровоточивости [ИНБокарев, 2000, ДМЗубаиров, 2000, М К Умутбаева, 2003, П Я Шаповалов и др , 2005, Gawaz, 2001], мы провели исследования, которые, как нам казалось, позволят получить важные для теории и практики медицины данные, позволяющие обосновать использование АК как средства направленного воздействия на систему гемостаза Цель исследования Экспериментально изучить изменения интенсивности внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину (способности реагировать на гипертромбинемию) в зависимости от уровня С-витаминной обеспеченности организма

Задачи: 1 Изучить агрегационную активность тромбоцитов, их способность высвобождать фф Рз и Р4, содержание продуктов ВТФ и толерантность к тромбину у несинтезирующих витамин С животных (морские свинки) при содержании их на рационе питания, отчасти или полностью лишенного витамина С, 2 То же изучить при введении избытка витамина С морским свинкам на фоне полноценного питания, 3 Изучить то же у витамин С-синтезирующих животных (белые крысы) при содержании их на рационе питания, свободном от витамина С и содержащем его, 4. Изучить в опытах на свинках зависимость эффектов витамина С на уровень маркеров ВТФ, толерантность к тромбину и активность тромбоцитов при угнетении или активации процессов ЛПО

Научная новизна.

Установлено, что между уровнем маркеров ВТФ, характеризующим интенсивность внутрисосудистого свертывания крови, и толерантностью к тромбину у животных, несинтезирующих витамина С при C-гипо-, С-авитаминозе и избыточном введении АК существует обратная зависимость - при дефиците витамина С растет содержание маркеров ВТФ, а толерантность к тромбину падает, при дополнительном введении АК содержание маркеров ВТФ снижается, а толерантность к тромбину растет

Показано, что толерантность к тромбину и содержание маркеров ВТФ изменяются у животных, не синтезирующих витамин С', с увеличением длительности их содержания на С-авитаминном рационе

Впервые показано, что у животных, синтезирующих витамин С, его отсутствие в рационе не ведет к снижению толерантности к тромбину и росту уровня маркеров ВТФ, при введении избытка АК на фоне полноценного рациона питания уровень маркеров ВТФ у них снижается, а толерантность растет с увеличением дозы АК В то же время у животных, несинтезирующих витамина С, существует параллелизм между ускорением непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и ростом интенсивности ЛПО, у синтезирующих витамин С животных эте зависимость менее выражена

Практическая ценность работы 1. Полученные данные обосновывают необходимость контролировать интенсивность

внутрисосудистого свертывания крови путем оценки содержания плазменных маркеров ВТФ при состояниях с недостаточной обеспеченностью организма витамином С 2. Полученные нами данные использованы при написании двух монографий «О роли щитовидной железы в регуляции гемостаза», М Медицина - 2006) и «Витамины, вну-трисосудистое свертывание крови и липидпероксидация» (Москва Медицина - 2006) 3. Результаты работы внедрены в практическую деятельность ряда лечебных учреждений г Тюмени и Тюменского региона

Положения, выносимые на защиту

1 Дефицит витамина С у несинтезирующих его животных ведет к ускорению непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и ослаблению защитной реакции организма на гипертромбинемию при одновременной интенсификации процессов перекисного окисления липидов и снижении антиоксидантного потенциала

2 Нагрузки аскорбиновой кислотой в дозах, превышающих суточную потребность в 2-3 раза, ведут к снижению интенсивности липидпероксидации и внутрисосудистого свертывания крови при одновременном росте толерантности к тромбину, а при значительном (четырех- и восьмикратном) избытке аскорбиновая кислота проявляет прооксидантный эффект, особенно у животных, синтезирующих витамин С

3 Зависимость уровня маркеров интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину от витамина С определяется его свойством поддерживать способность тромбоцитов к агрегации и к высвобождению фф Р3иР4

Апробация и публикация. Результаты работы опубликованы 1 В рецензируемых медико-биологических журналах - 2 статьи, 2 В монографиях «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация» (М Медицина, 2006 - 95 с), «О роли щитовидной железы в регуляции гемостаза» М Медицина - 2006 - 95 с) 3 В виде главы в упомянутой монографии, 4 В материалах республиканских, международных и зарубежных конференций, в заочной электронной конференции, проводимой РАЕ

Доложены на научн конф "Биологически активные добавки к пище -нутрицевтики - и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях" (Тюмень, 1995), III Российской (с международным участием) конференции в НЦ ССХ им Бакулева (Москва)

Структура и объем диссертации Работа изложена на 146 страницах, содержит 12 таблиц и 9 рисунков, включает введение, обзор литературы, собственные исследования (материалы, методы и результаты), обсуждение, выводы и практические рекомендации, список литературы (333 публикации - 216 отечественных и 117 зарубежных) Материалы и методы исследований

Работа выполнена на морских свинках (252 особи, 360±20 г) и нелинейных белых крысах (512 особей, масса тела 175±15 г и 200±16 г) Свинки выбраны потому, что они не синтезируют витамина С, являясь корректным объектом для моделирования С-гипо-витаминоза [Е Б Меньшикова и др , 2006], в том числе и при изучении гемостаза [Г В Андреенко, Н П Сытина, 1958-1960, ГВАндреенко, ЛВЛютова, 1969 А Ш Бышевский, 1967, 1969, Б А Кудряшов, 1975] Выбор крыс связан с тем, что для них разработан оптимальный рацион питания, известна суточная потребность в витаминах, тем, что состояние гемостаза под влиянием разнообразных воздействий преимущественно изучали на крысах У крыс и свинок удобно брать пробы крови из яремной вены (непосредственно в шприц со стабилизатором) в количестве, достаточном для определения всех изучавшихся показателей - до 40 мл/кг массы тела, не нарушая гемостазиологических требований [3 С Баркаган, А П Момот, 1998]

Учитывая сезонные сдвиги в гемостазе и его зависимость от метеофакторов [А Ш Бы-шевский и др, 1986], в каждую серию включали контрольную группу, кроме серий с малыми интервалами между опытами Кровь брали в шприц из обнаженной овальным разрезом яремной вены у наркотизированных диэтиловым эфиром животных (стабилизатор - 3,8% раствор цитрата натрия, 1 9) Рану закрывали кожным швом

Пищевой рацион Рацион питания морских свинок был приближен по составу к такому, который обеспечивает прогрессивный прирост массы тела и увеличивает приплод сено, свекл,i, овес, морковь, печеный хлеб, молоко, дрожжи и водопроводная вода [К Л Ковалевский, 1949] - полноценный рацион Содержание витамина С в суточной порции рациона составляло 5 5 мг на кг массы тела, т е было близким к расчетной величине, вычисленной по таблицам химического состава пищевых продуктов [К JI Ковалевская, 1948, АИШтенберг, 1960] С-авитаминный рацион состоял из тех же продуктов, с инактивированной АК в сене, свекле и моркови (автоклавирование -120° С, 2 раза по 1 ч), а в молоке - кипячением в течение 1 ч [рекомендации Всесоюзной конференции по витаминам, 1934 г] После такой обработки витамин С в составе рациона не обнаруживался Как С-гиповитаминный использовали С-авитаминный рацион с добавкой 1 1 АК на кг массы тела в сутки Эта добавка отодвигает на 6-7 дней появление признаков С-витаминной недостаточности и появление явных признаков скорбута [А Ш Бышеиский, 1959]

Источниками бите мина А и каротина в С-авитаминном рационе являлись морковь, молоко и сено - эта витамины лишь частично разрушаются при использованной обработке [Б Г Савинов, 1948] Суточную потребность в витаминах группы В, витаминах РР и D обеспечивали высушенные на свету дрожжи - 0 4 г/кг массы в сутки Источник витамина Ев- овес [П X Попандопуло, 1949] Аналогичные или близкие рационы использовались и при изучении гемостаза [ГВАндреенко и др 1958-1960, 1969 А Ш Бышевский, 1967, 1969, 1978, Л В Лютова, 1971, Б А Кудряшов, 1975]

Итак, АК в дозе 5 5 мг/кг в сутки вводили в контрольных группах При изучении влияния С-гиповитаминного рациона нг гемостаз вводили АК в дозе 1 1 мг/кг в сутки При изучении эффекта нагрузок витамином С свинкам вводили на фоне полноценного рациона двух-, трёх- или четырехкратные суточные дозы АК (соответственно 110, 16 5 или 22 0 мг/кг в сутки) Вводили АК глазной пипеткой в ротовую полость в виде водного раствора (в утренние часы)

Для крыс использовали рацион института питания АМН СССР [Инструкция 1952], основная диета которого удовлетворяет потребность крыс в белках, липидах и углеводах, минеральных солях и витаминах, коммерческий казеин - 18% по калорийности, крахмал маисовый - 55% по калорийности, подсолнечное масло - 27% по калорийности Потребность в минеральных солях обеспечивается солевой смесью Витамины вводили ежедневно в соответствии с суточной потребностью А - 200 ME, D -40 ME, Е - 1 5 мг, В, - 200, В2 - 250, В6 - 200, В,5 - 1500, РР - 250 мкг и холин - 50 мг на кг массы тела в сутки Жирорастворимые витамины вносили в порцию подсолнечного масла, туда же вносили навески казеина, крахмала и солевой смеси Смесь вносили в сосуд с кипящей дистиллированной водой, добавляя в нее предварительно водорастворимые витамины Образовавшуюся кашицу помещали в кормушку При раздаче пищевой смеси учитывали ее фактическое потребление - 100 г/кг массы тела [ОЯКурцинь, 1952] Преимущества этого рациона в сравнении со стандартами Дональдсона, характеризующими «идеальных» крыс [Hawk Р W, Ozer В L, 1954], многократно подтвер едены работами из институтов питания АМН СССР и УССР, а также кафедр гигиены питания Киевскою и Львовского медицинских институтов (19581975 гт) Так как крысы не нуждаются в поступлении витамина С, в опытах на них

изучали эффекты дополнительного введения АК в дозах 110, 16 5 или 22 0 мг/кг (и более) в сутки Значения доз взяты по аналогии с дозой для свинок, так как данных о потребности крыс в витамине С не существует (АК вносили в составе 'Л суточной порции рациона в утренние часы, а после ее потребления в кормушки помещали остальную часть рациона)

Состояние непрерывного внутрисосудистого свертывания оценивали, определяя в плазме крови продукты, содержание которых позволяет судить об интенсивности ВТФ 1. Содержание продуктов деградации фибрина (ПДФ) - маркера интенсивности внутрисосудистого свертывания крови и компенсаторной активации фибринолиза [Т А Рудницкая, 2003, Wada еа, 1994] - определяли по описанию [АШБышевский и др , 1991] 2. Содержание D-димеров (маркеры ВТФ или компенсаторного фибринолиза [Е Г Соболева и др 2003, Moerloose, Boehlen, 2003]) - с помощью латексной агглютинации с моноклональными антителами к D-димерам (набор «D-dimer test", Roche), результат выражали в мкг/мл эквивалентов фибриногена 3 Содержание РКМФ, растущее при повышении коагуляционной активности крови [С Т Ветриле и др 2003, Wada е а, 1996, 2003], определяли количественно - фенантролиновый тест [А П Момот и др, 1999] 4.Содержание ф Р3 в плазме вычисляли по разнице АВР до, и после освобождения плазмы от тромбоцитов - по Rabiner & Groder в описании [В П Балуда и др 1980] 5.Содержание ф Р4 - по действию прогретой и обедненной тромбоцитами плазмы на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной плазмы, степень сокращения времени свертывания - мера активности ф Р4 [В П Балуда и др, 1980] Высвобождаемые тромбоцитами фф (Р3 и Р4) - косвенные маркеры ВТФ - их содержание пропорционально уровню в крови тромбина, ускоряющего высвобождение 6. Количество тромбоцитов в периферической крови определяли, как описано [3 С Баркаган, АП Момот 1998] Потребность в их определении вызвана тем, что концентрацию тромбоцитов следовало корригировать при оценке агрегации [3 С Баркаган, 1998, Wada е а, 2003] 7. Спонтанную агрегацию тромбоцитов определяли по Н И Тарасовой в описании [В П Балуда и др , 1980] 8. АДФ-индуцированную агрегацию определяли агрегометром "Биола", конечная концентрация АДФ 0,01 мг/мл [ЗА Габбасов и др, 1989] Концентрацию тромбоцитов в плазме приводили к 250-500 тыс клеток/мкл (диапазон, корректный для работы на агрегометре), разбавляя исследуемую плазму (1 2) обедненной тромбоцитами плазмой Оба вида агрегации также косвенно свидетельствует об уровне тромбинемии, так как тромбин является индуктором образования агрегатов [А С Шитикова, 2000]

Результаты определений уровня фф Р3, Р4, являются одновременно и показателями интенсивности ВТФ и активности тромбоцитов (вместе с показателями СА и АДФ-аг-регации) 9. Концентрация в плазме осаждаемого тромбином фибриногена определяли спектрофотометрически [А Ш Бышевский, В Мохнатов, 1969]

Содержание витамина С и витамин С-обеспеченность организма оценивали, определяя количество АК в крови и ее поглотительную способность по отношению к АК Применяли прием, включающий титрование безбелковым фильтратом крови 2,6-ди-хлорфенолиндофенола [М М Эйдельман, Ф Я Гордон, 1948, 1951] Определение способности крови поглощать АК, в отличие от однократного определения в ней количества витамина С, указывает на дефицит витамина Сив тех случаях, когда содержание АК не снижено Оценка состояния С-витаминной насыщенности путем определения поглотительной способности крови в клинике и эксперименте давала положительные результаты [А М Агалецкая, 1948, ММ Эйдельман и Н Г Цариковская, 1955, М М Эйдельман, 1956, А Ш Бышевский, 1966,1978]

Для оценки ЛПО и АОП определяли 1. Содержание первичных и вторичных

липидпероксидов (ДК и ТБК-продуктов), 2 Период индукции (ПИ), 3 Скорость окисления (СО) Липиды экстрагировали смесью (11 по объему) гептана и изопропилового спирта в 100-кратном избытке Содержание ДК устанавливали по оптической плотности (X. - 232 нм) гептановой фазы Содержание продуктов ЛПО, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), определяли в экстракте флуорометри-чески [В НУшкалова, 1987] Интенсивность флуоресценции возбуждения оценивали на флуориметре «Биан 130» В экстрактах же определяли кинетические величины прямого инициированного окисления липидов молекулярным 02 в присутствии инициатора свободнорадикального окисления динитрилазобисизомаслянная кислота ПИ выражали временем, затрачиваемым на поглощение пробой 25 мм3 02, а СО - углом наклона линейного участка кинетической кривой [С Н Ельдецова, 1990]

Модифицировали ЛПО и АОП ацетатом свинца (прооксидант) или димефосфоном (антиоксидант) Ацетат свинца вводили в дозе (50 мг/кг массы тела), которая активирует ЛПО и снижает АОП за 10-15 дней [В Г Соловьев, 1997, МКУмутбаева, 2003] Сравнительно малый эффект объясняется тем, что всасывается лишь около 5% добавленного к рациону ацетата свинца [Материалы ВОЗ Свинец, 1980] Димефосфон (ДМ) - 1,1-диметил-З-оксибутирилфосфоновая кислота) - синергист физиологических антиоксидантов - не влияет на гемоста) [С ЛГалян, 1993, В Г Соловьев, 1997], в дозе 1г/кг повышает у животных АОП [С Н Ельдецова, 1990] Однократное введение такой дозы изменяет агрегацию примерно на 50% -те в степени, позволяющей выявлять эффект других антиоксидантов [М К Умутбаева, 2005] Суточные порции прооксиданта и антиоксиданта вводили свинкам орально глазной пипеткой в утренние часы одновременно с АК или без нее, а кры;ам - с утренней порцией рациона Определяли ЛПО и АОП в тромбоцитах, которые, выделяя и отмывая их [А Б Самаль и др , 1989] Толерантность к тромбину определяли согласно описанию в патенте [А Ш Бышевский и др , 2003] Результат рассчитывали по формуле, включающей концентрацию ФГ (%) в плазме крови крыс, которым тромбин нг вводили (исходный уровень), и уровень ФГ (в %) после введения тромбина (остаточная концентрация)

И = {1- [(Си-Со): Ск]} х 100

где Б - остаточная концентрация ФГ, %, Ск - его концентрация в плазме крыс, которым тромбин не вводили и другим воздействиям не подвергали (исходный уровень), Со - концентрация ФГ у крыс, которым ввели тромбин на фоне изучающегося воздействия или без него (остаточная концентрация)

Значение остаточной концентрации ФГ у крыс, которым тромбин ввели без предварительных воздействий, принимали за 100-процентную толерантность к тромбину, и устанавчивали степень и:менения (в %) толерантности при изучаемом воздействии по формуле Х% = (Бо : Бк)х100, где X - толерантность к тромбину в %, Бо - остаточная концентрация ФГ (в %) у группы, подвергавшейся изучаемому воздействию, Бк - остаточная концентрация ФГ (в %) у группы, не подвергавшейся изучаемому воздействию (контрольная группа) Специфичность способа обусловлена тем, что ФГ - основной субстрат тромбина в процессах свертывания [В П Балуда и др , 1995, Д М Зубаиров, ?000], и тем, что изменение уровня ФГ, реагирующего на тромбин, при экзогенной гипертромбинемии зависит от состояния всех систем, обеспечивающих выживание организма при ускоренном тромбиногенезе [Б А Кудряшов, 1975, ДМ Зубаиров, 2000]

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Вначале изучили эффективность применения ранее описанного С-гипо- и С-ави-таминного рационов, определяя при их использовании уровень витамина С в крови

спинок и её поглотительную способность. Анализ выявил (рис. 1), что рационы отвечают задачам работы: 1) при полноценном рационе не изменяется в течение 3-х недель уровень витамина С и С-поглотительная способность крови у свинок, получавших С-гипо- или С-авитаминный рацион, 2) прогрессивно снижается содержание витамина С в крови и растет её С-поглотительная способность, особенно при С-авитаминном питании, и это согласуется с результатами осмотра и вскрытия свинок (снижение прироста, затем и убыль массы тела, тусклая шерсть, малая подвижность, снижение аппетита, петехии).

Рисунок 1. Изменения уровня витамина С и С-поглотительной способности крови (абсолютные величины) в зависимости от рациона (уровень в крови витамина С умножен на 10, чтобы поместить его в этой же системе координат) Следовательно, все разновидности рациона по влиянию на С-витаминную обеспеченность соответствуют задачам работы - можно сопоставлять сдвиги С-гипо-и С-авитаммнного рационов с показателями при полноценном рационе. Это позволило провести эксперименты с определением изучавшихся показателей на 7-й, 15-й и 21-й дни содержания свинок на С-гипо и С-авитаминном рационах.

Оказалось (табл. 1) что к 7, особенно к 15 дню растут активность тромбоцитов (высвобождение фф. Р3 и 1'4. СА и АДФ-агрсгация) и скорость ВТФ (реет плазменного содержания маркеров). К 21 дню признаки активации тромбоцитов уменьшаются, а содержание прямых маркеров ВТФ увеличивается.

Ускорение ЛПО и снижение АОП, в отличие от сдвигов в гемостазе, нарастало до 21-го дня. Толерантность к тромбину снижалась у свинок до 21-го дня опытов, что более выражено при С-авитаминном питании.

Таким образом, при дефиците витамина С возникают сдвиги, аналогичные тем, которые выявляли при введении прооксидантов различной природы - тироксина, половых стероидов, свинца [Р. Г. Ал боров и др., 2000; И.А.Карпова и др., 2001; Л Л,Шаповалов и пр., 2002). Следовательно, отсутствие или дефицит АК оказывает такое же влияние на гемостаз, как про оке ид анты. Это согласуется с представлением об антиоксидантных свойствах АК и подтверждается в наших экспериментах тем, что отсутствие АК в рационе ускоряет ЛПО и снижает АОП пропорционально длительности опытов. При содержании АК в рационе свинок в объеме суточной потребности, интенсивность ЛПО и величина АОП близки к данным, полученным в опытах на животных, синтезирующих витамин С [И.А.Дементьева, 1998; И.В.Раль-

ченко, 1998, Е А Матейкович, 2006], и дштельно остаются постоянными

Таблица 1 Содержание маркеров В ГФ, толерантность к тромбину, ЛПО и АОП у свинок на 7, 15 и 21 дни содержания их на С-гипо- или С-авитаминном рационе

Свинки получали С-гиповитаминный (1-я строка) или

Показатели Контроль С-авитаминный рацион (2 -я строка)

7-й день 15-й день 21-й день

Р3% 80 9±2 0 81 0±2 1 86 1±1 2*+ 75 0±2 1*+

(п-8) 85 212 2* 92 0+2 2*+ 72 1+1 9*+

Р4,с 3 1±0 03 3 610 02*+ 4 3±0 03*+ 2 310 02*+

(п-8) 4 И-05*+ 5 0±004*+ 1 8±0 01*+

ФГ, г/л 2 1±0 08 2 1±0 08 1 9+0 02*+ 1 7+0 02*+

(п-8) 1 8+0 05* 1 5+0 01*+ 1 2+0 01*+

ПДФ, мг% 14 2±1 0 14 8±1 1 15 3+1 0*+ 20 1±1 4*+

(п-8) 15 9±1 2*+ 18 7±1 1*+ 25 311 6*+

РКМФ, мкг/мл 22 4±1 1 22 9±1 1 26 7±1 0*+ 28 8+2 0*+

(п-8) 25 2±1 3*+ 31 2±2 1*+ 35 6±2 5*+

Э-Д, мкг/мл 0 19±0 006 0 1810 007 0 22+0 007*+ 0 26 0±0 008*+

(п-8) 0 2310 005*+ 0 27+0 008*+ 0 3310 011*+

СА, % 4,1±0 04 4,4±0 06 6 8±009*+ 5 1±0 03*+

(п-8) 4 810 07*+ 10 1±0 11*+ 7 010 04*+

АДФ-АГ, % 52 0±2 1 55 4±2 4 68 7+3 5*+ 61 212 3*+

(п-8) 60 1±3 0*+ 74 913 9*+ 651+*+

ДК, А/мгЛП 0 041±0 004 0 04310 006 0 063±0 001*+ 0 07810 008*+

(п-8) 0 05410 004*+ 0 092±0 001*+ 0 13110011*+

ТБК, ед/мг ЛП 0 65±0 051 0 6910 051 0 72±0 025*+ 0 8110 022*+

(п-8) 0 7610 056*+ 0 83±0 034*+ 0 94±0 041*+

ПИ, мин/мл 45 1±3 1 43 1±3 3 37 8±1 6*+ 30 9111 9*+

(п-8) 40 1±3 0*+ 34 6+2 0*+ 28 2±2 2*+

СО, мм■* в мин 0 6810 05 0 7110 04 0 80+0 06*+ 0 93±0 03*+

0 8310 05*+ 0 9310 08*+ 1 0910 02*+

Т к ТР, % 95 4±8 6 88 1±4 4*+ 75 2±3 1*+

(п-7) 100 88 2±7 3*+ 64 7+3 6*+ 51 8+2 8*+

Примечания Т к ТР - толерантность к тромбину, знак * - достоверное отличие от соответствующей величины в контроле, знак + - достоверное отличие от соответствующей величины в предшествующий срок отбора проб Ускорение внутрисосудистого свертывания крови (рост уровня маркеров ВТФ) при дефиците витамина С согласуется с обнаруженным снижением уровня ФГ -следствием его ускоренного потребления, и это согласуется с тем, что толерантность к тромбину снижается, а рост уровня маркеров ВТФ выявляется на протяжении трех недель эксперимента То, что на 3-й неделе кормления С-гипо- и особенно С-ави-таминным рационом активность тромбоцитов, вначале повысившаяся, затем снижалась, можно объяснить истощением клеток Это согласуется с найденной у лиц с диабетом типа I активацией тромбоцитов [И И Дедов и др, 1995, 1996], сменяющейся позднее снижением их активности [Р Г Алборов, 2003 Ю В Нелаева, 2003]

В соответствии с задачами работы не имело смысла продолжать исследования после двух недель пребывания животных на С-гипо- и С-авитаминном рационе, т к в дальнейшем свинки потребляли корм в уменьшенном количестве (С-гиповитаминоз), в связи с чем на дефицит витамина С наслаиваются последствия алиментарного

голодания и, следовательно, недостаточности витаминов других групп.

Установив, что дефицит витамина С вызывает пропорциональное степени недостаточности ускорение ДПО, снижение АОП, активацию тромбоцитов и ускорение ВТФ уже к концу 1-й и особенно к концу 2-Й недели, мы пытались установить порядок появления этих сдвигов. Для этого брали пробы крови чаше между 7 и 15 днями аналогичного опыта. Быстроту увеличения сдвигов оценили, сопоставляя графически значения степени их отклонения от контроля в процентах. На рис. 2 приведены данные, полученные при С-авитаминозе. Здесь видно, что уже на 7-й день наиболее значимо повышено содержание липидпероксидов (ДК и ТЕК) и снижен АОП (укорочение ПИ и рост СО), за ними следуют показатели активности тромбоцитов (Р4, СА и АДФ-агрсгация). Изменения эти нарастают и в последующем, сохраняя соотношение между величинами, характеризующими эти сдвиги относительно контроля.

■ р-4 □ фг □ пдф ■ ркмф о д-д а са о адф-аг ■ Дк втек о пи □ со «т

145 ■ 125 105 85 65 15 25 5 -15

1

■ Я 1 1,. 1 [Г II

ш и II_л

ьт-Iй ™ 1

Рисунок 2. Степень изменений (% к контролю - рациону с дозой АК, равной суточной

потребности) активности тромбоцитов, маркеров ВТФ, ЛПО, АОП и толерантности к тромбину при С-авитамннном питании. Столбцы диаграммы слева направо: фф. Р4> фибриногенемия (ФГ), ПДФ, РКМФ, О-димеры, спонтанная агрегация, АДФ-агрегация, диеновые конъюгаты (ДК), ТБК-активные продукты, период индукции (ПИ), скорость

окисления (СО) и толерантность к тромбину (Т.к ТР) За этими показателями (по степени их изменения относительно контроля) располагаются величины, которые характеризуют сдвиги содержания маркеров ВТФ, Степень снижения уровня ФГ, как характеристика его потребления, заметно увеличилась только к концу опыта, когда интенсивность ВТФ уже существенно увеличилась. Мы не приводим данных у свинок с С-гиповитаминным питанием - они идентичны по направленности найденным у свинок с С-авитаминозом.

Категорически утверждать, что при С-авитаминозе рассматриваемые сдвиги развиваются в предполагаемой последовательности (вначале ЛПО и АОП, затем активация тромбоцитов, затем ускорение ВТФ н падение толерантности к тромбину) нет достаточных оснований, хотя именно в таком порядке протекают сдвиги этих показателей при активации ЛПО введением прооксидантов. При введении антиоксидантов последовательность изменений такова же, но противоположна по направлению [Э.А.Шабанов, 2000; Е.А.Матейкович, 2006; А.Ш.Бышевский и др.,

2006].

Для выявления связей между изменением изучавшихся показателей сопоставлен характер кривых, отражающих сдвиги во времени. На рис. 3 сравнивается динамика изменений (при С-авитамивозе) уровня вторичного липидпероксида (ТБК), ПИ, фф. Р3, Р4( СА и АДФ-агрегации: изменения всех величин в зависимости от длительности опытов линейны - коэффициенты аппроксимации, приведенные для каждого графика, предельно близки единице (от 0.89 до 0,98), Следовательно, зависимость между темпом нарастания скорости ЛПО, а также скорости снижения АОП с одной стороны, и степенью прироста агрегационной активности тромбоцитов и их способности к реакции высвобождения - с другой, близка к линейной. Это не говорит о том, какие из сдвигов инициирующие - ЛПО и АОП, или активность тромбоцитов. Однако, если учитывать, что С-авитаминоз - это устранение из участия в метаболизме одного из антиоксидантов (витамина С), то логично рассматривать ускорение ЛГГО и угнетение АОП инициатором последующих сдвигов.

ШЯШШ СА 1 1 АДФ-ДГ

"Линейный (АДФ-АП Линейный (ТБК) -Л*н#йиый (ПИ) Линнин^й {Р*4)

Рисунок 3. Динамика изменения (% к контролю) активности тромбоцитов, ЛПО и АОП при С-авнтаминном питании. В легенде слева направо фф. Р}, Р*, ФГ, ПДФ, РКМФ, Ш-димеры, спонтанная агрегация, АДФ-агрегания, диеновые конъюгаты (ДК), ТБК-актнвныс продукты, период индукции (ПИ), скорость окисления (СО) и толерантность к тромбину (Т.к ТР)

О такой же последовательности появления сдвигов свидетельствует и то, что инфузия тромбоцитов от реципиентов (крысы с гипероксидацией) нормальным крысам мало изменяет у них ЛПО [Р.Г.Алборов, 2006]. Видимо, инициатор

изменения активности тромбоцитов при дефиците витамина С - ускорение ЛПО. При этом степень активации тромбоцитов, особенно СА, несоразмерна степени активации ЛПО. Так, к 15-дню ЛПО, оцениваемая по уровню ТВК-продуктов, ускорилась на 40%, а СА на 151%. Однако, если учесть, что уровень ДК к тому же сроку увеличился на 138%, то вопрос о несоразмерности отпадает. Следует принять во внимание и то, что активированные хотя бы в малой степени тромбоциты аутокаталитически наращивают свою активность через ускорение тромбиногенеза, а тромбин активирует тромбоциты [Д.М.Зубаиров, 2000; А.С.Шитикова, 2000, 0а\ущ М.Р., 2001].

Сопоставляя у свинок динамику изменений активности тромбоцитов с изменением интенсивности ВТФ (при кормлении С-авитаминным рационом), мы нашли следующее. Сравнение графиков, отражающих сдвиги показателей активности тромбоцитов (содержание фф. Р3, Р.,, СА и АДФ-агрегация), с графиками изменения уровня маркеров ВТФ (ПДФ, РКМФ и О-димеры), обнаруживает следующее (рис. 4).

нм 1-1ПДФ

г 1 ркмф ш д.д

тшш ДДФ-АГ ——Линейный | А* !Ф-АГ| -Линейный (СА)

——Лилейный { 1-д) -Линейный (П. !Ф) ——Линейный (Р-4)

-Линейный) р-3) -Линейным (Рг ЪЬ)

Рисунок 4. Динамика изменении (% к контролю) активности тромбоцитов, и содержания маркеров ВТФ при содержании свинок на С-авнтаминном рационе питали е.

Содержание маркеров ВТФ изменяется параллельно росту активности тромбоцитов, причем в период наблюдения прирост уровня маркеров ВТФ происходит линейно Особенно это относится к Ц-димерам - коэффициент аппроксимации соответствующего тренда равен единице, т.е. имеет место абсолютная «линейность» сдвига. В малой степени отклоняются от единицы и коэффициенты аппроксимации трендов, характеризующих динамику изменения содержания двух других маркеров ВТФ - ПДФ и РКМФ (они равны 0.892 и 0.968 соответственно).

На рис. 5 представлены графики, характеризующую динамику изменения во времени уровня маркеров ВТФ и толерантности к тромбину.

ИМПДФ РП РКМФ 1-1 Д.д 1 1 Т.К ТР

-Линейный (ПДФ) --Линейный (Д-д) -Линейный (РКМФ)-Линейный (т.к ТР)

Рисунок 5. Динамика изменения (в % к контролю) содержания маркеров ВТФ и толерантности к тромбину (Т.к ТР) при С-ав и там и ином питании.

Здесь видно, что степень изменений толерантности к тромбину линейно снижается с ростом уровня маркеров ВТФ (такое же отношение «толерантность к тромбину/маркеры» распространяется и на остальные маркеры ВТФ).

Обсуждение опытов, в которых изучали, как меняется гемостаз и ЛПО при С-авитамннозе, можно закончить следующим: 1. На ранних этапах скармливания С-авитаминного рациона несшггезирующнм его животным наряду с ускорением ЛПО и снижением АОП увеличивается агрегационная и «высвобождающая» способность тромбоцитов; растет плазменное содержание маркеров ВТФ, т.е. интенсивность непрерывного внутр«сосудистого свертывания крови, и одновременно падает толерантность к тромбину; 2. При развитом С-дефиците (21-й день при С-гипо- и особенно С-авитаминном рационе) активность тромбоцитов падает в сравнении с обнаруживающейся к концу 2-й недели наблюдений; усугубляется и снижение толерантности к тромбину; 3, Ещё более увеличивается содержания маркеров ВТФ и при появлении явных признаков скорбута; 4. Появляющиеся уже к 7-му дню признаки активации ЛПО и снижения АОП усугубляются в течение всего периода витамин С-дефицита.

В следующей серии опытов одна группа свинок получала АК в составе С-ави-таминного рациона в дозе, равной суточной потребности, другая группа получала ДМ в дозе, предупреждающей ги пер оксидацию (1 г/кг). Результаты опытов (табл. 2) показывают, что введение АК свинкам, в дозе, равной суточной потребности, практически предупредило все гемостатазиологические изменения. Это позволило считать, что они (изменения) вызваны дефицитом витамина С.

В дозе, поддерживающей обычную для данных животных, интенсивность процессов ЛПО и величину АОП при С-авитаминном питании, ДМ устранил сдвиги ЛПО и АОП, возникавшие у свинок в этих условиях на 7 и 15 дни С-авитаминного питания, и предупредил появление гемостаз иол о гических сдвигов.

На 21-й день сдвиги активности тромбоцитов оказались менее выражены, чем на !5-й день, но выше, чем в контроле. Уровень маркеров ВТФ, напротив, стал еще значительнее, заметнее снизилась и толерантность к тромбину.

В целом в конце 3-й недели у свинок, получавших АК или ДФ в составе С-

авитаминного рациона, изменения (в сравнении с С-авитаминным) сгладились лишь отчасти (некоторое ограничение уровня липидпероксидов, сдвигов ПИ и СО)

Таблица 2 Степень отклонения (в % к контролю) показателей активности тромбоцитов, содержания маркеров ВТФ, ЛПО и АОП, и толерантности к тромбину у свинок на 7, 15-й и 21-й дни содержания их на С-авитаминном рационе, том же рационе с добавкой АК, том же рационе

Контроль -1- я строка - свинки получали С-авитаминный рацион

Показатели (АК -2- я строка -тот же рацион+ АК (5 5 мг/кг/сут)

5 5 мг/кг/сут) -3 я строка - тот же рацион+димес осфон (1 г/кг/сут)

7-й день 15-й день 21-й день

Р3 % 19 7±1 8 7 8 14

(п -8) 3 2 0

0 0 10

Р4, С 3 2±0 02 16 53 44

(п -В) 1 9 9

1 16 34

ФГ, г/л 2 2+0 06 4 -23 -41

(п-8) 1 -14 -14

4 -9 -23

ПДФ, мг% 14 2±1 1 7 38 200

(п-8) 0 6 0

2 4 40

РКМФ, мкг/мл 22 4±] 1 4 43 72

(п -8) -4 0 7

0 0 32

О-Д, мкг/мл 0 20±0 006 40 65 90

(п -8) 15 10 15

5 5 45

СА, % 4,0±0 03 20 72 40

(п-8) 5 10 -5

7 2 27

АДФ-АГ, % 52 0+2 1 7 32 23

(п-8) 2 4 4

0 0 15

Ж, А/мг ЛП 0 044±0 003 14 45 75

(п -8) 0 102 77

-4 0 61

ТБК, ед/мг ЛП 0 66±0 050 12 И 23

(п -8) 0 -3 -3

-3 0 15

ГТИ, мин/мл 45 4±2 1 -10 -17 -34

(п-8) 3 -1 4

0 0 -7

СО, мм"1 в мин 0 70+0 04 13 16 31

4 3 36

1 1 18

Т к ТР, % -9 -15 -32

(п-7) 100 0 0 -5

0 -2 -И

Обозначения знак «-» - показатель уменьшен относительно контроля

Это видно из диаграмм (рис 6), характеризующих динамику СА, уровня Б-диме-ров, ПИ и и толерантности к тромбину у свинок, получавших С-авитаминный рацион без добавок, тот же рацион+АК или тот же рацион+ДМ Так, у свинок, получавших

С-авитаминный рацион, СА увеличена на 7 и 15 дни, снижаясь к 21 дню, но оставаясь выше исходного значения. Содержание И-ди миров у них растет до конца наблюдений, ПИ сокращается к 7 и 15 дням, отчасти восстанавливаясь к 21 дню, а толерантность К тромбину продолжает падать с увеличением длительности опыта.

Рисунок 6. Изменения (% к контролю) СА, содержания О-дямерав, ПИ и толерантности к тромбину при С-авитаминном питании свинок, том же питании+АК и том же питании+ДМ (слева направо в пределах всех сроков отбора проб) У свинок, получавших АК в дозе, равной суточной потребности, СА не меняется в ходе опытов. Уровень О-димеров слегка увеличен во все периоды опыта, но в меньшей мере, чем у свинок С-авитаминозной группы. ПИ и толерантность к тромбину у них практически не изменены. У свинок, получавших с рационом ДМ, СА немного увеличена на 7 и 15 дни, как у свинок, получавших АК, а к 21 дню -увеличена на 27%. Уровень Б-димеров не изменился на 7 и 15 дни, но увеличился к 21 дню (на 45%). ПИ не изменен на 7-й и 15-й дни, сократился к 21 дню. Толерантность к тромбину не изменена на 1 и 2 этапах опыта и снижена на 11% к концу наблюдений, т.е. меньше, чем при С-авитаминном питании без добавок. Не представленные здесь показатели активности тромбоцитов, интенсивности ВТФ и ЛПО изменялись аналогично приведенным на рис. 6,

Такое развитие событий позволяет предполагать, что инициатором сдвигов в ранние сроки дефицита витамина С служит ускорение ЛПО и снижение АОП, а следствие - активация гемостаза. При выраженной картине скорбута (21-й день), когда антиоксидантный эффект АК или ДМ ограничивают изменения ЛПО и, особенно, АОП, тромбоциты, сохраняющие повышенную активность, обеспечивают дальнейший рост содержания маркеров В'ГФ

Поэтому активацию тромбоцитов и связанное с этим ускорение ВТФ при длительном дефиците витамина С, вызвавшем скорбут, нельзя объяснить только выключением из оборота одного из анти оксида нто в, каким является АК. Об этом свидельствует тот факт, что подмена АК другим антиоксидантом (ДМ) не купирует полностью гемостатических сдвигов, хотя и ограничивает дальнейшую активацию

ЛПО и снижение АОП Данные литературы позволяют объяснять неспособность ДМ полностью устранить сдвиги в гемостазе нарушением функции эндотелия -сосудистого компонента гемостаза [А С Шитикова, 2000, Gawaz, 2001] Так, в частности, известно, что уже при умеренной гомоцистеинемии (гомоцистеин в малых количествах - нормальный компонент крови) усиливаются адгезивные свойства эндотелия, а введение витамина С блокирует этот эффект [Nappo е а, 1999, Labinjoh еа, 2001, Labinjoh еа, 2001] Известно и то, что нагрузки АК, не влияющие на уровни активатора и ингибитора профибринолизина ткани, ФГ, ф VIII ФВ и вязкости крови при нормальной обеспеченности витамином С, на фоне его дефицита повышают уровень ф VIII ФВ [Tofler е а, 2000] Обнаружено, что введение АК снижает активность эндотелия, уменьшая скорость ЛПО, и снижает активность фибринолиза на фоне С-авитаминоза, в то время как у лиц с нормальной обеспеченностью витамином С этого не наблюдают [Antomades е а, 2003, Tomiyama е а, 2003] АК усиливает эффект вазодилататоров [Pellegnni е а, 2004], а изменения просвета сосудов не может не сказаться на свертывающей активности крови

Установлено, что АК ограничивает и даже предотвращает активацию тромбоцитов, благодаря способности увеличивать высвобождение полиморфноядерными лейкоцитами оксида азота - соединения с антиагрегантной активностью [Raghavan е а, 2003] Наконец, доказана роль витамина С в формировании субэндотелия путем участия в гидроксилировании пролина в молекуле преколлагена, что необходимо для его трансформации в коллаген [П Н Шараев, 2004, В П Мищенко и др , 2005, Е Б Меныцикова и др , 2006]

Это позволяет заключить, что значение витамина С в процессах свертывания крови обусловлено не только антиоксидантными, но и его специфическими свойствами Поэтому ДМ, как антиоксидант, поддерживающий эффекты физиологических антиоксидантов, не в состоянии полностью предупредить те гемостазиологические изменения, которые возникают при С-авитаминозе - он устраняет только ту их часть, которая связана с ативацией ЛПО и снижением АОП в тромбоцитах - клетках в существенной мере определяющих состояние гемостаза как многокомпонентной системы

Наши данные - дополнительное свидетельство того, что гемостазиологические сдвиги при дефиците витамина С связаны со снижением АОП и с активацией ЛПО, но не только с этим, но также и с выключением при С-авитаминозе некоторых специфических функций витамина, обеспечивающих его косвенное участие в гемостазе

Далее, изучая влияние АК в дозах, существенно превышающих суточную потребность, мы нашли, следующее

Двух- и трехкратный избыток АК у свинок несинтезирующих витамин С и получающих рацион, включающий АК в соответствии с суточной потребностью, в малой степени тормозит ЛПО и повышает АОП, и это сопровождается столь же небольшим замедлением ВТФ, снижением агрегационной и «высвобождающей» способности тромбоцитов, не отражаясь на толерантности к тромбину (наблюдается лишь тенденция к ее росту, не подтверждаемая статистически) Четырехкратный избыток АК на фоне полноценного рациона у свинок сопровождается слабой активацией ЛПО и малым снижением АОП к концу 1-й и 2-й недель, однако, на 21-й день эти изменения привели еще и к небольшому увеличению скорости ВТФ, а также к повышению активности тромбоцитов и снижению толерантности к тромбину (рис

■ Р-Э »P-t ОФГ а ПДИ> «РКМФ ШД.д 1СА ОАДФ-Аг ■ ДК ■ ТБК ОПИ Ш СО «Т.к TP

fi '

Й JL

ft i 1 Hi

LI J it Ii _ [1

' у a

г i

7 * день 15-й день 21-й день

Рисунок 7. Динамика изменения (% к значениям при полноценном питании) активности тромбоцитов, уровня маркеров ВТФ, интенсивности ЛПО-ЛОП и толерантности к тромбину при питании рационом с АК в дозе, четырехкратно превышающей суточную потребность Здесь видно следующее: 1. Невелики сдвиги, отражающие тенденцию к активации (или к угнетению) тромбоцитов, уровня ВТФ, ЛПО и АОП; 2. Четко выражены сдвиги, отражающие ускорение ЛПО, снижение АОП, активацию тромбоцитов, рост содержания маркеров ВТФ и снижение толерантности к тромбину на 21-й день. Этот, кажущийся неожиданным, эффект можно рассматривать как причину снижения толерантности к тромбину у свинок, получавших четырёхкратную дозу АК.

Активацию ЛПО и снижение АОП при значительном избытке АК можно считать следствием проявления прооксидаптных свойств больших доз АК, которая может вести себя как активатор с в об о дно радикальных процессов [Е. Б. Меньшикова и др., 2006; Cohen А. Schwarz Е., f9Si; Burton G. е.а., 1990].

Это наблюдение подтверждает также и то, что эффекты АК на гемостаз обусловлены их влиянием на ЛПО, как установлено относительно витаминов А, Е и Р в экспериментах, позволивших сопоставить эффекты этих витаминов с эффектами антиоксиданта без витаминных свойств [Е.А.Матейкович, 2006; С.В.Минсвцев, 2006], У крыс, синтезирующих витамин С эффекты АК на тромбоциты, ВТФ, ЛПО, АОП и на толерантность к тромбину имели ту же направленность и заметно не отличались по степени (установлено нами при использовании дополнительных доз АК на фоне полноценных для обоих видов рационов питания). Это видно при сопоставлении данных в таблицах 3 и 4). Вместе с тем, есть и заме тное отличие: у свинок АК в дозе, превышающая суточную потребность в 2 и 3 раза, повысила толерантность тромбину на 9-10% в виде тенденции, о которой можно говорить потому, что во все периоды опыта есть прирост толерантности, не подтверждаемый статистически. У крыс в те же сроки толерантность при такой дозе АК выросла до 110, 121 и 127%. Видимо, у синтезирующих витамин С животных эти дозы АК обусловливают достаточное повышение насыщенности организма витамином С. Доза, превышающая суточную потребность в 4 раза, вызвала у свинок слабую тенденции к снижению толерантности к тромбину к 7 и 15 дням, реализовавшуюся к 21 дню (достоверное снижение на 12%). У крыс эта доза снизила толерантность уже к 15 дню (на 8.7%) и на 12.7% - к

21 дню. Видимо, в этом случае проявилась прооксидантная способность АК, к

| |

16

избытку которой крысы как животные, синтезирующие витамин С, более чувствительны

Таблица 3 Содержание маркеров ВТФ, толерантность к тромбину, ЛПО и АОП у свинок содержавшихся на полноценном рационе (контроль) или том же рационе с избытком АК

Показатели Контроль (полноценный рацион - 5 5 мг/кг АК в сут) -1-я строка - свинки получали тот же рацион+АК (11 1мг/кг/сут) - 2-я строка - тот же рацион+ АК (16 5 мг/кг/сут) - 3-я строка - тот же рацион+АК (22 мг/кг/сут)

7-й день 15-й день 21-й день

Р3% 79 6±1 2 81 0±15 77 3±1 4 77 9±2 1

(п-8) 78 3±1 1 75 0±2 1* 74 1±13*

77 2±0 8 78 2±1 2 85 4±1 7*+

Р4,с 3 4±0 02 3 6±0 02 3 5±0 04 3 6±0 02

(п-8) 3 3±0 03 3 1±0 02»+ 3 2±0 04+

3 7±0 09 3 5±0 04 41±0 02*+

ФГ, г/л 2 2±0 07 2 1±0 06 1 9±0 04 1 9±0 02

(п -8) 2 2±0 05 2 1±0 04 2 0±0 03

2 4±0 09 2 4±0 06 1 8±0 061*

ПДФ, мг% 14 2±1 1 15 4±0 5 15 0±1 2 15 0±1 6

(п-8) 14 0±0 5 12 0±0 7*+ 11 4±1 01*+

15 9±0 5 15 9±0 07 16 4±1 0*+

РКМФ, 23 0±1 0 24 7±1 0 22 4±1 0 22 8±1 6

мкг/мл 22 6±0 8 19 1±1 1*+ 20 3±1 1*+

(п-8) 22 4±1 1 25 1±1 0 26 3±1 0*+

о-д, 0 22±0 007 0 24±0 008 0 23±0 007 0 23±0 010

мкг/мл 0 23±0 008 0 18±0 006*+ 019±0 010*+

(п-8) 0 22±0 006 0 23±0 005 0 26±0 014*+

СА, % 4,0±0 03 4,3±0 06 4 4±0 09 4 1±0 04

(п -8) 4 1±0 05 3 8±0 04+ 3 7±0 02*+

4,2±0 04 4 6±0 04 4,7±0 04*+

АДФ-АГ, % 52 0±2 1 52 7±2 3 51 9±3 1 54 1±2 5

(п -8) 53 4±3 3 48 0±1 6 48 0±1 7*+

52 2±1 7 56 1±2 7 57 2±1 2*+

ДК, А/мг ЛП 0 044±0 004 0 047±0 005 0 043±0 012 0 046±0 004

(п -8) 0 043±0 006 0 038±0 011*+ 0 040±0 002*+

0 044±0 004 0 046±0 012 0 052±0 003*+

ТБК, 0 65±0 043 0 62± 0 048 0 63±0 029 0 61±0 025

ед/мг ЛП 0 64±0 054 0 57±0 019*+ 0 57±0 03*+

(п-8) 0 65±0 036 0 68±0 057 0 77±0 050*+

ПИ, мин/мл 45 1±2 0 44 7±3 1 47 2±2 5 47 0±1 4

(п -8) 46 0±3 7 43 1±0 8*+ 48 9±0 8*+

45 7±2 1 43 1±2 1 41 0±1 2*+

СО, мм3 в ми 0 68±0 03 0 69±0 04 0 67±0 11 0 64±0 01

(п-8) 0 71±0 08 0 53±0 03*+ 0 61±0 02*+

0 70±0 07 0 71±0 05 0 73±0 01*+

Т к ТР, % 109±7 9 110±8 9 108±8 9

(п-7) 100 112±8 3 113±9 8 106±97

98 6±4 5 98 6±5 1 881±3 1*+

Примечания * - достоверное отличие от той же величины в контроле, + - достоверное отличие от той же величины у свинок, получавших АК в 2-кратной дозе

Таблица 4 Содержание маркеров ВТФ, толерантность к тромбину, ЛПО и АОП у крыс, содержавшихся на казеиново-крахмальном рацион, при дополнительном введении АК в дозах 11 О, _16 5 и 22 0 мг/кг/сут (соответственно 1 -я, 2-я и 3-я строки)_

Показатели Контроль крысы получали С-ави-таминный рацион -1-и строка - тот же рацион+ АК (11 1 мг/кг/сут), -2-н строка тот же рацион+ АК (16 5 мг/кг/сут) - 3-я строка - тот же рацион+АК (22 0 мг/кг/сут)

7-й день 15-й день 21-й день

Р3% 69 1±1 0 71 2±14 67 2±1 1 66 9±2 0*

(п-8) 70 0±1 2 64 1±0 7* 61 5±1 1*

70 2±1 2 67 0±0 9 76 0±1 2*

Р<,с 3 4±0 02 3 6±0 03 3 1±0 03* 3 0±0 03*

(п-8) 3 3±0 03 3 0±0 02* 3 0±0 04*

3 5±0 09 3 5±0 04 4 0±0 01*

ФГ, г/л 2 3±0 06 2 3±0 06 2 4±0 02 2 1±0 03

(п-8) 2 2±0 05 2 2±0 03 2 0±0 04

2 5±0 09* 2 0±0 07 1 7±0 063*

ПДФ, мг% 14 9±1 0 15 1±0 6 15 0±1 1 13 4±1 1*

(п-8) 14 8±0 4 11 0±0 4* 10 4±0 8*

14 9±0 5 15 4±0 06 16 2±0 9

РКМФ, мкг/мл 23 9±0 8 23 б±0 9 22 0±0 6 21 0±1 1*

(п-8) 23 7±0 9 19 2±0 9* 18 6±1 0*

25 0 ±1 4 24 1±1 0 24 9±1 1

Э-Д, мкг/мл 0 18±0 006 0 19±0 007 0 16±0 007 0 14±0 008*

(п-8) 0 21±0 011 0 14±0 005* 0 13±0 011*

0 21±0 012 0 20±0 009 0 23±0 012*

СА, % 4,2±0 04 4,4±0 03 3 7±0 05* 3 4±0 04*

(п-8) 4 2±0 08 3 3±0 03* 3 2±0 02*

4,4±0 07 4 3±0 05 4,6±0 08*

АДФ-АГ, % 51 0±1 9 51 4±1 9 46 1±1 1* 44 2±2 1*

(п-8) 53 7±3 2 43 0±1 0* 41 4±1 3*

54 1±2 8 55 0±2 2 54 4±1 2*

ДК, А/мг ЛП 0 040±0 001 0 036±0 004* 0 033±0 010* 0 030±0 003*

(п-8) 0 033±0 002* 0 027±0 011 * 0 028±0 002*

0 041±0 004 0 043±0 012 0 047±0 001*

ТБК, ед/мг ЛП 0 60±0 041 0 58± 0 041* 0 51±0 022* 0 48±0 021*

(п-8) 0 54±0 054* 0 46±0 011* 0 44±0 02*

0 65±0 034 0 63±0 051 0 6910 033*

ПИ, мин/мл 40 1±1 1 44 5±0 9* 47 3±2 1* 49 2±0 9*

(п-8) 46 8±0 7* 48 5±0 8* 51 2±0 7*

40 7±1 1 39 4±1 8 37 1±0 6*

СО, мм'1 в мин 0 61±0 02 0 57±0 01* 0 54±0 13* 0 50±0 01*

0 56±0 02* 0 52±0 08* 0 48±0 01*

0 63±0 08 0 63±0 08 0 67±0 02*

Т к ТР, % 1Ю±2 1* 121±3 9* 127±5 1*

(п-7) 100 113±1 9* 123±6 4* 126±3 7*

99 5±2 5 91 3±4 1* 87 3±4 8*

Примечания Т к ТР — толерантность к тромбину, * - достоверное отличие от соответствующей

величины в контроле

Чтобы уточнить, ъедет ли себя АК в больших дозах как прооксидант, мы изучили в опытах на крысах эффекты восьмикратной (против суточной потребности) дозы -40 0 мг/кг/сут, и подтвердили это На рис 8 видно, что уже на 7-й день введения АК в этой дозе повысились агрегационная и «высвобождающая» активность тромбоцитов, уровень маркеров ВТФ, уровень ДК и ГБК, СО и снизился ПИ, т е активировалась ЛПО, снизился АОП, и ускорилось внутрисосудистое свертывание крови Видно и то,

что с увеличением сроков введения этой дозы ДК все сдвиги усиливаются при одновременном снижении толерантности к тромбину. Примечательно, что на 7-й и 15-й дни введения АК в восьмикратной дозе содержание ФГ выше илггрольного значения, и это согласуется с данными о способности витамина С ускорять биосинтез белков [Б.А.Лавров, 1951; В.Г.Ребров, О.А.Громов, 2003]. Однако к 21-му дню фибриногенемия снизилась, что можно рассматривать как признак ускоренного потребления ФГ в связи с активацией внутри сосудистого свертывания крови. Кроме этого к 7-му дню была ускорена ЛПО и чуть снижен АОП.

Вр-З ■ Р-4 ОФГ О Г1ДФ ВРКМФ ид-я ■ СА а АДФ-Аг • ДК ВТБК О ПИ О СО «Т.кТР

———- 1

а 1 И

. . 11 Хл 11|

я^шгь II

-.- 1-+—Ч

7-й дань 15-й день 21-й день

Рисунок 8. Динамика изменения (% к значению при полноценном питании) активности тромбоцитов, содержания маркеров В ТФ. интенсивности ЛЛО-АОП и толерантности к тромбину у крыс, получавших АК в дозе, восьмикратно превышающей суточную

потребность

О том же свидетельствует и заметный рост содержания О-димеров - продуктов фибринолиза, ускоряющегося в ответ на усиленное (в конце наблюдений) фибринообразование [3. С. Бар каган, 1978; А.Ш.Бышевский, 1990; Д.М.Зубаиров, 2000].

Следовательно, в избытке витамин С обнаруживает способность прооксиданта, и это может усиливаться с увеличением дозы (другие прооксиданты, например, свинец или тирозин, дозазависимо активируют ЛПО и снижают АОП [И.А.Аптекарь, 2003]).

К 15-му дню увеличился уровень фф. Рз и Р4, заметнее повысилась СА, АДФ-агре-гация и плазменное содержание маркеров ВТФ. Заметнее увеличилась к этому сроку скорость ЛПО, значительнее стала и степень снижения АОП. К концу наблюдений (21-й день) все рассмотренные изменения усугубились.

Таким образом, выяснилось, что большие дозы АК снижают АОП в тромбоцитах, ускоряют в них ЛТ10 и повышают агрегапионную и «высвобождающую» активности, и, видимо, в связи с этим, ускоряют ВТФ. Подтверждается это ещё и тем, что толерантность к ¡ромбику при введении АК в высокой дозе уже через неделю сопровождается тенденцией к снижению толерантности к тромбину, которое становится достоверным к 15 дню, усиливаясь (на 28.9%) к 21 дню.

Итак, при С-гипо-, особенно при С-авитаминном питании ускоряется ЛПО и снижается АОП. В связи с этим мы пытались выяснить, как влияет АК на гемостаз при гипероксидации или торможении ЛПО у синтезирующих и не синтезирующих витамин С животных. С этой целью изучили влияние АК на уровень маркеров ВТФ, активность тромбоцитов и толерантность к тромбину при ускорении и угнетении

ЛПО у морских свинок и крыс Это было необходимо, так как известна способность некоторых витаминов-антиоксидантов ограничивать сдвиги гемостаза заметнее при гипероксидации [И В Ральченко, 1998, СВМиневцев, 2005, П Я Шаповалов, 2005] Результаты экспериментов представлены в виде интенсивных величин табл 5 и 6

Таблица 5 Степень сдвигов активности тромбоцитов, содержания маркеров ВТФ, ЛО, АОП и толерантности к тромбину у свинок, получавших С-авитаминный рацион, или тот же рацион+АК (5 5 мг/кг/сут), или тот же рлцион+ АК+свинец (50 мг/кг/сут), или тот же рацион+ АК+димефосфон (1 г/кг/сут)

Контроль 1-я строка - свинки получали С-авитаминный

Показатели (С-авитаминный рацион+АК (5 5мг/кг),

рацион), абсолютные 2-я строка - тот же рацион+АК+свинец,

неличины 3-и строка - тот же рацион+АК+димефосфон

7-й день 15-й день 7-й день 15-й день

Рз% 85 2±1 4 95 2±1 7* -35* -40*

(п-6) 9*+ 14*+

-50*+» -49+»

Р4.С 3 6±0 02 4 8±0 04* -5* -3*

(П-6) 8* 20*+

-17*+» -25*+

ПДФ, 16 4±0 3 19 5±1 0* -13* -12*

мг% 69*+ 79*+

(П-6) -24*+» -16 9*+»

РКМФ, 24 6±1 1 32 3±0 8* -10* -34*

мкг/мл 42*+ 32*+

(п-6) -26*+» -47*+»

о-д, 0 27±0 005 0 30±0 007 -33* -37*

мкг/мл 44*+ 90*+

(п-6) -48*+» -70*+»

СА, % 4,8±0 04 6 7±0 06* -17* -37*

(п-6) 48*+ 22*+

-19*+» -68*+»

АДФ-АГ, 55 6±1 4 68 5±2 4* -19* -34*

(п-6) 24*+ 15*+

-26*+» -37*+»

ДК, А/мг Л) 0 051±0 00 0 062±0 01С -14* -32*

(п-6) 54*+ 43*+

-57*+» -56*

ТБК, ед/мг 0 74±0 51 0 75±0 021 -12* -11*

ЛП 70*+ 97*+

(п-6) -36*+» -48*+»

ПИ, мин/ш 40 0±1 6 37 6±1 1* 12* 19*

(п-6) -25*+ -40*+

57*+» 85*+»

СО, мм3 в 0 77±0 033 0 84±0 12* -11* -9*

мин 28*+ 41*+»

(п-6) -34*+» -45*

Т к ТР, % 91 4±4 1 85 0±3 3* 10* 49*

(п-8) -39*+ -39*+

31*+» 46*+»

Обозначения как к табл 2, Примечание величины, выраженные в %%, указывают насколько и в каком направлении (знах «-» - ограничение эффекта, отсутствие знака - прирост эффекта) изменен эффект С-недостаточности (1-я строка - при наличии в рационе АК, 2-я - при наличии в рационе АК и свинца, 3-я - АК и димефосфона)

Таблица 6 Изменения (в % относительно величин, найденных на 7-й или 15-й дни при питании рационом без АК) активности тромбоцитов, уровня маркеров ВТФ, ЛПО, АОП и ТкТР у крыс при _ введении им с АК, АК+ацетат свинца, АК+димефосфон_

Казеиново-крахмальный - 1-я строка - тот же рацион+АК (5 5 мг/кг),

Показатели рацион без добавки АК - 2-я строка - тот же рацион +АК+свинец

(50 мг/кг/сут)

- 3-я строка - тот же рацион+АК+ДМ (1 г/кг/сут)

7-й день 15-й день 7-й день 15-й день

Рз % (п -8) 67 91009 67 11008 0 0

6* 7*+

-10* -13*

Р4, с (п -8) 3 3±0 01 3 210 03 0 0

3*+ 6*+

-3+ -3

ФГ, г/л (п -8) 2 2±0 05 2 310 05 0 0

-12*+ -40*+

0 9*+

ПДФ, мг% 15 1±0 7 14 810 9 0 0

(п-8) 10* 20*+

0 -11*

РКМФ, мкг/мл 23 5±0 7 24 010 8 0 0

(п-6) 7* 9*+

0 -21*+

О-Д, мкг/мл 0 18±0 006 0 1910 006 0 0

(п-8) 22* 26*+

0 -21*+

СА, % (п -8) 4,1 ±0 03 4,210 05 0 0

7* 12*

0 -14*+

АДФ-АГ, % 50 3±0 7 51 111 1 0 0

(п-8) 8 10*+

8* 0 -10*+

ДК, А/мг ЛП 0 043±0 002 0 04010 002 0 0

(п-6) 7* 25*

-9* -12*+

ТБК, ед/мг ЛП 0 63±0 039 0 6110 042 0 0

(п-8) 5* 15*+

-5* -10*+

ПИ, мин/мл 40 4 ±1 0 39 810 9 0 0

(п -8) -8* -9*

8*+ 20*+

СО, ммJ в мин 0 63±0 03 0 5910 03 0 0

(п-8) 5* 34*

-5*+ -5*+

Т к ТР, % 100 100 0 0

(п-8) -21*+ -30*+

9 15*+

Примечания Т к ТР - толерантность к тромбину, * - достоверное отличие от величин в 1 -й (или 2-й) колонке цифр, + - от данных, полученных на 7-й или 15-й день (т е от данных 1 -й строки в той же колонке) Знак «-« - снижение, без знака «—« - повышение

Анализ данных указывает на следующее

1. У свинок (табл 5), при исключении витамина С из рациона растут уровни фф Рз и Р4, маркеров ВТФ, липидпероксидов, способность к агрегации и СО, сокращается ГШ (особенно на 15-й день) При ведении АК в дозе, равной суточной потребности, изменений нет 2 Ускорение ЛПО свинцом усугубляет сдвиги, вызванные дефицитом

АК особенно на 15-й день. 3, Введение ДМ на фоне АК в объеме суточной потребности устраняет сдвиги.

Следовательно, про оксид ант активирует тромбоциты, ускоряет ВТФ и ЛПО, снижая одновременно АОП. Антиоксидант, напротив, усиливает эффект АК, способствуя более полному устранению гемостатических сдвигов. Действие ДМ суммируется с действием АК не только на ЛПО и АОП, но и на гемостаз, хотя сум-мация и не является полной.

У крыс (табл. 6), изменения иные: 1. Добавление АК к С-авитаминному (казе и но в о - крахм ал ь н о му) рациону не изменило параметров гемостаза, ЛПО и АОП (выявлено лишь некоторое замедление ЛПО и небольшой рост АОП). 2. При введении крысам свинца на фоне тей же дозы АК растет активность тромбоцитов, содержание маркеров ВТФ и интенсивность ЛПО, снижаются АОП и толерантность к тромбину, однако, интенсивность сдвигов уменьшена. 3. При введении крысам ДМ одновременно с АК в дозе, эквивалентной суточной потребности свинок, наблюдаются слабо выраженные изменения противоположной направленности. Изменения усиливаются прн большей продолжительности опыта (к 15 дню).

Есть ли различия в степени изменений, вызываемых введением АК в составе С-ави-таминного рациона, между животными синтезирующими и несинтезирую щи ми витамин С, а также в реакции животных на введение свинца или ДМ? Сопоставляя сдвиги показателей, установленных у свинок и крыс в одинаковых по характеру экспериментах, мы нашли следующее (рис. 9):

Морские свинки Крысы

Рисунок 9, Степень изменения (относительно контроля, в %) активности тромбоцитов, у ровня маркеров ВТФ, ЛПО и АОП у морских свинок и крыс на 7-й и 15-й дни содержания на

С-авитаминном рационе

1. При питании рационом без витамина С в течение 15 дней у крыс не изменяются показатели состояния гемостаза, ЛПО и толерантность к тромбину. 2. Введение в рацион АК в дозе, равной суточной потребности свинок, не приводит у крыс к сдвигам этих показателей (сдвиги на 0.5-1.6% статистически не подтверждаются - ц-отмечены в таблицах как равные нулю). 3, Введение на фоне АК свинца вызвало активацию тромбоцитов, рост уровня маркеров ВТФ, ускорение ЛПО, снижение АОП и толерантности к тромбину уже к 7, и заметнее - к 15 дню, однако степень сдвигов у крыс в эти сроки менее выражена, чем у свинок.

4. Менее выражены у крыс в сравнении со свинками сдвиги, вызванные свинцом или

димефосфоном

Заключая, выделим основное

У свинок, несинтезирующих витамин С, его дефицит в рационе сопровождается ускорением ЛПО и снижением АОП в тромбоцитах, ростом их агрегационной и «высвобождающей» активности, ускорением непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (рост уровня маркеров ВТФ) Эти изменения усиливаются с увеличением длительности С-гиповитаминного кормления У свинок, получавших С-авитаминный рацион, в течение первых двух недель перечисленные выше сдвиги более выражены, а к концу 3-й недели (т е при появлении явных признаков скорбута) наблюдается уменьшение сдвигов агрегационной и «высвобождающей» способности тромбоцитов при прогрессирующем росте уровня маркеров ВТФ

Введение в составе С-авитаминного рациона АК в дозе, отвечающей суточной потребности свинок, предупреждает описанные изменения практически полностью Ограничиваются у них, но не устраняются полностью, вызываемые С-авитаминозом изменения, при введении ДФ (антиоксиданта невитаминной природы) В связи с этим можно считать, что гемостатические сдвиги при С-авитаминозе у свинок сопряжены с ускорением ЛПО и снижением АОП, однако, есть и другие механизмы развития гемостатических сдвигов Наиболее вероятно, один из механизмов, обусловленных отсутствием витамина С в рационе, - нарушение формирования коллагена, роль которого в поддержании целостности сосудистой стенки известна (дефицит витамина С сопровождается нарушением формирования коллагена, обусловливающим рост проницаемости сосудистой стенки, что в свою очередь может за счет ускоренного поступления в кровоток тканевого фактора интенсифицировать ВТФ, что проявляется повышением уровня маркеров этого процесса в кровотоке)

У крыс, синтезирующих витамин С, его отсутствие в рационе не сопровождается изменениями ЛПО и АОП - видимо, синтезирующийся в организме этих животных витамин С обеспечивает (естественно, наряду с другими компонентами антиоксидантной системы) обычную интенсивность ЛПО и обычные уровни АОП Введение в С-авитаминный рацион таких животных дополнительного количества АК в дозе, соответствующей суточной потребности свинок, также не оказывает заметного влияния на активность тромбоцитов, ВТФ, ЛПО и АОП Введение невитаминного антиоксиданта димефосфона одновременно с небольшой дозой АК проявляется в организме крыс небольшим ограничением ЛПО (менее заметным, чем у свинок)

ВЫВОДЫ

1 Пребывание на С-гиповитаминном рационе питания приводит у животных, несинтезирующих витамин С, к прогрессирующему ускорению липидпероксидации, снижению антиоксидантного потенциала, росту интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген и снижению толерантности к тромбину

2 При появлении явных признаков скорбута (к концу 3-й недели С-авитаминного питания) у морских свинок агрегационная и «высвобождающая» способность тромбоцитов уменьшается, но не достигает исходного уровня, а интенсивность ВТФ продолжает увеличиваться на фоне нарастающей гипероксидации

3 У свинок при С-авитаминозе изменения взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантности к тромбину предупреждаются аскорбиновой кислотой в дозе, равной суточной потребности, и неполностью ограничиваются антиоксидантом димефосфоном (антиоксидантом невитаминной природы), устраняющим изменения липидпероксидации и антиоксидантного потенциала

4 У животных, синтезирующих витамин С, аскорбиновая кислота в дозах,

превышающих суточную потребность в 2-3 раза, сохраняет антиоксидантное действие, снижая интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген и повышая толерантность к тромбину, а в бблыней дозе действует как прооксидант, ускоряя взаимодействие тромбин-фибриноген и снижая толерантность к тромбину

5 Четырёхкратный избыток АК в рационе у свинок к концу 3-й недели оказывает прооксидантный эффект (активация ЛПО и снижение АОП), повышает активность тромбоцитов, ускоряет взаимодействие тромбин-фибриноген и снижает толерантность к тромбину

6 Введение антиоксиданта невит,шинной природы усиливает, а введение прооксиданта снижает способность аскорбиновой кислоты ограничивать изменения интенсивности ВТФ и толерантности к тромбину, сопутствующие С-витаминной недостаточности у животных, не синтезирующих витамина С У животных, синтезирующих аскорбиновую кислоту, >ти эффекты менее выражены

7 Прооксидантный эффект аскорбиновой кислоты у несинтезирующих витамина С животных, выражен заметнее при дозах, одинаковых в пересчете на массу тела

На основании полученных данных можно допустить, что влияние дефицита витамина С на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови обусловлено не только его антиоксидлнтыми свойствами, но и другими метаболическими функциями, в частности, участием витамина С в формировании коллагена и в сохранении атром-богенности эндотелия Тот факт, что избыток витамина С ускоряет внутрисосудистое свертывание крови, должен приниматься во внимание при назначениях больших доз аскорбиновой кислоты в терапии заболеваний с наклонностью к тромбообразованию Публикации по теме диссертации

1 Влияние половых стероидов (этинилэстрадиолола и левоноргестрела) на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке ПО А Рудзевич, Е М Шаповалов Э В Багумян и др // Теория и методология с овременного научного исследования Тюменского региона (сб статей аспирантов и соискателей) Тюмень -2003 С 121-122

2 Толерантность к тромбину при гипо-гкпертиреозе и тиреотоксикозе /Г А Сулкарнаева, ЕМ Шаповалов, ЭВ.Багумян и др// Экологическое образование и здоровый образ жизни (Сб матер 2-й региональной научно-практ конференции) - Сургут -2006 - С 147-151

3 Влияние витаминов А,Е,С и Р , вводимых порознь и одновременно, на внутрисосудистое свертывание крови / А Ш Бышевский, С Л Галян, Э В Багумян и др // Фундаментальные исследования - 2007 - 1 - С 24

4 Послеоперационные тромботические осложнения и их профилактика /А Ш Бышевский, В А Полякова, Е А Винокурова, Э В Багумян // Глава в книге «Гемостаз при оперативных вмешательствах в гине} ологической практике» - М Медицинская книга - 2006 - С 74-82

5 Влияние витамина Е на фибринолиз и общую свертываемость крови /Г А Сулкарнаева, С В Миневцев, О 3 Мустаев, Э.В.Багумян // Глава в книге «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и лкпидпероксидация» -М Медицина -2006 - С 13-16

6 Гемостатичесские эффекты витамина Р /Э.В.Багумян // Там же - С 50-51

7 Зависимость гемостаза от обеспеченности витамином С / А Ю Рудзевич, Э В Багумян, Е М Шаповалова, А В Шидин // Глава в кн «Зависимость гемостаза от С-витамииной обеспеченности организма» -М Медицинская книга 2007 - С 16-28

8 Влияние аскорбиновой кислоты на липидпероксидацию и внутрисосудистое свертывание крови при гипероксидации /А.В.Багумян, А Ю Рудзевич, М К Умутбаева и др // Глава в кн «Зависимость гемостаза от С-витаминной обеспеченности организма» - М Медицинская книга - 2007 - С 47-71

9 Влияние дефицита витамина С на содержание в крови аскорбиновой кислоты, её поглотительную способность и на взаимодействие тромбин-фибриноген / Э В Багумян, П Я Шаповалов // Медицинская наука и образование Урала - 2007 - 1 - С 7-9

10 Соотношение между толерантностью к тромбину и плазменным содержанием маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген / А Ш Бьппевский, С Л Галян, Э В Багумяи и др // Матер конф «Клиническая гемостазиология в сердечно-сосудистой хирургии» (с международным участием) - Москва НЦССХим А Н Бакулева РАМН -2007 - С 41-42

11 Влияние половых стероидов (этинилэстрадиолола и левоноргестрела) на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке /Ю А Рудзевич, Е М Шаповалов

Э В Багумяи и др // Заочная электронная конференция «Доклиническая и клиническая апробация новых лекарственных средств 15-20 октября 2006 г

Использованные сокращения

А............ Оптическая плотность

АДФ-АГ... АДФ-индуцируемая агрегация

АК......... Аскорбиновая кислота

АОП..... антиоксидантный потенциал

ВТФ........ взаимодействие тромбин-фибриноген

О-Д...... О-димеры

ДК.. .. диеновые конъюгаты

ДМ....... Димефосфон

ЛП........ липиды

ЛПО....... липидпероксидация

ПДФ...... продукты деградации фибрина

ПИ......... период индукции

РФМК.. . растворимые фибринмономерные комплексы

С А.......... спонтанная агрегация

СО . ... скорость окисления

ТБК...... ТБК (продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой)

ФГ ........ фибриноген

Ф.(фф) .... . фактор (факторы)

ВНУТРИСОСУДИСТОЕ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ С-ВИТАМИННОЙ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ ОРГАНИЗМА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

03 00 04 - биохимия

Подписано в печать « » Тираж 100 экз

Объем 1пл Формат 60x84/16 Заказ № Технический отдел ТГМА 625023, ул Одесская, 54

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Багумян, Эдуард Врежевич

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. АСКОРБИНОВАЯ КИСЛОТА И ГЕМОСТАЗ (обзор литературы).

2.1. Биологическая роль аскорбиновой кислоты.

2.2. Связь АК с системой гемостаза.

2.3. Изменения липидпероксидации и гемостаза при введении АК . 31 2.3.1.Влияние поливитаминов, содержащих витамин С, на липидперок-сидацию и интенсивность внутрисосудистого свертывания крови при некоторых заболеваниях, сопровождающихся гипероксидаци

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.2. Активность тромбоцитов, содержание маркеров ВТФ, толерантность к тромбину, ЛПО и АОП при дефиците витамина С у не синтезирующих его животных (морские свинки).

3.2.1. Влияние С-гипо- и С-авитаминного рационов на содержание в крови витамина С и поглотительную способность крови по отношению к АК.

3.2.2. Влияние С-гипо- и С-авитаминного рационов питания на активность тромбоцитов, плазменный уровень маркеров ВТФ, толерантность к тромбину, ЛПО и АОП.

3.2.3. Влиянне рациона питания, включащего АК в дозе, соответствующей суточной потребности в витамине С, или антиоксидант днмефосфон в дозе, аде-кватнрой АК по антиоксидантной активности, на плазменный уровень маркеров ВТФ и толерантность к тромбину у морских свинок.

3.2.4. Влияние избытка АК на плазменный уровень маркеров ВТФ, активность тромбоцитов и толерантность к тромбину у свинок.

3.3. Содержание маркеров ВТФ, активность тромбоцитов и толерантность к тромбину у животных, синтезирующих витамин С (белые крысы) при введении им АК.

3.3.1. Интенсивность ВТФ, активность тромбоцитов, толерантность к тромбину у крыс при введении им АК в дозах 11.0,16.5 и 22.0 мг/кг в сутки.

3.3.2. Активность тромбоцитов, интенсивность ВТФ и толерантность к тромбину у крыс при введении им АК в дозе 44.0 мг/кг/сут.

3.4. Влияние АК на плазменное содержание маркеров ВТФ, активность тромбоцитов и толерантность к тромбину на фоне изменения (ускорения или угнетения) ЛПО у животных, не синтезирующих витамин С

3.5. Влияние АК на плазменное содержание маркеров ВТФ, активность тромбоцитов и толерантность к тромбину на фоне ускорения и угнетения ЛПО у животных, несинтезирующих витамин С.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину в зависимости от С-витаминной обеспеченности организма (экспериментальное исследование)"

Витамин С - обязательный компонент питания большинства представителей животного мира - определяет течение многих процессов жизнедеятельности [А.А.Шмидт, 1941; В.В.Ефремов, 1949; Б.А.Лавров, 1951; М.И.Смирнов, 1974; П.Н.Шараев, 2003; В.П.Мищенко и др., 2005; Buehler P.W. е.а., 2005; Cherubini А. е.а., 2005; Chen C.Y. е.а., 2005; E.C.Kennett, P.W.Kuchel, 2006]. Следовало ожидать, что и такая система жизнеобеспечения как гемостаз, зависит от степени обеспеченности витамином С, и это обусловило внимание к изучению связи между гемостазом и витамином С, хотя В.В.Пашутин [1902] у больных с выраженными формами скорбута не находил снижения свертываемости крови. Позже отметили позитивное влияние витамина на свертываемость крови при патологических состояниях, сопровождающихся снижением С-вита-минной обеспеченности [Е.И.Бок, 1924; В.М.Новодворский, 1928; Г.Я.Каган, 1952, 1953; Cooper M.J е.а., 2006; Groenbaek К. е.а. , 2006; Kumari J. е.а. 2006; Xie Z. е.а., 2006]. Так, при некоторых формах кровоточивости дополнительное введение аскорбиновой кислоты (АК) сокращало время свертывания крови и повышало активность ф. II [М.С.Ле-винсон, 1940; З.Е.Глухенькая, 1958; А.А.Ахрарходжаев, 1961; К.А.Миронова, 1961; Hetenui, 1935; Cotti, Larizza, 1936; Duckerhoff е.а., 1940]. Оказалось, что развитие скорбута сопровождается нарастающей тромбо-цитопенией [Е.И.Бок, 1924; В.М.Новодворский, 1928; А.Л.Мясников, 1938; С.Д.Певзнер, 1939; P.Barchan, A.N.Howard, 1942], которой сопутствует снижение уровня фф. I и II [В.Копалейшвили и др., 1960] и общей свертываемости крови. С-витаминотерапия способствовала нормализации показателей, не влияя на них у лиц без дефицита витамина С. Так возникло предположение о нормализующем действии АК на некоторые прокоагулянты и общую свертываемость крови [М.С.Левинсон, 1940; С.М.Рысс и др., 1945; Duckerhoff Н. е.а., 1940; 152], чему, однако, 5 противоречили другие наблюдения [М.В.Игнатьева, 1963; К.И.Степаш-кина, 1939, Б.И.Рубинштейн и Е.В.Лебедева, 1940].

Эффекты АК при заболеваниях с геморрагиями были положительны в терапии гинекологических кровотечений и других видов кровоточивости [Г.Н.Яропольская, 1937; И.С.Краевская, 1940; Е.Деранкова, 1938; Г.А.Бакшт, 1947; Б.И.Кузник и др., 1964, 1976; Б Б.И.Кузник, В.П.Ски-петров, 1974; Junghans, 1935: Vogt, 1935]. Не все это подтверждали - в некоторых наблюдениях находили, что АК, оказывая гемостатическое действие при климактерических кровотечениях, не изменяет времени свертывания крови и содержания тромбоцитов [М.М.Домбровский, 1964; Junghans Е., 1935], что объясняли действием АК на состояние сосудов [Г.А.Бакшт, 1947; В.Копалейшвили и др., 1960]. Связь между С-ги-повитаминозом и наклонностью к геморрагии подтвердилась экспериментально [И.С.Краевская, 1940], а работы лаборатории проф. Б.А.Куд-ряшова (МГУ) указали в качестве причины кровоточивости при С-дефи-цитах тромбоцитопению и малую тромбопластическую активность тромбоцитов [Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина, 1959; Г.В.Андреенко, 1960; Г.В.Андреенко, Л.В.Лютова, 1969]. Предполагалась возможность реализации эффекта АК на гемостаз при С-дефицитах и через её влияние на активность прокоагулянтов [Е.П.Самборская и др., 1967; В.С.Шевченко, 1969; Л.В.Лютова, 1971; Cotti Z., LarizzaP., 1936; Sen С. е.а., 1994].

Вместе с тем, отмечалось, что АК не влияет заметно на свертываемость крови при нормальной обеспеченности витамином С и даже вызывает гипокоагулемию после длительного [В.П.Мищенко и др., 2005], а иногда и кратковременного введения умеренных доз витамина С у здоровых людей [А.В.Костинская, 1958], что связывали с ростом антитром-биновой активности [Ван Чий., 1959]. Находили вместе с тем небольшой рост уровня ф. Виллебранда и снижение - активатора профибринолизина при дефиците витамина С [G.H.Tofler е.а., 2000], прямую зависимость между скоростью ЛПО и уровнем некоторых маркеров ВТФ при аденоме простаты, атеросклерозе сосудов нижних конечностей, ИБС и токсическом зобе [В.М.Шафер, 1989; И.Физдель, 2004; Э.Н.Согрин, 2004, 2005; И.Г.Леонтьев, 2006; А.В.Фатеев, 2006], а также при введении половых стероидов и других прооксидантов [ПЛ.Шаповалов, А.И.Бродер, 2002; И.А.Аптекарь, 2003]. Те же зависимости найдены у беременных и родильниц с поздним гестозом [Е.А.Винокурова, 2006; Н.Н.Зороастрова, 2006]. При всех этих состояниях введение препаратов, содержащих витамин С, ограничивало сдвиги ЛПО и гемостатические отклонения.

В последние годы получены косвенные указания на роль С-вита-минной обеспеченности в состоянии гемостаза. Так, при умеренной го-моцистеинемии, повышающей угрозу тромбозов через рост адгезивных свойств эндотелия, введение витамина С блокирует эффекты гомоци-стеина [Nappo F. е.а., 1999; Labinjoh С. е.а., 2001; Labinjoh С. е.а., 2001]. Нагрузки АК, не влияя на уровни активатора и ингибитора профибрино-лизина ткани, фибриногена, ф. УШ:ФВ и на вязкость крови при отсутствии С-гиповитаминоза, повышают уровень ф. Виллебранда [G.H. Tofler е.а., 2000]. Введение АК снижает активность эндотелия и рост уровня ТБК-продуктов, активность фибринолиза на фоне С-авитаминоза у пациентов с интолерантностью к глюкозе и курильщиков, что не наблюдали в группах с нормальной обеспеченностью витамином С [Antoniades Е.е.а., 2003; Tomiyama Н. е.а., 2003]. Витамин С усиливает ответ сосудов на ва-зодилататоры [Tousoulis D.e.a., 2003; Pellegrini М.Р. е.а., 2004], как впрочем, ведут себя и другие антиоксиданты [Sumitra М.е.а., 2001; Skrha J.e.a., 2004; Chen P.R, е.а., 2005 а]. Показано, что АК предотвращает активацию тромбоцитов, увеличивая выход из полиморфноядерных лейкоцитов NO, обладающий антиагрегантными свойствами [S.A.Raghavan е.а., 2003].

Вместе с тем, совокупность фактов, касающихся связи между С-вита-минной обеспеченностью и гемостазом, не вносит ясности в вопрос о том, каково общее состояние системы, ответственной за сохранение жидкого состояния крови при экстремальных воздействиях, которые, изменяя ЛПО [В.П.Мищенко, 1981, 2005; А.Ш.Бышевский и др., 2004, 2005, 2006], могут снижать толерантность организма к избыточному тромбинообразованию.

Так как нет возможности составить четкого представления о характере влияния дефицита или дополнительного введения витамина С на непрерывное внутрисосудистое свертывание, от интенсивности которого можно судить о наклонности к тромбообразованию или кровоточивости [И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в; Д.М.Зубаиров, 2000; М.К.Умутбаева, 2003 а, б, 2005; Р.Г.Алборов, 2005, 2006; П.Я.Шаповалов и др., 2005; Gawaz М.Р., 2001], мы запланировали исследования, выполнение которых, как нам казалось, позволит получить отсутствующие, но важные для теории и практики медицины данные, которые позволят обосновать использование витамина С в качестве средства направленного воздействия на систему регуляции агрегатного состояния крови.

Цель исследования.

Экспериментально изучить, как изменяется интенсивность внутри-сосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину (т.е. способность реагировать на гипертромбинемию) в зависимости от степени С-витаминной обеспеченности организма.

Задачи исследования:

1. Изучить агрегационную активность тромбоцитов, их способность высвобождать фф. Р3 и Р4, содержание продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) и толерантность к тромбину у несинтезирующих витамин С животных (морские свинки) при содержании их на рационе питания, лишенном (отчасти или полностью) витамина С;

2. Изучить то же при введении избыточныъх доз витамина С у этих животных на фоне полноценного рациона питания;

3. То же изучить у животных, синтезирующих витамин С (белые крысы), при содержании их на рационе питания, освобожденном от ви8 тамина С и содержащем аскорбиновую кислоту;

4. Изучить в опытах на морских свинках зависимость эффектов витамина С на содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ), толерантность к тромбину и активность тромбоцитов при угнетении или активации процессов липидпероксидации.

Научная новизна.

Установлено, что между уровнем маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ), характеризующего интенсивность внутрисосу-дистого свертывания крови, и толерантностью к тромбину у животных, несинтезирующих витамина С, обнаруживается обратная зависимость при С-авитаминозе и С-гиповитаминозе, а также при избыточном введении АК: при дефиците витамина С растет содержание маркеров ВТФ, а толерантность к тромбину падает, при дополнительном введении АК содержание маркеров ВТФ снижается, а толерантность к тромбину растет.

Впервые показано, что толерантность к тромбину и содержание маркеров ВТФ изменяются у животных, не синтезирующих витамин С, с увеличением длительности их содержания на С-авитаминном рационе.

У животных, синтезирующих витамин С, его отсутствие в рационе не сопровождается снижением толерантности к тромбину и ростом уровня маркеров ВТФ; при введении АК на фоне полноценного рациона питания уровень маркеров ВТФ у них снижается, а толерантность увеличивается с увеличением дозы АК.

У животных, несинтезирующих витамина С, существует параллелизм между ускорением непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и ростом интенсивности ЛПО, у синтезирующих витамин С животных эта зависимость менее выражена.

Практическая ценность работы

1. Полученные данные обосновывают необходимость контролировать интенсивность внутрисосудистого свертывания крови путем оценки содержания плазменных маркеров ВТФ у больных с недостаточной обеспеченностью организма витамином С.

2. Полученные нами данные использованы при написании трёх монографий: «О роли щитовидной железы в регуляции гемостаза», М.: Медицина. - 2006), «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и ли-пидпероксидация» (Москва: Медицина. - 2006) и «Зависимость гемостаза от С-витаминной обеспеченности организма». - М: Медицинская книга. - 2007

3. Результаты работы внедрены в практическую деятельность ряда лечебных учреждений г. Тюмени и Тюменского региона.

Положения, выносимые на защиту

1. Дефицит витамина С у несинтезирующих его животных ведет к ускорению непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и ослаблению защитной реакции организма на гипертромбинемию при одновременной интенсификации процессов перекисного окисления липидов и снижении антиоксидантного потенциала.

2. Нагрузки аскорбиновой кислотой в дозах, превышающих суточную потребность в 2-3 раза, ведут к снижению интенсивности липидпе-роксидации и внутрисосудистого свертывания крови при одновременном росте толерантности к тромбину, при значительном (четырех- и восьмикратном) избытке аскорбиновая кислота проявляет прооксидантный эффект, особенно у животных, синтезирующих витамин С.

3. Зависимость уровня маркеров интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину от витамина С определяется его свойством поддерживать способность тромбоцитов к агрегации и к высвобождению фф. Р3 и Р4.

Апробация и публикация.

Результаты работы опубликованы: 1. В медико-биологических журналах, рекомендованных ВАК для диссертантов (2 статьи); 2. В виде четырёх глав в монографиях издательства «Медицина» и «Медицинская книга». 3. В материалах Всероссийской конференции с международным участием (1) и региональных конференций (2), а также в заочной электронной конференции, проводимой РАЕ.

Доложены: на III Российской конференции «Клиническая гемоста-зиология в сердечно-сосудистой хирургии» (с международным участием). - Москва: НЦ ССХ им. А.Н.Бакулева РАМН. - 2007, на 2-й региональной научно-практической конференции «Экологическое образование и здоровый образ жизни» - Сургут. - 2006, а также на заседании регионального отделения РАЕ (Тюмень).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Багумян, Эдуард Врежевич

5. ВЫВОДЫ

1. Пребывание на С-гиповитаминном рационе питания приводит у животных, несинтезирующих витамин С, к прогрессирующему ускорению липидпероксидации, снижению антиоксидантного потенциала, росту интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген и снижению толерантности к тромбину.

2. При появлении явных признаков скорбута (к концу третьей недели С-авитаминного питания) у морских свинок агрегационная и «высвобождающая» способность тромбоцитов уменьшается, но не достигает исходного уровня, а интенсивность ВТФ продолжает увеличиваться на фоне нарастающей гипероксидации

3. У свинок при С-авитаминозе изменения взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантности к тромбину предупреждаются аскорбиновой кислотой в дозе, равной суточной потребности, и лишь отчасти ограничиваются антиоксидантом димефосфоном (антиоксидантом невитаминной природы), устраняющим изменения липидпероксидации и антиоксидантного потенциала.

4. У животных, синтезирующих витамин С, аскорбиновая кислота в дозах, превышающих суточную потребность в 2-3 раза, сохраняет анти-оксидантное действие, снижая интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген и повышая толерантность к тромбину, а в большей дозе действует как прооксидант, ускоряя взаимодействие тромбин-фибриноген и снижая толерантность к тромбину.

5. Четырёхкратный избыток аскорбиновой кислоты в рационе у свинок к концу 3-й недели оказывает прооксидантный эффект (активация ЛПО и снижение АОП), повышает активность тромбоцитов, ускоряет взаимодействие тромбин-фибриноген и снижает толерантность к тромбину.

6. Введение антиоксиданта невитаминной природы усиливает, а введение прооксиданта снижает способность аскорбиновой кислоты ограничивать изменения интенсивности ВТФ и толерантности к тромбину, сопутствующие С-витаминной недостаточности у животных, не синтезирующих витамина С. У животных, синтезирующих аскорбиновую кислоту, эти эффекты менее выражены.

7. Прооксидантный эффект аскорбиновой кислоты у несинтезирую-щих витамина С животных, выражен заметнее при дозах, одинаковых в пересчете на массу тела.

• • •

На основании полученных данных можно допустить, что влияние дефицита витамина С на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови обусловлено не только его антиоксидантыми свойствами, но и другими метаболическими функциями, в частности, участием витамина С в формировании коллагена. Тот факт, что избыток витамина С ускоряет внутрисосудистое свертывание крови, должен учитываться при назначениях больших доз аскорбиновой кислоты в терапии заболеваний, отличающихся наклонностью к тромбообразованию.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ограниченность и неоднозначность сведений о влиянии дефицита или избытка витамина С в питании на гемостаз не позволили составить четкого суждения о роли гемостатических изменений в кровоточивости, сопровождающей скорбут, в то время как связь кровоточивости при развитии скорбута с изменениями сосудистой проницаемости установлена [И.С.Краевская, 1940; В.В.Ефремов, 1944, 1949; В.И.Гольдштейн и др., 1950; Б.А.Лавров, 1951; Б.И.Кузник, В.П.Скипетров , 1974; А.Ш.Бышевский, 1978; В.П.Мищенко и др., 2005; А.С.Сагг е.а., 2000; IC.M.Fair-field, R.H.Fletcher, 2002; Antoniades е.а., 2003]. Обращают на себя внимание данные об изменениях тромбопластических свойств тромбоцитов при дефиците витамина С [Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина, 1958, 1959], однако и эти факты не объясняют, приводит ли снижение коагуляционной активности тромбоцитов к таким нарушениям в гемостазе, которые изменяют способность организма реагировать на изменения интенсивности тромбиногенеза, а, следовательно, на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке. Не содержат такой информации и публикации, посвященные состоянию отдельных прокоагулянтов при дефиците витамина С. По этой причине нельзя сделать заключений о том, как изменяется при С-гиповитаминозе (С-авитаминозе) или при введении избытка витамина С непрерывное внутрисосудистое свертывание крови - процесс, по интенсивности которого можно судить о наклонности к тромбообразованию или кровоточивости [И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в; Д.М.Зубаиров, 2000; М.К.Умутбаева, 2003 а, б, 2005; П.Я.Шаповалов и др., 2005; M.P.Gawaz, 2001]. Нельзя судить и о том, как изменяется способность организма реагировать на сдвиги скорости тромби-нообразования, в то время как по изменениям этой способности можно делать выводы о том, какими могут оказаться последствия эндогенных или эксзогенных воздействий, ускоряющих тромбиногенез.

Мы поставили перед собой цель, достижение которой, возможно, позволит получить значимые для теории и практики медицины данные, обосновывающие использование витамина С как средства направленного воздействия на интегральный показатель состояния системы гемостаза - интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, - характеризующий процессы внутрисосудистого свертывания крови, и на толерантность к тромбину, т.е. способность организма реагировать на изменения тромбиногенеза.

Для достижения цели изучали у морских свинок, несинтезирующих витамин С, способность тромбоцитов к агрегации и высвобождению фф. Рз и Р4, содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину. То же изучали в опытах на белых крыс - животных, синтезирующих АК - при скармливании им рационов, свободных от витамина С, или содержащих этот витамин в соответствие с эквивалентом суточной потребности. У тех и других животных изучали эффекты на гемостаз нарастающих доз АК на фоне полноценного или С-авитаминного рациона питания, а также зависимость эффектов АК на гемостаз при одновременном введении про- или антиоксиданта.

В связи с имеющимися в литературе данными об антиоксидантных свойствах аскорбиновой кислоты, о связи между свободнорадикальными процессами и гемостазом [В.П.Мищенко, 1981; Walford G. Loscialpo J., 2003], во всех экспериментальных ситуациях контролировали интенсивность липидпероксидации и состояние антиоксидантного потенциала.

Предваряя эксперименты, направленные на достижение цели, мы изучили возможность использования ранее описанного С-гипо- и С-авитаминного рационов, определяя при их применении уровень витамина С в крови свинок и её поглотительную способность. Графический анализ (рис. 1) выявил, что рационы отвечают задачам экспериментов: при полноценном рационе питания не изменяется в течение 3-х недель ни уровень витамина С, ни поглотительная способность крови относительно этого витамина.

Ш Полноценный рацион

ICгиповитамикны й рацион С-авитаминный рацион

Рисунок 1. Изменения абсолютного содержания витамина С в крови и её поглотительной способности в зависимости от рациона (содержание в крови витамина С умножено на 10, чтобы поместить его в этой же системе координат)

У свинок, получавших С-дефицитный или С-авитаминный рацион, снижается во времени содержание витамина С в крови и параллельно растет поглотительная способность крови. То и другое существенно более выражено при С-авитаминном питании, что согласуется с данными осмотра и вскрытия свинок.

Следовательно, все три рациона по характеру влияния на уровень С-витаминной обеспеченности соответствовали задачам работы, т.е. позволяли сопоставлять эффекты С-гипо- и С-авитаминного рационов относительно показателей при полноценном питании.

Это позволило провести эксперименты с определением всех намеченных к изучению показателей на 7-й, 15-й и 21-й дни содержания на С-гипо и С-авитаминном рационах.

Оказалось (табл. 2) что к 7-му и особенно к 15-му дням растет активность тромбоцитов (способность к высвобождению фф. Рз и Р4, спонтанная и АДФ-агрегация), а также интенсивность ВТФ (повышается плазменное содержание маркеров процесса). К 21 дню наблюдений признаки активации тромбоцитов уменьшаются, а содержание прямых маркеров ВТФ продолжает расти до 21-го дня.

Ускорение процессов ЛПО, сопровождающееся спадом АОП, в отличие от изменений гемостаза, длится до 21-го дня. Толерантность к тромбину также падает у свинок до 21-го дня опытов, что более выражено при С-авитаминном питании.

Таким образом, при дефиците витамина С возникают сдвиги, аналогичные тем, которые выявляли при введении прооксидантов различной природы — тироксина, половых стероидов, свинца [Р.Г.Алборов и др., 2000; Э.А.Шабанов, 2000; И.А.Карпова и др., 2001; П.Я.Шаповалов и др., 2002]. Следовательно, отсутствие или недостаток витамина С оказывает такое же влияние на гемостаз, как введение прооксидантов. Это согласуется с представлением об антиоксидантных свойствах АК и подтверждается в наших экспериментах тем, что отсутствие АК в рационе ускоряет ЛПО и снижает АОП пропорционально длительности опытов. При содержании же АК в рационе несинтезирующих его животных в размере суточной потребности, интенсивность ЛПО и величина АОП близки к данным, полученным в опытах на синтезирующих витамин С животных [И.А.Дементьева, 1998; И.В.Ральченко, 1998; И.А.Зарубина, 1998; Е.А.Матейкович, 2006], и остаются постоянными при длительном наблюдении.

Ускорение постоянного внутрисосудистого свертывания крови, на что указывает рост уровня прямых и косвенных маркеров ВТФ при дефиците витамина С, согласуется с найденным нами снижением фибри-ногенемии - следствием ускоренного потребления фибриногена, и это согласуется со снижением толерантности к тромбину, как и с ростом уровня маркеров ВТФ в течение 1-й, 2-й и 3-й недели эксперимента.

То, что на 3-й неделе содержания на С-гиповитаминном и особенно С-авитаминном рационе питания активность тромбоцитов снижалась, можно объяснить их истощением. Это согласуется с тем, что было, в частности, найдено у лиц с диабетом типа I: у таких больных находили активацию тромбоцитов [И.И.Дедов (редактор), 1995; И.И.Дедов и др., 1996], сменяющуюся с увеличением длительности заболевания снижением активности этих клеток - их рефрактерностью [Р.Г.Алборов, 2003: Ю.В.Нелаева, 2003].

В нашем случае (соответственно задачам работы) не имело смысла продолжать исследования после двух недель пребывания животных на С-гипо- и С-авитаминном рационе, т.к. в течение 3-й недели животные потребляли корм в заметно уменьшенном количестве (следствие развивающегося С-гиповитаминоза), в связи с чем на дефицит витамина С накладываются последствия алиментарного голодания и дефицита других витаминов.

Установив, что дефицит витамина С вызывает (пропорционально степени витаминной недостаточности) ускорение ЛПО, снижение АОП, активацию тромбоцитов (т.е. их способность к агрегации и к реакции высвобождения) и ускорение ВТФ, обнаруживающиеся уже к концу 1-й недели, и усиливающиеся к концу 2-й недели, мы пытались установить последовательность появления этих сдвигов. Для этого в отдельной серии опытов сократили интервалы между отборами проб крови (от 7-го до 15-го дня). Быстроту нарастания сдвигов оценили, сопоставляя графически их значения, представленные в виде интенсивных величин - степеней отклонения от контроля (в процентах). Использованы для анализа данные, полученные при С-авитаминозе, поскольку они более выразительны и сходны с данными, полученными у свинок с С-гиповитамино-зом, отличаясь только количественными характеристиками.

Оказалось (рис. 2), что уже на 7-й день наиболее значимо повышено содержание липидпероксидов (ДК и ТБК) и снижен АОП (укорочение ПИ и рост СО), за ними (по степени сдвигов) следуют показатели активности тромбоцитов (Р4, СА и АДФ-агрегация). Все эти изменения нарастают в последующие дни, однако, сохраняется соотношение между величинами, характеризующими эти сдвиги относительно контроля.

145 125 105 85 65 45 25 5

Рисунок 2. Степень изменений (в % относительно контроля, т.е. рациона с дозой АК, равной суточной норме) активности тромбоцитов, маркеров ВТФ, ЛПО, АОГ1 и толерантности к тромбину при С-авитаминном питании. В поле легенды слева направо фф. Р3, Р4, фибрин огенемия (ФГ), ПДФ, РКМФ, D-димеры, спонтанная агрегация, АДФ-агрегация, диеновые конъюгаты (ДК), ТБК-активные продукты, период индукции (ПИ), скорость окисления (СО) и толерантность к тромбину (Т.к TP) Р-4 ОФГ ОПДФ ИРКМФ ОД-д ЯСА ПАДФ-АГ ЯДК ВТБК СПИ ПСО «ТкТР -ТЭТ

1 26 38

Щ

Я2

43 44

8 25. 37 I

I, I il Г 1 [

I II 41 ' I I |

II | 1 г1

-14 ■ V Jt -19 22 22 -23 JJ | -2(

7-й 10-й 13-Й 15-й"35 день день день день

За этими показателями (по степени их изменения относительно контроля) располагаются величины, которые характеризуют сдвиги содержания маркеров ВТФ.

Степень снижения фибриногенемии, как характеристика потребления фибриногена, заметно увеличивается только к концу наблюдений, когда интенсивность внутрисосудистого свертывания уже существенно увеличилась.

Утверждать категорически, что при С-авитаминозе рассматриваемые сдвиги развиваются в предполагаемой последовательности (первыми ЛПО и АОП, затем активация тромбоцитов, затем ускорение ВТФ и падение толерантности к тромбину) можно с известной осторожностью, хотя именно в такой последовательности развиваются сдвиги тех же показателей при активации липидпероксидации введением прооксидантов. Кстати, при введении антиоксидантов последовательность появления изменений такова же, но сами сдвиги имеют противоположную направленность [Э.А.Шабанов, 2000; Е.А.Матейкович, 2006; А.Ш.Бышевский и др., 2006].

Для оценки характера связи между изменениями изучавшихся показателей мы сопоставили характер графиков, отралсающих сдвиги во времени.

На рис. 3 сравнивается динамика изменений (при С-авитаминозе) уровня вторичного липидпероксида (ТБК-продукта), периода индукции, фф. Р3, Р4, спонтанной и АДФ-агрегации. Здесь видно, что изменения всех определявшихся показателей во времени описываются линейными кривыми: коэффициенты аппроксимации, приведенные на рисунке для каждой графика, предельно близки единице (от 0.89 до 0.98). Следовательно, зависимость между темпом нарастания скорости ЛПО и скорости снижения АОП с одной стороны, и степенью прироста способности тромбоцитов к агрегации и к реакции высвобождения - с другой, близка к линейной. р-з анар-4 wca i-1 адф-дг

1ТБК )ПИ —^Линейный (СА) —Линейный (Р-3)

Линейный (АДФ-АГ) Линейный (ТБК) - Линейный (ПИ) —Линейный (Р-4)

К сожалению, это не говорит о том, какие из изменений являются инициирующими - ЛПО и АОП, либо активность тромбоцитов. Однако если принять во внимание тот факт, что испытуемое воздействие (С-авитаминоз) можно рассматривать как устранение из участия в мета

Рисунок 3. Динамика изменения (в % относительно контроля) активности тромбоцитов, ЛПО и АОП при С-авитаминном питании. В поле легенды слева направо фф. Рз, Р4, фибриногенемия (ФГ), ПДФ, РКМФ, D-димеры, спонтанная а1регация, АДФ-агрегация, диеновые конъюгаты (ДК), ТБК-акгивные продукты, период индукции (ПИ), скорость окисления (СО) и толерантность к тромбину (Т.к TP)

7-й день

10-й день

13-й день

15-й день болизме одного из антиоксидантов (витамина С), то логично считать ускорение ЛПО и угнетение АОП инициатором последующих сдвигов.

Тем более, что уже отмечено выше, при использовании сильных прооксидантов удавалось выявить вначале активацию ЛПО, а затем активацию тромбоцитов, как и при использовании сильных антиоксидантов вначале наблюдали угнетение ЛПО, а позже - снижение активности тромбоцитов [Э.А.Шабанов, 2000; И.А.Аптекарь, 2003; Е.А.Матейкович, 2006]. В пользу такой последовательности событий свидетельствует и то, что инфузия тромбоцитов от реципиентов (крыс с гипероксидативным стрессом) здоровым крысам незначительно изменяла у них липидперок-сидацию [Р.Г.Алборов, 2006]. Видимо, инициатором изменения активности тромбоцитов при дефиците витамина С является ускорение липидпе-роксидации. При этом степень активации тромбоцитов, особенно увеличение их спонтанной агреагации, несоразмерна степени активации ЛПО. Так, к 15-дню липидпероксидация, если оценивать её по уровню вторичных липидпероксидов (ТБК-продуктов), ускорилась на 40%, а спонтанная агрегация на 151%. Однако, если учесть, что уровень первичных липидпероксидов (диеновых конъюгат) к тому же сроку увеличился на 138%, то вопрос о кажущейся несоразмерности снимается. Следует принять во внимание и то, что активированные хотя бы в малой степени тромбоциты аутокаталитически наращивают активность - активация тромбоцитов ведет к ускорению тромбиногенеза, а тромбин - активатор тромбоцитов [Д.М.Зубаиров, 2000; А.С.Шитикова, 2000; Gawaz М.Р., 2001].

Сопоставляя у свинок динамику изменений активности тромбоцитов с изменением интенсивности ВТФ (в период кормления С-авитаминным рационом), мы обратили внимание на следующее.

Сравнивая характер графиков, которые отражают сдвиги показателей активности тромбоцитов (содержание фф. Р3, Р4, спонтанная и АДФ-индуцируемая агрегация), с графиками, отражающими изменение содержания маркеров ВТФ (ПДФ, РКМФ и D-димеры), можно обнаружить следующее (рис. 4).

CTZIP-3 [—Z1 РКМФ АДФ-АГ -Линейный (Д-д) — 'Линейный (Р-3) Р-4 СГЗ) ПДФ

Д-Д 1=1 СА

-Линейный (АДФ-АГ) Линейный (CAJ

Линейный (ПДФ) — Линейный (Р-4) -Линейный (РКМФ)

151

7-й день 10-й 13-й 15-й день день день

Рисунок 4. Динамика изменения (в % относительно контроля) активности тромбоцитов, и содержания маркеров ВТФ при содержании свинок на С-ав и там и ином рационе питания.

Содержание маркеров ВТФ изменяется параллельно росту активности тромбоцитов, причем в период наблюдения нарастание уровня маркеров ВТФ осуществляется линейно. В особенности это относится к содержанию D-димеров - коэффициент аппроксимации соответствующего тренда равен единице, т.е. имеет место абсолютная «линейность» сдвига. В малой степени отклоняются от единицы и коэффициенты аппроксимации трендов, характеризующих динамику изменения содержания двух других маркеров ВТФ - ПДФ и РКМФ (они равны 0.892 и 0.968 соответственно).

На рис. 5 представлены тренды, характеризующую динамику изменения во времени уровня маркеров ВТФ и толерантности к тромбину.

1 1ПДШ ■ШРКМФ 1-1Д-д

ЕГПЗТ.к TP -Линейный (ПДФ) -Линейный (Д-д) -Линейный (РКМФ) -Линейный (Т.к TP)

Рисунок 5. Динамика изменения (в % к контролю) содержания маркеров ВТФ и толерантности к тромбину (Т.к TP) при С-авитаминном питании.

Здесь видно, что степень изменений толерантности к тромбину практически линейно снижается по мере повышения содержания маркеров ВТФ (то же отношение толерантность к тромбину/маркеры распространяется на каждый из маркеров в отдельности).

Можно закончить обсуждение экспериментов, в которых выясняли, как меняется гемостаз и липидпероксидация при С-авитаминозе, следующими утверждениями:

- в ранние этапы скармливания С-авитаминного рациона несинтези-рующим его животным наряду с ускорением ЛПО и снижением АОП увеличивается агрегационная активность тромбоцитов и их способность высвобождать фф. Р3 и Р4; растет плазменное содержание маркеров ВТФ, т.е. интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, и одновременно падает толерантность к тромбину;

- при развитом С-дефиците (21-й день в условиях С-гиповита-минного и особенно С-авитаминного питания) коагуляционная активность тромбоцитов падает в сравнении с той, которая обнаруживается к концу 2-й педели наблюдений, одновременно усугубляется снижение толерантности к тромбину;

- ещё более увеличивается содержания маркеров ВТФ при появлении явных признаков скорбута;

- появляющиеся уже к 7-му дню признаки активации ЛПО и снижения АОП усугубляются в течение всего периода С-дефицитного питания.

Чтобы уточнить связаны ли при С-гиповитаминозе сдвиги в гемостазе только с дефицитом АК как антиоксиданта, сдерживающего ли-пидпероксидацию, или в появлении этих сдвигов играет роль и отсутствие регуляторных воздействий, специфичных для витамина С, но не связанных с его влиянием на ЛПО.

В опыте, при проведении которого группа животных получала в составе С-авитаминного рациона аскорбиновую кислоту в объеме суточной потребности, а другая группа получала димефосфон в дозе, предупреждающей гипероксидативные сдвиги (1 г/кг), выявилось следующее. Ниже (табл. 10) приведены степени отклонения от контроля всех исследовавшихся показателей, найденные в опытах с С-авитаминным питанием, компенсируемым либо АК (в дозе, равной суточной потребности), либо димефосфоном (в дозе, снимающей сдвиги в ЛПО и гемостазе, сопровождающие изменения ЛПО).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Багумян, Эдуард Врежевич, Тюмень

1.Агалецкая A.M. О насыщаемости организма витамином С /А.М.Ага-лецкая // Врач. Дело, 1948. - 7. - С.571-576

2. Акопян С.А. Комбинированное действие аскорбиновой кислоты и адреналина на некоторые стороны обмена веществ / С.А. Акопян // На-учн. труды Ереванского университета. 1951. — т.ЗЗ. — С. 181-184

3. Алборов Р.Г. Влияние ингибиторов превращения арахидоновой кислоты на гемостаз в зависимости от интенсивности перекисного окисления липидов в тромбоцитах: Автореф. дисс. . к. м. н. — Тюмень. 2001. -22 с

4. Алборов Р.Г. Влияние селмевита на мембраны и коагуляционную активность тромбоцитов у больных сахарным диабетом / Р.Г.Алборов // Сахарный диабет. 2004. - 3. - С. 38-40

5. Алборов Р.Г. Зависимость между антиоксидантными свойствами витаминов и их влиянием на толерантность к тромбину /Р.Г.Алборов, С.Л.Галян, С.В.Миневцев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2005. - 3. - С.64-66

6. Алборов Р.Г. Постоянное внутрисосудистое свертывание крови при изменении интенсивности липопероксидации / Р.Г.Алборов // Успехи современного естествознания. 2003. — 6. - С. 37.

7. Алборов Р.Г. Роль клеток крови в связи между толерантностью к тромбину, содержанием в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген и липидпероксидацией: Автореф. дисс. . д.м.н. Тюмень. 2006. 42 с

8. Алборов Р.Г. Состояние пероксидации липидов и гемостаза при гипер- и гипотиреозах в эксперименте / Р.Г.Алборов, А.И Волков, О.П. Мысник // Научн. вестник ТГМА, 2000. 4. - С. 16

9. Андреев А.Ф. Роль некоторых витаминов, камполона и глюкозы в протромбинообразовательной функции печени / А.Ф.Андреев // Тер. архив. 1948. - 5. - С.66-74

10. Ю.Андреенко Г.В. Влияние витаминов С, Р, B!2, К и фолиевой кислоты на тромбопластическую активность морских свинок / Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина// Бюлл. эксп. биол. и мед. 1960. - 10. - С. 46-47

11. П.Андреенко Г.В. Зависимость тромбопластической активности крови морских свинок от поступления аскорбиновой кислоты / Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина // Пробл. свертывания и переливания крови. 1959. -10. - С. 26-29

12. Андреенко Г.В. Значение аскорбиновой кислоты в сохранении функции противосвертывающей системы крови /Г.В.Андреенко, Л.В.Лю-това // В кн. Система свертывания крови и фибринолиз. Киев. - 1969. — С.8-9

13. Андреенко Г.В. Изменение тромбопластической активности крови у крыс под влиянием больших доз аскорбиновой кислоты / Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина // Научн. докл. высшей школы. Биол. науки. 1958. - 1. - С.109-113

14. Аптекарь С.Г. Влияние аскорбиновой кислоты и рибофлавина на свертываемость крови / С.Г.Аптекарь, С.Г.Лорие // Фармакол. и токси-кол. 1959. - 2. - С.134-138

15. Аптекарь И.А. Тромбоцитарное звено и постоянное внутрисосуди-стое свертывание крови при активации и угнетении липопероксидации: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень. - 2003. — 22 с

16. Арсаева Т.Д. Влияние этинилэстрадиола и левоноргестрела на состояние тромбоцитарного гемостаза: Автореф. дисс. . Тюмень. 2004. -26 с

17. Ахрарходжаев А.А. Баланс аскорбиновой кислоты и протромбино-вая активность крови у больных легочным туберкулезом с легочным кровотечением и без него / А.А.Ходжаев // В кн. Современные вопросы клиники и терапии туберкулеза. Ташкент. - 1961. - С. 170-174

18. Бакшт Г.А. Витамины в акушерстве и гинекологии / Г.А.Бакшт //

19. Советский врач. жури. 1947. - 7-8. - С.511-518

20. Баклаева Н.Б. Перекисное окисление липидов и гемостазиологиче-ские сдвиги при операциях на матке: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень. -2005. - 24 с

21. Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П.Балуда, З.С.Баркаган, Е.Д.Гольдберг и др.// Томск. - 1980. -310 с.

22. Балуда В.П. Физиология системы гемостаза / В.П.Балуда, М.В.Ба-луда, И.И.Деянов, И.К.Тлепшуков // М. 1995. - 243 с.

23. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию / З.С. Бар-каган // М.:Ньюдиамед-АО. 1998. - 45 с

24. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С.Баркаган М.: Медицина. 1988. - 528 с.

25. Баркаган З.С. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза / З.С.Баркаган, А.П.Момот // Барнаул. 1998. С.83-84

26. Бескоровайный З.Г. С-витаминный обмен и суточная потребность здорового человека в витамине С в условиях Ленинграда / З.Г.Бескоро-вайный // Диссертация. Л. - 1946. - 342 с

27. Блех Р.Л. С-витаминная недостаточность при профессиональных интоксикациях / Р.Л.Блех // Врач. дело. 1949. - 9. - С. 815-818

28. Богданова В.А. Витамин С в женском молоке / В.А.Богданова //В кн. «Современные вопросы советской витаминологии»: Медгиз. 1955. С.-102-128

29. Бок Е.И. Морфология крови / Е.И.Бок // В кн. «Цинга» Л. - 1924. С. 25-33

30. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности / И.Н.Бока-рев // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2000 а. - С. 6-7.

31. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности // «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения / И.Н.Бокарев // М.2000 б. С. 47-52

32. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика / И.Н.Бокарев // М. 2002. — 75 с.

33. Бокарев И.Н. Тромбозы, предтромботические состояния, тром-бофилии и гиперкоагуляция / И.Н.Бокарев // Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения, 2000 в. С. 39-43

34. Бродер А.И. Интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину в зависимости от липопероксидации и анти-оксидантного потенциала: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Тюмень.- 2004. 24 с.

35. Буковская А.Я. Влияние аскорбиновой кислоты на тромбообра-зующие свойства крови при применении её у больных атеросклерозом: Автореф. дисс. . к.м.н. — М.- 1959. — 23 с

36. Бышевский А.Ш. Влияние витамина С на морфологию щитовидной железы, содержание йода в ней и йодный баланс/ А.Ш.Бышевский // Дисс. . канд. мед. наук. Львов. - 1959. - 217 с (фонд ЦНМБ)

37. Бышевский А.Ш. Влияние витамина С на содержание йода в щитовидной железе /А.Ш.Бышевский // Вопр. питания. 5. - 1959. - С. 41-45

38. Бышевский А.Ш. Метод определения антиплазмина в сыворотке крови / А.Ш.Бышевский, В. Мохнатов // Система свертывания крови и фибринолиза. Киев: Здоровья. - 1969. - С. 220-221

39. Бышевский А.Ш. Антиоксиданты в коррекции гемокоагуляцион-ных сдвигов / А.Ш.Бышевский, М.К.Умутбаева, Р.Г.Алборов // М: Медицинская книга. 2004. - 80 с.

40. Бышевский А.Ш. Витамин К-зависимые белки системы свертывания крови /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян // Успехи современной биологии.- 1983. 2. С.272-280

41. Бышевский А.Ш. Биохимические компоненты свертывания крови / А.Ш.Бышевский, О.А.Терсенов, С.Л.Галян и др. Свердловск: Из-во

42. Уральский рабочий». 1990. - 211 с

43. Бышевский А.Ш. Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.Я.Шаповалов // М.: Медицина. 2006 б. - 105 с

44. Бышевский А.Ш. Влияние витаминов Вь В2, Вб, B.2, С, Р и холина на противосвертывающую систему в условиях гиперхолестеринемии / А.Ш.Бышевский //В кн. Гигиена питания. Киев.- 1966. С.79-82

45. Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция / А.Ш.Бышевский // Свердловск Средне-Уральское книжное изд-во. 1978. - 175 с

46. Бышевский А.Ш.Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш.Бышевский, Л.В.Михайлова, П.Я.Шаповалов и др // Патент № 2219546, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003

47. Бышевский А.Ш. Механизмы, предупреждающие внутрисосудистое свертывание крови /А.Ш.Бышевский // Вопросы санологии (Матер 1-й санологической конференции). Львов. - 1967. - С. 157-172

48. Бышевский А.Ш. О роли щитовидной железы в регуляции гемостаза /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Г.А.Сулкарнаева, П.Я.Шаповалов // М.: Медицинская книга. 2006 а. - 95 с

49. Бышевский А.Ш., Кожевников В.Н. Свертываемость крови при реакции напряжения. Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. 1986. - 172 с.

50. Бышевский А.Ш., Мухачева И.А., Шафер В.М. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме. А.С. № 1659855. Публик. Бюлл № 24.-30.06. 1991.

51. Вакулин А.А. Роль эритроцитов и лейкоцитов в поддержании активности тромбоцитов в зависимости от состояния перекисного окисления липидов: Автореф. дисс. . докт. мед. Наук. Челябинск, 1998. - 42 с.

52. Вакулин А.А. Гемокоагуляция при переломах длинных трубчатыхкостей и остеосинтезе, влияние комбинации витаминов-антиоксидантов: Автореф. дисс. . к.м.н. Челябинск. - 1993. - 23 с

53. Ван Чий. Изменения уровня протромбина и фибриногена в крови у больных атеросклерозом и гипертонической болезнью при лечении их аскорбиновой кислотой, холином и препаратами йода: Автореф. дисс. . к.м.н. -М. 1959. 23 с.

54. Ветрилэ С.Т. Массивная кровопотеря и коагуляционный гемостаз у детей и подростков, подвергшихся хирургическому лечению сколиоза / С.Т.Ветрилэ, Л.Г.Захарин, С.А.Васильев и др. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 2 (14). - С. 40-44

55. Винокурова Е.А. Гемостаз и перекисное окисление липидов при операциях на матке / Е.А.Винокурова // Успехи современного естествознания. 2003. - 10. - С. 56

56. Винокурова Е.А. Гемостаз при оперативных вмешательствах в гинекологической практике / Е.А.Винокурова // М.: Медицина. 2006.- 91 с

57. Витамины и минеральные вещества / под ред. М.И.Смирнова // М.: Медицина. 1974. - 496 с

58. Волков А.И. Гемостаз и перекисное окисление липидов при гипо-тиреоидном состоянии / А.И.Волков, ИЕ.Городничева // Научн. вестник ТГГМА. 2001. - 1. - С. 138-141

59. Выговский У.П. Изменения в системе прокоагулянтов, антикоагулянтов и фибринолитической активности крови при эфирном наркозе / У.П.Выговский // Врач. дело. 1964. 6. - С.76-77

60. Габбасов З.А. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов / З.А.Габбасов, Е.Г.Попов и др.// Лаб. дело. 1989 а. -С. 15-18

61. Габбасов З.А. Новый методический подход к исследованию агрегации тромбоцитов in vitro / З.А.Габбасов, Е.Г.Попов и др. // БЭБиМ, 1989 6.- 10.-С.437-439

62. Галян С.Л. Влияние на гемокоагуляцию воздействий, снижающихагрегацию тромбоцитов /С.Л.Галян, Л.С.Марченко, И.В.Ральченко,

63. A.Ю.Рудзевич // Матер, междун. Симпозиума «Медицина и охрана здоровья» . Тюмень. - 1998. - С.391

64. Галян С.Л. Предупреждение и ограничение витаминами-антиокси-дантами нарушений гемостаза, вызываемых тромбинемией: Автореф. дисс. докт. мед. наук. Челябинск. - 1993. - 44 с.

65. Гладких В.Ф. К фармакологии аскорбиновой кислоты: Автореф. дисс. к. м. н. М.- 1946 - 23 с

66. Глухенькая З.Е. Влияние внутривенных инъекций глюкозы с аскорбиновой кислотой на уровень протромбина в крови / З.Е.Глухенькая // Сб. научно-практических работ госпиталя погранвойск. Львов. - 1958. -С.171-175.

67. Гольдштейн В.И. О механизме действия витамина С / В.И.Гольд-штейн, Д.В.Волькензон, Л.Г.Кондратьева, Н.Д.Ульянова // Биохимия. -1950. 15.-2.-С.173-177

68. Гольдштейн В.И. О механизме действия витамина С /

69. B.И.Гольдштейн // Тез.докл. на Юбилейной научн. сессии института питания АМН СССР. М. 1950. - С. 35-36

70. Дедов И.И. (редактор) Осложнения сахарного диабета (клиника, диагностика, лечение, профилактика). 1995. - 44 с.

71. Дементьева И.А. Влияние витаминов-антиоксидантов на антиагре-гантную активность соединений, модифицирующих превращения в тромбоцитах арахидоновой кислоты: Автореф. дисс. . д.м.н. Челябинск. - 1998. - 41 с

72. Деранкова Е. Лечение гинекологических кровотечений / Е.Деранкова // Сов. врач. журн. 1938. - 1. - С. 25-32

73. Домбровский М.М. Лечение гинекологических кровотечений аскорбиновой кислотой / М.М.Домбровский // Автореф. дисс. . к.м.н. — Ростов на Дону. 1964. - 22 с

74. Дурова М.В. Структурно-функциональные нарушения тромбоци-тарных мембран при ишемическом инсульте. Коррекция комплексным антиоксидантом: Автореф. дисс. . к.м.н. Казань. - 1999. - 25 с

75. Ельдецова С.Н. Гемокоагуляционные сдвиги и активность радикальных процессов в плазме и эритроцитах при экстремальных воздействиях в эксперименте: Автореф. дисс. . к. б. н. Челябинск. - 1990.-24 с

76. Ефремов В.В. Авитаминозы / В.В.Ефремов // М.: Медгиз. 1944. -137 с

77. Иванова Н.А. Содержание витамина С в крови и протромбиновый индекс у детей, пораженных флуороозом: Автореф. дисс. . к.м.н. -Свердловск, 1958. - 22 с

78. Игнатьев М.В. О влиянии АК на толерантность плазмы к гепарину у больных атеросклерозом сосудов /М.В. Игнатьев // Кардиол. 1063. -3. - С.68-69

79. Израильская И.А. Патоморфология ЦНС при гипо- и авитаминозе С и при даче больших доз аскорбиновой кислоты / И.А.Израильская, И.С.Дергачев // Тез. докладов 9-й научн. сессии института питания АМН СССР.-М.- 1955,-С.104-105

80. Иноятова JI.K. Влияние аскорбиновой кислоты на холестерин/ле-цитиновый индекс и протромбин крови при гипертонической болезни и атеросклерозе / Л.К.Иноятова // Мед. ж-л Узбекистана. 1958. - 11. — С.16-21

81. Инструкция для приготовления основной диеты для крыс. Утверждено Институтом питания АМН СССР. М. - 1952

82. Каган Г.Я. Влияние С-авитаминного питания на течение экспериментальной инфекции и формирование постинфекционного иммунитета / Г.Я.Каган // Журн. микробиол. эпидемиологии и гигиены. 1952. - 2. -С. 32-34

83. Каган Г.Я. Особенности реакции организма на инфекцию в разных условиях витаминного питания /Г.Я.Каган // Вопр. питания. 1953. - 5. -С.42-49

84. Кадыков В.И. О некоторых существующих взаимоотношениях между ферментами, токсинами и витаминами /В.И.Кадыков // Тез. докл. на Юбилейной научн. сессии института питания АМН СССР. М. - 1950.1. С. 23-24

85. Коздова А.Н. Заживление ожогов при авитаминозах А, К. и С / А.Н.Коздова// Хирургия. 1942. - 10. - С. 52-57

86. Копалейшвили В. и др. Тр. НИИ акушерства и гинекологии ГрССР. Тбилиси: АМН ГрССР. - 1960 -. С. 227-230

87. Костинская А.В. Влияние витамина С на содержание холестерина в крови / А.В.Костинская // Сб. научных трудов Харьковского мед. ин-та. Харьков: ХСИ. 1958. - т. 5. - С.157-158

88. Краевская И.С. Витамин С в этиологии и патогенезе маточных кровотечений и его терапевтическое применение / И.С.Краевская // Тр. Всес. конф. по витаминам. М. - 1940. - С. 245-250

89. Кратинов А.Г. О взаимодействии фолликулярного гормона и аскорбиновой кислоты /А.Г.Кратинов, А.М.Поляякова, Е.А.Торбина, А.Т.Шкирина // БЭБиМ. 1945. - в. 1-7. - С.69-72

90. Кручакова Ф.А. Аскорбиновая кислота как профилактический фактор в питании рабочих, соприкасающихся со свинцом и его солями / Ф.А.Кручакова, В.И.Полонская // Врач. дело. 1951. - 8. - С. 725-726

91. ОО.Крыжановская Е.С. Влияние качественно различного питания насостав женского молока /Е.С.Крыжановская // Диссертация. Киев. -1956.-231 с

92. Кудрявцева Н.Г. О некоторых взаимоотношениях между витаминами, гормонами и ЦНС /Н.Г.Кудрявцева // Тез. докл 8-го Всесоюзного съезда физиологов, биохимиков, фармакологов. М. 1955. - С.349-350

93. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания / Б.А.Кудряшов //. М., 1975. - 488 с.

94. ЮЗ.Кузник Б.И. и др. Тез. Докл. симпозиума «Биологические проблемы Севера». — Петрозаводск: Петрозаводский ун-т. — 1976. С. 77-79

95. Кузник Б.И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма / Б.И.Кузник, Н.В.Васильев, Н.Н.Цыбиков // М.: Медицина, 1989.-320 с.

96. Ю5.Кузник Б.И. .Форменные элементы крови, сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз / Б.И.Кузник, В.П.Скипетров // М.: Медицина, 1974. -306 с.

97. Юб.Кузник Б.И., Михайлов В.Д., Альфонсов В.В. Тромбогеморраги-ческий синдром в онкогинекологии. Томск: Изд-во Томск, ун-та, 1983. -166 с.

98. Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс / ОЛ.Курцинь // Институт питания АМН ССР. М. - 1952. - 5 с

99. Кучер JI.C. и др. Обеспеченность витамином С при алиментарной дистрофии / Л.С.Кучер и др. // Педиатрия. 1944. - 3. - С. 53.-57

100. Лавров Б.А. Динамика распределения аскорбиновой кислоты в животном организме в связи с некоторыми факторами среды /Б.А.Лавров, Б.И.Яновская // Тез. докл. на 9-й научн. сессии института питания АМН СССР. М. - 1955. С.10-12

101. Ю.Лавров Б.А. Реактивность организма и витамины /Б.А.Лавров // В кн. Современные вопросы медицинской науки. М. - 1951. - С. 98-106

102. Ш.Лаптева-Попова М.С. Влияние аскорбиновой кислоты на ретику-лоэндотелиальную систему. Кроветворение под влиянием аскорбиновойкислоты / М.С.Лаптева-Попова // Фармакол. и токсикол. 1943. - 6. - 3. -С. 49-51

103. Левинсон М.С. Гемостатическая роль витаминов С и Р при кровотечениях из внутренних органов /М.С.Левинсон // Сов. врач. 1940. - 11. -С. 741-748

104. Леонтьев И.А. Перекисное окисление липидов и содержание кати-онных белков при лечении хронического уретрогенного простатита ла-зеромагнитноэлектростимуляцией: Автореф. дисс. . к. м. н. Тюмень. -2006. -22 с.

105. Лернер Е.Л. Данные о применении аскорбиновой кислоты и некоторых гормональных препаратов при перенашивании беременности /Е.Л.Лернер // Научная сессия по нервной регуляции эндокринных желез. Харьков. 1952. - С.58-60

106. Лошкарева Л.С.Зависимость интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности к тромбину от гемо-коагуляционной активности тромбоцитов: Автореф. дисс. . к.м.н. -Челябинск. 1999. - 23 с

107. Лунин Н.И. О значении неорганических солей для питания животных/Н.И.Лунин//Диссертация. Санкт-Петербург. - 1880. - 159 с

108. Лютова Л.В. Влияние витаминов С и Р на состояние противосвер-тывающей системы: Автореф. дисс. . к.б.н. М.- 1971.- 22 с

109. Мартинсон Э.Э. Антагонистическое влияние каротина и аскорбиновой кислоты на катепсин / Э.Э.Мартинсон, Л.П.Соколова // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1937. - 4. - 5. - С. 444-445

110. Мартинсон Э.Э. Влияние витаминов на активность протеолитиче-ских ферментов / И.В.Федосеенко Э.Э.Мартинсон // Биохимия. 1937. -2. - 6. - С. 808-823

111. Мартынюк В.З. Мероприятия по устранению поступления окиси углерода в воздушную среду и профилактика оксиуглеродных интоксикаций /В.З.Мартынюк // Сб. научн. работ Львовского мед. института.1957.-т. 16.-С. 153-158 З.А.

112. Марченко Д.С. Влияние аспирина на тромбоцитарный и коагуля-ционный компоненты гемостаза в зависимости от интенсивности процессов ПОЛ в тромбоцитах: Автореф. дисс. . к.м.н. Уфа. - 1998. - 23 с.

113. Матейкович Е.А. Влияние половых стероидов (этинилэстрадиола и левоноргестрела) на взаимодействие тромбин-фибриноген в кровотоке: Авторефер. дисс. к. м. н. Тюмень. - 2006. - 21 с.

114. Меерзон Т.И. О влиянии аскорбиновой кислоты на липазу и эсте-разу / Т.И.Меерзон // Эксперим. Медицина. 1940. - 2. - С. 1-6

115. Меныников Ф.К. Об эритропоэтической1 функции костного мозга при экспериментальном авитаминозе С / Ф.К.Меньшиков // Сб. новостей НИИП. 1938. - С. 17-29

116. Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс. Проксиданты и антиок-сиданты /Е.Б.Меныцикогва, В.З.Ланкин, Н.К.Зенков и др. // Москва: «слово». 2006. - 553 с

117. Медведева И.В. Влияние витакомплекса на структурно-функциональную организацию клеточных мембран тромбоцитов /И.В.Медведева, А.А.Нелаева, И.А.Тромшина, В.Ю.Яснов // Матер. 5-го Российского съезда эндокринологов. М. - 1996. — С. 34

118. Миневцев С.В. Влияние витаминов А, Е, С и Р на липидпероксидацию, плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину: Автореф. дисс. . к. м. н. -Тюмень, 2006. - 23 с

119. Миневцев С.В.Зависит ли влияние витаминов на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови от их антиоксидантных свойств /

120. С.В.Миневцев // Сб. тез. докл. региональной научно-практической конференции «Экологическое образование и здоровый образ жизни». Сургут. 2005 - С.118-120

121. Миронова К.А. Влияние витамина С и Р на некоторые факторы свертывания крови и резистентность сосудистой стенки при ревматических поражениях сердечно-сосудистой системы / К.А.Миронова // В кн. Ревматизм. Одесса. - 1961. - С. 270-272

122. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и гемостаз / В.П.Мищенко, И.В.Мищенко, О.И.Цебржинский // Полтава: АССМИ. 2005. - 159 с

123. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и свертываемость крови / В.П.Мищенко // Актуальные проблемы гемоста-зиологии. М.: Наука. - 1981. - С. 153-157.

124. Мирер В.И. (цитируется по А.Ш.Бышевскому, 1978)

125. Мкртумян A.M. Влияние Компливита на гемокоагуляционные сдвиги, ПОЛ, содержание молекул средней массы и свободных аминокислот в плазме крови при воздействии свинца: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1994. - 22 с.

126. Могилев И.В. К вопросу об обмене витамина С при маточных кровотечениях / И.В.Могилев // Акуш. и гинеколог. 1937. - 12. - С.26-31

127. Мясников А.Л. Витамин С и его роль в физиологии, патологии и терапии / А.Л.Мясников // В кн. Изучение витамина С в Сибири. 1938. -2.-С. 5-16

128. Мясников A.JI. Витамин С и его роль в физиологии и терапии /А.Л.Мясников // Сб. новостей НИИП. 1938. - С. 5-11

129. МО.Нелаева Ю.В. Влияние а-липоевой кислоты на коагуляционный компонент гемостаза у больных сахарным диабетом I типа / Ю.В.Нела-ева, Л.В.Сунцова, А.А. Нелаева // Научн. вестник ТГМА. 2003. - 1. - С. 59-60

130. Нижегородов В.М. Влияние аскорбиновой кислоты на течение карбокситокскоза /В.М.Нижегородов // Диссертация. Львов. - 1958. -217с

131. Новодворский В.М. Опыт определения механизма кровотечений при цинге / В.М.Новодворский // Клин. мед. 1928. - 6. - 13. - С.753-762

132. Орлова А.А. С-витаминная недостаточность при силикозе и сили-котуберкулезе /А.А.Орлова // в кн. «Силикоз (вопросы патогенеза, клиники, терапиии профилактики). М.: АМН СССР. - 1951. - С. 189-194

133. Папаян Л.П. Современное представление о механизме регуляции свертывания крови / Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 2 (14). — С. 7-11

134. Пашутин В.В. Курс общей патологии /В.В.Пашутин // СПб. -1902.-т. 2. 857 с

135. Нб.Певзнер С.Д. Картина крови при авитаминозах С / С.Д. Певзнер // Мед. ж. БССР. 1939. - 5-6-. - С. 60-63

136. Писаревский Н.Н. Свертывание крови при С-авитаминозе / Н.Н.Писаревский // Русская клиника. 1924. - 6. - С.409-417

137. Полякова В.А. Эстроген-прогестагеновые оральные контрацептивы и гемостаз /В.А.Полякова, А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян и др. // В кн. «Гемостаз при физиологической и осложненной гестозом беременности» -Тюмень. 1999. С. 69-77

138. Полякова В.А Фармакологическая реабилитация после медицинского аборта / В.А.Полякова, И.А.Карпова, Е.А.Винокурова и др. // International Journal on immunoreabilitatio. 2004. - 6. - 1. - P. 110

139. Полякова В.А. Гемокоагуляционные сдвиги у больных фибромиомой матки и их коррекция комплексом витаминов А, Е, С, Р и РР / В.А.Полякова,, В.Н.Кожевников, Т.А.Фильгус и др. // Метод, рекомендации для врачей акушеров-гинекологов. -Тюмень. 1994. - 11 с

140. Полякова В.А. Патогенетическое обоснование применения анти-оксидантов для профилактики тромбогеморрагических нарушений при беременности, родах, в послеродовом и послеоперационном периодах: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1994. - 43 с.

141. Полякова В.А. Современные аспекты оперативного лечения больных миомой матки. / В.А. Полякова, Е.А. Винокурова, Н.Б. Баклаева и др. // Матер. VI Российского форума «Мать и дитя». М. - 2004. - С. 74

142. Попандопуло П.Х. Витаминный состав кормов / П.Х.Попандопуло // М.: Сельхозгиз. 1949. - 135 с

143. Попова И.Е. Перекисное окисление липидов в плазме и тромбоцитах при тиреотоксикозе, влияние селмевита / И.Е.Попова, И.А.Мухачева // Матер. Междун. симпозиума «Медицина и охрана здоровья-98» Тюмень, 1998.-С. 393-394

144. Пушкина Н.П. Содержание аскорбиновой кислоты у отдельных групп промышленных рабочих /Н.П.Пушкина // Гигиена труда и профессиональных заболеваний. 1959. - 4. - С. 44-45

145. Пэр Ф.Л. Влияние С-авитаминоза на содержание тирозина и триптофана в некоторых органах морской свинки /Ф.Л.Пэр // В кн. Вопросы питания. Рига. - 1952. - 1. - С.77-82

146. Ральченко С.А. Влияние поливитаминных комплексов на развитие диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень. 1992. - 24 с

147. Ральченко И.В. Компливит в лечении больных с диабетической нефропатией / И.В.Ральченко, Н.В.Грачева // Тюменский медицинский журнал. -2001. -2. С. 29

148. Рейхерт Л.И. Состояние мембранно-дестабилизирующих процессов и их коррекция при мозговых инсультах: Автореф. дисс. . д.м.н. -Казань. 1999. - 41 с

149. Рысс С.М. Гиповитаминозы и болезни витаминной недостаточности / С.М.Рысс /М.: Медгиз. 1948. - 175 с

150. Рысс С.М. Витамины /С.М.Рысс // М.: Медгиз. 1955. - 312 с

151. Рысс С.М. Витамины и их роль во внутренней патологии / С.М.Рысс // 4-я научн. сессия НИИвитаминологии. М. - 1961. - С. 108109

152. Ребров В.Г. Витамины и микроэлементы / В.Г.Ребров, О.А.Громов //М.: Алев-В. 2003. -648 с

153. Рысс С.М. Инфекции, авитаминозы / С.М.Рысс, С.И.Шерман, Е.А.Металлова // Работы ленинградских врачей в годы Отечественной войны. Л. 1945. -6. С. 118-126

154. Рубинштейн Б.И. Аскорбиновая кислота в клинике внутренних болезней /Б.И.Рубинштейн, Е.В.Лебедева // Тр. Всесоюзной конф. по витаминам. М. - 1940. С. 219-223

155. Рудзевич А.Ю. Коагуляционный и тромбоцитарный гемостаз при физиологической беременности и родоразрешении кесаревым сечением, коррекция курантилом и селмевитом: Атореф. дисс. . к. м. н. Пермь. -2000 22 с

156. Рябцева З.А. Применение аскорбиновой кислоты в комплексе мероприятий по борьбе с перегревом рабочих горячих цехов /З.А.Рябцева // Диссертация. Горький. - 1954. 224 с

157. Савинов Б.Г. Каротин /Б.Г.Савинов // Киев: АН УССР. 1948. -131 с

158. Самаль А.Б. рН среды как фактор регуляции функциональныхсвойств тромбоцитов / А.Б.Самаль, С.Н.Черенкевич, Н.Ф.Хмара // Гема-тол и трансфузиол. 1989. - 34. - 2. - С. 35-38.

159. Самборская Е.П. Е.П.Самборская и др. Матер, научн. сессии инта витаминологии. -М.: АМН СССР. 1967. - С. 1454

160. Селиванова И.В. Роль тромбоцитов и эритроцитов в активации перекисного окисления липидов тромбином: Автореф. дисс. . к.м.н. Челябинск. 1994. - 24 с

161. Скворцов В.И Тромбозы и эмболии / В.И Скворцов // Труды МОНИКИ. М. - 1951. - в. 5. - С. 70-72

162. Согрин Э.Н. Гемостаз и липопероксидация при аденоме простаты / Э.Н.Согрин // В кн. Перспективы развития амбулаторно-поликлини-ческой помощи в Тюмени Тюмень: Академия. - 2004. - С.-48-49.

163. Согрин Э.Н. Продукты взаимодействия тромбин-фибриноген и перекисного окисление липидов при аденоме предстательной железы: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Тюмень. — 2005. — 22 с

164. Степашкина К.И.О картине крови и, в частности, о тромбоцитах при авитаминозе С / К.И.Степашкина // Сов. врач. 1939. - 5. - С. 259-264

165. Селезнева JI.A. Гистопатологические изменения в организме у С-авитаминозных свинок /Л.А.Селезнева // В кн. «Витамины в теории и практике». М. - 1953. - т. 4. - С. 171-176

166. Соловьев В.Г. К механизму защитного действия витаминов А, Е, С и Р при тромбинемии: Автореф. дисс. . к. м. н. Челябинск. -1991.-25 с

167. Соловьев В.Г. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии: Автореф. дисс. . д. м. н. Челябинск, 1997.- 44 с

168. Соловьева А.В. Коррекция нарушений тромбоцитарного звена гемостаза витаминами-антиоксидантами и аспирином у беременных с поздним гестозом: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Уфа, 1999. - 23 с

169. Страчицкий К.И. Действие аскорбиновой кислоты на инвертазу /

170. К.И.Страчицкий//Биохимия. 1940. - 5.- 2. - С. 181-186

171. Субботина Т.Н. Перекисное окисление липидов и состояние анти-оксидантной системы крови у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом: автореф. дисс. . к. б. н. Тюмень. - 2003. 26 с

172. Сулкарнаева Г.А. Комплексный антиоксидант селмевит в коррекции нарушений свертывания крови при диффузном токсическом зобе / Г.А.Сулкарнаева // Аллергология и иммунология. — 2004. 5. - 3. - С. 505-506.

173. Узбеков Г.А. Влияние аскорбиновой кислоты на газовый обмен /Г.А.Узбеков // Тез. докл. на 10-й научной сессии ставропольского медицинского института. Ставрополь. - 1950. - С.10-11.

174. Узбеков Г.А. Активация белков организма аскорбиновой кислотой / Г.А.Узбеков // Тез. Докл. на 14-й научн. конф. Ставропольского мед. института. Ставрополь. - 1950. - С.647-650

175. Умутбаева М.К. Интенсивность постоянного внутрисосудистого свертывания крови при модификации процессов липопероксидации /М.К.Умутбаева // Научн. вестник ТГМА (специальный выпуск «Био-нтиоксиданты»), 2003 а. С.82-83

176. Умутбаева М.К. Связь липопероксидации с гемостазом / М.К.Умутбаева // Глава в кн. «Связь гемостаза с перекисным окислением липидов». М.: Медицинская книга, 2003 б. С. 41-50

177. Умутбаева М.К. Перекисное окисление липидов и антиоксидантный потенциал тромбоцитов как факторы, определяющие интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген: Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Тюмень. - 2005. - 45 с

178. Ушкалова В.Н. Комплексный анализ липидов крови спектрофо-тометрическим, флуорометрическим и кинетическим методами /

179. B.Н.Ушкалова, Н.В.Иоанидис З.М.Деева и др. // Лаб. дело. 1987. - 6.1. C. 446-460.

180. Фатеев А.В. Влияние комбинации анестетиков на состояние липидпероксидации крови у больных ИБСС при оперативном лечении: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень. - 2006. - 20 с

181. Хритинина K.M. Коэффициент протеолиза тканей и органов при экспериментальном скорбуте у морских свинок / К.М Хритинина // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1942. - 14. - 2. - С. 32-26

182. Цирук Ю.И. Коррекция витаминами-антиоксидантами гемокоагу-ляционных нарушений у беременных с гестозом: Автореф. дисс. . канд. мед. наук Омск, 1998.- 20 с.

183. Чернова А.Л. Состояние геостаза при лапароскопическимх гинекологических операциях: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень. - 2004. - 24 с

184. Шабанов Э.А. Влияние этинилэстрадиола и левоноргелстрела на интенсивность внутримсосудистого свертывания крови и коагуляцион-ную активность тромбоцитов: Автореф. дисс. . к.м.н. Пермь. - 2000. -20 с

185. Шаповалов П.Я. Активность тромбоцитов при угнетении и активации липопероксидации / П.Я.Шаповалов, А.И.Бродер // Матер, между-нар. Симпозиума «Медицина и охрана здоровья». Тюмень. 2002. - С. 157

186. Шаповалов П.Я. Связь между влиянием витаминов на гемостаз и их антиоксидантной активностью / П.Я.Шаповалов, Г.А.Сулкарнаева

187. С.В.Миневцев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2005. -39 (5). С.90-91

188. Шаповалов П.Я. Гемостаз при назначении ригевидона на фоне угнетения компливитом перекисного окисления липидов / П.Я.Шаповалов, Т.Д.Арсаева// Тромбоз, гемостаз и реология. 2001. - 1(5). - С. 141-144

189. Шараев П.Н. Витамины и здоровье /П.Н.Шараев // Ижевск: «Экспертиза». 2004. 108 с

190. Шафер В.М. Коррекция гемокоагуляционных сдвигов при эжкс-периментальной тромбопластинемии комплексом витаминов А.Е.С.Р и РР: Автореф. дисс. . к.м.н. Челябинск. - 1989. - 23 с

191. Шевченко B.C. Влияние галаскорбина на свертывающую и анти-освертывающую системы крови у больных острым холециститом / В.С.Шевченко // Система свертывания крови и фибринолиз. Киев. -1969. - С.445-446

192. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз / А.С.Шитикова // Санкт-Петербург. 2000. - 222 с

193. Шмидт А.А. Аскорбиновая кислота, её природа и значение в живом организме / А.А.Шмидт // М.-Л. 1941. - 213 с

194. Штенберг А.И. Химический состав пищевых продуктов / А.И.Штенберг //М.: Медгиз. 1960. - 671 с

195. Эйдельман М.М. Определение аскорбиновой кислоты и оценка насыщенности организма витамином С / М.М.Эйдельман, Ф.Я.Гордон //

196. Врач. дело. 1948. - 7. - С. 565-570

197. Эйдельман М.М. Об изменениях способности крови поглощать аскорбиновую кислоту при некоторых патологических состояниях. Вопр. Питания. - 1956. - 1. - С. 32-37

198. Эйдельман М.М. Дополнение к методу определения аскорбиновой кислоты в цельной крови / М.М.Эйдельман, Ф.Я.Гордон // Врач. дело. -1951.-5.-С. 427-430

199. Юдин В.В. Влияние антеовина на гемостаз при угнетении ПОЛ селмевитом / В.В.Юдин // Научн. вестник ТГМА. 2002 а. - 5. - С.79-80

200. Юдин В.В.Влияние этинилэстрадиола и левоноргестрела на переносимость гипертромбинемии в завивимости от состояния липоперокси-дации: Автореф. дисс. . к. м. н. Тюмень. - 2002 б. 22 с

201. Ядрова В.М. О влиянии различных доз аскорбиновой кислоты на свертывемость крови /В.М.Ядрова // В кн. Фармакотерапия при нарушениях свертывающей системы крови / В.М.Ядрова // Краснодар: Кубанский мед. ин-т. 1960. - С 98-104

202. Яковлев Н.Н. Значение повышенного содержания витамина С в пище для эффективности тренировки мышц /Н.Н.Яковлев // Физиол. Журн. СССР. 1951. - 1. - С. 384-390

203. Яропольская Г.Н Опыт лечения гинекологических кровотечений витамином С / Г.Н Яропольская // Гинекология и акушерство. 1937.- 4. - С.25-30

204. Alevizos A.G. Dietary intake in immigrant Arabian pregnant women/ A.G.Alevizos, K.N.Stamatiou, R.E.Lacroix e.a. // Saudi. Med. J. 2006. - 27. -7. -P.1019-1921.

205. АП B.H. Agents ameliorating or augmenting experimental gentamicin nephrotoxicity: some recent research / B.H.Ali // Food Chem. Toxicol.- 2003. -41.- 11.-P. 1447-1452.

206. Antoniades E. Effects of antioxidant vitamins С and E on endothelial function and thrombosis/fibrinolysis system in smokers. E.Antoniades, D.Tousoulis, C.Tentolouris e.a. / Thromb. Haemost. 2003. - 89(6). - P.990-995.

207. Ariga T. The antioxidative function, preventive action on disease and utilization of proanthocyanidins / T.Ariga // Biofactors. 2004. - 21.- 1-4. P. 197-201.

208. Astuya A. Vitamin С uptake and recycling among normal and tumor cells from the central nervous system / A.Astuya, T.Caprile, M.Castro e.a. // J. Neurosci. Res. 2005. - 1-15. - 79. - (1-2). - P.146-156.

209. Barkchan P. Soma blood coagulation studies in normal and scorbuties guinea-pigs / P.Barkchan, A.N.Howard // Brit. J. nutr. 1959. - 13. - 4. - P. 389-400

210. Berkner K.L.The vitamin K-dependent carboxylase /Annu. Rev. Nutr. 2005.-25. -P.127-149

211. Basu S. Factors regulating isoprostane formation in vivo / S.Basu, J.Helmersson // Antioxid Redox Signal. 2005. - 7. - 1-2. - P.221-235.

212. Billimoria J.D. Determination of fibrinolytic activity of whole blood / J.D.Billimoria, Drysdaile, James e.a. // Lancet. 1959. - 2. - 7. - P. 471-475

213. Muran // Altern. Ther Health. Med. 2006. - 12. - 3. - P. 70-75.

214. Buehler P.W.Redox biology of blood revisited: the role of red blood cells in maintaining circulatory reductive capacity / P.W.Buehler, A.I.Alayash // Antioxid. Redox. Signal. 2005. -7.- 11-12. - P.1755-1760

215. Bulger E,M. Intracellular antioxidant activity is necessary to modulate the macrophage response to endotoxin / E.M. Bulger, I.Garcia, R.V.Maier // Shock. 2002. - 18(1). - P.58-63

216. Burger e.a. -Munchen Med. Wschr. 1934 - 7. - P.1935-1942

217. Burton G. Biokonetics of dietery RRR-a-tocoferol in the malt guinea pig at three dietary levels of vitamin С and two levels of vitamin E / G.Burton , U.Wronska, Stone L. e.a. //Lipids. 1990. - 25. - P. 199-210

218. Campbell J.K,Tomato phytochemicals and prostate cancer risk / J.K Campbell, K. Canene-Adams, B.L.Lindshield e.a. J. Nutr. 2004. - 134. - 12 (Suppl). - 3486S-3492S.

219. Carcamo J.M. Vitamin С enters mitochondria via facilitative glucose transporter 1 (Glutl) and confers mitochondrial protection against oxidative injury /J.M.Carcamo, D.W.Golde // FASEB J. 2005. - 19. - 12. - P. 1657

220. Carr C. Potential antiatherogenic mechanisms of ascorbate (vitamin C) and alpha-tocopherol (vitamin E) / A.C.Carr, B.Z.Zhu, B.Frei // Circ. Res. 2000. - 1. - 87. - 5. - P.349-354.

221. Chattopadhyay S. Apoptosis and necrosis in developing brain cells due to arsenic toxicity and protection with antioxidants / Chattopadhyay S, Bhaumik S, Purkayastha M. e.a. // Toxicol. Lett. 2002. - 15. - 136. - 1. -P.65-76.

222. Chau Y.P. Endostatin induces autophagic cell death in EAhy926 human endothelial cells / Y.P.Chau, S.Y.Lin, J.H.Chen, M.N.Tai // Histol. Histopathol. 2003. - 18. - 3. -P. 715-726.

223. Chen C.Y. Flavonoids from almond skins are bioavailable and act syn-ergistically with vitamins С and E to enhance hamster and human LDL resistance to oxidation / C.Y.Chen, P.E.Milbury, K.Lapsley, J.B.Blumberg // J.

224. Nutr. 2005. - 135. - 6. - P.1366-1373.

225. Chen P.R. Sesamol regulates plasminogen activator gene expression in cultured endothelial cells: a potential effect on the fibrinolytic system. P.R.Chen, C.C.Lee, H.Chang e.a. // J. Nutr. Biochem. 2005. - 16(1). - P.59-64.

226. Cherubini A. Potential markers of oxidative stress in stroke / A.Che-rubini, C.Ruggiero, M.C.Polidori, P.Mecocci // Free Radic. Biol. Med. 2005. - 1.-39. -7.-P.841-852.

227. Claus R.A. Role of increased sphingomyelinase activity in apoptosis and organ failure of patients with severe sepsis / R.A.Claus, A.C.Bunck, C.L.Bockmeyer e.a. // FASEB J. 2005. - 19. - 12. - P.1719-1721.

228. Claus R.A. Role of increased sphingomyelinase activity in apoptosis and organ failure of patients with severe sepsis / Claus R.A., A.C.Bunck, C.L.Bockmeyer e.a. // FASEB J. 2005. - 19. - 12. - P.1719-1721.

229. Cohen Vitamin С and iron overload /A.Cohen E.Schwartz // New. Engl. J. Med. 1981. - 304. - P. 1108

230. Cooper M.J. The iron status of Canadian adolescents and adults: current knowledge and practical implications / M.J.Cooper, K.A.Cockell, M.R.L'Abbe / / Can. J. Diet. Pract. Res. 2006. - Autumn. - 67. - 3. - P.130-138

231. Cotti L. Uber den Einfluss der Ascorbinsoure auf Blutgerrinung / L.Cotti, P.Larizza //Klin.Wochenschr. 1936. - 15. - S.227-231

232. Daui G. Enhanced lipid peroxidation and platelet activation in the early phase of type 1 diabetes mellitus: role of interleukin-6 and disease duration / G.Daui F.Chiarelli, F.Santilli e.a. // Circulation. 2003. - 107. - P. 3199-3203

233. Duckerhoff H. e.a. Versuche der Deutung der Vitamiin C-Virkung bei Blutingen Parenchimatoser und hemophilien Art / H.Duckerhoff, W.H. Pretch // Ges.exp.med. 1940. - 107. -P.497-517

234. Duckerhoff H. Versuche der Deutung der Vitamin C-Virkung bei blutingen parenchimatoser und haemofieler Art / H.Duckerhoff, V.H.Peetsch // Z. ges. Exp. Art. 1940. - 107. - S. 497-517

235. Dustin J.P. Aminaciduria in infacy an ascorbic-acid deficiency / J.P.Dustin, D. Bigwood // Proc. Nutr. Soc. 1953. - 12. - 3. - P.293-299

236. Elsayed N.M. Interplay between high energy impulse noise (blast) and antioxidants in the lung / N.M.Elsayed, N.V.Gorbunov // Toxicology. 2003. - 15.-189. - 1-2.-P.63-74.

237. Engel RH. Oxidative stress and apoptosis: a new treatment paradigm in cancer / R.H.Engel, A.M.Evens // Front. Biosci. 2006. - 1. - 11. - P. 300-312.

238. Erdogan Z. Effects of ascorbic acid on cadmium-induced oxidative stress and performance of broilers / Z.Erdogan, S.Erdogan, S.Celik, A.Unlu // Bio. Trace Elem. Res. 2005. - 104. - 1. - P. 19-32.

239. Fairfield K.M., Fletcher R.H. Vitamins for chronic disease prevention in adults: scientific review / K.M.Fairfield, R.H.Fletcher // JAMA. 2002. -19.-287(23).-P.3116-3126.

240. FluteP.T. e.a. (цит. по А.Ш.Бышевскому, 1958)

241. Funk C. Die Vitamine, ihre Bedeutung fur die Physiology mit beson-derer Berucksichtigung der Avitaminosen (Beri-beri, Scorbut, Pellagra, Rachitis) /С. Funk// Wiesbaden. 1914. - 172 s.

242. Gaertner H. Krzepniecie krwi / H.Gaertner // Krakow. 1960. - 526 s

243. Gacko M. Some components of oxidative-antioxidative system in human blood plasma and serum. M.Gacko, P.Radziwon, R.Kowalewski, e.a. //

244. Rocz Akad. Med. Bialymst. 2004. - 49. - Suppl. 1. - P. 190-191.

245. Gawaz M.P. Agglutination of izolated platelet membranes / M.P.Gawaz, I.Ott // Arterioscl. Thromb. Vase. Biol. 1996. - 16. - P. 621627.

246. Gawaz M.P. Blood Platelets / M.P.Gawaz // Stuttg.; New York: Time. -2001.- 190 p.

247. Greig H.W.B. Studies on the inhibition of fibrinolis by lipids //

248. H.W.B.Greig, I.A.Runde // Lancet. 1957. - 2.- 10. - P. 461-464

249. Gochberg S.N. e.a. Pediatres. 1956. -18. - 5. - P.701-712

250. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry / P.B.Hawk, B.L.Ozer // Pract. Physiol. Chem., N-Y. 1954. - P. 1044

251. Hetenui G. Die Behendlung der Colitis gravis mit Ascorbinsoure / G.Hetenui //Klin. Wochenschr. 1935. - 14. - 41. - S. 1470-1471

252. Huisman T.H.I. Some investigations on the metabolism of fenilalanine and tyrosine in children weith vitamin С defitiency / Huisman T.H.I., Joxis

253. H.P. // Archiv. Disease Childhood. 1957. 32. - 162. - P.77-81

254. Itoh Y. Clinical and experimental evidence for prevention of acute renal failure induced by radiographic contrast media. / Y.Itoh.// J. Pharmacol.

255. Sci. 2005. - 97. - 4. - P.473-474.

256. Joganatan S.N. Effect of different diets on plasma fibrinolytic activity in monceys / S.N.Joganatan, C.Gopalan // Indnan. J. Med. Res. 1960. - 48. -6.-P. 756-761

257. Johnson J.S. Truncated gamma-glutamyl carboxylase in rambouillet sheep /J.S.Johnson, W.S.Laegreid, R.J.Basaraba, D.C.Baker // Vet. Pathol. -2006. 43(4). - P.430-437.

258. Junghans E. Die Bahandlung von gynecologischen Blutungen mit Vitamin С / E.Junghans // Klinisch. Wschr. 1935. - 14. - 25. - S. 899-911

259. Jurk K. Platelets: physiology and biochemistry / K.Jurk, B.E. Kehrel // Semin. Thromb. Hemost. 2005. - 31(4). - P. 381-392.

260. Kennett E.C. Plasma membrane oxidoreductases: effects on erythrocyte metabolism and redox homeostasis / E.C.Kennett, P.W.Kuchel //Anti-oxid. Redox. Signal. 2006. 8. - 7-8. - P1241-1247

261. Kirkinezos I.G. Cytochrome с association with the inner mitochondrial membrane is impaired in the CNS of G93A-SOD1 mice / I.G.Kirkinezos, S.R Bacman., D.Hernandez e.a. // J. Neurosci.- 2005. 5. -25. - 1. - P.l64-172.

262. Kobayashi N. Criteria for diagnosis of DIC based on the analysis of clinical and laboratory in 345 DIC patients collected by the Research Committee on DIC in Jpan / N.Kobayashi, K.Maegawa, M. Takadae.a.e // Bibl. Haematol. 1987. -49. - P. 265-275.

263. Labinjoh C. Effects of acute methionine loading and vitamin С on endogenous fibrinolysis, endothelium-dependent vasomotion and platelet aggregation / C.Labinjoh, D.E.Newby, I.B.Wilkinson e.a. // Clin. Sci. (Lond). 2001. - 100(2). - P.127-135.

264. Lehr H.A, Vitamin С blocks inflammatory platelet-activating factor mimetics created by cigarette smoking / H.A.Lehr, A.S.Weyrich,R.K. Saetzler e.a. // J. Clin. Invest. 1997. - 15. - 99(10). - P.2358-2364.

265. Li W. Vitamin С deficiency increases the lung pathology of influenza virus-infected gulo-/- mice / Li W. N.Maeda, M.A.Beck // J. Nutr. 2006 .136.- 10.-Р.2611-2616.

266. Malomo A.O. The effect of dexamethasone, metronidazole and ascorbic acid on the morphological changes induced by gamma rays on the spinal cord of Wistar rats. /A.O.Malomo, O. Owoeye, T.N. Elumelu a.e. // Afr. J. Med. Sci. -2005. 34. - 2. - P.161-165.

267. Mani K. Defective nitric oxide-dependent, deaminative cleavage of glypican-1 heparan sulfate in Niemann-Pick CI fibroblasts / K.Mani,

268. F.Cheng, L.A.Fransson // Glycobiology. 2006. - 16. - 8. - P.711-718.

269. Manju V. Rat colonic lipid peroxidation and antioxidant status: the effects of dietary luteolin on 1,2-dimethylhydrazine challenge /V.Manju, V. Balasubramaniyan, N. Nalini // Cell. Mol. Biol. Lett. 2005. - 10. - 3. - P. 535-551.

270. Markwardt F. Blutgerinnengshemende Wirkstoffe aus blutsaugenden Tieres / F. Markwardt // Jena; Veb Gustav Fiescher Verlagg. 1963. - 122 s.

271. Martinez-Cruz F. Oxidative stress induced by phenylketonuria in the rat: Prevention by melatonin, vitamin E, and vitamin С /F.Martinez-Cruz,. D. Pozo, C. Osuna. e.a. // J. Neurosci. Res. 2002. - 15. - 69. - 4. - P.550-558.

272. McGraw G. Mecanisme d action de 1 acide ascorbique sar les temps de saignement et de coagulation / G. McGraw // Rev.canad. boil. 1956. -4.-4/ - P.295-321

273. McGraw G. Regulation des temps de saignement et goagulatic /

274. G.McGraw // Laval Med. 1960. - 29. - 3. - P.355-405

275. Miettinnen W. Effect of fasting on fibrinolysis and blood coagulation / W.Miettinnen // Amer. J. Cardiol. 1962. - 10. - 4. - P. 532-534

276. Nappo F. Impairment of endothelial functions by acute hyperhomocys-teinemia and reversal by antioxidant vitamins / Nappo F, De Rosa N, Marfella

277. R, e.a. // JAMA. 1999. - 9. - 281(22). - P.2113-2118.

278. Ngondi J.L. The effect of different combination therapies on oxidative stress markers in HIV infected patients in Cameroon / J.L.Ngondi, J.Oben, D.M.Forkah e.a. // AIDS Res. Ther. 2006. - 22. - 3. - P. 19

279. Padayatty S.I. Vitamin С as an antioxidant: evaluation of its role in disease prevention / S.I.Padayatty, A.Katz, Y.Wang e.a. // J. Am. Coll. Nutr.2003.-22.- 1. -P.18-35

280. Panda K. Vitamin С prevents cigarette smoke-induced oxidative damage in vivo / K.Panda, R.Chattopadhyay, D.J.Chattopadhyay, I.B.Chatterjee / / Free Radic. Biol. Med. 2000. - 15. - 29. - P.l 15-124.

281. Pellegrini M.P. Vitamin С has no effect on endothelium-dependent vasomotion and acute endogenous fibrinolysis in healthy smokers / M.P.Pellegrini, D.E.Newby, N.R.Johnston e.a. // J. Cardiovasc Pharmacol.2004.-44(1).-P.l 17-124

282. Perlick E. /Anticoagulantien / E.Perlick // Leipzig: Veb Georg Tiieme. 1959.415 s

283. Prasad K.N. Multiple dietary antioxidants enhance the efficacy of standard and experimental cancer therapies and decrease their toxicity / K.N.Prasad // Integr. Cancer Ther. 2004. - 3. - 4. - P.310-322.

284. Raghavan S.A. Role of ascorbic acid in the modulation of inhibition of platelet aggregation by polymorphonuclear leukocytes / S.A.Raghavan, P.Sharma, M.Dikshit// Thromb Res. 2003. - 1. - 110. - 2-3. - P. 117-126.

285. Ramel A. Correlations between plasma noradrenaline concentrations,antioxidants, and neutrophil counts after submaximal resistance exercise in men / A.Ramel, K.H.Wagner, I.Elmadfa // Br. J. Sports. Med. 2004. -38.- 5.- E 22

286. Remde W. Storungen der Blutgerinnung und Blutstillungen in der Urologie / W.Remde // Leipzig: Veb Georg Thime. 1984. - 134 s

287. Ren W. Simultaneous voltammetric measurement of ascorbic acid, epinephrine and uric acid at a glassy carbon electrode modified with caffeic acid / W.Ren H.Q.Luo, N.B.Li // Biosens. Bioelectron. 2006. - 15. - 21. - 7. -P.1086-1092.

288. Rifici V.A. Administration of antioxidant vitamins does not alter plasma fibrinolytic activity in subjects with central obesity / V.A.Rifici, S.H.Schneider, Y.Chen, A.IC.Khachadurian // Thromb. Haemost. 1999. - 7. -78(3). - P.1111-1114.

289. Roomi M.W. In vivo and in vitro antitumor effect of ascorbic acid, lysine, proline, arginine, and green tea extract on human fibrosarcoma cells HT-1080 / M.W.Roomi, V.Ivanov, T.Kalinovsky. e.a. // Med. Oncol. 2006. - 23.- 1. P.105-111.

290. Sanguigni V. CD40 ligand enhances monocyte tissue factor expression and thrombin generation via oxidative stress in patients with hypercholesterolemia. V.Sanguigni, D.Ferro, P.Pignatelli, e.a. // J. Am. Coll. Cardiol. -2005.-4.-45(1).-35-42.

291. Sen C. Inward potassium transport systems in skeletal muscle derivedcells are highly sensitive to oxidant exposure / C. Sen, J.Kolosova, O. Han-ninen // Free radical Biol, med. 1994. - 4. - P. 130-136

292. Shen Antioxidant and antiplatelet effects of dang-gui-shao-yao-san on human blood cells / A.Y.Shen, T.S.Wang, M.H.Huang e.a. // Am. J. Chin. Med. 2005a . - 33. - 5. - P.747-758.

293. Shy M.E. Charcot-Marie-Tooth disease: an update / M.E.Shy // Curr. Opin. Neurol. 2004. - 17. - 5. - P.579-585.

294. Stief T.W. Singlet oxygen inactivates fibrinogen, factor V, factor VIII, factor X, and platelet aggregation of human blood / T.W.Stief, J.Kurz, M.O.Doss, J.Fareed // Thromb. Res. 2000. - 15. - 97(6). - P.473-480.

295. Su D. Three mammalian cytochromes b561 are ascorbate-dependent ferrireductases / D.Su, H.Asard //FEBS J. 2006. - 273. - 16. - P.3722-3734.

296. Sumitra M. Experimental myocardial necrosis in rats: role of arjunolic acid on platelet aggregation, coagulation and antioxidant status /М. Sumitra, P.Manikandan, D.A.Kumar e.a. // Mol. Cell. Biochem. 2001. - 224(1-2). -P.135-142.

297. Swirbey J.L. The chemical nature of vitamin С / J.L.Swirbey, A. Szent-Gyorgyi // Biochem. Journ. 1928. - 27. - p. 279-285

298. Tofler G.H. The effect of vitamin С supplementation on coagulability and lipid levels in healthy male subjects. G.H.Tofler, J.J.Stec, I.Stubbe, e.a. // Thromb. Res. 2000. - 1. - 100(1). - P.35-41.

299. Tousoulis D. Vitamin С affects thrombosis/ fibrinolysis system and reactive hyperemia in patients with type 2 diabetes and coronary artery disease /D.Tousoulis, C.Antoniades, C.Tountas, e.a. // Diabetes Care. 2003. -26(10).-P.2749-2753.

300. Trueba G.P. Oxygen free radical and antioxidant defense mechanism in cancer / G.P.Trueba, G.M.Sanchez, A.Giuliani // Front. Biosci.- 2004. 1.-9. - P. 29-44.

301. Turi J.L. Duodenal cytochrome b: a novel ferrireductase in airway epithelial cells / J.L.Turi, X.Wang, A.T.McKie e.a. // Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 2006. - 291. - 2. - P. 272-280

302. Wada H. Hemostasis study before onset of disseminsted intravascular coagulation / H.Wada, K.Minamikawa, Y.Wakita e.a. // Am. J. Hematol. -1994.-43. P. 265-275.

303. Wada H. Increastd plasma solubilit flbrinin patients with dissiminated iinravascular coagulation / H.Wada, Y.Wakita, T.Nakase e.a. // Am. J. Hematol., 1996. 51.-P. 255-260.

304. Wada H. The diagnosis and treatment of the DIC-syndrome / H.Wada, C.Esteban, H.Gabbaza e.a. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 1. С. 16-22.

305. VanWijk M.J. Microparticles in cardiovascular diseases. VanWijk MJ, E.VanBavel, A.Sturk, R.Nieuwland // Cardiovasc. Res. 2003. - 1. - 59(2). -P.277-287.

306. Velsor L.W. Influence of epithelial lining fluid lipids on N0(2)-induced membrane oxidation and nitration / L.W.Velsor, C.A.Ballinger, J. Patel, E.M.Postlethwait // Free Radic. Biol. Med. 2003. - 15. -34. - 6. -P.720-733.

307. Verrax J. Oxidative stress by ascorbate/menadione association kills

308. К562 human chronic myelogenous leukaemia cells and inhibits its tumour growth in nude mice / Verrax J., Stockis J., Tison A. e.a. // Biochem. Pharmacol. 2006. - 14. - 72. - 6. - P. 671-680.

309. Vogt E. Uber die Behandlung Gynecologischer Blutungen nit Vitamin С / E.Vogt // Munch. Med. Wochensch. 1935. - 82. - S. 263-265

310. Yamasaki C. Growth and differentiation of colony-forming human hepatocytes in vitro /Yamasaki C, Tateno C, Aratani A e.a. // J. Hepatol. -2006 . 44. - 4. - P.749-757

311. Yeh H.I. Reduced expression of endothelial connexins 43 and 37 in hypertensive rats is rectified after 7-day carvedilol treatment H.I.Yeh, P.Y.Lee, S.H.Su e.a. Am J. Hypertens. 2006. - 19. - 1. - P. 29-35