Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние ретинола на липидпероксидацию, антиоксидантный потенциал тромбоцитов, уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген в плазме и толерантность к тромбину

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние ретинола на липидпероксидацию, антиоксидантный потенциал тромбоцитов, уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген в плазме и толерантность к тромбину"

Из правах рукописи

Пустынников Александр Викторович

ВЛИЯНИЕ РЕТИНОЛА НА ЛИПИДИЕРОКСИДАЦИЮ, АНТИОКСИДАНТНЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ТРОМБОЦИТОВ, УРОВЕНЬ МАРКЕРОВ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ТРОМБИН-ФИБРИНОГЕН В ПЛАЗМЕ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.00.04-Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ООЗ15ЭЗ 12

Научный руководитель - доктор медицинских наук профессор 1ЪЯ ЛШп'

Тюмень - 2007

003159312

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Тюменская государствен нал медицинская академия Росздрава

Научный руководитель: доктор медицинских наук профессор Шаповалов Петр Яковлевич.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Корчин Владимир Иванович доктор биологических наук профессор Кадочникова Галина Дсмснтьсвна

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Омская медицинская академия Росздрава»

Защита состоится 26 октября 2007 г и 9 часов на заседании диссертационного Совета ДМ 212.274.07 при Тюменском государственном университете по адресу: г. Тюмень, ул. Пирогова. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале библиотеки Тюменского государственного университета

Автореферат разослан ^ ¿¿-¿^г^^У 2007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор биологических наук профессор

Общая характеристика работы. Актуальность Исследований. Биологическая активность витамина А, проявляющаяся участием в процессах роста, оксидоредукции, обмене протеинов и липидов [Б А Лавров, 1951, А.А Душейко, 1962; ПНШараев, 2004], в иммунной защите, в светоощущении [А О Натансон, 1961, П Н Шараев, 2004, В П Мищенко и др, 2005, А Ш Бышевский и др, 2006; Campbell J К е а, 2004; Verrax Je а 2006], и, наконец, его антиоксидантные свойства [В ПМищенко, 1981; Nappo Fea, 1999], позволяют ожидать, что и гемостаз - система эволюциони-зирующая параллельно с системой кровообращения и существовавшая в примитивной форме и до нее [Б А Кудряшов, 1975] - может зависеть от обеспеченности организма витамином А (ретинолом) Вместе с тем, связь гемостаз-ретинол изучена недостаточно, хотя и предполагалась еще в 50-е гг прошлого столетия на основе наблюдений с применением тестов, отражающих уровень отдельных прокоагулянтов, но не позволяющих охарактеризовать состояние гемостаза в целом [ПИБурула, 1960, Pool, 1955, Loscialpo, 1959] Связь выявляли и в единичных опытах с дефицитом ретинола или его нагрузкой [А Ш Бышевский, НБЛуцюк, 1962; MacGraw, 1969], также в клинике [М.Я.Тоя-Колесникова, 1961; Commerel еа, 1960] Затем гемостазиологи применяли более информативные методы для оценки связи ретинол-гемостаз [А.Ш.Бышевский, 1962, 1963], используя как модель гиперкогуляции алиментарную гиперхолестероле-мию [ГГБазазьян, НП Сытина, 1961, 1969, Ю.П. Никитин, 1962; Oppengheim, Bruger, 1952], но и это не дало убедительных результатов из-за несовпадения данных, полученных в разных лабораториях

В итоге, эти плохо доступные анализу разрозненные данные не позволяют считать установленной связь между обеспеченностью организма ретинолом и гемостазом Однако, то, что профилактические дозы ретинола при наклонности к гиперкоагуляции сдерживают её развитие [Ю П Никитин, 1962; Г.Г Базазьян и др , 1969, А Ш Бышевский, 1978], и сведения о свойстве витаминных комплексов, включающих ретинол, сохранять функциональную активность системы гемостаза, указывает на необходимость продолжить исследования такого рода [А.Ш Бышевский и др, 2006] На то же указывают единичные публикации последних лет [С В.Миневцев, 2005, 2006], согласно которым решнол у экспериментальных животных в дозах, эквивалентных лечебным, ограничивает скорость липидперокси-дации (ЛПО), поддерживает антиоксидантный потенциал (АОП) и повышает способность организма реагировать на гипертромбинемию

Все это свидетельствует о связи ретинол-гемостаз, тем более что ретинол обладает свойствами антиоксиданта [Е Б Меньшикова и др., 2006], а возмущения в системе гемостаза часто связаны с ускорением свободнорадикальных процессов [С Л Галян, 1993; С Л.Галян и др., 2002, П.Я Шаповалов и др , 2001, 2003, 2005, Trueba G Р. е а , 2004, Riccioni G е а., 2007]

Сказанное определило направление нашей работы и позволило сформулировать задачи для ее достижения

Цель исследования. Экспериментально изучить влияние рациона, несодер-жащего витамина А и содержащего его в избытке, на липидпероксидацию, антиоксидантный потенциал, интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген и способность организма реагировать на гипертромбинемию

Задачи исследования:

1 Изучить интенсивность ЛПО и АОП тромбоцитов, плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) и реакцию на гипертром-бинемию (толерантность к тромбину) у животных, получающих рацион, несо-держащий витамина А;

2 То же изучить у животных, получающих рацион, содержащий витамин А в количестве, кратно превосходящем суточную потребность,

3 Изучить состояние ЛПО и АОП, интенсивность ВТФ и толерантность к тромбину при введении прооксиданта (свинца) или антиоксиданта (димефосфо-на) с рационом, несодержащим витамина А и содержащим его в избытке,

4 То же изучить у животных, получающих атерогенный рацион без ретинола или содержащий его в дозах, заметно превышающих суточную потребность,

Анализ данных, полученных при выполнении задач 1-й и 2-й, вызвал необходимость изучить скорость лизиса фибринового сгустка, в связи с чем была поставлена еще одна задача.

5 Изучить наряду с ЛПО, АОП, ВТФ и толерантностью к тромбину, активность фибринолиза у животных, получающих полноценный рацион, атерогенный рацион без витамина А и с его избытком.

Научная новизна.

Впервые показано, что у крыс, получающих рацион без витамина А, ускоряется ЛПО, снижается АОП и ускоряется взаимодействие тромбин-фибриноген, отражающее интенсивность непрерывного внутрисосудастого свертывания крови

Впервые показано, что при наличии в рационе двух-, четырёх- и шестикратного избытка витамина А в тромбоцитах дозазависимо растет антиоксидантный потенциал, замедляются ЛПО и ускоряется взаимодействие тромбин-фибриноген

Обнаружено, что толерантность к тромбину (способность организма адекватно реагировать на гипертромбинемию) снижается при отсутствии витамина А в рационе и дозазависимо растет при его избытке

Впервые показано, что отсутствие витамина А в рационе усиливает эффект прооксиданта (свинца) на ЛПО, АОП и на НВСК, и что эти эффекты прооксиданта дозазависимо ослабляются при избытке витамина А.

Установлено, что гиперхолестеролемия, вызываемая на фоне рациона, несо-держащего витамина А, сопровождается ускорением НВСК, более выраженным, чем на фоне рациона, включающего витамин А (особенно в дозах, превышающих суточную потребность). Показано и то, что витамин А в количествах, превышающих суточную потребность в 6 и 12 раз, ускоряет фибринолиз (в эйглобу-линовой фракции плазмы, не содержащей антиплазминов) пропорционально длительности введения, и что активация фибринолиза, видимо, и является причиной увеличения уровня РКМФ и Б-димеров, в то время как содержание других маркеров непрерывного внутрисосудастого свертывания продолжает снижаться Практическая ценность работы

1 Полученные данные обосновывают необходимость углублять изучение гемостаза в зависимости от степени обеспеченности организма витамином А, особенно при состояниях с наклонностью к гиперкоагулящш (сердечно-сосудистые

заболевания, возрастные метаболические сдвиги, заболевания с хроническим течением -те состояния, сопровождающиеся эндогенным дефицитом витамина А).

2. Наши данные о приросте уровня ПДФ и Б-димеров при длительной нагрузке ретинолом свидетельствуют о целесообразности сопоставления динамики сдвигов плазменного содержания всех доступных определению маркеров ВТФ в разнообразных экспериментальных ситуациях, ведущих к ускорению или угнетению липидпероксидации. Не исключено, что обнаруженный нами феномен -прогрессирующее снижение уровня фф, Р} Р4 и ПДФ, прирост уровня РКМФ и Л-димеров, сменивший их первоначальное снижение при угнетении переписного окисления липидов избытком витамина А, - приобретет диагностическое значение

На защиту вынесены следующие положения

1 При отсутствии витамина А в составе полноценного (по остальным критериям) рациона питания ускоряется ЛПО и НВСК, падает антиоксидантный потенциал и способность организма адекватно реагировать на гипертромбинемию

2. Присутствие в полноценном рационе питания ретинола в дозах, превышающих суточную потребность в 2-4 раза, замедляет ЛПО и НВСК, повышает АОП и толерантность к тромбину, а шести- и двенадцатикратный избыток, кроме того, активирует фибринолиз

3 Отсутствие витамина А в составе атерогенного рациона усугубляет ускорение НВСК и снижение толерантности к тромбину, а его шести- и двенадцатикратный (против суточной потребности) избыток ограничивает эти изменения и активирует фибринолиз

4 То, что отсутствие витамина А усугубляет эффекты прооксиданта на ЛПО, на ВТФ и толерантность к тромбину, а большие дозы препятствуют эффектам прооксиданта, тогда как эффекты антиоксиданта невитаминной природы суммируются с эффектами витамина А, свидетельствуют, что влияние ретинола на гемостаз связано с йнтиоксидантными свойствами, а при высоких дозах еще и со способностью ускорять лизис фибрина.

Апробация и публикация.

Результаты работы опубликованы в журнале, рекомендованном ВАК для соискателей степени кандидата наук (3 статьи), в материалах Всероссийской (с международным участием) конференции «Тромбозы в клинике . » (С -Петербург, 2007), как глава в монографии (М - «Медицинская книга») и на электронной конференции «Экологические проблемы внутренних болезней, перинатоло-гии и педиатрии» (2007, три статьи)

Доложены на заседании Тюменского регионального отделения РАЕ (2006, 2007), на заседании Тюменского отделения Биохимического Общества (2006).

Структура и объем диссертации Работа изложена на 114 страницах, содержит 16 таблиц, 7 рисунков, включает введение, обзор литературы, собственные исследования (методы и результаты), обсуждение, выводы, список литературы (244 публикации - 101 отечественная и 143 зарубежных).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Опыты проведены на нелинейных белых крысах-самцах (170±14 г, 1020 особей) Выбор животных обусловлен тем, что для крыс создан и апробирован сба-

лансированный рацион питания, известна суточная потребность в витаминах (в ретиноле, в частности), тем, что влияние на гемостаза алиментарных факторов изучали чаще на крысах, тем, что у крыс можно брать пробы крови из v jugüaris в шприц со стабилизатором в количестве, достаточном для определения намеченных к исследованию показателей (до 38-40 мл/кг массы тела), не нарушая требований гемостазиологии к взятию проб [ВПБалуда и др, 1978, 3 С.Бар-каган, А ПМомот, 1998] Так как гемостаз подвержен сезонным сдвигам и действию метеофакторов [А Ш Бьппевский, В Н Кожевников, 1986] во все серии включали контрольную группу За 2-3 дня до опытов и при их выполнении крысы получали рацион, соответствующий рекомендациям института питания АМН СССР [ОЯКурцинь, 1952] С суточной порцией рациона ежедневно вводили суточную дозу витаминов А - 200 ME, D - 40 ME, Е - 1 5 мг, Bj - 200 мкг, В2 -250 мкг, В6 - 200 мкг, пантотенат-Са2+ - 1500 мкг, РР - 250 мкг, холин - 50 мг на кг массы тела по описанной технологии В кормушки вносили порцию рациона из расчета 100 г/кг массы [О Я Курцинь, 1952] Преимущества рациона установлены сравнением со стандартами Дональдсона для «идеальных» крыс [Hawk, 1923, Hawk, Ozer, 1954], его эффективность подтверждена публикациями из институтов питания АМН СССР (М) и УССР (Киев), кафедр биохимии, кафедр гигиены питания Киевского, Львовского и других медицинских институтов (1958-1975 гг ) Кровь брали шприцом из обнаженной вены у крыс, наркотизированных диэтиловым эфиром, стабилизируя её 3,8% раствором цитрата натрия (1 9). Рану закрывали кожным швом (кетгут)

Отделяли плазму крови центрифугированием и определяли в ней уровень следующих маркеров ВТФ

1 Продукты деградации фибрина (ПДФ) - маркеры ВТФ и активации фибрино-лиза, развивающейся в ответ на фибринацию [Т А Рудницкая, 2003, Wada еа, 1996, 2003] - определяли известным методом [А III Бышевский и др , 1991]

2. D-димеры - маркеры фибринообразования или компенсаторного фибринолиза [Б Г Соболева и др 2003, de Moerloose, Boehlen, 2003] - определяли путем латекс-ной агглютинации с моноклональными к D-димерам антителами (набор «D-dimer test", Roche), результат выражали в мкг/мл эквивалентов фибриногена

3 РКМФ - их концентрация увеличивается при росте коагуляционной активности крови [Wada е.а, 1996, 2003] - определяли с помощью количественного варианта фенантролинового теста [А П Момот и др, 1999]

4 Ф Рз - по разнице показателей АВР плазмы до и после освобождения ее от тромбоцитов - метод Rabiner & Groder в описании [В П Балуда и др 1980]

5 Ф Р4 - по действию прогретой и обедненной тромбоцитами исследуемой плазмы (источник ф Р4) на тромбин-гепариновое время свертывания усредненной нормальной плазмы (источник ФГ и антитромбина III) [В П Балуда и др , 1980]

Определявшиеся фф Р3 и Р4 - косвенные маркеры ВТФ - их уровень в плазме пропорционален уровню в крови тромбина, ускоряющего реакцию высвобождения [Д М Зубаиров, 2000, А С Шишкова, 2000]

6 Концентрация ФГ плазмы, свертываемого тромбином (при наличии других признаков ускоренного ВТФ, свидетельствует об активации внутрисосудистого свертывания крови [Wada е а, 2003]) Определение проводили спектрофотоме-трически [А Ш Бышевский, В Мохнатов, 1969]

7 Для уточнения механизма действия ретинола на гемостаз оценивали Хагеман-

зависимый фибринолиз Использован прием, основанный на определении скорости лизиса эуглобулинов, осажденных из бедной тромбоцитами плазмы, обработанной каолином [Г Ф Еремин, А П Архипов, 1982] Ход определения - согласно описанию [3 С Баркаган, А П Момот, 1998]

В части опытов использован стандартный рацион, включавший холестерол и 6-МТУ (2г/кг и 3 мгУкг в суточной порции соответственно) - тиреостатики способствуют изменению липидного обмена за счет снижения функциональной активности щитовидной железы Этот рацион мы далее называем атерогенным

ЛПО и АОП оценивали, определяя содержание первичных и вторичных липид-пероксидов в тромбоцитах диеновых конъюгат (ДК) и продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-продукгы), период индукции (ПИ), скорость индуцированного окисления (СО) Экстрагировали липиды смесью гептана и изопро-пилового спирта в равных объемных соотношениях (100-кратный избыток)

Содержание ДК оценивали по оптической плотности (X = 232 нм) гептановой фазы Содержание ТБК-продуктов определяли в экстракте флуорометрически [ВНУшкалова, 1993, 1997] Интенсивность флуоресценции возбуждения устанавливали с помощью флуориметра «Биан 130»

Кинетические величины прямого инициированного окисления липидов молекулярным Ог в присутствии динитрилазобисизомаслянной кислоты (инициатор сво-боднорадикального окисления) определяли в экстрактах, выражая ПИ временем, затрачиваемым на поглощение пробой 25 мм3 О2, а СО - углом наклона линейного участка кинетической кривой [С Н Ельдецова, 1990, В Н Ушкалова, 1993, 1997] Интенсивность ЛПО и значения АОП изменяли, вводя животным ацетат свинца

- прооксидант, или димефосфон (ДМ) - антиоксидант

Ацетат свинца вводили с рационом (50 мг/1 кг массы тела) В этой дозе свинец активирует ЛПО и снижает АОП без признаков нарушения обмена порфиринов даже при длительном введении [ААМкртумян, 1994, МКУмутбаева, 2003], что обусловлено всасыванием из кишечника лишь около 5% ацетата свинца, введенного с рационом [Материалы ВОЗ Свинец, 1980] Димефосфон - синтетический антиоксидант, поддерживающий эффект физиологических антиоксидантов организма, заметно не изменяющий гемостаза [С.Н Ельдецова, 1990; А М Мкртумян, 1994]

- вводили в дозе 1г/кг, которая повышает у крыс АОП и умеренно изменяет агрегацию тромбоцитов, позволяя находить эффект других антиоксидантов, в нашем случае - эффект ретинола [М К Умутбаева, 2003, Р.Г Алборов, 2006]

Для определений ЛПО и АОП в тромбоцитах, их выделяли и отмывали по описанию [А Б Самаль и др , 1989]

Толерантность к тромбину устанавливали по описанию к патенту [А Ш.Бышев-ский и др, 2003] Раствор тромбина (1 мл/кг массы тела, активность по времени свертывания 0 2% раствора ФГ - 24 с) вводили в яремную вену фиксированной на станке крысы после её пробуждения от наркоза (диэтиловый эфир) Пробы 1фови брали через 30 мин (0 9 мл в шприц с 0 1 мл 3 8% раствора трехзамещенного цитрата натрия) В плазме определяли содержание коагулируемого тромбином ФГ [А Ш Бышевский, В Мохнатое, 1969] Расчет проводили по формуле

О = {1- [(Ск - Со): Ск]} х 100 где Б - остаточная концентрация ФГ, %, Ск - концентрация ФГ в плазме крыс, которым тромбин не вводили и каким-либо воздействиям не подвергали (исходный уровень), Со - концентрация ФГ у крыс, которым ввели тромбин на фоне изучающегося воздействия или без него (остаточная концентрация).

Значение остаточной концентрации ФГ (Со) у крыс, которым тромбин ввели без предварительных воздействий, принимали за стопроцентную толерантность к тромбину, и устанавливали степень её изменения (в %) при изучаемом воздействии по формуле Х% = (Do/Dk)x100, где X - толерантность к тромбину, %, Do - остаточная концентрация ФГ (в %) у группы, подвергавшейся изучаемому воздействию, Dk - остаточная концентрация ФГ (в %) у группы, не подвергавшейся изучаемому воздействию (контроль)

Результаты, полученные этим способом, специфичны ФГ - основной субстрат тромбина в процессах свертывания [Д М Зубаиров, 2000, 3 С Баркаган, 1998], снижение уровня ФГ при гипертромбинемии зависит от состояния всех систем, обеспечивающих выживание организма при гипертромбинемии [Б А Кудряшов, 1975, А Ш Бышевский и др, 1987, В П Балуда и др, 1995, Д М Зубаиров, 2000]

Активность фибринолиза оценивали по скорости лизиса эуглобулинов, полученных го бедной тромбоцитами плазмы после обработки её каолином [Г Ф Еремин, А П Архипов, 1982] согласно описанию [3 С Баркаган, А П Момот, 1998]

Содержание XJI в сыворотке крови определяли методом, основанным на реакции Либермана-Бурхарда [М И Прохорова, 1982].

Анализ результатов. Количественные данные обрабатывали методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений, вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (т) и среднеквадра-тическое отклонение (о) Для оценки достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стьюдента (t) и величину вероятности (р)

Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирование, определяя те же величины. Различия считали достоверными при значениях р < 0 05) Оценивая результаты одновременного действия двух факторов, использовали способ дифференциации эффектов - «суммация», «потенцирование» или «антагонизм», предложенный Диксоном и Уэббом [1966]

Графический анализ, включая определения степени достоверности отличий (р) и коэффициентов аппроксимации трендов (R2) проводили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 97)

Схемы выполнения отдельных опытов зависели от решаемой задачи - поэтому они приводятся перед описанием конкретных экспериментов

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Эффекты рациона, не содержащего витамина А. и дополнительного введения витамина А на ЛПО, АОП. содержание маркеров ВТФ в плазме и толерантность к тромбину. Опыты этой серии выполнены по схеме группа 1-я (контроль интактный) - животные получали полноценный рацион (ретинол в соответствии с суточной потребностью - 200 ME/кг), группа 2-я - тот же рацион без ретинола (А-авитаминный рацион); группы 3-я, 4-я и 5-я получали рацион, содержащий ретинол (400, 800 или 1200 ME/кг, что выше суточной потребности в 2, 4 и 6 раз соответственно) Эти дозы эквивалентны профилактической, средней и высокой лечебной дозе Кровь в ipynnax 2-5-й брали через 2, 4 и 6 недель от начала опыта, у контрольных - на 3-й неделе (в середине опыта), В пробах определяли показатели ЛПО, АОП и маркеры ВТФ. Число животных в группе (п) указано здесь и далее в таблицах

Из данных табл 1 следует, что ЛПО усилилась при отсутствии ретинола в рационе (выросло содержание липидпероксидов - ДК и ТБК), а при избытке -замедлилось АОП при отсутствии ретинола в рационе снизился через 6 недель

(укорочен ПИ и выросла СО), а при избыточном введении ретинола - АОП увеличивался пропорционально дозе и длительности введения.

Таблица 1 ЛПО и АОП в тромбоцитах у крыс, неполучавших ретинол и получавших его в дозе, равной суточной потребности, и в дозах, превышающих потребность в 2, 4 и б раз (1-я строка -2, 2-я - 4 и 3-я - 6 недель) Полужирным шрифтом здесь и далее выделен

контроль

Показатели Крысы получали ретинол в дозе 200 МЕ/кг (контроль) л-'14 Животные (п - 7 на каждом этапе) получали ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

ДК А/мг ЛП 0 051^0 003 0 057±0 004 0063Ю 002* 0 07210002* 0 047±0 004 0 04410 001* 0 037±0 002* 0 042±0 004* 003440 003* 0 03010 002* 0 021±0 001* 001610002* 0 01210 002*

ТБК, ед /мг ЛП 0 76±0 05 0 81±0 03 0 9110 04* 0 S9±0 05* 0 69±0 05* 0 64±0 04* 0 57±0 03* 0 65±0 03* 0 60Ю04* 0 51 ±0 02* 0 4710 04* 03710 02" 0 2210 02*

ПИ мин/мл 45 7±1 4 46 0±1 6 43 8±1 2 33 7±1 4* 4б9±2 1 57 0±1 2* 64 6±1 8* 50 8±1 1* 61 5±1 9* 69 111 8* 63 4±1 9" 69 811 9* 77 411 8*

СО, мм3/мл/мин 0 7510 03 0 77±0 05 0 81±004 0 9210 04* 069±0 04 0 65Ю 03* 0 57±0 04* 0 6310 03* 0 5510 02* 0 5010 02* 0 4410 03* 0321003* 0 2110 02*

Обозначения ДК - диеновые конъюгаты, ЛП - липид, ТБК - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ - период индукции, СО - скорость окисления, знак * - достоверное отличие от контроля

Из данных табл 2 видно, что у крыс, не получавших ретинола, к концу опыта повысился в небольшой мере уровень маркеров ВТФ (в сравнении с контролем) Таблица 2 Содержание маркеров ВТФ в плазме крыс, неполучавших ретинол и получавших его в дозе, равной суточной потребности, и в дозах, превышающих потребность в

2,4 и б раз (1-я строка - 2, 2-я - 4 и 3-я - б недель)

Показатели Крысы получали ретинол в дозе 200 МЕ/кг (контроль), п-14 Животные (п - 7 на каждом этапе) получали ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

Ф Рэ,% 89 011 3 87 311 2 91 0114 96 911 2* 85 711 6 82 111 1* 77 011 2* 82 111 6* 78 211 5* 69 911 5* 78 311 4* 64 211 3* 60 111 6*

Ф Р( с 3 410 02 3 510 05 3 110 05 2 810 01* 3 210 03 3 010 02* 2 7Ю 02* 2 710 02* 2 410 02* 2 010 01* 2 110 02* 1 910 02* 1 710 01*

ФГ, г/л 2 310 04 2 210 09 211010 2 210 09 2110 08 2 110 09 2 210 07 2 110 08 2 11009 2 310 07 2 31008 2 610 05* 2 610 08*

ПДФ, мг% 15 111 0 15 311 0 16 111 4 12 111 2* 14 311 4 14 010 6* 9 910 5* 12 311 1* 12 010 8* 8 810 9* 17 911 1* 191109* 18 610 5*

РКМФ, мкг/мл 24 110.7 22 611 2 25 0109 28 1Ю9* 19 810 7 17 910 9* 15 710 7* 17 411 0* 14 2106* 13 110 5* 15 410 6* 12 7±1 1* 10 9Ю4»

D-Д, мкг/мл 0 20±Ö 009 0 1810 013 01810 018 0 2210 007* 01710 OOS 0 1610 012* 0 14Ю 010* 0 1410 011* 01110 010' 0 0810 009* 0 2910 010" 0 2710 008" 0 3010 004*

Обозначения Ф - фактор, ФГ - фибриноген, ГЩФ - продукты деградации фибрина, РКМФ - растворимые комплексы мономерного фибрина, В-Д - Б-димеры, знак * - достоверное отличие от контроля

При введении ретинола в дозе, превышающей суточную потребность в 2 раза (400 МЕ/кг), снижен уровень маркеров ВТФ к 6-й неделе, а тенденция к сниже-

нию наметилась через 4 недели При дозе ретинола в 800 ME/кг, снижение уровня маркеров ВТФ выявилось уже через 4 недели, будучи значительнее, чем при дозе 400 ME/кг К 6-й неделе сдвиг заметно усилился

У крыс, получавших ретинол в большей дозе (1200 ME/кг), уже через 2 недели выявлены примерно такие же сдвиги, как при меньшей в 2 раза дозе Сдвиги нарастали к концу наблюдений В отличие от других групп при этой дозе ретинола через 6 недель уровень ПДФ и D-димеров стал выше контроля

Концентрация ФГ в плазме изменилась только у крыс, получавших 1200 ME/кг ретинола, а в других группах не изменялся.

Таким образом, отсутствие ретинола в рационе привело к слабо выраженной активации ЛПО и снижению АОП тромбоцитов, и сопровождалось ускорением НВСК (повышением плазменного уровня маркеров ВТФ) При введении ретинола в избытке скорость ЛПО снижается, а АОП увеличивается одновременно со снижением уровня маркеров ВТФ Степень изменений растет с увеличением дозы ретинола и длительности введения

В следующей серии опытов в те же сроки изучали влияние рациона без ретинола и избытка ретинола на толерантность животных к тромбину, сохраняя ту же схему 1-я группа (контроль интактный) - полноценный рацион (доза витамина А - 200 МЕ/кг), 2-я группа (А-авитаминный рацион), 3-я, 4-я и 5-я группы - рацион, содержащий витамин А в количестве 400, 800 или 1200 МЕ/кг

В табл 3 видно, что при отсутствии ретинола в рационе через 2 недели выявилась тенденция снижения толерантности к тромбину (на 9%, р > 0 05) Через 4 недели снижение составило 15%, а через 6 недель - 21% (в обоих случаях р < 0 05) Введение ретинола в дозе, превышающей потребность в 2 раза, вызвало тенденцию к росту толерантности к тромбину уже через 2 недели, усилившуюся через 4 недели К концу 6-й недели рост толерантности к тромбину стал существенным- 26% к контролю

Таблица 3 Толерантность к тромбину у крыс, неполучавших ретинол и получавших его в дозе, равной суточной потребности, и в дозах, превышающих потребность в 2, 4 и 6

раз

(1 -я строка - 2, 2-я - 4 и 3-я - 6 недель)

Показатели Крысы получали ретинол в дозе 200 МЕ/кг (контроль), п -14 Животные (п - 8 на каждом этапе) получали ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

Толерантность к тромбину, % 100±1 6 91±1 6 84 1±1 4* 79±1 3* 108±2 1 111±22 126±2 1* 117±1 7* 122±2 2* 132±2 3* 124±2 2* 136±2 1* 135±2 3*

Обозначения знак * - достоверное отличие от контроля

При введении ретинола в дозе, превышающей потребность в 4 раза, толерантность к тромбину увеличилась уже через 2 недели, и заметнее - через 4 и 6 недель - на 12, 22 и 32% соответственно (во всех случаях р < 0 05) То же, но в большей степени, наблюдали у крыс, получавших ретинол в дозе, превышающей потребность в 6 раз - прирост толерантности составил 24, 36 и 35% к контролю через 2,4 и 6 недель соответственно

Следовательно, потребление рациона без ретинола сопровождается снижением толерантности к тромбину, достигающим достоверных, но небольших значений на 6-й неделе Избыток ретинола повышает толерантность при не-

большой дозе через 6 недель, а при вдвое большей - через 4 недели. При дозе, превышающей потребность в б раз, рост толерантности выявляется через 2 недели и достигает через 4 недели максимума, не увеличиваясь в дальнейшем

ЛПО при введении ретинола с прооксидантом. Чтобы уточнить, связаны ли сдвиги ВТФ с антиоксидантными свойствами витамина А, или эта связь обусловлена какими-либо иными свойствами, мы изучили эффекты ретинола на фоне ускоренной ЛПО Предполагалось, что если связь ретинол-гемостаз реализуется не за счет антаоксидантных свойств витамина А, то на ее характере не отразится изменение фона, на котором оцениваются ЛПО, АОП и ВТФ в условиях авитаминоза А и при избыточном введении ретинола Отличие от выше-рассмотренных опытов состоит в том, что вместе с ретинолом крысы получали ежедневно ацетат свинца (50 мг/кг) Контроль А (крысы получали ретинол, 200 МЕ/кг, отбор проб проведен один раз через 3 недели), и контроль Б (крысы получали ретинол, 200 МЕ/кг, и ацетат свинца) В группе «Контроль Б» и в подопытных группах пробы брали через 2,4 и 6 недель

Сравнение контролен А и Б (табл 4) показывает, что введение свинца на фоне ретинола в дозе, равной суточной потребности, активирует ЛПО (рост уровня ДК и ТБК) и снижает АОП (укорочение ПИ и рост СО). Изменения усиливаются с увеличением длительности опыта Введение свинца с рационом без ретинола еще заметнее активировало ЛПО и снизило АОП Введение ретинола в дозе 400 МЕ/кг ослабило сдвиги ЛПО и АОП (сдвиги сохраняли отличия от контроля А, но не достигли значений в контроле Б) При введении ретинола в дозе 800 МЕ/кг сдвиги, вызываемые свинцом, уменьшились, и в ещё большей степени уменьшились они у крыс, получавших ретинол в дозе 1200 МЕ/кг - у этой группы животных выявилось снижение скорости ЛПО и рост АОП

Таблица 4 ЛПО и АОП в тромбоцитах у крыс, получавших с ацетатом свинца (50 мг/кг) ретинол в дозе, равной суточной потребности, у неполучавших ретинола, и получавших его в дозах, превышающих потребность в 2,4 и 6 раза 1-я строка - 2, 2-я - 4, 3-я -_б недель_

Показатели Контроль А Крысы полу, чали ретинол в дозе 200 МЕ/кг п -12 Контроль Б (крысы получали ацетат свинца, 50 мг/кг) и ретинол (200 МЕ/кг) п - 7 на этапе Животные (п - 7 на этапе) получали ацетат свинца (50 мг/кг) и ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

дк А/мг ЛП 0 053±0 003 0 067±.0 003* 0 075± 0 003* 0 085± 0 004* 0 075±0 004*+ 0 084± 0 003*+ 0 092± 0 002*+ 0 059±0 002*+ 0 061±0 003*+ 0 060±0 004*+ 0 054±0 011+ 0 055±0 011+ 0 052±0 008+ 0 042±0 005*+ 0 044±0 004*+ 0 045±0 005*+

ТБК, ед /мг ЛП 0 74±0 010 0 82±0 012* 0 87±0 009* 0 93±0 003* 0 94±0 05*+ 0 99±0 09*+ 1 14±0 04*+ 0 79±0011* 0 78±0 011*+ 0 78±0 011*+ 0 73±0 013+ 0 75±009+ 0 72±0 011 + 0 77±0 012+ 0 70±0 010*+ 0 69±0 012*+

ПИ мин/мл 50 2±2 1 40 5±1 3* 37 2±1 5* 31 0±1 2* 354±1 2*+ 31 0±1 4*+ 27 е±о 03*+ 48 0±1 8*+ 47 3 2±1 1*+ 46 4±1 1*+ 499±1 2+ 50 9±0 014+ 52 0±0 022+ 57 0±2 1*+ 55 2±0 011*+ 54 6±0 021+

СО, мм3/мп/мин 0 61±0 04 0 90±0 07* 0.99±0.11* 1 22±1.4* 0 96±0 03*+ 1 20±1 2*+ 1 37±1 5*+ 0 69±0 03*+ 0 68±0 04*+ 0 71±003*+ 0 62±004+ 0 60±1 0+ 0 65±1 2+ 0 54±0 04*+ 0 52±-08*+ 0 53±04*+

Обозначения как к табл 2, знак * - достоверное отличие от контроля А, + - от контроля Б

Данные о содержании у животных маркеров ВТФ представлены в табл 5 Таблица 5. Плазменное содержание маркеров ВТФ у крыс, получавших с ацетатом свинца (50 мг/кг) ретинол в дозе, равной суточной потребности, у неполучавших ретинола, и получавших его в дозах, превышающих потребность в 2,4 и 6 раз

Показатели Контроль А Крысы получали ретинол в дозе 200 МЕ/кг п-12 Контроль Б (крысы получали ацетат свинца, 50 мг/кг) и ретинол (200 Животные (п - 7 на каждом этапе) получали ацетат свинца (50 мг/кг) и ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

Ф Р3,% 79 7±1 1 99,1± 1 1* 104±1 6* 114±1 2* 109±1 4*+ 113±15*+ 128±1 7*+ 89 9±1 2*+ 90 0±1 1*+ 89 4±1 4*+ 82 4±1 5+ 83 8±1 3+ 83 2±1 6+ 81 3±1 4+ 81 2±1 1+ 80 6±1 1 +

Ф Р4 с 3 2±0 02 4 9±0 02* 5 0±0 05* 5 1±0 03* 3 7±0 01*+ 4 1±0 03*+ 43±0 04+ 3 4±0 02*+ 3 5±0 01*+ 3 5±0 009*+ 3 4±0 01 + 3 5±0 02+ 3 3±0 04 3 4 ±0 04+ 3 3±0 02+ 3 1±0 04+

ФГ, г/л 2 210 01 1 9±0 06* 1 6±0 04* 1 5±0 03* 1 8±0 03*+ 1 5±0 03*+ 1 4±0 02*+ 1 9±0 03*+ 2 0±0 03+ 1 9±0 02*+ 1 9±0 05+ 21±006+ 2 1±0 07+ 2 1±0 04+ 2 2±0 02+ 1 9±0 07+

ПДФ, мг% 15 0±0 8 24 2±0 6* 25 3±0 7* 28 1±0 5* 28 3±1 2*+ 32 3±06** 35 9±0 5*+ 19 4 ±1 2*+ 20 1±1 1*+ 17 9±1 1*+ 20 1±1 0*+ 22 2±1 1*+ 19 1±1 2*+ 22 3±0 9*+ 24 1±1 0*+ 24 8±1 2*+

РКМФ, мкг/мл 25 0±1 0 34 5±1 1* 36 9±1 0* 39 7±1 3* 37 9±1 3*+ 38 6±1 2*+ 42 2±1 4*+ 27 9±1 4*+ 28 1±1 2*+ 29 3±1 1*+ 26 5±1 0+ 27 1±1 1 + 27 4±1 0+ 27 0±1 1+ 26 8±0 8+ 27 1±1 1+

D-Д, мкг/мл 0 19±0 003 0 33±0011* 0 35±0 012* 0 37±0 010* 0 35±0 011*+ 0 39±0 012*+ 044±0 015+ 0 24±0 009*+ 0 25±0 011++ 0 27±0012*+ 0 23±0 009*+ 0 24±0 011*+ 0 25±0 013*+ 0 26±0 010*+ 0 24±0 012*+ 0 27±0 013*+

Обозначения как к табл 2, знак * - достоверное отличие от контроля А, + - от контроля Б В плазме крыс, получавших свинец с рационом, содержавшим ретинол в соответствии с суточной потребностью - 200 МЕ/кг (контроль А), через 2 недели повышен уровень всех маркеров ВТФ (исключение - ФГ) Степень прироста несколько увеличивается в последующие сроки, а уровень ФГ снизился через 2 недели (снижение усугублялось в последующие сроки)

У крыс, получавших свинец с рационом без ретинола (4-й столбец) сдвиги имеют ту же направленность, выражены заметнее, и усилились через 4 и 6 недель Уровень ФГ снижается, но убыль невелика.

При введении свинца вместе с ретинолом (400 МЕ/кг) уровень маркеров ВТФ занял среднее место между показателями контроля Б и группы, получавшей свинец с рационом без ретинола. Уровень ФГ стал ближе к значениям в контроле А При введении свинца с ретинолом (800 МЕ/кг) уровень маркеров ВТФ (исключая ПДФ и Б-димеры) такой же, как в контроле А Содержание ПДФ и О-димеров не достигло контроля, оставаясь несколько выше (р < 0 05)

Т е эффект прооксиданта сопровождался ускорением ВТФ, ретинол ограничивал его эффект отчасти дозазависимо (эффекты доз в 800 и 1200 МЕ/кг примерно одинаковы, но ниже, чем эффекты меньших доз).

Снижая на фоне прооксиданта скорость ЛПО, и ограничивая угнетение АОП, ретинол в дозах, превышающих суточную потребность в 4 и б раз, сдерживает сдвиги не всех маркеров ВТФ - отчасти сохраняется повышенный уровень в плазме ПДФ и О-димеров, что может быть обусловлено свойством ретинола активировать фибринолиз Это было проверено экспериментально (см ниже)

В опытах по той же схеме изучили толерантность к тромбину Из данных табл. 6 видно, что введение прооксиданта с полноценным рационом сущест-

венно снижает толерантность к тромбину (на 60, 61 и 76% за 2,4 и 6 недель соответственно). Введение прооксвданта с рационом без ретинола, усугубляет снижение толерантности - за 2, 4 и 6 недель на 73, 79 и 85% При введении про-оксиданта с ретинолом в дозе 200 МЕ/кг, степень снижения во все сроки менее заметна, чем у крыс, получавших ретинол в соответствие с суточной потребностью, оставаясь ниже контрольной (контроль А) - на 61, 59 и 71%%

Таблица б Толерантность к тромбину у крыс, получавших ретинол в дозе, равной суточной потребности, у неполучавпшх ретинола, и получавших ретинол в дозах, превышающих потребность в 2, 4 и 6 раз одновременно с ацетатом свинца (50 мг/кг) 1-я строка

- 2, 2-я - 4, 3-я - 6 недель

Показатели Контроль А Крысы получали ретинол в дозе 200 МЕ/кг п -12 Контроль Б (крысы получали ацетат свинца, 50 мг/кг) и ретинол (200 МЕ/кг МЕ/кг) Животные (п - 7 на каждом этапе) получали ацетат свинца (50 мг/кг) и ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

ТкТР,% 100±1 8 34 0±1 0* 29.1 ±1 4" 24,1±1.1* 27 1±1 2*+ 21 2±1 1*+ 15 0±1 3*+ 39 2±1 4*+ 41 3±1 1*+ 28 9±1 0*+ 47 9±1 0*+ 57 8±1 V* 59 1±1 1*+ 91 3±2 1+ 90 4±4 1+ 92 2±2 6+

Обозначения * - достоверное отличие от контроля А, + - от контроля Б При введении прооксиданта одновременно с ретинолом в дозе 800 МЕ/кг, толерантность снижается на 52, 42 и 41%% в те же сроки При введении прооксиданта одновременно с ретинолом в дозе 1200 МЕ/кг, толерантность в те же сроки оказалась ниже контрольной на 9, 10 и 8% соответственно (изменения статистически недостоверны, но их однонаправленность свидетельствуют, что полного восстановления толерантности и в этом случае не произошло - сохраняется тенденция понижения)

Влияние ретинола йа гемостаз и ЛПО при введении с антиоксидантом. В этой части работы изучали влияние ретинола, вводившегося одновременно с антиоксидантом невитаминной природы - димефосфоном (ДМ), который, не изменяя заметно свертываемости крови [А М Мкртумян, 1994, В.Г Соловьев, 1997], в дозе 1г/кг ограничивает ЛПО и повышает АОП [М К.Умутбаева, 2003]. Схема опытов с ДМ та же, что и с прооксидантом контроль А (крысы получали ретинол, 200 МЕ/кг), контроль Б (крысы получали ДМ, 1г/кг)

Из данных табл. 7 видно, что у крыс контроля Б введение ДМ с рационом, содержащим ретинол (200 МЕ/кг), снизило интенсивность ЛПО и увеличило АОП (снижен уровень ДК и ТБК, удлинен ПИ, снижена СО) через 2 недели, и это стало еще заметнее через 4 и 6 недель При введении ДМ с рационом без ретинола сдвиги всех показателей ЛПО и АОП произошли в том же направлении, но появились только через 6 недель и были менее выражены Если ДМ вводили с ретинолом в дозе 400 МЕ/кг, степень угнетения ЛПО была значительнее и через 2 недели скорость ЛПО оказалась ниже, чем в контролях А и Б, что стало ещё заметнее через 4 и 6 недель С той же динамикой у животных этой группы удлинялся ПИ и уменьшалась СО Еще более заметные сдвиги нашли и в группе, получавшей ДМ с наибольшей дозой ретинола (1200 МЕ/кг).

Следовательно, ДМ при отсутствии в рационе ретинола проявляет менее выраженную антиоксидантную активность, а при введении одновременно с ретинолом эффекты обоих антиоксидантов отчасти суммируются

Таблица 7 ЛПО и АОП в тромбоцитах у крыс, получавших ретинол в дозе, равной суточной потребности, у неполучавших ретинола, и получавших ретинол в дозах, превышающих потребность в 2, 4 и б раз одновременно с димефосфоном (1 г/кг)

Показатели Контроль А Крысы получали ретинол, 200 МЕ/кг п -12 Контроль Б (крысы получали ДМ, 1 г/кг) и ретинол (200 МЕ/кг) п - 7 на этапе Животные (п - 7 на этапе) получали димефосфон (1 г/кг) и ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

ДК. А/мг ЛП 0 055±0 004 0 0471.0 004* 0 0401 0 002* 0 0341.0 002* 0 049±0 003 0 044± 0 003 0 039± 0 002*+ 0 046±0 002* 0 038±0 003* 0 037±0 004* 0 043±0 003*+ 0 036±0 001*+ 0 031±0 005*+ 0 040±0 004*+ 0 036±0 005*+ 0 03110 005*+

ТБК, ед /иг ЛП 0 73±0 011 0 6810 011* 0 62Ю 007* 0 51Ю 004* 0 71Ю 03 0 6610 05 0 64±0 02*+ 0 68±0 012* 0 60±0 01Г 0 47±0011*+ 0 58±0 012*+ 0 60±0 011*+ 0 47±0 011*+ 0 55+0 010*+ 0 52±0 011*+ 0 46±0 010*+

ПИ, мин/мл 50 512 1 53 211 0 57 9±1 4* 64 211 3* 51 1±1 1 53911 5 60 0±0 03*+ 54 0±1 8* 57 3 2±1 1* 61 0±1 0*+ 55 911 8*+ 59 211 1*+ 63 0+1 0*+ 57 9±2 0*+ 60 8±0 009*+ 64 3±0 020+

СО мм3/мл/мин 0 5910 03 0 54±0 07* 0 49±0 10* 0 3811 2* 0 56±0 03 0 54±0 21 0 49±1 5*+ 0 50±0 03*+ 0 44±0 02*+ 0 32±0 03*+ 0 51±0 01*+ 0 44±0 02*+ 0 31±0 03*+ 0 4810 05*+ 0 411-0 8*+ 0 ЗОЮ 3*+

Обозначения как к табл 2, знак * - достоверное отличие от контроля А, + - от контроля Б

В табл 8 - данные об уровне ВТФ у этих же крыс Здесь видно, что введение ДМ с ретинолом в дозе, равной суточной потребности (200 МЕ/кг), снизило уровень маркеров ВТФ и не изменило уровня ФГ (сравнить с контролем А) Таблица 8 Плазменное содержание маркеров ВТФ у крыс, получавших одновременно с димефосфоном (1 г/кг) ретинол в дозе, равной суточной потребности, у неполучавших ретинола, и получавших ретинол в дозах, превышающих потребность в 2, 4 и 6 раз

1-я строка - 2, 2-я - 4, 3-я - б недель

Показатели Контроль А Крысы получали ретинол, 200 МЕ/кг П —12 Контроль Б (крысы получали ДМ, 1 г/кг) и ретинол, 200 МЕ/кг п - 7 на этапе Животные (п - 7 на этапе) получали димефосфон (1 г/кг) и ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

Ф Рэ,% 80 1±1 2 79111 0 77 0±1 1* 76.1±1 1* 83 1±1 4 80 4±1 7 77 1±1 0* 81 2±1 2 78 0±1 1 74 3±1 2*+ 76 411 5*+ 73 811 3*+ 71 711 4*+ 71 0±1 3*+ 70 ОН 0*+ 69 611 1*+

Ф Р4 с 3 310 01 3 110 02 2 9±0 04* 2 5±0 02* 3 310 02 3 1±0 04 2 8±0 04*+ 3 2Ю07 2 6Ю 01*+ 2 3±0 007*+ 2 810 02*+ 2 51001*+ 2 110 04*+ 2 4 ±0 03*+ 2 3±0 01*+ 2 010 01*+

ФГ, г/л 2 2±0 02 2 4±0 03 2 1±0 02 2 4±0 03 1 9±0 04 2 0±0 05 3 4±0 02 1 9±0 05 2 1±0 03 2 010 02 1 910 05 2 110 03 2 НО 06 2 210 04 2 010 02 1 910 07

ПДФ, мг% 15 210 6 14 2±0 7 12 1±0 6* 10 4±0 4* 14 5±1 2 13 3±0 7 12 2±0 4** 13 9 ±1 1 11 8±1 3 9 1±0 6*+ 13119*+ 11 211 2*+ 10 010 9*+ 13 510 8* 15 511 0+ 17 8Н 1*+

РКМФ, мкг/мл 24 8±0 9 22.711 2 19 9±1 1* 17 9±1 0* 23 611 3 21 111 2" 194±1 4*+ 22 9±1 5 20 810 8 16 3±1 0*+ 20 311 1*+ 19 311 0*+ 27 411 0+ 20 011 1*+ 18110 5*+ 15 111 2*+

од, мкг/мл 0 20±0 002 0 18±0 009 0 17±0 008* 0 1510 007* 0 1910 011 0 18±0 011 0 17±0 009*+ 01910 012 01710 018 0 1310 011*+ 01810 007*+ 0 1610 012*+ 0 1110 013*+ 01910 010 0 2510 013*+ 0 2810 011*+

Обозначения как к табл 2, знак * - достоверное отличие от контроля А, + - от контроля Б

У крыс, получавших ДМ с рационом без ретинола (контроль Б), уровень маркеров ВТФ также снизился, но в меньшей степени, чем в контроле Б

У животных, получавших по 400 МВ/кг ретинола уровень маркеров ВТФ занял среднее положение между его величинами в контролях А и Б - т е степень сдвига ниже, чем у крыс получавших ДМ с рационом без ретинола

При введении ретинола в дозе 800 МЕ/кг, особенно 1200 МЕ/кг степень снижения уровня маркеров ВТФ заметнее - эффекты ДМ и ретинола отчасти суммированы Исключение - ПДФ и Б-димеры — их уровень в плазме в поздние сроки эксперимента выше, чем в контролях А и Б

Таким образом, уровень маркеров ВТФ при введении ДМ с ретинолом в дозе, равной суточной потребности, снижается заметнее, чем без ретинола С увеличением дозы ретинола эффект ДМ (замедление ВТФ) становится выше, а при наибольшей дозе влияние ретинола на большую часть маркеров ВТФ нарастает, но уровень ПДФ и Б-димеров повышается

Опыты с оценкой толерантности к тромбину при введении ДМ (табл 9) проведены по такой же схеме ДМ на фоне ретинола в дозе 200 МЕ/кг вызвал небольшой, но прогрессирующий с увеличением длительности опытов рост толерантности к тромбину, ДМ с рационом без ретинола также увеличил толерантность, но в меньшей мере (прирост толерантности - 11% против 18 % в контроле Б, р < 0 05) Введение ДМ с ретинолом в дозе 400 МЕ/кг вызвало больший рост толерантности (относительно контроля Б), также через 4 недели

Таблица 9 Толерантность к тромбину у крыс получавших ретинол в дозе, равной суточной потребности, у неполучавших ретинола, и получавших ретинол в дозах, превы-

шающих потребность в 2,4 и 6 раз одновременно с димефосфоном (1 г/кг) _ 1-я строка - 2, 2-я - 4,3-я - б недель_

Показатели Контроль А Крысы получали ретинол в дозе 200 МЕ/кг п —12 Контроль Б (крысы получали димефос-фон, 1 г/кг) и ретинол (200 МЕ/кг) п - 7 на этапе Животные (п - 7 на каждом этапе) получали димефосфон (1 г/кг) и ретинол (МЕ/кг массы тела) в дозах

00 400 800 1200

ТкТР,% 100±12 112±1 1* 118+1 2* 129±1 3* 105±1 1 111+1 0* 117±1 4*+ 117±1 4* 122+1 1* 135+1 3*+ 120±1 8* 127±1 4*+ 141+1 5"+ 142±2 Г+ 151+3 0*+ 184±3 1*+

Обозначения * - достоверное отличие от контроля А, + - от контроля Б Введение ДМ с ретинолом в дозе 1200 МЕ/кг вызвало рост толерантности к тромбину уже в конце 2-й недели, и в большей мере - через 4 недели Особенно значителен подъем толерантности через 6 недель

Хагеман-зависимый Фибринолиз при содержании крыс на рационе без витамина А, и йЙи его избытке Выше показано, что избыток ретинола, превышающий суточную потребность в 6 раз, угнетает ЛПО и замедляет ВТФ (по уровню фф Рз, Р4 и РКМФ), ограничивает эффект свинца и потенцирует эффект ДМ при введении в течение 6 недель Однако, снижение уровня ПДФ и D-димеров, наблюдавшееся через 2 и 4 недели, сменилось к 6-й неделе их повышением Это позволило думать, том, что значительный избыток ретинола может вызывать еще и ускорение фибринолиза Поэтому мы провели опыты с введением ретинола в уже испытанной (1200 МЕ/кг) и удвоенной дозе (2400 МЕ/кг), увеличив длительность введения до 8 недель Фибринолиз в контроле определяли до опытов, через 4, 6 и 10 недель от его начала в связи с тем, что этот показатель сильно варьирует [БАКудряшов, 1975, Hirschl ММ е.а, 2007, Lee СК, 2007] Анализ данных, полученных в эти сроки в контроле, не выявил значительных

колебаний фибринолиза, что позволило усреднить результаты и представить в контроле среднее значение его скорости.

Из данных табл 10 видно, что рацион без ретинола привел к небольшой активации ЛПО и снижению АОП, как это нашли мы ранее в шестинедельных опытах (табл 1) Длившееся 8-10 недель пребывание животных на рационе без ретинола сопровождается дальнейшим ускорением ЛПО и снижением АОП У животных, рацион которых включал 1200 МЕ/кг ретинола, за 6 недель скорость ЛПО снижалась, как и прежде, а АОП увеличивался (сравнить с табл 1). Продолжалось угнетение ЛПО и позднее через 8 недель скорость ЛПО снизилась заметнее (уровень ДК в тромбоцитах упал через 6 недель до 0 027 А/мг липи-дов, контроль - 0 031 А/мг липидов), а через 10 недель до 0 020 А/мг липидов Примерно так же изменился и уровень ТБК-продуктов, ПИ удлинялся, а СО увеличивалась

Таблица 10 ЛПО и АОП у крыс, получавших ретинол в дозе 200 Б/кг (суточная потребность), неполучавших ретинола, и получавших его в дозах, превышающих потреб-

ность в 6 и 12 раз (1-я строка - 2, 2-я - 4, 3-я - 6,4-я - 8, 5-я - 10 недель)

Показатель Контроль, крысы получали ретинол (200 МЕ/кг), п - 18 Животные (п- 6 на 00 (п -7 на этапе) этапе)получали р в дозах 1200 (п - 7 на этапе) зтиноп (МЕ/кг) 2400 (п - 7 на этапе)

ДК. А/мг ЛП 0 055±0 004 0 054±0 004 0 0571 0 003* 0 0621 0 002* 0 067± 0 003* 0 069± 0 004* 0 041±0 005* 0 037±0 003* 0 031±0 005* 0 027±0 003* 0 02010 003* 0 03810 002* 0 03110 002* 0 02610 002* 0 01810 001* 0 01410 005*+

ТБК ед /мг ЛП 0 73±0 011 0 741004 0 8010 06* 0 85±0 07* 085±0 04* 0 88Ю 08* 0 5510 01Г 0 53±0 010* 0 4710009* 0 4310 012* 0 38±0 009* 0 5110 010* О 4910 012* 0 4210 013* 0 3910 010*+ 0 3310 012*

ПИ мин/мл 50 512 1 51 0±1 3 47 911 6 44 8±1 1* 43 911 7* 42 7±1 1* 57 411 4* 62 7Ю 006* 63 410 021 66 5Ю 005* 67 110 023 61 911 7*+ 65 711 5* 70 011 1* 76 211 4* 82 111 2*

СО, мм3/мл/мин 0 5910 03 0 381004 0 63±0 25 066±041* 0 6810 27* 0 69±0 51* 0 461004* 0 421-0 7* 0 3310 4* 0 321-06* 0 33104* 0 4210 02* 0 3610 03* 0 2810 04* 0 2910 03* 0 2310 01*

Знак * - достоверные отличия от контроля У животных, получавших 2400 МЕ/кг, изменения в том же направлении еще значительнее

Таким образом, значительное увеличение дозы ретинола и длительности его введения усугубляет угнетение ЛПО и рост АОП, а отсутствие ретинола в рационе животных активирует ЛПО и снижает АОП.

В табл 11 приведены величины, характеризующие сдвиги содержания маркеров ВТФ у этих животных у получавших рацион без ретинола, росло содержание маркеров ВТФ не только до 6-й недели, но и позднее (на 8-й неделе уровень выше, чем на 6-й, а на 10-й выше, чем на 8-й)

Скорость фибринолиза за 6 недель не изменилась, а через 8 и 10 недель оказалась сниженной (удлинилось время лизиса) При введении ретинола в дозе 1200 МЕ/кг прирост уровня маркеров ВТФ ограничился уже к концу 2-й недели, а снижение уровня части маркеров ВТФ (фф. Р3 и Р4, РКМФ) прогрессировало

до конца опыта Такая же динамика изменений уровня фф Рз, Р4 и РКМФ у крыс, получавших ретинол в дозе 2400 МЕ/кг в сутки

Таблица 11 Плазменное содержание маркеров ВТФ и Хагеман-зависимый фибрино-лиз у крыс, получавших ретинол в суточной потребности, неполучавших ретинола, и получавших его в дозах, превышающих потребность в 6 и 12 раз (1-я строка - 7, 2-я - 7,

3-я - 6, 4-я - 8, 5-я -10 недель)

Животные (п- 7 на этапе) получали ретинол (МЕ/кг)

Показатель Получали ретинол в дозах

(200 МЕ/кг), п - 10 на 00 1200 2400

этапе (п - 5 на этапе) (п - 5 на этапе) (п - 5 на этапе)

82 0±1 5 71 3±1 2* 70 0±1 4*

Ф Рз,% 80 1±1 2 83 1±1 9 67 8±1 1* 62 2±1 1*

87 4±1 1* 64 7±1 2* 61 1±1 3*

89 8±1 9* 63 5±1 2* 52 9±1 2*

92 5±1 3* 63 0±1 2* 481±1 3*

3 ¿±0 01 3 2±0 04 2 5 ±0 04* 2 2 ±0 02*

ФР(с 3 4±0 05 2 3±0 06* 2 0±0 02*

3 8±0 04* 2 1±0 01* 1 8±0 03*

3 9±0 04* 2 0±0 04* 1 4±0 03*

4 1±0 04* 1 9 02* 1 0±0 02*

2 2±0 04 2 2±0 04 2 1±0 03

ФГ, г/л 2 2±0 02 2 0±0 05 2 1±0 03 2 0±0 02

2 410 06 1 9±0 07 2 240 06

2 0+0 05 2 1±0 03 2 0±0 02

2 4±0 06 1 9±0 07 1 9±0 04

16 0±1 1 12 9±0 9* 13 7±0 7*

ПДФ, 15 2±0.6 16 2±0 9 14 7±1 1 15 6±1 1

мг% 19 4±0 5* 18 1±1 1* 19 4±1 2*

18 9±1 1* 19 2±1 Т 21 0±1 6*

19 6±0 4* 19 9±1 0* 26 2±1 3*

23 9±1 5 20 1±1 3* 18 7±1 2*

РКМФ, 24 8±0.9 24 5±1 Э 18 3±0 7* 17 9±0 5*

мкг/мл 29 8±1 3* 15 6±1 1* 14 3±1 2*

30 5±1 1* 14 9±0 7* 11 6±0 7*

29 9±1 2* 13 8±1 2* 11 0±1 0*

о-д, 0 21±0 011 0 18±0 010* 019±0 010

мкг/мл 0 20±0 002 0 20±0 009 0 24±0 010* 0 26±0 014*

0 23±0 004* 0 27±0 013* 0 31±0 016*

0 24±0 008* 0 29±0 012* 0 35±0 016*

0 25±0 003* 0 31±0 012* 0 37±0 013*

Ф Х!1а- 8 3+0 05 8 2±0 02 6 9±0 04*

завмсимый 8 5±0 04 7 9±0 03* 6 3±0 05*

фибрино- 8 0±0 04 9 0+0 06 7 3±0 05* 6 0±0 03*

лиз, мин, 10 1±0 06* 6 8±0 04* 5 6±0 02*

п -24 10 4±0 05* 6 2±0 06* 5 1±0 03*

Знак * - достоверные отличия от контроля Содержание ПДФ и Б-димеров при введении ретинола в дозах 1200 и 2400 МЕ/кг ниже контроля через 2-4 недели, а затем (особенно при дозе 2400 МЕ/кг) прогрессивно растет, превысив контрольный уровень через 10 недель

Отсутствие ретинола в рационе лишь через 8 и 10 недель проявляется замедлением лизиса фибрина, причем степень замедления в эти сроки одинакова -те его торможение поздно развивается и не прогрессирует

При избытке ретинола фибринолиз, напротив, ускоряется уже через 2 недели при дозе 1200 МЕ/кг, и заметнее - при дозе 2400 МЕ/кг С удлинением опыта скорость лизиса нарастает при обеих дозах, особенно при большей из них

Из данных табл 12 видно, что толерантность к тромбину у крыс, неполучав-ших с рационом ретинола, обнаруживала тенденцию к снижению уже в первые недели Однако достоверный сдвиг был выявлен лишь через 8 недель - снижение толерантности на 16, а через 10 недель на 21 %.

Таблица 12 Толерантность к тромбину у крыс, получавших ретинол в суточной потребности, нелолучавших ретинола, и получавших его в дозах, превышающих потреб-

ность в 6 и 12 раз (1-я строка - 2, 2-я - 4, 3-я - 6, 4-я - 8, 5-я -10 недель)

Животные (п- 5 на этапе) получали ретинол (МЕ/кг)

Показатель Получали ретинол в дозах

(200 МЕ/кг), п-10 на 00 1200 2400

этапе (п - 5 на этапе) (п - 5 на этапе) (п - 5 на этапе)

Толерант- 96± 2 3 120±2 6* 126±2 4*

ность к 94±3 1 127±2 9* 132±2 4*

тромбину, 100±2 6 (п - 24) 95± 2 3 131 ±2 9* 142±2 0*

% 84±3 6* 146±3 2* 154±2 7*

79± 2 5* 155±3 5* 166±2 9*

Знак * - достоверное отличие от контроля Избыток в рационе ретинола (1200 МЕ/кг) привел к росту толерантности через 2 недели на 20, через 4 - на 27, через 6 недель на 131, через 8 и 10 недель -на Í48 и 155 % соответственно Значительнее эффект большей дозы ретинола (2400 МЕ/кг) за 2,4, 6, 8 и 10 недель на 26, 32,42, 54 и 66 %% соответственно

Итак, отсутствие ретинола в рационе сопровождалось умеренной активацией ЛПО, снижением АОП, ростом уровня маркеров ВТФ, слабо выраженным угнетением фибринолиза и снижением толерантности к тромбину Избыток ретинола пропорционально дозе и длительности введения витамина угнетал ЛПО, повышал АОП, снижал уровень фф Р3 и Р4, Уровень в плазме ПДФ и D-димеров, повышающийся при меньших дозах, при длительном введении в дозах, превышающих потребность в 6 и 12 раз, сопровождался снижением их уровня, сменившимся повышением, и выраженной активацией фибринолиза Влияние витамина А, вводившегося в составе атерогенного рациона, на ЛПО, АОП, уровень маркеров ВТФ, фибринолиз и толерантность к тромбину. Судя по клиническим и экспериментальным данным, выраженность гаперхолестеро-лемии - величина, обратная уровню обеспеченности организма витамином А [Gatica L V е а., 2006, Rtcciom G е.а, 2007] Нагрузки ретинолом в дозах, эквивалентных лечебным, способствуют поддержанию активности противосверты-вающих механизмов и ограничивают на фоне гиперхолестеролемии частоту гибели животных при гипертромбинемии [А Ш Бышевский, 1964, ГГБазазьян, 1969]. Поэтому важно было изучить динамику сдвигов ЛПО, АОП, маркеров ВТФ, фибринолиза и толерантности к тромбину при развитии гиперхолестеролемии на фоне рациона без ретинола и с его избытком

Гиперхолестеролемию у крыс вызывали, вводя с рационом ХЛ и 6-МТУ - апробированный метод [АШБышевский, 1964, 1978, ГГБазазьян, 1969] Схема опыта. 1) контрольная группа получала полноценный рацион с ретинолом в соответствии с суточной потребностью (200 МЕ/кг); 2) три подопытные группы одна получала атерогенный рацион без ретинола, вторая и третья получали с атерогенным рационом 1200 и 2400 МЕ/кг ежедневно в течение 10 недель Пробы брали через 2,4,6, 8 и 10 недель

Из данных табл. 13 видно, что у крыс, получавших ХЛ и 6-МТУ с рационом

без ретинола, увеличена холестеролемия уже на 2-й неделе, прогрессируя далее У крыс, получавших ретинол в дозе 1200 МЕ/кг, прирост холестеролемии стал достоверным лишь через 8 недель и сохранялся до конца опыта При дозе 2400 МЕ/кг увеличение холестеролемии выявилось лишь через 10 недель

Таблица 13 Холестеролемия при алиментарной нагрузке холестеролом и 6-МТУ у крыс, не получавших ретинол (1-я строка), получавших ретинол в дозах 1200 и 2400

МЕ/кг в течение 70 дней

Показатель Контроль (ретинол по 200 МЕ/кг) (п -10) Крысы не получали ретинол (1-я строка), получали ретинол в дозе 1200 (2-я строка) или 2400 МЕ/кг (3-я строка), п - в на этапе Пробы взяты через (недель)

2 4 ' 6 8 10

Холестерол, г/л 0 075±0 003 ООО ООО -JO)» fpíff ООО ООО М СО 00 0 091±0 011* 0 087±0 009 0 081±0 003+ 0 102±0003* 0 089±0 012 0 082±0 005*+ 0130±0011* 0117±0013*+ 0 087±0 003+» 0 157±0 013* 0 147±0 012*+ 0 120±0 003*+»

Знак * - достоверное отличие от контроля, знак + - от значений в 1 -й строке, знак " - от

значений во 2-й строке Из данных, приведенных в табл 14, видно, что скорость ЛПО при введении ХЛ и 6-МТУ с рационом без ретинола замедлилась через 6 недель и, заметнее, -через 8 и 10 недель. Тогда же увеличился АОП (удлинение ПИ и снижение СО) Таблица 14 ЛПО и АОП у крыс, получавших холестерол и 6-МТУ с рационом, не содержавшим ретинол и содержавшим его в дозах 1200 и 2400 МЕ/кг

Показатели Контроль (ретинол по 200 МЕ/кг) (п-12) Крысы не получали ретиноле (2-я строка) илу п (1-я строка), получали его в дозе 1200 МЕ/кг в дозе 2400 МЕ/кг (3-я строка) робы взяты через

2 недели 4 недели 6 недель 8 недель 10 недель

дк, А/мгЛП 0 052±0 003 0 054±0 004 0 049±0 005 0 04В±0 002 0 049± 0 004 0 51±0 003 0 041±0 003*+» 0 045± 0 002* 0 047±0 004* 0й35±0 002«+» 0 040± 0 003* 0 043±0 002* 002Э±0001*+» 0 038± 0 005* 0 042±0 004* 0 027±0 005*+»

тбк, ед/мг ЯП 0 75±0 019 0 74±0 05 0 71±0012 0 69±0 013 0 71±006 0 73±0 010 0 63±0 010*+» 0 68±0 03* 0 66±0 007* 0 57±0 008*+» 0 59±004* 060±0 010* 0 53±0 010*+» 0 56±007* 0 57±0 007* 042±0011*+»

пи, мин/мл 50 6±2 1 51 3±1 1 52 0±1 5 51 7±1 7 52 3±1 4 52 7±1 7 63 7±1 2*+» 55 8±1 0* 58 4±1 5* 65 0±1 2*+» 56 4±1 5* 59 8±2 6* 69 4±1 4*+» 579±1 2* 61,1± 023* 706±1 3*+»

со, мм3/мл/мин 0 60±0 04 0 58±0 04 0 46±0 04* 0 42±0 02* 060±0 24 043±-0 5 0 37±0 02*+» 0 55±0 11* 0 37±0 2* 0 33±0 02*+» 0 49±0 20* 0 32±-0 4* 0 28±0 02*+» 046±0 22* 0 30±0 3* 023±0.02*+»

Примечание в опктах по 6 на каждом этапе Знак * - достоверное отличие от контроля, знак + - От значений в 1-й строке, знак " - от значений во 2-й строке Введение ХЛ и б-МТУ с рационом, включавшим ретинол (2400 МЕ/кг), вызвало менее заметные, сдвиги

Из данных табл. 15 видно, что у крыс, получавших ХЛ и 6-МТУ с рационом без ретинола, уровень маркеров ВТФ увеличен уже через 6 недель, и растет до конца опыта При введении ХЛ и 6-МТУ одновременно с ретинолом в дозе 1200 МЕ/кг на 6-й, 8-й и 10-й неделе содержание в плазме тех же маркеров оказалось ниже, чем в отсутствие ретинола, и ниже, чем в контроле.

Однако уровень ПДФ через 4 недели оставался таким же, как и в группе крыс, получавших ХЛ и 6-МТУ без ретинола, а позднее повысился

У крыс, получавших ХЛ и 6-МТУ с бблыпей дозой ретинола (2400 МЕ/кг) все сдвиги маркеров ВТФ имели ту же направленность, как и при меньшей дозе (1200 МЕ/кг), однако, степень сдвигов была существеннее.

Скорость фибринолиза оказалась на 8-й и 10-й неделе сниженной при введении ХЛ и 6-МТУ без ретинола. При введении ретинола в дозе 1200 МЕ/кг фиб-

ринолиз ускорился через 4 недели, нарастая до конца наблюдений У крыс, получавших ретинол в дозе 2400 МЕ/кг, ускорение фибринолиза выявилось уже через 2 недели и также прогрессировало до конца опыта

Таблица 15 Плазменное содержание маркеров ВТФ и Хагеман -зависимый фибринолиз у крыс, получавших холестерол и 6-МТУ с рационом, не содержавшим ретинол, и содержавшим его в до_зах 1200 МЕ/кг и 2400 МЕ/кг_______

Показатели Контроль Ретинол пс 200 МЕ/кг Крысы не получали ретинола (1-я строка}, получали его в дозе 1200 МЕ/кг (2-я строка) или в дозе 2400 МЕ/кг (3-я строка) Пробы взяты через

2 недели 4 недели 6 недель 8 недель 10 недель

Ф Р3,% 80 1±1 2 82 0±1 5 71 3±1 2* 70 0±1 4* 83 1±1 9 67 8±1 1*+» 62 2±1 1*+» 87 4±1 1* 64 7±1 2*+» 61 1±1 3*+» 89 8±1 9* 63 5±1 2*+» 52 9±1 2*+» 92 5±1 3* 63 0±1 2*+» 48 1±1 3*+»

Ф Рд С 3 3±0 01 3 2±0 04 2 5 ±0 04* 2 2 ±0 02* 3 4±005 2 3±0 06*+» 2 0±0 02*+» 3 8±0 04* 2 1±001*+» 1 8±0 03*+» 3 9±0 04* 2 0±0 04*+» 1 4±0 03*+» 4 1±0 04* 1 9 ±02*+» 1 0±0 02*+»

ФГ, г/л 2 2±0 02 2 2±0 04 2 2±0 04 2 1±0 03 2 0±0 05 2 1±0 03 2 0±0 02 2 4±0 06 1 9±0 07 2 2±0 06 2 0±0 05 2 1±0 03 2 0±0 02 2 4±0 06 1 9±0 07 1 9±0 04

ПДФ. мг% 15 2±0 6 16 0±1 1 12 9±0 9* 13 7±0 7* 16 2±0 9 14 7±1 1 16 6±1 1 19 4±0 5* 18 1±1 1* 194±1 2* 18 9±1 1* 19 2±1 2* 21 0±1 6* 19 6±04* 19 9±1 0* 26 2+1 3*+»

РКМФ, мкг/мл 24 8±0 9 23 9±1 5 20 1±1 3* 18 7±1 2* 24 5±1 3 18 3±0 7* 17 9±0 5* 24 5±1 3 15 6±1 1*+» 14 3±1 2*+» 30 5±1 1* 14 9±0 7*+» 11 6±0 7*+» 31 8±1 2* 13 8±1 2*+» 11 0±1 0*+»

О-Д, мкг/мл 0 20±0 002 0 2110 011 0 18±0 010* 019±0010 0 20±0 009 0 24±0010* 0 26±0014* 0 23±0 004* 0 27±0013*+» 0 31±0 016*+» 0 24±0 008* 0 29±0 012*+» 0 35±0 016*+» 0 25±0 003** 0 31±0012*+» 0 37±0 013*+»

Хагеман-зависимый фибринолиз, мин 8 0±0 04 8 3±0 05 8 2±0 02 6 9±0 04* 8 5±0 04 7 9±0 03 6 3±0 05* 9 0±0 06 7 3±0 05*+» 6 0±0 03*+» 10 1±0 06* 6 8±0 04*+» 5 6±0 02*+» 10 4±0 05* 6 2±0 06*+» 5 1±0 03*+»

Примечание в контроле 12 особей, в опытах по 6 на каждом этапе Знак * - достоверное отличие от контроля, знак + - от значений в 1-й строке, знак " - от значений во 2-й строке

Толерантность к тромбину (табл 16) при введении ХЛ и 6-МТУ с рационом без ретинола обнаруживала слабую тенденцию к снижению через 2, 4 и 6 недель, и достоверно снизилась через 8, особенно через 10 недель

Введение ХЛ и 6-МТУ с ретинолом (1200 МЕ/кг) сопровождалось небольшим приростом толерантности к тромбину на 2,4 и 6 неделе, что стало заметнее через 8 и особенно 10 недель. В группе, получавшей большую дозу ретинола (2400 МЕ/кг), рост толерантности к тромбину был интенсивнее через 2 недели (на 26%) и 10 недель (на 66%)

Таблица 16 Толерантность к тромбину крыс, получавших холестерол и 6-МТУ с рационом, не

содержавшим ретинол, и содержавшем его в дозах 1200 и 2400 МЕ/кг

Показатель Контроль (ретинол по 200 МЕ/кг) (П — 21) Крысы не получали ретинола (1-я строка), получали его в дозе 1200 МЕ/кг (2-я строка) или в дозе 2400 МЕ/кг (3-я строка) Пробы взяты чеоез

2 недели 4 недели 6 недель 8 недель 10 недель

Толерантность к тромбину, % 100±2 6 96 3± 2 3 120±2 6* 126±2 4* 94±3 1 127±2 9*+ 132±2 4*+ 95±2 3 131 ±2 9*+ 142±2 0*+» 84±3 6* 146±3 2*+ 154±2 7*+» 79± 2 5* 155±3 5*+ 166±2 9*+

Примечание в контроле 12 особей, в опытах по б на каждом этапе Знак * - достоверное отличие от контроля, знак + - от значений в 1-й строке, знак" - от

значений во 2-й строке В конечном счете, введение ХЛ и 6-МТУ с рационом без ретинола вызывает значительный рост холестеролемии, сопровождающийся угнетением ЛПО и

ростом АОП. Одновременно растет в плазме крови уровень маркеров ВТФ и замедляется фибринолиз. Ретинол в дозах, превышающих суточную потребность в 6 раз, сдерживает рост уровня маркеров ВТФ и ускоряет фибринолиз. В дозе, превышающей суточную потребность в 12 раз, ретинол на фоне нарастающей холестерин ем и и приводит к тем же, но более выраженным сдвигам.

Результаты опытов, в ходе которых контрольные крысы получали ретинол в соответствии с суточной потребностью, а подопытные с тем же рационом ретинола не получали, позволяют количественно сопоставить динамику изменения ЛПО И АОП, характеризующую состояние в тромбоцитах ЛПО и АОП, с динамикой изменения интенсивности ВТФ (т.е. НВСК), а также толерантности к тромбину - показателя, характеризующего способность организма противостоять избыточному тромбин ore незу, вызванному каким-либо воздействием [Б.А.Кудряшов, } 975; Т.М.Калишевская, 1992; Г.Г.Базазьян, 1969; А.Ш.Бышев-скийидр., 2003,2005].

На рис. 1 видно, что с увеличением длительности содержания крыс на рационе без ретинола уровень ДК и ТЕК растет практически линейно. Увеличива-

Рисунок 1 Изменения (в % к контролю) ЛПО, АОП, уровня маркеров ВТФ и толерантности к тромбину (ТкТР) при содержании крыс на рационе без ретинола. Тренды (сверху вних) - ДК, ТЕК, ПДФ и РКМФ Одновременно растег в плазме уровень всех маркеров ВТФ, Вероятно, это следствие активации ЛПО: 1) ранее находили, что при состояниях, протекающих с гипероксидацией, возникает гиперкоагулемия, сопровождаемая повышением уровня маркеров ВТФ [В.Ф.Киричук и др., 2005; Ое Р,Моег1оо5е е.а., 2003); 2) ускорение ЛПО, судя по трендам, линейно (значения К2 близки к единице для ДК и ТЕК); 3) рост уровня маркеров ВТФ начинается позже, и менее выражен, чем рост уровня ДК и ТЕК; 4) динамика прироста маркеров также близка к линейной - Я1 мало отличается от единицы. Сходна динамика изменений АОП, а также изменения уровня, не показанных здесь маркеров - ПДФ и Б-димеров. Росту скорости ВТФ (ускорению НВСК) сопутствует снижение толерантности к тромбину, наб;подающееся уже тогда, когда уровень маркеров ВТФ (исключая ф. Р4) не изменен. Видимо, тест толерантности к тромбину - более чувствительно, чем уровень маркеров ВТФ, отражает способность организма

реагировать на воздействия, ускоряющие тромбиногенез.

При нагрузке ретинолом в дозах, превышающих суточную потребность крыс в 4, 6 и 8 раз, выявлены противоположные сдвиги показателей состояния ЛПО (рис. 2) - снизилось содержание ДК и ТБК, удлинился ПИ, снизилась СО, уровень маркеров ВТФ и выросла толерантность к тромбину. Все сдвиги усилились с увеличением дозы ретинола и длительности нагрузки.

Следовательно, дополнительное введение ретинола угнетает ЛПО и АОП до-зазависимо и зависимо от длительности введения.

При увеличении дозы ретинола в 4 и 6 раз угнетению ЛПО сопугствует снижение интенсивности ВТФ - падает уровень в плазме всех показателей этого процесса. При увеличении дозы ретинола в 8 раз против суточной потребности такие маркеры ВТФ, как фф. Р3; р4, и РКМФ ещё заметнее снижаются, а уровень ПДФ и О-димеров, напротив, возрастает. Толерантность к тромбину увеличивается параллельно со снижением скорости ВТФ при всех испытанных дозах.

12

-28 -78

Рисунок 2 Изменения (в % относительно контроля) ЛПО, АОП, уровня маркеров ВТФ

и толерантности к тромбину (ТкТР) при избыточном введении ретинола Примечательна зависимость между уровнем ПДФ и В-днмеров с одной стороны и фибринолизом с другой при высоких дозах ретинола (рис. 3).

зо во 40 20 о

Рисунок 3. Связь между урон Нем П ДФ и О-димеров в плазме крови и скоростью Лизиса фибринового слегка у крыс, получавших 1200 (слева) или 2400 МЕ/кг ретинола в сутки. Аргумент - уровни ПДФ и О-димеров на последовательных этапах опытов, функция -скорость фибривошза (величина обратная времени лизиса сгустка) на тих: же этапах опытов (неодинаковые единицы измерений потребовались для того, чтобы можно было сопоставить динамику процесса в общей системе ординат). Обозначения: ФЗ - фибринолиз

На этом основании можно допустить, что прирост уровня ПДФ и В-димеров при длительном введении высоких доз ретинола обусловлен активацией фибри-

ИДК ■ ТБК от ООО ВР-.1 яр-« ВПДФ В РКМФ ■ Д-в ит«тр

ПДФ,мг/10Омл - ■ -д-д.мкгЛООмп —& -Ф3,1/мии

-А ••— л

/-Л ¿5"- „

м - *. .. * — фм

нолиза, не связанной с влиянием витамина А на антиплазмины, которые отсутствуют в эйглобулиновой фракции плазмы Видимо, нет противоречия в том, что дозы ретинола, превышающие суточную потребность в 4, 6 и более раз при длительном введенйи повышают уровень ПДФ и D-димеров в плазме Дело в том, что эти же продукты образуются за счет ускоренной активации фибрино-лиза избытком витамина А

Заключая анализ полученных нами данных, выделим главное Содержание животных на рационе без витамина А усиливает ЛПО и снижает АОП, повышает в плазме содержание маркеров ВТФ, следовательно, ускоряет НВСК Введение с рационом ретинола в количестве, превышающем суточную потребность животных, дозазависимо угнетает ЛПО, увеличивает АОП, снижает интенсивность ЙВСК Сдвигам интенсивности НВСК сопутствуют изменения толерантности к тромбину с ускорением НВСК толерантность к тромбину снижается, с замедлением НВСК - растет

При введении ретинола одновременно с прооксидантом, вызываемые им сдвиги ЛПО, АОП и уровня продуктов ВТФ усиливаются, следовательно, эффект прооксиданта усугубляется Введение одновременно с прооксидантом ретинола в дозах, превышающих суточную потребность в 2, 4 и 8 раз, ограничивает влияние прооксиданта на ЛПО, АОП и на уровень маркеров ВТФ, т е противодействует возникновению вызываемых прооксидантом сдвигов При введении ретинола одновременно с антиоксидантом их эффекты на ЛПО частично суммируются, как и влияние ретинола на ВТФ

Антагонизм в действии на ЛПО и ВТФ пары прооксидант-ретинол и синергизм в действии пары антиоксидант-ретинол позволяет утверждать, что влияние ретинола на гемостаз обусловлено его противоокислительными свойствами При дозах ретинола, превышающих суточную потребность в 6 и 12 раз, через 6, 8 и 10 недель увеличивается содержание тех маркеров ВТФ, уровень которых зависит не только от интенсивности ВТФ, но и от других факторов (количества образующегося фибрина и интенсивности его лизиса) Ретинол в этих дозах при достаточно продолжительном введении активирует фибринолиз (вне связи с влиянием на активность антиплазминов), что, видимо, и является причиной роста уровня ПДФ и D-димеров при усиливающемся снижении таких маркеров ВТФ, фф Р3, Р4 и РКМФ

Отсутствие в рационе витамина А усиливает холестеролемию вызываемую введением ХЛ и 6>-МТУ, что сопровождается ускорением ВТФ и снижением толерантности к тромбину Избыточное введение витамина А в дозах, превышающих суточную потребность в 6 и 12 раз, ограничивает эти эффекты. Видимо, влияние витамина А на уровень ХЛ в крови в этих условиях можно рассматривать, как его способность ограничивать атеросклеротические изменения, зависимые от уровня холестеролемии, или иным путем ограничивать угнетающее влияние холестеринемии на состояние противосвертывающего аппарата, в частности, за счет свойственной витамину А способности активировать фибринолиз, поскольку известно, что плазмин (фибринолизин) является компонентом проти-восвертывающей системы [Б А Кудряшов, 1975, Т М Калишевская и др , 1992])

6. выводы

1 Отсутствие витамина А в составе рациона вызывает у экспериментальных животных (белые крысы) ускорение ЛПО и снижает АОП в тромбоцитах, что сопровождается повышением плазменного содержания маркеров ВТФ, и снижением толерантности к тромбину

2. Введение витамина А с рационом в количествах, превышающих суточную потребность крыс, дозазависимо повышает АОП, снижает интенсивность ЛПО и содержание маркеров ВТФ, повышая толерантность к тромбину

3. Введение прооксиданта (свинца) с рационом, не содержащим витамина А, снижает АОП, ускоряет ЛПО и повышает уровень маркеров ВТФ значительнее, чем на фоне рациона, содержащего витамин А в дозе, равной суточной потребности, превышающие суточную потребность количества витамина А ограничивают эти сдвиги.

4. Влияние витамина А и антиоксиданта невитаминной природы (димефос-фона) на ЛПО, АОП, ВТФ и толерантность к тромбину суммируется

5. Гиперхолестеринемия, провоцируемая одновременным введением холесте-рола и 6-МТУ, усиливается при отсутствии в рационе витамина А, сопровождаясь повышением уровня маркеров ВТФ, снижением толерантности к тромбину и угнетением Хагеман-зависимого фибринолиза, избыток витамина А в составе рациона ограничивает эти сдвига.

6 Длительное введение с рационом витамина А в дозах, превышающих суточную потребность, ускоряет Хагеман-зависимый фибринолиз в эйглобулино-вой фракции плазмы

Можно с большой долей вероятности утверждать, что витамин А, будучи ан-тиоксидантом, замедляет процессы ЛПО и увеличивает АОП тромбоцитов -клеток, отличающихся высоким вкладом в поддержание свертывающего потенциала крови, и это приводит к снижению интенсивности НВСК и росту толерантности к тромбину, тек повышению способности организма противостоять вызванной чем-либо гипертромбинемии. Вклад витамина А в поддержание про-тивосвертывающих механизмов в активном состоянии связан отчасти и с его способностью активировать Хагеман-зависимый фибринолиз

Возможно, одной из причин наклонности к тромбообразованию при атеро-склеротических изменениях является низкий уровень обеспеченности организма витамином А - предположение, требующее углубленных экспериментальных и клинических исследований взаимосвязи между обеспеченностью витамином А и состоянием системы гемостаза при атеросклеротических процессах Список работ по теме диссертации

1 Гемостазиологичекские сдвиги при миоме матки и ее оперативном лечении /В А Полякова, Е А Винокурова, А В Пустынников и др // Глава в монографии «Гемостаз при оперативных вмешательствах в гинекологической практике» - М Медицинская книга -2006 - С 16-23

2 Витамин А влияние на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и ф ХП-зависимый фибринолиз / А.В Пустынников // Медицинская наука и образование Урала - 2007 - 4 - С 8

3 Витамин А, липидпероксидация и непрерывное внутрисосудистое свертывание крови II Е М Шаповалова, А.В.Пус-гьшников, А Ю Рудзевич // Электронная конференция «Экологические проблемы внутренних болезней, перинатологии и педиатрии» - Июнь,

2007

4 Тканевой фактор, его место в свертывании крови i А Ш Бышевский, С J1 Галян, В А Полякова, А В.Пустынников и др // Медицинская наука и образование Урала -2007 - 4 - С 78-80

5 Влияние витаминов А, Е, С и Р на уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и / А Ш Бышевский, С JI Галян А.В.Пустынников и др // Конф. Тромбоз..........С-Петербург. - 2007. - С.

6 Эффекты гестагенов и эстрогенов на гемостаз (обзор) / В А Полякова, А Ш Бышевский, А.В.Пустынников и др // Медицинская наука и образование Урала - 2007 - 4 -С 81-86

7 Взаимодействие тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и липидперокси-дация зависят от обеспеченности витамином Е i А.В.Пустынников, Б М Шаповалова, М К Умутбаева // Электронная конференция «Экологические проблемы внутренних болезней, перинатологии и педиатрии» - Июнь, 2007

8 Эффекты ретинола на гемостаз, лшшдпероксидацию и толерантность к тромбину при одновременном введении с прооксидантом / Е М Шаповалова, А.В Пустынников, А Ю Рудзевич // Электронная конференция «Экологические проблемы внутренних болезней, перинатологии и педиатрии» - Июнь, 2007

Использованные сокращения

А оптическая плотность

АВР Активированное время рекапьцификации

АОП антиоксидантный потенциал

ВТФ взаимодействие тромбин-фибриноген

И-Д Б-димеры

ДК диеновые конъюгаты

ДМ димефосфон

ЛП липиды

ЛПО липидпероксидация

6-МТУ 6-метилтиоурацил

ПДФ продукты деградации фибрина НВСК Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови

ПИ период индукции

РФМК растворимые фибринмономерные комплексы

СО скорость окисления

ТБК )дукты (продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой)

ТкТР толерантность к тромбину

ФГ фибриноген

ХЛ холестерол

Пустынников Александр Викторович

ВЛИЯНИЕ РЕТИНОЛА НА ЛИПИДНЕРОКСИДАЩПО, АНТИОКСИДАНТНЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ТРОМБОЦИТОВ, УРОВЕНЬ МАРКЕРОВ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ТРОМБИН-ФИБРИНОГЕН В ПЛАЗМЕ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.00.04-биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 31 августа&бО? г. 2007 г. Тираж 100 экз. Отпечатано в издательском центре «Академия». Лицензия ИД № 05351 от 10.07. 2001 г. Тюмень, ул. Одесская, 50