Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние возраста и физиологического состояния на активность ферментных систем клеток тканей и органов животных
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия
Автореферат диссертации по теме "Влияние возраста и физиологического состояния на активность ферментных систем клеток тканей и органов животных"
МОСЯГИН Владимир Владимирович
ВЛИЯНИЕ ВОЗРАСТА И ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ НА АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТНЫХ СИСТЕМ КЛЕТОК ТКАНЕЙ И ОРГАНОВ ЖИВОТНЫХ
03.03.01 - физиология 03.01.04 - биохимия
4845474
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
1 2 МАЙ 2011
Москва - 2011
4845474
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ)
Научные консультанты:
доктор биологических наук,
профессор Максимов Владимир Ильич
доктор биологических наук,
профессор Фурман Юрий Васильевич
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук,
профессор Шевелев Николай Серафимович
доктор биологических наук,
профессор Шапошников Андрей Александрович
доктор биологических наук,
профессор Воробьева Светлана Владимировна
Ведущая организация:
ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных»
Защита диссертации состоится «25» мая 2011 г. в/^^часов на заседании совета по защите диссертаций Д 220.042.04 при ФГОУ ВПО МГАВМиБ (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 377-93-83).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО МГАВМиБ.
Автореферат разослан «22» апреля 2011 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
Фомина В.Д.
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. В настоящее время все более очевидной становиться важная и многообразная роль ферментных систем среди различных факторов, участвующих в регуляции и интеграции процессов развития, физиологического состояния и жизненных отправлений организма. На механизмах, основу которых составляют ферментные системы, базируется раскрытие в онтогенезе путей реализации наследственной информации, регуляции роста и развития, гомеостаза (К.Б. Свечин, И.А. Аршавский, А.В. Квасницкий и соавт., 1967; В.Н. Никитин, 1975; В.Ф. Лысов, 1977, 1996, 2004; С.И. Вишняков, 1989; В.И. Максимов, 1999-2002, 2004, 2005; В.И. Максимов и др., 1999-2010; Г.Ф. Рыжкова, 2005; В.А. Гудин, 2006; S.R. Torronteras et al., 1993). В частности, характерные периоды более быстрого и замедленного роста и развития органов и организма в целом в определенной степени связаны с активностью ферментных систем.
Известно, что активность ферментных систем зависит от степени воздействия различных факторов внешней и внутренней среды клетки, таких как изменение рН, концентрации субстрата, химическая модификация молекул, наличие специфических активаторов и ингибиторов, изменения проницаемости мембран, скорости деградации молекул фермента, индукции и репрессии биосинтеза белка молекул ферментов и др. (Н.Н. Чернов, 1996; А.А. Болдырев, 1997). Степень влияния этих факторов во многом определяется экзогенными и эндогенными условиями существования, оказывающими воздействие на организм, к ним относят: возраст, физиологическое состояние (половое и физиологическое созревание, продуктивность и скорость роста), тип кормления и кормовые добавки, гормональный и иммунный статус, стресс и др. Таким образом, активность ферментов, играет ведущую роль в реализации механизмов физио-лого-биохимической адаптации, обеспечивающих существование организма в постоянно изменяющейся внешней среде (В.Ф. Лысов, 1977; В.Б. Решетов, 1998; Р.М. Хаитов, 2000; Р.Х. Кармолиев, 2002, 2005; В.Г. Галактионов, 2005; Е.Л. Харитонов, 2003, 2007; E.Á. Силиванова, 2Ó06; Д.Н. Кыров, 2006 и др.; В.И. Максимов, 2002, 2006, 2008; В.В. Михайлов, 2008).
Для обеспечения физиологических процессов и свойств живой клетки, структурно-физиологической единицы тканей, органов и организма животного в целом, необходим избирательный транспорт веществ и энергии в клетку из внешней среды, ведущую роль в котором играет активный транспорт, осуществляемый ферментными системами мембран (ионными насосами), интегральны-
ми компонентами которых являются АТФазы. АТФ-зависимые ионные насосы, представляющие комплекс ферментов, обеспечивают как первичный транспорт катионов (Н*' Na+' К+' Са2+) и анионов (СГ, НС03") против их электрохимических градиентов, так и вторично-активный перенос через мембрану в клетку Сахаров, аминокислот, органических кислот, за счет энергии трансмембранного градиента концентрации ионов Na+. С работой АТФаз так же связана генерация биотоков, трансмембранного потенциала и передача нервного импульса, процессы сопряжения окислительного фосфорилирования. Накоплено большое количество сведений по изучению транспорта ионов и функционированию Mg2+-, Ca2+-, Na+,K+-, Н+-АТФаз (Я. Кагава, 1985; A.A. Болдырев и др., 1985, 1998; С.И. Вишняков, 1989; J.C. Skou et al., 1992; В.П. Скулачев, 1989,2001; В.А. Опритов, 1996; Ю.А. Владимиров, 1998; A.M. Рубцов, 2005; Г.Ф. Рыжкова, 2005; G. Schiener-Bobis, 2002; P.L. Jorgensen et al., 2003; и др.).
Показатель активности АТФазных ионных насосов является очень чутким критерием оценки метаболического состояния организма. Для обеспечения процессов активного транспорта питательных веществ необходимы существенные затраты энергии, которые составляют до 40 % от суммарной энергии, поступившего корма. Существенное влияние на активность транспортных АТФаз оказывает обеспеченность животных белком различного качественного состава (В.В. Мосягин, 1996; H.H. Максимюк, 1998; Ю.В. Фурман, 2001).
Дальнейший прогресс животноводства во многом зависит от решения проблемы дефицита кормового протеина и аминокислот за счет расширения их производства и повышения эффективности их использования, в частности рационального использования отходов кожевенной промышленности (Р.У. Бик-ташев, 1985; Ю.В. Фурман, 2001; В.И. Фисинин, 2006, 2007; И.Л. Гальперн, 2009; Я. Ройтер, 2010; и др.).
Вместе с тем, еще недостаточно сведений об особенностях влияния возраста и физиологического состояния в конкретные фазы постнатального онтогенеза, кормовых добавок на активность ферментных систем клеток органов и тканей различных видов животных. В связи с этим вполне очевидна актуальность исследования активности транспортных АТФазных систем клеток тканей и органов в постнатальном онтогенезе у птиц, свиней и крупного рогатого скота в зависимости от возраста и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), возрастом, кормлением, физиологическим созреванием.
Цель работы - выявление особенностей становления физиолого-биохимических процессов и функций в организме разных видов животных (птиц, свиней и крупного рогатого скота) в постнаталь'ном онтогенезе, связанных с активностью транспортных АТФазных ферментных систем их клеток тканей и органов в зависимости от их физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), физиологическим созреванием, возрастом и кормлением.
Для достижения цели, были поставлены следующие задачи: 1. Установление видовых особенностей функционирования АТФазных ферментных систем клеток тканей, органов и субклеточных структур у птиц, свиней и крупного рогатого скота в зависимости от возраста (фаз постнатально-го онтогенеза) и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), кормлением, физиологическим созреванием, продуктивностью и скоростью роста.
2. Выявление активности ферментных систем (АТФаз) в ядерных и цито-плазматических мембранах эритроцитов цыплят-бройлеров, специфичности влияние ионов электролитов (К^2\ Ыа+, К+) и ингибитора (строфантин-К).
3. Исследование особенности функционирования ферментных систем (АТФаз) в ядерной и цитоплазматической мембранах эритроцитов цыплят бройлеров в зависимости от их физиологического состояния обусловленного генетическим потенциалом (кроссом), возрастом и кормовыми добавками (ПКД и сукцинат натрия).
4. Выявление активности транспортных АТФаз в клетках тканей и органов цыплят-бройлеров в зависимости от их физиологического состояния обусловленного их генетическим потенциалом (кроссом), возрастом и кормовыми добавками (ПКД).
5. Изучение энергозависимого транспорта белков и аминокислот пептидной кормовой добавки в кишечнике цыплят-бройлеров.
6. Изучение активности транспортных АТФаз в эритроцитах свиней в зависимости от их физиологического состояния обусловленного физиологическим созреванием, возрастом.
7. Исследование специфичности влияния ионов электролитов (Ыа+, К+) и ингибиторов (строфантин-й) на активность транспортных АТФаз в эритроцитах свиней.
8. Изучение активности транспортных АТФаз в эритроцитах крупного рогатого скота в зависимости от их физиологического состояния обусловленного физиологическим созреванием, возрастом.
9. Исследование специфичности влияние ионов электролитов (Na+, К+) и ингибиторов (строфантин-G) на активность транспортных АТФаз в эритроцитах крупного рогатого скота.,
Научная новизна работы. Впервые установлена физиолого-биохимическая видовая особенность активности транспортных АТФазных ферментных систем клеток тканей, органов и субклеточных структур, которая имеет свое своеобразие у птиц, свиней и крупного рогатого скота в зависимости от возраста (фаз постнатального онтогенеза) и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), кормлением, физиологическим созреванием, продуктивностью и скоростью роста.
В ядерных и цитоплазматических мембранах эритроцитов (т.е. субклеточных структурах) цыплят-бройлеров выявлены АТФазы, активируемые ионами Mg2+-, Na+, К+-, Са2+- и НС03'-АТФазы цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов цыплят-бройлеров имеющие существенные различия, проявляющиеся во влиянии на них ионов Na+ и К+. Так, ионы Na+,K+ детерминируют АТФазную активность цитоплазматических мембран на 97%, ионы Са2+ г на 87% и НСОз" анион - на 96% с высокой степенью достоверности. Активность АТФазы ядер не зависела от наличия в среде инкубации ионов Na+,K+ и Са2+ (Р>0,05) и была детерминирована ионами НСОз'на 96% (Р<0,01).
У цыплят-бройлеров выявлена АТФазная активность и особенности функционирования в ядерных и цитоплазматических мембранах эритроцитов Mg2+-, Na+, К+-; Са2+- и НСОз*- АТФаз в зависимости от возраста и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (кроссом), кормлением. Так, с возрастом активность Mg2+-, Na+, К+-, Са2+- и НСОз~-АТФаз эритроцитов, клеток тканей и органов цыплят-бройлеров достоверно повышается. При этом детерминация активности ферментов возрастом более выражена у кросса «Бройлер-6», а кормовыми добавками у кросса «ISA».
У свиней и крупного рогатого выявлена функциональная активность АТФаз эритроцитов в зависимости от возраста и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой у крупного рогатого скота), физиологическим созреванием. Активность АТФаз эритроцитов свиней и крупного рогатого скота с возрастом достоверно понижается. Выявлены породные отличия активности АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота симмен-
тальской и черно-пестрой пород. На активность общей АТФазы порода оказывала влияние на 8,6%; активность Мд2+-АТФазы' (уабаин нечувствительная компонента) не была детерминирована породой; активность Ыа+,К+-АТФазы (уабаин чувствительной компоненты) была определена породой на 15,7%. Выявлено, что Ыа+-чувствительную АТФазную компоненту эритроцитов крупного рогатого породные особенности животных детерминируют на 13,2%; на К+-чувствительную компоненту порода оказывает влияние на'4,2%. Установлены, породные отличия активности АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота определяемые в средах различного ионного состава: у \^2+-АТФазы - на 9,6%; Ыа+,К+-АТФазы - на 2,6%, и НС03 "АТФазы - на 3,2%; активность Са2+-АТФазы не имела достоверных породных отличий.
Теоретическая и практическая значимость работы. Выполненные исследования носят фундаментальный характер и содержат новые решения актуальной научной проблемы выяснения становления физиолого-биохимических механизмов функционирования АТФазных ферментных систем субклеточных органоидов, клеток, тканей и органов.
Установленные особенности физиолого-биохимических механизмов активного транспорта с участием АТФазных ионных насосов с возрастом, кормлением, физиологическим состоянием (физиологическое созревание, продуктивность и скорость роста), породой (кроссом) необходимы для решения практических задач по созданию оптимальных условий эксплуатации животных, обеспечивающих полное проявление их генетических потенциальных возможностей.
Полученные данные открывают перспективу для дальнейших исследований по раскрытию молекулярных механизмов функционирования АТФазных транспортных систем в субклеточных структурах клеток органов и тканей животных при изменении внешних и внутренних условий существования. Результаты работы предполагают целенаправленный поиск специфических препаратов, способных эффективно регулировать транспортные процессы. Проведенные биохимические исследования вносят несомненный вклад в решение фундаментальной проблемы регуляции активного транспорта веществ с участием АТФазных ионных насосов.
Положения, выносимые на защиту: 1. Физиолого-биохимические механизмы активного транспорта ионов с участием Мд2+-; Ыа+,К+-; Са2+- и НСОз'- АТФаз в организме птиц, свиней и крупного рогатого скота имеют возрастные особенности.
2. Существуют особенности функционирование АТФаз ядерных и ци-топлазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров.
3. Кормовые добавки (пептидная и сукцинат натрия) оказывают стимулирующее влияние на активность АТФаз, физиолого-биохимические показатели крови, тканей и органов и продуктивность цыплят-бройлеров.
4. Активность АТФазных ферментных систем эритроцитов крупного рогатого скота имеет породные особенности.
Апробация работы и публикации. Материалы диссертационной работы доложены и одобрены на: конференциях профессорско-преподавательского состава Курской государственной сельскохозяйственной академии имени И.И. Иванова (Курск, 1995-2005); Международной научно-практической конференции Курского института социального образования (филиала) РГСУ «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» (Курск, 2007); Международной научно-практической конференции Курского института социального образования (филиала) РГСУ «Научные исследования, автоматика и динамика машин, инновационные и средозащитные технологии в техносфере» (Курск, 2007); VIII международном симпозиуме «Биологические механизмы старения» (Украина, Харьков,- 2008); Всеукраинской научной конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной биохимии и клеточной биологии» (Украина, Днепропетровск, 2008); II съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008); 74-й научной конференции Курского государственного медицинского университета, сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН (Курск, 2009); Всеукраинской научно-практической конференции «До-сягнения перспективи експерементально11 клиичшм бкшмп» (Украина, Терно-поль, 2009); Всероссийской научной конференции с международным участием «Теоретические основы физической культуры» (Казань, ТГГПУ, 2009); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 90-летию ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2009); Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию кафедры органической и биологической химии СПбГАВМ (С.Петербург, 2009); Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней, животных и птиц», посвященной 80-летию Уральского научно-исследовательского ветеринарного института (Екатеринбург, 2010); Международной научно-практической конференции «Адаптация и становление физиологических функций у живот-
ных», посвященной 90-летию кафедры физиологии животных ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2010); XXI Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010); на международной научно-практической конференции «Современные проблемы и инновационные тенденции развития аграрной науки» (Якутск, 2010); международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы современной науки й социального образования» (Курск, 2011); межкафедральном совещании по предварительной экспертизе диссертации в ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2011).'
По материалам диссертации опубликованы 40 работа, в том числе: 3 -патента на полезную модель, 15 - в рецензируемых печатных изданиях, рекомендованных ВАК РФ. В публикациях содержится полный объём информации, касающийся темы диссертации.
Основные материалы, изложенные в диссертации, получены автором самостоятельно.
Выражаю научным консультантам и своим коллегам глубокую благодарность и признательность за оказанную помощь.
Структура и объём диссертации
Диссертация изложена на 259 страницах машинописного текста, иллюстрирована 32 таблицами и 186 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования (1 глава), изложения собственных результатов (3 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 342 источника, в том числе 183 отечественных и 159 иностранных и приложений.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования проведены в 1992...2011 г.г. на животных птицефабрик «Курская», «Красная поляна», птицесовхоза «Юбилейный»,- СХПК «Победа» и ОАО «Магнитный+» Курской области; выполнялись на кафедре физиологии животных ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», в лабораториях ФГОУ ВПО «Курского института социального образования (филиал) РГСУ», на кафедре органической и биологической химии ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия».
Часть исследований выполнена в рамках государственного контракта №02.740.11.0718, «Разработка инновационных диагностических методик в области физиологии и биохимии животных как модельных объектов для медицины», по федеральной целевой программе (ФЦП) «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.
Объем исследований представлен в таблице 1, общая схема исследований -на рисунке 1.
Таблица 1. Количество и возрастные группы исследованных животных
Возраст Количество, экз. Средняя масса тела
1 2 3
Цыплята-бройлеры кросса «Ьройлер-6»
1 суг 50 37-40 г
15 суг 40 170-210 г
Ы) суг 40 1500-1Шг
Цыплята-бройлеры кросса «1УА»
1 суг ... . 50 46,3±0,7 г
10 суг 40 271±11г
20 суг 40 774±31
30 сут 40 1157±68г
40 суг 40 2125±109г
Свиньи
2 мес. 10 18-19 кг
6 мес. 10 75-85 кг
12 мес. 10 110-120 кг
2 года 10 170-180 кг
Крупный рогатый скот симментальской породы
6 мес. 10 140-180 кг
12 мес. 10 220-250 кг
2 года 10 480-520 кг .
Крупный рогатый скот черно-пестрой породы
6 мес. 10 140-180 кг
12 мес. 10 220-250 кг
2 года 10 480-520 кг
Рис.1. Схема исследований
Материалы исследований. Для решения поставленных задач проведено:
1. Изучение активности АТФазных ферментных систем эритроцитов, тканей и органов цыплят-бройлеров, эритроцитов свиней и крупного рогатого скота. Кровь для исследований брали у свиней в 2, 6, 12 и 24 месячном возрасте из вены хвоста путем надрезания его вентральной части; у крупного рогатого скота - в возрасте 6, 12 и 24 месяца из яремной вены. Кровь стабилизировали гепарином из расчета 4-6 единиц на 1мл крови.
Кровь брали у цыплят-бройлеров кросса «ISA» в 10, 20, 30 и 40 сут возрасте, у цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-6» - в 1, 15 и 60 сут возрасте из вен шеи после умерщвления декапитацией, и из подкрыльцовой вены. Кровь стабилизировали средой Алсвера.
Стабилизированную кровь птиц, свиней и крупного рогатого скота в термосе со льдом (+4°С) доставляли через 20-30 мин в лабораторию, для последующего анализа.
Отделение эритроцитов от плазмы проводили путем центрифугирования в рефрижераторной центрифуге (+4...10°С) в течение 30 мин при 3000 оборотах. Эритроциты после отделения от плазмы двукратно отмывали физиологическим раствором.
Печень, почки, фрагменты скелетной мускулатуры и сердце брали у цыплят кросса «ISA» в 10, 20, 30 и 40 сут возрасте, у цыплят кросса «Бройлер-6» в 1, 15 и 60 сут возрасте, в количестве 2-5 г и сразу же помещали в термос со льдом для транспортировки в лабораторию.
2. Исследование влияния кормовых добавок на цыплят-бройлеров. Проводили на четырех группах цыплят-бройлеров кроссов «Бройлер-6» и «ISA». Из суточных цыплят каждого кросса живой были сформированы по четыре группы 100 голов в каждой: три группы опытные и одна - контрольная. Птицу содержали в групповых клетках, плотность посадки, фронт кормления и поения, а также санитарно-гигиенические условия содержания птицы соответствовали современным рекомендациям.
Норма кормления соответствовала рекомендации ВИЖа (А.П. Калашников, В.И. Фисинин, В.В. Щеглов, Н.И. Клейменов, 2003).
Кормление экспериментальных цыплят проводили комбикормами с пониженным уровнем протеина, в 100 г которых содержалось 18-20 % сырого протеина и 295-310 ккал обменной энергии. Для доведения уровня протеина в комбикорме до рекомендуемых норм использовали (ПКД) протеиновую кормовую добавку из отходов кожевенного производства (опытные группы 1 и 2), мясокостную муку и сухое обезжиренное молоко (опытные группы 3 и 4). Цыплята-бройлеры опытных групп 2 и 3 дополнительно получали сукцинат натрия в дозе 25 мг-кг1 живой массы.
Содержание в кормосмесях опытных и контрольной групп сырого протеина, кальция и фосфора существенно не отличалось (Р>0,05).
В течение периода постановки опытов (40 и 60 суток) состояния здоровья животных, вели наблюдение за приемом и поедаемостью корма, учитывали их реакцию на различные внешние раздражители. Отмечено, что скармливание препаратов в указанных дозах не вызывает видимых изменений в поведении и клиническом состоянии цыплят.
Физиолого-биохимические методы исследований. 1. Физиологическое состояние свиней, птиц и крупного рогатого скота, в зависимости от возраста (фаз постнатального онтогенеза), генетического потенциала (порода, кросс), кормления, физиологического созревания, продуктивности и скорости роста, оценивали общепринятыми в клинической практике методами - определение температуры тела, частоты пульса и дыхательных движений в минуту, массы тела и ее среднесуточный прирост, состояния кожи, волосяного и перьевого покрова, слизистых оболочек, выделений (В.Ф. Лысов, 1977, 2004; А.И. Кузнецов, 2003).
2. Биохимические компоненты крови (общий кальций, фосфор, общий белок и его фракции) определяли: спектрофотометрическим, рефрактометрическим, нефелометрическим и электрофоретическим методами (И.П. Кондрахин, A.B. Архипов, В.И. Левченко и др., 2004; Б.И. Антонов, Т.Ф. Яковлева, Б.И. Дерябин, 1991).
3. Выделение ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров осуществляли методом 3-х кратного замораживания-оттаивания в растворе сахарозы (р= 1,176), содержащем 50 ммоль-л'1 трис-Н2804 буфер (pH
7,4) с последующим центрифугированием 30 мин при 1000 об мин'1 (Ю.Г. Шкорбатов, В.Г.Шахбазов, 1982, 1992; J. Chauveau, Y. Moule, С. Rauiller, 1956; V. Seligy, M. Miyagi, 1969). ' '
4. АТФазную активность определяли методами: a) K.S. Keeton et al., 1972, в среде, содержащей: 150 мМ NaCl; 5,0 мМ КС1; 25 мМ трис-HCl; рН - 8,0, 3 мМ ЫагАТФ, 3 мМ MgCb, пробы инкубировали в течение 45 мин при температуре 37°С. При определении М§г+-АТФазы, (уабаиннечувствительной) в субстратную среду вводили 10"4 M уабаина (строфантин-G); б) А.Т. Иващенко и др., 1981. При этом активность Mg2+ - АТФазы определяли в 50 мМ TpHC-H2S04 буфере (рН 7,4) содержащем 60 мМ NaCl, 2 мМ АТФ и 2 мМ MgCI2. Активность Na+, К+ - АТФазы измеряли в той же среде, заменяя 15 мМ NaCI на 15 мМ КС1. Са2+-АТФазную активность определяли, внося в среду 5x10"" M СаСЬ. Уровень НСОз'-АТФазной активности оценивали при замене 30 мМ NaCl на 30 мМ NaHC03.
Активность АТФаз оценивали по приросту неорганического фосфата после инкубации и выражали в наномолях неорганического фосфата (Фн) отщепленного 1 мг белка в 1 мин.
5. Неорганический фосфат определяли спектрофотометрическим методом (Кондрашова М.Н. и др., 1965) при длине волны 390нм, и по методу Чена (1957) в модификации A.M. Казеннова и соавт. (1984).
6. Концентрацию белка в гомогенате и субклеточных фракциях определяли методом Lowry et al (1951), и методом Варбурга и Кристиана (Досон Р., 1991), экстинкцию измеряли при длине волны 260 и 280 нм.
7. Белковые фракции сыворотки крови оценивали электрофоретически на мембранах из ацетата целлюлозы «Владипор» МФАС-ОС-1.
8. Полученные в ходе исследований данные подвергались биометрической обработке (Э. Корниш-Боуден, 1983; С.Д. Варфоломеев, 1999; К. Дерф-фель,1994; К. Геккелер и др., 1994; В.И. Крутов, 1989, Н.Я. Макарова, В.Я. Трофимец, 2002, А.Н. Кутейников, 2008) на ПЭВМ с использованием MS Excel и STATISTICA 6,0.
Достоверность обозначалась: * - Р < 0,05; ** - Р < 0,01, *** - Р < 0,001.
' 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Особенности функционирования АТФазных ферментных систем клеток тканей, органов и субклеточных структур у птиц в зависимости от возраста и физиологического состояния, обусловленного генетическим по, .. тенциалом (кроссом), кормлением и скоростью роста
. 3.1.1. Активность АТФазы эритроцитов иыплят-бройлеров и влияние на неё ионов электролитов и ингибитора (строфантин-К)
Ионы натрия, калия и магния оказывают активирующее действие на активность АТФазы в разных диапазонах концентраций, так максимальная АТ-Фазная активность проявляется при концентрациях ионов: натрия - 115-145, ионов калия - 19-28, ионов магния - 2,0-4,0 ммоль-мл''. Строфантин-К не оказывает достоверного влияния на АТФазную активность в диапазоне концентраций 0-100 ммоль-л"1 как в среде содержащей ионы Na+ и К+, так и в среде без них. При этом активность АТФазы на 76,5% детерминирована ионами магния, на 96,5% ионами натрия и на 47,6% ионами калия.
Изучение комбинаций оптимальных концентраций этих ионов показало, что максимальная АТФазная активность отмечается в инкубационной среде, содержащей: Na+ - 120 ммоль-мл, К+ - 20 ммоль-мл; Mg2+ - 3,0 ммоль-мл и составляет 9,24±0,23 нмоль Ф„ мг белка'1 -мин'.
Отсюда следует, что ионы натрия играют основную регуляторную роль в активности фермента, что позволяет предположить, что величина транспорта веществ, а, следовательно, и активность АТФазы существенно зависит от количества натрия bi плазме крови. Избыток или недостаток этих ионов в кормах цыплят-бройлеров может отражаться на уровне межклеточного обмене веществ, вызывая его существенные нарушения.
3:1.2. Активность Мг2*-. Na*.Кt- Со2*- и НСО{-АТФаз ядер и иитоплаз-матических мембран эритроцитов иыплят-бройлеров
У . цыплят сут возраста наибольшую активность в цитоплазматических мембранах имели Na+,K+- (12,37±0,13 нмоль Ф„ -мг белка'1-мин') и НСОз~-АТФазы (12,15±0,13 нмоль Ф„ -мг белка'1-мин'), в ядрах - НС03'-АТФаза (14,61+0,43 нмоль Ф„ -мг белка'1 -мин'1). Физиологическое состояние, обусловленное возрастом цыплят-бройлеров, оказывает влияние на активность Mg2+-, Na+,K+-, Са2+- и НС03'-АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов (**). При этом АТФазная активность цитоплазматической мембраны эритроци-
тов детерминирована ионами и К+- на 34,5%, Са2+ - на 12,9% и НС03" - на 52,3% (*). На АТФазную активность ядер ионы Ыа , К и Са2+ не оказывают влияния, а анион НСОз" детерминирует активность на 84,9%. (**)
Следовательно, полученные результаты указывают на то, что цитоплаз-матические мембраны эритроцитов цыплят-бройлеров содержат Ыа+,К+-, Са2+- и НС03"-АТФазы, а ядра - только НС03"-АТФазу, сходную с Ргфактором, и вероятно участвующую в процессах энергообеспечения эритроцитов. При этом на активность АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов оказывает достоверное влияние физиологическое состояние, обусловленное возрастом цыплят-бройлеров.
3.1.3. Влияние кормовых добавок на активность АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов иыплят-бройлеров кросса «Бройлер-б»
Физиологическое состояние, обусловленное применением кормовых добавок, оказывает влияние на активность М§2+-АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров. С 15 сут возраста она достоверно выше в группах, получавших ПКД, чем в контроле (табл. 2). У цыплят-бройлеров 60 сут возраста активность фермента выше в группах, получавших ПКД и сукцинат, по сравнению с контролем (***). При этом, активность фермента детерминирована возрастом на 73,0% и кормовыми добавками на 12,5% (***)
Таблица 2. Активность Mg2*-, Na+,K+"' Ca3t- и HCOj'-АТФаз (М±о) цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-6» (п=320)_
АТФаза 1 (опыт) 2 (опыт) 3 (опыт) 4 (контроль)
15 сут
Mgi+- 10,67+0,23* 11,2710,24*** 9,92±0,25 9,9310,27
Na+,K+- 13,92+0,11 13,91+0,10 12,05+0,23*** 13,6910,14
Cazt- 11,72+0,19** 11,26+0,13 10,34±0,19*** 11,2710,10
НСОз- 12,38±0,19 14,25+0,16*** 15,23+0,27*** 12,7310,37
60 сут
13,33+0,32*** 16,26±0,20*** 13,2810,32*** 14,6910,20
Na\K+- 28,12±0,46*** 29,05±0,32*** 26,6910,47** 24,9310,24
Са2+- 14,70+0,12 16,85±0,22*** 13,6510,22*** 14,71Ю,17
нсо3-- 27,21±0,24*** 26,90±0,22*** 25,6310,36* 24,8510,30
достоверность по сравнению с контрольной группой
Активность Ка+,К+- АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров 15 сут возраста групп, получавших ПКД, не имеет достоверных отличий от контроля, а в группе, получавшей сукцинат, установлено сни-
жение АТФазной активности по сравнению с контролем (***). В 60 сут возрасте активность фермента цыплят-бройлеров, получавших ПКД и сукцинат выше, чем в контрольной группе. Она детерминирована возрастом на 95,6% и кормовыми добавками на 1,9% (***).
Активность Са2+-АТФазы цыплят-бройлеров 15 сут возраста выше в группе, получавшей ПКД (*), и ниже - в группе, получавшей сукцинат (***), по сравнению с контролем. Совместное применение препаратов не приводит к изменению активности этой АТФазы. В 60 сут возрасте отмечено увеличение активности фермента, в группе, получавшей ПКД и сукцинат и ее снижение в группе, получавшей сукцинат, по сравнению с контролем (***). Активность фермента детерминирована возрастом на 80,8% и кормовыми добавками на 8,9% (***).
У цыплят-бройлеров 15 сут возраста активность НСОз"-АТФазы выше в группах, получавших янтарную кислоту, чем в контроле (***). В 60 сут возрасте активность фермента выше во всех группах опыта, чем в контроле (***), и детерминирована возрастом на 95,6% и кормовыми добавками на 1,2% (***).
Регрессионный анализ позволил установить математическую зависимость активности АТФаз цитоплазматических. мембран эритроцитов цыплят-бройлеров от их возраста (табл. 3). У цыплят опытных групп, получавшей ПКД, прирост активности происходит более интенсивно по сравнению с другими группами опыта и контролем.
Таблица 3. Уравнения регрессии динамики активности АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-6» (у - активность АТФазы, а X - возраст цыплят)
-'--тт---т-т----тт-—-----
Группа \^+-АТФаза Ыа\Кф-АТФаза Са2+-АТФаза НСОз'-АТФаза
1 (опыт) у=9;78+0,06х у=9,19+0,32х у=10,38+0,07х у=7,44+0,33х
2 (опыт) . у=9,61+0,11х у=8,86+0,34х у=8,68+0,14х у=10,04+0,28х
3 (опыт) у=8,80+0,07х у=7,16+0,33х у=8,85+0,08х у=11,77+0,23х
4 (контр.) у=8,34+0,11х у=9,94+0,22х у=9,65+0,08х у=8,69+0,27х
Активность и Ка+,К+-АТФаз ядер эритроцитов цыплят-бройлеров 15 сут возраста (табл. 4) выше в группах, получавших кормовые добавки, чем в контроле (***). В 60 сут возрасте уровень М§2+-АТФазы выше в группе, получавшей совместно ПКД и сукцинат, по сравнению с контролем (*). Активность фермента детерминирована возрастом на 67,1% и кормовыми добавками на 5,9% (***).
Кормовые добавки не оказывают достоверного влияния на активность Са -АТФазы ядер эритроцитов цыплят-бройлеров 15 и 60 сут возраста, при этом активность фермента детерминирована возрастом на 65% (***).
Таблица 4. Активность Ка+,К+-, Са2+- и НССЬ'-АТФаз (М±в) ядер эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-б» (п=320)__
АТФаза I (опыт) 2 (опыт) 3 (опыт) 4 (контроль)
15 сут
5,00±0,06*** 5,07±0,09*** 5,12±0,11*** 4,49±0,11
Ыа+Д+- 5,00±0,06*** 5,07±0,09*** 5,12±0,11*** 4,49±0,11
Са/1- 4,92±0,25 5,16+0,12 5,24±0,11 5,05±0,06
НСОз"- Ю,99±0,22 15,50+0,13*«* 12,85±0,17*** 10,57±0,25
60 сут
6,17+0,14 6,34±0,12* 5,98+0,19 5,97±0,16
6,29±0,12 6,53±0,19 6,18±0,16 6,18±0,20
Са"®+- 6,43±0,17 6,73±0,12 6,22±0,13 6,16±0,19
НСОз'- 9,81±0,14 10,18±0,11** 9,79+0,18 9,46+0,22
достоверность по сравнению с контрольной группой
На активность НСОз'-АТФазы ядер эритроцитов цыплят-бройлеров существенное влияние оказывает физиологическое состояние, обусловленное возрастом и применением кормовых добавок. Так, с возрастом активности фермента достоверно уменьшается, что можно объяснить снижением метаболической активности ядер эритроцитов. При этом активность фермента детерминирована возрастом на 45% (***). Активность НС03"-АТФазы ядер эритроцитов цыплят-бройлеров 15 и 60 сут возраста достоверно выше в группах, получавших янтарную кислоту, по сравнению с контролем (**).
Анализ математической модели зависимости активности АТФаз ядер эритроцитов от возраста цыплят-бройлеров (табл. 5) показывает более интенсивную возрастную динамику у СОз"- и Са2+-АТФаз, цыплят группы, получавшей совместно ПКД и сукцинат, по сравнению с другими группами опыта и контролем.
Таблица 5. Уравнения регрессии динамики активности АТФазы ядер эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «Броилер-6» (у - активность АТФазы, а X - возраст цыплят)
Группа К^+-АТФаза Ыа+,К+-АТФаза Са2+-АТФаза НСОз'-АТФаза
1 (опыт) у=4,61+0,03х у=4,61+0,03х у=4,42+0,03х у=11,38-0,03х
2 (опыт) у=4,65+0,03х у=4,65+0,03х у=4,63+0,04х у=17,27-0,12х
3 (опыт) у=4,84+0,02х у=4,84+0,02х у=4,91+0,02х у=13,87-0,07х
4 (контр.) у=4,00+0,03х у=4,00+0,03х у=4,68+0,02х у=10,94-0,02х
Двухфакторный дисперсионный анализ показывает, что активность АТ-Фаз цитоплазматических мембран и ядер эритроцитов в большей степени детерминирована возрастом цыплят-бройлеров (43,3-94,8%, **). При этом на активность АТФаз цитоплазматических мембран наибольшее влияние оказывает ПКД, на активность АТФаз ядер - совместное применение ПКД и сукцината, (33,5%,**). ..,...-
Следовательно, физиологическое состояние, обусловленное возрастом и применением кормовых добавок, приводит к росту активности Mg2+-, Na+,K+"-Са2+- и НСОз'-АТФаз цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-6». При этом активность Mg2+-, Na+,K+"' Са2+- АТФаз ядер также повышается, а у НСОз'-АТФазы - понижается.
3.1.4. Влияние кормовых добавок на активность АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов иыплят-бройлеров кросса «ISA»
На величину активности АТФаз цитоплазматических мембран эритроцитов существенное влияние оказывает физиологическое состояние, обусловленное применением кормовых добавок (табл.6). Активность АТФаз в группах, получавших ПКД, выше, чем в контрольной группе (*).
Таблица 6. Активность Mg2+-, Na+,K+-, Са2+- и НСОз'-АТФаз (М±о) цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA» (п=160) _
АТФаза I (опыт) 2 (опыт) 3 (опыт) 4 (контроль)
10 сут
Mg2+- Ю,39±0,08*** 10,02+0,14** 8,71±0,11*** 9,46+0,13
Na\K+- 12,08±0,06*** 11,75±0,07*** 11,05±0,09 11,09±0,11
Caz1- 11,11±0,16*** 11,00+0,09*** 10,56+0,09** 10,23±0,05
НСОз"- 13,48+0,08** 13,24±0,05* 12,97+0,43 12,73+0,20
20 сут
Mg2" 12,61±0,20*** 12,53+0,38*** 10,54±0Д1 10,51±0,16
15,16+0,11*** 14,53±0,12*** 12,69±0,09*** 12,22±0,09
Са2+- 14,25±0,13*** 13,93±0,21*** 12,59+0,13*** 11,57+0,15
НСОз- 17,27±0,12*** 17,48±0,14*** 15,63±0,12*** 14,91 ±0,09
30 сут
Mg'"- • 13,39±0,11*** 12,94±0,10*** 11,33±0,15* 10,93+0,15
Ыа+,Г- 15,87±0,10*** 15,04±0,14*** 13,16±0,12* 13,63±0,16
Са2+- 15,40±0,12*** 15,22+0,11*** 13,19±0,12*** 12,32+0,11
НСОз'- 21,70±0,13*** 21,31±0,13*** 17,94±0,11*** 16,89±0,15
40 сут
Mg-- 15,39±0,13*** 14,89±0,14*** 11,78±0,15** 12,74±0,26
Na+,r- 17,40±0Д7*** 16,88±0,20*** 13,97±0,17* 14,51 ±0,20
Са2+- 16,40±0,15*** 16,13+0,14*** 14,71+0,18*** 13,53±0,25
НСОз"- 27,47±0,08*** 27,24±0,19*** 23,37+0,19* 22,79±0,23
достоверность по сравнению с контрольной группой
Двухфакторным дисперсионным анализом влияния возраста и кормовых добавок на активность М§2+-АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров установлено, что она детерминирована возрастом на 59% (***) и кормовыми добавками на 29% (***). Активность Ыа+,К+-АТФазы детерминирована возрастом на 62,2% (***) и кормовыми добавками на 29,2% (***). Активность Са2+-АТФазы детерминирована возрастом на 67,8% (***) и кормовыми добавками на 23,8% (***). Активность НСОз'-АТФазы детерминирована возрастом на 87,6% (***) и кормовыми добавками на 8,5% (***).
С возрастом отмечается более интенсивный прирост активности Ыа+,К+- и НСОз'-АТФаз у цыплят опытных групп, получавших ГЖД (табл. 7).
Таблица 7. Уравнения регрессии динамики активности АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA» (у - активность АТФазы, а X -возраст цыплят)____
Группа Mgz '-АТФаза Ыат,Кт-АТФаза Са"-АТФаза НС03"-АТФаза
1 (опыт) у=8,95+0,15Х у=10,71+0,16Х у=9,69+0,16Х у=8,05+0,44Х
2 (опыт) у=8,88+0,14Х у=10,30+0,16Х у=9,67+0,16Х у=7,95+0,44Х
3 (опыт) у=7,94+0,10Х у=10,29+0,09Х у=9,36+0,13Х у=9,06+0,31Х
4 (контр.) у=8,27+0,10Х у=9,90+0,1 IX у=9,18+0,1 ОХ у=8,75+0,29Х
Физиологическое состояние, обусловленное возрастом, приводит к повышению активности Mg2+-, Na+,K+- и Са2+-АТФаз ядер эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA», и к ее снижению у НСОз"-АТФазы (табл.8).
Таблица 8. Активность Mg2*-, Na+,K+-, Са2+- и НСОз'-АТФаз (М±<т) ядер эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA» (п=160)____
АТФаза 1 (опыт) 2 (опыт) 3 (опыт) 4 (контроль)
10 суг
4,49±0,10 4,51±0,07 4,45+0,08 4,43±0,07
NaT,fC- 4,55±0,10 4,54±0,06 4,65±0,12 4,47±0,11
CaiT- 4,60+0,12 4,52+0,09 4,59+0,08 4,49±0,12
НСОз- 10,15±0,11 14,31±0,08*** 12,07±0,13*** 10,05±0,07
20 суг
м^- 5,08±0,05*** 5,16+0,06*** 5,12±0,07*** 4,60±0,06
NaT,KT- 5,10±0,07*** 5,13±0,15** 5,12±0,20* 4,61±0,10
Cai+- 5,28±0,09*** 5,43+0,08*** 5,30±0,11*** 4,81+0,08
НСОз"- 9,56±0,11 12,90+0,16*** 10,44±0,13***... 9,53±0,08
30 сут
6,32±0,10*** 6,62±0,07*** 6,28±0,08*** 5,84±0,06
NaT,Kr- 6,38+0,11** 6,39+0,11** 5,97±0,07 5,95±0,07
Cai+- 6,68+0,12*** 6,93+0,13*** 6,47±0,12** 6,16±0,08
НСОз'- 9,25±0,11 12,08±0,10*** 9,82+0,09* 9,50+0,11
40 суг
мг- 7,01±0,08 7,53±0,07* 6,95+0,17 7,05±0,17
NaT,KT- 6,91±0,10 7,46±0,09* 7,02±0,19 7,09±0,14
Cai+- 7,32+0,10 7,77±0,06** 7,39+0,12 7,40+0,09
НСОз- 8,64±0,10* 10,22±0,15*** 9,35±0,18* 8,97±0,13
достоверность по сравнению с контрольной группой
Активность }^2+-АТФазы ядер эритроцитов цыплят-бройлеров 10, 20, 30 и 40 сут возраста групп опыта, получавших кормовые добавки, выше, чем в контроле (*).
Активности Ыа+,К+- и Са2+-АТфаз ядер эритроцитов цыплят-бройлеров не имеет достоверных отличий от активности \^2+-АТФазы в изучаемые возрастные периоды во всех группах опыта.
Для М§2+-, Ка+,К+ и Са2+-АТФаз установлена сходная динамика возрастной активности, несколько отличающаяся по группам опыта. При этом наибольший прирост активности ферментов отмечен в группах, получавших ПКД (табл. 9).
Таблица 9. Уравнения регрессии динамики активности АТФазы ядер эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA» (у - активность АТФаэы, а X - возраст цыплят)_
Группа Mg^-АТФаза №+,К+-АТФаза Са^-АТФаза НСОз'-АТФаза
1 (опыт) у=3,48+0,08Х у=3,54+0,08Х у=3,46+0,09Х у=10,60-0,04Х
2 (опыт) у=3,19+0,1 ОХ у=3,23+0,10Х у=3,27+0,1 IX у=15,67-0,12Х
3 (опыт) у=3,47+0,08Х у=3,46+0,08Х у=3,44+0,09Х у=12,77-0,09Х
4 (контр.) у=3,18+0,08Х у=3,23+0,08Х у=3,13+0,ЮХ у=Ю,40-0,03Х
Активность НСОз'-АТФазы имеет отрицательную возрастную динамику, особенно интенсивную в опытных группах, получавших сукцинат (*).
Двухфакторный дисперсионный анализ возрастной динамики активности АТФаз цитоплазматических мембран и ядер эритроцитов показал, что активность Mg2+-, Na+,K+-, Са2+- и НСОз'-АТФаз в большей степени зависят от возраста и в меньшей степени от кормовых добавок.
Отсюда, физиологическое состояние, обусловленное возрастом и применением кормовых добавок, приводит к росту активности Mg2+-, Na+,K+~' Са2+- и НСОз'-АТФаз цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA». При этом активность Mg2+-, Na+,K+"' Са2+- АТФаз ядер также повышается, а у НС03"-АТФазы - понижается.
Сравнительный дисперсионный анализ кроссов «ISA» и «Бройлер-6» показывает, что детерминация возрастом более выражена у кросса «Бройлер-6», а кормовыми добавками у кросса «ISA».
Таким образом, на активность Mg2+-, Na+,K+- и Са2+- и НСОз'-АТФаз цитоплазматических мембран и ядер эритроцитов цыплят-бройлеров кроссов «Бройлер-6» и «ISA» оказывает влияние физиологическое состояние, обусловленное применением кормовых добавок, возрастом и кроссом.
3.1.5. АТФазная активность тканей и органов иыплят-бройлеров АТФазная активность неодинакова в различных тканях. Изученные нами объекты по убыванию активности можно расположить в следующий ряд: поч-ки-»печень—»эритроциты-»скелетные и сердечные мышцы. Физиологическое состояние, обусловленное возрастом, приводит к росту активности АТФаз тканей и органов. Наибольшие изменения в этом отношении отмечены в почках, далее следует печень и эритроциты и в меньшей степени такие сдвиги наблюдаются в мышцах.
АТФазная активность тканей и органов цыплят-бройлеров кроссов «Бройлер-6» «ISA» имеет сходную динамику и находится в зависимости от состава рациона, что подтверждается уравнениями регрессии (табл.10,11).
Таблица 10. Уравнения регрессии активности АТФазы тканей и органов цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-6» (у - активность АТФазы, X - возраст цыплят в сут)
Группа Печень Почки Мышечная ткань Сердце
1 у=5,94+0,10х у=7,34+0,03х у=6,81+0,07х у=6,76+0,05х
2 у=5,90+0,10х у=7,27+0,03х у=6,75+0,07х у=7,00+0,05х
3 у=5,95+0,08х у=7,23+0,03х у=6,73+0,07х у=6,66+0,11х
4 у=5,90+0,10х у=7,16+0,03х у=6,86+0,06х у=6,46+0,12х
Таблица 11. Уравнения регрессии активности АТФазы тканей и органов цыплят-бройлеров кросса «ISA» (у - активность АТФазы, X - возраст цыплят в сут)_
Группа Печень Почки Мышечная ткань Сердце
1 у=5,94+0,10Х у=7,34+0,03Х у=б,81+0,07Х у=7,69+0,09Х
2 у=5,90+0,09Х у=7,27+0,03Х у=б,75+0,07Х у=7,66+0,09Х
3 у=5,95+0,09Х у=7,23+0,03Х у=б,73+0,07Х у=6,66+0,1 IX
4 у=5,89+0,09Х у=7,16+0,03Х у=6,86+0,06Х у=6,46+0,12Х
Рост активности АТФазы в гепатоцитах цыплят опытных групп, получавших ПКД, происходит более интенсивно, чем в контрольной группе и группе, получавшей сукцинат, что можно объяснить тем, что ПКД имеет меньшую молекулярную массу, и вследствие этого более интенсивно всасываются в кишечнике, достигает печени и активизирует в ней метаболические процессы.
В почках и мышцах рост активности АТФазы происходит более интенсивно в группах получавших ПКД и сукцинат.
В сердечной мышце наиболее интенсивный рост активности АТФазы происходит в контрольной группе и группе, получавшей сукцинат.
Двухфакторный дисперсионный анализ влияния физиологического состояние, обусловленного применением кормовых добавок и возрастом показывает, что детерминация АТФазной активности тканей и органов
возрастом более выражена у кросса «Бройлер-6», а кормовыми добавками у кросса «ISA».
Анализ полученных результатов показывает, что активности АТФаз тканей и органов цыплят-бройлеров зависит от их физиологическое состояние, обусловленное возрастом, применением кормовых добавок и кроссом, и имеет определенное сходство с аналогичными показателями для цитоплазматических мембран и ядер эритроцитов.
3.1. б. Скорость роста иыплят-бройлеров и ее связь с активностью А Т-Фаз иитоплазматических мембран и ядер эритроиитов
Динамика прироста живой массы птицы является интегральным показателем ее физиологического состояния и уровня метаболических процессов.
Абсолютная масса цыплят-бройлеров кроссов «Бройлер-6» и «ISA» за период опыта увеличивается (табл. 12). Наибольший прирост живой массы у цыплят-бройлеров отмечен в группах, получавших ПКД, что вероятно, связано с тем, что белок ПКД находится в биологически более доступной форме и легче всасывается и транспортируется кровью, а наименьший - в опытной группе 3, получавшей сукцинат, активирующей процессы катаболизма.
На скорость роста, оказывает влияние физиологическое состояние цыплят-бройлеров, обусловленное кроссом. При этом она существенно выше у цыплят-бройлеров кросса «ISA».
Таблица 12. Уравнения регрессии прироста живой массы цыплят-бройлеров кроссов «Бройлер-6» и «ISA» (у - живая масса, г; х - возраст цыплят, сут)_
Кросс «Бройлер-6» «ISA
1 (опыт) у=-171,68+30,81х у=-182,80+54,76х
2 (опыт) у=-174,02+30,21х у=-176,34+53,20х
3 (опыт) у=-158,56+27,12х у=-155,76+48,86х
4 (контроль) у=-157,41+28,38х у=-159,32+49,75х
Корреляционный анализ (табл. 13) показывает, что при увеличении живой массы цыплят-бройлеров кроссов «Бройлер-6» и «ISA» активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран также возрастает, за исключением НСОз"-АТФазы ядер, активность, которой наоборот снижается (***).
Таблица 13. Коэффициенты корреляции активности ЛТФаз эритроцитов и живой мае-сы цыплят-бройлеров___ __
АТФаза №ГДГ- 1 Са ■ НСОз'-
Кросс «Бройлер-6»
Цитоплазматическая мембрана
1 (опыт) 0,866**« 0,991*** 0,963*** 0,996***
2 (опыт) 0,969*** 0,996*** 0,987*** 0,996***
3 (опыт) 0,899*** 0,990*** 0,951*** 0,985***
4 (контроль) 0,959*** 0,996*** 0,978*** 0,987*»*
Ядра
1 (опыт) 0,889*** 0,927*** 0,780*** -0,753***
2 (опыт) 0,901*** 0,862*** 0,918*** -0,992***
3 (опыт) 0,705*** 0,809*** 0,816*** -0,950***
4 (контроль) 0,884*** 0,883*** 0,810*** -0,645***
АТФаза Ыа+,К+- Са2+- НСОз-
Кросс «¡БА»
Цитоплазматическая мембрана
1 (опыт) 0,951*** 0,910*** 0,878*** 0,989***
2 (опыт) 0,898*** _ 0,927*** 0,885*** 0,990***
3 (опыт) 0,832*** 0,883*** 0,928*** 0,978***
4 (контроль) 0,896*** 0,906*** 0,907*** 0,983***
Ядра
1 (опыт) 0,928*** 0,903*** 0,910*** -0,845***
2 (опыт) 0,950*** 0,943*** 0,938*** -0,961***
3 (опыт) 0,905*** 0,878*** 0,931*** -0,831*«*
4 (контроль) 0,930*** 0,919*** 0,942*** -0,759***
Отсюда следует, что у цыплят-бройлеров существует взаимосвязь активности АТФаз эритроцитов со скорость прироста живой массы.
3.2. Особенности функционирования АТФазных ферментных систем эритроцитов свиней в зависимости от возраста (фаз постнатального онтогенеза) и физиологического состояния
3.2.1. Влияние строЛантина-С на АТФазную активность эритроиитов свиней
Физиологическое состояние, обусловленное возрастом, приводит к снижению активность М§2+,№+,К+-АТФазы, М§2+-АТФазы и Ыа+,К+-АТФазы эритроцитов свиней (рис. 4), Корреляционный анализ показывает сильную отрицательную связь активности АТФаз с возрастом животных: у 1^2+,№+,К+-АТФазы - -0,78 (**); ?^2+-АТФазы - -0,82 (**); Ыа+,К+-АТФазы - -0,56 (**). Это, вероятно связано с тем, что с возрастом животных отмечается снижение интенсивности метаболических процессов в организме.
Регрессионным анализом установлено, что наибольшее возрастное снижение активности наблюдается у М§2+-АТФазы (у=5,27-0,054х).
С целью выявления степени влияния строфантина-в на активность АТ-Фазы эритроцитов свиней был проведен двухфакторный дисперсионный анализ. Независимым фактором при этом служили возраст (фактор А) и наличие в среде инкубации строфантина- в (фактор Б). За нулевую точку отсчета принимали активность М§2+,Ка+,К+-АТФазы. Дисперсионный анализ показывает, что активность АТФазы детерминирована на 9,15% возрастом и на 87,34% стро-фантином-О (*).
Возраст, мес
—«—Мд.Ыа.К-АТФаза . -ш- -Mg-АТФаза—t—Na.K-АТФаза
Рис. 4. Влияние строфантина-G на динамику АТФазной активности эритроцитов свиней (М±т)
Таким образом, физиологическое состояние, обусловленное возрастом животных, оказывает влияние на активность транспортных АТФаз на 9,15%. При этом наибольшее возрастное снижение активности наблюдается у Mg2+-АТФазы.
3.2.2. Влияние ионов натрия и калия на АТФазную активность эритроцитов свиней
Максимальная активность фермента отмечается при концентрации калия - 15-20 ммоль-л~1(3,65±0,08, нмоль Фн/мг белка в мин) и концентрации натрия -130-150 ммоль-л"1 (4,32±0,10, нмоль Фн/мг белка в мин).
Для определения степени влияния ионов на активность АТФазы проведен однофакторный дисперсионный анализ, который показывает, что ионы натрия детерминируют активность фермента на 52,0%, а ионы калия на 45,8% (*).
Следовательно, основную регуляторную роль в активности АТФазы эритроцитов свиней играют ионы натрия и калия в различных диапазонах концентраций.
3.2.3. Активность Мр2*-. Иа+,К*-, Со2*- и НСО,'-АТФаз эритроцитов свиней
Наряду с определением активности 1^2+,Ыа+,К.+-АТФазы, М§2+-АТФазы и Ыа+,К+-АТФаз эритроцитов свиней с использованием строфантина-в, проведено определение активности Ыа+,К+-, Са2+- и НСОз'-АТФаз в средах различного ионного состава (табл. 14).
Физиологическое состояние, обусловленное возрастом животных, приводит к снижению активности Ыа+,К+-, Са2+- и НС03"-АТФаз эритроцитов свиней (**), что связано с возрастными перестройками мембраны этих клеток, так активности К^2+-АТФазы эритроцитов свиней описывается уравнением: у=5,0833-0,0597х; Иа+,К+-АТФазы - у=7,009-0,0783х, Са2+-АТФазы - у=5,2368-0,0664х и НСОз'-АТФазы - у=7,8382-0,0768х. При этом активность АТФазы детерминирована возрастом на 71,2%, Ыа+,К+-АТФазы - на 73,5%, Са2+-АТФазы - на 69,7% и НС03"-АТФазы - на 73,6% (***).
Таблица 14. Активность М^*-, Ка+,К% Са2+- и НСОз'-АТФаз (М±с) эритроцитов свиней (11=120)_
Возраст, мес М^+-АТФаза Ыа+,К+"АТФаза Са^'АТФаза НСОз'-АТФаза
2 5,13±0,08 7,15±0,15** 5,19±0,16 7,90±0,06**
6 4,67±0,11 6,б0±0,0б** 4,90±0,07 7,38±0,07**
12 4,15±0,12 5,83±0,18** 4,18±0,15 6,52±0,20**
24 3,76±0,12 5,38±0,12** 3,75±0,10 6,18±0,16**
достоверность по сравнению с активностью Л^2+-АТФазы
Отсюда следует, что на активность Ыа+,К+-, Са2+- и НС03"-АТФаз
эритроцитов свиней оказывает влияние физиологическое состояние, обусловленное возрастом животных, особенно сильно проявляющееся в отношении Ыа+,К+- и НСОз'-АТФаз.
3.3. Особенности функционирования АТФазных ферментных систем эритроцитов крупного рогатого скота в зависимости от возраста (фаз по-стнатального онтогенеза) и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой) и физиологическим созреванием
3.3.1. Влияние строфантина-0 на АТФазную активность эритроцитов
Физиологическое состояние, обусловленное возрастом животных, приводит к снижению активности М§2+,Ыа+,К+-, М§2+- и Ыа+,К+-АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота симментальской и черно-пестрой пород (рис. 6, 7). При этом у животных черно-пестрой породы уровень активности 1^2+,Ыа+,К+-и №+,К+-АТФаз выше, чем у симментальской породы, что подтверждается данными корреляционного и регрессионного анализов (табл. 15). У животных черно-пестрой породы установлена более сильная корреляционная зависимость активности ферментов от возраста, по сравнению с симментальской породой.
С целью выявления степени влияния строфантина-в на активность АТ-Фазы эритроцитов крупного рогатого был проведен двухфакторный дисперсионный анализ. Независимым фактором при этом служили возраст (фактор А) и наличие в среде инкубации строфантина-О (фактор Б). За нулевую точку отсчета принимали активность 1^2+,Ыа+,К+-АТФазы.
Возраст, мес
—«—Мд,Ма,К,-АТФаза - 4- -Мд-АТФаза —*—Na.K-АТФаза
Рис. 6. Возрастная динамика активности АТФазы эритроцитов крупного рогатого скота симментальской породы (М±т)
0,5 -,-,---,-,-,-,-,-,-,-,-,-,-,---,---,---
5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25
Возраст, мес
i Мд.Ыа.К-АТФаза ■ -■- -Mg-АТФаза t Na,K-AT<ba3a|
Рис. 7. Возрастная динамика активности АТФазы эритроцитов крупного рогатого скота черно-пестрой породы (М±ш)
Таблица 15. Показатели корреляции и регрессии активности АТФаз эритроцитов круп-иого рогатого скота _______
Показатель АТФаза Mg^-АТФаза Ыа+,К+-АТФаза
Симментальская порода
Коэффициент возрастной корреляции -0,69473* -0,57335* -0,31382*
Уравнение регрессии у=3,07-0,03*х у=1,99-0,02*х у=1,07-0,01*х
Черно-пестрая порода
Коэффициент возрастной корреляции -0,75499* -0,60366* -0,55524*
Уравнение регрессии у=3,24-0,03*х у=1,92-0,01*х у=1,32-0,01*х
Дисперсионный анализ показывает, что активность АТФазы эритроцитов крупного рогатого скота симментальской породы детерминирована на 3,5% возрастом и на 90,5% строфантином-0 (*), а черно-пестрой - на 3,2% возрастом и на 92,8% строфантином-в (*).
Для выявления влияния физиологического состояния крупного рогатого скота, обусловленного возрастом и породой на активность К^2+,Ыа+,К+-, М^-и №+,К+-АТФаз эритроцитов проведен двухфакторный дисперсионный анализ (табл.16). Так, активность М£2+,Ш+,К+-АТФазы детерминирована возрастом на 56,1% и породой - на 8,6%. Активность М§2+-АТФазы детерминирована возрастом на 37,4%, при этом влияние породы не выявлено. Активность Ыа+,К+-АТФазы детерминирована возрастом на 19,3% и породой - на 15,7%.
Таблица 16. Коэффициенты детерминации влияния возраста и породы крупного рогатого скота на активность АТФаз эритроцитов_______
АТФаза М*1*- Ыа+,К+-
Возраст (А) 0,561** 0,374** 0,193**
Порода (Б) 0,086** 0,000 0,157**
А+Б 0,004 0,034 0,014
Таким образом, на активность К^2+,Ыа+,К+-, и Ыа+,К+-АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота существенное влияние оказывает физиологическое состояние, обусловленное возрастом и породой. При этом наибольшие породные отличия выявлены для №+,К+-АТФазы, что, вероятно, связано с разным уровнем электролитного обмена ("Ыа+ и К+) у животных симментальской и черно-пестрой пород.
Снижения активности АТФаз эритроцитов животных симментальской и черно-пестрой пород с возрастом можно объяснить тем, что у физиологически зрелых телят с возрастом происходит снижение интенсивности энергетического обмена, функционального напряжения систем кровообращения, дыхания, и др., что в свою очередь связано с завершением структурно-функционального становления органов и механизмов регуляций.
3.3.2. Влияние ионов натрия и калия на АТФазную активность эритроцитов крупного рогатого скота
Максимальная активность фермента отмечается при концентрации калия -15-30 ммоль-л"1 и натрия - 100-150 ммоль-л"1. У животных симментальской породы ионы натрия детерминируют активность фермента на 82,2%, калия - на 89,7% (*); у черно-пестрой породы - ионы натрия - на 85,9%, калия - на 87,0% (*). При этом установлены определенные породные отличия, составляющие для натрия 13,2% и для калия 9,3% (**).
Следует отметить, что на активность АТФазы эритроцитов крупного рогатого скота ион натрия оказывает большее влияние, чем ион калия. Во влиянии ионов натрия и калия установлены определенные породные отличия, вероятно связанные с различным уровнем электролитного обмена у животных симментальской и черно-пестрой пород.
3.3.3. Активность Мг2*-. Ма'.К '' Са - и НСО{-АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота симментальской породы.
Наряду с определением активности К^^Ыа^К^АТФазы, Г^2+-АТФазы и Ыа+,К+-А'ГФаз эритроцитов крупного рогатого скота с использованием стро-фантина-О, проведено определение активности 'Ма+,К+-, Са2+- и НС03"-
АТФаз в средах различного ионного состава. По активности изучаемые ферменты можно расположить в следующей убывающей последовательности: НСОз'-АТФаза, Иа+,К+-АТФаза, Са2+-АТФаза и Mg2+-ATФaзa (табл. 17). При этом активность Ыа+,К+- и НС03"-АТФаз выше активности Mg2+-ATФaз во всех возрастных периодах (**).
Таблица 17. Активность Mg2+-, Na+,K+-, Ca2*- и HCOj'-АТФаз (М±о) эритроцитов крупного рогатого скота симментальской породы (п=120|
К^АТФаза
Возраст, мес
Ш*,К+-АТФаза
Ca -АТФаза
НСОз'-АТФаза
Симментальская порода
6 2,24±0,06 3,11±0,04** 2,37±0,05 3,26±0,05**
12 1,92±0,03 2,42±0,05** 1,98±0,04 2,98±0,06**
24 1,63±0,03 2,27±0,04** 2,10±0,04* 2,36±0,04**
Черно-пестрая порода
6 2,37±0,07 3,29±0,06** 2,42±0,07 3,41±0,06**
12 2,07±0,03 2,53±0,04** 2,11±0,03 3,18±0,04**
24 1,86±0,04 2,37±0,03** 1,91±0,04 2,47±0,03**
На активность АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота оказывает влияние физиологическое состояние, обусловленное возрастом и породой животных. Так, у животных симментальской породы, активность ¡^2+-АТФазы детерминирована возрастом на 78,9%; Ыа+,К+-АТФазы на - 88,8%; Са24-АТФазы на - 63,3%; НС03'-АТФазы на - 86,6% (***), а у черно-пестрой породы - активность К^2+-АТФазы - на 67,5%; Ыа+,К+-АТФазы - на 89,9%; Са2+-АТФазы - на 65,2%; НС03"-АТФазы - на - 89,6% (***). При этом активность К^2+-АТФазы детерминирована породой на 9,6%; Ыа+,К+-АТФазы - на 2,6%; и НСОз'-АТФазы - на 3,2% (**). Влияние породы на активность Са2+- АТФазы не выявлено.
Следовательно, детерминация возрастом активности Mg2+-, Ка+,К+-, Са2+-и НСОз'-АТФаз эритроцитов более выражена у животных черно-пестрой породы.
Для более глубокого понимания влияния возраста и физиологического состояния крупного рогатого скота, связанного с породными особенностями, на
активность АТФаз эритроцитов проведен регрессионный анализ (рис. 10, 11). Полученные математические модели показывают, что активность -
Ыа+,К+- и Са2+" и НСОз"-АТФаз у молодых животных черно-пестрой породы достоверно выше, чем у симментальской породы, что говорит об их более высоком уровне обмена веществ и энергии, однако у животных черно-пестрой породы интенсивность снижения активности Ыа+,К+- и Са2+" и НС03"-АТФаз незначительно выше, чем у симменталов.
Анализ полученных результатов позволяет сделать предположение, что животные черно-пестрой породы при рождении получают более высокий генетический потенциал, проявляющийся в уровне активности АТФаз, однако с возрастом происходит его снижение, до уровней симментальской породы.
Рис. 10. Регрессионный анализ возрастной динамики активности АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота симментальской породы_
Мд -АТФаэа - 2,-49ВЗ"ехр(-0,0128*х) На*.К*-АТФааа - З,393в*ехр(-0.01в3-х) Са^-АТФааа - 2,5341"ехр(-0.0125*х) НСО,"-АТФаза - 3,ве55*ехр(-0,0164-х)
20 22 2Л
Возраст. Мое
Рис. 12. Регрессионный анализ возрастной динамики активности АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота черно-пестрой породы
выводы
1. Вид животных (птицы, свиньи и крупный рогатый скот), в зависимости от возраста (фаз постнатального онтогенеза) и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), кормлением, физиологическим созреванием, продуктивностью и скоростью роста, определяет своеобразие активности транспортных АТФазных ферментных систем клеток тканей, органов и субклеточных структур.
1.1. У цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» активность АТФаз цитоплазматических мембран эритроцитов детерминирована возрастом: Mg2+-АТФазы на 59,2-73,0%, Ыа+,К+-АТФаза на 62,1-95,6%, Са2+-АТФаза на 67,880,8% и НСОз'-АТФаза на 87,6-95,6%. Активность ядерных АТФаз детерминирована возрастом на 90,0-67,1% - Mg2+-AT®a3bi, 86,1-70,9% - Ыа+,К+-АТФазы, 90,8-65,0% - Са2+-АТФазы и НС03'-АТФазы - на 29,1-44,8%.
1.2. У свиней активность Mg2+-, Na+,K+-, Са2+- и НС03"-АТФаз мембран эритроцитов зависит от возраста: наибольшее снижение для Na ,К -, и HCOi"-АТФаз эритроцитов. Активность Mg2+-ATOa3ti детерминирована возрастом на 71,2%, Ыа+,К+-АТФазы на - 73,5%, Са2+-АТФазы на - 69,7% и НС03"-АТФазы на-73,6% (***).
1.3. С возрастом крупного рогатого скота активность Mg2+-, Na+,K+-, Са2+-и НСОз'-АТФаз эритроцитов достоверно снижается. Активность Mg^-АТФазы детерминирована возрастом на 66,1%, №+,К+-АТФазы на - 86,8%, Са2+-АТФазы на - 55,9% и НСОз'-АТФазы на - 85,2% (***).
Динамика активности АТФаз у симментальской и черно-пестрой пород имеет определенные отличия. Активность Mg2+-AT®a3bi детерминирована породой на 9,6%, Ма+,К+-АТФазы на - 2,6% и НС03"-АТФазы на - 3,2% (***) влияние породы на активность Са2+-АТФазы не установлено.
2. Активность АТФазных ферментных систем эритроцитов цыплят-бройлеров специфична по отношению концентраций ионов натрия, калия и магния. Так, наибольшее активирующее влияние на АТФазную активность проявляется при концентрациях ионов: натрия - 115-145, ионов калия - 19-28, ионов магния - 2,0-4,0 ммоль-мл''. При этом активность АТФазы на 76,5% детерминирована ионами магния, на 96,5% ионами натрия и на 47,6% ионами калия. Максимальная АТФазная активность отмечалась в инкубационной среде, содержащей ионы: Na+ - 120 ммоль-мл, К+ - 20 ммоль-мл; Mg2+ - 3,0 ммоль-мл и составляла 9,24±0,23 нмоль Ф„ -мг белка'1-мин1. На активность АТФазы не оказывает
влияния специфический ингибитор - строфантин-К в диапазоне концентраций 0-100 ммоль-л*1 в среде содержащей ионы Na+H К+, так и в среде без них.
3. АТФазы, локализованные в ядерных и цитоплазматических мембранах эритроцитов цыплят-бройлеров имеют определенные различия. Так, ионы Na+ и К+ детерминируют АТФазную активность цитоплазматических мембран на 97%, ионы Са2+ - на 87% и НСОз' анион - на 96% с высокой степенью достоверности. Активность АТФазы ядер не зависела от наличия в среде инкубации ионов Na+, К+ и Са2+ (Р>0,05) и была детерминирована ионами НСОз" на 96% (Р<0,01).
4. Кормовые добавки (пептидная кормовая добавка и сукцинат) оказывают существенное влияние на активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA»h «Бройлер-6», и таким образом на физиологические процессы, обеспечивающие скорость роста.
5. Различные ткани и органы цыплят-бройлеров своеобразны по уровню АТФазной активности. По уровню возрастания АТФазной активности они располагаются в следующий ряд: почки—»скелетные и сердечные мышцы—»печень. У цыплят кроссов «ISA» и «Бройлер-б» установлена сходная возрастная динамика активности фермента тканей и органов. С возрастом цыплят активность АТФазы увеличивается: наибольшие изменения отмечены в печени, сердце и мышечной ткани и в меньшей степени - в почках.
6. Динамика АТФазной активности тканей и органов цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» зависит от применяемых добавок (ПКД и сукцинат) - наибольший рост активности АТФазы в печени, почках и мышцах цыплят, получавших ПКД и в сердечной мышце, получавших сукцинат; имеет кроссовые и возрастные отличия - детерминация возрастом более выражена у кросса «Бройлер-6», а кормовыми добавками у кросса «ISA».
7. Кормовые добавки (ПКД и сукцинат) оказывают стимулирующее влияние на физиологические процессы, обеспечивающие скорость роста. Наибольший прирост живой массы цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» отмечен в группах, получавших ПКД, а наименьший - в группе, получавшей сукцинат; скорость роста цыплят-бройлеров кросса «ISA» существенно выше у цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-6».
8. Скорость роста цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» имеет достоверную сильную корреляционную связь с активностью АТФаз цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов.
9. На активность АТФазы эритроцитов свиней существенное влияние оказывает специфический ингибитор (строфантин-О), который детерминирует активность фермента на 87,34%. Активность АТФазы зависела от физиологического состояния, возраста - на 9,15%. При этом активность М§2+,Ыа+,К+-АТФазы, М§2+-АТФазы и Ыа+,К+-АТФазы эритроцитов свиней с возрастом снижалась.
10. Максимальная активность АТФазы эритроцитов свиней отмечается при концентрации ионов калия -15-20 ммоль-л"1 и концентрации ионов натрия -130-150 ммоль-л'1. Ионы натрия детерминируют активность фермента на 52,0%, а ионы калия - на 45,8% (*).
11. Возраст крупного рогатого скота оказывает влияние на активность общей АТФазы эритроцитов на 56,1%, физиологическое состояние, обусловленное породой - на 8,6%. Активность Mg2+-ATФaзы (уабаин нечувствительная компонента) детерминирована возрастом на 37,4%, при этом влияние породы выявлено не было. Активность Ыа+,К+-АТФазы (уабаин чувствительной компоненты) определена возрастом на 19,3% и породой - на 15,7%.
12. У крупного рогатого скота активность АТФазы детерминирована на 90,5-92,5% строфантином-Б (*). Ионы Ыа+ детерминировали АТФазную активность эритроцитов крупного рогатого скота на 72,2%, ионы К+ - на 79,7%. При этом породные особенности животных оказывали влияние на Ыа+-чувствительную компоненту АТФазы на 13,2% и на К+-чувствительную компоненту - на 9,3% с высокой степенью достоверности.
13. Изучением скорости активного и пассивного переноса веществ, продуктов гидролиза ПКД через стеку кишечника установлено, что скорость переноса веществ на 71% (*) детерминирована временем опыта и на 27% (*) добавлением в раствор энергетических метаболитов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Рекомендуется широкое использование в бройлерном птицеводстве протеиновой кормовой добавки из отходов кожевенного производства для восполнения в растительных рационах дефицита кормового белка.
2. Установленные биохимические тесты (показатели активности транспортных АТФазных насосов) рекомендуется применять для оценки метаболического состояния, физиологических процессов и функций в организме цыплят-бройлеров, свиней и крупного рогатого скота симментальской и черно-пестрой пород в практической и научно-исследовательской работе.
3. Научные разработки и выводы работы рекомендуются к использованию при написании учебных пособий и методических указаний по физиологии, биохимии и кормлению сельскохозяйственных животных, по скотоводству, свиноводству и птицеводству для студентов вузов по агробиологическим специальностям.
4. Материалы диссертации внедрены в сельскохозяйственные предприятия разных типов и форм собственности Курской области, используются в учебном процессе в изучении курсов «Физиология» и «Биохимия», в ФГОУ ВПО «Курский институт социального образования (филиал) РГСУ», ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии».
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
I. Монографии h статьи в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ
1. Мосягин В.В. Биохимические механизмы активного транспорта, метаболизма белка и энергии в организме птиц / В.В. Мосягин // Монография. - Курск, ин-т социального образования (филиал) РГСУ. -Курск, 2007. - 155 с.
2. Мосягин В.В. Технологические аспекты производства кормовой добавки из отходов кож и оценки ее влияния на физиологическое состояние цыплят-бройлеров / Ю.В. Фурман, В.В. Мосягин, В.И. Максимов // Монография. -М:.-2011.-200 с.
3. Мосягин В.В. Особенности белкового и липидного обмена в организме сельскохозяйственной птицы / О.В. Смоленкова, Е.Ю. Федорова, B.C. Иноземцев // Монография. - Курск: изд-во «Мечта». - 2011. - 204 с.
4. Мосягин В.В. Влияние пептидной кормовой добавки из отходов кожевенного производства и сукцината натрия на активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов, биохимические показатели крови и продуктивность цыплят- бройлеров / В.В. Мосягин // Научный журнал КубГАУ - Краснодар: КубГАУ, 2008. - №35(1). - Шифр Информрегистра: 0420800012/0013. - Режим доступа: http://ei.kubagro.ru/
5. Мосягин В.В. Особенности функционирования АТФаз эритроцитов цыплят-бройлеров / В.В. Мосягин // Научный журнал КубГАУ - Краснодар: КубГАУ, 2008. - №35(1). - Шифр Информрегистра: 0420800012/0012. -Режим доступа: http://ei.kubagro.ru/
6. Мосягин В.В. Возрастная динамика активности АТФаз мембран
эритроцитов цыплят при скармливании ГПСД / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - СПб., 2009. - №4. - С. 28-29.
7. Мосягин В.В. Активность АТФаз цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров при скармливании кормовых добавок / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман // Ветеринарная медицина. - М., 2009. -№4. -С. 6-11.
8. Мосягин В.В. Активность общей АТФазы эритроцитов цыплят-бройлеров и влияние на нее ионов электролитов и строфантина-К / В.В. Мосягин // Ветеринарная медицина. - М., 2009. -№ 4. - С. 11-15.
9. Мосягин В.В. Возрастная динамика активности АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров / В.В. Мосягин //Ветеринарная Медицина. - М., 2010. - №1. -С. 44-46.
10. Мосягин В.В. Особенность АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман // Вестник ОрелГАУ: Теоретический и научно-практический журнал. - 2010. - № 2 (23), апрель,- С. 39-42.
11. Мосягин В.В. АТФазная активность молока коров различных пород / В.В.Мосягин, В.И. Максимов, Е.Ю. Федорова // Ветеринарная Медицина. -М., 2010.-№3. С. 21-23.
12. Мосягин В.В. АТФазная активность эритроцитов свиней / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман // Доклады РАСХН., 2010 - № 5 С. 38-39.
13. Mosyagin V.V. ATPase Activity of Pig Erythrocytes / V.V. Mosyagin, V.l. Maksimov, Yu.V. Furman // Russian Agricultural Science, 2010, Vol. 36, No. 5, pp.369-371.
14. Мосягин В.В. Возрастная динамика АТФазной активности эритроцитов у свиней и крупного рогатого скота / В.В.Мосягин, Е.Ю.Федорова // Проблемы биологии продуктивных животных: Научно-теоретический журнал. - Боровск, 2011, №1. - С. 85-88.
15. Мосягин В.В.Возрастная динамика АТФазной активности эритроцитов крупного рогатого скота симментальской и черно-пестрой породы / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Е.Ю. Федорова И Вестник ОрелГАУ: Теоретический и научно-практический журнал. - 2011. - № 1 (28), февраль,- С. 59-61.
16. Мосягин В.В. Особенности фракционного состава молочного белка коров различных пород / Е.Ю. Федорова, В.И. Максимов // Доклады РАСХН, 2011 -Кг 2 С. 37-39.
17. Мосягин В.В. Влияние возраста и физиологического состояния цыплят-бройлеров на содержание мембранного белка в эритроцитах /В.В. Мосягин
// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - СПб., 2011.-№1.-С. 88-90.
18. Мосягин В.В. Особенности функционирования АТФазных ферментных систем тканей и органов цыплят-бройлеров при скармливании пептидной кормовой добавки и сукцината / В.В.Мосягин, В.И.Максимов, Е.Ю.Федорова // Ветеринария Кубани. - 2011. № 2. - С.24-25.
II. Рационализаторские предложения и патенты
19. Мосягин В.В. Влияние сукцината натрия на продуктивность цыплят-бройлеров / В.В. Мосягин // Информационный листок № 56-94. Курск, М.Т. ЦНТИ. - 1994. -2с.
20. Мосягин В.В. Влияние янтарной кислоты и пептидного препарата на показатели белково-минерального обмена цыплят-бройлеров / В.В. Мосягин // Информационный листок № 16-96. Курск, М.Т. ЦНТИ. - 1996. -2с.
21. Мосягин В.В. Влияние пептидного препарата на интенсивность роста и показатели белково-минерального обмена цыплят / В.В. Мосягин // Информационный листок № 19-96. Курск, М.Т. ЦНТИ. - 1996. - 2с.
22. Мосягин В.В. Микрокиносъемка живых и фиксированных объектов (рац. предложение) / В.В. Мосягин, A.M. Черников, Г.В. Глебова // Удостоверение на рационализаторское предложение № 153/6 05.03.1998. КГСХА.
23. Мосягин В.В. Устройство для определения скорости всасывания питательных веществ (патент) / В.В. Мосягин, Ю.В. Фурман, Н.И. Тригуб, Е.И. Битюков, E.H. Манжосов, Ю.В. Майданов // Российская Федерация. ПАТЕНТ на изобретение № 51337, заявка № 2005129472, 20.09.2005. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10.02.2006 г. 0публ.:10.02.2006, Бюл. № 4.
III. Учебные пособия
24. Мосягин В.В. Биохимия активного транспорта, метаболизма белка и энергии в организме птиц / В.В. Мосягин, Ю.В. Фурман, В.И. Максимов // Учебное пособие с грифом УМО.- Курск, ин-т социального образования (филиал) РГСУ. - Курск, 2009. -161с.
25. Мосягин В.В. Использование энтеросорбентов: опыт и практика / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман, А.Ф. Бурцев // Учебное пособие с грифом УМО. -Курск, ин-т социального образования (филиал) РГСУ. Курск, 2009.-61с.
IV. Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах конференций, съездов и других изданиях
26. Мосягин В.В. Влияние пептидного препарата на интенсивность роста и показатели белково-минерального обмена цыплят /В.В. Мосягин // Тезисы докладов научно-практической конференции. Курск, КСХИ, 1995.- С. 34-36.
27. Влияние скармливания янтарной кислоты и пептидного препарата цыплятам на аденозинтрифосфатазные активности мембранных структур эритроцитов /В.В. Мосягин // Тезисы докладов научно-практической конференции. Курск, КСХИ, 1995,- С.46-48.
28. Влияние различных концентраций ионов Ыа+ и К+ на активности АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят / В.В. Мосягин, С.И. Вишняков // Тезисы докладов научно-практической конференции. Курск, КСХИ, 1996,- С.52-53.
29. Мосягин В.В. Биохимические показатели крови цыплят сут возраста / В.В. Мосягин // Материалы научно-практической конференции Курской ГСХА «Пути повышения продуктивности, воспроизводительной способности, профилактика и лечение сельскохозяйственных животных», Курск, КГСХА, 2001.-С. 53.
30. Мосягин В.В. Исследование транспорта азотистых соединений / В.В. Мосягин, Ю.В. Фурман, А.Ф. Бурцев, О.И. Барымова, В.Н. Чмыхов // Сборник научных работ «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества». - Брянск, БГСХА, 2004. — С.229-233.
31. Мосягин В.В. Технология получения пептидной кормовой добавки из отходов кожевенного производства / В.В. Мосягин, Ю.В. Фурман // Материалы международной научно-практической конференции «Научные исследования, автоматика и динамика машин, инновационные и средозащит-ные технологии в техносфере». - Курск, КГСХА, 2007. - С57-62.
32. Мосягин В.В. Возрастная динамика АТФазной активности печени, миокарда и скелетных мышц цыплят-бройлеров / В.В. Мосягин // Материалы VIII международного симпозиума «Биологические механизмы старения». - Украина, Харьков, СПД ФЛ Тарасенко В.П. - 2008.
33. Мосягин В.В. Активность мембранных АТФаз энтероцитов / В.В. Мосягин, Ю.В.Фурман, С.Н. Чмыхов // Материалы Всеукраинской международной научной конференции «Актуальные проблемы современной биохимии и клеточной биологии». - Украина, Днепропетровск, изд. Днепропетровский Национальный Университет. - С. 86.
34. Мосягин В.В. Влияние возраста и кормовых добавок на продуктивность цыплят-бройлеров / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман // Сборник научных тезисов Международной научно-практической конференции,
посвященной 90-летию со дня основания кафедры физиологии ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. - М.: Капитал Принт, 2010 г. - С. 170-172.
35. Мосягин В.В. Возрастная динамика активности АТФаз и аминокислотный состав сердца / В.В. Мосягин // Тезисы Всероссийской научной конференции с международным участием «Теоретические основы физической культуры». - Казань, 2009. - С.90-92.
36. Мосягин В.В. Влияние возраста и физиологического состояния животных на активность ферментов клеток, тканей и органов / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман // Тезисы докладов XXI Съезда Физиологического общества им. И.П. Павлова. - М. - Калуга: Типография ООО «БЕСТ-принт», 2010. - С. 419-420.
37. Мосягин В.В. Возрастная динамика активности Mg2+-AT®a3bi цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кроссов «Бройлер-6» и «ISA» / В.В. Мосягин, В.И. Максимов, Ю.В. Фурман // Сборник докладов Международной научно-практической конференции «Современные проблемы и инновационные тенденции развития аграрной науки» (г.Якутск, 10 ноября 2010 г.). - Якутск: Изд-во Сфера, 2010. - С. 5758.
38. Мосягин В.В. Биологическая роль транспортных АТФазных ионных насосов в клетке / В.В. Мосягин // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы современной науки и социального образования». - Курск, 2011 . - С.160 164.
39. Мосягин В.В. Особенность АТФазных транспортных систем птиц / В.В. Мосягин // Материалы международной научно-практической конференци «Теоретические и прикладные проблемы современной науки и социальног образования». - Курск, 2011 . - С.164-167.
40. Разработка инновационных диагностических методик в области физиологи и биохимии животных как модельных объектов для медицины Промежуточный отчет «Выбор направления исследований и эта предварительных исследований по проблемам фармакоррекци физиологобиохимических параметров организма животных с помощь пробиотиков» /В.И. Максимов, С.Ю. Зайцев, Н.В. Данилевская, М.С Царькова, JI.A. Фролова и др.// ФГНУ «Центр информационных технологи" и систем органов исполнительной власти». Зарегистрировано государственном информационном фонде неопубликованных документов 2010.11.15. - per. № 01201056530.
Отпечатано с оригинал-макета в ООО «Мечта», 305007, г. Курск,,
1-й Моковский проезд, д. 5. Тел.: (4712) 74-00-63, 74-00-65. Заказ №71 от 11.04.2011. Тираж 100 экз.
Гарнитура: Times New Roman Формат 60/84 1/16. Печать офсетная Услю печ. Лист 2,0
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Мосягин, Владимир Владимирович
Общая характеристика работы.
Обзор данных литературы.
1. Физиолого-биохимическое значение ферментных систем клеток тканей и органов.
1.1. Роль транспортных ферментных систем, локализованных в мембранные структуры клеток тканей и органов организма животных
1.2. Механизмы транспорта питательных-веществ в кишечнике.
1.3. Транспортные АТФазы и их активность.
1.3.1. Характеристика К АТФазы.
1.2.2. Биологическая роль Са2+-АТФазы.
1.2.3. Значение и биологическая роль НСОз.-АТФазы.
1.3.4. Особенности функционирования АТФаз птиц.
1.3.5. Влияние различных факторов на транспортные процессы и активность АТФаз.
2. Собственные исследования.
2.1. Материалы и методы.
2.2. Результаты собственных исследований.
2.2.1. Транспорт веществ и АТФазная активность эритроцитов, тканей и органов птиц.
2.2.2. Активность АТФаз эритроцитов свиней.
2.2.3. Активность АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние возраста и физиологического состояния на активность ферментных систем клеток тканей и органов животных"
Актуальность работы. В настоящее время все более очевидной становиться важная и многообразная роль ферментных систем среди различных факторов, участвующих в регуляции и интеграции процессов развития и жизненных отправлений организма. На механизмах, основу которых составляют ферментные системы, базируется раскрытие в онтогенезе путей реализации наследственной информации, регуляции роста и развития, гомеостаза (Свечин К.Б, Аршавский И.А., Квасницкий А.В. и соавт., 1967; Никитин В.Н., 1975; Лысов В.Ф., 1977, 1996, 2004; Кузнецов А.И., 1986; Максимов В.И., 1999-2002, 2004, 2005; Максимов В.И. и др., 1999-2010; Рыжкова Г.Ф., 2005; Гудин В.А., 2006; Torronteras S.R.et al., 1993). В частности, характерные периоды более быстрого и замедленного роста и развития органов и орга-. низма в целом в определенной степени связаны с активностью ферментных систем.
Известно, что активность этих систем зависит от степени воздействия различных факторов внешней и внутренней среды клетки, таких как изменение рН, концентрации субстрата, химическая модификация молекул, наличие специфических активаторов и ингибиторов, изменения проницаемости мембран, скорости деградации молекул фермента, индукции и репрессии биосинтеза белка молекул ферментов и др. (Чернов Н.Н., 1996; Болдырев А.А., 1997). Степень влияния этих факторов во многом определяется экзогенными и эндогенными условиями существования, оказывающими воздействие на организм, к ним относят: возраст, физиологическое состояние (половое и физиологическое созревание, продуктивность и скорость роста), тип кормления, состояние гормонального фона, стресс, нарушения метаболизма и др. Таким образом, активность ферментов, играет ведущую роль в реализации механизмов биохимической адаптации, обеспечивающих существование организма в постоянно изменяющейся внешней (Лысов В.Ф., 1977; Мороз А.М., 1984; Маслова М.Н. и др., 1991; Решетов В.Б., 1998; Хаитов Р.И., 2000; Кармолиев Р.Х., 2002, 2005; Мавров И.И. и др., 2002; Силиванова Е.А., 2006; Кыров Д.Н., 2006 и др.; Харитонов E.JL, 2003, 2007; Максимов В.И., 2002, 2006, 2008; Михайлов В.В., 2008; Swann A.C., 1985 и др.).
Одним из основных свойств живой клетки является избирательный транспорт веществ и энергии в клетку из внешней среды, ведущую роль в которых играет активный транспорт, осуществляемый ферментными системами мембран (ионными насосами), интегральными компонентами которых являются АТФазы. АТФ-зависимые ионные насосы, представляющие комплекс ферментов, обеспечивают как первичный транспорт катионов (H1"' Na+' К+' Са2+) и анионов (СГ, НСОз") против их электрохимических градиентов, так и вторично-активный перенос через мембрану в клетку Сахаров, аминокислот, органических кислот, за счет энергии трансмембранного градиента концентрации ионов Na+. С работой АТФаз так же связана генерация биотоков, трансмембранного потенциала и передача нервного импульса, процессы сопряжения окислительного фосфорилирования. Накоплено большое количество сведений по изучению транспорта ионов и функционированию Mg2+-, Ca2+-, Na+,K+-, КГ-АТФаз (Кагава Я., 1985; Болдырев A.A. и др., 1985, 1998; Вишняков С.И., 1989; Skou J.C. et al., 1992; Скулачев В.П., 1989, 2001; Опри-тов В.А., 1996; Цвилиховский М.И., 1997; Владимиров Ю.А., 1998; Чизмад-жеев Ю.А., 2000, Лопина О.Д., 1997, 1999, 2001; Schiener-Bobis G., 2002; Jorgensen P.L. et al.,2003; Рубцов A.M., 2005 и др., Рыжкова Г.Ф., 2005).
Показатель активности АТФазных ионных насосов является очень чутким критерием оценки метаболического состояния организма. Для обеспечения процессов активного транспорта питательных веществ необходимы существенные затраты энергии, которые составляют до 40 % от суммарной энергии, поступившего корма. Существенное влияние на активность транспортных АТФаз оказывает обеспеченность животных белком различного качественного состава (Максимюк H.H., 1998; Фурман Ю.В., 2001).
Среди питательных веществ корма, влияющих на организм животных, ведущая роль принадлежит белку, он обеспечивает жизнедеятельность организма и способствует его росту. Роль белка особенно значима для организма птицы. В отличие от других животных птица нуждается в постоянном поступлении в организм большого количества полноценного белка. Более интенсивный обмен веществ в расчете на единицу массы тела птицы определяет и ее более высокую продуктивность. Известно, что 80 % протеина в рационах птицы приходится на долю растительных кормов, однако они имеют дефицит по ряду аминокислот и нуждаются в обогащении ими. Недостаток или избыток (имбаланс) аминокислот в рационе сопровождается нарушением обмена веществ, значительными потерями продуктивности, перерасходом кормов, снижением жизнеспособности организма, рентабельности производства в целом (Архипов A.B., 1984, 2007; Лемешева М., 2006).
Дальнейший прогресс птицеводства во многом зависит от использования новых ресурсосберегающих технологий, создания новых высокопродуктивных линий и кроссов птицы. Это в свою очередь связано с решением проблемы дефицита кормового протеина и аминокислот за счет расширения их производства и повышения эффективности их использования (Фисинин В., 2006, 2007, Гальперн И.Д., 2009, Ройтер Я., 2010.). Эту проблему в значительной степени можно решить за счет рационального использования отходов кожевенной промышленности. На предприятиях легкой промышленности их накапливается большое количество, они не только не используются, но и являются источником загрязнения окружающей среды. Производство белковых кормовых добавок из этих отходов является перспективным направлением рационального использования вторичных ресурсов (Фурман Ю.В., 2001; Бикташев Р.У., 1985).
Анализируя все вышесказанное, следует отметить, вместе с тем, что еще нет сведений об особенностях влияния возраста и физиологического состояния в конкретные фазы постнатального онтогенеза на активность ферментных систем клеток органов и тканей различных видов животных (Плященко С.И. и др., 1983, 1988; Онегов А.П. и др., 1984; Юрков В.М., 1988; Ярилин
A.A., 1989; Жаров A.B., 1998; Идрисов Г.З., 1998; Хаитов P.M., 2000; Кармо-лиев Р.Х., 2002, 2005; Галактионов В.Г., 2005; Mafayer J.R. et al., 1987).
В связи с этим вполне очевидна актуальность исследования активности транспортных АТФазных систем клеток тканей и органов в постнатальном онтогенезе у птиц, свиней и крупного рогатого скота в зависимости от возраста и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (кроссом), возрастом, кормлением и половым и физиологическим созреванием.
Цель работы - выявление особенностей становления физиолого-биохимических процессов и функций в организме разных видов животных (птиц, свиней и крупного рогатого скота) в постнатальном онтогенезе, связанных с активностью транспортных АТФазных ферментных систем их клеток тканей и органов в зависимости от их физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), половым и физиологическим созреванием, возрастом и кормлением.
Для достижения цели, были поставлены следующие задачи:
1. Установление видовых особенностей функционирования АТФазных ферментных систем клеток, тканей и органов птиц, свиней и крупного рогатого скота.
2. Выявление активности ферментных систем (АТФаз) в ядерных и ци-топлазматических мембранах эритроцитов цыплят-бройлеров, специфичности влияние ионов электролитов (Mg2+, Na+, К+) и ингибиторов (строфантин-К).
3. Исследование особенности функционирования ферментных систем (АТФаз) в ядерной и цитоплазматической мембранах эритроцитов цыплят бройлеров в зависимости от их физиологического состояния обусловленного генетическим потенциалом (кроссом), возрастом и скармливанием пептидной кормовой добавки из отходов кожевенного производства (ГЖД) и сукцината натрия.
4. Выявление активности транспортных АТФаз в клетках тканей и органов цыплят-бройлеров в зависимости от их физиологического состояния обусловленного их генетическим потенциалом (кроссом), возрастом и скармливанием ПКД.
5. Изучение активности транспортных АТФаз в эритроцитах свиней в зависимости от их физиологического состояния обусловленного половым и физиологическим созреванием, возрастом.
6. Исследование специфичности влияния ионов электролитов. (Иа+, К+) и ингибиторов (строфантин-О) на активность транспортных АТФаз в эритроцитах свиней.
7. Изучение активности транспортных АТФаз в эритроцитах крупного рогатого скота в зависимости от их физиологического состояния обусловленного половым и физиологическим созреванием, возрастом.
8. Исследование специфичности влияние ионов электролитов (ТЧа+, К+) и ингибиторов (строфантин-О) на активность транспортных АТФаз в эритроцитах крупного рогатого скота.
Научная новизна работы. Впервые установлена физиолого-биохимическая видовая особенность активности транспортных АТФазных ферментных систем клеток тканей, органов и субклеточных структур, которая имеет свое своеобразие у птиц, свиней и крупного рогатого скота в зависимости от возраста (фаз постнатального онтогенеза) и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), кормлением, половым и физиологическим созреванием, продуктивностью и скоростью роста.
В ядерных и цитоплазматических мембранах эритроцитов (т.е. субклеточных структурах) цыплят-бройлеров выявлены АТФазы, активируемые ионами Мё2+-, Ыа+, К+-, Са2+- и НСОз". АТФазы цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов цыплят-бройлеров имеющие существенные различия, проявляющиеся во влиянии на них ионов и К+. Так, ионы №+,К+ детерминируют АТФазную активность цитоплазматических мембран на 97%, f\ I ионы Ca - на 87% и НСОз" анион - на 96% с высокой степенью достоверности. Активность АТФазы ядер не зависела от наличия в среде инкубации ионов Na+,K+ и Са2+ (Р>0,05) и была детерминирована ионами НСОз" на 96% (Р<0,01).
У цыплят-бройлеров выявлена АТФазная активность и особенности функционирования в ядерных и цитоплазматических мембранах эритроцитов Mg2+-, Na+, К+-; Са2+- и НСОз"- АТФаз в зависимости от возраста и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (кроссом), кормлением. Так, с возрастом активность Mg24-, Na+, К+-, Са2+- и НС03~-АТФаз эритроцитов, клеток тканей и органов цыплят-бройлеров достоверно повышается. При этом детерминация активности ферментов возрастом более выражена у кросса «Бройлер-6», а кормовыми добавками у кросса «ISA».
У свиней и крупного рогатого выявлена функциональная активность. АТФаз эритроцитов в зависимости от возраста и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой у крупного рогатого скота), половым и физиологическим созреванием. Активность АТФаз эритроцитов свиней и крупного рогатого скота с возрастом достоверно понижается. Выявлены породные отличия активности АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота симментальской и черно-пестрой пород. На активность общей АТФазы порода оказывала влияние на 8,6%; активность Mg2+-АТФазы (уабаин нечувствительная компонента) не была детерминирована породой; активность Na+,K+-АТФазы (уабаин чувствительной компоненты) была определена породой на 15,7%. Выявлено, что №+-чувствительную АТ-Фазную компоненту эритроцитов крупного рогатого породные особенности животных детерминируют на 13,2%; на К+-чувствительную компоненту порода оказывает влияние на 4,2%. Установлены, породные отличия активности АТФаз эритроцитов крупного рогатого скота определяемые в средах различного ионного состава: у Mg2+-АТФазы - на 9,6%; №+,К+-АТФазы - на
04
2,6%, и НСОз'-АТФазы - на 3,2%; активность Са -АТФазы не имела достоверных породных отличий.
Теоретическая и практическая значимость работы. Выполненные исследования носят фундаментальный характер и содержат новые решения актуальной научной проблемы выяснения становления физиолого-биохимических механизмов функционирования АТФазных ферментных систем субклеточных органоидов, клеток, тканей и органов.
Установленные особенности физиолого-биохимических механизмов активного транспорта с участием АТФазных ионных насосов с возрастом, кормлением, физиологическим состоянием (половое и физиологическое созревание, продуктивность и скорость роста), породой (кроссом) необходимы для решения практических задач по созданию оптимальных условий эксплуатации животных, обеспечивающих полное проявление их генетических потенциальных возможностей.
Полученные данные открывают перспективу для дальнейших исследований по раскрытию молекулярных механизмов функционирования АТФазных транспортных систем в субклеточных структурах клеток органов и тканей, животных при изменении внешних и внутренних условий существования. Результаты работы предполагают целенаправленный поиск специфических препаратов, способных эффективно регулировать транспортные процессы. Проведенные биохимические исследования вносят несомненный вклад в решение фундаментальной проблемы регуляции активного транспорта веществ с участием АТФазных ионных насосов.
Положения, выносимые на защиту:
Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Мосягин, Владимир Владимирович
выводы
1. Вид животных (птицы, свиньи и крупный рогатый скот), в зависимости от возраста (фаз постнатального онтогенеза) и физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой, кроссом), кормлением, физиологическим созреванием, продуктивностью и скоростью роста, определяет своеобразие активности транспортных АТФазных ферментных систем клеток тканей, органов и субклеточных структур.,
1.1. У цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» активность АТФаз цитоплазматических мембран эритроцитов детерминирована возрастом: Mg^-АТФазы на 59,2-73,0%, Ыа+,К+-АТФаза на 62,1-95,6%, Са2+-АТФаза на 67,8-80,8% и НС03~-АТФаза на 87,6-95,6%. Активность ядерных АТФаз детерминирована возрастом на 90,0-67,1% - Mg^-АТФазы, 86,170,9% - Иа+,К+-АТФазы, 90,8-65,0% - Са2+-АТФазы и НС03"-АТФазы - на 29,1-44,8%.
1.2. У свиней активность и НС03"-АТФаз мембран эритроцитов зависит от возраста: наибольшее снижение для Na+,K+-, и НС03" -АТФаз эритроцитов. Активность Mg -АТФазы детерминирована возрастом на 71,2%, Na+,K+-АТФазы на - 73,5%, Са2+-АТФазы на - 69,7% и НС03'-АТФазы на - 73,6% (***).
1.3. С возрастом крупного рогатого скота активность Mg2+-, Na+,K+-, Са2+- и НСОз'-АТФаз эритроцитов достоверно снижается. Активность Mg2+-АТФазы детерминирована возрастом на 66,1%, Na+,K+-АТФазы на - 86,8%, Са2+-АТФазы на - 55,9% и НСОэ"-АТФазы на - 85,2% (***).
Динамика активности АТФаз у симментальской и черно-пестрой пород
9+ имеет определенные отличия. Активность Mg -АТФазы детерминирована породой на 9,6%, Na+,K+-АТФазы на - 2,6% и НСОэ"-АТФазы на - 3,2% (***) влияние породы на активность Са -АТФазы не установлено.
2. Активность АТФазных ферментных систем эритроцитов цыплят-бройлеров специфична по отношению концентраций ионов натрия, калия и магния. Так, наибольшее активирующее влияние на АТФазную активность проявляется при концентрациях ионов: натрия — 115-145, ионов калия — 1928, ионов магния - 2,0-4,0 ммолъ-мл'1. При этом активность АТФазы на 76,5% детерминирована ионами магния, на 96,5% ионами натрия и на 47,6% ионами калия. Максимальная АТФазная активность отмечалась в инкубационной среде, содержащей ионы: Na+ - 120 ммолъ-мл, К+ - 20 ммолъ-мл; Mg2+ - 3,0 ммолъ-мл и составляла 9,24±0,23 нмолъ Фн -мг белка1-мин1. На активность АТФазы не оказывает влияния специфический ингибитор — строфантин-К в диапазоне концентраций 0-100 ммоль-л"1 в среде содержащей ионы Na+ и К+, так и в среде без них.
3. АТФазы, локализованные в ядерных и цитоплазматических мембранах эритроцитов цыплят-бройлеров имеют определенные различия. Так, ионы Na+ и К+ детерминируют АТФазную активность цитоплазматических мембран на 97%, ионы
Са - на 87% и НСОч" анион - на 96% с высокой степенью достоверности. Активность АТФазы ядер не зависела от наличия в среде инкубации ионов Na , К и
Са2+ (Р>0,05) и была детерминирована ионами НС03" на 96% (Р<0,01).
4. Кормовые добавки (пептидная кормовая добавка и сукцинат) оказывают существенное влияние на активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров кросса «ISA»h «Бройлер-6», и таким образом на физиологические процессы, обеспечивающие скорость роста.
5. Различные ткани и органы цыплят-бройлеров своеобразны по уровню АТФазной активности. По уровню возрастания АТФазной активности они располагаются в следующий ряд: почки-»скелетные и сердечные мышцы—>печень. У цыплят кроссов «ISA» и «Бройлер-6» установлена сходная возрастная динамика активности фермента тканей и органов. С возрастом цыплят активность АТФазы увеличивается: наибольшие изменения отмечены в печени, сердце и мышечной ткани и в меньшей степени - в почках.
6. Динамика АТФазной активности тканей и органов цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» зависит от применяемых добавок (ПКД и сук-цинат) - наибольший рост активности АТФазы в печени, почках и мышцах цыплят, получавших ПКД и в сердечной мышце, получавших сукцинат; имеет кроссовые и возрастные отличия - детерминация возрастом более выражена у кросса «Бройлер-6», а кормовыми добавками у кросса «ISA».
7. Кормовые добавки (ПКД и сукцинат) оказывают стимулирующее влияние на физиологические процессы, обеспечивающие скорость роста. Наибольший прирост живой массы цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» отмечен в группах, получавших ПКД, а наименьший - в группе, получавшей сукцинат; скорость роста цыплят-бройлеров кросса «ISA» существенно выше у цыплят-бройлеров кросса «Бройлер-6».
8. Скорость роста цыплят-бройлеров кроссов «ISA» и «Бройлер-6» имеет достоверную сильную корреляционную связь с активностью АТФаз цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов.
9. На активность АТФазы эритроцитов свиней существенное влияние оказывает специфический ингибитор (строфантин-G), который детерминирует активность фермента на 87,34%. Активность АТФазы зависела от физиологического состояния, возраста - на 9,15%. При этом активность
I . | 24* 4" 4"
Mg ,Na ,К -АТФазы, Mg -АТФазы и Na ,К -АТФазы эритроцитов свиней с возрастом снижалась.
10. Максимальная активность АТФазы эритроцитов свиней отмечается при концентрации ионов калия - 15-20 ммоль-л"1 и концентрации ионов натрия - 130-150 ммоль-л"1. Ионы натрия детерминируют активность фермента на 52,0%, а ионы калия - на 45,8% (*).
11. Возраст крупного рогатого скота оказывает влияние на активность общей АТФазы эритроцитов на 56,1%, физиологическое состояние, обусловленное породой - на 8,6%. Активность М§ -АТФазы (уабаин нечувствительная компонента) детерминирована возрастом на 37,4%, при этом влияние породы выявлено не было. Активность Ка+,К+-АТФазы (уабаин чувствительной компоненты) определена возрастом на 19,3% и породой - на 15,7%.
12. У крупного рогатого скота активность АТФазы детерминирована на 90,5-92,5% строфантином-О (*). Ионы Ыа+ детерминировали АТФазную активность эритроцитов крупного рогатого скота на 72,2%, ионы К+ - на 79,7%. При этом породные особенности животных оказывали влияние на Иа+-чувствительную компоненту АТФазы на 13,2% и на К+-чувствительную компоненту - на 9,3% с высокой степенью достоверности.
13. Изучением скорости активного и пассивного переноса веществ, продуктов гидролиза ПКД через стеку кишечника установлено, что скорость переноса веществ на 71% (*) детерминирована временем опыта и на 27% (*) добавлением в раствор энергетических метаболитов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Рекомендуется широкое использование в бройлерном птицеводстве протеиновой кормовой добавки из отходов кожевенного производства для восполнения в растительных рационах дефицита кормового белка.
2. Установленные биохимические тесты (показатели активности транспортных АТФазных насосов) рекомендуется применять для оценки метаболического состояния, физиологических процессов и функций в организме цыплят-бройлеров, свиней и крупного рогатого скота симментальской и черно-пестрой пород в практической и научно-исследовательской работе.
3. Научные разработки и выводы работы рекомендуются к использованию при написании учебных пособий и методических указаний по физиологии, биохимии и кормлению сельскохозяйственных животных, по скотовод
219 ству, свиноводству и птицеводству для студентов вузов по агробиологическим специальностям.
4. Материалы диссертации внедрены в сельскохозяйственные предприятия разных типов и форм собственности Курской области, используются в учебном процессе в изучении курсов «Физиология» и «Биохимия», в ФГОУ ВПО «Курский институт социального образования (филиал) РГСУ», ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии».
Заключение
На современном этапе развития биологической науки, разработка и использование новых препаратов и способов лечения животных невозможна без детального изучения биохимических процессов, протекающих в организме разных видов животных в отдельные стадии постнатального онтогенеза, при различных физиологических состояниях в норме и патологии.
За последние десятилетия накоплен большой практический материал по энзимологии, проблемам клеточной проницаемости, ионного транспорта и его связи с метаболическими процессами в организме животных, ключевое место в которых отводится активному транспорту ионов при участии АТ-Фазных насосов и затрате химической энергии АТФ.
Транспортные аденозинтрифосфатазы являются связующим звеном в осуществлении строго скоординированных биохимических процессов протекающих в клетках и межклеточной среде организма животных. Поэтому их функциональная активность представляет собой важнейший критерий оценки метаболического состояния, как всего организма, так и отдельных его органов, тканей и клеток.
Для изучения особенностей функционирования АТФазных ионных насосов, встроенных в биомембраны различных клеточных органоидов, необходимо их выделение в достаточно чистом виде, что достигается различными методами, в частности дифференциальным центрифугированием.
Наиболее удобными и информативными клетками, в этом отношении, являются эритроциты. Являясь основными форменными элементами крови -ткани, связывающей организм в единое целое, они наиболее полно отражают состояние его метаболических процессов. Однако эритроциты птиц содержат ядра, что отличает их от красных кровяных клеток других видов животных и затрудняет изучение АТФазных насосов, интегрированных в их мембраны.
По своему строению и функционироанию цитоплазматические и ядерные мембраны мембраны имеют существенные различия, заключающиеся не только составе их билипидного слоя, но и в особенностях функционирования интегрированных в них белковых ансамблей, и в частности транспортных АТФаз.
АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов птиц, имеют особенности функционирования, отличающие их от аналогичных структур других видов животных. Так, ионы натрия в количестве 130 ммоль-мл"1 в значительной степени активизируют работу мембранных АТФаз, ионы калия оказывают меньшее влияние на активность фермента, вероятно, это связано с блокировкой или отсутствием влиянием калий - зависимого центра его регуляции.
Эти результаты подтверждались и в опытах по применению ингибитора АТФазы — уабаина, действующего преимущественно на калий-зависимый центр фермента. Применение ингибитора в концентрации от 2 до 100 ммоль не оказывало влияния на величину активности АТФазы эритроцитов птицы. Аналогичные результаты получены в исследованиях P.A. Степаняна и A.A. Симоняна (1981).
Для решения задачи по изучению особенностей функционирования АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров нами была разработана методика выделения этих мембран эритроцитов, основанная на 3х кратном замораживании-оттаивании в растворе сахарозы с последующим градиентным центрифугированием.
Установлено, что АТФазы цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов цыплят имеют существенные различия, которые проявляются в активирующем действии ионов Na+ и К+ на эти мембраны. Так, замена в среде инкубации ионов натрия на ионы калия практически не отражалась на активности АТФазы ядерной мембраны эритроцитов, коэффициент корреляции (гху) составил 0,328±0,357 с достоверностью (Р) > 0,05. В то время как аналогичная замена ионов в среде инкубации цитоплазматических мембран приводила к достоверному изменению их АТФазой активности Р<0,05. Коэффициент корреляции между АТФазной активностью цитоплазматических мембран эритроцитов и качественным составом среды инкубации составил (гху) 0,657±
0,285. Причем Na ,К - чувствительная компонента АТФаз этой мембраны, по данным дисперсионного анализа, составляет 24,2±4,49 % (Р<0,01) от общей АТФазной активности.
Это свидетельствуют о том, что в цитоплазматической мембране эритроцитов цыплят-бройлеров имеется АТФазная система, чувствительная к ионам Na+ и К+, которая отличается от классической Na+,K+- АТФазы, тем, что она не ингибируется уабаином (P.A. Степанян, 1983). Поэтому логично предположить, что эта ферментная система, по всей видимости, осуществляет №+,К+,2СГ-котранспорт. Наличие таких систем в цитоплазматических мембранах эритроцитов подтверждается работами Palfrey Н et al (1980); Колосовой И.А. и др. (1993).
В результате проведенных исследований установлено, что с возрастом происходит достоверное увеличение АТФазных активностей ядерных и цитоплазматических мембранных структур эритроцитов цыплят-бройлеров. Причем активности Na+,K+- и НСОз"- АТФаз цитоплазматических мембран повышаются к 40 суточному возрасту почти в 2 раза. Такая динамика функционирования АТФаз, по-видимому, связана с перестройкой клеточной мембраны эритроцитов в процессе их роста и созревания. Это подтверждается данными К.Г. Сухомлиной (1986) и Ю.В. Фурмана (1991), которые, в частности, установили повышение АТФазной активности гомогенатов эритроцитов с возрастом. Однако активность аниончувствительной АТФазы ядерных мембран эритроцитов к 40 суточному возрасту наоборот несколько снижается, что, очевидно, связано с угасанием метаболических процессов при созревании эритроцитов. Это подтверждается работами J. Brody, К. Engel (1964); И.А. Болотникова и Ю.В. Соловьева (1980), установившими, что по мере созревания эритроцитов уменьшается активность дегидрогеназ.
Проведенный комплекс биохимических, зоотехнических и ветеринарных исследований позволил установить, что скармливание в рационах цыплят-бройлеров янтарной кислоты и протеиновой кормовой добавки оказывает существенное влияние на течение энергетического и пластического обменов в их организме.
Показано, что включение в рационы цыплят-бройлеров протеиновой кормовой добавки из отходов кожевенного производства в количестве 3% от массы комбикорма стимулирует белково-минеральный обмен, активность АТФаз и, как следствие, повышает прирост живой массы на 7-8 %.
В настоящих исследованиях установлено, что показатели активности | | | | | |
-, № ,К -, М£ ,Са - и НСОз"- АТФаз цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов цыплят повышаются при скармливании им протеиновой кормовой добавки. Причем по мере роста и созревания эритроцитов наблюдается перераспределение влияний ПКД на эти ионные насосы. Так, если в 10 суточном возрасте цыплят отмечено активирующее действие препарата
1 1 о-}- г. 11 в нмолъ Ф„ •мг белка •мин ) на Mg"№ ,К - и Мё%Са^- АТФазы соответственно на 0,79; 0,23 и 0,54 по сравнению с контролем, то к 40 дню наибольшее влияние протеиновая добавка начила оказывать на М£2+-, Ыа+,К+- и НСОз"- АТФазы. Причем активности Ка+,К+- и НСОз"- АТФаз повышаются по сравнению с контролем на 3,17 и 2,49 нмолъ Ф„ -мг белка'1 -мин1 соответ
У | ственнно, а активность М^ - АТФазы по сравнению с ним снижается на 1,36 нмолъ Ф„ -мг белка'1 -мин 1. Это подтверждается исследованиями других авторов, изучавших влияние уровня протеина корма на АТФазные активности (С. 8расЬ, А.А. АБсЫсепазу, 1971; А.А. БЬютаеу, ЗЬ.Э.ТагЫЬаеу, 1979), так, в частности, К.Г. Сухомлин и др. (1986) установлено повышение АТФазной активности органов и тканей цыплят-бройлеров при увеличении уровня переваримого протеина в рационе.
Как было показано выше, активирующее действие протеиновой кормовой добавки на различные транспортные АТФазы не одинаково и зависит от возраста и химического состава препарата.
Так, влияние ПКД на №+,К+- АТФазу цитоплазматических мембран эритроцитов главным образом зависит от содержания в ней хрома (Р. Наг1тШ: et al.5 1980; С.И. Вишняков, 1986; Г.Ф. Рыжкова, 1988), который в малых количествах оказывает стимулирующее действие на этот ионный насос.
Большое содержание кальция (до 9 %) обуславливает увеличение активности Mg2+,Ca2+- АТФазы как цитоплазматических, так и ядерных мембран эритроцитов цыплят-бройлеров. Кроме того, по данным С.Н. Орлова и 1 др. (1987), L. Mazzanti et al.(1992), ионы Са способны оказывать влияние на другие АТФазы, в частности на Na+,K+- и анионную. В зависимости от дозы его действие может проявляться активированием этой АТФазы или ее инги-бированием, что очевидно и имеет место в отношении Mg2+- АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят 40 суточного возраста.
Включение в основной рацион цыплят-бройлеров сукцината в дозе 25 мг-кг"1 живого веса по схеме: 4 дня скакрмливание препарата, 3 дня перерыв и тд. приводит к увеличению активности НСОз'- стимулируемой АТФазы ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов цьгалят 10 и 40 суточного возраста. Однако если в 10 суточном возрасте это стимулирование составляет в среднем 16-18 %, то к 40 суткам оно заметно снижается до 3-4 %, что связано с переходом энергообеспечения эритроцитов птиц при их созревании к анаэробному гликолизу (J. Brody, К. engel, 1964). А так как НСОз"-АТФаза, по данным А.Т. Иващенко и С.Т. Рыскуловой (1975); А.Т. Иващенко (1978); А.Т. Иващенко и И.А. Бушневой (1981); К.Р. Утеулина и А.Т. Иващенко (1982); А.А. Болдырева (1985), по всей видимости, является сходной по функции и строению с БрАТФазой митохондрий (Fi-фактор Рэкера), осуществляющей транспорт протонов и сопряжение процессов окисления и фосфорилирования (согласно гипотезе П. Митчела). В связи с этим увеличение активности НСОз"-АТФазы при скармливание сукцината является следствием стимуляции энергетического обмена, в частности, цикла лимонной кислоты, что подтверждается рядом авторов. Так В.В. Дынник, Р. Хайнрих и Е.Е. Сельков (1980) предложили математическую модель углеводного энергетического обмена, описывающую взаимодействие гликолиза, цикла Кребса (ди- и трикарбоновых кислот) и транспортных АТФаз. В исследованиях
Ю.Г. Каминского и др. (1986) показано увеличение у подопытных животных количества ресинтезированного АТФ на 30% при введении им сукцината аммония.
На основании этого можно сделать заключение, что применение янтарной кислоты приводит к увеличению уровня энергетического обмена в организме цыплят-бройлеров, отражающегося на приросте активности НС03"-АТФазы.
Кроме того, нами отмечено, что скармливание сукцината цыплятам приводит к снижению активностей М^;2+- и М^2+,Са2+- АТФаз цитоплазмати-ческих мембран эритроцитов цыплят как в 10-, так и в 40 суточном возрасте в среднем на 6—10 % по сравнению с контролем. Это объясняется, по всей видимости, тем, что янтарная кислота подобно щавелевой и лимонной способна
О 1 О 111 образовывать устойчивые комплексы с ионами Са и М^ , делая их физиологически не активными. Так, в частности В.К. Бауман (1968) отмечает, что внутривенное введение курам 1 мл 10% раствора лимонной кислоты приво дит к немедленной смерти вследствие связывания находящегося в кровяном русле ионизированного кальция, причем общее количество кальция в сыворотке крови при этом остается постоянным. Это подтверждается результатами настоящих исследований. Так, нами не выявлено достоверной разницы в содержании общего кальция сыворотки крови цыплят опытных групп, получавших сукцинат и контроля, где этот показатель составил от 1,54±0,02 до 2,19±0,06.
При совместном применении пептидного препарата и сукцината отмечено увеличение активностей всех АТФаз как цитоплазматических, так и ядерных мембран эритроцитов у цыплят 10 и 40 суточного возраста в среднем на 6-10% по сравнению с контролем. Это объясняется стимулированием белково-минерального и энергетического обменов в их организме, что приводит к увеличению приростов живой массы цыплят-бройлеров в среднем на 6%.
С этим связано и неодинаковое действие протеинового препарата и сукцината на активность АТФазных систем ядерных и цитоплазматических мембранных структур эритроцитов цыплят. Так, основное стимулирующее действие протеиновая кормовая добавка оказывает на Mg2+-, Na+,K+- и 2 j 2|.
Mg ,Са - АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят, с чем связано активированием транспорта аминокислот и кальция через плазматические мембраны. Активность Mg -АТФазы этих мембран, по данным L. Mircevova, М. Kodicek (1981); S.L. Schrier et al. (1981); G.S. Gordon et al. (1981), прямо связана с эластичностью и сократимостью эритроцитов, обеспечивая эти процессы энергией.
Действие сукцината сопровождается увеличением активности НС03"-АТФаз цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов.
Применение препаратов не вызывает существенного изменения биохимических показателей крови, характеризующих белково-минеральный обмен. Так,нами не отмечено достоверной (Р>0,05) разницы в содержание общего кальция, фосфора и белка в сыворотке крови цыплят опытных групп по сравнению с контролем, количество которых в среднем составляло 1,54±0,02 ммоль-л1, 0,97±0,03 ммолъ-л'1 и 3,98±0,06% соответственно. Однако с возрастом наблюдается незначительное увеличение этих показателей. Сходные данные получены Лукичевой В.А. (1994) на рационах с различными добавками.
Скармливание сукцината цыплятам-бройлерам, на ряду со стимулированием энергетического обмена, оказывает влияние на белковый и минеральный обмены, что, по-видимому, связано со снижением активности Na+,K+-АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят 10 суточного возраста, вследствие уменьшения транспорта аминокислот и биосинтеза белка. Это подтверждается тем, что в сыворотке крови цыплят опытных групп, получавших сукцинат достоверно ниже уровень альбуминовой фракции, соответственно на 12,2% Совместное применение протеиновой кормовой добавки (опытная группа N 2) частично компенсирует это снижение. К 40 суточному возрасту достоверных различий по этому показателю по группам опыта не наблюдается, а активность Ыа+,К+- АТФазы цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят опытных групп, получавших сукцинат, была выше контроля. Это объясняется участием этого насоса во вторично активном транспорте аниона янтарной кислоты через эритроцитарную мембрану. В частности, I. Ъътахщъ, В.Т. Нш1оп (1982) считают, что транспорт анионных аминокислот является Ыа+- зависимым и требует большого числа этих катионов для нейтрализации второй анионной (карбоксильной) группы у молекул аспарагиновой и глутаминовой аминокислот. Применение протеиновой кормовой добавки в рационах цыплят-бройлеров не вызывает существенного изменения в количественном и качественном составе белков крови. Однако, содержание общего белка в сыворотке крови цыплят опытных групп, получавших ПКД, было несколько выше этого показателя в контроле.
Применение сукцината оказывает существенное влияние на иммунную систему организма цыплят-бройлеров, что выражается в достоверном увеличении содержания у-глобулинов в сыворотке крови.
Анализ полученных данных показал, что применение сукцината усиливает энергетический обмен в организме цыплят-бройлеров, вследствие чего происходит снижение пластических процессов и прироста живой массы в среднем на 5-6 % по сравнению с контролем. В то время как скармливание протеиновой кормовой добавки, наоборот усиливает процессы анаболизма белка, отражающийся в увеличении привесов.
В проведенных нами исследованиях показано, что АТФазная активность в органах и тканях цыплят-бройлеров в процессе выращивания с суточного до 40-дневного возраста постепенно увеличивалась. Наибольший рост удельной активности отмечен в почках цыплят, несколько меньший наблюдали в печени, а минимальный в сердечной мышце.
Замена мясокостной муки протеиновой кормовой добавкой приводила к увеличению удельной АТФазной активности в эритроцитах, печени и почках цыплят. Аналогичные результаты получены в опытах на цыплятахбройлерах, при скармливании им белкового препарата гаприна (К.Г. Сухо млина и др. 1986). По данным С. Spaph; A. Aschkenasy (1971); A.A. Shomaev et al. (1979); И.А. Бушневой, А.Т. Ивашенко (1981); R.J. Movre, М. Trojanova (1981) и других, при протеиновой недостаточности, вследствие распада мембранных белков, значительно снижается активность АТФазы в органах и тканях животных, особенно в печени. Использование полученной нами протеиновой кормовой добавки из отходов кожевенного производства оказывало стимулирующее влияние на активность АТФазы эритроцитов, печени, почек, скелетной мышцы и миокарда, что согласуется с данными, полученными в опытах на свиньях и птице (С.И. Вишняков, 1988; H.A. Миненков, 1991; Рыжкова Г.Ф., 2005).
Свиньи, как известно, относятся по типу обменв к уротелическим животным. В связи с этим, биохимические процессы, происходящие в их организме имеют существенные отличия от птиц, в том числе касающиеся и механизмов активного транспорта, связанного с функционированием АТФаз-ных ионных насосов.
В наших исследованиях установлено, что содержания мембранного белка в тенях эритроцитов свиней с возрастом не имело достоверных отличий (Р>0,05) и составляло в 24 мес — 1,27±0,03; в 12 мес 1,26±0,03; в 6 мес -1,26±0,03 и в 2 мес - 1,27±0,03.
На активность АТФазы эритроцитов свиней существенное влияние оказывал специфический ингибитор Na+,K+-АТФазы — уабаин (строфантин-G). Так, было установлено, что активность АТФазы детерминирована на 9,15% возрастом и на 87,34% строфантином-G. При этом активность ]\/^2+,На+,К+-АТФазы, Mg2+-АТФазы и Na+,K+-АТФазы эритроцитов свиней с возрастом достоверно снижалась.
Максимальная активность фермента отмечается при концентрации калия - 15-20 ммоль-л"1 и концентрации натрия - 130-150 ммоль-л"1. Причем, активность АТФазы была детерминирована ионами натрия на 52,0% и ионами калия на 45,8% с высокой степенью достоверности (Р<0,05), что согласуется с данными литературы (С.И. Вишняков, 1988; Н.А. Миненков, 1991; Рыжкова Г.Ф., 2005).
С целью сравнения особенностей функционирования АТФаз цитоплаз-матических мембран эритроцитов свиней с аналогичными показателями у птиц было проведено определение активности АТФаз эритроцитов свиней в средах различного ионного состава (Иващенко А.Т. и др., 1981). В результате было установлено, что активность АТФазы достоверно зависит от наличия в среде инкубации ионов и НС03". Так, что активность
Ыа+,К+-АТФазы была детерминирована составом среды на 61,9%, НС03"-АТФазы на - 76,5% с высокой степенью достоверности (Р<0,001) в то время как внесение в среду инкубации ионов
Са2+ не отражалось на активности
АТФазы (Р>0,05).
По активности изучаемые ферменты можно расположить в следующей возрастающей последовательности: НСОз'-АТФаза, Ыа+,К+-АТФаза, Са2+
Л I
АТФаза и М^ -АТФаза. Следует отметить, что аналогичное распределение было установлено и у птиц. При этом, с возрастом было установлено снижение активности данных ферментов, особенное значительное для Ыа+,К1-, и НСОз'-АТФаз эритроцитов, что вероятно связано со снижением метаболических процессов в этих клетках, происходящее с возрастом. Так, активность
АТФазы была детерминирована возрастом на 71,2%, №+,К+-АТФазы на - 73,5%, Са2+-АТФазы на - 69,7% и НС03"-АТФазы на - 73,6% с высокой степенью достоверности (Р<0,001).
Крупный рогататый скот по анатомо-физиологическим особенностям пищеварительной системы отличается от птиц и свиней, что оказывает существенное влияние на процессы метаболизма и активность ферментных систем. С целью изучения влияния возраста и породных особенностей крупного рогатого скота на содержание мембранного белка в эритроцитах был проведен двухфакторный дисперсионный анализ, который показал, что возраст детерминирует этот показатель на 8,8%, и порода - на 2,6% с высокой степенью достоверности (Р<0,001), совместное влияние факторов выявлено не было.
Это храктеризует незначительные породные отличия в содержании мембранного белка эритроцитов.
Для выявления влияния возраста и породных особенностей на активность М£2+,Ка+,К+- (общей), М£2+- (уабаин нечувствительной компоненты) и Ма+,К+-АТФазы (уабаин чувствительной компоненты) эритроцитов крупного рогатого скота был проведен двухфакторный дисперсионный анализ (табл.30), показавший, что на активность общей АТФазы возраст оказывал
04влияние на 56,1%, порода на 8,6%. Активность М£ -АТФазы (уабаин нечувствительная компонента) была детерминирована возрастом на 37,4%, при этом влияние породы выявлено не было. Активность Ыа+,К+-АТФазы (уабаин чувствительной компоненты) была определена возрастом на 19,3% и породой на 15,7%.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Мосягин, Владимир Владимирович, Москва
1. A.c. RU 51337 Ul, МПК, А 61 D 7/00 (2006.01). Устройство для определения скорости всасывания питательных веществ Text. / B.B. Мосягин [и др.]. патент на полезную модель; заявка 3 2005129472; зарегистр. 10.02.2006.
2. Айзман, Р.И. Формирование в онтогенезе ионодепонирующей функции тканей патологии Текст. / Р.И Айзман, JI.K. Великанова //Журнал эволюции, биохимии и физиологии. — 1978. — Вып. 14. С. 547-552.
3. Акимова, O.A. Выявление белков, взаимодействующих с Ыа,К-АТРазой Text. / O.A. Акимова, Н.В. Долгова, Н.В. Мает, A.M. Рубцов, О.Д. Ло-пина // Биохимия. 2003. - Т. 68, вып. 9. - С. 1271-1279.
4. Активность некоторых ферментов энергетического обмена у птицы при разных белковых добавках к рациону Текст. / К.Г. Сухомлина [и др.] // Сборник научных трудов ТСХА. М.: ТСХА, 1986. - С. 111-114.
5. Антонов, В.Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран Текст. / В.Ф. Антонов. -М.: Наука, 1982. 151 с.
6. Архипов, A.B. Протеиновое и аминокислотное питание птицы Текст. / A.B. Архипов, Л.В. Топорова. М.: Колос, 1984. - 247 с.
7. Архипов, A.B. Липидное питание, продуктивность птицы и качество продуктов птицеводства Text. / A.B. Архипов. М.: Агробизнесцентр. -2007.-440 с.
8. Аскари, А. Регуляция Na-Hacoca липопротеидами: механизм и физиологическое значение Text. / А. Аскари // Биологические науки. 1990. -№6. -С.7-15.04
9. Барьерно-транспортные и структурные свойства мембран эритроцитов при псориазе Текст. / И.И. Мавров [и др.] // Дерматологія та венерологія. 2002.-№ 2 (16). - С. 15-19.
10. Батоцыренова, Е.Г. Влияние эндогенных и экзогенных модификаторов на активность Na+,K+-АТФазы Электронный ресурс.: дис. . канд. биол. наук: 03.00.04. СПб., 2005 (Из фондов Российской государственной библиотеки). - Полный текст: http//diss.rsl.ru.
11. Берсимбаев, Р.И. Регуляция активности НСО'з-стимулируемой адено-зинтрифосфатазы в слизистой желудка крыс и лягушек Текст. / Р.И. Берсимбаев, С.М. Шайхин // IV Всесоюзный биохимический съезд : тезисы. М., 1979. - Т.2. - С.23-24.
12. Биофизика мембран Текст. — М., 1969. 263 с.
13. Биохимия активного транспорта ионов и транспортные АТФазы Текст. / A.A. Болдырев [и др.]. М.: МГУ, 1985. - 203 с.
14. Болдырев, A.A. Na/K-АТРаза как олигомерный ансамбль / A.A. Болды-рев//Биохимия.-2001.-Т. 66, вып. 8.-С. 1013-1025.
15. Болдырев, A.A. Na/K-АТФаза — свойства и биологическая роль Текст. / A.A. Болдырев // Соросовский образовательный журнал. — 1998. — №4. — С.2-9.
16. Болдырев, A.A. Na,K-ATOa3a солевых желез утки Текст. / A.A. Болдырев, О.Д. Лопина, И.А. Свинухова // Биохимия. 1981. — Т. 46, вып. 8. -С. 24-29.
17. Болдырев, A.A. Ыа+,К+-АТФаза как олигомерная система Текст. / A.A. Болдырев // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. — Биол. химия. - 1982. -С. 75-146.
18. Болдырев, A.A. Биологические мембраны и транспорт ионов Текст. / A.A. Болдырев. М. : Изд-во МГУ, 1985.- 167 с.
19. Болдырев, A.A. Как регулируется активность мембранных ферментов Текст. / A.A. Болдырев, В.Д. Прокопьева // Биологические науки. — 1985.-№9.-С. 5-13.
20. Болдырев, A.A. Новые подходы к исследованию жизни и смерти нейро-нальной клетки Текст. / A.A. Болдырев, О.М. Юнева // Соросовский образовательный журнал. 2004. - Т.8, № 2. - С. 7-14.
21. Болдырев, A.A. Регуляция активности мембранных ферментов Текст. / A.A. Болдырев // Соросовский образовательный журнал. 1997. - № 6. -С. 21-27.
22. Болдырев, A.A. Роль структуры субстрата в функционировании Na+,K+ -АТФазы Текст. /A.A. Болдырев, О.Д. Лопина, И.А. Свинухова // Биохимия. 1989. - Т.54, вып. 9. - С. 895-908.
23. Болдырев, A.A. Современное состояние проблемы транспортных АТ-Фаз и транспортные аденозинтрифосфатазы Текст. / A.A. Болдырев. -М.: Изд-во МГУ, 1977. 115 с.
24. Болдырев, A.A. Функциональная активность Na+,K+ -АТФазы тканей в норме и при патологиях Текст. / A.A. Болдырев // Украинский биохимический журнал. — 1992. — Т.64, № 5. — С.3-10.
25. Болдырев, A.A. Является ли Na+,K+ -АТФаза мишенью окислительного стресса? Текст. / A.A. Болдырев, Е.Р. Булыгина, Г.Г. Крамаренко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1996. — № 3. — С. 275-278.
26. Болотников, И.А. Гематология птиц Текст. / И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев. Л. : Наука, 1980. - 116с.
27. Броун, И.И. Ca : третий сопрягающий ион? Текст. /И.И. Броун // Биохимия. -1994. Т.59, вып. 12. - С. 1779-1783.
28. Булычев, А.Г. Лизосомные ферменты и активность естественных киллеров Текст. / А.Г. Булычев, Т.В. Блинова // Цитология. — 1991. — Т.ЗЗ, № 2. С. 76-79.
29. Бурков, И.А.Структурные основы функционирования транспортных систем Текст. / И.А. Бурков, А.Ф. Кисилев //Новые методы и модификация в биохимических исследованиях в животноводстве. — М.: Колос, 1970.-С. 174-182.
30. Варфоломеев, С.Д. Биокенетика Текст. / С.Д. Варфоломеев, К.Г. Гу-ревич. М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999. - 720 с.
31. Великанова, Л.К. Резервные возможности функции почек и водно — солевого гомеостаза Текст. / Л.К. Великанова, Р.И., Айзман Н.П. Аба-скалова. Новосибирск: НГПУ, 1997. - 128с.
32. Вишняков, С.И. Активность Na+,K+ -АТФазы и распределения электролитов в тканях овец с эритроцитами LK- генотипа Текст. / С.И. Вишняков. М., 1984. - 39с. - Деп. в ВНИИ, № 200-84.
33. Вишняков, С.И. Межклеточный обмен в организме животных Текст. / С.И. Вишняков. М.: Агропромиздат, 1988. - 158 с.
34. Владимиров, Ю.А. Кальциевые насосы живой клетки Текст. / Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал. — 1998. — №3. — С. 20-27.
35. Влияние карнозина на активность Na,K-ATOa3bi: перспективы применения в клинической кардиологии Текст. / Г.В. Симония [и др.] // Биохимия. 1992. - Т. 57, вып. 9. - С. 45-48.
36. Влияние пероксида водорода и гипохлорита на активность Na,K-АТФазы мозга Текст. / A.A. Болдырев [и др.] // Биохимия. 1995. - Т. 60, вып. 10.-С. 1688-1695.
37. Войнова, Р. Транспорт свободных и соединенных пептидной связью аминокислот в тонкой кишке цыплят Текст. / Р. Войнова, Я. Профиров // Животноводческие науки. 1997. - № 5-6. - С. 72-75.
38. Галактионов, В.Г. Эволюционная иммунология / В.Г. Галактионов. -М.: ИКЦ,2005. 407 с.
39. Гальперн, И.Л. Методы ускоренного повышения генетического потенциала продуктивных признаков промышленных кроссов кур Текст. / И.Л. Гальперн // Достижения науки и техники АПК 2009. - №7. - С. 50-54.
40. Геннис, Р.Б. Биомембраны: Молекулярная структура и функции Текст. / Р.Б. Геннис. М.: Мир, 1997. - 624 с.
41. Георгиевский, В.И. Минеральное питание животных Текст. / В.И. Георгиевский, Б.Н. Анненков, В.Т.Самохин. М.: Колос, 1979. - 471 с.
42. Дерффель, К. Статистика в аналитической химии Текст. / К. Дерф-фель. М.: Мир, 1994. - 268 с.
43. Диксон, М. / Ферменты // М. Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982.- Т.1 -392 с.
44. Долапчиева, С.Д. Экспрессия изоформ а и ß субъединиц Na+ К+-АТФазы в моторных нейронах спинного мозга крысы Текст. / С.Д. Долапчиева // Биологические мембраны. 1988. — Т15, № 3 - С.286-289.
45. Досон, Р. Справочник биохимика Текст. / Р. Досон, Д. Элиот, У. Эллиот. — М.: Мир, 1991.-565 с.
46. Ерин, А.Н. Свободнорадикальные механизмы при церебральных патологиях Текст. / А.Н Ерин., Н.В. Гуляева, Е.В. Никушкин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1994. - № 10. - С. 343-348.
47. Ерюхин, И.А. Воспаление как общепатологическая реакция Текст. / H.A. Ерюхин, В.Я Белый, В.К. Вагнер. JI. : Наука, 1989. - 262 с.
48. Жегунов, Г.Ф. Возможный механизм регуляции АТФазной активности плазматических мембран миоцитов сердца Текст. / Г.Ф. Жегунов, В.В. Рязанцев // Физиологический журнал СССР. 1991. - Т.77, № 3. -С.130-133.
49. Зайцев, С.Ю. Супрамолекулярные ферментные системы крови собак в клинической диагностике / С.Ю. Зайцев, В.И. Максимов, Т.В. Бардюко-ва // Вестн. Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. 2008. - Т.49. №2. - С. 122-126.
50. Иванова, В.Т. Путь к синтезу белка Текст. / В.Т.Иванова, А.Н. Шами-на. JL: Химия, 1982 - 176 с.
51. Иващенко, А.Т. Аниончувствительная аденозинтрифосфатаза мембран эритроцитов крысы Текст. /А.Т. Иващенко // Биохимия. 1978. - Т. 43, №6.-С. 1086-1089.
52. Иващенко, А.Т. Выделение и свойства аниончувствительной аденозин-трифосфатазы из мембран эритроцитов Текст. / А.Т. Иващенко, И.А. Бушнева // Биохимия. 1981. - Т.45, № 3. - С. 486-488.
53. Иващенко, А.Т. Исследование аденозинтрифосфатазной активности ядер клеток печени и тимуса крысы Текст. / А.Т. Иващенко // Биохимия. 1978. - Т.43, № 11. - С. 2064-2068.
54. Иващенко, А.Т. Исследование аниончувствитеольной аденозинтрифос-фатазы митохондрий печени и почек крысы Текст. / А.Т. Иващенко //Известия АН. КазССР. Сер. Биология. 1978. - №1. - С. 31-35.
55. Иващенко, А.Т. Механизм влияния анионов на активность аденозин-трифосфатаз Текст. / А.Т. Иващенко // Научые доклады высшей школы биологических наук. 1981. - №7. - С. 5-15.
56. Иващенко, А.Т. НСО"3- стимулируемая АТФаза гомогенатов тканей крысы Текст. / А.Т. Иващенко, A.A. Жубанова, Б.С. Балмуханов // Биохимия. 1975. - Т.40, №5. - С. 1091-1093.
57. Иващенко, А.Т. Стимулируемая бикарбонатом АТФаза мембран эритроцитов крысы Текст. / А.Т Иващенко, С.Т. Рыскулова // Вопросы медицинской химии. 1975. - Вып. 5. — С. 492-494.
58. Идрисов, Г.З. Проблемы повышения качества подготовки зооветспе-циалистов / Г.З. Идрисов // Материалы Международной научной конференции посвященной 125-летию академии. Казань, 1998. — Т1. — С. 3-8.
59. Изоферменты Na+ К+-АТФазы серого вещества и ствола мозга теленка Текст. / Н.М. Владимирова [и др.] // Биологические мембраны. — 1998. Т.15, №3. - С. 349-352.гу .
60. Исследование АТФазной и АТФ-зависимой активности Ca ядрами скелетных мышц. Эффекты денервации и электрической стимуляции Текст. / О.Г. Куликова [и др.] // Биохимия. 1982. - Т.47, вып.7. -С.1216-1221.
61. Кагава, Я. Биомембраны Текст. / Я. Кагава. -М. : Высш. школа, 1985. 303 с.
62. Казеннов, A.M. Исследование активности Ыа,К-АТФазы в эритроцитах млекопитающих / А.М.Казеннов, М.Н.Маслова, А.Д. Шалабодов //Биохимия. -1984. Т.49, ВЫП.7. - С. 1089-1095.
63. Кальницкий Б.Д. Итоги и перспективы исследований в области биологии сельскохозяйственных животных / Б.Д. Кальницкий, В.В. Калашников // Проблемы биологии продуктивных животных. -2007. — №1. С.6-12.
64. Капелько, В.И. Нарушение энергообразования в клетках сердечной мышцы: причины и следствия Текст. / В.И. Капелько // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т.6, №5. - С.14-20.
65. Капля, А.А.Влияние фосфолипазы А2 из яда Naja Naja Oxiana на активность изоферментов ^^К^-Атфазы мозга крысы Текст. / A.A. Капля, В.В. Кравцова, A.B. Кравцов // Биохимия. 1996. - Вып. 6. - С. 9981005.
66. Капля, A.A. Инактивация №+К+-АТР-азы мозга крыс додецилсульфатом натрия: влияние pH, ионов магния, температуры / A.A. Капля, A.B.
67. Кравцов // Украинский биохимический журнал. 1997. - Т. 69, №4.-С. 38.
68. Капля, A.A. Физиологическая и адаптационная значимость изофермен-тов №+К+-АТРазы/ A.A. Канля // Украинский биохимический журнал. -1998.-Т. 70,№3.-С. 3-11.
69. Кармолиев, Р.Х. Биохимические процессы при свободнорадикальном окислении и антиоксидантной активности. Профилактика окислительного стресса у животных // Р.Х. Кармолиев // Сельскохозяйственная биология,- 2002.- №2.- С.19-28.
70. Кармолиев, Р.Х. Свободнорадикальная патология в этиопатогенезе болезней животных / Р.Х. Кармолиев //Ветеринария.- 2005.- №4.- С.42-47.
71. Клинико-диасгностическое значение определения осмотической и кислотной резистентности эритроцитов у больных геммарогической лихорадкой с почечным синдромом Текст. / Э.И. Низамова [и др.] // Здравоохранение Башкортостана. 1997. — №1-2. — С. 30-34.
72. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Текст. / И.П. Кондрахин [и др.]. М.: Агропромиздат, 1985. - 287 с.
73. Колб, В.Г. Интерпретация некоторых энзимологических показателей при заболеваниях внутренних органов Текст. / В.Г. Колб, Е.Т. Зубовская // Здравоохранение Белоруссии. 1976. - № 9. - С. 62-66.
74. Колосова, И.А. Роль GTP-связывающих белков в регуляции Na+/Hb -обмена и Na+,K+,2Cl"-KOTpaHcnopTa: действие фторид иона Текст. / И.А. Колосова, Й. Бернхард, С.Н. Орлов, Ф.Р. Бюллер // Биохимия, 1993. т. 58, с. 456.
75. Комаров, Ф.И. Биохимические исследования в клинике Текст. / Ф.И. Комаров, Б.Ф. Коровкин, В.В. Меньшиков. — Л., 1981. 408 с.
76. Кондрашова, М.Н. Метод определения неорганического фосфата по спектрам поглощения молибдатных комплексов в ультрафиолете
77. Текст. / М.Н. Кондрашова, М.Н Лесогорова, С.Э. Шноль // Биохимия. 1965. - Т.ЗО, вып.З. - С. 567-562.
78. Корниш-Боуден, Э. Основы математики для биохимиков Текст. /Э. Корниш-Боуден. М.: Мир, 1983. - 144 с.
79. Кривой, И.И. Роль К каналов и Na К -АТФазы в гиперполяризации мембраны скелетных мышечных волокон, вызываемой ацетилхолином Текст. / И.И. Кривой, Е.В. Лопатина, В.В. Кравцова // Биологические мембраны-2001. — Т.18, №1. — С.10-15.
80. Кравцов, A.B. Регуляция Na+ К+-АТР-азы: эффекты ионов Mg и Ca / A.B. Кравцов, В.В. Кравцова // Украинский биохимический журнал. -2001.-Т. 73,М2.-С. 5-27.
81. Кубасов, И.В. Роль Na+/K+-АТФазы в пресинаптическом последействии экзогенного ацетилхолина в диафрагме крысы Текст. / И.В. Кубасов,230
82. И.И. Кривой, Е.В. Лопатина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицинбы. — 1997. Т.123, №5. — С. 531-534.ромышленной технологии. — Казань, 1986.- С.66.
83. Кушак, Р.И. Всасывание аминокислот Текст. / Р.И.Кушак // Физиоло -гия всасывания. — Л. : Наука, 1977. С. 123-126.
84. Кыров, Д.Н. Исследование модулирующих эффектов гемолизата эритроцитов на активность №,К-АТФазы Текст. : автореф. дис. . канд. биолог, наук / Д.Н. Кыров. Тюмень, 2006. — 234 с.
85. Левитин, Е.В. Структурно — функциональное нарушение клеточных мембран при эпилепсии у детей и методы их коррекции Текст. / Е.В. Левитин. Тюмень, 1989. — 127 с.
86. Лемешева, М. Аминокислотное питание птицы Текст. / М. Лемешева // Животноводство России. 2006. - № 11. - С. 25-27.
87. Лисон, С. Кормление племенных петухов Текст. / С. Лисон // Птицеводство. 1997. - № 2. - С. 38-40.
88. Лопина, О.Д. Физиология протонной помпы Текст. / О.Д. Лопина // Российский журнал гастроэнтологии, гепатологии, колопроктологии. -1997.- №5.-С. 91-96.
89. Лопина, О.Д. Взаимодействие каталитической субъединицы К+-АТФазы с клеточными белками и другими эндогенными регуляторами Текст. / О.Д. Лопина // Биохимия. 2001. - Т. 66, № 10. - С. 13891400.
90. Лопина, О.Д. Na ,JC -АТФаза: структура, механизм и регуляция активности Текст. /О.Д. Лопина // Биологические мембраны. 1999. — Т. 16, №6.-С. 584-603.
91. Лукичева, В.А. Обмен белков сыворотки крови цыплят-бройлеров на рационе с различными добавками Текст. / В.А. Лукичева // Вопросы ветеринарной биологии: Сб.науч.тр. MBA.- М.: МВА, 1994.- с. 36-39.
92. Лупашко, Н.И. Окислительные процессы у эмбрионов и цыплят при скармливании курам сульфата натрия Текст. / Н.И. Лупашко, Г.А. Кар-ташов // Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных. -Харьков, 1978. С. 43^5.
93. Лысов, В.Ф. Физиология молодняка сельскохозяйственных животных / В.Ф. Лысов. Казань, 1977. - 62 с.
94. Лысов, В.Ф. Физиологические аспекты профилактики и лечения нарушений структурно-физиологической упорядоченности тканей, органов организма животных / В.Ф.Лысов // Труды первого съезда ветеринарных врачей Республики Татарстан. Казань, 1996 .- С 204-209.
95. Лысов, В.Ф. Основы физиологии и этологии животных / В.Ф. Лысов, Т.В. Иполитова, В.И. Максимов, Н.С. Шевелев. -М.: Колос, 2004. 586с.
96. Лысов, В.Ф. Физиологии и этологии животных / В.Ф. Лысов, В.И. Максимов. М.: Колос, 2004. 255с.
97. Макарова, Н. В. Статистика в Excel / Макарова Н. В., Трофимец В. Я. // Учеб. пособие. — М.: Финансы и статистика, 2002. 368 с.
98. Максимов, В.И. Становление гормонального статуса тканей органов свиней в постнатальном онтогенезе Текст. / В.И. Максимов // Доклады РАСХН, 2002.- № 4. С.42-45.
99. Максимов, В.И. Становление гормонального статуса тканей и органов у свиней в постнатальном онтогенезе / В.И. Максимов // Свиноводство.-1999.-№4.- С. 17-21.
100. Максимюк, H.H. Белковые гидролизаты для цыплят-бройлеров Текст. / H.H. Максимюк // Зоотехния. 1998. - №8. - С. 23.
101. Медведева, И.А. Активность Ка,К-АТфазы эритроцитов при иммобили-зационном стрессе у крыс с различной двигательной активностью / И.А. Медведева, М.Н. Маслова // Физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 1993. - Т.79, №10. - С 17-22.
102. Мембранные липиды как переносчики информации Текст. / Е.Б. Бур-лакова [и др.] // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. -М. : Наука, 1982. С. 74-78.
103. Мензиков, С.А. АТР-зависимый сопряженный с ГАМКА-рецепторами СГнасос нейрональных мембран Текст. : автореф. дис. . док. биол. наук / С.А. Мензиков. М., 2007. - 48 с.
104. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники Текст. / Г.А. Меркулов. М. : Медгиз, 1961. - 340 с.
105. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник / Под ред. проф. И.П. Кондрахина. М.: КолосС, 2004. 520 с.
106. Мороз, A.M. Активность Na+, К+ АТФазы в эритроцитах после воздействия лазерного излучения Текст. / A.M. Мороз. // Украинский биохимический журнал. — 1984. - Т.55, № 6. - С. 674-676.
107. Мосс, Д. Ферменты Текст. / Д. Мосс. М.: Мир, 1970. - 127с.
108. Мхеян, Э.Э. Активность микросомальных транспортных АТФаз и содержание фосфолипидов в ткани при паратиреопривной тетании Текст.: автореф дис. канд. биол. наук / Э.Э. Мхеян. Ереван, 1990. -23 с.
109. Ыа+/ЕГ-противотранспорт и кальциевый обмен в клетках периферической крови здоровых лиц и больных с хронической сердечной недостаточностью Текст. /А.Б.Гаджиев [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1994. - №12. - С. 572-575.
110. Никитин, В.И. эндокринная ситуация врзраста / В.И. Никитин // XII съезд Всесоюзного физиологического общества им И.О. Павлова. Тбилиси 1975. - Л.:Наука, 1975. - Т.1. - С. 249-250.
111. Новые данные об элементарных грибовидных частицах ядерных мембран Текст. / И.Б. Збарский [и др.] // Цитология. 1973. - Т.15, №12. -С. 1453-1457.
112. Нок, Т. Транспотные системы и усвояемость питательных веществ Текст. / Т. Нок // Химико- фармацевтический журнал. 1973. - Т.8, №10.-С. 15-18.
113. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных Текст. / под ред. А.П. Калашникова, Н.И. Клейменова. — М. : Агропромиздат, 1985.-352 с.
114. О влиянии дигитонина на активность Na,K- АТФазы из мозга быка Текст. / Щеглова М.В. [и др.] // Биохимия. 1981. - Т. 46, вып. 1. — С. 62-69.
115. Онегов, А.П. Справочник по гигиене сельскохозяйственных животных /
116. A.П.Онегов, Ю.И.Дударев, М.А.Хабибулов. — М.: Россельхозиздат, 1984. 436 с.
117. Опритов, В.А. Электричество в жизни животных и растений Текст. /
118. B.А. Опритов // Соросовский образовательный журнал. -1996. №96.1. C. 40-46.
119. Орлов, С.Н. Транспорт калия, анионов и активность Na+-Hacoca мембраны эритроцитов: три различных механизма регуляции внутриклеточным кальцием Текст. / С.Н.Орлов, Н.И Покудин., Ю.В. Котелевцев // Биохимия. 1987. - Т.52, вып.8. - С. 1373-1386.
120. Павлов, К.В. Электрогенный транспорт ионов Ка+,К+-АТФазой Текст. / К.В. Павлов, В.С.Соколов // Биологические мембраны. — 1999. Т. 16, №6. - С. 604-637.
121. Панюшкина, Е.А. Эндогенный Са2+"-зависимый ингибитор Na+,K+-АТРазы эритроцитов изменяет чувствительность фермента к уабаину, калию и фурасемиду / Е.А. Панюшкина, В.В. Петруняка // Биологические мембраны. 1994. - Т . 11, №1. - С.7-11.
122. Петров, A.M. Методические рекомендации по изучению резистентности телят-трансплантантов и ее коррекция / A.M. Петров, Е.С. Воронин, М.М. Серых. — Россельхозакадемия, 1995.- 53 с.
123. Петров, A.M. Динамика основных иммунологическихпараметров телят-трансплантантов / A.M. Петров, .С. Воронин. М.: MB А им.К.И. Скрябина, 1999. 186 с.
124. Платонова, Р.Д. Активация ацетилхолином натриевого насоса в мышце лягушки Текст. / Р.Д. Платонова, М.А Посконова, И.М. Родионов //Физиологический журнал СССР им. И.М. Сеченова. 1986. - №7. - С. 921-925.
125. Плященко, С.И. Естественная резистентность организма животных при различных типах кормления и условиях содержания / С.И. Плященко,В.Т. Сидоров // Ветеринармя. 1983.№8. - С. 21-23.
126. Плященко, С.И. Влияние экологическихфакторов на бактериальную об-семененность воздуха и заболеваемость оросят-отъемышей /С.И. Плященко, И.А. Хохлова, JI.C. Кутузов // Ветеринария. 1988.- №5. - С. 1820.
127. Повреждение мембран саркоплазматического ретикулума при перекис-ном окислении и его роль в развитии мышечных патологий Текст. / Каган В.Е. [ и др.] // Биофизика мембран. М. : Наука, 1981. - С.88-95.
128. Пойнов, Ю.В. О мемебранной концепии первичной артериальной ги-пертензии: К развитию представлений и природе гипертонической болезни Текст. / Ю.В. Пойнов // Кардиология. 1985. - №10. - С. 63-71.
129. Пойнов, Ю.В. Первичная артериальная гипертензия как патология клеточных мембран Текст. / Ю.В. Пойнов, С.Н. Орлова. М.: Медицина, 1987. -192 с.
130. Покровский, A.A. Биохимические методы исследования в клинике Текст. / A.A. Покровский. — М. : Медицина, 1969. — 652с.
131. Роль аминопептидазы щеточной каймы тонкого кишечника свиньи в транспорте дипептидов / М.И. Зильберман и др. // Макромолекулы в функционирующей клетке : четвертый симпозиум СССР -Италия. — Киев, 1983.-С. 227-232.
132. Ройтер, Я. Роль генофонда в создании новых пород и кроссов Текст. / Я. Ройтер // Животноводство России.- 2010. №1.- С. 19-20.
133. Рубцов, A.M. Са-АТРаза саркоплазматического ретикулума: молекулярная организация, механизм функционирования и особенности регуляции активности Текст. / A.M. Рубцов // Успехи биологической химии. 2005. - Т.45. - С. 235-268.
134. Рыжкова Г. Ф. Активность транспортных АТФаз и межклеточный обмен электролитов у сельскохозяйственных животных в норме и при включении в рацион биологически активных веществ : Дис. . д-ра биол. наук : 03.00.04 Курск, 2005, 333 с. РГБ ОД, 71:06-3/123
135. Рыжкова, Г.Ф. Активность транспортных ферментных систем в тканях куриных эмбрионов в динамике / Г.Ф. Рыжкова, А.Б. Ревина // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. 2010. -№3. - С. 47-51.
136. Рэкер, Э. Биоэнергетические механизмы: новые взгляды Текст. / Э. Рэ-кер. -М.: Мир, 1979.-216 с.
137. Свечин, К.Б. Возрастная физиология животных / К.Б. Свечин, И.А. Ар-шавский, A.B. Квасницкий и др. — М.: Колос, 1967. 431 с.
138. Симонян, Г.А. Ветеринарная гематология / Г.А. Симонян, Ф.Ф. Хиса-мутдинов. -М.: Колос, 1995. 256 с.
139. Скорость №+/Ьі+-противотранспорта эритроцитов и артериальная гипертония: данные одномоментного популяционного исследования Текст. / А.Н. Бритов [и др.] // Кардиология. 1991. - №8. - С. 54-58.
140. Скулачев, В.П. Биоэнергетика. Мембранные преобразователи энергии Текст. / В.П. Скулачев . М. : Высш. шк, 1989. - 283 с.
141. Скулачев, В.П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии, клетки и органы: роль активных форм кислорода Текст. / В.П. Скулачев // Соросовский образовательный журнал. — 2001. — Т. 7, №6. С.4-10.
142. Соколова, М.М. Роль тканевых депо и калийуретического действия аль-достерона в гомеостазе калия Текст. / М.М. Соколова // Физиологический журнал СССР. 1981 - 67(3). - С. 448-453.
143. Степанян, P.A. АТФазная активность плазматических мембран печеночной ткани кур в онтогенезе Текст. / Р.А.Степанян, A.A. Симонян // Биологический журнал Армении. 1983. - Т.36, N 10. - С. 830-834.
144. Сторожок С.А. Молекулярная структура мембран эритроцитов и их механические свойства / С.А. Сторожок, А.Г. Санников, Ю.М. Захаров.-Тюмень: Изд-во ТюмГУ, 1997. 140с.
145. Супрунов, О.В. Физиологическое обоснование нормирования протеина и аминокислот для птиц Текст. / О.В. Супрунов, О.В. Федорченков // Биосфера и человек: региональная науч.-практ. конф. — Майкоп, 1997. — С. 99-101.
146. Тапильская, Н.И. Эндогенные дигиталисоподобные ингибиторы Na/K-АТФазы — новый класс гормонов с широким спектром функций Текст. / Н.И. Тапильская, И. А Егорова, А .Я. Багров // Цитокины и воспаление. -2006.- Т. 5, №3. С. 3-9.
147. Тодоров, И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии Текст. / И. Тодоров. София, 1968. - 106 с.
148. Томмэ, М.Ф. Переваримость кормов Текст. / М.Ф. Томмэ, Р.В. Мар-тыненко, A.B. Неринг. -М.: Колос, 1970. 463 с.
149. Умарова, Ф.Т. Влияние сердечных гликозидов на внутримолекулярную динамику №+,К+-АТфазы / Ф.Т. Умарова, О.В. Белоногова, Г.И. Лихтенштейн//Биологические мембраны. 1995. - Т. 12, № 1. - С. 39-49.
150. Утеулин, K.P. Особенности действия анионов на АТФазу митохондрий Текст. / K.P. Утеулин, А.Т.Иващенко // Биохимия. 1982. — Т.47, вып. 10. - С. 1641-1644.
151. Фисинин, В. Промышленное птицеводство: стратегия развития Текст. / В. Фисинин // АгроРынок. 2006. - №4. - С.6-10.
152. Фисинин, В. И. Птицеводство дало мяса больше чем две отрасли вместе взятые Текст. / В.И. Фисинин // Животноводство России. 2007. - №2. -С. 2-4.
153. Фисинин, В.И. Вступительное слово академика РАСХН В.И. Фисинина Текст. / В.И. Фисинин // Проблемы биологии продуктивных животных.-2007.-№1.-С. 3-5.
154. Фролькис, В.В. Инвенторный механизм гормональной регуляции Na+ К+-АТФазы Текст. / В.В. Фролькис, А.Л. Кобзарь, О.В. Соколова //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1996. — Т. 122, №7.-С. 9-11.
155. Федорова, О.В. Эндогенные дигиталиснодобные ингибиторы Na+ К+-АТФазы в патогенезе солечувствительной артериальной гипертензии / О.В. Федорова, А.Я. Багров // Артериальная гипертензия. 2005. - Т. 11, № 2. - С.27-32.
156. Фурман, Ю.В. Технологические основы производства кормовых добавок и биопрепаратов, физиологические аспекты их применения в животноводстве Текст. : дисс. на соискание ученой степени док. биол. наук /Ю.В. Фурман. -М., 2001.-321 с.
157. Хаитов, P.M. Физиология иммунной системы / P.M. Хаитов// Российский физиологический журнал.- 2000. Т.86. - №3. - С. 252-268.
158. Цвилиховский, М.И. Активность Na, К+-АТФазы, Са2+, Mg2+ АТФазы и1. Ol
159. Mg -АТФазы в плазматической мембране эпителия тонкого кишечника животных различного возраста Текст. / М.И. Цвилиховский // Доклад Нациальной АН Украины. 1997. - №9. - С. 169-170.
160. Чернов, H.H. Ферменты в клетке и пробирке Текст. / H.H. Чернов // Соросовский образовательный журнал. 1996. - №5. - С. 28-34.
161. Чизмаджев, Ю.А. Мембранная биология: от липидных бислоев до молекулярных машин // Соросовский образовательный журнал. 2000. -№8.-С. 12-17.
162. Чурин, Б.В. Колебания активности Щелочной фосфатз и содержания фосфора в крови здоровых и больных язвенной болезнью Текст. / Б.В. Чурин, Т.Г. Цирельникова, В.А. Жуков // Клиническая лабораторная диагостика. 1995. — № 1.-С. 12-13.
163. Шевченко, A.C. Об особенностях влияния ионов кальция на активность Mg2+ зависимой АТФазы в тенях и реконструированных эритроцитах Текст. / A.C. Шевченко, С.Н. Орлов // Биохимия. 1977. - Т.42, вып.5. - С. 906-909.
164. Шеховцова, Т.Н. Ферменты: их использование в химическом анализе / Т.Н. Шеховцова // Соросовский образовательный журнал. 2000. -Т.6, №1.-С.44-48.
165. Шкорбатов, Ю.Г. Биоэлектрические свойства клеточных ядер Текст. / Ю.Г. Шкорбатов, В.Г. Шахбазов // Успехи современной биологии. —1992. — Т. 112, вып. 4. — С. 499-501.
166. Шкорбатов, Ю.Г. О роли нуклеиновых кислот и других биополимеров в образовании электрического заряда клеточного ядра Текст. / Ю.Г. Шкорбатов, В.Г. Шахбазов // Молекулярная генетика и биофизика. — 1982.-N7.-С. 35-38.
167. Эггум, Б. Косвенное определение адекватности протеина Текст. / Б. Эггум // Белковый обмен и питание. М.: Колос, 1980. - С. 172-180.
168. Юрков, В.М. Резистентность организма и продуктивность молдняка свиней при различных режимах освещения Текст. / Юрков В.М. // Ветеринария.- 1988.- №2.- С.28-30.
169. Ярилин, А.А. Гуморальный контроль процессов пролиферации, диффе-ренцировки и гибели клеток тимуса. Двойственный эффект сигналов: Онтогенез, эволюция, биосфера / А.А. Ярилин. -М.: 1989. 123 с.
170. A putative Н* К+ -ATPase is selectively expressed in surface epithelial cells of distal colon. Text. / F. Jaisser [et al.] //Amer. j. physiol. Cel. Physiol.1993. — V.256, № 34. — P. 1080-1089.
171. Adibi, S.A. Na,K-pump in the liposoms Text. / S.A. Adibi // Biochim. et Biophys. Acta. 1979. - V. 467, № 3. - P. 340-345.
172. Amelsvoort, J. Is there a plasma membrane —located anion-sensitive ATPase? Text. / J. Amelsvoort, J. Port, S. L. Bonting // Biochem. biophys. Acta. 1977. - V.466, №2. -P. 283-301.
173. Bagrov A. Endogenous plasma Na,K-ATPase inhibitory activity and digoxin like immunoreactivity after acute myocardial infarction / A. Bagrov,
174. O.V.Fedorova, M.N. Maslova, N.T. Roukoyatkin, M.V. Ukhanova, E.P. Zhabro // Cardiovasc.Res.-1991.-V.25, №5.-P.371-377.
175. Bader, H. Comparison of sources of a phosphorylated intermediate in transport ATPase / H.Bader, R.Post, G.Bond // Biochim.et biophys. acta .-1968.-15.-N l.-p.41-46.
176. Balzan S. Selective inhibition of human erythrocyte Na+/K+-ATPase by cardiac glycosides and by a mammalian digitalis like factor / S. Balzan, G. D'Urso, S. Ghione, A. Martinelli, U. Montali // Life Sciences. 2000. - № 67. -P. 1921-1928.
177. Barnett, R. Mechanism of the effects of lipid phase stransition on the Na+I<+-ATPase and the role of protein conformational changes Text. / R. Barnett// Prop, and funct. ofNa+K+- ATPase: int. congr. -N.Y., 1973. -P.561-568.
178. Bennett V. Spectrin and Ankyrin-Based Pathways: Metazoan Inventions for Integrating Cells Into Tissues /V. Bennett, A J. Baines/ZPhysiol. Rev. 2001. - V.81,Nb3.-P. 1353-1392.
179. Beron J. Aldosterone modulates sodium kinetics of Na, K-ATPase containing an subunit in A6 kidney cell epithelia/ J. Beron, L. Mastroberardino, A. Spillmann, and F.Verrey // Mol. Biol. Cell 1995. - V.6. - P.261-271.
180. Bertorello A.M. Phosphorylation of the catalytic a subunit of Na+, K+-ATPase inhibits the activity of the enzyme/ A.M. Bertorello, A. Aperia, S.I. Walaas, A.C. Nairn, P. Greengard // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. -V.88.-P. 11359-11362.
181. Bertorello A. M. Short-term regulation of renal Na-K-ATPase activity: physiological relevance and cellular mechanisms/A. M. Bertorello, A. I. Katz //Am. J. Physiol. 1993. — V.265, № 6 (Pt2). - P.743-755.
182. Blanco G. Isozymes of the Na, K-ATPase: heterogeneity in structure, diversity in function / G. Blanco and R.W. Mercer // Am. J. Physiol. Renal Physiol. 1998. - V.275. - F633-F650.
183. Blaustein M.P. Endogenous ouabain: role in the pathogenesis of hypertension / M.P. Blaustein // Kidney Int. 1996. - V.49. - P. 1748-1753.
184. Blot-Chabaud M. Role of protein phosphatase in the regulation of Na+-K+-ATPase by vasopressin in the cortical collecting duct/ M. Blot-Chabaud, N. Coutry, M. Laplace, J. Bonvalet, and N.Farman// J. Membr. Biol. 1996. -V.I53. - P.233-239.
185. Borin M.L. Roles of PKA and PKC in regulation of Na+ pump activity in vascular smooth muscle cells / M.L. Borin // Ann. NY Acad. Sci. 1997. -V.834. — P.576-578.
186. Bruck R. Vanadyl ions stimulate K+ uptake into isolated perfused rat liver via the Na+/K+-pump by a tyrosine kinase-dependent mechanism/ R. Bruck, Z. Halpem, H. Aeed, Y. Shechter, SJ.D. Karlish //. Pflagers. Arch. -1998. -V.435. P.610-616.
187. Buckalew V.M. Summary of a symposium on natriuretic and digitalis-like factors / V.M. Buckalew, H.C. Gonick // Clin, and Exper. Hypertension. -1998. V.20, № 5-6.-P. 481-488.
188. Bulygina E. Activation of glutamate receptors inhibits Na+,K+-ATPase of cerebellum granule cells / E. Bulygina // Biochemistry. 2002. - Vol. 67. -P.1209-1214.
189. Cheng S.X.J. Ca2+.i determines the effects of protein kinases A and C on activity of rat renal Na+,K+-ATPase / S.X.J. Cheng, 0. Aizman, A.C. Nairn, P. Greengard, A. Aperia // The Journal of Physiology. 1999. - V.518, №1. - P. 37-46.
190. Campos, M. Effect of magnesium and ATP on pre-steady-state phosphorylation kinetics of the Na+K+- ATPase Text. / M.Campos, L. Beuge // Biochim. biophis. acta, biomembranes. 1992. - V.l 105, №1. - P.51-60.
191. Chauveau, J. Text. / J. Chauveau, Y. Mouley, C. J. Rouiller //Gell Biol. -1962.-№ 12.- P. 17.
192. Chen P.S. Microdetermination of phosphorus / P.S. Chen, T.Y. Toribara, H. Warner // Analyt. Chem. -1957. V.28. - P.1756-1758.
193. Christensen , N.N. Role of membranes in secretory proceses Text. / N.N. Christensen // London, 1972. - P. 433-447.
194. Claussen, T. Regulation of active Na+K+- transport in skeletal muscle Text. / T. Claussen // Phisiol. rev. 1986. - V.66. - P. 542-580.
195. Clausen T. The Na+, K+ pump in skeletal muscle: quantification, regulation and functional significance/ T. Clausen// Acta Physiol. Scand. 1996. -V.I56. -P. 227-235.
196. Comparison of the ATP binding in the active sites of (Na"1C+)- ATPase, Mg2+- ATPase and Ca2+- ATPase with low affinity to calcium from cardiac sarcolemma Text. / R. Monosikova [et al.] //Bratisl. lek. listy. 1991. -V.92, №3-4.-P. 142-145.
197. Comparison of the ATP binding in the active sites of (Na+K+)- ATPase, Mg ATPase and Ca - ATPase with low affinity to calcium from cardiac sarcolemma Text. / R. Monosikova [et al.] //Bratisl. lek. listy. - 1991. -V.92, №3-4.-P. 142-145.
198. Cooper, P.H. Characterization of calciumion activated adenosinetriphospho-tase in the plasma membrane of rat mast cells Text. / P.H. Cooper, D.R. Stanworth//Biochem. j. 1976. -V. 156, № 3. - P. 691-700.
199. Cox, M. Potassium homeostasis Text. / M. Cox // The medical clinics of North America. 1981. - V.65, № 2. - P. 363-384.
200. Daniel, V.G. Intestinal amino acid tdansfer in the pig (sus scafa) Text. / V.G. Daniel // Comp. Biochem. Physiol. -1972. № 42a. - P. 689-695.
201. Danielli, J.F. Contribution to the theory of permeability of thin films Text. / J.F. Danielli, H.A. Davson //J. cell. comp, physiol. 1934. - V.5. - P.495-508.
202. Davis-Karlan, S.R. «Genome-wide analysis of iron-dependent growth releals a novel yeast gene required for vacuolar acidification» / S.R. Davis-Karlan, D.M. Ward, S.L. Shiflett, J.Karlan.- J.Biol.Chem.,Vol.279, N 6, 2004.-pp.4322-4329.
203. Detailed structural Analysis of exposed Domains of membrane -bound Na+K+- ATPase Text. / Y.A Ovchinnikov. [et al.] //FEBS LETT. 1987. -V.217, № 2.-P. 269-274.
204. Doris P.A. Ouabain in plasma from spontaneously hypertensive rats / P.A.
205. Doris // Am. J. Physiology. 1994. - V.266, № 1, part 2. - P. H360-H364.i
206. Effect of acetylsalicylic acid on liver plasma membraine Ca ATPase activity Text. / B.Omer [et al.] // Pharmacol, and pharm. - 1990. - V.42, №5. -P. 441-446.
207. Effect of calcium on Na+,K+-ATPase isolated from human placenta Text. / L. Mazzanti [et al.] //Biochem. int. 1992. - V.27, № 5. - P. 847-852.
208. Endogenous dititalis — like factors in hypertension and chronic renal insufficiency Text. / A.K. Ralph [et al.] //Kidney int. 1986. - V.30. - P. 723729.
209. Enyedi, A. On the substrate specificity of the red cell calcium pump Text. / A. Enyedi, B.Sarkadi, G. Gardos //Biochim. et biophis. acta. 1982. -V.687, №1. -P.109-112.
210. Erythrocyte membraines catalyze a novel glucosedenendent enzymatic gly1. A Icosylation that inhibits plasma membraine Ca -ATPase activity Text. / R.S. Safeer [et al.] // FASEB Jounal. 1990. - N 7. - P. 2209.
211. Fedorova O.V. Marinobufogenin an endogenous a-1-sodium pump ligand in hypertensive Dahl salf-sensitive rats /O.V. Fedorova, N.I. Kolodkin, N.I.Agalakova // Hypertension. 2001. - V.37. - P. 462-466.
212. Fairbanks G. Electrophoretic analisis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane / G. Fairbanks, T. L. Steck, D. K.H. Wallach// Biochemistry,- 1971. —V.I 0,№ 13. —P.2606-2617.
213. Favre H. Receptor-assay for endogenous inhibitors of a Na-K ATPase/ H. Favre, G. Siegenthaler, B. Martin, D. Roth, G. Granger, F. Louis // Klin. Wochenschr. 1987. - V. 65 (Suppl VIII). - P.49-52.
214. Fincham, D. A. Characterization of a novel variant of amino acid transport system asc in erythrocytes from Przewalski horse Text. / D. A. Fincham, J. C. Ellory, J. D. Young // Can.J.Physiol.and Pharmacol. 1992. - N 8. - P. 1117-1127.
215. Flemming C Functional Modulation of the Sodium Pump: The Regulatory Proteins «Fixit» / Flemming C and Yasser A. Mahmmoud // News in Physiological Sciences.-2003.-Vol. 18, № 3. P. 119-124.
216. Forgae, M. K+ independent active transport of Na+ by the (Na+and K+) -stimulated adenosine triphosphatase Text. / M. Forgae, G. Chin //Biol, chem. - 1981. - V.256, № 8. - P. 3645-3646.
217. Forte, J.G. Isolation of plasma membranes from Erlich Ascites tumor cells. Influence of amino acid on (TSTa^-HBC^-ATPase and K+-stimulated phosphatase Text. / J.G.Forte, T.M Forte, E. Heinz //Biochem. biophys. acta. 1973. -V.298, №4. - P. 827-841.
218. Gastric HCO"3- stimulated A. 1 lJase. Evidence against its microsomal localtization in rat founds mucosa. Text. / A. Soumarmon [et al.] //Biochem. biophys. acta. 1974. - V.339, № 3. — P. 403-414.
219. Goldman, S.Cold resistance of the brain during hiberation Na+,K+ -activated ATPase Text. / S. Goldman, J. Wills //Crybiology. 1973. - V.10. -P.218-224.
220. Goodman S. R. Brain spectrin: of mice and men / S. R. Goodman, W. E. Zimmer, M. B. Clark, I. S. Zagon, J. E. Barker, M. L. Bloom // Brain. Res. Bull. 1995. - V.36, N2 6. - P.593-606.
221. Goto A. Purification of endogenous digitalis-like factors from normal human urin / A. Goto, K. Yamada // Clin, and Exper. Hypertension. 1998. - V. 20, № 5-6.-P. 551-556.
222. Gunther, T. Effect of salts on the activity and inhibition of E. Coli membrane ATPase by etherynic acid and. inhibitors Text. / T. Gunther, W.Dellnitz, G. Marriss // Z Naturfor. 1974. — "V.292, № 1-2. - P. 54-59.
223. Haas M. Involvement of Src and epidermal growth factor receptor in the signal-transducing function of Na+/KL+-ATPase Text. / M. Haas, A. Askari, Z. Xie // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 27832-27837.
224. Harris, W.E. Origin of the y polypeptide of the Na+K+ATPase Text. / W.E. Harris, W.H. Sthal // Biochem. biophys. acta. 1988. - V.942, № 2. - P.236-244.
225. Hasler U. Structural and functional features of the transmembrane domain of the Na,K-ATPase p subunit revealed by tryptophan scanning / U.Hasler,G.Crambert, J.D.Horisberger, K.Geering// J. Biol. Chem. 2001. -V.276. - P.16356-16364.
226. Helose — specific inhibition in vitro of human red cell Ca2+- ATPase activ-ityText. / M.R. Deriel [et al] //Biochim. et biofhys. Acta biomembranes. -1992. V.110, № l.-P.l 19-122.
227. Hypertension and sodium transport in 390 healthy adults in Chicago Text. / V. Persky [et al.] //J. of hypertension. 1990. - V.8. - P.121-128.
228. Ishida, M. Membrane ATPase of Bacillus megaterium. I Proporties of membrane ATPase and its solubilised form Text. / M. Ishida, S.Mizushima //J. biochem. 1969. - V.66, №1. - P. 33-43.
229. Ivanov A.V. Role of the self-association of P subunits in the oligomeric structure of Na+/K+-ATPase /A.V. Ivanov, N.N. Modyanov, A. Askari // Bio-chemJ. 2002. - V. 364, № 1. - p. 293-299.
230. Jewell, E.A. Isoforms of the a subunit of Na,K-ATPase and their significance: Ion Pumps, Stract. and Mech.: meet. (Gathenburg, aug. 12-14, 1991) Text. / E.A Jewell, O.I. Shamraj, J.B. Lingred // Acta Physiol. Scand. Suppl. 1992.-N607.-P. 161-169.
231. Jewell, E.A. Isoforms of the a subunit of Na,K-ATPase and their significance: Ion Pumps, Stract. and Mech.: meet. (Gathenburg, aug. 12-14, 1991) Text. / E.A Jewell, O.I. Shamraj, J.B. Lingred // Acta Physiol. Scand. Suppl. -1992.-N607.-P. 161-169.
232. Jorgensen, P.L. Structure and mechanism of Na,K-ATPase: Functional sites and their interactions Text. / P.L.Jorgensen, K.O. Hakansson, S.J. Karlish // Annu. Rev. Physiol. 2003. - V. 65. - P. 17-49.
233. Kamiya, M. Changes in activity of sodium potassium adenosinetriphospho-tase in cells during adaptation of the Japanese eel to sea water Text. / M. Kamiya, S.Utida //Comp, biochem. phisiol. - 1968. - V.26. - P. 675-685.
234. Kasbekar, D.K. An adenosine triphosphatase from frog gastric mucosa Text. / D.K. Kasbekar, R.P Durbin //Biochem. biophys. acta. -1975. V.105, № 3. -P. 472-482.
235. Keeton, K.S. Characterization of adenosinetriphosphatase in erythrocyte membrane of the cow Text. / K.S. Keeton, I.I. Kaneko // Proc. soc. ekp. biol. and med. 1972. -N 1. -P. 140.
236. Koenig, C. A histochemical study of adenosine triphosphatase in the toad (Bufo spinuloses) gastric mucosa Text. / C. Koenig, J.D. Vial //J. histochem. cytochem. 1970. - V.18, №5. - P. 340-353.
237. Kolbel F. The endogenous digitalis-like factor / F. Kolbel, V.Schreiber // Mol. Cell Biochem. -1996. V. 111. .№ 5. - P. 160-161.
238. Kyte, J. Molleculer consideration relevant to the mechanism of active transport Text. / J. Kyte // Nature. 1981. - V.292, № 6. - P. 201-204.
239. Laffan, J. DNA Replication by a DNA -Membrane Complex Extracted from Bacillus subtilisi Site of Subcomplexes Text. / J. Laffan, W. Fischein //J. bacteriology. 1985. -V. 169. - P. 2819-2827.
240. Lichtstein D. Endogenous digitalis-like Na+,K+-ATPase inhibitors, and brain function / D. Lichststein, H. Rosen // Neurochem. Res. 2001. - V.26, N°. 8/9. - P.971-978.
241. Limlomwongse, L. Developmental changes in ATPase and K+-stimulated phosphatase of to dploe gastrica microsomes Text. / L. Limlomwongse, J.G. Forte //Amer. j. phisiol. — 1970. — V.219, № 6. — P. 1717-1722.
242. Lingham R.B. Regulation of rat brain (Na+, K+)-ATPase activity by cyclic AMP/ R.B. Lingham, and A.K. Sen// Biochim. Biophys. Acta. 1982. -V.688. -P. 475-485.
243. Lubin, M. Cell potassium and the regulation of protein synthesis Text. / M. Lubin //Jn: the cellular function of membrane transport. // Prentice Hall. Englewood. - Clifs. - N.J., 1964. - P. 193-244.
244. Mack, S. Metionina, colina e betaina Come funzinano e dove interagisco nel metabolismo animale Text. / S. Mack, V. Ciro // Teen. Molit. 1999. - № 3.-P. 291-296.
245. Mafayer J.R. Juffence of manure gases on pulerty in gilts / J.RMafayer, D.T.Kell, M.A.Dulcman // J.anim. Sc.- 1987. P. 1476-1483/
246. Marunouchi, T. Separation of sulfite dependent ATPase from other ATP hydrolyzing enzymes Text. / T. Marunouchi IIJ. biochem. - 1969. - V.66, №1. - P. 113-115.
247. Marunouchi, T. Studies on the sulfite-dependent ATPase of a sulfur oxidizing bacterium, thiobacillus thiooxidans Text. / T. Marunouchi, T. Mori //J. biochem. 1967. - V.62, №4. - P. 401-407.
248. Meggison, P.A. Effeciency of utilization of non protein-nitrogen in cattle. Text. / P.A. Meggison, Mc. N. Meniman // Proc. Nutr. Soc. -1980. -V. 38, № 3. P. 147-152.
249. Molecular cloning and sequence analysis of human. Na+K+-ATPase ß subunit Text. / Kawakami K. [et al.] // Nucl. aced. res. 1986. - V.14. - P.2833-2844.
250. Molecular cloning and sequence analysis of human. Na+K+-ATPase ß subunit Text. / Kawakami K. [et al.] // Nucl. aced. res. 1986. - V.14. - P.2833-2844.
251. Munakata, H. The a and ß subunits of lamb Kidney Na+K+-ATPase are Both glycoproteins Text. / H. Munakata, K. Schmid // Biochim. biophis. res. commun. 1982. -V. 107, №1. - P. 229-231.
252. Murphy, R.A. Hidrogen ion buffers and enzymatic activity myosin B adenosine triphosphatase Text. / R.A. Murphy, P.G. Koss // Arch. Biochem. and Biophis. 1968. -V. 128. - P. 236.
253. Narumi, S. Effect of gastric acid stimulants and inhibitors of the activities ofa i
254. HCO~3- stimulated and Mg -dependent ATPase and carbonic anhidrase in rat gastric mucosa Text. / S. Narumi, M. Kanno // Biochem. biophys. acta. -1973. V.311, №1. - P. 80-89.
255. Nathanson J.A. The cellular Na+ pump as a site of action for carbon monoxide and glutamate: a mechanism for long-term modulation of cellular activity Text. / J.A. Nathanson, C. Scavone, C. Scanlon, and M. McKee // Neuron. -1994.-Vol.14.-P. 781-794.
256. Nelson, N. Partial resolution of the enzimes catalizing phosphorylation Text. / N. Nelson, H.Nelson, E. Racker //J. biol. chem. 1972. - V.247, №20.-P. 6506-6510.
257. Nestor N.B. Effects of protein kinase modulators on the sodium pump activities of HeLa cells transfected with distinct isoforms of Na, K-ATPase Text. / N.B.Nestor, L.K. Lane, R.Blostein// Ann. NY Acad. Sei. 1997. - V.834. -P.579-581.
258. Palfrey H.Clive Protein phosphorylation and the regulation of cation cotrans-port Text. / Palfrey H.Clive, Alper Seth L., Greengard Paul. // J.Exp.Biol.-1980.- 89.-p. 103-115.
259. Palmer L.G. Regulation of the Na-K pump of the rat cortical collecting tubule by aldosterone Text. / L.G. Palmer, L. Antonian, G. Frindt // J. Gen. Physiol. -1993.-V. 102.-P.43-57.
260. Peris, S. Ion-mediated resistance to osmotic changes of ram spermatozoa: the role of amiloride and ouabain Text. / Peris, S., Solanes, D., Pena, A., Enric-Rodriguez-Gil, J., and Riga, T. // Theriogenology.- Vol. 54.- No 9, 2000, P. 1453-1467.
261. Pedemonto, C.H. Ca -stimulated ATPase from rat red cell membranes: Studies on the kinetic mechanism Text. / C.H. Pedemonto, H.F. Balengo //Comp, biochem. and phisiol. 1981. - №3. - P. 559-564.
262. Pfleger, H. Activation of membrane bound high affinity calcium ionsensitive adenosine triphosphatase of human erythrocytes by bivalent metal ions Text. / H. Pfleger, H.U. Wolf// Biochem. j. 1975. - V.147, №2. -P. 359-361.
263. Pierre S.V. Structure/function analysis of Na+-K+-ATPase central isoform-specific region: involvement in PKC regulation Text. / S.V. Pierre, M.-J. Duran, D.L.Carr, and Th.A. Pressley // Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2002. - V.283. - F1006-F1074.
264. Pont, J. An anion- sensitive ATPase in lizard gastric mucosa Text. / J.Pont, T. Hansen, S.L. Bonting //Biochem. biophys. acta. 1972. - V.247, №1. - P. 189-200.
265. Properties of ATPase of gastric mucosa. Y. Preparation of membranes and mitochondria by sonal centrifiigation Text. / J.G. Spenny [et al.] //Biochem. biophys. acta. 1973. - V.311, №4. - P. 545-564.
266. Proporties of soluble ATPase from of gastric mucosa Text. / A.L. Blum [et al.] //Biochem. biophys. acta. 1971. - V.249, №1. - P. 101-113.
267. Pu H.X. Functional role and immunocytochemical localization of the Ya and Yb forms of the Na,K-ATPase y subunit / H.X. Pu, F. Cluzeaud, R.Goldshleger, S. J.D. Karlish, N. Farman, Rh. Blostein // J. Biol. Chem. -2001. Vol. 276, №23. - P. 20370-20378.
268. Pu H.X. Distinct regulatory effects of the Na,K-ATPase y subunit / H.X. Pu, R. Scanzano, Rh. Blostein // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277, № 23. - P. 20270-20276.
269. Racker, E. Adenosine triphosphatase and oxidative phosphorylation Text. / E. Racker //Federat. procc. 1962. - V.21. - P. 54.
270. Ramasarma, T. Generation of H202 in Biomembranes Text. / T. Ramasarma //Biochem. biophys. Acta. 1982. - V.694, №1. - P. 63-69.
271. Robinson, J.D. Cation and nucleotide interactions with Na^K* ATPase, structure and function Text. / J.D.Robinson, M.S.Flasher. N.Y.: Acad. Press, 1979.-P. 275-285.
272. Rossier, B.C. Regulation of the sodium pumpihow and why Text. / B.C. Rossier, K.Gerring // Trends dichem. sei. 1987. - V.12. - №12. - P.483-487.
273. Rungie, J.M. Salt-stimulated adenosine triphosphatase from smooth microsomes of turnip Text. / J.M. Rungie, J.T. Wiskich //Plant. Phisiol. 1973. - V.51. — №6. - P. 1064-1068.
274. Ryrie, I J. Purification and partial characterisation of the oligomycin-sensitive ANPase from Yeast mitochondria Text. /1 J. Ryrie //Archiv, biochem. bio-phys. — 1975. — V. 168, №2. — P. 712-719.
275. Samarzija, J. Electrophysiological analisis of rat renal sugar and amino acid transport Text. / J. Samarzija, B.T.Hinton, E. Fromter // Pflugers Arch.-1982.-N2.-P. 190-197.
276. Satoh T. Intracellular signaling in the regulation of renal Na-K-ATPase. II. Role of eicosanoids/ T. Satoh, H.T. Cohen, A.I. Katz// J. Clin. Invest. 1993. -V.91.-P.409-415.
277. Schiener-Bobis, G. Action of palytoxin on apical ЬҐЖ -ATPase in rat colon. Eur. / G. Schiener-Bobis // J. Biochem. 2002. - V. 269. - P.3905-3911.
278. Schiener-Bobis, G. The sodium pump. Its molecular properties and mechanics of ion transport Text. / G. Schiener-Bobis // Eur. J. Biochem. 2002. — V. 269.-P. 2424-2433.
279. Schmalzing G. The adhesion molecule on glia (AM0G/p2) and al subunits assemble to functional sodium pumps in Xenopus oocytes / G. Schmalzing, S.Kroner, M. Schachner, S. Gloor// J. Biol. Chem. 1992. - V.267. - P. 20212-20216.
280. Schoner W. Sodium pump and steroid hormone receptor Na+,K+-ATPase / W. Schoner// Eur. J. Biochem. 2002. - Vol. 269, № 10. - P. 2423.
281. Schoner W. Endogenous glycosides, a new class of steroid hormones / W. Schoner // Eur. J. Biochem. 2002. - Vol. 269, № 10. - P. 2440-2448.
282. Schwinger RHG Isoform specific affinities of digoxin, digitoxin, methyl -digoxin and ß-acetyl-digoxin for human Na,K-ATPase. Naunyn Schmiedebergs Text. / C. Hauck [et al.] // Arch Pharmacol. 2004. - V. 369. - P. 95.
283. Seligy, V. Studies of template activity of chromatin isolate from metaboli-cally active and inactivated cells Text. / V. Seligy, M. Miyagi // Exp.Cell Res. 1969. - V.58, № 1. - P. 27-34.
284. Shier, W.T. Cytolitic Mechanisme Self -destruction of Mammalion celle by Activation of endogenous Hyrolytic enzymes Text. / W.T. Shier //Clin. Toxicol.-1982.-V.1,№1.-P. 1-32.
285. Shull, G.E. Molecular cloning of three distinct from of the Na+, K+-ATPase a-subunit from rat drain Text. / G.E. Shier, J. Greeb J.B. Lingerel //Biochemistry. 1986.-V.25, №25.-P. 8125-8132.
286. Sills, R.H. Decreased erythrocyte deformability in the anemia of bacterial meningitis Text. / R.H. Sills, M.T. Caserta, S.A Ladaw // J. pediatr. 1982. — V.101, №3. — P. 345-348.
287. Skou, J.C. Effect of ATP on the intermediary steps of the reaction of the Na, K dependent enzyme system Text. / J.C. Skou //Biochim. et biophis. acta. -1974.-V.339.- P.234.
288. Skou, J.C. Enzymatic aspects of active linked transport of Na+ and K+-trough the cell membranes Text. / J.C. Skou //Progr. bophys. molec. biol. 1964. -V.14.-P.131.
289. Skou, J.C. Enzymatic basis for active transport of Na+ and K+-across cell membrane Text. / J.C. Skou // Physiol. Rev. 1965. - V.45. - P. 596.
290. Skou, J.C. Further investigation on a (Mg2++Na2+)-activated adenosine triphosphatase possibly related to the active, linked transport «of Na+ and K+-across the nerve membrane» Text. / J.C. Skou // Biochim. et biophis. acta. -1960. V.42. -P.6.
291. Skou, J.C. The influence of some cations on an adenosine triphosphatase from crab peripheral nerves Text. / J.C. Skou // Biochim. biophis. acta. -1957.-V.23.-P. 394-401.
292. Skou, J.C. The influence of some cations on an adenosine triphosphatase from crab peripheral nerves Text. / J.C. Skou // Biochim. biophis. acta. — 1957.-V.23.-P. 394-401.
293. Skou, J.C. The Na, K-ATPase Text. / J.C. Skou, M. Esnmann // J. Bio-energ. and Biomembr. 1992. - V. 24. - P. 249-261.
294. Skou, J.C. The relationship of the (Na++K+)- activated enzyme system to transport of sodium and potassium across the cell membrane Text. / J.C. Skou// J. bioenerg. 1973. - V.4. - P.l 1.
295. Smith, P.l. Mechanism and regulation of transcellular potassium transport by the colon. Text. / P.l. Smith, R.D. Me Cabe //Amer. j. physiol. 1984. -V.247. - P.445-456.
296. Sodium potassium pump activity in white Blood ceels from children with an increased risk of developing hypertension-the odense schollchild Study Text. / H.S. Hansen [et al.] // Scand. j. of clin. & labor, inves. - 1993. -V.53. - P.57-65.
297. Stewart D.J. Role of cyclic GMP in cholinergic activation of Na-K pump in duck salt gland/ D.J. Stewart, A.K. Sen// Am. J. Physiol. Cell Physiol. -1981. -V.240.-P.207-214.
298. Stewart W.C. Acute and chronic regulation of Na+/K+-ATPase transport activity in the RN22 Schwann cell line in response to stimulation of cyclic AMP production/ W.C. Stewart, P.H. Pekala, E.M. Lieberman// Glia. 1998. - V.23. -P.349-360.
299. Studies on (K++H+)-ATPase. I Essential arginine residue in its substrate binding center Text. / J.J. Schrijen [et al.] //Biochem.biophys. acta. 1980. -V.597, №2. - P. 331-344.
300. Suleiman, M.S. The effect of inhibition of the Na-pumping normal Tyrode and during Ca-depletion on the amino acid content of isolated perfused guinea-pig hearts Text. / M.S. Suleiman, R.A. Chapman // J. Physiol. -1991.-438.-P. 318.
301. Sullivan, C.W. Multiple ion-stimulated adenosine triphosphatase activities with membranes of diatom Nitzschiab alba Text. / C.W. Sullivan, B.E. Vol-cani //Archiv, biochem. bophys. 1975. -V. 167, №2. - P.437-443.
302. Sullivan, C.W. Multiple ion-stimulated adenosine triphosphatase activities with membranes of diatom Nitzschiab alba Text. / C.W. Sullivan, B.E. Vol-cani //Archiv, biochem. bophys. 1975. - V.167, №2. -P.437-443.
303. Sweander, K.J. Two Isozymes of the Na+, K+-ATPase have distinct antigenic. Text. / K.J Sweander, R.C. Gilkeson // J. biol chem. 1985. - V.260, №15. -P. 9016-9022.
304. Tague, L.L. Effect of ethanol on bicarbonate stimulated ATPase, ATP and cyclic AMP in canine gastric mucose Text. / L.L. Tague, L.L. Shanbour //Proc. soc. exptl. miol. med. - 1977. - V. 154, №1. - P.37-40.
305. Teller, J.K. Enzymatyczne podstawy dzialania Pompy sodowey Text. / J.K. Teller // Post. biol. komork. -1981. №4. - P. 367-382.
306. The adhesion molecule on glia (AMOG) is a homologue of beta subunit of theNa+K+ATPase. Text. / S.M. Gloor [et al.] // J. cell. biol. 1990. - V.l 10. -P. 165-175.
307. The Lipids of red. Cell membranes comperitional and structural and functional aspects Text. / B. Roelofsen* [et al.] // Scand. j. clin. lab. invest. -1981. —V.41, №156. — P. 111-115.
308. Therien A.G. Expression and functional role of the y subunit of the Na,K-ATPase in mammalian cells / A.G. Therien, SJ. Karlish, Rh. Blostein // J.Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P.12252-12256.
309. Therien A.G. Mechanisms of sodium pump regulation / Alex G.Therien and Rhoda Blostein // Am J Physiol Cell Physiol. 2000. - Vol. 279. - P.541-566.
310. Watson, E. L. Ca -activated membraine ATPase : selective inhidition by ruthenium red Text. / E. L Watson., F. Vincenzi, P. W. Davis // Biochem.et Biophys. Acta. 1971. -N 2. - P. 606-610.
311. Webster, G.D. Interconversion two kinetically distinct states of the membrane- bound and solubilised HT-translocating ATPase from Rhodospirillum rubrum. Text. / G.D.Webster, P.A. Edwards, J.B Jackson // FEBS letters. -1977. V.76, №1. - P.29-35.
312. Xie Z. Na+/K+-ATPase as a signal transducer / Z. Xie, A. Askari // Eur. J. Biochem. 2002. - Vol. 269, № 10. - P. 2434-2439.
313. Xie Z. Na+-K+-ATPase-Mediated Signal Transduction: From Protein Interaction to Cellular Function / Z. Xie and Ting Cai // Molecular Interventions, -2003.-№3.-P. 157-168.
314. Yamamato, A. Usefulness of plasma lysine concentration as a parameter to estimate lysin requirement a shorterPenod in laying hens Text. / A. Yamamato // Nihon chikusan gakkaiho Anum Sei. and Techol. - 1997. - № 4. -P. 360-366.
315. Yu J. Selective soiubilization of protein and phospholipids from red blood cell membranes by nonionic detergents / J.Yu , D. A.Eishman , T. E. Sleek // J. Supramal. Struct. — 1973. V.I, - №2. -P.233-248.
316. Аминокислотный состав протеинового препарата, мясокостной и рыбной муки, г в 100 г (по данным Ю.В. Фурмана)
317. Аминокислоты пкд Мясокостная мука Рыбная мука
318. Лизин 5,97±0,44 5,83±1,02 5,07±0,23
319. Гистидин 8,12+1,64 2,99±0,53 5,79+0,67
320. Аргинин 6,20+1,48 8,67+0,64 4,34+0,34
321. Аспарагиновая кислота 6,21±0,61 9,10+1,55 6,02+1,01
322. Серин 1,33±0,30 1,04+0,43 2,50+0,33
323. Треонин 1,06±0,19 1,58+38 2,72±0,33
324. Глутаминовая кислота 7,95±1,44 5,75±1,83 8,84±1,35
325. Пролин 10,81±0,76 4,67+0,48 5,63+0,43
326. Глицин 12,68+0,93 13,75±1,02 6,73±0,13
327. Алании 7,87+1,81 5,84±0,53 7,57±0,61
328. Изолейцин 2,83+0,17 2,07+0,14 3,08+0,07
329. Валин 2,47+0,42 2,45+0,60 3,47+0,55
330. Лейцин 2,83+0,16 2,78+0,63 4,84+0,49
331. Фенилаланин 4,38+0,49 2,09+0,46 2,71+0,20
332. Тирозин 3,78+0,08 2,63+0,21 2,14+0,10
333. Метионин 1,69+0,12 0,63±0,10 2,66+0,06
334. Сумма 84,18+4,81 93,01+0,58 74,12±7,56в т.ч. заменимые, % 60,1 57,8 53,3незаменимые, % 39,9 42,2 46,7
335. Минеральный состав протеинового препарата, мясокостной и рыбной муки, г-кг1по данным С.В. Фурмана)
336. Показатели ПКД Мясокостная мука Рыбная мука
337. Кальций 34,440 ± 1,311 70,380 ±0,576 81,158 ± 1,632
338. Фосфор 1,620 ±0,570 4,324 ±0,217 64,383 ±1,600
339. Магний 0,070 ± 0,0002 0,036 ± 0,0004 0,143 ±0,0003
340. Натрий 5,578 ± 0,042 4,220 ± 0,006 6,100 ±0,015
341. Калий 0,914 + 0,012 1,120+0,034 2,25+ 0,045
342. Хром 0,00415 ±0,00281 0,00386 ± 0,00082 . 0,00234 ±0,00128
343. Структура и питательность применявшихся рационов, %1. Компоненты рациона Группы 1.я 2-я 3-я 4-я
344. Кукуруза 30,0 30,0 30,0 30,01. Пшеница 10,0 4,3 5,3 7,3
345. Ячмень 20,5 18,2 18,2 18,2
346. Шрот соевый 11,0 11,0 11,0 11,0
347. Дрожжи кормовые 5,0 5,0 5,0 5,0
348. Шрот подсолнечниковый 12,0 12,0 12,0 12,0
349. Рыбная мука 3,0 3,0 3,0 3,01. Мел 1,0 1,0 1,0 1,0
350. Сухое обезжиренное молоко 4,5 4,5 4,5 4,51. Премикс 1,0 1,0 1,0 1,0
351. Мясокостная мука 2,0 2,0 86,0 8,0
352. Протеиновая кормовая добавка 3,0 3,0
353. Жир кормовой 2,0 2,0 2,0 2,0
354. Итого, % 100,0 100,0 100,0 100,0
355. Химический состав печени цыплят-бройлеров, ммоль-г"1 сырой ткани (по данным Ю.В. Фурмана)
356. ГУЗ «ОБЛАСТНОЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ДИСПАНСЕР»оцг,.
357. У . -.,17/1ЦВ ЦЫ& 1 К.М.Н.1. КиселевщШтГт1. Эк . .4*2010 г.
-
Мосягин, Владимир Владимирович
-
доктора биологических наук
-
Москва, 2011
-
ВАК 03.01.04
- Эффективность использования ферментных препаратов и витамина U в рационах молодняка свиней на откорме
- Особенности обмена веществ у телят до 6-месячного возраста при обогащении их рационов ферментными препаратами и диаммонийфосфатом
- Влияние возраста и физиологического состояния животных на активность ферментных систем клеток, тканей и органов
- Особенности обмена веществ у раноотнятых поросят при скармливании им ферментных препаратов и витамина U
- Закономерности постнатального развития системы ацетилхолин-ацетилхолинэстераза и возрастные изменения активности аминотрансфераз в скелетных мышцах
