Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние углеводородов и тяжелых металлов на некоторые звенья метаболизма головастиков шпорцевой лягушки (Xenopus Laevis)

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шепило, Владимир Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Биология шпорцевой лягушки (Xenopus laevis).

1.2. Краткие сведения о воздействии некоторых тяжелых металлов на биологические объекты.

1.3. Краткие сведения о воздействии некоторых углеводородов на биологические объекты.

1.4.Г1овреждения ДНК, использование 3Н-тимидина для изучения функциональных повреждений ДНК.

1. 5. Образование и роль малонового диальдегида в биологических объектах.

1.6. Роль кортикостерона в организме животных.

ГЛАВА II. ПОСТАНОВКА ЭКСПЕРИМЕНТА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Схема экспериментальных исследований.

2.1.1. Острый опыт.

2.1.2. Хронический опыт бензол.

2.2. Определение токсичности веществ в тесте Fetax.

2.3. Морфологические исследования.

2.3.1. Измерение массы тела головастиков Xenopus laevis.

2.3.2. Оценка тератогенеза.

2.4. Определение включения Н-тимидина в ДНК Xenopus laevis.

2.5. Определение содержания ДНК в организме головастиков Xenopus laevis.

2.6. Определение количества малонового диальдегида (МДА).

2.7. Определение кортикостерона в организме головастиков Xenopus laevis.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВ

3.1. Действие отдельных токсикантов и их смесей в тесте Fetax на личинок Xenopus laevis.

3.2. Влияние бензола на головастиков Xenopus laevis.

3.3. Влияние толуола и смеси бензол-толуол на головастиков Xenopus laevis.

3.4. Влияние смеси ионов тяжелых металлов Си , Cd и смеси ионов тяжелых металлов, бензола и толуола на головастиков Xenopus laevis.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние углеводородов и тяжелых металлов на некоторые звенья метаболизма головастиков шпорцевой лягушки (Xenopus Laevis)"

Актуальность проблемы

В настоящее время человек интенсивно изменяет химический состав окружающей среды. Повышается концентрация тяжелых металлов и углеводородов в воздухе, природных водах, почвенном покрове, организмах, что не проходит бесследно для органического мира (Глазов, 1977; Веселов, 1984; Аршаница, 1988; Бочков, Чеботарев, 1989; Грин, Стаут, Тейлор, 1990; Егорова, 1995; Mormede, Davies, 2001).

Возрастающий мутагенный пресс антропогенно меняющейся среды обитания ведет к увеличению наследуемой патологии и злокачественных образований на всех уровнях организации живой материи. Профилактика индуцированного мутагенеза реальна и могут осуществляться компонентным путем, т.е. выявлением и изъятием из сфер народного хозяйства веществ, обладающих прямым или потенциальным мутагенным действием (Гводенко, Зинчук, Алешня, 2000).

Накопление в живых организмах вредных веществ приводит, если не к гибели, то ослаблению их, развитию заболеваний, нарушению функций различных систем и органов, в том числе и репродуктивных (Миноранский, 1996).

Особое техногенное давление испытывают экосистемы внутренних водоемов и прибрежных морских вод в районах с мощной индустриальной базой, развитым сельским хозяйством, наличием богатых месторождений полезных ископаемых (Александров, 1988; Зобова,1977; Степанов, Флоров, 1981; Сухенко, 1992; Gladimeyi, Wade, 1984; Кузьмин, 1999). 6

Следовательно, понимание механизмов действия токсикантов на гидробио-нтов является необходимой предпосылкой для разработки научных основ и методов определения ПДК применительно к задачам рыбохозяйственной регламентации поступающих в водоемы химических веществ (Лукьяненко, 1983; Гвозденко, 1997; Потапов и соавт., 1998; Agradi, Baga, Ceradini, Heltai, 2000). Водные организмы часто подвергаются слабым хроническим дозам многочисленных антропогенных поллю-тантов, многие из которых, генотоксичны. Часто имеется длительный латентный период между началом контакта поллютанта с окружающей средой и последующим патологическим состоянием или возможным экологическим ударом. Метод ранней диагностики таких процессов был бы крайне полезен (Shugart, Simener, Me. Carthy, 1987). В то же время, ПДК многих веществ являются крайне завышенными. Так, ПДК бензола для рыбохозяйственных водоемов составляет 0,5 мг/л, тогда как это вещество физиологически весьма активно и встречается в нефти, коксовой смоле, выхлопных газах, то есть в веществах, наиболее часто попадающих в окружающую среду в следствии хозяйственной деятельности человека. Гомолог бензола - толуол обладает менее выраженной токсичностью, по литературным данным (Plappert, Ваг-hel, Seidel, 1994), но его ПДК для рыбохозяйственных водоемов также составляет 0,5 мг/л (Перечень ПДК и ориентировочно безопасных уровней воздействия вредных веществ воды рыбохозяйственных водоемов, 1993).

Внушает опасения повышение в природных водах ионов тяжелых металлов, например, таких как медь, кадмий. 7

Токсичность этих веществ, при воздействии на живой организм, показана во многих научных работах, но изучению таких опасных ксенобиотиков, в концентрациях равных ПДК, уделяется крайне слабое внимание, хотя такие исследования могут существенно помочь в уточнении существующих нормативов (Болезни рыб. Справочник, 1989; Микряков, Лакирова, 1997; Lin Yu-hua, Lu Jian-min, Fu Hui -guang, 2001).

Мало изученная область - совместное действие ксенобиотиков на живой организм. Естественно, накопление данных в этой области позволяет более масштабно подойти к проблеме охраны окружающей среды (Волков и соавт., 1977; Максимов и соавт., 1997).

Одна из основных задач классической токсикологии - выбор объекта исследований (Катаскова, Полуян, Щербакова, 2000). Шпорцевая лягушка является весьма удачным тест - объектом среди позвоночных животных. Хотя в биологических лабораториях эксперименты на Xenopus laevis проводятся не одно десятилетие (Дет-лаф, 1975; Лефковитс, Гирнис, 1988; Brattelid, Smith, 2000), в практике токсикологических исследований в нашей стране это объект еще не применялся.

Преимущество проведения работы с этим животным следующие:

• возможность проведения исследований круглогодично;

• наличие генетически однородной популяции;

• большое количество икры;

• возможность постановки эксперимента на животных начиная с эмбрионального периода;

• высокая чувствительность головастиков к ксенобиотикам; 8

• легкость содержания взрослых животных.

Цель и основные задачи исследования

Целью настоящей работы является исследование воздействия тяжелых металлов (Си , Cd ) и углеводородов (бензол, толуол), в концентрациях равных ПДК, на ряд метаболических процессов головастиков шпорцевой лягушки (Xenopus laevus) для рекомендации данного организма, как тест - объекта для разработки ПДК загрязняющих веществ рыбохозяйственных водоемов.

Основные задачи исследования:

1. Исследовать влияние тяжелых металлов и углеводородов в тесте Fetax.

2. Изучить влияние тяжелых металлов и углеводородов на включение Н-тимидина в ДНК и содержание дезоксирибонуклеиновых кислот в организме головастиков Xenopus laevis.

3. Оценить воздействие тяжелых металлов и углеводородов на интенсивность пере-кисных процессов в организме головастиков Xenopus laevis.

4. Изучить действие тяжелых металлов и углеводородов на выработку гормона стресса - кортикостерона в организме головастиков Xenopus laevis. 9

Научная новизна

Впервые шпорцевая лягушка введена как тест - объект в токсикологические исследования в нашей стране. о

Впервые проведены исследования по изучению включения Н-тимидина в ДНК у головастиков Xenopus laevis. Показана возможность применения данной методики для выявления действия углеводородов и тяжелых металлов на репаратив-ные процессы в ДНК организма.

Выявлено тератогенное действие исследованных веществ в концентрации равной ПДК на эмбрионы шпорцевой лягушки.

Обнаружено, что толуол и ионы тяжелых металлов блокируют гормональный ответ организма при стрессе и снижают интенсивность репаративных процессов в ДНК организма, добавление же к смеси поллютантов - бензола активирует как гормональный ответ, так и интенсивность репаративных процессов в ДНК.

Теоретическая и практическая ценность работы

Полученные результаты значительно расширяют представления о механизмах действия тяжелых металлов и углеводородов в концентрациях, равных ПДК, на живой организм. Показана необходимость пересмотра ПДК ряда веществ с учетом их действия на генетический аппарат.

10

Результаты работы позволяют сделать вывод о возможности развития стресс -реакции у организмов даже при незначительных изменениях концентрации загрязняющих веществ. Показаны перспективы изучения гормонального статуса организма для диагностики патогенного действия изучаемых веществ. Выявлена связь между развитием стресс - реакции у организмов и интенсификацией репаративных процессов в ДНК у головастиков шпорцевой лягушки. Результаты исследований послужили основой для разработки 15 ПДК для рыбохозяйственных водоемов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Шпорцевая лягушка является чувствительным объектом и может использоваться для апробации ПДК загрязняющих веществ рыбохозяйственных водоемов.

2. Бензол при хроническом воздействии в концентрации, равной ПДК, вызывает повышение интенсивности включения меченного тимидина в ДНК и активацию уровня перекисного окисления липидов в организме головастиков Xenopus laevis. в остром опыте бензол вызывает стресс-реакцию у животных, что выражается в повышении уровня кортикостерона.

3. Толуол в концентрации, равной ПДК, вызывает снижение интенсивности включения 3Н-тимидина в ДНК и повышает уровень перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме головастиков, при этом блокируется гормональный ответ.

3 ттт

Смесь бензола и толуола повышает как уровень включения Н-тимидина в ДНК,

11 интенсивность ПОЛ, вызывает увеличение концентрации кортикостерона в организме головастиков Xenopus laevis.

-f~2 [ о

4. Смесь тяжелых металлов Си ,Cd , в концентрациях равных ЦЦК, вызывает снижение интенсивности включения меченного тимидина в ДНК и повышает интенсивность ПОЛ, но не вызывает гормонального ответа в организме голова2 стиков Xenopus laevis. Совместное действие Си , Cd и бензола, толуола в концентрации, равной ПДК, вызывает повышение уровня включения метки в ДНК, активацию ПОЛ и вызывает значительный гормональный ответ (повышение содержания кортикостерона) в организме головастиков Xenopus laevis.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на:

• 3-й Международной Конференции " Экология города" (г. Ростов - на -Дону, 1995),

• конференции молодых ученых "Биомониторинг и рациональное использование гидробионтов" (г. Владивосток, 1997),

• 3-й Международной Конференции " Экология и здоровье человека" (г.

Ростов - на - Дону, 1997).

Методические указания по использованию головастиков шпорцевой лягушки для определения токсичности воды в лабораторных условиях приняты к вне

12 дрению Центральным управлением по рыбохозяйственной экспертизе и нормативам по охране, воспроизводству рыбных запасов и акклиматизации.

Материалы диссертации использованы при создании научно-популярного фильмаоб амфибиях и могут использоваться при чтении спецкурсов по биохимии и экологии в ВУЗах.

Публикации

По материалам работы опубликовано 11 печатных работ.

Структура и объем работы.

Работа состоит из введения, 4 глав, заключения и выводов, изложена на 101 странице машинописного текста и содержит 9 таблиц, 3 рисунка, 1 фотографию. Список литературы включает 123 на именования, из них - иностранных 17.

13

Заключение Диссертация по теме "Экология", Шепило, Владимир Юрьевич

Выводы

1. На основании проведенных экспериментов доказано, что шпорцевая лягушка яв' ляется чувствительным объектом для изучения воздействия загрязняющих веществ и может использоваться при разработке ПДК для рыбохозяйственных во' доемов.

2. Толуол (0,5 мг/л), смесь ионов меди (0,001 мг/л) и кадмия (0,005 мг/л) при остром воздействии (24 часа) и бензол (0,5 мг/л) при хроническом действии (30 суток) в предельно допустимых концентрациях (ПДК) повышают уровень перекисного окисления липидов в организме головастиков Xenopus laevis.

3. Толуол (0,5 мг/л) и смесь солей тяжелых металлов (Си + 2 0,001 мг/л, Cd + 2 0,005 мг/л) в концентрациях, равных ПДК, не влияют на концентрацию кортикостерона в организме Xenopus laevis и снижают интенсивность включения Н-тимидина при неизменной концентрации ДНК и повышают смертность личинок на 35% и 25,5% соответственно.

4. Добавление бензола к толуолу и солям тяжелых металлов

Си + 2 0,001 мг/л , Cd 2+

0,005 мг/л (все вещества взяты в предельно допустимых концентрациях) повышает содержание в организме Xenopus laevis кортикостерона, активирует включение Н-тимидина при неизменной концентрации ДНК и снижает смертность

86 организмов по сравнению с отдельно взятыми толуолом и ионами тяжелых металлов, то есть является антагонистом. 5. Учитывая выявленное (с помощью нового объекта - шпорцевой лягушки и разработанных нами методик) токсическое действие поллютантов на уровни, приближенных к ПДК, считаем необходимо пересмотреть существующий перечень ПДК изученных нами веществ для рыбохозяйственных водоемов.

87

Заключение

В условиях изменения физиологически оптимальных параметров химического состава воды за счет присутствия примесей антропогенного происхождения, содержащиеся в воде токсиканты могут служить причиной формирования патологических реакций организма (Бокина, Фадеева, Вихрова, 1972; Виноградова, 1988). Во многих случаях наблюдается длительный латентный период между началом контакта химиката с окружающей средой и последующим выражением патологического состояния (Shugart, 1987), что подтверждается нашими экспериментальными данными. Следовательно, понимание механизмов действия токсикантов на гидробионтов является необходимой предпосылкой для разработки научных основ и методов определения ПДК, применительно к задачам рыбохозяйственной регламентации поступающих в водоемы химических веществ (Лукьяненко, 1983; Гвозденко, 1997; Argadi, Baga, Ceradini, Heltai, 2000). Так, при остром воздействии бензола, в концентрации равной ПДК, наиболее быстро реагирует на воздействие токсиканта гормональное звено. Повышение концентрации кортикостерона может свидетельствовать о начале развития стресс-реакции у опытных животных.

Полученные данные свидетельствуют о том, что острое применение бензола в концентрации, равной ПДК, не вызывает достоверных изменений как в интенсивно

78 сти включения Н-тимидина в ДНК (табл.1), так и в концентрации ДНК и уровне перекисного окисления липидов. Как у контрольных , так и у опытных животных содержание ДНК составляет 0,4 мг/г ткани (табл. 2).

Изменение в уровне кортикостерона может свидетельствовать о развитии стресс - реакции у животных, а следовательно, активации гомеостатирующих механизмов, что подтверждается литературными данными о роли этого гормона (Хеф-ман, 1972; Гаркови, Квакина, Укалова, 1977).

Взаимодействие токсических агентов с живыми системами приводит к нарушению гомеостаза на клеточном и тканевом уровнях, что наглядно представлено интенсификацией тератогенеза (фото 1). Бензол, при его хроническом воздействии вызывает искривление хорды и расширение кровеносных сосудов в области сердца. Активация перекисного окисления липидов выявлена практически во всех вариантах опыта, что можно рассматривать как свидетельство воздействия на организм мощного стресс - фактора и универсального механизма повреждения мембранных структур клетки, следствием которого являются изменения вязкости липидного биослоя и нарушение ионной проницаемости (Коржаницкий, 1977; Осипов и соавт. 1980; Белевский, 1981; Slater, 1984). Однако, при остром действии бензола нами не отмечено активации ПОЛ, что может быть объяснено запуском гомеостатирующих механизмов, посредством активации гормональных процессов, тормозящих повреждающее действие бензола на мембраны при однократном использовании последнего.

79

В отличие от острого воздействия, использование постоянно поддерживаемой концентрации бензола вызывает достоверное повышение активности перекисного окисления липидов, что выражается в достоверном увеличении уровня МДА на 21,6 % по сравнению с контролем. В то же время, концентрация кортикостерона достоверно не отличалась от контрольного уровня (табл. 2).

Восстановление уровня кортикостерона и повышение ПОЛ может свидетельствовать о повышении активности систем организма животных, в том числе и репа-ративных. Действительно, результаты исследований свидетельствуют об увеличении интенсивности включения Н-тимидина в ДНК.

Как уже было отмечено, бензол обладает минимальным влиянием на изученные звенья метаболизма по сравнению с толуолом и солями тяжелых металлов. Причем летальность в тесте Fetax для бензола была также минимальной. 2 + 2

В то же время, применение толуола и солей тяжелых металлов (Си , Cd ) в концентрации, равной ПДК, свидетельствует о том, что несмотря на выраженное негативное влияние этих веществ на организм (резкая активация ПОЛ), изменений в содержании гормона стресса - кортикостерона не происходит. Это обусловлено, по -видимому, блокадой гормонального ответа организма этими токсикантами. Наряду с

3 о отмеченным процессом, снижение включения Н-тимидина при неизменной концентрации ДНК может свидетельствовать и о блокировании репаративных процессах в ДНК. Кроме того, для действия толуола и солей тяжелых металлов характерна максимальная смертность организмов (рост смертности для толуола - 35%, солей тяже

80 лых металлов - 25% по сравнению с контролем) и наиболее выраженный тератогенный эффект.

Результаты исследований по изучению влияния толуола в концентрации 0,5 мг/л и смеси бензол 0,5 мг/л, толуол 0,5 мг/л (концентрации веществ равны ПДК) на динамику встраивания Н-тимидина в ДНК головастиков Xenopus laevis в остром опыте представлены в таблицах 3,4.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что добавление толуола в концентрации 0,5 мг/л в остром опыте достоверно (Р < 0,05) снижает уровень связанной с ДНК метки. В тоже время, не отмечено изменений в концентрации ДНК (табл. 5).

То есть, очевидно, что снижение количества связанного Н-тимидина зависит не от изменения концентрации ДНК, а от замедления включения его в состав нуклеиновых кислот в ходе репаративных процессов в организме Xenopus laevis.

Выявлено достоверное (Р < 0,05) снижение отношения связавшегося с ДНК Н-тимидина к свободному через 30 и 180 минут после введения метки (табл.3).

Параллельно с этим процессом отмечено достоверное повышение уровня пере-кисного окисления липидов в организме экспериментальных животных (табл.5), что может свидетельствовать о воздействии выраженного стрессогенного фактора на организм головастиков.

Однако, отсутствие повышения концентрации кортикостерона у головастиков Xenopus laevis при остром воздействии толуола, являющегося выраженным стрессо

81 ром, повышающим интенсивность ПОЛ, может свидетельствовать о подавляющем действии этого токсиканта на гормональное звено регуляции метаболизма, что может, в конечном итоге угнетать метаболические процессы организма, в том числе и репаративные, что было отмечено в наших исследованиях.

Во многом отличные от воздействия раздельно применяемых бензола и толуола, данные получены при остром воздействии смеси этих веществ в концентрации, равной ПДК. Результаты этих исследований свидетельствуют о выраженном развитии стресс - реакции в организме головастиков, что проявляется в повышении активности перекисного окисления липидов и в достоверном увеличении уровня МДА в сравнении с контролем, а также в достоверном увеличении содержания кортикостерона по сравнению с контрольным значением (табл. 5).

Параллельно с этими процессами нами обнаружено выраженное потенцирование включения 3Н-тимидина. Также выявлено выраженное увеличение отношения о связанного с ДНК Н-тимидина к свободному. Наряду с этим процессом отмечалось сохранение концентрации ДНК на контрольном уровне. Эти данные могут свидетельствовать о значительном усилении репаративных процессов, что обусловлено, по-видимому, повреждающим ДНК действием смеси толуола и бензола при остром воздействии этих веществ.

Таким образом, действие смеси бензол - толуол в концентрациях равных ПДК дает противоположный эффект по включению меченного тимидина в ДНК головастиков Xenopus laevis в сравнении с отдельным действием толуола. Причем, толуол

82 оказывает выраженное подавляющее действие на различные этапы метаболизма, тогда как бензол препятствует инактивирующему как гормональные, так и репаратив-ные процессы действию толуола.

Результаты исследований по изучению влияния смеси ионов металлов (медь и кадмий) и смеси ионов металлов с углеводородами (бензол и толуол) в концентрациях равных ПДК на динамику встраивания Н-тимидина в ДНК головастиков Xenopus laevis представлены в таблицах 6, 7.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что добавление смеси ионов ме

2 + 2 таллов до конечной концентрации (Си (0,001 мг/л), Cd (0,005 мг/л) в среду головастиков с последующей экспозицией 18 часов до введения меченного тимидина в организм головастиков достоверно (Р < 0,05) снижает уровень связанной с ДНК метки. Отношение связанного с ДНК Н-тимидина к свободному статистически значимо (Р < 0,05) уменьшалось по сравнению с контролем (табл.6). В то же время, концентрация ДНК в условиях данного исследования достоверно не отличается от контрольного уровня (табл.8). Полученные данные свидетельствуют о том, что

3 Ч> снижение количества связанного Н-тимидина зависит не от изменении концентрации ДНК, а от торможения включения нуклеотида в состав нуклеиновых кислот в ходе репаративных процессов. По-видимому, действие смеси ионов данных металлов в остром опыте, при концентрациях веществ равных ПДК в значительной степени блокирует интенсивность репаративных процессов в организме

83 блокирует интенсивность репаративных процессов в организме головастиков Xenopus laevis.

Значительный интерес представляет тот факт, что бензол, сам по себе являющийся мощным токсикантом, выступает в смеси с толуолом и ионами тяжелых металлов своеобразным антагонистом. Действие смеси бензола с толуолом, а также и бензола с тяжелыми металлами приводит к активации ПОЛ. Однако, наряду с этим отмечен резкий гормональный ответ, заключающийся в росте концентрации адаптационного гормона кортикостерона и активация включения 3Н-тимидина при неизменной концентрации ДНК, что может свидетельствовать об интенсификации репаративных процессов. Наряду с этим выявлено снижение смертности личинок Xenopus laevis до 19% и 18% по сравнению с контролем соответственно, т.е. по сравнению с отдельно используемыми толуолом и ионами тяжелых металлов смертность уменьшается на 46% и 28%, соответственно.

Необходимо также принять во внимание, что отмеченные негативные метаболические ответы организма(активация ПОЛ, торможение репаративных процессов), а так же увеличение летальности организмов в присутствии бензола, толуола, ионов Си + 2 , Cd 2 + , используемых в ПДК, свидетельствует о необходимости пересмотра существующих нормативов с использованием современных методов исследования.

Кроме того, требует дальнейшего детального изучения совместного действия токсиканта на гидробионтов, что, по нашему мнению, должно фиксироваться в

85

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шепило, Владимир Юрьевич, Ростов-на-Дону

1. Адаме Р. Использование радиоактивных изотопов в клеточной культуре// Методы культуры клеток для биохимиков. М.: Мир, 1983. - С. 163 -182.

2. Александров А.К. Влияние загрязнения на рыбохозяйственные водоемы // Первая всесоюзная конференция по рыбохозяйственной токсикологии. Рига, 1988. -С. 3 -14.

3. Аршаница Н.М. Влияние сточных вод нефтеперерабатывающего завода на инкубируемую икру, личинок и взрослых рыб: Сб. науч. тр.// Влияние пестицидов и нефтепродуктов на водные организмы. Киев: Наукова думка, 1974.- С. 73 - 86.

4. Аршиница Н.М. Некоторые особенности эпизотологии токсикозов рыб в естественных водоемах.// V Ввсесоюзная конференция по водной токсикологии. М, 1988.-С. 5-6.

5. Асатиани B.C. Новые методы биохомической фотометрии. М.: Наука, 1965 725 с.

6. Барабай В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов // Успехи современной биологии. -1991. Т. 11., № 6. - С. 923 - 931.

7. Белевский В.Н. Химия высоких энергий// М. -1981. В. 15. - № 1.- С. 3 - 25.88

8. Бокина А.И., Фадеева В.К., Вихрова Е.И. Состояние сердечно-сосудистой системы у людей, длительно потребляющих высокоминерализированные хлоридные питьевые воды// Гигиена и санитария, 1972. № 3. С. 10 -14.

9. Бочко Н.П., Чеботарев А.Н. Наследственность человека и мутагены внешней среды. М.: Медицина, 1989. - 269 с.

10. Болезни рыб. Справочник,- М.: Агропромиздат, 1989. 288 с.

11. Беренштейн Ф.Я. Микроэлементы, их биологическая роль и значение для животных. Минск: Наука, 1958. - С. 37 - 60.

12. Бреслер С.Е. Молекулярная биология. Л.: Наука, 1973. - 576 с.

13. Бурдин К.С., Полякова Е.Е. Металлотионеины, их строение и функции //Совр.биол. 1987. - т. 103., вып. 3. - С. 68 - 72.

14. Бышевский А.Ш., Терсенов OA. Биохимия для врача. Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994.-383 с.

15. Веселов Е.А. Подбор методов и показательных организмов при экспериментальных исследованиях по водной токсикологии // Проблемы водной токсикологии. -Петрозаводск, 1984. С. 3 -10.

16. Виноградова Л.А. Оценка биологически очищенных сточных вод на выживаемость микрофлоры // Гигиена и санитария. М., 1988, № 8, С. 80-82.

17. Владимиров Ю.А. Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.89

18. Волков И.В., Заличева И.Н., Моисеева В.П., Самылин А.Ф., Харин В.Н.// Водные ресурсы, 1997. Т. 24, № 5. - С. 556-562.

19. Войнар А.О. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М.: Советская наука, 1960. - 563 с.

20. Гаркови JI.X, Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов-на-Дону: РГУ, 1977. - 119 с.

21. Гвозденко С.И. Научные основы эколого-гигиенической регламентации пестицидов в воде водоемов // автореф. дис.докт.биол.наук. М., 1997. - 34 с.

22. Гвозденко С.И., Зинчук О.А., Алешня Е.П. Использование новых методов в токсикологии// Современные достижения рыбохозяйственной науки России (Материалы конференции). Саратов, 2002 г, С. 21-22.

23. Глазов С.Ф. Опасность загрязнения морской среды с судов//проблемы охраны морской среды: Сб.тез. -Калининград, 1977. С. 136 - 138.

24. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов JI.A. Общие механизмы токсического действия/ АМН СССР. Л.: Медицина, 1986. -280 с.

25. Голубев И.Р., Новиков Ю.В. Окружающая среда и ее охрана. М.: Просвещение, 1985.-190 с.

26. Грандберг И.И. Органическая химия. М.: Высшая школа, 1987. - С. 168 - 189.

27. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология. М.: Мир, 1990. - 1066 с.

28. Грубинко В.В., Леус Ю.В. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита у рыб// Гидробиол. Ж л., 2001. -Т. 37, № 1 - С. 64-78.90

29. Гриневич Ю.П. Свободнорадикальное окисление биолипидов в условиях прогрессии и регрессии опухолевых процессов// Материалы симпозиума- свободно радикальное окисление липидов в норме и патологии, 2-4 июня 1976г. М.: Наука, 1976. - С. 40 - 42.

30. Грушко Я.М. Вредные неорганические вещества в промышленных сточных водах. JL: Химия, 1979. - 260 с.

31. Грушко Я.М. Вредные неорганические вещества в промышленных сточных водах. Д.: Химия, 1982. - 216 с.

32. Гуляева Н.В. Перекисное окисление липидов при адаптации к стресу // Биол.науки. 1989. № 4. - 5 -14.

33. Детлаф Т.А., Руднева Т.Б. Шпорцевая лягушка. Объекты биологии развития. -М.: Наука, 1975. С. 392 - 441.

34. Дрегальская И.Н. Чувствительность эмбрионов пресноводных молюсков из разных мест обитания к повышению концентрации иона меди в среде // Экология. 1993,-№2.-С. 76-81.

35. Дэвидсон Дж. Биохимия нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1976. - 412 с.

36. Егорова И.П. Среда обитания и здоровье населения. Таганрог: Сфинкс, 1995. -322 с.

37. Зенгбуш П. Молекулярная и клеточная биология. М.: Мир, 1982,Т. 3 -344 с.91

38. Зобова Н.А. К вопросу о загрязнении морской среды нефтью и нефтепродуктами. // Проблемы охраны морской среды: Сб.тез. Калиниград, 1977. - 1977. - с. 138-139.

39. Иванов И.И., Зарембский Р.А,, Коровнин Б.Ф., Маркелов И.М., Гилишенко И.А., Рудаков В.В., Введение в клиническую биохимию. Л.: Медицина, 1969. - 492 с.

40. Израэльсон З.И., Смелянский З.Б. Руководство по гигиене труда. М.: Медицина, 1963. - с. 102 - 333.

41. Калинин Ф.Л., Лобов В.П., Жидков В.А. Справочник по биохимии. Киев: Нау-кова думка, 1971. -С. 664 - 665.

42. Канунго М. Биохимия старения. М.: Мир, 1982. -249 с.

43. Касплер П.Л., Малнин А.Б. Анализ изменения кривых выживаемости некоторых ракообразных и молюсков при воздействии ионов меди и кадмия // Гидробиол.ж-л., 1994. Т.30, № 3. - С.62 - 71.

44. Кесельман М.Л. Свободнорадикальные механизмы пестицидной интоксикации в эколого-гигиенических исследованиях // дис.докт.биол.наук. -М., 1997. 299 с.92

45. Клаус Дж. Использование Н-тимидина // Лимфоциты. Методы. М.: Мир, 1990. - С.292 - 293.

46. Кнунянц . Краткая химическая химическая энциклопедия. М.: Советская энциклопедия, 1961. -168 с.

47. Кожевников Ю.Н. О перекином окислении липидов в норме и патологии // Вопр. мед.химии. -1985. -31 с. -№5. С.2 - 7.

48. Колпакова М.Г. Кортикостероидная регуляция водно солевого гомеостаза. -Новосибирск: Наука, 1967. - 257 с.

49. Колупаев Б.И., Путинцева В.А. Активность дыхательных ферментов у рыб в токсической среде. // Гидроб.ж-л., 1986. Т.22, № 2. - С. 66 - 68.

50. Комаровский Ф.Я., Полищук Л.Р. Ртуть и другие тяжелые металлы в водной среде; миграции, накопление, токсичность для гидробионтов // Гидроб.ж л. - 1981 .-Т.17, № 5. - С.50 - 57.

51. Косицин А.В. Действие тяжелых металлов на ферменты металлоустойчивых растений // Ж-л. Микроэлементы в биологии и их применение в с/х. -1986. Т.2. - С. 88 -100.93

52. Коржаницкий В. Биохимическое значение перекисей липидов. // Успехи химии. -1977. 41. - № 8. - С. 1392 - 1430.

53. Корогодин В.И., Корогодина В.Л., Файси Ч. Семь концепций мутационного процесса. Дубна: Объединенный институт ядерных исследований, 1989. - 20 с.

54. Кузьмин С.Л. Земноводные бывшего СССР. -М.: Товарищество научных изданий КМК, 1999.-298 с.

55. Крамаренко В.Ф, Токсикологическая химия. Киев: Высшая школа, 1989. - 447с.

56. Кротов Н.А., Беспамятное Г.П. Предельнодопустимые концентрации химических веществ в окружающей среде. Л.: 1985. - 1398 с.

57. Крылов О.Н. Методика токсикологических опытов с рыбами с целью установления пограничных концентраций веществ: Сб. науч. тр. // Влияние пестицидов и нефтепродуктов на водные организмы. Киев; Наукова Думка, 1974.

58. Крю Ж. Биохимия. М.: Медицина, 1979. - 509 с.

59. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - 351с.

60. Ленинджер А. Биохимия. -М.: Мир, 1976. 956 с.94

61. Лефковитс И., Пернис Б. Иммунологические методы анализа. М.: Мир, 1988. -528 с.

62. Москвичев Д.В. Свободнорадикальные процессы и состояние биомембран при действии пиретроидных пестицидов в тканях белых крыс и в модульных систе-мах//Автореф. Дис.канд.биол.наук.-г.ростов-на-Дону, 2000.- 23 с.

63. Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикакология. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. - 318 с.

64. Лукьянова О.Н., Евтушенко З.С. Металлотионеины морских беспозвоночных // Биол.моря 1982. - № 4. - С. 65 - 68.

65. Лукьянова О.Н., Хотимченко Ю.С., Ульянова С.А. Перекисное окисление липидов в органах приморского гребешка и морского ежа. // Эволюционная биохимия. 1986. -№ 6. - С. 671 -677.

66. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М.: Наука, 1981. - 278 с.

67. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клетке. -М.: Медицина, 1987.-С. 255.95

68. Микряков В.П., Лакирова Т.Б. Влияние солей некоторых тяжелых металлов на состав белой крови молоди ленского осетра Acipenser baeru // Вопросы ихтиологии 1997. - Т. 37, № 4. - С. 538 - 542.

69. Миронов О.Г. Нефтяное загрязнение и жизнь моря. -Киев: Наукова Думка, 1973. -86с.

70. Маисеенко Т.И., Лукин А.А., Кашулин Н.А. Сиг как тест-объект для биоиндикации качества вод озер Крайнего севера. // Современные проблемы сиговых рыб. - Владивосток, 1991. - С. 213 - 224.

71. Миноранский В.А., Велик В.П., Закутский В.П., Чихачев А.С., Казакаов Б.А., Лукина Г.П. Редкие, исчезающие и нуждающиеся в охране животные Ростовской области. Ростов - на - Дону: Ростовский университет, 1996 г., - 444 с.

72. Морозов Н.П., Петухов С.А. Микроэлементы в промысловой ихтиофауне Мирового океана. М.; Агропромиздат, 1986. 158 с.

73. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов. М.: Медицина, 1985. -419 с.

74. Новиков М.А. О механизме реагирования водных экосистем на срессов воздействия. // Успехи современной биологии. 1994. - № 114. - С. 389-393.

75. Ноздрюхина А.Р. Иммуннопатология, микроэлементы. Атеросклероз. М.: Наука, 1953.-443 с.

76. Орехнович В.Н. Современные методы в биохимии, -м.: Медицина, 1977. -319с.96

77. Осипов А.Н., Моравский А.П., Шувалов В.Ф., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Изучение кинетики гибели перекисных радикалов в липидах. // Биофизика. -1980. 25. - № 2. - С. 234 - 238.

78. Перечень ПДК и ориентировочно безопасных уровней воздействия вредных веществ для воды рыбных водоемов. М.: Колос, 1993. - 128 с.

79. Потапов А.И., Ракитский В.Н., Новиков Ю.В., Макаров Э.В., Гвозденко С.И. Современные эколого-гигиенические проблемы пестицидного загрязнения водоемов. М.: Медицина, 1998. - 247 с.

80. Проссер JI. Сравнительная физиология животных. М.: Мир, 1977. - Т. 3. - 653 с.

81. Резников А.Г. Методы определения гормонов. Киев: Наукова Думка, - 1980. -400 с.

82. Рис Э., Стенберг М. От клеток к атомам. Иллюстрированное введение в молекулярную биологию. М.; Мир, 1988. - 141 с.

83. Руднева-Титова И.И. Соотношение процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности в тканях черноморской мидии. // Гидробиол. Ж л, 1996. - Т. 32, № 5. - С. 50 - 57.

84. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химичеких соединений на организм. М.'.Медицина, 1979. - 231 с.

85. Саундес Б.Н. неорганическая биохимия. М.: Мир, 1978, Т. 2. - С.434 - 480.97

86. Северин С.Е., Соловьева Г.А. Практикум по биохимии. М.: Московский университет, 1989. - С. 165.

87. Сергеев П.В., Сифула Р.Д., Майский А.И. Молеклярные аспекты действия стероидных гормонов. М.: наука, 1971. - 219 с.

88. Стент Г., Кэлиндар Р. Молекулярная генетика. -М.: Мир, 1981. -646с.

89. Страдомский Б.В. Эндогенные пиримидины, как модуляторы тревожно-депрессивных состояний человека и животных // Автореф. дис. докт. биол. наук. М., 1992. 241с.

90. Струн М.И., Мельников М.Т. Биологическая роль микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине. М.: Медицина, 1960 - С. 40 - 50.

91. Сухенко С.А. Ртуть в водохранилищах Канады. // Водные ресурсы, 1994. Т. 21. №2.-240-246 с.

92. Терлецкий Е.Д. Металлы, которые всегда с тобой. М.: Знание, 1986. - 68 с.

93. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии, Т. 1-3, М.: Мир, 1981.-1880 с.

94. Уортон Д.К. Цитохромоксидаза. Неорганическая биохимия. М.: Мир, 1978, Т.2, С. 434 - 500.

95. Фащук Д.Я., Архипов А.Г., Шляхов В.А. Концентрации массовых промысловых рыб Черного моря на разных стадиях онтогенеза и факторы, ее определяющие. // Вопросы ихтиологии. -1995. № 1. - С. 34 - 42.

96. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека. М.: Мир, 19, Т.2. - 376 с.98

97. Фриденштейн А .Я. Клонирование стромальных клеток предшественников: Сб.науч.тр. / методы культивирования клеток. -JI.: Наука, 1988. - С. 257 - 265.

98. Хертман Э. Биохимия стероидов. М.: Мир, 1972. 175 с.

99. Шигаева М.Х., Ахматулина Н.Б., Абилиев С.К. Мутагены и полумутагены окружающей среды . Алма-аты: Гылым, 1994. - 252 с.

100. Шипунов Ф.Ф., Степанов А.М., Фролов В.А. Загрязнение биосферы в Северном полушарии.//Антропогенные нарушения и природные изменения наземных экосистем. М., 1981. С. 7 28.

101. Шлегель Т. Общая микробиология. М.: Мир, 1987. - 566 с.

102. Шустов В.Я. Микроэлементы в гематологии. М.: Медицина, 1987. - 310 с.

103. Agradi Е., Baga R., Cillo F., Ceradini S., Heltai D. Environmental contaminants and biochemical reeponse in EEL exposed to Po river water// Chemosphero. 2000. - 41. №10.-p. 1565-1562.

104. Brattelid Trand, Smith Adrian J/Guidelinog bor reporting the resalts of experiments on fish// Lab. Anim. 2000. - 34. № 2. - h.l 31 - 135.

105. Bellamy D. Humoral Control of Growth and Differentiation, Academic Press, New York and London, p. 220 279,1973.

106. Bernard A.Runs. Mutation reeesearsh, 200 (1988) 133-147 Mutagenesis and deoxiribonukleotide pool in balans. -139c.99

107. Dawson Douglas., Wilke Teresa S. Evaluation of the frog embryo teratogenesis assay: Xenopus (Fetax) as a model system for model system for mixture toxicity hazard assesment. Environ. Taxicol. and Chem. -1991. p. 941 948

108. Gladdimeyi A.A., Wade I.W. // Water , air and soil pollut. -1984. -vol. 25 № 3. -P.305-316.

109. Lapis K., Simon K., Testing of potential enveromental carcinogens in aquarium fish. // Med.Biol. Environ. -1982. -11. № 2. -p. 13-16.

110. Lin Yu-hua, Lu Jian-min, Fu Hui -guang// Zhonyguo shuichan Kexue J. Fish. Sei. China 2001. - 8. № 2.-p. 88 - 91.

111. Mark Meuth. The molecular lasis of mutations inducced by deoxyribonucleoside triphosphate pool imbalances in mammalian cell // Experimental cell research, 1989. -p.305-316.

112. Plappert U., Barthel E., Seidel H.J. Reduction of benzene toxicity by toluene // Environ and Mol. Mutagenes. 1994. -24, № 4. - p. 283 - 292.

113. Perkins Peggy J., Boermans Herman J., Stefenson Gerald R. Toxicity of glyphosate and triclopyr using the Frog embrio Teratogenensis Assay Xenopus// Envirin. Toxicol. And Chem. - 2000. -19, № 4. - p. 940 - 945.100

114. Sasiader Marid Z miany chomoosomallne obserwowane u pracownikow przewlekle narazonych na benzen i jegopoehodne I I Pol. tyg.Cek. 1984. - 39 № 40-41.

115. Shugart L., Jimenes B.D., J.F. Mc. Carthy DNA damcege as a biological marcer in aquatic organisms. // Eleventh international symposium on polynuclear aromatic hidro-carbons. September 23 25, 1987.

116. Slater T.F. Review Article Free radical mechanisme in tissue injiru // Biochemical J. - 1984.-vol. 222, № 1.-p. 1 - 15.

117. Slowley Т., Teffrey L. Evidence for organicc complexed Cu in sea water // Nature, 1967,214.-p. 377-778.

118. Sinha Sarita, Gupta Manisha, Chandra Prakash // Environ. Mokit. and Asses. -1994 33 № 1. -p.75 - 84.101