Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ВЛИЯНИЕ ТОКОФЕРОЛСИНТЕЗИРУЮЩЕГО ПРОБИОТИКА НА МИКРОФЛОРУ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА И ОРГАНИЗМ ТЕЛЯТ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ВЛИЯНИЕ ТОКОФЕРОЛСИНТЕЗИРУЮЩЕГО ПРОБИОТИКА НА МИКРОФЛОРУ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА И ОРГАНИЗМ ТЕЛЯТ"



Н» правах рукописи

ШАЙДУЛЛИНА ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА

ВЛИЯНИЕ ТОКОФЕРОЛ С ННТЕЗИ РУ ЮЩЕГО ПРО БИОТИКА НА МИКРОФЛОРУ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА И ОРГАНИЗМ ТЕЛЯТ

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровицы Московской области 2004

Работа выполнена в отделе сертификации и экологических проблем в животноводстве Всероссийского государственного научно-исследовательского института животноводства

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Юрий Павлович Фомичев

Официальные оппоненты; доктор биологических наук,

профессор Борис Васильевич Тараканов

доктор биологических наук Светлана Владимировна Воробьева

Ведущая организация: Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии нм. К.И.Скрябина

Защита состоится 2004 г., в 10 часов, на заседании

диссертационного совета Д 006.013.01 при Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес: 142132, Московская область. Подольский район, нос. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан ^опд г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических

В. П. Губанова

I. ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ /

Актуальность темы.

Наметившаяся тенденция производства экологически чистых продуктов питания требует поиска новых типов добавок, повышающих продуктивность животных. Одной из реальных альтернатив на сегодняшний день являются пробнотики, препараты содержащие живые культуры микроорганизмов - симбионтов желудочно-кишечного тракта. Их применяют в качестве биологически активных веществ, обладающих ростостиму пирующим и лечебно-профилактическим эффектом. Преимущество их в том, что они безвредны и не имеют недостатков, присущих антибиотикам и химиотерапев-тическим средствам (Анптов В. А., Субботин В. М., 1980; Тараканов Б.В.,1999).

Применение пробиотиков в животноводстве затрагивает ряд важных проблем, связанных с регулированием кишечного микробиоза, иммунной, гормональной и ферментативной систем организма молодняка (Панин АЛ., Малик H.H., Вершинина И.Ю., 2002).

Для профилактики здоровья молодняка необходимо поддерживать популяцию полезных бактерий в пищеварительном тракте. Поэтому важно при его выращивании создавать необходимые условия, обеспечивающие формирование собственного микробиоценоза, включая применение средств, в том числе пробиотиков, способствующих формированию микрофлоры в нужном для организма направлении (Сизова A.B., 1974; Тимошко Н.А 1990,1992; Тараканов Б.В., 2003).

На сегодняшний день существует большое количество пробиотиков, созданных на основе лактобахтерий, бифидумбактерий, молочнокислых, целлюлозолитических и других бактерий (Платонов A.B., 1985). Широко применяются в животноводстве и птицеводстве такие новые пробнотики как реалак, лаком, стрептобифид, ветом-1,1субалин, целлобахтерин, лактоами-ловарин и другие (Иноземцев В. П. и др., 1997; Тараканов БВ.и др., 2003; Малик Н.И., Паник-AiН^-200 1 ).■ В начали 90-Х ПШов в ВИЖе на основе каро-

ЦНБ МСХА

1 фонд научной литрря

'tt? —ДЗ.9-7

тинсинтезирующей культуры 11Нск1ососси5 получен пробнотик - каротино-бактерин, эффективный в рационах цыплят-бройлеров, молодняка крупного рогатого скота и свиней (Пивняк И.Г. и др., 1992,1998).

Поиск микроорганизмов, пригодных для получения новых эффективных пробиотических препаратов в настоящее время остается актуальным.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение токоферолеинтезирующего штамма №100 и создание на его основе нового пробиотического препарата - тококарина. Для достижения указанной цели ставились следующие задачи:

- получить сухую форму пробиотика тококарина;

- определить сохранность биомассы культуры штамма №100 и готового препарата - тококарина отдельно и в смеси с комбикормом и прем иксом;

- изучить безвредность, антибиоти коустой ч нвость, антагонистическую активность иггамма №100.

Изучить влияние тококарина на:

- интенсивность роста и профилактику заболеваний пищеварительного тракта телят;

- показатели естественной резистентности телят,

- состав микрофлоры пищеварительного тракта телят;

- содержание в крови телят витамина А, каротина и токоферола. Определить оптимальные дозы и экономическую эффективность применения препарата при выращивании телят.

Научная новизна. Впервые получен пробиотический препарат токо-карин на основе токоферол синтезирующего штамма №100. Изучено его влияние при выращивании телят на:

- рост и сохранность; -неспецифическую резистентность;

- состав микрофлоры пищеварительного тракта;

- содержание в сыворотке крови витамина Л, каротина и токоферола.

Практическая значимость работы. Разработаны лабораторный регламент получения сухой формы пробиотика тококарина на основе токоферол-синтезирующего штамма №100 и наставление по его применению при вы* рашнванни телят в молочный период (утверждено Ученым Советом ВНИИЖа 13 июня 2000 г., протокол №4).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на;

-третьей международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» (Боровск, ВНИИФБиП с.-х. животных, 2000);

-52-ой конференции молодых ученых н аспирантов «Молодые ученые животноводству» (п. Дубровины, ВИЖ, 2003);

-научной конференции отдела кормления и приготовления кормов ВИ-Жа «Роль биологически активных веществ в кормлении сельскохозяйственных животных», посвлшенной 90-летию со дня рождения K.M. Солнцева (п. Дубровицы, ВИЖ, 2004).

На защиту выносятся следующие основные положения:

- разработка лабораторного регламента по получению сухого пробио-тика тококарина на основе токоферолсинтезнрующего штамма №100;

-результаты изучения влияния пробиотнка тококарина на популяцию микроорганизмов пишеваритсльного тракта, содержание в крови телят витамина Л, каротина и токоферола;

- результаты изучения влияния пробиотика тококарина на естественную резистентность, интенсивность роста и профилактику заболеваний пищеварительного тракта телят.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы в коли-

честве 145 источников, из »их 30 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 3 схемами, 32 рисунками.

2. Материалы к методы исследования.

Экспериментальная работа по теме диссертации проводилась в 19982004 г.г. в лаборатории микробиологии отдела сертификации И эколого-генетическнх исследований в животноводстве ВИЖа и агрофирме «Щапо-во».

Материалом для исследований служил токоферол синтезирующий штамм №100, выделенный в лаборатории микробиологии ВИЖа из содержимого толстого отдела кишечника цыплят-бройлеров (Худя ев а E.H., 1991), пробиотик тококарин, подопытные телт, а также сыворотка крови и кал телят.

Опыты по культивированию штамма Х?100 проводили на мясо пептон-ном агаре <МПА) и специальной жидкой среде в пробирках, чашках Петри и конических колбах на качалке (Пивняк И. Г., Попов Л. Н-, Худяева Е. Н„ 1994).

Биомассу культуры получали путем центрифугирования. Активность биомассы культуры штамма №100 и пробиотика тококарина определяли по количеству жизнеспособных клеток штамма №100 в 1 г. Бактериальную чистоту биомассы и готового препарата проверяли высевами на МПА и среду Эндо, а также м икроскоп ировани ем.

Биомассу хранили в холодильнике при температуре +4 С. Полученный в лабораторных условиях сухой иробиотическнй препарат - тококарин, хранили в жестких условиях - в негерм етизированной упаковке, при температуре не выше +20°С. Количество жизнеспособных клеток определяли путем подсчета колоний.

Испытание безвредности препарата проводили на здоровых белых мышах линии Balbeh живой массой 18-20 г. Пяти мышам выпаивали по 0,5 мл дистиллированной воды (контроль). Двум другим группам мышей по 5

голов в каждой выпаивали вместе с водой пробнотический препарат в дозе 100 млн. (опытная-1) и 500 млн. клеток на голову в сутки (олытная-2).

Антн биотнкоустой ч ивость определяли методом диффузии в агар с использованием дисков, этим же методом с использованием лунок определяли восприимчивость штамма к препарату - хкгозану. Через 24 часа инкубирования измеряли зоны задержки роста культуры штамма №100.

Антагонистическую активность клеток штамма №100 в условиях in vitro определяли методом иприха в отношении тест - культур (Егоров Н.С., 1979; Биргер О., 1982).

Эффективность применения тококарина при выращивании новорожденных телят проводили в агрофирме «Щапово» на телочках черно-пестрой породы, аналогов по живой массе и возрасту по следующей схеме (табл. 1).

Таблица 1

Схема опытов_

Группы телят Условия опытов Количество тслгг в грузте. голое Период опыта, дни

Опыт i Опыт II

Контрольная ОР - основной рацион 13 12 60

Опытная -1 ОР + тококарнн в дозе 5 млрд. клеток в возрасте 1-30 дней; 500 млн. клеток в возрасте 31-60 дне В 13 12 60

Опытная-2 ОР -»- тококарнн в дои 10 млрд. клеток в возрасте 1-30 дней; I млрд. клеток в возрасте Л -60 дней 13 - -

Проб логический препарат вносили с молозивом, молоком и комбикормом один раз в сутки. Телята в первые 10 дней жизни получали молозиво. Основной рацион состоял из молока цельного, сена, комбикорма.

Учитывали валовой прирост живой массы, количество дней с расстройством пищеварения, сохранность поголовья. Одновременно с этим изучали показатели неспеиифического иммунитета по лнзоцимной активно-

s

ста по методике Мутовила В.И, (1973) и бактерицидной активности по методике Мэтусевнча В.Ф. (1968).

Для изучения влияния тококарина на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта были исследованы пробы кала телят контрольной и опытных групп в возрасте 3,10,21,30 и 60 дней. В пробах определяли количество мезофильно-аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), количество молочнокислых микроорганизмов, бактерий группы кишечной палочки (БГКП), стафилококков, энтерококков, дрожжей, плесеней.

Определение каротина, витаминов А н Е в сыворотке крови телят проводили методом колончатой хроматографии (Пивняк И.Г. и др., 1970; Двинская Л.М. и Др., 1979; Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продухтов, 1998).

Все исследования проводили в трех повторностях и двух параллелях. Полученный цифровой материал обработан биометрически (Плохинекий H.A., J 980; Меркурьева Е.К., 1970) с использованием компьютерной программы Microsoft Excel 5.1.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3,1. Разработка лабораторного регламента получения сухой формы проб котика - тококарина.

Разработанный лабораторный регламент получения сухого готового препарата тококэрнна на основе токоферолсинтезмрующего штамма Кг 100 включает следующие этапы: подготовку посевного материала, получение маточной культуры, ферментационной культуральной среды и биомассы, приготовление н расфасовку препарата.

При этом, для получения посевного материала однородные характерные колонии культуры штамма №100 высевали в пробирки на скошенный МПА. В качестве посевного материала использовали чистую суточную культуру на скошенном МПА.

Для получения маточной культуры суточную культуру смывали с косяка МПЛ стерильным физиологическим раствором (5мл) и вносили в количестве 5-10% (по обьему) в конические колбы (750-1000 мл) с жидкой питательной специальной срелой и культивируют 24 часа на качалке, при 180200 об/мин и температуре +34-35°С.

Для получения ферментационной культур альной среды маточную культуру засевали в количестве 5-10% на жидкую специальную среду и ферментируют в течение 72 часов при температуре +34-35°С на качалке при 180-200 об/мин при температуре +34-35сС.

По окончании ферментации культуральную жидкость центрифугировали 30 мин при 14 тыс, оборотов в минуту. .

Регламент обеспечивал выход сырой биомассы бактерий в количестве -3 г, бактериальных клеток - 100 млрд. на 100 мл среды.

Получение препарата тококарина осуществляли методом контактной сушки биомассы штамма №) 00 с использованием наполнителя в соотношении 1:2; 1:2,5.

На каждом этапе работы проводили контроль активности и бактериальной чистоты культуры и готового пробнотнка.

В результате работы получен пробиотик тококарин — концентрат, который имеет вид серого порошка средней текучести, состоящего из биомассы бактерий штамма №100 и наполнителя. Препарат содержал не менее 10 млрд. жизнеспособных бактерий штамма №100 в 1 г.

3.2. Безвредность н устойчивость к антибиотикам, восприимчивость к хитозану н антагонистическая активность штамма №100.

Исследования по безвредности препарата тококарина проводили на белых мышах. Установлено, что все животные оставались живыми и клинически здоровыми. Полученные данные свидетельствуют о безвредности исследуемого препарата.

При определении чувствительности клеток штамма №100 к водорастворимому сукщшату х!ггозана «Р» ММ 80кДа (рН-7,4 степень деаиетилн-

рованпя 84%) на дистиллированной воле через 24 часа инкубирования зон задержки роста культуры не было отмечено. Это свидетельствует о том, что xirroiaH в данных дозах можно применять в животноводстве совместно с пробиотиком тококарином.

При определении антибиотикоустойчивости установлено, что штамм №100 устойчив к нистатину, полимикенну, малочувствителен к стрептомицину и чувствителен к гентамицииу, канамицину, левомицетину, неомици-ну, олеандомииину, тетрациклину, фураяонину, цифроспорину, эритромицину и высокочувствителен к ампициллину, бензил пенициллину и оксацил-лину.

Установлено, что клетки штамма №100 не оказывают подавляющего действия в условиях in vitro на следующие тест - культуры: Micrococcus lysodetcticus, Е. colt АТСС 3912/41, Micrococcus flavus, Rhodococcus sp. 21, Micrococcus luteus, Sarcina lutea ATCC 939, Salmonella abony 103/39, Bacillus cereus var. mycoides 537, Bacillus ccreus ATCC 11778, Bacillus subtilis ATCC 6633, Str. faecal is. Попользованные тест - культуры не оказали подавляющего действия на штамм №100 за исключением Bacillus subtilis ATCC 6633.

3.3. Сохранность сыром биомассы штамма №100 и тококэрнна в чистом виде it в смеси с комбикормом и премиксом.

Исследованиям по получению сухой формы препарата предшествовало изучение сохранности клеток токоферолсиктезируюшето штамма №100 в сырой биомассе, которая являлась исходным материалом.

Культура сохраняла свою активность в течение 2-х месяцев хранения на исходном уровне, что является достаточным для получения сухой формы пробнотика. Сохранность живых клеток в полученном сухом препарате оставалась на исходном уровне в течение 3-х месяцев, а через 6 месяцев составила 77,0% при температуре хранения +10-20°С, что вполне приемлемо для производственного использования препарата.

Важным результатом исследований является установление возможности сохранения пробнотика в составе комбикорма К-62-2 и прем икса П-62-2.

Было определено, что внесенный в количестве 5% {по массе) тококарик в составе комбикорма и прем икса сохранял на исходном уровне количество живых клеток в течение 2 месяцев хранения. По истечении б месяцев сохранность живых клеток составила более 80% от исходного уровня.

3.4. Эффективность использования сухого препарата тококарниа при вырашнвашш новорожденны* телят.

Как видно из таблицы 2, в первом опыте, введение в рацион пробиотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100 способствовало увеличению среднесуточных приростов живой массы, которые составили в контрольной группе 335,8 г, а в опытных группах 359,0 - 374,3 г, что больше на 6,8 - 11,5% соответственно.

Важным показателем при оценке эффективности выращивания молодняка сельскохозяйственных животных является величина затрат кормов на единицу прироста живой массы. На 1 кг прироста живой массы за 60 дней в опытных группах были затрачены: кормовых единиц в контроле — 5,9, в 1-ой опытной группе — 5,5, во 2-ой - 5,3. Переваримого протеина соответственно 712,4; 666,4 и 639,2. Введение в рацион пробиотика способствовало снижению затрат кормовых единиц на 6,4 — 10,2%, переваримого протеина — на 6,4 - 10,3% по сравнению с контролем.

Во втором опыте, (табл. 2) применение тококарина также дало положительный эффект. При этом, среднесуточные приросты живой массы в контрольной группе составили 418,3 г, в опытной - 472,2 г, что выше на 12,9 %. Снижение затрат корма на 1 кг прироста живой массы в опытной группе составило: кормовых единиц на 11,4%, переваримого протеина на 11,4% , что подтверждает полученные ранее данные.

При учете количества дней с расстройством пищеварения отмечено значительное их снижение в опытных группах. Так, в первом опыте этот показатель снизился в 1,94 и в 2,34 раза, а во втором опыте - в 1,7 раза по отношению к контролю.

Таблица 2

Показатели интенсивности роста телят __

Показатели Контрольная Опытная Опытная Контрольная Опытная

Количества телят в группе, гол. 13 13 13 12 12

Живая масса при рождении, кг 32,75 + 0,37 32,15 ±0,231 32,38 ± 0,25 33,00 ±0,31 32,67 ±0,46

Валовой прирост за 60 дней опыта: кг 20,15 ±0,35 21,54 ±0,35* 22,46 ± 035" 25,10 ±0,62 28,33 ± 0,53"

% 100 106,9 111,5 100 112,90

Среднесуточный прирост за 60 дней опыта: г 335,83 359,00 374,33 418,33 472,16

% 100 106,89 111,46 100 112,86

На 1 кг прироста затрачено за 60 дней опыта: кормовых еднниц 5,97 + 0,11 5,59 ± 0,09* 5,36 ±0,09" 4,81 ±0,12 4,26 ±0,08*"

% 100 93,63 89,78 100 88,56

лереяаримого протеина 712,44 ±12,85 666,47 ±10,60* 639,17± 10,60*" 631,10+13,96 559,20 ± 9,85*"

% 100 93,55 89,71 100 88,60

Количество дней с расстройством пищеварения, дни ! 0,3 ±0,53 5,30 ±0,44"* 4,40±0,15*" 9,40 ±0,53 5,50 ±0,44*"

Сохранность поголовья, % 100 100 100 91 100

*Р<0,05;' Р<0,01;***Р<0,001.

При этом необходимо отметить, что заболевания желудочно-кишечного тракта у телят, получавших тококарнн, проходили в более легкой форме.

ЗЛ. Влияние применения тококарпна на естественную резистентность телят.

Показателями состояния иммунитета телят служили бактерицидная и ли-зоцимная активность сыворотки крови.

В первом опыте уже в возрасте 10 дней отмечено повышение показателя лизоцимной активности сыворотки крови телят опытных групп по сравнению с контролем (Р< 0,01 ).В возрасте 30 дней также отмечено повышение этого показателя в опытных группах (Р< 0,001), гле он составил 32,43-42,53, а в контроле оставался на исходном уровне (табл. 3). Повышение бактерицидной активности сыворотки крови у опытных телят в 10 дней незначительное. В возрасте 30 лней этот показатель в опытных группах составил 88,83-91,32% , в то время как у телят контрольной группы остался на прежнем уровне 78,20% (Р< 0,01-0,001) (табл. 3).

Таблица 3

Показатели естественной резистентности телят в первом опыте (п=4)

Показатели ■ Возраст телят, ДНИ Группы телят

контрольная 1-олытная И-опытная

Лизоцимный индекс 1 21,64 ± 138 25,49 ±0,92 21,41 ±0,73

10 24,04 ± 1,05 31,84 ± 1,10* 32,43 ± из*

30 26,79+ 1,20 42,14± 1,08** 42,53 ±1,29"'

Бактерицидная активность (через 4 часа, %) 1 77,01 ± 2,86 76,62 ± 2,73 80,88 ± 1,51

10 .79,87 ±3,22 87,98 ±1,23 89,15 ± 0,9*

30 78,20 1 0,70 88,83 ± 0,86** 91,32 ± 1,44*

*Р < 0,01; **Р <0,001.

Показатели естественной резистентности телят во втором опыте (п=4)

Показатели Возраст телят, дни Группы телят

контрольная опытная

Лизоцим ный индекс 1 25,83 ±2,77 20,73 ± 3,90

10 26,45 ±2,97 34,75 ±1,79

30 27,76 + 3,96 45,71 ± 5,79**

Бактерицидная активность (через 4 часа, %) 1 78,13 ±4,35 74,29 ± 2,91

10 73,97 ±3,17 75,49- 1,41

30 67,40 ±1,31 80,69 ±0,82**

*Р < 0,01 ;**Р <0,001.

Во втором опыте в возрасте 10 дней повышение лизоцимной активности в опытной группе также было незначительным, а в возрасте 30 дней составила 27,76 - в контрольной группе и 45,71 - в опытной, что выше контроля на 64,7% (Р<0,001). Бактерицидная активность сыворотки крови телят в возрасте 30 дней п опытной группе повысилась и составила 80,69%, в контрольной - 67,40% (табл. 4),Это свидетельствует о том, что пробиотик стимулирует реакции неспе-пифического иммунитета и повышает естественную резистентность телят.

3.6. Влияние применения то кока р и на на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят.

Опенку динамики изменений состава микрофлоры проводили исследованием проб кала телят в возрасте 3,10,21,30,60 дней.

В кишечном тракте телят, получавших тококарин, значительно возросло общее количество мезофильно-аэробных н факультативно-анаэробных микроорганизмов, в то время как у контрольных животных этот показатель не изменялся (табл. 5).

Количество клеток штамма №100 в кале телят в опытных группах со временем повышалось, лаже после снижения дозы препарата в 10 раз после 30 дневного возраста. Это свидетельствует о приживлении штамма ЛгІОО в кишечнике телят.

Содержание молочнокислых микроорганизмов во всех группах возрастало до 30-дневного возраста. После месячного возраста было отмечено незначительное снижение бактерий зной группы. При этом наибольшая разница между группами была в возрасте 21 день, когда количество молочнокислых бактерий в кале телят опытных групп превышало контроль» 1,5-2,0 раза.

На рост бактерий группы кишечной палочки пробиотик оказал сдерживающее действие. В опытных группах количество данных микроорганизмов ниже, чем в контроле на 4 8-60% в возрасте от 10 до 30 дней. К двухмесячному возрасту в кале телят количество бактерий этой группы возросло на фоне повышения общего количества микроорганизмов, в том числе и молочнокислых, что можно считать положительным признаком. Соотношение кишечной палочки к молочнокислым бактериям в начале опыта у всех телят было 1:1, что говорит о нестабильном микробном балансе кишечника телят. В контрольной группе это соотношение сохранилось до конца опыта, а в опытных группах — составило 1:1,8.

В опытных группах количество энтерококков в первом опыте было выше, чем в контроле па фоне общего снижения количества бахтернй этой группы. Снижение отмечено и в контрольной к опытных группах.

У телят всех групп выделены микроорганизмы, которые относятся к условно-патогенной микрофлоре — стафилококки, дрожжи и плеоени, способных на фоне других отрицательных факторов спровоцировать заболевания пищеварительного тракта молодняка сельскохозяйственных животных.

Влияние тококарина на состав микрофлоры желудочно-кишечного -факта телят в первом опыте (пЧ)

Группы микроорганизмов Группа телят Возраст, дни

3 10 21 30 60

1 2 3 4 5 6 7

КМАФАнМ, млн. КОЕ/г' К 756,5*202,7 4341*4221 3450*1481 1710*683,65 2020*1909

0-1 875,0*273,8 3560*3114 5670*1289 4110*1691,8 8906*6885

0-2 734,0*318,0 4934*712 5457*424 5921*1349 18012*6885*

Штамм№100, млн. КОЕ/г К - - - -

0-1 0,20*0,02 1,20*0,31 20,0*10,64 56,5*20,2 60,7*24,9

0-2 0,65*0Д2 4,55*1,93 24Д±8Д 57,7*29,1 67,2125,4

БГКП, млн. КОЕ/г К 229,0*78,1 391,3*21,4 237,7*81,5 434,8*163,8 296,5*78,1

0-1 210,6*119,2 139,7^95,0 101,8*56,2 262,4*181,9 270,0*89,1

0-2 318,5*77,7 188,1*103,7 155,2*30,7 175,0*40,8 257,2*135,6

Молочнокислые, млн. КОЕ/г К 228,6*135,5 164,9*93,3 175,4*95,3 395,0*243,5 307,2Ы 95,4

0-1 212,0*57,9 140,1*75,1 264,1*42,6 581,5*90,5 433,1±77,7

0-2 331,6*145,9 237,1± 180,6 356,6*61,0 439,0*72,6 4673*76,4

1 2 3 4 5 6 7

Стафилококки, тыс. КОЕ/г К 2,60*0,64 62,б±19,7 23,3±4,75 4,46±0,58 0,58±0,27

0-1 2,51 ±2,74 б,63±4,35" 6,40*2,58* 1,87±0,29 0,63±0,07

0-2 1,76±0,63 2,30±0,78" 2,05±0,17" 2Д9±0,32 0,25±0,15

Энтерококки, млн. КОЕ/г К 19,5 ±5,77 20,3 ±7,13 6,74*1,76 0,17±0,05 0,33±0,11

0-1 21,&Ы2,7 21,4±4,80 7,19±3,48 030,14 0,55±0,05

0-2 19,0±4,78 36,3±6Д6 7,23*0,89 0^5±04» 0,25±0,04

Дрожжи, КОЕ/г К ' 240,0^17,1 407,5*176,3 1256,2*120,7 2185,0±1536,08 647,5±172,3

0-1 224,0± 144,9 320,0±52,9 350,7±51,5 2553±134,Г" 1653±90,9

0-2 240,0± 50,9 278,5±63,9 340,0189,0 100,0^43,2 100,0±27,1*

Плесени, КОЕ /г К 123,0±97,5 100,0±29,4 210,25±50,5 106,0 ±71,6 133,7±37,7

0-1 И3,7±3«,2 102,4417,0 П2,0±15^ 87,5±33,0 52,0±10,4"'

0-2 101,0±17,6 86,5*18,2 143,0±39,8 90,7±243 70,0±21,6*

*Р < 0,01; "*Р < 0,00'.. КОЕ* - колониеобразующая единица

В опытных группах отмечено значительное снижение стафилококков, дрожжей и плесеней по сравнению с контрольной. Это свидетельствует о том, что штамм №100, вводимый в данных дозах в условиях in vivo, оказывает сдерживающий эффект по отношению к условно-патогенной микрофлоре при заселении желудочно-кишечного тракта микроорганизмами. В частности, количество стафилококков в кале телят опытных групп значительно ниже, в 2 8-3,1 раза в возрасте 10-21 дней.

При определении содержания дрожжей и плесеней в кале телят установлено, что в опытных группах их количество значительно снижается, в то время как в контроле остается на стабильно высоком уровне.

Состав микрофлоры кишечника у телят во втором опыте представлен в таблице б. Как видно из таблицы 6, обшее количество микроорганизмов в кале телят во втором опыте увеличивается в обеих группах. При этом в опытной группе в 2-х месячном возрасте этот показатель был выше в 4 раза.

Одновременно наблюдается стабильный рост количества клеток штамма №100 в кале телят опытной группы, получавших тококарин.

Содержание бактерий группы кишечной палочки в кале опытных телят было ниже, чем у контрольных животных на 25-40%. С возрастом количество молочнокислых микроорганизмов возросло в обеих группах и разница между группами была незначительной.

При этом важно отметить, что соотношение бактерий группы кишечной палочки к группе молочнокислых составило у контрольных животных 1,36:1; 1:1,2; 1:1; 1:1,2 соответственно в 10, 21, 30 и 60 дней. Данное соотношение у опытных телят, получавших тококарин, составило 1:1,8; 1:1,5; 1:1,6; 1:1,9 соответственно в 10,21,30 и 60 дней.

Таблииа 6

Влияние то ко карина на состав микрофлоры желудочно-юшечиого тракта телят во втором опыте (п-4)

Грутты мшфоор-шюмоа Группи телит Возраст, дни

3 10 21 30 60

КМАФАнМ, млн. КОЕ/г К 700,0*485,7 6500*1093 60001:1117 4330*1273 5230*743,6

О 630,0*149,0 21600^3413** 36200*15972 3200015376** 2100014160**

ШшшЛгЮО, млн. КОЕ/г к - - - - -

о 0,32*0,1 ] 5,10*1,78 30,6*22,2 47,20*15,03 54,7*6,51

БГКП, млн. КОЕ/г К 338,0*182,3 342,0 ¿75,2 250,0147,0 352,0*71,0 350,0*45,8

0 342,0*144,1 202,0*97,4 382,0*95,1 281,0*70,9 250,0168,1

Молоч и кислые, ЛГ.11. КОГ: /г к 328,0і:126,5 251,0*41,1 296,6*61,8 352,0*158,8 421,0*77,6

о 334,0189,1 367*26,3 585,0*186,1 462,2*883 480,0*35,5

Стафилококки, тыс. КОЕ/г к 2,1010,91 3,5210,86 4,0210,72 4,70*0,60 5,03103

О 2,11*0,94 4,52±1,61 4,71 ±1,03 2,78*0,20 1,40*0,41

Энтерококки, млн. КОЕ/г к 27,1*11,6 5,05*1,27 10,212,87 7,70*3,29 0,37*0,07

0 30,1*16,5 44,0*11,8* 25,0*3,97* 8,80*1,80 0,66*040

Дрожжи, КОЕ/г К 210,0*35,0 521,0*115,2 490,0*258,3 720,0*86,6 342,0132,9

0 250,0*81,6 270,7*82,5 270,0*54,3 310,0*37,5" 150,0*53,6**

Плесени, КОЕ/г К 100,0*22,0 230,0*20,0 120,0*36,0 140,0*20,0 202,0*20,2

0 120,0±54д 100,0*41,2 | 100,0*2,94 120,0*30,9 150,0*30,4

*Р<0,01; "Р <0,001.

Количество энтерококков в обеих группах с возрастом снижалось, как и в первом опыте. При этом разница между опытной и контрольной группами была наибольшей в возрасте от 10 до 30 дней в сторону увеличения в опытной группе.

Из кала телят обеих групп были выделены, как и в первом опыте условно-патогенные микроорганизмы.

Во втором опыте количество стафилококков в опытной группе составило 1,40 тыс. КОЕ/г, а в контроле - 5,03 тыс, КОЕ/г.

В конце опыта в капе телят, получавших тококарин количество плесеней снизилось в 1,3 раза, дрожжей — в 2,3 раза, чем у телят контрольной группы.

3.7. Влияние тококарича на содержанке в сыворотке крови телят каротина, витамина Л и токоферола.

Полученные данные свидетельствуют о том, что пробиотик тококарин способен повышать содержание каротина и токоферола в сыворотке крови телят молочного возраста. Результаты исследования сыворотки крови телят на содержание каротина, витамина Л и токоферола представлены в таблицах 7 и 8.

В первом опыте полугены положительные результаты. Так, содержание каротина в опытных группах уже в возрасте 30 дней превышало контроль и составило в контрольной группе 0,49 мкг/мл, в опытных - 0,56-0,58 мкг/мл, однако повышение было не достоверно. В возрасте 60 дней этот показатель составил в контрольной группе 1,80 мкг/мл, а в опытных - 2,58-2,78 мкг/мл, что превысило контроль на достоверную величину- 43,3-54,4% (Р<0,001).

Содержание витамина А и токоферола в сыворотке крови с возрастом увеличивалось во всех группах, что характерно для животных данного возраста. В возрасте 60 дней содержание токоферола в сыворотке крови телят в контрольной группе составило 1,11 мкг/мл, а в опытных группах -1,58-1,54 мкг/мл, что на 38,7-42<0,01) выше по отношению к контролю.

Содержание каротина, витамина Л н токоферола в сыворотке крови телят в первом опыте (гг-4)__

Витамины Группа телят Возраст телят, дни

3 30 60

ЇІ

Каротин, мкг/мл Контрольная 0,22*0,08 0,49*0,08 100 1,80*0,17 100

Опытная-1 0,2610,09 0,5610,09 114,3 2,5810,10** 143,3

Опытная-2 0,2310,12 0,5810,08 118,4 2,7810,15** 154,4

Витамин А, МЕ/мд Контрольная 0,4010,046 1,1210,18 100 1,88*0,06 100

Опытная-1 0,4110,073 1,1810,25 105,4 1,9510,21 103,7

Опытная -2 0,4310,15 1,18+0,18* 106.2 1,96*0,17 104.2

Витамин Е, мкг/мл Контрольная 0.50*0,15 0,75*0,25 100 1,1110,17 100

Опытная-1 0,5110,11 0,89*0,13 118,7 1,5810,077* 142,3

Олытнзя-2 0,5740,17 0,89+0.16 118,7 1,54+0.10* 138,7

Р< 0,01; **Р <0,001. %* - по отношению к контролю

Таблица 8

Содержание каротина, витамина А и токоферола в сыворотке крови телят во втором опыте (п=5)_

Витамины Группа теаят Возраст телят, лнн

3 30 60

% %

Кзрогин, м кг/мл Контрольна» 0,22±0,10 0,38±0,07 100 1,33*0,10 100

Опытная 0,2010,07 0,5010,07 131,6 1,8810,28" 141,3

Витамин А, МЕ/мл Контрольная 0,41 ±0.13 1,05*0,066 100 1,5110,25 100

Опытная 0,37*0,15 1,1310,16 107,6 1,7010,25 112,6

Витамин Е, мкг/ил Контрольная 0,55*0,10 0,74*0.10 100 1,03*0,07 100

Опытная 0,5310,12 0,87*0,06 117,6 1,4410,15* 139,8

*Р<0,01; *"Р < 0,001.

Несмотря на то, что доза тококарина во второй опытной группе была выше, чем в первой опытной группе в 2 раза, динамика содержания витамина А и токоферола в сыворотке крови телят между ними существенно не раз-

личалась. По содержанию каротина между опытными группами в возрасте 60 дней в первом опыте разница недостоверная.

Полученные в первом опыте данные по влиянию тококарина на обеспеченность организма телят витаминами были подтверждены во втором опыте. Содержание каротина в опытной группе было достоверно выше по сравнению с контролем (Р<0,001), витамина А с возрастом увеличилась, но оставалась недостоверной. В возрасте 60 дней в контрольной группе содержание токоферола в сыворотке крови составило 1,03 мкг/мл, а в опытной - 1,44 мкг/мл,что на 39,8% выше контроля (Р<0,01).

2,8. Экономическая эффективность применения тококарина в рационах телят молочного перлона.

Экономическая эффективность от применения тококарина в рационах телят в дозе 5 млрд. клеток составила 1,6 руб. и 3,27 руб. на рубль затрат в первом и втором опыте соответственно.

ВЫВОДЫ

1. В лабораторных условиях получена сухая форма нового пробиотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100.

2. Штамм №100 устойчив к нистатину, полимиксину, малочувствителен к стрептомицину и чувствителен к группе тетрациклина н высокочувствителен к группе пенициллина.

3. Тест - культуры: Micrococcus lysodeicticus, Е. coli АТСС 3912/41, Micrococcus flavus, Rhodococcus sp. 21, Micrococcus luteus, Sarcina lutea ATCC 939, Salmonella abony 103/39, Bacillus cereus var. mycoides 537, Bacillus cereus ATCC 11778, Str faecal is. не оказали подавляющего действия на штамм №100 в условиях in vitro, за исключением Bacillus subtilis ATCC 6633.

4. Введение водорастворимого сукшіната хнтозана «Р» ММ 80кДа (рН-7,4 степень дешетилирования 84%) в агаризованную среду не оказывает отрицательного действия на рост штамма №100, что дает возмож-

ность применять пробиотик тококарин совместно с хитозаном данной марки в животноводстве.

5. Препарат то ко кари н при хранении в готовом виде сохраняет активность в не герметизированной упаковке в течение 6 месяцев при температуре не выше +20°С.

6. Препарат тококарин сохраняет свою активность в составе комбикорма К-62-2 и прем икса П-62-2 в течение 6 месяцев на уровне - 84 и 77 % соответственно.

7. Применение пробиотнка тококарина в рационах телят способствует повышению среднесуточных приростов на 6,9-11,5%, сокрашает количество дней с расстройством пищеварения в 1,9-2,3 раза по сравнению с контролем.

8. Пробиотик тококарин стимулирует реакции неспецифического иммунитета у телят - повышает лизошімную и бактерицидную активность сыворотки крови телят.

9. Пробиотик тококарин оказывает благоприятное действие на микрофлору желудочно-кишечного тракта телгг - снижает количество бактерий труппы кишечной палочки, стафилококков, дрожжей п плесеней в кале телят.

10.Применение пробиотнка тококарина в кормлении телят достоверно повышает содержание в сыворотке крови каротина на 41*3-54,4% и токоферола на 38,7-42,3%.

11 .Эффективная доза препарата тококарина для телят 1-30-дневного возраста - 5 млрд. клеток, 31 -60-дневного возраста - 500 млн. клеток иа голову в сутки. При увеличении дозы в два раза положительный эффект сохраняется без отрицательных последствий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендовать производству лабораторный регламент получения сухой формы нового пробнотмка тококарина на основе токоферол-синтезирующего штамма JfslOO.

2, Рекомендовать использовать пробнотнк тококарин при выращивании новорожденных телят в возрасте до 30 дней в дозе 5 млрд. клеток, ас 31 дня до 60-дневного возраста - 500 млн. клеток на голову в сутки для повышения жизнеспособности.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шайдуллина Р.Г., Пивняк И.Г., Заболотский В.А., Стукалова J1.H., Чи-нина Т.В., Михеенко В.М. Новые пробиотические препараты для животноводства^/Аграрная Россия.-2000.С. 64-69.

2. Шайдуллина Р.Г„ Заболотский В.А., Стукалова Л.Н., Минина Т.В., Михеенко В.М., Фоломова Е.О. Новые пробиотики для молодняка сельскохозяйственных животных и птицы./ Третья международная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». Тез. докладов ВНИИФБиП с.-х. животных, Боровск.-2000.~С.440-441.

3. Фомиче в ЮП., Шайдуллина Т.В. Пробнотнк тококарин в рационах животных. // Зоотехния. - 2003. №3. - С.18-19.

4. Шайдуллина Т.В. Новый пробнотнк тококарин и его влияние на естественную резистентность телят ./Материалы 52-й научной конференции молодых ученых ц аспирантов. ВНИИ животноводства. - 2004. - С.41-

45.

Издательство РУЦ ЭКТЖ 142132, Московская обл., Подольский р-н, п. Дубровины Tw». (Î - 27) 65-14-24, (8 - 27) 65-14-07

Сдано в набор 24.05.2004. Подписано в печаті 25.0t5.2CKM _Заказ Jft ДО. Печ. я. 1,0 Тираж 100 з«._