Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние тимозина на кроветворение и иммунопоэз при тимэктомии

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Влияние тимозина на кроветворение и иммунопоэз при тимэктомии"

Р Г Б и«

1 о ДПР №95

АКАДЕЛШЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИОХИМИИ

На правах рукописи

УДК 615.37

ЖУМАШОВ Сайдулла Нурахович

ВЛИЯНИЕ ТИМОЗИНА НА КРОВЕТВОРЕНИЕ

И ИММУНОПОЭЗ ПРИ тимэктомии

(03.00.25 — клеточная биология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ТАШКЕНТ — 1905

Диссертационная работа выполнена на кафедре медицинской биологии и генетики Ташкентского педиатрического медицинского института МЗ РУз.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

| А. Т. Акилов |

доктор биологических паук, профессор К- Н. Нишанбаев. Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

К. Р. Тухтаев,

кандидат биологических наук, доценг П. Р. Алимходжаева. Ведущая организация: Ташкентский Государственный университет.

Зашита диссертации состоится » . 1995 года

в «.-/у» часов на заседании специализированного совета Д.015.16.21 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Институте биохимии АН РУз по адресу: 700143, г. Ташкент, ул. X. Абдуллаева, 56.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии Академии наук Республики Узбекистан.

Автореферат разослан « Ж » Ос 1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор биологических паук

С. А. БУРХАНОВ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАШТЫ

Лктуальность_г12пблему. Исследование функции тимуса, центрального органа иммунитета, обусловлено необходимостью разработки научно обоснованной патогенетической коррекции многочисленных патологических процессов и нммунодефииитных состоянии организма, сопровождающихся нарушением функции кроветворно!! и иммунной систем. К настоящему времени накоплена обширная информация об иммунологических свойствах тимуса, обеспечивающего становление иммунокомпетентности клеток-, регулирующего нормальное функционирование всех звеньев системы иммунитета и иммунный гомзостаэ (Петров Р.В. с соавт.,1987; Пол У., 19i_f/; Mnyja!-нпчепко И.В.,1989; Еатырбеков Л.А.,1930; Ломакин U.C.,1990; Ярилин Л.Л.,1990; Николаев А.И.,1992; Аллаярова Г.il.,1993; Петрова Т.Л.,1993).

!!зучсниз патогенеза иммунодефицитов является ваянеШсей. зздачей клинической иммунологии, так как только на основе изучения механизмов, приводящих к тем или иным иммунным нарушениям, возмо~лы совершенствование дифференциальной диагностики и разработка адекватных методов коррекции. Развитие иммунодефи-цитного состояния не только способствует росту заболеванин,но и вызывает повышенную чувствительность организма к различным '¡.акторам окрулсагацсЗ средн. В езязи с этим, актуальным является вопрос о механизмах действия тимозинов на организм с HeMOHeH'nf иммунной реактивностью. Удобной моделью приобретенного игмук->-дефинитпого состопнля является тимэктомия, которая нарушает развитие реакций киеточного и гуморального иммунитета и существенно влияет на гемопоэз.

Исследования влияния тттэктомии на гемопозтичоские клетки, такде имепт палное значение для понимания патогенеза нммукоде-фицитов. При этом изучается Т-лимфомпти и их субп^пуляши,контролирующие пролиферацию, дифференпировку, миграции гемопооти-ческ:гх клеток на самих различных стадиях их образования, ш: влияние на восстановительные, регенераторные процессы.!! на стимуляция пролиферативной активности клеток крови. Однако механизмы формирования Т-клеточкого нумунодефшнта на сегодняшний день остаются мало изученными.

Регуляторныо пептип,н, пыделенньо из тимуса, обеспе"игглт дифференцировку стволовых крозетворпих клеток в иммунокот.'пе-

- I -

тентныо и обладают высокой биологической активностью с многогранной функцией (Никольский И.С..Гриневич A.A.,1989;Морозов B.F.,Хавинсон В.К.,1989; Хмельницкий O.K. с соавт.,1989; Гриневич Ю.А..Чеботарев В.Ф.,1989; Арион В.Я.,1989,1990;. Миркама-лова Э.Г. с соавт.,1991; Джураева Н.Р. с соавт.,1992; Мухамедь-нрова Н.Л. с соавт.,1994). В этом аспекте большой интерес представляет изучение влияния тимозинов, полученных из тимуса разных видов животных, на гемопооз и иммуногенез как при генетическом (врожденном) отсутствии тицуса, так и на модели его экспериментального удаления, что способствует получению новых данных о механизме их регуляции и разработке оптимальных способов широкого применения их в медицинской практике.

Несмотря на достигнутые успехи в изучении иммунобиологии гормонов тимуса, многие вопросы, связанные с развитием иммунодефицита при повреждениях тимуса, и его взаимосвязь с нарушениями в системе крови, применением химозинов для восстановления нарушенных функций кроветворной и иммунной систем после тимоктомии, изучены недостаточно и требуют дальнейших исследований.

Цель_и_задачи_испледпьания^ Целью настоящей работы явилось изучение гешпоэоа и некоторых иммунологических показателей у крыс притимзктомии и введении им тимозина в различные сроки исследования.

Исходя из цели исследования, были поставлены следующие , задачи:

- изучить влияние тпшктотлш'на количественный состав клеток костного ь.озга и периферически!! крови;

- изучить влияние тнмэктоинн па пролпферативкыо и антите-лг,образующие функции нииунокошетентньи: и кроветворных клеток;

- исследовать гемппоэз при введении тиу.озина тниэктоми-рпсанним .животным;

- пссяодоьать влияние тпкозина на некоторые иммунологические показатели ткшктпмироааннше ыивотнцх. ' ' \

Научная^!описна_и_пслктнческ влияние тиыозииа (фракцлл-5), выделенного из тимуса 2-3-днев-них ягнят каракульских овец, на кроветворение.и шфнопоаз тимэктомкрованных половозрелых белых крыс. При отпм установлено, что тпмозш обладает ьир/кяышой гено- 'И ищуностт$глир;/~

П'дой активнпстью. Под действием тимозина уволичип.к г.:* к"Д»1ч • стпо лимфоцитов в костном мозге, селезенке и периферической крови. Нормализуется повышенное количество клеток грпнулоци-тарного ряда. Инъекшя тимозиня тимзктпмирпванним крысам стимулирует и восстанавливает у них реакции клеточного иммунитета, попыпает прояифератионую активность Т-лимфопитов, ускоряет диф-ференцировку клеток - предшественников костного мозга и антите-лообразутощих клеток в селезенке.

Полученные результаты свидетельствуют о ва?'лоГ1 роли тику-са в гемо- и иммунопоэзе, в патогенезе иммунодефимита и учог-тии его гормонов в профилактике различных иммунодефимитннх состояний организма; способствуют дальнейшему углублению и расам-рению сведений о влиянии тимзктомии на гемо- и ш/муногг-оз. п компенсаторно-приспособительном функционировании иммун^к^/пе-тентных клеток и возможностях применения тнмозина для восстановления и обеспечения иммунного контроля гомеостаза, помогут прогнозировать нарушения в системе кропи после тнмэктомш! и осуществлять необходимую их коррекция.

Получение тимозина в больших количествах реально, так как имеется огромное количество сырья (тимус плодов н ноипрод-дскных овец), и без особых затрат на промышленной основе мокно наладить выпуск препаратов, что позволяет надеяться в бли:*аП-шем будущем на использование их.в практическом здравоохранении, Тимозины разной степени очистки могут наЛти н«сксе пригпглмо в клинической практике и ветеринарии в качестве крове- и пгму-нокорригирующих препаратов, могут бить использованы для коррекции гемопоэза при генетических и приобретенных иммунодефицита*. Оснознне_положсния_диссе]2Т^ииА БШосигае_иа_ опщгг^:

- установлена реакция системы крови •••> гг■ г:т-ческих гормонов, которая сопровождается угнетением лимрипт^-поэза, эритрппоэза и усилением гранулецнтопозпо.;

повреждающее влияние тимзкгемш на ге!.->позз ркр-агл-эт-ся в торможении развития и иедукцик, пролв.£ораш>1 и дцф^р'-нци-ровки отдельных ростков мнелонднж злементов костного мозга;

- введение тимпзина тишк?тпч,"»чаниып »ввотним оказывает стпгтулируищее влияние но. ггмо- и лимф^ичтопозз. Увеличивается сод^рупние ликр-чхитоп в ликф>" :.>.ьч «{н'пнпх. Усалирэ'тея днфр'рг-'нцнг-пзкя. зрптр'-'кдных ;: «к,;; "плетет пых клеток "нотем

- игл1унокорр«гируюи';е действие тимозина проявляется в активации антителогеноза и бласнюГ: трансформации лимфоцитов;

- некоторые представления п механизма действия химозина именованы на стимуляции уинунного ответа, восстановлении кро-г' 1 порения и его участия в механизме регуляции гемо- и т.муно-п-аза.

Материалы диссертации обсуждены на Республиканской научной конференции анатомов,• гистологов- и эмбрис лопв (Ташкент,1992); на I съезде морфологов Узбекистана (Таш-г.счт,1993); на научной конференции, посвященной 20-летию Таш-¡(N5! "Актуальные вопросы медицинской науки и здравоохранения" (30 кап, Ташкент,1994).

О^ликащш^ По материалам диссертации опубликованы четыре печатное работы.

■'•' сертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания ьятериалов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсувденш заключения, выводов и списка-цитируемой литературы, вклачающе-го 225 источников. Работа изложена на '240 страницах мшпино' писи и включает 20 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛВДОВАНИЯ

Объектом исследования служили 340 самцов половозрелых бе лых крыс с начальной живой массой 120-150 гр.

Для изучения показателей гемопоэза и ш/мункой системы в эксперименте животных подразделили на 4 группы:

- I группа - интаклние крысы (контроль);

- 2 группа - ложнооиерированные крысы (контроль);

- 3 группа - тимэктп.-.ированные (опыт);

- 4 группа - тимэктомировалнью, получившие тинозин (опыт

Материалом для исследования служили периферическая кровь

костный мозг н селезенка вышеуказанных групп кивотных.

Геуатологнческие_исследования^

В периферической крови определяли процентное содержание гемоглобина, количество эритроцитов, ретикулшитов.лимфоцнтпг нейтрофилов, моноцитов общепринятыми методами. Для подсчета эритограмма, миелпгрзммы и лейкограммы готовили мазки периферической крови и отпечатки из йостиого'мозга1 с последующей окраской по методу Паппенгейма-крикоиа ^Золотницкая Р.П.,19ЕГ

Для ппредеж ния миел жартци'ю» шпг-льзовали !!nnn|.n;,i;.,biai, метод В.Л.Котоиа (1907).

Разделение форменных [элементов проводили с использованием снеси растворов фиколл-верографпн плотностью - 1,07?.

Для отделения лейкоцитов из цельной крови использовал» осаждение на растворе желатина.

У L' I. У U Q 4 О СI! Li s Г 15 ё _ I! £ с j I е я п u ajj и л ^

Н.'.ч'уннмЯ ответ на эритроциты барана определяли по количеству антителообразумцих клеток в селезенке (АОК) ирякл.! кето-д.1Н ... jU I'¿'nie , A.A.üopdin (1963). ПролиТерацип Т- и В-ли;:фо-цитоп исследовали с помочью реакции бласгтрансфорьшшц (Линг Н.Х., 1971) в 1'икроиодк рнкацин В.В.Хоробрых с соавт. (I9Ü3).

Тимэктомия производили по методу С.Г.I'асаноиа,Г.С.Якуг'ч.й, (1961), описанному 3.Kei,иловой (1984). Исследгшание провопили через 1,2,3,6,3,12 месяце:; после т;л*.г7пкии. Материалы (i^in«» у декапитированних г.ипотких.

llQ^YH^llli2_Liбиологическн_активного фактора J. ри-Lüü^üüül-TtlwiSä.SCU'JIj. Ьюлогически активные фракции "э тику; а новорожденных каракульских 2-3 диевннх ягнят получали по сил-дпртно'л гетоду ( A.i,.Ooldntejin ot aJ., 197'.'; Г.А.Ноориг с I а:., 197с; Илколаев ¡\М. tV.at<yvw Г.Ц.

Определение дозороЯ _зцвис11»'ост;|. биологической актиркои-. ■! THt,'oei;!!a (фракцня-ü) пгюн^дя"¡"т пр&звнртеельно по изренглг;; числа т,2-.уш!ых розеткообразугглчх клеток (п!0;0 на лнпроп:пз.\ пернфер-шеско;! крови иитактша. и имг.унодефнцн'гних крыс.

Тимо3;!н_3_3оэе_1,0_мкг_на_кг.ысу ВВОДИЛИ тт-ЭКТпИф-Ш''.!!!.! Т1 крысам s течеик» 10 сучок на ^^зйоллгр.чос::^.:

рпстг.фз по ир"хо:?деш-'о I,2,3,Ь,9,12 : чдс/г к-сле -гимэ-г.осл!!. Кот-рольние пшозшге по fiitaaor:pnir,tf гх'.л*е п.гпуч-ш« апт;".геип>;л физ^плогипвскиП р?СТЕор.

три-идонноЛ статигттш (Виленыктг. !(,)•• Л.С,.

I>1; РщтцкиЯ Н.Фч.1573), Достоверное1:ь psswrmrt mb-mmri-v; с пог'-"!Ьч критерия Птшпент*. (inaiep-s) i? ктмтерР:! '.\"!Г, пр^мино-р уровень Я!МЧг.т«остл. Обрчяо? г у со'!":'." ггог-о;!':"'', к», f.": . ч

Р£ШИТлТи И 1К СБСУВД'ШЕ

В периферической крови крыс через 1 месяц после тимэктомии паблюраотсн уменьшение содержания гемоглобина, общего количества эритроцитов и лейкоцитов. Количество ретикулоцитов, нейтро-¡¡илышх гранулоцитои и моноцитов увеличивается. Появляются единичные базафмьшв клетки. Существенные изменения сбнаруживают-ся и в последующие сроки - 2,3,6,9,12 месяцев исследования после тимэктомии. Через 3 месяца после удаления тимуса содержание гемоглобиг составило 107,0+1,0, против 148,0+7,0 Г/л, общее количество эритроцитов и лейкоцитов соответственно 4,1+0,1 -6,75+0,6 млн. в Т/л и 7,78+0,3 - 12,6ч0,9 тыс. в Г/л крови. Достоверное снижение средних величин содеркания гемоглобина отмечается в 2,3,6 месяцев после тимэктомии, а количество ¡эритроцитов имеет лишь тенденцию к некоторому снижению по сравнению с контролем. Общее количество лейкоцитов на всех сроках исследования уменьшается, достигая контрольных значений к 12 месяцам после тимэктомии. Количес" о ретикулоцитов значительно увеличивается в 2,3,6 и 9 месяцев после тимэктомии.

Анализ лейкоцитарной формулы показывает, что количество нейтрофилов постепенно увеличивается, достигая максимума через 3 и 6 месяцев после тимоктомии,,а к 12 месяцам нормализуется. Достоверное увеличение их количества происходит, в основном, за счет сегментоядершх я палочкоядерньгх найтрофилов. Уменьшение общего количества лейкоцитов после тимэктомии отмечается за счет резкого снижения числа лимфоцитов в. периферической крови. Через 3 месяца после тимэктомии количество лимфоцитов уменьшается почти в 2 раза и составляет .всего 47% от контроля. Лимфо-пенил наблюдается во все сроки после тимэктомии. Заметное повышение числа моноцитов наблюдается на 3 месяце, а в остальные сроки исследования определяется в пределах колебания контроля. Существенный изменения наблюдаются и в количестве оозинофнлов и басофилов у тимэктошрованных крыс. Начиная с первого месяца, число эозинофнлоп увеличивается и ото обмечается до конца • наблюдения. I

Таким образом, после тимэктомии показатели периферической крови претерпевают существенные изменения, вцранавадоеся

в достоверном снижении, особенно через 3 месяца, гемоглобина, количества эритроцитов,.лейкоцитов, лимфоцитов и в повышении количества ретикулоцитов, нейтроф1льних лейкоцитов,моноцитов.

На II день от начала введения тимозина 30-дневным тимок-томированным животным, в периферической крови обнаруживается восстановление нарушенных показателей гемоглобина, общего количества эритроцитов, лейкоцитов и лимфоцитов до нормального уровня. Повышенное количество ретикулоцитов, нейтрофильных гранулоцитов, эозинофилов и моноцитов несколько уменьшается и находится в пределах контроля. Аналогичная нормализация нарушенных гематологических показателей наблюдается и при исследовании в пер!фер!ческой крови после 10-дневного введения тимозина 2,3,6 месячным животным. Однако при введении тимозина тим-эктомированным животным в сроки 9 и 12 месяцев после операции наблюдается превышение отдельных показателей в периферической крови по сравнению с контролем. ¡Зирзкенная панцитопения наблюдается после введения тимозина и сопровождается достоверным увеличением изученных показателей крови от уровня показателей контроля (тимэктомии) и особенно, в содержании гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов (рис.1) и утленыпении количества ретикулоцитов, нейтрофгльных гранулоцитов (pic.2) и моноцитов до нор/альшх значений (интактный контроль).

Таким образом, ежедневное введемте тимовина (фракция-^) в течение 10 дней в дозо 1,0 мкг на тлмэктомнрованное животное в различные сроки после операции полностью восстанавливает нарушенные гематологические показатели в периферической крови, а в поздние сроки (9,12 месяцев) после тимэктомии отдельные показатели несколько превышают контрольные значения интакткых крыс.

Для динамики нарушений в костном мозге тимэктомированных нипотных характерно незначительное снижение общего количества эритрсидгах клеток. Максимальное уменьшение числа эритроидных элементов наблюдается через три месяца после тимэктомии, в основном, за счет полихромато'^ильных норчобластов и составляет более 40% по сравнению с контролем. Наименьшее изменение' отмечается з количестве базофпльпых нормобластов, а число окси-фильных норлобластоп находится в пгк\^ела.ч контроля. В то ко

%

70 ¡50

50 40

30

20 10

I 2 3 б 9 12 (мз с)

Рис.1. Динамика иэмзгенл . лимфоцитов о периферической крови тимэкгамировашых крыс после шгьекции тимлзина.

1. Иктактнио (контроль) .............. ■

2. Тимэктомия (опыт) -------

3. Тимэктомия + тимозин (опыт)--- .

&

/о

50

40

30

20 10

.юс)

Рис.2. Динамика изменений нейтрсфилов в периферической крови ти мэ к т о ми р о в аиных крыс после тгьекции тнмозина.

1. 11нтактные (контроль) ............

2. Тимэктомия (опыт) . __ __ _

3. Тимэктомия тимозин (ого55.__

- 8 -

время, наблюдается достовернее увеличение количества ноднф{о~ ренцированних бластов, эрмтроОластов, пронормобластоп. Шшэот-меченныз количественные изменения среди клеток зр-1троидного ря-)ш. костного мозга определяются такхе в сроки 2,6.9 месяцев после тимэктомии. Через 12 месяцев общее количество недифференцированных бластов, эрнтробластов, пронсрчсбластов к нормоблас-тов разных генераций, а так:ке количество митозов и общее количество орлтроидных клеток у тимэктомнрованшх кшс нормализуется.

Для клеточных злеменгов гранулоцктопоэза в костном мозге •п^юктсмированных крус характерно увеличение количества грану-лсцлтов и их предшественников, начиная с первого месяца после операции. Со стороны нептрофилышх гранулоцитов отмечается постоянное увеличение их количества по сравнении с лояноопериро-ванным контролем. Постепенное увеличение миелобластов и неитро-¡]1.'лов всех генераций наблюдается в 2,3,6,9 месяцев, а количество прсшелоцитов, мнелоцитов,. метамиелоцитов достоверно повинуется в сроки 3,6 месяцев после тимэктомии. Общее количество гранулоцнтсв после тимэктомии во все сроки исследования увеличивается по отношению к контролю. II 12 месяцам после тимэктомии в костном :;сзге наблюдается угзньзнниэ поеыпзнного количества клеточных элементов гранулоцитопоэза, которое достигает средни:-: пснтролы-зга значении« Количество эосинофчлоз постепенно увели-чпе-тзтсл, особенно в 2,3,6 месяцев после тимэктомии. Наблюдается увеличение количества моноцитов и их прздиествзнников. .

Дш/фопоэз в костнал мозге после тимэктомии угнетается во вез срок"! (от I до 12 месяцев) исследования. Уменьшение количества лимфоцитов происходит» з ссновнс.'«, за его? снижения числа п развития их предшественников. К 3 месяцу после операции количество лийфоцчтов уменьшается до 35%, а ллмасоластов и пролнмфобластоэ на 50&. Достоверное укеиыпегеп числа лимфоцч-топ наблвдавтея в сроки 2.3,6 месяцев после тнизтгсс-'Г-л. До кони» исследования кодичосгво костномозговых зцптов но достигает уровня лсжноспзр;ро~.анпого контроля,

'!с:г.по заключать, что гг;!.!э:-:тсг,пл приводи".: :с повыи-зг.ш со-, депглнхп г.з зрелых зрятрсидинх клеток, грянулсг;гтоб п мс-но-ц::то:зг ектлени?) кояшгсетвя гифэдатсп и ах прйд-тэствеиникоэ.что

свидетельствует о нарушении костномозгового гемопоээа и сдвиге дифференцирпвки стволовых клеток в сторону гранулоцитопоэза.

Введение тимозина тимэктомиропанним крысам в различные сроки исследования (I-I2 месяцев) показывает его стимулирующее действие на эритро-миелопоэз. После окончания инъекций тимози-на и по истечению 1,2,3,6,12 месяцев после операции, наблюдается прогрессивный рост эритроидных и миелоидных элементов кроветворения в костном мозге.

В эритроцитарном ростке гемопоээа наблюдается уменьшение повышенного числа недифференцированных бластов, эритробластов, пронормобластов по сравнению с контролем. Увеличивается количество базоф)Ильных и полихроматофильных норыобластов. Нормализуется количество митозов и общее количество эритрпбла:тичес-ких клеток во все сроки наблюдения.

Независимо от срока удаления тимуса после Ю-дневной инъекции Тимозина наблюдается уменьшение количества гранулоцитар-ных элементов до уровня интактного контроля. Повышенное количество миелобластов, незрелых унейтрофилоБ, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, митозов и суммарного показателя гранулоцитов нормализуется. Также отмечается некоторое снижение увеличенного общего количества миелокариоцитов. Инъекция тимозина в различные сроки после тимзктомип показывает, что количество .миелобластов, нейтрофильных проииелоцитов, шелоци-тов и сегментоядерных гранулоцитов находится на таком пе уровне, как у ложнооперированнпго контроля, а количество палочкоядерных гранулоцитов как в случае послэ тимэктомии, так и при введении им тимозина, несколько превышает контрольные значения интактшх животных. Особенно это наблюдается при инъекции тимозина в сроки 2,3,6,9 месяцев после тимэктомии. Общее количество митозов среди миелокариоцитов уменьшается.

Инъекция тимозина тимэктошровашыы крысам существенно влияет и на уменьшение количества эоэинофильных и базофильных клеток. Количество моноцитов и их предтественников несколько снижается по сравнению с тимзктпшрованным контролем. Значительно увеличивается количество лимфоцитов и кх предшественников. Достоверное увеличение лимфоцитов наблюдается при инъ-екцин тимозина тимэктомированным крысам в сроки 3,6,9 месяцев и достигает уровня интактного контроля. Преимущественное влия-

ние тимозина б основном направлено на увеличение количества лимфоцитов и их предшественников в костном мозге'тимэктомлро-ванних крыс.

Таким образом, выявленные нами количественные и функциональные: нарушения в периферической крови и костном мозге в различные сроки после тимэктомии можно объяснить отсутствием тимуса и рассматривать как результат его непосредственного нлиьннл на гемопоэз, что вполне согласуется с данными, полученными другими исследователями (Карпова Е.Б. с соавт.,1979; Гольдберг Е.Д. с соапт. ,1983; Афонин A.D. ,1985; Королева H.A. ,1967; Andoruon et al., 1977; I.ähorinnn et al., 1983 и т.д.).Однако функциональные изменения в костном мозге в достаточной степени могут компенсироваться организмом и за счет других механизмов регуляции, так как процессы пролиферации и ди^еренцировки эритроидних клеток находятся под контролем эритропоэтина.бурсо-моторной активности, стромального окружения, системы кейлонов, антикейлонов и т.д. ( C.i'eschle ßt al., 1975). Поэтому повреждение какого-то одного из регулирующих механизмов может компенсироваться (в большей или меньшей степени) за счет усиления функционирования оставшихся не поврежденными соответствующих механизмов регуляции. После тимэктомии половозрелых крыс механизмы компенсации могут оказаться достаточными для поддержания кроветворения на близком к нормальному уровню. й.Влияние_тимозина_на_им^ноп

При изучении антителообразуккцих клеток (АОК) в селезенке тимэктомированшх крпс иммунизированных эритроцитами барана СЭВ) наблюдается увеличение количества ядросодержащих клеток по отношению к контроля. По мере нарастания дефицита гормонов тимуса, через 3 месяца после тимэктомии, число ядросодержащих клеток в селезенке тимэктомированных крыс существенно повышается и составляет 598,6+69,7 против контроля 263,6+94,2 на 10^ лимфоидных клеток. Достоверные изменения в количестве ка-риоцлтов отмечаются начиная с 2 по 6 месяцы после тимэктомии. Через 9 месяцев наступает уменьшение их количества, а к 12 месяцам определяется в пределах колебаний контроля. Таким обра-' зон, тимэктомия впаивает значительное увеличение ядросодеряа-щих клеток в селезенке.

Исследования, проведенные на 11-е сутки после инъекции

тпиозина тиизктомпрованниы крисам в различные сроки после операции, показывают на уменьшение повышенного количества ядросо-держащих клеток в селезенке. Значительное уменьшение ядросодер-лс&цих клеток селезенки обнаруживается при введении тишэина крысаг.1 после 3 месяцев тимэктомии и составляет 378,2г5Э,5 против контроля 598,5^69,7 на Ю^лимфоидных клеток. Дальнейшее увеличение ядросодержащих клеток а селезенке после введения тимозина отмечается только у 40-суточных тимэктомировашкх крыс. А в остальные сроки исследования (70,100,190,280 суток) наблюдается значительное уменьшение ядросодерхащих клеток,' а на 370 сутки определяется в пределах контрольных величин.

Полученные данное свидетельствуют о том, что после удаления тимуса введение тимозина способствует значительному сшгае-шю повышенного количества ядросодергащих клеток селезенки к оказывает нормализующий эффект.

При оценке нмцушюго ответа лимфоцитов через 4 суток после введения ЭБ пнтактньш, ложнооперировщпшм и тимзктошрован-ншл крысам наблюдается формирование А0К разной степени. Угнетение образования А0К отмечается у;.:е через I месяц после операции, 1:ак у ложноопернрованнах, так л у тимэктоиированшх нивотных • по сравнению с г.ымуниэироваН!Шм контролем. Нормальный индекс активности нарушается. В это время г.нмушшй ответ существенно снижается по отношению к иммунизированному контролю. У неш,:му-яизнровакних ЭВ контрольных крис формируется менее 16 А0К на -10^ ядросодержацих клеток селезенки.

Количество А0К среди ядросодер:хзд1К клеток значительно уменьшается в связи с недостаточностью гормонов тицуса, особенно на 90 сугкн после тишктоши, Достоверные 0,05) изменения в количестве А0К селезенки наблюдаются у ач-шзктоикро-ваиних крис через 2,3,6 месяцев после операции. Антнтёлогеноз в селезенке крыс, цыыуцнзироватшх ЗЕ,,ср сроком £ и.эсяца пчеле тимэктомии снижается на 1,3 раза и 3 месяцев - на 1,В раза по сравнению с контролем. В более поздние сроки исследования (9-12 ыосяцэв) после тим.зктокии отда^^тся восстановление количества Л0К по отиоиениа к контроля. ,

Полученные данные позволяют судить о развитии выраженного угнетения игглуиной реактивности у тииоктоьа;роваиных крис. Глубина кммунодефишта прямо пропорциональна сроку (врешш)иоп-

ТО — л ^ —

ле тиглгтогии. Изменения количества А (Ж как на всю селезенку (абсоляти'./й показатель), так и на I млн. ядерных клеток селезенки (относительный показатель) показывает их тождественность.

Введение тимозина в различные сроки после удаления тимуса способствует значительному повышению количества A0IÎ в селезенке. В сроки I ¡1 2 месяца после тимэктомии инъекции тимозина вызывают достоверное повышение числа AÖK соответственно в 1,5 и 2,3 раза по сравнению с л":хно~перированным контролем,получившим физиологический раствор.

Увеличение количества ACIC в селезенке тимэктоуиропанннх крыс после введения тимозина наблюдается и в последующие 'сроки в 3,6,9,12 месяцев после операции. Однако, усиление ДОК после введения тимозина проявляет выраженную зависимость от срока, прошедшего после тимэктомии. Если в ранние сроки (1,2,Змееяда) после тимэктомии инъекция тимозина сопровождается стимулирующим эффектом, то в более поздние сроки (6,9,12 месяцев) отмечаются, в основном, восстановительный и нормализующий эффекты. Можно заключить, что тимозкн является эффективным им-муномпдулируащим средством при коррекции вторичных иммунодефи-цитньс! состояний,, в частности Т-иммунодсфицита.

Исследование включения эН-тимидина в ДМ лимфоцитов селезенки в культуре показывает, что разные клетки лимфоцитарного происхождения неодинаково реагируют на воздействие митлгенов. Индекс стимуляции бластн"Л трансформации лимфоцитов селезенки иитактных ясивптных, стимулированных с ФГА, значительно увеличивается по сравнению с таковыми у интактных животных, не инкубированных с ФГА и составляет в среднем 5766,6^103,8 против ,3 лип/мин. Влияние Кон А, нндуктора Т-супрессоров в системе ин витро, несколько ниже, чем при действии ФГА и индекс стимуляции лимфоцитов достигает величины 2757,2+97,1 против контроля 513,7^65,2. Индекс активности лимфоцитов проинкубированных, с ЛПС, оказывающих влияние в основном на В-лимфо-циты несколько изменяется по сравнению с иестимулированным ин-тактным контролем и составляем 406,5+46,5 против 255,3+41,5 нкпЛ-'.ич.

Изучение включения °Н тимидина в лимфоциты селезенки тим-эктомированник крыс, стимулированных ФГА в дозе 15 мкг/мл,показывает, что через I месяц после тимэктомии реакция бластной

- J3 -

трансформации лимфоцитов заметно снижается по сравнению со сти-' мулнрованным контролем. В то же время у ложнооиерированных животных показатели бластной трансформации лимфоцитов имеют тенденцию к увеличению. Начиная со 2 месяца после тимэктомии и, особенно, через 3 месяца индекс стимуляции лимфоцитов резко уменьшается, что свидетельствует о снижении уровня их пролиферация по отношению к контролю. Сниженная реакция бласттрансфор-мации наблюдается и через 6,9,12 месяцев после тимэктомии, но индекс стимуляции лимфоцитов значительно выше, чем в сроки I, 2,3 месяца.

При инкубации лимфоцитов селезенки в культуре с Кон А в дозе Ю мкг/мл у тамэктомироцанних крыс наблюдается резкое снижение синтеза ДНК, начинал с первого месяца после удаления тимуса по сравнению с интактным и ложнотимэктомированным контролем. Уменьшение включешш °Н-тимидина в ДНК лимфоцитов тим-эктомированных животных отмечается во все сроки исследования (1-12 месяцев) после тимэктомии.

Индекс стимуляции лимфоцитов у тнмэктомированных крыс при добавлении в культуральную среду ЛПС в дозе 25 мкг/мл существенно не изменяется по сравнению с контролем. Наблюдается тенденция некоторого увеличения включешш 3Н-тимидииа в ДНК лим-фицитов селезенки во все сроки (1-12 месяцев) после тимэктомии.

Видимо, как показано в работах ряда авторов, в ответе лимфоцитов тимэктомированных животных на стимуляцию митогенами наиболее чувствительными оказались ¿ТА и Коц А зависимые Т-суп-рессоры и менее В-лимфоциш (Валуева Т.К.,Малижев В.Н.,1976; Чеботарев В.Ф,,1900; Шубинский Г.З..Шергин Г.о.,1900; Петрова Т.Д., с соавт.,1909,1992).

Введение тимогина в различные сроки (1-12 месяцев) тимэк-томироранным крысам в течение 10 дней в дозе I мкг/мл на животное в сутки вызывает усиление пролиферации лимфоцитов селезенки. При инкубации лимфоцитов тимэктомированных крыс с ФГА наблюдается увеличение индекса их активности по сравнения с контролем, во все сроки исследования, но не достигает уровня ин-тактного и лоянотимэктомированного стимулированного контроля.

Увеличение пролиферации лимфоцитов наступает и при инкубации с Кон А у тимэктомированных крыс при инъекции тимоэина. Однако показатели индекса активности бластной трансформации

не превышают уровня интактнпго стимулированного контроля. Незначительное повышение активности отмечается и при инкубации • лимфоцитов с ЛПС, но чаще разница их ме:кду контролем не достоверна.

Т;ис.-л образом, м^жно заключить, что введение тимозина там-зктомироп.м-пплм крысам нормализует показатели функционалы!'»:! активности всех субпопуляшй лимфоцитов, а в случае инкубашш с ФГА усиливает их пролиферацию при сраьненни с интлктним контролем. ;

Согласно данным, полученными нами, при 10-дневном введший тимозина в различные сроки после тимэктомии установлено, что тимозин увеличивает число антиген связывающих клеток при снижении иммунного ответа у тимэктомированних животных. Аналогичное качества тимозина различных фракций приводятся в зарубех-мч) и отечественной литературе. В частности, Л- -тимозин ин ситро повышает активность Т-клеток супрессоров, увеличивает количество

1,2,3 лимфоцитов и продукцию интерферона и т.д. (Черненко С,Д.,Гриневич Ю.А.,1991).

Для ряда препаратов тимусных гормонов (тималина, Т-активи-на, тимотропина) основной клеткой - мишенью являются предшественники Т-лимфоцитов (ПТЛ) костного мозга, которые после обработки приобретают маркеры Т-лимфоцитов и некоторые их функции. Изменение метаболизма, некоторых иммунологических и биохимических параметров'под действием Т-активина показано в исследованиях В.А.Ариона с соаят.(1987). Возможность влияния экстракта тимуса на дифференцировку предшественников В-лимфоцит^в продемонстрирована в опытах с лимфоцитами шшей ( и.й.3с1ше1а еь в1.,1975).

Типические пептиды участвуют в изменении иммунологической реактизности не только через 'стимуляцию лимфопоэза, но п через усиление продукции гранулоцитов (Попов Б.В..Белокрылов Г.А., 1985; Филеев Л.В. с соавт.,1985; Калашников С.Г. с соавт.,1989; Базарный В.В.,Осипенко А.В.,1991). Тимозин стимулирует те лимфоциты, которые имеют пониженную способность к РВТЛ ( 1.3епааг вt а1., 1У74; 1).\Уага, 1975 ). Конкретные механизмы такого действия пока сложно объяснить, как и их непосредственное влияние на кроветворные клетки предшественники.. Возмолсно, этот аффект реализуется через изменение в клетках костного мозга уровня

циклических нуклеотидов и их состояния меаду собой, кик это. било показано при использовании Т-актишша п лечении экспериментальной анемии (Базарный Б.А.,1989). По-видимому, тимозины (как било показано при изучении Т-активина) выполняют иницирую-|11ую функцию. При их метаболизме в организме образуются аминокислоты, которые в минимальных дозах стииулкруцт иммунологические функции (Велокрнлов Г.Н. с соавт. ,19Ь5;1,К..Дои1 а1,1УВ1) и действуют на гранулопитопозз (li.Hutctii.nnon et а1.,13иЬ).

В заключении можно отметить о иммунокоррмгирувщем влиянии тимозина при тимэктомии, так как нами установлено, что тимозии принимает активное участие б восстановлении нарушенных функций гик:о- и иммунопоэза тимзктомированних крыс. При действии тимозина усиливается селезеночное и костномозговое кроветворение, вследствие чего активно функционирует гемопозтичепкио клетки, поскольку процессы пролиферации и ди'цференцирошш находятся под контролем Т-лимфоцитов. Также показано участие тимозина в восстановлении и нормализации количества предшественников имку-нокомпетентных клеток костного мозга, измененного после тим-эктоши, что представляет песоынипнп:! интерес в патогенеза иммунодефицита.

Ъ !.! О .!; 1! .

I. Тимэктомия у тлокозрелих крыс приводит к существенна изменениям основных показателе;! гепопооза: снп./лется содержание геног;:обина} об^ее количество эритроцитов, яойкоццмв и ■ -лимфоцитов; повышается количество ретикудоштог., пеитрофцлышх, эозинофил'ьных I? йазофнльицх гранулоцитов п парк ¡»ерячоокол крови; увеличивается пецее количество нредвиетве-наакои оритро- к миелопозза в коетцгя.! кпзге.

'¿. При тиыэкгоша в органнзио наблюдаете/; ни.^тде^йцит, сопровоадоациЯск угает&юы. клеточного и гуг-орадисого нг.^унь-тета (при этом подавляется йнтпте^ог>0разу.сд:ц; фушацш» бльст-наи трансформация лшроцигпв и увеличивается количество клеток предшестьснникоп лейко- к ли^лпоазн косшо^оигпаого кроаи-творения.

3. Достоверные изменения и снс-деьз крови I» т&уиптсаи ааб-««дия'^С!» через 2,3,6 не«.цзв после ч-аьакаоыи, когда значительна .ч.1г>уЕч-:)тея: регуляции 4-!>-"»'Г'рг»в ипу/юОк.ытмесипгп надзора, пронесся цт)оли|>сра1г.н1, дп1.4гпошп рог.ы. и Функциональной актив-

imcTU ¡"TjiTiB и клеток »шелоидчпт ряда, чт^ пличвт на ну-мунмы;i ';пстаэ.

4. Установлена ^нтияальиая доза (I мкг) тимооииа ирракгнп--5), выделенная из тимуса каракульских ягнят. При инъекции данной фравдш тирозина тимэкгазированным крысам проявляется его стимулирующее и .¡шпунокпрригируюцее действие, при этом наблюдается повышение уровня гемо- и иммунопоэза.

5. Ежедневное введение тимозина в течение 10 суток (в дозе 1,0 мкг на животное) тш/октомировалным крысам в разные сроки (I—12 месяцев после операции) вызывает активацию пролиферации и дифферент,ировки различных клетоодых популяций костного i.f-зга, стимулирует эритр~поез, лейк^поэз, развитие предшественников тимусзависимых лимфогит^в (ПТЛ),, снижает повышенное количество нейтрофилов, ретикулоиитов и нормализует морфологический состав периферической крови.

6. При введении тимозина тимэктомированным животным наблюдается стимуляция антитслогснеза, увеличивается включаег^сть эН-тимидина в ДНК лимфоцитов селезенки, особенно, через 1,2,

3 месяца после тимэктомии, при высоком индексе активности бласт-ной трансформации лим^опитоа различных популяций.

7. Эффективное влияние тимозина (фракции-5) на систему крови и иммунитета позволяет рекомендовать его для клинического испытания при лечении различных видов анемии, лиыфопении, имму-нодефицитов и при недостато'зюсти функции как центральных,так

и периферических лимроидных органов.

1. Акилов Л.Т. .Жумашов С.Н. »'.¡а^тов Ж.И. Влияние тимэктомии и тимозина на состояние естественных факторов иммунитета и на показатели лейкоцитарной формулы у крыс//Узбекский биологический журнал. - 1990. - .'.'s 2. - С.36-38.

2. Жумадюв С.Н.,Мамутов Ж.И..Нишанбаев К.Н. Влияние тимч-зина на содержание Т- и В-лимф~цитов и периферические органы иммунитета тигактомированнмх морских свинок//У.збекский биологический журнал. - 1990. - J," 4. - С.30-32.

3. Влияние тимэктомии и тимозина на процессы антителооб-разованйя - крыс/С.11.Жумашов,H.H.Мамутов,А.А..Батырбеков,Л.С. Усмакова,К.Н.Нишанбаев//Узбекский биологический журнал. -1991. - ja 5. - С.58-59.

4. lAyvaiunB C.H. ,11иыанбаев К.II. Влияние тимэктомии на пока-' загели периферической крови белых. крыс//Узбекистон морфологла-ринннг I съезди (Тошкент.октябр 1993 йил) илмий мдо^залар те-зиси. Ташкент. - 1993. - 129 бет.

Айрисимон бези олиб ташланганда кон ^осил килиш ва иммунопоээга тимозиннинг таъсири

Тимуси олиб талшанган каламушларда цон ^осил цилувчи аъэо-лар (периферии к;онда, суяк кумигида) хавда иммун системалардаги булчдиган узгаришлар ва уларга доракул цузичоцларидан олинган •i иг. <?ин-Ь фракциясининг таъсири урганилди. Айрисимон бези олш-I 'ж каламушларда 1,2,3,0,9,12 ойларда сезиларли узгаришлар со-дир оулди. Айнш;са 2,3,6 ойларда перйферик цонда эритроцит ва лимф"->цитларнинг миёрга ннсбатан камайиши аницланди. Ретикулоцит, нейтрофил, моноцит, эоэинофил, базофиллларининг миёрдан ошиши ва суяк кумигида кон хослл килувчп элементлар дифференциясининг буаилиши натижасида эритропоэз, миеЛопоэзларда сезиларли узгаришлар булди. Уларга тимозиннинг 5-фракцияси таъсир этиши натижасида эса кон х,осил цилувчи элементлар фаолиятишшг миёрга якинлошганлигн атщланди.

Айрисимон бези олинган кала;.ушлар кора таюгида антитело ^осил цилувчи хукайралар (АлКл) сони ва ядро тутувчи хужайра-ларда антителалар сонининг 100 ва 190 кунларида мьёрдая камаи-ганлиги аникланди. Тимозин-о фракцпяси таъсири нати;:;асида Ад1р1 сонининг мйёрга я^инлашганлиги >;ам кузатилди. Тимоктокиялангаи каламушларда лимфоцитларнинг функционал фаолия.тини ajiiiifлал1 мау-садида JH тимидшшинг Т-лимфоцитларга бирикиши ва Т-ли).х]роцит бласттрансформациясининг суний устнриш мухитидаги £'ГА, Кон А ва JiilG концентрациясига 1;ай даракада богликлиги }>ам аниь;ланди, Тимэктомия цилинган калаг.гушлцрда тимидкншшг Т-лимфоцитлар-га импулсли бириюгаинг г.амайнб борпши кузатилди. Т-лнмфоцит-ларнинг бластчрансфоркациясининг узгаришини учун асосан, ФГА, Кон А ва ЛИС нинг турли конценхрациясини цуллав мацсодга муво-фшудир.

0л1шган маълумотлар макмуаси тимознн-5 фрикцияси таъсири натилсасида тимэктомия килинган кала1.<ушлардаги i;oh >;осил 1$илув-чи аъзолар ва jiwyn снстемалар фаолиятининг мъёрга яцинлашнш механизм урганилдп. Цу эса клиник иммунология ва гематология аьшшётда катта оуа?.аштга ora.

THE EFFECT OF THYMOSIN PREPARATION ON TILE HAJSMOPOIiLTIC AND IMMUKE SYSTEMS OF ■ THYKOfcCTOMIZKD RATS

For the first time the effect of thymoaln preparation on haemopoetic and immune systems of thymoectomized adult white rata -;iaa investigated. The thymosin-5-fraction is the ayntho-tic preparation isolated from the. thymus of 2-3 day lambs.

There are many significant alterations in the haemopoie-tio and immune systems of rata aftex" thymoectomy especially on the -1st, 2nd, 3rd, 6th and 12th months following the onset of experiment. The most significant one characterized with decrease in a number of erythrocytes, lymphocytes, leukocytes and increaso in a number of polymorphonuclear and basophilic lymphocytes in periferal blood system took place on the 2nd, 3rd and £th months after thyrnoocTomy.

After thynoectomy the processes of -erythropoiesis, rayelo-poienis as well as cell differentiation in spinal marrow were disturbed. Being administered the thymosin-5-fraction preparation gave restoration of all parameters. The most grave disorders in the production of antibodies in rat spleen and nucleated cells too it place on the 100th and 150th duy after thymectomy, normalization of the process followed the adminint-ration of thymosin-5-fraction. Besides, we studied functional activity of lymphocytes, To achieve the purpose we studied 3/1 chynolin preparation, causing blast-ceil transformation in T-lycphocytefl (phytohemaglutemin, coneanavalin, lypopoly-glucose). In tnynoectomiaea rata there waa significant decrease in uaipulao combinations oi' T-lymphocyte 3/1-thyrridin. .'.'.itoijeria causing blaafc-ceil transformation were used in different concentrations. The results showed that thymcsin-5--fraction preparation restored disturbed functions of baemo-pciotlo and immune oystess.

The preparation, in question can bo recommended to be used in immunological and haomotological practice.