Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние пробиотиков на показатели резистентности и иммунный статус организма телят

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние пробиотиков на показатели резистентности и иммунный статус организма телят"

?7о

На правах рукописи СПАССКАЯ Татьяна Аркадьевна

ВЛИЯНИЕ ПРОБИОТИКОВ

НА ПОКАЗАТЕЛИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ И ИММУННЫЙ СТАТУС ОРГАНИЗМА ТЕЛЯТ

Специальность 03.00.13 — Физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 1998

Работа выполнена на кафедре физиологии, биохимии и микробиологии сельскохозяйственных животных Калужского филиала Московской сельскохозяйственной академии им. К. А. Тимирязева.

Научный руководитель — доктор биологических наук, профессор Н. А. Алфимцев.

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор биологических наук, профессор Ю. Н. Шамберео; кандидат сельскохозяйственных наук, доцент В. А. Афанасьев.

Ведущее предприятие — Всероссийский .научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных (ВНИИФБиП с.-х. живот'ных).

Защита диссертации состоится . . . ' . . . 1998 г.

в ..... часов на заседании диссертационного совета

Д 120.35.06 в Московской сельскохозяйственной академии им. К- А. Тимирязева.

Адрес: 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 49. Ученый совет ТСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке ТСХА.

Автореферат разослан........ 1998 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета —

Т. М. Подколзина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАВОГЫ Лктул'/ыюсти работы. Применение антибиотиков в живот поводе 1ве как ешму-ляторов роста, а также в качестве превентивной меры пролив желудочно-кишечных расстройств у животных приводит к распространению в микробных популяциях R-фактора устойчивости к антибиотикам, к возрастанию лекарственно-устойчивых микроорганизмов, в частности, эитеробактерий пищеварительного тракта млекопитающих. Эта проблема побудила ряд исследований, в которых препараты молочнокислых и би-фидобакгерий использовались ка : безопасная альтернатива низким доим ашибиоти-ков для предотвращения и, возможно, лечения кишечных инфекций у сельскохоштст-венны.ч животных (Mitsuoka Т., 1991; Fallon R., 1991, Duclii/eau R., 1991, Montes A., 1993). Препараты получили общее назпание пробиотики.

Молочнокислые и бифидобактерии являются частью нормальной микрофлоры пищеварительного тракта человека и животных, играют важную роль в обеспечении защитных функций, в становлении иммунного статуса организма. В настоящее время предпринимаются попытки применения пробиотикон в бактериопрофнлактике и бак-териотерапии. При зтом роль пробнотиков, содержащих молочнокислые и бифидобактерии, неуклонно возрастает.

Цель и задачи исследований. Цель исследований: изучить влияние пробнотнков-румеколакта, бифидумбактернна, биосана - на неспецифнческую резистентность н иммунный статус организма телят в раннем постнатальном периоде, сравнить эффективность их лечебно-профилактического действия. Задачи исследований:

1. Изучить морфо-бнохимнческне показатели крови телят при скармливании им пробиотиков г

2. Исследовать систему комплемента, лизоиимную и бактерицидную активность сыворотки крови* фагоцитарную активность неитрофнлов в зависимости от дош применяемых пробиотиков.

3. Определить дйнамнку иммуноглобулинов A-, G-, M в крови телят в связи с добавками в рацион проб/ютиков

4. Проследить сохранность, рост и ра)витие телят в зависимости от введения п их рацион рагнмных пробиотиков

Научнин пойти ¿i. 1! результате выполненных жсперимситои впервые получены данные, характеризующие влияние пробиогических препаратов на иммунологические пока ta к'ли крови и неспепнфичеекую pe me юн т пост ь юля г в раннем посгнатальном периоде. Покатана в сравнительном аспекте эффективность применения новых про-бношческнх препаратов - руменолакта. Оифндумблктерина и биосапа - в целях сохранности. стимуляции роста и рашшия телят в условиях промышленного животноводства, определены оптимальные дош препаратов ;итя телят раннего посгиаталыюго периода.

Практическая чиачимосп,работы. Уточнены лечебно-профилактические дозы исслелованнмх пробио1иков. даны рекомендации но их использованию для повыше- • ния неспепифической резистентности, иммунного статуса и продуктивности телят.

Анробшщя работы. Основные положения диссертации доложены на заседании кафедры фи нюлогии, биохимии и микробиологии КФ МСХЛ (1995г.); на конференции ученых МСХЛ (1996г.); научно-методических конференциях КФ МСХА (1997, 1998г.г.); на конференции молодых ученых и специалистов МСХЛ(1998г.).

Ilyíriiik.nimi. I lo теме диссертации опубликовано 5 научных статей.

Объем и структура работы. Диссертация и зложена на 127 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований. обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений Содержит 36 таблиц. 3 рисунка. Список литературы включает 295 наименований, и i них 116 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Объект нсстедованнн, схема и условия проведения опытов

Опыты проведены в условиях фермы совхоза "Себелево"' Ферзиковского района и животноводческого комплекса АО "Новые Старки" Дзержинского района Калужской области в периоде 1992 по 1996 т i. Для каждой серии опытов методом пар аналоюв но происхождению и живой массе были сформирован^ группы ингактных телят черно-пестрой породы Ю-дневною во ¡pacía, по 10 толов в каждой (таблица 1, рис. I). Телята в обоих хозяйствах содержались в идентичных условиях, соответствующих зоотехническим и гит ионическим нормам lio всех опытах в течение 30 суток телята контроль-

Влияние пробнотикон на покашсли несненифнческон ре шс юн пост и _____иммунный спиус органшча геля!

Исследуемые факюры

Пока и гели иммунного с 1а-туса: количество Т-.шмфо-нитов, Т-\слперов, I -су-прессоров, уровень 1уЛ, 1^(1, 1рМ

(пемые результаты --Ш

Сравнительная оценка дейстия пробно (икон руменолакпа. биосана, би-фидумбакк'рина на о|м а-шим 1С.1Я■ н раннем нос!-накиыюм порно 1е

Показатели неспецифической резистентности: лизоиим, комплемент, БЛЛ, БАС, фагоцитарная активность ней-трофилов_

Ожи; ]

Изучение биологическо(о действия пробнотиков -руменолакта, биосана, бн-фидумбакгерина - на ор-гашпм телят в раннем по-сшатальном периоде

Уточнение ле-чебно-нрофилак-1ически\ до! пробнотнков

Рис. I, Схема исследований

ных и опытных групп выпаивались по стандартной общепринятой схеме с приучением с Зиелсльною возраста к концентрированным и грубым кормам.

Мробнотики - это бактериологические препараты. 1Чмсно;1акт включает штаммы Lactobacillus casei и Streptococcus faeciimi, в 1г содержи ica 25*10'' клеток. Ра »работай во ВНИИ биотехнологии, изготовлен НПФ"Ал:»ф" (Москва).

Виосан представляет собой смесь молочнокислых бактерий, являющихся постоянными обитателями рубца жвачных животных. Одна лоза препарата содержит 0,3*104 клеток. Изготовлен во ВНИИ ФБ и I I с. -х. животных (Боровск).

(¿ифидумбактерин сухой ветеринарный разработан в ВГ'НКИ ветеринарных препаратов. наставление по применению утверждено ГУВ МСХ 22. 07. 1991г. Одна доза препарата содержит 1,0*10* живых бифидобактсрий, выделенных от сельскохозяйственных животных.

Клинические и иммунологические методы исследовании

Морфологический состав крови определяли следующими методами: содержание гемоглобина - колориметрически; количество эритроцитов, лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, определение лейкоцитарной формулы - методом Филипченко.

Для биохимическою анализа крови использовали следующие методы: уровень общего белка в сыворотке крови - по биурезовой реакции, белковые фракции (альбумины, глобулины) методом электрофореза на бумаге; кальций, фосфор - общепринятыми методами.

Иммунологические методы: комплементарную активность сыворотки крови определяли методом П. А. Рмельяненко ( 1978); активность лизоцима в сыворотке крови-методом В. Г. Дорофсйчука (1968); бактерицидную активность сыворотки крови - методом О. D. Смирновой и Т. А. Кузьминой (1966), бета-литическую активность сыворотки крови - методом А. Г'. Алексеевой и А. 11. Волковой (1966), содержание иммуноглобулинов - методом радиальной иммунодиффуэии (noG. Manchini, 1965); количество Т-лимфонитов - методом спонтанного розсткообразования (по М. Jondal, 1972); Т»

хелперы - по чувствительности к тсофиллину методом A. Limatibul (1978).

Рснлыагы исследований обрабатывали статистически (Г. Ф. Лакин, 199Q).

-А-

Периоды исследований

Группа Число животных в группе Возр. жив. в начале опыта, суг Продолжительность опыта, с\т. Условия опыта

I Опытный период

1 контроль 10 10 30 ОР+0,5г левомицетина/гол. в сутки

11 10 10 30 Ор+О,25г руменолакта/гол. в сутки

111 10 10 30 ОР'0,5г руменолакта/тл. в сутки

IV 10 10 30 ОР^ 1,0г руменолакта/гол. в сутки

1) Опытный период

I контроль 10 10 30 ОР*0,5г кормогризина'гол. в сутки

11 10 10 30 ОР+2 условные доты биосапа/гол. в сутки

111 10 10 30 ОРО условные лозы биосана/гол. в сутки

III Опытный период

1 контроль 10 10 30 Основной рацион

II 10 10 30 ОР+2 условные дозы бн-фидумбактерина/гол. в сутки

III 10 10 30 ОР»-3 условные дозы би-фидумбактерина/гол. в сутки

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ I. МорсЬо-биохимнческие показатели крови телят при введении в их рацион пробнотиков В результате проведенных экспериментов нами установлено, что добавки в рацион телят пробиотических препаратов оказали положительное влияние на морфологическую картину крови. В крови животных контрольных групп количесгво притроци-тов было в пределах 7,12 ± 0,43 - 7,6? ± 0,13 млн/ммЗ. При скармливании руменолакта наблюдалось повышение количества эритроцитов на 7,44%, при добавках в рацион биосана - на 9.15% (Р < 0,05), бифидумбактерина - на 3,4% (табл. 2) Параллельно >ве-

личивалось количество гемоглобина' у животных, получавших руменолакт - на 2,68-4,16%(Р < 0,05), биосан - на 1,55-4,Го, бифидумбактсрин - на 1,73% Повышение количества эритроцитов и уровня 1Смоглобина в крови опытных животных при использовании пробиотичсскнх добавок мы связываем с стимулированием гемопотгичсских функций орщнизма. При этом, более благоприятное влияние на кроветворные функции телят в раннем постнатальном периоде окашвалн препараты: руменолакт в дозах 0,51,0г на I олову в сутки и биосан в количестве 3 условные дозы на голову в сутки.

Добавки в рацион телят пробиотичсских препаратов оказали влияние на показатели белой крови, то есть на количество лейкоцитов и характер лейкоцитарной (|юрму-лы. Гак, количество лейкоцитов в крови животных контрольных групп в первой и второй серии опытов было 10,13 1 0,18 тыс/мм' и 9,2 1 0,1 тыс/мм1. Повышенное содержание лейкоцитов объясняется влиянием инфекционного раздражителя, так как телята болели диспепсией Поскольку телята контрольных групп с признаками заболевания получали ашибиотикн, а 1елята опытных групп - пробиотические препараты, терапевтическое действие как антибиотиков, так и пробиотиков сопровождалось снижением в рашои степени напряженности инфекционного процесса и понижением количества лейкоцитов в крови. Вследствие того, что выздоровление животных опытных групп при использовании пробиотиков проходило быстрее, уровень лейкоцитов в их крови был ниже, чем у контрольных, на 6,32-12,15% при скармливании рум смол акта и на 2,18 - 4% - биосана.

В третьей серии опытов пробиотический препарат бифидумбактсрин применяли с профилактической целью. При этом количество лейкоцитов в крови телят опытных ФУпп, по сравнению с контрольной, напротив, повысилось на 2,67 - 5,34% (Р < 0,05)

В лейкоцитарной формуле во всех опытных вариантах, в сравнении с контрольными, мы наблюдали снижение эозинофилов, повышение сегмснтоядерных нейтрофи-лов и лимфоцитов; что, по нашему мнению, свидетельствует о положительном влиянии пробиотиков на организм животных в сравнении с антибиотиками. Следовательно, пробиотические препараты, как в профилактических, так и лечебных дозах, способствуют нормализации морфологнческо!о состава крови, не оказывая нстагивного влияния на орт антм телят

Таблица 2

Морфологические показатели крови телят при добавках в рацион пробнотиков

п=10

Группа Эритроциты, млн/Мм3 Гемоглобин, г/100мл Лейкоциты, тыс/мм3 Лейкоцитарная формула, %

Эозино-филы палочко-ядерные ссгменто-ядерные лимфоциты моноциты

I опыт (с румеполактом)

1 7,1210,43 10,81±0,13* 10,13±0,18а 3,010,3' 5,010,5" 26,210,1* 59,410,3* 6,4±0,2

11 7,4110,19 11,1010,19" 9,4910,3* 2,110,16 3,210,35 26,8+0,3" 61,710,16 6,210,3

111 7,65±0,11 11,24±0,15Ъ 9,0±0,246 1,310,1' 3,710,2' 27,210,3° 62,010,4" 5,810,2

IV 7,67±0,38 11,2610,17 8,9±0,38 1,310,1 3,710,2 27,210,3 62,010,4 5,810,2

II опыт (с биосаном)

1 7,3210,04* 10,95±0,16 9,210,10 2,310,2* 4,510,3 24,910,3 62,010,4* 6,310,5

II 7,5410,0?6 11,12±0,16 9,010,09 1,010,5" 4,210,1 25,910,2 63,510,3" 6,210,3

III 7,9910,09* 11,40*0,21 8,8410,19 0,510,26 4,110,2 25,410,3 64,010,2" 6,010,1

111 опыт (с бифидумбактерином)

| 1 1 7,6310,13 11,1±0,08 7,8610,04" 1,010,Г 1 4,410,2 27,1+0.2 62,510,2 | 5,010,4

Г" II 1 III ( ; 7,8010,14 11,29±0,09 8,0710,08'' 1,010,1* | 4,210,2 27,8+0,3 62,710,1 | 4,310,3

| 7,8910,14 11,3810,01 | 8,28±0,07" 0,510,2" | 4,010,3 28,010,2 63,010,3 { 4,5+0,3

Прши-шцис: адесь и в последующих таблицах достоверность разности при Р < 0,05

Стабилизация гомеостаза сопровождалась активизацией обменных процессов в организме животных, чш нод1всрждасгея биохимическими показателями, в частности, изменением концентрации общею белка, кальция и фосфора в сыворотке крови телят опытных 1рупп: при использовании румснолакга содержание общего белка в среднем возросло в сравнении с показателями контрольной группы на 10,2%, во втором опыте (с биосаном) - на 10,5%, в третьем опыте (с бифидумбактерином)- на 10,69%.

Наблюдалось повышение в сыворотке крови теля г концентрации кальция на 14,43% при использовании румснолакга (Р < 0.05), на 4,73% при добавках биосана и на 3,53% при введении бифидучбактсрина, фосфора - на 3,68%; 3,8%; 1,9% (соответственно по опытным вариантам). Влияние пробиогическнх добавок на изучаемые нами гематологические показатели мы связываем с положительным влиянием пробиотиков на реакции неснсцифического иммунитета, на стимуляцию защитных функций организма в целом.

Таким образом, на основании полученных данных можно констатировать, что использование добавок пробиотиков в рационе телят оказывало влияние на гемопоэз, повышая показатели красной крови. Лечебно-профилактический эффект от действия пробиотиков сопровождался стабилизацией показателей белой крови, приближая их к оптимальным для данного возрастного периода.

2. Показатели неспецифической пезисте1гтности телят при использования пробиотиков

Содержание комплемента в сыворотке крови телят при внесении в их рацион пробиотика руменолакта повысилось с 228,0±3,0 ед/мл в контроле до 256,0±2,8 ед/мл (на 12,28%), пробиотика биосала - с 240,0±4,0 ед/мл (в контроле) до 262,0±5,0 ед'мл, тс есть на 9,17%; бифидумбактерина - с 248,0±2,0 ед/мл (контроль) до 260,0±1,0 ед/мл (опыт), или на 4,84%. (Р 10,05). Таким образом, наибольшее влияние на данный показатель несиецифическон резистентности организма телят оказывал пробиотик румено-лакг в дозе 0,5-1,0 г'годову в сутки. Концентрация лизоцима в сыворотке крови телят контрольных групп в первом оиьнс составляла 14,38^1,25 мкг/мл При использовании румснолакга она незначительно возрастала - до 15,11,17 мкг/мл, то есть на 5,07%. При добавках в рацион биосана количество лизоцима в сыворотке возрастало с

Показатели неспецифической резистентности телят при введении в рацион пробиотиков

п=10

Группа Содержание Содержание лизоцима Бактерицидная Бста-лнтическая Фагоцитарная

комплемента в сыворотке крови активность активность активность.

ед/мл мкг/мл сыворотки крови, % сыворотки крови, % О' /О

I опыт (с руменолактом)

I 228,013,0* 14,38±1,25* 33,5412,53' 50,0212,33' 56,1112,98'

II 230,014,0' 14,6311,20й 42,2612,34" 53,1912,85' 58,2612,33а6

III 251,014,06 15,1111,776 46,1912,976 60,9612,3° 64,2012,55°

IV 256,012,86 15,2011,00" 46,84±2,356 • 61,0312,456 64,68+2,606

II опыт (с биосаном)

I 240,014,0* 15,1311,10 37,4212,23" 50,5812,19' 57,3012,21'

II 244,015,0" 15,33±1,27 45,2912,26° 53,1912,30' 60,50+2,37'

III 262,0±5,06 15,45±1,13 53,3212,54' 67,9612,09й 70,64+2,786 ________

III опыт (с бпфиду.мбактсрнном)

I 248,012,0' 14,63±1,25 41,1912,17' 51,3812,51' 60,9011,98

II 254,0±3,0' 15,0011,17 45,64+3,01'° 55,1712,46' 62,5012,45

III 260,011,06 15,2011,18 50,3812,77е 61,0212.90° 66,4212,90

15, Ш 1,1 мкг/мл (в конгроле) до 15,45±1,13 мкг/мл в 3 опытной группе, или на 2,11%; пробно гика бифидумбактерина - с 14,63±|,25 мкг/мл до 15,2±1,18 мкг/мл, то есть на 3,89%. На основании вышейсложенного можно сделать вывод, что все пробиотики (руменоллкт, биосан, бнфидумбактерин) оказывали примерно одинаковое влияние на данный показатель неспецифической резистентности организма; разность между показателями ниже порога достоверности. „

Пробиотики способствовали повышению бактерицидной активности сыворогки крови у подопытных животных. У телят контрольных групп с клиническими признаками диспепсии ( в первом и втором опытах) бактерицидная активность сыворотки крови была на уровне 33,5412,53% и 37,42±2,23%, соответственно. У клинически здоровых животных (контроль в третьем опыте) -41,19±2,17%. При введении в рацион румено-лакта в дозе 0,5 г/гол. в сутки бактерицидная активность сыворотки крови повысилась в среднем до 46,1912,97%, то есть на 37,72%; биосана - до 53,32±2,54% или на 42,53%; бифидумбактерина - до 50,38±2,77% или на 18,46% в сравнении с соответствующими контрольными вариантами.

Концентрация бста-лизинов в сыворотке кроен телят при использовании румено-лакта возросла в среднем на 21,87% в сравнении с контролем и составила 61,03±2,45%; при добавках биосана - 67,9612,09% (на 34,36%), бифидумбактерина - 61,02±2,90% (на 18,76%). Таким образом, на содержание бета-лизинов в сыворотке крови телят наиболее благ оприятное влияние оказывал пробиотик биосан.

Активность процессов фагоцитоза при скармливании телятам руменолакта возросла на 15,27% против контрольной, биосана - на 23,28%, бифидумбактерина - 9,06% (Р 5 0,05).

Таким образом, испытанные в наших опытах пробиотики проявили себя как им-муномодуляторы, стимулируя становление неспецифической резистентности организма; при этом более эффективными оказались руменолакт и биосан.

3 Иммунологические показатели у телят при скармливании пробиотиков

Оценка иммунного стату са организма предполагает характеристику клеточного и Iуыоралыюго звеньев иммунитета. Изменение параметров клеточного иммунитета мы

--»о-

Таблица 4

Содержание лимфоцитов и их субпопуляций в крови телят при скармливании им пробнотиков

п=10

I Группа Лимфоциты, тыс/мм3 Т-лимфоциты, % Т-хелперы, % Т-супрессоры, % Тх/Тс

I опыт (с руменолактом)

I 6,0110,01" 49,010,5" 27,6±0,3" 21,310,2" 1,29

II 5,86±0,23а6 52,310,06 33,210,16 19,0+0,16 1,75

III 5,58±0,176 56,210,1' 36,510,1' 19,610,16 1,87

IV | 5,5210,186 1 56,610,62" 36,510,6" 20,010,16 1,81

II опыт (с биосаном)

1 5,70+0,16 51,310,4" | 29,810,0" I 21,410,1" 1,39

II | 5,72±0,12 56,310,1" 1 38,710,0" 17,510,1" 2,22

III | 5,6610,1 | 64,610,2" 46,410,1" 18,210,2" 2,55

III опыт (с бнфндумбактерииом)

1 4,91±0,21 53,510,1' 37,310,1" 16,210,0" 2,3

И 5,0610,15 60,410,2" 40,4+0,1' 20,0+0,1" 2,02

111 5,2210,12 65,210,3" 45,710,3" 19,910,1" 2,29

рассматривали по вариациям абсолютного и относительного числа Т-лимфоцитов и их субпонуляций (Т-хелперон и Т-супрессоров) в периферической крови телят.

Паши исследования покатали, что при включении в рацион телят пробиогиче-ских добавок количество ро эоткообратуюншх Т-лимфоцитов повышалось с 2.94±0,49 тыс/мм' до 3,13) 0,39 тыс/мм' при использовании руменолакта, с 2,92 ±0,21гыс/мм' до 3,6610,14тыс/мм1 при использовании бносана, с 2,62Н),24 тыс/мм1 до 3,42тыс/мм' при добавках бифидумбактерина

Количество Г-хелперов и их доля в общем числе лимфоцитов крови телят контрольных I руин в первой серии опытов было 0,8110,07 тыс/мм1, ню составляет 27,6%, во второй - 0,8710,02 тыс/мм1 или 29,8%, в третьей - 0,9810,2 гыемм' или 37,3°о У животных опытных трупп эти показатели изменялись следующим образом: при добавках руменолакта повышались в среднем на 11 ,(>8%, биосапа - на 16,6°о, и бифидумбак-терина - на 8.4%.

Процентное соотношение Т-супрессоров снижается в первой и второй серии опытов в среднем на 4,7 и 3,3%, соответственно; в третьей серии опытов, напротив, повышается - па 2,8%.

Микроорташимы, входящие в состав пробиотиков, активизируя Т- и В- зависимые системы иммунитета, способствовали усилению выработки иммуноглобулинов различных классов. Так, количество при включении в рацион руменолакта возрастало на 6,15-14,6%, бносана - на 5,8-10,96%, бифидумбактерина - на 8,3-15,5%.

Количество М в сыворотке крови телят опытных групп, возрастало, в сравнении с контрольными, на 8,2-29,38% (1 опыт), при Р & 0,001; на 9,46-14,2% (II опыт) и на 10,4-21,42% (III опыт).

По данным наших исследований, наиболее благоприятное воздействие пробиотические препараты оказывали на секрецию ^А. Так, при добавках в рацион руменолакта содержание ^А в сыворотке крови телят опытных групп возрастало в среднем на 35,89%, в сравнении с контролем, бносана - на 100%, бифидумбактерина - 44,19%; статистически достоверные различия получены во всех сериях опытов.

Таким образом, воздействие пробиотиков на организм телят в раннем постна-тальном периоде можно рассматривать как введение дополнительных количеств антигенов, не оказывающих негативного влияния,

-м-

Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови при скармливании телятам нроСиотиков

и 10

Группа , мг/мл 1уМ, мг/мл 1рЛ, мг/мл

1 опыт (с руменолакзом)

1 13,0*1,10 1,94*0,12° 0,39 + 0,06"

II 13,803:1,05 2,10Ю,15' 0,50)0,02"

111 14,50*1,00 2,50*0,13" 0,53*0.0Г'

IV 14,90И,12 2,5 ПО, 13" 0,55*0,02Л

II опыт (с биосаном)

I 15,50*1,36 1,69 Ю,09 0,30*0,05"

II 16,40*1,24 1,85*0,17 0,45) 0,02Л

III 17,20*1,41 1.93)0,14 0,60)0,09"

III опыт (с бифидумбактерином)

1 13,85*1,17 2,10)0,24 0,43)0,01"

II 15,0*1,36 2,32*0,18 0,51 > 0,026"

III 16,0*1,21 2,55(0,23 0,62 )0,07Л

а выступающих раздражителями иммунной системы, активизирующими специфическую защиту организма животных, последствие чего повышаюсь, отмеченное в наших опытах, образование иммуноглобулинов различных классов.

4. Прирост живой массы телят при введении в рацион пробиотнков, Примененные в наших экспериментах пробиотики оказали положительное влияние на прирост живой массы телят. При этом наиболее эффективным был пробиотик руменолакт. В первой серии опытов прирост живой массы телят опы гных групп, в сравнении с контрольными, был выше в среднем на 11,6 - 15%, во второй серии -на 4 - 7%, в третьей серии - на 4,15 - 7,2%.

Эффект от применения нробиотиков мы связываем с повышением секрезорно-ферментагивной деятельности сычуга, стимуляцией процессов всасывания в желудоч-

но-кишсчном тракте, развитием процессов п преджелудках, угнетением условно-пагогенной микрофлоры в тонком h толстом кишечнике. Dm физиологические изменения способствовали лучшему усвоению корма подопытными животными, а, вследа-вне шн о, снижению eaipai кормов и питательных веществ на I кг прироста живой массы.

Так, при использовании румснолакга затраты корма, и сравнении с контролем, снизились на 0,-17 - 0,68, биосана - на 0,18 - 0,3, бифидумбакгерина - на 0,16 - 0,26 кормовых единиц.

13 проведенных нами исследованиях прослеживается зависимость сроков выздоровления геля г с признаками диспепсии от вводимых в рацион различных пробиотиков При использовании аншбиогиков выздоровление животных наступало на 6 - 8 сутки, нробиотикон - на 2 - 4 сутки, при пом патогенез был с менее выраженными симптомами.

Таким обраюм, пробиогичсские препараты оказали на организм животных в раннем носшагалыюм периоде многоплановое, многофакторное воздействие, что доказывает их неоспоримое преимущество перед антибиотиками.

I) Ы ПОДЫ

1. Пробиотические препараты - руменолакт, бносан, бифидумбактерин - оказывают разностороннее биологическое действие на организм телят в раннем постнатальном периоде.

2. Микробиолог ические добавки молочнокислых и бифидобактерий проявляют антигенные свойства, не оказывая при этом отрицательного влияния на организм.

3. Пробиотнки обладают иммуномодулирующими свойствами, что указывает ira тесную связь между иммунным статусом организма и заселением микрофлорой желудочно-кишечного тракта.

4. Использованные в экспериментах пробиотики оказали положительное влияние на формирование неспецифической резистентности организма телят: повышалось содержание комгшемента - на 4,8 - 10,1%, лизоцима - на 2,1 - 5,1%, бактерицидная активность сыворотки крови - на 18,4 - 42,5%, бета-литическая активность сыворотки крови - на 18,8 - 34,3%, фагоцитарная активность нейтрофилов - на 9,1 -14% (Р i 0,05) в

сравнении с контрольными вариантами.

-

5. При введении в рацион телят пробитических препаратов в крови животных увеличивалось абсолютное количество I-лимфоцитов, в сравнении с кошролем. на 14,69 -25,9% в ра(личных вариантах (Р > 0,05)

6. Имчхнорегудяюрнмй индекс при скармливании телятам нробиошков и ¡менялся в сторону преобладания Т-хслперов. что является положительным цромюстическнм признаком.

7. Пробиотическис препараты окатывали модулирующее действие ма гуморальное ¡вено иммунной системы: в сыворотке кропи 1еляг повышалась концентрация 1рМ, особенно

8. Пробиотики способствовали стабилизации морфологического состава кропи: количество эритроцитов в крови живошых опытных групп, в сравнении с контрольными вариантами, увеличивалось на 3 - 9%, гемотлобииа - на 1,7 - 4,1%.

9. Под влиянием пробиотиков у телят повышался уровень обменных процессов в организме: увеличивалось содержание общею белка в сыворотке крови на 3,5 - 9,5%, кальция - на 1,73 - 14,4%, фосфора - на 1,9 - 3,8%

10. Пробиотики обладают лечебно-профилактическими свойствами, оптимизирующими бактериоценоз желудочно-кишечного тракта телят, воздействуют на процессы пищеварения и усвоения корма, что способствует увеличению среднесуточного прироста живой массы животных опытных групп, в сравнении с контрольными, на 4 - 15,1% при более высокой оплате корма продукцией.

11. Использование пробиотических препаратов в рационах телят способствовало снижению себестоимости I ц прироста живой массы на 6,3 - 10,5%, затрат кормов на единицу продукции на 0,16 - 0,68 кормовых единиц.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

Для повышения защитных свойств ортанитма телят в раннем постнагальном пе-эиоде рекомендуем использовать пробиотические препараты, со ¡данные на основе мо-ючнокиелых и бифидобактсрии - руменолакт. биосан, бнфидумбактерин г в количест-¡ах ру меиолакт - по 0.5т. биосан и бифиду «бактерии по 3 условные дозы на голову в :утки С профилактической целью цюпараш выпаивать в течение первою месяца

жизни теленка один раз в день о укатанных дозах. При появлении сим1ГГОмов энтерит» них и ниероколигних заболеваний препараты выпаивать трехкратно в тех же дозах до полною выздоровления.

СПИСОК РАБОТ, ОПУЬЛИКОНАНПЫХ ПО ТЕМП ДИССЕРТАЦИИ:

1. Спасская Т. А., Лапеткин И. М., Алфимиев Н. А., Алфимиева Г. М. Зависимость продуктивности Ог использования биосана в кормлении телят. // Инф. листок - Калуга, 1992, К» 83 -'92, - 1с

2. Спасская Т. А., Лапеткин И. М., Алфимцев II. А., Алфимцеиа Г. М. Влияние руме-нолакта на продуктивность телят. // Инф. листок - Калуга, 1992, №107 - 92, -1с.

3. Спасская Т. А. Иммуномодулирукицие свойства пробногических препаратов. // Сб. Доклады ТСХА, Вып. 269, М„ изд-во МСХА, 1998, с. 271-277..

4. Спасская Т. А. Экологическая биозехнологичсская альтернатива: пробиотнки на.ме сто антибиотикам. И Сб. тезисов научных докладов IV Международной VIII Всероссийской конференции "Экология и охрана окружающей среды", Рязань, 1998, -1с.

5. Спасская Т. А. Влияние пробиотических добавок на морфо-биохимические показа тели и прирост живой массы телят в раннем постнатальном периоде. // Рукопись дин нирована н НИИ 1 ЭИАгропрома, 3. 9. 1998. регистр. №17512,объем 14с.

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Спасская, Татьяна Аркадьевна, Москва

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К.А.ТИМИРЯЗЕВА

СПАССКАЯ ТАТЬЯНА АРКАДЬЕВНА

ВЛИЯНИЕ ПГОВИОТИКОВ НА ПОКАЗАТЕЛИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ И ИММУННЫЙ СТАТУС

ОРГАНИЗМА ТЕЛЯТ 03.00.13-физиология человека и животных

диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук

На правах рукописи УДК 636.237.21:636.087.8:591.1

Научный руководитель-доктор биологических наук, профессор Н.А.Алфимцев

МОСКВА 1998

ОГЛАВЛЕНИЕ стр ВВЕДЕНИЕ .................................................3

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.........................................7

1.1. Использование микробиологических препаратов в промышленном скотоводстве................................7

1.2. Защитная роль нормальной микрофлоры.....................10

1.3. Механизм действия пробиотиков...........................14

1.4. Перспективы применения пробиотиков в животноводстве.....23

1.5. Иммунный статус организма. Влияние симбионтных микроорганизмов на становление иммунной системы ..................... 27

2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ............................33

2.1. Объект исследований,схема и условия проведения опыта____33

2. 2. Методы исследований.....................................33

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ'.................... Мк

3.1. Клинико-гематологические и иммунологические показатели, прирост живой массы телят при применении руменолакта----кк

3.1.1. Гематологические показатели...........................кк

3.1.2. Показатели неспецифической резистентности.............кв

3.1.3. Оценка иммунного статуса..............................к&

3.1.4. Влияние руменолакта на прирост живой массы телят, оплату корма ................. ................................50

3.1.5. Лечебно-профилактическое действие руменолакта.........52

3.2. Клинико - гематологические, иммунологические показатели, рост телят при добавках в рацион биосана ..... ...........55

3.2.1. Гематологические показатели ......... ...................55

3.2.2. Показатели неспецифической резистентности............ .5?

3.2.3. Оценка иммунного статуса..............................58

3.2.4. Влияние биосана на прирост живой массы телят, оплату корма.................................................60

- z -

3.2.5. Лечебно-профилактическое действие биосана ____ .........

3.3. Клинико - гематологические, иммунологические и показатели роста телят при добавках бифидумбактерина...............65

3.3.1. Гематологические показатели............... ............65

3.3.2. Показатели неспецифической резистентности.............67

3.3.3. Оценка иммунного статуса .......... .....................6S

3.3.4. Влияние бифидумбактерина на прирост живой массы телят, оплату корма ............... ..........................70

3.4. Сравнительное изучение влияния руменолакта, биосана и бифидумбактерина на исследуемые показатели ---- ........72

3.4.1. Гематологические показатели ......... ..................71

3.4.2. Показатели неспецифической резистентности.............80

3.4.3. Оценка иммунного статуса.................... ..........87

3.4.4. Зоотехнические показатели.............................92

3.4.5. Экономическая эффективность применения пробиотиков----96

ЗАКЛЮЧЕНИЕ..............................................100

ВЫВОДЫ.................................................108

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ ... 110 ЛИТЕРАТУРА.............................................111

- 3 -ВВЕДЕНИЕ

Эффективное использование питательных веществ животными обусловлено оптимальным содержанием в рационах биологически активных соединений: антибиотиков,витаминов,ферментных,белковых, дрожжевых добавок, микроэлементов.

В настояш.ее время внедряются новые, альтернативные современной практике, биотехнологические разработки, открывающие путь к решению многих насущных проблем. Современные методы разведения и технологии выращивания сопряжены с колоссальным стрессом для молодняка сельскохозяйственных животных. Молодое животное отлучают от матери вскоре после рождения,переводят на искусственное кормление, что приводит к появлению энтеритов и диареи как результата дисбаланса кишечной микрофлоры. Этот дисбаланс возникает из-за того, что пищеварительный тракт не заселяется нормальными непатогенными микроорганизмами, которые в естественных условиях выращивания животное получает с материнским молоком.

В результате раннее проведенных исследований с использованием молочнокислых бактерий как превентивной меры против энтеритов, дисба-ктериозов, а также для прекращения или облегчения диареи, созданы "антистрессовые" препараты, состоящие из моно- или поликультур молочнокислых бактерий с добавлением электролитов,витаминов, выпускающиеся в виде питательных паст, гелей или растворимых порошков.

Применение этих препаратов способствует также, помимо нормализации кишечной микрофлоры, поддержанию гомеостаза энтеральной и внутренней среды организма, оптимизации иммунологических реакций. Известно, что у гнотобионтов отсутствие нормальной микрофлоры сопровождается нарушением процессов Формирования иммунной системы: наблюдается гипоплазия лимфоидных тканей и органов, недостаточность иммунокомпетентных зффекторных систем СН.С. Кухаренко, 1992).

По данным Д. М-Исаковой (1993), применяемые в кормлении молодняка пробиотические препараты, такие как руменолакт, бифидумбактерин,био-сан, энтероцит,азотоцит, галлиферм, эниферм и т.д. увеличивают эффективность использования кормового белка, нормализуют состав кишечной микрофлоры, повышают резистентность организма к бактериальным инфекциям, способствуя тем самым сохранности поголовья и высокому приросту живой массы.

Актуальность работы Применение антибиотиков в животноводсте, которые используются в малых дозах как стимуляторы роста, а также в качестве превентивной меры против вызванных стрессом желудочно-кишечных расстройств у животных, приводит к все более широкому распространению в микробных популяциях R-Фактора устойчивости к антибиотикам, к заметному возрастанию числа лекарственно - устойчивых микроорганизмов, в частности,энтеробактерий желудочно-кишечного тракта млекопитающих. Сальмонелльная инфекция животных, успешно излечиваемая терапевтическими дозами антибиотиков, на первый взгляд не вызывает тревоги. Однако, эти бактерии также могут приобрести передающуюся устойчивость. Попадая к человеку через зараженное мясо,сальмонеллы,содержащие R-фактор, могут передавать его нормальным комменсалам,живущим в желудочно-кишечном тракте человека, которые, в свою очередь, передают эту устойчивость патогенным энтеро-бактериям человека. Этот кажущийся бесконечным порочный круг может повторяться со многими антибиотиками, в результате чего будут возникать штаммы с множественной устойчивостью к антибиотикам.

В последние десятилетия это побудило ряд исследований, в которых препараты молочнокислых и бифидобактерий использовались как безопасная альтернатива низким дозам антибиотиков для предотвращения и,возможно, лечения желудочных расстройств у сельскохозяйственных животных CMitsuokaT.,1991;Fallon R.,1991; Duclu2eau R.,1991; Montes A.,1993).

Препараты получили общее название пробиотикиС"pro bios''-для жизни).

Молочнокислые бактерии являются составной частью так называемого экологического барьера кишечникаСЛенцнер Л. Л. ,1981) и играют немаловажную роль в определении колонизационной резистентности организма. Являясь частью нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека и животным, они играют важную роль в обеспечении защитной функции, в становлении иммунного статуса организма теплокровный. В настоящее время предпринимаются попытки по применению пробиотиков в бактериопрофилактике и бактериотерапии. При этом роль пробиотиков, содержащий молочнокислые и бифидобактерии, неуклонно возрастает.

Цель_и_задачи_исследований

Цель исследований:изучить влияние различных пробиотическик препаратов - руменолакта, бифидумбактерина, биосана - на неспецифическую резистентность и иммунный статус организма телят в раннем постна-тальном периоде, сравнить эффективность их лечебно-профилактического действия.

Поставленная цель предопределила состав и последовательность конкретных задач:

1.Изучить возможные изменения морфо-биохимических показателей крови телят при скармливании им пробиотиков.

2. Исследовать неспецифическую резистентность организма телят: систему комплемента, лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови,Фагоцитарную активность нейтрофилов в зависимости от дозы применяемых пробиотиков.

3. Определить динамику уровня иммуноглобулинов классов А-, G-, М в крови телят в связи с добавками пробиотиков в рацион.

4. Проследить сохранность, рост и развитие телят в зависимости от введения в их рацион исследуемых пробиотиков.

- б -

Научная_новизна

В результате выполненных экспериментов впервые получены данные, характеризующие влияние пробиотических препаратов на иммунологические показатели крови телят в раннем постнаталъном периоде.

Показана в сравнительном аспекте эффективность использования новых пробиотических препаратов-руменолакта, бифидумбактерина и биосана для сохранности, роста и развития телят в условиях промышленного животноводства.

Практическая_значимость работы

Даны рекомендации по использованию пробиотических препаратов Сру-менолакта, бифидумбактерина, биосана) в промышленном животноводстве в профилактических и лечебных целях, для повышения продуктивности, неспецифической резистентности и иммунного статуса телят.

Апробация_работы

Основные положения диссертации доложены на заседании кафедры физиологии, биохимии и микробиологии КФ МСХАС1995г.); на конференции молодых ученых МСХА С 1996г.), научно - методических конференциях КФ МСХА С1997,1998 г.г.), на конференции молодых ученых и специалистов МСХА (1998г.).

Публикации

По теме диссертационной работы опубликованно 5 научных статей.

Объем_и_структура_работы

Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений. Содержит 36 таблиц, 3 рисунка. Список литературы включает 295 наименований,из них 116 иностранных авторов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ.

Производство продуктов животноводства зависит от количества и ка-эств а кормов, сбалансированности рационов по белку, аминокислотам, яергии, витаминам и другим биологически активным веществам. С другой гороны, несбалансированность рационов приводит к тому, что в животноводстве перерасходуется около 30 млн. тонн кормов ежегодно А. А. Пырцу, 1989).

Использование детализированных рационов увеличивает среднесуточные риросты живой массы в 1,5-2 раза, при этом уменьшается время откорма а 40% (Б.В.Тараканов,1987).

Одним из реальных путей удовлетворения потребности животноводства i протеине является Снаряду с добавками жмыхов, шротов, рыбной, мясо-:остной, кровяной муки, сухих животных кормов, карбамидных концентратов, зернобобовых, люцерны) получение кормового белка путем микроб-юго синтеза.

Вследствие быстрого размножения продуктивность микробов велика, а то аминокислотному составу микробный и грибной белок близки к животному.

В качестве продуцента белка, аминокислот, витаминов и других биологически активных веществ используют грибы родов Pénicillium, Aspergillus, Fusarium, Trichoderma СЗ.А. Курбацкая, Л. А. Закордонец, 1982). Гак,экстракт Aspergillus oryzac применяется как биологическая добавка для лактирукших коров, что существенно повышает удои С Huber J.Т., Higgenbotham G. Е. 1991).

В разных странах нашли широкое применение в кормлении животных биомассы дрожжей и бактерий, выращенных на доступных в экономическом плане субстратах различных промышленных отходов. В опытах

В. П. Дубинской С1985) на телятах 10-120-дневного возроста испытывался 3UH с 15%-ным содержанием меприна - биомассы бактерий рода Metanomo-nas, выращенных на метиловом спирте.

Пустовая Т. В. С1989) исследовала влияние меприна на организм растущих свиней,оценивая характер его действия по комплексу показателей гуморального и клеточного иммунитета. При этом было отмечено иммуно-депрессивное действие препарата.

В опытах Волобуева В. П. С1979) использовалась микробная биомасса, выращенная на природном газе СБПГ). В опытах отмечено, что замена 5, 10, 15% сухого обрата 3UM биомассой не оказала отрицательного влияния на прирост живой массы телят.

ГапринСбиомасса выращенная на природном газе) использовался в опытах Мирошниченко Г.В.С1985) для замены им части ЗЦМ. Автор пришел к выводу, что скармливание гаприна телятам от рождения до 4-х месячного возраста взамен 10 и 15% сухого обезжиренного молока не изменяет интенсивность их роста, экономит молоко, при этом обменные процессы в организме животных протекают на высоком уровне. Омельченко Н.А. (1994,1995) отмечает, что длительное скармливание гаприна оказывает благоприятное влияние на мясо-сальную продуктивность и качественные показатели свинины, на развитие и воспроизводительные способности свиней.

Наиболее широкое распространение в качестве источника белка получили одноклеточные грибы-дрожжи, содержащие незаменимые аминокислоты, витамины группы В. Для получения кормовой биомассы используются грибы родов Candida, Torulopsis, Saccharomyces.

Многочисленные сообщения зарубежных авторов говорят об эффективности использования дрожжевой культуры Saccharomyces cerevisiae при откорме 6t>i4k0b(William S.Р. ,1991),увеличении удоев лактирующих коров и повышении содержания белка в молоке(Rodrigues 0,1991;Lyons Т, 1991).

Обогащенные дрожжами растительные остатки гуза-паи проверены в опытах на цыплятах-бройлерах, овцах С Д. К. Джамалова,1994); молодняке крупного рогатого скота С P.M. Медеубаев, 1994).

Исследованы сочетания термически обработанных дрожжей с молочной сывороткой, а также с заменителем цельного молока в рационах телят СРой Дж.Х.,1982).

В качестве стимуляторов роста успешно применяются кормовые антибио тики:гризин, кормогризин,продуцент Act. griseus; Флавомицин, выделенный из актиномицетов; витамицин,полученный из пигментированного лучистого гриба Str.aureverticillatus:6auHTpauHH продуцируемый Вас.subtilis и Вас.licheniformis;KopMapHH вырабатывающийся культурой Str. aurigineus.

Введение в рацион молодых животных небольших количеств антибиотиков С5-10г на 1т) ускоряло рост и снижало отход молодняка в раннем постнатальном периоде выращивания. Стимулирующий эффект яйценоскости наблюдался как на курах, так и на водоплаваюцей птице СГаздаров А. К, 1989; A. Laval, 1988).

Доказана рентабельность введения антибиотиков в рацион свиней. Прирост их живой массы за период откорма увеличивается на 15-20% в сравнении с контрольными С Тараканов Б.В.,1987). В опытах на телятах также получен значительный положительный эффект. Так, у телят в возрасте 7-8 недель прирост живой массы повышался на 22-85%, а в возрасте 12 недель - на 20-35% (А.В.Никитин,1992).Введение антибиотиков в летний рацион дойных коров заметного влияния на лактацию не оказывало. В условиях пастбищного содержания животных эффект от применения антибиотиков мало заметен, их положительное действие проявляется,когда коровы находятся в условиях зимнего стойлового содержания СЕ.В. Баева, 1989).

При использовании в рационах ягнят антибиотики главным образом профилактируют желудочно-кишечные заболевания, пневмонии, авитамино-зыС К. А. Дей, 1990).

Таким образом, вышеприведенные результаты научных исследований достаточно убедительно доказывают перспективность биотехнологических разработок и их внедрение в животноводческую практику.

1.2. ЗАЩИТНАЯ РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ Одно из первых предположений о возможной ценности молочнокислых бактерий для здоровья было высказано И. И.Мечниковым, который связывал долгожительство балканских народов с регулярным употреблением ими в пищу кислого молока. С тех пор интерес к использованию молочнокислых бактерий в диетических целях то разгорался, то угасал, пока не была установлена особая защитная роль бактерий, которые формируют нормальные биоценозы микроорганизмов желудочно-кишечного тракта, регулируют процессы метаболизма, стимулируют иммунные процессы С Г. И. Гончарова, 1979; А. Л. Ленцнер, 1982)

Сравнение гнотобионтных животных с выращенными в естественных условиях показало, что Физиологические характеристики желудочно-кишечного тракта меняются, когда он лишен нормальной микрофлоры: уменьшается вес кишечника из-за его худшего развития и появляется излишек жидкостей в слепой и толстой кищках. Ученые В. В. Смеянов, С1992), Ф.3. Меерсон,(1981), В.Кларк и А.Бошон(1979) обнаружили, что эти изменения обратимы, если восстанавливается ценоз симбиотической микрофлоры. Установлено, что нормальная микрофлора желудочно-кишечного тракта оказывает ингибируюцее действие на патогенные микроорганизмы (I.Ballie,1988). Оральное введение гнотобионтным животным Shigella spp. вскоре вызывало энтериты и диарею, но те же дозы, вводимые животным с нормальной кишечной микрофлорой, проявляют меньший патогенный эффект, и Shigella вскоре удаляется из желудочно-кишечного тракта (I. Novak, 1992).Другие исследователи получили сходные результаты в опытах с иными патогенными микроорганизмами, такими как Clost