Влияние перфторорганических соединений на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб в аквакультуре

Шевлякова, Наталья Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние перфторорганических соединений на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб в аквакультуре
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Влияние перфторорганических соединений на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб в аквакультуре"

На правах рукописи

Шевлякова Наталья Владимировна

ВЛИЯНИЕ ПЕРФТОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ НА ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ОСЕТРОВЫХ РЫБ

В АКВАКУЛЬТУРЕ

03.00.16 - Экология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в научно-производственном осетроводству ФГУП «БИОС» г. Астрахань.

центре по

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Чижов Алексей Ярославович

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Маевский Евгений Ильич

Официальные доктор биологических наук, профессор

оппоненты: Дмитриева Тамара Михайловна

кандидат биологических наук Соколова Софья Александровна

Ведущая организация: Астраханский государственный

университет г. Астрахань

Защита состоится « 27 » мая 2004 г. в 1% часов на заседании диссертационного совета Д. 212.203.17 в Российском университете дружбы народов (РУДН) по адресу: 113093, г. Москва, Подольское шоссе, 8/5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РУДН

Автореферат разослан <<Л 7 » О-Лр-с 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор Н.А. Черных

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. В связи с катастрофическим снижением численности осетровых рыб в последние годы остро встает вопрос о развитии такой сферы аквакультуры как осетроводство. При разведении и выращивании осетровых возникает множество проблем, среди которых актуальными являются следующие:

1) сохранение жизнеспособного потомства - эмбрионов, личинок и молоди при транспортировке;

2) сохранение жизни производителей после операционного извлечения половых продуктов.

Наибольшее распространение при перевозке эмбрионов, личинок и молоди рыб получили герметично закрываемые полиэтиленовые пакеты благодаря компактности, малому весу, простоте герметизации и низкой стоимости. Плотность посадки перевозимых объектов в них значительно выше, чем в открытых емкостях. Недостатком такого способа транспортировки является торможение развития гидробионтов и их гибель из-за нарушения газообмена, в частности вследствие накопления углекислого газа и токсичных продуктов метаболизма при длительной транспортировке. Для улучшения газового состава внутрь емкости накачивают до половины объема газообразный кислород, однако эта процедура лишь в малой мере предотвращает гибель гидробионтов при длительной транспортировке и высокой плотности посадки.

Для повышения выживаемости рыб в 1997 г. А.К. Богерук с соавторами предложили использовать емкости с протоком ПФОС (0,8-10 об.% в час), которые являются химическими инертными переносчиками газов - кислорода и С02. Но это устройством оказалось неприемлемым для практического использования из-за сложности и дороговизны. Необходимо было проверить, способны ли ПФОС в закрытой емкости обеспечивать сохранение оплодотворенной икры и рыбы, а также исследовать возможность ПФОС влиять на их развитие. Биологические эффекты ПФОС у осетровых могут зависеть от физико-химических свойств этих соединений, а именно от способности растворяться в воде. Однако до сих пор эти аспекты оставались не

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

изученными.

Другой проблемой, как указывалось, при разведении осетровых рыб является отход производителей после операции прижизненного получения икры. Одна из основных причин гибели производителей заключается в послеоперационной кровопотере, которая сопровождается развитием гипоксии и ишемии, с последующим нарушением функционирования органов, в частности печени. В связи с этим возникала идея использовать в качестве противогипоксического-противоишемического средства газопереносящий кровезаменитель -перфторан для реабилитации оперированных самок.

С учетом вышеизложенного целью исследований являлось изучение влияния ПФОС на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб для повышения их устойчивости к оперативному вмешательству и к экстремальным условиям транспортировки.

Основные задачи работы:

1. Исследовать выживаемость эмбрионов, личинок и молоди осетровых в герметических емкостях в присутствии различных количеств ПФОС;

2. Изучить тератогенность и влияние ПФОС на развитие осетровых рыб на ранних стадиях онтогенеза в герметических емкостях;

3. Определить влияние ПФОС на концентрации продуктов жизнедеятельности при транспортировке осетровых рыб в герметической емкости;

4. Исследовать эколого-физиологическое состояние самок осетровых рыб после операции прижизненного получения овулировавшей икры;

5. Изучить влияние перфторана на эколого-физиологическое состояние прооперированных самок осетровых.

Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые изучено влияние ПФОС в различных количествах на выживаемость и морфологическое развитие осетровых и их гибридов на ранних этапах онтогенеза, а также на химические показатели водной среды при моделировании транспортировки в герметической емкости. Впервые установлено воздействие операции прижизненного получения половых

' ГАНкЗЬ»

5 у» . -

продуктов на физиологическое состояние производителей осетровых рыб. Получены новые данные по гематологическим и биохимическим показателям сыворотки крови самок осетровых рыб при введении перфторана после операции прижизненного получения половых продуктов.

Предмет защиты. Научное обоснование целесообразности использования ПФОС в товарном осетроводстве.

Апробация результатов исследования. Материалы работы обсуждались на II Международной научно-практической конференции «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития» (Астрахань, 2001), Всероссийской конференции «Ранние этапы развития гидробионтов как основа формирования биопродуктивности и запасов промысловых видов в мировом океане» (Москва, 2001), научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития аквакультуры в России» (Краснодар, 2001), Всероссийской конференции молодых ученых «Рыбохозяйственная наука на пути в XXI век» (Владивосток, 2001), XII конференции молодых ученых «Биология внутренних вод: проблемы экологии и биоразнообразия» (Борок, 2002), XI Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2003). По материалам диссертации опубликовано 16 работ, имеется решение о выдаче патента на изобретение.

Структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературных данных, описания материала и методов исследования, собственных данных, заключения, выводов и списка литературы, включающего 250 наименований, в том числе 70 зарубежных авторов. Работа изложена на 121 странице и содержит 8 таблиц и 16 рисунков.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для моделирования транспортировки рыб помещали в герметично закрывающиеся емкости, содержащие в равных объемах воздух и воду. В

опытных группах часть воздуха заменяли ПФОС (ПФД, ПФПЦГ, ПФПМТБЦГ или ПФТБА). После насыщения жидкой фазы кислородом в емкости помещали эмбрионы и личинки осетровых на разных стадиях развития. Условия перевозки имитировали встряхиванием с частотой 0,2 Гц в вертикальном направлении с амплитудой размаха 7-8 см.

Объектами исследований были развивающаяся икра, личинки и молодь русского осетра (Acipenser gueldenstaedtii, Brandt), севрюги (Acipenser stelatus, Pallas), стерляди (Acipenser ruthenus, Linne), а также гибридов - бестера (гибрида белуги (H.huso) х стерлядь (A.ruthenus)) и белуги х бестер (табл.1). Эмбриогенез оценивали прижизненно по методу эколого-морфологических исследований осетровых рыб (Детлаф и др., 1981). Морфометрический анализ выполняли под бинокуляром МБС-10 при помощи окуляр-микрометра по 17 показателям (Ланге, Дмитриева, 1981). Физико-химические параметры водной среды контролировали унифицированными методами.

Экспериментальная группа производителей состояла из 85 зрелых самок русского осетра (Acipenser gueldenstaedti, Brandt), заготовленных осенью (табл.1). Прижизненное получение овулированной икры у производителей осуществляли методом подрезания яйцеводов (Подушка, 1996). Кровь для анализа брали прижизненно из хвостовой вены рыб за 2-3 суток до операции и через двое суток после операции.

Перфторан (ОАО НПФ «Перфторан») вводили в хвостовую вену самкам опытной группы по окончании операции в дозе 1,5 мл/кг.

Для сравнения исследовали влияние другого кровезаменителя -полиглюкина (АО «Биохимик»), который вводили из расчета 5 мл/кг массы тела.Гематологические и биохимические показатели крови определяли унифицированными методами. Полученные данные обрабатывали общепринятыми методами статистического анализа (Лакин, 1980) с использованием программы Microsoft Excel. Достоверность отличий сравниваемых признаков оценивали с помощью t-критерия Стьюдента и непараметрическими методами при допустимой вероятности ошибки - р<0,05.

Таблица 1. Содержание и объем исследования.

Объект исследования Вид рыбы или гибридная форма Кол-во особей, шт Воздействие Содержание исследования

Эмбрионы Русский осетр 8000 ПФД Оценка выживаемости, стадии и типичности развития. Изучение морфометрических показателей. Контроль физико-химических параметров водной среды (кислород, диоксид углерода, ионы аммония, аммиак, нитраты, нитриты, рН)

Стерлядь 20000

Севрюга 20000

Белуга х бестер 5600

Предличинки Русский осетр 1600

Стерлядь 660

Севрюга 384

Личинки Русский осетр 480 ПФПЦГ. ПФПМТБЦГ, ПФД, ПФТБА

Молодь Бестер 80 ПФД

Русский осетр 120

ИТОГО: 65924

Зрелые самки Русский осетр 53 операция Определение стадии зрелости, длины и массы, продуктивности. Изучение гематологических (гемоглобин, кол-во эритроцитов, лейкоцитарная формула, СОЭ) и биохимических (общий белок, альбумин, липиды, холестерин, триглицериды, бета-липопротеиды, АсАТ, АлАТ)

13 перфторан

19 полиглюкин

ИТОГО: 85

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Влияние ПФОС на выживаемость объектов транспортировки.

В первой серии экспериментов оценивали влияние ПФД на выживаемость личинок и молоди осетровых рыб. При этом в опытной группе доля перфторуглерода в жидкой фазе составляла 10 объемных % (об.%).

В первом эксперименте однодневные личинки русского осетра помещали в герметичные емкости при плотности 200 шт./250 мл. В контроле продолжительность жизни личинок составила 27 часов, тогда как в присутствии ПФД - только 49 часов (рис.1). Т.е., присутствие ПФД в замкнутом пространстве значимо способствовало повышению выживаемости личинок.

В следующем эксперименте оценивали выживаемость молоди русского осетра средней массой 1,2 г при плотности посадки 15шт./л. В контроле продолжительность жизни молоди не превышала 44 часа. В опыте с ПФД время выживания рыб увеличилось до 84 часов (рис.1).

Молодь бестера массой тела 10 г (при плотности 2 шт./л) прожила в контрольной группе - 6 часов, тогда как в емкости с ПФД -11 часов.

Часы 100 1

Личинки Молодь

Рисунок 1. Влияние ПФД на продолжительность жизни русского осетра

Таким образом, продолжительность жизни личинок, а также молоди русского осетра и бестера существенно возрастала в присутствии 10 об.% ПФД. В ряде случаев превышение по сравнению с контролем было двукратным.

2. Влияние ПФОС на развитие объектов перевозки.

Из опыта исследования перфторана известно, что контакт перфторуглеродов с эмбриональным материалом может приводить к тератогенному и эмбриотоскическому эффекту. Поэтому далее исследовали влияние ПФД на развитие зародышей.

Эмбрионы русского осетра на 21-й стадии развития помещали в закрытую емкость при плотности 1000 шт./100мл и выдерживали в ней в течение 2 суток. В опытной группе доля перфторуглерода в жидкой фазе составляла 10 об.%.

В контрольных емкостях после их вскрытия 98% зародышей находились на 25-й стадии развития, остальные 2% - на 26-й стадии (рис.2).

■ Контроль □ ПФД

Стадии развития

Рисунок 2. Влияние ПФД на скорость развития эмбрионов русского осетра (по стадиям)

При этом у 20 % эмбрионов были обнаружены нарушения развития в виде загиба хвоста. В опытной группе (в присутствии ПФД) 60% достигли 30-й стадии развития, 15% - 29-й стадии, 10% - 28-й стадии, 3% - 26-й стадии, 8% - 27-й стадии и 4% - 25-й стадии эмбрионального развития. Наблюдаемая разница в развитии зародышей является, по-видимому, следствием более благоприятных условий в опыте. Для более * детального выявления возможного эффекта ПФД на развитие был выполнен морфометрический анализ эмбрионов стерляди и севрюги. В ( опыте использовали возрастающие количества ПФД - от 10 до 40 об.% в жидкой фазе. Плотность эмбрионов составляла 1000 шт./100мл. Зародыши стерляди были помещены в емкости на 32-й стадии развития. Через сутки в контрольных емкостях эмбрионы оставались неподвижными, конец хвоста немного заходил за голову, что соответствует 33-й стадии. В присутствии ПФД эмбрионы достигли через сутки 34-й стадии, т.е. зародыши активно двигались в оболочках и конец хвоста достигал начала продолговатого мозга.

В дальнейшем проводили инкубацию стерляди из опытных и контрольных групп в чашках Петри до массового выклева личинок в опытных емкостях, наступившего через двое суток. Эффект улучшения развития и уменьшения количества мертвых эмбрионов отмечен при добавлении всего 10 об.% ПФД. При увеличении доли ПФД в жидкой фазе до 20 об.% отмечен максимальный эффект (рис.3).

Морфологическую оценку предличинок, проводили по 17 показателям (Ланге, Дмитриева, 1982). Развитие предличинок в опытных группах было типичным. Выявлена тенденция к увеличению отдельных показателей по сравнению с контролем. Так, при сравнении группы с 40 об.% перфторуглерода и без него обнаружено увеличение общей длины тела на 9,5%, длины тела на 9,7%, длины туловища на 12,4% и высоты головы на 37,6%.

■ Мертвые эмбрионы В Эмбрионы на 34 стадии

Контроль ПФД10 ПФД20 ПФДЗО ПФД40 об.% об.% об.% об.%

Рисунок 3. Влияние ПФД на эмбриональное развитие стерляди

Отмечено достоверное увеличение наибольшей высоты тела (на 11,4%) и длины головы (на 21%) в тех группах, где содержание ПФД в воде было максимальным (табл.2). Существенно, что контакт эмбрионов с перфторуглеродом ускорил последующее развитие предличинок. Далее был выполнен эксперимент на эмбрионах севрюги. После содержания зародышей, изначально находившихся на 32-й стадии развития, в течение 2-х суток в герметичной емкости в контроле и опытной группе с содержанием ПФД 10 об.% в жидкой фазе все эмбрионы погибли. При увеличении количества ПФД до 20 об.% наблюдался выклев единичных личинок (5%), остальные 65 % находились на 34-й стадии развития и 30 % - на 33-й. В группе с количеством ПФД 30 об.% выклюнувшихся личинок было 15 %, на 34-й стадии - 70 % и на 33-й стадии - 15 % от общего количества заложенной икры. При увеличении количества ПФД до 40 об.% - отмечен массовый выклев (70%), остальные 30 % находились на 34-й стадии. При морфометрическом анализе выявлены тенденции, наблюдавшиеся в предыдущем эксперименте со стерлядью.

Таблица 2. Морфометрические показатели предличинок стерляди, М±ш

(мм)

Показатели Опытные группы при содержании

Контроль перфтордекали на в жидкой фазе, об%

10 20 30 40

Общая длина 9,03±0,21 8,8±0,35 9,38±0,21 8,95±0,20 9,98±0,45

тела (Ь)

Длина тела (1) 8,83±0.21 8,63±0,34 9,1 ±0,24 8,73±0,19 9,78±0,45

Длина 6,0±0,06 5,8±0,21 6,18±0,12 5,8±0,21 6,85±0Д1

туловища (а<1)

Наибольшая 2,33±0,09 2,38±0,05 2,48±0,07 2,43±0,05 2,63±0,09 *

высота тела

(Н)

Высота головы 0,83±0,26 1,0±0,04 1,23*0,09 0,95±0,03 1,33±0,03

(Нсер11)

Длина головы 0,83±0,07 0,85±0,09 0,93±0,03 0,88±0,03 1,05±0,05 *

(1серЬ)

Примечание: * - достоверное различие с контролем (р<0,05)

Таким образом, добавление ПФД в герметичную емкость при моделировании перевозки эмбрионов русского осетра, стерляди и севрюги способствовало уменьшению гибели и торможения развития зародышей по сравнению с группой контроля. Контакт эмбрионов с ПФД не приводил к развитию уродств и аномалий..

3. Влияние ПФОС на концентрации продуктов метаболизма.

Каковы причины обнаруженных эффектов перфторуглеродов? Считается, и эти представления являются общепризнанными, что перфторуглероды улучшают газообмен. Чтобы убедиться в этом на практике был проведен эксперимент с эмбрионами гибрида белуга х бестер. Цель его состояла в изучении влияния ПФД на химические показатели водной среды при моделировании транспортировки.

Зародыши гибрида находились на 15 стадии развития, плотность их составляла 700 шт./100 мл. Перфторуглерод занимал 40 об.% от жидкой фазы. Спустя 29 часов от начала эксперимента было обнаружено, что в контрольных емкостях 19 % икры было мертвой, у 70 % стадия развития

оценивалась как 16-я, у 11 % - как 17-я. В опытных емкостях 15 % эмбрионов было мертвых, 40 % - на 16-й стадии, 45 % - на 17-й стадии развития. Через двое суток выдерживания в герметических емкостях эмбрионы контрольной группы погибли. В опытной группе 10 % икры было мертвой, 13 % находилось на 16-й стадии и 77 % - на 20-й стадии эмбрионального развития (рис.4).

Содержание кислорода в экспериментальных емкостях постепенно снизилось за время инкубации более чем в два раза, изменившись до 17,2 мг/л в опыте и 19,7 мг/л в контроле, однако оставалось достаточно высоким. Для нормальной жизнедеятельности осетровых концентрация кислорода должна быть более 6 мг/л (Привезенцев, 1973).

I Контроль

ППФД

мертвые эмбрионы 16 стадия 20 стадия

Рисунок 4. Развитие эмбрионов гибрида белуга х бестер спустя 2 суток после начала эксперимента

Концентрация диоксида углерода за время эксперимента значительно увеличилась пропорционально длительности инкубации, как в опыте, так и в контроле, достигнув уровня 14,9 мг/л и 17,6 мг/л соответственно. Превышение ПДК (10 мг/л) отмечено уже через 29 часов инкубации.

Таким образом, существенных отличий в газовом режиме между контрольными и опытными емкостями не наблюдалось. Очевидно, что улучшения газообмена в емкостях, содержащих перфторуглерод, не произошло. Это подтверждает и теоретический расчет. При постановке экспериментов мы заменяли воздушную фазу на ПФД. Однако, газовая

емкость перфторуглерода по сравнению с газовой емкостью воздуха в несколько раз меньше. Так, при р02=760 мм рт.ст., содержание кислорода в ПФД - 42 об.%, а в воздухе - 100 об.%. Следовательно, если воздушную фазу заменить ПФД, то содержание кислорода уменьшиться в 2,5 раза. Остается проверить возможность улучшения гидрохимического режима в результате сорбции перфторуглеродом продуктов метаболизма.

Содержание ионов аммония за время инкубации несколько повысилось в опыте и контроле пропорционально длительности эксперимента (до 1,91 мг/л и 2,27 мг/л соответственно). Превышение уровня ПДК (0,5 мг/л) было отмечено через 18 часов после его начала. Содержание нитритов увеличилось до 0,14 мг/л в опытных емкостях и до 0,11 мг/л в контрольных. Их уровень оказался выше допустимых величин (0,08 мг/л) уже через 29 часов инкубации в обеих группах. Количество нитратов в опыте и контроле оставалось в пределах ПДК (1,0 мг/л) и варьировало до 0,35 и 0,32 мг/л соответственно. Отмечено также уменьшение рН среды до 7,3 в опытных и 7,2 в контрольных емкостях. Данные изменения значений находятся в пределах, допустимых для осетровых рыб (7-8), и отражают закономерный сдвиг в кислую сторону.

Таким образом, при моделировании транспортировки эмбрионов осетровых рыб в герметичной емкости наблюдали возрастание концентрации диоксида углерода со сдвигом рН в кислую сторону, а также некоторое накопление ионов аммония и нитритов. Присутствие ПФД не привело к улучшению газового режима и не повлияло на накопление азотсодержащих продуктов метаболизма.

4. Зависимость выживаемости объектов перевозки от вида ПФОС.

Благодаря работам отечественных ученых (Терешина, Доронина, 1999; Образцов и др., 1993) доказано, что ПФОС помимо газотранспортных свойств обладают высокой биологической активностью. В частности, липофильные ПФОС, растворяясь в мембранах клеток и взаимодействуя с гидрофобными участками полиферментных комплексов, модифицируют их функциональную активность. Это проявляется в изменении мембран эритроцитов, активности первого комплекса дыхательной цепи митохондрий, индукции

цитохрома Р-450 по фенобарбитальному типу и торможению продукции активных форм кислорода активированными лейкоцитами. Кроме того, ПФОС и их эмульсии обладают выраженными сорбционными свойствами.

Можно предположить, что решающим фактором при добавлении ПФОС в герметично закрывающийся пакет при транспортировке является взаимодействие перфторуглеродов с мембранами объектов перевозки. Для проверки возможного мембранотропного действия ПФОС были выполнены исследования с тремя липофильными соединениями, имеющими существенные различия в химической структуре, - ПФПЦГ, ПФПМТБЦГ, ПФД и нелипофильным - ПФТБА. Следует отметить, что наряду с относительно высокой липофильностью, взятые перфторуглероды обладают большей по сравнению с перфторированным третичным амином - ПФТБА способностью растворяться (диффундировать) в водной среде. Это происходит, очевидно, вследствие более высокого давления паров. Так, ПФТБА в отличие от ПФД имеет в 6 раз меньшую величину давления пара, в 2 раза более высокую критическую температуру растворения в гексане и в 15 раз хуже растворяется в воде. При этом по кислороду и углекислому газу емкость ПФТБА составляет 96% от газовой емкости ПФД.

Опыт проводили на 20-дневных личинках русского осетра (масса тела - 260 мг) при добавлении в воду 10 и 15 об.% ПФОС (рис.5). Продолжительность жизни личинок в группах с добавлением 10 и 15об.% ПФПЦГ составила 26 и 28 часов соответственно, выживаемость личинок контрольной группы - 15 часов. В эксперименте с использованием 10 и 15 об.% ПФПМТБЦГ личинки оставались живыми в течение 20,5 и 30 часов соответственно, а в контроле - 14,5 часов. Аналогичная картина повышения выживаемости рыб при увеличении доли перфторуглерода в воде наблюдалась также в эксперименте с ПФД. Так, продолжительность жизни личинок русского осетра в опытных группах составила 22 и 30,5 часов соответственно, в контрольной - 14,5 часов. Обратная тенденция появилась при использовании ПФТБА: в опытных емкостях с меньшим количеством перфторуглерода личинки прожили 14 часов, с большим -13,5 часов, а в контроле - 15,5 часов.

Часы

35 т ■ Контроль в 10 об.% □ 15 об.%

30 -

ПФПЦГ

ПФПМТБЦГ

ПФД

ПФТБА

Рисунок 5. Продолжительность жизни личинок русского осетра при использовании различных ПФОС (в часах)

Следовательно, можно сделать вывод, что главной причиной обнаруженного протективного эффекта является взаимодейтсвие ПФОС с биологическими структурами, а не газовая емкость ПФОС. Реализация этого взаимодействия обусловлена прямым контактом ПФОС с гидробионтами и, по-видимому, способностью перфторуглеродов диффундировать в воду, что важно для личинок и молоди, дышащих через жабры.

5. Реабилитация самок русского осетра после операции

прижизненного получения икры.

Влияние операции прижизненного получения икры на «

физиологическое состояние самок русского осетра оценивалось по

анализу крови: 28 особей за 2-3 суток до операции и 25 особей спустя двое суток после операции. Установлено снижение гемоглобина с 77 г/л 9 до 66 г/л (рис.6). У 28% рыб величина этого показателя была менее 60 г/л, что отражает развитие в послеоперационном периоде анемического синдрома, обусловленного кровопотерей. Значение СОЭ в среднем составляло 9 мм/час, что на 29% выше данного показателя до операции. Повышение СОЭ в послеоперационном периоде можно объяснить

развитием воспалительного процесса, анемией, интоксикацией продуктами резорбции икры. Также обнаружено снижение содержания общих липидов, холестерина и белка в сыворотке крови оперированных рыб.

Влияние перфторана изучали на 19 производителях русского осетра (опытная группа - 9 самок, контрольная - 10 самок). Введение эмульсии сопровождалось увеличением концентрации гемоглобина на 25%, уменьшением СОЭ на 16%, и падением активности печеночных аминотрансфераз - АлАТ (на 18,5%) и АсАТ (на 31,5%) (рис.7). Обнаружена тенденция к уменьшению количества нейтрофилов и лимфоцитов. При этом одновременно наблюдались такие же сорбционные эффекты, какие были отмечены Е.В.Терешиной (2003) у теплокровных животных: уменьшение содержания в сыворотке крови общих липидов, холестерина, бета-липопротеидов, а также общего белка и альбумина.

Представляло интерес воздействие на послеоперационных самок другого кровезаменителя - полиглюкина. Группа сравнения состояла из 6 опытных и 7 контрольных рыб. Введение полиглюкина русскому осетру в дозе 5 мл/кг массы тела не привело к положительному эффекту.

5 120-1

| Ю<Н

I 80

5 60 -

5? 40

160 140 1

20 -1

0 !

Рисунок 6. Влияние оперативного получения икры на физиологические показатели самок русского осетра

Примечание: * - достоверное различие с контролем (р<0,05)

При анализе показателей достоверных различий между особями «полиглюкиновой» - опытной и контрольной групп выявлено не было, за исключением содержания гемоглобина. Его содержание у самок после

инфузии полиглюкина оказалось достоверно меньше, чем у контрольных (р<0,05) на 25,6%. Возможно это связано с гемодшпоцией. Остальные биохимические показатели обеих групп существенно не отличались.

Таким образом, из апробированных кровезаменителей только введение перфторана самкам русского осетра приводит к улучшению их физиологического состояния, что подтверждает достоверное изменение гематологических и биохимических показателей.

/ ^ / ^

Рисунок 7. Влияние перфторана на физиологические показатели самок русского осетра

Примечание: * - достоверное различие с контролем (р<0,05)

ВЫВОДЫ

1. Показано, что в присутствии ПФОС в замкнутой емкости выживаемость эмбрионов, личинок и молоди осетровых рыб возрастает почти в 2 раза.

2. Перфторуглероды не повреждают процесс эмбриогенеза. Морфометрический анализ свидетельствует о некотором ускорении роста эмбрионов и личинок по сравнению с группой контроля, т.е. ПФД уменьшает торможение развития эмбрионов при моделировании транспортировки осетровых рыб в герметичных емкостях.

3. Показано, что изменение газообмена и сорбция токсических продуктов метаболизма не являются определяющими факторами в развитии положительного эффекта ПФД. Эффект ПФОС зависит от их количества в водной фазе и их типа. Нелипофильный и слабо диффундирующий через воду ПФТБА не оказывает существенного влияния на выживаемость и развитие эмбрионов, личинок и молоди осетровых рыб, что дает основание связывать позитивное влияние с мембранотропными эффектами перфторуглеродов и их способностью диффундировать через водную среду.

4. Обнаружено ухудшение физиологического состояния самок русского осетра после операции прижизненного получения овулировавщей икры, которое проявляется в снижении концентрации гемоглобина на 14%, повышении СОЭ на 41%, уменьшении общего белка крови и холестерина на 26% и 32% соответственно.

5. Внутривенное введение перфторана прооперированным самкам русского осетра приводит к улучшению их физиологического состояния, что подтверждается повышением концентрации гемоглобина на 25%, снижении СОЭ на 16% и уменьшением активности аминотрансфераз в сыворотке крови (АсАТ - на 31% и АлАТ - на 19%).

6. При внутривенном введении полиглюкина физиологическое состояние оперированных самок существенно не изменилось, за исключением снижения концентрации гемоглобина на 26%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При транспортировке эмбрионов, личинок и молоди осетровых рыб в герметично закрытых емкостях с водой (полиэтиленовые пакеты) рекомендовано внесение насыщенных кислородом липофильных, имеющих наибольшую способность диффундировать в воду, ПФОС. Добавление 10 об.% и более ПФОС значительно увеличивает выживание и уменьшает торможение развития при перевозке осетровых на ранних этапах онтогенеза.

2. Реабилитация самок русского осетра после операции получения овулировавшей икры должна включать в себя мероприятия, направленные на улучшение их физиологического состояния, максимальное устранение стрессовых факторов, и повышение резистентности рыб к искусственным условиям содержания, что позволит оптимизировать их дальнейшее «одомашнивание». В качестве противошокового и антигипоксического средства рекомендовано введение в хвостовую вену кровезаменителя с газотранспортной функцией - перфторана, в дозе 1,5 мл/кг массы тела. Использование перфторана в послеоперационном периоде приводит к снижению СОЭ и активности аминотрансфераз в сыворотке крови, что указывает на уменьшение повреждения тканей.

Список опубликованных работ:

1. Лозовская М.В., Лозовский А.Р., Никулынина Г.Н., Шевлякова Н.В., Федосеева Е.А. Влияние биологически активных веществ на выживание и физиологические показатели осетровых рыб на ранних этапах онтогенеза // Ранние этапы развития гидробионтов как основа формирования биопродуктивности и запасов промысловых видов в мировом океане: Материалы Всероссийской конф. - Вопросы рыболовства. - М., 2001. - С. 152-155.

2. Лозовский А.Р., Лозовская М.В., Шевлякова Н.В., Федосеева Е.А. Определение критериев корректирующего отбора осетровых рыб в маточное стадо // Проблемы и перспективы развития аквакультуры в России: Материалы докл. науч.- практ. конф. - Краснодар, 2001. - С. 72-73.

3. Лялькина Е.В., Вихляева И.А., Федосеева Е.А., Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р.. Физиологическое состояние самок русского осетра Acipenser gueldenstaedti Brandt при внесезонном получении половых продуктов // Рыбохозяйственная наука на пути в XXI век: Тез. докл. Всерос. конф. молодых. - Владивосток, 2001. - С. 36-37.

4. Федосеева Е.А., Лозовский А.Р., Шевлякова Н.В. Сезонная динамика содержания белков сыворотки крови у разновозрастных осетровых РМС // Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития: Материалы докл. II Междунар. науч.-практ. конф. - Астрахань, 2001. - С. 39-41.

5. Шевлякова Н.В. Использование перфтордекалина для повышения выживаемости рыб в процессе транспортировки // Рыбохозяйственная наука на пути в XXI век: Тез. докл. Всеросс. конф. молодых ученых. -Владивосток, 2001. - С. 154-155.

6. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р., Тяпугин В.В. Влияние перфтордекалина на эмбриогенез и выживаемость молоди рыб в условиях дефицита кислорода // Аквакультура осетровых рыб. Достижения и перспективы развития: Материалы докл. П Междунар. науч.-практ. конф. - Астрахань, 2001. - С. 124.

7. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р., Дегтярева С.С. Темпы роста и физиологическое состояние ремонтно-маточных стад белуги // Биология внутренних вод: проблемы экологии и биоразнообразия: Тез. докл. XII конф. Молодых ученых. - Борок, 2002. - С. 158.

8. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. Влияние перфтордекалина на эмбриогенез и выживаемость молоди осетровых рыб при моделировании гипоксии // Перфторуглеродные соединения в медицине и биологии: Сб. материалов XII Междунар. конф. - Пущино, 2002. - С. 154-155.

9. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. Влияние перфтордекалина на выживаемость и развитие эмбрионов осетровых рыб при транспортировке // Современное состояние рыбоводства на Урале и перспективы его развития: Материалы Междунар. науч.-практ. конф. - Екатеринбург, 2003. - С. 59-63.

10. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. Влияние перфтордекалина на гидрохимические показатели при моделировании транспортировки

эмбрионов осетровых рыб // Животные в антропогенном ландшафте: Материалы Междунар. науч.-практ. конф. - Астрахань, 2003. - С. 115117.

11. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. Влияние перфторана на физиологическое состояние самок русского осетра после прижизненного получения овулировавшей икры // Эколого-физиологические проблемы адаптаций: Материалы XI Междунар. симпозиума. - М., 2003. - С. 628630.

12. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. Физиологические показатели русского осетра, прооперированного для получения икры после введения перфторана // Перфторуглеродные соединения в медицине и биологии: Сб. материалов XIV Междунар. конф. - Пущино, 2004. - С. 167-171.

13. Шевлякова Н.В., Лозовский А.Р. Влияние перфторорганических соединений на адаптации осетровых рыб при транспортировке и после получения половых продуктов //Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития: Материалы докладов III Междунар. науч.-практ. конф. - Астрахань, 2004. - С. 217-220.

14. Шевлякова Н.В., Чижов А .Я., Маевский Е.И., Лозовский А.Р., Асланиди К.Б. Химически инертные перфторуглероды повышают выживаемость и ускоряют развитие гидробионтов // Перфторуглеродные соединения в медицине и биологии: Сб. материалов XIV Междунар. конф. - Пущино, 2004. - С. 222-227.

15. Шевлякова Н.В., Чижов А.Я., Лозовский А.Р., Маевский Е.И. Использование перфторана для реабилитации самок осетровых рыб после операции прижизненного получения икры // Перфторуглеродные соединения в медицине и биологии: Сб. материалов XIV Междунар. конф. - Пущино, 2004. - С. 234-236.

16. Шевлякова Н.В., Судакова Н.В. Применение кетамина для наркоза осетровых // Рыбоводство и рыболовство. - 1997, №1. - С. 25.

17. Васильева Л.М., Шевлякова Н.В., Шеходанов К.Л., В.Т.Ермилов. Способ транспортировки живой рыбы. Заявка № 2002100291/13(000044) от 3 января 2002 г.

Список сокращений

ПФОС - полностью фторированные органические соединения

ПФД - перфтордекалин

ПФТБА - перфтортрибутиламин

ПФГТЦГ - перфторпропилциклогексаном

ПФПМТБЦГ - перфтор-пара-метилтретбутшгциклогексаном

АлАТ - аланиновая аминотрансфераза

АсАТ - аспарагиновая аминотрансфераза

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

Шевлякова Наталья Владимировна (Россия)

Влияние перфторорганических соединений на эколого-

физиологическое состояние осетровых рыб в аквакультуре

Исследовано влияние полностью фторированных органических соединений на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб при транспортировке и после оперативного изъятия овулировавшей икры у производителей. Установлено, что добавление в герметическую емкость липофильных ПФОС повышает выживаемость и уменьшает торможение развития рыб. Впервые показано положительное влияние перфторана при введении его в кровяное русло самкам русского осетра (Acipenser gueldenstaedtii) после прижизненного получения половых продуктов.

Shevlyakova Natalia Vladimirovna (Russia)

Influence of compound of perfluorocarbon on a ecologycal-pbysiological status of sturgeon fishes in aquaculture

Influence of CPFC on a ecological-physiological status of sturgeon fishes is investigated at transportation and after operative withdrawal of ovulatoryes eggs from female. It is established, that addition in hermetic capacity of lipophilic CPFC raises survival rate and reduces braking development of fishes. Positive influence of perftoran for the first time is shown at his introduction in a blood of female of the Russian sturgeon (Acipenser gueldenstaedtii) after lifetime withdrawal of ovulatoryes eggs.

#-8475

РНБ Русский фонд

2005-4 5069

Издательство КаспНИРХ 414056, г. Астрахань, ул. Савушкина, 1 Подписано в печать 27.04.2004 г. Тираж 100. Заказ 073.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шевлякова, Наталья Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.4

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Современное состояние популяции каспийских осетровых.9

1.2. Проблема сохранения осетровых в аквакультуре

1.2.1 .Выживаемость рыб при транспортировке.16

1.2.2. Влияние операции прижизненного получения половых продуктов на производителей.27

1.2.3. Регуляция эколого-физиологического состояния рыб перфторорганическими соединениями.32

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Методы исследования осетровых на ранних этапах онтогенеза 38

2.2. Методы исследования зрелых производителей.45

Глава 3. ОЦЕНКА ВОЗДЕЙСТВИЯ ПФОС НА ОСЕТРОВЫХ РЫБ И КОНЦЕНТРАЦИИ ПРОДУКТОВ МЕТАБОЛИЗМА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ТРАНСПОРТИРОВКИ В ГЕРМЕТИЧЕСКОЙ ЕМКОСТИ

3.1. Влияние ПФОС на выживаемость осетровых рыб при моделировании транспортировки на разных стадиях онтогенеза.52

3.2. Влияние ПФОС на развитие осетровых рыб при моделировании перевозки.54

3.3. Влияние ПФОС на концентрации продуктов метаболизма в герметической емкости.60

3.4. Зависимость выживаемости объектов перевозки от вида ПФОС.67

Глава 4. ВЛИЯНИЕ ПФОС НА ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ САМОК ОСЕТРОВЫХ РЫБ ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ ПРИЖИЗНЕННОГО ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛОВЫХ ПРОДУКТОВ

4.1. Эколого-физиологическое состояние самок русского осетра после операции получения половых продуктов.70

4.2. Влияние реабилитационных мероприятий на эколого-физиологическое состояние самок русского осетра, прооперированных для получения овулировавшей икры.77

4.2.1. Влияние перфторана на эколого-физиологическое состояние самок русского осетра после операции получения половых продуктов.77

4.2.2. Влияние полиглюкина на эколого-физиологическое состояние самок русского осетра после операции получения половых продуктов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние перфторорганических соединений на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб в аквакультуре"

Актуальность. Угрожающее состояние стада осетровых рыб вызывает необходимость предпринимать срочные меры по их спасению. Проблема сохранения немногочисленных представителей осетровых, как на Каспии, так и в других водоемах, становится заботой мирового сообщества (Веппв^ а1., 1997). Однако шансы на быстрое восстановление запасов этих ценных рыб весьма малы, так как для них характерны длительный период полового созревания, высокий процент смертности и чувствительность к методам добычи.

В сложившихся условиях для поддержания численности и биоразнообразия осетровых в природе большое значение приобретает заводское воспроизводство, конечным результатом которого является выпуск молоди в естественные водоемы. В России существует около 20 заводов, выпускающих в реки ежегодно десятки миллионов штук осетровых. Однако многие осетровые рыбоводные заводы (ОРЗ) не имеют возможность содержания собственного маточного стада (Волгоградский ОРЗ, Житненский ОРЗ Астраханской области и др.), а вынуждены перевозить развивающуюся икру и личинки с других заводов для подращивания и выпуска молоди в реку или, транспортируя дальше, в море.

Уменьшить пресс на природные запасы осетровых рыб помогает товарное выращивание, которое в свою очередь не только снижает браконьерство, но и стимулирует формирование маточных стад, в задачу которых входит сохранение редких и исчезающих видов (Васильева, 2000).

Заводы, . занимающиеся товарным разведением,такжеиспытывают необходимость в перевозке рыб как с других хозяйств для пополнения собственного стада, так и полученных в условиях своего завода икры и личинок для нужд заводов по воспроизводству осетровых.

Наибольшее распространение при перевозке эмбрионов, личинок и молоди рыб получили герметично закрываемые полиэтиленовые пакеты благодаря компактности, малому весу, простоте герметизации и низкой стоимости (Орлов, Кружалина, 1974). Плотность посадки перевозимых объектов в них значительно выше, чем в открытых емкостях. Недостатком такого способа транспортировки является торможение развития гидробионтов и их гибель из-за нарушения газообмена и массобмена, в частности вследствие накопления углекислого газа и токсичных продуктов метаболизма при длительной транспортировке. Для улучшения газового состава внутрь емкости накачивают до половины объема газообразный кислород, однако эта процедура лишь в малой мере предотвращает гибель гидробионтов. Таким образом, проблема сохранения жизнеспособного потомства - эмбрионов, личинок и молоди при транспортировке оставалась не решенной.

Для повышения выживаемости рыб в 1997 г. А.К. Богерук с соавторами предложили использовать емкости с протоком ПФОС (0,8-10 об.% в час), которые являются химически инертными переносчиками газов - кислорода и СОг (рис.1). Но это устройством оказалось неприемлемым для практического использования из-за сложности и дороговизны. Необходимо было проверить, способны ли ПФОС в закрытой емкости обеспечивать сохранение оплодотворенной икры и рыбы, а также исследовать возможность ПФОС влиять на их развитие. Биологические эффекты ПФОС у осетровых могут зависеть от физико-химических свойств этих соединений, а именно от способности растворяться в воде. Однако до сих пор эти аспекты были не изученными.

Другой, не менее важной проблемой в осетроводстве является сохранение жизни производителей после операционного извлечения половых продуктов. Плохое физиологическое состояние самок перед операцией, отсутствие у части из них овуляции после гормональной инъекции, низкое рыбоводное качество икры у самок с неудовлетворительным физиологическим состоянием, повышенный отход оперированных в условиях искусственно регулируемых температур производителей обуславливают необходимость предоперационной подготовки и послеоперационной реабилитации рыб (Металлов, Гераскин, Аксенов, 1997). Как показал опыт НПЦ «Биос», риск потери самок после операций, особенно в осенне-зимний период, достаточно большой, и поэтому проблема выживаемости прооперированных производителей в первые месяцы после получения икры требует дальнейшего изучения. 1

1 1 Воздух

1 С7 Вода; 1 •

ПФД

1 Аквариум

2 Фильтр-оксигенатор

3 Насос

Кислород 1

1 и.

-I

Й§Ш

Рис. 1. Схема проточного устройства для перевозки рыб (1Ш 2081577, 1997)

В результате операции в организме рыб > происходят значительные. изменения физиологического состояния, которые являются в настоящее время малоизученными. Для коррекции возникающих нарушений целесообразно апробировать перфторуглеродную эмульсию - препарат «Перфторан», который может компенсировать недостаток гемоглобина (Байбуз, 1997; Костюнченко,

1999; Корик, 2000; Клигуненко, Компаниец, 1999), эффективно осуществляет газообмен в условиях нарушенной микроциркуляции, оказывает антитоксическое действие, а также предотвращает шоковое состояние (Гридчик, Захаров, 1999; Клигуненко, Скирда, Лещев, 2001; Клигуненко и др., 2001; Riess, 1994; Riess J.G., Le Blanc, 1995; Rockwell, 1985). Однако его влияние на оперированных рыб не изучено.

Цель и задачи. С учетом вышеизложенного целью исследований являлось изучение влияния ПФОС на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб для повышения их устойчивости к оперативному вмешательству и к экстремальным условиям транспортировки. Основные задачи работы:

5. Изучить влияние перфторана на эколого-физиологическое состояние прооперированных самок осетровых.

Научная новизна и практическая значимость. Впервые изучено влияние ПФОС в различных количествах на выживаемость и морфологическое развитие осетровых и их гибридов на ранних этапах онтогенеза, а также на химические показатели водной среды при моделировании транспортировки в герметической емкости. Впервые установлено воздействие операции прижизненного получения половых продуктов на физиологическое состояние производителей осетровых рыб. Получены новые данные по гематологическим и биохимическим показателям сыворотки крови самок осетровых рыб при введении перфторана после операции прижизненного получения половых продуктов. На основании результатов работы даны рекомендации по применению перфторуглеродных соединений для транспортировки эмбрионов и личинок осетровых рыб в герметических емкостях и реабилитации производителей после операции прижизненного получения половых продуктов.

Апробация работы. В диссертации подведены итоги исследований, выполненных автором в 1997-2003 гг. Материалы работы обсуждались на Всероссийской конференции «Ранние этапы развития гидробионтов как основа формирования биопродуктивности и запасов промысловых видов в мировом океане» (Москва, 2001), научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития аквакультуры в России» (Краснодар, 2001), Всероссийской конференции молодых ученых «Рыбохозяйственная наука на пути в XXI век» (Владивосток, 2001), XII конференции молодых ученых «Биология внутренних вод: проблемы экологии и биоразнообразия» (Борок, 2002), XI Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2003), Международной научно-практической конференции «Современное состояние рыбоводства на Урале и перспективы его развития» (Екатеринбург, 2003), III Международной научно-практической конференции «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития» (Астрахань, 2004). По материалам диссертации опубликовано 15 работ, имеется патент на изобретение (см.приложение 1).

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературных данных, описания материала и методов исследования, собственных данных, обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 252 наименования, в том числе 70 - зарубежных авторов. Текстовая часть изложена на 128 страницах машинописного текста, иллюстрированного 9 таблицами и 27 рисунками, из которых 16 диаграмм.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Шевлякова, Наталья Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Показано, что присутствие ПФОС в замкнутой емкости повышает выживаемость эмбрионов, личинок и молоди осетровых рыб почти в 2 раза по сравнению с контролем, что доказывает их выраженный протективный эффект в этих условиях.

2. ПФОС не нарушают развитие осетровых рыб на ранних стадиях онтогенеза в герметической емкости, что подтверждается отсутствием уродств и уменьшением торможения развития эмбрионов и личинок, в том числе и по морфометрическим показателям.

3. Показано, что изменение газообмена и сорбция токсических продуктов метаболизма не являются определяющими факторами в развитии положительного эффекта ПФД.

4. Эффект ПФОС зависит от их количества в водной фазе и типа. ПФТБА не оказывает существенного влияния на выживаемость и развитие эмбрионов, личинок и молоди осетровых рыб, что дает основание связывать позитивное влияние со способностью перфторуглеродов диффундировать в водную среду.

5. Обнаружено ухудшение эколого-физиологического состояния самок русского осетра после операции прижизненного получения овулировавшей икры, которое проявляется в повышении СОЭ на 40,1%, снижении концентрации гемоглобина на 13,6%, а также уменьшении общего белка сыворотки крови на 26,4%, общих липидов на 26,1% и холестерина на 32,4%.

6. Установлено протективное действие внутривенного введения перфторана самкам русского осетра после операции прижизненного изъятия овулировавшей икры, что проявляется уменьшением показателя СОЭ на 16%, активности сывороточной " АсАТ" на 31,5%, повышении" "концентрации гемоглобина в крови на 25,3%. Некоторые из обнаруженных метаболических эффектов (снижение содержания в сыворотке крови альбумина на 49% и холестерина на 57%) отражают наличие у перфторана выраженных сорбционных свойств.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ ПФОС ДЛЯ ТРАНСПОРТИРОВКИ И ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ

ОСЕТРОВЫХ

2. Реабилитация самок русского осетра после операции получения овулировавшей икры должна включать в себя мероприятия, направленные на улучшение их эколого-физиологического состояния, максимальное устранение стрессовых факторов, и повышение резистентности рыб к искусственным условиям содержания, что позволит оптимизировать их дальнейшее «одомашнивание». В качестве противошокового и антигипоксического средства рекомендовано внутривенное введение кровезаменителя с газотранспортной функцией — перфторана, в дозе 1,5 мл/кг массы тела. Использование перфторана в послеоперационном периоде приводит к повышению содержания гемоглобина, снижению СОЭ и активности аминотрансфераз в сыворотке крови, что указывает на уменьшение повреждения тканей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Необходимость выполненных нами исследований обусловлена трудностями адаптации осетровых рыб к искусственным условиям содержания, приводящими в результате, как к массовой гибели, так и потере отдельных особей.

Значительный отход при выращивании осетровых рыб происходит в ходе эмбрионально-личиночного развития и на стадии молоди. Разведение рыб часто требует их транспортировки на ранних этапах онтогенеза в течение более или менее длительного времени, когда возникают экстремальные экологические условия, еще больше повышающие риск их гибели.

В 1997 году А.К. Богеруком с соавторами было установлено положительное влияние перфторуглеродов на состояние рыб при транспортировке, что дало основание предложить новый способ содержания и перевозки с применением ПФОС. Использовали выраженные газотранспортные способности ПФД, который насыщали кислородом в типовом оксигенаторе и самотеком свободной струей подавали в аквариум с водой, благодаря чему происходило уменьшение размеров и исчезновение анаэробной зоны.

Нами было установлено положительное влияние липофильных, имеющих способность диффундировать в воду, ПФОС на эмбрионы и личинки осетровых рыб при моделировании транспортировки в герметических емкостях без постоянной подачи перфторуглерода. Повышение выживаемости при добавлении таких ПФОС в герметическую емкость с рыбой наблюдалось во всех проведенных экспериментах на различных видах и гибридных формах осетровых (русский осетр, стерлядь, севрюга, бестер, белуга х бестер). Это позволяет утверждать, что протективное влияние перфторуглеродов носит не случайный, а закономерный характер.

ПФД, вносимый в герметические емкости, значительно улучшает не только выживаемость, но и влияет на развитие находящихся в них объектов.

Зародыши опытной группы по сравнению с контрольной группой быстрее и с меньшими нарушениями морфообразовательного процесса достигают последующих стадий эмбриогенеза.

Скорость и типичность развития эмбрионов осетровых рыб определяется целым рядом факторов. Для нормального эмбриогенеза необходимы оптимальные условия водной среды, особенно для зародышей на более поздних стадиях, у которых интенсивность обменных процессов выше (Детлаф и др., 1981).

Первостепенное значение имеет температура воды при инкубации, которая должна находиться в пределах: для эмбрионов белуги - 8-15°С, русского осетра 12-18°С, севрюги - 15-25°С (Никольская, Сытина, 1978). Температурный оптимум для зародышей гибридных форм близок к таковому у родительских видов.

Характерной особенностью развития икры осетровых в пределах зоны температурных адаптаций на ранних стадиях эмбриогенеза до начала гаструляции является более или менее пропорциональное нарастание скорости развития зародышей с увеличением температуры водной среды (Городилов, 1970). Определена зависимость скорости эмбриогенеза различных видов осетровых от температуры (Детлаф и др., 1981). Экстремальные температуры воды, как низкие, так и высокие, отрицательно влияют на зародышей, что в дальнейшем приводит к нарушению морфогенеза и гибели эмбрионов.

В наших экспериментах температура воды находилась, как, правило, в оптимальных пределах. В отдельных опытах, проведенных на русском осетре, она была несколько выше оптимальной, но не критической. Осетр на ранних этапах развития является наиболее пластичным к температурным воздействиям^ видом, икра которого благодаря широте температурных границ развития может инкубироваться как при повышенных, так и пониженных температурах (Никольская, Сытина, 1978).

Протективное воздействие перфторуглеродов подтверждено анализом морфометрических показателей осетровых на ранних стадиях онтогенеза. Положительный эффект носит ярко выраженный дозозависимый характер и усиливается с увеличением количества препарата в емкости от 10 до 40 об.%.

Каковы причины обнаруженных эффектов перфторуглеродов? Очевидно, что они обусловлены физико-химическими свойствами этих соединений. Из целого ряда необычных свойств ПФОС наиболее привлекательными считают химическую инертность и способность растворять большие количества газов. "Действительно, при нормальном атмосферном давлении в них растворяется до 50 об.% кислорода и до 190 об.% углекислого газа (Иваницкий, 2001). Еще в 80-х гг. было окончательно доказано после эксперимента с тетрахименами, обладающими окситаксисом, что различные организмы - от инфузорий до млекопитающихся - могут усваивать кислород, отдаваемый перфторуглеродами.

Если положительный эффект обусловлен газотранспортной функцией ПФОС, тогда химический анализ воды должен выявить разницу между группами. Однако прямое измерение содержания кислорода, углекислого газа и аммиака в водной среде не выявило в течение 2 суток существенных различий этих параметров между стандартными и содержащими 40 об.% перфторуглерода пакетами при выдерживании зародышей гибрида белуга х бестер. Таким образом, улучшения среды при добавлении ПФД в герметическую емкость не произошло.

В целом, во время моделирования транспортировки эмбрионов осетровых рыб отмечали выраженное возрастание концентрации диоксида углерода со сдвигом рН в кислую сторону, а также некоторое накопление ионов аммония и нитритов.

Накопление ионов аммония не является основным фактором, лимитирующим выживаемость гидробионтов в герметических пакетах. Таким фактором ионы аммония становятся в хорошо аэрируемых емкостях открытого типа при длительной транспортировке (Орлов и др., 1974). Токсичным является свободный аммиак, который образуется из ионов аммония при сдвиге рН в щелочную сторону (Руководство., 1977)., В наших опытах с герметическими емкостями мы наблюдали не защелачивание, а закисление водной среды пропорционально длительности инкубации. В этих условиях количество свободного аммиака не только не увеличилось, но даже несколько уменьшилось.

Известно, что наиболее сильное угнетающее действие на рыб в герметических емкостях оказывает нарастание концентрации диоксида углерода. При отравлении этим токсикантом в транспортной таре гибель молоди может наступить уже после выпуска в водоем, несмотря на то, что общее состояние ее при визуальном наблюдении будет казаться вполне удовлетворительным (Орлов и др., 1974). Замедление эмбриогенеза осетровых рыб, наблюдаемое в наших экспериментах, происходило на фоне увеличивающегося содержания диоксида углерода в водной среде. Величина этого показателя соответствует 17,6 мг/л в контроле и 14,9 мг/л в опыте, однако разница между этими значениями не достигает уровня достоверности.

Проведенный на личинках русского осетра эксперимент с использованием ПФОС, имеющих существенные различия в химической структуре, показал эффективность использования лишь липофильных и наиболее способных растворяться в воде перфторуглеродов — ПФПЦГ, ПФПМТБЦГ и ПФД. Можно предположить, что протективное действие ПФОС при добавлении их в герметичную емкость обусловлено взаимодействием частиц перфторуглеродов с биологическими структурами.

В работах отечественных биофизиков имеются- сведения, о. том,-что липофильные ПФОС, растворяясь в мембранах клеток и взаимодействуя с гидрофобными участками полиферментных комплексов, способны модифицировать их функциональную активность. Это проявляется в изменении мембран эритроцитов, активности первого комплекса дыхательной цепи митохондрий, индукции цитохрома Р-450 по фенобарбитальному типу, а также торможению продукции активных форм кислорода активированными лейкоцитами. Кроме того, ПФОС и их эмульсии обладают выраженными сорбционными способностями. Учитывая столь высокую биологическую активность ПФОС можно предположить, что именно в этом заключается их протективное действие на осетровых рыб в изученных условиях.

Свойства ПФОС позволяют широко использовать их в самых различных областях биологии и медицины (Sekiguchi, 1998а; 19986; Schmitz Р., Hermeking Н., Gerke Е, 1998). Так, описано применение фторуглеродных соединений для культивирования бактерий с различными типами дыхания. Опыты с посевами материала от больных туберкулезом показывают более интенсивное размножение микобактерий на среде с ПФД и значительное превосходство этой среды по чувствительности в сравнении с контролем. Обнадеживающие результаты получены и в экспериментах с микобактериями лепры (Ющенко и др., 1999).

Известно, что концентрированная эмульсия перфторуглеродов — низафтем служит профилактическим и лечебным средством при воспалительных заболеваниях тканей пародонта благодаря воздействию на различные звенья патологического процесса. Проведенные клинические исследования подтвердили высокую эффективность как самой эмульсии, так и разработанной лечебно-профилактической линии средств гигиены полости рта, в состав рецептур которой она была введена (зубная паста «Силодент-люкс). Терапевтическая активность этих средств по величине индекса ПМА (папиллярно-маргинально-альвеолярый) уже на 3-й день в 2 раза выше, чем у традиционных средств (солкосерил) (Сахарова, Сидляров, 1999).

Разработана серия эмульсий ПФОС на различных эмульгаторах для использования их при производстве косметических средств различной направленности. Показано, что эмульсии ПФОС как переносчики молекулярного кислорода ускоряют синтез коллагена и эластина в дерме кожи и одновременно замедляют синтез кератина, то есть обладают реальным омолаживающим действием (Макаров и др., 1999).

Перфторуглероды являются основой кровезаменителя с газотранспортной функцией - перфторана, получившего широкое распространение в реанимации, хирургии, терапии, трансплантологии, офтальмологии (Лазоришинец, 2003; Осипова и др.,2003, Шишкин и др., 2003; Chang, Reppueci, Zimmerman et al, 1989; Chang, Sun, 1994).

На основе данных, полученных нами и подтвержденных многочисленными экспериментами, можно рекомендовать использование липофильных, имеющих наибольшую способность диффундировать в воду, перфторуглеродов в аквакультуре, в частности, для улучшения эколого-физиологического состояния осетровых рыб при транспортировке в герметично закрытых емкостях.

Другой, не менее актуальной проблемой аквакультуры осетровых рыб, является адаптация производителей к искусственным условиям содержания; после операции прижизненного получения половых продуктов. В настоящее время для ускоренного формирования ремонтно-маточного стада осетровых рыб часто прибегают к одомашниванию диких производителей. Стрессы и травмирование самок в процессе заготовки, предоперационного выдерживания, а также во время операции прижизненного получения икры ухудшают их физиологическое состояние, приводят к заболеванию и гибели; отдельных особей. Поэтому возникает необходимость реабилитации производителей как до операции, так и после нее.

Особый интерес представляло; изучение влияния операции прижизненного получения икры на физиолого-биохимические показатели крови осетровых рыб. В своих исследованиях мы установили, что операция прижизненного получения овулировавшей икры приводит к значительным изменениям биохимических и гематологических показателей. Развивается гипопротеинемия за счет уменьшения глобулинов, анемия и повышение СОЭ.

Такие результаты согласуются с многочисленными литературными данными о коренном изменении направления обмена веществ в нерестовый период жизни осетровых рыб в естественных условиях (Андреев, 1979; Долидзе, 1981 а,в; Лукьяненко и др., 1990).

После вымета. половых продуктов в реке у осетровых резко падает концентрация гемоглобина (Андреев, 1980) и увеличивается СОЭ (Малышева, 1965; Андреев, 1975). Содержание общего белка сыворотки крови у покатных отнерестившихся рыб меньше, чем у ходовых (Седов, 1966; Лукьяненко, Седов, 1968; Шелухин, 1968 б; Гапонов, 1974 а), более высокая СОЭ и пониженная концентрация гемоглобина (Лукьяненко, Талонов, 1968).

О коренном изменении направления обмена веществ в нерестовый период жизни осетровых рыб в естественных условиях имеется немало информации (Михайлова, Калашников, 1939; Калашников, Скадовский, 1948; Малышева, 1966, 1967; Дубинин, 1973, 1978; Шелухин, 1974 а,б; Андреев, 1979; Долидзе, 1981 а,в; Лукьяненко и др., 1990). Гораздо меньше сведений о состоянии самок, созревающих после гипофизарной инъекции на осетровых заводах. Г.И. Малышева (1966, 1967) считает, что гипофизированные производители, содержавшиеся при оптимальных физико-химических параметрах водной среды по показателям крови незначительно отличаются от особей, находящихся в естественных условиях, однако в дальнейшем продемонстрированы существенные различия между этими рыбами (Металлов, 1974 а, б).

Показано, что гипофизарная инъекция, вызывая ускорение овуляции и состояние «текучести», не приводит к сходным по глубине изменениям обмена у заводских рыб в сравнении с естественно нерестующими особями (Долидзе, 1983). Так, у «текучих» заводских белуг в отличие от самок в дикой природе, содержание гемоглобина оказалось ниже на 20%, общего белка - на 14%, общих липидов - на 16% и холестерина - на 32,2% (Долидзе, 1981а). В целом, после гипофизарной инъекции происходит достоверное снижение в сыворотке крови почти всех изучаемых показателей (гемоглобина, общего белка, общих липидов и холестерина), кроме показателя СОЭ, который несколько повышается (Гапонов, 1974в).

Таким образом, данные других исследователей, изучавших физиологическое состояние осетровых рыб в посленерестовый период жизни как в естественных условиях, так и после гипофизарной инъекции в искусственных, подтверждают результаты, полученные нами на самках русского осетра после прижизненного получения половых продуктов. Ухудшение состояния производителей в этот период вызывает необходимость проведения реабилитационных мероприятий как в раннем, так и, при необходимости, в отдаленном послеоперационном периоде.

Установлено, что внутривенное введение перфторана самкам русского осетра после операции получения половых продуктов, в отличие от полиглюкина, способствует улучшению их физиологического состояния. Использование данного кровезаменителя привело к достоверным изменениям ряда гематологических и биохимических показателей. Явным положительным эффектом после введения перфторана явилось уменьшение активности аминотрансфераз в сыворотке крови, относящихся к индикаторам повреждения клеток гипоксического, токсического и некротического характера (Меньшиков, 1987). Аналогичное снижение активности АсАТ и АлАТ в сыворотке крови на 45-48% наблюдали при инфузии перфторана больным с геморрагическим шоком для профилактики синдрома полиорганной недостаточности (Захаров и др., 2001).

Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови широко используется в медицине для распознавания заболеваний, вызывающих развитие цитолитического синдрома. Синдром цитолиза наблюдается при гепатите, инфаркте миокарда, остром панкреатите, гемолизе, миокардите, остром нефрите а также некоторых заболеваниях мышц и нервной системы (Хазанов, 1988; Исламов, Ладилов,1990; Zhao, Smith, Еуег, 1995).

В качестве индикаторов цитолитического синдрома могут быть использованы самые разные ферменты, локализующиеся в цитоплазме или органоидах клетки, и уклоняющиеся в кровь при ее повреждении (АсАТ, АлАТ, изоцитратдегидрогеназа, глутаматдегидрогеназа и др.). Однако определение активности сывороточных аминотрансфераз пользуется особой популярностью в клинической медицине благодаря доступности и высокой чувствительности (Хазанов, 1988).

В ихтиопатологии исследование активности сывороточных ферментов для диагностики патологических процессов до последнего времени практически не использовалось (Справочник ., 2000), однако полученные нами результаты позволяют рекомендовать определение активности аминотрансфераз в качестве доступного и информативного критерия оценки физиологического состояния производителей осетровых рыб.

Уменьшение показателя СОЭ у рыб опытной группы, получавших перфторан, также доказывает протективное действие препарата в послеоперационном периоде. Величина СОЭ является информативным, хотя и относительно малочувствительным критерием воспалительных, некротических и других патологических процессов в организме. Снижение СОЭ отмечено при использовании перфторана в комплексе антипаретической терапии у больных, перенесших операции на брюшной полости по ургентным показаниям (Клигуненко и др., 2001).

Некоторые из обнаруженных метаболических эффектов (снижение содержания в сыворотке крови альбумина, холестерина, бета-липопротеидов (Кузнецова, Рыбакова, 1999; Chang, McCreath, Draeger et al, 1993; Doronina, Kurmacheva, Afonin, 1994; Chase, McCreath, 1994;) обусловлены тем, что перфторан является эффективным жидким сорбентом с развитой активной поверхностью, площадь которой составляет 600 м2 в каждых 100 мл эмульсии. Данное свойство, присущее только перфторану, позволяет предупредить, уменьшить или устранить признаки жировой эмболии, являющееся весьма опасным осложнением травм различного происхождения. Так, например, перфторан связывает до 10 мл липидов на 1 мл препарата (Мороз, Крылов, 1999; ОЬ^боу еЬ А1,2000).

Способность связывать различные гидрофобные соединения позволяет примененять эмульсии перфторуглеродов для лечения эндотоксикоза при острых отравлениях (Шилов и др., 2001). В модельных опытах установлено, что количество сорбированного перфторуглеродами белка зависит от состава эмульсии (Кузнецова и др., 1999). Общеизвестны холестеринсорбирующие свойства эмульсий ПФОС, что дало основание предложить их для использования как инфузионного эндосорбента холестерина для профилактики и лечения атеросклероза (ТегевЫпа е1 а1., 1992; Терешина и др. 1999; Терешина, Доронина, 1999).

Однако не исключается, что снижение показателей некоторых белков и липидов отражает напряжение адаптационных механизмов в послеоперационном периоде, связанное с их повышенным расходом.

Апробация кровезаменителя с газотранспортной функцией — перфторана в качестве средства для улучшения эколого-физиологического состояния самок русского осетра после операции прижизненного получения половых продуктов доказала возможность и необходимость использования данной эмульсии. Полученные нами положительные результаты дают основание рекомендовать введение перфторана производителям внутривенно в дозе 1,5 мл/кг.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шевлякова, Наталья Владимировна, Москва

1. Андреев В.В. Некоторые особенности минерального обмена у белуги в речной период жизни // Экологическая физиология и биохимия рыб. Тез. докл. IV Всесоюз. Конф. Астрахань, 1979, т. 2. -197 с.

2. Андреев В.В. Содержание микроэлементов и показателей крови у волжской нерестовой популяции белуги // Тр. Астраханского технического инта рыбной промышленности и хозяйства. Юбилейный выпуск. Астрахань, 1980.-С. 103-107.

3. Андреев В.В. Эколого-физиологическая характеристика нерестовой популяции осетра // Некоторые проблемы экологии животных Нижнего Поволжья и Северного Кавказа. Волгоград, 1975. - С. 24-40.

4. Архипов В.В., Манцыгин Ю.А. Клеточный тест на токсичность перфторированных органических соединений // Перфторуглеродные соединения в медицине и биологии. Пущино, 2001. - С. 88-92.

5. Архипов В.В., Шкворченко Д.О., Макаров К.Н. Макрофагальная реакция на различные ПФОС и ее зависимость от газового состава в культуре клеток линии Р-388 // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999. - С. 161-166.

6. Байбуз Д.В. Исследование возможности использования перфторуглеро-дов в акушерстве и гинекологии // Конкурсная работа ВНОС ВмедА, 1997.-29с.

7. Баранникова И.А. Пути развития и функциональные основы внутрипопу-ляционной дифференциации у осетровых // Осетровые и проблемы осетрового хозяйства. M.: Пищевая промышленность, 1972. - С. 167-179.

8. Баранникова И.А. Функциональные основы миграции рыб.- Л.: Наука, 1975а.-210 с.

9. Ю.Березовская В.И., Савельева Э.А., Чебанов М.С. Искусственное нерестилище для естественного размножения осетровых // Рыбоводство и рыболовство. 1995, №2. - С. 15-17.

10. Билько В.П. Влияние рН среды на оплодотворяемость икры разного качества // Разнокачественность раннего онтогенеза у рыб. К.: Наук.думка, 1974. - С. 170-179.

11. Билько В.П., Кружилина C.B. Влияние свободной углекислоты на жизнеспособность фитофильных и пелагофильных рыб в раннем онтогенезе // Гидробиол.журн. 1999, т.35, №4. - С.32-40.

12. И.Богданова Л.А., Глазачева И.В., Иванов Э.В., Розова Т.Л., Шестерин И.С. Инструкция по химическому анализу воды прудов. — М.: ВНИИПРХ, 1984.-51 с.

13. Н.Богерук А.К., Ежов В.Г., Ефимов А.Н., Луховицкий В.И., Поликарпов В.В. Способ содержания рыбы в рыбоводной емкости. A.C.RU 2081577 // Открытия и изобретения, 1997.

14. Бурлаков А.Б. Гонадотропные гормоны гипофиза рыб и их таксономическая специфичность // Труды ВНИРО, 1978, т. 130. С.17-25.

15. Бурцев И.А. Получение потомства от межродового гибрида белуги со стерлядью // Генетика, селекция и гибридизация рыб. М.: «Наука», 1969.- С.232-242.

16. Бурцев И.А., Серебрякова Е.В., Николаев А.И. Временные инструктивные указания по селекционно-племенной работе с гибридами осетровых рыб.- М.: ВНИРО, 1978. 16 с.

17. Васильева JIM. Биологические и технологические особенности аквакуль-туры осетровых в условиях нижнего Поволжья. Астрахань, 2000. -190 с.

18. Васильева Л.М., Ноякшева Т.А. Лечебные и профилактические мероприятия при выращивании осетровых. Астрахань, 2001. - ■ 16 с.

19. Вернидуб М.Ф. Критические периоды в развитии яиц и личинок рыб и их практическое значение // Вестник Ленинградского университета. — Л., 1949,-№4.-С. 69-98.

20. Ветеринарные препараты в России: Справочник // И.Ф. Кленова, Н.А.Яременко. М.: Сельхозиздат, 2000. - 544 с.

21. Вещев В.П. Пополнение запасов севрюги Волго-Каспия от естественного воспроизводства // Осетровые на рубеже XXI века: Тез. докл. Междунар. конф. Астрахань, 2000. - С. 41-42.

22. Власенко А.Д. Оценка запасов промысловых рыб в Каспийском бассейне //1 конгресс ихтиологов России: Тез.докл.-М.: ВНИРО, 1997 С.411-411.

23. Власенко А.Д., Зыкова Г.Ф., Красиков Е.В. Состояние запасов осетровых в Каспийском бассейне и пути их восстановления // Современные проблемы Каспия: Материалы Междунар. конф., посвященной 105-летию КаспНИРХ. Астрахань: КаспНИРХ, 2002. - С. 58-64.

24. Воробьева A.A. Биологические последствия совместного воздействия нефтепродуктов и ХОП на эмбриогенез осетровых рыб // Тез. докл.: Проблемы современного товарного осетроводства. — Астрахань, 1999. — С. 120-121.

25. Временные рекомендации по определению физиологического состояния рыб по физиолого-биохимическим данным. М., 1981. - 54 с.

26. Гаджиев Р.В., Алиева Д.К. Современное состояние воспроизводства шипа на куринских осетровых рыбоводных заводах // Тез. докл. междунар. конф.: Осетровые на рубеже XXI века. Астрахань, 2000. - С. 226-227.

27. Газимагомедова М.М. Структурно-функциональные изменения мембран эритроцитов при остром отравлении метафосом и их коррекции перфто-раном // Автореф. дис.канд. биол. наук. Махачкала, 1999 — 25 с.

28. Гапонов B.C. Гематологическая характеристика производителей ходовой и покатной белуги // Тез. отчетной сессии ЦНИОРХ. Астрахань, 1974а. -С. 33-34.

29. Гапонов B.C. РОЭ у ходовых и инъецированных производителей осетровых // Тез. отчетной сессии ЦНИОРХ.-Астрахань, 1974в. С. 35-36.

30. Гераскин П.П., Алтуфьев Ю.В., Металлов Г.Ф., Шелухин Г.К. Изменение физиологического состояния осетровых рыб при хроническом токсикозе // Рыбохозяйственные исследования на Каспии: Результаты НИР за 1999 год. Астрахань: КаспНИРХ, 2000. - С. 283-295.

31. Гераскин П.П., Металлов Г.Ф., Аксенов В.П. Физиолого-биохимическая характеристика самок севрюги, используемых для искусственного воспроизводства // Осетровое хозяйство водоемов СССР. Астрахань, 1984. -С. 81-82.

32. Гончаров Б.Ф. Перспективы использования синтетических аналогов лю-либерина для получения зрелых половых продуктов от производителей осетровых рыб // VI Всесоюз. конф. по экологической физиологии и биохимии рыб: Тез. докл. Вильнюс, 1985. - С. 384-385.

33. Грибова И.А. Гематологическая норма // В кн.: Руководство по гематологии / Под ред. А.И. Воробьева, Ю.И.Лорио. М.: Медицина, 1979 - 220 с.

34. Гридчик И.Е., Захаров А.Е. Лечение гиповолемического шока с использованием перфторана // Физиологические активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине: Тез. Всеарм. Науч. конф., 1999. С.14-16.

35. Гришанова А.Ю., Мишин В.М. Сравнительная характеристика изолированных форм цитохрома Р-450, индуцируемых фенобарбиталом и пер-фтордекалином //Биохимия. 1988. - Т.53, вып. 3. - С. 368-376.

36. Гулидов М.В., Соловьев Л.Г. Использование микрометода Ван Дама для определения интенсивности потребления кислорода зародышами рыб // Океанология. М., 1976, №5. - С.912-916.

37. Дацкевич В.П. Как повысить жесткость воды // Рыбоводство и рыболовство. М., 1967, №5, - с. 41.

38. Державин А.Н. Воспроизводство запасов осетровых рыб. Баку.: АН АзССР, 1947. - 247 с.

39. Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб. М.: «Наука», 1981. - 224 с.

40. Долидзе Ю.Б. Сравнительный биохимический анализ функционального состояния производителей белуги в естественных и заводских условиях // Рациональные основы ведения осетрового хозяйства: Тез. докл. науч.-практ. конф. Волгоград, 1981 а. - С. 71-73.

41. Долидзе Ю.Б. Физиолого-биохимическая характеристика производителей белуги в преднерестовый и нерестовый периоды // Рациональные основы ведения осетрового хозяйства: Тез. докл. науч.-практ. конф. Волгоград, 1981 в.-С. 75-76.

42. Долидзе Ю.Б. Физиолого-биохимическая характеристика производителей каспийской белуги (Huso huso L.) в естественных и заводских условиях:

43. Автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук. М., 1983. - 17 с.

44. Домрачева B.C., Максимов Б.Н., Пашина Н.Г. и др. Острая токсичность эмульсий на основе отдельных стереоизомеров перфтордекалина и при сочетании их с другими перфторуглеродными соединениями //

45. Перфторуглеродные соединения в биологии и медицине. Пущино, 1980. -170 с.

46. Дурново Е.А., Фурман И.В., Ипполитов В.П., Мухина И.В., Леухина В.Ю. // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 2002.- С. 126-129.

47. Дурин П.В., Крючков В.Н., Минияров Ф.Т. Опыт доместикации диких самок белуги на производственной базе ОНПЦ «БИОС» // I конгресс ихтиологов России: Тез.докл. М.: ВНИРО, 1997. - С. 310-310.

48. Житнухин Ю.Л., Литвиненко И.В., Бисага Г.Н., Одинак М.М. Изменение клинико-иммунологических показателей экспериментального аллергического энцефаломиелита под влиянием перфторана // Бюл. Эксперим. Биологии и медицины. 1997. -Т.123, №3. - С.315-318.

49. Иваницкий Г.Р. Биофизические основы создания перфторуглеродных сред и газотранспортных кровезаменителей (обзор) // Перфторорганиче-ские соединения в биологии и медицине. Пущино, 2001. - С. 4-49.

50. Иваницкий Г.Р. Донорская кровь и ее альтернативы // Перфторорганиче-ские соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999. - С. 5-20.

51. Иваницкий Г.Р. Как перфторан обеспечивает газотранспорт. // Перфто-рорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999. - С. 229-243.

52. Иванов А.П. Рыбоводство в естественных водоемах. М.: Агропромиз-дат, 1988.-367 с.

53. Иванов В.П. Биологические ресурсы Каспийского моря: их сохранение и использование в изменяющихся экологических и геополитических условиях: Автореф. дис. на соиск. уч. ст. докт. биол. наук. Астрахань, 1999. -76 с.

54. Иванов В.П. Состояние запасов трансграничных объектов промысла и распределение ОДУ между прикаспийскими государствами // Рыбохозяй-ственные исследования на Каспии: Результаты НИР за 1999 год. Астрахань: КаспНИРХ, 2000. - С. 93-97.

55. Иванова Н.Т. Атлас клеток крови рыб (сравнительная морфология и классификация форменных элементов крови рыб). М.: Легкая и пищевая пром-сть, 1982. - С. 184.

56. Иванов В.П. Современные уловы осетровых заводского происхождения в Каспийском бассейне // Формирование запасов осетровых в условиях комплексного использования водных ресурсов. — Астрахань, 1986. С. 103-104.

57. Игумнова Л.В., Детлаф Т.А. Временные закономерности созревания севрюги волжской нерестовой популяции // Вопросы ихтиологии. — М., 1983, т. 23, вып. 1.-С. 76-80.

58. Исламов Б.И., Ладилов Ю.В., Бобровский Р.В. и др. Применение эмульсий перфторуглеродов. для противоишемической защиты миокарда // Перфторуглероды и медицина. Новосибирск, 1990. - С. 142-144.

59. Казанский Б.Н. Эколого-эволюционные принципы организации осетрового хозяйства в бассейне южных морей // В кн.: Биологические основы развития осетрового хозяйства в водоемах СССР. М.: «Наука», 1979. -С. 22-34.

60. Казанчеев E.H. Рыбы Каспийского моря. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981. -168 с.

61. Касимов Р.Ю., Касимова З.К. Кислородный порог у молоди осетровых в раннем онтогенезе // Тез. докл. науч. сессии ЦНИОРХ. Баку, 1967. — С. 34-35.

62. Клигуненко E.H., Компаниец Н.Г. Возможности использования перфто-рана в комплексе антипаретической терапии при операциях на органах брюшной полости // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999. - С. 70-76.

63. Клигуненко Е.Н.ДСравец О.В., Гулега И.Е. Стресс-протекторные эффекты перфторана // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999.- С. 70-76.

64. Клигуненко E.H., Кравец О.В., Лещев Д.П. и др. Клиническая оценка эффективности применения перфторана в условиях шока различного генеза

65. Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине: Тез. Всерос. Науч. конф., 2001. -С.21-23.

66. Клигуненко E.H., Скирда И.И., Лещев Д.П. Кислородный статус организма при использовании перфторана в лечении различных видов гиповоле-мического шока // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 2001.- С. 129-133.

67. Климонов В.О., Никоноров С.И., Витвитская JI.B. Справочник по применению анестезирующих веществ в рыбоводстве М.: ТОО «Меди-нор», 1995. - 169 с.

68. Кляшторин Л.Б. О чувствительности молоди осетровых к дефициту кислорода // Вопросы ихтиологии. 1976, т. 16, вып. 4. - С. 744-748.

69. Кокоза A.A. Динамика устойчивости молоди осетровых к дефициту кислорода в период заводского выращивания // Матер, науч. сессии, посвященной 100-летию осетроводства. Астрахань, 1969. - С. 49-58.

70. Коновалов П.М. Опыты с молодью севрюги на дыхание и кислородный порог // Сб. работ по ихтиологии и гидробиологии, 1961, вып.З. С. 93105.

71. Константинов A.C., Пелипенко М.Ю. О возможности использования цеолитов для удаления токсических продуктов азотистового обмена рыб // Вопросы ихтиологии. 1983, т. 23, вып. 6. - С.1040-1042.

72. Корик В.Е. Применение кровезаменителя переносчика кислорода на основе модифицированного гемоглобина при лечении больных с тяжелой кровопотерей // Автореф. дис. канд. мед. наук. - 2000. - 17 с.

73. Костюнченко А.Л. Применение перфторана для восполнения операционной кровопотери при операциях на легких // Применение инфузионных антигипоксантов и искусственных переносчиков кислорода в хирургии. — 1999. С.35-37.

74. Коуржил Й., Хамачкова Й., Ступка 3., Микодина Е.В., Седова М.А.,

75. Кочетыгов Н.И. Изменение газотранспортной функции крови при использовании кровезаменителей при кровопотере и шоке в эксперименте // Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в военной медицине: Тез. Всеарм. Науч. конф., 1997. С.57-59.

76. Кузнецова И.Н. Влияние эмульсий перфторуглеродов на макро- и микрокинетику доставки газов кровью // Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине: Тез. Всеарм. Науч. конф., 1999. С.45-47.

77. Кузнецова И.Н. О механизмах биологической активности эмульсий перфторуглеродов // // Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине: Тез. Все-рос. Науч. конф., 2001. С.29-31.

78. Кузнецова И.Н. Функциональная активность и стабильность эмульсий перфторуглеродов: Автореф. дис. . .д-ра биол.наук / РНИИГТ, ВмедА. -СПб., 1999.-38 с.

79. Кузнецова И.Н., Рыбакова Л.П. Поверхностные свойства и взаимодействие частиц эмульсий перфторуглеродов с белками крови // Перфторорга-нические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999. - С. 227228.

80. Кулиев З.М., Алекперов А.П. Осетроводство в Азербайджане и перспективного развития // Осетровые на рубеже XXI века: Тез. докл. Междунар. конф. Астрахань, 2000. - С. 255-256.

81. Курбанов К.З., Магомедов М.А. Иммунотропное действие перфторугле-родных соединений в эксперименте // Сб. науч. тр., посвящ. 10-летию

82. ЦНИЛ ДГМА. Махачкала, 2000. - С.31-36.

83. Кэмпбелл Дж. У. Выделение продуктов азотистого обмена. В кн.: Сравнительная физиология животных. - М.: Мир, 1977, т.1. - 591 с.

84. Лабораторные методы исследований в клинике / Под. Ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - С. 242-244.

85. Лазоришинец В.В. Опыт использования кристаллоидной кислородсодержащей фармакохолодовой кардиоплегии с добавлением перфторана при хирургической коррекции пороков сердца // Перфторуглеродные соединения в медицине и биологии. Пущино, 2003. - С. 44-49.

86. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.

87. Ланге Н.О., Дмитриева E.H. Методика эколого-морфологических исследований развития молоди рыб. — В кн.: Исследования размножения и развития рыб. -М., 1981. С. 67-84.

88. Лиманский В.В., Яржомбек A.A., Бекина E.H., Андронников С.Б. Инструкция по физиолого-биохимическим анализам рыбы. — М., 1984. 60 с.

89. Лозинов А.Б. О кислородном оптимуме молоди осетровых. Автореф. дис. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук, изд. МГУ, 1950. - 30 с.

90. Лонгинович Д.Н. Потребление кислорода рыбцом на ранних этапах развития // Тр. Азовск.н.-и.ин-та рыбного хозяйства, 1960, вып.З, с.65-88.

91. Лукичева Т.И., Сентебова H.A. // Лаб. дело. 1977, №11.- С.675-677. ЮО.Лукьяненко В.И., Талонов B.C. Видовые особенности и половой диморфизм РОЭ у осетровых // Матер, науч. сессии ЦНИОРХ. - Баку, 1968. -С. 54-55.

92. Ю1.Лукьяненко В.И., Дубинин В.И., Сухопарова А. Д. Влияние экстремальных условий приплотинной зоны реки на осетровых рыб. -Рыбинск, 1990. 272 с.

93. Лукьяненко В.И., Седов С.И. Об изменчивости и видоспецифичности белкового спектра сыворотки крови у рыб // Журнал общей биологии. 1968, т. 29, №2. - С. 209-219.

94. Львов Л.Ф. О методике прижизненного получения половых продуктов у осетровых // Рыбное хозяйство. Серия «Аквакультура». Осетровые Волго-Каспийского бассейна: вопросы разведения и выращивания: Информ. Ма7тер. / ВНИЭРХ, 1997, вып.З. С.29-33.

95. Львов Л.Ф. Применение анестезирующих средств для осетровых рыб // Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре: Тез. докл. Международ, симп. — Астрахань, 1992. С. 250-253.

96. Маевский Е.Й. О. биологической активности' перфторорганических соединений и их эмульсий // Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в экспериментальной и клинической медицине: Тез. Всеарм. Науч. конф., 1999. С.52-54.

97. Макаров К.Н., Махлис Л.А., Оксинойд О.Э. Эмульсии ПФС для косметики // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. -Пущино, 1999.-С. 167-169.

98. Малышева Г.И. Изменение показателей крови севрюги Asipenser stellatus Pallas во время естественного нереста и при гипофизарных инъекциях // Физиологическое основы экологии водных животных: Тез. докл. на науч. совещании. Севастополь, 1965. - С. 63-65.

99. Металлов Г.Ф. Динамика осмотического давления крови у производителей озимого осетра в речной период жизни // Тез. отчетной сессии ЦНИОРХ. Астрахань, 1974а. - С. 96-97.

100. Металлов Г.Ф. Особенности осмотического давления крови у производителей русского осетра в условиях естественного нереста и в заводских условиях после гипофизации // Тез. отчетной сессии ЦНИОРХ. -Астрахань, 19746. С. 98-99.

101. Металлов Г.Ф., Гераскин ПЛ., Аксенов В.П. Физиолого-биохимические аспекты оценки рыбоводного «качества» самок севрюги Acipenser stellatus (Pall.), 1997.

102. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследований // Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1973. - С. 45-47.

103. Микодина Е.В. Биологические основы и методы управления функциями в раннем онтогенезе рыб // Биологические основы марикультуры / Под ред. Л.А. Душкиной. М.: ВНИРО, 1998. - С.178-205.

104. Мильпггейн В.В. Осетроводство. — М.: Пищевая промышленность,1972.-127с.

105. Михеев В.П. Разведение стерляди в плавучих садках в условиях водохранилища // Тез. отчетной сессии ЦНИОРХ. Астрахань, 1972. - С. 110-111.

106. Мороз В.В., Крылов H.JI. Некогда спорные, но сегодня решенные, вопросы применения перфторана в клинике // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999.- С. 25-32.

107. Никольская Н.Г., Сытина JI.A. Сравнительный анализ действия постоянных температур на эмбриональное развитие разных видов осетровых // Вопросы ихтиологии. 1978, т. 18, вып.1 (108). - С. 101-116.

108. Никольский Г.В. Частная ихтиология. М.: Высшая школа, 1971. -С. 471.

109. Николюкин Н.И. Некоторые вопросы цитогенетики, гибридизации и систематики осетровых рыб // Генетика. 1966, №5, - С. 12-18.

110. Никоноров С.И. Эволюционный, физиолого-генетический и прикладной аспекты исследования центральной нервной системы рыб: Авто-реф. дис. на соиск. уч. ст. докт. биол. наук.- М., 1987. 44 с.

111. Никоноров С.И., Климонов В.О. Влияние гидрохлорида хинальдина на поведение рыб // Механизмы поведения: Матер. III Всесоюз. конф. по поведению животных. М.: «Наука», 1983, т.1.- С.23 3-234.

112. Никоноров С.И., Климонов В.О. Перспективы применения нейро-тропных веществ в рыбоводстве // Рыбное хозяйство. М., 1984, №4. -С.72-73.

113. Новоженин Н.П. Использование анестезирующих веществ в рыбоводстве // Тр.ВНИИПРХ, 1969, т.16. С.258-270.

114. Образцов В.В., Кабалыюв К.С., Гросс У. и др. // Перфторуглерод-ные активные средства для медицины и биологии (новые аспекты исследований). Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1993, с. 117-119.

115. Орлов Ю.И. Можно ли увеличить давление в пакетах? // Рыбоводство и рыболовство, 1973, №1. — С. 19.

116. Орлов Ю.И., Вольнова Г.А., Кружалина Е.И., Аверина И.А. Какое количество водных организмов следует помещать в транспортные емкости // Рыбоводство и рыболовство. 1971, №2. - С. 12.

117. Орлов Ю.И., Кружалина Е.И. Полиэтиленовые пакеты для перевозки рыбы // Рыбоводство и рыболовство. 1962, №3. - С.27.

118. Орлов Ю.И., Кружалина Е.И. Применение пакетов из пластмассовых пленок для перевозки живой рыбы и других водных животных. М., 1959.-24 с.

119. Орлов Ю.И., Кружалина Е.И., Аверина И.А., Ильичева:Т.И. Транспортировка живой рыбы в герметических емкостях. М., 1974. - С. 5-13.

120. Пельцам Э.Д. Наставление к искусственному разведению стерлядей. Казань, 1886.- 24 с.

121. Персов Г.М. Методика работы с производителями стерляди // Ученые записки Ленинградского ун-та.- 1957, вып.44. С.72-86.

122. Плужников H.H., Лобзин Ю.В., Ковеленов А.Ю. и др. Иммунологические эффекты перфторана // Эксперим. И клин. Фармакология. 1998. - Т.61, №5. - С.34-36.

123. Подушка С.Б. Длительность созревания самок осетровых, инъецированных в различное время суток // Биологически активные вещества и факторы в аквакультуре. М.: ВНИРО, 1993. - С. 49-52.

124. Подушка С.Б. Получение икры у осетровых с сохранением жизни производителей // Научно-технический бюллетень лаборатории ихтиологии ИНЭНКО.- С.-Петербург, 1999, вып. 2. С.4-20.

125. Подушка С.Б. Прижизненное получение икры у осетровых рыб // Биологические ресурсы и проблемы развития аквакультуры на водоемах Урала и Западной Сибири: Тез. докл. Всерос. конф. Тюмень, 1996. -С. 115-116.

126. Подушка С.Б. Способ получения икры от самок осетровых рыб. Авторское свидетельство СССР №1412035. 1986.

127. Полянинова A.A., Молодцова А.И., Кашенцева JI.H. Питание осетровых рыб в Каспийском море // Современные проблемы Каспия: Матер. Междунар. конф., посвященной 105-летию КаспНИРХ. Астрахань: КаспНИРХ, 2002. - С. 249-261.

128. Привезенцев Ю.А. Гидрохимия пресных водоемов (практическое пособие для рыбоводов). М.: «Пищевая промышленность», 1973.- 119 с.

129. Привольнев Т.И. Перевозка и хранение живой рыбы. М.: Пище-промиздат, 1956, - 78 с.

130. Пронькин В.И., Подушка С.Б. Оценка степени зрелости самок волжской севрюги по положению ядра в ооцитах // Рациональные основы ведения осетрового хозяйства. Волгоград, 1981. - С. 207-209.

131. Прошин Я.Г., Максудьянц И.В. Пути решения проблемы дефицита производителей на осетровых заводах Севкаспрыбвода // Искусственное воспроизводство и охрана ценных видов рыб: Мат-лы Всеросс. Совещания. M., 2001. - С. 233-235.

132. Руководство по химическому анализу поверхностных вод суши // Под ред. д.х.н. проф. Семенова А.Д. — Д.: «Гидрометеоиздат», 1977. С. 329-332.

133. Рывлина И.В. Влияние анестезирующего препарата хинальдина на интенсивность потребления кислорода при транспортировке живой рыбы // Деп. в ВИНИТИ, №302. М., 1981. - 25 с.

134. Садов И.А. Влияние перенасыщенной кислородом воды на развитие молоди // Рыбное хозяйство. М., 1948, .№1. - С.43.

135. Саха К.С., Сэн Д.П., Мазумбар П. Влияние вредных веществ, попавших в среду при распаде продуктов обмена, на выживание личинок и мальков и предупреждение этого влияния // В сб.: Перевозка живой рыбы. Рыбное хозяйство за рубежом. 1958, - С. 21-28.

136. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. Часть 1. М., 1998.-310 с.

137. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. Часть 2. — М.,1999.-234 с.

138. Седов С.И. Сравнительная характеристика сывороточных белков у ходовых и покатных осетровых рыб // Тез. отчетной сессии ЦНИОРХ. -Астрахань, 1966. С. 75-76.

139. Смольянов И.И. Технология формирования и эксплуатации маточного стада сибирского осетра в тепловодных хозяйствах. — М.: ВНИ-ИПРХ, 1987.-34 с.

140. Софронов Г.А., Селиванов Е.А., Ханевич М.Д., Вербицкий В .Г., Дудко С.М., Тиканадзе А.Д., Лазаренко Д.Ю. Применение перфторана на органах брюшной полости // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999.- С. 32-37.

141. Спиридонов Г.С. Строительство осетрово-стерляжьего рыбоводного завода на Куйбышевском водохранилище в Татарской АССР // Осетровое хозяйство водоемов СССР: Тез. докл. Всесоюз. совещания. — Астрахань, 1984.-С. 335-336.

142. Стребкова Т.П. Использование наркотической смеси при транспортировке живой рыбы // Рыбное хозяйство. 1971, №2, - С. 19-21.

143. Сулейманян B.C., Панасенко В.В., Цень Л.Н. Способ повышения жизнестойкости икры рыб. А.А.№984424 // Открытия и изобретения. 1982, №48,-25с.

144. Суховерхов Ф.М., Королева В.М., Писаренкова A.C. Особенности выращивания и зимнего содержания стерляди в прудах // Избранные труды ВНИИПРХ. Кн.1, т. I-IL -М., 2002. С. 41-48.

145. Трусов, В.З. Метод определения зрелости половых желез самок осетровых // Рыбное хозяйство. 1964, №1. - С. 26-28.

146. Тютенков С.К. Опыт перевозки мизид в каннах с кислородной аэрацией // В сб.: Методы перевозки водных беспозвоночных и личинок рыб в целях акклиматизации. М. 1960, - С. 51-55.

147. Усенко Л.В., Криштпфор A.A. // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино, 1999.- С. 76-87.

148. Хазов К.Ю. О росте и сроках созревания весенне-нерестующего волго-каспийского осетра Acipenser guldenstadti Brandt // Вопросы ихтиологии. 1973, т. 13, вып. 6. - С. 1085-1092.

149. Харкевич Д.А. Фармакология: Учебник. 4-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 1993. - 544 с.

150. Ходоревская Р.П. Плавательная способность осетровых на ранних этапах онтогенеза // Биологические основы развития осетрового хозяйства в водоемах СССР. М., 1979. - С. 201-209.

151. Чистякова И.П. Влияние углекислоты на рост личинок осетра и потребление ими кислорода // Тр.ВНИРО, 1961, т. XLIV. С. 15-22.

152. Шевлякова Н.В., Судакова Н.В. Применение кетамина для наркоза осетровых // Рыбоводство и рыболовство. 1997, №1. - С. 25.

153. Шелухин Г.К. Сезонная изменчивость физиолого-биохимических параметров северо-каспийской популяции русского осетра // Матер, науч.сессии ЦНИОРХ. Баку, 1968 б. - С.103.

154. Шилов В.И., Хазов Ю.К., Ивойлова Н.К. О росте, достижении половой зрелости и сроках повторного созревания весенне-нерестующего волго-каспийского осетра // Тр. Саратовского отдел. ГосНИОРХ, 1971 а, т. 11. -С. 71-87.

155. Шилов В.И., Хазов Ю.К., Ивойлова Н.К. О достижении половой зрелости и сроках повторного созревания весенне-нерестующего волго-каспийского осетра Acipenser guldenstadti Brandt // Вопросы ихтиологии. -1971 б, т. 11, вып. 4. С. 678-685.

156. Шилов В.И., Хазов Ю.К. О росте и сроках созревания весенне-нерестующего волго-каспийского осетра // Тез. отчетной сессии ЦНИОРХ. Астрахань, 1972. - С. 189-191.

157. Шишкин М.М., Куликов А.Н. Патофизиология эмульсификации: перфторорганических жидкостей при послеоперационной тампонаде стекловидной камеры // Перфторуглеродные соединения в медицине и. биологии. Пущино, 2003. - С. 173-179.

158. Шумаков В.И., Онищенко H.A., Саитгареев Р.Ш., Тарабарко Н.В.-Использование перфторуглеродных эмульсий при трансплантации органов (итоги и перспективы) // Перфторорганические соединения в биологии и медицине.- Пущино, 1999. С. 143-146.

159. Шурухин A.C. Закономерности созревания самок стерляди после гипофизарной инъекции // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. 1986, №254. - С. 108-117.

160. Ющенко П.С. Устройство для нереста производителей и полученияоплодотворенной икры осетровых рыб // Сб. аннотаций АзНИИРХ по плану 1960 г. Ростов-на-Дону, 1961,- С.9-10.

161. Anderson W.G., McKinley R.S., Colavecchia 1997. The use of clove oil as an anaesthetic for rainbow trout and its effect on swimming performance // North American Journ. of Aquaculture. V.17. P. 301-307.

162. Andrews J. W., Murrai Т., Gibbons G. The influence of dissolved oxygen on the growth of channel catfish. Trans // Amer. Fish., Soc. 1973, v. 102, no. 4,-P. 22.

163. Batzri S., Korn E. Biochem et Biophys acta. 1973, v. 298. - P. 10151021.

164. Black E.C., Fry F.E.I., Black V.S. The influence of carbon dioxide on the utilisazion of oxygen by some freshwater fish // Canad. J. Zool. 1954, v. 32, no. 6, P. 46-52.

165. Blajchman M.A. Substitutes for success /news/ // Nat. Med. 1999. Vol.5, N1.-P.17-18.

166. Bollands A.D, Lowe K.C. Effects of a perfiuorocarbon emulsion, Fluo-sol-DA, 6n rat lymphoid tissue and. immunological competence // Biochem. Physiol. 1986. -Vol.85, N2. - P.309-312.

167. Briozzo J., Nunez L., Chirife J., Herszage L., D'Aquino M. 1989. Antimicrobial activity of clove oil dispersed in a concentrated sugar solution // J. Appl. Bacteriol. V. 66. P. 69-75.

168. Bullerman L.B., Lieu F.Y., Seier S.A. 1977. Inhibition of grown and aflatoxin production by cinnamon and clove oil, cinnamic aldehyde and eugenol // J. Food Sci. V. 42. P. 1107-1116.

169. Chang S„ Reppueci V., Zimmerman N.J., et al. Perfiuorocarbon liquids in the management of traumatic retinal detachments //Ophthalmology. 1989. -Vol.96, N 6. - P.785-792.

170. Chang S., Sun J.K. Perfiuorocarbon liquids in vitreoretinal surgery //Fluorine in medicine in the 21st century: Conference papers, Manchester,

171. Apr., 1994 / Ed. by R.E. Banks, K.C. Lowe. S.I., 1994. - Paper 24. - 9p.

172. Chang T.M., Dekker N.Y. Blood substitutes and oxygen carriers // Biomater. Artif. Cells Immobil. Biotechnol. 1992, Vol.20, N2-4, 871 p.

173. Chang Y.K., McCreath G.E., Draeger N.M., Chase H.A. Novel technologies for direct extraction of proteins // Chem. Eng. Res. Des. 1993. -Vol.71, №A3.- P. 299-303.

174. Chase H.A., McCreath G.E. Separation of proteins using liquid per-fluorocarbon emulsions // J. Chem, TeAchnol. Biotechnol. 1994. -Vol.59, №1.-P. 70-106.

175. Cho G.K., Heath D.D. 2000. Comparison of tricaine methanesulphonate (MS 222) and clove oil anaesthesia effects on the physiology of juvenile Chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha (Walbaum) // Aquacult. Res. 31(6): 537-546.

176. Dixon D.D., Holland D.C. Fluorocarbons: properties and syntheses // Fed. Proc. 1975.-Vol.34, N6. - P.1444-1448.

177. Doronina N.N., Kurmacheva O.A., Afonin N.I. Effect of perfluorochemical emulsion on lipoproteins of plasma blood // Artif. Cells Blood Sub-stit. Immobil. Biotechnol. 1994. - Vol.22, № 4. p.1295-1298.

178. Durville, P., Collet, A. 2001. Clove oil used as an anaesthetic with juvenile tropical marine fish // SPC Live Reef Fish Information Bull. No.9.

179. Emmet R.T. Spectrophotometric determination of urea and ammonia in natural waters with hypochlorite and phenol // Anal. Chem. 1969, vol.14, n. 12.-P. 170-174.

180. Erdmann M.V.I999.Clove oil: an "eco-frendly" alternative to cyanide use in the live reef fish industry? // Live Reef. Fish. Inf. Bull. N. 5. P. 4-7.

181. Fluorin Chemistry / Ed.J.H.Simons. V. 5. N.-J., Lond. Acad. Press., 1964. P. 54-66.

182. Fox H.M., Wingjield C.A. A portable apparatus for determination of oxygen, dissolved in a small volume of water // J. Exptl. Biol. 1938. - P. 15.

183. Fry F.E. The aquatic respiration of Fish // The physiology of fishes, v. 1, Academic press. Inc., New-Jork. 1957. - P. 66-92.

184. Fry F.E., Black V.S., Black E.C., Influence of temperature on the asphix-ion of various tensions of oxygen and carbon dioxide // Biol. Bull. 1947. - P. 92.

185. Hamackova J., Lepicova A., Kouril J., Lepic P., Kozak P., Policar T., Stupka Z., 2001a. Anesteziologicky uCinek hrebickoveho oleje u lina obecneho (Tinea tinea) v zavislosti na teplotS vody // Bull. VURH Vodnany. V. 37(4). P. 147-152.

186. Hikasa Y., Takasa K., Ogasawara T., Ogasawara S. 1986. Anaesthesia and recovery with tricaine methanesulphonate, eugenol and thiopental sodium in the carp, Cyprinus carpio // Jap. J. Vet. Sci. N. 48. P. 341-351.

187. Jamilson G.A., Greenwalt T.J. Blood substitutes and plasma expanders: American national red cross 9 annual scientific Symp., Washington, May, 1977 // N.Y., 1978. - 340 p. - Prog. Clin. Biol. Res; Vol.19.

188. Jegorow I.N., Muslin J.S. Gewinnung von Rogen aus lebenden Fisch // Die Lebensmittel-Ind//-Bd. 18. Hf.I. 1971. - S.25-26.

189. Johnson P.W., Sieburth J.N. Ammonia removal by selective ion exchange: a backup system for microbiological filters in closed-system aquaculture // Aquaculture. 1974, v.4, №1. - S. 61-68.

190. Karapmar M. 1990. Inhibitory effects of anethole and eugenol on thegrowth and toxin production of Aspergilus parasiticus // Int. J. Food Microbiol. N.10. P. 193-200.

191. Karapmar M., Aktug S.E. 1987.Inhibition of foodborne pathogens by thymol, eugenol, menthol and anethole // Int. J. Food Microbiol. N. 4. P. 161166.

192. Karl M. Nemoto. Experience of of fish transportation by plane. «Progressive Fisch-Culturist», v.19, №4, October, 1957. P. 147-157.

193. Kramer R.E. 1985. Antioxidants in clove // J. Am. Oil Chemist's Soc. N. 62. P. 111-113.

194. Ledebur A., Beitrage zur Physiologie der Schwimblase der Fisch // Z. vergleich. Physiol., 1937, S. 2-25.

195. Leiner. Die Physiologie der Fischatmung, Leipzig, 1938. S. 67.

196. Moleyar V., Narasmha P., 1992. Antibacterial activity of essential oil components // Int. J. Food Microbiol. V. 16. P. 337-342.

197. Nagababu E., Lakshmaiah, N. 1992. Inhibitory effects of eugenol on non-enzymatic lipid peroxidation in rat liver mitochondria // Biochem. Pharmacol. N. 43. P. 2393.

198. Obraztsov V.V., Neslund G.G., Kornbrust E.S. et. al. In vitro celluli effects of perfluorochemicals correlate with their lipid solubility // Amer. Z| Physiol. Lung Cell Mol. Physiol.- 2000. Vol.278, N5.-P.1018-1024.

199. Rajakumar D.V., Rao M.N. A. 1993. Dehydrozingerone and isoeugenol as inhibitors of lipid peroxidation and as free radical scavengers // Biochem. Pharmacol. V.46. P. 2067-2072.

200. Ranade M.R., Kevalramani H. Experience of transportation of indiancarpus fingerlings in plastic bags by plane // Indian Journal of Fischeries. 1956, v.3,№2. P. 56-60.

201. Riess I.G. Oxygen Carriers («Blood Substitutes») Raison d"» Etre, Chemistry, and Some Physiology. // Chem. Pev. - 2001. - Vol. 101. P. 27992825.

202. Riess J.G. Les emulsions de fluoroccarbures comme transporteurs d'oxygene injectables. Progress resents et perspectives // Rev. Fr. Transfus. Hemo-biol. 1992. -Vol.35, N6. - P.391-406.

203. Riess J.G. Perfluorochemical emusions for intravascular use // Fluorine in medicine in the 21st century: Conference papers, Manchester, Apr., 1994 / Ed. by R.E. Banks, K.C. Lowe. S.I.,. 1994: - Paper 20. - 9p.

204. Riess J.G., Le Blanc M.L. Preparatioiof perfluorochemical emulsions for biomedical use: principles, materials and methods // Blood substitutes: Preparation, physiology and medical applications, -l.s., 1995.- P.95-129.

205. RiessJ.G. Fluorocarbon-based blood substitutes: what progress //J. Ar--tif.Organs. -1991. -Vol.14, N3. -P.253-258.

206. Rockwell S. Use of a perfluorochemical emulsion to improve oxigenation in a solid tumor // Int. J.Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1985. - Vol. 11, N. 1. - P. 97-103.

207. Schevchenko Y.L., Skorik V.I., Sudus A.V. Use of perftoran in experimental apnea model // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. Biotechnol. 1998. -Vol.26, N5-6. P. 699-699.

208. Schmitz P., Hermeking H., Gerke E. Scleras fixation of posterior chamber lenses in vitrectomized eyes. Perfluorocarbon as an operative aid // Ophthalmology. 1998.- Vol.95,N 8.-P. 564-567.

209. Sekiguchi S. Present status and future prospects in development of blood substitutes // Nippon Naika Gakkai Lasshi. 19986. - Vol.87, N5. - P.941-949.

210. Taylor P. W., Roberts S. D. 1999. Clove oil: An alternative anaesthetic for aquaculture // North Am. J. Aquacult. N. 61. P. 150 -155.

211. Tereshina E.V., Doronina N.N., Afonin N.I. et al. Some aspects of perfluorochemical emulsion's interaction with blood // Biomater. Artif. Cells Immobil. Biotechnol. 1992. - Vol.20, N2-4. - P.1001-1011.

212. Tereshina E.V., Doronina N.N., Ilyina O.A. Compounds absorbed by PFC emulsion during incubation with blood cells in vitro // Artif.Cells, Blood Subst., Immob. Biotech. 1997. - Vol.24. - n.4. - P. 997.

213. Tereshina E.V. Properties of perfluorochemical emulsions in the bloodstream // Symp. «Current issues in blood substitutes» Stockholm. - Sweeden. -2002.-PI 1/12.-c.56.

214. Thompson T.G., Miller R.C. 1928. Apparatus for micro-determination of dissolved oxygen // Industr. Engineer. Chem., v. 20, N 7. P.56.

215. Tremper K.K. Perfluorochemical "blood substitutes" editorial. // Anesthesiol ogy. 1999. - Vol.91, N5.-P. 1185-1187.

216. Trzebiatowski R., Stepanowska K., Siwicki A.K., Kazun K. 1996. Badania nad przydatnoscia preparatu propiscin do znieczulenia ogolnego suma europejskiego // Komunikaty Rybackie (Olsztyn). N. 1. P. 14-18.

217. Tsuchida E. Blood substitutes present and future perspectives: Proc. of 7th Intern. Symp. on blood substitutes, Tokyo, Sept., 1997 // Amsterdam: Hardbound, 1998. 456p.

218. Wada S., Ochikubo H., Sugawara Y. et al. Cellular immune reaction in / W , hyperacute ejection // Transplant. Proc. 1998. - Vol.30, N7. - P.3818-3820.

219. Whitttney R.J. A syning pipette method for the determination oxygen in the bield // J. Exptl. Biol. 1938, v. 15, No. 4. - P. 11-15.

220. Winkler Z. W. The determination of dissolved oxygen in water// Deutsch. Chem. Gesellsch. Berlin, 1988, Bd. 21. P. 2843-2850.

221. Winslow R.M., Vandegriff K.D., Intaglietta M. Blood substitutes: physiological basis of efficacy// Boston: Birkhauser, 1995, 205p.

222. Woynarovich E. Methode und Apparatur zur titrimetrisehen Messung des Sanurstoffverbrauches von Wasserorganismen bei verschiedenen Temperaturen // A maguar tudomounyos Academia Fihany biological kutatointenerek evkonyve. 1959,26.

223. Zhao L., Smith J.H., Eyer C. L. Effects of a 100% perfluorooctylbro-mide) emulsion on ischemia (reperfusion injury following cardioplegia) // Ar-tif. Cells Blood Substit. Immobil Biotechnol. 1995. - Vol.23, N4. - P.513-531.

224. Zohar Y. Gonadotropin releasing hormone in spawning induction in Teleosts: basic and applied considerations // Les Colloques de I'INRA. 1988, N. 44, P. 47-62.

225. Wasanasathian A., Peng C.A. Enhancement of microalgal growth by using perfluorocarbon as oxygen carrier // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. BiotechnoL 2001. - Vol.29, № 1. - P.47-55.

226. Toffaletti J.G., Wildermann R.F. Use of turbidity-correction algorithm eliminates the effect of perflubron emulsion on CO-oximeter results (letter) // Clin. Chem.- 2000. Vol.46, N1. - PJI36-137.

Информация о работе

Шевлякова, Наталья Владимировна
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.16

Диссертация

Влияние перфторорганических соединений на эколого-физиологическое состояние осетровых рыб в аквакультуре - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы