Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние олигопептидов вилона и эпиталона на свободнорадикальные процессы в мозге и крови крыс разного возраста при гипокинезии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние олигопептидов вилона и эпиталона на свободнорадикальные процессы в мозге и крови крыс разного возраста при гипокинезии"

На правахрукописи

КИЛИНКАРОВА Нина Николаевна

ВЛИЯНИЕ ОЛИГОПЕПТИДОВ ВИЛОНА И ЭПИТАЛОНА НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В МОЗГЕ И КРОВИ КРЫС РАЗНОГО ВОЗРАСТА ПРИ ГИПОКИНЕЗИИ

03.00.04.-биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов - на - Дону 2004

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии человека Ростовского государственного педагогического университета

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор биологических наук,

профессор A.M. Менджериикий

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор биологических наук,

профессор В.В. Внуков

доктор биологических наук, профессор Е.М Франциянц

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Санкт-Петербургский Институт биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН

¿У 2004 г. в 'у

Защита диссертации состоится

1Г

часов на заседании диссертационного совета Д. 212. 208. 07 по биологическим наукам в Ростовском государственном университете (344006, Ростов-на-Дону, ул. Большая Садовая, 105)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке РГУ (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148)

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук В.В. Бабенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Проблема управления эффективностью адаптации организма к экстремальным воздействиям продолжает быть актуальной как для теоретической биологии, так и для практической медицины, поскольку для современной человеческой популяции наряду с физиолгическим (естественным) характерно ускоренное (патологическое) старение, обусловленное истощением адаптационных резервов в онтогенезе, протекающем в неблагоприятных природных условиях при несбалансированном питании (Хавинсон, Морозов, 2001).

Многие, нарушения структуры и функций в процессе старения сходны с наблюдаемыми при стрессе. (Коркушко, Хавинсон, 2002), например, изменения поведения и приспособительных возможностей, сдвиги интенсивности свободнорадикальных процессов (Фролькис, 1991; Иагшап, 1992) и увеличение мутабильности хромосом (Серединин, Дурнев, 1992). Интенсификацией свободнорадикального окисления, тотальным снижением синтеза и секреции регуляторных пептидов, а также ослаблением чувствительности к ним клеток-мишеней сопровождаются и многие нейродегенеративные заболевания, ассоциированные со старением или индуцированные стрессом (Ег^а^ег й а1., 1999).

Наиболее перспективными в плане замедления возрастных и стресс -индуцированных изменений; в организме в настоящее время считаются пептидные биорегуляторы, которые не только участвуют в регуляции физиологических процессов, начиная; с отдельных- функций специализированных клеток и заканчивая сложными поведенческими актами, но и влияют на интенсивность перекисного окисления. липидов (ПОЛ) (Григорьев, Малинин; 1996: Королева, Ашмарин, 2000).

Короткие пептиды (от 2 до 10 аминокислотных остатков) обладают

более высокой биологической активностью (влияние на репродуктивную,

нейроэндокринную, иммунную систему, увеличение продолжительности

жизни экспериментальных животных и антистрессорные свойства) по

сравнению с их высокомолекулярными предшественниками цитомединами

(Хавинсон, Мыльников, 2000; Малинин, 2001). Однако механизмы действия

коротких пептидов на молекулярном и клеточном уровнях остается

1 РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ I

малоизученными.

! ш 5

2004-4 19952

Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение роли свободнорадикальных процессов в механизме действия коротких олигопептидов вилона (Lys-Glu) и эпиталона (Ala-Glu-Asp-Gly) в условиях нормально функционирующего организма и при-24-часовой гипокинезии у крыс разного возраста. В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи исследования:

1. Исследовать влияние вилона и эпиталона на интенсивность свободнорадикального окисления и активность ферментов антиоксидантной защиты в различных органах и тканях крыс;

2. Изучить действие вилона и эпиталона на уровень хромосомных аберраций в роговице глаза и костном мозге животных.

3. Установить тип адаптационной реакции организма крыс под воздействием гипокинезии на фоне введения вилона и эпиталона и без них по анализу формулы белой крови

4. Исследовать действие вилона и эпиталона на фагоцитарную активность лейкоцитов в норме и при стрессе.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что изученные пептиды обладают иммуностимулирующим и антиоксидантным действием при введении интактным и помешенным в условия гипокинезии 3-х и 16-месячным животным с высоким уровнем тревожности. Влияние эпиталона на фагоцитарную активность лейкоцитов более выражено у 16-месячных крыс, особенно в условиях стрессорного воздействия и превышает эффект вилона. В норме и при гипокинезии введение вилона оказывает стабилизирующее действие на мембраны форменных элементов крови. В условиях гипокинезии препараты проявили антимутагенный эффект, но у вилона он был более выраженным, а наибольшая антимутагенная активность пептидов была зафиксирована у 3-месячных животных. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Введение вилона. и эпиталона, повышает- резистентность организма, способствуя развитию состояния «преадаптации» у крыс разного возраста путем формирования реакции активации. В условиях гипокинезии инъекции препаратов препятствовали развитию стресс -реакции за счет замены ее на более эффективные и экономичные варианты резистентной стратегии адаптации (реакции тренировки и активации).

2. Молекулярным механизмом проявления антимутагенных эффектов и повышенияг-резистентости организма крыс разного возраста при

развитии адаптационных реакций на фоне введения вилона и эпиталона в норме и при гипокинезии явилось ограничение интенсивности перекисного окисления липидов и активация ферментов антиоксидантной защиты в головном мозге и эритроцитах. 3. Величина стресспротекторного эффекта у 3-месячных животных соответствовала способности пептидов оказывать стабилизирующее влияние на состояние эритроцитарных и лейкоцитарных мембран, тогда как у 16-месячных крыс она была тесно связана с влиянием вилона и эпиталона на уровень малонового диальдегида и фагоцитарную активность лейкоцитов.

Теоретическое и практическое значение. Результаты исследования расширяют наши представления о роли пептидов в механизмах выбора адаптационной стратегии организмами разного возраста и подтверждают возможность повышения эффективности адаптивного ответа при переключении с помощью пептидов с одного типа адаптационной реакции на другой. Результаты дополняют теоретические положения о механизмах развития экстремальных состояний и участия в них регуляторных пептидов.

Новые факты о механизме действия и эффектах олигопептидов вилона и эпиталона открывают перспективы их практического применения в медицине в качестве антимутагенных, иммуномодулируюших препаратов и антиоксидантов. Влияние вилона и эпиталона на формирование адаптационных реакций животных разного возраста позволяет использовать препараты в одних случаях в качестве адаптогенов, в других - как геропротекторных веществ. Вилон является типичным адаптогеном и обладает стресс-лимитирующими свойствами, наиболее эффективно снижая негативное влияние гипокинезии у 3-месячных крыс. Геропротекторные свойства эпиталона. подтверждают его более выраженные антистрессорные эффекты у 16-месячных крыс и максимальная способность (по сравнению с вилоном) замедлять скорость образования малонового диальдегида, который является предшественником шиффовых оснований (входящих в состав липофусцина) и оказывает непосредственное влияние на. геном клетки (в частности на количество хромосомных аберраций).

Материалы работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий в Ростовском государственном университете и Ростовском государственном педагогическом университете в курсах общей и возрастной физиологии, спецкурсах по выбору и спецкурсах для магистров.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на конференции молодых ученых и преподавателей РГПУ (Ростов-на-Дону, 2002) и на конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, разделов, содержащих результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов и выводов. Библиографический указатель диссертации содержит 202 источника, из них 127 работ отечественных и 75 работ зарубежных авторов. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 21 таблицу и 8 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились на 190 беспородных белых крысах-самцах в возрасте 3 и 16 месяцев, содержащихся на стандартном рационе в условиях вивария. В эксперимент отбирали животных с высоким уровнем тревожности с помощью тестов "открытого поля" и вынужденного плавания, так как именно они более.чувствительны к внешним воздействиям (Буреш и соавт., 1991; Арушунян, 1990)-Были поставлены следующие серии экспериментов:

1. В качестве контрольных использовались животные, которым вводили 0,9% №0. Трехмесячные крысы соответствуют молодым половозрелым особям, а 16-месячные соответствуют возрасту 55-60 лет у человека, который в настоящее время в нашей стране является критической продолжительностью жизни (особенно у мужчин).

2. Введение крысам разного возраста ежедневно в течение 5 суток вилона или эпиталона в дозе 2,5 мкг/кг массы, последняя инъекция за 24 часа до декапитации (Малинин, 2001)

3. Действие на крыс разного возраста 24-часовой гипокинезии, которую моделировали путем помещения животных в пластиковые пеналы из оргстекла, ограничивающие подвижность (Федоров, 1987).

4. Введение крысам разного возраста ежедневно в течение 5 суток вилона или эпиталона в дозе 2,5 мкг/кг массы (последняя инъекция.за 24 часа до начала гипокинезии)

Выбор гипокинезии в качестве, экспериментального воздействия обусловлен, тем, что она является одним из стрессорных факторов, приводящих к ускоренному старению, и относящихся к группе основных

симптомов паркинсонизма (Charlton, Crowell, 1995). Препараты вводили внутрибрюшинно в 10 часов утра через каждые 24 часа. Дозы пептидов и интервалы времени для изучения их действия отработаны в предыдущих исследованиях (Малинин, 2001). Применяли синтетические пептиды вилон и эпиталон в дозе 2,5 мкг/кг массы, полученные в Санкт-Петербургском институте Биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН и предоставленные членом-корреспондентом РАМН, профессором В.Х. Хавинсоном.

Животных декапитировали, мозг извлекали на холоду, кровь собирали в пробирки с антикоагулянтом. Интенсивность ПОЛ оценивали по количеству малонового диальдегида (МДА) (Стальная, Гаришвили, 1977) в гомогенате коры головного мозга и по светосумме свечения за 100 секунд (Sm) и высоте (Н) быстрой вспышки (Шестаков и соавт., 1972) Н2Сь-индуцированной люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ) в плазме крови и водорастворимой фракции коры головного мозга. Определяли активность ферментов антиоксидантной защиты супероксиддисмутазы (СОД) (Арутюнян, 2000) и каталазы (Королюк и соавт., 1988) в мозге, плазме крови и эритроцитарном лизате, а также оксидазную активность белка плазмы крови церулоплазмина (ЦП) (Колб, Камышников, 1982). О состоянии эритроцитарных и лейкоцитарных мембран судили по количеству внеэритроцитарного гемоглобина. (ВЭГ) (Меньшиков, 1987) и суммарной пероксидазной активности (СПА) (Покровский, 1969). Фиксацию мазков крови проводили раствором эозинметиленового синего по Маю -Грюнвальду, окраску - по Романовскому - Гимзе (Меньшиков, 1987). Количество форменных элементов в лейкоцитарной формуле выражали в процентах от общего,числа лейкоцитов. Для исследования структурных нарушений хромосом . был проведен цитогенетический анализ в клетках костного мозга и роговицы глаза анафазным методом по стандартной методике на временных препаратах (Гостимский и соавт., 1974). Для изучения влияния пептидов на фагоцитарную активность лейкоцитов измеряли интенсивность люминолзависимой ХЛ цельной крови (Фролова и соавт, 1992). Измерения проводили на спектрофотометре Beckman DU-7 (США) и хемилюминометре, состоящем из блока фотометрирования с детектором ФЭУ-37 в составе сцинтиляционного измерительного зонда VA-S-968 (RTF) и базового сцинтиляционного спектрофотометра 22028 (RTF).

Результаты исследования подвергали статистической обработке (Лакин, 1990) с использованием t-критерия Стьюдента для независимых выборок.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При изучении типа адаптационных реакций по соотношению элементов лейкоцитарной формулы нами установлено (Рис.1), что введение коротких пептидов повышает резистентность организма, способствуя независимо от возраста развитию состояния «преадаптации» у интактных крыс путем формирования реакции активации (Гаркави и соавт., 1991).

В условиях гипокинезии введение препаратов препятствовало развитию стресс-реакции за счет замены ее на менее расточительные варианты резистентной стратегии адаптации (Рис.1). Ранее возможность переключения адаптационных стратегий с помощью нейропептидов была показана в нашей лаборатории при использовании киоторфина, неокиоторфина и дельта-сон индуцирующего пептида (Альперович, Менджерицкий, 1999), а также при применении коротких пептидов кортагена, эпиталона и вилона в условиях гипоксии (Фатеева, 2002).

В повышение резистентности организма после введения вилона молодым интактным крысам, вероятно, внесло существенный' вклад снижение интенсивности ПОЛ в головном мозге. Об уменьшении образования гидроперекисей липидов в водорастворимой фракции коры головного мозга свидетельствовало снижение высоты быстрой вспышки ХЛ на 19%, 0,05<р<0,1 (Рис.2). Кроме того, было отмечено уменьшение уровня такого молекулярного продукта ПОЛ как МДА в коре головного мозга на 26%, р<0,05 (Рис.3), а также существенная активация каталазы в эритроцитах (Рис.4).

Повышение резистентности организма 16-месячных интактных крыс на фоне введения вилона сопровождалось некоторым усилением интенсивности реакций свободнорадикального окисления в крови (увеличение высоты быстрой вспышки ХЛ на 23%, р<0,05 и усиление активности каталазы в плазме) и снижением уровня МДА в мозге на 30%, р<0,05 (Рис. 2-4).

Введение эпиталона способствовало повышению резистентности организма интактных молодых крыс путем ингибирования ПОЛ в головном мозге на начальных стадиях, что проявлялось в достоверном уменьшении светосуммы и высоты быстрой вспышки на 22% и 21%, соответственно (Рис. 2). Одновременно наблюдалась активация каталазы и СОД в эритроцитах (Рис. 4,5).

Рис.1. Влияние препаратов на тип адаптационной реакции (исследованный по лейкоцитарной формуле) у молодых и 16-месячных крыс в норме и при гипокинезии

Рис.2. Светосумма (Sm) и высота быстрой вспышки (Н) ХЛ плазмы крови (А) и водорастворимой фракции коры головного мозга (Б) крыс в норме и условиях гипокинезии: 1- вилон, 2- эпиталон, 3- гипокинезия, 4 — вилон + гипокинезия, 5 - эпиталон + гипокинезия (в % к контрольному уровню).

Развитие реакции, активации у 16-месячных крыс при введении эпиталона* сопровождалось увеличением образования радикальных продуктов ПОЛ (о чем свидетельствовало увеличение 8ш ХЛ) при одновременном снижении уровня МДА в коре головного мозга и активации каталазы в мозге и эритроцитах.

Таким образом, содержание продуктов ПОЛ в тканях интактных крыс после введения вилона и эпиталона зависело от возраста. Если у молодых., животных при снижении уровня радикалов л и п и ЬОг* г гидроперекисей липидов ЬООИ в коре больших полушарий содержание МДА достоверно уменьшалось или оставалось без изменений, то у 16-месячных крыс падение уровня МДА наблюдалось на фоне интенсификации ХЛ (Рис. 2, 3). Несмотря на возрастные, различия, в динамике продуктов ПОЛ, оба олигопептида проявили способность активировать ферменты антиоксидантной защиты (Рис. 4, 5). Это позволяет считать вилон' и эпиталон перспективными антистрессорными и геропротекторными препаратами. О геропротекторных свойствах препарата можно говорить, когда под его влиянием происходит уменьшение биологического или функционального возраста, повышается физическая и умственная работоспособность, нормализуются параметры метаболизма и нейроэндокринной регуляции, повышаются адаптационные возможности организма и иммунитет (Никитин, 1991; Анисимов, 2000).

При исследовании показателей ХЛ цельной крови нами был обнаружен стимулирующий эффект коротких пептидов на степень подготовленности фагоцитирующей системы к ответу на чужеродный агент (по длительности латентного периода ХЛ), на уровень метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов (по светосумме) и на количество фагоцитирующих клеток (по высоте медленной вспышки) у животных обеих возрастных групп (Рис. 6). Указанное действие пептидов было более выражено при гипокинезии, особенно у 16-месячных животных. Иммуностимулирующий эффект вилона зарегистрирован при его введении интактным и помещенным в условия гипокинезии крысам обеих возрастных групп. Наибольшее воздействие вилон оказал на молодых животных: об усилении . метаболической активности лейкоцитов свидетельствует увеличение светосуммы ХЛ на 24%, которое сохранялось и через сутки после взятия крови; на увеличение пула фагоцитирующих клеток указывает повышение высоты медленной вспышки ХЛ на 87% сразу после декапитации и на 49% через сутки после взятия крови (по сравнению с контрольными значениями, р<0,05).

Рис.3. Влияние пептидов на содержание МДА в коре головного мозга (А) и активность церулоплазмина в плазме крови (Б) крыс разного возраста (в % к уровню контроля): 1- вилон, 2 - эпиталон, 3 - гипокинезия, 5- вилон + гипокинезия, 5 - эпиталон + гипокинезия.

Рис.4. Влияние пептидов на активность каталазы в гемолизате эритроцитов, плазме крови (А) и коре головного мозга (Б) у крыс разного возраста (в % к уровню контроля); 1- вилон, 2 - эпиталон, 3 - гипокинезия, 4- вилон + гипокинезия, 5 - эпиталон + гипокинезия

При применении эпиталона отмечалась тенденция к снижению активности нейтрофилов и уменьшению пула фагоцитирующих клеток интактных молодых крыс. У 16-месячных животных в нормальных физиологических условиях эпиталон способствовал поддержанию активности фагоцитирующих клеток на высоком уровне особенно через сутки после взятия крови (снижение величины латентного периода на 53%, р<0,05). Это указывает на отсроченный иммуностимулирующий эффект и согласуется с данными литературы об опосредованном регуляторном влиянии эпиталона на иммунитет через подкорковые структуры головного мозга (Малинин, 2001).

По всем показателям ХЛ иммуностимулирующий эффект был максимальным у молодых крыс на фоне введения вилона, а у 16-месячных — на фоне инъекции эпиталона, особенно в условиях стрессорного воздействия (Рис.6).

Ограничение подвижности в течение 24 часов у крыс обеих возрастных групп вызвало не только значительную иммунодепрессию, но и сопровождалось мощным генотоксическим эффектом (Рис. 6, 7), хотя у 16-месячных крыс они были менее выражены. Это кажущееся противоречие, вероятно можно объяснить некоторым запаздыванием в развитии стресс-реакции у стареющих животных по сравнению с молодыми. Если у молодых крыс формула «белой крови» соответствовала стадии тревоги острого стресса уже после 1-часовой гипокинезии, то у 16-месячных эта стадия наступала только после 24-часового ограничения подвижности. В то же время у молодых . лейкоцитарная формула к концу 24-часового ограничения подвижности указывает на переход к реакции хронического стресса. О запаздывании стресс-реакции у старых животных сообщают и другие авторы (Бажанова, 1998; Лысенко и соавт, 2001) и связывают его со снижением-содержания биогенных аминов в структурах мозга (Stancheva et al., 1991) и уменьшением плотности адренорецепторов (Burnett, 1990).

О большем латентном периоде развития стресс-реакции у 16-месячных крыс свидетельствуют и результаты исследования активности про- и антиоксидантных систем. Если после окончания 24-часовой гипокинезии у молодых наблюдается сдвиг равновесия в сторону интенсификации процесса ПОЛ (повышение содержания промежуточного молекулярного продукта -МДА в мозге и уровня ВЭГ и СПА в плазме крови), то у стареющих отмечается преимущественная активация каталазы и СОД (Рис. 3-5, 8).

Рис.5. Влияние пептидов на активность СОД в коре головного мозга (А) и гемолизате эритроцитов (Б) у крыс разного возраста (в % к уровню контроля): 1 - вилон, 2 - эпиталон, 3 - гипокинезия, 4 - вил о л + гипокинезия, 5 - эпиталон + гипокинезия

Рис.6. Влияние пептидов на фагоцитарную активность лейкоцитов по показателям ХЛ цельной крови: А- латентный период (мм), Б- светосумма (количество импульсов), В- высота медленной вспышки (мм). 1- контроль, 2 -вилон, 3- эпиталон, 4 - гипокинезия, 5 - вилон + гипокинезия, 6 - эпиталон + гипокинезия.

Это согласуется с представлениями других авторов о том, что в первую стадию острого стресса происходит ингибирование ПОЛ, а активация происходит позже на фоне истощения компонентов антирадикальной защиты (Ерин, Гуляева, 1994).

Вероятно, накоплению МДА, уменьшению стабильности и увеличению проницаемости мембран клеток крови принадлежит решающая роль в более сильном (в 2 раза) проявлении генотоксического эффекта гипокинезии у молодых крыс по сравнению с 16-месячными (Рис. 7).

Высокая химическая активность МДА определяет его способность взаимодействовать с белками и ДНК, нарушая'их структуру и увеличивая количество аберраций хромосом (Брень, Гуськов, 2000). Нарастание уровня ВЭГ и усиление СПА в плазме крови молодых крыс при гипокинезии (Рис. 8) отражает лабилизацию не только эритроцитарных, но и лейкоцитарных мембран, поскольку главный вклад в СПА вносят свободный гемоглобин и миелопероксидаза лейкоцитов, высвобождающиеся в плазму при повреждении соответствующих мембранных структур (Бондаренко и соавт, 1985; Милютина и соавт., 1994). Не исключено, что в цепь реакций свободнорадикального окисления, приводящих к нарушению структуры ДНК, вносит-свой вклад свободный гемоглобин, который сам является мощным прооксидантом (Внуков, 1982), а также образующиеся в результате пероксидазной реакции гипохлорит и гидроксильный радикал (Малышев, 1994).

Хотя повышение резистентности интактных животных разного возраста на фоне введения изучаемых препаратов не сопровождалось достоверными изменениями в количестве аберраций хромосом в роговице глаза и костном мозге, в условиях ограничения подвижности вилон и эпиталон проявили антимутагенные свойства-(Рис.7). У молодых-крыс в условиях гипокинезии наибольший антимутагенный эффект зарегистрирован при введении вилона (снижение числа аберраций хромосом на 90% в роговице и на 82% в костном мозге по сравнению со значениями при стрессе без предварительного введения пептидов, р<0,05), несколько менее выраженный — у эпиталона. У 16-месячных крыс во время стрессорного воздействия наиболее эффективно препятствовал росту числа хромосомных аберраций эпиталон (на 74% в роговице и на 78% в костном мозге по сравнению с результатами при стрессе, р<0,05), тогда как эффект вилона был значительно слабее.

Рис.7. Количество аберраций хромосом в эпителии роговицы глаза и костном мозге молодых . (Л) и 16-месячных (Б) крыс: 1-вилон, 2-эпиталон, 3-гипокинезия, 4- вилон + гипокинезия, 5-эпиталон + гипокинезия (в % к уровню контроля).

При помещении молодых животных в условия стрессорного воздействия наибольшим протекторным эффектом обладал вилон, что проявилось в максимально выраженном антимутагенном и иммуностимулирующем эффекте, в практически полной нормализации СПА при наибольшей активации СОД в мозге и поддержании на высоком уровне активности каталазы я коре головного мозга.

При воздействии гипокинезии на 16-месячных крыс наиболее эффективным стресспротектором оказался, эпшпалон, о чем свидетельствовал максимальный антимутагенный, иммуностимулирующий и антиоксидантный эффект. Последний проявлялся в наибольшем ингибировании образования радикальных и молекулярных продуктов ПОЛ и снижении СПА за счет максимальной (по сравнению с вилоном) активации каталазы в мозге, СОД в эритроцитах и церулоплазмина в плазме крови (Рис. 3-5).

Довольно мошное адаптогенное и иммуностимулирующее действие вилона у интактных и особенно подвергнутых стрессорному воздействию крыс может, быть обусловлено тем, что Lys-Glu (которые составляют первичную структуру вилона) является фрагментом таких пептидов как интерлейкин - 1р, интерлейкин - 2, интерферон а, спленин, тимозины, иммуностимулирующие свойства которых хорошо известны (Морозов и соавт., 2000). Вероятно, повышение резистентности организма при введении вилона обусловлено его способностью препятствовать развитию иммунодепресии, характерной для стадии тревоги острого стресса (Меерсон, Пшенникова,. 1989).

Тимус как центральный орган иммунной системы оказывает выраженное воздействие на гомеостаз, влияя практически на все виды обмена веществ и физиологические системы в организме (Малинин, 2001). Механизм такого влияния в настоящее время объясняют способностью пептидов, продуцируемых клетками тимуса, оказывать регулирующее действие на протеолитические процессы, происходящие в клетках организма (Кокрушко и соавт., 2002). Поскольку роль протеолитических процессов в регуляции активности нейротрасмиттерных систем и интенсивности свободнорадикальных реакций неоднократно доказана (Mantyh et al., 1995), становится понятной цепь событий, в результате которых вилон проявляет свои антиоксидантные и антимутагенные свойства.

Рис.8. Влияние пептидов на содержание внеэритроцитарного гемоглобина (А) и суммарную пероксидазную активность (Б) плазмы крови крыс разного возраста (в % к контрольному уровню): 1- вилон, 2 - эпиталон, 3 - гипокинезия, 4 - вилон + гипокинезия, 5 - эпиталон + гипокинезия.

Факт наибольшей эффективности эпиталона как стресслрогекторного вещества у 16-месячных крыс можно, вероятно, объяснить тем, что при старении функция эпифиза снижается. Это влечет за собой не только нарушение уровня и ритма секреции мелатонина с последующей дестабилизацией циркадианных ритмов (Reiter, 1995), но и значительные сдвиги в углеводном, липидном, солевом обмене и функциях иммунной и нейроэндокринной систем (Анисимов, 1998). Кроме того, показана роль различных пептидов эпифиза в антистрессорной защите нервной системы и всего организма при острой гипоксии (Карпов и соавт, 1985; Комаров и соавт, 1996).

Таким образом, в условиях введения олигопептидов вилона и эпиталона изменения интенсивности свободнорадикальных реакций в мозге и крови могут:

- повышать резистентность организма в нормальных физиологических условиях: (формирование состояния «преадаптации» и стимуляция фагоцитарной активности лейкоцитов)

- влиять на выбор адаптационной стратегии при стрессорном воздействии

- замедлять скорость старения организма,, в том числе путем модуляции скорости образования МДА, который.

а) является. предшественником шиффовых оснований, входящих в структуру «пигмента старения» липофусцина

б) оказывает непосредственное влияние на геном клетки, в частности на количество хромосомных аберраций

ВЫВОДЫ

1. При ограничении подвижности повышение содержания продуктов перекисного окисления липидов в коре головного мозга и плазме крови животных обеих возрастных групп сопровождается угнетением фагоцитарной активности лейкоцитов и увеличением- количества аберраций хромосом в эпителии роговицы и костном мозге, что более выражено у 3-месячных, животных. Наибольшая стресс-

индуцированная активация.прооксидантных систем, у молодых крыс подтверждается повышением уровня ВЭГ и СПА.

2. Профилактическое введение вилона и эпиталона перед помещением крыс обеих возрастных групп в условиях гипокинезии препятствует развитию у них стресс-реакции за счет замены ее на более эффективные и экономичные, варианты резистентной стратегии адаптации, о чем свидетельствует соотношение форменных элементов белой крови.

3. В условиях гипокинезии вилон и эпиталон проявили выраженный антимутагенный эффект, величина которого соответствовала способности пептидов усиливать фагоцитарную активность лейкоцитов. Наибольший антимутагенный эффект зарегистрирован при профилактическом -введении вилона молодым крысам,, несколько меньший - при введении эпиталона 16-месячным животным.

4. Механизмом действия вилона и эпиталона является их способность к формированию состояния «преадаптации» путем поддержания оптимального для каждой конкретной ситуации баланса интенсивности. ПОЛ и активности антиоксидантных систем головного мозга и крови.

5.. Величина стресспротекторного эффекта соответствовала способности пептидов оказывать стабилизирующее, влияние, на состояние эритроцитарных и лейкоцитарных мембран (судя по величине ВЭГ и СПА). Более сильные мембраностабилизирующие свойства были выявлены у вилона при введении молодым животным. Степень протекторного эффекта у 16-месячных крыс была тесно связана со способностью пептидов влиять на уровень МДА. Это позволит использовать указанные показатели в качестве критериев эффективности и направленности действия пептидов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лысенко А.В., Могруль Е.В., Фатеева Л.В., Килинкарова Н.Н. Механизмы антистрессорных и геропротекторных эффектов нейропептидов // Наука и образование.- 2002.- №3.- С. 183-196.

2. Моргуль Е.В., Фатеева Л.В., Килинкарова Н.Н., Лысенко А.В. Старение организма: механизмы и коррекция // Наука и образование. .- 2002.-№3.-С. 177-182.

3. Килинкарова Н.Н., Руденко Т.Н., Менджерицкая Л.Г. Взаимосвязь антиоксилантного и антимутагенного эффектов эпиталамина и коротких пептидов // В мат. 2-й межвузовской конференции молодых ученых, специалистов и студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов- на-Дону, РГМУ.- 2003,- С. 54-55

4. Лысенко А.В., Килинкарова Н.Н., Руденко Т.Н., Фатеева- Л.В., Менджерицкий A.M. Применение пептидов для коррекции структурно-функциональных нарушений при гипокинезии // Нейрохимия.- 2003.Т. 20, №3.-С. 127-132

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВЭГ- внеэритроцитарный гемоглобин

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СОД - супероксиддисмутаза

СПА - суммарная пероксидазная активность

ХЛ - хемилюминесценция

ЦП - церулоплазмин

Н- высота быстрой вспышки ХЛ

8ш - светосумма ХЛ

Печать ризограф. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме» Формат 60\84/16. Объем 1.0 уч. - изд. л. Заказ № 115. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006. г. Ростов-на-Дону, Суворова, 19

'-23 75

РНБ Русский фонд

2004-4 19952

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Килинкарова, Нина Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Гипокинезия как фактор ускоренного старения.

1.2. Старение организма: механизмы и регуляция.

1.3. Перспективы использования пептидов как антистрессорных и геропротекторных препаратов.

ГЛАВА 2. Постановка эксперимента и методы исследования

2.1. Постановка эксперимента.

2.2. Биохимические методы исследования.

2.3. Биофизические методы.

2.4. Гистологические методы.

2.5. Цитогенетические методы.

2.6. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Влияние коротких пептидов на лейкоцитарную формулу крыс разного возраста в норме и при гипокинезии.

3.2. Исследование антимутагенной активности вилона и эпиталона в норме и при стрессе.

3.3. Влияние пептидов на фагоцитарную активность лейкоцитов при стрессе.

3.4. Влияние пептидов на интенсивность свободнорадикального окисления и активность элементов антиоксидантной защиты в головном мозге и крови крыс разного возраста.

3.4.1. Содержание продуктов перекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной защиты при введении вилона и эпиталона крысам разного возраста в нормальных условиях.

3.4.2. Интенсивность перекисного окисления липидов и антиоксидантных процессов в различных тканях крыс при гипокинезии на фоне введения коротких пептидов.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние олигопептидов вилона и эпиталона на свободнорадикальные процессы в мозге и крови крыс разного возраста при гипокинезии"

Проблема управления эффективностью адаптации организма к экстремальным воздействиям продолжает быть актуальной как для теоретической биологии, так и для практической медицины, поскольку для современной человеческой популяции наряду с физиологическим (естественным) характерно ускоренное (патологическое) старение, обусловленное истощением адаптационных резервов в онтогенезе, протекающем в неблагоприятных природных условиях при несбалансированном питании (Хавинсон, Морозов, 2001).

Многие нарушения в процессе старения сходны с наблюдаемыми при стрессе (Коркушко, Хавинсон, 2002). К таким сходствам наряду с изменениями поведения и приспособительных возможностей относят сдвиги интенсивности свободнорадикальных процессов (Фролькис, 1991; Наппап, 1992) и увеличение мутабильности хромосом (Серединин, Дурнев, 1992). Интенсификацией свободнорадикального окисления, тотальным снижением синтеза и секреции регуляторных пептидов, а также ослаблением чувствительности к ним клеток-мишеней сопровождаются и многие нейродегенеративные заболевания, ассоциированные со старением или индуцированные стрессом (Erhvanger et al., 1999).

Наиболее перспективными в плане замедления возрастных и стресс-индуцированных изменений в организме в настоящее время считаются пептидные биорегуляторы, которые выполняют не только сигнальную роль, но и принимают участие в регуляции физиологических процессов, начиная с отдельных функций специализированных клеток и заканчивая сложными поведенческими актами (Григорьев, Малинин, 1996: Королева, Ашмарин, 2000).

Короткие пептиды (от 2 до 10 аминокислотных остатков) обладают более высокой биологической активностью (влияние на репродуктивную, нейроэндокринную, иммунную систему, увеличение продолжительности жизни экспериментальных животных и антистрессорные свойства) по сравнению с их высокомолекулярными предшественниками цитомединами (Хавинсон, Мыльников, 2000; Малинин, 2001). Однако механизмы действия коротких пептидов на молекулярном и клеточном уровнях остаются малоизученными.

Целью работы явилось изучение роли свободнорадикальных процессов в механизме действия коротких олигопептидов вилона (Lys-Glu) и эпиталона (Ala-GIu-Asp-GIy) в условиях нормально функционирующего организма и при 24-часовой гипокинезии у крыс разного возраста.

В качестве экспериментального воздействия использовали модель гипокинезии, которая является одним из стрессорных факторов, приводящих к ускоренному старению, и относящихся к группе основных симптомов паркиснонизма (Charlton, Crowell, 1995).

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи исследования:

1. Исследовать влияние вилона и эпиталона на интенсивность свободнорадикального окисления и активность ферментов антиоксидантной защиты в различных органах и тканях крыс;

2. Изучить действие вилона и эпиталона на уровень хромосомных аберраций в роговице глаза и костном мозге животных.

3. Установить тип адаптационной реакции организма крыс под воздействием гипокинезии на фоне введения вилона и эпиталона и без них по анализу формулы белой крови

4. Исследовать действие вилона и эпиталона на фагоцитарную активность лейкоцитов в норме и при стрессе.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что изученные пептиды обладают иммуностимулирующим и антиоксидантным действием при введении интактным и помещенным в условия гипокинезии 3-х и 16-месячным животным с высоким уровнем тревожности. Влияние эпиталона на фагоцитарную активность лейкоцитов более выражено у 16-месячных крыс, особенно в условиях стрессорного воздействия и превышает эффект вилона. В норме и при гипокинезии введение вилона оказывает стабилизирующее действие на мембраны форменных элементов крови. В условиях гипокинезии препараты проявили антимутагенный эффект, но у вилона он был более выраженным, а наибольшая антимутагенная активность пептидов была зафиксирована у 3-месячных животных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Введение вилона и эпиталона повышает резистентность организма, способствуя развитию состояния «преадаптации» у крыс разного возраста путем формирования реакции активации. В условиях гипокинезии инъекции препаратов препятствовали развитию стресс-реакции за счет замены ее на более эффективные и экономичные варианты резистентной стратегии адаптации (реакции тренировки и активации).

2. Молекулярным механизмом проявления антимутагенных эффектов и повышения резистентности организма крыс разного возраста при развитии адаптационных реакций на фоне введения вилона и эпиталона в норме и при гипокинезии явилось ограничение' интенсивности перекисного окисления липидов и активация ферментов антиоксидантной защиты в головном мозге и эритроцитах.

3. Величина стресспротекторного эффекта у 3-месячных животных соответствовала способности пептидов оказывать стабилизирующее влияние на состояние эритроцитарных и лейкоцитарных мембран, тогда как у 16-месячных крыс она была тесно связана с влиянием вилона и эпиталона на уровень малонового диальдегида и фагоцитарную активность лейкоцитов.

Теоретическое и практическое значение. Результаты исследования расширяют наши представления о роли пептидов в механизмах выбора адаптационной стратегии организмами разного возраста и подтверждают возможность повышения эффективности адаптивного ответа при переключении с помощью пептидов с одного типа адаптационной реакции на другой. Результаты дополняют теоретические положения о механизмах развития экстремальных состояний и участия в них регуляторных пептидов.

Новые факты о механизме действия и эффектах олигопептидов вилона и эпиталона открывают перспективы их практического применения в медицине в качестве антимутагенных, иммуномодулируюших препаратов и антиоксидантов. Влияние вилона и эпиталона на формирование адаптационных реакций животных разного возраста позволяет использовать препараты в одних случаях в качестве адаптогенов, в других - как геропротекторных веществ. Вилон является типичным адаптогеном и обладает стресс-лимитирующими свойствами, наиболее эффективно снижая негативное влияние гипокинезии у 3-месячных крыс. Геропротекторные свойства эпиталона подтверждают его более выраженные антистрессорные эффекты у 16-месячных крыс и максимальная способность (по сравнению с вилоном) замедлять скорость образования малонового диальдегида, который является предшественником шиффовых оснований (входящих в состав липофусцина) и оказывает непосредственное влияние на геном клетки (в частности на количество хромосомных аберраций).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Килинкарова, Нина Николаевна

выводы

При ограничении подвижности повышение содержания продуктов перекисного окисления липидов в коре головного мозга и плазме крови животных обеих возрастных групп сопровождается угнетением фагоцитарной активности лейкоцитов и увеличением количества аберраций хромосом в эпителии роговицы и костном мозге, что более выражено у 3-месячных животных. Наибольшая стресс-индуцированная активация прооксидантных систем у молодых крыс подтверждается повышением уровня ВЭГ и СПА.

Профилактическое введение вилона и эпиталона перед помещением крыс обеих возрастных групп в условиях гипокинезии препятствует развитию у них стресс-реакции за счет замены ее на более эффективные и экономичные варианты резистентной стратегии адаптации, о чем свидетельствует соотношение форменных элементов белой крови.

В условиях гипокинезии вилон и эпиталон проявили выраженный антимутагенный эффект, величина которого соответствовала способности пептидов усиливать фагоцитарную активность лейкоцитов. Наибольший антимутагенный эффект зарегистрирован при профилактическом введении вилона молодым крысам, несколько меньший - при введении эпиталона 16-месячным животным. Механизмом действия вилона и эпиталона является их способность к формированию состояния «преадаптации» путем поддержания оптимального для каждой конкретной ситуации баланса интенсивности ПОЛ и активности антиоксидантных систем головного мозга и крови. Величина стресспротекторного эффекта соответствовала способности пептидов оказывать стабилизирующее влияние на состояние эритроцитарных и лейкоцитарных мембран (судя по величине ВЭГ и СПА). Более сильные мембраностабилизирующие свойства были выявлены у вилона при введении молодым животным. Степень протекторного эффекта у 16-месячных крыс была тесно связана со способностью пептидов влиять на уровень МДА. Это позволит использовать указанные показатели в качестве критериев эффективности и направленности действия пептидов.

105

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Килинкарова, Нина Николаевна, Ростов-на-Дону

1. Акопян В.П., Балян Л.С., Мелконян К.В. Участие ГАМК-ергического компонента в механизмах регуляции мозгового кровообращения. М.: ВИНИТИ, ИНТ! т.26,- 1991.- С.46-62.

2. Акопян В.П., Кананян А.С., Геворкян Г.А., Мелконян К.В. Некоторые аспекты метаболических и морфологических нарушений головного мозга в условиях гипокинезии и их фармакологическая коррекция// Эксперим. и клинич фармакол.- 1993.- № 5.- С. 8 11.

3. Альперович Д.В., Менджерицкий A.M., Лысенко А.В. Мембраноспецифичный механизм протекторного действия ДСИП и пирацетама при гипоксии // В сб.: «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция».- М., 1997,- С.5

4. Альперович Д.В., Лысенко А.В., Мационис А.Э., Менджерицкий A.M. Роль нейропептидов в механизмах адаптации к экстремальным состояниям.- Ростов н/Д: Изд-во РГПУ, 1999.-296 с.

5. Анисимов В.Н., Соловьев М.В. Эволюция концепций в геронтологии.- СПб: Эскулап, 1999.- 115 с.

6. Анисимов В.Н. Средства профилактики ускоренного старения (геропротекторы) // Успехи геронтологии.-2002.- №4.- С. 55-75

7. П.Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма.- С-Пб.: Фолиант, 2000.- 104 с.

8. Арушанян Э.Б., Щетинин Е.В., Батурин В.А. Временная динамика принудительного плавания крыс как адекватный критерий оценки специфической активности антидепрессантов// Фармакология и токсикология,- 1990.- Т.53, N 5.- С.64-67.

9. Бажанова Е.Д., Жуков Д.А., Данилова О.А. Различие в реакции старых и молодых крыс на иммобилизационный стресс // Журнал эволюц. биохим. и физиол.- 1994,- № 4.- С. 541 -545

10. Бакулин А.В., Оганов B.C., Мансурова Л.А., Скорнякова А.Б. Влияние 1-хлорметилсилатрона на биомеханику костной ткани в условиях гиподинамии// Докл. АН, 1994.- № в.- С. 831 -834

11. Банин В.В., Каминская Н.А., Коган Б.И. Клеточный цикл хондроцитов как показатель темпов формирования кости при гиподинами // Матер. 7

12. Всерос. Симп. «Эколого-физиологические проблемы адаптации».-Москва, 1994.-С. 26

13. Беспалов В.Г., Александров В.А., Анисимов В.Н. и др. Влияние полипептидных факторов тимуса, эпифиза, костного мозга и переднего гипоталамуса на реализацию трансплацентарного канцерогенеза // Эксперимент, онкология.- 1984,- Т.6, № 5.- С. 27 30

14. Болдырев А.А. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. М: Изд-во МГУ, 1998.- 320 с.

15. Бонецкий А., Федоров В. Участие ренин-ангиотензиновой системы в . регуляции инактивации норадреналина в легких при иммобилизационномстрессе у крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1994.- № 5.- С. 468-469.

16. Брень А.Б., Гуськов Е.П., Ускова Н.И., Лысенко А.В. Генетические и биохимические механизмы адаптации млекопитающих к окислительному стрессу// XXX Совещание по проблемам ВНД, посвященное 150-летию И.П. Павлова, С-Пб, 2000.- С.- 177 178

17. Бречко В.В. Влияние гипокинезии на показатели антиоксидантной системы и свободно-радикального окисления у крыс.//Патологическая физиология и экспериментальная терапия,-1983, N 5, с. 56-58.

18. Буреш Л., Бурешова О., Хьюстон Дж. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М., 1991. - 399 с.

19. Вальдман А.В. Александровский Ю.А. Психофармакотерапия невротических расстройств.- М: Медицина, 1987.- 288 с.

20. Ванюшин Б.Ф., Бердышев Г.Д. Молекулярно-генетические механизмы старения. М., 1977.- 300 с.

21. Варбанец В.Ф. Активность протеолитических ферментов и их ингибиторов в опухолях толстой кишки // Вопр. Мед. химии.- 1990.- № 2.-С. 33-35

22. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и соавт. Свободные радикалы в главных системах //Биофизика (Итоги науки и техники ВИНИТИ РАН).-М.-1991 .-29.-С. 1 -252

23. Воейков B.J1. Био-физико-химические аспекты старения и долголетия // Успехи геронтологии.- 2002. №9.- С. 54-66

24. Газиев А.И., Ушакова Т.Е., Подлуцкий А. Я. Диетические антиоксиданты увеличивают продолжительность жизни мышей, снижают частоту мутаций и увеличивают экспрессию защитных генов // Успехи геронтологии.- 1997.-№1.- С.80-84

25. Гаркави JI.X., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма.- Ростов-на-Дону: Изд-во РГУ, 1990.- 240 с.

26. Гончарук В.Д. Ультраструктурные изменения микроциркуляторного русла и нервных клеток ретикулярной формации среднего мозга крыс с гипертензивной реакцией при иммобилизационном стрессе// Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1994.- № 3.- С. 318-320.

27. Голиков П.П. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта. М.: Медицина, 1987.-304 с.

28. Горбов Ф.Д., Лебедев В.И. Психоневрологические аспекты труда операторов.- М., 1975.

29. Гостимский С. А., Дьякова М. И., Ивановская Е. И., Монахова М. А. Практикум по цитогенетике. М.- Изд. Моск. ун-та. 1974 - 172 с.

30. Григоров Ю.Г., Козловская С.Г., Медовар Б.Я. Роль особенностей питания в проблеме долголетия // Вопр геронтологии.- 1996, №6.- С.79-85

31. Григорьев Е.И., Малинин В.В. Гипотеза механизма действия сверхмалых доз регуляторных пептидов // Материалы Международного симпозиума «Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма».-СПб: Наука, 1996.- С.37-38

32. Григорьян В.Г., Тароян Н.А., Агабабян А.Р. Исследование нейрофизиологических механизмов адаптации человека к монотонной операторской работе на дисплее // Матер 7 Всерос. Симп. «Эколого-физиологические проблемы адаптации».- Москва, 1994.- С. 69

33. Грицик А.И. Белковые фракции плазмы крови у крыс при гипокинезии различной продолжительности// Авиакосмич и экологич медицина.-1993.-№ 1.-С. 59.

34. Грицук А.И., Губкина Н.И. Влияние гипокинезии различной продолжительности на содержание электролитов в мышечной ткани крыс // Авиакосмическая и экологическая медицина.- 1997.- Т.31.- С. 28-33

35. Гуляева Н.В., Лузина Н.Л., Левшина И.П., Крыжановский Г.Н. Стадия ингибирования перекисного окисления липидов при стрессе// Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1988,- № 12.- С. 660-663.

36. Гуськов Е.П., Шкурат Т.П., Цитогенетические последствия гипербарической оксигенации в рядах клеточных циклов периферической крови человека // Генетика.- 1985.- Т. 21, №8.- С. 13611367

37. Дмитриев Л.Ф. Малоновый диальдегид может контролировать клеточное деление на стадии репликации ДНК (гипотеза) // Журн Эволюц Биохим и Физиол.- 1991.- Т28, №6.- С. 720-729

38. Донская Л.В. Двигательная активность человека в условиях механизированного производства,- Л, 1975.

39. Држевецкая И.А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы.- М.: Высшая школа, 1983.- 272 с.

40. Егоров С.Н., Курелла Е.Г., Болдырев А.А., Красновский А.А. //Биоорг химия.- 1992.- Т. 18.-С. 142-144.

41. Ерин А.Н., Гуляева Н.В., Никушкин Е.В. Свободнорадикальные механизмы в цереброваскулярных патологиях // Бюл. эксп. Биол. и мед.-1994.-№ 10.-С. 343-348.

42. Жвания М.Г., Костенко Н.А. Структура высших отделов моторной системы мозга крысы после разных форм гипокинезии //Neuroscience and Behavioral Physiology.- 1998.- V. 23- P. 312-318

43. Зинчук В.В., Борисюк М.В. Роль кислородсвязываюших свойств крови в поддержании прооксидантно-антиоксидантного равновесия организма. / Успехи физиологических наук.- 1999,- Т. 30, N 3.- С. 38-48.

44. Карпов Р.С., Слепушкин В.Д., Мордовии В.Ф. использование препаратов эпифиза в клинической практике,- Томск: Изд-во Томского ун-та, 1985.152 с.

45. Коваленко Е.А. патофизиология длительной гипокинезии// Косм. Биол. и авиакосм. Медицина.- 1976.- 3 1.- С. 3-14.

46. Коваленко Е.А., Гуровский Н.Н. Гипокинезия.-Москва."Медицина", 1980.320 с.

47. Козловский B.JI. Фармакологические свойства блокаторов кальциевых каналов и перспективы их применения в психиатрии и неврологии.-Журнал неврологии и психиатрии .- 1994.- С. 104- 108.

48. Колб В.Г., Камышников B.C. //Справочник по клинической химии-Минск: Беларусь, 1982.- 366 с.

49. Комаров Ф.И. Применение пептидных биорегуляторов в клинической медицине// В сб. «Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма».- СПб: Наука, 1996.- С.48

50. Комаров Ф.И., Хавинсон В.Х., Симоненкова В.А. Применение эпиталамина при климактерической миокардиопатии // Клинич медицина.- 1995.- Т. 73.- №4.- С. 40-42

51. Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Бутенко Г.М., Шатило В.Б. Пептидные препараты тимуса и эпифиза в профилактике ускоренного старения // СПб.: Наука, 2002.- 202 с.

52. Коркушко O.B., Ярошенко Ю.Т. максимальное потребление кислорода у мужчин в зависимости от возраста и уровня двигательной активности // Физиология человека.- 1996.-Т.22, №4.-С. 100-103

53. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб дело, 1988.- № 1.- С. 16-19

54. Коршунов A.M., Преображенская И.С. Программированная смерть клеток (апоптоз)./ Неврологический журнал,- 1998.- N 1,- С. 40-46.

55. Крапивницкая Т.А., Разсолов Н.А. Проблема адаптации к профессиональным условиям пилотов с явлениями нейроциркуляторной дистонии// Матер 7 Верос. Съезда «Эколого-физиологические проблемы адаптации».- Москва, 1994.-С. 130.

56. Королева С.В., Ашмарин И.П. Нейропептид У: многообразие и кажущаяся противоречивость функций. Анализ возможных опосредованных эффектов // Успехи физиол. Наук.- 2000.- T.3I, №1.- С. 31-46

57. Кротов В.П. исследования водно-солевого обмена при ограничении двигательной активности// Косм биол. и мед.- 1972.- № 2.- С. 66-74

58. Кудаева Л.М. Гипокинезия как один из факторов становления гипертонии// Матер. 7 Всерос. Съезда «Эколого-физиологические проблемы адаптации».-Москва, 1994.-С. 135

59. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины.- С-Пб.: Наука, 1998.-310 с.

60. Кулинский В.И:, Ольховский И.А. Две адаптационные стратегии в неблагоприятных условиях резистентная и толерантная. Роль гормонов и рецепторов. //Успехи совр биол. - 1992.- № 5-6.- С. 697-714

61. Лакин Г.Ф. Биометрия.- М.гВысш. шк., 1990,- 352 с.

62. Лебедева Л.И., Скорова С.В. О предельных явлениях при мутагенезе // ДАН СССР. 1985. - Т. 282. - N1. - С. 173-176.

63. Лобзин B.C., Михайленко А.А., Панов А.Г. Клиническая нейрофизиология и патология гипокинезии. М: Мед.; 1979

64. Лысенко А.В., Менджерицкий A.M. Влияние ДСИП на проницаемость лизосомальных мембран в опытах in vitro./ Известия СКНЦВШ.- 1994.-N3.- С. 66.-68.

65. Лысенко А.В., Карантыш Г.В., Менджерицкий A.M. Участие моноаминов в изменении представленности основных форм поведения крыс разного возраста при гипокинезии // Нейрохимия 2001.- Т. 18, №2.- С. 132-141

66. Лысенко А.В., Моргуль Е.В., Фатеева Л.В. Механизмы антистрессорных и геропротекторных эффектов нейропептидов // Наука и образование.-2002, №3.-С. 183- 196

67. Лысенко А.В., Руденко Т.Н., Фатеева Л.В., Менджерицкий A.M. Применение пептидов для коррекции структурно-функциональных нарушений при гипокинезии // Нейрохимия.- 2003.- №4.- С. 18-24

68. Малинин В.В. Механизмы действия синтетических пептидных тимомиметиков.// Автореф. дисс. д.м.н. СПб, 2001.- 35 с.

69. Малиновская Н.К. Роль мелатонина в организме человека // Клиническая медицина,- 1998, № 10.- С. 15-22

70. Мационис А.Э, Морфофункциональные механизмы синаптической пластичности и их роль в адаптации мозга к экстремальным состояниям.-Автореферат дис. Докт. мед. наук.- Москва, 1997.- 40 с.

71. Меерсон Ф.З. Физиология адаптационных процессов. М.: Наука .- 1986.-639с.

72. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Медицина и здравоохранение. Проблемы кардиологии. Вып. 3. М.: Союзмединформ, 1989.- 72 с.

73. Менджерицкий A.M. Лысенко А.В. Ускова Н.И. Протеолитические процессы в мозге и сыворотке крови крыс при гипокинезии и адаптивном влиянии ДСИП.- Биохимия.- 1995.- N4.- С. 585-592.

74. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н. Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник.-М.:Медицина.-1987.-368 с.

75. Мищенко В.П., Силенко Ю.И., Хавинсон В.Х. Влияние цитомедина пародонта на состояние перекисного окисления липидов и гемостаз при спонтанном пародонте у крыс // Стоматология.- 1991.- № 5.- С. 12-14

76. Морозкина Т.С., Полякова З.И., Лисицына Л.П., Захаренко И.В., Стрельников А.В. // Биохимия.- Минск, 1989.- С. 64-69

77. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем цитомедины // Успехи соврем биологии. 1983. Т.96, вып. 3 (6). С. 339-352.

78. Морозов В.Г. Механизм действия цитомединов в патологии // Симпозиум: Пептидные регуляторы -цитомедины / Воен мед акад им Кирова.-СПб.- 1992.-С. 105

79. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В. Пептидные тимомиметики. С-Пб: Наука, 2000.- 158 с.

80. Никитин В.Н. Экспериментальные подходы к продлению жизни // Проблемы старения и долголетия.- 1991.- Т. 1, № 1.- С. 5-10

81. Никушкин Е.В., Крыжановский Г.Н., Тупеев И.Р., Бордюков М.М., Юзефова С.М. Антиоксидантные ферменты крови при эпилептической активности // Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 1987.- № 3.- С. 297 299

82. Новиков B.C. (ред) Программированная клеточная гибель // СПб: Наука, 1996.

83. Ноздрачев А.Д., Баранникова И.А., Батуев А.С. Общий курс физиологии человека и животных. В 2 кн.//М.: Высш. шк., 1991.-512 с.

84. Осипов А.Н., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме // В сб.: Успехи биологической химии.-М.: Наука, 1990.- С. 180-209

85. Павлов Е.Е. Роль тималина в комплексном лечении бронхиальной астмы // Геронтологические аспекты пепьтдной регуляции функций организма.-СПб: Наука 1996.- С.65-66

86. Панин JI.E., Маянская Н.Н. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении.- Новосибирск: Наука, 1987.- 200 с

87. Панков Ю.А. Соматотропный гормон и частичный медиатор его биологического действия инсулиноподобный ростовой фактор-1.// Биохимия, т. 64, вып. 1, 1999.-е.5-13.

88. Панферова Н.Е. Сердечно-сосудистая система при гипокинезии различной длительности и выраженности// Косм. Биол. и авиакосм. Мед.-1976.-№6.- С. 15-20.

89. Погосян Г.Г., Налбандян P.M. Ингибирование липидной пероксидации супероксиддимутазой и церулоплазмином // Биохимия.-1983.-t.48.-вып.7.-С.1129-1134.

90. Покровский А.А. (ред) Биохимические методы исследования в клинике -М.:.Медицина. 1977. 168 с.

91. Рахманкулова Г.М. Влияние иммобилизации на содержание катехоламинов, аскорбиновой кислоты, глюкозы в крови и органах крысы // Функции двигательного аппарата человека и животных.- Казань. 1986.- С. 109-114.

92. Рустамов К.Д. Нейтральная пептидгидролазная активность в растворимой фракции разных областей коры головного мозга крыс в условиях голодания // Сб. I Респ. Биохимии. Конференц.- Баку, 1990.-С.112

93. Середенин С.Б. Дурнев А.Д. Фармакологическая защита генома. М.: ВИНИТИ, 1992.- 160 с.

94. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитутовой кислоты // Современные методы в биохимии.- М.: Медицина, 1977.- С. 66-68.

95. Степаничев М.Ю., Лазарева Н.А., Моисеева Ю.В., Онуфриев М.В., Митрохина О.С., Гуляева Н.В. Окислительный стресс в мозге: роль в нейродегенеративных и пластических изменениях.// XXX совещание по проблемам ВНД, 2000. С.23-25.

96. Тигранян Р.А. Гормонально метаболический статус организма при экстремальных воздействиях. - М.: Наука, 1990.- 288 с.

97. Тизул А.Я. Церебральная гемодинамика при 120-суточной клиностатической гипокинезии// Космич. Биол и мед.- 1972.- № 4.- С. 7277.

98. Тюлина О.В., Стволинский С.Л., Каган В.Е., Болдырев А.А. Влияние карнозина и его природных производных на хемилюминисценцию лейкоцитов, активированных BaSOj.// Нейрохимия.- 1995.- Т. 12, вып. 1.--С.46-51.

99. Тявокин В.В. Гиподинамия и сердечно-сосудистая система.- Саранск. 1975.

100. Фатеева Л.В. Механизмы стресс-протекторного действия коротких пептидов у крыс разного возраста // Автореф дисс к.м.н. С-Пб, 2002.21 с.

101. Федоров И.В. О динамике изменений белкового обмена у крыс в течение длительной гипокинезии// Косм. Биол. и мед.- 1970.-№ 3.- С. 1821

102. Федоров И.В. Обмен веществ при гиподинамии. М, 1982.- 276 с.

103. Формазюк В.Е., Горшкова Т.Ю., Болдырев А.А., Сергиенко В.И. // Биохимия 1992, т. 57.- С. 1324-1329.

104. Фролькис В.В. Старение: воспоминание о будущем.// "Лжування та Д1агностика,\- 1998.-N 1.- С. 14.

105. Фролькис В.В. Геронтология: прогнозы и гипотезы // Вестник НАН Украины.- 1999.- №7.- С. 28-40

106. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., Чалисова Н.И., Окулов В.Б. Влияние пептидов головного мозга на клетки нервной ткани in vitro // Цитология.-1997.- Т. 39, №7.- С. 571-575

107. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., Анисимов В.Н. Влияние эпиталамина на свободнорадикальные процессы у человека и животных // Успехи геронтологии.- 1999.- №3.- С. 133-142

108. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Пептиды эпифиза и тимуса в регуляции старения //С-Пб.: Фолиант, 2001.- 160 с.

109. Хавинсон В.Х., Мыльников С.В. Влияние эпиталона на возрастную динамику ПОЛ у Drosophila melanogaster // Бюл экспер биол и медицины.- 2000.-№11.- С.585-588

110. Хавинсон В.Х., Малинин В.В., Чалисова Н.И., Григорьев Е.И. Тканеспецифическое действие пептидов в культуре тканей крыс разного возраста // Успехи геронтологии.- 2002.- С. 95-100

111. Хасина Э.И., Кириллов О.И. Стрессовые механизмы гипокинезии.-Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1987.- 45 с.

112. Хоч И., Лопухова В., Грацианова А. Изменение морфофункционального состояния щитовидной железы при сочетанном действии гипокинезии и холода// Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1994.- № 11.-С. 523-528.

113. Чораян И.О., Ускова Н.И. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на содержание нейромедиаторов после действия гипокинетического стресса// механизмы интеграции биологических систем, проблема адаптации.- ставропосль.- 1990.- С. 118-119.

114. Шестаков В.А., Бойчевская Н.С., Шерстнев М.П. Хемолюминисценция плазмы крови в присутствии перекисис водорода// Вопр мед химии.-1972.-№2.- С. 132- 137

115. Шидловская Т.Е. Интенсивность перекисного окисления липидов в тканях крыс при гипокинезии // Космич. Биол. и авиакосм. Медицина.-1985.-№4.- С. 45-48

116. Штемберг А.С. Комбинированное действие гипокинезии и различных доз гамма-облучения на условнорефлекторную деятельность крыс.// Авиакосмическая и Экологическая медицина. 31(3): 34-396 1997.

117. Юшков В.В., Юшкова В.А. Влияние биорегуляторов на поведение и нейромедиаторный гомеостаз // Симпозиум: Пептидные биорегуляторы, цитомедины. СПб, 1992.-С.151.

118. Alexanian A.R., Bamburg J.R. Neuronal survival activity of S100 betabeta is enhenced by calcineurin inhibitors and requires activation of NF-kappa B.//FASEB J.- 1999, sep.; 13(2): 1611-1620.

119. AIlsop R/С/. Vaziri H„ Patterson C. Telomere length predicts implicative capacity of human fibroblasts // Proc Nat Acad Sci USA.- 1992.- V. 89.- P. 10114-10118

120. Ames B. Which are the significant environmental mutagens and antimutagens? // Mutat. Res. 1983.- V. 113.- P. 223-224

121. Blalock E.M., Porter N.M., Landfield P.W. Decreasea G-Protein-Mediated Regulation and Shift in Calcium Channel Types with Age in Hippocampal Cultures.//J.of Neurosci.- 1999.- № 19(19).- P. 8674-8684

122. Calabresi, Centonze D., Bernardi G. Electrophysiology of dopamine in normal and denervated striatal neurons.// TiNS, V.23, N 10, 2000,- p.S57-S63.

123. Choen M., Shirley P., De Chatelet L. 11 Clin. Chem.- 1983.- V.29.- P.513-515

124. Chuang J-Z., Milner T.A., Zhu M., Sung C.-H. A 29 kDa intracellular chloride channel p64Hl is associated with large dense-core vesicles in rat hippocampal neurons.//J. of Neurosci, Apr. 15, 1999, 19 (8): 2919-2928.

125. Cooper M., DeChatelet L., Shirley P., Cooper M. // Inflammation. 1982.-V. 6.- P.103-112.

126. Culter R. Human longerity and aging: possible role of reactive oxigen species // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1991.- V.621.- P. 1 -28

127. Erlwander R„ Unmack M., Grondahl M. Effect of age on vasoactiveintestinal polypeptide-induced short-circuit current in porcine jejunum // Сотр. Biochem. Physiol. Mol. Integr. Physiol. 1999.- V. 124, №1.- P. 29-33

128. Faden N., Maciejewski N. // J. Reticuloendoth. Soc.- 1981.- V. 30.- P. 219226

129. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis.//Science-1998-281:1309-1312.

130. Goth L. // Clin. Chem. 1991.- V.37, N12.- P: 2043 - 2047

131. Harley С., Vaziri H., Counter С., Allsopp R. The telomere hypothesis of cellular aging // Exp. Gerontol.- 1992.- V. 27.- P. 375-382

132. Harman D. Role of free radicals in ading and disease // Ann. N.Y. Acad. Sci.-1992.- V.673.- РЛ 26-141

133. Hayflick L. Intracellular determinants of call aging // Mech Ageing Dev.-1984.- V. 28, N2-3.-P. 177-185

134. Hashimoto M., Takeda A., Hsu L.J., Takenouchi Т., Maslian E. //J. Biol. Chem. 1999 oct 8; 274(41 ):28849-28852.

135. Herman J.P., Cullinan W.E. Neurocircuitry of stress: central control of the hypothalamo-pituitary-adrenocortical axis.//TiNS, Feb 1999, V. 20, N 2, p.78-83.

136. Kaskow J., Regnii A., Mulchahey J. Changes in brain corticotropin-releasing factor messenger RNA expression in aged Fisher 344 rats // Brain Res.- 1999.-V.822, №1-2.- P.228-230

137. Khavinson V., Izmaylov D., Obukhova L., Malinin V. Effect of epitalon on the lifespan increase in Drosophila melanogaster // Mech. Ageing Dev. -2000.-V. 120.- P. 141-149

138. Kim Tae-Wan. Tanzi R.E. Neuronal Intranuclear Inclusions in Polvglutamine Diseases: Nuclear Weapons or Nuclear Fallout.//Neuron. vol. 21, oct. 1998, 657-659.

139. Kovalenko E., Kasyan I., Vacek A. Adaptation to microgravity and hypokinesia// Congr. Int. Soc. For Pathophysiol, Moscow, 1991,- P. 354-355

140. Kristal В., Yu В. An emerging hypothesis: synergistic induction of aging by free radicals and Maillard reactions // J Gerontol.- 1992.- V.47, N4.- P. В107-B114

141. LeBlanck J. Strategies in cold: natural torpidity and thermogenesis/ Eds. Wang L., Hudson J. N.Y.: Acad. Press, 1988. P. 695.

142. Lee R„ Knapp S., Wurtman R. Prostaglandin E2 Stimulates Amyloid Precursor Protein Gene Expression: Inhibition by Immunosuppressants.// J. Neurosci, 1, 1999, 19(3): 940-947.

143. Lotharius J., Dugan J.L., O'Malley K.L. Distinct Mechanisms Underlie Neurotoxin-Mediated Cell Death in Cultured Dopaminergic neurons.//J.of Neurosci feb. 15, 1999, 19(4): 1284-1293.

144. Lysenko A., Uskova N., Matsionis A., Povilaitite P. The role of DSIP in calpaine activity regulation.// // in: Neurochemistry:cellular, molecular and clinical aspects.- eds. Teelken and Korf.- Plenum Press.- 1997.-P. 419-422

145. Macho L. Kvetnansky R., Torda T. // In: Catecholamines and stress. Recent advances.- New York, 1980.- P. 399-408.

146. Mabry Т., Gold P. McCarty R. Stress. Basic mechanisms and clinical implications. New York, 1995.- P. 512-523.

147. Mantyh P., DeMaster E., Malhortra A., Ghilardi J. Receptor endocytosis and dendrite reshaping in spinal neurons after somatosensory stimulation./ Science-1995.-v. 268.- P. 1629-1632.

148. Mathias S. Pena L., Kolesnik R Signal transduction of stress via ceramide // Biochem.- 1998.- V. 335.- P. 465-480

149. Mendzeritsky A. Matsionis A., Lysenko A. Delta-sleep inducing peptide protective effect under hypokinetic condition// in: Neurochemistry:cellular, molecular and clinical aspects.- eds. Teelken and Korf.- Plenum Press.- 1997.-P. 339-343.

150. Nakamura A. Nakashima M. Kanemoto H., Sugao Т., Fukumura Y. Shiomi H. Potent antinociceptive effect of centrally administered DSIP // Eur J. Pharmacol. 1988. V.155. N3.- P.247.-253

151. Nicotera P., Leist M. Manzo L. Neuronal cell death: a demise with different shapes.// TiPS feb 1999. vol. 20:46-51.

152. Novicov V.I., Molotkov O.V., Podcheko A.D., Babichev A.V. The effect of thimic peptides on the development of streptozotocin-induced diabetes mellitus.// Patol. Fiziol. Eks. Ter. 1999 Jul-Sep; (3):25-28.

153. Obeso J.A., Rodriguez-Oroz M.C., Rodriguez M., Lanciego J.L., Artieda J., Gonzalo N., Olanovv C.W. Pathophysiology of the basal ganglia in Parkinson's disease.//TiNS, V.23, N 10, 2000.- p.S8-S19.

154. Ojami J., Masters C.L., Opeskin K., McKelie P., Byrne E. //Mech Ageing Dev. 1999, Nov. 2; 11 l(l):39-47.

155. Onn S.-P., West A.R., Grase A. A. Dopamine-mediated regulation of striatal neuronal and network interactions.// TiNS, V.23, N 10, 2000.- p.S48-S56

156. Ooka H., Shinkai T. Effects of chronic hyperthyroidism on lifespan of the rat //Mech. Aging Dev.- 1986.- V.33.- P.275-282

157. Parent A., Sato F., Wu Y„ Gauthier J., Levesque M., Parent M. Organization of the basal ganglia: the importence of axonal collateralization.// TiNS. V.23. N 10, 2000,-p.S20-S27.

158. Reiter R., Oxidative damage to nuclear DNA: amelioration by melatonin. NEL Review// Neuroendocrinol. Lett. 1999.- V. 20.- P. 145-150

159. Rosenberg P.A., Li Y„ Ali S., Altiok N., Back S.A., Volpe J.J. Intracellular redox state determines whether nitric oxide is toxic or protective to rat oligodendrocytes in culture.//J. Neurochem. 1999 Aug;73(2):476-484.

160. Ross A., Kinloch, J. Mark Tzeherne, L. Mike Furness and Iradj

161. Hajimohamadreza. The pharmacology of apoptosis.// TiPS- Jan., 1999, vol. 20, p. 35-42.

162. Rybakina E., Nalivaeva N., Kozinets I. Involvement of the sphingomyelin pathway in interleukin-1 signalling in murine immunocompetent and nerve cells // Immunol. Lett.- 1997.- V. 56, N 1-3.- P. 67

163. Samson L., Cairns J. A new pathway for DNA repair in Escherichia coli // Nature.- 1977.- V. 267, N 5608.- P. 281-283p

164. Salo D., Lin S., Pacilici R. Davies K. SOD is preferentially degraded by a proteolytic system from red blood cells following oxidative modification by hidrogen peroxide // Free Radical Biol and Med.- 1988.- V.5.- P.335-339

165. Sealfon S.C., Olanow W. Dopamine receptors: from structure to behavior.// TiNS, V.23, N 10, 2000.- p. S34-S40.

166. Sell D., Lane M., Johnson W. Longevity and the genetic determination of collasen slvcoxidation kinetics in mammalian senescence // Proc Nat Acad Sci USA.- 1996.- V. 93.- P. 485-490

167. Selvaraj R., Sbarra A., Thomas G. // J. Reticuloendoth. Soc. 1982.- V.31 .-P.3 - 16

168. Shimazu S., Katsuki H., Akaike A//Eur. J. Pharmacol 1999 Jul 14; 377(1): 29-34.

169. Smirnov K. Hypokinetic syndrome in the digestive system in microgravity// Congr. Int. Soc. For Pathophysiol, Moscow, 1991.- P. 356.

170. Smith Y., Kieval J.Z. Anatomy of the dopamine system in the basal ganglia.// TiNS, V.23, N 10, 2000.- p.S28-S33.

171. Tesoriere L., D'Arpa D., Conti S., Giaccone V., Pintaudi A.M., Livrea M.A. Melatonin protects human red blood cells from oxidative hemolysis: new-insights into the radical-scavenging activity.// J. Pineal Res. 1999 Sep.: 27(2):95-05.

172. Tigranian R. Brain opioid system in stress and its dependence on state of catecholaminergic system// J. of Neurochemistry.- 1998.- V. 71, Suppl. 1.- P.S 48B

173. Vaudry D., Gonzalez B.J., Basille M., Fournier A., Vaudry H. Neurotrophic activity of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide on rat cerebellar cortex during development.// Proc. Natt. Acad. Sci USA 1999 Aug 3: 96(16):9415-9420.

174. Walters J.R., Ruskin D.N., Allters K.A., Bergstom D.A. Pre- and postsynaptic aspects of dopamine-mediated transmission.// TiNS. V.23, N 10. 2000.- p.S41-S47.

175. White A. R. .//J. Neuroscience, Nov. 1, 1999, 19(21): 9170-9179.

176. Wolff S., Olivieri G., Afzal V. Adaptation of human lymphocytes to radiation or chemical mutagenes: Differences in cytogenetic repair // In: G. Obe and A. Natarajan (Eds), Chromosomal Aberrations.- Berlin: Springer. 1990.-P. 140-150

177. Ying W., Han S.K., Miller J.W., Scanson R.A. J. Neurochem 1999. oct.: 73(4): 1549-1556

178. Yokoo H., Tanaka M., Tanaka T. Stress-induced increase in noradrenaline release in the rat hypothalamus assessed by intracranial microdialysis // Experientia.- 1990.- № 3.- P. 290-292.

179. Zaidi A., Michaelis M.L. Effects of reactive oxigen species on brain synaptic plasma membrane Ca(2+)-ATPase.//Free Radic Biol Med 1999 oct; 27(7-8):810-827.