Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические и генетические характеристики растений и на формирование растительного покрова

ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические и генетические характеристики растений и на формирование растительного покрова"

На правах рукописи

СУСЛОНОВ АЛЕКСАНДР ВЛАДИМИРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ НЕФТЯНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ПОЧВ НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РАСТЕНИЙ И НА ФОРМИРОВАНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО ПОКРОВА

03.02.08 - экология (биологические науки)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2010

2 3 .ПЕН 2010

004618845

Работа выполнена в Естественнонаучном институте Государственного Образовательного учреждения Высшего Профессионального Образования «Пермский государственный университет»

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент Назаров Алексей Владимирович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, доцент Федоров Николай Иванович

доктор биологических наук, профессор Кавеленова Людмила Михайловна

Ведущее учреждение:

Институт биологии Коми НЦ УрО РА]

Защита состоится « ?}> » (У 2010 г. в « ^ » часов « 00 » мин.

на заседании Объединенного диссертационного совета ДМ 002.136.01 щ Учреждении Российской академии наук Институте биологии Уфимско научного центра РАН ио адресу: 450054 г. Уфа, Проспект Октября, 69. факс: +7 (347) 2356247; е-таН:игу@апгЬ.ги

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уфимского научного центра РАН и на сайте Института биологии Уфимского научного центра http://ib.anrb.ru/sovethtmI

Автореферат разослан « »

2010г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

Р.В. Уразгильдап

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Среди современных проблем человечества в последние десятилетия особое внимание уделяется состоянию окружающей среды. Значительную роль в загрязнении биосферы играют нефть и нефтепродукты, поэтому изучению различных аспектов проблемы нефтяного загрязнения уделяется большое внимание (Киреева и др., 2004). Загрязнение почв нефтью вызывает нарушения динамического равновесия в экосистеме вследствие изменения структуры почвенного покрова, геохимических свойств почв, а также токсического действия на живые организмы (Пиковский и др., 2003). Опасность нефтяного загрязнения связана с высокой чувствительностью к нему высших растений, притом, что они занимают ключевое положение практически во всех наземных экосистемах, определяя существование и состав остальных биологических компонентов биогеоценозов. Попадая в почву, нефть из-за медленной скорости деструкции тяжелых нефтяных фракций оказывает на растения длительное воздействие, достигающее в случае сильного загрязнения 10-20 лет и более (Шилова, 1977; Демиденко, Демурджан, 1988; Габбасова и др., 2002). Однако основное количество работ посвящено изучению влияния на растения нефтяных загрязнений с небольшим, не превышающим 3-5 лет, сроком. Данные о растениях, произрастающих на почвах с более длительными сроками загрязнения нефтью, очень немногочисленны. В условиях длительного нефтяного загрязнения остаются не изученными морфологические особенности растений и уровень их генетического разнообразия, который является основой устойчивости воспроизводства природных экосистем.

Цель исследования - экспериментальная оценка влияния нефтяного загрязнения разной давности на растительный покров, морфологические особенности и уровень генетического разнообразия доминирующих в луговых сообществах травянистых видов растений в условиях подзоны южной тайги Пермского Предуралья.

Для достижения цели были поставлены следующие основные задачи:

1. Провести мониторинг формирования растительного покрова нефтезагрязненных площадок с разным сроком внесения нефти в почву.

2. Исследовать влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические особенности луговых растений Роа pratensis L. через шесть и девять лет и Trifolium pratense L. через шесть, девять и двадцать лет после загрязнения.

3. Выявить эффективные морфологические показатели для оценки влияния нефтяного загрязнения почв на растения на примере Р. pratensis и Т. pratense.

4. Изучить генетическое разнообразие Р. pratensis на нефтезагрязненных площадках через шесть и девять лет после начала эксперимента.

5. Дать комплексную оценку формирования растительного покрова, морфологических и генетических характеристик Р. pratensis и Т. pratense в условиях разных сроков загрязнения почв нефтью.

Положения, выносимые на защиту

1. Нефтяное загрязнение почв приводит к снижению общего проективного покрытия и общей наземной биомассы растений, которые не восстанавливаются полностью в течение 20-ти лет, замедляет восстановление растительного покрова на нефтезагрязненных площадках в условиях подзоны южной тайги Пермского Предуралья.

2. В условиях загрязнения в разные сроки почв нефтью у доминирующих в луговых сообществах видов растений Р. pratensis и Т. pratense снижены значения морфологических показателей, такие как длина центральных метамеров и длина побега.

3. Уровень флуктуирующей асимметрии длины боковых листочков тройчато сложного листа Т. pratense является эффективным при изучении стабильности развития растений на изученной почве при нефтяном загрязнении шестилетней давности.

4. Длительное нефтяное загрязнение почв приводит к снижению генетического разнообразия доминирующего в растительных сообществах вида Р. pratensis.

Научная новизна полученных результатов

Впервые в условиях нефтяного загрязнения почв изучен механиз! восстановления растительного покрова на площадках разных сроков загрязнени (от 1-го до 20-ти лет). Впервые для выявления влияния загрязнения почв нефты на растения использован анализ флуктуирующей асимметрии тройчато сложног листа модельного вида Т. pratense из семейства Fabaceae. На площадках разны сроков загрязнения определены основные морфологические параметр] доминирующих в луговых сообществах видов растений. Впервые на пример модельного вида растений, доминирующего в травянистом ярусе Р. pratensis i семейства Роасеае, показано, что длительное нефтяное загрязнение приводит снижению генетического разнообразия. Впервые анализ формирован! растительного покрова нефтезагрязненных площадок проведен в комплексе

определением морфологических особенностей и генетического разнообразия доминирующих в луговых сообществах видов растений.

Практическая значимость и реализация результатов исследований

Результаты исследования вносят существенный вклад в изучение влияния нефтяных загрязнений на растительные сообщества. Научные выводы работы и рекомендации могут быть использованы для мониторинга нефтезагрязненных экосистем. Анализ флуктуирующей асимметрии рекомендуется для оценки стабильности развития растений при антропогенных воздействиях. Молекулярно-генетический анализ может быть использован для выявления генетической компоненты биоразнообразия, механизмов функционирования и поддержания устойчивости экосистем. Разработанная и апробированная методика комплексной оценки формирования растительного покрова, морфологических особенностей и генетического разнообразия растений на нефтезагрязненных площадках рекомендуется в дальнейшем для выявления влияния на растения нефтяных загрязнений разной длительности и в разных регионах страны. Результаты исследований используются при преподавании учебных дисциплин и специальных курсов студентам на кафедре почвоведения ГОУ ВПО «Владимирский государственный университет» и на кафедре экологии ГОУ ВПО «Челябинский государственный университет», что подтверждено актами внедрения результатов исследований в учебный процесс.

Связь работы с научными программами

Диссертационная работа выполнялась в ходе подготовки и реализации ПГУ приоритетного инновационного национального проекта «Образование». Исследования проводились в связи с тематикой гранта РФФИр_урал_а № 07-0496016 «Влияние нефтяных загрязнений почв на популяции микроорганизмов и растений Пермского края» (2007-2009 гг.), а также гранта РФФИр_урал_а № 0704-96032 «Динамика генетического разнообразия и структуры популяционных систем ресурсных растений Пермского края при антропогенных воздействиях» (2007-2009 гг.).

Личный вклад автора состоит в выборе объектов, разработке программы, проведении полевых и лабораторных исследований, а также в обработке, анализе и обобщении результатов, подготовке публикаций. Автор лично провел геоботанические описания, определение морфометрических показателей растений, их молекулярно-генетический анализ, дал комплексную оценку формирования растительного покрова, морфологических и генетических особенностей растений

на нефтезагрязненных и контрольных площадках, а также написал и оформил текст диссертации и автореферата.

Апробация работы

Материалы исследований представлены на Всероссийском молодежном научном симпозиуме «Безопасность биосферы - 2005» (Екатеринбург, 2005), на Первой Всероссийской научно-технической Интернет-конференции «Современные проблемы экологии и безопасности» (Тула, 2005), на Шестой международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых (Пермь, 2007), на Первой Международной телеконференции «Фундаментальные медико-биологические науки и практическое здравоохранение» (Томск, 2010), на Общероссийской научной конференции «Актуальные проблемы науки и образования» (Красноярск, 2010), на III Всероссийской научно-практической конференции «Биологические системы: устойчивость, принципы и механизмы функционирования» (Нижний Тагил, 2010).

Публикации

Диссертантом по теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в их числе три статьи в ведущих рецензируемых журналах из перечня ВАК, три статьи в материалах сборников и четыре научных работы в материалах конференций.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, шести глав - обзор проблемы, материалы и методы исследований, четырех глав результатов и их обсуждения, выводов. Список литературы включает 147 источников, в том числе 104 публикации отечественных авторов и 43 публикации иностранных авторов. Диссертационная работа изложена на 118 машинописных страницах, из которых 98 страниц основного текста и 20 страниц приложений, содержит 25 таблиц, 20 рисунков, приложения.

Благодарности

Автор выражает искреннюю благодарность и признательность научному руководителю к.б.н., с.н.с. Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, доценту ПГУ Назарову A.B.; зав. НИЛ «Молекулярной биологии и генетики» ЕНИ ПГУ д.б.н., проф. ПГУ Боронниковой C.B.; д.б.н., проф. ПП Мандрице С.А., н.с. НИЛ «Молекулярной биологии и генетики» ЕНИ ПП Светлаковой Т.Н. и всем соавторам по публикациям.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Изучение влияния нефтяного загрязнения на растения проводилось в условиях подзоны южной тайги Пермского Предуралья на опытном стационаре института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (г. Пермь) в д. Ключи Добрянского района в 2005-2009 гг. Экспериментальные площадки размером 1м2 были заложены в злаково-разнотравном лугу на дерново-подзолистой среднесуглинистой почве (гумус 2.86 %, pH водный - 6.3, pH солевой - 5.6, N общий - 0.123%). Площадки размером 1 м2 закладывались для микробиологических исследований в 1985, 1996, 1997, 1998 и 1999, 2002, 2003 и 2004 гг. Всего было заложено 240 нефтезагрязненных и 240 контрольных площадок. Длительность нефтяного загрязнения рассчитана от 2005 года. Формирование растительного покрова и характеристики растений изучали для 20-ти, 9-та, 8-ми, 7-ми, 6-ти, 3-х, 2-х и 1-го лет загрязнения. Площадки были перекопаны с уборкой растительности. На каждую площадку вносили 24 л/м2 нефти. Для загрязнения использовали нефть Ярино-Каменноложского месторождения (содержание парафинов - 5.4%, серы - 0.51-0.79%, плотность -0.816-0.838 г/см3). Контрольные площадки были также перекопаны с уборкой растительности, но без загрязнения нефтью. В 2005 году для комплексных исследований случайным образом были избраны по 10 площадок с каждого года загрязнения и по 10 контрольных площадок для каждого года загрязнения. Таким образом, было обследовано 80 площадок, загрязненных нефтью в разные сроки, и 80 контрольных площадок. Определение битумоидов в почве осуществляли в соответствии с «Методическим руководством по люминесцентно-битумологическим и спектральным методам исследования...» (1979). Агрохимические свойства почвы определяли с использованием общепринятых методик (Практикум по агрохимии..., 2001). Геоботанические описания растительных сообществ указанных участков и определение общей биомассы были проведены в 2005 году по общепринятым методикам (Шенников, 1961). Общее проективное покрытие растений определяли по методике Л.Г. Раменского (1956). При учете обилия отдельных видов растений пользовались шкалой Drude (Быков, 1957).

Для исследования морфологических особенностей растений в условиях длительного нефтяного загрязнения были отобраны два вида, доминирующих в растительных сообществах: Роа pratensis L. (Роасеае) и Trifolium pratense L.

(Fabaceae). Эти виды были в достаточном количестве представлены как на площадках разных лет загрязнения, так и на контрольных площадках. Для анализа морфологических особенностей на площадках 9-ти и 6-ти летней давности загрязнения были отобраны по 30 растений обоих видов. Общее число проанализированных растений составило 180 для Т. pratense и 120 для Р. pratensis. Изучение морфологических параметров проведено в соответствии с рекомендациями Ю.А. Злобина (1989). Для изучения флуктуирующей асимметрии листья исследованных растений Т. pratense были отсканированы при помощи планшетного сканера Mustec 1200 UB Plus. Дальнейшее измерение проводилось в программе Image J. Статистический анализ флуктуирующей асимметрии боковых листочков тройчато сложного листа Т. pratense проведен по методике А. Палмера и С. Стробека (Palmer, Strobeck, 2003) и Д.Б. Гелашвили (2004).

Анализ молекулярно-генетического полиморфизма ДНК проведен в научно-исследовательской лаборатории «Молекулярной биологии и генетики» ЕНИ ПГУ с использованием ISSR- (Inter Simple Sequence Repeats, Zietkiewicz et al., 1994) метода с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР) на примере доминирующего в растительных сообществах вида Р. pratensis. Для выделения ДНК использовали методику A.M. Торрес (Torres et al., 1993). Листья были собраны с растений на площадках 9-ти и 6-ти летней давности загрязнения. Концентрация всех проб ДНК была в пределах 5 нг/мкл. Амплификация ДНК была выполнена в термоциклерах MJ Mini-Cycler («Bio-Rad», USA) и Терцик («ДНК-Технология», Москва) по типичной для ISSR-метода программе (Молекулярная генетика, 2007). Для проверки достоверности полученных спектров ДНК опыт повторяли не менее трех раз. Амплифицированные продукты были подвергнуты электрофорезу в 1.7% агарозном геле в присутствии бромистого этидия. Гели были отсканированы в системе гель-документации Gel-Doc XR («Bio-Rad», USA). Для определения длины фрагментов ДНК использовали маркер молекулярной массы 100 bp +1.5 + 3 Kb DNA Ladder («ООО-СибЭнзим-М», Москва) и программу Quantity One («Bio-Rad», USA). Проведен анализ полиморфизма 90 ISSR-маркеров у 450 проб ДНК Р. pratensis. Компьютерный анализ молекулярно-генетического полиморфизма ДНК проведен с помощью программы POPGENE 1.31 (Yeh et al., 1999) и специализированного макроса GenAlExó (Peakall, Smouse, 2006) для MS Excel с определением доли полиморфных локусов (Williams et al 1990) при Р95, общего числа аллелей («„), эффективного числа аллелей (ие (Kimura et al., 1964), ожидаемой гетерозиготности (Я£) (Nei, 1987). Объем1 использованных выборок в среднем составляли 30 растений. Статистическ 8

анализы выполнены при помощи программ STATISTICA 6.0 (версия 6.0.), SPSS 11.5 и MS Excel с использованием стандартных для биологических исследований методов (Животовский, 1983,1990; Лакин, 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Формирование растительного покрова на нефтезагрязненных площадках В первый год общее проективное покрытие растений на площадках без загрязнения нефтью составляло 30%, на площадках с нефтезагрязненной почвой -1% (рис. 1).

SS 70

s 60

| 50 I 40

<D

о 30

S 20

S 10

о

ê 0

1 2 3 6 7 Срок после начала опыта,годы

20

-без загрязнения -с загрязнением

Рис. 1. Общее проективное покрытие растений на экспериментальных площадках

Общая биомасса растений на площадках без загрязнения равнялась 211,1 г/м2, на участках с загрязнением - 13,5 г/м2 (рис. 2).

Рис. 2. Общая биомасса надземной части растений на экспериментальных площадках

На нефтезагрязненной почве отмечено существенное снижение видового разнообразия (27 видов) по сравнению с вариантом опыта без загрязнения (41 вид) (рис. 3).

Рис. 3. Видовая насыщенность экспериментальных площадок

Наиболее обильными на нефтезагрязненных и контрольных площадках были сорные однолетние виды. На почве без загрязнения это Chenopodium album L., на нефтезагрязненной почве - Chenopodium album L., Erysimum cheiranthoides L. Из многолетников более десяти растений на 1м2 имели в первом случае Elytrigia repens (L.) Nevski., Achillea millefolium L., во втором - Achillea millefolium L., Elytrigia repens (L.) Nevski., Tanacetum vulgare L. Однолетние сорные растения на загрязненных нефтью участках были сильно угнетены.

Во второй год общее проективное покрытие растений на участках с почвой без загрязнения составляло 50%, на площадках с нефтезагрязненной почвой - 5% (рис. 1), общая биомасса растений - 269,2 и 63,4 г/м2 (рис. 2), видовая насыщенность - 37 и 34 видов соответственно (рис. 3). На незагрязненных участках преобладали многолетние злаки, в первую очередь Elytrigia repens (L.) Nevski. и Bromopsis inermis (Leys.) Holub. Отмечено исчезновение ряда однолетних сорных видов. На нефтезагрязненных площадках не отмечено резкое увеличение численности многолетних злаков. Относительно обильными видами являлись Elytrigia repens (L.) Nevski., Bromopsis inermis (Leys.) Holub., Achillea millefolium L., Trifolium repens L. Численность однолетних сорных видов растений уменьшилась, за исключением Crépis tectorum L.

В третий год общее проективное покрытие растений на площадках без загрязнения составляло 60%, с нефтезагрязнением - 10% (рис. 1). Общая биомасса растений на площадках без загрязнения - 234,8 г/м2, на участках с загрязнением -84,5 г/м2 (рис. 2). Количество видов на экспериментальных площадках в вариантах без загрязнения и с загрязнением - 39 и 36 соответственно (рис. 3).

Через шесть, семь, и девять лет общее проективное покрытие растений на площадках без загрязнения достигало 50%, на участках с восьмилетним сроком эксперимента - 60%. Общая биомасса растений варьировала от 207,8 г/м2 до 284,8 г/м2. Количество видов растений изменялось от 35 до 38. На нефтезагрязненных площадках через шесть и семь лет общее проективное покрытие растений составляло 10%, общая биомасса растений на данных участках - 75,8 и 81,0 г/м2, а видовая насыщенность - 28 и 33 вида соответственно. С увеличением времени, прошедшего после загрязнения, возрастает общее проективное покрытие растений, через восемь и девять лет оно достигает 30%, повышается общая биомасса растений до 154,8 и 155,1 г/м2 соответственно. Количество видов на площадках - 27 и 31 соответственно.

Через двадцать лет общее проективное покрытие растений на участках с почвой без загрязнения составляло 50%, на площадках с нефтезагрязненной почвой - 30%. Общая биомасса растений на площадках без загрязнения равна 218,1 г/м2, на участках с загрязнением - 94,9 г/м2. Видовая насыщенность в обоих вариантах эксперимента равна 36 видам.

Таким образом, исследованное нефтяное загрязнение почв оказывает длительное негативное воздействие на проективное покрытие, общую биомассу растений и видовое разнообразие растительного покрова.

2. Анализ влияния нефтяного загрязнения почв на морфологические особенности растений 2.1. Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические особенности Роа pratensis L.

У Р. pratensis все морфологические показатели, кроме числа листьев, ниже у растений, произрастающих на нефтезагрязненных площадках (табл. 1), чем у растений с контрольных площадок (Суслонов и др., 2010).

При оценке метамерного строения растений Р. pratensis (рис. 4) количество узлов и междоузлий совпало у подавляющего большинства изученных растений Р. pratensis как на контрольных, так и на нефтезагрязненных площадках.

Таблица 1.

Средние значения морфологических показателей Р. pratensis

Показатель Варианты опыта (лет после загрязнения нефтью)

9-й(1996г) 6-й (1999т) Контроль

1 .Длина побега, см 49,52±1,14 45,34±1,22 53,91±1,06

2.Длина стебля, см 49,52±1,14 45,34±1,22 53,91±1,06

3.Число листьев, шт 3,84±0,15 3,51±0,16 3,23±0,06

4. Длина соцветия, см 8,11±0,25 7,94±0,29 8,81±0,25

5.Число колосков в соцветии, шт 16,85±0,82 17,63±0,69 22,14±0,90

6.Число зерен в колоске, шт 5,84±0,15 5,41±0,31 6,31 ±0,22

Установлены достоверные отличия в длинах третьего и четвертого метамеров у Р. pratensis, произрастающих на нефтезагрязненных площадках, по сравнению с растениями с контрольных площадок.

Рис. 4. Метамерное строение Р. pratensis.

Примечание: м - длина междоузлий, ДлМ - длина соцветия; узлы пронумерованы снизу вверх

Таким образом, в условиях нефтяного загрязнения почв достоверно ниже длина побега у Р. pratensis на 15,90% через шесть лет и на 8,14% через девять лет после загрязнения, а также достоверно ниже длина центральных метамеров: третьего метамера Р. pratensis -на 25,58% через шесть лет и на 15,05% через девять лет после загрязнения, четвертого метамера Р. pratensis - на 23,81% и 28,67% соответственно.

2.2. Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические особенности Trifolium pratense L.

Длина побега Т. pratense достоверно ниже у растений с площадок 20-ти, 9-ти и 6-ти лет загрязнения нефтью по сравнению с контрольной выборкой (табл. 2).

Таблица 2.

Показатели метамерности Т. pratense_

Морфометрический показатель 20 лет (1985г) 9 лет (1996г) 6 лег (1999г) контроль

Длина первого междоузлия, см 2,14±0,15 3,03±0,47 2,86±0,73 2,23±0,36

Длина второго междоузлия, см 5,39±0,37 7,33±0,55 6,94±0,69 6,56±0,48

Длина третьего междоузлия, см 7,73±0,46 7,82±0,40 7,45±0,53 9,12±0,55

Длина четвертого междоузлия, см 8,04±0,41 7,93±0,50 8,69±0,73 10,57±0,49

Длина пятого междоузлия, см 7,87±0,55 6,76±0,84 8,69±0,69 9,24±0,48

Длина шестого междоузлия, см 5,35±0,52 4,54±0,72 6,03±0,98 8,43±0,49

Длина седьмого междоузлия, см 3,93±0,77 3,81±0,82 3,25±0,75 4,81±0,6

Длина восьмого междоузлия, см 2,90±0,74 3,03±0,53 3,11±0,34 3,64±0,92

Длина девятого междоузлия, см 1,88±0,50 3,80±0,60 - 1,50±0,80

Длина побега, см 34,16±2,51 42,41 ±2,94 41,06±2,38 48,13±1,47

Примечание: 6, 9 и 20 лет - срок загрязнения

Таким образом, в условиях нефтяного загрязнения почв достоверно ниже длина побега у Т. pratense на 14,69% через 6-ть лет и 11,88% через 9-ть лет после загрязнения, а также длина центральных метамеров: третьего метамера Т. pratense -на 18,31% через 6 лет и 15,24% через 20 лет, четвертого метамера Т. pratense - на 17,79% через 6 лет, 24,98% через 9 лет, 23,94% через 20 лет.

Проведена оценка уровня флуктуирующей асимметрии длины боковых листочков тройчато сложного листа растений Т. pratense, произрастающих в условиях нефтяного загрязнения (Светлакова и др., 2010; Суслонов, 2010). В результате статистического анализа показателей флуктуирующей асимметрии растений Т. pratense, были обнаружены достоверные отличия в интегральных значениях асимметрии растений, произрастающих на нефтезагрязненных площадках 6-ти летней давности от растений, произрастающих на контрольных площадках. Нефтяные загрязнения 9-ти и 20-ти летней давности не оказали влияние на уровень этого показателя.

3. Генетическое разнообразие растений на нефтезагрязненных площадках

на примере Р. pratensis

Для выявления полиморфизма длин амплифицированных фрагментов ДНК, получаемых в результате полимеразной цепной реакции (ПЦР) с помощью ISSR-метода, из 25 ISSR-праймеров выбраны и апробированы 5 наиболее эффективных праймеров (табл. 3).

Таблица 3.

Характеристика амплифицированных ISSR-фрагментов Р. pratensis

Прай-мер Нуклеотид-ная последовательность (5-3') Размеры фрагментов ДНК, пн Число фрагментов ДНК Доля полиморфных фрагментов ДНК {Pgs)

9 лет 6 лет контроль 9 лет 6 лет контроль

М1 (AC)8CG 260- 1340 18 17 15 0,833 0,824 0,867

М2 (АС)8СС 290- 1270 20 19 20 0,800 0,842 0,950

М9 (GAC)4AC 270-1220 19 19 20 0,790 0,737 0,950

Х9 (ACC)6G 230-930 16 16 14 0,813 0,813 0,857

XII (AGC)6G 240- 1020 17 15 16 0,824 0,867 0,938

всего 90 86 85 0,811 0,814 0,918

Примечание: 6 и 9 лет - срок загрязнения

Установлено, что с помощью одного ISSR-праймера, в среднем, было амплифицировано 17 фрагментов ДНК (рис. 5). Доля полиморфных фрагментов у Р. pratensis, растущих на почве после шести (Pw=0,814) и девяти (Рр5=0,811) лет загрязнения нефтью, достоверно ниже, чем у растений с контрольных площадок (Р«=0,918).

М abcdefghij klm nopqrstu vwxyz

Рис. 5. ISSR-спектр Р. pratensis с праймером Ml, произрастающих на площадках, загрязненных нефтью в 1996 году. Буквами обозначены номера проб, М - маркер молекулярного веса. Стрелками указаны некоторые полиморфные фрагменты

Значения ожидаемой гетерозиготности также ниже у растений, произрастающие на площадках после шести (#е=0,287) и девяти (Не=0,290) лет внесения нефти в почву по сравнению с растениями, произрастающими на контрольных площадках (Не=0,302). Соответственно, эффективное число аллелей на локус, как производный от ожидаемой гетерозиготности показатель, тоже ниже у растений, произрастающих на площадках с загрязнением 6-летней (пе=1,449) и 9-летней давности (n«=1,467) по сравнению с контролем (пе= 1,497). Показатель внутрипопуляционного разнообразия растений нефтезагрязненных площадок достоверно ниже (ц=1,786 после 6 лет, ц=1,765 после 9-ти лет внесения нефти в почву), чем у растений, произрастающих на контрольных площадках (ц=1,816). В условиях нефтяного загрязнения почв проведен анализ полиморфизма ДНК с использованием разных тандемных повторов генома Р. pratensis (Девятова и др., 2010; Боронникова и др., 2010).

Таким образом, у доминантного в луговом сообществе вида Р. pratensis уровень генетического разнообразия ниже на площадках шести и девятилетней давности загрязнения почв нефтью по сравнению с контролем.

4. Комплексная оценка влияния нефтяного загрязнения на растения

Нефтяное загрязнение оказало сильное негативное воздействие на общее проективное покрытие, которое через год после внесения нефти на загрязненных площадках было в 30 раз меньше, чем на незагрязненных, а через 20-ть лет различие между ними составляло в 1,7 раза. С увеличением срока после загрязнения и уменьшения концентрации загрязнителя также уменьшается различие между загрязненными и незагрязненными участками по величине общей биомассы растений от 15,6 раз через год после начала эксперимента до 1,8 раза через 9-ть лет. Через 20-ть лет после внесения нефти в почву загрязненные и незагрязненные площадки отличались между собой по величине общей биомассы растений в 2,2 раза. При этом концентрация бигумоидов в загрязненной почве через 20-ть лет после внесения нефти была в 4,8 раза больше, чем в незагрязненной. Следовательно, полного восстановления почвы не произошло даже за этот длительный срок (Назаров, Суслонов, 2010).

Внесение нефти в почву оказало отрицательное влияние и на формирование растительного сообщества в условиях загрязнения. Во-первых, это проявлялось в удлинении стадий зарастания загрязненных площадок растениями. Если однолетние сорные растения на незагрязненной почве доминировали в течение одного года, то при загрязнении почвы они преобладали в течение двух лет. Во-

вторых, негативное влияние нефти на формирование травянистого яруса проявлялось в уменьшении видов растений, заселяющих загрязненные почвы. В целом, на нефтезагрязненных площадках произрастало меньшее количество видов растений, за исключением площадок, загрязненных 20 лет назад, где количество видов не отличалось от такового на контрольных площадках без загрязнения. Максимальное отличие в данном показателе между площадками с загрязнением и без внесения нефти наблюдалось через год после начала опыта.

При изучении морфологических особенностей достоверная разница, между растениями, произрастающими на нефтезагрязненных площадках, с растениями, произрастающими на контрольных площадках, обнаружена у Р. pratensis по длине побега, длине соцветия, числе колосков в соцветии и длине центральных метамеров; а у T.pratense - по длине побега и длине центральных метамеров. Показано, что уровень флуктуирующей асимметрии длины боковых листочков тройчато сложного листа T.pratense как показатель нестабильного развития растения при влиянии негативных факторов, применим при изучении стабильности развития растений при нефтяном загрязнении.

В условиях нефтяного загрязнения Р. pratensis характеризуются меньшим генетическим разнообразием, так как доля полиморфных локусов (Р95), ожидаемая гетерозиготность (Не), эффективное число аллелей (Пс) и показатель внутрипопуляционного разнообразия (ц), достоверно ниже у растений, произрастающих на нефтезагрязненных площадках. Снижение генетического разнообразия потенциально может быть особенно опасно, так как именно оно определяет адаптивный потенциал живых организмов в условиях изменяющейся среды.

Внесение нефти в почву привело к увеличению количества в ней растворимого натрия. С увеличением времени, прошедшего после загрязнения концентрация ионов натрия в почве уменьшается. Так, через год после начала опыта, его концентрация в загрязненной почве была в 19,6 раза больше, чем в почве без загрязнения, через два года - в 7,0 раза, через девять - в 2,5 раза. Через двадцать лет содержание растворимого натрия в загрязненных почвах не имело достоверных отличий от такового в почвах без загрязнения. Результаты эксперимента согласуются с данными, полученными ранее, так как известно, что в условиях гумидного климата при промывном режиме почвы происходит достаточно быстрое вымывание из нее солей пластовых вод, которое препятствует засолению почвы при нефтязагрязнении (Иларионов, 2006). На основании

полученных результатов рекомендован список видов высших растений для фиторемедиации нефтезагрязненных почв.

Таким образом, при комплексном анализе установлено отрицательное влияние нефтяного загрязнения разной длительности на формирование растительного покрова, продуктивность растительного сообщества, а также на морфологические показатели, стабильность развития растений и уровень генетического разнообразия растений нефтезагрязненных площадок. Нами на основании полученных результатов рекомендован список видов высших растений для восстановления нефтезагрязненных почв.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что нефтяное загрязнение почв 20-ти летней давности приводит к изменению флористического состава и снижению общей надземной биомассы растений в 2,2 раза, общего проективного покрытия - в 1,7 раза.

2. Установлено, что у изученных видов растений в условиях нефтяного загрязнения почв по сравнению с контролем достоверно меньше длина побега у Р. pratensis на 15,90% через шесть лет и на 8,14% через девять лет после загрязнения, у Т. pratense - на 14,69% и 11,88% соответственно.

3. Нефтяное загрязнение привело к уменьшению длины центральных метамеров изученных видов растений: третьего метамера Р. pratensis на 25,58% через шесть лет и на 15,05% через девять лет после загрязнения, четвертого метамера Р. pratensis - на 23,81% и 28,67% соответственно; третьего метамера Т. pratense -на 18,31% через 6 лет и 15,24% через 20 лет, четвертого метамера Т. pratense - на 17,79% через 6 лет, 24,98% через 9 лет, 23,94% через 20 лет.

4. Установлены достоверные отличия в интегральных значениях асимметрии листочков тройчато сложного листа Т. pratense, произрастающих на площадках после шести лет загрязнения нефтью по сравнению с растениями с контрольных площадок. Показано, что уровень флуктуирующей асимметрии боковых листочков тройчато сложного листа Т. pratense является эффективным показателем оценки влияния нефтяного загрязнения почв на стабильность развития растений.

5. На примере модельного вида Роа pratensis L. показано, что генетическое разнообразие достоверно ниже у растений, произрастающих на площадках после шести (Р95=0,814; Не=0,287; ц=1,786) и после девяти (Pw=0,811; Не=0,290; [i= 1,765) лет загрязнения нефтью по сравнению с растениями, произрастающими на контрольных площадках (Р«=0,918; #е=0,302; ц=1,816).

6. Комплексный анализ показал, что нефтяное загрязнение почв оказывает длительное отрицательное воздействие на морфологические особенности и уровень генетического разнообразия растений, а также на формирование растительного покрова, при котором общее проективное покрытие и общая биомасса растений не восстанавливаются даже через 20 лет после загрязнения почв нефтью.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Светлакова Т.Н., Мандрица С.А., Боронникова C.B., Суслонов A.B. Оценка изменчивости морфологических признаков Trifolium pratense L. в условиях нефтяного загрязнения почв // Вопросы современной науки и практики. Университет им. В.И. Вернадского. 2010. №1-3 (28). С.16-22.

2. Боронникова C.B. Мандрица С.А., Светлакова Т.Н., Назаров A.B., Суслонов A.B. Изучение генетического разнообразия растений, произрастающих в условиях нефтяного загрязнения почв, с использованием ISSR-маркеров и на примере Роа pratensis L. // Экологическая генетика. 2010. Т.8, №1. С. 59-63.

3. Девятова Н.М., Бельтюкова H.H., Назаров A.B., Суслонов A.B.. Светлакова Т.Н. Анализ генетического разнообразия Роа pratensis L. в условиях нефтяного загрязнения почв с использованием IRAP-маркеров // Аграрный вестник Урала. 2010. №2.(68) С.43—45.

Публикации в других изданиях

4. Боронникова C.B., Мандрица С.А., Кокаева З.Г., Суслонов A.B.. Шибанова H.JL, Тихомирова H.H., Дрибноходова О.П. Динамика генетического разнообразия и структуры популяционных систем ресурсных растений Пермского края при антропогенных воздействиях // Региональный конкурс РФФИ-Урал: Результаты научных исследований, полученные в 2007 г. 4.2. Пермь, Екатеринбург, 2008. С.60-63.

5. Боронникова C.B., Бельтюкова H.H., Суслонов A.B.. Светлакова Т.Н., Динамичность генома растений // В мире научных открытий. №2 (08). Ч. 1. 2010. С. 258.

6. Суслонов A.B. Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологическую изменчивость Trifolium pratense L. // Сборник научных работ с материалами трудов 1-ой Международной телеконференции «Фундаментальные медико-биологические науки и практическое здравоохранение». Томск, 2010. С. 38-40.

7. Назаров A.B., Суслонов A.B. Мониторинг формирования растительного покрова на экспериментальных нефтезагрязненных площадках // В мире научных открытий. №3 (09). Ч. 3. Материалы Общероссийской научной конференции «Актуальные вопросы науки и образования». Красноярск, 2010. С. 34-37.

8. Суслонов A.B., Светланова Т.В., Боронникова C.B. Морфологическая изменчивость Роа pratensis L. при нефтяном загрязнении // Материалы Ш Всероссийской научно-практической конференции «Биологические системы: устойчивость, принципы и механизмы функционирования». Нижний Тагил, 2010. С. 229-231.

9. Суслонов A.B.. Назаров A.B., Светланова Т.Н., Боронникова C.B. Разработка новых подходов оценки морфологической и генетической изменчивости растений при нефтяном загрязнении почв // Сборник материалов Второй Международная конференция «Наука и бизнес: пути развития». Тамбов, 2010. С. 8-11.

10.Боронникова C.B., Мандрица С.А., Кокаева З.Г., Суслонов A.B.. Михеева О.В., Тихомирова (Бельтюкова) H.H., Дрйбноходова О.П., Светланова Т.Н., Козьминых Т.В. Динамика генетического разнообразия и структуры популяционных систем ресурсных растений Пермского края при антропогенных воздействиях // Региональный конкурс РФФИ-Урал: Результаты научных исследований, полученные за 2007-2009 гг. Сборник статей 4.2. Пермь, Екатеринбург, 2010. С.63-66.

Подписано в печать 19.11.2010. Тираж 110 экз. Усл. печ. л. 1. Формат 60x90/16. Набор компьютерный. Заказ № 459/2010.

Отпечатано в типографии ИД "Пресстайм" Адрес: 614025, г. Пермь, ул. Героев Хасана, 105

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Суслонов, Александр Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Физико-химические свойства нефти.

1.2. Уровни загрязнения почв нефтью.

1.3. Влияние нефтяного загрязнения на растения.

1.4. Анализ морфологических особенностей растений в экологических исследованиях.

1.5. Анализ генетического разнообразия растений в экологических исследованиях.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Характеристика района исследований.

2.3. Методы исследований.

2.3.1. Постановка полевых экспериментов.

2.3.2. Определение содержания битумоидов в почве.

2.3.3. Определение растворимого натрия.

2.3.4. Геоботанические полевые исследования растительности нефтезагрязнениых почв.

2.3.5. Методы изучения морфологических особенностей Роа pratensis L. и Trifolium pratense L.

2.3.6. Методы изучения молекулярно-генетического полиморфизма ДНК Роа pratensis L.

2.3.7. Статистический анализ результатов.

Глава 3. ФОРМИРОВАНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО ПОКРОВА НА

НЕФТЕЗАГРЯЗНЕНИЫХ ПЛОЩАДКАХ.

Глава 4. АНАЛИЗ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ РАСТЕНИЙ

ПРИ НЕФТЯНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ ПОЧВ.

4.1. Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические особенности

Роа pratensis L.

4.2. Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические особенности Trifolium pratense L.

4.3. Оценка флуктуирующей асимметрии боковых листочков тройчато сложного листа Т. pratense.

Глава 5. ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНОБРАЗИЕ РАСТЕНИЙ НА НЕФТЕЗАГРЯЗНЕННЫХ ПЛОЩАДКАХ НА ПРИМЕРЕ Р. PRATENSIS.

Глава 6. КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ НЕФТЯНОГО

ЗАГРЯЗНЕНИЯ НА РАСТЕНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические и генетические характеристики растений и на формирование растительного покрова"

Актуальность проблемы

Среди современных проблем человечества в последние десятилетия особое внимание уделяется состоянию окружающей среды. Значительную роль в загрязнении биосферы играют нефть и нефтепродукты, поэтому изучению различных аспектов проблемы нефтяного загрязнения уделяется большое внимание (Киреева и др., 2004). Загрязнение почв нефтью вызывает нарушения динамического равновесия в экосистеме вследствие изменения структуры почвенного покрова, геохимических свойств почв, а также токсического действия на живые организмы (Пиковский и др., 2003). Опасность нефтяного загрязнения связана с высокой чувствительностью к нему высших растений, притом, что они занимают ключевое положение практически во всех наземных экосистемах, определяя существование и состав остальных биологических компонентов биогеоценозов. Попадая в почву, нефть из-за медленной скорости деструкции тяжелых нефтяных фракций оказывает на растения длительное воздействие, достигающее в случае сильного загрязнения 10-20 лет и более (Шилова, 1977, Демиденко, Демурджан, 1988; Габбасова и др., 2002). Однако основное количество работ посвящено изучению влияния на растения нефтяных загрязнений с небольшим, не превышающим 3-5 лет сроком. Данные о растениях, произрастающих на почвах с более длительными сроками загрязнения нефтью, очень немногочисленны. Кроме того, остаются не изученными в условиях длительного нефтяного загрязнения морфологические особенности растений и уровень их генетического разнообразия, который является основой устойчивости воспроизводства природных экосистем.

Цель исследования - экспериментальная оценка влияния длительного нефтяного загрязнения почв на растительный покров, морфологические особенности и уровень генетического разнообразия доминирующих травянистых видов растений в условиях подзоны южной тайги Пермского Предуралья.

Для достижения цели были поставлены следующие основные задачи:

1. Провести мониторинг формирования растительного покрова нефтезагрязненных площадок с разным сроком внесения нефти в почву.

2. Исследовать влияние нефтяного загрязнения почв на морфологические особенности луговых растений Роа pratensis L. через шесть и девять лет и Trifolium pratense L. через шесть, девять и двадцать лет после загрязнения.

3. Выявить эффективные морфологические показатели для оценки влияния нефтяного загрязнения почв на растения на примере Р. pratensis и Т. pratense.

4. Изучить генетическое разнообразие Р. pratensis на нефтезагрязненных площадках через шесть и девять лет после начала эксперимента.

5. Дать комплексную оценку формирования растительного покрова, морфологических и генетических характеристик Р. pratensis и Т. pratense в условиях разных сроков загрязнения почв нефтью.

Положения, выносимые на защиту

1. Нефтяное загрязнение почв приводит к снижению общего проективного покрытия и общей наземной биомассы растений, которые не восстанавливаются полностью в течение 20-ти лет, замедляет восстановление растительного покрова на нефтезагрязненных площадках в условиях подзоны южной тайги Пермского Предуралья.

2. В условиях загрязнения в разные сроки почв нефтью у доминирующих в луговых сообществах видов растений Р. pratensis и Т. pratense снижены значения морфологических показателей, такие как длина центральных метамеров и длина побега.

3. Уровень флуктуирующей асимметрии длины боковых листочков тройчато сложного листа Т. pratense является эффективным при изучении стабильности развития растений на изученной почве при нефтяном загрязнении шестилетней давности.

4. Длительное нефтяное загрязнение почв приводит к снижению генетического разнообразия доминирующего в растительных сообществах вида Р. pratensis.

Научная новизна полученных результатов

Впервые в условиях нефтяного загрязнения почв изучен механизм восстановления растительного покрова на площадках разной длительности загрязнения (от 1-го до 20-ти лет). Впервые для выявления влияния загрязнения почв нефтью на растения использован анализ флуктуирующей асимметрии тройчато сложного листа модельного вида Т. pratense L. из семейства Fabaceae. На площадках разной длительности загрязнения определены основные морфологические параметры, доминирующих в луговых сообществах видов растений. Впервые на примере модельного вида растений, доминирующего в травянистом ярусе Р. pratensis из семейства; Роасеае, показано, что длительное нефтяное загрязнение приводит к снижению генетического разнообразия. Впервые анализ формирования растительного покрова нефтезагрязненных площадок проведен в комплексе с определением морфологических особенностей'и генетического разнообразия доминирующих в луговых сообществах видов растений.

Практическая значимость и реализация результатов исследовании

Результаты исследования вносят существенный вклад в изучение влияния нефтяных загрязнений на растительные сообщества. Научные выводы работы и рекомендации могут быть использованы для мониторинга нефтезагрязненных экосистем; : Анализ* флуктуирующей асимметрии рекомендуется для оценки- стабильности; развития растений . с билатеральными признаками при антропогенных воздействиях. Молекулярно-генетический анализ может быть использован для выявления генетической компоненты биоразнообразия; механизмов функционирования-№ поддержания устойчивости экосистем. Разработанная и апробированная методика комплексной; оценки, формирования растительного покрова^ морфологических особенностей и генетического разнообразия растений; на нефтезагрязненных площадках рекомендуется в дальнейшем для выявления влияния на растения нефтяных загрязнений разной длительности и в разных регионах страны. Результаты исследований используются при преподавании учебных дисциплин и специальных курсов студентам на кафедре почвоведения ГОУ ВПО «Владимирский государственный университет» и на кафедре экологии ГОУ ВПО «Челябинский государственный университет», что подтверждено актами внедрения результатов исследований в учебный процесс (приложение).

Связь работы с научными программами

Диссертационная работа выполнялась в ходе подготовки и реализации ПГУ приоритетного инновационного национального проекта «Образование». Исследования проводились в связи с тематикой гранта РФФИрурала № 0704-96016 «Влияние нефтяных загрязнений почв на популяции микроорганизмов и растений Пермского края» (2007-2009 гг.), а также гранта РФФИрурала № 07-04-96032 «Динамика генетического разнообразия и структуры популяционных систем ресурсных растений Пермского края при антропогенных воздействиях» (2007-2009 гг.).

Личный вклад автора состоит в выборе объектов, разработке программы, проведении полевых и лабораторных исследований, а также в обработке, анализе и обобщении результатов, подготовке публикаций. Автор лично провел геоботанические описания, определение морфометрических показателей растений, их молекулярно-генетический анализ, дал комплексную оценку формирования растительного покрова, морфологических и генетических особенностей растений на нефтезагрязненных и контрольных площадках, а также написал и оформил текст диссертации и автореферата.

Апробация работы

Материалы исследований представлены на Всероссийском молодежном научном симпозиуме «Безопасность биосферы - 2005» (Екатеринбург, 2005), на Первой Всероссийской научно-технической

Интернет-конференции «Современные проблемы экологии и безопасности» (Тула, 2005), на Шестой международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых (Пермь, 2007), на Первой Международной телеконференции «Фундаментальные медико-биологические науки и практическое здравоохранение» (Томск, 2010), на Общероссийской научной конференции «Актуальные проблемы науки и образования» (Красноярск, 2010), на III Всероссийской научно-практической конференции «Биологические системы: устойчивость, принципы и механизмы функционирования» (Нижний Тагил, 2010).

Публикации

Диссертантом по теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в их числе три статьи в ведущих рецензируемых журналах из перечня ВАК, четыре статьи в материалах сборников и три научных работы в материалах конференций.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, шести глав - обзор проблемы, материалы и методы исследований, четырех глав результатов и их обсуждения, выводов. Список литературы включает 147 источников, в том числе 104 публикации отечественных авторов и 43 публикации иностранных авторов. Диссертационная работа изложена на 1 18 машинописных страницах, из которых 98 страниц основного текста и 20 страниц приложений, содержит 25 таблиц, 20 рисунков, приложения.

Заключение Диссертация по теме "Экология (по отраслям)", Суслонов, Александр Владимирович

выводы

1. Установлено, что нефтяное загрязнение почв 20-ти летней давности приводит к изменению флористического состава и снижению общей надземной биомассы растений в 2,2 раза, общего проективного покрытия - в 1,7 раза.

2. Установлено, что у изученных видов растений в условиях нефтяного загрязнения почв по сравнению с контролем достоверно меньше длина побега у Р. pratensis на 15,90% через шесть лет и на 8,14% через девять лет после загрязнения, у Т. pratense — на 14,69% и 11,88% соответственно.

3. Нефтяное загрязнение привело к уменьшению длины центральных метамеров изученных видов растений: третьего метамера Р. pratensis на 25,58% через шесть лет и на 15,05% через девять лет после загрязнения, четвертого метамера Р. pratensis — на 23,81% и 28,67% соответственно; третьего метамера Т. pratense - на 18,31% через 6 лет и 15,24% через 20 лет, четвертого метамера Т. pratense — на 17,79% через 6 лет, 24,98% через 9 лет, 23,94% через 20 лет.

4. Установлены достоверные отличия в интегральных значениях асимметрии листочков тройчато сложного листа Т. pratense, произрастающих на площадках после шести лет загрязнения нефтью по сравнению с растениями с контрольных площадок. Показано, что уровень флуктуирующей асимметрии боковых листочков тройчато сложного листа Т. pratense является эффективным показателем оценки влияния нефтяного загрязнения почв на стабильность развития растений.

5. На примере модельного вида Роа pratensis L. показано, что генетическое разнообразие достоверно ниже у растений, произрастающих на площадках после шести (Рр5=0,814; #¿=0,287; fj,=l,786) и после девяти (/>95=0,811; Не=0,290; (1=1,765) лет загрязнения нефтью по сравнению с растениями, произрастающими на контрольных площадках (Рр5=0,918; Не=0,302; {1=1,816).

6. Комплексный анализ показал, что нефтяное загрязнение почв оказывает длительное отрицательное воздействие на морфологические особенности и уровень генетического разнообразия растений, а также на формирование растительного покрова, при котором общее проективное покрытие и общая биомасса растений не восстанавливаются даже через 20 лет после загрязнения почв нефтью.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Суслонов, Александр Владимирович, Пермь

1. Абдуев М.Р., Аскеров А.О. Рекультвация нефтезагрязненных земель в Азербайджане // Вестник сельскохозяйственной науки. 1979. №1. С. 57—61.

2. Агроклиматический справочник по Пермской области // Свердловская метеорологическая обсерватория. Л.: Гидрометеорологическое изд.-во, 1959. 132 с.

3. Алиев С.А., Гвозденко Д.Б., Бабаев М.П. и др. Рекомендации по рекультивации нефтезагрязненных земель. Баку. 1981. 26 с.

4. Аниськина М.В. Мутагенный и токсический эффекты у растений Tradescantia (clon 02) и Arabidopsis thaliana (L.) Heynh., индуцированные нефтью и нефтепродуктами: автореф. дисс. . канд. биол. наук. Сыктывкар, 2006. 20 с.

5. Баширова P.M.; Григориади А.С.; Киреева Н.А. и др. Влияние загрязнения почвы нефтью на дягиль лекарственный Archangelica officinalis // Аграрная Россия. 2009. №2. С. 42-44.

6. Буадзе О.А. Ультраструктурные и цитологические основы действия ксенобиотиков на растительные клетки // Биотрансформация ксенобиотиков в растениях. Тбилиси: Менциерба, 1988. С. 248-284.

7. Бузмаков С.А., Костарев С.М. Техногенные изменения компонентов природной среды в нефтедобывающих районах Пермской области. Пермь: Изд-во Перм. ун-та, 2003. 171 с.

8. Боронникова С.В. Молекулярно-генетическая идентификация и паспортизация редких и находящихся под угрозой исчезновения видов растений. Пермь, 2008. 120 с.

9. Ю.Боронникова С.В., Бельтюкова Н.Н., Суслонов А.В. и др. Динамичность генома растений // Мир открытий. №2 (08). Ч. 1. 2010. С. 258. П.Быков Б.А. Геоботаника. Алма-Ата: Изд-во АН КазССР, 1957. 382 с.

10. Веселовский В.А., Вшивцев B.C. Биотестирование загрязнения среды нефтью по реакции фотосинтетического аппарата растений // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988, С. 99-112.

11. Викторов C.B. Ботанические признаки битуминозности пород и почв на Южном Устьюрте и в северо-восточной Турмении // Бюл. МОИП. Отд. геол. 1957. Вып. 3. С.181-182.

12. Водопьянов В.В., Григориади A.C., Киреева H.A. и др. Влияние нефтяного загрязнения почвы на ризосферную микробиоту и моделирование процессов биодеградации углеводородов // Вестник Оренбургского государственного университета №6 (100), 2009. С. 545-547.

13. Востокова Е.А., Вышивкин Д.Д., Касанова М.С. Геоботанические показатели битуминозности // Труды Всесоюзн. аэрогеолог, треста. 1955. Вып. 1. С. 99-117.

14. Временные методические рекомендации по контролю загрязнения почв. 4.2 под ред. С. Г. Малахова.: Московское отделение гидрометеоиздата, 1984. 56 с.

15. Габбасова И.М., Хабиров И.К. Распространение, типология и оценка состояния деградированных почв республики Башкортостан // Вестник Башкирского университета. 2010. №2. С. 5-13.

16. Габбасова И.М., Сулейманов P.P., Хазиев Ф.Х. Оценка степени восстановлепности нефтезагрязненных почв с давними сроками загрязнения после биологической рекультивации // Почвоведение. 2002. №10. С. 1259.

17. Гайнутдинов М.З., Гайсин И.А., Храмов И.Т. и др. О токсичности нефти // Проблема разработки автоматизированных систем наблюдения, контроля и оценки состояния окружающей среды: Материалы Всесоюз. науч.-техн. конф. Казань, 1979. С. 128-129.

18. Гайнутдинов М.З., Храмов И.Т., Гилязов М.Ю. К вопросу рекультивации земель, нарушенных нефтяной промышленностью // Рекультивация земель в СССР: Тез. Всесоюз. науч.-техн. конф. М., 1982. Т. 2. С. 144-146.

19. Гашева М.Н., Гашев Н.С., Соромотин A.B., Состояние растительности как критерий нарушенности лесных биоценозов при нефтяном загрязнении //Экология. 1990. № 2. С. 77-78.

20. Гвоздев В.А. Подвижная ДНК эукариот. Роль в регуляции активности генов и эволюции генома // Соросовский образовательный журн. 1998. №8. С. 15-21.

21. Гилязов М.Ю. Изменение некоторых биохимических свойств выщелоченного чернозема при загрязнении его нефтью // Агрохимия. 1980. № 12. С. 72-75.

22. Глазко В.И., Глазко Г.И. Введение в генетику. Биоинформатика. ДНК-технология. Генная терапия. ДНК-экология. Протеомика. Метаболика Киев: КВЩ, 2003. 640 с.

23. Глазко В.И., Глазко Т.Т. ДНК-технологии в генетике и селекции: Курс лекций Краснодар: ВНИИ риса, 2006. 399 с.

24. Гостимский, С. А., Кокаева З.Г., Коновалов Ф. А. Изучение организации и изменчивости генома растений с помощью молекулярных маркеров // Генетика. 2005. Т. 41. № 4. С. 480-490.

25. Грищенко О.М. Ботанические аномалии как поисково-разведочный критерий нефтегазоносности // Экология. № 1. 1982. С. 18-22.

26. Гусейнов Д.М., Гвозденко Д.В. Опыты по рекультивации нефтезагрязненных земель, расположенных на окраинах г. Баку // Тез. докл. X научной сессии. Баку, 1973. С. 84-86.

27. Девятова Н.М., Бельтюкова H.H., Назаров A.B. и др. Анализ генетического разнообразия Роа pratensis L. в условиях нефтяного загрязнения почв с использованием IRAP-маркеров // Аграрный вестник Урала. 2010. №2(68). С.43-45.

28. ЗЬДемиденко А .Я., Демурджан В.М., Шеянова А.Д. Изучение питательного режима почв, загрязненных нефтью // Агрохимия. 1983. № 9. С. 100-103.

29. Демиденко А.Я., Демурджан В.М. Пути восстановления нефтезагрязненных почв черноземной зоны Украины. // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. С. 197-206.

30. Динамика популяционных генофондов при антропогенных воздействиях / под ред. Ю.П. Алтухова. М.: Наука, 2004. 619 с.

31. Етеревская JI.B., Шеянова П.Д. Изменения свойств почвы в связи с загрязнением их при разведке и добыче нефти и газа // Агрохимия и почвоведение. Вып. 29. Киев, 1975. С. 3-7.

32. Етеревская Л.В., Яранцева Л.Д., О влиянии на растения загрязнений почвы при бурении и разведке на нефть и газ // Растения и промышленная среда. Киев, 1976. С.73-75.

33. Животовский Л.А. Показатель внутрипопуляционного разнообразия // Журн. общ. биолог. 1980. Т. 41, № 6. С. 828-836.

34. Животовский Л.А. Показатели популяционной изменчивости по полиморфным признакам // Фенетика популяций. М., 1982. С. 38-44.

35. Животовский Л.А. Статистические методы анализа частот генов в природных популяциях // Итоги науки и техники. Общая генетика. М.: ВИНИТИ АН СССР. 1983. Т. 8. С. 76-104.

36. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. М.: Наука, 1991. 271с. 40.Захаров В. М. Асимметрия животных. М.: Наука, 1987. 216 с.

37. Иларионов С.А. Трансформация углеводородов нефти в почвах гумидной зоны: автореф. дисс. доктора биол. наук. Сыктывкар, 2006. 29 с.

38. Иларионов С.А., Назаров A.B., Калачникова И.Г. Роль микромицетов в фитотоксичности нефтезагрязненных почв // Экология. №5. 2003. С. 341— 346.

39. Иллюстрированный определитель растений Пермского Края / С.А. Овеснов, Е.Г. Ефимик, Т.В. Козьминых и др. Пермь: Книжный мир, 2007. 743 с.

40. Исаченко Т.Н. Лавренко Е.М. Ботанико-географическое районирование // Растительность европейской части СССР. Л., 1980. С. 10-20.

41. Кавеленова Л.М., Малыхина Е.В., Розно С.А. и др. К методологии экофизиологических исследований листьев древесных растений // Поволжский экологический журн. 2008. №3. С. 200.

42. Киреева H.A., Галимзянова A.M., Мифтахова A.M. Микромицеты почв, загрязненных нефтью, и их фитотоксичность // Микология и фитопатология. 2000. Т. 34. Вып.1. С. 36-41.

43. Киреева H.A., Мифтахова A.M., Кузяхметов Г.Г. Рост и развитие сорных растений в условиях техногенного загрязнения почвы. // Вест. Башкирского ун-та. 2001а. №1. С. 32-34.

44. Киреева H.A., Мифтахова A.M., Кузяхметов Г.Г. Влияние загрязнения нефтью на фитотоксичность серой лесной почвы // Агрохимия. 2001b. № 5. С. 64-69.

45. Киреева H.A., Тарасенко Е.М., Онегова Т.С. и др. Комплексная биоремедиация нефтезагрязненных почв для снижения токсичности // Биотехнология. 2004. № 6. С. 63-70.

46. Киреева H.A., Маркарова М.Ю., Рафикова Г. Ф. и др. Ферментативная и микробиологическая активность загрязненных нефтью глееподзолистых почв на разных стадиях их восстановления // Вестник Башкирского университета. 2006. №4. С. 56-60.

47. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Григориади A.C. Влияние загрязнения почв нефтью на физиологические показатели растений и ризосферную микробиоту // Агрохимия. 2009. № 7. С. 71-80.

48. Киреева Н. А., Григориади А. С., Хайбуллина Е. Ф. Ассоциации углеводородокисляющих микроорганизмов для биоремедиации нефтезагрязненных почв // Вестник Башкирского университета: 2009; Т. 14. №2. С.391-394.

49. Кулаева О.Н. Белки теплового шока и устойчивость растений к стрессу// Соросовский образоват. журн. 1997. № 2. С. 5-13.

50. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб. пособие для биол. спец.вузов.4-е изд., перераб. и доп. М. : Высш. шк., 1990. 352 с.

51. Левин G.B., Халимов Э.М., Гузев B.C. Эколого-микробиологическос нормирование содержания нефти в почве // Токсикол. вести; 1995. № Г. С. 11-15.

52. Леднев A.B. Изменение свойств дерново-подзолистых суглинистых почв под действием загрязнения, продуктами нефтедобычи и приемы их рекультивации // автореф. дисс;.доктора сельхоз. наук. Ижевск. 2008. 43 с.

53. Леонтьев A.A., Ким В.И. Новые методы закрепления и облесения песков // Защитное лесоразведение на песчанных территориях Средней Азии. Вып. XV. Ташкент: СредазНИИЛ, 1973. С. 43-48.

54. Майр Э. Популяция, виды и эволюция. М.: Мир, 1974. 460 с.

55. Методическое руководство по люминесцентно-битумологическим и спектральным методам исследования органического вещества пород и нефтей. М.: Недра, 1979. 204 с.

56. Молекулярная генетика: учеб.-метод, пособие / под ред. C.B. Боронниковой; Перм. ун-т. Пермь, 2007. 150 с.

57. Морозов Н.В., Петров Г.Н. Опыты по самоочищению воды от нефти в присутствии водной растительности // Теория и практика биологического самоочищения загрязненных вод. М.: Наука, 1972. С. 53-59.

58. Московченко Д.В. Нефтегазодобыча и окружающая среда // Эколого -геохимический анализ Тюменской области. Новосибирск: Наука, 1998. 112 с.

59. Назаров A.B., Иларионов С.А., Азизова Э.А. Формирование растительности на экспериментальных загрязненных площадках // Вестник Пермского государственного университета. Вып. 2: Биология. 2000. С. 121125.

60. Назаров A.B., Иларионов С.А. Потенциал использования мокробно-растительного взаимодействия для биоремедиации // Биотехнология. 2005. №5. С. 54-62.

61. Назаров A.B., Иларионов С.А Изучение причин фитотоксичности нефтезагрязненных почв // Альтернативная генетика и экология. 2006. №1. С. 60-65.

62. Назаров A.B. Влияние нефтяного загрязнения почв на растения // Вестн. Перм. Ун-та. 2007. Вып. 5(10). С. 134-139.

63. Назаров A.B., Суслонов A.B. Мониторинг формирования растительного покрова на экспериментальных нефтезагрязненных площадках // Материалы Общероссийской научной конференции «Актуальные вопросы науки и образования». Красноярск, 2010. С. 34—37.

64. Невзоров В.М. О вредном воздействии нефти на почву // Изв. вузов. Лесн. журн. 1976. № 2. С. 164-165.

65. Несветайлова Н.Г. О растительности битуминозных грунтов // Бюл. МОИП. Отд. биол. 1953. Вып. 6. С. 55-62.

66. Оборин A.A., Хмурчик В.Т., Иларионов С.А. и др. Нефтезагрязненые биогеоценозы (Процессы образования, научные основы восстановления,медико-биологические проблемы). Пермь, изд-во Пермского гос. университета, 2008. 506 с.

67. Официальный вестник Госкомэкологии России. 1999. № 1-2. 116 с.

68. Пермская область: отрасли, регионы, города. Пермь, 1997. 262 с.

69. Плохинский H.A. Биометрия. М.: Изд-во МГУ. 1969. 368 с.

70. Пиковский Ю.И., Геннадиев А.Н.; Чернянский С.С. и др. Проблема диагностики и нормирования загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами. Почвоведение. 2003. № 9. С. 1132-1140.

71. Практикум по агрохимии / Под ред. В. Г. Минеева. М: Изд-во МГУ, 2001. 689 с.

72. Раменский Л.Г., Цаценкин И.А., Чижиков О.Н. и др. Экологическая оценка кормовых угодий по растительному покрову. М.: Сельхозиз, 1956. 472 с.

73. Савинов A.B. Фенотипическая индикации ценопопуляций растений в условиях техногенеза // Экологический мониторинг. Ч. 5. Н.Новгород: Изд-во ННГУ, 2003. С.300-323.

74. Савкина Т., Боярский 3., Стжыщ 3. Повреждения почвы, вызванные повреждениями нефти // Материалы симп. по вопросам рекультивации нарушенных промышленностью территорий. Лейпциг, 1970. Ч. 1. С. 199— 205.

75. Семериков Л.Ф., Завьялова Н.С. Влияние нефтяных загрязнений на изменчивость популяций канареичника тростниковидного (Phalaroides arundinaceaé) // Экология. 1990. №2. С. 31-34.

76. Цветков H.A., Иванов А.Н., Глазко В.И. Генетическая дифференциация сортов риса по IRAP-маркерам // Изв. ТСХА. 2006. №4. С. 155-159.

77. Тахтаджан A.J1. Система магнолиофитов. Л.: Наука: ЛО, 1987. 438 с.

78. Урбах В.Ю. Биометрические методы. М.: Наука. 1964. 416с.

79. Хазиев Ф.Х., Тишкина Е.И., Киреева H.A., Кузяхметов Г.Г Влияние нефтяного загрязнения на некоторые компоненты агроэкосистемы // Агрохимия. 1988. №2. С. 56-61.

80. Халимов Э.М., Левин C.B., Гузев B.C. Экологические и микробиологические аспекты повреждающего действия нефти на свойства почвы // Вести. МГУ. Сер. 17. 1996. №2. С. 59-64.

81. Хедрик Ф. Мир биологии: генетика популяций. М.: Техносфера, 2003. 592 с.

82. Чесноков Ю.В. ДНК-фингерпринтинг и анализ генетического разнообразия у растений // Сельхоз. биол. 2005. № 1. С. 20^-0. 98.Чупахина Г.Н., Масленников П.В. Адаптация растений к нефтяному стрессу // Экология. 2004. № 5. С. 330-335.

83. Шенников А.П. Введение в геоботанику. Л.: Изд-во ЛГУ, 1961. 432 с.

84. Шилова И.И. Первичные сукцессии растительности на техногенных песчаных обнажениях в нефтегазодобывающих районах Среднего Приобья // Экология. 1977. №6. С. 5-15.

85. Шилова И.И. Влияние загрязнения нефтью на формирование растительности в условиях техногенных песков нефтегазодобывающих районах Среднего Приобья // Растения и промышленная среда. Свердловск, 1978. Вып. 5. С. 44-52.

86. Шилова И.И. Биологическая рекультивация нефтезагрязненных земель в условиях таежной зоны // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. М.: Наука, 1988. С. 159-168.

87. Шкляев A.C., Балков В.А. Климат Пермской области. Пермь: Кн. изд-во, 1963. 191 с.

88. Шуйцев Ю.К. Деградация и восстановление растительных сообществ тайги в сфере влияния нефтедобычи // Добыча полезных ископаемых и геохомия природных экосистем. М.: Наука, 1982. С. 70-81.

89. Archipova I.R., Pyatkov К.1., Meselson М. et al. Retroelements containing introns in diverse invertebrate taxa // Nature Genet. 2003. V. 33. P. 123-124.

90. Atlas R.M., Schofield E.A., Morelli et al. Effects of petroleum pollutants on Arctic microbial populations // Environ. Pollut. 1976. V. 10. № 1. P. 35—43.

91. Baker J.M. Seasonal effects of oil pollution on salt marsh vegetation // Oikos. 1971. V. 22. № 1. P. 106-110.

92. Baker J.M. The investigation of oil industriy influences on tropical marine ecosystems // Mar. Pollut. Bull. 1981. V. 12. № 1. P. 6-10.

93. Blankenship D.W., Larson R.A. Plant growth inhibition by the water extract of a crude oil // Water, Air and Soil Pollut. 1978. V. 10. № 4. P. 471-472.

94. Cavalli-Sforza L.L., Bodmer W.F. The genetic of humans populations // San-francisco: Freeman, 1971. 962 p.

95. Ford E. Polymorphism and taxonomy // The new systematic. Oxford: Clarendos press, 1940. P. 493-513.

96. Freedman W., Hutchinson T.C. Physical and biological effects of experimental crude oil spills on Low Arctic tundra in the vicinity of Tuktoyaktuk, N.W.T. Canada // Canad. J. Bot. 1976. V. 54, № 19. P. 2219-2230.

97. Gilfillan E.S., Page D.S., Bass A.E. et al. Use of Na/K ratios in leaf tissues to determine effects of petroleum on salt exclusion in marine halophytes // Marine Pollut. Bull. 1989. V. 20, № 6. P. 272-276.

98. Grosswell I.W. The fate of petroleum in a soil environment // Oil Spill Conf. New Orleans, 1977. P. 449^182.

99. Hunt P.G., Ricard W.E., Denece F.J. Terrestrial oil spills in Alaska: Environmental effects and. recovery // Proc. of joint conf. on precention and control of oil spills. Washington, 1973. P. 733-740.

100. Kalendar R., Grob Т., Regina M. et al. IRAP and REMAP: Two new retrotransposon-based DNA fingerprinting techniques // Theor. and Applied Genetics. 1999. V. 98. P. 704-711.

101. Kalendar R., Tanslcanen J., Immonen S. et al. Genome evolution of wild barley (Hordeum spontaneum) by BARE-1 retrotransposon dynamics in response to sharp microclimatic divergence // Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 2000. V. 97, №12. P. 6603-6607.

102. Kalendar R.N., Glazko V.I. Types of molecular-genetic markers and their application // Physiology and biochemestry of cultural plants. 2002. V. 34, № 4. P. 279-296.

103. Kalendar R., Vicient C.M., Peleg O. et al. Large retrotransposon derivatives: abundant, conserved but nonautonomous retroelements of barley and related genomes // Genetics. 2004. V. 166, №3. P. 1437-1450.

104. Kalendar R., Schulman A.X. IRAP and REMAP for retrotransposon-based genotyping and fingerprinting // Nature Protocols. 2006. V. 1, №5. P. 24782484.

105. Kidwell M.G., Lisch D.R. Transposable elements as sources of genomic variation // Mobile DNA. 2002. V. 2. P. 59-93.

106. Kimura M., Crow J.F. The number of alleles that can be maintained in a finite population / Kimura M., Crow J.F // Genetics. 1964. V. 49. P. 725-738.

107. Kumar A., Bennetzen J. Plant retrotransposons // Annu. Rev. Genet. 1999. V. 33. P. 479-532.

108. Leigh F., Kalendar R., Lea V. et al. Comparison of the utility of barley retrotransposon families for genetic analysis by molecular marker techniques // Mol. Genet, and Genom. 2003. V. 269, №3. P. 464-474.

109. Lin Q., Mendelssohn I.A. A comparative investigation of the effects of South Louisiana Crude oil on the vegetation of fresh, brackish, and salt marshes // Marine Pollut. Bull. 1996. № 2. V. 32. P. 202-209.

110. Manninen O., Kalendar R., Robinson J., Schulman A.X. Application of BARE-1 retrotransposon markers to the mapping of a major resistance gene for net blotch in barley // Mol. Genet, and Genom. 2000. V. 26. P. 325-334.

111. Mitchell W.W., Lounachan T.Z., Mikendrick J.D. Effects of tillage and fertilization on persistence of crude oil contamination in an. Alaskan soil // J. Environ. Quality. 1979. Vol. 8. P. 525-532.

112. Nei M. Molecular evolutionary genetics. N.Y.: Columbia Univ. press, 1987. P.176-187.

113. Nyman J.A. Effect of Crude Oil and Chemical Additives on Metabolic Activity of Mixed Microbial Populations in Fresh Marsh Soils // Microb. Ecol. 1999. V. 37. P. 152-162.

114. Odu C.T.I. Biological aspects of land rehabilitation following hydrocarbons contamination // J. Inst. Petrol. 1972. V. 58. P. 201-206.

115. Palmer A. R., Strobeck C. Fluctuating asymmetry: measurement, analysis, patterns // Ann. Rev. Ecol. Syst. 1986. V. 17. P. 391-421.

116. Palmer A. R., Strobeck C. Fluctuating asymmetry analysis revisited // Developmental instability (DI): causes and consequences. M. Polak, ed. Oxford New York, University Press, 2003. P 231.

117. Peakall R., Smouse P.E. GenAlEx6: Genetic analysis in Excel. Population genetic software for teaching and research // Mol. Ecol. Not. 2006. V. 6. P.288-295.

118. Radwan S., Sorkhoh N., El-Nemr I. Oil biodégradation around roots // Nature. 1995. V. 376. № 27. P. 302.

119. Teo C.H., Tan S.H., Ho C.L. et al. Genome constitution and classification using retrotransposon-based markers in the orphan crop banana // J. Plant Biol. 2005. V. 48, №1. P. 96-105.

120. Torres A.M., Weeden N.F, Martin A. Linkage among isozyme, RFLP and RAPD markers in Vicia faba // Theor. Appl. Genet. 1993.V.5. P.937-945.

121. Udo E.J., Fayeni A.A. The effect of oil pollution of soil on germination, growth and nutrient uptake of corn // J. Environ. Quality. 1975. V. 4, № 4. P. 537-540.

122. Valiola I., Vince S., Teal J.M. Assimilation of sewage by wetlands // Estuar. Proceed. 1976. №. 1. P. 234-253.

123. Vicient C.M., Kalendar R., Schulman A.X. Envelope-class retroviruslike elements are widespread, transcribed and spliced, and insertionally polymorphic in plants // Genom. Res. 2001. V. 11. P. 2041-2049.

124. Vicient C.M., Kalendar R., Anamthawat-Jonsson K. et al. Structure, functionality, and evolution of the BARE-1 retrotransposon of barley // Genetica. 2005. V. 107, № 1-3. P. 53-63.

125. Vitte C., Panaud O. LTR-retrotransposons and flowering plant genome size: emergence of the in crease/decrease model // Cytogenet. Genome Res. 2005. V. 110. P. 91-107.

126. Weeden N.F., Timmerman G.M., Hemmat M. et al. Inheritance and reliability of RAPD markers // Proc Symp Appl. RAPD Tech. Plant Breed. 1992. P. 12-17.

127. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers//Nucl. Acids Res. 1991. V. 18. P. 7213-7218.

128. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J. at al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucl. Acids Res. 1990. V. 18. P. 6531-6535.

129. Zietkiewicz E., Rafalski A., Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification // Genomics. 1994. V. 20. P. 176-183.