Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние куприхола на организм животных и максимально допустимый уровень его в продуктах питания

ВАК РФ 03.00.20, Гельминтология

Автореферат диссертации по теме "Влияние куприхола на организм животных и максимально допустимый уровень его в продуктах питания"

Г Б ОД

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХСВЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОСИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ шени К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

ГОЛОВКИНА Ирина Петровна

ВЛИЯНИЕ КУПРИХОДА. НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ И МАКСИМАЛЬНО ДОПУСТИМЫЙ УРОВЕНЬ ЕГО В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ

Специальность 03.00.20 - Гельминтология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидат биологических наук

Москва 1995

- г -

Работа выполнена во Всеросийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени академика К.И.Скрябина (БИГИС).

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук,

профессор Т.П.Веселова.

Официальные оппоненты:

И.И.Венедиктов Т.З.Рысина

доктор биологических наук, профессор

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник

Ведущая организация - Всеросийский государственный научно-исследовательский институт контроля,сертификации и стандартиаа-ции ветеринарных препаратов.

,у Защита диссертации состоится " " ^¿¿/¡¿¡С/а-С- 1995г. в у7 часов на заседании специализированного совета Д-020.04.01. при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени академика К.И.Скрябина.

/

Адрес: 117218,Москва,В.Черемушкинская,28.

С диссертацией можно ознакомиться в бмблиотеке ВИГИС.

Автореферат разослан " " 1994г.'

Ученый секретарь

- 3 -

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность работы. Трематодозы жвачных - фасциолез, дик-роцедиоз, парамфистоматоз имеют наибольшее распространение в животноводческих хозяйствах страны и наносят существенный экономический ущерб сельскому производству. В условиях рыночной экономики стабильное развитие животноводства предполагает высокий уровень организации лечебно-профилактических мероприятий, производство качественных и экологически безвредных продуктов и сырья.

Основной мерой борьбы с трематодогами является дегельминтизация животных, которая одновременно лечебное и профилактическое средство, так как освобождение животных от паразитов препятствует распространению инвазии. Поэтому изыскание достаточно эффективных и нетоксичных и безвредных для животных и их продукции антгельминтикоь. при гельминтозах сельскохозяйственных животных остается до сих пор одной из первоочередных задач ветеринарной медицины.

В качестве аятгельминтика в накей стране в 1960-х годах применялся гексахлорпараксилол (Т.П.Веселова, М.А.Воробьев, М.В.Дорошина, 1964), в последующие годы его лекарственные формы

- гексихол (Т.П.Веселова, М.В.Дорошина, М.В.Требухин, 1973) и политрем. Последний показал высокую антгельминтную активность, главным образом при фасциолеэе (Т.П.Веселова, М.В.Дорошина, И.А.Архипов, 1987, 1987а) и меньшую при дикроцедиозе (М.В.Муса-ев, 1989, 1990) и ларамфистоматозе (М.В.Мусаев, 1989). Следует отметить, что -большим преимуществом политрема перед предыдущими

- гексахлорпараксилолом и гексихолом - было снятие ограничений при его применении по несовместимости их с перекисленными кормами.

В поиске усиления дикроцелициднго действия, . на основе, политрема, была создана новая лекарственная форма гексахлорпарак-силола - куприхол, показавшая высокий дикролицидный и фасциоло-цидный эффект в уменьшенных дозах (Т.П.Веселова, И.А.Архипов, Ы.Б.Мусаев, 1991, 1994). Таким образом куприхол по действующему началу является более совершенным и перспективным антгельминти-ком при трематодозах жвачных животных.

Однако для полного представления о новом препарате недостаточно данных о его антгеяьминтной активности, необходимо еще изучение токсического действия с учетом использования продуктов питания от дегельминтизированных животных. Последним звеном в

этих исследованиях является установление величины максимально допустимого уровня (ИДУ) препарата в продуктах питания, которая будет свидетельствовать не только о возможной токсичности, но и о реализации продуктов - конечной цели существования этой отрасли. ■

Цель и задачи работы.

В задачу наших исследований входило установление МДУ куп-рихола в продуктах питания животного происхождения. Одним ив необходимых показателей для вычисления МДУ является "коэффициент запаса", включающий кроме имеющихся в литературе данных следующие:

- изучение кумулятивных свойств куприхола;

- изучение влияния куприхола на организм овец;

- остаточное количество куприхола в органах и тканях овец;

- установление пороговой дозы куприхола;

- изучение влияния :суприхола на антитоксическую функцию печени;

- установление МДУ куприхола в продуктах питания. .

Научная новизна.

Впервые устанавливается МДУ куприхола в продуктах питания, полученных от дегельминтиэированных животных, дающая возможность их реализации. •

Практическая ценность работы. Заключается в том, что впервые для полной научно-обоснованной оценки лечебных свойств куприхола. и его токсичности установлена величина МДУ в продуктах питания полученных от дегельминтиэированных живаотных, дающая возможность использования в пищу экологически чистые продукты Основные положения выносимые на защиту.

- изучение кумулятивных свойств куприхола;

- изучение влияния куприхола Тт организм овец;

- остаточное количество куприхола в органах и тканях овец;

- установление пороговой дозы куприхола;

- изучение влияния куприхола на антитоксическую функцию печени;

- установление МДУ куприхола в продуктах питания.

Публикации: По материалам диссертации опубликовано и принято к печати 3 статьи.

Объем структура диссертации.

Диссертация изложена на/¿^машинописного текста и состот ив введения, обэора литературы, собственных исследований, заключения, выводов и практических предложений. Работа иллюстрированна 18 таблицами и 5 рисунками. Список литературы содержит^/ наименований, в том числе3 иностранных.

- 5 -

Обвop литературы.

Первый раздел обзора посвящен максимально допустимому уровни (МДУ) веществ в продуктах питания животноводства и путям его установления. Излагаются новые направления в изучении токсических свойств антгельминтиков - установлению недействующей и пороговой доз, коэффициента запаса и других показателей связанных с величиной ИДУ.

Во втором разделе анализируются лекарственные формы гек-еахлорпараксшюла - гексихол, политреы, куприхол. Дается оценка трематсдоцидного, д;Е-;ролицвдного лийст»и« пслитремз и 1суприхола у жвачных'животных, результатов экспериментальных и производственных испытаний их в сравнительном аспекте, а также данным по изучению токсичности куприхола.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. ИЗУЧЕНИЕ КУМУЛЯТИВНЫХ СВОЙСТВ КУПРИХОЛА.

Кумуляция - накопление эффекта при повторном воздействии вэщества. Часто химические соединения, обладая низкой токсичностью, при многократном поступлении в организм даже в малых дозах могут накапливаться в организме и затем оказывать неблагоприятное воздействие.

Материалы и методы.

Опыты проводили на 20 белых крысах - самцах массой 105-158 г (в среднем 116,3±9,1 г). Куприхол вводили животным перорально в желудок, ежедневно в нарастающих дозах в крахмаленом геле в течении 35 дней <в течении 12 дней 1/12 от ЛД50 - 1000 мг/кг, последующие 13 дней 1/8 - 1500 мг/кг, б дней 1/6 - 2000 мг/кг и 4 дня 1/4 - 12000 мг/кг до наступления гибели 50% животных) но методу Ю.С.Когана, В.В.Станкевича (1964). Проводили наблюдения за общим состоянием, массой тела в динамике и гибелью животных.

Кумулятивные свойства куприхола оценивали па основании принятого количественного показателя - коэффициента кумуляции (Ккум) отношение суммарной дозы вещества, вызывающей гибель 50%. животных при многократном .введении 55500 к дозе, внаываюгрй FOZ-ную гибель животных при однократном введении С12000 мг/кгi.

- 6 -Результаты.

Полученные данные по изучению кумулятивных свойств купри-хола свидетельствуют, что коэффициент кумуляции куприхола равен величине 4,5.

По общепринятой классификации куприхол относится к группе веществ, обладающих умеренными кумулятивными свойствами, так как коэффициент кумуляции у него равен 4,5.

2.ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КУПРИХСЛА НА ОРГАНИЗМ ОВЕЦ.

Как уже раннее указывалось, что при создании лекарственных форм гексахлорпараксилола были использованы разные добавки с получением гексихола, политрема и куприхола, причем последний получен на основе политрема. Влияние на организм сельскохозяйственных животных было изучено только первого - исходного вещества гексахлорпараксилола (Т.П.Веселова, 1968). В связи с этим данные исследования были посвящены изучению влияния куприхола на организм овец, как наиболее подверженных заражению дик-роцедиям!., к тому же куприхол более эффективен, по сравнению с политремом, при гельминтозе, вызываемым этим видом паразитов.

. Материалы и методы.

Под данными опытами находилось 12 овец (8 овцематок и 4 валуха) породы прекос, разделенных на 4 группы (три подопытные и рдну контрольную) по три животных в каждой. Кроме того в качестве контроля были использованы и данные исследований, полученные в подопытных группах Ж> дачи препарата.

Куприхол вводили через рот в трех вариантах: в первом - в максимальной терапевтической доие - 0,2 г/кг однократно, во втором - ежедневно в течении 5 дней и в третьем - пять раз увеличенной терапевтической дозе - 1 г/кг однократно.

• Реакцию'организма на введения куприхола определяли по общему клиническому статусу, гематологическим, морфологическим и биохимическим показателям крови и исследованиям мочи,- а также основным функциям организма.

■ Методика проводимой работы заключалась в следующем: куприхол вводили животным утром. За сутки до его введения и через 1, 3 и 5 суток после в одно время (по утрам) проводили наблюдения и исследования животных, а при пятикратном введении в те хе Ьрскн после последнего введения. Из клинических наблюдений оО-

ращалось внимание на состояние кожного покрова, видимых слизистых оболочек, подвижность животных, прием ими корма и воды, измеряли температуру тела, подсчитывали количество сердечных толчков и дыхательных движений. Проводили забор крови из яремной вены для гематологических исследований.

Гематологические исследования состояли из подсчета количества эритроцитов и лейкоцитов (при помо'ци камеры Гсряева), определения количества гемоглобина (при помощи гемометра Сали). Для вычисления лейкограммы кровь фиксировали на мазках и окрашивали по Романовскому.

При использовшпш методик, поедстагиенннх в руководство . "Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии" (1985) биохимические исследования крови проводили на сахар (глюкозу),каротин,кальций,фосфор и щелочной резерв.

Проводили исследования состояния мочи: рН,сахара и ацетоновых тел.

Из основных функций организма исследованию подвергали центральную нервную систему, сердечно-сосудистую систему и желудочно-кишечный тракт методами: установления латентного периода времени возникновения жвачного рефлекса, электрокардиографии и клинических исследований последнего.

Метод установления латентного периода времени жвачного рефлекса, подучивший широкое применение у фармакологов, основан на наличии у самок жвачных животных рефлекторной жвачки, возникающей через несколько секунд после начала тактильного раздражения соска - обычного доения (60 раздражений в 1 сек.) до первой отрыжки. -В опыт подбирали овцематок с наиболее стабильным временем рефлекса. Раздражение соска производили через 1, 2, 5, 8 и 24 часа после введения куприхола.

В опытах по . изучению влияния куприхола на сердечно-сосудистую систему был- использован метод электрокардиографии, как наиболее объективный и широко внедренный в клиническую, особенно, экспериментальную практику (Р.М.Восконян, 1941; Я.М.Скорняков, 1954; М.В.Казакова, 1962; Т.П.Веселова, 1968, 1970; 8.Л.ОБЬегпе, 1974 и др.) при помощи одноканального черниль-но-пишущего электрокардиографа типа ЭК-1Р СВМ.

При изучении влияния куприхола на желудочно-кишечный тракт кроме наблюдений за животными приемом ими корма и воды, подсчитывали количество сокращений .рубца в 2 мин., прослушивали моторику кишечника и отмечали сформированность фекальных масс.

Следует отметить, что в сумме в подопытных группах проводилось 9-10 измерений по каждому наблюдению и исследованию, а з

контрольной - 12-15, как уже раннее указывалось, с учетом данных полученных до введения препарата.

После установления клинического статуса вводили куприхол и проводили наблюдения за животными в течении 5 суток с соответствующими исследованиями, на 1, 3 и 5 сутки, как и при установлении статуса, а в опытах, в которых антгельминтик вводили многократно, то более длительное время начиная после последнего введения.

Данные, полученные при вышеуказанных исследованиях, были проанализированы методом математической статистики на ПНЕМ РС/АТ-286 в программе "МЮКША" с вычислением средней арифметической величины (М), ее ошибки (±ш) и уровня значения величины Р.

Для определения широты терапевтического индекса. была дополнительно создана еще одна группа животных, состоящая из 3 овец. Указанным животным вводили индивидуально через рот куприхол в дозе 2 г/кг т.е.. в 10 раз увеличенной терапевтической. После введения антгельминтика за этими животными проводились в течении 5 суток общие клинические наблюдения с обращением внимания на состояние шерстного покрова, видимых слизистых оболочек, подвижности животных, приемом ими корма и воды.

Результаты.

При осмотре животных подопытных групп не отмечено отклонений от их исходного состояния.

.. Нетоксичность препарата в изучаемых дозах подтверждается и результатами гематологических исследований, в которых количество гемоглобина и морфологических элементов крови не выявили существенных отклонений, так как были на уровне близком к контролю (Р>0,05) и при нанесении на сетку гематологического профиля по Домрачеву соответствовали границам нормы для овец. Следует отметить, что основные биохимические исследования крови, рекомендуемые при диспансеризации животных (И.Г.Шарабрин, 1972) были направлены, главным образом, на выявление функционального состояния печени, как принимающей участие во всех процессах обмена веществ. Тем более, что при пероральном введении препаратов -первый удар принимает на себя именно печень и часто страдает от такого рода воздействий, а также и гельминтозы, вызываемые дикроцелиями и фасциолами, при которых эффективен куприхол, поражают печень.

? результате»• биохн^дгаергат-дарледрБайИЯми крови.на сахар.;

каротин, кальций, фосфор и щелочной резерв, также не выявили отклонений у овец от исходного физиологического статуса.

Результаты исследования мочи подтверждают сделанный нами вывод о нетокеичноети куприхола в изучаемых дозах.

При изучении влияния куприхола на центральную нервную систему был применен метод длительности латентного периода жвачного рефлекса у овцематок. Данными исследованиями было установлено исходное значение рефлекса до дача препарата - в пределах 8,9+2,6 - 14,3±3,8 сек. После дачи препарата в дозе 0,2 г/кг однократно, пятикратно и 1,0 г/кг однократно уровень полученных значений был близким к контрольна.: (исходным до дачи препарата) и составлял величины 9,3±2»2; 15,114,7, 12,5±4,1 сек. соответственно. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что куприхол не оказывает отрицательного влияния на функциональное состояние центральной нервной системы, так как время, рефлекторной отрыжки при раздражении соска вымени у овец до и после дачи антгельминтика . было в пределах недостоверности различий (Р>0,05).

Данные электрокардиографических исследований показали, что после дачи куприхола в дозах 0,2 г/кг однократно, пятикратно (ежедневно в течении пяти дней) и 1.0 г/кг однократно не установлено отклонений от исходных показателей ЭКГ; Ритм сердечной деятельности (интервал Я-]?) сохранялся, не отмечалось тахикардии, проявляющейся, как правило, при интоксикациях. О постоянстве тонуса симпатических и парасимпатических нервов, регулирующих ритм работы сердца, свидетельствует неизменность амплитуды зубца Р и интервала Р-Ц. Проводящая система ссрдца при этом не страдает - время электрической систолы (ДИЭТ) остается неизмен-кнм. Сохранение в пределах нормы величины и характера зубца Т такте подтверждает наш"вывод о нетоксичности куприхола, во всех испытанных дозах. •

В отношение пищеварительного тракта, следует сказать, что при проведенга наблюдений и исследований ке было отмечено отклонений у животных, как в приеме корма и воды, так и в функциональном состоянии рубца.и кишечника.

Таким образом установлено, что куприхол в максимально терапевтической дозе - 0,2 г/кг при однократном и пятикратном введениях и в пять раз увеличенной дозе - ,1 г/кг является нетоксичным препаратом, так как не вызывает нарушения общего состояния, изменения гематологических, морфологических и биохимических показателей крови и изменения мочи, а также основных Функцйй организма - центральной нервной пиотемн. оррлрчнп-ппоу-

- 10 -

диетой системы и желудочно-кишечного тракта.

В дополнительном опыте после введения овцам куприхола-в-10- кратной терапевтической дозе - 2 мг/кг не было выявлено каких - либо отклонений от их исходного состояния. Животные свободно передвигались, охотно принимали корм и воду.

3. ОСТАТОЧНЫЕ КОЛИЧЕСТВА КУПРИХОЛА В ОРГАНИЗМЕ ОВЕЦ.

К настоящему времени была изучена фармакокинетика и установлены остаточные количества гексахлорпаракселола у разных видов животных - лабораторных и сельскохозяйственных - при даче его в лекарственных формах гексихол и гексихол 1 и политрем (Н.Н.Савченко(1980), Н.И.Рыженов,- Т.П.Веселова,' Н.Н.Гудкова (1980), Н.И.Рыженова, Н.Н.Савченко (1981), H.H.Савченко (1981,1984), а также биологическая доступность куприхола в сравнении с лолитремом (Н.Н.Савченко, 1991). В данных опытах, проведенных на белых крысах автором было показано, что куприхол обладает лучшей биодоступностью, чем политрем. Например, уже через 1 час после введения куприхола обнаруживается в печени 6,1 мг/кг гексахлорпараксилола, а при введении политрема содержание гексахлорпараксилола увеличивается только к. 24 -му часу до 0,69 мг/кг.

В связи с вышеуказанным представляло интерес установление количественного содержания куприхола в органах и тканях овец через одни сутки и в последующее время.

Материалы и методы.

Определение остаточных количеств куприхола в органах и тканях овец проводили на четырех овцах, содержавшихся в опытном хозяйстве ВИГИС "Курилово", на основании использования метода определения гексахлорпараксилола в органах и тканях животных методом тонкостенной хроматографии, разработанным Н.Н.Савченко (1984), так как в куприхоле действующим началом является гек-сахлорпараксилол. '

Куприхол вводили овцам перорально, однократно, в максимально терапевтической дозе равной 200 мг/кг. Убой животных проводили черев 1, 5, 15 и 30 суток после введения препарата. Для . исследования остаточных количеств куприхола в организме овец брали основные органы и ткани:, мышцы, печень, желчь, жировую ткань.кровь, почки, селезенку, легкие, сердце.

принцип метола основан на извлечении куприхола (гексахлор-

- 11 - .

параксидола) из органов и тканей животных ацетоном с последующим перераспределением из водно-ацетоновой смеси в гексан и дальнейшим определении двухлорной тонкослойной хроматографии. Экстракты очищали концентрированной серной кислотой. В качестве подвижной среды был выбран гексан. Нижний предел определения куприхола 0,05 мг/кг в органах и тканях животных.

Полученные данные обработаны по методу Стьюдента.

Результаты.

Установлено, что после введения куприхола максимальное . содержание гексахлорпараксилола в органах и тканях овец приходится на первые сутки. Основная часть препарата выводится через 5 суток, через 15 - в органах препарат присутствует в незначительных количествах, к 30 суткам обнаруживаются только его следы; количество препарата ниже уровня определяемое™. Наибольшее количество препарата обнаруживается на первые сутки в жировой ткани, печени и желчи, наименьшее в крови,почках,селезенке и легких. В мышцах препарат присутствует на всех сроках и к 30-му дню составляет 0,04±С,001 мг/кг. Максимальный уровень в мышцчх фиксируется на первые сутки - 5,0±1,88 мг/кг, почти также как и у Н.Н.Савченко (1984), по политрему (6,8+0,82). Характерно, что в печени и желчи на первые сутки создается значительная концентрация куприхола: 20,0±0,74 и 25,0±0,80 соответственно, на 30-е сутки уровень препарата ниже уровня определяемости (<0,05 мг/кг), что говорит об избирательном действии препарата на печень. В жировой ткани на первые сутки куприхол обнаруживается в колечистве 68,80 + 1,б9мг/кг, что можно отнести за счет липои-дотропности гексахлорпараксилола, с резким уменьшением на 5 сутки (6,24 + 0,73) и особенно к 15 суткам (1,91 + 0.24). В остальных органах концентрация его незначительная.

Таким образом с учетом данных Н.Н.Савченко (1991) увеличенная биодоступность, по сравнению с политремом куприхол проявляется только во время н¿достигшее первых суток после его введения. В последующее время, по нами полученным данным, содержа ние препарата в органах и тканях овец находится на уровне близком к другим лекарственным формам гексахлорпараксилола -гексихолу и политрему.

4. УСТАНОВЛЕНИЕ'ПОРОГОВОЙ ДОТЫ КУПРИХОЛА. .

В работе были использованы методические подходы по опреде-

лению пороговых и подпороговых доз, разработанные для пестицидов, фунгицидов и гербицидов широко применяемых в агропромышленное™ и примененных в подобных экспериментах при изучении данного вопроса у новых антгельминтиков - тивидина и политрема (Н.Н.Савченко, 1989; М.В.Доропшна, 1989).

Следует отметить, что фунгициды, гербициды и особенно пестициды присутствуют в природе постоянно и недозированно, а изучаемый нами антгельминтик - куприхол, применяется однократно, строго дозированно на кг массы животного и являясь лекарственным веществом, в данном случае, он поставлен в более жесткие условия эксперимента.

Материалы и методы.

Работу проводили на самцах белых крыс массой 192 - 323 г., из которых сформировали 21 группу по принципу аналогов по 6 животных в каждой. Всего .под опытом находилось 126 животных, 96 -подопытных и 30 контрольных.

Подопытным животным куприхол вводили до кормления ежедневно в желудок в форме суспензии, приготовленной на 2%-ном крахмальном геле, в течение 6 месяцев. Контрольным животным вводили крахмальный гель соответственно массы животных.

Поскольку основной задачей хронического эксперимента явля- . ется установление пороговой дозы "вредного" вещества, то рекомендуется испытать действие не менее трех доз (Токсометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду,1986), поэтому в данных опытах куприхол был испытан в трех дозах. Первая доза - 10 мг/кг установлена на основании максимального содержания политрема (как исходного вещества для получения куприхола) в органах и тканях животных. после дегельминтизации. Так, максимальное содержание политрема было установлено Н.Н.Савченко на первые сутки и' составило в молоке 13,4 мг/кг й мышцах 6,7 мг/кг. Близкое к последнему - 5,0 мг/кг мы определили в дальнейшем в своих опытах с'куприхолом.

Исходя из среднедушевого лотребления молока (0,5) и мяса (0,2) в сутки первая доза должна быть 8 мг/кг, но для простоты расчетов при введении она была увеличина до 10 мг/кг (Дорошина Ы.В:,1989). Для второй дозы ориентировочно первую увеличили в 5 раэ и для третьей - в 10 раз, которая соответствует минимальной терапевтической - 100 мг/кг при фасциолезе овец.

В связи с тем, что куприхол получен на основе политрема и пороговая доза последнего установлена М.В,Дорониной (1089)

представляло интерес сравнение результатов испытания дозы 100 мг/кг политрема, примененного данным автором, с ¡суприхолом в нашем опыте. Поэтому была создана еще одна подопытная группа животных, входящая в состав 21 группы, которой вводили лолитрем в течении 6 месяцев.

Принимая во внимание, что при знтерапьном введении веществ (путь введения куприхола рекомендуемый для сельскохозяйственных животных) печень одна из первых принимает на себя удар по их детоксикации и что действие куприхола предназначено на паразитов локализующихся в печени, то для оценки функционального состояния этого органа были премекены "печеночное тесты".

■ Так высокое содержание распространенных аланиновой и ас-паргиновой трансаминаз отмечается в печени, мышцах и др. тканях. Большая часть аланиновой транеаминазы все же печеночного происхождения и определение ее с успехом используется для диагностик выроженных поражений печени.

При проведении хронического эксперимента с веществами подозрительными в отношении гепатотоксичности, наряду с индикаторными ферментами важно определить и ферменты полностью или частично секретируемые печенью, например щелочную фосфатазу.

На основании вышеизложенного мы проводили определение активности ферментов АлТ, АсТ и щелочной фоефатазы в сыворотке крови в динамике: на 5, 12, 30 дни, 3 и 6 месяцев от начала введения куприхола. Для этой цели был использован системный синхронный анализатор (Synchron CXR systems) фирмы "BECKMAN" (Австрия).

Следует отметить, что избранные сроки введения веществ в организм в хроническом опыте обычно основываются на реальности поступления их в организм. Например, поступление промышленных ввеществ из атмосферного воздуха, пестицидов из растений происходит в течении всего года. В таких случаях хронический опыт рекомендуется проводить 9-12 месяцев. Длительность хронического опыта значительно сокращается (до 4-6 месяцев), если поступление ввещества ограничив' 'тся одним сезоном. Нами исследуем"»-ввещество вводится в организм однократно и поэтому срок исследований его в хроническом опыте должен быть сокращен, хотябы до 3 месяцев. Но с целью большей убежденности в нетоксичночти куприхола мы хронический опыт проводили в течении 6 месяцев.

Кроме того определяли отношение ферментов АсТ к АлТ (показатель де Ритиса), как указывающее на патологию печени, если оно ниже единицы.

Принимая во внимание, что масоа тела жиботнкх и прганоь

является весьма информативным показателем, изменение которой важны не только для молодых растущих животных, , но и взрослых. Так в ходе опыта крыс взвешивали и сравнивали массу животных. После убоя у них взвешивали печень для выведения весового коэффициента печени, который также является показателем состояния данной системы у животных. Весовой коэффициент печени определяли по формуле - масса органа в г деленная на массу тела в кг (И.В.Саноцкий, 1970).

Полученные данные проведенных исследований анализировали методом математическое статистики на ПЭВМ РС/АТ-286 в программе "МЮШЗТА" с вычислением средней арифметический величины (М), ее ошибки (±т) и уровня.значения величины Р.

■ Результаты и обсуждение.

Проведенными экспериментальными исследованиями установлено, что. ежедневное введение куприхола в дозах 10, 50 и 100 мг/кг в течении трех месяцев не вызывало достоверных изменений активности ферментов - АлТ, АсТ и ЩФ в сыворотке крови по отношению к контролю (Р>0,005). Подтверждение сказанного является показатель дё Ритиса - отношение АсТ и АлТ, который во всех случаях был больше или равен единице. Известно, что данный коэффициент при заболеваниях печени обычно ниже единицы.

Следует сказать, что обострение заболевания печени сопровождается резким подъемом активности ферментов в сыворотке'крови. Так повышение активности АлТ и АсТ отмечено в дозе 100 мг/кг после 6-месячного введения куприхола: АлТ на 17,4, АсТ -4.0 и Шф - 14,0% (Р>0,01, Р-0,01),сопровождавщиеся снижением показателя де Ритиса до 0,88 при 1,03 у контрольных животных, указанное свидетельствует о некотором токсическом влиянии препарата на печень.

Наблюдения за динамикой массы печени и массы животных получавших куприхол во все сроки введения во всех дозах не вызывали изменений, а также и весовой коэффициент печени не претерпевал отклонений от таковых контрольных животных, свидетельствующий о том, что куприхол не оказывает отрицательного влияния на защитные функции печени.

' Следует отметить, что наблюдался некоторый спад массы тела животных, при нарушении рациона их кормления, в это время данное наблюдалось и у контрольных животных, например, на 12-ый день опыта. Однако отмеченное не отразилось на весовом коэффициенте печени.

Принимая во внимание, что куприхол получен на основе политрема и пороговая доза последнего определена Ы.В.Дорошиной (1989), проведенное нами сравнение его с куприхолом в единой дозе - 100 мг/кг при длительном - 6-месячном введении выявило идентичное повышение активности ферментов: АлТ на 18,8, АсТ -6,0 и ЩФ - 17,3%, а при куприхоле: АлТ на 17,4, АсТ - 4,0 и Шф - 14,0% при также близком показателе де Ритиса (АсТ/АлТ) 0,86 и 0,88 соответственно.

Таким образом полученные данные свидетельствуют, что куприхол по токсичности находится на уровне такового политрема. Указанное подтверждается и данными весового коэффициента печени, который в группе животных после 6-месячного введения купри-хола в дове 100 мг/кг был равен величине 29,6, а после подобного введения политрема - 29,3, у контрольных животных - 30,0.

Следовательно куприхол в дозах 10 и 50 мг/кг при длительном введении (в течении 6 месяцев включительно) не вызывал изменений биохимических показателей функции печени. В два раза увеличенной дозе - 100 мг/кг после 6 месячного введения препарат в пределах 4-171 повышал активность исследуемых ферментов (Р>0,01). В то же время масса тела и масса печени животных не претерпевали изменений по сравнению с контролем.

На Основании программы ООН по окружающей среде и междуна-одиого регистра потенциально токсических веществ (Токсометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду,1986) доза куприхола 100 мг/кг относится к категории пороговой, как вызывающий начальные токсические изменения в печени. Однако эта доза для политрема по данным Ы.В.Дорошиной (1989) является подпо-роповой, а пороговая в два раза увеличенная - 200 мг/кг, при которой кроме изменения активности ферментов, наблюдалось также уменьшение массы тела животных (Р<0,001). По этому вопросу необходимо сказать, что для определения ферментов нами был использован высокочувствительный анализатор фирмы "ВЕСКМАН" и предпологая указанное нами был взят дополнительный контроль. В дополнительный контроль входила группа животных, которым подобно куприходу вводили политрем в течении 6 месяцев с аналогичным куприхолу результатом то есть политрем в дозе 10О мг/кг вызывал идентичное куприхолу повышение активности ферментов. Известно, что результат исследования, особенно ферментов, зависит от степени чувствительности метода и в этом случае при применении данного метода установление, что.куприхол не токсичней политрема. . ■ '

Таким образом. дантш 5к0пяримрнтами уртлнпр.лрна пороге-_

- 16 -

вая доза куприхода, равная 100 мг/кг.

5. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КУПРИХОДА НА АНТИТОКСИЧЕСКУЮ ФУНКЦИЮ

ПЕЧЕНИ.

Для выявления токсического действия лекарственных веществ на печень используется гексиналовая проба. Как известно, инактивация барбитуратов происходит преимущественно в печени и при поражении ее каким-либо препаратом, обезвреживание барбитуратов замедляется. Следовательно, продолжительность гексеналового наркоза зависит от степени повреждения печени веществами (Д.Г.Розин, 1964).

Материалы и методы.

Опыт проведен на 57 беспородных крысах - самцах массой 150-280 граммов. Животных разделили на 9 групп, В подопытных и одна контрольная, в каждой по 5-7 животных.

Животным подопытных групп куприхол и политрем вводили в терапевтической дозе 200 мг/кг в крахмальном геле через зонд, непосредственно в желудок. Животным контрольной группы препарат не вводили, ей вводили один гексенал и через 1,5; 3; 6; 24 часа крысам всех групп водили гексенал внутрибрюшинно в дозе 60 мг/кг, в форме 0,6%-ного водного раствора. Раствор гексенала готовили ex tempore.

Длительность гексеналового сна учитывали в минутах по времени пребывания животного в "боковом положении", до востановлена рефлекса переворачивания в положение "спиной вверх".

Полученные цифровые данные всех показателей проаналивиро-ванны на ПЭВМ с вычислением средней арифметической "М", ошибки средней арифметической "±т" и уровня вероятности - величины

ирм

Результаты.

Установлено, что в контрольной группе животйых (которой вводили только гексенал) продолжительность сна составила 31,Oil,2 минуты. При введении гексенала через 1,5 часа после дачи куприхола в дозе 200 мг/кг продолжительность сна составляла 31.?±3,3 минуты, через 3 часа 34,545,3 минуты, через 6 часов 33,О минуты и через 24 часа 29,9+7,8 минуты. При проведении

грксш'&дорого тгтта о лолитремом в дозр ?00 .мг/кг. • результаты

были следующие: продолжительность сна через 1,5; 3; 6 и 24 часа после введения политрема составила 34,2±6,3; 37,3±10,2; Э7,8±5,4 и 32,1±7,5 соответственно.

Тагам образом установлено, что куприхол и политрем в единой дозе 200 мг/кг (тералевтичес!тая доза), оказывают незначительное подавление антитоксической функции печени, однако куприхол в сравнении с политремом в меньшей степени.

6. УСТАНОВЛЕНИЕ МАКСИМАЛЬНО ДОПУСТИМОГО УРОВНЯ КУПРИХОЛЛ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ ЖИВОТНОВОДСТВА.

По современным требованиям, предъявляемым Госветфармсове-том РФ к антгельминтикам при внедрении их в ветеринарную практику, необходим контроль за остаточным содержанием их в продуктах животноводства. Основным показателем, по которому проводится этот контроль, является МДУ- Этот показатель ранее был установлен для лекарственного вещества - антгельминтика политрема (Т.П.Веселова и др., 1990), на основе которого получен куприхол, также являтзфйся лекарственной формой гексахлорпараксело-ла.

Необходимо показать, что Программой ООН по окружающей среде предусмотрело проведение токсометрического эксперимента для пестицидов по предложенной схеме. (Токсометрия химических веществ, рагрязняющих окружающую среду. Под ред.А.А.Каспаро-ва. ,И.В.Саноцкого. М., 1986. 426с), которой руководствовались'в своих исследованиях по антгельминтикам - ранее по изучению политрема и в настоящей работе куприхола. Следует отметить, что более четко схема данных исследований пестицидов была сформулирована Г.А.Талановым (Остатки пестицидов в объектах ветеринарного надзора и их санитарно-токсикологичеекое значение. Авто-реф. дис. д-ра вет. наук. М. 1975), что учитывалось нами в исследованиях.

Так, на перврм этапе устанавливается токсичность самого ' препарата при пути введения его рекомендованном практике - параметры острой токсичности, как вону токсичного действия, при однократном введении и коэффициент кумуляции при многократном введении. Определяется максимальное содержание исследуемого вещества в органах и тканях животных и пороговая доза. Последняя устанавливается в хроническом эксперименте с учетом общего токсического действия и отдаленных эффектов.

При изучении общего токсического действия вещества его

вводят животным'.- виду, предназначаемому для лечения, в тера-

певтических и увеличенных дозах, при этом кроме влияния его на кровь, обращается внимание на гепатотоксическое, кардиотокси-ческое и нейротоксическое действие; змбриотропное и мутагенное действие, последние проводится на лабороторных животных. По отсутствию вышеуказанного токсического влияния вещества приступают к расчетам 'по установлению его МДУ в продуктах питания.

Расчеты по установлению максимально допустимого уровня проводятся по формуле ранее принятой комитетом по охране продуктов питания ФАО/ВОВ. .По этой формуле установленную в длительном хроническом эксперементе подпороговую дозу умножают на среднюю массу тела человека, а полученное произведение делят на коэффициент запаса. ' -

За среднюю массу тела человека принимают 50 кг, так как продукты питания содержащие остатки вещества употребляют не только взрослые, но и дети.

Коэффициент запаса - отношение величины порога хронического действия вещества к величине санитарного стандарта то есть величина показывающая во сколько раз должна быть уменьшена доза вещества для человека, установленная на животных с учетом возможности более высокой чувствительности человека.

• Поскольку не имеется данных для установления коэффициента запаса антгельминтиков мы приводим таковые для пестицидов, хотя пестициды во внешней среде присутствуют постоянно, а изучаемый нами антгельминтик куприхол вводится животным однократно, поэтому мы ставим куприхол.в более жесткие условия.

Так для установления коэффициента запаса для куприхода мы руководствовались данной схемой предложеной для пестицидов (Токсометрия•химических веществ, загрязняющих окружающую среду ,.1986, стр. 43), по которой для данного препарата коэффициент запаса равен величине 30.

-:. . так как ОН. ОТНОСИТСЯ'К умеренно стой-

ким веществам, со слабо выраженной или умеренной кумуляцией, при максимально безвредной дозе 50 мг/кг, что в 10 раз больше нормативной - 5 мг/кг. .

В результате расчетов по ранее указанной формуле МДУ для куприхола в продуктах питания животновотного происхождения составляет 83,3 мг/сутки/человека, что во _всех возможных случаях превышает его максимальное содержание'в них.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нл основании проведенных компдрконых исследований: и?уче-

ния кумулялятивных свойств куприхола, влияния его на организм овец, определения остаточного количества куприхола в органах и тканях животных, пороговой дозы препарата и антитоксической функции печени впервые установлена величина максимально допустимого уровня куприхола в продуктах питания, полученных от де-гельминтизированных животных.

Кумулятивные свойства куприхола изучали по методу ¡0. С.Кагана и В.В.Станкевича (1964) на 30 белых крысах после перораль-ного введения препарата ежедневно в нарастающих дозах в течение 35 дней. В результате был установлен установлен коэффициент кумуляции куприхола раттаий ггличине 4,5, свидетельствующий о том, что препарат обладает умеренной кумуляцией, как и политрем.Изучение влияния куприхола на организм овец проводили на 12 овцах с введением препарата в терапевтической дозе 0,2 г/кг однократно и многократно (в течение 5 дней) и однократно в суммарной дозе - 1 г/кг. В результате не было"выявлено токсического влияния куприхола в разных дозах и кратностях. Так, клинические наблюдения за животными (состояния шерстного покрова, видимых слизистых оболочек рта и коньюктивн глаза, псдвтоэтость, принятие корма, воды, температура тела, число сердечных толчков и дыхательных движений) показали, что препарат не вызывает отрицательного действия. Гематологические показатели также находились в пределах нормы при Р>0,05.. Биохимические исследования крови на сахар, каротин, ¡салъций, фосфор и щелочной резерв не выявили отклонений у овец от исходного физиологического статуса (при Р>0,05).

Исследования мочи на физические и химические свойства подтверждают нетоксичность куприхола в изучаемых дозах.

Данные электрокардиографических исследований показали, что после дачи куприхола в дозах 0,2 г/кг однократно, пятикратно и 1,0 г/кг однократно не установление отклонений от исходных величин ЭКГ.

Исследования центральной нервной системы проводились с помощью метода длительности латентного периода жвачного рефлекса у овцематок (И.И.Грачев, 1952; А.Ф.Орлов, 1954; Т.П.ВеселОва, 1968; и др.) также не выявили отрицательного влияния куприхола на функциональное состояние центральной нервной системы, так как время рефлекторной отрыжки при раздрожении соска вымени у овец до и после дачи препарата было в пределах исходных при недостоверности различий Р>0,05.

При исследовании пищеварительного тракта овец также не было отмечено отклонений, как в приеме корма и воды и Функции-

- 20 -

нальноы состоянии рубца и кишечника.

Таким образом исследования показали, что куприхол в максимально терапевтической дозе-0,2 г/кг при однократном и пятикратном введении и в пять раз увеличенной дозе 1 г/кг является нетоксичным антгельминтиком - не вызывает нарушения овщего состояния, изменения гематологических, морфологических и биохимических показателей крови, изменения мочи и нарушения основных функций организма: центральной нервной, сердечно - сосудистой и пищеварительной систем.

В дополнительном опыте, проведенном на овцах при введении куприхола в 10 раз увеличенной дозе 2 г/кг по данным клинических наблюдений, также не было выявлено отклонений от исходного статуса. Таким образом куприхол обладает широким терапевтическим индексом - величине 10, на основании которой его можно применять животным кг только с кормом, но и групповыми методами.

Следует отметить, что основной показатель по которому проводится контроль за остаточным содержанием веществ в продуктах питания животноводства - величина ЫДУ- Перед ее определением необходимо установить пороговую дозу препарата т.е дозу, вызывающую шшшальноые токсические отклонения при длительном введении.

Опыты по определению пороговой доза куприхола проводили на белых крысах. Подопытным животным ежедневно вводили куприхол в течении 6 месяцев в трех дозах - 10, 50 и 100 йг/кг. В результате была установлена пороговая доза куприхола - 100 мг/кг и подпороговая - 50 мг/кг.

Следует отметить, что для оценки функционального состояния печени были применены " печеночные тесты ", поскольку печень принимает на себя удар по детсксикации куприхола, действующего на трематод в этом органе. Кроме того печень играет важную роль в белковом, углеводном и других обменах, осуществляет обезвоживающую и выделительную функции, являясь местом метоба-лизирования химических соединений и подвержена их вредному влиянию. В большинстве токсикологических исследований ограничиваются индикацией ранних признаков нарушения функций печени т. е. ценность методов определяется их чувствительностью и специфичностью. Так высокое содержание аланиновой и аспаргиновой т'ран-с;»«иназ отмечается преимущественно в печени, меньше и др. тканях. и эти траноаминазн с успехом используются для диагностики ь!ф'1Л"нных поражений печени т.к. обострение заболевания печени сс>прп5'0*да'!тгя резким подъемом активности ферментов в сыворотки Крлг.и.

- 21 -

При хроническом эксперименте наряду с индикаторными ферментами важно-определить и фермент секретируемый печенью -щелочная фосфатаза. На основании вышеизложенного была определена активность ферментов АлТ, АсТ и щелочной фосфотазы в сыворотке крови в динамике на 5, 12, 30 дни, 3 и 6 месяцев от начала введения куприхола. Для этой цели был использован системный синхронный анализатор фирмы "BECKMAN" (Австрия). Кроме того определяли отношение ферментов АсТ к АлТ (показатель де Ритиса)„ указывающее на патологию печени, если оно ниже единицы. В процессе опытов принимали во внимание изменение массы тела лиЬот-лых и поэтому проводили взЕэшпзание подопытных крнс. После убоя взвешивали печень крыс для выведения весового коэффициента печени, который является также показателем состояния дачной системы у животных. Весовой коэффициент определяли по формуле, предложенной И.В.Саноцким (1970).

Проведенными исследованиями установленно, что ежедневное введение куприхола в дозах 10 и 50 мг/кг в течении 6 месяцев и 100 мг/кг в течении 3 месяцев не вызывало достоверных изменений активности ферментов - АлТ, АсТ и ЩФ в сыворотке крови по отношению к контролю (Р>0,05). Показатель де Ритиса - отношение АсТ и АлТ был равный или более единицы.

Повышение активности АлТ и АсТ отмечено в дозе 100 мг/кг после 6 месячного введения куприхола: АлТ на 17,4%, АсТ - 4,0% Щ1> - 14,0% (Р>0,01, Р-0.01),сопровождавшееся снижением показателя де Ритиса до 0,88 при 1,03 у контрольных животных, указывало на некоторое токсическое влияние препарата на печень.

Наблюдения за динамикой массы печени и массы животных, получавших кулрихол во все споки введения до?ы не отметили изменений. Весовой коэффициент печени но претерпевая отклонений от таковых контрольных г-лвотньх. Наблюдался некоторый спад массы тела животных при нарушении рациона их кормления, данное наблюдалось и у контрольных на 12 день опыта. Однако отмеченное не отразилось и на у"е:?ыэ!ппт 'весового коэффициента печени в этот срок у животных всех групп, включая контрольную.

Принимая во внимание, что куприхол получен на основе политрема была создана дополнительная группа животных, которой политрем тагаге как и куппихол вводили в течении 6 месяцев в единой дозе 100 мг/кг. В результате получено идентичное купри-холу повышение активности ферментов АлТ на 18,8%, АсТ - 6,0% и ЩФ - 17,3%, при показателе де Ритиса - 0,86.

Таким образом на основании Международного регистра потенциально токоичепш Беаеотв доза ^прихола 100 иг/хгодаяйтол.

к категории пороговой, как вызывающее начальные токсические изменения в печени, а доза 50 мг/кг - к недействующей, подпорого-вой. На основании расчетов "проведенных по формуле принятой комитетом по охране продуктов питания ФАО/ВОВ - подпороговую дозу умножают на среднюю массу человека и делят на коэффициент запаса (величина, полученная при интеграции токсических свойств препарата*) установлена величина МДУ в продуктах питания живот-новотного происхождения - 83,3 мг/сутки/человека, которая во всех возможных случаях превышала максимальное содержание куприхола в них.

Поскольку куприхол обладает направленным действием на- печень, о чем свидетельствует локализация паразитов на которые он действует губительно (фасциолы, дикроцелии) и фармококинетика -большее содержание его в этом органе, то представлял интерес изучение влияния препарата на одну из основных функций печени -антитоксическую. Опыты были проведены на крысах методом гексеналового теста в сравнительном аспекте с политремом, вводимых в единой дозе 200 мг/кг (для куприхола максимальная терапевтическая). В результате установлено, что они оказывают незначительное подавление антитоксической функции печени (Р>0,05) и при сравнении с политремом в меньшей степени, что подтверждает малую токсичность куприхола.

Таким образом, результатами наших исследований показана безопастность употребления продуктов питания, полученных от де-гельминтизированных животных куприхолом, в случаях вынужденного убоя или хозяйственной необходимости.

ВЫВОДЫ.

1. Изучены кумулятивные свойства куприхола. Коэффициент кумуляции препарата равен величине 4,5. По общепринятой классификации куприхол относится к группе веществ обладающих умеренными кумулятивными свойствами.

2. Установлено, что куприхол в максимальной терапевтической дозе 0,2 г/кг при однократном и пятикратном введении и в пять раз увеличенной дозе - 1 г/кг овцам, не вызывает нарушение общего состояния, изменения гематологических, морфологических и биохимических показателей крови и изменения мочи, а также основных функций организма - центральной нервной системы, сердечно-сосудистой и пищеварительной.

3. в опытах по влиянию куприхола на организм овец показана широта терапевтического индекса - более 10., свидетельствую-

щий о возможности применения антгелъминтика групповым методом с кормом.

4. Куприхол в дозе 200 мг/кг оказывает незначительное в меньшей степени, чем полнтрем(Р>0,05) подавление антитоксической функции печени.

5. Установленного после введения куприхола в дозе 200 мг/кг максимальное содержание гексахлорпяраксилола (действующее' начало) в органах и тканях овец приходится на первые сутки. Основная часть антгелъминтика выводится через пять суток, через 16 - в органах препарат присутствует в незначительных количествах, к 30 суткам обнаруживается его следы. Наибольшее количество препарата обнаруживается на первые сутки в жировой ткани (что свидетельствует о его лилотропности), печени и желта (указывающее на избирательность действия на печень),наименьшее в крови, почках, селезенке и легких. В мышцах препарат присутствует во все сроки и к 30 дню составляет 0,04±0,001 мг/кг. Максимальный уровень в мышцах фиксируется на первые сутки - 5,Oil,88 мг/кг.

6. В длительном эксперименте (при введении куприхола в течении 6 мгсяцов) определена пороговая доза, которая является 100 мг/кг, как вызывающая нач|1льные токсичесгае изменения в сыворотке крози (АлТ на 17,4, ЩФ - 14,0 и АсТ на 4,0%; (Р>0,01, Р-0,01),' сопровождающаяся снижением показателя де Ритиса до 0,83 при 1,03 у контрольных животных, указывающего на .некоторое токсическое влияние препарата на печень, причем масса тела и масса печени не претерпевали изменений.

7. При введении куприхола в течении 6 месяцев установлена подпореговая (недействующая) доза, которой является 50 мг/кг.

' 8. Установлена величина максимально допустимого уровня (>¿0'') купрпуола в проектах питания жгаютиовотного происхождения - СЗ.З мг/сутки/челозека,гюторая во ьсех возможных случаях превышает максимальное содержание препарата в них, обеспечивая безопастность употребления продуктов от дегсльминтизированных животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Величина максим: >льно допустимого уровня (ИДУ) куприхола - 83,3 мг/сутки/человека, более чем в 10 раз превышающая максимальное содержание антгелъминтика в них, что позволяет решить вопрос о реализации продуктов питания, полученных от дегельмкн-тизированных животных.

2, Полученные данные вошли во "Вряменные. наотагл«пкя по

применению куприхола при тремотадовах жвачных животных", которое передано в Госветфармсовет для рассмотрения.

3. В связи с малой токсичностью куприхола и широким терапевтическим индексом (равныйЮ), его можно применять групповым способом в смеси с сухими кормами - комбикормом, дробленым зерном, отходами мукомольной промышленности.

4. Результаты исследований по установлению ВДУ купрвдола рекомендуются использовать в лекционных курсах по фармакологии с токсикологией и гельминтологии по вопросам , касающимся продуктов питания, полученных от дегельминтизированных животных в случаях вынужденного убоя.

б. В связи с необходимостью представления величины ВДУ при внедрении новых антгельминтиков, данная работа может быть использована в качестве методического пособия при разработке этого .показателя.

СПИСОК РАБОТ.

1. И.П.Головкина "К токсикологии куприхола" // "Ветеринарная газета". - 18-31 октября 1994. - N 21(57).

2. И.П.Головкина "Влияние куприхола на организм овец" // Труды ВИГИС. - Принята к печати 1994.

3. Т.П.Веселова, И.Н.Головкина " Экспериментальное установление максимально допустимого уровня (МДУ) куприхола в продуктах питания животноводства " // Ветеринария'. Принято к печати

. 1994.