Фасциолез крупного рогатого скота в Республике Татарстан

Тимербаева, Разалия Рустамовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Фасциолез крупного рогатого скота в Республике Татарстан
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Фасциолез крупного рогатого скота в Республике Татарстан"

На правах рукописи

ТИМЕРБАЕВА РАЗАЛИЯ РУСТАМОВНА

ФАСЦИОЛЕЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКА И ТЕРАПИЯ)

Специальность 03.00.19 - Паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Н,- Новгород - 2003

Работа выполнена на кафедре паразитологии и инвазионных болезней в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана

Научный руководитель доктор ветеринарных наук,

профессор М.Х.ЛУТФУЛЛИН

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук В.В. Саушкин;

кандидат ветеринарных наук, доцент В.Ф.Субботин

Ведущая организация: ГУ Научно-исследовательский ветеринарный

Институт Нечерноземной зоны РФ (НИВИ НЗ РФ)

Защита диссертации состоится « 20 »ноября 2003 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.220.047.02 в Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии (603107, Н.Новгород, проспект Гагарина 97).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан 15 октября 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат биологических наук, профессор

2.РОЗ-А

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В результате проведения оздоровительных мероприятий в ряде областей и республик Российской Федерации в последние годы достигнуты определенные успехи в снижении заболеваемости сельскохозяйственных животных гельминтозами. Однако, ущерб, наносимый животноводству инвазионными заболеваниями, продолжает оставаться значительным.

Одним из широко распространенных в Республике Татарстан гельминтозов в популяции крупного рогатого скота является фасциолез. В ряде хозяйств вовлеченность крупного рогатого скога в паразитарную систему фасциолезной инвазии достигает 40 и более процентов с развитием тяжелых, а порой необратимых форм патологии. При остром течении болезни нередко отмечают гибель, а при хроническом - снижение упитанности, прироста массы тела, молочной продуктивности животных (Н.В. Демидов, 1965; 1979; A.M. Сазанов, 1974; Я. Г. Гаджиев, 1983; С. П. Убираев, 1995).

В литературе имеется достаточное количество работ по изучению гельминтологической ситуации в популяциях различных видов животных в хозяйствах Республики Татарстан (А. В. Ефимов, А. А. Нигматуллин, 1936; И. П. Горшков, 1936; В. Г. Эвранова, 1942, 1957; М. X. Лутфуллин, Ф. М. Шакурова и др., 1996; А. X. Волков, 1997; М. Х.Лутфуллин, Д. Г. Латыпов и др., 1999; А. X. Волков, Т.С. Садыков и др., 2000). Однако ряд вопросов, касающихся эпизоотологического надзора, совершенствования методов прижизненной диагностики паразитарной системы фасциолеза, требуют дальнейшего изучения.

Основным методом борьбы с фасциолезом в настоящий период является дегельминтизация. Однако решающее значение в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при этом паразитозе имеет своевременная и безошибочная диагностика. Традиционные методы копрологической диагностики гельминтозов, в том числе и фасциолеза, которые существуют в настоящее время (последовательного промывания, Демидова, Вишняускаса и др.), требуют совершенствования, так как не позволяют выявлять ранние (начальные) стадии заболеваний. Поэтому в настоящее время настойчиво предпринимаются попытки диагностики заболеваний на ранней, личиночной стадии развития возбудителя путем использования различных иммунологических реакций (РСК, РИГА, реакция преципитации, аллергическая проба и т.д.). Однако иммунологические методы диагностики разработаны недостаточно.

Поэтому разработка новых более чувствительных копрологических, а также иммунологических методов диагностики фасциолеза в ранних стадиях его развития в организме животных остается актуальной проблемой.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы является совершенствование методов прижизненной) диагностики- -фасциолеза. Для реализации указанной цели были поставлены i

«ЧШМН

СПспрвт 09

- изучить распространение и сезонную динамику паразитарной системы фасциолеза в популяции крупного рогатого скота в Республике Татарстан;

- усовершенствовать методы копрологичекой диагностики фасциолеза крупного рогатого скота;

- разработать и изготовить соматические антигены фасциол для реакции связывания комплимента (РСК), иммуноферментного анализа (ИФА), изучить их специфичность и активность;

- В сравнительном аспекте изучить разрешающую способность РСК, ИФА, при диагностике фасциолеза.

изучить антгельминтную эффективность препаратов (вермитан, роленол, сантел, альбамелин, клозальбен) при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота.

- определить роль фасциол в возникновении неспецифических реакций при бруцеллезе.

Научная новизна. Впервые в условиях Республики Татарстан выявлены территориальные границы распространения и усовершенствован гельминтоовоскопический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота.

Разработан оригинальный способ изготовления высокоэффективного диагностикума из Р. Ьера^са для постановки РСК и ИФА.

Определена разрешающая способность серологических реакций при диагностике острого фасциолеза крупного рогатого скота.

Установлено гетерогенное воздействие фасциол на индукцию противобруцеллезных антител у крупного рогатого скота в хозяйствах благополучных по бруцеллезу.

Практическая ценность. Изучена эпизоотическая ситуация фасциолеза крупного рогатого скота в Республике Татарстан определены зоны с различной степенью экстенсивности инвазии. Разработан и предложен более эффективный гельминтоовоскопический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота.

Предложен метод объективной оценки эпизоотологической ситуации при • остром фасциолезе (в период миграции молодых фасциол в печени), а также определение антгельминтной эффективности препаратов с помощью реакции связывания комплемента с фасциоловым антигеном.

В хозяйствах неблагополучных по фасциолезу, с целью дифференциации положительно реагирующих на бруцеллез животных необходимо исследовать в РСК с фасциоловым антигеном.

Внедрение исследований. Приготовленные антигены для серологической диагностики фасциолеза испытаны и внедрены в республиканской и районных ветеринарных лабораториях Республики Татарстан, с целью дифференциации неспецифических реакций у коров, положительно реагирующих на бруцеллез.

На основании проведенных исследований разработаны следующие нормативно-технические документы:

1. Временная инструкция по изготовлению и контролю фасциолового антигена для РСК. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

2. Временное наставление по постановке и учету РСК с фасциоловым антигеном. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

3. Технические условия (ТУ) на изготовление, контроль и применение экспериментальных серий фасциолового антигена. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

4. Методические указания по дифференциации зараженного фасциолезом крупного рогатого скота от реагирующего положительно на бруцеллез. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

Результаты проведенных исследований, сформулированные в диссертации, внедрены в учебный процесс на кафедре паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины.

Апробация работ. Материалы диссертации доложены и обсуждены на республиканской научно-производственной конференции (Казань, 1999, 2001); международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета КГАВМ (Казань, 2000); секции паразитологии второго съезда ветеринарных врачей (Казань, 2000); на объединенных сессиях координационного совета по ветеринарной гельминтологии (Москва, 20002001); научно-техническом совете Казанской государственной академии ветеринарной медицины (Казань, 2001); всероссийской научно-производственной конференции (Казань, 2002); расширенном заседании сотрудников кафедр паразитологии, эпизоотологии, патологической анатомии, физиологии, акушерства, фармакологии, хирургии и биохимии КГАВМ (Казань, 2003).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Фасциолез как инвазионная паразитарная система (распрос гранение, сезонная динамика);

2. Усовершенствованный метод копрологической диагностики фасциолеза - наиболее эффективный метод прижизненной диагностики этой патологии;

3. Способ получения антигенов для серологической диагностики фасциолеза оказался эффективным и востребованным;

4. Комплекс методов прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота обеспечивает своевременное и надежное распознавание этой патологии;

5. Антигельминтная эффективность различных препаратов при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота, возможно оценивать по продолжительности специфического антитела образования;

6. Спонтанный фасциолез в ряде случаев является причиной индукции противобруцеллезных антител в популяции крупного рогатого скота.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 12 научных работ и получено удостоверение на рационализаторское предложение (№ 42302 за 2002).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 20 таблицами и 5 рисунками. Включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и приложения. Список использованной литературы, включает 202 источника (в том числе 40 иностранных авторов).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Материалы и методы

Работа выполнена на кафедре паразитологии Казанской государственной • академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, Казанском мясокомбинате, в хозяйствах и ветеринарных лабораториях Республики Татарстан (РТ) в 1999-2002 р.

Проведен ретроспективный статистический анализ эпизоотической ситуации ,по фасциолезу крупного рогатого скота в районах Республики Татарстан по материалам ветеринарной отчетности, а также по результатам собственных исследований.

Гельминтоовоскопические исследования проведены методами Щербовича, Береты, Маллори, Котельникова-Хренова, Вишняускаса, Вольфа, Сафиуллина, Котельникова-Вареничсва, Демидова и последовательных смывов. *.

При изыскании оптимальной технологии получения антигенов для реакции связывания комплемента (РСК) и реакции иммуноферментного анализа ,(ИФА) использованы различные методы воздействия на фасциол: химические, физические и их комбинации (подробное изложение в соответствующих разделах диссертации).

Материалом для получения фасциоловых антигенов служили гельминты, собранные из желчных протоков печени при убое крупного рогатого скота на Казанском мясокомбинате.

Активность фасциоловых антигенов испытывали в РСК и ИФА с сыворотками крови крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолезом. Сыворотки крови от здоровых животных служили как негативные, от больных дикроцелиозом и эхинококкозом - для контроля специфичности полученных фасциоловых диагностикумов. РСК ставили по общепринятой методике.

Определение специфичности и активности антигенов в ИФА осуществляли методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа, по А. Volieretal (1976).

Для очистки фасциолового антигена в ИФА использовали метод ультрацентрифугирования с помощью ультрацентрифуги \Л Вескман.

При изучении сравнительной эффективности аллергической пробы, РСК и гельминтоовоскопических методов исследований при фасциолсзе крупного рогатого скота использовали аллерген, изготовленный по методу В.Г. Эврановой (1956).

Реакцию учитывали через 1,5 - 2 и 24 часа И оценивали по следующей шкале: утолщение кожной складки на 5 мм и более - положительная реакция; до 4 мм - отрицательная реакция.

Для определения сезонной динамики и продолжительности сохранения фасциол в организме крупного рогатого скота с октября 1999 по февраль 2002 гг. систематически исследовали фекалии и сыворотку крови от 45 голов крупного рогатого скота разного возраста, спонтанно инвазированного фасциолезом.

Изучение эффективности вермитана (5 мг/1кг, перорально), роленола (0,5 мл/10 кг, внутримышечно), сантела (5 мг/кг по ДВ, внутримышечно), альбамелина (7,5 мг/кг, перорально) и клозальбена (6 мг/кг по ДВ, перорально) при фасциолезе и продолжительность сохранения комплементсвязывающих антител в сыворотке крови после дегельминтизации проводили в опыте, в котором по принципу аналогии были сформированы 6 групп телят (по 10 голов в каждой) 6-10 месячного возраста, спонтанно инвазированного фасциолезом. Исследование животных проводили до и через 7, 14, 21, 28, 35, 42 и 49 дней после дегельминтизации. В конце опыта часть животных убивали и подвергали неполному гельминтологическому вскрытию.

Сыворотку крови крупного рогатого скота, положительно или сомнительно реагирующего на бруцеллез из благополучных хозяйств повторно исследовали в РБП, РА и РСК со стандартным бруцеллезным и фасциоловым антигеном. РБП (роз-бенгал проба) ставили по общепринятой методике.

Бактериологическое исследование на бруцеллез патологического материала из лимфатических узлов и паренхиматозных органов крупного рогатого скота проводили по общепринятой методике.

Нами проведено 2010 копрологических, 3224 серологических, 240 аллергических исследований и 568 неполных гельминтологических вскрытий.

« Статистическую обработку цифровых данных проводили с заданной

надежностью (достоверностью) Р > 95 % или уровне значимости г = 0,05 на ЭВМ «Электроника МК-56» по разработанным программам (Р. X. Тукшаитов, Н. X. Нигматуллин, 1988).

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1 Эпизоотологическая ситуация по фасциолезу крупного рогатого скота в Республике Татарстан

. - Провели анализ эпизоотологической ситуации по фасциолезу и •' установили, что за последние шесть лет зараженность крупного рогатого скота этим паразитозом в целом по республике постепенно снижается. Если в 1996 и 1997 годы экстенсинвазированносгь (ЭИ) по результатам копрологических . исследований равнялся соответственно составлял 5,2 и 5,1 %, а по данным . ветеринарно-санитарной экспертизы - 5,6 и 5,3 %, то в последующие годы эти показатели были несколько ниже и составляли по результатам исследований фекалий в 1998 году - 4,6; 1999 - 3,2; 2000 - 1,9; в 2001 - 2,0 %. Экстенсинвазированность крупного рогатого скота фасциолезом по данным ветеринарно-санитарной экспертизы представлена на рис. 1.

В зависимости от экстенсинвазированности животных в Республике Татарстан выделено пять зон распространения фасциолеза: благополучная, слабого и умеренного распространения, периодических вспышек и широкого распространения.

Установлено, . что благополучная зона включает 2 юго-восточных (Бавлинский и Ютазинский) района, где в течение 5 лет не выявлены случаи инвазированности крупного рогатого скота фасциолезом. '

б 1 5 4

. • 3 2 I

1 2 3 4 5 6

ГОДЫ

1996 1997 1998 1999 2000 2001 экстенсинвазированность при убое скота — экстенсинвазированность при копрологическом исследовании Рис. 1 Экстенсинвазированность фасциолеза крупного рогатого скота в условиях РТ (по данным копрологических исследований и ветеринарно-санитарной экспертизы на

мясокомбинатах).

Установили, что в девяти в том числе в пяти юго-восточных (Бугульминский, Альметьевский, Лениногорский, Азнакаевский, Нижнекамский) и четырех заволжских (Камско-Устьинский, Апастовский, Кайбицкий, Буинский) районах (зона слабого распространения) инвазированными фасциолами оказались отдельные животные с низкой интенсивностью инвазии (ЭИ не более 2,0) и субклиническим течением фасциолеза.

В зону умеренного распространения вошли пять северных (Арский, Атнинский, Балтасинский, Высокогорский, Сабинский) районов, пять центральных (Тюлячинский, Алексеевский, Новошешминский, Чистопольский, Рыбно-Слободской) и два северо-восточных (Агрызский и Заинский) района. Экстенсинвазированность животных фасциолезом в этой зоне не превышала 5 % в течение всего периода исследований.

В зону периодических вспышек вошли шесть южных (Спасский, Алькеевский, Аксубаевский, Нурлатский, Черемшанский и Дрожжановский), а также три западных (Зеленодольский, Верхне-Услонский, Пестречинский) и один северо-восточный (Тукаевский) районы. Во влажные годы в этой зоне экстенсинвазированность крупного рогатого скота составляла около 10 %.

Зона широкого распространения включает четыре восточных (Актанышский, Мензелинский, Муслюмовский, Сармановский), четыре северных (Менделевский, Елабужский, Мамадышский и Кукморский) районов, а также два района, расположенных в поймах рек Камы и Волги (Тетюшский и Лаишевский). В этой зоне ежегодно проявляются острые вспышки фасциолеза и экстенсинвазированность варьирует в среднем от 10,0 до 36,0 %.

2.2 Совершенствование прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота 2.2.1 Изучение диагностической эффективности различных гельминтоовоскопических методов

В сравнительном аспекте изучили разрешающую способность методов копрологической диагностике фасциолеза (методы Щербовича, Вереты, Маллори, Котельникова-Хренова, Вишняускаса, Вольфа, Сафиуллина, Котельникова-Вареничева, Демидова и последовательных смывов) и установили, что седиментационный метод последовательных смывов проявил сравнительно низкую диагностическую эффективность. Этим методом удалось выявить в среднем 1,0+ 0,03% , а комбинированным методом Демидова - 1,4 % + 0,05% яиц фасциол.

Методом Щербовича с нитратом натрия, методом Маллори с сахаром яйца фасциол у этих животных не выявлялись.

С помощью флотационного метода Котельникова-Хренова с нитратом свинца удалось обнаружить 1,5 ±0,02% яиц фасциол.

Методом Вереты в комбинации солей нитрата аммония с хлоридом натрия выявили в среднем 0,7±0,02% яиц фасциол, а методом Вишняускаса-0,5+0,01 %.

Диагностическая эффективность комбинированных методов Щербовича и Вольфа была несколько выше. Так, при методе Щербовича сульфатом магния было 'Обнаружено 2,1±0,06 %, а с тиосульфатом натрия - 2,8+0,14 % яиц фасциол. Методом Вольфа с карбонатом калия выявили 2,2±0,07 %, а методом Сафиуллина - 14 % +0,6% яиц фасциол, заложенных в пробе.

По методу Котельникова-Вареничева, где в состав флотационных жидкостей входит хлорид цинка (2 кг на 1 л воды) выявлено в среднем 20 %+ Г,0 яиц фасциол.

Таким образом, результаты сравнительного изучения эффективности 12 гельминоовоскопических методов показали, что наиболее чувствительным является метод Котельникова - Вареничева.

Необходимо отметить, что из-за большого удельного веса насыщенного раствора хлорида цинка (1,82) поверхностная пленка после центрифугирования материала, была сильно засорена непереваренными остатками корма, что затрудняет просмотр материала. В дальнейшем нами был модифицирован комбинированный метод Котельникова-Вареничева с насыщенным раствором хлорида цинка, который приняли за базовый. К этому раствору добавляли насыщенный раствор поваренной соли в соотношениях, 1:0,5; 1:1; 1:1,5; 1:2; 1:2,5; 1:3; 1:4 (7 разведений). Исследовали пробы фекалий с заведомо известным количеством яиц фасциол.

Исследования показали, что для гельминтоовоскопии яиц трематод наиболее эффективным является метод Котельникова-Вареничева с использованием комбинированного флотационного раствора хлорида цинка и хлорида натрия в соотношении 1:0,5, который дает возможность выявить 32+1,1% яиц фасциол, причем поверхностная пленка жидкости при этом была чистая и исследуемые капли не подвергались кристаллизации в течение 3-х часов.

Следующим этапом наших исследований явилось усовершенствование метода Котельникова-Вареничева, используя разные флотационные жидкости, приготовленные как из двух, так и из трех ингредиентов. Компонентами служили насыщенные растворы хлорида цинка (плотность 1,82), хлорид натрия (плотность 1,19) и раствора сахара (плотность 1,28). Эффективность этого метода определяли в разных соотношениях базовых растворов, которые использовали в качестве флотационных жидкостей.

Установили, что введение раствора сахара в состав компонентов флотационной жидкости, состоящей из хлорида цинка и хлорида натрия, и использование их в соотношении 2:1:1 (хлорид цинка, хлорид натрия и сахар) дает возможность повысить чувствительность метода и выявить в среднем 60,2 + 1,2 % яиц фасциол.

2.2.2 Совершенствование серологической диагностики фасциолеза

Для изучения сравнительной эффективности различных иммунологических методов диагностики фасциолеза нами проведено испытание реакции связывания комплемента (РСК), реакции иммуноферментного анализа (ИФА) и аллергической пробы.

В реакции связывания комплемента испытывали антигены, приготовленные различными методами: комбинированный, повторного замораживания и оттаивания, ацетоновый, эфирный, ультразвуковой и диметилсульфоксидный. Исследования показали, что наибольшую активность проявляет антиген, приготовленный комбинированным методом. Этот метод включает в себя следующие этапы: промывание фасциол и их высушивание, воздействие диметилсульфоксидом, центрифугирование, замораживание, оттаивание надосадочной жидкости и ее диализ. Изготовленный антиген с позитивной фасциоловой сывороткой в разведении 1:20 реагировал на 4 креста в разведении антигена 1:20, а с негативной сывороткой в разведении 1:5 и 1:10 реакция была отрицательной во всех разведениях антигена.

Антиген, полученный методом замораживания и оттаивания, также был специфичным и реагировал отрицательно с негативной сывороткой в разведении 1:5 и 1:10 во всех испытуемых разведениях антигена. Однако он по активности уступал первому диагностикуму и в разведении позитивной сыворотки 1:20 при разведении антигена 1:20 реагировал лишь на 2 креста.

Антигены, полученные эфирным, ацетоновым и ультразвуковым экстрагированием были наименее активными в РСК и с позитивной фасциолезной сывороткой в разведении 1:20 реагировали только на 1 крест. Кроме того, эти антигены показали неспецифические реакции, то есть с негативной сывороткой в разведении 1:5 реагировал на 2 креста (антикомплементарные свойства).

Антиген, приготовленный экстрагированием диметисульфоксидом, был специфичным, но по активности уступал диагностикуму, полученному комбинированным способом.

Таким образом, антиген, полученный комбинированным методом, оказался наиболее активным и специфичным в РСК, предельный титр которого равнялся 1:40, а рабочий - 1:20. Этот диагностикум мы использовали в последующих исследованиях.

В дальнейшем специфичность этого антигена испытывали в производственных условиях при исследовании 119 сывороток крупного рогатого скота из 4 благополучных по фасциолезу хозяйств. От этих же животных были выборочно исследованы пробы фекалий методом последовательного промывания. Результаты показали, что яйца фасциол в исследованных пробах не обнаруживаются, а РСК с фасциоловым антигеном во

всех случаях была отрицательной, что говорит о специфичности этого диагностикума.

В последующем изучали диагностическую эффективность РСК, при различной интенсинвазированности крупного рогатого скота фасциолами. При убое были получены сыворотки от 22 голов крупного рогатого скота, в желчных протоках печени которых паразитировали от одной до 15 фасциол. В результате постановки РСК с испытуемым антигеном было установлено, что положительно реагировали 18 (81,8 %), сомнительно - 2 (9,1 %) и отрицательно

- 2 (9,1 %) животных.

У 100 голов крупного рогатого скота, в том числе 30 голов молодняка 1,5

- 2 лег, 30 нетелей и 40 коров, у которых фасциолы не выявлены, результаты серологических исследований были отрицательными.

При исследовании 20 сывороток крупного рогатого скота, инвазированного дикроцелиозом (от 100 до 1000 и более экз.), в 19 пробах (95 %) результаты РСК были отрицательные, 1 (5 %) проба показывала сомнительный результат.

Исследование 10 сывороток от инвазированного эхинококкозом крупного рогатого скота (интенсинвазированность от 1 до 12 ларвоцист) показало, что в РСК с фасциоловым антигеном в 9 случаях результаты были отрицательные, одно животное у которого в печени и легких были 12 крупных пузырей, показало положительный результат в РСК с фасциоловым антигеном (1:20 +++).

В дальнейшем испытание фасциолового антигена в РСК проводили с сыворотками крови крупного рогатого скота из 10 хозяйств неблагополучных по фасциолезу. Одновременно животных исследовали гельминтоовос-копическими методами, а также учитывали данные Арской ветеринарной лаборатории и Казанского мясокомбината. Установили, что из 1400 животных, исследованных в РСК, 232 (16,6%) были выявлены специфические комплиментсвязывающие антитела, в то время как копрологическим методом последовательного промывания фасциолез был установлен только у 23 (1,6%) животных. При сравнительном испытании методов последовательного промывания и модифицированного нами метода установили, что более чувствительным оказался последний, который выявил в 8,12 раза больше больных фасциолезом животных.

Результаты исследований показали, что в неблагополучных по фасциолезу хозяйствах, разрешающая способность РСК с фасциоловым антигеном значительно превосходит другие методы.

На следующем этапе исследований провели совершенствование серологической диагностики фасциолеза путем разработки активного и специфического антигена для реакции иммуноферментного анализа.

Антигены готовили разными физическими и физико-химическими методами. Первая технологическая схема заключалась в том, что взвесь фасциол после соответствующих обработок подвергали ультразвуковому воздействию. При втором методе на взвесь фасциол воздействовали 1 %

раствором тритона Х-100, далее ультразвуком и суспензию осаждали насыщенным раствором сульфата аммония. Третий метод заключался в том, что во взвесь фасциол добавляли диметилсульфоксид и подвергали 5-ти кратному замораживанию и оттаиванию.

При постановке ИФА с приготовленными антигенами было установлено, что антиген, полученный с применением диметилсульфоксида, в разведении 1:100 с позитивной фасциоловой сывороткой в разведении 1:800 реагировал положительно, а с негативной сывороткой в разведении 1:200 и 1:400 реакция была отрицательной.

Антигены, полученные ультразвуковым воздействием, а также с применением тритона Х-100 были специфичными и реагировали отрицательно с негативной сывороткой в разведениях 1:200 и 1:400 при разведении антигена 1:100. Однако по активности эти антигены уступали первому диагностикуму. Так, при разведении позитивной сыворотки 1:200 и антигена 1:100 реакция была положительной, а при разведении 1:400 - отрицательной.

Таким образом, из всех антигенов наиболее активным и специфичным в ИФА оказался диагностикум, полученный с применением диметилсульфоксида, который мы использовали в дальнейших исследованиях.

Результаты изучения специфичности этого антигена показали, что при исследовании 40 негативных проб сывороток крови реакция в ИФА была отрицательной, 12 позитивных фасциоловых сывороток показали положительный результат. Из 10 дикроцелиозных сывороток одна проба и из 10 эхинококкозных - две пробы, также реагировали позитивно, то есть и при ИФА не исключается возможность перекрестных реакций с фасциоловым антигеном.

Для дальнейшей очистки полученного фасциолового антигена из тотальных белковых экстрактов фасциол был применен метод ультрацентрифугирования. Полученный в этом агрегате антигенный препарат был свободен от примесей более высокомолекулярных паразитарных антигенов и других высокомолекулярных компоненюв, в том числе и белков хозяина, присутствующих в неочищенных экстрактах и проявил большую специфичность.

При исследовании сывороток крупного рогатого скота в ИФА с фасциоловым антигеном в отношении негативной сыворотки коэффициент специфичности был равен 1,5 и выше, что позволяет считать реакцию специфичной.

Для изучения диагностической эффективности реакции иммуноферментного анализа в сравнении с РСК исследовали сыворотки крови крупного рогатого скота, спонтанно зараженного фасциолами в количестве 1-15 экз.

Исследования показали, что из 22 сывороток крупного рогатого скота положительно в ИФА реагировали 20 (90,9 %), отрицательно - 2 (9,1 %), а в РСК положительно - 18 (81,8 %), сомнительно - 2 (9,1 %) и отрицательно - 2

(9,1 %)■

Дальнейшее испытание полученного диагностикума проводили также с сыворотками крови крупного рогатого скота, взятого во время убоя животных на Казанском мясокомбинате (табл. 1). Установили, что как молодняк до 2-х лег, в количестве 50 голов, а так же нетели и коровы (80 гол.) свободные от гельминтов, показали отрицательные результаты при серологическом исследовании. Из инвазированных фасциолами 58 животных в острой форме, в ИФА положительно реагировали 56 (96,6 %), в РСК - 53 (91,4 %).

При исследовании 144 голов крупного рогатого скота, инвазированного половозрелыми фасциолами, в ИФА положительно реагировали 137, что составляет 95,1 % о г числа инвазионного крупного рогатого скота, в РСК 130 (90,2 %) животного.

Таблица 1

Данные о специфичности и диагностической эффективности ИФА с фасциоловым антигеном

№ Результаты ветеринарно-санитарной экспертизы по ,, данным убоя Исследовано перед убоем серологически (гол.) Реагировало серологически в

ИФА РСК

гол % гол %

1. Здоровые животные (молодняк 50 - - - -

до 2-х лет)

2. ' Здоровые живо1НЫе (нетели и 80 - - - -

коровы)

3. Инвазированные фасциолами 58 56 96,6 53 91,4

(острое течение)

4.; Инвазированные фасциолами 144 137 95,1 130 90,2

(хроническое течение)

5. Инвазированные дикроцелиями 45 1 2,2 2 4,4

6. Инвазированные ларвальным 33 2 6,1 3 9,1

эхинококкозом

Таким образом, диагностическая эффективность ИФА при остром течении фасциолеза равна 96,6 %, а при хроническом - 95,1 %, а показатели РСК соответственно составляют 91,4 % и 90,2 %.

При изучении специфичности антигена нами были исследованы также серологически 45 животных, инвазированных дикроцелиями. При этом положительные результаты в ИФА были отмечены у одного (2,2 %), а в РСК у двух (4,4 %) животных.

При исследовании 33 голов крупного рогатого скота, инвазированных Е/ ипПосикпБ, в ИФА позитивные показания отметили у двух (6,1 %), в РСК -трех (9,1 %) животных.

2.2.3 Аллергическая диагностика фасциолеза крупного рогатого скота

Разрешающую способность аллергической пробы при фасциолезе изучали в 2-х опытах на 200 коровах и 40 нетелях в коллективном предприятии «Алга» Кукморского района неблагополучном по фасциолезу. Одновременно с аллергическими исследованиями проводили серологические и копрологи-ческие исследования.

В результате проведенных исследований было установлено, что при первом исследовании в октябре 2000 года из 200 коров реагировали на фасциоловый аллерген 30 (15,0 %), в то время как в РСК с фасциоловым антигеном выявлены позитивные показания у 36 (18,0 %) животных.

При исследовании 40 нетелей в этот же период на фасциоловый аллерген реагировали положительно 7 голов (17,5 %), в РСК позитивные показания отметили у 8 (20 %) животных.

При повторном исследовании в феврале 2001 года из исследованных 200 коров реагировали положительно на фасциоловый аллерген 20 (10 %), в РСК с фасциоловым анчигеном позитивные показания установили у 32-х (16 %) животных.

Из 40 нетелей за этот период с фасциоловым аллергеном реагировали положительно 5 (12,5 %), в РСК позитивные показания отметили у 7-ми (17,5%) животных.

Таким образом, количество животных, выявленных аллергической пробой как при остром, так и при хроническом течениях фасциолеза, было меньше чем установленных серологическим методом.

Результаты исследования дают основания заключить, что серологические методы исследований выявляют большее количество инвазированных фасциолезом животных.

Диагностическая эффективность копрологических методов зависела от сроков исследования. Так, при исследовании в октябре с помощью метода Котельникова-Вареничева было выявлено 2,0 % коров и 5 % нетелей, и в феврале соответственно 13 % и 15 %. Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что аллергический метод диагностики дает возможность выявлять острое течение фасциолеза. Вместе с тем, внутрикожная проба по диагностической эффективности уступает показателям серологического исследования животных в РСК. (рис. 2).

35 30 25 20 15 -I 10 5 0

35 30 25 20 15 10 5 0

октябрь

35 ч 30 25 20 15 -I 10

октябрь

35 п 30 25 20

10 -

февраль

1 - копрологический метод

а - метод последовательных смывов

б - усовершенствованный метод Котельникова-Вареничева

2 - аллергический метод

3 - серологический метод

Рис. 2 Сравнительная эффективность различных методов прижизненной диагностики фасциолеза у коров (А) и нетелей (Б)

2.3 Сезонная динамика и продолжительность сохранения фасциол в организме крупного рогатого скота

Комплементсвязывающиеся антитела, улавливаемые с фасциоловым антигеном, начали выявляться при исследовании в августе месяце. В этот

период реагировали 2 телки из 35, что составляет 5,7 %, а титры антител у них равнялись 1:5. При последующем исследовании в сентябре количество реагирующих животных увеличилось до 11,2 % (4 гол.), а титры антител равнялись 1:5 - 1:10. В октябре последовало дальнейшее увеличение реагирующих на фасциолез животных и составило 14,3 % (5 гол.). В ноябре экстенсивность заражения животных продолжала нарастать, причем диагноз в этот период был установлен и копроовоскопически. В фекалиях у 3 голов (8,6%) были обнаружены яйца фасциол. Комплементсвязывающиеся антитела выявлены у 8 (22,8 %) телят, что на 8,5 % больше, чем в октябре месяце. Количество зараженных животных увеличивалось до января месяца. В этот период количество больных животных, выявленных серологическим методом и гельминтоовоскопией, равнялось 34,4 % (11 гол.) и 25,7 % (9 гол.) соответственно. В феврале отмечали тенденцию к незначительному снижению экстенсивности инвазии. У телят контрольной группы на протяжении опыта фасциолез не был установлен.

Изучение вопроса о продолжительности персистирования фасциол в организме крупного рогатого скота при спонтанном заражении показало, что в начале опыта (октябрь 1999 года) 38 коров из 200 реагировали положительно в РСК, а яйца фасциол в это время не выделялись. В феврале 2000 года комплементсвязывающие антитела обнаружились у 17 животных из 38, у 9 из них выделялись яйца фасциол. При последующем исследовании в апреле этого года реагирующих в РСК составляло 12, копрологически - 6, в июле - 9 и 3 животных соответственно. В октябре этого же года в РСК реагировали положительно 5 голов, а яйца фасциол выделялись только у 2-х. В январе 2001 года позитивные показания РСК сохранили 2 животных, а яйца фасциол были выявлены у одной коровы. В конце марта 2001 года результаты копрологичсеских исследований были отрицательными, а положительные показания РСК сохранялись.

Таким образом, для объективной прижизненной оценки эпизоотической ситуации по фасциолезу в стаде необходимо использовать серологический метод, потому что не все молодые фасциолы попавшие в организм достигают половозрелой формы и выделяют яйца фасциол. Кроме того, исследования показали, что при слабой инвазированности коров фасциолами возможно самовыздоровление. Организм крупного рогатого скота освобождается от половозрелых гельминтов в различные сроки, начиная от 3-х до 17 месяцев. Возможно, это обусловлено преждевременным выделением или гибелью фасциол под воздействием защитных реакций организма хозяина.

2.4 Эффективность антгельминтиков при фасциолезе крупного рогатого скота

Установили, что через 7 дней после дегельминтизации крупного рогатого скота вермитаном, роленолом и сантелом (1, 2, 3 группы) в пробах фекалий у

всех животных яйца фасциол не выявлялись. Титры антител к этому времени снизились и через 28-35 дней большинство животных утратили антител. Полное угасание антител произошло к 42-49 дням. При убое животных в конце опыта (по 2 из каждой группы) фасциолы не были выделены. Следовательно, экстенс- и интенсэффективность вермитана, роленола и сантела составила 100 %. (Рис. 3)

абв абв абв абв л б ъ а б к аба

а - титр антител до дегельминтизации б - через 7 дней

в - через 49 дней после дегельминтизации

, Рис. 3. Динамика титров антител у крупного рогатого скота при фасциолезе после дегельминтизации (1 - вермитан; 2 - роленол; 3 - сантел; 4 - альбамелин; 5 и 6 - клозальбен; 7 - контроль)

После дегельминтизации альбамелином (4-ая группа), а также клозальбеном (5 1руппа) спустя 7 дней и в последующие сроки у 9 животных из 10 яйца фасциол не обнаруживались и антитела у них не выявлялись до конца срока исследования (49-ый день). В то же время у одного теленка, как из 4-ой, так и из 5-ой групп, в фекалиях в течение всего периода исследований были обнаружены яйца фасциол и антитела в титрах 1:10 - 1:20. Следовательно, окстенсэффективность альбамелина и клозальбена в наших опытах по данным копрологических и серологических исследований составила 90 %.

Шестая группа была сформирована из телят, в организме которых, по данным копрологических исследований, яйца фасциол отсутствовали, но в сыворотке крови у них при исследовании в РСК было установлено наличие антител. Спустя 7 дней после введения клозальбена титры антител по группе снизились и составили 6,0 ± 0,7, против 10,0 ± 1,8 до введения препарата. Начиная с 28 дня, у пяти телят титры стали нарастать и достигли 1:20 и держались на этом уровне до 49 дней. Кроме того, в этот период у 3-х из 5-ти животных в фекалиях были обнаружены яйца фасциол. В сыворотке крови остальных 5 животных титры антител постепенно снизились и к 42 дню не выявлялись. Яйца фасциол у этих телят не были обнаружены. Следовательно, экстенсэффективность клозальбена составила 50 %.

Таким образом, проведенные исследования показали возможность использования РСК для контроля эффективности дегельминтизации.

2.5 Индукция противобруцеллезных антител у крупного рогатого скота на фоне спонтанного фасциолеза.

При исследовании 25 сывороток из 4-х хозяйств Тетюшского района (благополучные по бруцеллезу более 40 лет) с единым бруцеллезным антигеном в РА в титре 50 МЕ реагировали 13, 100 МЕ - 9 и 200 МЕ - 3 пробы. РБП была положительная и совпала у 3-х животных. В РСК на бруцеллез все 25 проб реагировали отрицательно.

При исследовании этих сывороток с фасциоловым антигеном в РСК в титре 1:5 и 1:10 положительная реакция была установлена в 13 пробах (52 %). У коров, положи 1ельно реашрующих в РСК с фасциоловым антигеном, были взяты пробы фекалий и повторно кровь для определения антител. Копрологическим исследованием 13 животных, которые положительно реагировали с фасциоловым антигеном, выделены яйца этого гельминта. Все эти животные положительно реагировали с бруцеллезным антигеном.

При убое 5-ти животных из этой группы в печени были обнаружены фасциолы, интенсинвазированность которыми составляла от 24 до 57 экз. Результаты бактериологического исследования на бруцеллез, были отрицательные.

После дегельминтизации остальных 8 животных, реагирующих положительно на фасциолез и бруцеллез, при серологическом исследовании их через 40 дней после введения антгельминтика, антитела в сыворотке крови не были обнаружены. Результаты копрологических исследований также были отрицательными.

При серологическом исследовании 10 проб крови от коров частного сектора г. Казани (ранее реагировавшие на бруцеллез) было установлено, что в РА в титрах 50 и 100 МЕ реагировали соответственно 4, в титрах 200 МЕ — 2 животных. РСК с фасциоловым антигеном была положительная у всех 6 коров в титре 1:10 и выше. Через 49 дней после дегельминтизации этих животных

вермитаном результаты серологических (на бруцеллез и фасциолез) и копрологических исследований были отрицательные.

Аналогичные данные были получены и при исследовании 16 голов крупного рогатого скота, реагирующего на бруцеллез в хозяйствах Нурлатского района.

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что у крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолезом, могут индуцироваться антитела, выявляемые РА с единым бруцеллезным антигеном.

ВЫВОДЫ

1. В условиях республики Татарстан сформировались пять зон риска функционирования паразитарной системы фасциолеза: благополучная, слабого (экстенсинвазированность до 2 %); умеренного распространения (ЭИ до 5 %); периодических вспышек (ЭИ до 10 %) и широкого распространения (ЭИ от 10 до 36 %).

2. В контролируемых опытах с исскуственной закладки яиц фасциол установлено, что из 12 гельминтоовоскопических методов диагностики фасциолеза крупного рогатого скота, наиболее высокой разрешающей способностью обладает метод Котельникова-Вареничева, позволяющий выявлять в среднем 20±1,0 % яиц фасциол.

2.1 Модифицированный метод Котельникова-Вареничева с флотационной жидкостью, состоящей из насыщенного раствора хлорида цинка, хлорида натрия и сахара в соотношении 2:1:1, позволяет выявить 60,2±1,2 % заложенных яиц фасциол, в то время как седиментационный метод последовательных смывов в среднем 1±0,03 %.

3. Разработанный комбинированный метод экстрагирования фасциол позволяет получить активный и специфичный антиген для реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа.

4. Серологическая диагностика (РСК, ИФА) фасциолеза позволяет определять степень и ранние сроки инвазированности животных при фасциолезе. В неблагополучных по фасциолезу хозяйствах РСК с фасциоловым антигеном выявляет большее количество зараженных животных в сравнении с гельминтоовоскопическими методами.

4.1 Реакция иммуноферментного анализа (ИФА) в сравнении с реакцией связывания комплемента оказалась более чувствительным методом обнаружения фасциоловых антител у крупного рогатого скота.

5. Аллергический метод диагностики фасциолеза целесообразно использовать при остром течении болезни. Диагностическая эффективность этого метода ниже, чем серологического.

(ноябрь). Максимальное количество реагирующих в РСК животных выявляется в январе, с последующей тенденцией их к снижения.

7. В контролируемых опытах установлено, что наивысшей фасциолоцидной активностью при имагинальном фасциолезе обладают вермитан, роленол, сантел (100%), альбамелин и клозальбен (90%), при преимагинальном - клозальбен (50%). Использование реакции связывания комплемента с фасциоловым антигеном позволяет контролировать антгельминтную эффективность препаратов.

8. У крупного рогатого скота при спонтанном заражении фасциолезом установлена индукция противобруцеллезных антител, выявляемых РА и реже в РБП. Постановка РСК с фасциоловым антигеном позволяет дифференцировать неспецифические реакции на бруцеллез у животных инвазированных фасциолезом.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ:

1. Усовершенствованный гельминтоовоскопический метод Котелъникова-Вареничева диагностики фасциолеза и дикроцелиоза у сельскохозяйственных животных (удостоверение на рационализаторское предложение № 425-02 от 13.03.02.).

2. Временная инструкция по изготовлению и контролю фасциолового антигена для РСК. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

3. Временное наставление по постановке и учету РСК с фасциоловым антигеном. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

4. Технические условия (ТУ) на изготовление, контроль и применение экспериментальных серий фасциолового антигена. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

5. Методические указания по дифференциации зараженного фасциолезом крупного рогатого скота от реагирующего положительно на бруцеллез. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гельминтозы жвачных / Лутфуллин М.Х., Шакурова Ф.М., Гоголев В.Б., Тимербаева P.P. // Материалы республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства. - Казань, 1997. - С.28.

2. Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Тимербаева P.P. Диагностическая значимость копрологических исследований и вскрытия печени при фасциолезе крупного рог атого скота // Материалы международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета - Казань, 2000. - С.82-83.

3. Латыпов Д.Г., Тимербаева Р.Р. Изыскание антигенов для серологической диагностики фасциолеза крупного рогатого скота // Материалы международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета. - Казань, 2000. -С.81-82.

4. Латыпов Д.Г., Лутфуллин М.Х., Тимербаева P.P. Продолжительность жюни фасциол в организме крупного рогатого скота // Материалы научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2001. - С.47-49.

5. Латыпов Д.Г., Лутфуллин М.Х., Тимербаева P.P. Неспецифические показатели на бруцеллез у крупного рогатого скота больного фасциолезом // Материалы научно-производственной конферешдаи по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2001. С.49-50.

6. Эпизоотическая ситуация по фасциолезу крупного рогатого скота в Республике Татарстан / Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Гайсин Г.Н., Тимербаева P.P. // Ветеринарный врач. - 2001. - № 3. - С.66-68.

7. Тимербаева P.P. ИФА при фасциолезе крупного рогатого скота // Материалы научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2001. - С. 85.

8. Тимербаева P.P., Латыпов Д.Г., Горшкова Г.Г. Динамика комплементсвязывагощих антител у спонтанно инвазированного фасциолезом крупного рогатого скота после применения аттельминтиков // Ученые записки КГАВМ. - Казань, 2002, том 172. -С. 137-140.

9. Латыпов Д.Г., Лутфуллин М.Х., Тимербаева P.P. Диагностическая эффективность реакции связывания комплемента при фасциолезе крупного рогатого скота // Ученые записки КГАВМ. - Казань, 2002, том 172.-С.140-144.

Ю.Лутфуллин М.Х., Горшкова Г.Г., Тимербаева P.P. Усовершенствование комбинированного гельминтоовоскопического метода Щербовича для диагностики трематодозов у сельскохозяйственных животных. // Теория и практика в борьбе с паразитарными болезнями (зоонозы).- М., 2002, выпуск 3. - С.203-204.

11.Латыпов Д.Г., Лутфуллин М.Х., Тимербаева P.P. Эффективность различных гельмингоовоскопических методов при трематодозах животных. // Материалы Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. -Казань, 2002, часть 1. -С.77-79.

^.Модифицированный гельминтоовоскопический метод для диагностики трематодозов крупного рогатого скота / Латыпов Д.Г., Лутфуллин М.Х., Горшкова Г.Г., Тимербаева P.P. // Труды Всероссийского института гельминтологии им. К.И.Скрябина. - М., 2003.-Том. 1. -С.136-145.

На правах рукописи

Тимербаева Р.Р.

Фасциолез крупного рогатого скота в Республике Татарстан (эпизоотология, диагностика и терапия)

03.00.19 - паразитология

Автореферат

диссертации на соискании ученой степени кандидата ветеринарных наук

компьютерная верстка С.А.Храмова

Корректор О.Ф.Костина Лицензия ЛР № 040284 от 6.05.98

Подписано в печать 9.10.2003 г. Формат 60/84 1/16. Печать офсетная. Бумага офсетная. Усл.печ.л. -1,0. Тираж-100 экз. Заказ № 476

Типография НГСХА, 603107, Н.Новгород, пр.Гагарина, 97.

2-лсз-А

$ 16733

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Тимербаева, Разалия Рустамовна

Введение

Обзор литературы

1. Эпизоотологические особенности фасциолеза

2. Диагностика гельминтозов

2.1 Копроскопическая диагностика

2.2 Серологическая диагностика

2.3 Аллергическая диагностика 28 3 Лечение при фасциолезе

Собственные исследования

1 Материал и методы

2. Результаты исследования

2.1 Эпизоотологическая ситуация по фасциолезу крупного 49 рогатого скота в республике Татарстан

2.2 Совершенствование прижизненной диагностики 59 фасциолеза крупного рогатого скота

2.2.1 Изучение диагностической эффективности 59 различных гельминтоовоскопических методов

2.2.2 Совершенствование серологической диагностики 71 фасциолеза

2.2.3 Аллергическая диагностика фасциолеза крупного 92 рогатого скота

2.3 Сезонная динамика и продолжительность сохранения 98 фасциол в организме крупного рогатого скота

2.4 Эффективность некоторых антгельминтиков при 102 фасциолезе крупного рогатого скота

2.5 Индукция противобруцеллезных антител у крупного рогатого скота на фоне спонтанного фасциолеза.

Обсуждение результатов исследований

Выводы

Практические предложения

Введение Диссертация по биологии, на тему "Фасциолез крупного рогатого скота в Республике Татарстан"

Одним из широко распространенных в Республике Татарстан гельминтозов в популяции крупного рогатого скота является фасциолез. В ряде хозяйств вовлеченность крупного рогатого скота в паразитарную систему фасциолезной инвазии достигает 40 и более процентов с развитием тяжелых, а порой необратимых форм патологии. При остром течении болезни нередко отмечают гибель, а при хроническом - снижение упитанности, прироста массы тела, молочной продуктивности животных (Н.В. Демидов, 1965; 1979; A.M. Сазанов, 1974; Я.Г. Гаджиев, 1983; СЛ. Убираев, 1995).

В литературе имеется достаточное количество работ по изучению гельминтологической ситуации в популяциях различных видов животных в хозяйствах Республики Татарстан (А.В. Ефимов, М.Т. Нигматуллин, 1936; И.П. Горшков, 1936; В.Г. Эвранова, 1942, 1957; М.Х. Лутфуллин, Ф.М. Шакурова и др., 1996; А.Х. Волков, 1997; М.Х.Лутфуллин, Д.Г. Латыпов и др., 1999; А.Х. Волков, Т.С. Садыков и др., 2000). Однако, ряд вопросов, касающихся эпизоотологического надзора, совершенствования методов прижизненной диагностики паразитарной системы фасциолеза, требуют дальнейшего изучения.

Основным методом борьбы с фасциолезом в настоящий период является дегельминтизация. Однако решающее значение в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при этом паразитозе имеет своевременная и безошибочная диагностика. Традиционные методы копрологической диагностики гельминтозов, в том числе и фасциолеза, которые существуют в настоящее время (последовательного промывания, Демидова, Вишняускаса и др.) требуют совершенствования, так как не позволяют выявлять ранние (начальные) стадии заболеваний. Поэтому в настоящее время настойчиво предпринимаются попытки диагностики заболеваний на ранней, личиночной стадии развития возбудителя путем использования различных иммунологических реакций (РСК, РНГА, реакция преципитации, аллергическая проба, ИФА и т.д.). Однако иммунологические методы диагностики разработаны недостаточно.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы является совершенствование методов прижизненной диагностики фасциолеза.

Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

- усовершенствовать методы копрологичекой диагностики фасциолеза крупного рогатого скота;

- разработать и изготовить соматические антигены фасциол для реакции связывания комплемента (РСК), иммуноферментного анализа (ИФА), изучить их специфичность и активность;

- в сравнительном аспекте изучить разрешающую способность РСК, ИФА, при диагностике фасциолеза; изучить антгельминтную эффективность некоторых препаратов (вермитан, роленол, сантел, альбамелин, клозальбен) при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота;

- определить роль фасциол в возникновении неспецифических реакций при бруцеллезе.

Научная новизна. Впервые выявлены условные зоны распространения фасциолеза в условиях Республики Татарстан и усовершенствован гельминтоовоскопический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота.

Разработан оригинальный способ изготовления высокоэффективного диагностикума из F. hepatica для постановки реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа.

Определена разрешающая способность серологических реакций при диагностики острого фасциолеза крупного рогатого скота.

Установлено гетерогенное воздействие фасциол на индукцию противобруцеллезных антител у крупного рогатого скота в хозяйствах, благополучных по бруцеллезу.

Практическая ценность. Изучена эпизоотическая ситуация фасциолеза крупного рогатого скота в Республике Татарстан и определены зоны с различной степенью экстенсивности инвазии. Разработан и предложен более эффективный гельминтоовоскопический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота.

Предложен метод объективной оценки эпизоотологической ситуации при остром фасциолезе (в период миграции молодых фасциол в печени), а также определение антгельминтной эффективности препаратов с помощью реакции связывания комплемента с фасциоловым антигеном.

В хозяйствах, неблагополучных по фасциолезу, с целью дифференциации положительно реагирующих на бруцеллез животных необходимо исследовать в РСК с фасциоловым антигеном.

Внедрение исследований. Приготовленные антигены для серологической диагностики испытаны и внедрены в республиканской ветеринарной лаборатории и районных ветеринарных лабораториях

Республики Татарстан с целью дифференциации неспецифических реакций у коров, положительно реагирующих на бруцеллез.

На основании проведенных исследований разработаны следующие нормативно-технические документы:

2. Временное наставление по постановке и учету РСК с фасциоловым антигеном. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

4. Методические указания по дифференциации зараженного фасциолезом крупного рогатого скота от реагирующих положительно на бруцеллез животных. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на республиканской научно-производственной конференции (Казань, 1999, 2001); международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2000); секции паразитологии второго съезда ветеринарных врачей (Казань, 2000); на объединенных сессиях координационного совета по ветеринарной гельминтологии (Москва, 20002001); научно-техническом совете Казанской государственной академии ветеринарной медицины (Казань, 2001); всероссийской научно-производственной конференции (Казань, 2002); расширенном заседании сотрудников кафедр паразитологии, эпизоотологии, патологической анатомии, анатомии, физиологии, акушерства, фармакологии, хирургии и биохимии КГАВМ (Казань, 2003).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Фасциолез как инвазионная паразитарная система (распространение и сезонная динамика);

5. Антгельминтная эффективность различных препаратов при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота, возможно оценивать по продолжительности специфического антителообразования;

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 12 научных работ и получено удостоверение на рационализаторской предложение (№ 42302 за 2002).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 20 таблицами и 5 рисунками. Включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и приложение. Списк ипользованной литературы включает 202 источника (в том числе 40 иностранных авторов).

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Тимербаева, Разалия Рустамовна

ВЫВОДЫ

1. В условиях Республики Татарстан сформировались пять условных зон функционирования паразитарной системы фасциолеза: благополучная (5 лет не регистрируются заболевание); слабого распространения (экстенс-инвазированность до 2 %), умеренного распространения (ЭИ до 5%); периодических вспышек (ЭИ до 10%) и широкого распространения (ЭИ от 10 до 36 %).

2. В контролируемых опытах с искусственной закладкой яиц фасциол установлено, что из 12 гельминтоовоскопических методов диагностики фасциолеза крупного рогатого скота, наиболее высокой разрешающей способностью обладает метод Котельникова-Вареничева, позволяющий выявлять в среднем 20±1,0 % яиц фасциол.

2.1 Модифицированный метод Котельникова-Вареничева с флотационной жидкостью, состоящей из насыщенного раствора хлорида цинка, хлорида натрия и сахара в соотношении 2:1:1 позволяет выявить 60,2±1,2 % заложенных яиц фасциол, в то время как седиментационный метод последовательных смывов в среднем 1±0,03 %.

3. Разработанный комбинированный метод экстрагирования фасциол позволяет получить активный и специфичный антиген для реакции связывания комплемента (РСК) и иммуноферментного анализа (ИФА).

4.1 Реакция иммуноферментного анализа в сравнении с реакцией связывания комплемента оказалась более чувствительным методом обнаружения фасциоловых антител у крупного рогатого скота.

6. У молодняка крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолезом на пастбищах, иммунологические показатели инвазии (РСК) выявляются значительно раньше (август), чем показатели копроовоскопии (ноябрь). Максимальное количество реагирующих в РСК животных выявляются в январе с последующей тенденцией к снижению.

7. В контролируемых опытах установлено, что наивысшей фасциолоцидной активностью при имагинальном фасциолезе обладают вермитан, роленол, сантел (100 %), альбамелин, клозальбен (90 %), при преима-гинальном - клозальбен (50 %). Использование реакции связывания комплемента с фасциоловым антигеном позволяет контролировать антгельминтную эффективность препаратов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Модифицированный нами метод Котельникова-Вареничева как наиболее чувствительный гельминтоовоскопический метод рекомендуется использовать для диагностики фасциолеза в республиканских, межрайонных и районных ветеринарных лабораториях.

2. Реакция связывания комплемента с разработанным нами фасциоловым антигеном рекомендуется использовать для оценки эпизоотической ситуации по фасциолезу, как в острый, так и хронический периоды болезни, а также для оценки эффективности антгельминтных препаратов через 42-49 дней после дегельминтизации.

3. Фасциолы являются причастными к индукции противо-бруцеллезных антител в организме крупного рогатого скота. Поэтому в благополучных по бруцеллезу хозяйствах сыворотку крови крупного рогатого скота, положительно реагирующего на бруцеллез, дополнительно исследуют на зараженность их фасциолезом в РСК с разработанным нами антигеном.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Тимербаева, Разалия Рустамовна, Нижний Новгород

1. Абалихин Б. Г. Дикроцелиоз и мюллериоз овец в Центральном районе Нечерноземной зоне РФ // Дисс. докт. вет. наук Иваново. - 1996. -С.419.

2. Абдуллаев Х.С. Паразитофауна, эпизоотологические особенности фасциолеза у крупного рогатого скота в Центральном районе Нечерноземья РФ. Изыскание средств дегельминтизации животных при фасциолезе// Автореф. дисс. .канд. вет. наук. Иваново, 1995. - С.2.

3. Адо А.Д. Аллергия и анафилаксия // Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. М., 1964. - Т.З. — С.247-273.

4. Адо А.Д. Общая аллергология. М.: Медицина, 1970. - 543 с.

5. Адо А.Д. Общая аллергология. М.: Медицина, 1978. - 462 с.

6. Азимов Ш.А., Салимов Б.С. Особенности эпизоотологии фасциолеза животных и меры борьбы с ним в Узбекистане. — Материалы научн. конф. по фасциолезу. Великие Луки. М., 1977. - С. 1-3.

7. Азимов Ш.А., Катайцева Т.Ц., Батаева М.Б. Фасциолез крупного рогатого скота в Ташкентской, Сырдарьинской и Джизакской областях //Тез. докл. научн. конф. 4-6 апреля 1989 г. -М., 1989. Т. 1. - С.6.

8. Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е., Ятусевич А.И., Пашкин П.И., Василевич Ф.И. Паразитология и инвазионные болезни животных. — М.: Колос, 1988.-743 с.

9. Аксенова И.Н. Определение оптимальной дозы антигенов для аллергической диагностики цистицеркоза (Cisticercus bovis) крупного рогатого скота //Бюлл. Всесоюз. ин-та гельминтологов. 1972.- Вып. 9. — С.5-10.

10. И.Алиев М.С. Эпизоотологические факторы фасциолеза //Ветеринария. -1981.- № 7. С.40-41.

11. Анаев М.С. Эпизоотологические особенности фасциолеза жвачных и меры борьбы с ним в условиях Дагестанской АССР // Автореф. дисс. .канд. вет. наук. — М., 1974. 22 с.

12. З.Архипов И. А. Терапевтическая и экономическая эффективность дегельминтизации овец при фасциолезе // Автореф. дисс. .канд. вет. наук. — М., 1976.- 25 с.

13. Архипов И.А. Эффективность куратрема при смешанной инвазии крупного рогатого скота, вызванной фасциолами и парамфистомами // Материалы докладов научной конференции. М., 1995. - С. 13-14.

14. Архипов И.А. Препараты для терапии смешанных паразитарных заболеваний жвачных животных // Материалы докладов научной конференции «Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии». — М., 1995. С.89-90.

15. Архипов И.А. Новые отечественные антгельминтики при гельминтозах животных // Ветеринария. 1998, -№11. — С.29-31.

16. Архипов И.А., Кошеваров Н.И., Даугалиева Э.Х. и другие. Фасковерм в форме болюсов при паразитарных болезнях овец и крупного рогатого скота //Ветеринария. 1998. - № 8. - С.23-26.

17. Атаев A.M. Особенности профилактики фасциолеза овец при стационарно-пастбищном и отгонно-пастбищном их содержании в Дагестанской АССР. //Тезисы докладов научной конференции 4-6 апреля 1989 г., М., 1989. — С.25-26.

18. Аюпов Х.В. Гельминтозы человека, животных и растений и меры борьбы с ними. М.: Наука, 1968. - С.70-74.

19. Бабянскас М.А. К вопросу изучения иммунобиологических реакций как метода диагностики фасциолеза у сельскохозяйственных животных // Тез. докл. научн. конф. Всесоюз. общества гельминтологов. М., 1962. — 4.2. -С.15-16.

20. Баягин В.Н. Антгельминтная эффективность рафоксанида при фасциолеза овец и крупного рогатого скота // Бюлл. Всесоюз. института гельминтологии имени К.И. Скрябина. М., 1976. - Вып. 17. - С. 19-20.

21. Безредка A.M. Анафилаксия и антианафилаксия. — М.: Медицина, 1928. — 212 с.

22. Бессонов А.С. Вопросы аллергической диагностики трихинеллеза свиней // Ветеринария. 1970. -№11.- С.31-32.

23. Бессонов А.С. Ветеринарная гельминтология: Проблемы девяностых // Вестник с.-х. наук. М., 1988. - № 8/384. - С.78-83.

24. Болховитинов Д.З. Новые принципы овоскопической диагностики гельминтозов // Ветеринария. 1950. - № 4. - С.47-49.

25. Бредихина В.Т. Новые методы иммунобиологической диагностики мониезиоза овец // Труды всесоюзного института гельминтологии имени К.И. Скрябина. М., 1959. - Т.7. - С. 146-182.

26. Бурделев Т.Е., Аникеев А.П. Диагностика ранней стадии аскаридоза свиней // Сборник по гельминтологии, поев. 90-летию со дня рождения К.И. Скрябина. — М., 1971. —С.39-43.

27. Буркан Г.Г. Сравнительная эффективность иммунологических и копрологических методов диагностики диктиокаулеза овец // Материалы докладов научной конференции молодых ученых, посвященной 100-летию В.И. Ленина и 50-летию ТАССР. 1970. - С. 116-117.

28. Веселова Т.П., Великовская Ю.А. Применение четыреххлористого углерода при фасциолезе крупного рогатого скота // Ветеринария. — 1959. -№7.-С.39-41.

29. Веселова Т.П., Воробьев М.А., Дорошина М.В. Опыт применения гексахлорпараксилола (ГПК) методом групповой дачи с кормом при фасциолезе овец // Материалы научной конференции всесоюзного общества гельминтологов. М., 1963. — 4.1. - С.54-56.

30. Веселова Т.П., Дорошина М.В., Архипов И.А. Сравнение эффективности гексихола С гексихола при фасциолезе овец // Бюлл. всесоюз. института гельминтологии. М., 1987. - Вып. 48. - С.78.

31. Веселова Т.П., Архипов И.А., Мусаев М.В. Эффективность куприхола при трематодозах животных // Ветеринария. 1994. - № 12. - С.7-8.

32. Виноградов В.В., Воробьева Н.Ф. Тучные клетки. Новосибирск, 1973. -150 с.

33. Вишняускас А. Копрологический метод флотационной концентрации и его эффективность при фасциолезе // Науч.- техн. информации Литов. НИВИ, 1965.-С. 18-23.

34. Войтюк В.Н., Горохов В.В., Гурихина М.Г., Сайфуллов И.С. Опыт оздоровления хозяйств от фасциолеза // Тезисы докладов Всесоюзной научной конференции «Методы профилактики и борьбы с трематодами человека и животных». Сумы. - М., 1991. - С.26-27.

35. Волкова З.М. Опыт борьбы с фасциолезом овец путем преимагинальных дегельминтизаций // Ветеринария. 1948. - № 4. - С.25-27.

36. Волкова Э.М. Эпизоотология фасциолеза овец Московской области // Дисс. .канд. вет. наук. -М., 1954. -С.190.

37. Волков А.Х. Зараженность крупного рогатого скота гельминтозами в хозяйствах Менделеевского района РТ // Материалы республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства. Казань, 1997. - С.9.

38. Волков А.Х. Эффективность антгельминтных препаратов при гельминтозах крупного рогатого скота // Материалы международной научной конференции, посвященной 125-летию академии. — Казань, 1998. -С.130-131.

39. Волков А.Х. Некоторые факторы, обуславливающие возникновение неспецифических реакций у крупного рогатого скота // Материалы научно-производственной конференции «Актуальные проблемы животноводства и ветеринарии» Казань, 1999. - С.21-22.

40. Волков А.Х. Методы и средства борьбы с ассоциативными инвазионными болезнями крупного рогатого скота // Дисс. . .докт. вет. наук. — Казань, 2000.-С.264.

41. Волков А.Х., Сафин М.А., Харитонов М.В. Причастность гельминтов к проявлению туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота // Ежеквартальный и производственный журнал «Ветеринарный врач региона Поволжья и Урала» Казань, 2000. - № 2. - С. 17-19.

42. Волков А.Х., Садыков Т.С., Шакиров М.С., Нигматуллин И.А. Эпизоотологические особенности фасциолеза крупного рогатого скота в

43. Республике Татарстан // Ежеквартальный и производственный журнал «Ветеринарный врач» регион Поволжья и Урала. Казань, 2000. - № 3. — С.65-68.

44. Волков Ф.А., Апалькин В.А., Козянов B.C. Эффективность ивомека при паразитозах телят // Профилактика болезней животных ивермектином. — Новосибирск, 1991. С.22-26.

45. Волков Ф.А., Апалькин В.А., Волков Е.А. Паразитарные болезни животных, птиц и пчел. Справочное пособие. Новосибирск, 1995. — С.34-45.

46. Воробьев М.А., Петрик И.Г. // Меры борьбы и профилактики трематодозов сельскохозяйственных животных. М., 1983. - С. 12.

47. Гареев К.А., Галимов Б.А. Действие клозальбена на фасциол разного возраста // Труды Волгоградского НИТИ мясо — молочного скотоводства и переработки продукции животноводства. Волгоград, 2000. — С. 12-13.

48. Головкина Л.П. Влияние куприхола на организм животных и максимально допустимый уровень его продуктах питания // Дисс. .канд. вет. наук. М., 1995. - С.89.

49. Голубев Н.Ф. Опыт оздоровления овец от гельминтозов в колхозах Ленинградской области // Ветеринария. 1957. - № 5. - С.36-40.

50. Горохов В.В. Острая форма фасциолеза. М.: Колос, 1983. - 120 с.

51. Горохов В.В. Эпизоотический процесс при фасциолезе // Ветеринария. — 1986. № 4.-С.38.

52. Даугалиева Э.Х., Филипов В.В. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных. М.: Агропромиздат, 1991.-С.З-8.

53. Даугалиева Э.Х., Курочкина К.Г. Иммунопрофилактика фасциолеза и диктиокаулеза животных // Труды Веер, ин-та гельминтол. — М., 1997. — Т.ЗЗ. —С.53-62.

54. Демидов Н.В. Новый способ применения четыреххлористого углерода при фасциолезе овец // Ветеринария. 1954. - № 3. - С. 16-18.

55. Демидов Н.В. К вопросу о переживаемости яиц фасциол в зимний период // Труды ВИГИС. 1959. - Т. 7. - С.75-77.

56. Демидов Н.В. К вопросу иммунобиологической диагностике фасциолеза // Тез. докл. научн. конф. всесоюз. общества гельминтологов АН СССР. — М., 1962.-С.53-54.

57. Демидов Н.В. Новый способ копрологической диагностики фасциолеза // Материалы научн. конф. всесоюз. общества гельминтологов. — М., 1963. —41. -С.95-96.

58. Демидов Н.В., Горохов В.В. Испытание филиксана при фасциолезе крупного рогатого скота // Труды ВИГИС. 1963. - Т. 10. — С. 196-198.

59. Демидов Н.В. Фасциолез животных. М.: Колос, 1965. - С.3-10.

60. Демидов Н.В., Яхонтов Б.В. Фасциолез как медико-ветеринарная проблема. -М.: Наука, 1968. - С. 18-23.

61. Демидов Н.В. Фасциолез // Итоги науки и техники. Серия зоопаразитологии. М.: Колос, 1979. - С.7-66.

62. Денисова Л.И., Батякина В.А., Демидов Н.В. К вопросу о получении битинола и его пиперазиновой соли // Материалы науч. конф. ВОГ. — 1965.-Ч.1.- С.70-72.

63. Докторов Ю.С. Аллергическая диагностика дикроцелиоза овец // проблемы паразитологии. Тр. VI науч. конф. паразитол УССР.- 1969. —42.— С.13-14.

64. Дорошина М.В. Фармакология и токсикология дихлорфена, битионола, фенасала// Дисс. .канд. вет. наук. -М., 1968. -263 с.

65. Досжанов Б.Д. Противоэпизоотические мероприятия при фасциолезе животных (на примере Центрального левобережного агроклиматического района Нижегородской области) // Автореферат дисс. .канд. вет. наук. — С-Пб, 1999.-20 с.

66. Душкин В.А. Влияние пастбищ разного типа на зараженность животных трематодами // В кн.: Профилактика и борьба с трематодами в зонах мелиорации земель // Тез. докл. Всесоюз. конф. (Баку, 1-3 июня 1983 г.). — М., 1983. С.61-62.

67. Ершов B.C. Офтальмореакция при фасциолезе крупного рогатого скота //рукопись ВИГИС. М., 1950. - С.43-44.

68. Ершов B.C., Крикунов М.С., Плахотная Р.А., Горобец А. Новый метод диагностики аскаридоза свиней // Работы по гельминтологии. Юбилейный сборник. Изд. АН СССР. 1953. - С.61.

69. Ершов B.C. Аллергические реакции у животных, вызываемые почвенными нематодами // Материал докл. Всесоюз. науч. конф., посвященной 100-летию КВИ. 1974.- Т.1. - С.260-261.

70. Иванова Н.С., Ульянов П.В. материалы по оздоровлению романовских овец от основных гельминтозов в некоторых колхозах зоны Палехского ГПР // Труды Ивановского СХИ. 1954. - Вып. 12. - С. 180-198.

71. Игнатов Ю.Е. Иммунодефециты животных. — М.: Колос, 1996. С.11-36.

72. Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболеваний животных гельминтозами. Утв. ГУВ при Государственной комиссии совета министров СССР по продовольствию и закупкам РФ. 28.12.88. М.: Информагротех, 1999. - 72 с.

73. Карабаев Д.К. Фасциолез крупного рогатого скота на юго-востоке и юго-западе Казахстана и меры борьбы с ними // Тезисы докладовреспубликанской научно-производственной конференции по гельминтологии в гор. Джамбуле. Казахсельхозгиз, 1962. — С.40-43.

74. Карохин В.И., Горшков И.Т. К фауне паразитических червей овец Прикамского края Тат. Республики // Труды казан. НИВИ.- T.l 1 и уч. зап. КВИ.- 1933.-С.159-170.

75. Коваленко А.И., Коваленко A.M., Романенко П.Г., Дахно И.С. Зараженность жвачных животных трематодозами на Северо-Востоке Украины // Материалы докл. научн. конф. «Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии». М., 1995. - С.77-79.

76. Козлова Г.А. Тест-система для иммуноферментной диагностики трихинеллеза свиней на основе моноклональных антител // Материалы докладов Всероссийской научной конференции о взаимоотношении паразита и хозяина 8-9 декабря 1998 г. М., 1998. С.ЗЗ.

77. Корнишина М.Д. Изыскание новых методов диагностики и терапии при аскаридозе и гетеракидозе // Материалы докл. всесоюз. научн. конф., посвященной 100-летию КВИ. 1974. - T.l. - С.271-273.

78. Корчагов А.П. Динамика внутрикожной аллергической реакции при экспериментальном диктиокаулезе овец // Бюлл. Всесоюз. ин-та гельминтологов. 1974. - Вып. 14. - С.26-33.

79. Котельников Г.А. Проблемы диагностики гельминтозов // Ветеринария. -1970.-№ 11.-С.28-30

80. Котельников Г.А. Диагностика гельминтозов животных.— М., 1974.—240 с.

81. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. М.: Колос, 1982. - 58 с.

82. Кравчук В.Ф. Профилактика токсикозов при дегельминтизации гексахлорпараксилолом // Ветеринария. 1976. - № 12. - С.49.

83. Кузьмичев В.В. Эпизоотология фасциолеза, некоторые вопросы патогенеза и усовершенствование мер борьбы с ним в условиях Центральной нечерноземной зоны РСФСР // Дисс. .канд. вет. наук. -Иваново, 1985.-252 с.

84. Куприянов А., Салимов Б. Восприимчивость овец и коз к фасциолезу // Тез. докл. конф., посвященной 100-летию со дня рождения академика К.И. Скрябина. Ташкент, 1978. - С.74-76.

85. Лазарев Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. — М.: Медицина, 1985.-С.5-11.

86. Логинов С.Б. Аллергическая реакция жеребят на антиген из альфортий// Труды Всесоюз. ин-та гельминтологии им. К.И. Скрябина. -М., 1959. Т. 7. — С. 185-190.

87. Лукашенко Н.П. изучение прижизненной диагностики трихинеллеза свиней методами аллергических и серологических реакций // Ветеринария. 1957. - № 2. - С.31-32.

88. Лутфуллин М.Х., Корнишина М.Д., Шакурова Ф.М., Волков А.Х. Ассоциативные инвазии животных в хозяйствах Республики Татарстан. — Казань, 1996.-С.172-173.

89. Маркарян А.И. Опыт применения иммунологических реакций для ранней диагностики и определения сроков заражения аскаридозом // Тез. докл. науч. конф. Всесоюзного общества гельминтологов. — М., 1960. — С.84-85.

90. Малахов А.В. Влияние дегельминтизации против фасциолеза на молочную продуктивность коров // Тез. докл. Всесоюз. научн. конф. «Методы профилактики и борьбы с трематодами человека и животных».- Сумы. М., 1991. -С.70-71.

91. Малыгин JI.A. Сравнительная эффективность различных антигенов при аллергической диагностике гидатигенного цитицеркоза свиней // Материалы докл. научн. конф., посвященной 50-летию Великого октября.- Казань, 1967. С.44.

92. Мамыкова О.И. Селекция сельскохозяйственных животных на устойчивость к болезням и повышение резистентности в условиях промышленных технологий. М. - Вып. 8. - С. 122.

93. Медуницин Н.В. Аллергия. Аллергические реакции замедленного типа // Общие вопросы патологии. М., 1968. - С.45-95.

94. Медуницин Н.В. Повышенная чувствительность замедленного типа. — М.: Медицина, 1983.-160 с.

95. Михайлицин Ф.С. и др. Авторское свидетельство СССР № 8076609, М Кл. С 07. С 103126, с приоритетом от 28.11.77. // Бюлл. Изобр. 1981 № 46.С.304.

96. Мосииа С.К. Применение аллергической диагностики при экспериментальном цистицеркозе кроликов // Ученые записки Казанского ветеринарного института. Казань, 1961. - Т. 82. - С. 211 -219.

97. Новак М.Д., Кузмичева В.В., Мозтухин С.В., Золоткова Т.Е. фасциолез крупного рогатого скота в Костромской области // Сб. науч. тр. «Экологическая паразитология». — Иваново, 1998. С.26-27.

98. Нурулаев А. Сезонная и возрастная динамика фасциолеза жвачных на юге Узбекистана // Материалы науч. конф. по фасциолезу, проходившей 21-23 июня в Великих Луках. М., 1977. - С.64-66.

99. Петков А. и др. Распространение и сезонная динамика фасциолеза // Ветер, сб., 1977. № 5. - С.34-36.

100. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика. М.: Медицина, 1976. -336 с.

101. Петров Ю.Ф., Сазанов A.M., Сорокин И.Б., Кузмичев В.В. Направленное изменение паразитоценоза, фасциол, бактерий, грибов в организме овец путем применения антгельминтиков // В кн.: Паразитоценозы и ассоциативные болезни. М.: Колос. - 1994. - С.253-268.

102. Петров Ю.Ф., Мужжовлев Е.Ф., Абдуллаев Х.С. Роль фасциол в возникновении неспецифических реакций на туберкуллин // Материалы докл. научн. конф. «Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии». М., 1995. - С. 125-127.

103. Петроенко В., Шигина Н.Г. Гельминтологическая оценка разных типов пастбищ в отношении фасциолеза // IX конф. Украинского паразитологического общества. — Киев, 1980. Ч.З. - С. 149-150.

104. Полетаева О.Г., Заточкина Э.Г. Применение реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) для определения длительности сезона заражения в очаге аскаридоза // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1974. - № 3. - С.274-278.

105. Полуэктова П.Ф. Реакция связывания комплемента при аскаридозе свиней // Бюлл. всесоюз. института гельминтологии им. К.И. Скрябина. -М., 1972. Вып. 8. - С.49-52.

106. Преображенский П.М. Экспериментальная проверка реакции Касони при эхинококкозе // Вестник современной ветеринарии. — 1926. № 5. — С. 146.

107. Пушкарев А.С. Действие дисалара на иммунобиологическую реактивность при фасциолезе крупного рогатого скота и овец // Ветеринария. 1999. - № 1. - С.28-30.

108. Сазанов A.M. Эпизоотология фасциолеза овец и меры борьбы с ними в условиях дельты реки Дона (Азовский район Ростовской области) // Дисс. .канд. вет. наук. -М., 1957. — 266 с.

109. Сазанов A.M., Сафиуллин Р.Т., Киселев И.А., Тупицин В.И., Белых А.И. Эффективность гексихола при фасциолезе коров // Бюлл. ВИГИС. -М., 1991. Вып. 53. - С.56-59.

110. Сазанов A.M., Сафиуллин Р.Т. Лечебная и экономическая эффективность политрема и гексихола при фасциолезе коров // Тез. докл. Всесоюз. научн. конф. «Методы профилактики и борьбы с трематодами человека и животных». Сумы. М., 1991. - С. 104.

111. Сапунов А.Я. О возможности применения серологических тестов для изучения в эпизоотологической ситуации по паразитоценозам // Материалы докл. научн. конф. М., 1995. - С. 155-156.

112. Сафиуллин Р.Т., Бурмистров Е.Н., Волков А.Х. Сантел -высокоэффективный препарат при паразитарных болезнях крупного рогатого скота // Ветеринария. 1999. - № 5. — С.33-35.

113. Сафиуллин Р.Т. Сравнительная эффективность копрологических методов диагностики гельминтозов свиней и их усовершенствование на основе стандартизации // Тр. Всероссийского института гельминтологии им. К.И. Скрябина. М., 2001. - Т. 37. - С.149-159.

114. Сахаров Г.П., О влиянии повторных впрыскиваний сывороток и активно-иммунизированных веществ на содержание в крови противотел //Русск. врач. 1905. - № 52. - С. 1613.

115. Скрябин К. И., Шульц Р.С., Метелкин А., Попов Н.П. Ветеринарная паразитология и инвазионные болезни домашних животных. — М.: Госиздат совхозной литературы, 1934. 594 с.

116. Скрябин К.Т. Трематоды животных и человека. — М. Л., 1948. - Т.2. -С.97.

117. Скрябин К.И., Эвранова В.Г. Трематоды. — М.: Издательство АН, 1952. -Т. 7.-180с.

118. Сосипатров Г.В. В сб.: Материалы к научной конференции ВОГ. М., 1965. — Ч. 1. -С.203-205.

119. Степанов А.В. Лабораторная диагностика гельминтозов с.-х. животных тропических стран. М., 1983. - 78 с.

120. Убираев С.П. Справочник ветеринарного врача. — Саратов, 1995. — С.236-238.

121. Ханбегян Р.А. Новый метод диагностики фасциолеза // Ветеринария. -1960.-№ 10.- С.76-77.

122. Харитонов М.В. Профилактика неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота // Материалы республиканскойнаучно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства. Казань, 1997. - С.56.

123. Цолоев А.Х., Архипов И.А., Шамхолов В.М., Юсупова Р.А. Испытание новых лекарственных форм альбендазола и нилверма при гельминтодозах овец // Труды Всероссийского института гельминтологии им. К.И. Скрябина. М., 2000. - Т. 36.- С. 173-179.

124. Чанкович М., Исмагилов Р.Г. Кролик как лабораторная модель для изучения аллергических и серологических реакций // Проблемы патологии, иммунитета и химиопрофилактики гельминтозов сельскохозяйственных животных. Кайнар, 1968. - С.66-73.

125. Чуперлович К. Динамика комплементсвязывающих антител у кроликов, зараженных F. hepatica // Труды Всесоюзного института гельминтологии им. К.И. Скрябина. М., 1971. - Т. 17. - С.295-299.

126. Шакиев Е. Эпизоотологические особенности фасциолеза жвачных животных в Каракалпакской АССР // Труды УзНИВИ. 1978. - Т. 27. -С.148-151.

127. Шемяков Д.Н. Эффективность тетраксихола при фасциолезе овец // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина. 1997. - Т. 33.-С.160-163.

128. Шемякова С.А. Испытание иммунопаразитана с целью профилактики фасциолеза крупного рогатого скота // Труды всероссийского института гельминтологии. 1997. - Т. 33. — С.156-159.

129. Шумакович Е.С. Гельминтозы жвачных животных. — М.: Колос, 1967. -55 с.

130. Шумакович Е.С. Борьба с гельминтозами на фермах промышленного животноводства. — М.: Колос, 1975. 174 с.

131. Эвранова В.Г. Иммунодиагностика гельминтозов сельскохозяйственных животных. Казань, 1956. - С. 10-11.

132. Эвранова В.Г. Диагностика дикроцелиоза овец с помощью аллергической реакции //Ученые записки КГВИ. — Казань, 1957. С. 138140.

133. Эвранова В.Г., Яшина Г.И. Иммунологические методы диагностики при экспериментальном эхинококкозе овец // Уч. зап. КВИ. Казань, 1965.-Т. 94.-С.117-122.

134. Эвранова В.Г., Васильева Д.В., Эвранова Г.Б., Горбунов С.М. Тучноклеточная реакция при трихинеллезной инвазии // Науч. тр. КВИ. — 1980.-Т. 133. -С.132-134.

135. Эвранова В.Г. Диагностика гельминтозов жвачных. Казань, 1981. -29 с.

136. Яворский И.П. Биологические основы профилактики фасциолеза в Прекарпатье //Тез. докл. науч. конф. — М., 1989. Т.2. - С. 195.

137. Якубовский М.В., Ланницкий С.С., Лавор С.И. Эффективность фенбендазола при фасциолезе жвачных // Тез. докл. научн. конф. — М., 1989.-Т. 2.-С. 197.

138. Annen J. М., Boraj J.O. Fchert H. Prufing neuer Fascilizide, II. Wirksamkeitsvergleich von Rafoxanid und Diamphenethid bai subakuter und chronischer Fasciolese des Schaufes // Schez, arch. Tierheilk. 1973. - p.91-98.

139. Arthus M. Injections repetees de sereem de cheval chez le lapin // C. R. Soc. Biol. 1903. - vol. 55. - p.817.

140. Berden D., Hammet N. Microplata enrume linked immunosorbent as-say for antilody to Fasciola hepatica in cattlo Veter. Rec., 1978. 103.8:158.

141. Blancouj et al. Reaction intradermigue duu antigene specifique de genre Fasciola cher les bovines. Rev. Elevage Med. Veter. 1976. 29.1:39-42.

142. Bordet J. Le mecanisme de 1 anaphylaxie // C.R. Soe. Biol. 1913. - vol. 74.-P.225.

143. Coles G. et al. A potent new salicylanilide effective against Fasciola hepatica.-Res. In Veter. Se., 1980. 28.2:63.

144. Crestian J. La fasciolese rt la dicroeliose. Les methodes de diagnostic. -Lelevage bovin ovin caprin, 1980, 99:13-18.

145. Decker J. et al. Prufing eines koprologischen Untersuchungvenfahrens (Modifikation nach KATO) auf seine Anwedbarkeit in der veterinarmedizinisch parasitologischen Diagnostic. - Mh. Veter. - Med., 1980,35,7:258-260.

146. Dickerson G., Hartenist M., Kingsbury P. Chematherapentie agens for all stages of liver fluke disease in sheer// Brit. Vet. J. — 1971. v. 127.

147. Eckert J. et al. Subacute Fasciolese beim Hind Schweiz. Arch Tierheilt 1977. 119.4:135-148.

148. Favati V. Annali univ. facolta di med. Vet., 1966, 18, 85.

149. Fragade Azevedo I., Coe-iho Roberts Palmira. Lapplication de emmunofluorescence au diagnostic de la fasciolase hepatigue «Ann. Parasitol. Humaine et comparee», 1965, 40, № 5. 529-542.

150. Furmaga S. et al. Appreciation experimentale de 1 efficacite du bromophenophos dans la-lutte contre la fasciolose des ovins.- Bull. soc. Veter. Prat. Fr., 1979, 63, 7:533-540.

151. Genchi C., Locatelli A. Ulteriori indadini sulla diagnosi allergica della distomatosi bovina. clin. Veter., 1978, 101, 7:376-378.

152. Gratia A., Linz R. Lallergie hemorra gique; relations e entre le phenomenode shwarzman et le phenomene d Arthus // Ann. Ints Fasteus. 1933. -vol. 50.-P. 89-93.

153. Grelek H., Horchner F. Vergleichende Unterschungen sur Serodiagnotik der Rinderfasziolese mit dem inderecten Immunfiuoreszenzund Immunoperoxidazitest (ELISA) Berl. U munch tierarzte. Wschre.,1977, 90, 17: 332-335.

154. Hinaidy H.K., Keferbok F.; Pichler C.; Jahn J. Vergleichende koprologische untersuchunder beim Ring. J. Veter. Med. Ser. B. 1988. 35.8: 557-569.

155. Horchner F, et al. Zur Diagnostic der Ringer fasciolese. Berl. Umunch tierazti Ws chr. 1976. 89, 15. 296-300.

156. Ibarra F. Montenego N., Vera Y., Boulard C. Oviroz H., Flores J., Cohoa P. Comparison of three ELISA teste for seroepidemiology of bovine fascioliosis //Veter. Parasitol. 1998. - vol. 77, № 4. p.229-236.

157. Irelck H., Horcher F. Vergleichende Untersuchunde zur serodiagnostik der Rinder fasciolose mit dem inderekten immunofluorszens — und immunoperoxidase test (ELISA). Berl. u munch, Lierarzti, Wserz. 1977, 90. 17,332-333.

158. Jladysr-Pawiak K. A study of the usefulness of the lotex reaction in diagnosis of cattle fascioloses — Acta parasitol. Polon. 1977, 24. 28-34.

159. Kagan Irving G. Advances in the immunodiagnosis of pararitic infuctions Z Parasintenk. 1974, 45, № 2. 163-195.

160. Kadhim J., al- Attar M. Preliminary obcervations on antigen activite of Fasciola gigantica by immunodiffusion test in sheep Brit. Veter. 1974, 130.3 114-141.

161. Kadnini J.K. The comparative efficary of diamphenetide and rafoxanide against Fasciola gigantica in sheep // Tropen med. und Parasitol. 1975. - v.26 - № 2. p. 20Г-204.

162. Kimura Y., Satoh M., Shima T. Therapeutic effect of tricrobendozole on spontaneons bovine fascioliasis J. Japan. Veter. Med. Assn. 1987. 40. 9: 628632.

163. Locatell A., Simonic T. Fasciola hepatica L. Le fascioliasi: aspetti di fisiologia, biochimica, patogenicita, immunologia e diagnosi. Folia veter lat., 1974. 4, 1:43-70.

164. Marrero CAR., Santiago N., Hillyer G. V. Evaluation of immunodiagnostic antigens in the excretory secretory progusts of Fasciola hepatica I. Parasitol. 1988. 74.4: 646-652.

165. Nardelli L., Katie P. Tablete fahex u surbijanlu metiljavosti ovaca. Praxic veter, 1987. 35.Г-33-35.

166. Ovary Z. Anafilassi cutanea locale attiva nella cavia // Boll soc. ital. sper. -1951.-vol. 27.-P. 100-102.

167. Pesson В., Leger N., Madulo-Leblond G. et al. Diagnostic immunologique en parasitologie et en mycology. «Pharm. Boil., 1979. 13. № 123,417-418.

168. Petithory I. C. Progres recents en serologie parasitaire «Symbioses». 1973, 5. № 2. 137-147.

169. I. Pfister K., Keller G., Baisiger. Early diagnosis of bovine Fasciola hepatica infection using an ELISA system. Proceedins Vol. 1. 1986. 119-124.

170. Ruitenberg E. I., Capron A., Bout D., Knapen F. Van. Enryme immunoassay for the serodiagnosis of parasitic infections «Biomedicine». 1977. 26. №5. 311-314.

171. Sinelair I. J., Wassll D. A. Serodiagnosos of F. hepatica infections in cattle. Abstracts. 1986. 860-863.

172. Tiner R. Fluresan antiher ternigi ili kaynmlarda F. gigantica nim erken teshise uzezinde arastirmalar-Ankana Unik. Veter. Fak, Dergisi. 1925. 22.2/4 125-136.

173. Touratier L. Note sur la place du nitro xynil dans la Lutte integree contre la fasciolose bovine a F. gigantica a Madagascar. Rev Elevage Med. veter. 1988. 41,2: 181-189.

174. Wallace D.H., Kilgore P.L., Benz G.W. Clorsulon a nev fasciolacide for cattle Med. veter. Pract. 1985. 66.11: 879-882.

175. Була^И Мирко, ЛалиИ Радомир, Мовсеыуан Миодраг, ЧуперловиЬ Коста HMMyH0flHjagH03a фасциолозе льygл. «Српски арх. целок, лекар.» -1977. 105, №7-8, 657-663.

Информация о работе

Тимербаева, Разалия Рустамовна
кандидата ветеринарных наук
Нижний Новгород, 2003
ВАК 03.00.19

Диссертация

Фасциолез крупного рогатого скота в Республике Татарстан - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно