Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние геморрагического шока на процессы обучения и поведение крыс в постреанимационном периоде

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние геморрагического шока на процессы обучения и поведение крыс в постреанимационном периоде"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В .ЛОМОНОСОВА

\-

Биологический факультет:

На правах рукописи

БАСТРИКОВА Наталия Александрова

ВЛИШШЕ ГЕМОРРАГИЧЕСКОГО ШОКА НА ПРОЦЕССЫ ОБУЧЕНИЯ И ПОВЕДЕНИЕ КРЫС В ПОСТРЕАНИМАЦИОННОМ ПЕРИОДЕ

03.00.13- физиология человека и животных 14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1997

Работа выполнена в НИИ общей реаниматологии РАМН (директор института -профессор В.В.Мороз) и на кафедре физиологии человека и животных биологического факультета МГУ им М.В.Ломоносова (заведующий кафедрой -академик РАМН И.П.Ашмарин).

Научные руководители:

доктор биологических наук, доцент Н.А.Соколова доктор медицинских наук В.Л.Кожура

Официальные оппоненты:

Член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук К.С.Раевский доктор биологических наук З.А.Зорина

Ведущее учреждение - НИИ общей патологии и патологической физиологии

Защита диссертации состоится 22 декабря 1997 г. в 15.30 часов на заседании Специализированного Ученого Совета Д.053.05.35. Биологического факультета Московского Государственного Университета им. М.В.Ломоносова по адресу: 119899, Москва, Воробьевы горы, МГУ, биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета

РАМН

МГУ.

Автореферат разослан 21 ноября 1997 года. Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат биологических наук

Б.А.Умарова

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ. Актуальность темы. Наиболее сложной и важной проблемой реаниматологии является полноценное восстановление функций ЦНС (В.А.Неговский, 1986, 1995). За последние два десятилетия получены принципиально новые данные о природе патологических изменений, возникающих в мозге при геморрагическом шоке и в различные сроки постреанимационного периода (В .Л.Кожура, 1980, 19.97, В.И.Удовиченко, 1993, Н.Я.Коваленко, Д.Д.Мациевский, 1997, Б^б, 1993).

Известно, что необратимые изменения при длительной гипотензии в коре головного мозга могут развиваться еще до наступления клинической смерти и даже на фоне частично сохраненного сознания. Согласно клиническим данным к наиболее часто наблюдаемым парушегашм относятся психические и интел-лекгуально-мнестические расстройства, причем осложнения могут носить преходящий характер и появляться в отдаленном периоде (Г.В.Алексеева,1987, 1997). Постгипоксические энцефалопатии приводят к инвалидизации, потере работы и снижению качества жизни. К основным факторам, которые определяют психоневрологические осложнения, возникающие в постреанимационном периоде, относятся первичная гипоксия, интрацеребральные и экстрацеребральные постреанимационные изменения (В.А.Неговский и соавт., 1987).

Вместе с тем, отсроченные морфологические и биохимические изменения в мозге могут наблюдаться после геморрапгческого шока даже при внешнем неврологическом восстановлении (В.Л.Кожура и соавт., 1991, Нага е! а1., 1993, В.И.Удовиченко, 1993). Однако клинически эти изменения не всегда выражены, что обусловлено большими компенсаторными возможностями мозга.

Таким образом, комплексное экспериментальное исследование этапов возникновения функциональных нарушений ЦНС при геморрагическом шоке является актуальной проблемой и представляет интерес для практической медицины. Изучение характера и динамики развития дисфункций ЦНС имеет также большое значение в связи с нерешенностью вопроса о сроках возникновения необратимых изменений в ЦНС уже после реанимации.

В основе развития постреанимационной патологии в постгеморрагическом периоде лежат нарушения, относящиеся к различным уровням функционирования организма. В связи с этим применение регуляторных пептидов для профилактики и коррекции постреанимационных нарушений представляется весьма перспективным. Важной особенностью их действия является плейотрогаюстъ (И.П.Ашмарин, М.А.Каменская, 1986, Гомазков, 1993), что позволяет влиять на всю совокупность патологических факторов. Уникальная способность запускать каскад реакций, приводящий к пролонгированному действию, вызывает интерес к этим препаратам в качестве потенциальных фармакологических средств для влияния на формирование и развитие отдаленных последствий ишемических состояний.

С целью коррекции выявленных нарушений мы исследовали пептид семакс (аналог АКТГ-(4-10)). Этот выбор обусловлен тем, что фрагменты АКТГ относят к группе физиологических антагонистов опиоидов. В то же время

эндогенная опиоидная система играет важную роль в патогенезе шока, и ее активация может быть фактором, запускающим развитие постгеморрагических нарушений. Кроме того, семакс обладает собственными эффектами как антигипоксический и ноотропный препарат (АэЬтапп Л а1., 1995). Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является комплексное исследование поведения белых крыс в иостреанимационном периоде после геморрагического шока и оценка влияния регуляторного пептида семакс на восстановление функций ЦНС. В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать зависимость уровня летальности и появления нарушений в постгеморрагическом периоде от длительности геморрагического шока.

2. Изучить влияние длительного геморрагического шока на процессы обучения и поведение на разных стадиях постреанимационного периода.

3. Исследовать реакцию на геморрагический шок по изменению уровня биогенных аминов, кортикостероидов и продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) на разных стадиях постреанимационного периода.

4. Исследовать влияние регуляторного пешвда семакс на обнаруженные изменения функциональных и биохимических параметров в постреанимационном периоде.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование процессов обучения и поведения крыс на разных стадиях постреанимационного периода после геморрагического шока. Впервые показано фазовое развитие нарушений и доказано возникновение вторичных изменений когнитивных функций в отдаленном постгеморрагическом периоде. Показана возможность коррекции постреанимациошшх нарушений способности к обучению при помощи однократного применения семакса. Выявлено отсроченное действие семакса на биохимические параметры. Отмечена важность разной длительности гиповолемической гипотензйи для возникновения дисфункций ЦНС. Теоретическая и практическая значимость. Диссертационная работа является одной из первых работ, посвященных комплексному исследованию постгеморрагических изменений в поведении и обучении животных. Выявлена зависимость нарушений поведения на ранней стадии постреанимационного периода (1 неделя) от исходного уровня тревожности. Показана возможность возникновения нарушений когнитивных функций на поздних стадиях постреанимадионного периода (4 недели) независимо от наличия или отсутствия изменений на ранней стадии. Полученные данные подчеркивают необходимость длительных реабилитационных мероприятий для пациентов, перенесших геморрагический шок, даже при отсутствии неврологических расстройств в раннем постреанимационном периоде из-за наличия риска их развития в более поздние сроки. Положительное влияние однократного применения зарегистрированного лекарственного препарата семакс на восстановление параметров поведения и когнитивных функций в постреанимационном периоде позволяет рекомендовать этот препарат для

проведения клинических испытаний в целях последующего широкого использования в реанимационных и реабилитационных клиниках. Апробация работы. Результаты диссертационной работы апробированы на I Съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995), на Международном симпозиуме, посвященном 60-летаю НИИ общей реаниматологии РАМН (Москва, 1996), на 6м Съезде Международной Ассоциации Нейротоксикологии (Сегед, 1997), на 33м Международном конгрессе Физиологических наук (Санкт-Петербург, 1997), на Пептидном клубе кафедры физиологии человека и животаых биологического факультета МГУ (1997), на научно-практических конференциях НИИ ОР РАМН (1997). По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, 1 работа принята в печать. Структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения и выводов и списка литературы. Работа изложена на 162страницах, содержит 30 рисунков и 14 таблиц. Список литературы включает 171 источник.

Автор глубоко признателен сотрудникам кафедры физиологии человека и животных, кафедры биофизики Биологического факультета МГУ и сотрудникам НИИ ОР РАМН, чья неоценимая помощь позволила состояться этой работе.

Материалы и методы исследования. В работе были использованы самцы беспородных белых крыс весом 230-350 г. Всего в работе использовано 498 животных.

В экспериментах применяли

- пептид МеЮ1и-Нз-РЬе-Рго-ету-Рго (семакс, аналог фрагмента АКТГ- (4-10), синтезированный в Институте Молекулярной генетики РАН. Препарат вводили в физиологическом растворе. В контроле вводили эквивалентные объемы физиологического раствора.

Модель геморрагического шока. В качестве геморрагического шока использовали артериальную гиповолемическую птотензию (модифицированная модель Уиггерса на крысах, 1950). Гипотензию вызывали у наркотизированных животных (нембутал, 40 мг/кг). Кровь забирали через катетер в хвостовой артерии до достижения среднего АД 40 мм рт. ст., которое поддерживалось на этом уровне путем дополнительного забора или реинфузии крови. Артериальная гипотензия была разной продолжительности: 30 и 60 минут с момента достижения среднего АД 40 мм рт. ст. По истечению времени гипотензии кровопотерю восполняли реинфузией забранной крови. Введение семакса проводили после реинфузии крови через катетер в яремной вене (7,5 мкг/кг/мин), либо через I неделю после реанимации (в/б, 150 мкг/кг).

Оценка поведения и способности к обучению в постреанимационном периоде. В качестве контроля для разделения влияния операции и кровопотери на обучение и поведение животных использовали две группы животных: интактные и оперированные.

Выработка условного рефлекса с положительным пищевым подкреплением в «Т-образном лабиринте» (Ашмарин и соавт., 1980). В первый день животных, подвергнутых накануне пищевой депривации, помещали в лабиринт на 40 минут с целью адаптации. Обучение проводили в течение последующих 4 дней: животных помещали в лабиринт по 5 раз, максимальная длительность каждого предъявления - 3 минуты. Регистрировали: латентный период (время от момента, посадки до выхода из стартовой камеры), время реакции (время, потребовавшееся животному для достижения требуемого отсека и взятия пищи), число ошибок (заходы в противоположный требуемому отсек), количество выполненных реакций (число случаев, когда животное находит подкрепление в течение. Зх минут пребывания в лабиринте). По этим показателям также вычисляли латешный период выполненных реакций как разницу между временем, реакции и латентным периодом выполненных реакций.

Обучение проводили. через 1 неделю, 2 недели и 4 недели после артериальной гипотензии. Исследования в разные периоды постреанимационного периода были выполнены на отдельных сериях животных в связи с невозможностью повторить данный тест на тех же животных, не внося ошибки повторного тестирования.

Приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ) (Ре11о\у е1 а1., 1985). Время тестирования составляло 5 минут. Регистрировали «время в светлом отсеке», «заходы в светлый отсек», «свешивания» с открытых рукавов лабиринта, число реакций груминга, число дефекаций. Исходную тревожность оценивали по суммарному баллу, учитывающему все эти показатели, согласно которому животных делили на низко- и высокотревожных. Повторное тестирование проводили за 3 дня до адаптации в Т-образном лабиринте.

Норковая камера (МакагуиоЬ е1 а1., 1977). Тестирование проводили в течение 2 минут в бесстрессорных условиях при свете красной лампы. В течение каждых 30 сек регистрировали горизонтальную активность (по количеству секторов, пройденных животным), вертикальную активность (по числу подъемов на задние лапы), количество обследованных отверстий (норок) и груминг (по числу умываний).

Кроме того, измеряли пищевую мотивацию (количество съеденного корма за 5 мин), статическую' компоненту физической выносливости в тесте «Вертикальная сетка» (максимальное время 180 сек), латентный период болевой реакции в тесте «Горячая пластина» (52,4-52,6°С, регистрировали время от момента посадки до первого облизывания задней лапы).

Определение уровня биогенных аминов и кортикостероидов в тканях крыс и продуктов перекисного окисления лилидов (ПОЛ) в плазме крови в разные сроки после 60 минутной гипотензии. Опыты были проведены на 138 животных. Измеряли уровень биогенных аминов через 20 минут после реанимации (сразу после введения семакса или физиологического раствора), на 7 и 28 сутки постреанимационного периода. Животных забивали путем декапитации, ткани помещали в жидкий азот. Уровень адреналина,

норадреналина (MetcoLf, 1974), а также кортикостероидов (Ю.А.Пашсова, И.Я.Усыватова, 1965) в надпочечниках, уровень серотонина в селезенке и стволе мозга (Miller, Maikel, 1970) определяли флуориметрическим методом на спектрофотометре Hitachi 850. Флуоресценцию для адреналина измеряли при ^=500 им и возбуждающем свете Х=410 нм, для норадреналина, для серотонина при X—470 нм и 7г360 нм, для кортико-стероидов при А.=530 нм и А.=470 нм соответственно. Продукты ПОЛ определя-ли в плазме крови (модифицировашшй метод Asakava, Matsushita, 1980). Кровь собирали при декапитации. Количество ТБК-активных продуктов определяли на спектрофотометре «Specord М-40» ири Х- 532 нм, используя для расчетов г = 1,56 х 105М-1 см-1. Данные биохимические показатели измеряли в следующих группах: интактные животные; оперированные животные; животные, которым после реанимации инфузировали семакс (в контроле - физиологический раствор), а также крысы с. введением семакса (в/б, 150 мкг/кг) в отсутствии пшотензии.

Эксперименты данной серии проведены на базе кафедры биофизики биологического факультета МГУ под руководством д.б.н. Е.Н.Гончаренко. При обработке результатов использовали стандартные методы статистического анализа (Гублер, Генкин, 1973). Для сравнения поведенческих показателей использовали непараметрические критерии: критерий U Вилкоксона-Манна-Уитни для несвязанных выборок, точный критерий Фишера, Т-критерий Вилкоксона для связанных выборок. Для оценки биохимических показателей использовали параметрический t-критерий Стьюдента. Обработку данных осуществляли с помощью пакета программ STATISTICA for Windows 4.5.

Результаты и их обсуждение.

1. Влияние геморрагического шока разной продолжительности на выживаемость и процессы обучения и поведение крыс в постреанимационном периоде.

1.1. Влияние 30 минутой гипотензии

Исследование влияния геморрагического шока разной продолжительности на выживаемость крыс показало, что 30 минутная гшютензия не приводит к летальным исходам.

Через 1 неделю после геморрагического шока наблюдалось достоверное увеличение латентного периода реакции на третий день обучения по сравнению с оперированными крысами в тесте «Т-образный лабиринт» с положительным пищевым подкреплением, что свидетельствует об изменении соотношения мотиваций, однако к четвертому дню этот показатель восстанавливался до уровня интактных животных. По другим показателям отличий между группами не обнаружено.

Обучение реанимированных крыс через 2 и 4 недели в «Т-образном лабиринте» после 30 минутной гипотензии не выявило достоверных изменений по сравнению с оперированными и интактными животными.

Таким образом, геморрагический шок, продолжительностью 30 минут, не приводит к нарушению мнестических функций в постреанимационном периоде, однако отдельные отклонения свидетельствуют о влиянии на мотивационкую сферу.

1.2. Влияние 60 минутной гипотснзии

При геморрагическом шоке, продолжительностью 60 минут, смертность животных составила 17,1 %. Не выявлено зависимости числа летальных исходов от сезона. Анализ влияния исходного уровня тревожности на выживаемость показал, что высокотревожные животные характеризуются более высокой смертностью (25%, р<0,05.) по сравнению с низкотревожными (6,3 %). По-видимому, это является следствием их низкой устойчивости к гипоксии (К.Ю.Саркисова и соавт., 1993, Н.Я.Коваленко, Д.Д.Мациевский, 1997).

В постреанимационном периоде отмечены фазовые изменения в обучении и поведении животных.

1.2.1. Обучение через 1 неделю после геморрагического тока.

Через 1 неделю после геморрагического шока отмечено увеличение временных параметров обучения: латентного периода реакции (рис. 1а), латентного периода выполненных реакций, времени реакции и чистого времени реакции (рис.1б). Кроме того, нарушена динамика показателей «латентный период реакции» и «время реакции», которые в контрольных группах достоверно снижались к четвертому дню обучения по сравнению с первым днем, тогда как в опытной группе такое снижение отсутствовало. По числу ошибок животные, перенесшие геморрагический шок, не отличались от контрольных. Количество выполненных реакций (рис.1в) у реанимированных крыс было достоверно мейьше того же показателя на второй и третий дни обучения по сравнению с контрольными группами (р<0,05). Однако к четвертому дню данный показатель восстанавливался. Динамика показателя «количество выполненных реакций» к четвертому дню повторяет динамику этого показателя в контрольных группах, что свидетельствует о выработке условного рефлекса. Следовательно, в данном случае в наибольшей степени страдает эмоционально-мотивационная сфера и в меньшей степени затрагивается память. Этот вывод подтверждается также отсутствием изменения рассматриваемого показателя у реанимированных животных при воспроизведении по сравнению с последним днем обучения.

Отличий между группами по уровшо пищевой мотивации не обнаружено.

Исследование зависимости выявленных нарушений через 1 неделю после геморрагического шока от исходного уровня тревожности показало, что данные нарушения в процессе обучения проявляются только в подгруппе высокотревожных животных. В подгруппе низкотревожных животных отмечается тенденция к увеличению латентного периода реакции на Зй и 4й дни относительно оперированных животных, что дает основание предполагать дисбаланс мотиваций, однако по другим параметрам отличий от контрольных групп не найдено.

Латентный период реакции

О

1день (8день)

а)

2день Здень 4день В

(Эдень) (Юдень) (11день) (18день) дни обучения

Чистое время реакции

б)

1день . 2день (вдень) ' (Эдень)

Здень 4день В

(Юдень) (11 день) (18день) дни обучения

■ингактные — о— операция

- геморрагия

200

150

100

50 -

В)

Количество выполненных реакций

1день. 2день Здень 4день В

(8день) (Эдень) (Юдень) (11день) (18 день) дни обучения

□ икгактные

3 операция

В геморрагия

Рис.1. Параметры обучения в Т-образном лабиринте через 1 неделю после реанимации. В скобках указаны дни после геморрагического шока. Данные указаны в %. За 100% приняты значения соответствующих параметров в 1й день обучения в интактной группе. * - р<0,05, ** - р<0,01 (отличия от гаггактных), # - р<0,05 (отличия от оперированных).

Повторное тестирование в ПКЛ показало снижение числа реакций грумин-га в темном отсеке, которое является проявлением замещенной активности и может отражать как уменьшение, так и увеличение тревожности. Другие показатели, более ярко отражающие тревожность, например, «время в светлом отсеке», «заходы в светлый отсек», не изменились. Важно отметить, что такой показатель как «свешивания», на который не влияет пространственная память, не изменился по сравнению с контрольными группами. Таким образом, по-видимому, имеет место смещение баланса мотиваций в сторону пассивно-оборонительной реакции.

Изменения в спонтанном поведении животных в тесте «Норковая камера» у этих же крыс (16 день после шока) выявлены также только в высокотревожной подгруппе, при этом отмечено подавление ориентировочно-исследовательской реакции: снижение вертикальной активности (рис.2а), уменьшение горизонтальной активности на 120й сек наблюдения, оталонение в динамике норковой активности. Число реакций-груминга (рис2б) возрастает. Учитывая проведение тестирования в бесстрессерных условиях и сниженную ориентировочно-исследовательскую реакцию, можно предположить, что в данном случае усиливается тревожность животных.

Вертикальная активность, стойки

Груминг

30 60 90 время (сек)

12о суммарные значения за 2 мин

30 60 90 120 время (сек)

интактные интактные

операция операция

I геморрагия ■ геморрагия

Рис.2. Вертикальная активность (число стоек) (а) и груминг (число умываний) (б) через 16 дней после геморрагического шока у высокотревожных животных.

* Р<0,05- отличия от интактных, # Р<0,05-отличия от оперированных

Обнаруженные изменения в поведении подтверждают влияние геморрагического шока на эмоционально-мотивационную реактивность.

Таким образом, через 1 неделю после геморрагического шока у реанимированных животных, с одной стороны, нарушено восприятие экспериментальной обстановки, которая при каждом повторном обучении в «Т-образном лабиринте» оказывается для них как будто «новой», что ослабляет способность к обучению в целом. С другой стороны, сниженная ориентировочно-исследовательская реакция также оказывает влияние на восприятие и процесс обучения, поскольку именно этот мотивационный компонент необходим на первой стадии выработки условного рефлекса - стадии генерализации (Симонов, 1981).

- 91.2.2. Обучение через 2 недели после геморрагического шока

При обучении животных в «Т-образном лабиринте» через 2 недели после геморрагического шока продолжительностью 60 минут «время реакции» и «чистое время реакции» реанимированных; животных снижались по сравнению с интактными животными на 2й день обучения (р<0,05). По другим параметрам не выявлено никаких отличий относительно контрольных групп.

Поведение животных при повторном тестировании в ПКЛ и в тесте «Норковая камера» не отличалось ни от интактных, ни от оперированных животных. Не было обнаружено изменений в пищевой мотивации, болевой чувствительности и статической компоненте физической выносливости.

Таким образом, к 2й неделе постреанимационного периода наблюдается восстановление регистрируемых показателей в состоянии животных.

1.2.3. Обучение через 4 недели после геморрагического шока

Через 4 недели после геморрагического шока отмечались вторичные изменения в обучении и поведении животных, причем выявлена сезонная зависимость.

У животных, реанимированных в осенне-зимний период, латентный период реакции не отличался ни от оиерироваиных, ни от интактных групп, однако наблюдалось достоверное снижение (р<0,05) показателей «время реакции» и «чистое время реакции» (рис.За) на 2й день обучения относительно обеих контрольных групп, и на Зй день относительно оперированных животных. Изменение данных показателей не связаны с изменением латентного периода реакции, поскольку, имеют противоположную направленность.

По числу ошибок не выявлено отличий между группами. Количество выполненных реакций (рис.3 б) увеличивалось у животных, перенесших геморрагический шок, по сравнению с оперированными крысами в 1й и 2й дни обучения (р<0,05). Однако не наблюдалось характерного для контрольных групп увеличения этого показателя к 4му дню по сравнению с 1м днем обучения, что указывает на нарушение консолидации памятного следа.

В пищевой мотивации отличий между группами не обнаружено. Изменения поведения у «осенне-зимних» реанимированных носили обратный характер по отношению к оперированным животным.

При повторном тестировании в ПКЛ отмечалось снижение числа реакций груминга. Тот факт, что по показателям «время в светлом отсеке» отмечено достоверное увеличение, а по числу «свешиваний» и «заходам в светлый отсек» тенденция к возрастанию этих показателей относительно группы оперированных животных, позволяет говорить об уменьшении тревожности.

Изменение динамики груминговой активности наблюдалось также в тесте «Норковая камера». Тенденция к возрастанию числа обследованных норок и увеличению вертикальной активности может являться следствием снижения мотивации страха.

%

Чистое время реакции

1день 2день Здень 4день В

(29 день) (30 день) (31день) (32 день) (39 день) а) дни обучения

—•—ингактные

о— операция - ■ геморрагия

% Количество выполненных реакций

1день 2день Здень 4день 8

(29день) (ЗОдень) (31 день) (32день) (39 день) б) дни обучения

□ интактные Б операция ■ геморрагия

Рис.3. Параметры обучения в Т-образном лабиринте через 4 недели у животных, реанимированных в осенне-зимний период. В скобках указаны дни после геморрагического шока. Данные указаны в %. За 100% приняты значения соответствующих параметров в 1й день обучения в интактной группе. * - р<0,05 (отличия от интактных), # - р<$,05 (отличия от оперированных).

Таким образом, учитывая весь комплекс выявленных изменений в поведении «осенне-зимних» реанимированных крыс, можно выделить две грани, которые характеризуют процесс обучения в «Т-образном лабиринте»: с одной стороны, снижение тревожности, и, следовательно, уменьшение влияния пассивно-оборонительной мотивации, с другой - ослабление мнестаческих функций.

Совсем другой характер носил процесс выработки условного рефлекса у животных, реанимированных в весенний период, через 4 недели после геморрагического шока.

В первый день у реанимированных крыс было отмечено достоверное увеличение времени реакции и чистого времени реакции по сравнению с контрольными группами (р<0,05), однако в последующие дни не было

обнаружено достоверных отличий между группами. По другим параметрам: «латентный период реакции», «латентный период выполненных реакций», «количество выполненных реакций» и «число ошибок», не выявлено изменений относительно контрольных групп. Тем не менее, было отмечено достоверно большее увеличение в процессе обучения показателя «количество выполненных реакций» по сравнению с контролем (р<0,05) (рис.4). В поведении животных при тестировании в ПКЛ не было достоверных отличий между группами.

„ Рис.4. Изменение показателя

о/ (КВР4-КВР1) *И ^

80 '' * «количество выполненных реакций»

(КВР4-КВР1) между 4м и 1м даем при обучении в Т-образном лабиринте у крыс, реанимированных в весенний период,. ГШ - геморрагический шок, * интактные операция ГШ " р<0,05 (отличия от интактных), # -

р<0,05 (отличия от оперированных).

В спонтанном поведении было выявлено усиление ориентировочно-исследовательской реакции, а именно, увеличение вертикальной и горизонтальной активности (р<0,05).

Наблюдаемое «улучшение» обучения может быть связано с доминированием ориентировочно-исследовательской компоненты в мотивационном балансе. Однако отклонение от нормы в «лучшую» сторону может быть также следствием снижения вероятностного прогнозирования событий и нуждается в дополнительной проверке в более чувствительных к этому виду нарушений тестах.

Таким образом, нарушения, выявленные в отдалешюм постреапи-мационном периоде, были более существенны у «осенне-зимних» крыс.

Анализ нарушений поведения в разные сроки после реанимации приводит к выводу, что изменения, обнаруженные на ранней стадии постреанимационного периода, проявляются только у высокотревожных животных. Вероятно, это было обусловлено тем, что в данной группе устойчивость к гипоксии ниже, чем в группе низкотревожных животных. Вторая неделя постреанимационного периода характеризуется восстановительными процессами, однако наряду с ними начинают развиваться отсроченные нарушения, выраженные к четвертой неделе. Следует отметить, что подобная фазность процессов после геморрагического шока известна и для ряда биохимических показателей в мозге (Кожура, 1980).

2. Коррекция постреанимационных нарушений с помощью рггуляторного пептида семакс. 2.1.Инфузия семакса (в/в, 7,5 мкг/кг/мин. в течение 20 мин) сразу после реанимации

Инфузия семакса не оказывала влияния на выживаемость животных после реанимации (оцетшвалось в пределах 1 недели) по сравнению с животными, получавшими физиологический раствор (0,04 мл/мин) (контрольная группа).

На фоне инфузии семакса не выявлено изменений среднего АД и ЧСС по сравнению с контрольной группой. Известно, что фрагменты АКТГ могут оказывать положительное влияние на параметры гемодинамики при геморрагическом шоке, в основе которого лежит увеличение остаточного объема крови за счет депонируемой в селезенке фракции (Вег1о1ш е1 а1., 1986). Однако эти эффекты возникают только при введении пептидов непосредственно после кро-вопотери. В наших опытах семакс вводили после реанимации, то есть спустя более чем 60 минут после кровопотери. С одной стороны, имеющиеся в селезенке ресурсы крови к этому моменту, по-видимому, уже использованы, а с другой стороны, внутриартериальная инфузия крови при реанимации отменяет необходимость увеличения объема циркулирующей крови.

Поскольку нарушения способности к обучению через 1 неделю после геморрагического шока отмечались только у высокотревожных животных, мы применяли семакс именно в. этой группе.

Показатель «латентный период реакции» (рис.5а) в группе реанимированных животных с инфузией семакса на Зй и 4й дни обучения достоверно снижался (р<0,05) относительно контрольной группы, получавшей физиологический раствор, и не отличался от интактной группы. Показатели «время реакции» и «чистое время реакции» (рис.5б) уменьшались на Зй и 4й дни обучения относительно контрольной группы (р<0,05) и не отличались достоверно от тех же показателей в группе интактных животных. Кроме того, «количество выполненных, реакций» (рис.5в), сниженное после геморрагического шока, достоверно возрастало в группе, в которой вводили семакс (р<0,05), по сравнению с контрольной группой и не отличалось по сравнению с группой интактных животных.

В группе реанимированных животных, получавших семакс, динамика временных показателей также нормализовалась до интактного уровня.

Таким образом, применение этого регуляторного пептида приводило к восстановлению показателей при обучении в Т-образном лабиринте до уровня, регистрируемого у интактных животных.

Однако применение семакса не предотвращало увеличение латентного периода выполненных реакций при воспроизведении. Это может быть связано с тем, что у животных, которым вводили семакс, пищевая мотивация (рис.6) была ниже (р<0,05) по сравнению с интактными крысами, в то время как в контрольной группе с физиологическим раствором подобного эффекта не наблюдалось. Снижение пищевой мотивации делает информацию о месте нахождения пищи менее значимой, а, значит, и более слабо воспроизводимой. Анорексическое действие характерно для АКТГ и его фрагментов (Вм1о1ш, 1995). Семакс, по-видимому, также обладает подобным влиянием, однако его эффект проявляется отсрочено.

Таким образом, несмотря на то, что пищевая мотивация снижалась, способность к обучению через 1 неделю после однократного применения семакса у реанимированных животных восстанавливалась. Это дает основание

Латентный период реакции

1день 2день Здень 4день В (вдень) (Эдень) (Юдень) (11день) (Юдень) 3) дни обучения

Чистое время реакции

1день 2день Здень 4день В (вдень) (Эдень) (Юдень) (11 день) (Юдень) б) дни обучения

» ингакгные - - ГШ + физ.р-р —х- ГШ + семакс

% Количество выполненных реакций

1день 2день Здень 4день В (вдень) (Эдень) (Юдень) (11 день) (Юдень) В) дни обучения

□ ингакгные В ГШ + физ.р-р а ГШ + семакс |

Рис.5. Влияние инфузии семакса (7,5 мкг/кг/мин) на параметры обучения в Т-образном лабиринте у высокогревожных животных через 1 неделю после реанимации. ГШ + семакс - реанимированные животные с янфузией семакса (в контроле - инфузия физиологического раствора). В скобках указаны дни после геморрагического шока. Данные указаны в %. За 100% приняты значения соответствующих параметров в 1й день обучения в интактной группе. * - р<0,05, *** - р<0,005, **** - р<0,001 (отличия от интакгных), & - р<0,05, && - р<0,01 (отличия от контроля).

для предположения о восстановлении других составляющих мотивационного баланса.

Рис.6. Влияние семакса (в/в инфу-зия, 7,5 мкг/кг/мин) на уровень пищевой мотивации через 1 неделю после геморрагического шока., ГШ + семакс - реахшмированные животные с семаксом (в контроле вводили физиологический раствор) * - р<0,05 (отличия от интакшых), & - р<0,05 (отличия от контроля).

Количество корма, г

1,2 1 -0,8 -0,6 -0,4 0,2 0

1

• &

ингакгные

ГШ +

физ.р-р

Г111 +

семакс

При исследовании спонтанного поведения животных было обнаружено, что в группе животных, получавших семакс, наблюдалась нормализация вертикальной и груминговой активности до уровня шггактаых животных. Отмечалось увеличение числа обследованных норок на -30 сек наблюдения по сравнению с интактными животными, однако к 60 сек данный показатель снизился по сравнению с контрольной группой и не отличался от интактной группы.

При повторном тестировании в ПКЛ в группе, в которой вводили семакс, не отмечено достоверных отличий от интактных животных.

При обучении через 4 недели после геморрагического шока у «осенне-зимних» крыс, которым сразу после реанимации вводили семакс, «латентный период реакции был снижен на 2й и Зй дни и при воспроизведении относительно контрольной группы с физиологическим раствором. В другие дни эти параметры были также меньше относительно группы реанимированных животных, которым вводили физиологический раствор, но различия между группами не достигали значимого уровня. Показатели «время реакции» и «чистое время реакции» достоверно уменьшались в первый день относительно контрольной группы с физиологическим раствором (р<0,05), а на 2й день обучения - относительно интактных животных (р<0,05).

Показатель «количество выполненных реакций» в процессе обучения не отличался от данного показателя ни у контрольных, ни у интактных крыс. По числу ошибок между исследуемыми группами не обнаружено различий.

Уменьшение «времени реакции» и «чистого времени реакции» к 4му дню обучения было достоверным в группе, в которой вводили семакс (р<0,01 и р<0,005, соответственно), в то время как у реанимированных крыс с физиологическим раствором изменение данных параметров не достигало уровня значимости (р=0,08). Увеличение «количества выполненных реакций» в процессе обучения, тем не менее, было недостоверным.

Таким образом, восстановление динамики параметров обучения через 4 недели после инфузии семакса было неполным.

С другой стороны, оставалось неясным, чем определялось снижение временных параметров обучения в «Т-образном лабиринте»: более быстрой

выработкой условного рефлекса или же характерным для реанимированных животных снижением уровпя тревожности и подавлением пассивно-оборонительной мотивации.

Повторное тестирование в ПКЛ показало, что у животных, перенесших геморрагический шок, введение семакса после реанимации увеличивало груминговую активность до уровня интактных, а показатели «время пребывания в светлом отсеке», «заходы в светлый отсек» и «свешивания» имели тенденцию к уменьшению.

Спонтанное поведение крыс, получавших семакс, не отличалось от интактных животных. По всем показателям, по которым у реанимированных крыс с физиологическим раствором были обнаружены отклонения, у животных с применением семакса была выявлена нормализация этих показателей. Отличий между группами по уровню пищевой мотивации не отмечалось.

Следовательно, инфузйя семакса сразу после реанимации нормализовала поведение и уровень тревожности у «осенне-зимних» крыс, однако восстановление мнестических функций было частичным. Такое длительное положительное действие семакса может быть связано с ангиопиоидными свойствами этого пептида, которые позволяют в раннем постгеморрагическом периоде блокировать вклад эндогенной опиоидной системы, активированной при геморрагическом шоке (Holaday, Faden, 1979). То, что в исследуемые сроки не проявлялось нощщеггшвной активности ссмакса в тесте «Горячая пластина», не отрицает подобной возможности, поскольку речь идет о функциональном антагонизме и в соответствии с теорией о пептидном континууме может быть задействован целый ряд других систем.

2.2.Однократное введение семакса (в/б. 150 мкг/кг) через 1 попето после геморрагического шока

Применение семакса за 15 минут до обучения в «Т-образном лабиринте» у высокотревожных реанимированных животных приводило к восстановлению временных параметров обучения до уровня интактных животных: «латентный период реакции» (рис.7а) уменьшался на 2й, Зй, 4й дни обучения и при воспроизведении (р<0,05) по сравнению с животными, которым вводили физиологический раствор - контрольная группа (0,8 мл, в/б). Показатель «время реакции» снижался (рис.76.) на Зй и 4й дни, а чистое время реакции на 2й, Зй, 4й дни обучения относительно контрольных животных.

Показатель «количество выполненных реакций» (рис.7в) достоверно возрастает в 1й, 2й, Зй дни обучения (р<0,005) и при воспроизведении относительно контрольной группы, а по сравнению с интактными животными на 2й и Зй дни обучения (р<0,05).

Динамика временных показателей соответствовала динамике этих показателей в ингакгаой группе. Таким образом, применение семакса за 15 минут до обучения у животных через 1 неделю после геморрагического шока не только восстанавливало процесс обучения, но и улучшало когнитивные функции по сравнению с интактными животными. Этот эффект, по-видимому, связан с ноотропной активностью семакса (Ashmarin et al., 1995).

Латентный период реакции

1день 2день Здень 4день В (вдень) (Эдень) (Юдень) (11день) (Юдень) а) дни обучения

% Чистое время реакции

~ (вдень) (Эдень) (Юдень) (11день) (18день) дни обучения

| » ингакгные ■ -ГШ + физ.р-р -х- ГШ + семакс]

% Количество выполненных реакций

1день 2день Здень 4день В (вдень) (Эдень) (Юдень) (11день) (Юдень) В) дни обучения

□ икгакгные ■ ГШ + физ.р-р О ГШ + семакс

Рис.7. Влияние ссмакса (150 мкг/кг, в/б введете за 15 мин до обучения в 1й день) на параметры обучения в Т-образном лабиринте у высокотревожных животных через 1 неделю после реанимации. ГШ + семакс - реанимированные животные с введением семакса (в контроле вводили физиологический раствор). В скобках указаны дни после геморрашческого шока. Данные указаны в %. За 100% приняты значения соответствующих параметров в 1й день обучения в интактной группе. * - р<0,05, ** - р<0,01,

*** - р<0,005, **** - р<0,001 (отличия от шггакгных), & - р<0,05, &&& - р<0,005

(отличия от контроля).

Кроме того, в той же группе животных, отмечалось восстановление всех параметров спонтанного поведения (16 день после шока, 9 день после инъекции) до уровня интактных животных.

Процесс выработки условного рефлекса через 4 недели у «осенне-зимних» животных, которым через 1 неделю вводили в/б семакс, достоверно улучшался по сравнению с контрольной группой, в которой вводили физиологический раствор: «латентный период реакции» снижался на 2й, 4й день (р<0,05), в другие дни отмечалось та же направленность, по изменения данного параметра не достигали значимого уровня. По сравнению с интактными животными не было обнаружено отличий..

Воспроизведение выработанного павыка у крыс, которым применяли семакс (4 недели после введения), характеризовалось снижением временных параметров - «латентный период реакции», «время реакции», «чистое время реакции» - не только по сравнению с контрольной группой, но и относительно интактных животпых.

% Количество выполненных реакций

Чдень 2день Здень 4день В (29день) (ЗОдень) (31день) (32день) (39 день) ) дни обучения

Количество ошибок

! ^^ j_| i^j 1_L

1день 2день Здень 4день В (29день) (ЗОдень) (31день) (32день) (ЗЭдень) ) дни обучения

Рис.8. Влияние семахса (150 мкг/кг, б/6 введение через 1 неделю после геморрагического шока) на параметры обучения в Т-образном лабиринте у животных, реанимированных в осенне-зимний период. ГШ + семакс - реанимированные животные с введением семакса (в контроле вводили физиологический раствор). В скобках указал ал дни после геморрагического шока. Данные указаны в %. За 100% приняты значения соответствующих параметров в 1й день обучения в интактной группе. * -р<0,05, *** - р<0,005 (отличия от интактных), & - р<0,05 (отличия от контроля).

□ интактные

I ГШ + физ.р-р

|ГШ+семакс

Показатель «количество выполненных реакций» (рис.8а) увеличивался достоверно к 4 дню обучения (р<0,005), что позволяет говорить о восстановлении когнитивных функций.

Количество ошибок (рис.8б) у крыс, которым вводили семакс достоверно возрастает в 1й день обучения относительно как контрольных, так и интактных крыс (р<0,05), по уже на 2й день отмечено снижение этого параметра по

сравнению с интактной группой (р<0,05). При воспроизведении также было обнаружено уменьшение «числа ошибок» (р<0,05) в группе реанимированных животных, которым вводили семакс, по сравнению с интактными крысами.

По-видимому, первый день у этих животных характеризуется усилением эмоциональной напряженности, что позволяет лучше воспринимать комплекс внешних стимулов. Наряду с этим последующее снижение числа ошибок говорит о том, что хорошо выражено угашение незначимых стимулов в процессе выработки условного рефлекса.

При повторном тестировании в ПКЛ было показано, что введение семакса реанимированным животным, оказывает достоверное влияние на один показатель: «время в светлом отсеке» снижалось относительно контрольной группы (р<0,05) и не отличалось от данного показателя у интактных и оперированных животных. Влияние семакса на другие показатели («заходы в светлый отсек», «свешивания», «груминг в темном отсеке») оказалось недостоверным, но отмечалась тенденция к их нормализации. Следовательно, на этом основании можно предположить, что введение семакса предотвращало изменение тревожности, возникающее на поздней стадии постреанимационного периода.

Учитывая, что уровень тревожности реанимированных в осенне-зимний период животных после применения семакса восстанавливался, снижение временных параметров в тесте «Т-образный лабиринт» можно рассматривать как улучшение способности к обучению.

Таким образом, в/б применение семакса через 1 неделю после реанимации не только восстанавливало параметры поведения и мотивациошше соотношение, но и улучшало когнитивные функции по сравнению с интактными животными, то есть оказалось более эффективным в предотвращении последствий геморрагического шока по сравнению с введением препарата сразу после реинфузии крови.

Исходя из того, что нарушения в постгеморрагическом периоде имеют фазовый характер развития, можно предполагать, что введение семакса через 1 неделю после реанимации воздействовало на патологические процессы, приводящие к формированию отсроченных нарушений.

3. Изменение биохимических параметров на разных стадиях постреанимационного периода.

Развитие экстремальных состояний вызывает значительные изменения ряда биохимических показателей, прежде всего характеризующих активность симпато-адреналовой системы, которая играет ключевую роль в стрессорньгх реакциях организма (Г.Селье, 1960). Эта роль может быть положительной, обеспечивая поддержание функционирования жизненно важных органов и антиоксидантную защиту, поскольку биогенные амины относятся к природным антиоксидантам. С другой стороны, по мере затягивания активации симпато-адреналовой системы при шоке начинают проявляться отрицательные стороны,

такие как гипоксия периферических тканей и потенциировашге процессов пере-киспого окисления линидов (Г.Г.Жданов, МЛ.Нодель, 1995).

Изменения исследуемых биохимических показателей на ранней стадии постреанимационного периода (0-7 дней) в группе, в которой вводили физиологический раствор, по-видимому, являются прямым следствием влияния геморрагического шока. На 20 минуте постреанимационного периода было отмечено возрастание продуктов ПОЛ в плазме крови в 6 раз (р<0,05), выражена тенденция к снижению норадреналина в надпочечниках (на 12 %), увеличению кортикостероидов в надпочечниках (на 26%) и увеличению серотонша в стволе головного мозга (на 26%) у реанимированных животных, которым вводили физиологический раствор, по сравнению с оперированными животными. В этой же группе на 7 сутки постреапимационного периода наблюдалась выраженная тенденция к снижению серотонина (рис.9) в селезенке (на 28%).

Рис.9. Изменение содержания серотонина в селезенке на разных стадиях постреапимационного периода. ГШ + семакс - реанимированные животные, которьм вводили семакс (в/в инфузия, 7,5мкг/кг/мин в течение 20 мин сразу после реанимации) В контроле (ГШ + физ.р-р) вводили физиологический раствор. За 100% приняты значения в группе оперированных животных. # р<0,05 (отличия от оперированных), & -р<0,05 (отличия от контроля).

% к контролю

200 -

7дней

□ операция В ГШ + семакс

28 дней В ГШ +физ.р-р

Снижение содержания норадреналина в надпочечниках, по-видимому, связано с гиперактивацией симпато-адреналовой системы при шоке. Так как синтез этого биогенного амина ограничен по скорости из-за наличия стадии гидрокси-лирования тирозина, снижение его концентрации в надпочечниках может косвенно свидетельствовать об увеличении выброса в кровь. С другой стороны, концентрация кортакостероидов, в синтезе которых нет лимитирующего звена, увеличивается, что, вероятно, связано с параллельной гиперактивацией гипота-ламо-гипофизарно-надпочечникой системы; эти данные подтверждают выраженную стрессорную реакцию. То, что изменения через 20 минут после реанимации не достигали статистически значимого уровня, по-видимому, обусловлено началом нормализации этих показателей в надпочечниках после реин-фузии крови.

На поздней стадии постреанимационного периода (28 сутки) в группе, в которой вводили физиологический раствор, наблюдалось увеличение содержания серотонина (рис.9)'в селезенке (р<0,05) и уровня норадреналина в надпочечниках (р<0,05) относительно оперированных животных.

Таким образом, геморрагический шок вызывает как срочные изменения в системе биогенных аминов, так и отставленные эффекты. Изменение содержания норадреналина в надпочечниках и серотонина в селезенке на 28 день, видимо, является отражением событий, происходящих в позднюю стадию постреанимациошгого периода и развивается вслед за промежуточной стадией восстановления (14 день). Интересно отметить, что на поздней стадии постреанимационного периода активность системы биогенных аминов изменяется в противоположную сторону по сравнению с ранней стадией.

Сопоставление полученных данных с результатами анализа поведенческой активности позволяет предполагать, что в определенной степени различия в реакциях животных на ранней и поздней стадиях постреанимационного периода может быть связано с соответствующим изменением активности системы биогенных аминов.

Исследование действия семакса на биохимические параметры показало, что данный пептид обладает собственными отсроченными эффектами.

Введение семакса интактным животным в отсутствии гипотепзии (в/б, 150 мкг/кг), приводило к снижению содержания адреналина (на 35%) и норадреналина (на 24%) в надпочечниках (р<0,01), увеличению уровня серотонина (на 34%) в селезенке (р<0,05) через 7 дней после введения, а также к возрастанию содержания кортикостероидов в надпочечниках (на 19%, р<0,01) через 28 дней по сравнению с интактными животными. В данном случае можно предположить, что семакс запускает каскад реакций, приводящий к увеличению выброса катехоламинов через 1 неделю из надпочечников, что, в свою очередь, приводит к увеличению синтеза серотонина в селезенке. Тем не менее, это лишь одна из версий, которые могут объяснить выявленные отклонения.

Введение семакса (в/в инфузия, 7,5 мкг/кг/мин в течение 20 мин) животным, перенесшим геморрагический шок, приводило на 7 сутки постреанимационного периода к достоверному увеличению содержания серотонина в селезенке по сравнению с группой, в которой вводили физиологический раствор,-и не влияло на другие показатели. Это может быть связано с собственным эффектом пептида. Поскольку серотонин потенциирует процессы кроветворения в костном мозге на самых рангах стадиях (В.П.Нефедов и соавт., 1991), увеличение его синтеза может приводить к восстановлению реологических свойств крови, а, следовательно, и доставки кислорода к тканям, уменьшая вклад постшоковой гипоксии в развитие дисфункций ЦНС. Возможно, что восстановление процессов обучения и поведения через 1 неделю после геморрагического шока у реанимированных высокотревожных животных, которым вводили семакс (в/в инфузия, 7,5 мкг/кг/мин), обусловлено именно влиянием семакса на уровень серотонина.

Заключение.

Общий анализ полученных данных позволяет сделать вывод о фазности развития постреанимационного периода. Уровень исходного функционального состояния ЦНС (оцененный по степени тревожности) определяет выживаемость

при геморрагическом шоке, вызванном длительной гиповолемической гштотеизией, а также возникновение нарушений в поведении и восприятии внешних стимулов на ранией стадии постреапимационного периода. На данном этапе нарушения проявляются только у высокотревожных крыс. Это, вероятно, обусловлено разной устойчивостью этих животных к гипоксическому воздействию.

На поздней стадии постреанимационного периода исчезает зависимость изменений в поведешш и обучении от исходного уровня тревожности. В то же время отставленные нарушения могут иметь разную направленность в зависимости от сезона, в котором проводили экспериментальный геморрагический шок и реанимацию. Неоднородный характер нарушений иа ранней и поздней стадиях доказывает, что в основе их возникновения, несмотря на общую причину, лежат разные механизмы. Существование промежуточной стадии восстановления исследованных показателей позволяет предполагать, что отставленные изменения имеют длительный скрытый латентный период.

Следует отметить повышенную уязвимость эмоционально-мотивационного компонента поведения как на ранней, так и на поздней стадиях. Принимая во внимание его важность для оценки и адекватной реакции на внешние стимулы, можно говорить о сниженной адаптационной способности животных в лострешпшационном периоде.

Обнаруженные фазовые изменения в активности системы биогенных аминов в постреанимациоююм периоде предполагают, что нарушения в обучении и поведешш животных могут быть связаны с этим фактором.

Существенно, что однократное применение семакса позволяло корригировать состояние животных. Тот факт, что введение данного регуляторного пегггада через 1 неделю оказалось более эффективным в предотвращении нарушений на поздней стадии по сравнению с введением семакса сразу после реанимации позволяет предполагать, что процессы, приводящие к отсроченным изменениям, развиваются в постреанимационном периоде.

В целом полученные данные говорят о необходимости дальнейшего исследования механизмов, лежащих в основе фазности постреанимационного процесса, и перспективности поиска средств для терапии постреанимационных энцефалопатий среди регуляторных пептидов.

выводы.

1. Геморрагический шок, вызываемый у крыс 30 минутной гиповолемической гипотензией, не приводит к летальным исходам и нарушению в процесса обучения в разные сроки после кровопотери.

2. Геморрагический шок, вызываемый у крыс 60 минутной гиповолемической гипотензией, приводит к летальным исходам в 17% случаев. Смертность зависит от исходной степени тревожности: в группе высокотревожных крыс этот показатель достоверно выше (25%).

3.60 минутный геморрагический шок вызывает нарушения в обучении и поведении крыс. Фазный характер последствий геморрагического шока выражается в появлении нарушений обучения в ранней и поздней стадиях постреанимационного периода и отсутствии изменений на промежуточной стадии:

а) на ранней стадии (через 1 неделю) наблюдается замедление скорости выработки условного рефлекса па место в Т-образном лабиринте с пищевым подкреплением, что выражается в увеличении показателей «латентный период реакции» и «время реакции» и снижении показателя «количество выполненных реакций». Данные изменения выражены только у крыс с высоким уровнем тревожности.

б) в промежуточной стадии (через 2 недели) не наблюдается различий в процессе обучения между реанимированными и конгрольными грушами.

в) на поздней стадии (через 4 недели) у крыс, реанимированных в осенне-зимний период, снижается уровень тревожности, одновременно с этим в данной группе нарушается выработка условного рефлекса. У крыс, реанимированных в весенний период, обучение улучшается.

4. Инфузйя семакса (в/в, 7,5 мкг/кг/мин в течение 20 минут) сразу после реанимации приводит к полному восстановлению параметров обучения и спонтанного поведения на ранней стадии и частичному восстановлению на поздней стадии.

5.Внутрибрюшинное введение семакса (150мкг/кг) через 1 неделю после геморрагического шока приводит не только к восстановлению, но и к улучшению параметров обучения по сравнению с шгтактными животными при нормализации регистрируемых показателей спонтанного поведения.

6. Геморрагический шок вызывает возрастание концентрации продуктов перекисного окисления липидов в плазме крови, снижение содержания норадреналина и увеличение содержания кортикостероидов в надпочечниках, увеличение уровня серотонина в стволе мозга (через 20 минут); снижение содержания серотонина в селезенке (через 7 дней) на ранней стадии постреанимационного периода и приводит к увеличению содержания норадреналина в надпочечниках и серотонина в селезенке (через 28 дней) на поздней стадии постреанимационного периода.

7. Инфузия семакса реанимированным животным (в/в, 7,5 мкг/кг/мин в течение 20 мин) сразу после реанимации приводит к восстановлению концентрации серотонина в селезенке через 1 неделю после геморрагического шока и не влияет на остальные исследованные биохимические показатели.

Список печатных работ по теме диссертации:

1.Бастрикова H.A., Крушинская Я.В., Дубинин В.А., Каменский A.A., Соколова H.A. Влияние пептидергической коррекции геморрагического шока на поведение крыс в постгеморрагическом периоде.// Бюл. экспер. биол. и мед., 1995, №12, С.623-625.

2. Крупшпская Я.В., Бастрикова H.A., Беспалова Ж.Д., Каменский A.A., Соколова H.A. Пептидергическая коррекция неврологического статуса в постгеморрагическом периоде.// В сб.тез. 1го Съезда Российского научного общества фармакологов: Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств, - Волгоград - 1995.

3. Бастрикова H.A., Крушинская Я.В., Каменский A.A., Соколова H.A., Ашмарин И.П. Пептидергическая коррекция геморрагического шока.// Успехи физиологических наук, 1996, Т.27, №1, с.32-46.

4. Крушинская Я.В., Бастрикова H.A., Соколова H.A. Пептидергическая коррекция кардио- и., гемодинамических показателей при остром геморрагическом шоке у бодрствующих крыс.// Вестник МГУ, 1996, сер. 16, биология, №4, с.21-24.

5. Соколова H.A., Крушинская Я.В., Бастрикова H.A., Кошелев В.Б., Беспалова Ж. Д. Защитное влияние эндогенного пептидного опиоидного антагониста FMRFa при остром гипоксическом и геморрагическом шоках у крыс.// Тез. докл. Межд. симп. «Физиолого-биохимические основы жизнедеятельности мозга», -Санкт-Петербург, 1994, с.34.

6. Бастрикова H.A., Новодержкина И.С., Зайцев А.Ю., Соколова H.A., Кожура B.JI. Влияние функционального состояния ЦНС (степени тревожности) на течение длительной артериальной гипотензии у крыс.// Реаниматология на рубеже XXI века. Материалы Межд. симп., поев. 60-летию НИИ общей реаниматологии РАМН. - Москва - 1996 - с. 10-11.

7. Бастрикова H.A., Новодержкина И.С., Соколова H.A., Кожура B.JI. Влияние геморрагического шока на процессы обучения в постгеморрагическом пероде.// Бюлл. экспер. биол. и мед. - 1996, принята в печать.

8. Bastrikova N.A., Novoderzhkina LS., Sokolova N.A., Kamensky A.A., Kozhura V.L. Semax (analogue ACTH - (4-10)) infusion doesn't have an influence on the learning of rats subjected to haemorrhagic shock.// In: 6th Metting of the International Neurotoxicology Association INA-6, 1997, Szeged, Hungary, P. 104.

9. Bastrikova N.A., Novoderzhkina I.S., Sokolova N.A., Kozhura V.L. Anxiety changes caused by haemorrhagic shock in rats.// Abstracts of XXXIII International Congress of Physiological sciences. -St.Petersburg. -1997. P.093.27.