Исследование низкоинтенсивной лазерной коррекции состояния организма животных при массивной кровопотере

Рощина, Анна Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование низкоинтенсивной лазерной коррекции состояния организма животных при массивной кровопотере
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Исследование низкоинтенсивной лазерной коррекции состояния организма животных при массивной кровопотере"

На правахрукописи

РОЩИ НААННААЛЕКСАНДРОВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОЙ ЛАЗЕРНОЙ КОРРЕКЦИИ СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ ПРИ МАССИВНОЙ КРОВОПОТЕРЕ

03.00.23. - Биотехнология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в Научно-исследовательском и учебно-методическом Центре биомедицинских технологий ВИЛАР (НИЦ БМТ ВИЛАР) РАСХН и в Государственном предприятии Научно-исследовательский институт общей реаниматологии РАМН (ГУП НИИОР РАМН)

Научные руководители:

доктор биологических наук Николаева Светлана Сергеевна

доктор медицинских наук, профессор Кожура Вячеслав Леонтьевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Никитина Зоя Кимовна

доктор биологических наук Соколов Николай Николаевич

Ведущая организация:

ГУ НИИ Общей патологии и патофизиологии РАМН

Защита состоится " 9 " марта 2004 года в 14 час. 00 мин. на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН по адресу: 117216 Москва, ул. Грина, 7.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216 Москва, ул. Грина, 7.

Автореферат разослан Ученый секретарь диссертационного совета Д 006.070.01

М.В.Кирцова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Многообразие биологических эффектов, направленных на мобилизацию компенсаторных реакций организма и широта терапевтического действия низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) обусловили его применение во многих областях медицины (Мешалкин Е.Н., Сергиевский B.C., 1981; Корочкин И.М. и соавт., 1984; Брилль и др., 1994; Капустина Г.М. и др., 1996; Кару Т.И., 2001; Клебанов Г.И. и др., 2001; Другова О.В. и др., 2001). Исследования последних лет свидетельствуют о том, что НИЛИ может быть эффективным средством профилактики морфофункциональных и метаболических нарушений в организме, наблюдаемых при массивной кровопотере (Кожура В.Л. и др., 1993, 2000; Таланцев К.В., 1997; Кравченко-Бережная Н.Р., 2001). При критических состояниях в организме возникают значительные гемоциркуляторные нарушения, создающие предпосылки для изменения водно-электролитного обмена и биохимических показателей тканей организма (Неговский В.А. и др., 1987; Торопов А.П., 1994; Sidharta Т., 1998; Shoemaker W. et al., 1996; Воробьев А.И. и др., 2001; Лескова Г.Ф., 2003; Коваленко Н.Я и др., 2003). Среди ключевых механизмов патогенеза при массивной кровопотере нарушению состояния воды в организме придается особое значение. Как известно, вода является обязательной составляющей всех биологических систем и согласно существующим представлениям воздействует на формирование и стабилизацию структуры макромолекул биополимеров, биомембран и более сложных надмолекулярных образований (Аксенов СИ., 1990; Мревлишвили Г.М., 1998). Сдвиги соотношения свободной и связанной воды в тканях могут в значительной степени отражать изменения функционального состояния организма, позволяют вскрыть механизмы развития некоторых патологических состояний и дать научное обоснование методов диагностики и коррекции метаболических нарушений, возникающих при этом (Микашинович З.И. и др., 1983; Фаращук Н.Ф., 1994; Николаева С.С. и др., 2002). Существенную роль в развитии критических состояний, в том числе острой массивной кровопотери, играет активация процессов пероксидного окисления липидов (ПОЛ), которые оказывают повреждающее действие на все компо " ан

(МсСоМ J.M.,1985; На1^еП B. et а1., 1989; Лескова Г.Ф., 2001). Известно так же, что по мере увеличения тяжести кровопотери в организме происходит последовательное переключение биоэнергетического обеспечения клеток с углеводов на продукты жирового обмена (Молчанова Л.В. и др., 1994).

Однако состояние воды и взаимосвязь процессов гидратации тканей с изменением содержания продуктов ПОЛ и уроновых кислот при массивной кровопотере, постреанимационном периоде и при использовании НИЛИ не изучена. Несмотря на то, что в последние десятилетия проводятся интенсивные и разносторонние исследования возможности использования лазера для коррекции патологий, развивающихся при различных заболеваниях, до сих пор остается недостаточно изученным вопрос о корригирующем действии НИЛИ на организм при массивной кровопотере.

Изучение механизмов изменения таких параметров как баланс свободной и связанной воды, содержание ПОЛ и продуктов углеводного обмена в миокарде и печени при кровопотере и действии лазера позволяет дать научное обоснование для использования НИЛИ в качестве одного из методов биомедицинской технологии восстановления жизненных функций организма при массивной кровопотере и помочь в выборе оптимальных условий его применения.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось исследование низкоинтенсивной лазерной коррекции состояния организма животных при массивной кровопотере.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

• Оценить возможность использования низкоинтенсивного лазерного излучения в качестве биотехнологического метода восстановления жизненных функций организма при массивной кровопотере;

• Исследовать влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на содержание свободной, связанной воды и биохимические характеристики тканей животных в преагональном состоянии (с артериальным давлением АД 25 мм рт. ст.);

• Изучить особенности состояния различных форм воды, содержание продуктов ПОЛ и уроновых кислот в миокарде и печени животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.);

• Исследовать влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на состояние воды и биохимические характеристики тканей животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.);

• Изучить характеристики содержания связанной и свободной воды, продуктов ПОЛ и уроновых кислот в миокарде и печени животных в постреанимационном периоде (после реинфузии крови) зависимости от уровня артериального давления и степени тревожности животных;

• Оценить эффективность корригирующего действия НИЛИ на состояние воды и биохимические характеристики, миокарда и печени в постреанимационном периоде.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Получены данные позволяющие рассматривать низкоинтенсивное лазерное излучение, как перспективный биотехнологический метод восстановления жизненных функций организма при массивной кровопотере.

2. Установлены пороговые значения потери крови (близкие к преагональному) за пределами которых НИЛИ не способствует адаптации организма, что необходимо учитывать при разработке научно обоснованных методов лазерной коррекции организма.

3. Одним из механизмов нарушения гомеостаза организма при массивной кровопотере наряду с активацией процессов ПОЛ и снижением содержания продуктов углеводного обмена в тканях, является дисбаланс свободной и связанной воды.

4. Использование НИЛИ при острой массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.) и в сочетании с реинфузией крови предупреждает изменение содержания различных форм воды, уроновых кислот и продуктов ПОЛ в миокарде и печени животных.

5. При массивной кровопотере и в постреанимационном периоде выявлены новые ранее неизвестные механизмы патологических последствий,

проявляющихся в изменении состояния воды, уровня ПОЛ и содержания уроновых кислот, характер которых зависит от тяжести кровопотери и степени тревожности животных.

6. Использование НИЛИ в комплексе с реинфузией крови способствует нормализации баланса свободной и связанной воды и повышает содержание продуктов углеводного обмена в миокарде и печени животных.

Научная новизна. Получена новая информация о механизме биологического действия НИЛИ, направленного на поддержание гомеостаза организма при массивной кровопотере.

Использование комплекса акваметрических и биохимических методов исследования позволило установить, что НИЛИ при массивной кровопотере предотвращает изменение баланса связанной и свободной воды, продуктов углеводного обмена и инактивирует процессы пероксидного окисления липидов, т. е. оказывает цитопротекторное, мембраностабилизирующее действие.

Впервые обнаружено существование пороговых значений потери крови, близких к преагональному (АД 25 мм рт. ст.) за пределами которых НИЛИ не только не способствует адаптации организма, но и приводит к дальнейшему повреждению биоструктур тканей.

Дана количественная оценка различных форм воды, содержащихся в миокарде и печени животных, соотношение которых специфично для каждого органа и меняется при массивной кровопотере и реинфузии крови.

Результаты исследования имеют большое значение для понимания общебиологических закономерностей функционирования организма и его отдельных органов в процессе массивной кровопотери, в постреанимационном периоде и в результате лазерной коррекции.

Научно-практическая значимость. Полученные данные позволяют рассматривать НИЛИ как эффективный компонент комплексного метода восстановления жизненных функций организма при массивной кровопотере и расширяют современные представления о патогенезе критических состояний и механизме действия лазерной коррекции нарушений гомеостаза организма.

Результаты этих исследований вносят определенный вклад в выяснение механизмов действия НИЛИ на состояние воды и биохимические характеристики миокарда и печени.*

Выявленный факт существования порогового значения потери крови за пределами, которого НИЛИ не способствует адаптации организма, следует учитывать при разработке и внедрении новых лазерных технологий коррекции организма при кровопотере.

Установленная в работе высокая чувствительность соотношения свободной и связанной воды к метаболическим нарушениям, происходящим в организме при кровопотере и лазерной коррекции, позволяет предложить этот показатель в качестве биотеста на тяжесть изменений и степень дезадаптации организма при разработке новых методов биомедицинской коррекции патологических изменений на тканевом и организменном уровне.

Результаты комплексного исследования акваметрических и биохимических показателей миокарда и печени животных позволили обосновать целесообразность лазерной коррекции в комплексе реанимационных мероприятий с учетом тяжести массивной кровопотери.

Данная работа соответствует одному из направлений Федеральной целевой программы "Развитие медицинской промышленности в 1998-2000 годах и на период до 2005 года", утвержденной Постановлением Правительства . РФ от 26.06.1998 № 650, приоритетному направлению НИР и ОКР отделения медико-биологических наук РАМН № 4 и Межведомственного научного совета Министерства здравоохранения РФ по медицинской биотехнологии № 3, а также плановой тематике Научно-исследовательского центра биомедицинских технологий ВИЛАР.

органических и элементоорганических пероксидов (Москва, 2003), на Международной конференции "Критические технологии в реаниматологии" (Москва, 2003), на конференции "Основные общепатологические и клинические закономерности развития критических, терминальных и постреанимационных состояний. Принципы их коррекции" (Москва, 2003). По результатам исследований опубликовано 11 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 147 стр. машинописного текста, содержитл рисунков и 11 таблиц. Работа состоит из введения, обзора литературы (2 гл.), экспериментальной части (1 гл.), результатов исследования и их обсуждения (4 гл.), заключения, выводов и списка литературы, включающего 285 йсточников, из которых 193 отечественных и 92 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены в осенне-зимний период на белых беспородных крысах-самцах массой 230-330 г. Крыс наркотизировали нембуталом (25 мг/кг массы внутрибрюшинно), катетеризировали хвостовую артерию и через нее за 15 мин до кровопотери вводили гепарин (500 МЕ/кг).

В эксперименте животные были разделены на группы: контрольная (наркотизированные, ложнооперированные); с артериальной гипотензией (АГ); с АГ и НИЛИ; с АГ и реинфузией крови; с АГ, реинфузией крови и НИЛИ. В опытах продолжительность АГ составляла 10 мин, 30 мин и 2 ч.

Для достижения необходимого артериального давления (АД 40 мм рт. ст. и АД 25 мм рт.ст.) кровь забирали через катетер в хвостовой артерии. Объем кровопотери составлял в среднем 10 мл/кг массы тела и 20 мл/кг массы тела, соответственно. Затем животным проводили возмещение кровопотери путем переливания собственной крови. Продолжительность постреанимационного периода составляла: 30 мин, 3 ч и 7 сут. Перед началом опытов животных с продолжительностью постреанимационного периода 7 сут разделили на высоко- и низкотревожных по тесту в лабиринте (Жуков Д. А. и др., 1994).

Методика надсосудистой лазерной обработки во всех опытах была одинаковой: световод Ые-К лазера (аппарат АЛОК-1, длина волны 633 нм, мощность 1 мВт) подводили в область хвостовых артерии и вены. Облучение

начинали на 8-ой мин кровопотери по достижении экспериментального уровня значения артериального давления и продолжали в течение 2 мин (Кожура В.Л., 1993).

Материалом исследования служили миокард, печень и плазма крови экспериментальных животных. Распределение материала по разделам эксперимента представлено в табл. 1.

Таблица 1

Использование экспериментального материала в разделах исследования

Количество

Раздел исследования животных

Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на состояние воды и биохимические характеристики миокарда и печени животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.)

Интактные 9

Контроль (наркоз, ложнооперир. 10 мин) 10

АД 40, 10 мин 8

АД 40,10 мин; НИЛИ 8

Контроль, (наркоз, ложнооперир. 2ч) 10

АД 40,2 ч 9

АД 40,2ч; НИЛИ 9

Лазерная коррекция постреанимационных изменений состояния воды и биохимических характеристик тканей животных (АД 40 мм рт. ст.).

Контроль, (наркоз, ложнооперир. 2ч) 20

АД 40,2 ч; реинфузия, 30 мин 6

АД 40,2 ч; НИЛИ; реинфузия, 30 мин 6

АД 40,2 ч; реинфузия, 180 мин 6

АД 40,2 ч; реинфузия, 7 сут 7

Низкотревожные, АД 40,2 ч; реинфузия, 7 сут 9

Высокотревожные, АД 40,2 ч; реинфузия, 7 сут 9

Контроль, высокотревожные 10

Контроль, низкотревожные 10

Исследование возможности лазерной коррекции состояния воды и биохимических характеристик миокарда и печени при кровопотере (АД 25 мм рт. ст) и реинфузии крови

Контроль, (наркоз, ложнооп. 30 мин) 12

АД 25,30 мин 7

АД 25,30 мин; НИЛИ 7

АД 25,30 мин; реинфузия,30 мин 10

АД 25,30 мин; НИЛИ; реинфузия,ЗОмин 10

Всего 177

На каждом этапе работы в образцах тканей определяли содержание общей, свободной и связанной воды, количество продуктов липидной пероксидации, супероксид-перехватывающую активность и содержание уроновых кислот в гидролизатах тканей.

Для изучения особенностей гидратации тканей использовали комплекс акваметрических методов (Николаева С.С. и др., 1998). Количество общей воды определяли прямым титрованием с реактивом Фишера (Климова В.А., 1975). Подвижность воды, содержащейся в образцах тканей, и прочность ее связывания с биополимерами изучали на дифференциальном сканирующем калориметре DSC-2 (фирма Perkin-Elmer). По площади эндотерм плавления замораживаемой воды (до - 15 °С) рассчитывали количество свободной воды. Количество связанной воды определяли по разности между содержанием общей и свободной воды.

Об уровне процесса ПОЛ в органах и плазме крови судили по содержанию в них продуктов, реагирующих с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП), которые измеряли флуориметрическим и спектрометрическим методами (Tanizava H. et al., 1981; Гаврилов В.Б. и др., 1983). Супероксид-перехватывающую активность оценивали по способности гомогенатов тканей, либо плазмы крови ингибировать люцигенин-зависимую хемилюминесценцию, специфичную для О2, образующихся при окислении кверцетина в щелочной среде. За 1 условную единицу О2-перехватывающей активности принимали подавление светосуммы ХЛ на 50% по сравнению с контролем (Теселкин Ю.О. и др., 1998). Изменение углеводных компонентов в тканях животных оценивали по содержанию уроновых кислот с помощью карбазолового метода (Chandrasekaran E.V. et. al., 1980).

Статистическую обработку результатов проводили, используя распределение Стьюдента для малых выборок. Все результаты представлены в виде значений средней величины ± стандартная ошибка среднего (Маймулов В.Г.и др., 1996).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на состояние воды и биохимические характеристики тканей животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.)

Из данных, приведенных на рис. 1 следует, что в миокарде через 10 мин острой кровопотери при неизменном содержании общей воды, количество свободной воды уменьшается на 8 % (отн.) (рис. 1а), а связанной воды увеличивается на 44 % (отн.) (рис. 16), что очевидно обусловлено изменением водно-электролитного обмена при артериальной гипотензии (АГ).

Рис. 1 Содержание различных форм воды в миокарде животных при массивной

кровопотере (АД 40 мм рт.ст.): а-общая — и свободная-, б-связанная вода,

К- контроль (п = 10), АГ 10 мин (п = 8), АГ 2 ч (п - 9). *р < 0,05 по сравнению с контролем.

Ко второму часу АГ соотношение различных форм воды в миокарде восстанавливается до исходных величин, что подтверждает его высокую компенсаторную активность.

В печени, как и в миокарде, содержание общей воды за 10 мин АГ не меняется, а происходит изменение соотношения связанной и свободной воды. Однако, в отличие от миокарда, количество свободной воды за 10 мин АГ увеличивается на 5 % (отн.) (рис. 2а), а содержание связанной воды уменьшается на 27 % (отн.) (рис. 26). В последующие 2 ч АГ наблюдается достоверное по сравнению с 10 мин АГ повышение общего влагосодержания на 6 %, за счет увеличения свободной воды (рис. 2а), что может привести к отеку

печени. При этом количество связанной воды не меняется (рис. 26). Полученные данные показывают, что печень, по сравнению с миокардом подвергается большим ишемическим повреждениям при кровопотере.

Рис. 2 Содержание различных форм воды в печени животных при массивной

кровопотере (АД 40 мм рт.ст.): а-общая-и свободная-, б-связанная вода,

К- контроль (п = 10), АГ 10 мин (п - 8), АГ 2 ч (п = 9). р < 0,05 по сравнению с контролем.

Таким образом, в первые минуты кровопотери происходят наиболее существенные изменения состояния воды в тканях, которые могут привести к дальнейшим осложнениям в жизненно важных органах в постреанимационном периоде.

Таблица 2

Влияние НИЛИ на содержание уроновых кислот в тканях животных при

массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст, АГ 10 мин), (п = 8)

Объект исследования Содержание уроновых кислот, г/100 г сухой ткани

Контроль без НИЛИ применение НИЛИ

Печень 2,98 ± 0,02 2,61 ±0,07* 3,03 ± 0,04**

Миокард 0,98 ± 0,03 0,86 ±0,03* 1,02 ±0,06**

Здесь: * р<0,05 по сравнению с контролем, п - число экспериментов

** р<0,05 по сравнению с параметрами животных без НИЛИ

Ё 70

и о о

^60

го

т 50

.Мш

70 65 60 55 50

1 2 3

Рис. 3 Влияние НИЛИ на содержание воды в тканях животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт.ст., АГ 10 мин): а-общая о. и свободная« вода в миокарде, б-общая □ и свободная а вода в печени; в — связанная вода в миокарде В и печени б-., 1- контроль (п = 10), 2- кровопотеря (п = 8), 3 - кровопотеря и НИЛИ (п = 8). *р < 0,05 по сравнению с кровопотерей

Полученные результаты позволяют предположить существование оптимального соотношения различных форм воды, которое очевидно характерно для каждой ткани. Повышение или снижение этого показателя по сравнению с контролем может привести к изменению физиологической и биохимической адаптации и нарушению гомеостаза тканей.

Исследование изменения содержания продуктов ПОЛ в тканях при массивной кровопотере (АД 40 мм рт.ст.) показали, что уровень ТБК-РП в миокарде, за 10 мин и 2 ч АГ не отличается от контроля (рис. 4). Увеличение уровня ПОЛ в плазме крови животных, так же как и в печени, наблюдается только при двухчасовой АГ (рис.4). Через 2 ч АГ содержание ТБК-РП в печени увеличивается в 1,4 раза, а в плазме крови - в 2,3 раза по сравнению с ложнооперированными животными.

Обнаруженная активация свободнорадикальных процессов при массивной кровопотере, в свою очередь может приводить к нарушению внутри- и межмолекулярных связей белково-липидного комплекса мембран клеток и уменьшению прочности связывания воды с биополимерами.

Из приведенных в таблице 2 данных следует, что содержание уроновых кислот в печени и миокарде в результате кровопотери (АД 40 мм рт. ст., АГ 10 мин) снижается на 15% и на 12%, соответственно.

а б

Рис. 4 Влияние НИЛИ на содержание ТБК-РП в тканях животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт.ст., АГ 2 ч): а - миокард о и печень в' , б - плазма крови , I - контроль (п =9), 2 - кровопотеря (п = 9), 3 - кровопотеря и НИЛИ (п = 9). *р < 0,05 по сравнению с 1, ** р < 0,05 по сравнению с 2.

Очевидно, обнаруженный дисбаланс связанной и свободной воды, наряду с активацией процессов ПОЛ и снижением содержания продуктов углеводного обмена является одним из механизмов нарушения гомеостаза организма при массивной кровопотере.

На следующем этапе работы была исследована коррекция с помощью низкоинтенсивного лазерного излучения изменений происходящих в тканях при кровопотере.

Из данных, рис. 3, 4 и табл. 2 следует, что воздействие НИЛИ при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.) предупреждает изменение содержания связанной и свободной воды, уроновых кислот и снижает уровень ТБК-РП в изученных тканях.

Таким образом, выявлен ещё один биологический эффект НИЛИ, направленный на сохранение гомеостаза организма при массивной кровопотере.

Полученные результаты позволяют рассматривать НИЛИ как эффективный компонент комплексного метода восстановления жизненных функций организма после кровопотери.

2. Низкоинтенсивная лазерная коррекция постреанимационных нарушений состояния воды и биохимических характеристик тканей животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.).

Результаты исследования влияния реинфузии крови на состояния воды в тканях экспериментальных животных представлены на рис.5.

К 30 мин постреанимационного периода в сердечной мышце, на фоне не меняющегося содержания общей и достоверного снижения количества .. свободной воды, происходит увеличение в 1,4 раза содержания связанной воды , • по сравнению с контрольными образцами. К 3 ч постреанимационного периода в тканях миокарда наблюдается восстановление содержания свободной и связанной воды до исходного уровня, что свидетельствует о проявлении компенсаторной реакции миокарда в постреанимационном периоде.

Однако в последующие 7 сут вновь наблюдаются определенные изменения содержания различных форм воды в тканях, которые зависят от степени тревожности животных.

* ео

| 75

о ™

5 65 5 60

т 55 50

шй

Кв Кн 30 Зч 7суг 7 сут НИН в н

Срок наблюдения

Кн 30мин• Зч 7 сут 7сут в н

Срок наблюдения

Рис. 5 Динамика изменения содержания воды в миокарде в постреанимационном периоде (АД 40 мм рт. ст., АГ 2ч): а -общая Р и свободная ■ вода, б -связанная вода; Кн- контроль низкотревожные (п = 10) , Кв- контроль высокотревожные (п = 10), В - опыт высокотревожные (п = 9), Н - опыт низкотревожные животные (п = 9). *р < 0,05 по сравнению с контролем.

Из данных приведенных на рис. 5 следует, что через 7 сут в ткани миокарда высокотревожных животных содержание связанной воды снижается, но остается выше, а свободной ниже, по сравнению с теми же параметрами ткани до реинфузии. У низкотревожных крыс содержание различных форм воды в ткани миокарда не отличались от контрольных значений (рис.5). Это может свидетельствовать о большей адаптационной способности низкотревожных крыс к острой массивной кровопотере. У животных с высокой тревожностью, нарушения водного баланса в миокарде могут проявляться и в отдаленные сроки постреанимационного периода.

3 ч 7 сут 7 сут мин в н

Срок наблюдения

Кв Кн 30 3 ч 7 сут 7 сут мин в и

Срок наблюдения

Рис. 6 Динамика изменения содержания воды в печени в постреанимационном периоде (АД 40 мм рт. ст., АГ 2ч): а -общая и свободная вода, б -связанная вода; Кн- контроль низкотревожные (п = 10) , Кв- контроль высокотревожные (п = 10), В — опыт высокотревожные (п = 9), Н - опыт низкотревожные животные (п = 9). *р < 0,05 по сравнению с контролем.

В ткани печени (рис.6) закономерности изменения соотношения связанной и свободной воды к 30 мин постреанимационного периода аналогичны тем, которые наблюдаются в миокарде. Однако в печени по сравнению с миокардом эти изменения более значительны. Содержание связанной воды увеличивается в 2 раза (рис. 66), при этом наблюдается достоверное снижение количества свободной воды на 8% по сравнению с контролем (рис. 6а). К 3^ часу постреанимационного периода содержание связанной воды в ткани повышается в 1,9 раза, а количество свободной

снижается на 6 % по сравнению с контролем, при этом наблюдается незначительное увеличение общей воды (рис. 6а).

Через 7 сут постреанимационного периода в ткани печени высоко- и низкотревожных животных содержание связанной воды остается повышенным, при этом количество общей и свободной воды снижается на 3 % и 6 % соответственно по сравнению с контролем. В отличие от миокарда количественные изменения содержания воды в ткани печени не зависят от степени тревожности изучаемых животных.

Таблица 3

Содержание ТБК-РП через 7 сут после реинфузии крови АД 40 мм рт. ст, АГ 2 ч), (п = 14)

Объект исследования / Содержание ТБК-РП, нмоль/мл

Контроль Опыт

Миокард 35,37+1,09 40,79±1,06*

Печень 50,90+1,01 55,72±1,08*

Плазма крови 2,56±0,09 2,82±0,06*

Здесь: *- р< 0,05 по отношению к контролю, (п -число экспериментов)

Результаты экспериментов показали, что через 7 суток после реинфузии крови уровень ПОЛ остается выше, чем у контрольных животных (табл. 3). Из данных, приведенных в табл. 4 следует, что в ткани миокарда и печени через 30 мин постреанимационного периода после массивной кровопотери (АД 40 мм рт. ст., АГ 2 ч) содержание уроновых кислот снижается на 7% по сравнению с контрольными значениями (табл. 4).

Таблица 4

Содержание уроновых кислот в тканях животных через 30 мин после реинфузии крови при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст., АГ 2 ч), (п = 6)

Объект-исследования Содержание уроновых кислот, г/100 г сух. ткани

Контроль Кровопотеря и реинфузия Кровопотеря, НИЛИ, реинфузия

Миокард 0,95 ±0,02 0,88 ±0,01* 0,94 ±0,03**

Печень 2,98 ±0,08 2,75 ±0,06* 2,87 ±0,12*

Здесь: *- р< 0,05 по отношению к контролю; **- р< 0,05 по отношению к

животным без НИЛИ, (п - число экспериментов)

Таким образом, выявлены новые механизмы постреанимационных изменений, которые могут привести в дальнейшем к определенным патологическим нарушениям в кардиоцитах и гепатоцитах тканей животных. В результате использования НИЛИ при массивной кровопотере наблюдается тенденция к снижению нарушений соотношения свободной и связанной воды и содержания уроновых кислот в тканях миокарда и печени в постреанимационном периоде (рис. 7, табл. 4).

60 I "

¡5

£ 70 о

га

т 60 55 50

75 70 65 60 55 50

ло, 1=

* Л

с £ г

1 7 д I

£ *

1 л а * г

X X X X X X

X X

Рис. 7 Влияние НИЛИ на содержание воды в тканях животных в постреанимационном периоде (30 мин): а — общая □ и свободная вода Я в миокарде, б - общая,'®, и свободная и вода в печени, в - связанная вода в миокарде®! печени В 1 - контроль (п = 14), 2- кровопотеря и реинфузия (п = б); 3 — кровопотеря, НИЛИ и реинфузия (п = 6). *р < 0,05 по отношению к 1, ** р < 0,05 по отношению к 2.

Таким образом, НИЛИ в комплексе с реинфузией уменьшает постреанимационную патологию.

3. Исследование возможности лазерной коррекции состояния воды и биохимических характеристик миокарда и печени при массивной кровопотере (АД 25 мм рт. ст.) и в постреанимационном периоде

Массивная кровопотеря (АД 25 мм рт. ст., преагональное состояние) в ткани миокарда (рис. 8 а,в) приводит к снижению общей воды за счет уменьшения фракции свободной воды. Количество связанной воды практически не меняется.

В ткани печени (рис. 8 б,в), в отличие от миокарда, при АГ происходит увеличение общей воды за счет повышения в 1,5 раза содержания связанной, что очевидно можно рассматривать как отек-набухание гепатоцитов.

Как следует из полученных данных, через 30 мин АГ при АД 25, также как и при АД 40, в миокарде не обнаружено изменения содержания продуктов липидной пероксидации, в то время как в печени содержание ТБК-РП увеличивается в 1,2 раза (табл. 5). Накопление продуктов ПОЛ в печени сопровождается истощением антиоксидантных систем плазмы крови. О чем свидетельствует уменьшение антиоксидантной активности плазмы крови на

17%.,

80 I 75 ¡170

°65 га 60 ¿а 55 50

70 65 60 55 50

Рис. 8 Влияние НИЛИ на содержание воды в тканях животных: а - общая сэ и свободная ■ вода в миокарде, б - общая о и свободная и' вода в печени, в -связанная вода в миокарде (9 и печени 0 животных при кровопотере (АД 25 мм рт. ст., АГ 30 мин), 1 - контроль (п =12), 2 - кровопотеря (п =7); 3 - кровопотеря с НИЛИ (п =7). *р < 0,05 по сравнению с 1, **р < 0,05 по сравнению с 2.

Таблица 5

Содержание ТБК-РП в тканях животных, перенесших кровопотерю (АД 25 мм рт. ст., АГ 30 мин)

Объект исследования Содержание ТБК-РП, нмоль/мл

Контроль (п=12) Кровопотеря (п = 7)

Миокард 34,49 ±2,41 35,49 ±1,89

Печень 47,94 ±2,82 57,53 ±3,21*

Здесь: *- р< 0,05 по отношению к контролю, (п - число экспериментов)

Результаты исследования содержания уроновых кислот приведенные в таблице 6 показывают, что содержание уроновых кислот в печени в результате кровопотери при АД 25 мм рт. ст. снижается на 30%, а в миокарде на 16% по сравнению с ложнооперированными животными.

Таблица 6

Содержание уроновых кислот в тканях животных, перенесших кровопотерю (АД 25 мм рт. ст., АГ 30 мин)

Объект исследования Содержание уроновых кислот (мг/100 мг сух. ткани)

Контроль (п= 12) без НИЛИ (п = 7) с НИЛИ (п = 7)

Печень 2,98 ±0,09 2,10 ±0,07* 2,58 ± 0,05**

Миокард 0,98 ±0,03 0,80 ±0,06* 0,85 ±0,03**

Здесь: * р<0,05 по отношению к контролю, ** р<0,05 по отношению к кровопотере без НИЛИ (п — число экспериментов)

В этом случае особенно важным является исследование возможности коррекции ишемических нарушений с помощью НИЛИ.

На рис. 8 показано, что при использовании НИЛИ в преагональном состоянии наблюдается некоторая тенденция к нормализации баланса различных форм воды и содержания уроновых кислот в миокарде и печени животных (табл.6), однако их количество остается ниже контрольных значений.

Очевидно, в случае массивной кровопотери (АД 25 мм рт. ст., преагональное состояние) происходят более глубокие, по сравнению с АД 40 мм рт. ст. деструктивные нарушения биополимеров тканей, которые приводят к необратимым изменениям структурно-функционального состояния органов.

В постреанимационном периоде в ткани миокарда и печени, так же как и при АД 40 мм рт. ст. происходит перераспределение свободной и связанной воды, однако при этом меняется направленность процесса (рис. 9). Содержание связанной воды в миокарде и в печени снижается на 3 % и 5 %, соответственно (рис. 9 в), а количество общей и свободной воды в миокарде увеличивается на 5 % (рис. 9 а).

Таким образом, обнаружено существенное различие между состоянием воды в тканях животных в постреанимационном периоде после кровопотери при АД 40 мм рт. ст. и АД 25 мм рт. ст. В первом случае реинфузия приводит к повышению содержания связанной воды, а во втором (при большем объеме кровопотери) — к снижению связанной воды.

Через 30 мин после реинфузии крови в преагональном состоянии, также как и при кровопотере АД 40 мм рт. ст., повышается уровень ПОЛ в миокарде и печени на 13%, в плазме крови - на 18%, что происходит вследствие достоверного снижения антиоксидантной активности плазмы крови, и наблюдаемой тенденции к снижению этого параметра в миокарде и печени (табл. 7). Реактивация процессов ПОЛ является одним из ведущих факторов патогенеза реперфузионных повреждений тканей. Такие изменения могут приводить к нарушению внутри- и межмолекулярных связей белково-липидного комплекса мембран клеток и уменьшению прочности связывания воды с биополимерами, что наиболее ощутимо проявляется при массивной кровопотере (АД 25 мм рт. ст.).

Таблица 7

Влияние реинфузии крови и НИЛИ на супероксид-перехватывающую активность тканей животных при массивной кровопотере (АД 25 мм рт. ст., АГ 30 мин), (п = 6)

Объект исследования Супероксид-перехватывающая активность, усл. ед. на 1 мг белка

Контроль Кровопотеря и реинфузия Кровопотеря, НИЛИ и реинфузия

Миокард 98,19 ±1,06 96,39 ± 0,44 93,55 ±1,66*

Печень 97,82 ± 1,2 94,36 ±1,37 84,42 ±1,22**

Плазма крови 1,205 ±0,053 1,017 ±0,046* 0,984 ± 0,065*

Здесь: * р<0,05 по отношению к контролю, ** р<0,05 по отношению к животным без НИЛИ, (п - число экспериментов)

Таблица 8

Содержание уроновых кислот в миокарде и печени животных при массивной

кровопотере (АД 25 мм рт. ст., АГ 30 мин)

Объект исследования Содержание уроновых кислот, г/100 г сух. ткани

Контроль Кровопотеря, реинфузия Кровопотеря, НИЛИ, реинфузия

Миокард 0,96 ±0,06 0,61 ±0,04* 0,56 ± 0,02*

Печень 2,99 ±0,14 1,92 ±0,14* 1,78 ±0,17*

Здесь: * р<0,05 по отношению к контролю, (п — число экспериментов)

При этом происходит дальнейшее снижение содержания уроновых кислот в миокарде и печени животных (табл. 8).

Полученные данные позволяют рассматривать изменения состояния воды в организме животных в постреанимационном периоде в условиях АД 25 мм рт. ст., как следствие нарушения компенсаторных механизмов обеспечения системной микрогемодинамики тканей. При этом происходят необратимые нарушения гидратных оболочек биополимеров, которые, наряду с другими функциональными изменениями состояния организма, приводят к летальному исходу.

В преагональном состоянии, в отличие от массивной кровопотери (АД 40 м рт. ст.), НИЛИ приводит к резкому снижению содержания связанной воды в исследуемых тканях. Количество связанной воды в миокарде и печени крыс

уменьшается в 4 раза по сравнению с контролем (рис. 9 в). Практически вся вода, содержащаяся в тканях, переходит в свободное состояние (рис. 9 а). При этом применение НИЛИ приводит к дальнейшему снижению антиоксидантной активности миокарда, печени и плазмы крови животных (табл. 7) и содержания уроновых кислот в исследуемых тканях (табл. 8).

Таким образом, применение НИЛИ при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.) увеличивает адаптационные возможности организма, при терминальном (преагональном) состоянии НИЛИ не способствует адаптации организма. Полученные данные позволяют наметить новые подходы к применению лазерных технологий с целью коррекции нарушенных функций организма при массивной кровопотере.

ВЫВОДЫ

1. Впервые определены предельные пороговые значения потери крови при которых возможно использование НИЛИ в качестве перспективного биотехнологического метода восстановления жизненных функций организма.

2. Доказано, что в преагональном состоянии организма НИЛИ не оказывает корригирующего действия, что необходимо учитывать при разработке биомедицинской технологии лазерной коррекции при массивной кровопотере.

3. Установлено, что дисбаланс свободной и связанной воды, наряду с активацией процессов ПОЛ и снижением содержания продуктов углеводного обмена в тканях, является одним из механизмов нарушения гомеостаза организма при массивной кровопотере.

4. Показано, что применение НИЛИ» при массивной кровопотере предупреждает дисбаланс различных форм воды и продуктов углеводного обмена, препятствует активации пероксидного окисления липидов в тканях миокарда и печени.

5. В постреанимационном периоде выявлены новые ранее неизвестные механизмы патологических последствий, проявляющиеся в изменении состояния воды, уровня ПОЛ и содержания уроновых кислот, характер

которых зависит от тяжести кровопотери и степени тревожности животных.

6. Впервые показано, что использование НИЛИ в комплексе с реинфузией крови уменьшает постреанимационную патологию, способствуя восстановлению состояния свободной и связанной воды, содержания продуктов углеводного обмена в миокарде и печени животных.

Список публикаций по теме диссертации

1. Николаева С.С., Рощина А.А., Яковлева Л.В., Ребров Л.Б., Ким Зон Чхол, Новодержкина И.С., Бастрикова Н.А. Исследование соотношения фракций воды в сердечной мышце и печени крыс в динамике геморрагического шока. // Материалы научно-практической конференции. Патофизиология и современная медицина.- Москва, 2000. -С.141-143.

2. Рощина А.А., Кожура В.Л., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Ребров Л.Б., Николаева С.С., Новодержкина И.С., Паршина Е.Ю., Яковлева Л.В., Басараб ДА., Яковлева Н.Е., Кирсанова А.К. Влияние лазерного облучения на содержание пероксидов и фракций воды в печени и миокарде крыс в ранний постреанимационный период. // Материалы IX Российского национального конгресса "Человек и лекарство". — Москва, 2002. - С. 687.

3. Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура В.Л., Быков В.А., Яковлева Л.В., Королева О.А., Новодержкина И.С., Басараб Д.А., Паршина Е.Ю., Ребров Л.Б. Содержание различных форм воды в миокарде и печени крыс в ранний постреанимационный период. // Материалы третьей Всероссийской конференции. Гипоксия, механизмы, адаптация, коррекция. - Москва, 2002. - С. 101.

4. Рощина А.А, Николаева С.С, Кожура В.Л., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Яковлева Л.В., Быков В.А., Королева О.В, Ким Зон Чхол, Ребров Л.Б. Влияние лазерного облучения на содержание воды и пероксидов в печени и миокарде крыс при массивной кровопотере. // Биомедицинские технологии. - М., 2002. - Вып. 19. - С. 56-60.

5. Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура В.Л., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Яковлева Л.В., Быков В.А., Новодержкина И.С., Басараб Д.А., Ребров Л.Б., Паршина Е.Ю., Кирсанова А.К. Состояние воды и ПОЛ в тканях крыс при массивной кровопотере и облучении лазером. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,- М., 2003. - № 2. — С. 158-161.

6. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура

B.Л., Ребров Л.Б. Супероксид-перехватывающая активность плазмы крови и тканей крыс при геморрагическом шоке. // Материалы XI Международной конференции по химии органических и элементоорганических пероксидов. - М., 2003. - С. 300-302.

7. Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура В.Л., Быков В.А., Яковлева Л.В., Новодержкина И.С., Королева О.А., Ребров Л.Б., Паршина Е.Ю., Кирсанова А.К. Закономерности изменения различных форм воды в миокарде и печени крыс при кровопотере и в раннем постреанимационном периоде. // Биомедицинская химия. - М., 2003. - Т. 49, Вып. 5 . - С. 451-455.

8. Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура В.Л., Быков В.А., Яковлева Л.В., Новодержкина И.С., Паршина Е.Ю., Королева О.А., Ребров Л.Б. Постреанимационный синдром состояния воды в миокарде и печени* крыс. //Биомедицинские технологии - М., 2003.-Вып. 20. -С. 143-153.

9. Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура В.Л., Быков В.А., Яковлева Л.В., Новодержкина И.С., Кирсанова А.К., Ребров Л.Б. Вода в тканях при массивной кровопотере и лазерной коррекции. // Материалы конференции "Основные общепатологические и клинические закономерности' развития критических, терминальных и постреанимационных состояний. Принципы их коррекции"- М., 2003. -

C. 132-136.

10. Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура В.Л., Быков В.А., Яковлева Л.В., Новодержкина И.С., Басараб Д.А., Паршина Е.Ю., Ребров Л.Б. Влияние лазерного облучения на состояние воды в тканях экспериментальных

конференции "Критические технологии в реаниматологии" - М., 2003. — С. 79-80.

11. Рощина А.А., Николаева С.С., Кожура В.Л., Быков В.А., Яковлева Л.В., Новодержкина И.С., Кирсанова А.К., Королева О.А., Ребров Л.Б. Исследование состояния воды в тканях при массивной кровопотере и лазерной коррекции // Биомедицинские технологии и радиоэлектроника. -2004.-№1-2.-С. 93-100.

Рощина А.А. Исследование низкоинтенсивной лазерной коррекции состояния организма животных при массивной кровопотере Автореф. Дисс. канд. биол. наук: 03.00.23; - М., 2004. - стр. 24.

Подписано к печати 05.12.2003 г. Формат А5 Бум. Тип. Печать ризогр. Тираж 100 экз.

Научно-исследовательский и учебно-методический Центр биомедицинских технологий ВИЛАР, 123056, Москва, ул. Красина, 2.

Р- 27 68

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рощина, Анна Александровна

СОДЕРЖАНИЕ. список сокращен™.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1 Общие принципы биологического действия низкоинтенсивного лазерного излучения.

1.1. Современные представления о механизмах действия низкоинтенсивного лазерного излучения.

1.2. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения для коррекции критических состояний организма.

Глава 2 Состояние воды и биохимические характеристики тканей животного происхождения при терминальных состояниях организма.

2.1. Общие закономерности взаимодействия воды с биополимерами тканей.

2.2. Роль воды в регуляции биологических процессов.

2.3. Изменение биохимических характеристик тканей при терминальных состояниях.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3 Материалы и методы исследования.

3.1. Материалы исследования.

3.2. Методика применения Не-Ые лазера.

3.3. Акваметрические и калориметрические методы определения содержания воды в биополимерах.

3.3.1. Титриметрическое определение воды с реактивом К.Фишера.

3.3.2. Калориметрический метод оценки состояния воды в тканях экспериментальных животных.

3.4. Биохимические методы исследования.

3.4.1. Определение уроновых кислот.

3.4.2. Определение супероксид-перехватывающей активности.

3.4.3. Определение продуктов окисления липидов.

3.5. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 4 Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на состояние воды и биохимические характеристики миокарда и печени животных при массивной кровопотере

АД 40 мм рт. ст.).

4.1. Особенности состояния воды в тканях животных при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.).

4.2. Органопротекторное действие низкоинтенсивного лазерного излучения при массивной кровопотере (АД мм рт. ст.).

4.3. Влияние НИЛИ на биохимические характеристики тканей при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.). ■ ■ 63 4.3.1. Корригирующее действие НИЛИ на уровень ПОЛ в тканях животных при массивной кровопотере.

4.3.2. Влияние НИЛИ на содержание уроновых кислот в миокарде и печени при массивной кровопотере

АД 40 мм рт. ст.).

Глава 5 Исследование возможности лазерной коррекции состояния воды и биохимических характеристик миокарда и печени при массивной кровопотере (АД 25 мм рт. ст., преагональное состояние).

5.1. Влияние лазера на состояние воды в тканях животных при массивной кровопотере.

5.2. Влияние НИЛИ на биохимические характеристики тканей животных при массивной кровопотере (АД мм рт. ст.).

Глава 6 Лазерная коррекция постреанимационных изменений состояния воды и биохимических характеристик тканей животных (АД 40 мм рт. ст., АГ 2 ч).

6.1. Закономерности изменения различных форм воды в миокарде и печени в постреанимационном периоде.

6.2. Закономерности изменения биохимических характеристик миокарда и печени в постреанимационном периоде.

6.3. Лазерная коррекция постреанимационных изменений содержания различных форм воды и уроновых кислот в тканях.

Глава 7 Оценка эффективности использования НИЛИ для коррекции постреанимационных изменений состояния воды и биохимических характеристик тканей после кровопотери (АД 25 мм рт. ст., преагональное состояние).

7.1. Закономерности изменения различных форм воды в миокарде и печени в постреанимационном периоде и при действии НИЛИ.

7.2. Закономерности изменения биохимических характеристик в миокарде и печени в постреанимационном периоде и при действии НИЛИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование низкоинтенсивной лазерной коррекции состояния организма животных при массивной кровопотере"

Актуальность исследования. Многообразие биологических эффектов, направленных на мобилизацию компенсаторных реакций организма и широта терапевтического действия низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) обусловили его применение во многих областях медицины [27,56,75,80,90,115]. Исследования последних лет свидетельствуют о том, что НИЛИ может быть эффективным средством профилактики морфофункциональных и метаболических нарушений в организме, наблюдаемых при массивной кровопотере [84,86,95,172]. При критических состояниях в организме возникают значительные гемоциркуляторные нарушения, создающие предпосылки для изменения водно-электролитного обмена и биохимических показателей тканей организма [101,128,268]. Среди ключевых механизмов патогенеза при массивной кровопотере нарушению состояния воды в организме придается особое значение. Как известно, вода является обязательной составляющей всех биологических систем и согласно существующим представлениям воздействует на формирование и стабилизацию структуры макромолекул биополимеров, биомембран и более сложных надмолекулярных образований [7,124]. Сдвиги соотношения свободной и связанной воды в тканях могут в значительной степени отражать изменения функционального состояния организма, позволяют вскрыть механизмы развития некоторых патологических состояний и дать научное обоснование методов диагностики и коррекции метаболических нарушений, возникающих при этом [110,136,181]. Существенную роль в развитии критических состояний, в том числе острой массивной кровопотери, играет активация процессов пероксидного окисления липидов (ПОЛ), которые оказывают повреждающее действие на все компоненты клеточных мембран [101,246]. Известно так же, что по мере увеличения тяжести кровопотери в организме происходит последовательное переключение биоэнергетического обеспечения клеток с углеводов на продукты жирового обмена [120].

Однако, состояние воды и взаимосвязь процессов гидратации тканей с изменением содержания продуктов ПОЛ и уроновых кислот при массивной кровопотере, постреанимационном периоде и при использовании НИЛИ не изучена. Несмотря на то, что в последние десятилетия проводятся интенсивные и разносторонние исследования возможности использования лазера для коррекции патологий, развивающихся при различных заболеваниях, до сих пор остается недостаточно изученным вопрос о корригирующем действии НИЛИ на организм при массивной кровопотере.

Изучение механизмов изменения таких параметров, как баланс свободной и связанной воды, содержание ПОЛ и продуктов углеводного обмена в миокарде и печени при кровопотере и действии лазера позволяет дать научное обоснование для использования НИЛИ в качестве одного из методов биомедицинской технологии восстановления жизненных функций организма при массивной кровопотере и помочь в выборе оптимальных условий его применения.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

• Изучить характеристики содержания связанной и свободной воды, продуктов ПОЛ и уроновых кислот в миокарде и печени животных в постреанимационном периоде (после реинфузии крови) в зависимости от уровня артериального давления и степени тревожности животных;

• Оценить эффективность корригирующего действия НИЛИ на состояние воды и биохимические характеристики миокарда и печени в постреанимационном периоде.

Основные положения, выносимые на защиту.

2. Установлены пороговые значения потери крови (близкие к преагональному), за пределами которых НИЛИ не способствует адаптации организма, что необходимо учитывать при разработке научно обоснованных методов лазерной коррекции организма.

4. Использование НИЛИ при острой массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.) предупреждает изменение содержания различных форм воды, уроновых кислот и продуктов ПОЛ в миокарде и печени животных.

5. При массивной кровопотере и в постреанимационном периоде выявлены новые ранее неизвестные механизмы патологических последствий, проявляющихся в изменении состояния воды, уровня ПОЛ и содержания уроновых кислот, характер которых зависит от тяжести кровопотери и степени тревожности животных.

Впервые обнаружено существование пороговых значений потери крови, близких к преагональному (АД 25 мм рт. ст.), за пределами которых НИЛИ не только не способствует адаптации организма, но и приводит к дальнейшему повреждению биоструктур тканей.

Научно-практическая значимость. Полученные данные позволяют рассматривать НИЛИ, как эффективный компонент комплексного метода восстановления жизненных функций организма при массивной кровопотере и расширяют современные представления о патогенезе критических состояний и механизме действия лазерной коррекции нарушений гомеостаза организма.

Результаты этих исследований вносят определенный вклад в выяснение механизмов действия НИЛИ на состояние воды и биохимические характеристики миокарда и печени.

Выявленный факт существования порогового значения потери крови, за пределами которого НИЛИ не способствует адаптации организма, следует учитывать при разработке и внедрении новых лазерных технологий коррекции организма при кровопотере.

Данная работа соответствует одному из направлений Федеральной целевой программы "Развитие медицинской промышленности в 1998-2000 годах и на период до 2005 года", утвержденной Постановлением Правительства РФ от 26.06.1998 № 650, приоритетному направлению НИР и ОКР отделения медико-биологических наук РАМН № 4 и Межведомственного научного совета Министерства здравоохранения РФ по медицинской биотехнологии № 3, а также плановой тематике Научно-исследовательского центра биомедицинских технологий ВИЛАР.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции "Патофизиология и современная медицина" (Москва, 2000), на научно-практической конференции "Биомедицинские технологии" (Москва, 2002), на III Российской конференции с международным участием "Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция" (Москва, 2002), на IX Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2002), на XI Международной конференции по химии органических и элементоорганических пероксидов (Москва, 2003), на Международной конференции "Критические технологии в реаниматологии" (Москва, 2003), на конференции "Основные общепатологические и клинические закономерности развития критических, терминальных и постреанимационных состояний. Принципы их коррекции" (Москва, 2003). По результатам исследований опубликовано 11 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 147 стр. машинописного текста, содержит 20 рисунков и 11 таблиц. Работа состоит из введения, обзора литературы (2 гл.), экспериментальной части (1 гл.), результатов исследования и их обсуждения (4 гл.), заключения, выводов и списка литературы, включающего 285 источников, из которых 193 отечественных и 92 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Рощина, Анна Александровна

ВЫВОДЫ

1. Впервые дана количественная оценка содержания различных форм воды, в миокарде и печени при массивной кровопотере и лазерной коррекции, и показано, что соотношение связанной и свободной воды может быть использовано как биотест-показатель при диагностике и разработке новых методов биомедицинской коррекции патологических изменений на тканевом и организменном уровне.

2. Выявлен один из механизмов нарушения гомеостаза организма при массивной кровопотере, заключающийся в дисбалансе свободной и связанной воды, активации процессов ПОЛ и снижении содержания продуктов углеводного обмена в миокарде и печени.

3. Установлено, что применение низкоинтенсивного лазерного излучения при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.) предупреждает изменение содержания различных форм воды, продуктов углеводного обмена и ПОЛ в тканях, т.е. оказывает выраженное цитопротекторное, мембраностабилизирующее действие.

4. Полученные данные позволяют рассматривать низкоинтенсивное лазерное излучение, как эффективный метод биомедицинской технологии, способствующий адаптации и восстановлению жизненных функций организма при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.).

5. Установлены пороговые значения потери крови (близкие к преагональному) за пределами которых низкоинтенсивное лазерное излучение не способствует адаптации организма, что необходимо учитывать при разработке научно-обоснованных методов коррекции организма при массивной кровопотере.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование лазерной коррекции организма при массивной кровопотере соответствует одному из направлений Федеральной целевой программы "Развитие медицинской промышленности в 1998-2000 годах и на период до 2005 года", утвержденной Постановлением Правительства РФ от 26.06.1998 № 650, приоритетному направлению НИР и. ОКР отделения медико-биологических наук РАМН № 4 и Межведомственного научного совета Министерства здравоохранения РФ по медицинской биотехнологии № 3, а также плановой тематике Научно-исследовательского центра биомедицинских технологий ВИЛАР.

Исследования проводились на миокарде и печени животных. Непосредственная связь этих органов с системой кровообращения, энергетическим обеспечением и водно-электролитным равновесием придает этим тканям особую значимость при коррекции нарушения метаболических процессов организма.

Для оценки корригирующего влияния лазера использовались такие характеристики тканей, как содержание связанной и свободной воды, продуктов ПОЛ и уроновых кислот.

Выбор этих характеристик определялся следующими соображениями. Количество тканевой воды и ее структурная организация играют важную роль в патогенезе многих заболеваний и в значительной мере определяют гомеостатические механизмы организма.

Существенную роль при различных патологиях играет активация ПОЛ, которая оказывает повреждающее действие на все компоненты клеточных мембран. Однако, приводимые в литературе данные не увязывались с изменением различных форм воды при массивной кровопотере и лазерной коррекции.

Количественная оценка содержания уроновых кислот является не менее важным показателем состояния организма при кровопотере, т. к. полисахариды в значительной мере определяют его энергообеспечение. Развитие некоторых форм тканевой гипоксии приводит к ускоренному расходованию гликогена и изменению содержания других полисахаридов: гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфата и гепарина.

Предложенный комплекс акваметрических и биохимических методов, позволил выявить новые механизмы патологических нарушений в миокарде и печени животных при массивной кровопотере и в постреанимационном периоде, которые заключаются в нарушении баланса связанной и свободной воды, активизации процессов ПОЛ и снижении количества уроновых кислот.

Поскольку изменения этих характеристик идут синхронно при массивной кровопотере и реинфузии крови, можно сделать вывод, что эти процессы взаимообусловлены. Такие изменения не могут быть репарированы за счет использования внутренней энергии организма. Для предотвращения нарушений акваметрических и биохимических характеристик тканей организма, проявляющихся в результате массивной кровопотери, нужна дополнительная энергия. Подобное влияние на биосистему организма оказывает НИЛИ.

Такой вывод сделан на основании результатов данного исследования, в котором показано, что применение НИЛИ на ранних стадиях массивной кровопотери предотвращает: перераспределение свободной и связанной воды, увеличение ТБК-РП - одного из маркеров процесса ПОЛ и снижение уроновых кислот в тканях печени и миокарда, что способствует увеличению выживаемости животных после длительной артериальной гипотензии. Следовательно, под влиянием НИЛИ развивается активация функциональных возможностей организма. Оказывая корригирующее влияние на организм при кровопотере, НИЛИ вовлекает в ответную реакцию органы, ответственные за жизнь, что и приводит к адаптации организма.

Таким образом, полученные результаты исследования позволяют рассматривать НИЛИ как перспективный метод биомедицинсткой технологии, который рекомендуется использовать в качестве комплексного метода восстановления жизненных функций организма при массивной кровопотере.

Вместе с тем исследование действия НИЛИ на организм при различной тяжести кровопотери позволило установить, что в преагональном состоянии НИЛИ не способствует адаптации организма. Под влиянием НИЛИ при АД 25 мм рт. ст. процесс перераспределения различных форм воды усиливается. Практически вся вода, содержащаяся в тканях, переходит в свободное состояние. Наряду с этим развиваются процессы увеличения ТБК-РП и снижение уроновых кислот в тканях. Очевидно, в этом случае происходят необратимые структурные нарушения биополимеров клеточных мембран, в результате которых биополимеры теряют способность связывать воду. В этом случае развивается стрессорная реакция организма на лазерное излучение. Следовательно, конечный эффект лазерной коррекции зависит от начального физиологического состояния организма и тяжести кровопотери.

Полученные данные необходимо учитывать при разработке научно-обоснованных методов коррекции метаболических нарушений в организме при массивной кровопотере.

В процессе работы было обнаружено, что динамика изменений соотношения связанной и свободной воды в тканях объективно отражает степень дезадаптации организма при кровопотере и эффективность корригирующего действия НИЛИ. Полученные данные позволили предложить этот метод в качестве одного и критериев (биотестов) регуляции гомеостаза организма.

Рассматривая возможные механизмы корригирующего действия НИЛИ на организм при массивной кровопотере следует учесть литературные данные, полученные при исследовании лазерной коррекции организма при других патологиях, которые в основном сводятся к тому, что природа этого процесса определяется влиянием световой энергии на молекулярный уровень живых систем [46,60,75,81,91].

Определяющую роль в механизмах корригирующего действия НИЛИ играют светоиндуцируемые перестройки молекулярных и субмолекулярных жидкокристаллических структур и в том числе воды, которые могут способствовать усилению гидратационной способности активных центров биополимеров [122,169].

В основе лазерного влияния на метаболизм углеводов лежат фотобиологические процессы, которые способствуют энергообразующей функции клетки [25,75].

Показано, что электромагнитное поле линейно поляризованного лазерного света вызывает конформационные изменения липидного слоя клеточных мембран, что, в свою очередь, приводит к активации многих связанных с ней ферментов. Взаимодействие лазерного луча с активными центрами каталазы, супероксиддисмутазы и других природных антиоксидантов уменьшает патогенные эффекты ПОЛ на клеточные мембраны [13,45].

Очевидно НИЛИ, снижая активацию ПОЛ и предотвращая снижение продуктов углеводного обмена, в значительной мере способствует нормализации гидратационных характеристик биополимеров, которые определяются способностью активных центров всех структурных компонентов тканей связывать воду.

В результате проведенной работы показано, что при массивной кровопотере (АД 40 мм рт. ст.) НИЛИ оказывает биостимулирующее, адаптационное влияние на организм. Таким образом, установлен один из механизмов биологического действия НИЛИ, направленный на восстановление системы гомеостаза организма при массивной кровопотере.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рощина, Анна Александровна, Москва

1. Авруцкий М.Я., Катовский Д.Г., Мусихина Л.В., Гусейнов Т.Ю. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на основные биологические процессы и гомеостаз больных // Анестезиол. и реаниматол. 1991. -№ 5. - С. 74-79.

2. Агаджанян H.A. Адаптация к экстремальным условиям и резистентность организма // Вестник АМН СССР. -1987. № 6. -С. 24-28.

3. Агафонов Б.Е., Живлюк Ю.Н., Черников Ф.Р. Детерминированный хаос в динамике водородной связи // Биофизика.- 1995.- Т. 40, № 3.- С. 497-505.

4. Агов Б.С., Андреев Ю.А., Борисов A.B. О механизме терапевтического действия света гелий-неонового лазера при ишемической болезни сердца // Клиническая медицина.-1985.-№10.-С.102-105.

5. Айзенхабер Ф., Аджубей A.A., Айзенменгер Ф., Есипова Н.Г. Гидратация левой спирали типа поли-Ь-пролин. II. Исследование методом Монте-Карло // Биофизика.- 1992.- Т. 37, №1.- С. 68-73.

6. Аксенов С.И. Связанная вода в дисперсных системах // Состояние воды в биологических системах. М. - 1980.- №57. — С. 46-74.

7. Аксенов С.И. Вода и ее роль в регуляции биологических процессов. М., Наука 1990.- С.99.

8. Аксенов С.И. Исследование динамической структуры глобулярных белков импульсными методами ЯМР // Молекулярная биология.- 1983.- Т. 17.-С. 475-483.

9. Аксенов С.И. Метод ЯМР-релаксации // В кн. Новые физические методы в биологических исследованиях.- М., Наука.- 1987.- С. 143-163.

10. Аксенов С.И. Роль воды в процессах функционирования биологических структур и их регулировании // Биофизика. — 1985.-Т. 30.-С. 220-223.

11. Аксенов С.И., Боженко В.К., Калачихина О.Д. Влияние низкотемпературных лигандов на релаксацию протонов воды в растворах белков // Биофизика.- 1990.- Т. 35,- С. 39-42.

12. Артюхов В.Г., Башарина О.В., Пантак А.А.,Свекло Л.С. Влияние излучения Не-Ие-лазера на ферментативную активность и оптические свойства каталазы // Бюлл. эксперим. биол. и медицины.- 2000.-Т.129, №6.- С.633.

13. Барабаш О Л., Марцияш A.A., Шейбак Т.В. Стресс-модулирующие эффекры лазеротерапии у больных ИБС // Тер. архив.- 1996. № 2. - С. 50-53.

14. Бастрикова H.A., Крушинская Я.В., Дубынин В.А., Каменский A.A., Соколова H.A. Влияние пептидергической коррекции геморрагического шока на поведение крыс в постгеморрагическом периоде // Бюлл. экспер. биол. и медицины. 1995.-Т. 120, № 12.-С. 623-625.

15. Бастрикова H.A., Новодержкина И.С., Каменский A.A., Соколова H.A., Кожура В.Л., Ашмарин И.П. Влияние геморрагического шока на процессы обучения в отдаленном постгеморрагическом периоде // Бюлл. эксперим. биол. 1998. -Т. 125, №2.-С. 130-133.

16. Бергельсон Р.Д. Мембраны, молекулы, клетки. М.: Наука - 1982.-С.20-25.

17. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов.- М.- 1989. — С.3-25.

18. Блудова С.А., Сейтембетов Т.С. Нарушения гомеостаза при экстремальных и терминальных состояниях // Научныетруды, Новосибирск.- 1981, Новосибирский госуд. мед. ин-т.- С. 12-14.

19. Бойко JI.A. Оптическое излучение как сигнал индуктор для переключения программ морфогенеза у фотопериодических растений И Человек и свет. Саранск - 1982. - С. 111.

20. Брилль Г.Е., Киричук В.Ф. // В кн.: Применение низкоинтенсивных лазеров и излучения миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике. Саратов - 1994. - С. 3743.

21. Букин В.А. Акустическое исследование гидратации нуклеиновых оснований в водных растворах: анализ аномалий воды в гидратной оболочке // Биофизика.- 1988.- Т. 33,№6.- С. 926-931.

22. Буравков C.B., Цирольд К., Шахламов В.А. Картирование локального содержания воды и сухого вещества с использованием ультратронных замороженных срезов // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1993. - Т., № 9. - С. 325.

23. Бурджанадзе Т.В., Бежитадзе М.О. Калориметрическое исследование механизма развертывания молекулы коллагена в присутствии ионов // Биофизика.- 1988.- Т. 33, № 1.- С. 50-54.

24. Бурлакова Е.Б., Алексеенко A.B. Аристархова С.А., Архипова Г.В., Кайране Ч.Б., Мальцева Е.А., Молочкина Е.М., Пальшина Н.П., Хохлов А.П., Шелудченко Н.И. // Липиды биологических мембран. Ташкент:Фан, 1982.- С. 16.

25. Бурлакова Е.Б., Аристархова С. А., Федорова Л.В., Шелудченко Н.И., Шишкина Л.H.// Биол. науки.- 1991.- Т. 333, Вып .9.-С. 2127.

26. Бычков С.М. Кузьмина С.А. Протеогликаны и клетки // Бюлл. экспенрим. биол. и медицины. 1996. - Т. 121, № 2. - С. 124-127.

27. Воейков В.Л., Новиков К.Н. Сюч Н.И. Изменение хемилюминесценции неразведенной крови больныхишемической болезнью сердца в ходе лазеротерапии // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1998. - Т. 125, № 6. - С. 680-683.

28. Вязникова М.Ю., Денисов В.П., Николаева С.С., Петрусевич Ю.М. Спектры протонного магнитного резонанса связанной воды в мышце // Биофизика. 1993. - Т. 38, № 3. - С. 492-499.

29. Габрилян А.Г. Спектроскопия биополимеров // Биофизика. 1990. - Т. 35, № 4. - С. 702-704.

30. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль JI.M. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой // Вопросы мед.химии.- 1987.- Т.ЗЗ., Вып.1.- С. 118122.

31. Гасан А.И., Вирник K.M., Малеев В.Я. Энергетика гидратации нуклеиновых кислот различного нуклеотидного состава // Биофизика.2001. Т. 46,№ 6. - С. 997-1002.

32. Гасан А.И.,Вирник К.М.ДЛестопалова A.B.,Малеев В.Я. Динамические свойства воды, связанной на матрицах природных ДНК и модельных комплексов // Биофизика. 2002. -Т. 47,№ 2. -С. 245-252.

33. Генкин В.М., Новиков В.Ф., Параманов JI.B., Элькина Б.И. Влияние низкоинтенсивного лазерного облучения на состояние белков крови// Бюл. экспер. биол.- 1989.-№8.- С. 188-190.

34. Гогвадзе В.Г., Бруетовецкий H.H., Жукова A.A. Участие фосфолипазы А2 в индуцируемом продуктами перикисного окисления липидов разобщении митохондрий печени крыс // Биохимия.- 1990.-Т.55,Вып. 12.- С. 2195-2199.

35. Голдовский A.M. // Основы учения о состоянии организмов. -JL, 1977.-С. 116.

36. Горбатенкова Е.А., Азизова O.A., Владимиров Ю.А. Реактивация супероксиддисмутазы излучением гелий-неонового лазера // Биофизика.- 1988.- №4.- С. 717-719.

37. Горбатенкова Е.А., Владимиров Ю.А., Парамонов Н.В., Азизова O.A. Красный свет гелий-неонового лазера активирует супероксидисмутазу // Бюл. эксперим. биол. и медицины. -1989.-№3.-С. 302-305.

38. Гордон Д.С. "Гепариновый механизм" воздействия низкоинтенсивного инфракрасного лазера на ткани организма человека // Мед. журнал Чувашии. 1993. - № 1. - С. 77-80.

39. Горизонтова М.П. Микроциркуляция при стрессе // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1986. - № 3. - С. 9-18.

40. Городецкая Е.А., Каленикова Е.И. Образование гидроксильных рдикалов при реперфузии миокарда после экспериментальной ишемии различной длительности // Бюлл. экперим. биол. и медицины 2001. - Т. 131, № 6. - С. 629-632.

41. Гостищев В.К., Вертьянов В.А., Шкроб JI.O. BJIOK в комплексном лечении хронического остеомиелита // Тез. Междунар. конф. «Новое в лазерной медицине и хирургии».-Ч.1.- Переславль-Залесский.-1990.- С.17-18.

42. Губский В.И. Водно-солевой гомеостаз как фактор адаптации гормоннальных рецепторов // Всесоюзное физиологическое общество им. И.П.Павлова. Съезд 13, Алма-Ата, 1979. Реф. докл. на симпозиуме. - JL, - 1979. -Т. 1. - С. 201-202.

43. Губский В.И. Молекулярная структура и организация // Физиология и патология почек и водно-солевого обмена. — Киев, 1974.-С. 45-50.

44. Дементьева И.И., Трекова H.A., Белоус А.Е., Андрианова М.Ю., Мильчаков В.И., Иванов В.А., Чарная М.А. Метаболизм и функциональная способность миокарда при различных видах реперфузии сердца // Вестник РАМН. 1997. - Т. 11. - С. 31-34.

45. Довганский А.П., Курцер Б.М., Зорькина Т.А. Печень при экстремальных состояниях. Кишинев, Штиинца. - 1989. -С.71-123.

46. Древаль В.И. Влияние лазерного излучения на водорастворимые и мембраносвязанные белки // В кн.: Биологическое действие лазерного излучения.- Куйбышев. -1984.- С. 15-19.

47. Другова О.В., Монич В.А., Житникова О.В. Эффекты воздействия красного света на постишемический миокард при реперфузии // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. — 2001. — Т. 131,№4.-С. 386-387.

48. Евстигенеев А.П., Инюшин В.М. Лазерная стимуляция жидких сред // проблемы лазерной медицины: Материалы IV межд. конгресса, посвященного 10-летию Московскогообщественного центра лазерной хирургии. — Москва-Видное -1997.-С. 252.

49. Есипова Н.Г., Лазарев Ю.А. Исследование структуры коллагена спектральными и дифракционными методами. // в кн. Конформационные изменения биополимеров в растворах.- М.,-1973.- С.185-191.

50. Есипова Н.Г., Щеголева Т.Ю. Гидратационные параметры, определяющие структурно-функциональное состояние тканей содержащих коллаген. // Биофизика.- 1990. — Т. 35,№5, С.827-830.

51. Ефременков C.B., Нарезкина Л.П. К вопросу о механизме действия лазерного облучения на биологические объекты. // Тезисы докладов I Всероссийского конгресса по патофизиологии, 17-19 октября 1996. Москва - 1996.-С. 66.

52. Жуков Б.Н., Мусиенко С.Н. Влияние постоянного магнитного поля на состояние гемодинамического гомеостаза // Магнитные поля в биологии, медицины и сельском хозяйстве. -Ростов-на-Дону, 1985. С. 18-19.

53. Загускин С.Л. Гомеостаз при различных уровнях организации биосистем. Новосибирск, Наука (Сибирское отделение). -1991.-С. 51-57.

54. Зубкова С.М. Сравнительный анализ биологического действия микроволн и лазерного излучения. // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физ. культуры. 1996. -№6.-С. 31-34.

55. Зубкова С.М., Лапрун И.Б., Соколова З.А., Попов В.И. Окислительные и синтетические процессы в тканях печени и мозга при излучении гелий-неонового лазера // Биологические науки. Научные доклады высшей школы. 1981. - № 4. - С. 2431.

56. Иванов И.И.// Молекуляр. биология.- 1984.- Т. 18.Вып.2.-С. 512-524.

57. Идрисова Л.Т., Еникеев Д.А., Байбурина Г.А. Влияние лазерной гемотерапии на содержание кислых ГАГ в печени и плазме крови крыс в динамике алкогольной комы // Патологическая физиология и эксперимент, терапия.- 2000.-№2.- С. 15-17.

58. Инюшин В.М., Махмудова Г.Х. Новое в механизме действия гелий неоновых лазеров на организм // Лазеры в акушерстве и гинекологии. Тбилиси. - 1987. - С. 45.

59. Инюшин В.М., Чекуров П.Р. Биостимуляция лучом лазера и биоплазма. Алма-Ата. - 1975. - С. 207.

60. Инюшин В.М., Шабаев В.П. Роль водных структур в биофизических механизмах биологического действия лазерных излучений // Гигиенические аспекты использования лазерного излучения в народном хозяйстве. — М., Медицина. 1982 — С. 102-103.

61. Камскова Ю.Г. Изменение антиоксидантного статуса и уровня ПОЛ в крови и печени в динамике 30-суточной гипокинезии // Бюлл. эксперим. биолог, и медицины.- 2001.-Т.132, №10.- С.387.

62. Каплан М.А. Лазерная терапия механизмы действия и возможности //1-й Междунар. конгресс «Лазер и здоровье».-Лимассол-Москва:Фирма «Техника».-1997.- С 88-92.

63. Кару Т.И. Клеточные механизмы низкоинтенсивной лазерной терапии //Успехи соврем, биологии.- 2001.- Т.121,№1.-110-120.

64. Карякин A.B., Кривенцова Г.А. Состояние воды в органических и неорганических соединениях.- М., Наука. -1973.-С. 7-23.

65. Киселева Л.Ф., Меркулова Л.И., Митрофанов А.И. Вопросы гидродинамики в действии лекарственных веществ // Фармакология здравоохранению. — Л., 1976. — С. 99.

66. Клебанов Г.И., Крейнина М.В., Полтанов Е.А. К вопросу о механизме лечебного действия низкоинтенсивного инфракрасного лазерного излучения // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 2001. - Т. 131. - № 3. - С. 286-289.

67. Климова В. А. Основные микрометоды анализа органических соединений М., Химия. - 1975. - С. 170-196.

68. Козель А.И., Соловьева Л.И., Попов К.Г. К механизму действия низкоинтенсивного лазерного излучения на клетку // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1999. - Т. 128, № 10. — С. 397- 399.

69. Конторщикова К.Н., Перетягин С.П. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на некоторые метаболические показатели крови постреанимационного периода // Бюл. эксперим. биол. и медицины. 1992. - № 10. - С. 357-359.

70. Корнилова С.М., Леем П., Григорьев Д.Н., Капинос Л.Е., Тотова Я., Благой Ю.П. Калориметрическое исследование1. Ч , Л Iвлияния Са и Mg на переход спираль-клубок в ДНК // Биофизика.- 1997. Т. 42,№3. С.599-607.

71. Корочкин И.М., Иоселиани Д.Г., Беркинбаев С.Ф. Лечение острого инфаркта миокарда внутривенным облучением крови гелий- неоновым лазером И Сов. медицина. 1988. - № 4. -С. 34-38.

72. Корочкин Н.М., Капустина Г.М., Бабенко Е.В., Журавлев Н.Ю. Гелий-неоновая лазерная терапия в комплексном лечении нестабильной стенокардии // Советская медицина.- 1990.- №3.-С. 12-15.

73. Корочкин Н.М., Платонова Т.К, Капустина Г М. Внутривенная лазеротерапия в комплексном лечении острых пневмоний // Сов. медицина. 1989. - № 7. - С. 22-26.

74. Косых А. А., Арасланов С. А. Роль межклеточного матрикса в регенерации печени // Морфология. 2000. - Т. 117, №3.-С. 62-63.

75. Кошелев В.Н., Чалых Ю.В. Клиническая эффективность внутрисосудистой He-Ne лазеротерапии у больных с внутрибрюшинными кровотечениями // В кн. Низкоинтенсивные лазеры в эксперименте и клинике. — Саратов. 1992.-С. 72-80.

76. Кравченко-Бережная Н.Р. Нарушения транспортной способности альбумина плазмы крови у больных с тяжелой механической травмой и их коррекция низкоинтенсивным лазерным излучением: Автореф. дис. Канд. мед. наук. — М. -2001 -22С.

77. Куликов В.Ю., Ким Л.Б. Терапевтический эффект лазерного облучения у больных ишемической болезнью сердца

78. Применение лазеров в клинике и эксперименте. -М.,Медицина,1987. С.106-107.

79. Куринов И.В., Крупянский Ю.Ф., Суздалев И.П., Гольданский В.И. изучение влияния гидратации на динамику некоторых глобулярных белков методом рэлеевского рассеяния мессбауэровского излучения // Биофизика. 1987. - Т. 32, № 2. -С. 210-214.

80. Лазаревич Ю.В., Маевска М.Д., Строшнайдер И. // Анестезиология и реаниматология.- 1980.- № 5.- С. 39.

81. Ламри Р., Билтонен Р. Термодинамические и кинетические аспекты конформаций белков в связи с физиологическими функциями // В кн. Структура и стабильность биологических молекул.- М., Мир.- 1973.- С. 7.

82. Левин В.Н., Мельников В.А., Серкова О.В. Изменение микроциркуляции и соотношений общей, свободной и связанной воды основных компартментах организма при пневмонии // Сб. науч. Трудов 2-й Московский мед. Институт.-1981.-Т. 173, вып. 6.-С. 111.

83. Лескова Г.Ф. Роль нарушений липидного обмена в патогенезе геморрагического шока и пути их коррекции // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 212, № 1. — С. 79-90.

84. Литвицкий П.Ф., Сандриков В.А., Демуров Е.А. Адаптивные и патогенные эффекты реперфузии и реоксигенации миокарда. М., Медицина. - 1994. — 319 С.

85. Львов K.M., Исаков A.A. Влияние воды и вторичной структуры на термостабильность макрорадикалов в белках // Биофизика,- 1994.- Т. 39, № 5.- С. 757-760.

86. Мазурин Ю.В., Пономаренко В.А., Ступаков Г.П. Гомеостатический потенциал и биологический возраст человека. -М., 1991.-48С.

87. МаймуловВ.Г. Лучкевич B.C., Румянцева А.П., Семенова В.В. Основы научно-литературной работы в медицине // СПб.: Специальная литература.- 1996.

88. Макаров К.И., Калиш Ю.И., Постолов A.M., Ильхамов А.Ф. Применение лазерного излучения в амбулаторной хирургии // Клинич. хирургия. 1990. - № 1. — С. 63-65.

89. Малеев В.Д., Семенов М.А., Гасан А.Н., Кашпур В.А. Физические свойства системы ДНК-вода // Биофизика. — 1993. — Т. 38, №5.-С. 768-790.

90. Микашинович З.И., Шепотиновский В.И. Способ прогнозирования течения шока // Патент А 61 В 10/00 АС №1055475 публ. 831123 №43 СССР.126 f

91. Марцияш A.A. Стресс модулирующие эффекты инвазивной гелий-неоновой лазеротерапии у больных ИБС. Автореф. дис. канд. мед. наук. Москва. - 1996. — 25 С.

92. Маслова H.H., Посткоммационный отек головного мозга (по содержанию свободной, связанной воды в крови и ликворе). Смоленск.- 1992.- Автореф. дис. канд. мед. наук. 25 С.

93. ИЗ. Мацяк Ю.А., Марюк И.В., Слободян Е.Р. Лазеротерапия хронического проктосигмоидита на курорте Моршин // Клинич. хирургия. 1990. - № 2. - С. 37-38.

94. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М., 1984.- С. 5-15.

95. Мешалкин E.H., Сергиевский B.C. Применение прямого лазерного излучения в экспериментальной и клинической кардиохирургии // Результаты перспективы применения гелий-неоновых лазеров в кардиохирургии. Новосибирск. - 1981. - С. 6-29.

96. Мешалкин E.H., Сергиевский B.C., Наурошвили Т.И. Предупреждение и продление клинической смерти. Экспериментальное исследование. // Препринт 514, Новосибирск. 1984. - С. 3-10.

97. Минц Р.И., Скопинов С.А., Яковлева C.B. Фотооптический отклик плазмы крови на низкоинтенсивный красный свет // Биофизика. 1990. - Т. 35, № 6. - С. 998-999.

98. Михайлова Е.В., Зайцева И.А. // В кн.: Применение низкоинтенсивных лазеров и изучение миллиметрового диапазона в эксперименте и клинике. Саратов. - 1994. — С. 149151.

99. Михайлова JT.B., Агов Б.С., Конева С.Б., Евстафьева Е.С. Механизм влияния гелий-неонового лазерного облучения на сердце // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1987. - № 5. - С. 81-83.

100. Молчанова Л.В., Полякова Э.Д., Иванова Т.Н. Содержание циклических нуклеотидов и активность ферментов лизосом в тканях мозга, сердца и печени в раннем постреанимационном периоде // Анестезиология и реаниматология. 1994.- №5,-С.28-30.

101. Мороз В.В. Возможности коррекции гипоксии критических состояний // Экспериментальные, клинические и организационные проблемы общей реаниматологии. Сб. тр. НИИ общей реаниматологии РАМН. - М. - 1996. - С. 229-248.

102. Мостовников В.А., Мостовникова Г.Р., Морозова Р.П. Межклеточное дистанционное взаимодействие посредством электромагнитного излучения видимого спектрального диапазона. // Лазерная техника и лазерная медицина. — Хабаровск. 1989. - С. 82-83.

103. Мошкова А.Н., В.Е.Стефанов, Е.М.Хватова, С.Н.Лызлова Подходы к прогнозированию пределов устойчивости организма к гипоксии, основанные на оценке системы адениновых нуклеотидов // Бюл. эксперим. биол. и медицины- 1998. Т.125, №4. -С. 391-394.

104. Мревлишвили Г.М., Размаде Г.З., Метревели Н.О., Какабадзе Г.Р. Физика взаимодействия ДНК и воды с учетом двух типов водородных связей в воде // Биофизика.- 1995.- Т. 40, № 2.- С. 293-295.

105. Назаров Б.Ф., Галушка С.В., Власенко A.B. Мониторинг водно-секторальных нарушений у больных с гестозами. Материалы Международной конференции 17-21 марта 2003 г. Критические технологии в реаниматологии.-Москва. 2003. - С. 67-68.

106. Насонкин О.С., Линьков В.А. // Анестезиология и реаниматология.-1985.-№ 4,- С. 63-64.

107. Неберухин Ю.И., Рогов В.А. Строение водных растворов неэлектролитов. Сравнительный анализ термодинамических свойств водных и неводных двойных систем. // Успехи химии.-1971.-11.С.369-484.

108. Неговский В.А., Гурвич A.M., Золотокрылина Е.С. Постреанимационная болезнь. М., Медицина. 1987. - С. 242260.

109. Неговский В.А. Основные принципы лечения терминальных состояний, вызванных массивной кровопотерей и травмой // Вестн.АМН СССР.- 1979.- №3.- С.- 28-33.

110. Неговский В.А., Мороз В.В. // Анестезиол. и реаниматология. 2000, № 5, С. 39-42.

111. Недогода В.В., Спасов A.A., Куаме Конан. Новые направления в гепатологии. — СПб., -1996.-С. 7-21.

112. Николаева С.С., Вязникова М.Ю., Быков В.А. Особенности научно-методических подходов для изучения влияния воды на биологические объекты. Биомедицинские технологии. - М., 1998, вып. 10, с. 78-80.

113. Николаева С.С., Дубинская В.А., Михайлов А.Н., Королева O.A. Влияние аутолиза на физико-химическиесвойства кожного покрова млекопитающих. // Вопросы медицинской химии. 1981. -Т., № 3. - С. 362-365.

114. Новожилова Л.Ю., Молотков О.В. Изменение фракционного состава воды в крови и органах крыс при гипербиотических процессах // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1987. - № 1. - С. 72-74.

115. Новожилова Л.Ю., Молотков O.B. О возможности скрининга злокачественных новообразований по состоянию фракций воды в крови // Биохимия опухолевой клетки Минск. - 1990.-С. 37-38.

116. Новожилова Л.Ю., Молотков О.В. Характер количественных изменений общей, свободной и связанной воды в регенирирующей печени крысят, половозрелых крым-самцов и самок. Деп. В ВИНИТИ № 1360-В 87, 1987. - С. 7.

117. Ногаллер А.М, Звонков B.C. Эффективность лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки низкоинтенсивным электромагнитным (лазерным) излучением // Клинич. медицина. 1989. - №3.- С. 110-115.

118. Ольбинская Л.И., Литвицкий П.Ф. Коронарная и миокардиальная недостаточность. М., Медицина.-1986. - 269 С.

119. Остапченко Д.А., Шишкина Е.В., Мороз В.В. Транспорт и потребление кислорода у больных в критических состояниях // //Анестезиология и реаниматология . 2000. №2.- С. 68-72.

120. Паранич A.B. // Кислород и свободные радикалы. Междунар. симп., Гродно.- 1996.- С. 84-85.

121. Паранич A.B., Чайкина Л.А., Ионов И.А. // Материалы конф.»Актуальные проблемы современного птицеводства». Харьков 4-6 декабря.- 1991.- 74-75.

122. Петрусевич Ю.М., Коссова Г.В., Колье O.P. // Сверхслабые свечения в биологии. М.,Наука. 1972.- С. 133.

123. Платонов H.A. Влияние производных фенотиазина и бутирофенона на развитие отека-набухания головного мозга: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Смоленск. - 1982. —С. 15.

124. Плужников М.С., Холмогоров В.Е., Иванов Б.С. О механизме действия излучения гелий-неонового лазера на кровь и ее компоненты // Лазеры и медицина: Сб. тез. докл. Межд. конф. Ташкент - 1989.-Ч. 1.-С. 127-128.

125. Погорелов А.Г., В.Н.Погорелова, М.И.Дубровкин, И.П.Демин, Е.В.Хренова Активация специфических мембранных механизмов мышечной клетки сердца на начальной стадии ишемии // Биофизика.- 2002. -Т.47,№ 4. С. 744-751.

126. Привалов П.Л. Стабильность белков и гидрофобные взаимодействия // Биофизика.- 1987.- Т. 32.- С. 742-760.

127. Резников Л.Я. Лечение заболеваний верхних мочевых путей низкоинтенсивным лазерным излучением // Актуальные вопросы медицины: Тез. докл. 1-й Всерос. конф. М.- 1991.- С. 105-106.

128. Родионов Б.В., Когосов Ю.А., Коновалов Е.Г. Влияние лазерного излучения малой интенсивности на кровь и сосуды в клинике и эксперименте // Сов. медицина. — 1991. № 1. — С. 2729.

129. Романова Т.П., Брилль Г.Е. Особенности морфофункционального ответа тучных клеток на стресс при транскутальном лазерном облучении // Лазерная и магнитная терапия в экспериментальных и клинических исследованиях: Тез. докл. Обнинск, 1993.- Ч.1.- С. 9-10.

130. Ромоданов А.П., Сергиенко Т.Н. Отек и набухание мозга как нейрохирургическая проблема // Вопросы нейрохирургии им. Бурденко H.H. 1987. - № 4. - С. 3-9.

131. Росляков В.Я., Хургин Ю.И. Твердофазный гидролиз циннамоил-а-химотрипсина // Биохимия. 1972. - Т. 37. - С. 493-497.

132. Рубин А.Б., Венедиктов П.С., Кренделева Т.С., Пащенко В.З. Регуляция первичных стадий фотосинтеза при изменении физиологического состояния растений // Фотосинтез и продукционный процесс. М., 1988. - С. 29-40.

133. Рузов В.И. Сравнительное исследование действия гелий-неонового лазера, перлинганина и гепарина на энергетический аппарат ишемизированного миокарда // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. — 1994. № 1. - С. 3335.

134. Рузов В.И. Фармакологическая и лазерная коррекция нарушений микроциркуляторного русла при ишемии миокарда // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1996. - № 5. - С. 5-7.

135. Рузов В.И., Черняускене Р.Ч., Вилюнас C.JI. Возможности коррекции гелий-неоновым лазером антиоксидантной недостаточности в условиях гиподинамии // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1991. -№ 1. - С. 46-48.

136. Саханова P.A., Лебедева А.Г., Любовицкая Г.И. Соотношение свободной и связанной воды в мышцах в отногенезе // Структурно-функциональные основы нервных и психических заболеваний. Смоленск. - 1983. - С. 61 -64.

137. Саханова P.A., Любовицкая Г.И. О фазовых переходах свободной и связанной воды в процессе мышечного сокращения // Биофизика. 1985. - Т. 30, № 2. - С. 359-360.

138. Семенов М.А., Больбух Т.В., Гасан А.И., Малеев В.Я. Влияние воды на структурные переходы и стабильность ДНК из Clostridium-perfringens // Биофизика.- 1997.- Т. 42, № 3.- С. 591599.

139. Семенов М.А., Больбух Т.В., Кашпур В.А., Малеев В.Я., Мревлишвили Г.М. Гидратация и стабильность ß-формы Li ДНК. // Биофизика.- 1994.- Т. 39,№1.- С.50-57.

140. Семенов М.А., Матвеев Д.А., Больбух Т.В., Малеев В.Я. Гидратация и стабильность двухспирального комплекса poly(dA)-poly(dT) // Биофизика.- 1994.- Т. 39, № 4.- С. 628-636.

141. Серых М.М., Древаль В.И., Дряглина Л.П. Влияние лазерного облучения на интенсивность метаболическихпроцессов в различных органах крысы // Физиология вегетативной нервной системы. Тезисы Всесоюзной конференции. Куйбышев. - 1979. - Т. 2. - С. 151.

142. Сохадзе В.М., Мревлишвили Г.М., Есипова Н.Г. Калориметрическое исследование водных растворов гистона Н I и поли-Ь-пролина при низких температурах // Биофизика.-1990.- Т. 35, № 3.- С. 410-414.

143. Сочнева E.H. Гликемические кривые у крыс, перенесших 15-минутную клиническую смерть // Физиология и патология экстремальных и терминальных состояний.- Алма-Ата.- 1992. С. 136-138.

144. Таланцев К.В. Влияние низкоинтенсивного лазерного облучения крови на функциональное состояние миокарда левого желудочка и ценральную гемодинамику в раннем постреанимационном периоде: Автореф. дис. кан. мед. наук. -М., 1998-24С.

145. Тацуо О.О. Исследование биополимеров // В кн. Биополимеры Под. ред. Ю. Иманиси. М., - 1988. - С. 8-17.

146. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б. Определение антиокислительной активности плазмы крови с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол // Вопр. мед. химии.-1998. -Т.4,№1.- С.70-76.

147. Туманян В.Г., Рогуленкова В.Н. Есипова Н.Г., Айзехабер Ф. Конформация тройной спирали коллагена, как функция первичной структуры // Биофизика.- 1992.- Т. 37, № 1.- С. 5-9.

148. Удовиченко В.И. Экспериментальная разработка комплексной патогенетической терапии шока: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М.: НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН, 1993. 75 с. (у Лесковой)

149. Фаращук E.H., Маслова H.H. Нарушения гидратного гомеостаза в остром и отдалнном периоде легкой черепно-мозговой травмы // Вестн. Смоленской Медицинской академии. 1998.-№1.- С.15-17.

150. Фаращук Н.Ф. Оценка состояния организма при лучевом поражении по степени гидратации биоколлоидов крови // Радиационные поражения и перспективы развития средств индивидуальной защиты от ионизирующих излучений. — Москва. 1993.-С. 43-44.

151. Фаращук Н.Ф., Коновалова Н.Ю., Чиркин A.A. Фракционный состав воды и состояние липидтранспортной системы крови при действии ионизирующего излучения // Сб. научных трудов. — Витебск. 1993. С. 37-41.

152. Федотов В.Д., Задиханов P.A. Динамика молекул воды в гидратированном твердом полиглицине. Анализ форм 'Н ЯМР сигнала свободной индукции и спин-решеточной релаксации // Биофизика.- 1996.- Т. 41, № 5.- С. 965-972.

153. Финкельштейн A.B., Батретдинов А.Я. Физические причины быстрой самоорганизации стабильной пространственной структуры белков: решение парадокса Левинталя // Молекулярная биология.- 1997.- Т. 31, № 3.- С. 469477.

154. Франке Ф. Свойства водных растворов при температурах ниже 0°С // В кн. Вода и водные растворы при температурах ниже нуля градусов Цельсия. — Киев. 1985. - С. 176-276.

155. Фролова H.A., Паранич A.B., Светлакова H.H., Алдабаев Ю.В. // IV Съезд белорусского общественного объединения фотобиологов и биофизиков.- Минск, 28-30.06.2000,- С. 207.

156. Халепо О.В. Особенности функционального состояния регенерирующей печени при действии лазерного и ионизирующего излучения // Автореф. дис. . канд. мед. наук. — 2000.- 22 С.

157. Хамзина Н.К. Влияние изменений pH на степень оводнения мозга в постреанимационном периоде у крыс // Нарушения гомеостаза при экстремальных и терминальныхсостояниях. Сб.научн. тр. Новосибирск, Новосибирский госуд. мед. ин-т. 1981.- С. 40-42.

158. Хургин Ю.Н. Гидратация глобулярных белков. // Журнал ВХО им. Д.И. Менделеева. 1976. Т. 21(4).- С.684-690.

159. Черников Ф.Р. Роль электронных фазовых переходов воды в биологических системах // Биофизика.- 1991.- Т. 36, № 5.- С. 741-746.

160. Шишкин С.С., Китавцев Б.А., Дебов С.С. Изучение посмеротного распада полисом скелетных мышц крыс // Биохимия. 1975. - Т. 40, № 5. - С. 1053-1059.

161. Щелкунова Г.П. Количественные изменения общей, свободной и связанной воды в головном мозгу крыс и кроликов при его "отеке-набухании" до и после дегидратирующей терапии. Дисс. . канд. мед. наук. - Смоленск. - 1977. - С. 213.

162. Эйзенберг Д., Кауцман В. Структура и свойства воды.- JL, Гидрометеоиздат.- 1975.- С. 200-280.

163. Яковлева Н.Е., Ляпина Л.А., Новодержкина И.С., Кирсанова А.К., Березина Т.Л. Изменения гомеостаза при лазерном облучении крови во время кровопотери и после реанимации // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 2000.-Приложение 2.- С. 98-100.

164. Aksyonov S.I., Goryachev S.N., Denisov V.P. Effects of hydration on dynamic and functional properties of photosynthetic membranes from Rhodospirillum rubrum as revealed by 13C and 31 P MMR spectroscopy // Studia Biophysica. 1990.- P. 1-15.

165. Allenspach A.L., Maynard H., Tsonis P.A. Visualisation of proteoglycans and link protein in embryonic chick limb cartilage viacryoflcation, freeze-substitution and immunochemical techniques // J. Microscop. 1996. - V. 182, N 2. - P. 84-94.

166. Bardelmever G.H. Electrical conduction in hydration collagen II. Some aspects of hydration // Biopolymers.- 1973.- V. 12.- P. 2303-2307.

167. Berinton E., Long J.B., Holaday J.W. // Fed. Pore.- 1985.- V. 44,- P. 290.

168. Berki T., NemethP., Poto L.,Nemeth A. Effects of photosensitization and lowpower helium-neon laser irradiation on liposomes and cell membranes // Scanning Microsc. 1991.- V.5. -P. 1157-1164.

169. Bertoluzza A., Fagnano C., Fini G., Morelli M.A. Some roles of water in biological // Int. Conf. Spectrosc. Biol. Mol. 5-th.- 1993.-P. 365-368.

170. Billah M.M., Anthhes J.C. // Biochem. J.- 1990.- V. 269.- P. 281.

171. Block A., Bettelheim F.A. Water vapor sorption of hyaluronic acid // Biochem. Biophys. Acta.- 1970.- V. 201, N 1.- P. 69-75.

172. Chandraseh E.V., Rewiller J.H. Constituate analysis of glycosaminoglycans // Methods in carbohydrate chemistry. 1980.-V.VIIL- P.89-96.

173. Chen S.H. Dynamics of water of hydration in protein // Conf. Proc.-Ital. Phys. Soc.- 1993.- V. 43, (Water-Biomolecule interactions).- P. 189-194.

174. Das D.K., George A., Liu X., Rao P.S. // Biochem. Biophys Res. Commun. -1989.- V. 165.-P. 1004-1009.

175. Dhalla N.S., Temsah R.M., Netticadan T.J. // Hypertention. -2000.-V. 18.- P. 655-673.

176. Dong Man-Ku. Cui Yan, Chen Chang-wei., Zhongguo puwai jichu yu linchuand zazhi I I Clin. J. Bases and Clin, in Gen. Surg. -2001.- V.8, N5.-P. 295-297.

177. Drost-Hansen W., Singleton J. Lin. Intercellular water and regulation of cell volume and PH // Princ. Med. Biol. 1995. - V. 4, N 1.-P. 217-246.

178. Drost-Hansen W., Singleton J. Lin. Role of vicinal water in cells // Prins. Med. Biol. 1995. - V.4, N1. - P. 195-217.

179. Dugi K.A., Dichek H.L., Santaurarina S. // J. Biol. Chem. -1995.-V. 270.- P. 2539.

180. Erust J.A., Clubb R.T., Zhou H., Gronenborn A.M., Clore G.M. Demonstration of positionally disordered water within a protein hydrophobic cavity by NMR. // Science.- 1995. V. 267(5205).- P.1813-1817.

181. Fenyo M. Theoretical and experimental basis of biostimulation // Optics and laser technology. 1984. - V. 6. - P. 209-215.

182. Fletcher N.H. The chemical physics of ice // Cambridge U.P.Cambridge.- 1970.-P. 190-200.

183. Franks F., Mathias S.F. Hatley R.N.M. Water temperature and life // Phil, trans Roy. Soc. London. B. 1990. - V. 326, N 1237. -P. 517-533.

184. Gasan A.L., Kashpur V.A., Maleev V.V. Thermal transformation and hydration of serum albumin // Biofizika.- 1994.-V. 39, N. 4.- P. 588-593.

185. Grant E.N., Sheppard R.J., South G.R. Dielectric behavior of biological macromolecules in solution // Oxford, Clarendon Press.-1978.- P. 234.

186. Green M. E., Lewis J. Monte Carlo simulation of the water in a channel with charges // Biophys. J. 1991. - V. 59, N. 2. - P. 419426.

187. Grunder W., Kanowski M., Wagner M., Werner A. Visualization of pressure distribution within loaded joint cartilage by application of angle-sensitive NMR mictroscopy // Magn. Reson. Med.- 2000.- V. 43, N 6.- P. 884-891.

188. Hagler A.T., Scerada H.A., Nemethy G. Structure of liquid statistical thermodinamic theory // J. Phys. Chem.- 1972.- V. 76.- P. 3229.

189. Henney R.P., Vasko J.S., Brawley R.K., Morrow A.G. // Amer. Heart J.- 1966.- V. 72.- P. 242.

190. Holaday J.W // Neuroendocrine perspectives. -1984.- V. 3.- P. 161.

191. Holaday J.W., Faden A.I. //Nature.- 1978.- V. 275.- P. 450.

192. Hudson B.J.F., Mahgoul S.E.O. // J. Sci. Food Agric. -1981.-V. 32. P. 208.

193. Jacob T.D., Ochoa J.B., Udekwu A.O., Wilkinson J., Murray T., Biilar T.R., Simons R.L., Marion D.W., Peitzmen A.B. Nitric ocxide production is inhibited in trauma patients // J. Trauma. — 1993.-V.35.-P. 590-597.

194. Jin Li-juan, Cheng Wei-xin, Yin Xiao-lin, Yang Han // Multiple organ parenchymal cell apoptosis and its induction early ischemia-reprfussion in rat and mice // Chin. J. Pathphysiol. 2001. Vol. 17,N8.-P. 792-793.

195. Jizben Z., Zheglian Z., Wending Z. Hydration and thermotransition of collagen fiber // in "Water and ions biological systems", L.- 1985.-P. 197-214.

196. Junichi H., S. Masaki, Sh. Hiroki, N. Haruki, K. Takaki -Large vortex-like structure of dipole field in computer models of liquid water and dipole-bridge between biomolecules. — Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-2001.-V. 98.- № 11.-P. 5961-5964.

197. Kako E.J. Free radical effect on membrane protein in myocardial ischemia reperfusion injury. // J. Mol. and Cell Cardiol. 1987. - V. 19, № 2. - P. 209-211.

198. Kano Fumiaki, Kaminoh Yochiro, Kamaya Hiroshi, Ueda Issaku The water effect on phase transition of partially hydrated lipid multybilayer // Repts Progr. Polym. Phys. Jap. 1989. — 32. — P. 663-666.

199. Kayyali Usamah S., Donaldson Cameron, Huang Hailu, Abdelnour Raja, Hasson Paul M. Phosphorilation of xantine degidrogenaze/oxidaze in hipoxia // J. Biol. Chem.- 2001. V.276, N.17. - P.14359-14365.

200. Kertecs J., Fenyo M., Mester E., Bathory G. Hypothetical physical model for laser biostimulation // Optics and laser tecnology.- 1982.- V.4.-№l.-P. 31-32.

201. Konings A.W.T. // Radiat. Phys. Chem.-1987.- V.30,№ 5-6.-P. 339-349.(11)

202. Kubasova T., Kovacs I., Somosy Z. Biological effect of He-Ne laser: investigations on functional and micromorfological alternations of cell membranes in vitro // Laser Surg. Med. 1984. -V. 4., №4.-P. 381-388.

203. Labbe R.F., Skogerboe K.J., Davis H. A. Laser photobioactivation mechanisms: in vitro stadies using ascorbic acid uptake and hydroxyproline formation as biochemical markers ofirradiation response I I Laser Surg. Med. — 1990.- V. 10, № 2. — P. 201-207.

204. Lafonten M., Landin D. // Proc. Nutr. Soc.- 1995. -V. 54.- P. 49.

205. Lettlechild J.A. Current in protein research // Amino-Acids Proteins.- 1995.- V. 26.- P. 283-329.

206. Lozaridas T., Paulaitis M.E. The molecular origin of the large entropies of hydrophobic hydration // Nato Asi. Ser. B.- 1994.- V. 325.-P. 87-101.

207. Lubart R., Friedman H. Calcium transport in irradiated bovine mitochondria and plasma membrane vesicles // Laser Barselona, by ILTA Publishers, LTD, Laser Therapy. 1994, № 1. - P. 32.

208. Lumry R. Conformational mechanisms for free energy transduction in protein systems: old ideas and new facts // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1974. - V. 227. - P. 46-73.

209. Luo Xuechun, Yan Yongbin, Zhang Riging, Wang Xioyin, Fan Lili. NMR study of damage on isolated perfused rat heart exposed to ishemia and hypoxia // Tsinghua Sci. and Technol.- 2001.- V.6, N.3.-P. 281-284.

210. Lyons J., Eisenstein S.M., Swett B.E. Biochemical changes in intervertebral disc degeneration // Biochem. Biophys. Acta.- 1981.-V. 673, N4.-P. 443-453.

211. Macovschi E. The biostructured water // Rev. Roum. Biochem.- 1980.- V.17, N 1.- P. 39-49.

212. Manthorpe R. Longterm effect of glucocorticoid on connective tissue of aorta and skin. //Acta endocrinol., -1980.- V. 2.- P.271-281.

213. Manzatu J., Frandafir V., Christof R. Reorganisation of collagen in the presence of structured (activated) water // World Meet Pharm., Biopharm. Pharm. Technol. 1-st.- 1995.- P. 26-27.

214. Mashimo S. Structure of water in pure liquid biosystems // J. Non-Cryst. Solids.- 1994.- V. 172, N2.-P. 117-120.

215. McCord J.M. // N. Engl.J.Med. 1985. - Vol. 312, N 3. - P. 159-163.

216. Meis Leopoldo. Role of water in the energy of hydrolysis of phosphate compounds energy transdyction in biological membranes // Biochim. Et biophys. Acta. Bioenerg. - 1989. — V. 973, N2.-P. 333-349.

217. Mester A. Meser's methods of laser biostimulation // Laser Surg. Med. 1986. - V. 6, № 2. - P. 170.

218. Molina P.E., Malek S., Lang C.H., Qian L., Naukam R., Abumrad N.N. // Neuroimmunomodulation. -1997.- V. 4.- P. 36.

219. Murase Norio, Watanabe Tokuko Nuclear magnetic relaxetion studies of the compartmentalizet water in cross-linked polymer gels //Magn. Resonan. Med.- 1989.-V. 9,N l.-P. 1-7.

220. Nishida T.,Inoue T., Kamiike W., Kawashima Y., Takagawa K.// J. Biochem.- 1989.- V.106.- P.533.

221. Novler D.A. Kinetic effect in protein crystals. I. The role of hydration in protein aggregation // J. Phys. D: Appl. Phys.- 1995.- V. 28, N7.- P. 1384-1392.

222. Nunes Chini Eduardo, Montero Lomeli Monica, Meks L. The effect of the different water activities on the sarcoplasmatic reticulum of the Ca, Mg AT Pase // Arg. Boil. E. tecnol. - 1989. -V. 32, N. I.-P. 10-16.

223. Ochoa J.B., Udekwu A.O., Billiar T.R., Curran R.D., Cerra F.B., Simmons R.I., Peitzman A.B. Nitrogen oxide levels in patients after trauma and during sepsis. // Ann. Surg.- 1991.-V. 214.-P.621-626.

224. Ohshiro T., Calderhead R.G. Low Level Laser Therapy: A Practical Introduction.- Chichester- New-York — Brisbene Toronto - Singapore, John WiIey&Sons.-1988.- P.141.

225. Ordentlich A., Kronman C., Borak S.A. Engeneering resistance to "aging" of phosphylated human acetulholinesterase. Role of hydrogen bond network in the active center // FEBBS LETT.- 1993.-V. 334, N 2.- P. 215-220.

226. Parlato G., Cimmino G., De Venditis E. Superoxide dismutase activity in the skin of the rats irradiated by He-Ne laser // Experimentia, 1983. V. 39. N 7. - P. 750-751.

227. Patel D.J., Cannel L.L. Nuclear magnetic resonance studies of slowly exchanging peptide protons in cytochrome C in aqueous solutions // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1976. - V. 73. - P. 13981402.

228. Pocsik I., Furo I., Tompa K. // Biochem. Biophys. Acta.- 1986. V.880.- P. 1.

229. Pohl W., Bohl M. Infrared spectroscopic data favor a global mode hydration in determining DNA conformation by water activity // Biospectroscopy.- 1995.- V. 1, N 2.- P. 101-104.I145

230. Poole P.L., Finney L.L. Sequential hydration of dry proteins: a direct difference investigation a sequence homology lysozyme and a-lactat albumin// Biopolymers.- 1984.- V. 23.- P. 1647-1666.

231. Ramachandran G.N., Bausal M., Bhatnagar R.S. A hypothesis on the role of hydroxyproline in stabilizing collagen structure // Biochem. Biophys. Acta.- 1973.-V. 322, N1.-P.166-171.

232. Rosenkranz E.,Okamoto K.F.,Buckberg G. // J. thorac. cardiovasc. Surg.- 1986. -V. 92.- P.488-501.

233. Rustenbeck J., Lenzen S.// Naunyn-Schmideberg's Arch. Pharmacol.- 1989.-V.339.- P.37.

234. Schoenborn B.P., Gu W., Shu F. Hydrogen bonding and solvent in proteins. // Synchrotron Radiat. Biosci.- 1994.N 2. P.221-227.

235. Shon Mu Shik, Lowoling Per-Olov Some remarks on certain magnetic properties of water in the study of cancer // "Int. J. Quantum Chem.: Quantum Biol. Symp."- 1987.-N 14.-P. 9-14.

236. Sidharta T., Yoshitumi Y., Ziwei W. The study of damage on rat liver exposed to hypoxia-reoxiganation and ishemia-reperfusion // Crit. Care. Med.- 1998.- V.26.- P.1089-1095.

237. Siskova A., Wilhelm J. The effects of hiperoxia, hipoxia and ischemia/reperfusion on the activity of cytochrome oxidase from the rat retina // Physiol. Res. 2001. - Vol. 50, N 3. - P. 267-273.

238. Takigami Shoji, Takigami Machiko, Phyllips Glyn O. Hydration characteristics of the crosslinked hyaluronan derivative hylan // Carbohydr. Polym.- 1993.- V. 22, N 3.- P. 153-160.

239. Tanford C. The hydrophobic effect. 2nd ed, N.Y.: Wiley-Interscience - 1980.-233 P.

240. Tanizawa H., Matsushita S. Coloring conditions of thiobarbituric acid test for detecting lipid hydroperoxides // Chem. Pharm. Bull.-1981.- V.29.-P.2910-2914.

241. Tigyi J. Development of water research in biology // Water and ions boil. Syst. Proc. 2 Int. Conf. Bucharest, Sept., 6-11, 1982. N.Y. London.- 1985. P. 27-38.

242. Torres J.P., Boegehold M.Q., Bouskela E., House S.D., Johnson P.C. Microcirculatory responses in cot sortirius muscle to hemorrhagic hypotension // Am. J. Physiol. 1989. - P. 257.

243. Tuner J., Hodl L. // Laser therapy in dentistry and medicine. Stockholm. 1996.

244. Vasco J.S., Henney R.P., Oldman H., Brawley R.K., Morrow A.G. // Amer. J. Cardiol.- 1966.- V. 18.- P. 876.

245. Vasilescu V., Catona E. New data conserning the role of water in biosystems // Rev. roum. morfol. embriol. et phisiol., Ser. physiol. 1980.-V. 17, N 1.-P. 3-17.

246. Venditti P., Masullo P., Di Meo S. Hemoproteins affect H202 removal from rat tissues // Int. J. Biochem. and Cell Biol. 2001. — V. 33, N 3. - P. 293-301.

247. Vshida T., Tateishi T., Honma, Shirasaki Y., Hyodo K. Compressive behavior and water distribution of human lumbar vertebral disk by MRI // Implant Meter Biofunct: proc. 7th Eur. Cont. Biomater. Amsterdam ect., 1988. - P. 441-446.

248. Wall T.T., Hornig D.F. Raman intensities of HDO and structure in liquid water // J. Chem. Phys.- 1965.- V. 43, N 6.- P. 2079.

249. Weber B.H., Storm M.C., Boyer P.D. An assessment of exchangesbility of water molecules in the interior of hymotrypsinogen in solutions // Arch. Biochem. Biophys.- 1974.- V. 163, N 1.-P. 1-6.

250. Yoshida K., Mohserin V. // Life Sei. 1991. V. 49. P. 1359.

251. Zhang D., Chen T., Wang C., Wu S., Fu C. Effekt of heliumneon laser irradiation on serum lipid peroxide concemtrations in burnt mice//Laser Surg. Med. 1992.- V. 12.-P. 180-183.

252. Zhung Q.Z., Zhang C.F., Wang Q.Z. Effects of cyproheptadine on plasma superoxide dismutase activity and malondialdehyde content in rabbits with hemorrhagic shock // Clin. Med. (Engl.). -1994. V. 107. - N 5. - P. 323-325.

253. Zimmermann M., Wirksamkeit eines Helium-Neon-Laser auf Mikroorganismen // Stomatol DDR. 1990. - P. 9-11.

Информация о работе

Рощина, Анна Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.23

Диссертация

Исследование низкоинтенсивной лазерной коррекции состояния организма животных при массивной кровопотере - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы