Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Влияние биологических и технических факторов на результативность осеменения свиней замороженной спермой

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Влияние биологических и технических факторов на результативность осеменения свиней замороженной спермой"

Л

На правах рукописи

КРУК НИНА АЛЕКСАНДРОВНА

ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ И ТЕХНИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА РЕЗУЛЬТАТИВНОСТЬ ОСЕМЕНЕНИЯ СВИНЕЙ ЗАМОРОЖЕННОЙ СПЕРМОЙ

06.02.01. - Разведение, селекция, генетика и , воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы, Московская область

1999 г

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте свиноводства. . : —,

Научный руководитель:

доктор биологических наук АХ ПАРИЖНЫЙ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

И.Н. ШАЙДУЛПИН кандидат биологических наук П.В. ЖУКОВСКАЯ

Ведущее учреждение:

Российская академия ' менеджмента в животноводстве

Защитадиссертациисосгоится " " яаября1999п в Ючасов на заседании диссертационного Совета Д.020.16.01 при-. Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства. Адрес: 142012, Дубровицы, Подольского района, Московской области.

С.диссертацией можно ознакомиться в библиотека Всероссийского научно-исследовательского-института живатиогодстйа.

Автореферат разослан " "сентября 1999 г

Ученый секретарь диссертационного Совета, доктор с.-х. наук

ЮЛ, ШМАКОЇЇ

1; ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ : 1.1; Актуальность работы. Искусственное осеменение является важнейшим рычагом интенсификации репродукции свиней в условиях промышленного содержания. Особенно важным с точки: зрения-интенсификации селекщюнно-племеннойработьг в евино- ■■. водстве является метод долгосрочного хранения' спермы.хряков в

тубокозамороженном состоянии; . .....

Использование заморожекной'.спермышозволяетулучшить-племенную работу ъ свиноводстве,-, так как при. этом появляется возможность широкого использования выдающихся в генетическом отношении хряюов, проверенных по качеству погтомсгва.л -

Однако до сих пор, данный метод осеменения не нашел широкого практического применения в связи с: пониженной фергильностью заморохсенноотгаянойспермыХрЯКОВ. ; -* .. ■-.;

■ Бнолотческие причины пониженной криоустойчивосги спермы хряков к замораживанию окончательно не выяснены и этот вопрос требует дальнейших-всесторонних исследований.

Важное значение для успешного замораживания спермы хряков . имеет состав синтетических сред: В этой связи дальнейшее совершенствование и повышение криозащитных свойств разбавителей для. спермы хряков 1шеет одно из важнейших значений.

Большую роль в успешном осеменешш СВ1ШеЙ замороженной спермой играет также время введения спермы ло отношению к овуляции. Поэтому вопросы стимуляции и синхронизации овуляции у свиней в связи с использованием для осеменения замороженной спермы, также являются актуальной задачей биологической науки.

Неменееважноепракшческоезиачениеприразработкеметодов замораживания спермы хряков имеет вопрос снижения объема и дозы сохраняемой спермы. При этом появляется возможность значитель- • кого снижен 1И экономических затрат на хранение спермы в результате сокращения потребностей вхладоагентах и биохранилшцах. . .

Большой нгучный и практический интерес имеют также вопросы-влияния на криоустойчивость сперматозоидов хряков посредством введения определенных биологичергггяспгерБПст^цтетп в их

нл: . „ с .отека

К- >т5в«а

рацион.

Именно на решение данных проблем и были направлены исследования, изложеиныев диссертации.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью данной работы является повышение эффективности искусственного осеменения свиней при использовашш гпубокозамороженной спермы, г :.■>..

Для решения поставленной цели в задачу наших исследований входило изучение следующих вопросов:

. 1) Изучить влияние .диализной обработки спермы хряков на её криоустойчивость. : ' Г , : . '

2) Выяснить влияние метода замораживания на содержание АТФ в сперматозоидах хряков......

3) Изучить влияние новых антиоксидантов и пищевой глюкозы на криоустойчивость спермы хряков. : .

• 4) Проанализировать криоустойчивость спермы хряков в связи с содержанием витаминов Б и С в их рационе.

5) Определить влияние подкормки хряков препаратом СГОЛ на криоустойчивость сперматозоидов.

6) Выяснить возможность повышения результативности осеменения свиней замороженной спермой при стимуляции овуляции сурфагоном и аштростом.

7) Исследовать оплодотворяемость свиноматок от замороженной спермы в зависимости от концентрации сперматозоидов в дозе.

8) Проанализировать экономическую эффективность результатов исследований.

1.3. Нцучная новизна исследований. Впервые изучена динамика содержания АТФ в сперматозоидах хряков в связи со способом крио-консервации и установлена высокая криопротективная эффективность нового антиоксиданта ВНИИС-1. Выяснена возможность использования пищевой глюкозы в составе синтетической среды для спермы хряков и установлено влияние способа оттаивания на биологическую полноценность сперматозоидов. Установлена возможность повышения крноустойчнвостн спермы хряков при их подкормке препаратом СГОЛ и витаминами Б и С. Доказана возможность

повышения результативности осеменения свиней замороженной спермой при стимуляции овуляции сурфагоном и анипростом.

1.4. Практическая.значнмость, Замораживание спермы хряков с диализной обработкой позволяет значительно уменьшить потребность в хладоагеитах и биохранилищах. Использование в составе замораживающей среды ангноксиданта ВНИИС-1 повышает крио-устойчпвость и оплодотворяющую способность сперматозоидов. Замена медицинской глюкозына пищевую в составе замораживающей среды снижает на 20% ее себестоимость.

Подкормка хряков препаратом СГОЛ позволяет повысить крноустойчивость сперматозоидов и результативность искусственного осеменения свиней.

Стимуляция овуляции у свиней с помощью внугриматочного введения сурфагона и аштроста позволяет проводапъ однократное осеменение свиней замороженной спермой в течение эструса. .

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на:

♦ научно-практической конференции: "Проблемы обогащения и эффективного использования генофонда в животноводстве". РАМЖ, Быково, 1995; ' .

• научной конференции: Воронежского государственного аграрного университета им. К.Д.Глинки. Воронеж, 1996;

* • рабочем совещании: "Консервация генетических ресурсов". Пущино, 1996;

* научно-практической конференции: "Современные проблемы воспроизводства стада с.-х. животных и задачи кадрового обеспечения". РАМЖ, Быково, 1996;

♦ международном симпозиуме: "Бесплодие. Вспомогательные репродуктивные технологии". Киев, 1997;

• научно-практической конференции: "Повышение конкурентноспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения". РАМЖ, Быково, 1997;

* на 2-ой международной научно-практической конференции: "Актуальные проблемы ветеринарно санитарного контроля с.-х.

продукции". Москва, 1997; .

• научно-практической конференции: "Эффективность развития свиноводства в" современных условиях рыночной экономики". ВНИИС, Быково, 1998; ■'.... і ■

• Всероссийском совещании по воспроизводству с.-х. животных, Москва, ВВЦ, 1999; ..

• международном симпозиуме: "Бесплодие. Вспомогательные репродуктивные технологии 2000". Клев, 1999;

• международной научно-практической конференции: "Повышение эффективности ведения свиноводства". ВНИИС, Быково, 1999;

' * расширенной межотдельской конференцій! ВНИИС, 1999;

• научно-практической конференции: "Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения".

. РАМЖ, Быково, .1999. \ •

По материалам диссертации опубликовано 10 статей.

1.6. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, практических предложений и списка литературы. Работа изложена на 109стран1щахмашинописноготекста, включает26таблиц. Список литературы включает 193 источника, из них 97 иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования выполнены во Всероссийском НИИ свиноводства. Объектом исследований служила сперма хряков различных пород. Эксперименты по искусственному; осеменению свиней проведены в различных хозяйствах России.

В случае обычного разбавления эякулята, сперму получали мануальным методом и разбавляли ее 1:1 глюкозо-цитратно-трис-глицерино-желшчной средой (Кононов В.П, и др. 1991). Затем сперму охлаждали 4-5 часов до 4°С, и замораживали на фторопластовой пластине в виде гранул объемом 0,5 мл. После чего гранулы спермы помещали на хранение в жидкий азот.

При диализной обработке, гуслую фракцию спермы, полученную мануальным путем, помещали в среднюю емкость диализной камеры.

Боковые емкости заполняли средой следующего состава (на 1000 мл дистиллированной воды): лактоза - 84 г; глюкоза - 6 г, трилон - Б -4 г; аммоний цитрат - 2 г, трис - (оксиметил)-аминометан - 0,6 г, глицерин - 40 мл. Заполненную таким образом диализную камеру помещали в холодильник и выдерживали при + 15°С в течение 3-4-х часов. После чего сразу переливали в стеклянный сосуд и добавляли к ней смесь желтка куриного яйца и изотонического раствора цитрата натрия (1:1) в количестве 10% отобъемаспермы. Послеэтого сперму охлаждали до +4°С в течение одного часа. Замораживали сперму в гранулах объемом 0,5 мл.

Оттаивание спермы проводили с помощью специального гидро-отгаивающего устройства (Кононов В.П. и др., 1975)

Содержание АТФ в сперматозоидах определяли биолюминис-центным методом с помощью портативного люминометра ЕМПЛТЕ-100 ЗА (Россия).

Анализ активности аспарапшовой и аланиновой трансаминаз в сперме хряков проводили по модифицированному методу Умбраита (Покровский А.А., 1969).

При изучении влияния стимуляции овуляции у свиней на результативность осеменения, свиноматкам за 10-12 часов до осеменения внутриматочно вводили в 100 мл физраствора 10 мкг сурфагона пли 90 мкг анипроста, либо вводили данные препараты сочетанно (5 мкг сурфагона + 45 мкг анипроста).

Результаты осеменения свиноматок анализировали по данным опоросов.

Биометрическую обработку полученных данных проводили по Е.К. Меркурьевой (1964).

ОБЩАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЭЛ. Приемы повышения устойчивости спермы хряков к замораживанию

3.1.1. Влияние диализной обработки спермы на ее криоустойчивость

В связи с большим объемом эякулята у хряков возникают определенные проблемы при разбавлении и хранении в замороженном состоянии таких объемов семени. В этой связи было предложено использовать криошнсервацию сперматозоидов хряков с частичным удалением семенной плазмы (Шапиев И.Ш. и др. 1976; Кононов В.П., Нарижный А.Г. 1981). Однако этот метод трудоемок и оказывает неблагоприятное влияние на результативность осеменения маток замороженной спермой.

Позднее В.П.Кононовым с сотрудниками (1987) был предложен метод диализной обработки спермы хряков перед замораживанием.

Целью данного раздела диссертации было изучение сравнительной эффективности замораживания спермы хряков при ее обычном разбавлении и диализной обработке.

Результаты искусственного осеменения свиноматок спермой, замороженной различными способами представлены в таблице I.

~ Таблица!

Влияние способа обработки спермы на результативность . . осеменения свиней замороженной спермой

Метод замораживания Число осемененных маток Опоросилось Многоплодие маток

число %

Обычное разбавление 44 23 52,3 8,3±0,3

Диализная обработка 45 29 ' 64,4 9,2±0,5 '

Из таблицы 1 видно, что результативность осеменения свиноматок криоконсервированной спермой при ее диализной обработке была выше на 12%. При этом также на 0,9 поросенка было выше и многоплодие маток в этой группе (Р<0,05).

Полученные данные свидетельствуют о преимуществах диализного способа замораживания спермы хряков и его перспективности для дальнейшего практического применения.

3.1.2. Анализ содержания АТФ в сперматозоидах хряков в зависимости от метода замораживания

Содержание АТФ в сперматозоидах животных коррелирует с их подвижностью и оплодотворяющей способностью (Ерохин A.C., ЛехмусИ.А 1996; Foolkes J,A. е.а., 1979; Kahn W. е.а.,1982; Aalbers J.G. е.а., 1985).

В связи с совершенствованием методов криошнсервацин спермы хряков представляет несомненный практический интерес изучение динамики содержания АТФ в сперматозоидах под влиянием глубокого замораживания и в связи с методом криоконсервацни.

Целью наших экспериментов было изучение содержания АТФ в нативных и подвергнутых замораживанию различными способами сперматозоидах хряков.

Изучение влияния различных способов разбавления спермы хряков перед замораживанием на уровень АТФ в сперматозоидах представлено в таблице 2.

Из таблицы 2 видно, что способ разбавления спермы перед замораживанием оказывает определенное влияние на содержание АТФ в сперматозоидах после замораживания-оттаивания и на их подвижность. Лучшие результаты получены при разбавлшии диализным способом. При этом через 2 часа эквилнбращш спермы, в группе с диализной обработкой было выявлено более высокое содержание АТФ по сравнению с обычным разбавлением: 33,2 нмоль/10*кл. против 29,5 нмоль/Ю* кл. соответственно, При этом в диализной группе содержание АТФ в сперматозоидах через 5; 60 и 120 мин. после оттаивания снизилось на 37%, 75% и 80% против 45%, 79% и

- ■ ' Таблица 2

Влияние способа разбавления спермы перед замораживанием на содержание АТФ в сперматозоидах (п=9)

Время исследования АТФ Обычное разбавление спермы Диализная обработка спермы

ПОДВИЖНОСТЬ спермнев, % содержание АТФ, имоль/Ю'кл подвижность сперм пев, % содержание АТФ, имоль/Ю'кл

Перся замораживанием 76±5,0 29,5±2,1 78±7,1 33,2±2,1

Через 5 мин, после оттаивания 32±1,4 * 1б,3±|,81 35±2Д* ' 20,8±1,4 *

Через 60 мин. после оттаивания 20±0,8 б,1±0,2" 8,1 ±0,5 "

Через 120 мин. после оттаивания !5±1,0 " '4,9*0,3" 23 ±0,8 " б,8±0,6 "

* - Р<0,05*х Р<0,01

83% при обычном разбавлении спермы.

В диализной группе также отмечено менее резкое снижение _ подвижности оттаянных сперматозоидов. . . .

Эти данные свидетельствуют о том, что диализный метод разбавления спермы хряков способствует более эффективной защите сперматозоидов в процессе их криоконсервации.

ЗЛ.З. Влияние антиоксидантов на криоустойчнвость спермы хряков

Ранее было установлено, что процесс глубокого замораживания может стимулировать процессы перекисного окисления лшгадов в сперме животных, результатом чего является развитие деструктивных изменений в мембранах сперматозоидов и снижение их биологической полноценности

В этой связи целью, наших исследований было изучение влияния некоторых новых антиоксидантов на устойчивость спермы хряков к глубокому замораживанию.

В частности мы изучали криозащитное влияние холин хлорида и синтетического япгрорастворимого антиоксиданта ВНИИС-1.

Мы изучали криозащитную эффективность антиоксидантов Гфи раздельном или совместном применении. Причем,- в случае раздельного применения использовали 2,5% концентрацию холин хлорида в составе средь» и 600 мг/л антиоксиданта ВНИИС-1.

При совместном использовании препаратов в замораживающую . среду вводили 1,5% холин хлорида и 400 мг/л ВНИИС-1 .Результаты этого эксперимента представлены в таблице 3.

• Таблица 3

Влияние антиоксидантов на криоустойчивость сперматозоидов .

; хряка (п=8)

Изучаемые показатели Замораживание сперматозоидов

Без антиоксидантов (контроль) С холин хлоридом С ВНИИС-1 С ВНИИС-1 + холин хлорид

Подвижность оттаявых сперматозоидов, % 38±1,2 44±2,8 47±3,1 49±2,8*

Абсолютный показатель живучести при 37°С, усл.ед. 79±6,1 88±4,7 ^ 93±4,3 х ' 101±6,4 *

Число сперматозоидов с неповрежденной акросомой, % 54±2,0 69±3,7 73±2,3 х 78±6,1 *

Активность аминотрансфе-? раз в семенной плазме: ACT АЛТ i 38±5 г - 7±1,2 29±2,1 * ' 6±0,6 : 25±2,5 ■ ; 5±0,4 * 23±1,4 * 4±0,6 *

* - Р<0,05;

Таблица 4

Результативность осеменения свиней спермой замороженной с

ангиоксидангами

Замораживание спермы Осеменение маток Опоросилась Многоплодие Масса поросенка при рождении, кг

число %

Контроль (без антиоксидантов) 48 26 54 9,3±0,б 1,35±0,04

Схолин хлоридом (2,5%) 50 33 66 9,7±0,4 1,39±0,03

С ВНИИС-1 (бООмг/л) .49 34 69 х 9,7±0,4 . 1,42±0,0б

Холин хлорид (1.5%) + ВНИИС-1 (400 мг/л) 55 40 72 х 9,9±0,6 * 1,44±0,02

Как видно из таблицы 3, использование антиоксидантов в оптимальной концентрации способствовало повышению подвижности сперматозоидов хряка сразу после оттаивания и увеличило продолжительность их живучести при 37*0. Кроме того, введение антио ксидантов в состав разбавителя, способствовало повышению сохранности мембранных структур сперматозоидов при замораживании, о чем свидетельствует более низкая утечка внутриклеточных ашшотрансфераз в штаубационную среду.

В частности в группе с холин хлоридом, утечка ACT была ниже на 24%, а утечка АЛТ - на 14% ниже по сравнению с контролем (Р<0,05).

При замораживании сперматозоидов с ангио ксидантом ВНИИС-1, утечка го клеток ACT была на 35% ниже, а АЛТ - на 29% ниже по сравнению с контролем (Р<0,05).

Совместное применение антиоксидантов оказало еще более выраженный протекгивный эффект при замораживании спермы хряков. При этом подвижность и живучесть огтаянных сперматозоидов была соответственно вьпнена:29'и 27 % по сравнению с контролем (Р<0,05).

Утечка ACT го сперматозоидов в данном случае снижалась на 40%, а АЛТ - на 43% по сравнению с контролем (Р<0,05).

Затем в производственном эксперименте мы выяснили результативность искусственного осеменения свиней спермой, замороженной с различными антиоксидантами (табл, 4).

Как видно из данных таблицы 4, замораживание спермы .с добавлением холин хлорида, способствовало повышению оплодо-творяемосги свиней на 12%, а многоплодия - на 0,4 поросенка по сравнению с контрольной группой.

При использовании антиокснданта ВНИИС-I, опоросилось на 15% больше свиней по сравнению с контролем. В этом случае также было выше многоплодие свиноматок и крупноплодность их потомства.

Совместное применение в составе синтетической среды обоих антноксндантов привело к более заметному повышению результативности осеменения свиней замороженной спермой.

Дальнейшие исследования в данном направлении представляют несомненный практический интерес.

ЗЛА* Эффективность замораживания спермы при использовании медицинской и пищевой глюкозы

В связи с тем, что в настоящее время в стране снизился выпуск медицинской ппокозы, представляет интерес изучение возможности ее замены пищевой глюкозой в составе сред для замораживания спермы хряков.

Имеются данные, что пищевая гаюкоза может быть успешно использована вместо медицинской в составе сред для хранения спермы хряков в охлажденном состоянии (ОК Савин, 1999). ;

В этой связи, целью наших исследований являлось изучение, возможности замены медицинской глюкозы на пищевую в составе среды для глубокого замораживания спермы хряков. Причем, нами выяснялась эффективность применения пищевой глюкозы при обычном и диализном разбавлении спермы.

Введение пищевой глюкозы в состав замораживающей среды вместо медицинской, не оказало отрицательного влияния на подвижность сперматозоидов после оттаивания и абсолютный показатель их живучести при обоих методах разбавления спермы. Следовательно, пищевая глюкоза обладает криозащитной эффективностью на сперматозоиды хряков, сравнимой с действием медицинской глюкозы.

В последующем производственном опыте была изучена эффективность осеменения маток спермой, замороженной с двумя видами глюкозы при обычном и диализном разбавлении эякулятов.

Результаты эксперимента показали, что при замораживании спермы с обоими видами глюкозы, вне зависимости от способа разбавления, были получены практически одинаковые результаты по оплодотворяемости и многоплодию маток, а также по крупно-плодности их потомства. Сохранность поросят также не отличалась в зависимости от группы животных.

Это свидетельствует о том, что пищевая глюкоза не оказывает отрицательного влияния на результативность осеменения свиней замороженной спермой и она может быть использована в практике криоконсервации спермы хряков.

3.1.5. Крноустончивосгь сперматозоидов в зависимости от содержания витаминов £ и С в рационе хряков

Имеются данные, что введение повышенных доз витамина Е в состав рационов хряков способствует повышению устойчивости их сперматозоидов к глубокому замораживанию (В.П.Кононов и др., 1978;. А. Г Нарижный, 1995). -

В этой связи мы решили изучить влияние подкормки хряков витаминами Е и С на устойчивость их спермы к глубокому замораживанию при диализной обработке.

Повышение уровня витамина Е в рационе хряков в: б раз по сравнению с контролем (600 мг), способствовало повышению его концентрации в крови на 24%, а в сперме—на 61% по сравнению с контролем (Р<0,05). ' ;

Дополнительная; подкормка хряков витамином С привела' к

повышению его концентрации в крови и сперме соответственно на 10,9 и 7,8%.

Совместное введение данных витаминов в соответствующей дозе в состав рациона, повысило концентрацию витамина Е в крови на 49%, а в сперме—на 39%. Уровень витамина С повысился в крови и сперме — на 35,4 и 69% соответственно. Следовательно, путем специального кормления хряков возможно повысить содержание витаминов Е и С не только в крови, но и в их сперме.

Затем нами было изучено влияние подкормки хряков данными дозировками витаминов на сперматологические показатели хряков.

Результаты этого эксперимента показали, что дополнительная подкормка хряков витаминами Б и С, а особенно в комплексном виде, способствовала повышению объема эякулята, увеличивала концентрацию и подвижность сперматозоидов, и положительно влияла на сохранность акросом.

Опыты по искусственному осеменению маток замороженно-сгггаянной спермой приведены в таблице 5.

Данные таблицы 5 свидетельствуют, что при подкормке хряков витаминами Е и С, повышается оплодотворяющая способность спермы и увеличивается многоплодие свиноматок.

Полученные нами данные свидетельствуют о перспективности дальнейших исследований в области повышения криоустойчивости спермы хряков путем целенаправленной подкормки витаминами, обладающими антиоксидантной активностью.

3.1.6. Повышение криоустойчивости сперматозоидов при подкормке хряков препаратом СГОЛ

В последние годы для регуляции воспроизводительной функции у свиней применяют различные: гормональные и биологически активные препараты.

В частности, в настоящее время разработанатехнология получения из молочной> сыворотки биологически активного соединения — препарата СГОЛ.

Таблица 5

Эффективность осеменения свиней криоконсервированной спермой при подкормке хряков витаминами

Содержание витаминов в суточном рациона хряков , Осеменено маток Опоросилось, % Родилось жизнеспособных поросят Многоплодие, гол.

Контроль 50 52 232 8,9±0,3

Витамин Е (600 мг) 60 66,6 386 , 9,6±0,2

Витамин С (1500 мг) 60 65 ■ 373 9,5±0,4

Витамин Е (600 мг)+ Витамин С(1500мг) 61 68,8 » 414 9,8±0,3 -

х - Р<0,05 -

В этом препарате содержатся полисахариды, белки, пептиды, аминокислоты, витамины и другие активные вещества.

Учитывая состав препарата, мы решили изучнть'влияние подкормки хряков данным веществом на качественные показатели эякулятов и на устойчивость сперматозоидов к глубокому замораживанию.

Результаты 3-х месячной подкормки хряков различными дозировками СГОЛ показали, что сперма хряков, получавших препарат, обладает более высокими биологическими показателями по сравнению со спермой контрольных животных.

Так у животных, получавших по 2 г препарата на 1 кг массы тела, объем эякулята и концентрация сперматозоидов были выше соответственно на 18 и 21 % по сравнению с контролем. При этом живучесть сперматозоидов при 37°С также повысилась на- 28% (Р<0,05). "

Лучшие результаты были отмечены в группе, где использовали дозу препарата в 3 г на 1 кг живой массы хряков. Объем эякулята в этой группе превышал контрольные показатели на 18,4%, концентрация : сперматозоидов была выше на 23%, а живучесть; сперматозоидов - на 30% (Р<0,05).

Анализ результатов искусственного осеменения свиней спермой, замороженной от хряков, получавших различные дозировки СГОЛ приведен в таблице 6.

Таблица 6

Влияние подкормки хряков препаратом СГОЛ на результативность осеменения свиней замороженной спермой"

Доза препарата, г на I кг массы тела Заморо-• жено эякулянтов Из них с подвижностью 30% и более Осеме-. нено свиней Опоросилось Многоплодие свиней, : ГОЛОВ

число %

Контроль 14 9 25 14 56 8,9±0,4

1,0 15 И 26 16 61,5 9,1±0,6

2,0 15 13 26 17 65,3 9,4±0,6

3,0 16 14 28 . 19 67,8 9,4±0,3

Наилучшие результаты по подвижности оттаянных сперматозоидов были получены в группах, получавших 2 и 3 г СГОЛ на 1 кг массы хряков. По сравнению с контролем, процент оттаянных эяку-' лятов, пригодных для осеменения в этих группах, повысился на 22,3 и 23,2% соответственно.'

Оплодотворяемость свиноматок 3 и 4-й группы повысилась по сравнению с контролем на 9,3% и на ! 1,8% (РХ),05), В этих группах также имелась тенденция к повышению многоплодия свиноматок.

Таким образом, полученные в этих опытах данные показывают, что препарат СГОЛ является перспективным соединением, улучшающим показатели сп ермопр одукции хряков и повышающим устойчивость сперматозоидов хряков к глубокому замораживанию; Необходимо проведение дальнейших исследований в данном направлении с целью выяснения более точного механизма действия препарата и его оптимальных дозировок.

3.3. Влияние биологических факторов на результативность осеменения свиней криоконсервированной спермой

3.3.1. Влияние способа осеменения свиней замороженной . спермой на оплодотворяемость

Как известно, при осеменен ж I свиней применяют два метода введения спермы: не фракционный метод (Милованов В.К., 1962) и фракционный метод (Квасницкий А.В. и др., 1961).

В случае фракционного метода в качестве заполнителя используют изотонические растворы Сахаров или солей.

В этой связи мы решили изучить влияние искусственного осеменения свиней замороженно-оттаянной спермой с применением этих двух методов введения спермы. Причем, в обоих случаях использовали одинаковую концентрацию сперматозоидов в оттаянной дозе - 3 млрд. живых клеток. Результаты опыта приведены в таблице 7.

Таблица 7

Влияние способа осеменения свиней криоконсервированной спермой на их оплодотворяемость

Метод осеменения Заполнитель Осеменено свиней Опоросилась Многоплодие

число %

Нефракционный 38 20 52 8,9±0,3

Фракционный 1,7% р-р сернокислого натрия 37 19 51 8,8±0,б

* Результаты опоросов'показали, что оба метода осеменения свиней спермой, замороженной с диализной обработкой, дают практически одинаковые результаты по оплодотворяемости и многоплодию маток в случае использования дозы, содержащей 3 млрд.-подвижных сперматозоидов.

3.3.2. Оплодотворяемость свиней в зависимости от концентрации сперматозоидов в дозе

С целью уточнения оптимальной концентрации сперматозоидов в дозе оттаянной спермы хряков, нами были проведены специальные опыты.

В первом опыте изучали влияние числа подвижных сперматозоидов в оттаянной сперме, замороженной с диализной обработкой, на результативность не фракционного осеменения свиней.. ,

Оттаянную сперму перед осеменением разбавляли изотоническим раствором цитрата натрия для получения определенной концентрации клеток в 100. мл раствора. Затем производили осеменение маток.

Было установлено, что при обычном осеменении свиней замороженно-оттаянной спермой в объеме 100 мл, практически одинаковые результаты по оплодотворяемости и многоплодию получены при содержании 2,5; 3,5 и 4,5 млрд. клеток.

Уменьшение числа сперматозоидов в оттаянной дозе до 1,5 млрд. привело к достоверному снижению оплодотворяемости и многоплодия маток.

Во втором опыте изучали влияние числа сперматозоидов в дозе при фракционном способе осеменения свиней по Квасницкому A.B. (1961). В качестве заполнителя спермы при этом использовали 1,7% раствор сернокислого натрия. ..

В результате этого опьгга было установлено, что при уменьшении вводимой фракционным методом дозы спермы до 50 мл с содержанием 2,2 млрд. сперматозоидов, были получены такие же результаты, как и при большем объеме и числе сперматозоидов в дозе. Снижение объема спермы до 25 мл с содержанием 1,1 млрд. сперматозоидов, привело к значительному снижению результативности осеменения маток криоконсервированной спермой.

Следовательно, при использовании криоконсервированной спермы, замороженной с диализной обработкой, для .успешного осеменения в дозе должно быть не менее.2,2-2,5 млрд. подвижных сперматозоидов.

3.3.3, Влияние температуры оттаянной спермы на результативность осеменения

На результативность осеменения свиней криоконсервированной спермой влияют не только условия ее замораживания и оттаивания, но также и ряд других факторов. В частности, одним из таких факторов может быть температура оттаянной спермы, при которой производится искусственное осеменение, а также продолжительность ее инкубации после оттаивания при различных температурных условиях.

В этой связи, мы решили изучить1 влияние различных температурных режимов, до которых оттаянная сперма подогревается перед осеменением, на оплодотворяемость свиноматок.

Результаты этих опытов показали, что температура, до которой подогревается сперма, оказывает некоторое влияние на результативность осеменения. В .частности, при более низкой температуре • вводимой спермы (18°С), имелась тенденция к повышению оплодо-творяемости и многоплодия свиноматок, по сравнению с более высокими температурами.

В последующем опыте, мы решили изучить влияние продолжительности инкубации оттаянной спермы хряков при определенной температуре на результативность осеменения маток.

В этом эксперименте было показано, что инкубация оттаянной спермы »течение 10-60 мин. после оттаивания при 18°С, не приводит к снижению оплодотворяемости и многоплодия маток.

В случае инкубации оттаянной спермы в течение 30-60 мин. при 28 и 380С, отмечалась тенденция к снижению результативности осеменения маток и их многоплодия. Следовательно, оптимальной температурой оттаянной спермы, при которой производят, осеменение свиней, следует считать 18°С. При этом оттаянную сперму желательно использовать для осеменения в течение часа после ее оттаивания. В случае использования более высоких температур подогрева спермы, желательно проводить осеменение в течение 1020 минут после оттаивания.

3.3.4. Результативность осеменения свиней замороженной спермой при стимуляции овуляции

При искусственном осеменении свиней замороженной спермой большое значение для улучшения о плод отворяемо ста имеет время введения сперматозоидов по отношению к овуляции.

Поэтому в наших исследованиях мы решили изучить влияние синхронизации овуляции у свиноматок с помощью рилизинг-гормона и простагпандина на результативность их осеменения спермой, замороженной с использованием диализной обработки.

Причем, в отличии от ранее проведенных экспериментов, стимулирующие овуляцию вещества мы вводили внутриматочно после выявления признаков эсгруса у свиней.

В первом опыте мы выясняли влияние дозировки (сурфагона и пергонала) на число овулировавшнх фоликулов у свиноматок.

Анализ полученных результатов свидетельствует, что внутри-маточное введение сурфагона и пергонала в изученных дозировках свиноматкам в начале эструса, способствует увеличению числа окулировавших фолликулов и повышает потенциальное многоплодие животных: При этом, лучшее действие оказал сурфагон в дозах 1015 мкг на животное.

В следующем опыте мы выясняли эффективность однократного осеменения свиней замороженной спермой при стимуляции овуляции раздельным или совместным применением сурфагона и анипроста в оптимальных дозировках (табл. 8).

Результаты таблицы 8 показывают, что стимуляция овуляции у свиней совместным применением анипроста и сурфагона, способствовала некоторому повышению оплодотворяемости маток по сравнению с их раздельным применением. При этом, результа-. тивность однократного осеменения была практически схожей с двухкратным осеменением свиней.

Таблица 8

Влияние раздельного или совместного применения сурфагона и анипросга на результативность осеменения свиней замороженной спермой

Группа животных Осеменено свиней Опоросилась Среднее .многоплодие Масса поросенка при рождении, кг

число I %

Двухкратное осеменение

Контроль (без препаратов) .42 26 61 9,0±0,6 1,32±0,08

• ' Однократное осеменение

Сурфагон (10 мкг) 44 25 57,7 9,1±0,3 1,35±0,08

Анлпрост (90 мкг) 39 22 56,8 9,1 ±0,5 1,30±0,04

Сурфагон (5 мкг) + Анипрост (45 мкг) ' 42 ' 25 60,4 9,2±0,б 1,32±0,06

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о перспектив но сги стимуляции овуляции у свиней при использовании криокон-сервированной: спермы с целью повышения о плод отворяемо сти и снижения кратности осеменения. Дальнейшие исследования в данном направлении имеют несомненную практическую важность. ^

3.4. Экономическая эффективность результатов исследований.

Экономическая эффективность использования криоконсер-вированной спермы для искусственного осеменения свиней связана с его результативностью и трудовыми затратами на осеменение животных и криоконсервацию спермы...

Нами была проведена экономическая оценка затрат на искусственное осеменение свиней спермой, замороженной с антиоксидантами. За счет повышения оплодотворяемости маток при нсполь-зовашш холин хлорида, актиоксиданта В НИИ С-1 или их комплексного применения, себестоимость 1-го поросенка при рождении соответственно составляла 56,1 руб.; 53,4 руб. и 50 рублей против

71,4 рубля в контроле. Таким образом, при дополнительном получении 100 поросят от опытных свиноматок прибыль будет составлять соответственно по группам 1530 руб.; 1800 руб. и 2140 рублей.

За счет оптимизации процессов оттаивания спермы с использованием ультратермостатов с повышенной скоростью вращения двигателя (1900; 12000 и 16000 об/мин.) и повышения результативности осеменения при использовании 2-го и 3-го аппаратов, дополнительная прибыль на 1 -го поросенка в этик группах соответственно составила 3,5 и 7,2 рубля или в расчете на 100 поросят—350 и 720 рублей.

Использование в составе замораживающей среды для спермы хряков пищевой глюкозы вместо медицинской, снижает себестоимость среды на 20%.

Биотехнические приемы стимуляции овуляции у свиней позволяют без ущерба для осеменения заменить двухкратное осеменение на однократное. Экономический эффект при этом складывается не только из 2-х кратной экономии спермопродукции, но также и в результате снижения трудовых затрат на проведение искусственного осеменения маток.

Общий экономический эффект от использования криоконсер-вированной спермы можетбьпътакже обусловлен ускорением генетического прогресса в разводимых стадах свиней в связи с использованием выдающихся в племенном отношении производіггелей.

4. ВЫВОДЫ

1. Диализная обработка спермы хряков перед замораживанием способствует повышению криоустойчнвостп сперматозоидов и улучшению их оплодотворяющей способности.

2. Замораживание спермы хряков с диализной обработкой способствует лучшей стабилизации мембранных структур сперматозоидов и более медленному гидролизу АТФ в оттаянных образцах:

3. Установлено, что введение в состав замораживающей среды для спермы хряков антиоксидантов ВНИИС-1 и холин: хлорида,

повышает криоустойчивосгь сперматозоидов и результативность осеменения свиноматок соответственно на 15 н 12%. Комплексное применение данных препаратов повысило оплодсггворяемость свиней.. ііо сравнению с контролем на 18% (Р<0,05).

4. Использование пищевой глюкозы вместо медицинской в составе среды для замораживания спермы хряков, не оказало отрицательного влияния на оплодотворяемость и многоплодие свиноматок.

5. Показана возможность повышения устойчивости сперматозоидов хряков к глубокому замораживанию посредством их дополнительной подкормки витаминами Н и С.

6. Подкормка хряков биологически активным препаратом СТОЛ оказывает положительное влияние на криоустойчивость сперматозоидов и результативность искусственного осеменения свішей.

7. Выяснено, что при фракционном осеменении свішей заморо-женно-оттаянной спермой, в дозе должно содержаться не менее 2,2 млрд: подвижных сперматозоидов,

8. Оптимальная температура- подогрева оттаянной спермы. хряков, составляет 18°С.

9. Стимуляция овуляции у свішей с помощью сурфагона и ани-проста позволяет проводить однократное осеменеіше свішей крио-консервнрованной спермой без снижения его результативности по сравнению с двухкратным. >

5. ПРАКТИЧЕСКПЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. С целью повышения крноустойчивости сперматозоидов хряков рекомендуем использовать диализную обработку спермы и вводить в состав синтетической среды 400 мг/л антиоксиданта В НИИ С-1 и 15 г/л холин хлорида.

2. Рекомендуем для повышения криоусгойчнвостн спермы хряков ежедневную их подкормку препаратом СГОЛ в дозе 2-3 г на 1 кг массы тела.

3. Для повышения результативности искусственного осеменения свиней замороженно-огтаянной спермой предлагаем проводить

синхронизацию ;овуляции с помощью внутриматочного введения«, свиньям' 5 мкг сурфагона и 45: мкп анипроста>за 10-12 часов до осеменения; •• - . .

• ■ Список опубликованных работ по теме диссертации'

* 1. Крук HjV. Использование биологически активных,веществ^ при замораживании1 спермы; хряков/. // Зоотехния.- ■ 1996.-№7. с.28- -30. " • ' : 'г: . * V ■ . .. ■

2; Нарижный; АіГ., Крук: Н;А\, Минеева Е.А. и. др. Совершенствованиетехнолопшзамораживашія,хранешіяи использования спермы хряков-улучшател ей // Научные аспекты профилактики и терапии болезней с.-х; животных. Воронеж;-1996.; -/

3. Нарижньпї А.Г., КрукН.А/, Савин О. и др; Влияние разбавителей, содержащих гидрагную и медицинскую глюкозу, на оплодотворяемо сть маток.// Свиноводство:—. 1997 - №4. - с. 18-25;

4. Ерохіш A.C., Нарижный А.Г., Крук H.A.* Результативность диализного способа разбавления спермы хряков перед замораживанием.//Зоотехния: - 1997-№8.-с. 26.-28 .

"■5.- "Нарижный - А. П, Крук H.A., Комова З.П. ■ и др. Усовершенствование метода криоконсервации гамет хряка с использованием диализа. // Бесплодие. Вспомогательные репродуктивные технологии. Маг. - симп. Киев. 15-1бмая 1997г. - с. 183-185.

6. Нарижный А.Г., Крук H.A., Бурлака Г.М. и др. Влияние повышенных доз витаминовЕиСврационехряков на устойчивость . сперматозоидов к замораживанию. // Селекция, кормление, содержание с.-х. животных и технология производства продуктов животноводства Сб. тр. ВНИИплем. т 1997.- выи. 1. - с. 125-129.

7. Нарижный А.Г., Крук H.A., Минеева Е.А. и др. Применение препарата СГОЛ для повышения воспроизводительной функции свиней. // Селекция, кормление, содержание сельскохозяйственных животных и технология производства продуктов животноводства Сб.тр. ВНИИплем.-1997-вып. 2-е. 135-140.

2 6-

8. Зыкунов Н.П, Нарижный А.Г., Крук H.A. и др Рекомендации по применению сурфагона в свиноводстве. М.1998, 11. С.

9. Крук H.A. Повышение криозащитных свойств среды с пргшенением новых антиоксидантов// Повышение эффективности ведения свиноводства. Сб. докл: конф; Быково. ВНИИС. -1999.-е. ; 208-209.

10. Крук H.A., Герасимов A.B., Сидоров А: И. и др. Действие; биологически активных препаратов на воспроизводительную функцию свиноматок. П Бесплодие. Вспомогательные репродуктивные технологии 2000; Сб. науч. тр. Симпозиума. Киев. - 1999. - с. 244.

Отпечатано в ООО фирме "ФЕЛИКС п Подольск^Вокзальная пл., 10 Тел.: (27)63-27-91

Тираж 100 зкз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Крук, Нина Александровна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Искусственное осеменение свиней с использованием замороженной спермы.

2.2. Биологические повреждения сперматозоидов при замораживании.

2.3. Влияние синтетических разбавителей на устойчивость сперматозоидов хряка к замораживанию.

2.4. Биотехнические приемы повышения оплодотворяемости свиней при использовании криоконсервированной спермы.

3. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

5. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

5.1. Приемы повышения устойчивости спермы хряков к замораживанию.

5.1.1. Влияние диализной обработки спермы на её криоустойчивость.

5.1.2. Анализ содержания АТФ в сперматозоидах хряков в зависимости от метода замораживания.

5.1.3. Влияние новых антиоксидантов на криоустойчивость спермы хряков.

5.1.4. Эффективность замораживания спермы при использовании медицинской и пищевой глюкозы.

5.1.5. Криоустойчивость сперматозоидов в зависимости от содержания витаминов Е и С в рационе хряков.

5.1.6. Повышение криоустойчивости сперматозоидов при подкормке хряков препаратом СГОЛ.

5.2. Влияние способа оттаивания спермы на результативность осеменения свиней.

5.3. Влияние биологических факторов на результативность осеменения свиней криоконсервированной спермой.

5.3.1. Влияние способа осеменения свиней замороженной спермой на оплодотворяемость.

5.3.2. Оплодотворяемость свиней в зависимости от концентрации сперматозоидов в дозе.

5.3.3. Влияние температуры оттаянной спермы на результативность осеменения.

5.3.4. Результативность осеменения свиней замороженной спермой при стимуляции овуляции.

5.4. Экономическая эффективность результатов исследований.

6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

7. ВЫВОДЫ.

8. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Влияние биологических и технических факторов на результативность осеменения свиней замороженной спермой"

Искусственное осеменение является важнейшим рычагом интенсификации репродукции свиней в условиях промышленного содержания. Особенно важным с точки зрения интенсификации селекционно-племенной работы в свиноводстве является метод долгосрочного хранения спермы хряков в глубокозамороженном состоянии.

Использование замороженной спермы позволяет улучшить племенную работу в свиноводстве, так как при этом появляется возможность широкого использования выдающихся в генетическом отношении хряков, проверенных по качеству потомства.

Однако до сих пор, данный метод осеменения не нашел широкого практического применения в связи с пониженной фертильностью замороженно-оттаяной спермы хряков.

Биологические причины пониженной устойчивости спермы хряков к замораживанию окончательно не выяснены и этот вопрос требует дальнейших всесторонних исследований.

Важное значение для успешного замораживания спермы хряков имеет состав синтетических сред. В связи с этим вопрос дальнейшего совершенствования и повышения криозащитных свойств разбавителей для спермы хряков имеет очень важное значение.

Большую роль в успешном осеменении свиней замороженной спермой играет также время введения спермы по отношению к овуляции. Поэтому вопросы стимуляции и синхронизации овуляции у свиней в связи использованием для осеменения замороженной спермы, также являются актуальной задачей биологической науки.

Не менее важное практическое значение при разработке методов замораживания спермы хряков имеет вопрос снижения объема и дозы сохраняемой спермы. При этом появляется возможность значительного снижения экономических затрат на хранение спермы в результате сокращения потребностей в хладоагентах и биохранилищах.

Большой научный и практический интерес имеют также вопросы влияния на криоустойчивость сперматозоидов хряков биологически активных веществ в их рационе.

Именно на решение данных проблем и были направлены исследования, изложенные в диссертации.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Крук, Нина Александровна

7. ВЫВОДЫ

1. Диализная обработка спермы хряков перед замораживанием способствует повышению криоустойчивости сперматозоидов и улучшению их оплодотворяющей способности.

2. Замораживание спермы хряков с диализной обработкой способствует лучшей стабилизации мембранных структур сперматозоидов и более медленному гидролизу АТФ в оттаянных образцах.

3. Установлено, что введение в состав замораживающей среды для спермы хряков антиоксидантов ВНИИС-1 и холин хлорида, повышает криоустойчивость сперматозоидов и результативность осеменения свиноматок соответственно на 15 и 12%. Комплексное применение данных препаратов повысило оплодотворяемость свиней по сравнению с контролем на 18% (Р<0,05).

4. Использование пищевой глюкозы вместо медицинской в составе среды для замораживания спермы хряков, не оказало отрицательного влияния на оплодотворяемость и многоплодие свиноматок.

5. Показана возможность повышения устойчивости сперматозоидов хряков к глубокому замораживанию посредством их дополнительной подкормки витаминами Е и С.

6. Подкормка хряков биологически активным препаратом СГОЛ оказывает положительное влияние на криоустойчивость сперматозоидов и результативность искусственного осеменения свиней.

7. Выяснено, что при фракционном осеменении свиней замороженно-оттаянной спермой в дозе должно содержаться не менее 2,2 млрд. подвижных сперматозоидов.

8. Оптимальная температура подогрева оттаянной спермы хряков составляет 18°С.

9. Стимуляция овуляции у свиней с помощью сурфагона и анипроста позволяет проводить однократное осеменение свиней криоконсервированной спермой без снижения его результативности по сравнению с двухкратным.

8. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. С целью повышения криоустойчивости сперматозоидов хряков рекомендуем использовать диализную обработку спермы и вводить в состав синтетической среды 400 мг/л антиоксиданта ВНИИС-1 и 15 г/л холин хлорида.

2. Рекомендуем для повышения криоустойчивости спермы хряков ежедневную их подкормку препаратом СГОЛ в дозе 2-3 г на 1 кг массы тела.

3. Для повышения результативности искусственного осеменения свиней замороженно-оттаянной спермой предлагаем проводить синхронизацию овуляции с помощью внутриматочного введения свиньям 5 мкг сурфагона и 45 мкг анипроста за 10-12 часов до осеменения.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Крук, Нина Александровна, Дубровицы, Московской обл.

1. Антонюк B.C. Биохимический контроль за качеством спермы хряков. // Доклады ВАСХНИЛ. 1980. -№ 1.- с. 27-30.

2. Баранов Ф.А. Впервые получены поросята от искусственного осеменения замороженным семенем. //Животноводство. -1972.- № 2.- с. 68-69.

3. Баранов Ф.А. Поросята от замороженного семени хряков. // Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения. Научные труды ВИЖа. -1974.- т.1. с. 48-49.

4. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и криопротекция. М.: Высшая школа. -1987.

5. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. Киев. -1982. -256 с.

6. Бобадов Н., Загорски Д. Замразяване на сперма, разфасована в IMY тюбети и алуминикви туби върху азотни пари. // Ветер. Мед. Науки. -1985.- v.22. -№ 1. -р. 69-76.

7. Брутганс Я.П. Усовершенствование метода искусственного осеменения свиней путем рационального использования различных компонентов семени и биологически активных веществ. // Автореф. дисс. . канд.биол.наук. Дубровицы. -1980. 20 с.

8. Варнавский А.Н. Влияние метода замораживания и глицерина на подвижность и ультраструктуру живчиков. // Овцеводство. -1970. -№ 8.-с. 22.

9. Варнавский А.Н., Турбин В.Ф., Осадчук B.C. Подвижность и ультраструктура живчиков быка в процессе технологической обработки. // Технология искусственного осеменения и биология воспроизведения с.-х. животных. М.: Колос. -1972. с. 169-175.

10. Володин В. Сроки овуляции у маток. // Свиноводство. -1982. -№ 10. -с. 28.

11. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах. // ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Серия биофизика. -1991. -т. 29. -с. 18-20.

12. Визнер Э. Кормление и плодовитость сельскохозяйственных животных. М.: Колос. -1976. 159 с.

13. Голубь B.C. Липиды семенника, придатка живчиков барана и быка. // Автореф.дисс. . канд.биол.наук. -Дубровицы. -1972.

14. Грищенко В.И., Паращук Ю.С., Калугин ЮВ. Способ консервации спермы человека. А. с. № 1355212. -№ 44. -1987.

15. Грищенко В.И., Паращук Ю.С., Дахно Ф.В., Юрченко Г.Г. Криобиология и проблема бесплодия. Наукова Думка, -1990. 136 с.

16. Гуськов A.M. Криогенные изменения липидов и функциональная полноценность гамет хряков и быков. // Автореф. дисс. . канд.биол.наук. Львов. -1984. - 20 с.

17. Гуськов A.M., Дарий Г.Е., Пузына Г.И. Повышение репродуктивной способности животных методом ингибирования перекисного окисления липидов. // Доклады ВАСХНИЛ. -1993. -№ 2. -с. 71-73.

18. Гайворонский Г., Ирицян Г. Удачный опыт. // Свиноводство. -1973.-№1.-с. 25.

19. Городецкий A.A. Витаминное питание свиней. Справочное пособие. -М.: Колос. -1988. 77 с.

20. Данов Д.Т., Ковачев К.Д., Попов В.Д. Изследования върху ултраструктурните изменения на сперматозоидите на коча при криоконсервации. // Криобиология на половите клетки, София. -1983. -с. 155-173.

21. Ерохин A.C. Физиологические аспекты криорезистентности спермы баранов и быков. // Дисс. . докт.биол.наук. -Дубровицы. -1994.-42 с.

22. Ерохин A.C., Платов Е.М., Тимофеев К.Н. Структурное состояние мембраны сперматозоидов барана и быка после криовоздействия. // Доклады ВАСХНИЛ. -1989. -№ 3. -с. 19-21.

23. Ерохин A.C., Деряженцев В.И. Перекисное окисление липидов в сперме баранов. // Овцеводство. -1991. -№ 3. -с. 17-19.

24. Ерохин A.C., Коган И.Г., Барсель В.А. Активность супероксиддисмутазы в сперме барана и быка при криоконсервации. // Сельскохозяйственная биология. -1995. -№ 4. -с. 50-51.

25. Ерохин A.C., Лехмус И.А. Определение содержания АТФ биолюминесцентным методом в сперматозоидах барана после криообработки. //Доклады РАСХН. -1996. -№ 1. -с. 32-34.

26. Зверева Г.В., Чухрий В.Н., Клевиц Л.А. Сукцинатдегидрогеназная активность спермы быков и качество спермы. // С.-х. биология. -1989. -№ 6. -с. 30-33.

27. Зыкунов Н.П, Нарижный А.Г., Походня Г.С. и др. Рекомендации по применению сурфагона в свиноводстве. М.: -1998. -12с.

28. Квасницкий A.B. Аппаратура и техника получения семени от хряков. // Вестник с.-х. науки. -1957. -№ 9. -с. 23-25.

29. Квасницкий A.B., Конюхова В. А., Конюхова J1.A. Искусственное осеменение свиней фракционным методом. // Киев. -1961.-195 с.

30. Кениг И., Чиркиль И., Шеллер X., Искуственное осеменение свиней. // -М.: Колос. -1980. -176 с.

31. Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практика. //Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Дубровицы. -1982. 47 с.

32. Кононов В.П. Значение слабодиссоциирующих катионов при охлаждении семени. // Доклады ВАСХНИЛ. -1977. -№ 5. -с. 25-26.

33. Кононов В.П., Голышев H.A., Нарижный А.Г. Выход трансаминаз из живчиков, как показатель оплодотворяющей способности. //С.-х. биология. -1978. -т. 13. -с. 104-108.

34. Кононов В.П., Голышев H.A., Хачапуридзе Э. Среды для замораживания спермы. // Свиноводство. -1975. -№ 11.-е. 23-25.

35. Кононов В.П., Хачапуридзе Э.Л. Оптимальные режимы глубокого охлаждения и оттаивания семени хряка. // Доклады ВАСХНИЛ. -1975. -№ 8. -с. 23-25.

36. Кононов В.П. Повышение функциональной и морфологической устойчивости живчиков хряка при замораживании. // Сельскохозяйственная биология. -1980. -т. 15. -№ 6. -с. 914-917.

37. Кононов В.П., Нарижный А.Г. Замораживание семени хряка в концентрированном состоянии. //Зоотехния. -1981. -№ 10. -с. 39-41.

38. Кононов В.П., Нарижный А.Г. Совершенствование технологии искусственного осеменения свиней. // Свиноводство. -1982. -№ 10. -с. 25-26.

39. Кононов В.П. Достижения и перспективы замораживания семени в свиноводстве. // -М.: -1983. -75 с.

40. Кононов В.П., Нарижный А.Г., Походня Г.С. Способ криопротективной обработки спермы животных. // Животноводство. -1987. -№12. -с. 42-44.

41. Кононов В.П. Глубокое замораживание семени хряков. Новое в теории и практике. // Теория и практика воспроизведения животных. -М.: Колос. -1984. -с. 241-256.

42. Кононов В.П., Семенова В.А., Ерохин A.C. Факторы плазмы спермы, повышающие устойчивость сперматозоидов при замораживании. //Сельскохозяйственная биология. -1986. -№ 10. -с. 98-101.

43. Кононов В.П., Васильева Э.Г., Солдатенков Н.К. Обусловленность оптимального времени осеменения свиноматок свежевзятым и криоконсервированным семенем. // Вестник с.-х. науки. -1990.-№ 8.-с. 124-129.

44. Касымов К.Т., Ашимов Ж.Б. Глубокое замораживание спермы баранов. // Пути повышения продуктивности животноводства в Казахстане. Алма-Ата. -1975. -с. 48-49.

45. Корбан Н.В. Криоконсервация спермы хряков. II Криоконсервация спермы с.-х. животных. JL: Агропромиздат. -1988. -с. 103-161.

46. Корбан Н.В., Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш. Метод замораживания спермы. // Свиноволство. -1977. -№ 12. -с. 29.

47. Корбан Н.В., Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш. Совершенствование технологии замораживания спермы хряков. // Животноводство. -1980. -№7.-с. 23-25.

48. Корбан Н.В., Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш. Методические рекомендации по низкотемпературной консервации спермы хряков. Л. -1980. -61 с.

49. Курбатов А.Д., Мороз Л.Г. Влияние экзо- и эндоцелюлярных криопротекторов на сперму хряков. // Бюлл. ВНИИРГиЖ. -1983. -в. 65. -с. 5-7.

50. Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В. и др. Криоконсервация спермы с.-х. животных. Л.: Агропромиздат. -1988. -256 с.

51. Кичева М.Г., Загорски Д.Т., Бобадов Н.Д. Исследована криопротективного действия ЕНГ-20 на замораживание, реанимацию и морфологию сперматозоидов хряка. // Biol. et. Immunal. Reprod. -1989.-v. 15.-p. 45-51.

52. Левин К., Ющенко Н. Замораживание спермы хряков. // Свиноводство. -1973. -№ 7. -с. 23.

53. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н. и др. Лабораторные методы исследования в клинике. М., 1987. -с. 186-190.

54. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственного осеменения животных. М.: -1962. -696 с.

55. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория и практика воспроизведения животных. М.: -1984. -252 с.

56. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория холодового удара живчиков млекопитающих. //Доклады ВАСХНИЛ. -1959. -№ 8. -с. 3-9.

57. Мингазов Т.А. Влияние витамина Е на усвоение каротина в микробном препарате и воспроизводительную функцию коров. // Вестник с.-х. науки Казахстана. -1977. -№ 1. -с. 68-71.

58. Маринов П.И., Златарев С.Т., Грудова Ч.Н. Среди за криоконсервация на овчи сперматозоиди. // Криобиология на половите клетки. София. -1983. -с. 86-101.

59. Мороз Л.Г., Корбан Н.В., Рустенова P.M. и др. Устойчивость семени хряков при замораживании с тиольными соединениями. //С.-х. биология.-1983.-№ 11.-с. 88-91.

60. Наук В.А. Криоконсервация семени животных. // Консервация генетических ресурсов. Пущино. -1982.

61. Наук В.А., Гуськов A.M. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков. // Доклады ВАСХНИЛ. -1983. -№ 2. -с. 27-29.

62. Наук В. А., Гуськов A.M. Среда для разбавления и замораживания спермы хряков. // Авторское свидетельство. № 1143413-Б.И.-1985.-№9.

63. Наук В.А., Буга Н.Ф. Глубокое замораживание семени хряков-производителей в гранулах. // Животноводство на промышленную основу. Кишинев. -1975. -с. 58-67.

64. Нарижный А.Г., Ерохин A.C., Рочев Н.Ф. Влияние антиоксидантов и способа криоконсервации на пероксидацию липидов в сперме хряка. // Доклады РАСХН. -1993. -№ 6. -с. 32-34.

65. Нарижный А. Г., Ерохин A.C. Активность супероксиддисмутазы в нативной и криоконсервированной сперме хряков. // Доклады РАСХН. -1995. -№ 1. -с. 37-38.

66. Нарижный А.Г. Интенсификация воспроизведения в условиях промышленного свиноводства. Теория и практика. // Дисс. на соиск. . докт. биол. наук. Дубровицы. 1995. - 46 с.

67. Ок Савин. Влияние технологических и биологических факторов на результативность осеменения свиней охлажденной спермой. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Дубровицы. -1999. 21 с.

68. Осташко Ф.И. Причины и механизмы холодового удара клеток. // Международный сельскохозяйственный журнал. -1964. -№ 3. -с. 106-109.

69. Ойвадис Р.Н., Соколовская И.И., Абилов А.И. Морфология гамет самцов сельскохозяйственных животных как критерий биологической полноценности. // Морфологические исследования в практике здравоохранения и животноводства. -М.: Наука. -1984. -с. 144-148.

70. Питкянен И.Г. Новое в оплодотворении и плодовитости свиней. -М.: -1961. -215 с.

71. Питкянен И.Г. Исследования по биологии воспроизведения и искусственному осеменению свиней. // Долады Сов. Ученых к 5-му Межд. конгр. по биол. воспроизвел, и искусст. осем. животных. М.: -1964. -с. 37-38.

72. Полянцев H.H., Подберезный В.В. Синхронизация овуляции у свиней с помощью сурфагона. // Зоотехния. -1991. -№ 8. -с. 43-45.

73. Панкратов В.А. Окситоцин при искусственном осеменении свиней в условиях промышленной технологии. // Труды Ставропольскиго НИИ сельского хозяйства. -1979. -№ 45. -с. 76-78.

74. Платов Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей с.-х. животных. // Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Дубровицы. -1973.

75. Плишко Н.Т. Среды для хранения спермы хряков. // Свиноводство. -1968. -№ 6. -с. 19-21.

76. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования. -Киев: Наукова Думка. -1984. -245 с.

77. Рустенов А.П., Мороз Л.Г. Влияние серосодержащих соединений на устойчивость спермы хряков к замораживанию. // Бюлл. ВНИИРГЖ.-1989. № 116.-с. 7-10.

78. Сердюк С.И. Искусственное осеменение в промышленном свиноводстве. М.: Колос. -1977. -160 с.

79. Семаков В.Г. Активность сукцинатдегидрогеназы в процессе замораживания и оттаивания спермы быков и хряков. // Доклады ВАСХНИЛ. -1984. -№ 2. -с. 26-27.

80. Семенов В.И. Применение гормональных препаратов при осеменении свиней. // Научные основы развития животноводства в БССР. -1988. -вып. 18. -с. 47-51.

81. Сергеев Н.И. Результаты искусственного осеменения свиней с использованием окситоцина и нейротропных веществ. // Животноводство. -1963. -№ 2. -с. 76-79.

82. Сергееев Н.И. Нервно-гуморальные факторы при искусственном осеменении свиней. II Докл. Сов. ученных к 5-му межд. конгр. по биол. воспр. и иск. осем. животных. М.: -1964. -с. 25-27.

83. Сергеев Н.И., Ярош С. Некоторые нервно-гуморальные факторы при искуственном осеменении свиней. // Животноводство. -1964. -№ 5. -с. 84-86.

84. Судаков В.Г. Повышение качества спермы хряков. // Зоотехния. -1994. -№ 5. -с. 26-27.

85. Станев Л.Л., Бояджиева-Михайлова А.Г., Манова-Тодорова К.О. Ролята на цикличните нуклеотиди в регулацията на сперматозойдите. // Криобиология на половите клетки. -София. -1983. -с. 72-84.

86. Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения. М.: И.Л. -1963. -503 с.

87. Соколовская И.И., Питкянен И.Г. Искусственное осеменение свиней. М.: -1961.

88. Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов А.И. О значении акросомы в оценке семени самцов. // Животноводство. -1981. -№ 3. -с. 45-46.

89. Смирнов И.В. Сохранение спермы сельскохозяйственных животных посредством глубокого охлаждения. // Дисс. . канд.биол. наук. -М. -1949. -22 с.

90. Шапиев И.Ш., Мороз Л.Г., Корбан Н.В. К вопросу технологии замораживания спермы хряков. // Животноводство. -1976. -№12.-с. 60-62.

91. Шапиев И.Ш. Совершенствование методов замораживания и оценки спермы хряков. // Автореф. дисс. . докт. с.-х. наук. -Пушкин. -1998. -49 с.

92. Угарова Н.И., Бровко Л JO.,. Трдян И.Ю. Оптимизация биолюминесцентного метода определения микробной биомассы. // Прикладная биохимия и микробиология. -1991. -т. 27. -№ 1. -с. 134-141.

93. Чандерле И. Применение окситоцина при искусственном осеменении свиней. // Проблематика глубокого замораживания семени хряков и баранов. -Краков. -Могиляны. -1978. -с. 39-42.

94. Aalbers I.G., Johnson L.A., Rademaker I.H. Acrosome morphology and fertilizing capacity of boar spermatozoa frozen in pellets and straws. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. -1985. -p. 277-281.

95. Aalbers I.G., Johnson L.A.,Aalbers-Smith E.A. e.a. ATP content of fresh and frozen-thawed boar semen and its relation to sperm concentration and fertility. // First Int. Conf. Deep Freezing Boar Semen. Uppsala. -1985. -p. 38-45.

96. Almlid Т., Johnson L.A., Freezing of boar semen in straw: effect of glycerol levels, equilibration time and temperature of glycerol addition on post-thaw sperm viability. //J. Anim. Sci. -1987. -v. 65. -p. 384-385.

97. Alvares J.G., Storey B.T. Role of superoxidedismutase in protecting rabbit spermatozoa from 02 toxicity due to peroxidation. // Biol. Reprod. -1993. -v. 28. -p. 1129-1136.

98. Boehnko H. Zur tiefgefrierung von Ebersperma. 3. Weitere Labor und Weitere Besamung-Sversuche unter vorwendung von TEST und TES-Verdünner sowie, verschliessene Auftaumethoden. //Dtsch. Tierazte. Wechr. -1974. -v. 81. -№ 14. -p. 336-340.

99. Baker R.D. Effect of volume of semen and drugs on transport of sperm in artificially inseminated gilts. // J. Anim. Sei. -1968. -v. 27. -№ 1. -p. 88-93.

100. Becze I. The reproductional biology of male domestic animals. // Arg. Ed. Budapest. -1983. -№ 1. -p. 12-14.

101. Grabo B., Einarsqon S. Fertility of deep-frozen boar spermatozoa. // Acta Vet. Scand. -1971. -v. 12. -p. 125-127.

102. Crabo B.G., Bower R.E., Graham E.F. The effect of glycerol on bull and boar spermatozoa in vitro measured as loss of intracellular glutamic acetic transaminase. //Abstr. 11 Nord. Vet. Congr. Bergen. -1970. -p. 242-245.

103. Courtens I.L., Paquignon M. Infrastructure aspects of stored boar semen. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. -1985. -p. 37-61.

104. Enne G.,Beccaro P. Conqelamento del materiale spermatico di verro. // Riv. Suinic. -1982. -v. 23. -p. 65-72.

105. Foulkes J.A., Watson P.A. Hyaluronidase activity in seminal plasma as a method of assessing bull sperm integrity. // J. Reprod. Fertil. -1975. -v. 43. -№ 2. -p. 349-353.

106. Foulkes J.A., McDonald B.J. The relationship between ATP content and motility of bovine spermatozoa. // Theriogenology. -1979. -v. 11. -p. 311-319.

107. Graham E.F., Rajamannan A.N., Schmehl M.K. Fertility studies with frozen boar spermatozoa. // A.I. Dig. -1971. -v. 19. -p. 16-18.

108. Healew P. Effect of freezing on the ultrastructure of the spermatozoon of some domestic animals. //J. Reprod. Fertil. -1969. -v. 18. -№ 1. -p. 21-27.

109. Hahn R. Problems of deep-freezing boar semen. // Atti del 8th Symp. Int. di Zootechn. Milano. -1973. -p. 730-733.

110. Hahn R. Zur Tiefgefrieiung von Ebersperma 2. Mitteilung: Besamung versuche unter Verwendung von TEST-und TESNAK Verdünner sowie verschiedenen Auftaumethoden. // Dtsch. Tierarrtl. Wschr. -1974. -v. 81. -№12.-p. 281-283.

111. Jones R., Stewart D. The effect of cooling to 5°C and freezing and thawing on the ultrastructure of bull spermatozoa. // J. Reprod. Fert. -1979. -v. 56.-№ 1.-p. 233-238.

112. Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa. // Proc. R. Soc. Lond. B -1973. -v. 184. -p. 103-107.

113. Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa: formation, role of plasmologen and physiological significance. // Proc. R. Soc. Lond. B. -1976. -v. 193. -p. 317-333.

114. Iida I., Adachi I. Studies on deep-freezing of boar semen. 1. Effect of various diluents and glicerol levels on deep-freezing of boar spermatozoa. // Jap. J. Zoot. Sei. -1966. -v. 37. -№11. -p. 411-416.

115. Kahn V.W., Pfetsh J., Leidi W. ATP, ADT und AMP Gehalt von Spermien Haustiere und des Menschen sowie von Bullenspermien Wahrend der Tiefgefrierkonservierung. // Zuchthig. -1982. -v. 17. -p. 49-55.

116. Kunze C.? Peter W., Mudra K. e.a. Vergleich ende Untersuchungen zur Gefrierkonservierung von Ebersperma. // Arch. Exp. Vet. Med. -1982. -B. 36.-№ 1.-p. 133-139.

117. Krogenaes A., Berg K.A., Hafiie A.L. e.a. Membrane alterations in bull spermatozoa after in vitro fertilization. // Acta. Yeterinaria Scandinavica. -1994. -v. 35. -№ 1. -p. 17-26.

118. Kozumplic I. Effect of follicular fluids on motility of thawed boar spermatozoa. // Acta. Vet. Bmo. -1978. -v. 47. -p. 33-38.

119. Kozumplic I. Velirost petel a individualni viaatnost semen Kancu ve vztanu k postu pohyblivjoh spermii po roznirazeni. // Vet. Med. -1978. -v. 23. -№ 6. -p. 457-463.

120. Kovacs L. A sertessperma molyhutes hazai pasztataj. // Magy allator. lapja. -1981. -v. 36. -№ 6. -p. 398-403.

121. Kirkwood R., Lythgoe E., Aherae F. Effect of lactation, food intake and gonadotrophine releasing hormone on sows. // Canad. J. Anim. Sci. -1987.-v. 67. -№ 3. -p. 715-719.

122. Lovelock J.E. Denaturation of lipid-protein complex as a cause of damage by freezing. //Proc. Roy. Soc. B. -1957. -v. 147. -№ 2. -p. 427-433.

123. Levitt J. A sulphydril-disulfide hypothesis of frost injury and resistance in plants. //J. Theor. Biol. -1962. -№ 3. -p. 183-191.

124. Larsson K. Current research on the deep-freezing of boar semen. // World. Rev. Anim. Prod. -1978. -v. 14. -№ 4. -p. 59-64.

125. Larsson K. Fertility of deep-frozen boar spermatozoa at various intervale between insemination and induced ovulation. // Acta. Vet. Scand. -1976. -v. 17. -№ 1. -p. 63-73.

126. Larsson K. Fertility of deep-frozen boar spermatozoa at various intervale between insemination and induced ovulation. // Acta. Vet. Scand. -1976. -v. 17. -№ 1. -p. 43-46.

127. Lots J.H. Diss. Zur ovulationsbeeinflussung bei der saw mittels intrazervikalar infusion spermiefreir. Medien. Hannover. -1990. -79 p.

128. Lorrman W., Hahn R. Our experiences with deep frozen boar semen. Uppsala. Sweden. -1985. -p. 295-298.

129. Maryman H.T., Williams R.J., Douglas M.S. Freezing injurey from "solution effect" and its prevention by natural or artificial cryoprotection. // Cryobiology. -1977. -v. 14. -№ 3. -p. 287-302.

130. Mazur P. Causes of injury in frozen and thawed cell. // Fed. Proc. -Suppl. 15. -1965. -v. 24. -p. 175-182.

131. Mazur P. The role of intracellular freezing in the death of cell cooled at supraoptimal rates. // Ciyobiology. -1977. -v. 14. -p. 251-272.

132. Mahmoud M.F. Comparative study of the phosphatases activity on fresh and frozen semen of bovine. // Ind. Vet. J. -1986. -v. 63. -№ 5. -p.393-396.

133. Maxwell W.M., Salamon S. Fertility of boar semen after long term storage. // Theriogenology. -1977. -v. 8. -№ 4. -p. 206-208.

134. Maxwell W.M., Salamon S. Fertility of frozen-thawed boar semen. // Austr. J. Biol. Sci. -1979. -v. 32. -p. 243-249.

135. Nath J. Correlative biochemical and ultrastructural studies on the mechanism of freezing damage the ram semen. // Cryobiology. -1971- v. 9. -p. 240-246.

136. Osinovo O., Salamon S. Fertility test of frozen boar semen. // Austr. J. Biol. Sci. -1976. -v. 29. -№ 4. -p. 336-339.

137. Polge C., Smith A.U., Parkers A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and dehydratation at low temperature. // Nature. -1949. -v. 164. -№4172.-p. 666-667.

138. Polde C., Rowson L.E. Fertilization capacity of bull spermatozoa after freezing at 79°C. II Nature. -1952. -v. 169. -№ 4307. -p. 626-627.

139. Polge C., Salamon S., Wilmut I. Fertilizing capacity of frozen boar semen following surgical insemination. // Vet. Rec. -1970. -v. 87. -p. 424-428.

140. Polge C. The fertilizing capacity of boar spermatozoa following freezeng and thawing. // 8"th Int. Congr. Anim. Reprod. and A.I. Krakow. -1976. -v. 4. -p. 1081-1084.

141. Pangawcar G.R., Sharma R.D., Sharma R. Phosphatase and transaminase activity in the seminal plasma of bull in relation to freezability of semen. // Theriogenology. -1988. -v. 29. -№ 6. -p. 1393-1399.

142. Paquignon M., Quellier P., Dacheux I. Congelation du sperme de varrat: comparison de differents diluens, modes de cunditionnement et temperatures de decongelation. // Ann Zootechn. -1986. -v. 35. -Mb 2. -p. 173-183.

143. Paquignon M. Freezing and thawing extendere for boar spermatozoa. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. -1985. -p. 129-145.

144. Pacjva I. Overeni drou rordilnyeh technologikych postupu zmrazovani kanciho spermatu ve vztahv k laboratornim vysledkum, zabresavanni a plodnosti plemenici. // Zivorishna Vyroba. -1983. -v. 28. -№ 10. -p. 765-767.

145. Pare C.S., Pursel V.G. Effect of cooling rate and duration of freezing point plateau on boar sperm frozen in maxistraws. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. -1985. -p. 267-276.

146. Plummer J.M., Robertson L., Watson P.F. Accumulation of calcium in cold-shocked spermatozoa of the ram and its intracellular localization using pyroantimonate. // J. Physiology. -1985. -v. 365. -№ 1. -p. 65.

147. Peter W Einfluss ses Besamungszeitpunkte auf die Befruchtung sergebnisse mit getrierkonservierten Ebersperma. // Arch. Tierzucht. -1982. -v. 25. -№ 4. -p. 303-309.

148. Pursel V.G., Johnson L.A. Procedure for the preservation of boar spermatozoa by freezing // U. S. Dept. Agric AR.S. -1971 -v. 44 -p. 227-229.

149. Pursel V.G., Johnson L.A. Fertility composition of boar semen frozen in two extenders. // J. Anim. Sci. -1972 -v. 35 -№ 5. -p.l 123-1125.

150. Pursel V.G., Johnson L.A. Freezing of boar spermatozoa, fertilizing capacity with concentrated semen and a new thawing procedure. // J. Anim. Sci. -1975 -v. 40. -p. 99-102.

151. Pursei V.G., Schulmann L.L., Johnson L.A. Effect of orvus es paste on acrosome morphology, motility and fertilizing capacity of frozen-thawed boar sperm. // J. Arnim. Sei -1978 -v. 47. -p. 198-202.

152. Pursei V.G. Advances in preservation of swine spermatozoa. // Beltsville symposia in Agric. Res. -1979. -v. 3. -p. 145-157.

153. Pursei V.G., Park C.S. Duration of thawing on post-thaw acrosome morphology and immotility of boar spermatozoa frozen in 5-ml maxi-straws. // Theriogenology. -1987. -v. 28. -p. 683-690.

154. Quinn P.J. A lipid-phase separation model of low-temperature damage of biological membranes. // Cryobiology. -1985. -v. 22. -p. 128-146.

155. Reed H.C. Current use of frozen boar semen. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. -1985. -p. 225-237.

156. Royere D., Hamamash S., Nicole J.C. e.a. Freezing and thawing alter chromatin stability of ejaculated human spermatozoa: fluorescence acridine orange staining and feulgen-DNA Cytophotometric Studies. // Gamete Res. -1988.-v. 21.-p. 51-57.

157. Robertson L., Watson P.F. Calcium transport in dilited or cooled ram semen. // J. Reprod. Fertil. -1986. -v. 77. -p. 177-185.

158. Richter L., Liedecke A. Ein Verfahren Zum Tief gefrieren vont"h

159. Ebersperma. // 7 .Int. Congr Tierisch. Fortpflanz K.B.Munchen. -1972. -v. 2. -p. 1617-1619.

160. Rabeier M.I. Einfluss von seminalplasma enhaltsstoffen im inseminat auf Befruchtungsraten, speraiientransport and ovulation bei der sow. // Inaug-Diss. Hannover -1990.

161. Romeny E., Trey H., Richter L. Zur Tiefgefrierung von Ebersperma 5. Mitteilung: Labor und Besamungsversuche zur Verbesserung des "Hulsenbergverfahren". //Dtsch. Tierarzth. Wscgr. -1974. -v. 81. -p. 382-385.

162. Salamon S., Wilmut I., Polge C. Deep freezing of boar semen. 1. Effect of diluent composition, protective agents and method of thawing on survival of spermatozoa. // Austr. J. Biol. Sei. -1973. -v. 26. -p. 219-230.

163. Salamon S., Visser D. Fertility after surgical insemination with frozen boar semen. // Austr. J. Biol. Sei. -1974. -v. 27. -p. 499-504.

164. Soderquist L., Rodrigues-Martines H., Ianson L. Post-thaw motility, ATP content and cytochrome C oxidase activity of bull spermatozoa relation to fertility. //J: Vet. Med. A. -1991. -v. 38. -№ 3. -p. 165-174.

165. Sandford L.M.,King G.J., Masherson J.W. Influens of glycerol concentration and freezing to 79°C on oxygen uptake and livability of boar and bull spermatozoa. // Canad. J. Anim. Sei. -1972. -v. 52. -№ 1. -p. 65-72.

166. Samouilidis S.G., Samoyilidis R.I., Kohler-Samoulidis G. Kunstliche besamung nit in Pailletten und pellets tiefgefrorenem Ebersemen. // Zuchthygiene. -1987. -v. 22. -№1. -p. 3 4-36.

167. Schmidt D. Die. Konservierung in tabbletten. // Tiettucht. -1982. -v. 25. -№ 3. -p. 209-220.

168. Schmidt D. Der Einfluss des Einfrier-und Auftauer regimes auf die u berlebenstate gefrierkonservierter Eberspermien. // Vort. Anla Int. Sym. Zur. Gefr. von. sperm. Schonow (DDR.) -1978. -p. 211-218.

169. Soede N.M., Wetzeis C.G., Zondag W e.a. Effect of time of insemination relative to ovulation as determined by ultrasonography on fertilization rate of sows. // J. Reprod. Fértil. -1995. -v. 104. -p. 99-106.

170. Tasseron F., Amir D., Schindler H. Acrosome damage of ram spermatosoa during dilution, cooling and freezing. // J. Reprod.Fértil. -1977. -v. 51 -№ 2. -p. 461-462.

171. Takacs T., Pecsi T., Magyar I. The effect of the prostaglandin F2L treatment of boar semen and sow on the fertility levels in an artificialinsemination system. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. -1985. -304-307.

172. Takacs T., Machaty Z., Magyar I. A kansperma melyhutese beltsville i modszerrel es a melyhutott spermavatt termekenyitesek eredmenyei // Magyar Allatory Lapia. -1989. -v. 44. -p. 469-473.

173. Vicente A. Technology of freezing boar semen // 7th Int. Congr Anim. Repr. A.I. -Munchen. -1972. -v. 2. 2. -p.1623-1626.

174. Visser D. Salamon S. Effect of composition of tris-based diluent on survival of boar spermatozoa following deep-freezing // Austr. J. Biol. Sci. -1974. -v. 27. -p. 485-497.

175. Vasquez I.A., Graham E.E. Effect of dialysis and glycerol on diluentsthfor freezing boar semen. // 9 Int. Congr. Anim. Repr. and A.I. Madrid. -1980-v. 5. -p. 442-444.

176. Viring S., Einarsson S. Influence of boar seminal plasma on the distribution of spermatosoa in the genital tract of gilts. // Acta Vet. Scand. -1980. -v. 21.-№4. -p. 598-606.

177. Vinter P. Vliv pridavku syntetickeho analogu PGF2 alfa-oestrophanu Spofa do inseminacni davky na plodnost prasnic. // Zivocisna Vyroba -1985. -v. 30. -№ 3. -p. 245-250.

178. Watson P.F. The preservation of semen in mammals. // Oxford Rev. in Biol.-1975.-v. 1.-p. 285-350.

179. Willems S.M. Development of artificial insemination pigs in EAAP countries // Livest. Prod. Sci. -1978. -v. 5. -p. 285-291.

180. Woolgar A.E. Hemolysis of human red blood cells by frezing and thawing in solution containing sucrose : relationship with posthypertonic hemolysis and solute movement. //Cryobiology. -1971. -v. 11. -№ 1. -p. 44-51.

181. Wilmut I., Polge C. The freezing of boar spermatozoa. // 7th Int. Congr. Anim. Reprod. Munchen. -1972. -v. 2. -p. 1611-1615.

182. Wilmut I., Polge C. Recent progress in the deep-freeze preservation of boar semen. // J. Reprod. Fertil. -1971. -v. 25. -№ 2. -p. 301-302.■

183. Wilmut I., Polge C. The fertilizing capacity of frozen and thawed boar semen. // Cryobiology. -1977. -v. 14. -p. 483-491.

184. Westendorf P., Richter L., Tree H. Zur Tierfgefrierung von Ebersperma : Labor und Besamung sergebnisse mit dem Hulsenberger Pailleten Verfahren. // Dtch. Ttierarztl. Wschr. -1975. -v. 82. -p. 261-267.

185. Waide Y.S., Soejema A., Masuda H. Studies on deep freezing of boar semen. // Jap. J. Zoot. Sei. -1969. -v. 29. -p. 142-143.

186. Weitze K.F., Rath D., Farano F. Befreechtungsergebnisse nach t Besamung mit Tiefgefriersperma beem Schwein. // Zuchthygiene. -1987. -v. 22.3.-p. 123-126.

187. Weitze K.F. Interaction between inseminate and ovarian function in the saw. // Reprod. Dornest. Anim. -1990. -v. 25. 4. -p. 191-196.

188. Waberski D., Weitze K.F., Lietmann C. e.a. The initial fertilizing capacity of long term stored liqued semen following preand postovulatory insemination. // Theriogenology. -1994. -v. 41. -p. 1367-1377.

189. White J., Darine-Bennet A. The lipids of sperm in relation to cold % shock. // Proc. 8 " Int. Congr. Anim. Reprod. A.I. Krakow. -1976. -v. 4. -p.951.954.

190. Yanagimachi R., Usui N. Calcium dependence of the acrosome reaction and activation of guinea-pig spermatozoa. // Expt. Cell. Res. -1974. -v. 89. -p. 161-174.