Влияние активных кислородных метаболитов на эмбриогенез алтайского зеркального карпа

Кеберлайн, Ольга Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Влияние активных кислородных метаболитов на эмбриогенез алтайского зеркального карпа
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Влияние активных кислородных метаболитов на эмбриогенез алтайского зеркального карпа"

На правах рукописи

КЕБЕРЛАЙН ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

ВЛИЯНИЕ АКТИВНЫХ КИСЛОРОДНЫХ МЕТАБОЛИТОВ НА ЭМБРИОГЕНЕЗ АЛТАЙСКОГО ЗЕРКАЛЬНОГО КАРПА

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

005056586

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

6 ЛЕИ 2012

Саранск-2012

005056586

Работа выполнена на кафедре зоологии и методики обучения биологии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Новосибирский государственный педагогический университет»

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук Сахаров Андрей Валентинович

доктор биологических наук, профессор Кузьмичева Лидия Васильевна профессор кафедры биохимии ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарёва», г. Саранск.

доктор биологических наук, профессор Зайцева Елена Владимировна заведующая кафедрой зоологии и анатомии ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет им. академика И. Г. Петровского», г. Брянск.

ФГБОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия», г. Иваново

Защита диссертации состоится «14» декабря 2012 г. в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.15 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарёва» по адресу: 430005, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке им. М. М. Бахтина Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарёва.

Объявление о защите и автореферат диссертации размещены на официальном сайте Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарёва www.mrsu.ru и Интернет-сайте ВАК http://vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан « /3 »ноября 2012 г. Ученый секретарь диссертационного совета

Ъ^уТ- Романова Т. А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. В условиях сокращения добычи океанической рыбы и снижения биологических ресурсов внутренних водоемов аквакультура остается одним из надежных источников увеличения объемов пищевой продукции (А. К. Богерук, 2006; А. А. Крайний, 2007; Ю. П. Мамонтов и др., 2007). Несмотря на накопленный опыт и достижения в области аквакультуры, современный уровень развития общества требует разработки и внедрения в реальный сектор экономики наукоёмких технологий, направленных на получение жизнеспособной молоди, обладающей высокими темпами роста, устойчивой к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды (Т. П. Михелес, 2001; И. С. Мухачев, 2009; А. М. Багров и др., 2004; Б. Н. Котенев и др., 2006).

Установлено, что изменение оксигенации икры в период инкубации, механические повреждения и другие воздействия являются неотъемлемой частью технологических процессов при искусственном воспроизводстве рыб и приводят к активации неспецифических ответных реакций организма рыб уже на ранних этапах онтогенеза (В. В. Залепухин, 2001; А. С. Константинов и др., 1998). Высокая чувствительность рыб к действию различных абиотических факторов в период эмбрионально-личиночного развития определяет необходимость исследования механизмов адаптации организма эмбрионов к данным факторам с использованием современных методов биохимии и морфологии. Считается доказанным, что на ранних этапах онтогенеза регуляция неспецифических механизмов адаптации может обеспечиваться за счет накопленных в яйце самок в процессе оогенеза антиоксидантных соединений (А. Е. Mikullin, 1992). Вместе с тем изучение механизмов адаптации рыб к неблагоприятным факторам внешней среды на ранних этапах онтогенеза остается изученным крайне недостаточно (Л. А. Бондарева и др., 2006; Г. Н. Новиков, 2000).

При всех неоспоримых преимуществах аквакультуры перед естественным воспроизводством рыб получение половых продуктов от производителей и искусственное оплодотворение икры на воздухе несет опасность повышения уровня свободнорадикального перекисного окисления липидов и других органических соединений яйца с возможностью развития окислительного стресса и его негативным влиянием на ход морфогенетических процессов (А. Р. Исуев, 1990; В. Р. Микряков и др., 2001; Е. Б. Меныцикова и др., 2008; В. 3. Залепухин, 2006). Каротиноиды представляют наименее изученную группу соединений, участвующих в регуляции процессов дыхания, а также защите клеток тканей эмбрионов от повреждения активными кислородными метаболитами (А. Е. Микулин, 2000). При этом роль свободнорадикального перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты рыб в реализации летальных и сублетальных повреждений клеток эмбрионов активными кислородными метаболитами остаются изучены крайне недостаточно. Указанное определяет необходимость уточнения роли

естественных антиоксидантных соединений яйца рыб в механизмах реализации программы индивидуального развития эмбрионов и личинок карпа.

С точки зрения фундаментальной биологии, исследование механизмов адаптации рыб на ранних этапах онтогенеза к действию абиотических факторов позволит выявить наиболее чувствительные к их влиянию молекулярные мишени и определить ключевые звенья патогенеза повреждений клеток различных тканей у эмбрионов и личинок рыб.

Изучение влияния абиотических факторов среды обитания рыб на особенности их развития в ранние периоды онтогенеза является основой для разработки новых, научно обоснованных методов управления морфогенетическими процессами в организме рыб в условиях аквакультуры. Данный подход представляет интерес для прикладной биологии и позволит увеличить выход предличинок из икры, обладающих высокими темпами роста и устойчивых к технологическим нагрузкам.

В этой связи изучение роли активных кислородных метаболитов в механизмах адаптации эмбрионов рыб к абиотическим факторам окружающей среды в динамике эмбрионально-личиночного развития, а также поиск методов управления окислительными процессами в организме рыб с использованием антиоксиданта «Тиофан» явились основанием для проведения настоящего исследования.

1.2. Цель исследования - изучить влияние активных кислородных метаболитов на эмбриогенез алтайского зеркального карпа и возможность управления окислительными процессами в икре антиоксидантом «Тиофан».

Задачи исследования:

1. Изучить активность процессов липопероксидации и функциональное состояние системы антиоксидантной защиты у эмбрионов и личинок рыб породы алтайский зеркальный карп при традиционной технологии аквакультуры и использовании антиоксиданта «Тиофан».

2. Представить сравнительную морфофункциональную характеристику эмбрионов и личинок рыб породы алтайский зеркальный карп, полученных при традиционной технологии аквакультуры и использовании антиоксиданта «Тиофан».

3. Оценить показатели роста и развития рыб породы алтайский зеркальный карп в постэмбриональном периоде развития, полученных при традиционной технологии аквакультуры и использовании антиоксиданта «Тиофан» в сравнительном аспекте.

1.3. Научная новизна. Впервые исследовано состояние процессов липопероксидации и активность системы антиоксидантной защиты у рыб породы алтайский зеркальный карп в период эмбрионально-личиночного развития. Впервые установлено влияние повышенной оксигенации при обесклеивании икры «сухим» способом на увеличение уровня свободнорадикального перекисного окисления липидов в икре алтайского зеркального карпа. Впервые доказано повреждение клеток эмбрионов рыб на стадиях бластулогенеза, гаструляции и органогенеза активными кислородными

метаболитами. Впервые изучено влияние свободнорадикального перекисного окисления липидов на интенсивность расходования трофического материала и каротиноидов в яйце рыб. Впервые выявлена связь между размерами желтка свободных эмбрионов рыб породы алтайский зеркальный карп и их темпами роста при переходе на смешанное питание.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Усиление процессов свободнорадикального перекисного окисления липидов и перенапряжение системы антиоксидантной защиты являются характерным признаком традиционных технологий аквакультуры, что приводит к повреждению активными кислородными метаболитами клеток эмбрионов в период бластулогенеза, гаструляции и органогенеза.

2. Использование антиоксиданта нового поколения «Тиофан» снижает показатели липопероксидации в оплодотворенном яйце рыб, нецелевое расходование трофического материала желтка у эмбрионов и через антирадикальный механизм увеличивает темпы роста эмбрионов и личинок карпа при переходе на смешанное питание.

3. Использование метода антирадикальной защиты эмбрионов алтайского зеркального карпа определяет преимущества в росте и развитии рыб на старте, которые сохраняются в течение первого года жизни.

1.4. Научно-практическая значимость работы. Установлена роль активных кислородных метаболитов в реализации программы индивидуального развития рыб в эмбрионально-личиночный период. Впервые разработан метод управления свободнорадикальными процессами в оплодотворенной икре рыб породы алтайский зеркальный карп в период эмбрионально-личиночного развития антиоксидантом «Тиофан». Внедрение в технологию аквакультуры нового метода обесклеивания оплодотворенной икры с применением антиоксиданта «Тиофан» обеспечивает перераспределение функций организма эмбрионов рыб при резких колебаниях кислородного режима в направлении расходования пластических и энергетических ресурсов на рост и развитие особи. Использование нового метода антирадикальной защиты эмбрионов и личинок рыб позволяет снизить показатели эмбриональной смертности рыб на 12,06% и увеличить интенсивность темпов роста и развития эмбрионов и личинок на 4,79%, мальков рыб на 48,1% и сеголетков карпа на 60,48% по сравнению с контролем. Полученные на старте преимущества в росте и развитии при использовании нового метода аквакультуры сохраняются в течение первого года жизни рыб.

1.5. Реализация результатов исследования. Результаты диссертационного исследования относительно влияния активных кислородных метаболитов на эмбриогенез зеркального карпа используются в лекционных курсах «Биология клетки» и «Патология клетки», «Воспроизводство водных биологических ресурсов», читаемых в Новосибирском государственном педагогическом университете. Основные результаты диссертационного

исследования используются в практической работе ФГБУ «Верхнеобьрыбвод», ООО Агрофирмы «Маяк».

1.6. Апробация результатов исследования. Материалы диссертации доложены и обсуждены на XLVIII Международной научной конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск 2010), VI Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы биологической науки и образования в педагогических вузах» (Новосибирск 2010), VIII Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва 2010), XV Международной экологической конференции «Экология России и сопредельных территорий» (Новосибирск 2010), VII Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы биологической науки и образования в педагогических вузах» (Новосибирск 2011).

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 4 - в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

1.8. Структура и объём работы. Диссертационная работа изложена на 130 страницах компьютерного текста, включает: введение, обзор литературы, описание материала и методов исследования, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы, практические предложения, библиографический список цитируемой литературы, включающий 275 источников, из них 201 российских и 74 зарубежных авторов и приложения. Работа иллюстрирована 28 рисунками и 7 таблицами.

1.9. Личный вклад. Диссертационная работа является результатом 3-х летних полевых и лабораторных исследований автора на базе специализированного рыбоводного предприятия ООО Агрофирмы «Маяк» Алтайского края, института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, лаборатории морфологии института антиоксидантов и аналитического центра ФГБОУ ВПО «Новосибирский государственный педагогический университет» и реализована в рамках тематики исследований НОЦ «Экспериментатьная и прикладная биология» ФГБОУ ВПО «НГПУ». Автор самостоятельно выполнил весь объём работ по набору, обобщению экспериментального и теоретического материалов, провёл статистическую обработку полученных результатов. Соавторы опубликованных работ оказывали консультативную, техническую и методическую помощь, за что выражаю им глубокую благодарность.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная часть работы проведена в весенние периоды 20092012 годов на базе инкубационного цеха специализированного рыбоводного предприятия ООО Агрофирмы «Маяк» Алтайского края. Технология искусственного разведения рыб породы алтайский зеркальный карп, используемая на данном предприятии, включала получение половых продуктов от производителей, подобранных согласно селекционно-генетической карте,

искусственное оплодотворение икры «сухим» способом, ее обесклеивание и культивирование в аппаратах Вейса.

Эмульсию для обесклеивания икры готовили на основе 1% масляного раствора антиоксиданта «Тиофан» с добавлением проточной воды в гомогенизаторе при скорости вращения 3000 об/мин в течение 30 минут.

Согласно протоколу эксперимента всю икру, полученную от одной самки и оплодотворенную половыми продуктами, полученными от одного производителя, помещали в равных объемах в три аппарата Вейса для обесклеивания. В первом аппарате обесклеивание икры производили традиционным для данного хозяйства способом - цельным молоком - из расчета 0,5 л молока на 8 л воды. Эмбрионы и личинки в данном аппарате составили 1-юконтрольную группу. Во втором аппарате, в качестве обесклеивающего раствора вместо молока использовали 1%-й масляный раствор антиоксиданта «Тиофан» из расчета 0,5 л данного раствора на 8 л воды (опытная группа). В третьем аппарате для обесклеивания оплодотворенной икры применяли растительное масло в объеме 0,5 л на 8 л воды (2-я контрольная группа). Дальнейшую инкубацию икры проводили в аппаратах Вейса в проточной воде при температуре 21-24°С в течение 4-х суток. Все исследования были проведены в 10 повторах.

Особенности развития эмбрионов карпа всех исследуемых групп оценивали в проходящем свете на живой икре с использованием комплекса оптико-структурного анализа «Olimpus BBS-№2».Морфологический анализ предличинок, личинок и мальков осуществляли согласно схеме И. Ф.Правдина (1966). Измерения производили при помощи электронной линейки-штангенциркуля с точностью до 0,01 мм. Исследуемые параметры включали общую и стандартную длину тела, длину туловища, высоту и толщину тела, длину головы, диаметр глаза, диаметр желточного мешка.

Исследование опытных и контрольных образцов проводили на базе лаборатории морфологии НИИ химии антиоксидантов федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Новосибирский государственный педагогический университет» (ФГБОУ ВПО «НГПУ»),

Ультраструктурный анализ икры был выполнен на базе Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН с использованием электронного микроскопа JEM-1400 фирмы «Jeol» (Япония).

Морфогистохимические исследования икры и эмбрионов проводили на гистологических срезах. Локализацию Са2+ в икре карпа определяли по Крэттену (Б. Ромейс, 1954).

Жирнокислотный состав икры определяли на базе аккредитованного испытательного аналитического центра Новосибирского института органической химии им. Н. Н. Ворожцова СО РАН методом хроматографического анализа в газовом и жидкостном хроматографах фирмы «Agilent» в соответствии с ГОСТ 30418-96, ГОСТ Р 51483-99, Р 4.1.1672-03.

Определение содержания биогенных элементов (кальций, калий и натрий) в гомогенатах икры производили на базе аналитического центра ФГБОУ ВГТО «Ы НУ» методом атомно-эмиссионного анализа с индуктивно связанной плазмой (МУК 4.1.1482-03).

Интенсивность процессов свободнорадикального перекисного окисления липидов (СПОЛ) в гомогенатах икры и эмбрионов оценивали по содержанию продуктов СПОЛ - малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК) (И. Д. Стальная, 1977; М. И. Душкин, 1998). Функциональное состояние системы антиоксидантной защиты (АОЗ) оценивали по показателям активности каталазы (КАТ) (М. А. Королюк и др. 1988; Н. Aebi, 1984) и содержания каротиноидов (В. И. Лапин и др., 1970; Н. А. Плохинский, 1970; В. Н. Davies, 1965, 1976; F. N. Foppen 1971).

Физиологические показатели предличинок и личинок рыб породы алтайский зеркальный карп оценивали по количеству поглощенного ими кислорода за 1 час согласно методике Винклера, основанной на способности гидроксида марганца в щелочной среде взаимодействовать с растворенным в воде кислородом (А. Л. Лобачев и др. 2006; В. В. Кузьмина, 2007).

Измерение морфометрических характеристик проводили с помощью комплекса программ AxioVision (Carl Zeiss, Германия). Статистическую обработку данных проводили на основе вычисления средних арифметических (х) и их ошибок (Sx). Различия показателей оценивали методом вариационной статистики по /-критерию Стьюдента и считали достоверным при р < 0,05. Все расчёты проводили по общепринятым формулам (Г. Ф. Лакин, 1980) с использованием пакета программ Microsoft Excel 2010.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Сравнительная характеристика процессов липопероксидации и активности системы антиоксидантной защиты у эмбрионов алтайского зеркального карпа при традиционной технологии аквакультуры и использовании антиоксиданта «Тиофан»

Для уточнения роли активных кислородных метаболитов (АКМ) в процессах эмбрионального развития карпа на ранних этапах онтогенеза было использовано два подхода. Первый заключался в получении икры от самок на воздухе в соответствии с протоколом технологии традиционной аквакультуры. Второй моделировал процесс естественного нереста рыб, и получение икры от самок производили в воде с последующей ex temporo её консервацией путем замораживания. Результаты биохимического анализа неоплодотворенной икры, полученной от производителей на воздухе, показали, что содержание первичных продуктов СПОЛ - ДК статистически достоверно превышает данный показатель аналогичных образцов икры, полученных от производителей в воде на 29,11% (рис. 1 А). Изменений в значениях МДА между икрой двух исследуемых групп не обнаружено (рис. 1 Б).

0,006

|| а си

1,5ч 2,2 ч 7ч 10ч 20ч 30ч Юч 50ч 70 ч

Время инкубации икры

1ч 1,5ч 2,2ч 7ч 10ч 20ч 30ч 10ч 50 ч 70ч

Время инкубации икры

Рис.1. Изменение содержания продуктов свободнорадикального перекисного окисления липидов в икре и эмбрионах рыб породы алтайский зеркальный карп: А— ДК; Б - МДА.

Примечания:

1. На рис. 1 — достоверное различие между показателями контрольной и опытной групп (*р<0,05, **р<0,01).

1. На рис. 1 □ икра, полученная от самки в воде; □ неоплодотворенная икра; СИ оплодотворенная икра; □ опытная группа; 13 контрольная группа.

20 ч 30 ч 40 ч 50 ч 70 ч

Время инкубации икры

Рис. 2. Исследование активности каталазы на ранних этапах эмбрионального развития зеркального карпа. 1Д

40мин 1,5 ч 2,2 ч 7 ч 10 ч 20 ч 30 ч 40 ч 50 ч

Времн инкубации икры

Рис. 3. Изменение содержания свободной фракции каротиноидов в икре зеркального карпа 1-й контрольной и опытной групп в динамике эмбрионально-личиночного развития.

Примечания:

1. На рис. 2, 3 - достоверное различие между показателями контрольной и опытной групп {*р<0,05, **р<0,01, *** р<0,001).

2. На рис. 2, ЗП икра, полученная от самки в водСИ неоплодотворенная икра;Е1 оплодотворенная икра; □ опытная группа; 0 контрольная группа.

При этом активность КАТ в образцах икры, полученных от самок в воде, была достоверно ниже на 30,72%, чем в образцах, полученных от производителей на воздухе (рис. 3). Исследование содержания полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в икре карпа позволило установить, что при статистически достоверном повышении уровня СПОЛ в икре, полученной от самок на воздухе, в данных образцах регистрируется снижение содержания докозапентаеновой и докозадиеновой кислот, имеющих в составе две двойных связи и более, на 27,3% и на 42,9% по сравнению с образцами икры, полученными от самки в воде. Данные результаты позволяют считать, что в условиях традиционной технологии аквакультуры отбор половых продуктов от самок на воздухе является фактором, запускающим СПОЛ в яйце. Увеличение активности КАТ можно рассматривать как адаптивную реакцию в икре на повышение СПОЛ, направленную на защиту молекул органических соединений яйца от АКМ, что уже с первых этапов технологического процесса аквакультуры вызывает напряжение уровня метаболизма в яйце. Следовательно, при традиционной технологии аквакультуры получение икры на воздухе приводит к повышению окисления, прежде всего ПНЖК, являющихся необходимым материалом для формирования мембранных структур клеток эмбрионов. При этом увеличение активности КАТ не гарантирует адекватную антирадикальную защиту трофического материала желтка. В условиях цепной реакции СПОЛ и недостаточной активности КАТ повышенное окисление жирных кислот (ЖК) может привести к их «холостому» расходованию, а не к обеспечению морфогенетических процессов. Возможность управления процессами СПОЛ в яйце на ранних этапах онтогенеза оценивалась при использовании антиоксиданта «Тиофан» в процессе обесклеивания икры.

Сравнительное исследование содержания продуктов СПОЛ - ДК и МДА в икре карпа при введении в состав обесклеивающего раствора антиоксиданта «Тиофан» и традиционной технологий обесклеивания икры показало, что в период от 40 минут и до 7 часов эмбрионального развития в икре всех исследуемых групп происходит возрастание уровня первичных продуктов СПОЛ - ДК, а уровень вторичных продуктов - МДА достоверно не изменяется (рис. 1 А, Б). При этом на сроках 1 и 7 часов эмбрионального развития отмечается достоверное превышение уровня ДК в образцах икры опытной группы по сравнению с 1-й контрольной на 31,63% и 15,78% соответственно. Важно отметить, что в интервале 40 минут - 7 часов развития активность КАТ в опыте достоверно превышала соответствующие значения контрольных образцов на 23,09%, 28,97%, 57,07% соответственно (рис. 2). Выявленная динамика повышения уровня СПОЛ является следствием окисления субстратов яйца и может объясняться необходимостью интенсивного расходования трофического материала желтка, в том числе липидов, на обеспечение как морфогенетических процессов, так и их «холостого» расходования при недостаточной активности антиоксидантной системы (АОС) эмбрионов.

Сравнительный анализ содержания продуктов СПОЛ в опытных и контрольных образцах икры показал, что на сроках 40 минут и 10 часов эмбрионального развития в группе с использованием для обесклеивания икры антиоксиданта «Тиофан» содержание ДК снижается на 62,6% и на 30% соответственно в аналогичные промежутки времени по сравнению с контролем (рис. 1 А). При этом значения МДА в опыте и контролях не имеют различий (рис. 1 Б). Активность КАТ на данном сроке отбора проб в гомогенатах икры 1-й контрольной группы статистически достоверно ниже на 18,42% и 64,12% по сравнению с опытными образцами в соответствующие временные интервалы (рис. 2). Повышение уровня СПОЛ и снижение активности КАТ в гомогенатах икры 1-й контрольной группы на сроке 40 минут и 10 часов эмбриогенеза карпа указывают на развитие окислительного стресса (ОС).

Исследование содержания ПНЖК в икре на сроке 40 минут развития позволило установить, что в опытных образцах происходит статистически достоверное снижение содержания линолевой (со-6), арахидоновой (со-6), эйкозапентаеновой (<о-3), докозатетраеновой (ш-6), докозагексаеновой (со-6), ЖК по сравнению с контрольными образцами на 54,76%; 50,9%; 41,6%; 66,36%; 51,2% соответственно. Данная точка отбора проб совпадает с первым критическим периодом эмбрионального развития рыб. Возможность витального наблюдения доступных структур у эмбрионов в проходящем свете, а именно количества или морфологии бластомеров, на данном сроке позволяет определить использование продуктов СПОЛ в реализации морфогенетических процессов или их деградацию вследствие свободнорадикального окисления и депрессии системы АОЗ.

Превышение уровня СПОЛ в интервале от 40 минут до 70 часов эмбрионального развития карпа при обеспечении достоверно высокого уровня активности КАТ в образцах икры опытной группы по сравнению с 1-й контрольной группой предполагает более интенсивное течение метаболических процессов а, следовательно, и темпов морфогенеза в опытной группе. Пики приходятся на 1-й и 7-й часы эмбрионального развития, Однако доказательство или опровержение выдвинутого предположения требует проведения морфологического анализа. Отсутствие в указанный интервал времени различий между опытными и контрольными образцами в содержании одного из важных показателей СПОЛ - вторичного продукта - МДА, можно объяснить ограничением свободнорадикальных процессов за счет реализации механизмов АОЗ, сформированных в яйце в процессе оогенеза. Типичными представителями естественных АОС являются каротиноиды, которые содержатся в икре всех видов рыб.

Результаты сравнительного биохимического анализа количественного содержания каротиноидов в икре всех исследуемых групп показали, что в соответствующих образцах 1-й контрольной группы по сравнению с опытной в течение первых 20 часов эмбрионального развития происходит динамичное повышение количества свободной от связи с белком фракции каротиноидов (рис. 3). Можно считать, что увеличение в исследуемых образцах икры 1-й

контрольной группы по сравнению с опытной уровня свободной от белков фракции каротиноидов на стадиях дробления, гаструляции и органогенеза связаны с необходимостью их адаптивного участия в инактивации АКМ. Важно отметить, что на сроке 30 часов инкубации повышение уровня вторичного продукта СПОЛ - МДА в образцах икры 1-й контрольной группы по сравнению с опытной на 15,6% (рис. 1 Б) совпадает со снижением активности КАТ на 44,87% (рис. 2) и содержания каротиноидов в контроле по сравнению с опытом на 39,53% соответственно (рис. 3). Можно полагать, что срок 30 часов эмбрионального развития является одним из важных временных промежутков эмбриогенеза, характеризующихся высоким уровнем окислительных процессов, в течение которого требуется повышение активности АОС.

Схожая закономерность в отношении повышения уровня СПОЛ и снижения активности КАТ отмечается на сроке 40 часов инкубации икры. Содержание МДА в контрольных образцах икры превышает данный показатель в икре опытной группы на 15,82% (рис. 1 Б), а активность КАТ в 1-й контрольной группе статистически достоверно ниже, чем в опытных образцах на 61,3% (рис. 2). При этом превышение содержания свободных от связей с белком каротиноидов, которые обладают в том числе и АО активностью, в икре 1-й контрольной группы на 58,14% (рис. 3) по сравнению с опытной группой не обеспечивает снижения содержания вторичных продуктов - МДА в исследуемых образцах икры 1-й контрольной группы. Это позволяет сделать заключение о том, что введение антиоксиданта «Тиофан» в составе обесклеивающей эмульсии обеспечивает выполнение им своих специфических антиоксидантных функций и обеспечивает экономный режим расходования собственных антиоксидантных соединений - каротиноидов.

3.2. Сравнительная морфофункциональная характеристика эмбрионов и предличинок алтайского зеркального карпа при традиционной технологии аквакультуры и использовании антиоксиданта «Тиофан»

При исследовании икры зеркального карпа в проходящем свете установлено, что в соответствующих образцах 1-й контрольной группы через 40 минут после оплодотворения отмечается перемещение ооплазматического материала в направлении к анимальному полюсу желтка и начинается формирования плазматического бугорка. В опытной группе, где в составе обесклеивающего раствора вводили антиоксидант «Тиофан», на анимальном полюсе желтка идентифицируется четко оформленный плазматический бугорок и первая борозда дробления.

Согласно данным морфометрического анализа диаметр икры и ширина перивителлинового пространства в образцах яиц контрольных и опытной групп через 40 минут после оплодотворения имели статистически достоверные различия (табл. 1). В группе с использованием традиционной технологии аквакультуры исследуемые показатели превышали соответствующие значения опытной группы на 6,53% и 32,6% соответственно.

Таблица 1

Морфометрическая характеристика икры зеркального карпа _через 40 минут после оплодотворения_

Группа Диаметр икры, мкм Диаметр желтка, мкм Высота бластодиска, мкм Ширина перивителлинового пространства, мкм

1-я контрольная 1850,97*19,6*** 1307,99±37,6 183,92±15,7 220,94±19,9*

опытная 1730,14±11,9 1327,88±3б,8 163,36±36,2 148,28±26,08

Различия между показателями контрольной и опытной групп достоверны (*р<0,05; ***р<0,001).

На электронограммах образцов икры 1-й контрольной группы отчетливо заметно, что оболочка яйца состоит из трех слоев - наружного, среднего и внутреннего. Наружный слой оболочки толщиной 0,67±0,14 мкм на поверхности покрыт слоем фибриллярных структур, среди которых идентифицируются интенсивно осмиофильные частицы округлой формы размером 93±2,8 нм. Средний слой толщиной 0,16±0,03 мкм имеет более высокую электронную плотность по сравнению с наружным и внутренним слоями, образован близко расположенными гранулярными структурами размерами менее 20 нм. На ультратонких срезах заметно, что внутренний слой имеет толщину 4,51 ±0,7 мкм и представлен радиально расположенными по отношению к поверхности яйца пластинчатыми структурами. Их количество в среднем составляет 12-14, и размеры в продольном сечении соответствуют 0,46±0,06 мкм. Оболочка икры в плоскости, перпендикулярной поверхности яйца, пронизана каналами, полость которых имеет диаметр 0,8±0,12 мкм. Наружный слой оболочки яйца в области расположения канала образует выступы, между которыми располагается структура округлой формы, изолирующая полость канала от окружающей среды. Морфология канала в области внутреннего слоя оболочки позволяет считать, что его полость сообщается с перивителлиновым пространством.

На светооптическом уровне ширина перивителлинового пространства определяется как расстояние между поверхностью желтка и оболочкой яйца. Вместе с тем данные электронной микроскопии показали, что результаты морфометрических исследований, полученные при анализе образцов икры контрольной группы в проходящем свете, не соответствуют результатам ультраструктурного анализа. Заполненное водой пространство, которое располагается между желтком и оболочкой икры, представляет собой на уровне ультраструктуры участок цитоплазмы анимального полюса яйца, с признаками ярко выраженного нарушения водно-ионного гомеостаза. При этом видимая в проходящем свете полость перивителлинового пространства представляет собой обводненный участок клетки со смещенной плазматической мембраной яйца прямо к внутренней оболочке икры. В связи с чем ширина перивителлинового пространства оказывается достоверно меньше, чем значение, полученное при изучении препаратов в проходящем свете. Это

позволяет считать, что в контрольных образцах глубокие изменения водно-электролитного баланса в яйце приводят к набуханию цитоплазмы, а не увеличению перивителлинового пространства.

Для образцов икры опытной группы типичным признаком является наличие хорошо выраженного перивителлинового пространства, отделяющего цитоплазму от оболочек яйца. Среди фибриллярных компонентов, прилежащих к наружному слою оболочки, идентифицируется обилие мелких интенсивно осмиофильных частиц округлой формы размером 10-30 нм. На электроннограммах содержимое перивителлинового пространства и каналов оболочки заполнено гранулярным (20 нм) и фибриллярным материалом. В отличие от контрольных образцов каналы снаружи прикрыты не глобулярными структурами, а структурами полигональной формы. В цитоплазме яиц опытной группы обнаруживается обилие свободных рибосом и полисом, а также наличие многочисленных мембранных структур и отсутствие признаков нарушения водно-ионного гомеостаза. Эндоплазматическая сеть (ЭПС) представлена узкими каналами и расширенными цистернами, содержащими вещество умеренной электронной плотности. Характерным признаком образцов опытной группы является отсутствие признаков нарушения водно-ионного гомеостаза.

Наличие признаков нарушения водно-ионного гомеостаза в цитоплазме яиц 1-й контрольной группы послужило основанием для изучения в образцах икры исследуемых групп особенностей распределения наиболее важных катионов, участвующих в поддержании ионного гомеостаза клетки (табл. 2).

Таблица 2

Содержание биогенных катионов в икре карпа

через 40 минут после оплодотворения_

Группа Массовая доля, мг/кг

Кальций Натрий Калий

Опыт 57,2±6,32* 408±10,25** 735±22,12*

Контроль 105,8±21,43 505±18,16 924±23,33

Различия между показателями контрольной и опытной групп достоверны (*р<0,05; **р<0,01).

При анализе содержания основных катионов, участвующих в регуляции водно-ионного гомеостаза, было установлено, что между опытными и контрольными образами существует различие в содержании натрия и калия на 19,21% и 20,45% соответственно (табл. 2). При отсутствии в литературных источниках сведений о содержании натрия и калия в икре при идеальных условиях полученные результаты в совокупности с данными ультраструктурного анализа позволяют считать, что в икре опытной группы по сравнению с контролем происходит нарушение работы Ыа/К АТФ-азы. Считается, что именно с её работой связано поддержание водно-ионного гомеостаза (В. Т. СЬиа, 2000; Л. А. Бондарева, 2002, 2006).

Исследования содержания кальция в образцах икры контрольной и опытной группы также обнаружили достоверные различия. В образцах икры опытной группы содержание кальция превышало аналогичное значение контрольных образцов на 45,93% (табл. 2). Как известно, повышение концентрации данного катиона в цитоплазме является сигналом для запуска Са -зависимых протеолитических систем, обеспечивающих деградацию цитоплазматических белков, в том числе участвующих в реализации программы эмбрионального развития (К Suzuki et. al., 1988; JI. А. Бондарева, 2006). Однозначно ответить на вопрос, чем объясняется повышенное содержание кальция в икре опытной группы, представляется достаточно сложным. С нашей точки зрения, источником повышенного содержания кальция в яйце может являться его усиленный транспорт через поврежденную плазматическую мембрану из внешней среды. На данный механизм косвенно может указывать его избыточная локализация в примембранном слое цитоплазмы и каналах оболочки икры опытной группы, выявленная нами в результате исследований с использованием гистохимической реакции на кальций по Крэттену. Избыточная локализация кальция в указанных компартментах яйца также может быть связана с повреждением мембран гладкой ЭПС и митохондрий, которые являются основными депо данного катиона.

В соответствии с классическими представлениями патоморфологии выявленные морфологические признаки повреждения икры карпа 1-й контрольной группы могут быть связаны с реализацией свободнорадикального (CP) механизма повреждения. Наличие в составе молекулы Na*K АТФ-азы сульфгидрильных групп, а также ПНЖК в составе билипидного слоя плазматической мембраны определяет их в качестве главных молекулярных мишеней для АКМ (А. Р. Исуев, 1990; J. A. Killian et. al., 2001). Можно полагать, что именно повреждение Na/K АТФ-азы является следствием регистрируемого на уровне ультраструктуры нарушения водно-ионного гомеостаза в яйце. Как известно, работа Na/K АТФ-азы, а также синтез КАТ являются энергозависимыми процессами. В соответствии с единством структуры и функции, имеющиеся признаки повреждения митохондрий, в частности расширение межмембранного пространства и снижение электронной плотности матрикса митохондрий в контрольных образцах, указывают на повреждение митохондрий и как следствие снижение синтеза АТФ (В. П. Скулачев, 2001; Н. С. Lee et. al., 2007). С нашей точки зрения, снижение содержания КАТ в контроле по сравнению с опытом объясняется нарушением структуры и функции системы энергообеспечения клетки.

Безусловно, что на повышение уровня СПОЛ клетка должна реагировать адекватным синтезом АО соединений. В научной литературе отмечено, что система АОЗ в период бластулогенеза является несовершенной и может обеспечиваться за счет синтеза белков по мРНК, запасенных в яйце в процессе оогенеза (3. С. Кауфман, 1990; С. Гилберт, 1993). При анализе ультраструктуры яиц 1-й контрольной группы установлено, что на анимальном полюсе

цитоплазматический матрикс характеризуется более низкой электронной плотностью по сравнению с аналогичной структурой вегетативного полюса. Преобладание в цитоплазме икры 1-й контрольной группы свободных рибосом по сравнению с опытной группой связано с синтезом немембранных белков, поступающих в пероксисомы, ключевым ферментом которых является пероксидаза и КАТ (А. Е. Дрошнев и др., 2007; Е. Б. Меньшикова и др., 2006). В связи с тем, что процесс адаптации является многокомпонентным, в условиях перенапряжения или депрессии одного из звеньев данного процесса обеспечение приспособительных реакций должно развиваться по альтернативному механизму. Увеличение свободной от связи с белками фракции каротиноидов в исследуемых образцах икры 1-й контрольной группы, с нашей точки зрения, является альтернативным механизмом АОЗ в условиях снижения активности КАТ. В соответствии с результатами работы содержание каротиноидов в контроле превышало значения опытных образцов.

Икра зеркального карпа в образцах икры 1-й контрольной группы через 1,5 часа после оплодотворения находилась на стадии четырех бластомеров, а в образцах опытной группы - на стадии восьми бластомеров. При этом во всех исследуемых образцах бластомеры были одинакового размера, формы и не имели видимых морфологических признаков нарушения строения.

Через 2 часа 20 минут после оплодотворения интенсивность бластулогенеза в 1-й контрольной и опытной группах имела ярко выраженные различия. В икре 1-й контрольной группы в структуре бластодиска четко идентифицируются крупные бластомеры, их характерным признаком являлось появление бластомеров разного размера. Содержание икры с неоднородными бластомерами составляло 15,7% от общего количества икры (табл. 3).

Таблица 3

Рыбоводные качества икры зеркального карпа_

Показатель Группа

1 -я контрольная 2-я контрольная опытная

Икра с неоднородными бластомерами, % 15,7±1,65 16,08±1,24 3±0,73***

Выживаемость эмбрионов через 7 часов после оплодотворения, % 84,5±3,05 83,7±2,08 97±4,73*

Выживаемость эмбрионов через 30 часов после оплодотворения, % 74±2,05 75,6±1,98 85,5±3,73**

Общий выход предличинки из икры, % 61,95±4,85 62,35±3,92 74,1 ±2,73*

Различия между показателями опытной и контрольных групп достоверны (* р < 0,005; ** р < 0,01; *** р < 0,001)

В связи с тем, что антиоксидант «Тиофан» является жирорастворимым, для осуществления адресной доставки данного антиоксиданта в икру использовался

масляный раствор. Это явилось основанием для создания 2-ой контрольной группы, где в качестве обесклеивающего раствора вводили масляную эмульсию без содержания антиоксиданта «Тиофан». Результаты сравнительного морфологического анализа показали, что существенных различий между икрой, обработанной молоком и маслом (1-я контрольная и 2-я контрольная группы), не обнаружено (табл. 3). Можно предположить, что высокая интенсивность эмбрионального развития рыб, икра которых обработана масляньм раствором антиоксиданта «Тиофан», обусловлена влиянием данного антиоксиданта на интенсивность процессов бластулогенеза. Таким образом, дальнейшее рассмотрение икры, обесклеенной раствором масляной эмульсии, явилось нецелесообразным.

Согласно результатам исследования в икре 1-й контрольной и опытной групп через 10 часов после оплодотворения регистрируются четкие различия в темпах роста и развития. В группе с применением традиционной технологии обесклеивания на нативных препаратах в указанный срок развития заметна стадия мелкоклеточной морулы и начало обрастания желтка клетками бластодермы. В опытной группе в аналогичный промежуток времени завершался этап эпиболии, в результате которого образовалась желточная пробка, и началось утолщение головного и хвостового отделов эмбриона.

Через 20 часов образцы икры контрольных и опытной групп находились на этапе органогенеза. В образцах икры всех исследуемых групп четко идентифицируется закладка тела эмбриона. Отличием является то, что в группе с применением антиоксиданта «Тиофан» регистрируется появление головного и хвостового отделов эмбриона, заметны признаки начала формирования мозговых пузырей, глазных бокалов и первичной сегментации мускулатуры.

В икре всех исследуемых групп на сроке 30 часов развития происходило завершение этапа органогенеза, характеризующееся обособлением хвостового отдела эмбриона и ростом в длину зачатка кишечной трубки. Характерной особенностью эмбрионов опытной группы явилось появление хрусталиков в глазных бокалах, закладка зачатков слуховых плакод и обособление хвостового отдела эмбриона от желточного мешка. В контрольных образцах регистрируется лишь начало обособления хвостового отдела от желточного мешка. Данные морфометрического анализа показали, что площадь желтка в икре 1-й контрольной группы на этапе органогенеза на 9,37% была достоверно меньше, чем в опытной группе. Данная закономерность на уровне ультраструктуры впервые регистрировалась на сроке 40 минут развития и, как показывают морфологические исследования, сохраняется на всех исследуемых этапах эмбриогенеза зеркального карпа. Полученные результаты позволяют считать, что деградация желтка в опыте имеет менее выраженные признаки по сравнению с контролем.

Сравнительное изучение двигательной активности эмбрионов зеркального карпа на сроке 30 часов показало, что количество движений эмбрионов в икре опытной группы составляло 15±1,49 раз в минуту, а в икре 1-й контрольной -10±1,24, и эти значения имели достоверные различия. Следует отметить, что в

данный временной интервал сохранялась выявленная на более ранних сроках развития закономерность в отношении выживаемости эмбрионов карпа. Данный показатель на 11,57% превышал соответствующий показатель эмбрионов контрольной группы (табл.3).

При исследовании эмбрионов в проходящем свете через 50 часов после оплодотворения различия между 1-й контрольной и опытной группами нивелируются или используемыми в работе методами не определяются. Вместе с тем исследование морфометрических и физиологических характеристик карпа после выклева позволяет считать, что обнаруженное на ранних стадиях эмбриогенеза опережение темпов роста и развития сохраняется у предличинок. Это утверждение доказывается при анализе сроков выклева. В опытной группе выход единичных предличинок из икры наступал на 3 часа раньше, чем в контрольной. Массовый выклев на 5 часов опережал группу контроля. При этом общий выход предличинок из икры в группе с использованием новой технологии обесклеивания на 12,15% превышал соответствующий показатель в контрольной группе (табл.3).

При исследовании интенсивности дыхания у эмбрионов рыб алтайского зеркального карпа опытной группы потребление кислорода на 26,09% ниже, чем в 1-й контрольной группе (табл. 4).

Таблица 4

Коэффициент потребления кислорода у рыб породы алтайский зеркальный карп в

эмбриональный период развития (Мг 02/л)

Группа Эмбрионы на стадии органогенеза Предличинки (1-3 сутки после выклева) Личинки (4-6 сутки после выклева)

Опытная 1,7±0,11* 1,7±0,16* 1,1±0,18*

Контрольная 2,3±0,13 2,3±0,1 2,3±0,26

* Достоверныеразличия опытной группы относительно контрольной р< 0,05

3.3. Влияние антиоксиданта «Тиофан» на особенности постэмбирионального развития рыб породы алтайский зеркальный карп

Данные морфометрического анализа показали, что в 1-е, 2-е и 3-й сутки после выклева между предличинками 1-й контрольной и опытной групп выявлены различия в размерах провизорного органа (желточного мешка) и общей длины тела. Диаметр желточного мешка является одним из важных показателей благополучия особи при переходе на автономное существование. Считается, что изменение его морфометрических параметров связано с расходованием пластического материала на увеличение линейных размеров. При анализе данного показателя у свободных эмбрионов карпа 1-й контрольной и опытной групп в 1-е сутки после выклева обнаруживается противоречие с известными представлениями. Так, у 1-суточных свободных эмбрионов 1-й контрольной группы при меньшей площади желточного мешка на 11,34%по сравнению с эмбрионами опытной группы длина тела не имела различий (табл. 5). С нашей точки зрения, данное противоречие можно объяснить

повышенным расходованием пластических материалов желтка не на рост и развитие, а на окисление трофических компонентов желтка в результате усиления СПОЛ. Наличие в составе желтка икры ПНЖК в условиях повышения окислительных процессов и депрессии антиоксидантной системы приводит к их свободнорадикальному окислению, что, по сути, исключает ПНЖК из общего метаболизма и приводит к «холостому» расходованию. Лишь на 2-е и 3-й сутки постэмбрионального развития у предличинок опытной группы происходит снижение диаметра желточного мешка на 7,45% и 14,64% соответственно и увеличение линейных размеров на 5,44% и 4,78% по сравнению с 1-й контрольной группой, что не противоречит существующим положениям биологии развития (табл. 5).

Таблш(а 5

Морфометрические показатели предличинки карпа 1-й контрольной и опытной групп в первые дни после выклева (мм)_

Показатель 1 -е сутки после выклева 2-е сутки после выклева 3-й сутки после выклева

контроль опыт контроль опыт контроль опыт

длина тела 5,845±0,11 5,966±0,1 6,586±0,09* 6,965±0,12 9,498±0,13* 9,975±0,17

длина головы 1,527±0,05 1,576±0,04 1,565±0,09 1,560±0,05 2,107±0,09 2,143±0,14

высота головы 1,018±0,02* 1,123±0,04 1,083±0,03* 1,247±0,07 1,413±0,08 1,606±0,06

диаметр глаза 0,395±0,02* 0,487±0,03 0,483±0,02 0,494±0,03 0,624±0,05 0,637±0,15

диаметр желточного мешка 1,134±0,06* 1,279±0,04 1,127±0,02* 1,043±0,03 1,045±0,03* 0,892±0,0б

* Достоверные различия опытной группы относительно контрольной р<0,05.

Преобладание не только роста, но и развития у предличинок и личинок опытной группы по сравнению с 1-й контрольной прослеживается при анализе интенсивности дыхания (табл. 4). Согласно данным таблицы 4 коэффициент потребления кислорода в 1-й контрольной группе на 29,06% и на 52,17% соответственно превышает аналогичные показатели опытной группы.

В соответствии с классическими представлениями эмбриологии рыб увеличение дыхания связывается с повышением общего метаболизма за счет расходования трофического материала желтка и направлено на обеспечение темпов роста и развития (А. П. Макеева, 1992; Л. В. Белоусов, 2005). Можно считать, что в условиях повышенного уровня СПОЛ уменьшение ресурсов желточного мешка в образцах рыб 1-й контрольной группы в 1-е сутки после выклева сопряжено с интенсивным расходованием кислорода в процессе СПОЛ. У рыб опытной группы рациональное расходование органических веществ желтка в течение 1-3 суток постэмбрионального развития сочеталось с более высокими темпами роста и стабильно низким уровнем потребления кислорода по сравнению с контролем. Полученные результаты позволяют считать, что применение нового метода обесклеивания икры с использованием

антиоксиданта «Тиофан» ограничивает развитие цепных свободнорадикальных процессов в яйце и способствует рациональному использованию трофического материала желтка на рост и развитие эмбрионов.

Однократное применение метода свободнорадикальной защиты эмбрионов карпа в период обесклеивания икры и полученные преимущества в росте и развитии рыб опытной группы сохраняются в течение малькового и ювенильного периодов их развития. По данным морфометрического анализа, проведенного в возрасте 3-х недель, особи опытной группы по экстерьерным показателям превосходили мальков 1-й контрольной группы по массе тела на 66,7%, общей длине и длине тела на 29,06 % и на 26,8% соответственно, а также по обхвату тела наЗ 1,52% (табл. 6)

Таблица 6

Морфометрические показатели мальков карпа контрольной и опытной групп в возрасте трех недель_

Показатель Опыт Контроль

Масса тела, г 0,162±0,049* 0,054±0,014

Общая длина тела, мм 22,2±2,2** 15,75±1,03

Длина тела, мм 17,7±1,77* 12,95±0,72

Высота тела, мм 5,9±1,1 3,75±0,49

Толщина тела, мм 3,35±0,4 2,45±0,5

Обхват тела, мм 16,5±1,6* 11,3±1,34

Различия между показателями контрольной и опытной групп достоверны (*р<0,05; **р<0,01).

Несмотря на незначительные превышения морфометрических показателей у эмбрионов, личинок и мальков опытной группы по сравнению с контрольной группой, разработанный новый метод обесклеивания оплодотворенной икры с применением антиоксиданта «Тиофан» дает основание считать, что блокирование СПОЛ на ранних этапах онтогенеза защищает клетки тканей и органов карпа от АКМ, что определяет преимущества в росте и развитии рыб на старте. При исследовании массы тела сеголетков карпа и линейных размеров рыбы опытной группы в течение первых 5 месяцев жизни по данным показателям превышали аналогичные показатели рыб 1-й контрольной группы на 82,7% и 38,2% соответственно.

ВЫВОДЫ

1. Получение половых продуктов от производителей и оплодотворение икры на воздухе при традиционной технологии аквакультуры вызывает повышение липопероксидации в яйце карпа, напряжение системы антиоксидантной защиты и развитие окислительного стресса на сроках 40 минут и 10 часов эмбриогенеза.

2. Новый метод обесклеивания икры с использованием антиоксиданта «Тиофан» обеспечивает снижение уровня липопероксидации в икре и снижение эмбриональной смертности по сравнению с традиционной технологией аквакультуры.

3. Использование антиоксиданта «Тиофан» в процессе обесклеивания икры по сравнению с традиционной технологией аквакультуры обеспечивает преимущество в темпах роста и развития эмбрионов на этапах бластулогенеза, гаструляции, органогенеза и личинок при переходе на внешнее питание.

4. Мальки и сеголетки алтайского зеркального карпа, полученные при использовании антиоксиданта «Тиофан», по массе тела и линейным размерам достоверно превосходят рыб, выращенных при традиционной технологии аквакультуры в аналогичные периоды постэмбрионального развития.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для снижения эмбриональной смертности и увеличения темпов роста молоди рыб породы алтайский зеркальный карп предлагается использование методов антирадикальной защиты при разведении карпа в условиях аквакультуры.

2. Синергическое сочетание антирадикальной активности фенольных фрагментов с противопероксидным действием сульфидной группы антиоксиданта «Тиофан» позволяет рекомендовать его в качестве эффективного средства противорадикальной защиты рыб при их разведении в аквакультуре.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

В журналах, рекомендованных ВАК РФ:

1. Кеберлайн О. В. Влияние различных технологий обесклеивания икры на интенсивность зародышевого развития зеркального карпа в условиях промышленной технологии / О. В. Кеберлайн, М. А. Обогрелова, А. В. Сахаров, А. А. Макеев, И. В. Морузи, Е. В. Пищенко, А. Е. Просенко, С. Н. Луканина // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - Новосибирск, 2010 -№ 3 - С. 63-70.

2. Кеберлайн О. В. Инновационная технология управления процессами свободнорадикальной защиты рыб на ранних этапах онтогенеза / О. В. Кеберлайн, А. В. Сахаров, А. А. Макеев, А. Е. Просенко, Ю. В. Сафьянов //Вестник КрасГАУ.-Красноярск, 2012.-Вып. 9.-С. 112-117.

3. Кеберлайн О. В. Роль каротиноидов в механизмах адаптации эмбрионов зеркального карпа к технологическим нагрузкам при разведении в аквакультуре / О. В. Кеберлайн, А. В. Сахаров, А. А. Макеев, А. Е. Просенко // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 6; URL: www.science-education.ru/106-7328 (дата обращения: 07.11.2012).

4. Макеев А. А. Влияние антиоксиданта тиофана на процессы пероксидации в кишечнике рыб при экспериментальной гипоксии / А. А. Макеев, А. В. Сахаров, М.А. Обогрелова, О. В. Кеберлайн, А. Е. Просенко // Вестник новосибирского государственного аграрного университета. - Новосибирск, 2010. - № 3 (15). - С.85-88.

В других изданиях:

5. Кеберлайн О. В. Влияние различных технологий обесклеивания икры на развитие эмбрионов и личинки карпа / О. В. Кеберлайн // «Сборник научных работ студентов и молодых ученых». — Новосибирск: НГПУ, 2009.

6. Кеберлайн О. В. Влияние различных технологий обесклеивания икры на рост и развитие карпа в раннем онтогенезе / О. В. Кеберлайн // Материалы XLVIII международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс». - Новосибирск, 2010. — С. 94.

7. Кеберлайн О. В.Влияние антиоксиданта тиофана на эмбриональное развитие зеркального карпа / О. В. Кеберлайн, A.A. Макеев, A.B. Сахаров, А.Е. Просенко // VI Всероссийская научно-практическая конференция «Проблемы биологической науки и образования в педагогических вузах». - Новосибирск, 2010.-С. 90-93.

8. Кеберлайн О. В. Влияние антиоксиданта тиофана на рост и развитие карпа в раннем онтогенезе / О. В. Кеберлайн //VIII Международная конференция «Биоантиоксидант». -Москва, 2010. -С. 198-200.

9. Кеберлайн О. В. Влияние антиоксиданта тиофана на показатели окислительного стресса в тканях эмбрионов и личинок зеркального карпа / О. В. Кеберлайн // XV Международная экологическая студенческая конференция «Экология России и сопредельных территорий. Новосибирск. — 2010.-С. 198.

10. Кеберлайн О. В. Влияние технологических факторов при искусственном разведении рыб на особенности транспорта катионов в раннем периоде онтогенеза / О. В. Кеберлайн, А. А. Макеев, А. В. Сахаров, А. Е. Просенко, Н. А. Аношина, JI. Н. Букреева // VTI Всероссийская научно-практическая конференция «Проблемы биологической науки и образования в педагогических вузах». - Новосибирск, 2011. - С. 102-105.

Подписано в печать 13.11.12. Формат бумаги 60x84/16. Печать RISO. Уч.-изд.л. 1,5. Усл. п.л. 1,4. Тираж 110 экз. Заказ № 72.

Педуниверситет, 630126, Новосибирск, Вилюйская, 28

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кеберлайн, Ольга Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Периодизация и закономерности индивидуального развития костистых рыб.

1.2. Перспективы и проблемы воспроизводства рыб в условиях аквакультуры.

1.3. Свободнорадикальные процессы организма в норме и при воздействии факторов окружающей среды.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.3. Влияние антиоксиданта «Тиофан» на особенности постэмбрионального развития рыб породы алтайский зеркальный карп.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Влияние активных кислородных метаболитов на эмбриогенез алтайского зеркального карпа"

В условиях сокращения добычи океанической рыбы и снижения биологических ресурсов внутренних водоемов аквакультура остается одним из надежных источников увеличения объемов пищевой продукции [9, 90, 113]. Несмотря на накопленный опыт и достижения в области аквакультуры, современный уровень развития общества требует разработки и внедрения в реальный сектор экономики наукоёмких технологий, направленных на получение жизнеспособной молоди, обладающей высокими темпами роста, устойчивой к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды [5, 88, 128, 129].

Установлено, что изменение оксигенации икры в период инкубации, механические повреждения и другие воздействия являются неотъемлемой частью технологических процессов при искусственном воспроизводстве рыб и приводят к активации неспецифических ответных реакций организма рыб уже на ранних этапах онтогенеза [58, 80]. Высокая чувствительность рыб к действию различных абиотических факторов в период эмбрионально-личиночного развития определяет необходимость исследования механизмов адаптации организма эмбрионов к данным факторам с использованием современных методов биохимии и морфологии. Считается доказанным, что на ранних этапах онтогенеза регуляция неспецифических механизмов адаптации может обеспечиваться за счет накопленных в яйце самок в процессе оогенеза антиоксидантных соединений [123, 126]. Вместе с тем изучение механизмов адаптации рыб к неблагоприятным факторам внешней среды на ранних этапах онтогенеза остается изученными крайне недостаточно [12, 137].

69, 119, 122]. Пигменты представляют наименее изученную группу соединений, участвующих в регуляции процессов дыхания, а также защите клеток тканей эмбрионов от повреждения активными кислородными метаболитами [126]. При этом роль свободнорадикального перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты рыб в реализации летальных и сублетальных повреждений клеток эмбрионов активными кислородными метаболитами остаются изучены крайне недостаточно. Указанное определяет необходимость уточнения роли естественных антиоксидантных соединений яйца рыб в механизмах реализации программы индивидуального развития эмбрионов и личинок карпа.

С точки зрения фундаментальной биологии, исследование механизмов адаптации рыб на ранних этапах онтогенеза к повышению активности свободнорадикальных процессов позволит выявить наиболее чувствительные к их влиянию молекулярные мишени и определить ключевые звенья патогенеза повреждений клеток различных тканей у эмбрионов и личинок рыб.

Изучение влияния активных кислородных метаболитов на особенности развития рыб в ранние периоды онтогенеза явится основой для разработки новых, научно обоснованных методов управления морфогенетическими процессами в организме рыб в условиях аквакультуры. Данный подход представляет интерес для прикладной биологии и позволит приблизиться к решению проблемы увеличения выхода предличинок из икры, оптимизации темпов роста и повышения устойчивости рыб к технологическим нагрузкам.

В этой связи изучение роли активных кислородных метаболитов в механизмах адаптации эмбрионов рыб к абиотическим факторам окружающей среды в динамике эмбрионально-личиночного развития, а также поиск методов управления окислительными процессами в организме рыб с использованием полифункционального серосодержащего антиоксиданта нового поколения «Тиофан» явились основанием для проведения настоящего исследования.

Цель исследования - изучить влияние активных кислородных метаболитов на эмбриогенез алтайского зеркального карпа и возможность управления окислительными процессами в икре антиоксидантом «Тиофан». Задачи исследования:

3. Оцепить показатели роста и развития рыб породы алтайский зеркальный карп в постэмбриональном периоде развития, полученных при традиционной технологии аквакультуры и использовании антиоксиданта «Тиофан» в сравнительном аспекте.

Научная новизна. Впервые исследовано состояние процессов липопероксидации и активность системы антиоксидантной защиты у рыб породы алтайский зеркальный карп в период эмбрионально-личиночного развития. Впервые установлено влияние повышенной оксигенации при оплодотворении икры «сухим» способом на увеличение уровня свободнорадикального перекисного окисления липидов в икре алтайского зеркального карпа. Впервые доказано повреждение клеток эмбрионов рыб на стадиях бластулогенеза, гаструляции и органогенеза активными кислородными метаболитами. Впервые изучено влияние свободнорадикального перекисного окисления липидов на интенсивность расходования трофического материала и каротиноидов в яйце рыб. Впервые выявлена связь между размерами желтка свободных эмбрионов рыб породы алтайский зеркальный карп и их темпами роста при переходе на смешанное питание.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Установлена роль активных кислородных метаболитов в реализации программы индивидуального развития рыб в эмбрионально-личиночный период. Впервые разработан метод управления свободнорадикальными процессами в оплодотворенной икре рыб породы алтайский зеркальный карп в период эмбрионально-личиночного развития антиоксидантом «Тиофан». Внедрение в технологию аквакультуры нового метода обесклеивания оплодотворенной икры с применением антиоксиданта «Тиофан» обеспечивает перераспределение функций организма эмбрионов рыб при резких колебаниях кислородного режима в направлении расходования пластических и энергетических ресурсов на рост и развитие особи. Использование нового метода антирадикальной защиты эмбрионов и личинок рыб позволяет снизить показатели эмбриональной смертности рыб на 12,06% и увеличить интенсивность темпов роста и развития эмбрионов и личинок на 4,79%, мальков рыб на 48,1% и сеголетков карпа на 60,48% по сравнению с контролем. Полученные на старте преимущества в росте и развитии при использовании нового метода аквакультуры сохраняются в течение первого года жизни рыб.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Усиление процессов свободнорадикального перекисного окисления липидов и перенапряжение системы антиоксидантной защиты являются характерными признакоми традиционных технологий аквакультуры, что приводит к повреждению активными кислородными метаболитами клеток эмбрионов в период бластулогенеза, гаструляции и органогенеза.

Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации доложены и обсуждены на XLVIII Международной научной конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск 2010), VI Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы биологической науки и образования в педагогических вузах» (Новосибирск 2010), VIII Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва 2010), XV Международной конференции «Экология России и сопредельных территорий» (Новосибирск 2010), VII Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы биологической науки и образования в педагогических вузах» (Новосибирск 2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 4 - в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Структура и объём работы. Диссертационная работа изложена на 130 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, библиографического списка цитируемой литературы, который включает 275 источников, из них 201 российских и 74 зарубежных авторов и приложения. Работа иллюстрирована 28 рисунками и 7 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Кеберлайн, Ольга Владимировна

выводы

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Кеберлайн, Ольга Владимировна, Новосибирск

1. Азизов, Я. М. Рыбное хозяйство России на рубеже веков / Я. М. Азизов, С. А. Студеницкий, Ю. А. Шиаченков. М.: Госкомрыболовство, 2000.-211 с.

2. Аквакультура России, в период до 2005 года. Федеральная программа. М., 2000. - 83 с.

3. Алексеев, А. П. Мировое рыболовство и аквакультура в конце XX начале XXI веков / А. П. Алексеев // Рыбоводство и рыбное хозяйство. -2007. №4. - С. 2 - 9.

4. Анисимова, И. М. Ихтиология / И. М. Анисимова, В. В. Лавровский. -М., 1991.-288 с.

5. Багров, А. М. Стратегия развития аквакультуры во внутренних водоемах России / А. М. Багров, Г. Е. Серветник, И. П. Новоженин // Вестник Россельхозакадемии. М., 2004. — №3. - С. 17-20.

6. Багров, А. М. Анализ некоторых аспектов "Стратегии развития аквакультуры России на.период до 2020 г." / А. М. Багров, Ю. П. Мамонтов // Рыбное хозяйство. М., 2008. - №2. - С 19-23.

7. Белоусов, Л. В. Основы общей эмбриологии / Л. В. Белоусов. -М.: Изд-во МГУ, 2005. 360 с.

8. Берг, Л. С. Дробление и образование парабласта у щуки (Esox Lucius) /Л. С. Берг // Дневник Зоологического отделения и Зоологического музея.-1989.-№9,10.-С. 1-24.

9. Богерук, А. К. Аквакультура важнейшее направление в обеспечении населения страны высококачественными продуктами питания // Финансовый эксперт. - М., 2006. - № 1. - С. 65-71.

10. Богерук, А. К. Состояние и направления развития аквакультуры в Российской Федерации / А. К. Богерук. М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2007.-88 с.

11. Бондарева, Jl. А. Са -активируемые протеолитические ферменты у рыб и водных беспозвоночных / Л. А. Бондарева // Вестник молодых ученых. Сер. Науки о жизни. 2002. - Т. 4. - № 1. - С. 52-57.

12. Бондарева, Л. А. Са2+-зависимая протеолитическая система животных / Л. А. Бондарева, Н. Н. Немова, Е. И Кяйвяряйнен. М.: Наука, 2006.-294 с.

13. Борисов, В. А. Государственное регулирование рыбохозяйственного комплекса / В. А. Борисов, С. В. Ниточкина, Т. В. Карпушкина, Т. И. Топенцина // Экономика информация. М.: ВНИИЭСХ, 2005. - С. 39-65.

14. Боровская, Т. Г. Средство для коррекции нарушений женской репродуктивной функции, вызванных цитостатическим воздействием / Т. Г. Боровская, Е. Д. Гольдберг, Ю. А. Щемерова и др. // Патент № 2367420, 20.09.2009.

15. Бочаров, Ю. С. Эволюционная эмбриология позвоночных / Ю. С. Бочаров. М.: Изд-во Моск. ун-та., 1988. - 232 с.

16. Бурлакова, Е. Б. Система окислительно-восстановительного гомеостаза при радиационно-индуцируемой нестабильности генома / Е. Б. Бурлакова, В. Ф. Михайлов, В. К. Мазурик // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. - Т.41. - №5. - С. 489-499.

17. Бузлама, В. С. Методическое пособие по изучению процессов перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы защиты организма у животных / В. С. Бузлама и др. Воронеж, 1997. - 415 с.

18. Васнецов, В. В. Этапы развития костистых рыб / В. В. Васнецов // Очерки по общим вопросам ихтиологии. М., Л.: Изд-во Ан СССР, 1953. -С. 207-217.

19. Ведемеер, Г. А. Стресс и болезни рыб / Г. А. Ведемеер. М., 1981.150 с.

20. Вернидуб, М. Ф. Критические периоды в развитии яиц и личинок рыб и их практическое значение / М. Ф. Вернидуб // Вестник ЛГУ. 1949. -№4.-С. 69-98.

21. Виноградов, В. К. Повышение эффективности товарного рыбоводства / В. К. Виноградов, Л. В. Ерохина // Рыбоводство и рыболовство. -1999.-№3.-С. 6.

22. Владимиров, В. И. Критические периоды развития у рыб /

23. B. И. Владимиров // Вопросы ихтиологии. 1975. - Т. 15. - Вып. 6. - С. 72-87.

24. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы в живых системах / Ю. А. Владимиров, О. А. Азизова, А. И. Деев и др. // Итоги науки и техники. -1991.-Т. 29.-С. 238-246.

25. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю. А. Владимиров // Вестник РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-51.

26. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы в биологических системах / Ю. А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т. 6. -№ 12.-С. 13-19.

27. Владимиров, Ю. А. Дизрегуляция проницаемости мембран митохондрий, некроз и апоптоз / Ю. А. Владимиров // Дизрегуляционная патология: Руководство для врачей и биологов. М.: Медицина, 2002.1. C.127-157.

28. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция / Ю. А. Владимиров, Е. В. Проскурнина //Успехи биологической химии. 2009. - Т. 49. - С. 341-348.

29. Воевода, Т. В. Изучение токсического действия нового фенольного антиоксиданта СО-3 в субхроническом эксперименте / Т. В. Воевода, Т. Г. Толстикова, И. В. Сорокина и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2000. - Т. 63. - № 4. - С. 57-60.

30. Воробьева, Е. И. Влияние внешних факторов на микроструктуру оболочек икры рыб / Е. И. Воробьева, В. В. Рубцов, К. П. Марков. -М.: Наука, 1986.- 109 с.

31. Гаврилов, Р. Ф. Почему население современной России потребляет так мало рыбной продукции? / Р. Ф. Гаврилов //Рыбное хозяйство. 2006. -№2.-17 с.

32. Гидрохимический контроль в рыбоводных хозяйствах: Рекомендации // Новосиб. госуд. аграр. университет. Новосибирск, 1992. -32 с.

33. Гилберт, С. Биология развития / С. Гилберт. -М.: Мир, 1993. -Т.1.-228 с.

34. Гордеев, А. В. Состояние и перспективы развития рыбного хозяйства России / А. В. Гордеев // Рыбное хозяйство. 2005. - № 4. - С. 3-5.

35. ГОСТ Р 51483-99 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме. М.: Госстандарт России, 1999.-5 с.

36. ГОСТ 30418 96 Масла растительные. Метод определения жирно-кислотного состава. - Минск: Изд-во стандартов, 1998. - 7 с.

37. Гутиева, 3. А. Оптимизация выращивания личинок карповых рыб в условиях индустриальной аквакультуры / 3. А. Гутиева. М., 2005. - 195 с.

38. Делянин, Н. В. Механизмы антиоксидантной защиты организма при изменении режима кислородного обеспечения / Н. В. Делянин, А. М. Герасимов

39. Материалы международной научной конференции. Гродно, 1993. - С. 18-19.95

40. Физиологическиеклинико-биохимические аспекты / Е. Е. Дубинина. -СПБ.: Медицинская пресса, 2006. 400 с.

41. Дугин, П. И. Системный подход к анализу производственно-экономических параметров в сельском хозяйстве / П. И. Дугин, С. А. Борина //Вестник АПК.-2010.-№ 1.-С. 3-21.

42. Душкин, М. И. Влияние антиоксиданта тиофан на индукцию цитохромов Р-450 печени крыс / М. И. Душкин, А. Е. Просенко, Н. В. Кандалинцева, В. В. Ляхович // Научный вестник Тюменской медицинской академии. 2003. - Т. 23. -№ 1. - С. 11-13.

43. Евсеев, А. В. Острая гипоксия: механизмы развития и коррекция антиоксидантами / А. В. Евсеев, П. Д. Шабанов, Э. А. Парфенов и др. -СПб.: Эл-би-СПб, 2008. 224 с

44. Егоров, М. А. Физиологические особенности действия фитогормона эпибрассинолида на организм животных в раннем онтогенезе / М. А. Егров. -Астрахань, 2002. 247 с.

45. Жигин, А. В. К вопросу о разработке федерального закона "Об аквакультуре" / А. В. Жигин //Рыбное хозяйство М., 2006. - №2 -С. 26-29.

46. Жукинский, В. Н. Влияние абиотических факторов на разнокачественность и жизнеспособность рыб в раннем онтогенезе / В. Н. Жукинский. М: Агропомиздат, 1986. - 124 с.

47. Журавлев, А. И. Спонтанная биохемилюминесценция животных тканей / А. И. Журавлев. -М.: Наука, 1983. С. 3-30

48. Журавлев, А. И. Антиоксиданты: свободнорадикальная патология / А. И. Журавлев, С. М. Зубкова. М.: ФГОУ ВГАВМиБ, 2008. - 270 с.

49. Журавлева, Н. Г. Влияние абиотических и биотических факторов среды на выживаемость эмбрионов и молоди рыб / Н. Г. Журавлева // Вестник МГТУ. 2009. - Т. 12. - № 2. - С. 338-343.

50. Залепухин, В. В. Концепция эндогенной разнокачественности в условиях искусственного воспроизводства рыб / В. В. Залепухин // Стрежень: научный ежегодник. Волгоград, 2001. - Вып. 2. - С. 429-432.

51. Залепухин, В. В. Плюсы и мунусы искусственного воспроизводства рыб / В. В. Залепухин // Стрежень: научный ежегодник. Волгоград, 2006. -Вып. 5.-С. 125-128.

52. Зданович, В. В. Выращивание молоди рыб в условиях температурного градиента / В. В. Зданович // Рыбоводство и рыболовство. -1994.-№ 2. С. 9-10.

53. Зенков, Н. К. Окислительный стресс. Биохимические и патофизиологические аспекты / Н. К. Зенков, В. 3. Лапкин, Е. Б. Меньшикова. -М.: Наука, 2001.-343 с.

54. Зенков, Н. К. Фенольные биоантиоксиданты / Н. К. Зенков, Н. В. Кандалинцева, В. 3. Ланкин и др. Новосибирск: СО РАМН, 2003. - 328 с.

55. Иванов, П. П. Общая и сравнительная эмбриология /П. П. Иванов. -М., Л.: Биомедгиз, 1937. 809с.

56. Ивлева, И. В. Температура среды и скорость энергетического обмена у водных животных / И. В. Ивлева. Киев: Наук.думка, 1981. - 232 с.

57. Игнатьева, Г. М. Ранний эмбриогенез рыб и амфибий / Г. М. Игнатьева. -М., 1979. 176 с.

58. Ильясов, С. В. Главная задача — стабилизация экономики отрасли / C.B. Ильясов // Рыбное хозяйство. М., 2006. - № 1 - С. 4-12.

59. Иорданский, Н. Н. Эволюция органов дыхания хордовых (низшие позвоночные и первично водные позвоночные) / Н. Н. Иорданский // Биология в школе. 1989. - № 1. - С. 8-15.

60. Исуев, А. Р. Сравнительная характеристика жирнокислотного состава липидов на ранних стадиях онтогенеза карпа, толстолобика, кеты, каспийского лосося и русского осетра / А. Р. Исуев, Б. С. Мусаев // Вопросы ихтиологии. 1989. - Т.29. -№2. - С. 342-345.

61. Исуев, А. Р. Свободнорадикальное перекисное окисление липидов в раннем онтогенезе рыб: автореф. дис. . д-ра биол. наук М., 1990. - 36 с.

62. Казанчева, В. С. Экономическая оценка рыбохозяйственных водоемов. Проблемы и перспективы повышения продуктивных качеств сельскохозяйственных животных / В. С. Казанчева. Ставрополь, 2007. -С.126-128.

63. Казимирко, В. К. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная терапия / В. К. Казимирко, В. И. Мальцев, В. Ю. Бутылин, Н. И. Горобец. Киев: Морион, 2004. - С. 160-161 с.

64. Каледин, В. И. Изучение влияние антиоксиданта тиофана на канцерогенное действие 3,4-бензпирена при пероральном введении у мышей / В. И. Каледин, Б. Г. Некрасов, А. М. Гончар и др. // Сибирский экологический журнал. 2006. - № 5. - С. 649-654.

65. Камышников, В. С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика / В. С. Камышников. Мн.: Интерпрессервис, 2003. - 911 с.

66. Каретко, С. Г. Пути повышения эффективности использования основных фондов в рыбохозяйственном комплексе страны / С. Г. Каретко // Роль и место агропромышленного комплекса в удвоении ВВП. -М.: "Росинормтех", 2003. 300 с.

67. Кауфман, 3. С. Эмбриология рыб / 3. С. Кауфман. -М.:Агропромиздат, 1990.-271 с.

68. Кафиани, К. А. Гетерогенность информационной РНК, синтезирующейся на ранних стадиях эмбриогенеза / К. А. Кафиани, М. Я. Тимофеева, А. А. Нейфах//Онтогенез. 1965. - Т. 164.- 1183-1186.

69. Кафиани, К. А. Информационные молекулы в раннем развитии животных / К. А. Кафиани, А. А. Костомарова. М.: Наука, 1978. - 355 с.

70. Киселев, А. Ю. Перспективы развития аквакультуры в России и вопросы ее научного обеспечения / Ю. А. Киселев // Рыбное хозяйство. -М., 2008. -№3. С. 62-65.

71. Кляшторин, Л. Б. Водное дыхание и кислородные потребности рыб. -М.: Легк. пищ. пром-сть, 1982. 168 с.

72. Константинов, А. С. Влияние колебаний рН на энергетику и биологическое состояние рыб / А. С. Константинов, В. С. Вечканов, В. А. Кузнецов // Вопросы ихтиологии. 1998. - Т. 38 - № 4. - С. 530-536.

73. Константинов, А. С. Влияние колебаний концентраций кислорода в воде на рост и энергетику рыб / А. С. Константинов, В. В. Зданович, В. Я. Пушкарь и др. // Вопросы ихтиологии. 1998. - Т. 38 - № 3. - С. 381-387.

74. Константинов, А. С. Влияние осцилляции температуры на рост и энергетику рыб / А. С. Константинов, В. В. Зданович, Д. Г. Тихомиров // Вопросы ихтиологии. 1989. - Т. 29. - вып. 6. - С. 1019-1027.

75. Концепция развития рыбного хозяйства РФ на период до 2020 г. Государственный комитет Российской Федерации по рыболовству. -М., 2003.

76. Королюк, М. А. Метод определения активности каталазы / М. А. Королюк, Л. И. Иванова, И. Г. Майорова, В. И. Токарев // Лабораторное дело. 1988.-№ 1.-С. 16-19.

77. Корочкин, Л. И. Взаимодействие генов в развитии / Л. И. Корочкин. -М.: Наука, 1977.-261 с.

78. Корочкин, Л. И. Биология индивидуального развития / Л. И. Корочкин. М.: Изд-во МГУ, 2002. - 263 с.

79. Костюк, В. А. Биорадикалы и биоантиоксиданты / В. А. Костюк, А. И. Потапович. Мн.: БГУ, 2004. - 174 с.

80. Котенев, Б. Н. Состояние и перспективы развития аквакультуры в Российской Федерации / Б. Н. Котенев, Ж. Т. Дергалева, И. В. Бурлаченко, И. В. Яхонтова, А. К. Богерук // Рыбное хозяйство. М., 2006. - № 5. - С. 25-29.

81. Кошелев, Б. В. Экология размножения рыб / Б. В. Кошелев. -М.: Наука, 1985.-307 с.

82. Крайний, А. А. Актуальные вопросы рыбохозяйственного комплекса России / А. А. Крайний // Рыбное хозяйство. М., 2009. -№1. - С. 3-6.

83. Крыжановский, С. Г. Эколого-морфологические закономерности развития карповых, вьюновых, соморых рыб / С. Г. Крыжановский // Труды института морфологии животных АН СССР. 1949. - Вып 1. - С. 5-332.

84. Крыжановский, С. Г. Теоретические основы эмбриологии / С. Г. Крыжановский // Успехи современной биологии. 1950. - Т. 30 -Вып 3(6).-С. 382-413.

85. Крылов, Г. С. Выращивание рыбопосадочного материала карпа в первой зоне прудового рыболовства / Г. С. Крылов. Ижевск, 2004. - 144с.

86. Ксейко, Д. А. Процессы перекисного окисления липидов в норме и патологии / Д. А. Ксейко // Система перекисного окисления липидов и антиоксиданты в норме и патологии. Ульяновск: Изд-во «Вектор-С», 2008.-С 6-47.

87. Кузьмина, В. В. Особенности становления пищеварительной функции рыб / В. В. Кузьмина, А. Г. Гельман // Вопросы ихтиологии. 1998. -Т. 38 -№ 1. - С. 113-122.

88. Кулинский, В. И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соросовский образовательный журнал. 1999. - № 1. - С. 2-7.

89. Курдюков, С. И. Формирование стратегии устойчивого развития рыбохозяйственного комплекса / С. И. Курдюков. -М.: НИБ, 2004 320 с.101

90. Лабас, Ю. А. Регуляторная роль активных форм кислорода: от бактерий до человека /10. А. Лабас, А. В. Гордеева, Ю. И. Дерябина и др. // Успехи современной биологии. М.: Наука, 2010. — №> 4. — С. 323-335.

91. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. М.: высш. школа., 1980.293 с.

92. Лапин, В. И. О методике экстракции жира из сырых тканей рыб / В. И. Лапин, Е. Г. Чернова // Вопросы ихтиологии. 1970. - Т. 10. - Вып. 4 (63). -С. 753-756.

93. Логинова, Т. А. Каротиноиды радужной форели при развитии гонад и икры / Т. А. Логинова // Обмен веществ и биохимия рыб. 1967. - С. 336-340.

94. Лобачев, А. Л. Анализ неорганических загрязнителей питьевых и природных вод / А. Л. Лобачев, Р. Ф. Степанова, И. В. Лобачева. Самара,2006.-45 с.

95. ЮЗ.Локшина, Л. А. Регуляторная роль протеолитических ферментов / Л. А. Локшина//Молекуляр. биология. 1979. - Т. 13.-№6.-С. 1205-1229.

96. Лужин, Б. Г. Этапы развития личинок карпа / Б. Г. Лужин // Рыбоводство и рыболовство. 1976. -№ 3. - С. 10-12.

97. Лужин, Б. Г. Зародышевое развитие карпа / Б. Г. Лужин // Рыбоводство и рыболовство. 1977. -№ 2. - С. 11-12.

98. Лущак, В. И. Свободнорадикальное окисление белков его связь с функциональным состоянием организма / В. И. Лущак // Биохимия. 2007. -Т. 72,-№8.-С. 995-1017.

99. Ляхович, В. В. Активированные кислородные метаболиты в монооксидазных реакциях / В. В. Ляхович, В. А. Вавилин, Н. К. Зенков, Е. Б. Меньщикова//Бюллетень СО РАМН. -2005.-№4.-Вып. 118.-С. 7-12.

100. Макеева, А. П. Эмбриология рыб/А. П. Макеева. -М., 1992.-216 с.

101. Макоедов, А. Н. Основы рыбохозяйственной политики России / А. Н. Макоедов, О. Н. Кожемяко. М.: Национальные рыбные ресурсы,2007.-480 с.

102. Мамонтов, 10. П. Искусственнее воспроизводство гидробионтов как основа аквакультуры / Ю. П. Мамонтов // Рыбоводство и рыболовство. -2000. -№ 1.-С.З -11.

103. Ш.Мамонтов, Ю. П. Рыбное хозяйство внутренних пресноводных водоемов России / Ю. П. Мамонтов, Д. И. Иванов, А. И. Литвиненко, В. Я. Скляров. Санкт- Петербург: ГосНИОРХ, 2005. - 99 с.

104. Мамонтов, Ю. П. О мерах по развитию аквакультуры в Российской Федерации. / Ю. П. Мамонтов, М. А. Есипова // Рыбное хозяйство. 2006. -№ 3. - С. 16-19.

105. Мамонтов, Ю. П. Аквакультура в пресноводных водоемах / Ю. П. Мамонтов, А. И. Литвиненко. Тюмень, 2007. - 34 с.

106. Мартышев, Ф. Г. Прудовое рыбоводство / Ф. Г. Мартышев -М.:Издательство «Высшая школа», 1973. -428 с.

107. Меерсон, Ф. 3. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических поражений сердца / Ф. 3. Меерсон. М.: Медицина, 1984.-269 с.

108. Меерсон, Ф. 3. Адаптация, стресс, профилактика. М.: Наука, 1981.-279 с.

109. Мелехова, О. П. Свободнорадикальные процессы в эпигеномной регуляции развития / О. П. Мелехова. М.: Наука. - 2010. - 324 с.

110. Меньщикова, Е. Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов / Е. Б. Меньщикова, Н. К. Зенков // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113. - Вып. 4. - С. 442-453.

111. Меньщикова, Е. Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е. Б. Меньщикова, В. 3. Ланкин, Н. К. Зенков. М.: Слово, 2006. - 553 с.

112. Меньщикова, Е. Б. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания / Е. Б. Меньщикова, Н. К. Зенков, В. 3. Ланкин и др. -Новосибирск: APTA, 2008. 284 с.

113. Мешков, М. М. Строение икринок Те1ео51е1 / М. М. Мешков, О. А. Лебедева // Эколого-морфологические исследования раннего онтогенеза позвоночных. М.: Наука, 1983. - С. 61-70.

114. Микряков, В. Р. Реакция иммунной системы рыб на загрязнение воды токсикантами и закисление воды / В. Р. Микряков, Л. В. Балабанова, Е. А. Заботкина и др. М.: Наука, 2001 - 126 с.

115. Микулин, А. Е. Причины изменения спектральных свойств каротиноидов в эмбриональном развитии костистых рыб // Биологически активные вещества и факторы в аквакультуре: Сборник научных трудов. -М.: ВНИРО, 1993.-С. 163-167.

116. Микулин, А. Е. Особенности молекулярной структуры каротиноидов и их функциональное значение / А. Е. Микулин // Тезисы международной научно-технической конференции. «Приоритетные технологии в пищевой промышленности».-М.: МГЗИПП, 1998-Вып. 1.-С. 59-60

117. Микулин, А. Е. Функциональное значение пигментов и пигментации в раннем онтогенезе рыб / А. Е. Микулин. М., 2000. - 231 с.

118. Минин, А. А. Спонтанная активация яиц рыб предотвращается ингибиторами протеаз / А. А. Минин, С. Г. Озерова // Онтогенез. 2008. -Т. 39.-№5.-С. 1-5.

119. Михелес, Т. П. Рыбохозяйственный комплекс внутренних водоемов России: современное состояние, проблемы, пути их решения / Т. П. Михелес. -Санкт-Петербург, 2001.-316 с.

120. Мухачев, И. С. Системы инновационных технологий товарного рыбоводства на юге Тюменской области / И. С. Мухачев // Аграрный вестник Урала.-2009.-№11.-С. 113-115.

121. Немова, IT. H. Свойства и физиологическая роль внутриклеточных протеиназ в тканях рыб / H. Н. Немова // Успехи современной биологии. 1991. -Т. 111.-Вып. 6.-С. 948-954.

122. Немова, H. Н. Внутриклеточные протеолитические ферменты у рыб / H. Н. Немова. Петрозаводск: Карельский научный центр РАН, 1996. - 104 с.

123. Немова, H. Н. Лизосомы и лизосомальные ферменты рыб / H. Н. Немова, Р. У. Высоцкая. М.: Наука, 2008. - 288 с.

124. Немова, H. Н. Протеиназы семейства кальпаинов. Структура и функции / H. Н. Немова, Л. А. Лысенко, Н. П. Канцерова // Онтогенез. — 2010. — Т. 41 -№ 5.-С. 381-389.

125. Нейфах, А. А. Молекулярная биология процессов развития / А. А. Нейфах, М. Я. Тимофеева. М.: Наука, 1977. - 312 с.

126. Никольский, Г. В. Экология рыб / Г. В. Никольский. -М.: Государственное издательство «Высшая школа», 1963. 368 с.

127. Новиков, Г. Н. Рост и энергетика развития костистых рыб в раннем онтогенезе / Г. Н. Новиков. М., 2000. - 295 с.

128. Овчинникова, Л. П. Антиокислительная активность тиофана бис(3-(3,5-дитрет-бутил-4-гидроксифенил)пропил.сульфида / Л. П. Овчинникова, У. Н. Роцкая, Е. А. Васгонина и др. // Биоорганическая химия. 2009. - Т. 35. -№3.-С. 417-423.

129. Озернюк, Н. Д. Биоэнергетика онтогенеза / Н. Д. Озернюк. -М.: Изд-во МГУ, 2000. 264 с.

130. Озернюк, Н. Д. Температурные адаптации / Н. Д. Озернюк. -М.: Изд-во МГУ, 2000. 205 с.

131. Олифан, В. И. Критические стадии в индивидуальном развитии животных. / В. И Олифан // II совещание эмбриологов СССР. Тезисы докладов. Изд МГУ, 1957.-С. 147-148.

132. Определение резистентности к окислению липопротеинов низкой плотности сыворотки крови: метод.рекомендации / сост. Ю. И. Рагина, М. И. Душкин. Новосибирск, 1998. - 11 с.

133. Определение химических элементов в биологических средах и препаратах методами атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой // Методические указания. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2003. - 56 с.

134. Орехович, В. Н. Роль протеиназ в регуляции физиологических процессов в организме / В. Н. Орехович, Ю. Е. Елисеева, Л. В. Павлихина, Л. А. Локшина // Тезисы докладов IV Всесоюзного симпозиума по медицинской энзимологии. Алма-Ата, 1983. - С. 3.

135. Павлов, Д. А. Морфологическая изменчивость в раннем онтогенезе костистых рыб / Д. А. Павлов. М., 2007. - 262 с.

136. Падалка, С. М. Изменение уровня свободных радикалов в эмбрионахрыб как показатель биокоррекции раннего развития / С. М. Падалка,

137. О. В. Бурлакова, А. А. Медведева и др. // Материалы и доклады

138. Международного симпозиума «Тепловодная аквакультура и биологическая106продуктивность водоемов аридного климата». Астрахань: Изд-во АГТУ, 2007. - С.437-439.

139. Панкова, Н. В. Изменение клеточного ядра на ранних стадиях развития вьюна / Н. В. Панкова // Цитология. 1963. - Т. 5. - № 1. - С. 36-42.

140. Ларина, Е. В. Механизмы регуляции ферментов в онтогенезе / Е. В, Ларина, П. А. Калиман. Харьков: Вища школа, 1978. - 204 с.

141. Пирс, Э. Гистологическая техника / Э. Пирс. М.: Изд. иностр. лит., 1962.-962 с.

142. Плохинский, Н. А. Биометрия / И. А. Плохинский. М.: Изд-во МГУ. - 1970.-367 с.

143. Породы карпа (Cyprinus carpió L) / Под редакцией А. К. Богерука // «Породы и одомашненные формы рыб». М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2004.-398 с.

144. Пономарев, С. В. Фермерская аквакультура: Рекомендации / С. В. Пономарев, Л. Ю. Лагуткина, И. Ю. Киреева. М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2007. - 192 с.

145. Постановление СФ РФ «О Федеральном законе «О рыболовстве и сохранении водных биологических ресурсов» от 26 июля 2000г. № 228-СФ.

146. Правдин, И. Ф.Руководство по изучению рыб / И. Ф. Правдин. -М.: Пищ. пром-сть, 1966. 367 с.

147. Привольнев, Т. И.Влияние высокой температуры на развитие икры рыб / Т. И. Привольнев // Тр. Петергоф. Биол. ин-та. 1935. -№ 13/14. -С. 12-27.

148. Просенко, А. Е. Синтез и исследование антиокислительных свойств бис-3,5-диалкил-4-гидроксифенил)алкил.сульфидов / А. Е. Просенко,107

149. Е. И. Терах, Е. А. Горох и др. // Журнал прикладной химии. 2003. - Т. 76. -№2. - С. 256-260.

150. Просенко, А. Е. Серосодержащий фенольный антиоксидант тио-фан как перспективный лекарственный препарат / А. Е. Просенко, Е. И. Терах, Н. В. Кандалинцева и др. // Материалы Всероссийской конф. -Новосибирск: Сибвузиздат, 2004. С. 391-392.

151. Пучков, В. Ф. Критические периоды развития, формообразовательный аппарат и эволюционный подход к их изучению с телеономических позиций / В. Ф. Пучков // Арх. Анатомии, гистологии и эмбриологии. 1978.-Т. 75-№ 10.-С. 20-29.

152. Расс, Т. С. Ступени онтогенеза костистых рыб (Teleostei) / Т. С. Расс // Зоологический журнал. 1946. - Т. 25. - С. 137-148.

153. Репин, В. С. Критические факторы химической регуляции развития /

154. B. С. Репин. М.: Медицина, 1980. - 247 с.

155. Рождественский, И. К. Перспективы развития товарного рыбоводства в России. / И. К. Рождественский // Рыбоводство. М., 2007. -№ 2. - С. 4-6.

156. Ромейс, Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс. М.: Иностранная литература, 1954. - 719с.

157. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство. Р 4.1.1672-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 30.06.2003). 183 с.

158. Рыжков J1. П. Основные морфофизиологические закономерности раннего онтогенеза пресноводных рыб / JT. П. Рыжков // Биологические основы рыбоводства: Актуальные проблемы физиологии и биохимии рыб. М., 1984.1. C. 6-27.

159. Сазонтова, Т. Г. Роль свободнорадикальных процессов и редокссигнализации в адаптации организма к изменению уровня кислорода /108

160. Т. Г. Сазонтова, 10. В. Архипенко // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. М., 2005. - Т. 91. - № 6. - С. 636-655.

161. Сазонтова, Т. Г. Значение баланса прооксидантов и антиоксидантов равнозначных участников метаболизма / Т. Г. Сазонтова, Ю. В. Архипенко // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2007. - №3. -С.2-19.

162. Светлов, П. Г. Теория критических периодов развития и ее значение для понимания принципов действия среды на организм / П. Г. Светлов // Сборник вопросов цитологии и общей физиологии. М., JL, 1960.

163. Северцов, А. С. Происхождение и эволюционное значение гетерохроний / А. С. Северцов // Вопросы эволюции онтогенеза. -М.: Наука, 1985. С. 61-67.

164. Скулачев, В. П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии, клетки и органы: роль активных форм кислорода /

165. B. П. Скулачев // Соросовский Образовательный Журнал. 2001. - Т. 7 - №6.1. C. 4-10.

166. Смольякова, В. И. Антиоксидантные эффекты тиофана при экспериментальном поражении печени тетрахлорметаном / В. И. Смольякова, М. Б. Плотников, Г. А. Чернышева и др. // Бюллетень сибирской медицины. -2010.-№ 5.-С. 98-101.

167. Современное состояние рыбного хозяйства на внутренних водоемах России / под ред. А. С. Иванова, А. С. Печникова. СПб.: ООО «ИП Комплекс», 2004. - 565 с

168. Содержание растворенного кислорода в воде: Методические указания / Сост. И. А. Кузьмина. НовГУ, Великий Новгород, 2007. - 12с.

169. Соин, С. Г. Приспособительные особенности развития рыб / С. Г. Соин. М., 1968.-92 с.

170. Соин, С. Г. К вопросу о разнообразии экологических групп рыб по условиям их размножения и развития / С. Г. Соин // Современные проблемы ихтиологии. М., 1981.-С. 124-141.

171. Сологуб, Т. В. Свободнорадикальные процессы и воспаление / Т. В. Сологуб, М. Г. Романцов. М., 2010. - 95 с.

172. Сорокина, И. В. Гигиеническая характеристика стабилизатора СО-3 / И. В. Сорокина, А. С. Лапик, М. П. Долгих, Л. П. Попова // Токсикология и санитарная химия полимеризационных пластмасс. Л., 1984. - С. 55-59.

173. Сорокина, И. В. К токсикологии стабилизатора СО-3 / И. В. Сорокина, А. С. Лапик, Н. С. Максимова, М. П. Долгих // Известия СО АН СССР.-Л., 1987.-№ 1.-С. 55-59.

174. Стальная, И. Д. Современные методы в биохимии / И. Д. Стальная. -М.: Медицина, 1977.-391 с.

175. Строганов, А. Н. Особенности становления дыхательной функции в раннем онтогенезе костистых рыб / А. Н. Строганов, Г. Г. Новиков // Экологические проблемы онтогенеза рыб: физиолого-биохимические аспекты. -М.: МГУ, 2001. С. 20-30.

176. Тельцов, Л. П. Критерии определения критических фаз развития органов в онтогенезе / Л. П. Тельцов, В. А. Столяров, Ю. С. Шагиахметов // Материалы Российского IV съезда АГ: Рос. морфологические ведомости. -М.,1999. -№1-2. С.147-148.

177. Тельцов, Л. П. Здоровье и законы индивидуального развития / Л. П. Тельцов // Фундаментальные исследования. 2007. - №6. - С. 18-28.

178. Терах, Е. И. Исследование синергических эффектов у антиоксиданта

179. СО-3 и его структурных аналогов в сравнении с композициями110триалкилфенолов и диалкилсульфида / Е. И. Терах, А. Е. Просенко,

180. B. В. Никулина, О. В. Зайцева // Журнал прикладной химии. 2003. - Т. 76. - № 2.-С. 261-265.

181. Токин, Б. П. Общая эмбриология / Б. П. Токин. М., 1987. - 480 с.

182. Трифонова, А. Н.Влияние асфиксии на развитие кариокинетического деления у эмбрионов рыб / А. Н. Трифонова // Архис биологических наук. -1935. Т.37 - Вып.З. - С. 757-749.

183. Трифонова, А. Н.Критические периоды эмбрионального развития / А. Н.Трифонова // Успехи современной биологии. -1949. Т.28 - Вып. 4.1. C. 154-168.

184. Трифонова, А. Н. Изменение жизнестойкости икры рыб при смене стадий развития и при адаптации к неблагоприятным воздействиям / А. Н. Трифонова // Тезисы докладов на XVI годичной научной сессии Института. Свердловск, 1954. - № 2. - С. 9-11.

185. Трифонова, А. Н.Повышение общей жизнеспособности при адаптации к действию повреждающих агентов / А. Н. Трифонова // Журнал общей биологии. 1958. - Т. 19 - Вып. 3. - С. 197-201.

186. Федеральная программа развития рыбного хозяйства Российской Федерации на период до 2010 года. Проект. Госкомрыболовство РФ. 2000 г.

187. Фридлянд, И. Ф. Влияние антиоксидантов на функциональную активность мононуклеарных клеток периферической крови больных вирусным гепатитом С / И. Ф. Фридлянд, А. Е. Просенко, С. Ю. Клепикова и др. // Мед. иммунол. 2001. - Т. 3. - № 2. - С. 243.

188. Цебржинский, О. И. Некоторые аспекты антиоксидантного статуса / О. И. Цебржинский // Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза. Полтава, 1992. - С. 120-142.

189. Шатуносвкий, М. И. Эколого-физиологические исследования рыб в онтогенезе / М. И. Шатуновский // Экология размножения и развития рыб. -М.: Наука, 1980. С. 29-47.

190. Шахматова, О. А. Активность антиоскидантной системы личинок рыб как показатель качества морской среды / О. А. Шахматова // Экология моря. 2002. - Вып. 59. - С. 48-50.

191. Шахмурзов, А. М. Пути повышения эффективности рыборазведения. / А. М. Шахмурзов //Стратегия адаптивного ведения сельского хозяйства в условиях экономического кризиса. Нальчик, Москва, 2004. - Ч. 2 - Вып. 2. -С. 48-52.

192. Чеснокова, Н. П. Общая характеристика источников образования свободных радикалов и антиоксидантных систем / Н. П. Чеснокова, Е. В. Понукалина, M. Н. Бизенкова // Успехи современного естествознания. -2006.-№7.-С. 37-41.

193. Чеснокова, Н. П. Молекулярно-клеточные механизмы инактивации свободных радикалов в биологических системах / Н. П. Чеснокова, Е. В. Понукалина, M. Н. Бизенкова // Успехи современного естествознания. -2006. № 7. - С. 29-36.

194. Эпель, Д. Инициирование развития в период оплодотворения / Д. Эпель // Онтогенез. 1992. - Т. 23. -№ 3. - С. 213-227.

195. Яковенко, Е. Я. Способ стимуляции развития рыб / Е. Я. Яковенко, В. А. Жуковская, Ю. Г. Жуковский, В. Ю. Быковская и др. // Патент № 1443222 от 08.08.88

196. Aebi, H. Catalase in vitro / H. Aebi // Ment. Enzymol. 1984. - Vol. 105. -P. 121-126.

197. Allen, R. G. Oxidative stress and gene regulation / R. G. Allen, M. Tresini // Free Radikal Biol. Med. 2000. - Vol. 28 - № 3. - P. 463-499.

198. Ando, S. Distribution of carotenoids in the eggs from 4 species of salmonids / S. Ando, M. Hatano // Comp. Biochem. Physiol. 1991. - V. 99. - Iss.2. -P. 341-344.

199. Arret, A. J. Lysosomes. A laboratory handbook / A. J. Arret, M. Heath. -Amsterdam: Nort-Holland, 1977. -19 p.

200. Babibor, B. M. NADPH-oxidase: An update / B. M. Babibor // Blood. -1999.-Vol. 93.-P. 1464-1476.

201. Ballard, W. W. Morphogenetic movements and fate maps vertebates / W. W. Ballard // Amer. Zool. 1981. - Vol. 21 - № 2. - P. 391-399.

202. Ballard, W. W. Morphogenetic movements and fate mape of the cypriniform Teleost, Catastomus commersoni (Lacepede) / W. W. Ballard // J. Exp. Zool. 1982. - Vol. 219. -№ 3. - P. 301-321.

203. Ballon, E. K. Early life histories of fishes: new developmental, ecological and evolutionary perspectives. Developments in Environ / E. K. Ballon // Biol. Fish.5. 1985. - 280 p.

204. Ballon, E. K. Epigenesis of an epigeneticist: the development of some alternative concepts on the early ontogeny and evolution of fishes / E. K. Ballon // Guelph Ichthyol. Rev. 1990. - Vol. 1 - P. 1-42 '.

205. Ballon, E. K. Epigenetic processes, when natura non facit saltum becomes a myth, and alternative ontogenies a mechanism of evolution / E. K. Ballon // Environ. Biol. Fish. 2002. - Vol. 65. - P. 1-35.

206. Barrett, A. J. Handbook of proteolytic enzymes / A. J. Barret, N. D. Rawlings, J. F. Woessner. L.: Academic, 1998. —1666p.

207. Ben-Aharon, I. Expression and immunolocalization of the calpain-calpastatin system in the human oocyte/ I. Ben-Aharon, D. Ben-Yosef, A. Amit, R. Shalgi // Fertil. Steril. 2005. - Vol. 83. - N 6. - P. 1807-1813.

208. Bonley, H. Hydrolitik enzymes. / H. Bonley. -N. Y.: Elsevier Sci. Publ. Co., 1987.-307 p.

209. Bounous, G. Antioxidant Sustem / G. Bounous, J. H. Molson // Anticancer Research. 2003. - Vol. 23. - P. 1411 -1416.

210. Boveris, A. Determination of the production of superoxide radicals and hydrogen peroxide in mitochondria / A. Boveris // Methods Enzymol. 1984. -Vol.105.-P. 429-435.

211. Craik, J. C. A. The carotenoids of eggs of wild and farmed Atlantic salmon, and their changes during development to the start of feeding / J. C. A. Craik, S. M. Harvey // J. Fish. Biol. 1986. - Vol. 29. - P. 549-565.

212. Chua, B. T. Direct cleavage by the calcium-activated protease calpain can lead to inactivation of caspases / B. T. Chua, K. Guo, P. Li // J. Biol. Chem. 2000. -Vol. 275.-P. 5131-5135.

213. Davies, B. H. Analysis of carotenoid pigments / B. H. Davies// Chemistry and Biochemistry of Plant Pigments. New York-London: Acad. Press, 1965. -P. 489-533.

214. Davies, B. H. Carotenoids / B. H. Davies // Chemistry and Biochemistry of Plant Pigments. London, New-York, San-Francisco, 1976. - Vol. 2. - P. 38-165.

215. Dansette, P. M. Sulfur containing compounds as antioxidants / P. M. Dansette, A. Sassi, C. Descamps, D. Mansuy // Antioxidants in therapy and preventive medicine. -N.Y.: Plenum press, 1990. P. 209.

216. Droge, W. Free radikals in the physiological control of cell function / W. Droge // Physiol. Rev. 2002. - Vol. 82. - P. 47-95.

217. Engle, C. An analysis of production and financial formance of baitfish production / C. R. Engle, N. Stone, E. Park // J. Appl. Acuacult. 2000. - 10 - № 3. -P. 1-15.

218. Epel, D. Biol. cell. / D. Epel, D. Nishioka, G. Perry. 1978. -T. 32.-135 p.

219. Epel, D. Calcium and cell function / D. Epel. N. Y.: Acad, press, 1982. -V. 2.-355 p.

220. Falasca, G. F. Superoxide anion production and phagocytosis of crystals by cultured endothelial cells / G. F. Falasca, A. Ramachandrila, K. A. Kelley // Arthr. Rheum. 1993.-Vol. 36.-P. 105-116.

221. Finkel, T. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageining / T. N. Finkel, Holbrook N. // Nature. 2000. - Vol. 408. - P. 239-247.

222. Foppen, F. N. Tables for the identification of carotenoid pigments / F.N. Foppen //Chromatogr. Rev.- 1971. -Vol. 14.-N. 3.-P. 133-298.

223. Gildberg, A. Aspartic proteinases in fishes and aquatic invertebrates / A. Gildberg.// Compar. Biochem. and Physiol 1988. -Vol. 81. -№ 3.-355 p.

224. Giorgio M. Hydrogen peroxide: a metabolic by-product or a common mediator of ageing signals? / M. Giorgio, M. Trinei, E. Migliaccio, P. G. Pelicci // Nat Rev Mol Cell Biol. 2007. - №8 (9). - P. 722-730.

225. Global aquaculture outlook in the next decades: an analysis of national aquaculture production forecasts to 2030. FAO Fisheries Circular No. 1001. Rome, 2004.-47 p.

226. Gordon, A. H. Lysosomes in biology and pathology / A. H. Gordon. -Amsterdam: Nort- Holland., 1973. Vol. 3. - 89 p.

227. Guerin, P. Oxidative stress and protection against reactive oxygen species in the pre-implantation embryo and its surroundings / P. Guerin, S. E. Mourtassim, Y. Menezo // Hum. Reprod. Update. 2001. - Vol. 7 - № 2. - P. 175-189.

228. Holtzmann, E. Lysosomes: A Survey / E. Holtzmann. N. Y.: Acad, press, 1976.-208 p.

229. Hsu, C. Y. Ambient temperature influences aging in an annual fish (Nothobranchius rachovii) / C. Y. Hsu, Y. C. Chiu // Aging Cell. 2009. - Vol.8. -P.726-737.

230. Kamler, E. Ontogeny of yolk-feeding fish: an ecological perspective / E. Kamler//Reviews in Fish Biol. And Fisheries. 2002. - Vol. 12.-P. 79-103.

231. Kellicott, C. The effects of low temperatures upon the development of Fundulus / C. Kellicott // Amer. J. Anat. 1916. -Vol. 20. -N 3. - P. 92-108.

232. Kikugawa, K. Carotene effectively scavenges toxic nitrogen oxides: nitrogen dioxide and peroxynitrous acid / K. Kikugawa, K. Hiramoto, S. Tomiyama // FEBS Lett. -1997. Vol. 404. - P. 175-178

233. Killian, J. A. The «double life» of membrane lipids / J. A. Killian, G. Van Meer // EMBO. 2001. - Vol. 21. - P. 91-95.

234. Knight, J. A. Review: Free radicals, antioxidants, and the immune system / J. A. Knight // Ann. Clin. Lab. Sci. 2000. - Vol. 30. - P. 145-158.

235. Krinsky, N. I. Function / N. I. Krinsky // Carotenoids. ed. Isler. Basel and Stuttgart: Birkhauser. 1971. - 669 p.

236. Krinsky, N. I. Carotenoid protection against oxidation / N. I. Krinsky // Pure-and Appl. Chem. 1979. - Vol. 51. -N. 3. - P. 649-660.

237. Krinsky, N. L. Membrane antioxidants / N. L. Krinsky // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1988.-Vol. 551.-P. 17-33.

238. Laihia, J. K Lucigenin and linoleate enhanced chemiluminescent assay for superoxide dismutase activity / J.K. Laihia, M. Ahotupa, J.K. Laihia, M. Ahotupa // Free Radic. Biol. Med. 1993. - Vol. - 14. - P. 457-461.

239. Lee, H. C. Oxidative stress, mitochondrial DNA mutation, and apoptosis in aging / H. C. Lee, Y. H. Wei // Exp. Biol. Med. Maywood, 2007. - Vol. 232(5) -P. 592-606.

240. Loft, S. Biomarkers of oxidative damage to DNA and repair. / S. Loft, P. Hogh Danielsen, L. Mikkelsen, L. Risom, L. Forchhammer, P. Moller // Biochem Soc Trans. 2008. - Vol. 36. - P. 1071-1076.

241. Long, W. L. The role of the yolk syncytial layer in determination of the plane of bilateral symmetry in the rainbow trout Salmo gairdneri / W. L. Long // J. Exp. Zool.- 1983.-Vol. 228.-N 1.-P. 41-70.

242. Lowe, G. M. Carotenoids as prooxidants? / G. M. Lowe, K. Vlismas, A. J. Yong // Mol. Aspects Med. 2003. - Vol. 24. - P. 363-369.

243. Lowry, O. H. Protein measurement with Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr, R. J. Randall // J. Biol. Chem. 1951. -Vol. 193.-N 1.-P. 265-275.

244. Lu, T. Free Radicals and Senescence / T. Lu, T. Finkel // Exp Cell Res. -2008.-Vol. 314(9).-P. 1918-1922.

245. Melekhova O. P. Embryogenesis as a model of a developing system / O. P. Melekhova //Formal Descriptions of Developing System (NATO Sciences Series), Kluwer Akademik Publishers. 2003. - P. 269-276.

246. Messima, M. Lysosomal hydrolase activities in the developing rat liver / M. Messima, L. Tessitor, M. Musi et. all. // Bull. Soc. Ital. Biol. Sper. 1980. -Vol. 56 - № 1. - P. 27-32.

247. Miki, W. Biological function and activities of animal carotenoids / W. Miki//Pure and Appl. Chem. 1991.-Vol. 63.-N. l.-P. 141-146.

248. Mikullin, A. E. Composition and functions of pigments in bone fishes embryogenesis / A. E.Mikulln // Proc. of Sc. Conf. Fish Reproduction. 1992. -P. 76-81.

249. Murachi, T. Advances Enzyme Regulat / T. Murachi, K. Tanaka, M. Hatanaka, T. Murakami. 1981. - Vol.19. -407 p.

250. Olson, J. A. Carotenoids and vitamin A -An overview / J. A. Olson // Lipid-Soluble Antioxidants: Biochemistry and Clinical Applications. -Basel: Birkhauser Verlag, 1992.-P. 178-192.

251. Ong, A. S. H. Natural sources of carotenoids from plants and oils / A. S.H. Ong, E. S. Tee//Methods in Enzymology. 1992. - Vol. 213.-P. 142-167.

252. Paloza, P. Antioxidant effects of carotenoids in vim and mrilm An overview / P. Paloza, N. L. Krinsky // Methods in Enzymol. 1992. - Vol. 213. -P. 403-420.

253. Penaz, M. Ecomorphological laws and saltation in the early ontogeny of salmonoidei / M. Penaz // Folia Zool. 1983. - Vol. 32. - P. 365-373.

254. Penaz, M. A General framework of fish ontogeny: a review of the ongoing debate / M. Penaz // Folia Zool. 2001. - Vol. 50. - № 4. - P. 241-256.

255. Pillay, T. V. Aquaculture: principles and practices / T. V. Pillay, M. N. Katty // Blackwell Publishing. 2005. - 624 p.

256. Poli, G. Oxidative stress and cell signaling / G. Poli, G. Leonarduzzi, F. Biassi // Current Med. Chem. 2004. - Vol. 11. - P. 1163-1182.

257. Santella, L. Breakdown of cytoskeletal proteins during meiosis of startfish oocytes and proteolysis induced by calpain / L. Santella, K. Kyozuka, S.Hoving et. al. // Exp. Cell. Res.-2000. Vol. 259.-P. 117-126.

258. Sies, H. Oxidative stress from basic research to clinical application / H. Sies//Am. J. Med. - 1991.-Vol. 91.-Suppl.3 C.-P. 31-38.

259. Somansundaram, K. Tumor suppressor p53: regulation and function / K. Somansundaram, W. S. El-Deiery // Frontiers Biosci. 2000. -Vol.5 -P. 424-437.

260. Stockard, C. R. The artificial production of a single median cyclopean eye in the fish embryo by means of sea water solutions of magnesium chloride / C. R. Stockard // Arch. Entw.-Mech., Organismen. 1907. - Vol. 23. - P. 249-258.

261. Suzuki, K. Limited autolysis of Ca2+-activated neutral protease (CANP) changes its sensitivity to Ca2+ ions. / K. Suzuki, S. Tsuji, S. Kubota et. al. // J. Biochem. 1981. - Vol. 90. - P. 275-278.

262. Suzuki, K. Regulation of activity of calcium activated neutral protease / S. Imajoh, Y. Emori, H. Kawasaki, Y. Minami, S. Ohno // Advances Ehzymol. Regulat. 1988. - Vol. 27. - P. 153-169.

263. Terao, J. Antioxidant activity of P-carotene-related carotenoids in solution / J. Terao // Lipids. 1989. - Vol. 24. -N. 7. - P. 659-661.

264. Toyohara, H. / H. Toyohara, Y. Makinodan, S. Ikeda. // Bull. Japan. Soc. Scient. Fish. 1985. - Vol. 51. -№ 8. -1281 p.

265. Wei, Y. H. Respiratory function decline and DNA mutation in mitochondria, oxidative stress and altered gene expression during aging / Y. H. Wei, S. B. Wu, Y. S. Ma, H.C. Lee // Chang Gung Med J. 2009. -№ 32(2). -P. 113-32.

266. Whittingham, D. G. Biol. cell. / D. G. Whittingham, G. Siracusa, B. R. Fulton. 1978. - T. 32. - 149 p.

267. Zaken, V. The development of antioxidant defence mechanism in young rat embryos in vivo and in vitro / V. Zaken, R. Kohen, A. Ornoy // Early Pregnansy. -2000. Vol. 4 - № 2. - P. 110-123.

Информация о работе

Кеберлайн, Ольга Владимировна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2012
ВАК 06.02.01

Диссертация

Влияние активных кислородных метаболитов на эмбриогенез алтайского зеркального карпа - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы