Вирус Западного Нила в различных экосистемах юга Западной Сибири

Кононова, Юлия Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Вирус Западного Нила в различных экосистемах юга Западной Сибири
ВАК РФ 03.02.02, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Вирус Западного Нила в различных экосистемах юга Западной Сибири"

На правах рукописи

Кононова Юлия Владимировна

ВИРУС ЗАПАДНОГО НИЛА В РАЗЛИЧНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ ЮГА ЗАПАДНОЙ СИБИРИ

03.02.02 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Г/

Владимир-2010

004601022

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Минздравсоцразвития России

Научный руководитель:

кандидат биологических наук Шестопалов Александр Михайлович Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Борисов Владимир Владимирович, ФГУ

«Федеральный центр охраны здоровья животных», г. Владимир

доктор биологических наук Пономарев Всеволод Алексеевич, ФГОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.К. Беляева», г. Иваново

Ведущая организация: ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», г. Москва

Защита состоится «Лапреля 2010 г. в «10» часов на заседании диссертационного совета Д 220.015.01 при ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец, ФГУ «ВНИИЗЖ», тел/факс. (4922) 26-15-73

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» и на сайте: http://www.arriah.ru

Автореферат разослан « марта 2010 г.

Учёный секретарь диссертационного I

доктор биологических наук

А.П. Пономарев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Вирус Западного Нила (ВЗН), впервые изолированный в 1937 г. в Уганде, является представителем семейства Flaviviridae, рода Flavivirus, антигенного комплекса японского энцефалита и относится к группе арбовирусов. Циркуляция ВЗН в природных очагах поддерживается в цепочке птица^комар—»другое позвоночное животное, при этом основная роль в поддержании циркуляции принадлежит птицам; с птицами также может быть связан занос вируса на неэндемичные территории (Львов Д. К., 2000). ВЗН имеет широкий круг восприимчивых хозяев - он способен инфицировать многие виды птиц, млекопитающих (включая человека) и рептилий (Austin R. J. et al., 2004; Eidson M. et al., 2001; Chowers M. Y. et al., 2001; Weese J. S. et al., 2003; Miller D. L. et al., 2003). Клиническая картина вызываемого им заболевания у восприимчивых хозяев варьирует от бессимптомных форм до лихорадки и менингоэнцефалита.

Ареал ВЗН включает в себя Африку, Южную и Центральную Европу, Австралию и Южную Азию (Львов Д. К., 2000; Campbell G. L. et al., 2002). В России ВЗН циркулирует на территории Волгоградской, Астраханской, Ростовской областей и в Краснодарском крае (Атлас распространения природно-очаговых инфекций на территории Российской Федерации, 2001). В 90-е гг. XX века наблюдалась активизация очагов циркуляции ВЗН в пределах исконных эндемичных территорий (Tsai Т. F. et al., 1998; Triki Н. et al., 2001; Guthrie A. J. et al., 2003), а также интродукция вируса на Североамериканский континент (Lanciotti R.S. et al., 1999). Эти процессы характеризовались большим числом тяжёлых клинических форм и летальных исходов как среди заболевших людей, так и среди животных. Так, во время вспышек ЛЗН среди людей уровень смертности составил 4-12,5% (Tsai Т. F. et al., 1998; Update: West Nile Virus Encephalitis, 1999), некоторые эпизоотии среди лошадей характеризовались летальностью 38-57% (Castillo-Olivares J., and Wood I, 2004). Филогенетический анализ штаммов ВЗН, выделенных во время вспышек в различных частях ареала в конце ХХ-начале XXI вв., показал принадлежность большинства из них к генотипу la (Lanciotti R. S. et al., 2002).

Юг Западной Сибири связан с эндемичными по ВЗН территориями миграционными путями многих видов птиц. Для отдельных районов на юге Западной Сибири установлен и подтверждён сезонный занос перелётными птицами ВЗН 1а генотипа (Терновой В. А. и др., 2004). В то же время установление факта заноса ВЗН на юг Западной Сибири не дает ответа на вопрос о возможности формирования местных очагов циркуляции вируса. Для изучения этого процесса необходим комплексный эколого-вирусологический подход, важной составляющей которого являются современные сведения о фауне потенциальных участников трансмиссивного цикла ВЗН и эпизоотических процессах, протекающих в их популяциях. В отношении ВЗН-восприимчивых врановых птиц региона, в большинстве относящихся к

многочисленным видам, в настоящее время отсутствуют данные о колебаниях их численности и наличии эпизоотий, которые могут быть связаны с эпизоотической активностью ВЗН (УагешусЬ Б. А. е1 а1., 2004). В отношении популяций кровососущих комаров в степных и лесостепных районах юга Западной Сибири последние эколого-фаунистические исследования проводились в 60-70-х гг. XX века (Кухарчук Л. П., 1981), что не отражает современного состояния фауны, особенно в связи с произошедшими климатическими изменениями. Актуальным является также вопрос об участии в циркуляции ВЗН иксодовых клещей, многочисленных и эпидемиологически значимых кровососущих членистоногих юга Западной Сибири. Другим необходимым аспектом исследования является оценка эпидемического и эпизоотического потенциала ВЗН в регионе, что имеет практическое значение. Сезонные трансмиссивные заболевания людей, сопровождающиеся симптомами лихорадки или энцефалита, традиционно связываются с вирусами клещевого энцефалита или омской геморрагической лихорадки, однако в части случаев этиология остаётся не установленной. Учитывая патогенность ВЗН для многих видов животных, актуальным также является изучение роли ВЗН в заболеваниях сельскохозяйственных животных на юге Западной Сибири.

Цель и задачи исследования

Цель работы - изучение особенностей циркуляции вируса Западного Нила в различных ландшафтно-экологических условиях на юге Западной Сибири и оценка возможного формирования очагов циркуляции ВЗН. Для её достижения необходимо было решить следующие задачи:

1. В местах вероятного заноса ВЗН в разных ландшафтных зонах юга Западной Сибири выбрать природные экосистемы с наличием потенциальных участников трансмиссивного цикла ВЗН - птиц, мелких млекопитающих, кровососущих комаров и иксодовых клещей.

2. Провести сбор и анализ образцов от потенциальных участников трансмиссивного цикла для установления факта циркуляции среди них ВЗН.

3. Провести сравнительный анализ степени зараженности ВЗН участников трансмиссивного цикла с учётом климатических параметров сезона исследования для оценки возможного формирования природных очагов циркуляции ВЗН на юге Западной Сибири.

4. Исследовать возможность вовлечения в трансмиссивный цикл вируса случайных участников - сельскохозяйственных животных и людей.

5. Исследовать генетическое разнообразие ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Научная новизна

По результатам комплексных эколого-вирусологических исследований показана возможность формирования на юге Западной Сибири очагов циркуляции ВЗН, не связанных с сезонным заносом вируса перелётными

птицами. Впервые с использованием современных иммунологических и молекулярно-биологических методов была показана циркуляция ВЗН у диких птиц с разным миграционным статусом, мелких млекопитающих и иксодовых клещей на юге Западной Сибири. Впервые в условиях региона выявлена зависимость между уровнем зараженности участников трансмиссивного цикла ВЗН и климатическими характеристиками сезона исследования. Было показано, что основным параметром, влияющим на зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла, является длительность периода с температурным режимом >26°С в сезоне. На основании данных серологического мониторинга здоровых доноров и диагностики случаев заболевания, вызванного ВЗН у жителей Новосибирской области, показана эпидемическая напряжённость западносибирского очага циркуляции ВЗН. Филогенетический анализ полевых и клинических изолятов ВЗН, выделенных на юге Западной Сибири в 2003-2006 гг. показал их принадлежность к генотипу 1а и выявил генетическую близость со штаммами ВЗН, изолированными от погибших пациентов во время вспышки ЛЗН в 1999 г. в Волгограде.

Теоретическая и практическая значимость

Получены современные данные об особенностях циркуляции вируса Западного Нила в различных ландшафтно-экологических условиях на юге Западной Сибири, которые могут быть использованы при диагностике сезонных случаев лихорадок и менингоэнцефалитов неясной этиологии у населения этого региона. По результатам выявления случаев заболевания людей, в структуре инфекционных заболеваний населения в Новосибирской области установлена новая нозологическая форма - лихорадка Западного Нила. Генетическая близость западносибирских полевых и клинических изолятов ВЗН с патогенными для людей штаммами вируса, изолированными на юге России, свидетельствует о наличии эпидемического потенциала у ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Материалы диссертации вошли в отчёты:

- по Договору между ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора и Новосибирским областным фондом поддержки науки и высшего образования при Администрации Новосибирской области по теме «Идентификация и генотипирование вируса Западного Нила, циркулирующего в Новосибирской области»;

- по научной теме гранта РНП.2.1.1.7515 ведомственной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы».

Совместно со специалистами ТУ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Новосибирской области разработан Приказ «О мерах по диагностике лихорадки Западного Нила у людей в Новосибирской области», вступивший в силу с 25.07.2006 г.

Положения, выносимые на защиту 1. Показана циркуляция вируса Западного Нила среди диких птиц с разным

миграционным статусом, мелких млекопитающих и иксодовых клещей в различных экосистемах юга Западной Сибири.

2. Зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла в экосистемах юга Западной Сибири зависит от длительности периода с температурами >26°С в сезоне. В степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири показано формирование природных очагов ВЗН, не связанных с сезонным заносом.

3. Показана эпидемическая напряжённость западносибирских очагов циркуляции ВЗН на основании данных серомониторинга здоровых доноров, а также по выявлению случаев заболевания, вызванного ВЗН у жителей Новосибирской области.

4. Полевые и клинические изоляты ВЗН, выделенные в Западной Сибири в 2003-2006 гг., принадлежат к генотипу 1а и имеют высокий уровень гомологии с патогенными для людей штаммами ВЗН, изолированными на юге России.

Апробация работы и публикации

Материалы исследований были представлены на Всероссийской научной конференции «Сибирская зоологическая конференция» (Новосибирск, 2004), Международной научно-практической конференции «Болезни диких животных» (Покров, Владимирская область, 2004), Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты» (Омск, 2004), Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (Санкт-Петербург, 2004), Межрегиональной научной конференции «Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» (Новосибирск, 2005), Российской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Новосибирск, 2005), Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни: Проблемы здравоохранения и военной медицины» (Санкт-Петербург, 2005), Российской научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2006), на Международном семинаре «Emerging Diseases: Tick-transmitted and influenza», (Новосибирск, 2007), III Межрегиональной научной конференции, посвященной 80-летию профессора К.П. Фёдорова (Новосибирск, 2009).

По материалам диссертации опубликовано 20 научных работ. Полученные в работе фрагменты гена белка Е ВЗН, выделенного от птиц и заболевших людей, депонированы в базу данных GenBank (номера DQ059560-DQ059564, DQ304544, DQ304545).

Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 181 страницах, содержит 25 таблиц и 12

рисунков. Состоит из введения, глав «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Заключение», выводов, списка литературы и «Приложения». Список литературы содержит 217 источников, из них 159 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа была выполнена в 2003-2008 гг. на базе ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

1. Места сбора материала и характеристика сезонов. В трёх ландшафтных зонах - степной, (Северная Кулунда, Карасукский р-н Новосибирской обл.), лесостепной (южная часть Барабинской лесостепи, Здвинский р-н Новосибирской обл.) и подзоне осиново-берёзовых лесов (г. Томск и его окрестности) на основании орнитологических данных (Рябицев В. К., 2008) были определены места вероятного заноса ВЗН перелётными птицами, в которых выбраны биотопы для сбора полевого материала. Места обитания птиц были визуально обследованы на наличие эпизоотий.

Данные по климатическим параметрам сезонов 2003-2004 гг. и 2006-2007 гг. в выбранных районах были получены с сервера Архива метеонаблюдений http://meteo.infospace.ru соответствующих метеостанций.

2. Материал для исследования. Полевой материал. В выбранных районах за указанный период было обследовано 162 птицы, 229 особей мелких млекопитающих; в степной и лесостепной зонах собрано 11000 имаго кровососущих комаров, в подзоне осиново-березовых лесов - 2008 особей иксодовых клещей всех возрастных стадий. У позвоночных животных для анализа были взяты образцы внутренних органов - печени, селезёнки, головного мозга, дополнительно у млекопитающих - мочевые пузыри. Сбор полевого материала, транспортировку и хранение проводили по методикам, описанным ранее (Терновой В. А. и др., 2004; Кононова Ю. В. и др., 2007; Москвитина Н. С. и др., 2008). Полевой материал из Томской области был любезно предоставлен сотрудниками кафедры зоологии позвоночных Томского госуниверситета.

Сыворотки крови сельскохозяйственных животных (лошадей и КРС), собранные в сезоне 2004 г. были любезно предоставлены заведующим вирусологическим отделом Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории к.в.н. В. И. Аксёновым.

Клинический материал. Сыворотки крови здоровых доноров были получены в сезоне 2004 г. из клинико-диагностических лабораторий Здвинской и Карасукской Центральных районных больниц. Анамнестические анкетные данные доноров включали сведения о поле, возрасте и месте проживания. Происхождение клинического материала от заболевших людей было описано ранее (Терновой В.А. и др., 2006), исследование этого материала утверждено Этическим комитетом ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» от 10.02.2006.

3. Иммунологические методы. Выявление антигена ВЗН. В качестве диагностического вирусного антигена использовался белок Е - основной белок

оболочки ВЗН (Львов Д. К., 2000). Выявление вирусного антигена из образцов полевого материала проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) по схеме, описанной ранее (Терновой В. А. и др., 2004). Для выявления случаев микст-инфекции с родственными флавивирусами (вирусы омской геморрагической лихорадки, клещевого энцефалита) образцы были проанализированы на наличие антигена этих вирусов по той же методике.

Определение титров специфических антител в сыворотках крови людей проводили с использованием тест-систем «ВектоНил-IgG», «ВектоВКЭ-IgG», («Вектор-Бест», Новосибирск) согласно инструкции производителя.

Определение титров специфических антител в сыворотках крови сельскохозяйственных животных проводили с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации (РН) согласно рекомендациям (Методические рекомендации по лабораторным и полевым исследованиями арбовирусов, 1975).

4. Молекулярно-биологические методы. Выделение РНК, синтез кДНК и полимеразную цепную реакцию (ПЦР) из образцов полевого и клинического материала проводили по методике, описанной ранее (Терновой В. А. и др., 2004).

Определение нуклеотидных последовательностей. Определение нуклеотидной последовательности выделенного ПЦР-фрагмента проводили на автоматическом секвенаторе «Beckman CEQ2000XL» (Beckman Coulter, США) с использованием наборов реактивов CEQ DTCS Kit (Beckman Coulter, США) согласно инструкции производителя. Нуклеотидная последовательность всех фрагментов была определена по обеим цепям, определение проводили дважды, в независимых экспериментах.

Анализ последовательностей. Для генотипирования выявленных вариантов ВЗН проводили филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей фрагмента гена белка Е длиной 322 нуклеотидных остатка (н. о.). Для сравнения использовали соответствующие последовательности других штаммов ВЗН из базы данных GenBank при помощи компьютерной программы VectorNTI Suite 8. Обработка данных проводилась с использованием программы GenDoc.

Построение филогенетического дерева осуществляли с использованием программы MEGA 4. Для оценки достоверности группирования применяли бутстреп-тест. Топология дерева была восстановлена при помощи метода объединения ближайших соседей. Индексы статистической поддержки узлов указаны для значений, превышающих 70%.

5. Вирусологические методы. Изоляцию ВЗН из полевого и клинического материала проводили по методике, описанной ранее (Терновой В. А. и др., 2006).

6. Статистические методы. Статистическую обработку результатов проводили по стандартной методике (Сырцова Л.А. и др., 2003).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Циркуляция ВЗН в экосистемах на юге Западной Сибири

1.1. Краткая характеристика биотопов в местах заноса ВЗН

В степной и лесостепной зонах выбранные биотопы были связаны с колониями грачей (берёзовые колки, лесополосы), а также с местами обитания водно-околоводных птиц, в подзоне осиново-берёзовых лесов - с местами обитания мелких воробьиных птиц, большинство из которых являются дальними мигрантами. В целом, для большинства биотопов было характерно присутствие диких перелётных птиц и кровососущих членистоногих, способных вовлекаться в циркуляцию ВЗН. В то же время биотопы различались по экологическим условиям, влияющим на обитание и активность участников трансмиссивного цикла, и степенью антропогенной нагрузки.

1.2. Циркуляция ВЗН среди позвоночных животных

Птицы. В выбранных экосистемах из участников трансмиссивного цикла ВЗН в первую очередь были обследованы птицы - основные позвоночные хозяева вируса. Результаты анализа внутренних органов на наличие ВЗН у птиц Северной Кулунды в сезонах 2003-2004 гг., южной лесостепи в сезоне 2004 г. и подзоны осиново-берёзовых лесов сезонов 2006-2007 гг. представлены в табл. 1.

Таблица 1

Результаты анализа внутренних органов птиц на наличие ВЗН

Характеристика выборки Северная Кулунда Южная лесостепь, 2004 Подзона осиново-березовых лесов

2003 2004 2006 2007

Общее количество 32 16 44 37 33

Отряды, число видов воробьеобразные (Ра$$еп[огтез) 2 5 4 16 13

соколообразные Ракот/огтея — — 1 —

ржанкообразные СИагас1гН/огтез — — — 1 1

стрижеобразные АроЛ/огтез — — — 1

гусеобразные Атеп/огте$ — — — 3

ВЗН- позитивные антиген, % 18.8'1-1.1 93,8 38,6±14,8 43,2±16,5 42,8±17,5

РНК, % 15,6±13,1 62,5±25,7 20,5±12г3 0 0

Подавляющее большинство добытых во всех ландшафтных зонах птиц относились к воробьеобразным. Высоко чувствительные к ВЗН птицы семейства врановых (Сопчс1ае) составляли большую часть сборов в Северной Кулунде и южной лесостепи, в выборке птиц лесных биотопов подзоны осиново-берёзовых лесов преобладали славковые (БуЫШае), дроздовые

(ТигсИс1ае) и вьюрковые (Рпп&ШсЬе) птицы. Обследование колоний грачей в Северной Кулунде в 2003 г. выявило наличие мёртвых птиц без видимых повреждений.

Сравнение уровня зараженности птиц по сезонам и местам сбора материала выявило определённые различия. При сопоставлении сезонов 2003-2004 гг. в Северной Кулунде можно видеть, что в 2004 г. уровень зараженности птиц по обоим маркерам был выше, чем в 2003 г. Среди ВЗН-позитивных грачей 2003 г. часть была найдена мёртвыми, что позволяет считать ВЗН возможной причиной гибели птиц.

В южной лесостепи в целом, как по выявлению антигена так и РНК ВЗН, процент инфицированных птиц в 2004 г. был меньше, чем птиц, добытых в том же сезоне в Северной Кулунде.

За весь период исследования у птиц из подзоны осиново-берёзовых лесов РНК ВЗН не была выявлена ни в одном образце внутренних органов, при этом антиген ВЗН встречался у птиц с одинаковой частотой в течение двух сезонов исследования.

Млекопитающие. На предмет вовлечения в циркуляцию ВЗН были обследованы мелкие млекопитающие. Результаты анализа внутренних органов на наличие ВЗН у мелких млекопитающих Северной Кулунды и южной лесостепи в сезоне 2004 г. и подзоны осиново-берёзовых лесов сезонов 20062007 гг. представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты анализа внутренних органов мелких млекопитающих на наличие ВЗН

Характеристика выборки Северная Кулунда, 2004 г. Южная лесостепь, 2004 г. Подзона осиново-березовых лесов

2006 2007

Общее количество 55 18 53 102

Отряды, число видов грызуны (Rodentia) 8 3 4 6

насекомоядные (Insectívora) 3 5 1

хищники (Carnivora) 1

ВЗН- позитивные антиген, % 40,0±13,2 100 34,0±13,1 61,8±9,5

РНК, % 12,7±9,0 47,4±24,2 9,4±8,0 2,0

Из обследованных мелких млекопитающих в степной зоне большую часть составили грызуны, среди которых преобладали серые полёвки (МкгоШз), а также три вида мышей, красная полёвка и степная пеструшка. Насекомоядные были представлены тремя видами бурозубок (27% от всех добытых животных); также в сборах присутствовали две особи мелкого хищника ласки. В сборах южной лесостепи преобладали насекомоядные, представленные четырьмя видами бурозубок и водяной куторой, среди отловленных грызунов большую часть составили красные полёвки (лесные полёвки, СШШопоту^), узкочерепная полёвка и полевая мышь. В подзоне осиново-берёзовых лесов в

течение двух сезонов основную часть сборов составили грызуны, среди которых преобладали лесные полёвки (три вида) и полевая мышь. Кроме них в сезоне 2006 г. встречалась обыкновенная бурозубка, а в сезоне 2007 г. -пашенная полёвка и полёвка экономка.

Можно видеть, что в сезоне 2004 г. частота встречаемости антигена и РНК ВЗН у зверьков южной лесостепи была значительно выше, чем у животных в Северной Кулунде.

При сравнении заражённости ВЗН мелких млекопитающих из подзоны осиново-березовых лесов можно видеть, что в сезоне 2007 г. вирусный антиген встречался почти в два раза чаще, чем у зверьков в сезоне 2006 г., в то время как РНК ВЗН была выявлена только у двух красных полевок.

1. 3. Экология, численность и циркуляция ВЗН среди кровососущих членистоногих

Комары. В степной и лесостепной зонах были проведены эколого-фаунистические исследования популяций кровососущих комаров. Результаты исследований приведены в табл. 3.

Таблица 3

Результаты эколого-фаунистических исследований кровососущих комаров Северной Кулунды и южной лесостепи в летний период 2004 г.

Характеристика выборки Северная Кулунда Южная лесостепь

Время сборов II половина июня I половина июля

Общее количество 3170 7380

рода Anopheles, Ochlerotatus, Aedes,

Фауна Coquillettidia, Culex

число видов 16 17

Экологические группы (число видов) холодолюбивые 2 3

умеренно теплолюбивые 11

теплолюбивые 3

Трофические полифаги 9

связи орнитофильные 2

(число видов) антропофильные 5 6

Виды-эудоминанты O.flavescens, Ae. cinereus cinereus, Coq. richardii О. dorsalis, 0. excrucians, O.flavescens, Coq. richardii, Cx. modeslus

В различных биотопах Северной Кулунды и южной лесостепи были обнаружены комары, относящиеся к 5 родам, при этом в степной зоне было выявлено 16 видов, а в лесостепной - 17 видов комаров. По принадлежности к экологическим группам собранные комары были представлены в основном мезотермофильными (умеренно теплолюбивыми) видами, по трофическим связям большинство отловленных комаров относились к видам-полифагам.

Видами-эудоминантами в Северной Кулунде (более 15% от общего числа сбора) были О. flavescens, Ае. cinereus cinereus, Coq. richardii, в южной лесостепи - О. dorsalis, О. excrucians, О. flavescens, Coq. richardii, Сх. modestus. По экологическим требованиям почти все они относились к мезотермофильным (за исключением термофильного Сх. modestus). По трофическим связям виды-эудоминанты Северной Кулунды характеризовались предпочтительным питанием на людях и птицах, в то время как в южной лесостепи большинство эудоминантов относились к видам-полифагам. Различия в предпочтительных трофических связях эудоминантов степных и лесостепных районов позволяют объяснить высокую зараженность птиц в Северной Кулунде в противоположность высокой зараженности мелких млекопитающих в южной лесостепи.

За период, прошедший с последних эколого-фаунистических исследований в этих районах (60-70-е гг. XX века), было отмечено изменение в структуре видового состава комаров, выражающееся в замещении некоторых олиготермофильных (холодолюбивых) видов на мезотермофильные. В целом фауна комаров обеих ландшафтных зон была широко представлена мезотермофильными видами, однако для большей части биотопов степной зоны было характерно присутствие комаров термофильных видов, численность которых в отдельных местах достигала 6-12% при крайне редкой (менее 1%) встречаемости комаров холодолюбивых видов.

Среди встречающихся в обеих ландшафтных зонах комаров были выявлены эпидемиологически значимые виды, для которых на эндемичных по ВЗН территориях юга России и в США документированы изоляция вируса или выявление его РНК (http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnne/mosquitoSpecies.htm; Fyodorova M. V. et al., 2006). Среди видов-эудоминантов к ВЗН-восприимчивым относились Ае. cinereus cinereus, О. dorsalis, Coq. richardii и Сх. modestus.

Клещи. В отношении иксодовых клещей подзоны осиново-берёзовых лесов были проведены эколого-фаунистические исследования, а также выполнен анализ клещей на наличие маркеров ВЗН. Результаты обследования иксодовых клещей на наличие ВЗН представлены в таблице 4 (стр. 12).

В сезонах 2006-2007 гг. основную часть сборов клещей составляли 1х. persulcatus и Ix. pavlovskyi, крайне редко встречались личинки D. reticulatus, а в сезоне 2007 г. - личинки Ix. trianguliceps. ВЗН-позитивные клещи встречались среди представителей видов Ix. persulcatus и Ix. pavlovskyi всех возрастных стадий.

Пищевые предпочтения для конкретного вида клещей были установлены по питанию преимагинальных стадий. Предпочтение к питанию на птицах имели нимфы и отчасти имаго Ix: pavlovskyi, в то время как личинки этих клещей обнаруживались исключительно на мелких млекопитающих, для нимф таёжного клеща птицы были скорее случайными прокормителями. Большая часть ВЗН-позитивных взрослых клещей lx. pavlovskyi была собрана с растительности, что позволяет предположить существование трансстадийной передачи вируса и отнести клещей Ix. pavlovskyi к эпидемиологически

значимым в передаче ВЗН. В случае 1х. репикаШ наблюдалась гораздо меньшая орнитофильность, вместе с тем маркеры ВЗН широко встречались как у имаго с растительности, так и у преимагинальных стадий, питающихся на млекопитающих и рептилиях. Встречаемость вирусных маркеров у клещей всех возрастных стадий при наличии небольшого процента особей, питающихся на птицах, позволяет предполагать трансстадийную передачу, а также указывает на протекание в организме прокормителей продуктивной ВЗН-инфекции.

Таблица 4

Результаты обследования иксодовых клещей подзоны осиново-берёзовых лесов на наличие ВЗН в сезонах 2006-2007 гг.

Характеристика выборки 2006 2007

Общее количество (все возрастные стадии) 1429 579

Видовой состав. % 1 1х. регзикашх 48,9 62,0

1х. рау/опку! 50,0 37,3

О. гейси1аш 1,1 0,5

1х. 1пап%иИсер5 — 0,2

ВЗН-позитивные, виды 1х. репи1саш$ антиген, % 10,1±3,3 оз

РНК, % 11,0±2,4 0

й. \pavlovskyi антиген, % 7,8±1,9 1,4

РНК, % 4,3±1,5 0

Общая зараженность ВЗН антиген, % 8,8±1,4 0,7

РНК, % 7,4±1,3 0

Для исследованных клещей сезона 2006 г. было характерно изменение частоты встречаемости маркеров ВЗН в зависимости от времени сборов. В конце апреля и в мае у преобладающих в сборах имаго вирусный антиген выявлялся в несколько раз чаще, чем РНК ВЗН. В июньских сборах клещей соотношение вирусных маркеров антиген/РНК было примерно одинаковым, причём оба маркера выявлялись у представителей всех возрастных стадий, что свидетельствует об активной репликации вируса в организме клещей в этот период сезона. Самая низкая за сезон частота встречаемости маркеров ВЗН была отмечена в июльских сборах клещей, в которых преобладали преимагинальные стадии.

В сезоне 2007 г. антиген ВЗН был обнаружен только в двух пулах имаго 1х. рггвикаш (0,3%) и 1х. рт1оузку1 (1,4%), собранных с растительности в середине мая, РНК ВЗН не была обнаружена ни в одной пробе клещей этого сезона.

1. 4. Влияние климатических параметров сезона на зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла и возможность формирования местных очагов циркуляции ВЗН

Исходя из результатов обследования участников трансмиссивного цикла ВЗН, было изучено влияние климатических особенностей сезонов на уровень заражённости птиц, мелких млекопитающих и иксодовых клещей.

Длительность сезона активности во всех ландшафтных зонах рассчитывалась следующим образом: его начало приходилось на начало активности имаго клещей и появление зимующих самок комаров - в Северной Кулунде и южной лесостепи это начало апреля, в подзоне осиново-берёзовых лесов - вторая декада апреля. Концом сезона активности членистоногих на всех исследуемых территориях считался сентябрь, когда прекращалась активность самок зимующих видов комаров.

В выделенный период года было подсчитано количество часов с допустимыми и оптимальными для членистоногих переносчиков условиями, а также количество часов с температурой, благоприятной для репликации ВЗН в их организме. У иксодовых клещей активность отмечается при температуре выше 0°С (Таежный клещ Ixodes persulcatus Schulze (Acariña, Ixodidae): Морфология, систематика, экология, медицинское значение, 1985); для комаров допустимый диапазон температур составляет 2-30°С, оптимальный - 7-25°С, при допустимой скорости ветра до 6 м/с и оптимальной - до 4 м/с в открытых биотопах (Кухарчук JI. П., 1980). Эффективная репликация ВЗН в комарах отмечается при температурах выше 26°С (Cornel A. J. et al., 1993), а в иксодовых клещах - выше 25°С (Азарова И. А., 2000). Поскольку в степной и лесостепной зонах в летний период основными кровососущими членистоногими являются комары, для этих районов было рассчитано только количество часов с температурами от 26°С. Эти данные, а также общая зараженность ВЗН позвоночных и иксодовых клещей, представлены в табл.№5 и №6.

Таблица 5

Характеристика сезонов активности членистоногих переносчиков ВЗН в сопоставлении с данными частоты встречаемости вирусных маркеров у участников трансмиссивного цикла в Северной Кулунде и южной лесостепи

Параметры сезона Северная Кулунда Южная лесостепь

2003 2004 2004

Количество часов с температурой выше 0° 3966 4104 3744

Количество часов с температурой 2-30°С (+ скорость ветра до 6 м/с) 3840 (3654) 3810(3540) 3438 (2748)

Количество часов с температурой 7-25°С (+ скорость ветра до 4 м/с) 3012(2514) 2976 (2880) 2724(1668)

Количество часов с температурой выше 26°С 390 426 •270

Общая зараженность ВЗН птицы антиген, % 18,8±14,1 93,8 38,6±14,8

РНК, % 15,6±13,1 62,5±25,7 20,5±12,3

млекопитающие антиген, % н.и. 40,0±13,2 100

РНК, % н.и. 12,7±9,0 47,4±24,2

Примечания: В скобках указано количество часов, когда оба параметра присутствовали

одновременно; н.и. - не исследовали

При сравнении двух сезонов в Северной Кулунде можно видеть, что в сезоне 2004 г. уровень заражённости ВЗН птиц был выше, чем в 2003 г., причем это было справедливо при оценке по обоим маркерам. При сравнении в сезоне 2004 г. уровня заражённости птиц степной и лесостепной зон также можно видеть зависимость от климатических параметров, в то время как у мелких млекопитающих подобной зависимости не наблюдалось. В этом случае можно предположить влияние на этот процесс численности комаров, в частности, высокой численностью видов-полифагов.

При рассмотрении климатических параметров в районе подзоны осиново-берёзовых лесов были обнаружены подобные закономерности, а также выявлены некоторые особенности, характерные именно для этой территории. Поскольку на этой территории в качестве участников трансмиссивного цикла ВЗН рассматривались иксодовые клещи с многолетним жизненным циклом, был также охарактеризован сезон 2005 г., предшествовавший сезону исследования (табл. 6).

Таблица 6

Характеристика сезонов активности членистоногих переносчиков ВЗН в сопоставлении с данными частоты встречаемости вирусных маркеров у участников трансмиссивного цикла в подзоне осиново-берёзовых лесов

Параметры сезона Год

2005 2006 2007

Количество часов с температурой выше 0°С 3708 3708 3900

Количество часов с температурой 2-30°С' 3618 3540 3846

Количество часов с температурой 7-25°С' 2868 2752 3048

Количество часов с температурой выше 26°С (25°С) 234(312) 162(252) 144 (222)

Общая зараженность ВЗН клещи (все виды и стадии) антиген, % н.и. 8,8±1,4 0,7

РНК, % н.и. 7,4±1,3 0

птицы антиген, % н.и. 43,2±16,5 42,4±17,5

РНК, % н.и. 0 0

млекопитающие антиген, % н.и. 34,0±13,1 61,8±9,5

РНК, % н.и. 9,4±8,0 2,02

Примечания:

В скобках указано количество часов, когда оба параметра присутствовали одновременно;

1 - скорость ветра не приводится, т.к. в течение сезона количество дней со скоростью ветра больше 4 м/с не превысило 3-4 дней; н.и. - не исследовали

При анализе распределения вирусных маркеров у клещей можно видеть, что в сезоне 2006 г. антиген ВЗН и вирусная РНК встречались у клещей в целом почти одинаковой частотой, в то время как в сезоне 2007 г. вирусный антиген встречался на порядок реже, а РНК вируса вообще не выявлялась. Сезон 2006 г.

характеризовался наименее благоприятными для активности членистоногих переносчиков условиями, однако ВЗН-позитивные имаго и часть нимф, собранные в его начале, с большой вероятностью были инфицированы ВЗН в предыдущем сезоне до перехода в диапаузу. Сезон 2005 г. по условиям для репликации вируса был наиболее благоприятным, что способствовало развитию продуктивной инфекции у клещей, показателем которой была высокая частота встречаемости вирусной РЖ. Таким образом, на процесс накопления вируса в клещах в сезон исследования оказывают влияния климатические условия предыдущего сезона.

У мелких млекопитающих, отловленных в сезоне 2006 г., антиген ВЗН встречался почти в два раза реже, чем у животных, добытых в 2007 г., а вирусная РНК, наоборот, выявлялась чаще в 2006 г. Наличие вирусной РНК является показателем эффективности репликации вируса, и в случае с мелкими млекопитающими также можно видеть зависимость между частотой встречаемости этого маркера и количеством времени с благоприятными для репликации вируса условиями. Что касается сравнения встречаемости вирусных маркеров у птиц, можно предположить, что примерно одинаковая частота встречаемости антигена ВЗН при отсутствии вирусной РНК в течение двух сезонов могла быть связана с видовой невосприимчивостью обследованных птиц.

Общим для всех сезонов и районов критическим параметром, определяющим степень продуктивности ВЗН-инфекции в членистоногих переносчиках и, как следствие, у позвоночных животных, было количество времени с температурами, благоприятными для репликации ВЗН. При рассмотрении в качестве основных переносчиков комаров на эффективность репликации вируса в них оказывает влияние температурный режим сезона исследования, а при рассмотрении в качестве векторов иксодовых клещей следует учитывать температурный режим предыдущего сезона. Влияние этого параметра на развитие ВЗН-инфекции у позвоночных животных также справедливо в случае мелких млекопитающих и восприимчивых к вирусу птиц.

В заключение можно сделать вывод, что в природных экосистемах юга Западной Сибири среди участников трансмиссивного цикла ВЗН имеет место циркуляция вируса, интенсивность которой зависит от длительности определённого температурного режима. Подтверждение факта циркуляции ВЗН, не связанной с сезонным заносом, свидетельствует о существовании на выбранных территориях природных очагов ВЗН.

2. Участие в трансмиссивном цикле ВЗН случайных хозяев -сельскозяйственных животных и людей

2.1. Сельскохозяйственные животные

Серологический мониторинг. Сельскохозяйственные животные -крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, лошади и, в отдельных частях ареала, верблюды - имеют разную видовую восприимчивость к ВЗН, однако у всех их после контакта с вирусом формируется иммунный ответ (Васильев А. В. и др.,

2005).

Серомониторинг антител к ВЗН у сельскохозяйственных животных был проведён в сезоне 2004 г. у коров и лошадей, сыворотки крови которых были собраны соответственно в деревнях Карасукского (район Северной Кулунды) и Здвинского (юг Барабинской лесостепи) районов Новосибирской области. Частота встречаемости антител к ВЗН в РТГА составила у коров 7,8±5,0% (9 серопозитивных животных из 115), у лошадей - 9,2±6,6% (7 серопозитивных из 76). Для исключения возможного серологического перекрёста антител к встречающимся в Новосибирской области родственным флавивирусам (вирус ОГЛ, ВКЭ) с ВЗН, позитивные по наличию антител к ВЗН сыворотки были исследованы в РТГА с антигенами этих флавивирусов, а также исследованы в РН с ВЗН. Антитела к ВКЭ и вирусу ОГЛ в этих сыворотках обнаружены не были, а РН подтвердила наличие в них вируснейтрализующих антител, что свидетельствует о контакте серопозитивных животных с ВЗН.

Относительно частоты встречаемости антител можно отметить, что у коров и лошадей степной и лесостепной зон юга Западной Сибири она была сравнима с таковой у этих животных в Астраханской области в отдельные годы (Васильев А. В. и др., 2005).

Заболеваемость. По результатам ретроспективного анализа заболеваемости лошадей из разных районов Новосибирской области в период с апреля по сентябрь в 2004-2008 гг. с использованием данных годовых отчётов Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории у этих животных не было зарегистрировано случаев заболевания с неврологическими симптомами.

2.2. Люди

Серологический мониторинг. Заболевание людей, вызванное ВЗН, в большей части случаев протекает бессимптомно, в этом случае показателем контакта с вирусом является наличие антител. Результаты обследования

Таблица 7

Циркуляция антител к ВЗН и ВКЭ (вирусу ОГЛ) у здоровых доноров Карасукского (Северная Кулунда) и Здвинского (южная лесостепь) районов Новосибирской области

Характеристика выборки Карасукский район Здвинский район

Количество обследованных 175 45

Возрастные группы дети и подростки до 14 лет, % 2,8 —

лица трудоспособного возраста, % 74,0 97,8

лица старше 55 лет, % 23,2 2,2

Место жительства горожане, % 41,7 —

сельские жители, % 58,3 100

Пол женщины, % 75,4 75,6

мужчины, % 24,6 24,4

Доля серопозитивных доноров к ВЗН, % 7,4±3,9 26,7±13,3

к ВЗН+ВКЭ, % 6,3±3,6 8,9±8,5

сывороток крови здоровых доноров из Карасукского и Здвинского районов Новосибирской области в 2004 г. представлены в табл. 7.

По анамнестическим данным все доноры длительное время проживали в указанных районах, т.е. не относились к категории приезжих. Обследованные доноры были разделены на возрастные группы, а также по месту жительства и полу. При анализе сывороток доноров на антитела к ВЗН было принято во внимание, что оба района являются эндемичными по вирусу ОГЛ (антигенный комплекс клещевого энцефалита), а также учитывалась у кого-либо из доноров возможная вакцинация против ВКЭ в прошлом, поэтому позитивные по наличию антител к ВЗН сыворотки были проанализированы на антитела к родственным флавивирусам.

По результатам серологического мониторинга здоровых доноров, проживающих в Северной Кулунде и южной лесостепи, можно заключить, что на момент сбора сывороток часть населения этих районов имела контакт с ВЗН. Контакт с вирусом чаще отмечался у жителей лесостепных районов, что может быть обусловлено высокой численностью комаров, а также меньшей степенью урбанизации. Частота встречаемости антител к ВЗН среди здоровых доноров юга Западной Сибири, сопоставимая с таковой в природных очагах ВЗН на юге России (8-10%) (Львов Д. К. и др., 2000; Москвитина Э.А. и др., 2007), свидетельствует об эпидемической напряжённости западносибирских очагов ВЗН.

Заболеваемость. В летний период 2004 г. в отдел флавивирусов и вирусных гепатитов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» поступил клинический материал (цельная кровь и сыворотки) от трёх пациентов с симптомами лихорадки (два случая) и энцефалита (один случай) неясной этиологии. В отношении двух пациентов в лечебных учреждениях возникли затруднения в постановке точного диагноза, один пациент в лечебное учреждение не обращался. Предварительный анализ клинического материала позволил исключить в качестве причины заболевания ВКЭ и вирус ОГЛ. Результат анализа клинического материала на наличие маркеров ВЗН, а также краткие данные по клинической картине приведены в табл. 8.

Таблица 8

Краткие клинические данные и результаты анализа на маркеры ВЗН материала от

пациентов

№ Пол, возраст, место жительства Сроки заболевания Основные симптомы Лабораторная диагностика

1 Мужчина, 33 года, житель Новосибирской обл. 20.05.04 -11.06.04 Тяжелая лихорадка ДО к ВЗН 1:32001:6400, РНК ВЗН в крови

2 Мальчик, 7 лет, житель г. Новосибирск 24.06.04 -23.07.04 Энцефалит ДО к ВЗН 1:12800-1:6400

3 Женщина, 28 лет, житель г. Новосибирск 19.07.04 -21.07.04 Лихорадка с катаральным воспалением ДО к ВЗН 1:4001:200, выделение вируса

Несмотря на разную степень тяжести заболевания, в анамнезе всех трёх

пациентов можно выделить общие черты. У всех пациентов за несколько дней до заболевания было пребывание в природных биоценозах, а также отсутствие выездов на эндемичные по ВЗН территории, что позволило исключить завозной характер заболевания. Следует также отметить, что двое пациентов (№1 и №3) были вакцинированы против клещевого энцефалита и имели выраженный титр антител против этой инфекции, однако это не защитило их от заболевания JI3H.

3. Генотипирование ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири

Из части образцов, в которых были выявлены вирусные маркеры, с помощью ОТ-ПЦР были получены фрагменты кДНК, соответствующие участку гена белка Е ВЗН, которые были секвенированы. Секвенированные образцы имели следующее происхождение: образцы от серых ворон из Северной Кулунды 2003 г. (ChCorvus 10-03, ChCorvus3I-03), грачей из южной лесостепи 2004 г. (ChRook7-04, ChRookl4-04, ChRook27-04), от красной полёвки из южной лесостепи 2004 г. (ChRodent-04), от заболевших людей (Пациенты №1 и №3, ChiWS-04 и HumWS-04 соответственно) и два пула имаго клещей 1х. persulcatus и Ix. Pavlovskiy из подзоны осиново-берёзовых лесов 2006 г. (Tomsk-1, Tomsk-2).

Генотипирование исследуемых нуклеотидных последовательностей позволило идентифицировать эти последовательности как относящиеся к генотипу 1а вируса Западного Нила. Западносибирские полевые и клинические изоляты ВЗН 2003-2006 гг. оказались высоко гомологичными (не более 1-3% расхождения) с волгоградским штаммом VLG-4 ВЗН.

При анализе филогенетического дерева (рис. 1, стр. 20) можно видеть, что они характеризуются невысоким уровнем генетических отличий и не имеют гостапьной (хозяинной) специфичности. Можно видеть, что западносибирские изоляты ВЗН 2003-2006 гг. кластеризуются вместе с западносибирскими изолятами, выделенными в 2002 г., а также со штаммами ВЗН, изолированными на юге Европейской части России.

Полученные результаты согласуются с орнитологическими данными по путям миграций грачей, что может служить доказательством заноса ВЗН этими птицами на юг Западной Сибири с эндемичных территорий на юге РФ. Генетическая близость исследованных изолятов с патогенными для людей штаммами ВЗН юга России позволяет предполагать наличие эпидемического потенциала у ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Генотип la

ANAS7 ♦Tomsk-2

ANAS4 VLG-4 I Щ-27924 I VRAN07 I CORWUS4 I

♦Tomsk-1

VRAN08 -*ChiWS-04 7)3jA ChRook7-04 ' A ChRook14-04 • ChRodent-04 i-*HumWS-04 ЧрА ChCorvus1t>-03 1— 4 ChCorvus31-03 UchRook27-04

Россия. Западная Сибирь. 2002 г.

Россия. Западная Сибирь, 2006 г Россия. Западная Сибирь, 2002 г.

Россия, Волгоград

Россия. Западная Сибирь. 2002 г.

Россия. Западная Сибирь, 2006 Россия, Западная Сибирь, 2002 г.

Россия, Западная Сибирь. 2003-2004 гг.

Италия Марокко

Россия. Астрахань Мексика

III

Sarafend WNFCG

-В856

NC_001563 - 87-103

R097-50 Румыния

Italy 1998 98-111 I — 04.05 I Г- Ases9-901 МехОЗ B-SP B-LP 6-LP

NY2000-crow265 6-SP

NJ MQ5488 NY99-eql>s 2741 - 385-99 NY99-flamingo382-99 ' NY2000-grouse3282 Eg 101 Египет

Kunjin Австралия

Израиль

Уганда

США

Чехия - Krnd88-190

Россия. Краснодарский край

Рис. 11. Филогенетическое дерево полевых и клинических изолятов и штаммов ВЗН, построенное на основании сравнения нуклеотидных последовательностей фрагмента гена белка Е (322 н. о.) методом «объединения ближайших соседей». Линия отражает генетическую дистанцию. Бутстрепы приведены для значения индекса поддержки узлов >70%.

Примечания:

А. - птицы (серые вороны и грачи); • - красная полёвка; * - люди; ♦ - клещи 1х. persulcatus и Ix. Pavlovskiy

выводы

1. Выявлена циркуляция ВЗН среди воробьеобразных птиц (Passeriformes) мигрирующих и оседлых видов в степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири. Частота встречаемости антигена и РНК ВЗН у птиц составила: в Северной Кулунде в сезоне 2003 г. 18,8±14,1% (антиген) и 15,6±13,1% (РНК), в сезоне 2004 г. - 93,8% (антиген) и 62,5±25,7% (РНК); в южной лесостепи в сезоне 2004 г. антиген ВЗН был обнаружен у 38,6±14,8% птиц, вирусная РНК - у 20,5±12,3%. У птиц подзоны осиново-берёзовых лесов в течение двух сезонов наблюдения (2006-2007 гг.) из вирусных маркеров был обнаружен только антиген с частотой 43,2±16,5% и 42,4±17,5% соответственно.

2. В циркуляцию ВЗН в степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири вовлекаются мелкие млекопитающие -грызуны, насекомоядные и мелкие хищники. Наибольшая частота встречаемости антигена и РНК ВЗН в сезоне 2004 г. отмечена у мелких млекопитающих южной лесостепи - 100% (антиген) и 47,4±24,2% (РНК ВЗН), у животных Северной Кулунды антиген ВЗН был обнаружен у 40,0±13,2% особей, вирусная РНК - у 12,7±9,0%. У мелких млекопитающих подзоны осиново-берёзовых лесов встречаемость антигена и РНК ВЗН в сезоне 2006 г. составила 34,0±13,1% и 9,4±8,0%, в сезоне 2007 г. - 61,8±9,5% и 2,0% соответственно.

3. Фауна кровососущих комаров в летний период сезона 2004 г. в степной зоне была представлена 16 видами, в лесостепной зоне - 17 видами. В биотопах степной зоны к видам-эудоминантам (более 15% от числа сборов) относились О. Jlavescens, Ае. cinereus cinereus, Coq. richardii, в лесостепной зоне - О. dorsalis, О. excrucians, О. jlavescens, Coq. richardii и Сх. modestus, среди которых выявлены виды, способные принимать участие в трансмиссивном цикле ВЗН. Было отмечено исчезновение некоторых холодолюбивых видов и снижение численности большей части мезотермофильных видов при доминировании (более 5% от числа сборов) в отдельных биотопах комаров теплолюбивых видов.

4. Показано вовлечение в циркуляцию ВЗН имагинальных и преимагинальных стадий иксодовых клещей Ix. persulcatus и Ix. pavlovskiy в подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири. В сезоне 2006 г. среди клещей Ix. persulcatus вирусный антиген был обнаружен у 10,1±3,3%, а РНК ВЗН - у 11,0±2,4% особей всех возрастных стадий; среди клещей Ix. pavlovskiy было отмечено 7,8±1,9% позитивных по вирусному антигену и 4,3±1,5% по РНК ВЗН у особей всех возрастных стадий. В сезоне 2007 г. у обследованных клещей был обнаружен антиген ВЗН - у 0,3% имаго Ix. persulcatus и 1,4% имаго Ix. pavlovskiy.

5. Частота встречаемости вирусных маркеров у участников трансмиссивного цикла ВЗН в экосистемах юга Западной Сибири зависит от длительности периода с температурой >26°С в сезоне. В степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири показано

формирование природных очагов ВЗН, не связанных с сезонным заносом.

6.Установлено вовлечение в трансмиссивный цикл ВЗН на юге Западной Сибири случайных участников - сельскохозяйственных животных и людей. Доля серопозитивных к ВЗН сельскохозяйственных животных в сезоне 2004 г. среди КРС в Северной Кулунде составила 7,8±5,0%, среди лошадей в южной лесостепи - 9,2±6,6%. Показана циркуляция антител к ВЗН в сезоне 2004 г. на уровне 7,4±3,9% среди здоровых доноров из степных районов и 26,7±13,3% среди здоровых доноров из лесостепных районов Новосибирской области. Были выявлены три случая заболевания ЛЗН у людей в Новосибирской области.

7. Секвенирование и последующий анализ фрагмента гена белка Е полевых и клинических изолятов ВЗН, выделенных на юге Западной Сибири, показал, что они принадлежат генотипу 1а ВЗН, являются генетически близкими между собой и с патогенными для людей штаммами ВЗН, изолированными на юге России.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1. Видовой состав кровососущих комаров (DIPTERA, CULICIDAE) и возможность формирования очагов циркуляции вируса Западного Нила на юге Западной Сибири / Кононова Ю. В., Мирзаева А. Г., Смирнова Ю. А. [и др.] // Паразитология - 2007 - Т. 41 - №6 - С. 459 - 470.

2. Выявление вируса Западного Нила и его генотипирование в иксодовых клещах (Parasitiformes: Ixodidae) в Томске и его пригородах / Москвитина Н. С., Романенко В. Н., Терновой В. А., Иванова Н. В., Протопопова Е. В., Кравченко Л. Б., Кононова Ю. В. [и др.] // Паразитология - 2008 - Т. 42 - №3 - С. 210-225.

3. Генетическое разнообразие инфекционных агентов, переносимых клещами в г. Томске и его пригородах / Чаусов Е. В., Терновой В. А., Протопопова Е. В., Коновалова С. Н., Кононова Ю. В. [и др.] // Паразитология - 2009 - Т. 43 - №5 -С. 374-388.

4. Генотипирование вируса Западного Нила в популяциях диких птиц наземного и древесно-кустарникового комплексов на территории Барабинской лесостепи и Кулундинской степи (2003-2004 гг.) / Кононова Ю. В., Терновой В. А., Щелканов М. Ю. [и др.] // Вопр. вирусол. - 2006 - Т. 51 - № 4 - С. 19-23.

5. К познанию фауны и экологии кровососущих комаров (DIPTERA, CULICIDAE) лесостепных и степных районов Западной Сибири / Мирзаева А. Г., Смирнова Ю. А., Юрченко Ю.А., Кононова Ю. В. // Паразитология - 2007 - Т. 41 - №4 -С. 253-267.

6. Случаи лихорадки Западного Нила в Новосибирской области в 2004 г. и генотипирование вируса, вызвавшего заболевание / Терновой В. А., , Протопопова Е. В., Кононова Ю. В. [и др.] // Вестник РАМН - 2007 - № 1 - С. 21-26.

7. Выявление антигена и РНК вируса Западного Нила у двух видов врановых на юге Западной Сибири. / Кононова Ю. В., Протопопова Е. В., Терновой В. А. [и др.] // Сб. статей V Межрегион, науч.-практ. конф. с междунар. участием

«Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты» - Омск, 2004 - Т.2 - С. 184-187.

8. Выявление антител к флавивирусам у населения лесостепной и степной зон Новосибирской области в 2004 году / Кононова Ю. В., Протопопова Е. В., Федянин А. П. [и др.] // Журнал инфекционной патологии - Иркутск - 2004 - Т. 12-№3-4-С. 97-99.

9. Выявление маркеров вируса Западного Нила у мелких млекопитающих лесостепной и степной зон Новосибирской области / Кононова Ю. В., Протопопова Е. В., Терновой В. А. [и др.] // Тр. Российской науч.-практ. конф. «Инфекционные болезни: Проблемы здравоохранения и военной медицины» -Санкт-Петербург, 2006 - С. 161-162.

10. Выявление циркуляции вируса Западного Нила (Flaviviridae, Flavivirus) на юге Западной Сибири по данным обследования в РТГА сывороток крови крупного рогатого скота / Щелканов М. Ю., Кононова Ю. В., Аристова В. А. [и др.] // Сб. мат. Росс, науч.-практ. конф. «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» - Санкт-Петербург, 2004 - С. 287-288.

11. Изучение циркуляции вируса Западного Нила за период 2002-2003 гг. в популяциях птиц разных экологических комплексов, обитающих на территории Барабинской и Кулундинской низменностей / Кононова Ю. В., Юрлов А. К., Терновой В. А. [и др.] // Тез. докл. Всеросс. конф., посвящ. 60-летию Института систематики и экологии животных СО РАН - Новосибирск, 2004 - С. 383.

12. Мониторинг вируса Западного Нила в популяциях диких птиц на юге Западной Сибири / Кононова Ю. В., Щелканов М. Ю., Юрлов А. К. [и др.] // Тез. Междунар. науч.-практ. конф. «Болезни диких животных» - Покров, 2004 г. - С. 70-74.

13. Мониторинг вируса Западного Нила у врановых юга Западной Сибири / Кононова Ю. В., Юрлов А. К., Терновой В. А. [и др.] // Журнал инфекционной патологии - Иркутск - 2004 - Т. 11 - № 3-4 - С. 73-76.

14. О первых результатах эпидемиологического мониторинга за лихорадкой Западного Нила в Новосибирской области / Понотова Л. В., Михеев В. Н., Локтев В. Б., Кононова Ю. В. [и др.] // Сибирь-Восток - 2006 - №9 - С. 45-48.

15. Особенности биотопического распределения массовых видов кровососущих комаров в южной лесостепи и степи Западной Сибири / Мирзаева А. Г., Кононова Ю. В., Смирнова Ю. А. // Сб. мат. II межрегион, науч. конф. «Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» -Новосибирск, 2005-С. 142-143.

16. Оценка влияния климатических факторов на трансмиссивный цикл ВЗН в биоценозах лесостепной и степной зон Новосибирской области / Кононова Ю. В., Мирзаева А. Г., Юрченко Ю. А. [и др.] // Сб. мат. III Межрегион, науч. конф., посвящ. 80-летию профессора К.П. Фёдорова - Новосибирск, 2009 - С. 129-133.

17. Оценка возможности формирования очагов циркуляции вируса Западного Нила на юге Западной Сибири / Кононова Ю. В., Мирзаева А. Г., Протопопова Е. В. [и др.] II Тр. Росс. науч. конф. с междунар. участием «Проблемы инфекционной

патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» -Новосибирск, 2006 - С. 194-195.

18. Распространение вируса Западного Нила на Азиатскую часть России и генотипирование его вариантов / Локтев В. Б., Терновой В. А., Кононова Ю. В. [и др.] // Сб. мат. Росс, науч.-пракг. конф. «Генодиагностика инфекционных болезней» - Новосибирск, 2005 - С. 131-132.

19. Molecular epidemiology of the West Nile virus in Western Siberia / Kononova Yu. V., Protopopova E. V., Temovoi V. A. [et al.] // In: «Emerging Diseases: Tick-transmitted and influenza». The 2007 International Workshop - Novosibirsk, 2007 -P. 28.

20. West Nile virus is an emerging pathogen for Russia / Bogachek M. V., Kononova Iu. V., Protopopova E. V. [et al.] / In: «Emerging Diseases: Tick-transmitted and influenza». The 2007 International Workshop - Novosibirsk, 2007 - P. 27.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает благодарность научному руководителю к.б.н. A.M. Шестопалову и своим коллегам, в тесном сотрудничестве с которыми была выполнена диссертационная работа:

- сотрудникам отдела молекулярной вирусологии флавивирусов и вирусных гепатитов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» к.б.н. Е.В. Протопоповой, к.б.н. В.А. Терновому, к.б.н. Н.Л. Тупоте, к.б.н. Е.В. Чаусову, С.Н. Коноваловой, д.б.н., проф. В.Б. Локтеву;

- ведущему научному сотруднику лаборатории экологии вирусов ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (г. Москва) к.б.н. М.Ю. Щелканову;

- сотрудникам Института систематики и экологии животных (ИСиЭЖ) СО РАН к.б.н. А.Г. Мирзаевой, к.б.н. A.B. Друзяке, к.б.н. Т.А. Дупал, к.б.н. А.К. Юрлову, Ю.А. Смирновой, к.б.н. В.А. Шило, д.б.н. С.Н. Борисову, к.б.н. Ю.А. Юрченко;

- специалистам ТУ Роспотребнадзора по Новосибирской области А.П. Федянину и к.м.н. Л.В. Самойловой;

- заведующему вирусологическим отделом Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории к.в.н. В.И. Аксёнову;

- сотрудникам кафедры зоологии позвоночных Томского государственного университета д.б.н., проф. Н.С. Москвитиной, С.С. Москвитину, д.б.н. В.Н. Романенко, к.б.н. И.Г. Коробицыну, к.б.н. В.Н. Курановой, к.б.н. С.И. Гашкову, Н.В. Ивановой, Н.П. Большаковой; а также коллегам из отдела зоонозных инфекций и гриппа ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» за консультативную помощь и поддержку в написании диссертации.

Отпечатано на полиграфической базе ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ) Тираж 90 экз., март 2010 г.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кононова, Юлия Владимировна

Список использованных сокращений

Введение

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. 1.

Вирус Западного Нила (ВЗН)

Инфекционные свойства ВЗН

1.2. 1. Патогенез

1. 2. 2. Заболевание, вызываемое ВЗН у животных

1. 3.

1. 2. 3. Инфекция ВЗН у людей

1. 2. 4. Генетические основы патогенности и адаптивных свойств

Экология ВЗН

1.3. 1. Ареал ВЗН

1.3.2. Циркуляция ВЗН в природе

1. 3.2.1. Природный резервуар

1. 3. 2. 2. Трансмиссивные циклы ВЗН 1. 3. 3. Влияние факторов • окружающей среды на передачу ВЗН трансмиссивным путём

Юг Западной Сибири как новая эндемичная территория для ВЗН

1. 4. L Исследования ВЗН в Сибири (исторический аспект)

1. 4. 2. Краткая физико-географическая и фаунистическая характеристика южной части Западно-Сибирской равнины

Введение Диссертация по биологии, на тему "Вирус Западного Нила в различных экосистемах юга Западной Сибири"

Актуальность исследования

Вирус Западного Нила (ВЗН), этиологически связанный с лихорадкой Западного Нила (JI3H), относится к семейству Flaviviridae, роду Flavivirus, антигенному комплексу японского энцефалита [31]. Впервые вирус был выделен из крови больного в 1937 году в Уганде, провинция Западный Нил [28], откуда и пошло его название. Основными позвоночными хозяевами вируса в природе являются птицы, в качестве переносчиков выступают кровососущие комары (.Diptera, Culicidae) различных видов [28]. Основной трансмиссивный цикл вируса Западного Нила поддерживается при постоянной передаче вируса в цепочке птица комар, от комаров вирус передается другим позвоночным животным [189]. Основная роль в поддержании циркуляции вируса в природных очагах среди позвоночных животных принадлежит птицам; с птицами может быть также связан занос вируса на неэндемичные территории [30, 128]. Роль других позвоночных в этом процессе менее значительна из-за недостаточного для заражения комаров уровня вирусемии [28].

Круг восприимчивых к ВЗН позвоночных животных чрезвычайно широк и включает в себя диких и домашних птиц [68, 81, 140], млекопитающих (включая людей) [78, 187], а также некоторые виды рептилий [191], что указывает на значительную экологическую пластичность этого вируса. Клиническая картина вызываемой им инфекции у восприимчивых животных и человека варьирует от бессимптомных форм до лихорадки и летальных форм менингоэнцефалита.

Исторически ареал ВЗН включает в себя Африку, Южную и Центральную Европу, Австралию и Южную Азию [31, 180]. В России ВЗН активно циркулирует на территории Волгоградской, Астраханской, Ростовской областей и в Краснодарском крае [2, 182]. Расширение ареала ВЗН было отмечено в 1999 году, когда вирус был впервые выявлен в США; в настоящее время он распространился практически по всей территории этой 5 страны [138, 127, 181]. Позднее вирус был обнаружен в Канаде, Мексике [136, 192] и некоторых странах Латинской Америки [122, 211].

На протяжении нескольких десятилетий с момента открытия ВЗН отмечались в основном спорадические случаи JI3H у людей в пределах эндемичных территорий. В конце 90-х годов прошлого века вспышки JI3H были отмечены в нескольких европейских странах [205, 175], Израиле [78], а также впервые на североамериканском континенте [171]. Почти во всех вспышках была высока доля больных с тяжелой формой менингоэнцефалита; уровень летальности колебался от 4% (Румыния) до 12,5% (США) [175, 171]. В 1999 году подобная вспышка JI3H была зарегистрирована и на юге России, в Волгоградской области и Краснодарском крае, где также имели место случаи менингоэнцефалита с летальным исходом [57, 115]. Филогенетический анализ изолятов ВЗН, выделенных во время вспышек в различных частях ареала в конце прошлого - начале нынешнего столетий, показал принадлежность большей части из них к генотипу 1а [79], что указывает на способность к экспансии именно этого генотипа ВЗН.

В связи с усилением патогенности вируса Западного Нила на эндемичных и новых территориях, а также благодаря его быстрой адаптации к новым видам хозяев, J13H в настоящее время рассматривают как классический пример возникающего и вновь возвращающегося (emerging-reemerging) инфекционного заболевания [29]. Для эффективного контроля над этими процессами особая роль отводится регулярному мониторингу циркуляции ВЗН как в традиционных очагах, так на новых территориях.

Первые предположения о возможном заносе ВЗН перелётными птицами в Западную Сибирь и попытки его обнаружения следует отнести к 60-70 гг. прошлого века [30]. В те годы были обследованы сыворотки крови более чем от тысячи перелетных птиц, гнездящихся на побережье оз. Малые Чаны, и у части из них был выявлены антитела к ВЗН [7]. Антитела к вирусу были также обнаружены в сыворотках крови людей [6]. Имеется также сообщение о выделении ВЗН из полевого материала на территории Омской области [2], однако, достоверной информации о выделенном изоляте в реферируемых журналах, а также в базе GenBank найти не удалось. Следует отметить, что обследования птиц и людей проводились на территории, где циркулируют другие флавивирусы — вирус ОГЛ и ВКЭ, имеющие с ВЗН выраженный антигенный перекрест в серологических реакциях. Не занижая ценность выполненных исследований, трудно говорить о возможности проведения в то время достоверной дифференциальной диагностики ВЗН от других флавивирусов с использованием лишь серологических методов. Спустя длительное время, в 2002 г. гликопротеин и РНК ВЗН были обнаружены в образцах головного мозга диких перелётных птиц - двух видов чирков и грачей; филогенетический анализ западносибирских вариантов ВЗН также показал их принадлежность генотипу 1а [9].

Установление факта заноса ВЗН на неэндемичную территорию не даёт ответа на вопрос о возможности формирования местных очагов циркуляции,-вируса. Исходя из особенностей трансмиссивного цикла ВЗН, показателем его циркуляции на определенной территории является выявление вируса или его маркеров (гликопротеин оболочки и РНК) у кровососущих членистоногих и других, кроме птиц, позвоночных животных, связанных с членистоногими-переносчиками трофическими связями. Кроме этого, на эффективность' передачи вируса позвоночным животным, участвующим в трансмиссивном цикле, оказывают влияние определённые факторы окружающей среды, при наличии которых формируются благоприятные условия для активности членистоногих переносчиков и репликации вируса в их организме.

Таким образом, для оценки возможности формирования местных очагов циркуляции ВЗН на юге Западной Сибири необходимо было провести в местах вероятного заноса ВЗН комплексное эколого-вирусологическое исследование различных экосистем. Экологическая компонента должна включать в себя характеристику животных сообществ с целью определения участников трансмиссивного цикла вируса, характеристику климатических параметров сезона, влияющих на существование и активность членистоногих, а также на репликацию вируса в их организме. Вирусологическая составляющая подразумевает выявление вирусных маркеров (гликопротеина Е и вирусной РНК) у животных, участвующих в трансмиссивном цикле ВЗН, изучение возможности вовлечения в циркуляцию вируса случайных хозяев — сельскохозяйственных животных и людей, а также молекулярно-генетический анализ выделенных вариантов вируса.

Основная цель - настоящего исследования заключается в выявлении особенностей циркуляции ВЗН в разных ландшафтно-экологических условиях на юге Западной Сибири и оценке возможного формирования очагов циркуляции ВЗН.

Для достижения поставленной цели необходимо было выполнить следующие задачи:

- в местах вероятного заноса ВЗН в разных ландшафтных зонах юга. Западной Сибири выбрать природные экосистемы с наличием потенциальных участников трансмиссивного цикла ВЗН - птиц, мелких млекопитающих, кровососущих комаров и иксодовых клещей;

- провести сбор и анализ образцов от потенциальных участников трансмиссивного цикла для установления факта циркуляции среди них ВЗН;

- провести сравнительный анализ степени зараженности ВЗН участников трансмиссивного цикла с учётом климатических параметров сезона исследования для оценки возможного формирования природных очагов циркуляции ВЗН на юге Западной Сибири;

- исследовать возможность вовлечения в трансмиссивный цикл ВЗН случайных участников - сельскохозяйственных животных и людей;

- изучить генетическое разнообразие ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Научная новизна и практическая значимость

Впервые с использованием современных иммунологических и молекулярно-биологических методов была показана циркуляция ВЗН у диких птиц с разным миграционным статусом, мелких млекопитающих и иксодовых клещей на юге Западной Сибири.

Впервые в условиях региона выявлена зависимость между уровнем зараженности участников трансмиссивного цикла ВЗН и климатическими характеристиками сезона исследования. Было показано, что основным параметром, влияющим на зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла, является длительность периода с температурным режимом >26°С в сезоне.

На основании данных серологического мониторинга здоровых доноров и диагностики случаев заболевания, вызванного ВЗН у жителей Новосибирской области, показана эпидемическая напряжённость западносибирского очага циркуляции ВЗН, а также в структуре инфекционных заболеваний населения в Новосибирской области установлена новая' нозологическая форма -лихорадка Западного Нила.

Филогенетический анализ полевых и клинических изолятов ВЗН, выделенных на юге Западной Сибири в 2003-2006 гг. показал их принадлежность к генотипу 1а и выявил генетическую близость со штаммами ВЗН, изолированными от погибших пациентов во время вспышки JI3H в 1999 г. в Волгограде, что свидетельствует о наличии эпидемического потенциала у ВЗН, циркулирующего на юге Западной Сибири.

Материалы диссертации вошли в отчёты:

Основные положения, выносимые на защиту

- показана циркуляция вируса Западного Нила среди диких птиц с разным миграционным статусом, мелких млекопитающих и иксодовых клещей в различных экосистемах юга Западной Сибири;

- зараженность ВЗН участников трансмиссивного цикла в экосистемах, юга Западной Сибири зависит от длительности периода с температурами >26°С в сезоне. В степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири показано формирование природных очагов ВЗН, не связанных с сезонным заносом;

- показана эпидемическая напряжённость западносибирского очага циркуляции ВЗН на основании данных серомониторинга сельскохозяйственных животных и здоровых доноров, а также по выявлению случаев заболевания, вызванного ВЗН у жителей Новосибирской области;

- полевые и клинические изоляты ВЗН, выделенные в Западной Сибири в 2003-2006 гг., принадлежат к генотипу 1а и имеют высокий уровень гомологии с патогенными для людей штаммами ВЗН, изолированными на юге России.

Вклад автора

Автор непосредственно принимала участие в сборе и иммуноферментном анализе полевого материала из Новосибирской области; в сборе, иммуноферментном анализе клинического материала от здоровых доноров и выделении ВЗН из материала от заболевшего человека, в подготовке проб полевого материала из Томской области и статитстической обработке результатов.

Апробация работы

По теме диссертации опубликовано 20 публикаций, в том числе 6 статей в отечественных реферируемых журналах.

Материалы исследований были представлены на Всероссийской научной конференции «Сибирская зоологическая конференция» (Новосибирск, 2004), Международной научно-практической конференции «Болезни диких животных» (Покров, Владимирская область, 2004), Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы здоровья населения Сибири: гигиенические и эпидемиологические аспекты» (Омск, 2004), Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (Санкт-Петербург, 2004), Межрегиональной научной конференции «Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» (Новосибирск, 2005), Российской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Новосибирск, 2005), Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни: Проблемы здравоохранения и военной медицины» (Санкт-Петербург, 2005), Российской научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2006), Международном семинаре «Emerging Diseases: Tick-transmitted and influenza», (Новосибирск, 2007), III Межрегиональной научной конференции, посвященной 80-летию профессора К.П. Фёдорова (Новосибирск, 2009).

Работа была выполнена в 2003 - 2008 годах. Раздел работы, посвящённый изучению клещевых инфекций у иксодовых клещей, млекопитающих и диких птиц в Томской области был поддержан грантом

РНП.2.1.1.7515 ведомственной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы». Исследования клинического материала от заболевших людей утверждены Этическим комитетом ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор», название проекта «Выявление случаев заболевания, вызванного вирусом Западного Нила у людей в Новосибирской области» (утвержден 10.02.2006).

Структура и объем диссертации

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Кононова, Юлия Владимировна

5. Выводы

1. Выявлена циркуляция ВЗН среди воробьеобразных птиц (Passeriformes) мигрирующих и оседлых видов в степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири. Частота встречаемости антигена и РНК ВЗН у птиц составила: в Северной Кулунде в сезоне 2003 г. 18,8±14,1% (антиген) и 15,6±13,1% (РНК), в сезоне 2004 г. - 93,8% (антиген) и 62,5±25,7% (РНК); в южной лесостепи в сезоне 2004 г. антиген ВЗН был обнаружен у 38,6±14,8% птиц, РНК ВЗН - у 20,5±12,3%. У птиц подзоны осиново-берёзовых лесов в течение двух сезонов наблюдения (2006-2007 гг.) из вирусных маркеров был обнаружен только анитген с частотой 43,2± 16,5% и 42,4±17,5% соответственно.

2. В циркуляцию ВЗН в степной, лесостепной зонах и подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири вовлекаются мелкие млекопитающие -грызуны, насекомоядные и мелкие хищники. Наибольшая частота встречаемости маркеров ВЗН (антиген/РНК) в сезоне 2004 г. отмечена у мелких млекопитающих южной лесостепи - 100% (антиген) и 47,4±24,2% (РНК), у животных Северной Кулунды антиген ВЗН был обнаружен у 40,0±13,2% особей, вирусная РНК - у 12,7±9,0%. У мелких млекопитающих подзоны осиново-берёзовых лесов встречаемость антигена и РНК ВЗН в сезоне 2006 г. составила 34,0±13,1% и 9,4±8,0%, в сезоне 2007 г. - 61,8±9,5% и 2,0% соответственно.

3. Фауна кровососущих комаров в летний период сезона 2004 г. в степной зоне была представлена 16 видами, в лесостепной зоне - 17 видами. В биотопах степной зоны к видам-эудоминантам (более 15% от числа сборов) относились О. flavescens, Ае. cinereus cinereus, Coq. richardii, в лесостепной зоне — О. dorsalis, О. excrucians, О. flavescens, Coq. richardii и Сх. modestus, среди которых выявлены виды, способные принимать участие в трансмиссивном цикле ВЗН. Было отмечено исчезновение некоторых холодолюбивых видов и снижение численности большей части мезотермофильных видов при доминировании (более 5% от числа сборов) в отдельных биотопах комаров теплолюбивых видов.

4. Показано вовлечение в циркуляцию ВЗН имагинальных и преимагинальных стадий иксодовых клещей Ix. persulcatus и Ix. Pavlovskiy в подзоне осиново-берёзовых лесов юга Западной Сибири. В сезоне 2006 г. среди клещей Ix. persulcatus вирусный антиген был обнаружен у 10,1 ±3,3%, а РНК ВЗН - у 11,0±2,4% особей всех возрастных стадий; среди клещей Ix. Pavlovskiy было отмечено 7,8±1,9% позитивных по вирусному антигену и 4,3±1,5% по РНК ВЗН у особей всех возрастных стадий. В сезоне 2007 г. у обследованных клещей был обнаружен только антиген ВЗН - у 0,3% имаго Ix. persulcatus и 1,4% имаго Ix. Pavlovskiy.

6. Было установлено вовлечение в трансмиссивный цикл ВЗН на юге Западной Сибири случайных участников - сельскохозяйственных животных и людей. Доля серопозитивных к ВЗН сельскохозяйственных животных в сезоне 2004 г. среди КРС в Северной Кулунде составила 7,8±5,0%, среди лошадей в южной лесостепи - 9,2±6,6%. Показана циркуляция антител к ВЗН в сезоне 2004 г. на уровне 7,4±3,9% среди здоровых доноров из степных районов и 26,7± 13,3% среди здоровых доноров из лесостепных районов Новосибирской области. Были выявлены три случая заболевания JI3H у людей в Новосибирской области.

7. Секвенирование и последующий анализ фрагментов гена белка Е полевых и клинических изолятов ВЗН показал, что они принадлежат генотипу 1а ВЗН, являются генетически близкими между собой и с патогенными для людей штаммами ВЗН, изолированными на юге России.

4. Заключение

В связи со значительным расширением ареала ВЗН за последнее десятилетие и возросшей эпидемиологической значимостью вызываемого им заболевания, представляется актуальным изучение механизмов адаптации ВЗН к различным экосистемам и особенностей функционирования очагов циркуляции вируса на новых территориях. В соответствии с этим, в настоящей работе были исследованы особенности циркуляции ВЗН в разных экосистемах юга Западной Сибири.

На юге Западной Сибири существуют места заноса вируса Западного Нила, связанные с ареалом гнездования перелётных птиц отряда ворбьеобразных (Passeriformes). Экосистемы, существующие в местах заноса ВЗН, характеризуются составом животных сообществ и наличием климатических факторов, совокупность которых обеспечивает циркуляцию ВЗН в трансмиссивных циклах, связанных как с комарами, так и с иксодовыми клещами. Циркуляция вируса, оценённая по наличию гликопротеина Е и вирусной РНК у животных, участвующих в трансмиссивном цикле, имеет свои особенности в разных экосистемах.

Среди птиц юга Западной Сибири чаще всего оба вирусных маркера присутствовали у врановых - грачей и ворон, а также у воробьиных и скворцовых; у этих птиц ВЗН-инфекция приводила к проникновению вируса в ЦНС. Представители других семейств (дроздовых, славковых, вьюрковых, овсянковых, поползневых, синицевых, утиных, бекасовых, стрижиных, ястребиных) не обладали видовой восприимчивостью к вирусу - в их организме не обнаруживались вирусные маркеры, либо ВЗН-инфекция ограничивалась внутренними органами и протекала по абортивному типу (наличие только гликопротеина Е). Наибольшая частота встречаемости маркеров ВЗН была характерна для птиц Северной Кулунды и южной лесостепи, у птиц подзоны осиново-берёзовых лесов частота встречаемости гликопротеина Е оставалась примерно одинаковой в течение двух сезонов исследования.

Из других позвоночных животных на наличие маркеров ВЗН были обследованы мелкие млекопитающие. Вирусные маркеры были обнаружены у этих животных во всех исследуемых районах. Чаще всего гликопротенин Е и вирусная РНК обнаруживались у мелких млекопитающих лесостепной зоны, у животных степной зоны оба маркера выявлялись в несколько раз реже. У мелких млекопитающих подзоны осиново-берёзовых лесов во внутренних органах из маркеров ВЗН преобладал белок Е, частота встречаемости обоих маркеров значительно различалась в 2006 и 2007 гг.

В местах заноса ВЗН в степной и лесостепной зонах были проведены эколого-фаунистические исследования популяций кровососущих комаров на предмет наличия восприимчивых к ВЗН видов. В ходе проведённых исследований было документировано изменение видового состава комаров в этих районах по сравнению с последними данными, полученными в 60-70-х гг. прошлого века. В популяциях комаров были обнаружены виды, способные выступать эффективными переносчиками ВЗН, причём в некоторых биотопах эти виды были доминирующими. Среди эудоминантов к эпидемиологически значимым видам относились Ае. cinereus cinereus, О. dorsalis, Coq. richardii и Сх. modestus. Было показано, что с момента последних исследований в структуре экологических групп имаго произошли изменения, характеризующиеся исчезновением некоторых холодолюбивых видов и снижением численности оставшихся мезотермофилов; при этом представители термофильных видов доминировали в некоторых биотопах. По анализу трофических связей среди выявленных в сезоне 2004 г. комаров в Северной Кулунде преобладал О. flavescens, преимущественно нападающий на птиц и людей, в то время как виды-доминанты южной лесостепи были представлены полифагами. Выявленные отличия коррелируют с распределением вирусных маркеров у позвоночных животных — с высокой частотой встречаемости белка Е и РНК ВЗН у птиц в Северной Кулунде и мелких млекопитающих в южной лесостепи.

У разных стадий развития иксодовых клещей Ix. persulcatus и Ix. pavlovskiy подзоны осиново-берёзовых лесов впервые были выявлены маркеры ВЗН. Этот факт, несмотря на отсутствие вирусного генетического материала в пробах от птиц из этого района, свидетельствует о заносе ВЗН в пределы этой ландшафтной зоны. Анализ трофических связей этих клещей показал, что у преимагинальных стадий вирусные маркеры чаще выявляются в случае питания нимф и личинок на птицах. Была показана также динамика накопления маркеров ВЗН в разные периоды сезона активности клещей.

Исходя из особенностей распределения маркеров ВЗН у птиц, мелких млекопитающих и иксодовых клещей, были проанализированы климатические хараткеристики сезонов исследования с целью определения влияния температурного режима на циркуляцию ВЗН в разных ландшафтно-экологических условиях на юге Западной Сибири. Было проведено сравнение сезонов исследования по длительности периодов с допустимыми и оптимальными для членистоногих условиями активности, длительности периода с диапазоном температур, благоприятных для репликации ВЗН в организме членистоногих, и по частоте встречаемости маркеров ВЗН у позвоночных животных и членистоногих. Было установлено, что основным фактором, влияющим на частоту встречаемости вирусных маркеров у животных во всех исследуемых районах, является продолжительность периода с температурами, благоприятными для репликации ВЗН в комарах.

В результате эколого-вирусологического исследования различных экосистем юга Западной Сибири был установлена циркуляция в них ВЗН, зависящая от температурного режима сезона. Выявленные осбенности циркуляции ВЗН свидетельствуют о формировании на юге Западной Сибири природных очагов ВЗН, не связанных сезонным заносом.

По результатам серологического мониторинга было показано, что в степной и лесостепной зонах на юге Западной Сибири сельскохозяйственные животные и люди в течение жизни имели контакт с ВЗН. Было установлено также, что циркулирующий на юге Западной Сибири ВЗН способен инфицировать людей при попадании их в природные экосистемы. Уровень циркуляции антител к ВЗН у сельскохозяйственных животных и здоровых доноров в сезон исследования был сопоставим с таковым для природных очагов на юге России, что свидетельствует о напряжённости западносибирских очагов ВЗН.

Генотипирование циркулирующих на юге Западной Сибири вариантов ВЗН показало их принадлежность генотипу 1а ВЗН. Была установлена генетическая близость западносибирских вариантов между собой, независимо от источника выделения, а также с ВЗН, циркулирующим на юге России.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кононова, Юлия Владимировна, Владимир

1. Азарова И.А. Подавление репродукции и диссеминации вируса Западного Нила в организме млекопитающих и паразитарной системе «клещ-позвоночное»: автореф. дис. . канд. биол. наук. — Минск 2000 - 26 с.

2. Атлас распространения возбудителей природно-очаговых вирусных инфекций на территории Российской Федерации / Львов Д.К., Дерябин П.Г., Аристова В.А. и др. М.: [Медицина], 2001. - 194 с.

3. Багиров Г.А., Гаджибекова Э.А., Алирзаев Г.У. Активность нападения комаров Uranotaenia unguiculata Edwards, 1913 на человека // Мед. паразитол. 1994 - №3 - С. 39-40.

4. Бобков Ю.В., Торопов К.В. К авифауне Северной Кулунды // Материалы к распространению птиц на Урале, в Приуралье и Западной Сибири: сб. ст. -Екатеринбург: ИЭРиЖ УО РАН, 1997 С. 12-14.

5. Богачек М.В. Изучение антигенной структуры поверхностных структурных белков вируса Западного Нила: автореф. дис. . канд. биол. наук. -Кольцово 2006 - 20 с.

6. Бусыгин Ф.Ф., Цаплин И.С. Серологическая разведка в отношении экзотических арбовирусов в Западной Сибири // Трансконтинентальные связи перелетных птиц и их роль в распространении арбовирусов: сб. ст. -Новосибирск: Наука, 1972 С. 251-252.

7. Выделение арбовирусов в Армянской ССР / Шахназарян С.А., Оганесян А.С., Манукян Д.В. и др. // Тр. ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Вирусология. Москва, 1991 - Т. 24 - С. 22-23.

8. Генотипирование вируса Западного Нила, выявленного у птиц на юге Приморского края в течение 2002 2004 годов / Терновой В.А., Протопопова Е.В., Сурмач С.Г. и др. // Мол. ген., микробиол. и вирусол. -2006 - №4 - С. 30-35.

9. Жданов В.М., Гайдамович С .Я. Общая и частная вирусология. Руководство в 2 Т. М.: Медицина, 1982 - Т 2. - 520 с.

10. Западно-сибирская равнина. Яндекс-словари сайт. URL http://slovari.yandex.ru/dict/bse/article/00027/06800.htm (последнее обращение 25.01.2010)

11. Заражаемость сельскохозяйственных животных вирусом Западного Нила в Астраханской области по данным серологического обследования (20012004) / Васильев А.В., Щелканов М.Ю., Джаркенов А.Ф. и др. // Вопр. вирусол. 2005 - №6 - С. 36-41.

12. Изоляция вируса Западного Нила на южной Украине / Виноград И.А., Белецкая Г.В., Чумаченко С.С. и др. // Вопр. вирусол. 1982 - № 5 - С. 55-57.

13. Изоляция вируса лихорадки Западного Нила от больных во время эпидемической вспышки в Волгоградской и Астраханской областях / Львов Д.К., Бутенко A.M., Вышемирский О.И., и др. // Вопр. вирусол. -2000 -№3- С. 9-12.

14. Изучение экологии арбовирусов, передаваемых комарами, с помощью подсадных животных в дельте Волги / Березин В.В., Чумаков М.П., Семенов Б.Ф. и др. // Вопр. вирусол. 1971 - №6 - С. 739-745.

15. Инфекция, вызываемая вирусом лихорадки Западного Нила, как клиническая и эпидемиологическая проблема / Венгеров Ю.Я., Фролочкина Т.И., Жуков А.Н. и др. // Эпидемиол. и инф. болезни 2000 -№4-С. 27-31.

16. Иоганзен Б.Г. Природа Томской области Новосибирск: ЗападноСибирское книжн. изд-во, изд. 4-е, 1971 - 174 с.

17. Каримов С.К., Дерновой А.Г., Дурумбетов Е.Е. Арбовирусы иарбовирусные заболевания в Республике Казахстан Алматы: ГЛЕБ, 2001- 162 с.

18. Костюков М.А., Искулов Ф.С. О выделении вируса Западный Нил от больных в Таджикистане // Мед. паразитол. 1978 - №3 - С. 49-53.

19. Кухарчук Л.П. Экология кровососущих комаров (Diptera Culicidae) Сибири- Новосибирск: Наука, 1981. 232 с.

20. Львов Д.К. Лихорадка Западного Нила // Вопр. вирусол. 2000. - № 2. - С. 4-9.

21. Львов Д.К. Значение вновь возвращающихся инфекций в биобезопасности // Вопр. вирусол. 2002 - № 5. - С. 4-7.

22. Львов Д.К., Ильичёв В.Д. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции. М.: Наука, 1979. - 270 с.

23. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. Арбовирусы и арбовирусные инфекции. М.: Медицина, 1989. - 336 с.

24. Львов Д.К!, Лебедев А.Д. Закономерности географического распространения арбовирусов // Трансконтинентальные связи перелетных птиц и их роль в распространении арбовирусов: сб. ст. Новосибирск: Наука, 1972-С. 145-152.

25. Методические рекомендации по лабораторным и полевым исследованиям арбовирусов. -М.: Медицина., 1975 С. 55-81.

26. Млекопитающие Новосибирской области. сайт. URL http:/www.balatsky.ru/NSO/ML.htm (последнее обращение 25.01.2010)

27. Москвитина Н.С., Сучкова Н.Г. Млекопитающие Томского Приобья и способы их изучения. Томск: ТГУ, 1988 - 185 с.

28. Наумов P.JI. Паразитирование на птицах // Таежный клещ Ixodes persulcatus Schulze (Acarina, Ixodidae): Морфология, систематика, экология, медицинское значение / под ред. Н.А. Филипповой Л.: Наука, 1985. - С. 278-291.

29. Озёрная лягушка (Rana ridibunda) один из прокормителей кровососущих комаров Таджикистана - резервуар вируса лихорадки Западного Нила / Костюков М.А., Гордеева З.Е., Булычев В.П. и др. // Мед. паразитол. -1985 -№3- С. 49-50.

30. Платонов А.Е. Влияние погодных условий на эпидемиологию трансмиссивных инфекций (на примере лихорадки Западного Нила) // Вестник РАМН 2006 - №2 - С. 25-29.

31. Получение и изучение свойств антиидиотипических антител, несущих на своей поверхности гемагглютинирующие паратопы вируса клещевого энцефалита / Протопопова Е.В., Хусаинова А.Д., Коновалова С.Н., Локтев В.Б. // Вопр. вирусол. 1996 - №2 - С. 50-53.

32. Природные ресурсы Новосибирской области / Бейром С.Г., Васильев И.П., Гаджиев И.М. и др. Новосибирск: Наука, 1986. - 216 с.

33. Редышна Н.В., Островерхова Н.В., Островерхова Г.П. О фауне кровососущих комаров (Diptera: Culicidae) г. Томска // Вестник Томского государственного университета 2007 - Т. 300 (II) - С. 221-227.

34. Романенко В.Н. Особенности биологии иксодовых клещей, обитающих в окрестностях г. Томска // Паразитология 2004 - Т. 39 - №5 - С. 365-370.

35. Россолов М.А., Бусыгин Ф.Ф. Изучение экологических связей перелетных птиц с вирусом Западного Нила в Западной Сибири // Природноочаговыеболезни человека: сб. ст. Омск, ОНИИПИ, 1977 - С. 91-94.

36. Руководство по медицинской энтомологии / Под ред. В.П. Дербеневой-Уховой. М., Медицина, 1974. - 360 с.

37. Рябицев В.К. Птицы Урала, Приуралья и Западной Сибири. -Екатеринбург: УрГУ, 2008. 405 с.

38. Ставский А.В., Федорова Т.Н. Изучение чувствительности диких птиц к некоторым арбовирусам группы В в связи с их межконтинентальным распространением // Вопросы инфекционной патологии: сб. ст. Омск: ОНИИПИ, 1975. - С. 96-107.

39. Сырцова JI.E., Косаговская И.И., Авксентьева М.В. Основы эпидемиологии и статистического анализа в общественном здоровье и управлении здравоохранением. М.: ММА им. И.М. Сеченова, 2003. - 99 с.

40. Фауна птиц регионов Западной Сибири / Рябицев В.К., Бойко Г.В., Москвитин С.С. и др. // Инвентаризация, мониторинг и охрана ключевых орнитологических территорий России. Вып. 3 / Отв. ред. С.А. Букреев. -М.: Союз охраны птиц, 2001 С. 140-168.

41. Цапрун А.А. К биологии клещей Dermacentor // Тр. СибНИВИ. Вып. 7 -Омск, 1957-С. 19-32.

42. Черкасский Б.Л. Инфекционные и паразитарные болезни человека. М.: Медицинская газета, 1994 - 623 с.

43. Шумилова Л.В. Ботаническая география Сибири: монография. Томск: ТГУ, 1962-440 с.

44. Эколого-фаунистический анализ населения мелких млекопитающих (Micromammalia) Центрального Алтая / Юдин Б.С., Потапкина А.Ф.,

45. Галкина Л.И., Половинкина Р.А. // Фауна и систематика позвоночных Сибири Новосибирск: Наука, 1977. - С. 5-31.

46. Экосистемы. Экология. Лекция 3 сайт. URL http://ekologiya.narod.ru/pagel4.htm (последнее обращение 25.01.2010)

47. Эпидемические вспышки менингита и менингоэнцефалита в Краснодарском крае и Волгоградской области, вызванные вирусом Западного Нила / Львов Д.К., Бутенко A.M., Гайдамович С.Я. и др. // Вопр. вирусол. 2000 - № 1. - С. 37-38.

48. Юрлов К.Т. Видовой состав и приуроченность к биотопам птиц в озерной лесостепи Барабинской низменности (Западная Сибирь) // Экология и биоценотические связи перелетных птиц — Новосибирск: Наука, 1981 С. 5-29.

49. Abbassy М.М., Osman М., Marzouk A.S. West Nile virus (Flaviviridae: Flavivirus) in experimentally infected Argas ticks (Acari: Argasidae) // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1993 - V. 48 - P. 726-737.

50. Abbassy M.M., Stein K.J., Osman M. New artificial feeding technique for experimental infection of Argas ticks (Acari: Argasidae) // J. Med. Entomol. -1994-V. 31 P. 202-205.

51. A neurotropic virus isolated from the blood of a native in Uganda / Smithburn K.C., Hudhes T.R., Burke A.W., Paul H.R. // Amer. J. Trop. Med. 1940 - V. 20.-P. 471-492.

52. A novel mode of arbovirus transmission involving a nonviremic host / Jones L.D., Davies C.R., Steele G.M., Nuttall P.A. // Science. 1987 - Aug 14 - V. 237 (4816)-P. 775-777.

53. A study of the ecology of West Nile virus in Egypt / Taylor R.M., Work Т.Н.,

54. Hurlbut H.S., Rizk F. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1956 - V. 5 - P. 579-620.

55. A survey for haemagglutination-inhibiting antibody to West Nile virus in human and animal sera in Nigeria / Olaleye O.D., Omilabu S.A., Ilomechina E.N., Fagbami A.H. // Сотр. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 1990 - V. 13 - N. 1 -P. 35-39.

56. Alligators as West Nile virus amplifiers / Klenk K., Snow J., Morgan K., et al. //Emerg. Infect. Dis.-2004-V. 10-N. 12-P. 2150-2155.

57. An outbreak of West Nile fever among migrants in Kisangani, Democratic Republic of Congo / Nur Y.A., Groen J., Heuvelmans H., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1999 -V. 61 -N. 6 - P. 885-888.

58. An update on the potential of north American mosquitoes (Diptera: Culicidae) to transmit West Nile Virus / Turell M.J., Dohm D.J., Sardelis M.R., et al. // J. Med. Entomol. 2005 - V. 42 - N. 1 P. 57-62.

59. Antibodies to Alphavirus, Flavivirus, and Bunyavirus arboviruses in house sparrows (Passer domesticus) and tree sparrows (P. montanus) in Poland / Juricova Z., Pinowski J., Literak I., et al. // Avian Dis. 1998 - V. 42 - P. 182185.

60. Antigen distribution pattern of West Nile virus in Culex tritaeniorhynchus, Culex vishnui and Culex pseudovishnui mosquitoes / Mishra A.C., Jadi R.S., Paramasivan R., Mourya D.T.// J. Comraun. Dis. 2001 - V. 33 -N. 3 - P. 174179.

61. Arboviruses and lemurs in Madagascar: experimental infection of Lemur fulvus with yellow fever and West Nile viruses / Rodhain F., Petter J.J., Albignac R., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1985 - V. 34 -N. 4 - P. 816-822.

62. Argasid ticks as possible vectors of West Nile virus in Israel / Mumcuoglu K.Y., Banet-Noach C., Malkinson M., et al. // Vector Borne Zoonotic Dis. 2005 -V. 5-N.l-P. 65-71.

63. Avian hosts for West Nile virus in St. Tammany Parish, Louisiana, 2002 / Komar N., Panella N.A., Langevin S.A., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. -2005 V. 73 -N. 6 -P. 1031-1037.

64. Banet-Noach C., Simanov L., Malkinson M. Direct (non-vector) transmission of West Nile virus in geese // Avian Pathol. 2003 Oct. - V. 32 - N. 5. - P. 489-94.

65. Bernkopf H., Levine S., Nerson R. Isolation of West Nile virus in Israel // The Journal of Infectious Diseases. 1953 - V. 93 (3). - P. 207-218.

66. Castillo-Olivares J., Wood J. West Nile virus infection of horses // Vet. Res. -2004-V. 35-P. 467-483.

67. Clinical characteristics of the West Nile fever outbreak, Israel, 2000 / Chowers M.Y., Lang R., Nassar F., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2001. - V. 7. - N. 4. -P. 675-678.

68. Complete genome sequences and phylogenetic analysis of West Nile virus strains isolated from the United States, Europe, and the Middle East / Lanciotti R.S., Ebel G.D., Deubel V., et al. // Virology 2002, June 20 -V. 298 - N. 1 -P. 96-105.

69. Cornel A.J., Jupp P.G., Blackburn N.K. Environmental temperature on the vector competence of Culex univittatus (Diptera: Culicidae) for West Nile virus // J. Med. Entomol. 1993 - V. 30 - N. 2 - P. 449-456.

70. Crow deaths as a sentinel surveillance system for West Nile virus in the northeastern United States, 1999 / Eidson M., Komar N., Sorhage F., et al. // Emerg. Infect. Dis. -2001. -V. 7. -N. 4. P. 615-620.

71. Current protocols in molecular biology. Preparation and analysis of DNA. / Ed.by Frederic M. Ausubel et al. Canada, Green Publishing Associates and Wiley-Interscience, 1989 - V. 1. - 314 p.

72. Detection of West Nile virus in oral and cloacal swabs collected from bird carcasses / Komar N., Lanciotti R., Bowen R., et al.// Emerg. Infect. Dis. -2002 V. 8 - N. 7 - P. 741-742.

73. Differential virulence of West Nile strains for american crows / Brault A.C., Langevin S.A., Bowen R.A., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2004 - V. 10 -N. 12 -P. 2161-2168.

74. Dohm D.J., O'Guinn M.L., Turell M.J. Effect of environmental temperature on the ability of Culex pipiens (Diptera: Culicidae) to transmit West Nile virus // J. Med. Entomol. 2002 - V. 39 - N. 1 - P. 221-225.

75. Dohm D.J., Turell M.J. Effect of incubation at overwintering temperatures on the replication of West Nile Virus in New York Culex pipiens (Diptera: Culicidae) // J. Med. Entomol. 2001 - V. 38 - N. 3 - P. 462-464.

76. Eastern cottontail rabbits (Sylvilagus floridanus) develop West Nile virus viremias sufficient for infecting select mosquito species / Tiawsirisup S., Piatt K.B., Tucker B.J., Rowley W.A. // Vector Borne Zoonotic Dis. 2005 - V. 5 -N.4-P. 342-350.

77. Efficient transmission of tick-borne encephalitis virus between cofeeding ticks / Labuda M., Jones L.D., Williams Т., et al. // J. Med. Entomol. 1993 - V. 30 -N. 1-P. 295-299.

78. Epidemiology and transmission dynamics of West Nile virus disease / Hayes E.B., Komar N., Nasci R.S., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2005 - V. 11 - N. 8 -P. 1167-1173.

79. Evaluation of arthropod-borne viruses and other infectious disease pathogens as the causes of febrile illnesses in the Khartoum Province of Sudan / McCarthy M.C., Haberberger R.L., Salib A.W., et al. // J. Med. Virol. 1996 - V. 48 - N. 2-P. 141-146.

80. Experimental and natural infection of North American bats with West Nile virus / Davis A., Bunning M., Gordy P., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2005 - V. 73 - N. 2 - P. 467-469.

81. Experimental infection of cats and dogs with West Nile virus / Austgen L.E., Bowen R.A., Bunning M.L., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2004 - V. 10 - N. 1 -P. 82-86.

82. Experimental infection of common garter snakes (Thamnophis sirtalis) with West Nile virus / Steinman A., Banet-Noach C., Simanov L., et al. // Vector Borne Zoonotic Dis. 2006 - V. 6 - N. 4 - P. 361-368.

83. Experimental infection of horses with West Nile virus / Bunning M.L., Bowen R.A., Cropp C.B., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2002 - V. 8 - N. 4 - P. 380386.

84. Experimental infection of North American birds with the New York 1999 strain of West Nile virus / Komar N., Langevin S., Hinten S., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2003 - V. 9 - N. 3 - P. 311-322.

85. Experimental infection of pigs with West Nile virus / Teehee M.L., Bunning M.L., Stevens S., Bowen R.A. // Arch. Virol. 2005 - V. 150 - N. 6 - P. 12491256.

86. Experimental transmission of West Nile vims (Flaviviridae: Flavivirus) by Carios capensis ticks from North America / Hutcheson H.J., Gorham C.H., Machain-Williams C., et al. // Vector Borne Zoonotic Dis. 2005 - V. 5 - N. 3-P. 293-295.

87. Fatal encephalitis and myocarditis in young domestic geese (Anser anser domesticus) caused by West Nile virus / Swayne D.E., Beck J.R., Smith C.S., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2001 - V. 7 - N. 4 - P. 751 -753.

88. Felsenstein J. Confidence limits on phylogenies: an approach using the bootstrap // Evolution 1985 - V. 39 - P. 787-791.

89. Filipe A.R. Isolation in Portugal of West Nile virus from Anopheles maculipennis mosquitoes // Acta Virol. 1972 - V. 16 - P. 361.

90. Filipe A.R., De Andrade H.R. Arboviruses in the Iberian Peninsula // Acta Virol. 1990- V. 34-P. 582-591.

91. First field evidence for natural vertical transmission of West Nile virus in Culex univittatus complex mosquitoes from Rift Valley province, Kenya / Miller B.R., Nasci R.S., Godsey M.S., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2000 - V. 62 - N. 2-P. 240-246.

92. Formosinho P., Santos-Silva M.M. Experimental infection of Hyalomma marginatum ticks with West Nile virus //Acta Virol. 2006 - V. 50 - N. 3 - P. 175-180.

93. Hall R.A., Scherret J.H., Mackenzie J.S. Kunjin virus: an Australian variant of West Nile? //Ann. N. Y. Acad. Sci. 2001 -V. 951 - P. 153-160.

94. Hinckley A.F., O'Leary D.R., Hayes E.B. Transmission of West Nile virus through human breast milk seems to be rare // Pediatrics. 2007 - V. 119 - N. 3 -P. 666-671.

95. Hubalek Z., Halouzka J., Juricova Z. West Nile fever in Czechland // Emerg. Infect. Diseases. 1999 - V. 5. - N. 4 - P. 594-5.

96. Hubalek Z., Halouzka J. West Nile fever a reemerging mosquito-borne viral disease in Europe // Emerg. Infect. Diseases. - 1999 - V. 5 - N. 5 - P. 643-650.

97. Intrauterine West Nile virus infection—New York, 2002 / Centers for Disease Control and Prevention (CDC) // Morb. Mortal. Wkly. Rep. 2002 - Dec 20 -V. 51-N. 50-P. 1135-1136.

98. Isolation from human sera in Egypt of a virus apparently identical to West Nile virus / Melnick J.L., Paul J.R., Riordan J.T., et al. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1951 V. 77-P. 661-665.

99. Isolation of two strains of West Nile virus during an outbreak in Southern Russia, 1999 / Lvov D.K., Butenko A.M., Gromashevsky V.L., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2000. - V. 6 - P. 373-376.

100. Isolation of viruses from wild mammals in West Africa, 1966-1970 / Kemp G.E., Causey O.R., Setzer H.W., Moore D.L. // J. Wild. Dis. 1974 - V. 10 -N. 3-P. 279-293.

101. Isolations of West Nile and Bagaza viruses from mosquitoes (Diptera: Culicidae) in central Senegal (Ferlo) / Traore-Lamizana M., Zeller H.G., Mondo M., et al. // J. Med. Entomol. 1994 - V. 31 - N. 6 - P. 934-938.

102. Isolation of West Nile virus from Culex mosquitoes / Taylor R.M., Hurlbut H.S., Dressier H.R., et al. // J. Egypt. Med. Assoc. 1953 - V. 36 - N. 3 - P. 199208.

103. Ixodid and argasid tick species and West Nile virus / Lawrie C.H., Uzcategui N.Y., Gould E.A., Nuttall P.A. // Emerg. Infect. Dis. 2004(6) - V. 10 - N. 4 -P. 653-657.

104. Johnston L.J., Halliday G.M., King N.J. Langerhans cells migrate to local lymphnodes following cutaneous infection with an arbovirus // J. Invest. Dermatol. -2000-V. 114-P. 560-568.

105. Klenk K., Komar N. Poor replication of West Nile virus (New York 1999 strain) in three reptilian and one amphibian species // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2003 -V. 69-N.3-P. 260-262.

106. Komar N., Clark G.G. West Nile virus activity in Latin America and the Caribbean // Rev. Panam. Salud. Publica. 2006. - V. 19 - N. 2 - P. 112-117.

107. Kramer L.D., Bernard K.A. West Nile virus infection in birds and mammals // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2001 - V. 951 - P. 84-93.

108. Kuno G., Gubler D.J., Santiago de Weil N.S. Antigen capture ELISA for the identification of dengue viruses // J. Virol. Methods. 1985. - V. 12. - N. 1-2. -P. 93-103.

109. Laboratory-acquired West Nile virus infections—United States, 2002 / Centers for Disease Control and Prevention (CDC) // Morb. Mortal. Wkly. Rep. 2002 -Dec 20- V. 51 - N. 50 - P. 1133-1135.

110. Lucasse C. First isolation of West Nile virus in Central Africa // Bull. Soc. Pathol. Exot. Filiales. 1963 -V. 56-P. 156-161.

111. Mackenzie J.S., Gubler D.J., Petersen L.R. Emerging flaviviruses: the spreadiand resurgence of Japanese encephalitis, West Nile and dengue viruses // Nat. Med. 2004 - V. 10 (12 Suppl) - P. 98-109.

112. Malkinson M, Banet C. The role of birds in the ecology of West Nile virus in Europe and Africa // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2002. - V. 267. - P. 309322.

113. Me<?o O. West Nile arbovirus antibodies with hemagglutination inhibition (Ш) in residents of Southeast Anatolia // Mikrobiyol. Bui. 1977 - V. 11 - N. 1 - P. 3-17.

114. MEGA: A biologist-centric software for evolutionary analysis of DNA and protein sequences / Kumar S., Dudley J., Nei M., Tamura K. // Briefings in Bioinformatics 2008 - V. 9 - P. 299-306.

115. Mishra A.C., Mourya D.T. Transovarial transmission of West Nile virus in Culex vishnui mosquito // Indian J. Med. Res. 2001 - V. 114 - P. 212-214.

116. Natural West Nile virus infection in a captive juvenile Arctic wolf (Canis lupus) / Lanthier I., Hebert M., Tremblay D., et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2004 - V. 16 — N. 4 — P. 326-329.

117. Nir Y., Beemer A., Goldwasser R.A. West Nile virus infection in mice following exposure to a viral aerosol // Br. J. Exp. Pathol. 1965 - V. 46 - P. 443^149.

118. Nonviremic transmission of West Nile vims / Higgs S., Schneider B.S., Vanlandingham D.L., et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2005 V. 102 -N. 25-P. 8871-8874.

119. Nonviremic transmission of West Nile virus: evaluation of the effects of space, time, and mosquito species / McGee C.E., Schneider B.S., Girard Y.A., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2007 - V. 76 - N. 3 - P. 424-430.

120. Nosal B, Pellizzari R. West Nile virus // CMAJ. 2003. - May 27 - V. 168. - N. 11.-P. 1443-1444.

121. Oral transmission of West Nile virus in a hamster model / Sbrana E., Tonry J.H., Xiao Shu-Yuan, et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2005 - V. 72 - N. 3 - P. 325-329.

122. Origin of the West Nile virus responsible for an outbreak of encephalitis in the northeastern United States / Lanciotti R.S., Roehrig J.T., Deubel V., et al. // Science. 1999. - V. 286. - N. 5448. - P. 2333-2337.

123. Outbreak of West Nile virus infection, Volgograd Region, Russia, 1999 / Platonov A.E., Shipulin G.A., Shipulina O.Y., et al. // Emerg. Infect. Diseases. -2001 -V. 7.-N. l.-P. 128-132.

124. Pathogenecity of West Nile virus in chickens / Senne D.A., Pedersen J.C., Hutto D.L., et al. // Avian Diseases. 2000. - V. 44. - N. 3. - P. 642-649.

125. Pathologic and immunohistochemical findings in naturally occuring West Nile virus infection in horses / Cantile C., Del Piero F., Di Guardo G., Arispici M.// Vet Pathol. -2001 -V. 38-P. 414-421.

126. Pathology of fatal West Nile virus infections in native and exotic birds during the 1999 outbreak in New York City, New York / Steele K.E., Linn M.J., Schoepp R. J., et al. // Vet. Pathol. 2000 - V. 37 - N. 3 - P. 208-224.

127. Paul S.D., Rajagopalan P.K., Sreenivasan M.A. Isolation of the West Nile virus from the frugivorous bat, Rousettus leschenaulti // Indian J. Med. Res. 1970 -V. 58 -N. 9 - P. 1169-1171.

128. Pavri K.M., Singh K.R. Isolation of West Nile virus from Culex fatigans mosquitoes from Western India // Ind. J. Med. Res. 1965 - June - V. 53 - P. 501-505.

129. Persistent shedding of West Nile virus in urine of experimentally infected hamsters / Tonry J.H., Xiao S.Y., Siirin M., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. -2005-V. 72-P. 320-324

130. Phillips R.A., Christensen K. Field-caught Culex erythrothorax larvae found naturally infected with West Nile vims in Grand County, Utah // J. Am. Mosq. Control Assoc. 2006 - V. 22 - N. 3 - P. 561 -262.

131. Phylogenetic relationships of southern African West Nile virus isolates / Burt F.J., Grobbelaar A.A., Leman P.A., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2002 - V. 8. -N. 8.-P. 820-826.

132. Pilo-Moron E., Vincent J., Le Corroller Y. Isolation of a West-Nile virus in the extreme south of the Algerian Sahara (Djanet) // Arch. Inst. Pasteur Alger. -1970-V. 48-P. 181-184.

133. Samoilova T.I., Votiakov V.I., Titov L.P. Virologic and serologic investigations of West Nile virus circulation in Belarus // Cent. Eur. J. Public Health. 2003, June. - V. 11. - N. 2. - P. 55-62.

134. Samuel M.A., Diamond M.S. Pathogenesis of West Nile virus infection: a balance between virulence, innate and adaptive immunity, and viral evasion // J. Virol.-2006-V. 80-N. 19-P. 9349-9360.

135. Schmidt J.R., Said M.I. Isolation of West Nile virus from the african bird argasid, Argas reflexus Hermanni, in Egypt // J. Med. Entomol. 1964 - V. 391. P. 83-86.

136. Serologic evidence of exposure of wild mammals to flaviviruses in the central and eastern United States / Root J.J., Hall J.S., McLean R.G., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2005 - V. 72 - N. 5 - P. 622-630.

137. Serologic evidence of West Nile virus infection in black bears (Ursus americanus) from New Jersey / Farajollahi A., Panella N.A., Can- P., et al. // J. Wildl. Dis. 2003 - V. 39 -N. 4 - P. 894-896.

138. Serologic evidence of West Nile virus infections in wild birds captured in Germany / Linke S., Niedrig M., Kaiser A., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. -2007-V. 77-N.2-P. :358-364.

139. Serologic survey of cats and dogs during an epidemic of West Nile virus infection in humans / Kile J.C., Panella N.A., Komar N., et al. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 2005 - Apr 15- V. 226 -N. 8 - P. 1349-1353.

140. Serological evidence for Japanese encephalitis and West Nile viruses in domestic animals of Nepal / Pant G.R., Lunt R.A., Rootes C.L., Daniels P.W. // Сотр. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2006 - V. 29 -N. 2-3 -P 166-175.

141. Serological, reverse transcriptase-polymerase chain reaction, and immunohistochemical detection of West Nile virus in a clinically affected dog / Buckweitz S., Kleiboeker S., Marioni K., et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2003 -V. 15-P. 324-329.

142. Serological surveillance of West Nile virus infection in a village of the Central Highlands in Madagascar / Morvan J., Fontenille D., Lepers J.P., Coulanges P. // Ami. Soc. Belg. Med. Trop. 1990-V. 70-N. 1 - P. 55-63.

143. Seroprevalence of West Nile, Rift Valley, and sandfly arboviruses in Hashimiah, Jordan / Batieha A., Saliba E.K., Graham R., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2000 -V. 6-N. 4-P. 358-362.

144. Short report: serologic evidence for West Nile virus transmission in Puerto Rico and Cuba / Dupuis A.P., Marra P.P., Reitsma R., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2005 - V. 73 - N. 2 - P. 474-476.

145. Study on West Nile virus persistence in monkeys / Pogodina V.V., Frolova M.P., Malenko G.V., et al. // Arch. Virol. 1983 - V. 75 - P. 71-86.

146. Susceptibility of mosquito and tick cell lines to infection with various flaviviruses / Lawrie C.H., Uzcategui N.Y., Armesto M., et al.// Med. Vet. Entomol. 2004 - V. 18 - N. 3 - P. 268-274.

147. Taxonomy Browser (Flaviviridae) сайт. URL http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwvvtax.cgi?id=11050 (последнее обращение 25.01.2010)

148. Thakare J.P., Rao T.L., Padbidri V.S. Prevalence of West Nile virus infection in India // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 2002 - V. 33 -N. 4 - P. 801-805.

149. The relationships between West Nile and Kunjin viruses / Scheiret J.H., Poidinger M., Mackenzie J.S., et al. // Emerg. Infect. Diseases 2001, - V. 7 -N. 4-P. 697-705.

150. Tick-borne encephalitis with hemorrhagic syndrome, Novosibirsk region, Russia, 1999 / Ternovoi V.A., Kurzhukov G.P., Sokolov Y.V., et al. // Emerg. Infect. Diseases 2003. - V. 9. -N. 6. - P. 743-746.

151. Transmission cycles of the West-Nile virus in Madagascar, Indian Ocean / Fontenille D., Rodhain F., Digoutte J.P., et al. // Ann. Soc. Belg. Med. Trop. -1989-V. 69 -N. 3 — P. 233-243.

152. Transmission of West Nile (B956 strain) and Semliki Forest virus (MBB2646-M-404744-958 strain) to suckling hamsters during lactation / Reagan R.L., Yancey F.S., Chang S.C., Brueckner A.L. // J. Immunol. 1956 - V. 76 - P. 243-245.

153. Transmission of West Nile virus through blood transfusion in the United States in 2002 / Pcaler L.N., Marfin A.A., Petersen L.R., et al. // N. Engl. J. Med. -2003 V. 349-N. 13-P. 1236-1245.

154. Transstadial transfer of West Nile virus by three species of ixodid ticks (Acari: Ixodidae) / Anderson J.F., Main A.J., Andreadis T.G., et al. // J. Med. Entomol.- 2003 V. 40 - N. 4 -P. 528-533.

155. Update: West Nile Vims Encephalitis. New York 1999 // Centers for Disease Control and Prevention (CDC) // Morb. Mortal. Wkly. Rep., Atlanta, 1999. - V. 48.-P. 890-892.

156. Vertical transmission of West Nile virus by Culex and Aedes species mosquitoes / Baqar S., Hayes C.G., Murphy J.R., Watts D.M. // Am. J. Trop. Med. Hyg. -1993 V. 48 - N. 6 - P. 757-762.

157. Weinbren M.P. The occurrence of West Nile virus in South Africa // S. Afr. Med. J. 1955-V. 29-N47-P 1092-1097.

158. West Nile encephalitis / Solomon Т., Ooi M.H., Beasley D.W.C., Mallewa M.U BMJ 2003 - V. 326 - P. 865-869.

159. West Nile encephalitis epidemic in southeastern Romania / Tsai T.F., Popovici F., Cernescu C., et al. // Lancet. 1998. - V. 352. - P. 767-71.

160. West Nile fever in Israel 1999-2000: from geese to humans / Bin H., Grossman Z., Pokamunski S., Malkinson M., et al. // Annals of the New York Academy of Sciences. -2001 -V. 951 P. 127-142.

161. West Nile Flavivirus Polioencephalomyelitis in a Harbor Seal (Phoca vitulina) / Del Piero F., Stremme D.W., Habecker P.L., Cantile C. // Vet. Pathol. 2006 -V. 43-P. 58-61.

162. West Nile outbreak in horses in southern France, 2000: the return after 35 years / Murgue В., Murri S., Zientara S., et al. // Emerg. Infect. Diseases 2001 - V. 7 -N. 4 - P. 692-696.

163. West Nile viral meningoencephalitis in Tunisia / Triki H., Murri S., Le Guenno В., et al. // Med. Trop. (Mars). 2001 - V. 61 - N. 6 - P. 487-490.

164. West Nile vims / Campbell G.L., Marfin A.A., Lanciotti R.S., Gubler D.J. // Lancet Infect. Dis. 2002. - V. 2- P. 519-529.

165. West Nile vims activity—United States, 2006 / Centers for Disease Control and Prevention (CDC) // Morb. Mortal. Wkly. Rep. 2007 - June 8 - V. 56 -N. 22 -P. 556-559.

166. West Nile virus and other zoonotic viruses in Russia: examples of emergind-reemerging situation / Lvov D.K., Butenko A.M., Gromashevsky V.L., et al. // Arch, of Virol. (Suppl.). 2004 - V. 18 - P. 85-96.

167. West Nile virus Basics. Entomology. сайт. URL http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnile/mosquitoSpecies.htm (последнее обращение 25.01.2010)

168. West Nile virus; ecology and epidemiology of an emerging pathogen in Colombia / Berrocal L., Pena J., Gonzalez M., Mattar S. // Rev. Salud. Publica (Bogota). -2006-V. 8-N. 2-P 218-228.

169. West Nile virus encephalitis and myocarditis in wolf and dog / Lichtensteiger C.A., Heinz-Taheny K., Osborne T.S., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2003 -V. 9 -N. 10-P. 1303-1306.

170. West Nile Virus encephalitis in a barbary macaque (Macaca sylvanus) / 01berg R.-A., Barker I.K., Crawshaw G.J., et al. // Emerg. Infect. Diseases 2004 - V. 10 -N. 4 -P. 712-714.

171. West Nile virus encephalomyelitis in horses in Ontario: 28 cases / Weese J.S., Baird J.D., DeLay J., et al. // Can. Vet. J. 2003. - V. 44. - N. 6. - P. 469-473.

172. West Nile virus epidemic in horses, Tuscany region, Italy / Autorino G.L., Battisti A., Deubel V., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2002 - V. 8. - N. 12. - P. 1372-1378.

173. West Nile virus home. Ecology and Virology. Vertebrate Ecology, сайт. URL http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnile/birds&mammals.htm (последнее обращение 25.01.2010)

174. West Nile virus in Guadeloupe: introduction, spread, and decrease in circulation level: 2002-2005 / Lefrancois Т., Blitvich B.J., Pradel J., et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2006 - V. 1081-P. 206-215.

175. West Nile vims in farmed alligators / Miller D.L., Mauel M.J., Baldwin C., et al. // Emerg. Infect. Diseases 2003. - V. 9. - N. 7. - P. 794-9.

176. West Nile virus in Mexico: evidence of widespread circulation since July 2002 /

177. Estrada-Franco J.G., Navarro-Lopez R., Beasley D.W., et al. // Emerg. Infect. Dis.-2003.-V. 9.-N. 12.-P. 1607-1607.

178. West Nile virus in Morocco, 2003 / Schuffenecker I., Peyrefitte C.N., el Harrak M., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2005 - V. 11 - N. 2 - P 306-309.

179. West Nile virus in Pakistan. 1. Sero-epidemiological studies in Punjab Province / Hayes C.G., Baqar S., Ahmed Т., et al. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. -1982 V. 76 - N. 4 - P. 431-436.

180. West Nile Virus in Transplant Recipients Investigation Team. Transmission of West Nile virus from an organ donor to four transplant recipients / Iwamoto M., Jernigan D.B., Guasch A., et al. // N. Engl. J. Med. 2003 - V. 348 - N. 22 -P. 2196-2203.

181. West Nile virus infection among turkey breeder farm workers—Wisconsin, 2002 / Centers for Disease Control and Prevention (CDC) // Morb. Mortal. Wkly. Rep. 2003 - Oct 24- V. 52-N. 42-P. 1017-1019.

182. West Nile virus infection in crocodiles / Steinman A., Banet-Noach C., Tal S., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2003 - V. 9 - N. 7 - P. 887-889.

183. West Nile virus infection in farmed american alligators (Alligator mississippiensis) in Florida / Jacobson E.R., Ginn P.E., Troutman J.M., et al. // J. Wild. Dis. 2005 - V. 41 - N. 1 - P. 96-106.

184. West Nile virus infection in mosquitoes, birds, horses, and humans, Staten Island, New York, 2000 / Kulasekera V.L., Kramer L., Nasci R.S., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2001 -V. 7-N. 4-P. 722-725.

185. West Nile virus infection in reindeer (Rangifer tarandus) / Palmer M.V., Stoffregen W.C., Rogers D.G., et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2004 - V. 16 -N. 3- P. 219-222.

186. West Nile virus infection in the golden hamster (Mesocricetus auratus): a model for West Nile encephalitis / Xiao S.Y., Guzman H., Zhang H., et al. // Emerg. Infect. Dis. -2001 -V. 7-N. 4-P. 714-721.

187. West Nile virus infection in tree squirrels (Rodentia: Sciuridae) in California,2004-2005 / Padgett K.A., Reisen W.K., Kahl-Purcell N., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2007 - V. 76-N. 5-P. 810-813.

188. West Nile virus infection of Thoroughbred horses in South Africa (2000-2001) / Guthrie A.J., Howell P.G., Gardner I.A., et al. // Equine Vet. J. 2003 - V. 35 -N. 6 - P. 601-605.

189. West Nile virus infection: serological investigation among horses in France and in Africa / Cabre O., Durand J.P., Prange A., et al. // Med. Trop. (Mars). 2005 -V. 65-N. 5-P. 439-443.

190. West Nile virus investigations in South Moravia, Czechland / Hubalek Z., Savage H.M., Halouzka J., et al. // Viral Immunol. 2000 - V. 13. - N. 4. - P. 427-33.

191. West Nile vims isolates from India: evidence for a distinct genetic lineage / Bondre V.P., Jadi R.S., Mishra A.C., et al. // J. Gen. Virol. 2007 - V. 88 - P. 875-884.

192. West Nile virus isolation from equines in Argentina, 2006 / Morales M.A., Barrandeguy M., Fabbri C., et al. // Emerg. Infect. Diseases 2006. - V. 12. -N. 10.-P. 1559-1561.

193. West Nile vims meningoencephalitis in a Suri alpaca and Suffolk ewe / Yaeger M., Yoon K.J., Schwartz K., Berkland L. // J. Vet. Diagn. Invest. 2004 - V. 16 -P. 64-66.

194. West Nile Virus Outbreak in North American Owls, Ontario, 2002 / Gancz A.Y., Barker I.K., Lindsay R., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2004 - V. 10 - N. 12 - P. 2135-2142.

195. West Nile vims quantification in feces of experimentally infected American and fish crows / Kipp A.M., Lehman J.A., Bowen R.A., et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2006 - V. 75 - N. 4 - P. 688-690.

196. West Nile Virus, Venezuela / Bosch I., Herrera F., Navarro J.-C., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2007. -N. 13. - P. 651-653.

197. West Nile virus viremia in eastern chipmunks (Tamias striatus) sufficient forinfecting different mosquitoes / Piatt K.B., Tucker В .J., Halbur P.G., et al. // Emerg. Infect. Dis. -2007-V. 13-N. 6-P. 831-837.

198. Whitman L., Aitken Т.Н. Potentiality of Ornithodoros moubata Murray (Acarina, Argasidae) as a reservoirvector of West Nile Vims // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1960-V. 54-P. 192-204.

199. Widespread West Nile vims activity, eastern United States, 2000 / Marfin A.A., Petersen L.R., Eidson M., et al. // Emerg. Infect. Dis. 2001 - V. 7 - N. 4 - P. 730-735.

200. Work Т.Н., Hurlbut H.S., Taylor R.M. Indigenous wild birds of the Nile Delta as potential West Nile vims circulating reservoirs // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1955 -V. 4-N. 5-P. 872-888.

201. Work Т.Н., Hurlbut H.S., Taylor R.M. Isolation of West Nile vims from hooded crow and rock pigeon in the Nile delta // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1953 -V. 84-N. 3 - P. 719-722.

202. Zeller H.G, Schuffenecker I. West Nile vims: an overview of its spread in Europe and the Mediterranean basin in contrast to its spread in the Americas // Eur. Journal Clin. Microbiol. Infect. Diseases 2004 - V. 23. - N. 3 - P. 147156.

Информация о работе

Кононова, Юлия Владимировна
кандидата биологических наук
Владимир, 2010
ВАК 03.02.02

Диссертация

Вирус Западного Нила в различных экосистемах юга Западной Сибири - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы