Вирулентные свойства стафилококковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите

Баязитова, Лира Табрисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Вирулентные свойства стафилококковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Вирулентные свойства стафилококковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите"

На правах рукописи

БАЯЗИТОВА ЛИРА ТАБРИСОВНА

ВИРУЛЕНТНЫЕ СВОЙСТВА СТАФИЛОКОККОВОЙ МИКРОФЛОРЫ КОЖИ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ

03.00.07 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Уфа-2009

\Jhk~ /

003477198

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Республика Татарстан, г. Казань).

Научный руководитель - доктор медицинских наук, профессор

Фассахов Рустэм Салахович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Габидуллин Зайнулла Гайнулинович;

доктор медицинских наук, профессор Поздеев Оскар Кимович

Ведущая организация - Государственное образовательное

учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации

Защита диссертации состоится 20 октября 2009 года в 11 часов на заседании Объединенного совета ДМ 208.006.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава» по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава».

Автореферат разослан « ее&М)щ2оо9г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Лукманова К. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

По данным ВОЗ, в мире ежегодно более 1 млн человек заболевают аллергическими болезнями, одним из наиболее распространенных среди которых является атопический дерматит (АтД). Заболеваемость АтД в экономически развитых странах мира составляет в среднем 15-20 человек на 1000 населения [Ильина Н.И., 2005; Ревякина В.А., Агафонов А. С., 2008]. Ухудшение здоровья населения, широкое распространение бактериальных, вирусных и грибковых инфекций, а также увеличение частоты резистентных к антибактериальным препаратам микроорганизмов существенно меняют течение болезни, приводя к развитию более тяжелых форм, характеризующихся рецидивирующим течением и выраженными воспалительными проявлениями [Елисютина О.Г., Феденко Е.С., 2006].

Серьезной проблемой является частое присоединение вторичной инфекции кожи у 25-34 % больных с атопическим дерматитом [Смирнова Г.И., 2004]. Среди микробов, колонизирующих кожу пациентов, страдающих АтД, лидирующую роль занимает Staphylococcus aureus. По данным разных авторов, у 80-95 % пациентов, страдающих этим заболеванием, с кожных покровов высевается Staphylococcus aureus [Leung D.Y.M., 2002; Gong J.Q. et al., 2006]. Установлено, что с усилением колонизации кожи стафилококком наблюдаются более тяжелые патологические изменения и характер течения атопического дерматита [Szacos Е. et al., 2004]. Присоединение стафилококковой инфекции к уже существующему аллергодерматозу часто становится пусковым фактором развития обострения заболевания.

Возможен и другой вариант развития АтД - колонизация кожи Staphylococcus aureus становится причиной развития АтД у лиц с атопическим фенотипом.

Накопленный клинический опыт показывает, что стафилококковая колонизация кожи у пациентов с АтД значительно изменяет характер течения этого аллергического заболевания. Однако, несмотря на значительное число работ, посвященных роли микробного фактора при данной патологии, особенности стафилококковой микрофлоры, колонизирующей кожу пациентов при АтД, раскрыты неполно. Недостаточно изучено влияние местной терапии на вирулентные свойства Staphylococcus aureus, персистирующего на коже больных атопическим дерматитом.

Исследования вирулентных свойств бактерий рода Staphylococcus, колонизирующих кожные покровы, необходимы для раскрытия механизмов взаимодействия макро- и микроорганизма, возникающих при развитии АтД,

что будет способствовать развитию новых подходов к лечению пациентов с этим заболеванием.

Цель исследования

Определить вирулентные свойства и ферментативные особенности стафилококков, колонизирующих кожу больных атопическим дерматитом; оценить антибактериальную активность 1-окси-2(1Н)-пиридитиона цинка (пиритиона цинка) по отношению к Staphylococcus aureus при его применении в местной терапии больных атопическим дерматитом.

Задачи исследования

1 Определить видовой и количественный состав стафилококковой микрофлоры кожи при осложнённом и неосложнённом течении атопического дерматита в различных возрастных группах больных.

2 Изучить вирулентные свойства (адгезивный потенциал, активность гидролитических энзимов и ферментов антиоксидантной системы защиты) штаммов Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, колонизирующих кожу пациентов с атопическим дерматитом в зависимости от тяжести заболевания.

3 Оценить клиническую эффективность местной терапии с применением пиритиона цинка и его антибактериальные свойства в отношении штаммов Staphylococcus aureus, колонизирующих поражённую кожу больных атопическим дерматитом.

Научная новизна

Получены новые данные о различной степени выраженности адгезивного потенциала у штаммов стафилококков (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis), колонизирующих кожу больных, в зависимости от степени тяжести атопического дерматита.

Впервые дана количественная характеристика активности протеиназ штаммов стафилококков, высеянных с пораженной кожи больных атопическим дерматитом; для Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis определён тип секретируемых протеиназ, обусловливающих эту активность.

Установлена зависимость активности каталазы и супероксиддисмутазы штаммов стафилококков, высеянных с кожи больных, от клинической формы, степени тяжести и периода течения атопического дерматита.

Выявлена высокая термонуклеазная активность Staphylococcus aureus, колонизирующих кожу больных при тяжелом течении атопического дерматита.

Показана высокая эффективность местной терапии с применением пиритиона цинка, обусловленная антибактериальным действием препарата, способствующим элиминации с кожи больных Staphylococcus aureus и снижению их вирулентных свойств.

Научно-практическая значимость работы

Полученные данные о высокой частоте выделения с кожи больных с тяжелой степенью атопического дерматита метициллинрезистентных штаммов Staphylococcus указывают на необходимость проведения антибактериальной терапии с учетом результатов определения метициллинрезистентности стафилококков.

Результаты исследования клинической эффективности и антибактериальной активности препаратов на основе пиритиона цинка (препарат «Скин-кап») позволяют рекомендовать использование их при местной терапии у больных с атопическим дерматитом, ассоциированным с массивной колонизацией кожи Staphylococcus aureus.

Выраженная активность гидролитических, антиоксидантных ферментов и адгезивность штаммов Staphylococcus aureus, колонизирующих кожу больных атопическим дерматитом, характеризуют их высокую патогенность, что диктует необходимость учета роли бактериального фактора при проведении этиопатогенетической терапии.

По результатам диссертационной работы подана заявка и получено решение о выдаче патента на изобретение «Способ определения IgG-протеиназной активности» (заявка № 2008113407/13 от 28.03.2008 г.).

Внедрение результатов исследований в практику

Результаты диссертационного исследования используются в работе специализированной поликлиники Федерального государственного учреждения науки «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора; аллергологического отделения муниципального учреждения здравоохранения «Детская клиническая городская больница № 7» г. Казани; в учебном процессе на кафедрах микробиологии и аллергологии и клинической иммунологии Государственного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Казанская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.

Основные положения, выносимые на защиту

1 Кожа пациентов первых двух лет жизни с тяжелым течением экссудативной формы атопического дерматита колонизирована Staphylococcus aureus в высокой степени плотности.

2 Штаммы Staphylococcus aureus, колонизирующие пораженную кожу больных атопическим дерматитом в периоде обострения, обладают выраженной адгезивной способностью, высоким уровнем активности Ig-протеиназ, нуклеаз, каталазы и супероксиддисмутазы.

3 Применение пиритиона цинка приводит к снижению плотности контаминации пораженной кожи Staphylococcus aureus, снижению их вирулентных свойств.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на научных форумах: 15-м Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 2005); Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2007» (Москва, 2007); 17-м Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Казань, 2007); 10-м Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009).

Основные положения диссертации обсуждены на расширенном заседании Ученого совета Федерального государственного учреждения науки «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора; кафедр аллергологии и клинической иммунологиии, микробиологии Государственного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Казанская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию, специализированной консультативно-диагностической поликлиники инфекционно-аллергических заболеваний при Федеральном государственном учреждении науки «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора (протокол № 1 от 1 июня 2009 года).

Диссертация апробирована на расширенном заседании Объединенного диссертационного совета ДМ 208.006.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава» (протокол № 7 от 25 06.09 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 127 страницах, содержит 40 таблиц и 13 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Список литературы включает 194 источника (75 отечественных и 119 зарубежных).

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Клинические исследования проводились в течение 2003-2005 гг. на базе специализированной консультативно-диагностической поликлиники инфекционно-аплергических заболеваний ФГУН «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора и аллергологического отделения муниципального учреждения здравоохранения «Детская городская клиническая больница № 7» (г. Казань).

Диагноз атопический дерматит (АтД) установлен у 114 пациентов, включённых в диссертационное исследование, в соответствии с рекомендациями Российского национального согласительного документа по атопическому дерматиту (2002) и согласительного документа «Современная стратегия терапии атопического дерматита: программа действия педиатра» (2004). Степень тяжести АтД оценивалась по международной системе SCORAD (Severity scoring of atopic dermatitis). Были выделены три степени тяжести: легкая (индекс SCORAD менее 30 баллов), среднетяжелая (индекс SCORAD от 30 до 60 баллов), тяжелая (индекс SCORAD более 60 баллов).

Контрольную группу составили 25 практически здоровых лиц (ПЗЛ) в возрасте от 6 месяцев до 18 лет. Основными критериями отбора в группу сравнения из числа практически здоровых лиц явились следующие: отсутствие жалоб на нарушения состояния здоровья в момент осмотра; отсутствие признаков аллергической и другой острой или хронической патологии [Хайруллина P.M., 1999].

В работе использован комплекс методов: клинических, лабораторно-инструментальных, аллергологических, микробиологических,

биохимических и статистических.

Общеклинические лабораторные методы исследования включали общий анализ крови и мочи, анализ кала на гельминты и простейшие.

Специфическая диагностика включала оценку данных аллергологического анамнеза, кожного тестирования, определение содержания общего иммуноглобулина Б (IgE) в сыворотке крови. Кожное тестирование проводили в аллергологическом кабинете на базе поликлиники ФГУН КНИИЭМ (зав. поликлиникой - к.м.н. Л.Р. Смирнова). Уровень общего IgE в сыворотке крови определяли количественным иммуноферментным методом с использованием наборов тестов производства ЗАО «БиоХимМак». Анализ аллергологического анамнеза проводили по общепринятым стандартам обследования аллергических больных.

Микробиологические методы исследования включали качественную и количественную оценку микрофлоры. Качественный состав микрофлоры кожи определяли методом агаровых мазков-отпечатков по Н. Н. Клемпарской в модификации А. Е. Максимовой (1997). Идентификацию микроорганизмов осуществляли по морфологическим, биологическим и биохимическим свойствам в соответствии с нормативными документами. Также использован количественный метод микробиологического исследования микрофлоры кожи - количество выросших колоний микроорганизмов выражали в колониеобразующих единицах на 1 см2 кожи (КОЕ/см2).

Определение ДНК-азной активности штаммов стафилококка проводили согласно приказу МЗ РФ от 22.04.1985 г. № 585 на питательной среде DNAse-Agar («Bio-RAD», Франция). Определение термонуклеазной активности штаммов бактерий рода Staphylococcus проводили методом кислоторастворимых фракций в жидкой среде культивирования по методу Н.Е. Кучеренко и соавт. (1988).

Определение чувствительности стафилококков к антимикробным препаратам и метициллинрезистентности выделенных штаммов осуществляли согласно Методическим указаниям МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности штаммов бактерий рода Staphylococcus к антибактериальным препаратам проводили диско-диффузионным методом.

Идентификацию метициллинрезистентных стафилококков осуществляли по МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» с использованием питательной среды MRSA-SELECT-агар («Bio-RAD», Франция). Для контроля качества проводимых исследований использовали эталонный штамм Staphylococcus aureus АТСС № 25923.

Активность секретируемых стафилококками протеолитических ферментов определяли в питательной среде методом фибрин-агаровых пластин [Astrup Т., 1952]. Количественно протеиназную активность оценивали in vitro иммуноферментным методом в лаборатории иммунологии и разработки аллергенов ФГУН КНИИЭМ Роспотребнадзора (зав. лаб. — старший научный сотрудник, к.м.н. Тюрин Ю.А). В качестве субстрата использовали иммуноглобулин G человека (IgG). Активность протеиназ выражали в единицах удельной активности фермента (мкмоль субстрата, расщеплённого за 1 минуту на 1 мг белка в питательной среде культивирования при оптимальных условиях). Концентрацию белка в питательной среде определяли по М. М. Bradford (1976).

Определение адгезивных свойств штаммов стафилококков проводили по методу В.И. Брилис и соавт. (1986). При этом изучение окрашенных мазков и подсчет клеток проводили в лаборатории физиологии и генетики культивируемых клеток Казанского института биохимии и биофизики КНЦ

РАН с использованием цифровой камеры AxioCam MRc5 (Cari Zeiss, Германия), адаптированной к световому микроскопу «Jenamed» (Cari Zeiss, Германия) совместно с научным сотрудником, к. б. н. Акуловым А. Н.).

Активность супероксиддисмутазы (СОД) в лизатах стафилококка определяли адренохромным методом в модификации Т. В. Сирота (1999). Лизаты стафилококков получали по методу R. Merchante (1995). Удельную активность СОД оценивали на 1 мг белка, содержащегося в лизате стафилококковых клеток. Концентрацию белка определяли по М. М. Bradford (1976).

Активность каталазы бактериальных штаммов определяли по методу М.А. Королюк и соавт. (1988), выражали в мкаталах на 1 млн микробных клеток.

Схема местной терапии больных атопическим дерматитом в возрасте от 1 года до 18 лет, включающая препараты пиритиона цинка:

- при ограниченной форме АтД использовали крем для наружного применения 0,2 % 2 раза в день (утром и вечером) на 4-6 ч до полного разрешения процесса (21 день);

- при наличии экзематизации, мокнутия, отека использовали аэрозоль для наружного применения 0,2 % 2 раза в день до полного разрешения процесса (21 день).

- при лихеноидной форме и на участки лихенизации кожи - крем для наружного применения 0,2 % 1 раз в день до полного разрешения процесса (21 день).

Статистическую обработку результатов исследования проводили на персональном компьютере в математических пакетах программ "Statistica 6.0" StatSoft USA. Определяли среднюю арифметическую (М), стандартную ошибку средней арифметической (ш). Оценку значимости различий средних арифметических проводили с использованием t-критерия

Стьюдента и уровня значимости (р). Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

Микробиологические особенности стафилококковой микрофлоры ксжи у больных атопическим дерматитом

Вначале нами была проведена оценка прогностически неблагоприятных факторов у пациентов с атопическим дерматитом. Было установлено, что у 91,3 % пациентов заболевание чаще дебютировало на первом году жизни: у 57,0 % - в первые 3 месяца, 20,3 % - в возрасте от 3 до 6 месяцев и 14,0 % - во втором полугодии жизни, т.е. был характерен ранний дебют заболевания. У 50 (43,8 %) пациентов наблюдалось сочетание нескольких аллергических заболеваний: в 60,0 % случаев АтД сочетался с атопической

бронхиальной астмой, в 10,0 % - с аллергическим ринитом и в 10,0 % - с пищевой и/или лекарственной аллергией, проявляющейся в виде ангионевротического отёка и острой крапивницы.

Оценка наследственной отягощённости по аллергическим заболеваниям у пациентов с АтД позволила выделить группы больных с высокой, средней и низкой степенью наследственной отягощенности. Высокая степень наследственной отягощённости была выявлена у 30,7 % пациентов с атопическим дерматитом. В этой группе в период клинического обострения наблюдалось тяжелое течение заболевания (индекс БСОНАЭ - 60 баллов и выше) и выявлены статистически значимые различия в числе обострений в течение года в сравнении с группой лиц со средней и низкой степенью наследственной отягощённости. В 57,0 % случаев у пациентов с АтД наблюдалась средняя степень наследственной отягощённости, тяжесть заболевания составила от 30 до 60 баллов по ЗСОЯАО. У пациентов с АтД низкая наследственная отягощённость встречалась редко (12,3 % случаев), тяжесть заболевания при этом составляла в период обострения менее 30 баллов по БСОКАО, течение заболевания характеризовалось статистически значимо меньшим числом обострений в год по сравнению с пациентами с высокой и средней степенью наследственной отягощённости по аллергическим заболеваниям (таблица 1).

Таблица 1 - Зависимость тяжести атопического дерматита от степени

наследственной отягощённости по аллергическим заболеваниям

Степень наследственной отягощенности Возраст пациентов, мес. (мт,- гпах.) Степень тяжести АтД по индексу БСОЯАО Частота обострений в год

Высокая 6,5-60,8 Тяжелая 6,5+1,0*

Средняя 36,5-216,0 Среднетяжелая 4,4±0,2

Низкая 46,4-52,8 Легкая 3,8±0,4

* Различие с больными с высокой и низкой степенью наследственной отягощенности статистически значимо (р<0,05).

Учитывая, что уровень 1§Е у детей и взрослых может быть использован для оценки выраженности сенсибилизации и определения атопического генеза заболеваний, нами было проведено исследование его содержания у больных с разной степенью тяжести атопического дерматита. Было показано, что у 38 (33,3 %) пациентов с тяжелым течением АтД (экссудативная и пруригоподобная формы) в возрасте от 6 месяцев до 2 лет отмечались максимальные уровни общего 1§Е - (392,0±18,3) МЕ/мл (р<0,05). В возрастной группе от 3 до 14 лет АтД протекал в лихеноидной и эритематосквамозной форме (средняя степень тяжести), уровень сывороточного ^Е - (228,0±8,03) МЕ/мл - статистически значимо

отличался от его уровня в младшей и старшей возрастных группах. У пациентов в возрасте от 15 до 18 лет АтД протекал в эритематосквамозной форме с лихенизацией (легкая степень тяжести), уровень общего сывороточного IgE при этом был наименьшим и составил (146,0±11,3) МЕ/мл (р<0,05).

Напряжённость сенсибилизации у пациентов с АтД подтверждалась высокими значениями абсолютного и относительного содержания эозинофилов в периферической крови. Так, уровень эозинофилии был наибольшим у пациентов в возрасте до двух лет с тяжелым течением АтД, наименьший уровень эозинофилии был выявлен в старшей возрастной группе с эритематосквамозной формой АтД с выраженной лихенизацией кожи. Уровень эозинофилии периферической крови коррелировал с уровнем общего IgE (г=0,67, р<0,05).

Для оценки роли микробного фактора в развитии АтД нами были проведены микробиологические исследования в двух группах больных: в 1-й группе АтД протекал без клинических проявлений вторичной инфекции кожи (п=84); во 2-й группе наблюдались осложнения течения заболевания с присоединением местной инфекции кожи (п=30).

В первой группе частота выделения Staphylococcus aureus с поражённой кожи составила 59,5 %, с непораженной - 27,7 %, против 8,0 % в группе практически здоровых лиц. Частота встречаемости у больных Staphylococcus epidermidis составила от 5,0 до 11,9 % (с непораженной и пораженной кожи соответственно); в контрольной группе (ПЗЛ) Staphylococcus epidermidis был обнаружен на коже у 20,0 % обследованных.

Установлено, что наиболее часто и с максимальной плотностью обсемененности Staphylococcus aureus выделялся с кожи детей в возрасте до 2 лет с экссудативной формой АтД, протекавшего с максимальной степенью тяжести в период обострения кожного процесса - (5,5±0,3) lg

КОЕ/см2 против (3,3±0,4) lg КОЕ/см2 у практически здоровых лиц (р<0,05). По мере снижения тяжести течения АтД наблюдалось уменьшение частоты выделения и плостности колонизации поверхности кожи золотистым стафилококком.

Во 2-й группе пациентов (с осложненным инфекцией течением АтД) у 16 (14,0 %) пациентов (дети в возрасте от 6 мес. до 3 лет) было отмечено развитие бактериальной, у 7 (6,1 %) - микотической, обусловленной дрожжеподобными грибами рода Candida и Malassezia; и у 7 (6,1 %) больных - микст-инфекции, обусловленной ассоциацией бактериальной (Staphylococcus aureus) и грибковой микрофлорой (Candida, Malassezia). Закономерных изменений в степени колонизации поверхности кожи Staphylococcus aureus в зависимости от тяжести заболевания не выявлено.

Полученные данные согласуются с данными других исследователей,

показавших четкие видовые различия в частоте встречаемости Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis в микробиоценозе коже больных АтД, характеризующих патогенетическую значимость бактерий рода стафилококков в развитии заболевания [Мокроносова М.А., 2003; Gong J. Q. et al., 2006]. При АтД без клинических проявлений инфекционного процесса на коже частота обнаружения и степень обсемененности поверхности пораженной кожи Staphylococcus aureus определяется уровнем тяжести, характером течения заболевания, обусловленными особенностями реагирования организма. Осложненные вторичной инфекцией клинические формы АтД характеризуются более тяжелым течением, что обусловлено снижением реактивности организма и развитием иммунной недостаточности у больных [Leung D. Y. М., 2002]. Различия в патогенетической роли основных видов стафилококков, колонизирующих кожу ПЗЛ и больных АтД, могут быть обусловлены особенностями вирулентных свойств этих бактерий. В связи с этим далее нами были изучены вирулентные свойства бактерий рода Staphylococcus, колонизирующих кожу больных атопическим дерматитом.

Адгезивность - способность экспрессировать факторы адгезии и колонизации является пусковым механизмом реализации патогенности бактерий. Выбор эритроцитарной модели для оценки адгезии был обусловлен тем, что эритроциты несут на своей поверхности фибронектин, фибриноген и такие компоненты гликокаликса, как гликозаминогликаны, которые создают специфические эпитопы для взаимодействия с адгезивными поверхностными протеинами стафилококка и другими факторами адгезии этих бактерий [Clarke S.R. et al., 2004]. Для оценки адгезивного потенциала применялся индекс адгезии стафилококка (ИАС) -среднее число адгезированных клеток на одном эритроците [Брилис В.И. и др., 1986]. Неадгезивными считали штаммы при среднем числе клеток на одном эритроците <1,75; низкоадгезивными - от 1,76 до 2,50; среднеадгезивными от 2,51 до 4,00 и высокоадгезивными при ИАС >4,00.

Было показано, что в период обострения заболевания с кожи пациентов выделяются гетерогенные по адгезивности стафилококки, которые условно можно разделить на низко- и среднеадгезивные варианты (ИАС от 1,78 до 3,40) видов Staphylococus aureus, Staphylococcus epidermidis (50,0 % всех выделенных штаммов) и высокоадгезивные варианты (ИАС от 4,50 до 6,00) вида Staphylococcus aureus (25,0 % штаммов). В отличие от больных АтД, с кожи ПЗЛ выделялись стафилококки (Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus epidermidis), большая часть которых (75,0 %) была

отнесена к неадгезивным (ИАС от 0,6 до 1,0) и низкоадгезивным вариантам (ИАС от 1,0 до 2,0). Установлена чёткая зависимость встречаемости высоко-, средне- и низкоадгезивных вариантов Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus от тяжести течения атопического дерматита. Так, при среднетяжёлых и тяжёлых формах АтД кожа пациентов колонизировалась только высокоадгезивными штаммами Staphylococcus aureus и среднеадгезивными штаммами Staphylococcus epidermidis, при легких формах тяжести АтД выделялись низкоадгезивные и среднеадгезивные варианты Staphylococcus epidermidis и Staphylococcus aureus (таблица 2).

Таблица 2 - Адгезивность стафилококков кожи пациентов с различной _степенью тяжести атопического дерматита_

Степень тяжести АтД Индекс адгезии стафилококков (ИАС)

S. aureus S. epidermidis

Легкая (п=19) 3,5+0,5* 2,8+0,5*

Среднетяжелая (п=27) 4,5±0,3* 2,7+0,3

Тяжелая (п=14) 5,5±0,5* 3,7±0,3*

ПЗЛ 2,5±0,5 2,0+0,5

* Различие с ПЗЛ статистически значимо (р<0,05).

Преимущественная колонизация кожи при АтД видом Staphylococcus aureus обусловлена, прежде всего, протеолитической инактивацией протеазами бактерицидного действия антимикробных пептидов кожи (LL-37). Нами были получены статистически значимые различия в активности протеиназ между штаммами стафилококка, выделенными от пациентов с АтД и ПЗЛ - (1,4±0,21 и 0,36±0,08, соответственно, р<0,01). Эти различия носили у Staphylococcus aureus внутривидовой характер (рисунок 1).

мг lgG/мин/мг белка 2 1 1,75 1,5 1,25 1

0,75 0,5 0,25 0

□ Основная группа

П Группа сравнения

S.aureus (n=48) S- epldermidis (п=16)

вид штамма

Рисунок I - Протеиназная активность штаммов стафилококков, колонизирующих кожу больных атопическим дерматитом

Установлено, что протеиназная активность штаммов Staphylococcus aureus, колонизирующих кожу больных АтД, превышала эту активность почти в 4 раза у штаммов данного вида, выделенных от практически здоровых лиц (1,55+0,36 и 0,42±0,09 соответственно, р<0,02), что свидетельствует о различной степени вирулентности штаммов, колонизирующих кожу в норме и при патологии. С помощью ингибиторов протеиназ определяли два профиля lg-протеиназ по типу активных центров.

Таблица 3 - Профиль протеиназ (по типу активных центров) стафилококков кожи пациентов с атопическим дерматитом_

Виды стафилококков Тип протеиназ

сериновые металлозависимые

S. aureus + +

S. epidermidis + -

Примечание: «+»- наличие активности ^-протеиназ данного типа ; «-»- отсутствие активности ^-протеиназ данного типа у всех исследованных штаммов.

Определение профиля протеиназ по типу активных центров у Staphylococcus aureus, колонизирующих кожу больных АтД и ПЗЛ, показало, что энзимы, образуемые этими штаммами, относятся к металлозависимьм и сериновъш протеиназам. У вида Staphylococcus epidermidis преимущественно активность обеспечивалась за счет сериновых протеиназ (таблица 3).

Полученные нами данные о степени протеиназной активности штаммов Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, колонизирующих кожу в норме и при АтД, а также данные о видовом различии в профиле протеиназ (по типу активных центров) согласуются с работами исследователей, установивших, что протеолиз кателицидинов LL-37 сериновыми протеазами, секретируемыми Staphylococcus epidermidis, на фрагменты, не теряющие антимикробные свойства, позволяет данному виду конкурировать за данную экологическую нишу; в то время как металлопротеиназа Staphylococcus aureus расщепляет пептид LL-37 на фрагменты, не обладающие противомикробным действием и, тем самым, разрушает врожденную противомикробную систему защиты кожи.

Анализ ДНК-азной активности - значимого маркера патогенности штаммов Staphylococcus, показал, что ДНК-азоположительные штаммы стафилококков высеваются с кожи больных АтД в 91,2 % случаев, а ДНК-азоотрицательные - в 8,8 % случаев. Установлено, что при тяжелом варианте течения АтД у детей первых двух лет все выделенные штаммы Staphylococcus aureus с кожи пациентов были способны образовывать ДНК-азы, тогда как при легкой степени тяжести АтД кожа колонизируется ДНК-азоположительными штаммами в 71,0 % случаев. Такая высокая частота встречаемости ДНК-азной активности среди штаммов Staphylococcus aureus может служить характерным фенотипическим маркёром персистенции на коже штаммов этого вида у пациентов с атопическим дерматитом. Выявлено, что уровень активности термонукпеазы у штаммов стафилококков, колонизирующих кожу больных АтД, в 1,24 раза выше, чем у штаммов стафилококков, заселяющих кожу практически здоровых лиц.

Известно, что реактивные формы кислорода (02~ , ОН) и перекись водорода (Н2Ог) оказывают токсическое действие на микробные клетки, но вирулентные виды микроорганизмов эволюционно выработали систему ферментативной защиты (каталаза, супероксиддисмутаза, пероксидаза и др.) от окислительного киллинга в фагоцитах. Наши исследования показали, что в период обострения АтД кожа пациентов колонизируется штаммами стафилококков, для которых характерна высокая активность каталазы и супероксиддисмутазы (СОД), по сравнению со штаммами, выделяемыми с кожи в период ремиссии заболевания (таблицы 4 и 5). Выявленная закономерность не зависела от видовой принадлежности стафилококков. Анализ уровня активности каталазы у штаммов Staphylococcus aureus,

Staphylococcus epidermidis, колонизирующих кожу пациентов с различной степенью тяжестью АтД и ПЗЛ, выявил статистически значимые различия в уровне активности этого фермента. Активность СОД у штаммов Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, выделенных с кожи пациентов с различной тяжестью АтД, также была статистически значимо более высокой, чем активность этого фермента у штаммов этих видов, колонизирующих кожу практически здоровых лиц.

Таблица 4 —Активность основных антиоксидантных ферментов у штаммов Staphylococcus epidermidis, выделенных с кожи больных атопическим дерматитом в различные периоды заболевания_

Период заболевания Активность каталазы, мкат/ млн м.т. Активность супероксиддисмутазы, у.е.

Ремиссия (п=19) 2103,1±11,9* 273,1 ±7,9*

Обострение (п=10) 3200,6±6,9 416,8±6,5

* - Различия в среднем уровне активности у штаммов, полученных в разные периоды заболевания, статистически значимы (р<0,05).

Таблица 5 - Активность основных антиоксидантных ферментов у штаммов Staphylococcus aureus, выделенных с кожи пациентов с атопическим

Период заболевания Активность каталазы, мкат/млн м.т. Активность супероксиддисмутазы, у.е.

Ремиссия (п=35) 2208,1+12,4* 323,1±8,5*

Обострение (п=35) 3013,6±8,9 497,8±6,8

* - Различия в среднем уровне активности между штаммами, полученными в разные периоды заболевания, статистически значимы (р<0,05).

Выраженная активность ферментов каталазы и супероксиддисмутазы у штаммов стафилококов, составляющих бактериоценоз кожи, по-видимому, позволяют этим бактериям колонизировать среду, богатую кислородом, а также противостоять кислородзависимому киллингу, реализуемому в фагоцитах макроорганизма. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что при атопическом дерматите кожа колонизируется штаммами стафилококка, максимально адаптированными к окислительному киллингу

при фагоцитозе и внешним аэробным условиям.

Таким образом, в период обострения атопического дерматита кожа пациентов колонизируется штаммами стафилококков с выраженными адгезивными свойствами, высокой активностью ферментов распространения (протеиназы и термонуклеазы) и ферментов антиоксидантной защиты (каталазы и супероксиддисмутазы), по сравнению со штаммами, составляющими бактериоценоз кожи в норме.

Эффективность пиритиона цинка при местной терапии атопического дерматита и его антибактериальная активность в отношении штаммов Staphylococcus aureus

В ряде рандомизированных исследований была показана безопасность и клиническая эффективность применения пиритиона цинка («Скин-кап», Cheminova International S.Q., Испания) в терапии больных атопическим дерматитом [Мокроносова М.А. и др., 2004; Скрипкин Ю.К. и др., 2007; Фассахов Р.С. и др., 2007].

В нашем исследовании проведена оценка эффективности местной терапии АтД с применением одной из лекарственной формы пиритиона цинка по следующим показателям: бактериологическим (оценка элиминации, плотности колонизации кожи больных атопическим дерматитом Staphylococcus aureus, изменений вирулентных свойств штаммов стафилококков, колонизирующих кожу пациентов); и клиническим критериям эффективности (степень тяжести заболевания, динамика основных симптомов дерматита).

У всех больных до начала терапии определяли тяжесть заболевания: индекс SCORAD; индекс IGA (Investigator's Global Assessment) -исследовательская глобальная оценка, учитывающая выраженность местных изменений, выраженность кожного зуда и нарушения сна; а также проводили бактериологическое исследование пораженных участков кожи.

Результаты, отражающие клинические критерии эффективности проведённой терапии, с применением пиритиона цинка показали, что на 21-й день терапии у всех больных было отмечено снижение индекса тяжести заболевания (SCORAD) в 3,6 раза по сравнению с исходным уровнем (соответственно 51,2+0,5 и 14,2±0,7, р<0,05), отмечено также значительное купирование местных воспалительных изменений кожи (гиперемии, зуда, мокнутия), что сопровождалось улучшением общего самочувствия пациента. Объективные критерии положительной динамики общего состояния пациентов к 21-му дню терапии, такие как снижение в 3 раза выраженности зуда кожи, снижение значения показателя нарушения сна в 2,5 раза, уменьшение индекса IGA почти в 3 раза - (3,3+0,3) балла и (1,2±0,2) балла соответственно (р<0,05) - подтверждают клиническую

эффективности трехнедельного курса терапии с применением пиритиона цинка в данных пациентов.

К 21-дню терапии у пациентов отмечается статистически значимое снижение, по сравнению с исходным уровнем, плотности колонизации поражённой кожи Staphylococcus aureus на 15 % - (4,3+0,2) lg КОЕ/см2 и (3,7+0,1) lg КОЕ/см2, соответственно (р<0,05).

Отмечено, что к концу терапии пиритионом цинка с участков поражённой кожи детей в возрасте до 5 лет выделяются штаммы Staphylococcus aureus со сниженными адгезивными свойствами (НАС до терапии 4,6+0,5, после - 3,0±0,5 (р<0,05), по сравнению со штаммами, колонизировавшими кожу этих пациентов до терапии (рисунок 2).

ИАС 6 5 4 3 2 1 0

долечения

21-йдень терапии

Рисунок 2 - Индекс адгезивности штаммов Staphylococcus aureus до и после терапии у детей в возрасте до 5 лет

У детей в возрасте старше 5 лет к концу терапии пиритионом цинка статистически значимых различий в адгезивных свойствах между штаммами Staphylococcus aureus, выделенных как до так и после терапии, нами не было выявлено (ИАС до терапии 4,8±0,5, после - 4,7+0,5, р>0,05), (рисунок 3).

НАС

I___________________до лечения........... .....21-й день терапии_ __

Рисунок 3 - Индекс адгезивности штаммов Staphylococcus aureus до и после терапии у группы детей в возрасте от 6 до 16 лет

Изучение ферментативных свойств у штаммов Staphylooccus aureus, выделенных с кожи до и после лечения (21-й день), показало, что к концу терапии кожа пациентов колонизировалась штаммами со сниженной ферментативной активностью, по сравнению со штаммами, выделенными до начала терапии. Установлены статистически значимые различия в удельной активности гидролитических ферментов у штаммов Staphylococcus aureus, выделяемых до и после терапии: IgG-протеиназ - в 1,5 раза, термонуклеазы - в 1,2 раза (р<0,05) (рисунки 4 и 5).

Активность антиоксидантных ферментов (каталазы и супероксиддисмутазы) у штаммов Staphylococcus aureus, выделяемых к концу терапии с кожи пациентов, получавших пиритион цинка, была также статистически значимо снижена в 1,36 и 1,48 раза соответственно, по сравнению с активностью этих ферментов у штаммов Staphylococcus aureus до терапии (рисунки 6 и 7).

Рисунок 4 - Протеиназная активность внеклеточных протеаз штаммов Staphylococus aureus, выделенных до и после лечения

(Уд.акт.)

21 -й день терапии

до лечения

21-й день терапии

Рисунок 5 — Активность термонуклеазы лизатов штаммов Staphylococcus aureus, выделенных с кожи до и после лечения

А (Мккат.)

3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0

-*-

• I

до лечения

21-й день терапии

Рисунок 6 - Активность каталазы штаммов Staphylococcus aureus, выделенных до и после лечения

А (уд.акт)

—1—

—-i-

до лечения 21-й день терапии

Рисунок 7 - Активность супероксиддисмутазы лизатов штаммов Staphylococcus aureus, выделенных до и после лечения

Таким образом, проведенные исследования показали, что использование препарата пиритиона цинка для местного лечения больных АтД дает выраженный терапевтический эффект. После курса лечения пиритионом цинка статистически значимо снижается плотность колонизации кожи золотистым стафилококком; к 21-му дню терапии с кожи больных высеваются штаммы Staphylococcus aureus со сниженными вирулентными свойствами. Терапевтическая эффективность активированного пиритиона цинка обусловлена выявленной антистафилококковой активностью.

Выводы

1 У больных атопическим дерматитом бактерии Staphylococcus aureus являются значимым компонентом микрофлоры кожи. Частота выделения Staphylococcus aureus с поражённой кожи при атопическом дерматите составляет 59,5 %, против 8,0 % в группе сравнения. Частота выделения этого вида с непоражённой кожи пациентов не превышает 27,7 %.

2 У детей раннего возраста (до двух лет) с тяжелой степенью атопического дерматита отмечается наиболее выраженная степень плотности колонизации Staphylococcus aureus (lg 5,5 ±0,9) КОЕ/см2, что сопровождается высоким уровнем общего сывороточного иммуноглобулина Е и эозинофилией.

3 При обострении атопического дерматита кожа колонизируется низко-и среднеадгезивными вариантами Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis и высокоадгезивными вариантами Staphylococcus aureus. Кожа практически здоровых лиц заселена неадгезивными и низкоадгезивными вариантами Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus epidermidis. Установлена прямая зависимость между степенью выраженности адгезивного потенциала по индексу адгезии стафилококков для Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus от степени тяжести атопического дерматита.

4 Выявлены различия по фенотипическим свойствам, отражающим вирулентность штаммов стафилококков, колонизирующих кожу больных атопическим дерматитом и практически здоровых лиц. Активность протеиназ у штаммов Staphylococcus aureus, выделенных от пациентов, в 4,0 раза, термонуклеазы - в 1,24 раза выше, чем у штаммов этого вида стафилококка, выделенного с кожи практически здоровых лиц. Установлены статистически значимые различия в уровне активности каталазы и супероксиддисмутазы у штаммов Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, выделенных с кожи больных со среднетяжелой и тяжелой степенью атопического дерматита, и штаммов стафилококка этих же видов, колонизирующих кожу практически здоровых лиц.

5 При применении пиритиона цинка в местной терапии больных атопическим дерматитом, наряду с клинической эффективностью, отмечается снижение плотности колонизации кожи Staphylococcus aureus. После курса местной терапии пиритионом цинка с кожи больных высеваются штаммы Staphylococcus aureus со сниженными вирулентными свойствами.

Практические рекомендации

1 Данные о высокой частоте выделения у больных атопическим дерматитом метициллинрезистентных штаммов Staphylococcus aureus указывают на необходимость использования теста для выявления метициллинрезистентных стафилококков при проведении бактериологической диагностики

2 Местную антибактериальную терапию больных атопическим дерматитом проводить с учетом результатов исследования антибиотикорезистентности штаммов Staphylococcus aureus, выделенных с кожи.

3 На основании результатов исследования клинической эффективности и антибактериальной активности пиритиона цинка рекомендуется его использование при местной терапии в период обострения атопического дерматита.

4 При видовой идентификации стафилококков предлагается, наряду с исследованием ДНКазы, определять термонуклеазную активность бактерий рода Staphylococcus.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Шарифуллина А. А., Фассахов Р. С., Баязитова JI. Т. Аллергический ринит у детей: особенности микробиоценоза полости носа // Сборник тезисов / 15-й Национальный конгресс по болезням органов дыхания. 1-й Учредительный конгресс Евроазиатского респираторного общества. - М., 2005.-С. 31.

2 Баязитова JI. Т., Тюпкина О.Ф., Долбин Д. А., Куликов С. Н., Тюрин Ю. А. Фенотипические особенности изолятов Staphylococcus aureus кожи детей с атопическим дерматитом // Тезисы докладов Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2007». Секция «Биология». М., 2007. - С. 104-105.

3 Баязитова Л. Т., Фассахов Р. С., Тюрин Ю. А., Сукманская Е. О., Круглова Е. Б., Куликов С. Н, Тюпкина О. Ф., Долбин Д. А. Фенотипические особенности кокковой микрофлоры кожи в норме и при атопическом дерматите // Российский аллергологический журнал. —2007. - № 4. - С. 48-52.

4 Шарифуллина А. А., Агафонова Е. В.,. Баязитова JI.T. Микробиоценозы полости носа у детей с различными вариантами аллергического ринита и подходы к терапии // Практическая медицина. -2007.-№4(23).-С. 35.

5 Баязитова JI. Т., Тюрин Ю. А., Сукманская Е. О., Куликов С. Н. Фенотипические характеристики кокковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите // Там же. - С. 41.

6 Баязитова Л. Т., Тюрин Ю. А., Сукманская Е. О., Решетникова И. Д., Владимирова Д. И., Куликов С. Н., Долбин Д. А. Изменение ферментативных свойств S. aureus кожи больных атопическим дерматитом при лечении активированным цинк пиритионом // Российский аллергологический журнал.. - 2008. - № 1. - Приложение 1 .С. 298-299.

7 Баязитова Л. Т., Фассахов Р. С., Тюрин Ю. А., Шарифуллина А. А., Тюпкина О. Ф. Термонуклеазная (TNASE) активность стафилококков, выделенных от пациентов с аллергической патологией //. Российский аллергологический журнал. - 2009. - № 3, вып.1. - С. 277-278.

8 Фассахов Р. С., Баязитова Л. Т., Тюрин Ю. А., Тюпкина О. Ф., Куликов С. Н. Антибиотикорезистентность Staphylococcus aureus, колонизирующего кожу и кишечник, у больных атопическим дерматитом // Практическая медицина. - .2009. -№ 3 (35). - С. 66-69.

9. Баязитова Л. Т., Тюрин Ю. А., Куликов С. Н., Долбин Д. А., Фассахов Р. С. Исследование антибактериальной активности препарата «Скин-кап» в отношении Staphylococcus aureus при местной терапии атопического дерматита // Там же. - С. 89-91.

Патенты

1 Тюрин Ю. А., Баязитова Л. Т., Куликов С. Н., Фассахов Р. С., Долбин Д. А. Способ определения IgG-протеиназной активности (получено положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2008113407/13 от 28.03.2008 г.).

БАЯЗИТОВА ЛИРА ТАБРИСОВНА

ВИРУЛЕНТНЫЕ СВОЙСТВА СТАФИЛОКОККОВОЙ МИКРОФЛОРЫ КОЖИ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия на издательскую деятельность ЛР № 021319 от 05.01.99 г.

Подписано в печать 10.09.2009 г. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1,38. Уч.-юд. л. 1,54. Тираж 100 экз. Заказ 610.

Редакционно-издательский центр Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32.

Отпечатано на множительном участке Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. Заки Валиди, 32.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Баязитова, Лира Табрисовна

Список сокращений и условных обозначений.

Введение.

Обзор литературы.

Глава 1 Этиология и патогенез атопического дерматита. Влияние препаратов наружной терапии на микрофлору кожи при атопическом дерматите

1.1 Современные представления об этиологии и патогенезе атопического дерматита.

1.2 Роль стафилококковой микрофлоры кожи в течении -атопического дерматита. 1.3 Местные антимикробные факторы кожи в ; антистафилококковой защите при атопическом дерматите.

1.4 Вирулентные свойства и факторы бактерий рода Staphylococcus и их значение в аллергическом воспалении кожи при атопическом дерматите.201.5 Воздействие препаратов, применяемых при местном лечении атопического дерматита на бактериальную микрофлору кожи

Собственные исследования.

Глава 2 Материалы и методы исследований.

2.1 Общая характеристика обследованных групп* больных.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Лабораторно-аллергологические методы исследования.

2.2.2 Микробиологические методы исследования.

2.2.3 Методы изучения свойств бактериальных штаммов in vitro.

2.2.4 Применение пиритиона цинка в местной терапии больных атопическим дерматитом

2.2.5 Методы статистической обработки данных.

Глава 3 Клинико-микробиологическая характеристика больных атопическим дерматитом. Вирулентные свойства стафилококковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите. Клиническая эффективность и антистафилококковая активность пиритиона цинка при местной терапии атопического дерматита

3.1 Клинические и прогностически неблагоприятные факторы заболевания, выявленные у пациентов с атопическим дерматитом.

3.2 Стафилококковая колонизация кожи при атопическом дерматите.

3.3 Клинико-бактериологическая характеристика пациентов с осложнённым течением атопического дерматита.

3.4 Вирулентные свойства бактерий рода Staphylococcus, колонизирующих кожу больных атопическим дерматитом.

3.4.1 Адгезивные свойства бактерий рода Staphylococcus и их оценка.

3.4.2 Протеиназная активность бактерий рода Staphylococcus.

3.4.3 Нуклеазная активность бактерий рода Staphylococcus

3.4.4 Активность каталазы и супероксиддисмутазы бактерий рода Staphylococcus.

3.4.5 Антибиотикорезистентность Staphylococcus aureus и частота встречаемости среди них метициллинрезистентных и метициллинчувствительных изолятов у больных атопическим дерматитом.

3.5 Оценка эффективности 1-окси-2(1Н)-пиридитиона цинка (пиритиона цинка) при местной терапии атопического дерматита и его антибактериальная активность в отношении Staphylococcus aureus, колонизирующих кожу.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Вирулентные свойства стафилококковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите"

Актуальность проблемы

В мире ежегодно, согласно данным ВОЗ, заболевают аллергическими болезнями более 1 млн человек, доминирующим среди которых, прежде всего в детском возрасте, является атопический дерматит (АтД) [Лютина Е.И. и др., 2004; Linstov M.L. et al., 2002]. Заболеваемость АтД является высокой и в экономически развитых странах мира составляет в среднем 15—20 человек на 1000'населения [Ильина Н.И., 2005; Ревякина В.А. и др., 2008].

Влияние неблагоприятной экологической ситуации, ухудшение здоровья населения, агрессивное распространение бактериальной, вирусной и микотической флоры, резистентной к фармакологическому воздействию [Дерябин Д.Г., 2000; Елисютина О.Г. и др., 2004], существенно меняют течение болезни, привода к развитию* более тяжелых форм,, характеризующихся непрерывно рецидивирующим течением т выраженными микробно-воспалительными проявлениями [Смирнова Г.И., 2004].

В настоящее время серьезной» проблемой клинической аллергологии является частое наслоение вторичной1 бактериальной, грибковой и вирусной инфекции кожи у 25-34 % больных атопическим дерматитом [Воронина В.Р. и др., 2003; Маланичева Т.Г. и др., 2007; Leung D.Y.M. et al., 1998].

Среди микробных агентов, инфицирующих кожу пациентов, страдающих атопическим дерматитом, значительная роль принадлежит Staphylococcus aureus. По данным авторитетных исследований, в 80 - 100 % случаев кожные покровы больных АтД колонизируются Staphylococcus aureus [Кудрявцева А.В. и др.,2003; Максимова А.Е., 1997; Goodyear Н.М. et al., 2002], а у детей с этой патологией во всех возрастных группах он выделяется не только с участков кожных поражений, но и с непораженной кожи, причем нередко при отсутствии видимых клинических признаков инфекционного процесса [Matsui К. et al., 2000].

Установлено, что чем больше степень колонизации- кожи стафилококком- тем:тяжелее патологические изменениями характер течения атопического дерматита [Мокроносова М.А., 2003; Szacos Е. et al., 2004]. Присоединение стафилококковой инфекции к уже существующему атопическому дерматиту часто становится пусковым фактором; развития, обострения заболевания [Адельман Д:, 2000].

Возможен и другой; вариант - колонизация кожи Staphylococcus aureus и последующее развитие инфекции? становится , причиной; развития; атопического дерматита у лиц с атопическим фенотипом: Накопленный сегодня в аллергологии^ и дерматологии клинический опыт показывает, что колонизация .кожи Staphylococcus aureus у пациентов с атопическим дерматитом значительно меняет характер течения: этого/ аллергического: заболевания.

Однако до настоящего времени особенности стафилококковой» микрофлоры, колонизирующей? кожу пациентов при атопическом дерматите; и при этом потенциально являющейся этиологическим фактором, развития; местных инфекционных осложнений; раскрыты недостаточно.

Исследование вирулентных^ свойств: стафилококков" кожи позволит -раскрыть тонкие механизмы взаимодействия макроорганизма и микрофлоры при атопическом дерматите и будет способствовать развитию новых подходов к лечению пациентов с атопическим дерматитом, ассоциированным с массивной колонизацией кожи стафилококковой микрофлорой.

Цель исследования

Задачи исследования

2 Изучить вирулентные свойства (адгезивный потенциал, гидролитических энзимов^ и ферментов антиоксидантной системы защиты) штаммов Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, колонизирующих кожу пациентов с атопическим дерматитом в зависимости от тяжести заболевания.

3 Оценить клиническую эффективность местной терапии с применением Д-окси-2(1Н)-пиридитиона цинка (пиритиона цинка) и его-антибактериальные свойства в отношении штаммов Staphylococcus aureus, колонизирующих поражённую кожу у больных атопическим дерматитом.

Научная новизна

Получены новые данные о различной степени выраженности адгезивного потенциала у штаммов стафилококков (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis), колонизирующих кожу больных в зависимости от степени тяжести атопического дерматита.

Впервые дана количественная характеристика активности протеиназ штаммов стафилококков, высеянных с пораженной кожи больных атопическим дерматитом; для Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis определён тип секретируемых протеиназ, обусловливающих эту активность.

Выявлена высокая термонуклеазная активность. Staphylococcus aureus, колонизирующих кожу больных при тяжелом течении атопического дерматита.

Практическая значимость работы

Полученные данные о высокой частоте выделения с кожи больных с тяжелой степенью атопического дерматита метициллинрезистентных штаммов Staphylococcus указывают , на необходимость проведения' антибактериальной терапии с учетом результатов определения! метициллинрезистентности стафилококков.

Результаты исследования клинической' эффективности w антибактериальной активности препаратов на' основе пиритиона цинка позволяют рекомендовать использование его при местной терапии атопического дерматита* у больных атопическим дерматитом, ассоциированным с колонизацией кожи Staphylococcus aureus.

По результатам диссертационной работы получено положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ определения IgG-протеиназной активности» (заявка № 2008113407/13 от 28.03.2008 г.).

Внедрение результатов исследования в практику

Материалы исследования, отражающие клинико-бактериологические характеристики больных с различной степенью тяжести атопического дерматита, для прогнозирования течения и оптимизации терапии используются в работе аллергологического отделения МУЗ. «Детская городская клиническая больница № 7» г. Казани и специализированной поликлиники Федерального государственного учреждения науки «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора.

Основные положения работы используются в учебном процессе на кафедре аллергологии и клинической иммунологии и кафедре микробиологии Государственного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Казанская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию при чтении лекций и проведении, практических занятий.

Получено положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ определения Ig G-протеиназной активности» по заявке № 2008113407/13 от 28.03.2008 г.

Основные положения, выносимые на защиту

1 Кожа пациентов: первых двух лет жизни с экссудативной и пруригоподобной формами атопического дерматита с тяжелым течением колонизирована Staphylococcus aureus в высокой степени плотности.

2 Штаммы Staphylococcus aureus, колонизирующие пораженную кожу больных с атопическим дерматитом в периоде обострения, обладают выраженной адгезивной способностью, высоким уровнем активности Ig-протеиназ, нуклеаз, катал азы, супероксиддисмутазы.

3 Применение пиритиона цинка приводит к снижению плотности контаминации пораженной кожи Staphylococcus aureus; снижению их вирулентных свойств.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на научных форумах: 15-м Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 2005); Международной конференции студентов, аспирантов и молодых, ученых «Ломоносов - 2007» (Москва, 2007); 17-м Национальном конгрессе по болезням органов- дыхания (Казань, 2007); 10-м Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009).

Основные положения диссертации обсуждены на расширенном заседании кафедры аллергологии и клинической, иммунологии, кафедры микробиологии Государственного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Казанская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию, специализированной консультативно-диагностической поликлиники инфекционногаллергических заболеваний при Федеральном государственном учреждении науки «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 1 от 01.06.2009 года).

Диссертация апробирована на заседании , Объединенного диссертационного совета ДМ 208.006.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (протокол № 7 от 25.06.2009 года).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 3 - в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 127 страницах, содержит 13 рисунков и 40 таблиц. Она состоит из введения (одна глава), собственных исследований

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Баязитова, Лира Табрисовна

Выводы

1 У больных атопическим дерматитом бактерии Staphylococcus aureus являются значимым компонентом микрофлоры кожи. Частота выделения Staphylococcus aureus с пораженной кожи при атопическом дерматите составляет 59,5 % против 8,0 % в группе сравнения. Частота выделения этого вида с непоражённой кожи пациентов не превышает 27,7 процента.

2 У детей раннего возраста ( до двух лет) с тяжелой степенью атопического дерматита отмечается наиболее выраженная степень плотности колонизации Staphylococcus aureus, (lg 5,5±0,9) КОЕ/ см2, что сопровождается высоким уровнем общего сывороточного иммуноглобулина Е и выраженной эозинофилией.

3 При обострении атопического дерматита кожа колонизируется низко-и среднеадгезивными вариантами Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis и высокоадгезивными вариантами Staphylococcus aureus. Кожа практически здоровых лиц заселена неадгезивными и низкоадгезивными вариантами Staphylococcus saprophyticus и Staphylococcus epidermidis. Установлена прямая зависимость степени выраженности адгезивного потенциала по индексу адгезии стафилококка для Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus от степени тяжести атопического дерматита.

Установлены статистически значимые различия в уровне активности каталазы и супероксиддисмутазы у штаммов Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, выделенных с кожи больных со среднетяжелой и тяжелой степенью атопического дерматита, и штаммов стафилококка этих же видов, колонизирующих кожу практически здоровых лиц.

5 При применении пиритиона цинка в местной терапии больных атопическим дерматитом, наряду с клинической эффективностью, отмечено снижение плотности колонизации кожи Staphylococcus aureus. После курса местной терапии пиритионом цинка с кожи больных высеваются штаммы Staphylococcus aureus со сниженными вирулентными свойствами.

Практические рекомендации

4 При видовой идентификации стафилококков предлагается, наряду с исследованием ДНК-азы, определять термонуклеазную активность бактерий рода Staphylococcus.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Баязитова, Лира Табрисовна, Уфа

1. Акатов, А. К. Стафилококки / А. К. Акатов, JL Ф. Зуева. М. : Медицина, 1983.-256 с.

2. Активированный пиритион цинка («скин-кап»). Механизмы действия. Клиническое применение / Ю. К. Скрипкин, Ф. И. Петровский, Е. С. Феденко и др.. // Российский аллергологический журнал. — 2007. № 3.- С. 70-75.

3. Активированный цинк-пиритион (скин-кап) в лечении атопического дерматита у детей (результаты Российского многоцентрового исследования) / Р. С. Фассахов, Е. О. Сукманская, И. Д. Решетникова и др. // Практическая медицина. 2007. - № 4. - С. 43—46.

4. Атопический дерматит у детей / Н. Г. Короткий, А. А. Тихомиров и др.- Тверь : Триада, 2003. — 238 с.

5. Атопический дерматит: рекомендации для практических врачей. Российский национальный согласительный документ по атопическому дерматиту / под общей рекомендацией академика P.M. Хаитова, А.А. Кубановой. М. : Фармарус Принт, 2002. - С. 112-176.

6. Бактериальные инфекции кожи и их значение в клинической практике дерматолога / С. А. Масюкова, В. В.Гладько, М. В.Устинов и др. // Consilium medicum . 2004. - Vol. 6, № 3. - P. 180-185.

7. Балаболкин, И. И. Современная концепция патогенеза и принципы терапии аллергических заболеваний у детей / И. И. Балаболкин // Педиатрия. 2003. - № 4. - С. 52-57.

8. Белоусова, Т. А. Бактериальные инфекции кожи: проблема выбора оптимального антибиотика / Т. А. Белоусова, М. В. Горячкина // Терапевт.- 2006. -№ 3. С. 28-32.

9. Белькова, Ю. А. Пиодермии в амбулаторной практике / Ю. А. Белькова // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2005. — Т. 7, № 3. - С. 255-271.

10. Бондаренко, В. М. «Острова» патогенности бактерий / В. М. Бондаренко // Журн. микробиол. 2001. - № 4. - С. 67-74.

11. Будихина, А. С. /3-дефензины: свойства и функции / А. С. Будихина, Б.

12. B. Пинегин // Российский аллергологический журнал. 2008. - № 3. - С. 15-19.1'4.Бухарин, О. В. Проблемы персистенции патогенов в инфектологии / О. В. Бухарин // Журн. микробиол. 2006. - № 4. - С. 4-8.

13. Бухарин, О.В. Активные формы кислорода как фактор, регулирующий поверхностные свойства бактерий / О. В. Бухарин, А. В. Сгибнев, С. В. Черкасов // Журнал микробиол. 2008. - № 4. — С. 3-6.

14. Влияние различных методов наружной терапии на колонизацию кожи Staphylococcus aureus и течение атопического дерматита / М. А. Мокроносова, А. Е. Максимова, А. П. Батуро и др. // Российский аллергологический журнал. 2004. - № 12. - С. 58-61.

15. Воронина, В. Р. Особенности микробиоценоза кожи больных атопическим дерматитом и терапия его осложнений / В. Р. Воронина, А. Н. Пампура, Е.

16. C. Феденко // Российский аллергологический журнал. 2007. - № 3. - С. 3-11.

17. Воронина, В. Р. Роль грибковой и бактериальной флоры кожи в патогенезе атопического дерматита / В. Р. Воронина, Ю. С. Смолкин, А. А. Чебуркин // Вестник дерматологии и венерологии. — 2003. — № 1. С. 16-19.

18. Гомберг, М. А. Атопический дерматит / М. А. Гомберг, А. М. Соловьев, М. А. Аковбян // Русский медицинский журнал. 1998. - Т. 6. — С. 1328-1335.

19. Гребенюк, В. Н. Наружные кортикостероиды в лечении атопического дерматита / В. Н. Гребенюк // Consilium Medicum. 2003. - Т. 5. - № 3. -С. 120-123.

20. Гриценко, В. А. Роль физико-химических свойств стафилококков разных видов в обеспечении устойчивости к тромбодефенсинам человека / В. А. Гриценко, Ю. Б. Иванов, О. С. Журлов // Журн. микробиол. — 2006. — № 4. -С. 16-19.

21. Дерябин, Д. Г. Стафилококки: экология и патогенность / Д. Г. Дерябин; РАН. Урал, отд-ние, Ин-т клеточного и внутриклеточного симбиоза. — Екатеринбург : УрО РАН, 2000. 239 с.

22. Елисютина, О. Г. Роль Staphylococcus aureus в патогенезе атопического дерматита / О. Г. Елисютина, Е. С. Феденко // Российский аллергологический журнал. 2004. - № 1. - С. 17-20.

23. Елисютина, О.Г. Возможности фармакологического контроля нарушений микробиоценоза кожи и слизистых у больных осложненными формами атопического дерматита / О. Г. Елисютина, Е. С. Феденко // Российский аллергологический журнал. — 2006. — № 6. — С. 59-75.

24. Елисютина, О. Г. Препараты фузидовой кислоты в наружной терапии атопического дерматита / О. Г. Елисютина, Е. С. Феденко // Российский аллергологический журнал. 2008. — № 1. — С. 74—77.

25. Ильина, Н. И. Аллергия болезнь цивилизации / Н. И. Ильина // Качество жизни. Медицина. - 2005. - № 49 (11). - С. 10-14.

26. Катунина, О. Р. Современные представления об участии кожи в иммунных процессах / О. Р. Катунина, А. В. Резайкина // Вестник дерматологии и венерологии. 2009. - № 2. - С. 39-46.

27. Клемпарская, Н. Н. Изменение микрофлоры кожи при действии на организм экзогенных и эндогенных факторов // Материалы научно-практической конференции «Микрофлора кожи человека ее клинико-диагностическое значение». — М., 1989. - С. 3-11.

28. Клиническая аллергология: руководство для практических врачей / под ред. акад. РАМН, проф. Р. М. Хаитова. М. : МедПрессИнформ, 2002. -623 с.

29. Клиническая иммунология и аллергология / под ред. Д. Адельман. — М. : Практика, 2000. 806 с.31 .Короткий, Н. Г. Атопический дерматит рекомендации по лечению / Н. Г. Короткий // Вестник дерматологии и венерологии. - 2006. — № 3. — С. 5859.

30. Кунгуров, Н. В. Об оптимизации терапии больных атопическим дерматитом детей и взрослых / Н. В. Кунгуров, М. М. Кохан, Ю. В. Кениксфест // Вестник дерматологии и венерологии. -2004. № 3. - С. 23-29.

31. Ларина, Т. В. Особенности течения и терапии атопического дерматита, ассоциированного с золотистым стафилококком у детей : автореф. дис. . канд. мед. наук / Ларина Т.В. — Ижевск, 2003. — 20 с.

32. Лютина, Е. И. К вопросу об эпидемиологии аллергических заболеваний / Е. И. Лютина, Ф. К. Манеров // Аллергология. 2004. - № 4. — С. 55—57.

33. Максимова, А. Е. Особенности микрофлоры кожи и желудочно-кишечного тракта у больных атопическим дерматитом : автореф. дис. . канд. мед. наук / Максимова А. Е. М., 1997. - 23 с.

34. Махрова, Т. В. Влияние метаболитов стафилококков на адгезивные реакции в системе «Candida albicans — буккальные эпителиоциты» / Т. В. Махрова, М. И. Заславская, А. Н. Маянский // Журн. микробиол. — 2004. -№ 5. С. 4-7.

35. Медицинская микробиология / под ред. В. И. Покровского, О. К. Поздеева. М. : ГЭОТАР, 1999. - 400 с.

36. Метод определения активности каталазы / М. А. Королюк, JI. И. Иванова, И. Г. Майорова, В. Е. Токарев // Лабораторное дело. 1988. -№ 1. - С. 1619.

37. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В. И. Брилис, Т. А. Брилене, X. П. Ленцнер и др. // Лабораторное дело. — 1986.-№4.-С. 210-212.

38. Микробиоценоз кожи больных хроническими дерматозами / В. К. Солнцева, А. С. Быков, А. А. Воробьев и др. // Журн. микробиол. 2000. - № 6. — С. 51-55.

39. Митрохин, С. Д. Мупироцин: профилактика внутрибольничных инфекций, вызываемых золотистым стафилококком, и оздоровление госпитальной среды / С. Д. Митрохин // Антибиотики и химиотерапия. — 2003. Т. 48, № 3. - С. 13-19.

40. Мокроносова, М. А. Влияние Staphylococcus aureus на4 течение атопического дерматита / М. А. Мокроносова // Аллергология. — 2003. № 1.-С. 46-50.

41. Мониторинг стафилококковой микрофлоры кожи у больных атопическим дерматитом / Л. В. Текучёва, Е. В. Зайцева, В. Г. Арзуманян, Р. М. Темпер // Вестник дерматологии венерологии. — 2006. № 5. - С. 69-72.

42. Назаров, П. Г. Атопический дерматит: иммунопатологические аспекты / П. Г. Назаров, И. А. Горланов, И. Р. Милявская // Аллергология. 1998. -№4.-С. 13-14.

43. Наружная терапия и уход за кожей при атопическом дерматите у детей. Практическое руководство для врачей / под ред. Л. Ф. Казначеевой. — Новосибирск, 2003. — 24 с.

44. Научно-практическая программа «Атопический дерматит и инфекции кожи у детей: диагностика, лечение и профилактика». — М., 2004. 47 с.

45. Нейроанатомические и нейрофизиологические аспекты зуда / М. М. Юдина, Г. Г. Торопина, А. Н. Львов, О. Л. Иванов // Российский журнал кожных и венерических болезней. 2009. - № 3. — С. 28-32.

46. Новиков, А. И. Болезни кожи инфекционного и паразитарного происхождения. Руководство для врачей / А. И. Новиков, Э. А. Логинова. М.: Медицинская книга, 2001.-С. 14-17.

47. Новоселов, В. С. Пиодермии / В. С. Новоселов, Л. Р. Плиева // Русский медицинский журнал. 2004. - № 12 (5). - С. 327-332.

48. Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией : приказ МЗ СССР от 31.07.1978 г. № 720. М., 1978.- 82 с.

49. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам : методические указания МУК 4.2.1890-04 / Минздрав России.

50. Оценка стафилококковой и нелипофильной дрожжевой микрофлоры кожи у больных с кожной патологией при контактном способе посева /В. Г. Арзуманян., Е. В. Зайцева, Т. И. Кабаева, Р. М. Темпер // Вестник дерматологии и венерологии. 2004. - № 6. — С. 3-6.

51. Павлова, О. В. Новые аспекты патогенеза атопического дерматита: психонейроиммунные взаимодействия / О. В. Павлова, Ю. К. Скрипкин // Вестник дерматологии и венерологии. — 2009. — № 1. — С. 38-41.

52. Пиритион цинк (скин-кап) в терапии атопического дерматита у детей (по результатам Российского многоцентрового исследования КАДЕТ) / Р. С.

53. Ревякина, В: А. Результаты национального многоцентрового; клинико-эпидемиологического исследования 1 атопического> дерматита у детей / В: А. Ревякина, JI. М. Огородова, И. А. Деев и др. //Аллергология. 2006. —1.-С. 3-6.

54. Сергеев, Ю. В. Атопический дерматит: современная»; диагностика; и-; лечение / Ю. В. Сергеев, О. JI. Иванов, Д. К. Новиков // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — 2001. № 4. — С. 28—48.

55. Сирота, Т. В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы / Т. В. Сирота- // Вопросы медицинской химии; — 1999.-№3.

56. Смирнова, Г. И. Современные подходы! к лечению, реабилитации атопического дерматита, осложненного вторичной инфекцией / Г. И. Смирнова // Аллергология и иммунология в педиатрии; — 2004. — № Т. — С.34.39.

57. Современная стратегия терапии атопического дерматита: программа действий педиатра. Согласительный документ Ассоциации детских аллергологов и иммунологов России.—М:, 2004; — 96 с.

58. Современные фторхннолоны (ципрофлоксацин, левофлоксацин) в лечении инфекций кожи и мягких тканей / В. П. Яковлев, А. М. Светухин, JI. А. Блатун, С. А. Ухин // Антибиотики и химиотерапия. 2004. - Т. 49, № 8— 9. - С. 57-65.

59. Страчунский, JI. С. Внебольничные MRSA новая проблема антибиотикорезистентности // JI. С. Страчунский, Ю. А. Белькова, А. В. Дехнич // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. -2005. - Т. 7, № 1. - С. 32-42.

60. Тюрин, Ю. А. Протеиназная активность микрофлоры кишечника при острых кишечных инфекциях у детей : дис. . канд. мед. наук / Тюрин Ю.А. Казань, 2003. - С. 48-54.

61. Тюрин, Ю. А. Роль факторов патогенности золотистых стафилококков в развитии атопического дерматита / Ю. А. Тюрин, Д. А. Долбин // Журн. микробиол. 2008. - № 4. - С. 105-110.

62. Хаертдинова, JI. А. Особенности клиники атопического дерматита, осложненного вторичной стафилококковой инфекцией / Л. А. Хаертдинова, Т. Г. Маланичева // Актуальные проблемы педиатрии. — 2006.-Т. 5, № 1. С. 791.

63. Шарифуллина, А. А. Микробиоценозы полости носа у детей с различными вариантами аллергического ринита и подходы к терапии : автореф. дис. . канд. мед. наук / Шарифуллина А. А. — Уфа, 2007. 21 с.

64. Шендеров, Б. А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 1 : Микрофлора человека и животных и ее функции / Б. А. Шендеров. -М.: Грант, 1998. 287 с.

65. A major susceptibility locus for atopic dermatitis maps to chromosome 3q21 / Y. A. Lee, U. Wahn, R. Kehrt R et al. // Nat. Genet. 2000. - Vol. 26. - P. 470-473.

66. Akdis, C.A. Diagnostic and treatment of atopic dermatitis in children and adults: / C. A.Akdis, M. Akdis, T. Bieber //American Academy of Allergy, Asthma and Immunology. // Allergy. 2006. - Vol. 61. - P. 969-987.

67. An automated method for the detection of staphylococcal heat stable deoxyribonuclease in dairy products / A. Meyrand, V. Atrache, C. Bavai et al. // Lett. Appl. Microbiol. 1999. - Vol. 29, № 4. - P. 216-220.

68. An IL13 coding region variant is associated with a high total serum IgE level and atopic dermatitis in the German multicenter atopy study (MAS-90) / X. Liu, R. Nickel, K. Beyer et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - Vol. 106. - P. 167-170.

69. Astrup, T. The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity / T. Astrup, S. Mullerts // Arch. Biochem. Biophysics. 1952. - Vol. 40. - P. 346357.

70. Biber, T. Atopic dermatitis: from the genes the scin lesions / T. Biber, A. Wollenberg // Allergy. 2000. - Vol. 55. - P. 205-213.

71. Biology and clinical relevance of naturally occurring antimicrobial peptides / R. L. Gallo, M. Murakami, T. Ohtake, M. Zaiou // J. Allergy Clin. Immunol. -2002. -Vol. 110. P. 823-831.

72. Bowler, P. G. Wound microbiology and associated approaches to- wound management / P. G. Bowler, В. I. Duerden, D. G. Armstrong // Clin. Microbol. Rev.-2001.-Vol. 14.-P. 244-269.

73. Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / M. M. Bradford // Anal. Biochem. 1976. - Vol. 7. - P. 248-254.

74. Breuer, K. Bacterial infections and atopic dermatitis / K. Breuer, A. T. Werfel // Allergy. 2001. - Vol. 56 -. P. 1034-1041.

75. Can the use of a rapid polymerase chain screening method decrease the incidence of nosocomial meticillin-resistant Staphylococcus aureus / M. A.Aldeyab, M. P. Kearney, С. M. Hughes et al. // J. Hosp. Infect. 2009. Vol. 71, № 1. — P.22-28.

76. Clarke, S. R. IsdA of Staphylococcus aureus is a broad spectrum, iron-regulated adhesin / S. R. Clarke, M. D. Wiltshire, S. J. Foster // Molecular Microbiology. 2004. - Vol. 51, № 5.- P. 1509-1519.

77. Cleavage of human immunoglobulins by serine proteinase from Staphylococcus aureus / L. Prokesova, B. Potuznikova, J. Potempa et al. // Immunol. Lett. -1992. Vol. 31. - P. 259-265.

78. Clements, M. O. Stress resistance in Staphylococcus aureus / M. O. Clements, S. J. Foster // Microbiology. \999. - Vol. 7, № 11. - P. 458-462.

79. Colonisation with superantigen producing Staphylococcus aureus associated with increased severity of atopic dermatitis / Т. M. Zollner, T. A. Wichelhaus, A. Hartung et al. // Clin. Exp. Allergy. 2000. - Vol. 30: - № 7. - P. 9941000.

80. Comparative study of Staphylococcus aureus isolated from lesional and non-lesional scin of» atopic dermatitis patients / K. Matsui, A. Nishikawa, H. Suto et al. //Microbiol. Immunol. 2000. - Vol. 441 - № ll.-P: 945-947.

81. Dahl, M. V. Hyper-IgE syndrome revisited / T. Biber // Int. J. Dermatol. -2002. Vol. 41, № 9. - P. 618-619:

82. Deficiency in immunoglobulin G2 antibodies against staphylococcal enterotoxin CI defines a subgroup of patients with atopic dermatitis / S. Mrabet-Dahbi, K. Breuer, M. Klotz et al. // Clin. Exp. Allergy. 2005. - Vol. 35.-P. 274-281.

83. Degradation of human antimicrobial peptide LL-37 by Staphylococcus aureus-derived proteinases / M. Sieprawska-Lupa, P. Mydel, K. Krawczyk et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 2004. - Vol. 48, № 12. - P. 4673-4679.

84. Dermicidin is constitutively produced by eccrine sweat glands and is not induced in epidermal cells under inflammatory skin conditions / S. Rieg, C. Garbe, B. Sauer et al. // Brit. J. Dermatol. 2004. - Vol. 4 - P. 123-132.

85. Dinges, M. M. Exotoxins of Staphylococcus aureus / M. M. Dinges, P. M. Orwin, P. M. Schlievert // Clin. Microbiol. Rev. 2000. - Vol. 13. - P. 16-34.

86. Dunne, W. M., Jr. Bacterial adhesion: seen any good biofilms lately? / W.M. Dunne, Jr. // Clin. Microbiol. Reviews. 2002. -.Vol. 15, № 2. - P. 155-166.

87. Effect of metalloproteinase from Staphylococcus aureus on in vitro stimulation of human lymphocytes / L. Prokesova, Z. Porwit-Bobr, K. Baran et al. // Immunol. Lett. 1991. - Vol. 27. - P. 225-230.

88. Efficacy and safety of tacrolimus ointment treatment for up to 4' years in patients with atopic dermatitis / J. M. Hanifrn, A. S. Paller, L. Eichenfield et al. // J. Am. Acad. Dermatol. 2005. - Vol. 53, suppl. 2. - P. 177- 185.

89. Endogenous antimicrobial peptides and skin infections in atopic dermatitis / P. Y.Ong, T. Ohtace, C. Brandt et al. // N. Engl. J. Med. 2002. - Vol. 347, № 15.-P. 1151-1159.

90. Evaluation of staphylococcal exotoxins and their specific IgE in childhood atopic dermatitis / Y. Nomura, К. Tanaka, H. Tomita et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1999. - Vol. 104, № 8. - Suppl. 2. - P. 441-446.

91. Evidence for a disease-promoting-effect of Staphylococcus aureus-derived exotoxins in atopic dermatitis / R. Bunikowski, M. E. Mielke , H. Skarabis et al. //J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - Vol. 105. - P. 814-819.

92. Expression of staphylococcal clumping factor A impedes macrophage phagocytosis / N. Palmqvist, M. J. Patti, A. Tarkowski, E. Josefsson // Microbes and Infection. 2004. - № 6. - P. 188-195.

93. Expression of Thl, Th2 and immunosuppressive cytokine transcriptsin canine atopic dermatitis / T. J. Nuttall, P: A. Knight, S. M. McAleese et al. // Glin. Exp. Allergy. 2002. - Vol: 32. - P. 789-795.

94. Goodyear, H. M. Wet wrap dressings for eczema: an effective treatment but not to bmisused / H: M. Goodyear, J: F. Harper // Brit. J: Dermatol: 2002. -. Vol: 146, №4. -p. 159.

95. Guthery, E. Zinc pyrithione in. alcohol-based products for scin antisepsis: persistence of antimicrobial effects / E. Guthery, L. A. Seal, E. L. Anderson // Am. J. Infect. Control. 2005. - Vol. 33; № 1. - P. 15-22:

96. Havard, J. Peptide antimicrobial agents / J. Havard, P. Hamill, R. E. W. Hancock // Clin. Microbiol: Reviews. 2006; - Vol. 19, № 7. - P. 491- 511.

97. Hirschman, J. V. Normal cutaneus flora andi infections the cause / J. V. Hirschman, D. S. Feingold // Infections diseases. 2nd ed./ S. L. Gorbach, J. G. Bartlett, N. R. Blacklow, ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company, 1998. -P. 1263-1265.

98. Huebner, J. Coagulase-negative staphylococci: role as pathogens / J. Huebner, D. A. Goldmann // Annu. Rev. Med. 1999. - Vol. 50. - P. 223-236.

99. Human epidermal Langerhans cells express the tight function protein claudin-1 and are present in human genetic claudin-1 deficiency (NISCH Syndrome) / S. C. Zimmerli, K. Kerl, S. Hadj-Rabia et al. // Exp. Dermatol. -2008.-Vol. 17, № i.p. 20-23.

100. Impact of LL-37 on anti-infective immunity / В. M. E. Dawn, J. Davidson, D. Lau et al. // J. Leukocyte Biology. 2005. - Vol. 77. - P. 451-Л59

101. Inhibition of Staphylococcus aureus by oleurupein is mediated by hydrogen peroxydi / D: Zanichelli, T. A. Baker, M. N. Clifford, M. R. Adams // J. Food Prot. 2005. - Vol. 68, № 7. - P. 1492-1496.

102. Innate antimicrobial peptide protects the scin from invasive bacterial infection / V. Nizet, T. Ohtace, X. Lauth et al. // Nature. 2001. - Vol. 414. -P. 454-457.

103. Insights on antibiotic resistance of staphylococcus aureus from its whole genome: genomic island SCC / T. Ito, K. Okuma, X. X. Ma et al. // Drug Resist. Update. 2003. - № 6. - P. 41-52.

104. International Consensus Conference on Atopic Dermatitis II (IGCAD II): clinical update and current treatment strategies // Brit. J. Dermatology. 2003. -Vol. 148, suppl: 63.- P. 3-10.

105. Isolation and characterization of a highly specific serine endopeptidase from an oral strain of Staphylococcus epidermidis /J. L. Moon, A. Banbula, A. Oleksy et al. // Biol. Chem. 2001. - Vol. 382. - P. 1095-1099.

106. Kanafani, H.Catalase and superoxide dismutase activities in virulent and nonvirulent Staphylococcus aureus isolates / H. Kanafani, S. Martin // J. Clin. Microbiology. 1985.- № 4. - P. 607-610.■ 120 ■

107. Kaplan; N. Ml Use of thermonuclease testing to ■ identifity Staphylococcus aureus by direct examination of blood?cultures / N. M. Kaplan // East Mediterr Health J. 2003. - Vol. 9, № 11.- P. 185-190:

108. Leclercq, R. Mechanisms of resistance to macrolides and lincosamides: паШге of the resistance elements: and their clinical, implications / R. Leclercq//

109. Clin. Infect. Dis.-2002.-Vol. 34.-P. 482-492.

110. Leung; D. Y. Ml Role of iStaphylococcus aureus dm atopic dermatitis /. D: Y. Ml Leung*// Atopic dermatitis / Ti Bieber, DiY. Mi Leung; Marcel-Dekker,eds. New-York : Basil;2002:,- № 7.- Pi 410-418:

111. Linstow M. L. Prevalence andi predictors of atopy among; young Danish adults / Mi L. Linstow, C. Porsbjerg, C. S. Ulrik et al:.'// Clin: Exp. Allergy. -2002. Vol. 32. - P. 520-525.

112. Lowy, F. D. Antimicrobial resistance: the example of Staphylococcus aureus / F. Di Lowy // Ji Clin. Invest. — 2003. — Vol. 111. — Pi 1265-1273.

113. Lowy, F. D. Staphylococcus aureus infections / F. D. Lowy // N. Engl. J. Med. 1998; - Vol. 339. - P. 520-532.140: Lubbe, J. Secondary infections in patients with atopic dermatitis / J.Lubbe // Am. J. Clin. Dermatol. 2003. - Vol. 4. - P. 641-654.

114. Mapping the pathways to staphylococcal pathogenesis by comparative secretomics / M. J. Sibbald, A. K. Ziebandt, S. Engelmann et al. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2006. - Vol. 70, № 3. - P. 755-757.

115. Matricardi, P. M. High microbial tunwver rate preventing atopy: a solution to inconsistencies impinging on the Hygiene hypothesis? / P. M. Matricardi, S. Bonini // Clin. Exp. Allergy. -2000. Vol. 30. - P. 1506-1510.

116. Merchante, R. A periplasm in Bacillus subtilis / R. Merchante, H. M. Pooley, D. Karamata // J. Bacteriology -1995. Vol. 177, № 21. - P. 61766183.

117. Micera, A. The role of neuromediators in ocular allergy / A. Micera, A. Lambiase, S. Bonini // Allergy Clin. Immunol. 2008. - Vol. 8, № 5. - P. 466471.

118. Microbial colonization and atopic dermatitis / A. Roll et al. // Curr. Opin. Allergy. Clin. Immunol. 2004. - Vol. 4, № 5 - P. 373-378.

119. Molecular cloning and biochemical characterisation of proteases from Staphylococcus epidermidis / G. Dubin, D. Chmiel, P. Мак et al. // Biol. Chem. 2001. - Vol. 382. - P. 1575-1582.

120. Mupirocin resistance in clinical isolates of Staphylococcus aureus / P. G. Jones, T. Sura, M. Harris, A. Strother // Infect. Control Hosp. Epidemiol. — 2003. Vol. 24. - P. 300-301.

121. Nichijima, S. Antimicrobial resistanse of Staphylococcus aureus isolated from scin infections / S. Nichijima, I. Kurukawa // Int. J. Antimicrob. Agents. -2002. Vol. 19. - P. 241-243.

122. Niemann, H. H. Adhesins and invasins of pathogenic bacteria: a structural view / H. H. Niemann, S. Wolf, D. W. Heinz // Microbes and Infection. 2004. — № 6. - P. 101-112.

123. Nilsson, E. J. Topical corticosteroids and Th 1, Th2 and immunosuppressive cytokine gene transcripts in canine atopic dermatitis / E. J: Nilsson, C. G. Henning, J. Magnusson // Clin. Exp: Allergy. 2002. - Vol. 32. —P. 789-795.

124. Noble, W.C. Scin bacteriology and the role of Staphylococcus aureus infection/W.G.Noble//Brit. J. Dermatol;- 1998.-Vol. 139.-P. 9-12.

125. Novel- immunological approaches in the treatment of atopic eczema / M. Mempel, B. Belloni, C. Andress et al. // Curr. Opir. Allergy Clin. Immunol! -2008. Vol. 5. - P. 423-427.

126. Persistent skin colonization with Staphylococcus aureus in atopic dermatitis: relationship to clinical and immunological parameters / T. J: Guzik, M. Bzowska, A. Kasprowicz et al. // Clin: Exp. Allergy. 2005. - Vol: 35: - P. 448-455. ' :

127. Philip, M. D. Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus skin, infections: a review of epidemiology, clinical features, management, and prevention / M. D. Philip, R. Cohen // Int. J. Dermatology. -2007. -Vol. 46. -P. 1—11.

128. Pivarcsi, A. Innate immunity in the skin: how keratinocytes fight against pathogens. / A. Pivarcsi, I. Nagy, L. Kemeny // Curr. Immunol. Rev. — 2005. — Vol. 1.-P: 29-42.

129. Possible influences of Staphylococcus aureus on atopic dermatitis — the colonizing features and the effects of staphylococcal enterotoxins / Y. Morishita, J. Tada, L. Sato et al. // Clin. Exp. Allergy. 1999 - Vol: 29 - P. 1110-1117.

130. Postsecretory processing generates multiple cathelicidins. for enhanced topical antimicrobial defense / M. Murakami, B. Lopez-Garcia, M. Braff et al. // J. Immunol. 2004. - V.172. - P. 3070-3077.

131. Preferential binding of Staphylococcus aureus to skinsites of Th2-mediated inflammation in a murine model / S. H. С ho, I. Strickland, A. Tomkinson et al. // J. Invest. Dermatol. 2001. - Vol. 116. - P. 658-663.

132. Prevalence-and role of serum IgE antibodies to the Staphylococcus aureus-derived superantigens SEA and SEB in children with atopic dermatitis / R. Bunikowski, M. Mielke, H. Skarabis et al. // J. Allergy Clin. Immunol. -1999. -Vol. 103.-P. 119-124'.

133. Proceedings of International Consensus Conference on Atopic Dermatitis (Rome, Italy, November 5 6, 1999) / J: Hanifin, J.- H. Saurat, ed. // Am. Acad. Dermatol. - 2001. - Vol. 45. - P. 1-68.

134. Profit, T. Bacterial superantigens / T. Profit, J. D.Fraser // Clin. Exp. Immunol. 2003. - Vol. 133. - P. 299^-306.

135. Role and regulation of the superoxide dismutases of Staphylococcus aureus / M. N. Karavolos, M. J. Horsburgh, E. Ingham, S. J. Foster // Microbiology. -2003. Vol. 149. - P. 2749-2758.

136. Role of Staphylococcus aureus surface-associated proteins in the attachment to cultured NaCaT keratinocytes in a new adhesion assay / M.

137. Mempel, Т. Schmidt, S. Weidinger et al. // J. Invest. Dermatol. 1998. -Vol. 111,№3. —P. 452-456

138. Salgado, C. D. Community-acquired meticillin-resistant Staphylococcus aureus: A meta-analysis of prevalence and risk factors / C. D. Salgado, В. M. Farr, D. R. Galfee // Clin. Infect. Dis. 2003. - Vol. 36. - P. 131-139.

139. SB modulates virulence determinant expression and stress resistance: characterization of a functional rsbU strain of Staphylococcus aureus 8325-4 / M. J Horsburgh, J. L. Aish, I .J. White et al. // J. Bacteriol. . 2002. - Vol: 184.-P. 5457-5467.

140. Schroder, J.-M. Human beta-defensin-2 / J.-M. Schroder, J. Harder // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1999. - Vol. 31. - P. 645-651.

141. Severity scoring of atopic dermatitis: the SCORAD Index (Consensus Report of the European Task Force on atopic dermatitis) // Dermatology. -1993.-Vol. 186.-P. 23-31. 1

142. Short-term effects of topical fusidic acid or mupirocin on the prevalence of fusidic resistant (FusR) Staphylococcus aureus in atopic eczema / J. C. Ravenscroft, A. M. Layton, E. A. Eady et al. // Brit. JI Derm. 2003. - Vol. 148.-P. 1010-1017.

143. Sousa, M. A. Bridges from hospitals to the laboratory: genetic portraits of methicillin-resistant Staphylococcus aureus clones / M. A. Sousa, H. Lencastre // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004. - Vol. 40. - P. 101-111.

144. Staphylococcus aureus surface protein SasG contributes to intercellular autoaggregation of Staphylococcus aureus / M-.Kuroda, R. Ito, Y. Tanaka et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2008. - Vol. 377, № 4. - P. 1102— 1126.

145. Stratum corneum pH! in atopic dermatitis: impact on scin barrier function and colonisation* with Staphylococcus, aureus / F. Rippke, V. Schreiner, X. Doering; H. I. Maibach // Am. J. Clin. Dermatol. 2004. - Vol. 5, №>4. - P. 217-223.

146. Sullivan, J.M. Adhesion of Candida albicans to oral streptococci is promoted by selective adsorption of salivary proteins to the streptococcal cell surface / J. M. Sullivan, Hi F. Jenkinson, R. D. Cannon // Microbiology. 2000. - Vol. 146. - Pf 41-46.

147. The association between Staphylococcus aureus strains carryng Panton-Valentine leicocidin genes and the development of deep-seated' follicular infection / O. Yamasaci, J1 Kaneko, S. Morisane et al. // Clin. Infect. Dis. -2005. Vol. 40. - P. 381-385.

148. The molecular evolution of meticillin-resistant Staphylococcus aureus / R. N. -Deurenberg, C. Vine, S. Kalenic et al. // Clin. Microbiol. Infect. 2007. -Vol-. 13.-P. 222-235.

149. The prevalence of lowand high level mupirocin resistance in staphylococci1 from 19 European hospitals / F. J. Schmitz, E. Lindenlauf, B. Hoffmann et al. // J. Antimicrob. Chemoter. 1998. - Vol. 42. - P. 489-495.

150. The role" of colonization pressure in nosocomial transmission of meticillin-resistant Staphylococcus aureus / V. R. Williams, S. Callery, M. Vearncombe, A. E. Simor,// Am. J: Infect. Control. 2009: - Vol. 37, № 2. - P. 106-110.'

151. Thermostable DNase is superior to tube coagulase fon direct detection, of Staphylococcus aureus in positive blood cultures, / P. R. Laqace-Wiens, M. J. Alfa, K. Manickann, J: A. Karlowsky // J. Clin. Microbiol* 2007. - Vol. 45,№ 10.-P.3478—3479. •

152. Toxin in bullous impetigo ■ and, staphylococcal scalded-skin» syndrome targets desmoglein / Ml Amagai, N. Matsuyoshi; Z. Wang et al. / Nat; Med. 2000. -Vol. 6.-P: 1275-1277.

153. Travers, Ji B. The keratinocyte as a target for staphylococcal bacterial'toxins-/ Jl B. Travers, D. A. Norris, D. Y. M. Leung // J. Invest. Dermatol. Symp. Proc. 2001. - Vol. 6. - P. 225-230.

154. Tristan, A. use of Multiplex PCR to identify Staphylococcus aureus adhesins involved in human hematogenous infections / A. Tristan, L. Ying, M. Bes // J. Clin.Microbiology. 2003. - Vol. 41. - P. 4465-4467.

155. Use of ribotiping to retrospectively identifity meticillin-resistans Staphylococcus aureus isolates from phase 3 clinical trials for tigecycline that are genotipically related to communiti-associated isolates / F. McAleese, E.

156. Murphy, A. Babinchak et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 2005. - Vol. 49.-P. 4521-4529.

157. Wann, E. R. The fibronectin-binding MSCRAMM FnbpA of Staphylococcus aureus is a bifunctional protein that also binds to fibrinogen / E. R. Wann, S. Gurusiddappa, M. Hook // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275, № 18.-P. 13863-13871.

158. Zanetti, M. Cathelicidins, multifunctional peptides of the innate immunity / M. Zanetti // J. Leuk. Biol. 2004. - Vol. 75. - P. 39-48.

Информация о работе

Баязитова, Лира Табрисовна
кандидата медицинских наук
Уфа, 2009
ВАК 03.00.07

Диссертация

Вирулентные свойства стафилококковой микрофлоры кожи при атопическом дерматите - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы