Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка сыропригодности молока при использовании в рационах продуктов переработки стевии

ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка сыропригодности молока при использовании в рационах продуктов переработки стевии"

На правах рукописи

САВИНА ИРИНА ПАВЛОВНА

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА И ОЦЕНКА СЫРОПРИГОДНОСТИ МОЛОКА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ В РАЦИОНАХ ПРОДУКТОВ ПЕРЕРАБОТКИ СТЕВИИ

06.02.05 — ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

005557855

15 ЯНВ 2015

Уфа-2014

005557855

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Воронежский государственный аграрный университет имени императора Петра I»

Научный руководитель —

Официальные оппоненты:

Семёнов Сергей Николаевич

кандидат ветеринарных наук, доцент

Долгов Виктор Андреевич —

доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий лабораторией ветеринарно-санитарной экспертизы мяса, рыбы и других пищевых продуктов ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии

Ларионов Геннадий Анатольевич -

доктор биологических наук, доцент, заведующий кафедрой общей и частной зоотехнии ФГБОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия»

Ведущая организация - ФГБОУ ВПО «Московская государст-

венная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Защита диссертации состоится 27 февраля 2015 года в 10.00 ч. на заседании диссертационного совета Д 220.003.02 при федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный аграрный университет» по адресу: 450001, Республика Башкортостан, г. Уфа, 50-летия Октября, 34, тел. 8 (347) 228-91-77, факс 8 (347) 228-08-98

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный аграрный университет», www.bsau.ru

Автореферат разослан « Л9 » ^/^МЬсУ 2014

года.

Учёный секретарь диссертационного совета Д 220.003.02, ' Каримов Фоат Ахметович

доктор ветеринарных наук

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Основной задачей современного сельского хозяйства является производство необходимого количества продукции для удовлетворения растущих потребностей населения в продуктах питания, а перерабатывающей промышленности - в сырье. Существующие масштабы развития отрасли демонстрируют необходимость целенаправленного регулирования аграрной политики на всех уровнях управления технологической цепочкой «поле - ферма — завод - потребитель».

Фактор качества молочной продукции напрямую зависит от биохимических характеристик и уровня безопасности молока (Горбатова К. К., 1984, 1986, 2003, 2004; Храмцов А. Г., 1999, 2002; Барабанщиков Н. В., 2000; Крусь Г. Н. с соавт., 2004; Твердохлеб Г. В. с соавт., 2006; Кузнецов А. Ф., 2009; Востроилов А. В., 2010; Долгов В. А. с соавт., 2010; Мамаев А. В., 2013, Ларионов Г. А., 2014).

Интенсификация получения молока существенно меняет уровень обменных процессов у лактирующих животных, что требует нормализации рациона крупного рогатого скота путем введения новых, эффективных и безопасных, доступных и экономически обоснованных, легкоусвояемых кормовых добавок, положительно влияющих на организм животного и его продуктивные качества. С точки зрения физиологии наиболее приемлемыми в кормлении считаются природные источники биологически активных веществ, в частности, растительного происхождения (Двинская А. М., Шубин А. А., 1986; Бузлама В. С., Рецкий М. И, 1997; Bors W., 1990; Richman А. S., 2001).

Степень разработанности проблемы. Проблемы ветеринарно-санитарного качества и сыропригодности молока недостаточно разработаны и изучены, что обусловило выбор темы и обозначило ее актуальность.

Оценка сырого молока с точки зрения его технологической пригодности, а также проведение мероприятий по оптимизации этих свойств, становятся в последнее время отправной точкой инновационного ведения молочного скотоводства (Свириденко Г. М., 2005; Семёнов С. Н., 2009).

Чаще всего кормовые добавки нового поколения должны решать проблему комплексно: улучшать поедаемость основного рациона, поставлять недостающие питательные элементы, повышать эффективность использования составных веществ кормов, оптимизировать обменные процессы в организме, противостоять негативным факторам внешней среды, обеспечивать получение молока с высокими ветеринарно-санитарными и технологическими показателями. Кроме того, они обязаны быть экономически доступны и экологичны.

В качестве решения данного вопроса в последние годы активно рассматривается вариант использования вторичных продуктов переработки стевии в рационах сельскохозяйственных животных (Трухачёв В. И. с соавт. 2006, 2007; Полянский К. К., Семёнов С. Н., 2009, 2011). Растение стевия - Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsl., сем. Asteraceae медовая трава, двулистник сладкий), обладает естественной сладостью (Родионова Н. С., 2000; Верзилина Н. Д. и др., 2004; Семенова Н. А., 2004; Подпоринова Г. К., 2006; Munro Р. L., 2000). Ее родина - горы Парагвая. Сейчас стевия завезена уже во многие страны, а в 1985 г. она появилась в России. Ученые ВНИИ сахарной свеклы и сахара (Воронежская область, поселок Рамонь) освоили размножение стевии микрокрональным

методом - в пробирках (сорт рамонская сластена) и приступили к технологии ее выращивания.

По химическому строению сладкие вещества стевии являются тетрацикли-ческими дитерпеновыми гликозидами (стевиозиды), агликоном которых является стевиол, не имеющий вкуса. (Коробова М. М., 2000; Костина В. В., 2004; Варламов Д. Н., 2007). Сам процесс переработки стевии включает в себя различные варианты использования данного растения. Один из способов представляет собой водную экстракцию свежеубранных растений для получения стевиозида, в результате которого образуется жом стевии, обладающий высокой биологической и питательной ценностью. Другой вариант - использование высушенных и измельченных наземных частей стевии (стебли и листья). При этом способе переработки эффективность выхода полезных веществ намного выше. Для производства стевиозида используются только верхушечные листья стевии, а стебли и наземные листья не представляют ценности. С целью рационального использования продуктов переработки стевии (стебле-листьевой массы и жома) нами предложены варианты их применения в качестве кормовых добавок крупному рогатому скоту в период лактации с целью оптимизации качественных параметров молока и сыра. Данный вопрос имеет как научное, так и практическое значение.

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы являлась сравнительная ветеринарно-санитарная оценка и определение показателей сы-ропригодности молока при использовании в рационе лактирующих коров продуктов переработки (стебле-листьевой массы и жома) стевии. Для реализации цели исследований перед нами были поставлены и решены следующие задачи:

1. Оценить питательность и безопасность продуктов переработки стевии (стебле-листьевой массы и жома).

2. Установить степень воздействия кормовых добавок из нетрадиционного растительного сырья (стебле-листьевой массы и жома стевии) на организм лактирующих коров.

3. Изучить влияние кормовых добавок на ветеринарно-санитарные показатели и сыропригодность молока.

4. Определить качество и микроструктуру сыра «Калачеевский», полученного из экспериментального сырого молока.

5. Разработать методы изготовления парафиновых срезов применительно к твердым сычужным сырам.

6. Обосновать экономическую эффективность проведенных исследований.

Научная новизна. Впервые в сравнительном аспекте научно обосновано и

экспериментально доказано действие новых фитокормовых добавок из нетрадиционного растительного сырья (стевии) на показатели ветеринарно-санитарной безопасности и сыропригодности молока, а также на товарные и микроструктурные характеристики приготовленного из него твердого сычужного сыра с низкой температурой второго нагревания. Впервые для оценки микроструктурных изменений в твердых сычужных сырах предложены методы изготовления парафиновых срезов сыра.

Теоретическая и практическая значимость. Расширены знания в области повышения сыропригодности молока под влиянием введения в рацион коров

фитокормовых добавок на основе нетрадиционного растительного сырья (сте-вии). Дано научное обоснование исследуемой проблематики. Проведен анализ влияния кормовых добавок из стевии на организм коров по следующей цепочке «показатели обмена веществ - молоко - сыр». Проведена модернизация существующих методов изготовления микроскопических препаратов сыра.

В производственных условиях установлено влияние стебле-листьевой массы и жома стевии на показатели сыропригодности молока и качества сыра «Ка-лачеевский». На основании полученных данных разработано и утверждено Отделением ветеринарной медицины РАСХН «Методическое пособие по влиянию фитокормовой добавки из стевии на ветеринарно-санитарное качество молока и пригодность в производстве сыров» (протокол № 4 от 27.03.2012 г.).

Результаты исследований рекомендованы к внедрению в учебный и научный процесс в ФГБОУ ВПО Воронежский ГАУ при подготовке специалистов ветеринарного, зооинженерного и технологического профиля.

Методы изготовления парафиновых срезов твердых сычужных сыров используются в научном и учебном процессе ФГБОУ ВПО Воронежский ГАУ (протокол заседания НТС № 4 от 14.02.2013 г.).

В условиях коллективного хозяйства «имени Куйбышева» Калачеевского района Воронежской области с положительным эффектом апробировано использование продуктов переработки стевии в качестве кормовых добавок крупному рогатому скоту. Результаты исследований внедрены в технологическую схему получения молока и в филиале ОАО МК «Воронежский» «Калачеевский сырзавод» Калачеевского района Воронежской области.

Степень достоверности и апробация результатов исследований. Результаты исследований получены на сертифицированном оборудовании с использованием современных методик сбора и обработки информации. Полученные результаты обрабатывались статистическим методом вариационной статистики на достоверность различия сравниваемых показателей с помощью программ STATISTIKA 6.0 и электронных таблиц Microsoft Excel 2003. Степень достоверности различий средних величин в случаях нормального распределения определялись с помощью критерия Стьюдента.

Основные положения научных исследований были доложены автором на межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых (Воронеж, 2009 г.); на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского и аспирантского состава факультета ветеринарной медицины ВГАУ (2009-2013 гг.); на II и III этапах Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (г. Белгород, г. Ставрополь, 2010 г.); на конкурсе научно-инновационных проектов среди студентов, аспирантов и работников ФГОУ ВПО Воронежского ГАУ в рамках форума сельской молодежи «Будущее за молодыми» (2010 г.); на научных учебно-методических конференциях профессорско-преподавательского и аспирантского состава ВГАУ (Воронеж, 2011, 2013 гг.); конференции молодых ученых ВГАУ (Воронеж, 2012 г.), на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Животноводство России в условиях ВТО» (г. Орел, 2013 г.), на Международной научно-практической конференции

«Развитие аграрного сектора экономики в условиях глобализации» (Воронеж, 2013 г.), на выставке «Агросезон-2013» по направлению «Современная техника и технологии в земледелии и животноводстве» (Экспоцентр ФГБОУ ВПО Воронежский ГАУ).

Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии во всех этапах эксперимента, апробации результатов исследований на конференциях и выставках различного уровня, подготовке основных публикаций по выполненной работе.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Сравнительная оценка влияния стебле-листьевой массы и жома стевии на организм лактирующих коров.

2. Оптимизация ветеринарно-санитарных показателей молока и его сыро-пригодности при использовании кормовых добавок из нетрадиционного растительного сырья (стевии).

3. Качество и микроструктурный анализ сыра «Калачеевский».

Публикации результатов исследований. Основное содержание диссертации и результаты научных исследований изложены в 9 работах общим объемом 3,64 п.л. (авторских — 3,01 п.л.), в том числе 3 статьи опубликованы в ведущих рецензируемых научных изданиях объемом 0,88 п.л. (авторский вклад 0,76 п.л.)

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 148 страницах компьютерного текста и содержит 32 таблицы, 28 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, их обсуждения, заключения, практических предложений и приложений. Список литературы содержит 215 источников, из них 65 иностранных.

Материалы и методы исследований. Диссертационная работа выполнялась в соответствии с целевыми научными программами, координируемыми Министерством сельского хозяйства РФ, с планом научных исследований кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы, факультета ветеринарной медицины и технологии животноводства ФГБОУ ВПО Воронежский ГАУ по теме «Разработка и внедрение научно-обоснованных, экологически безопасных методов диагностики, лечения и профилактики массовых болезней животных в условиях ЦЧЗ», раздел 3.10. «Обеспечение ветеринарно-санитарной безопасности и санитарно-гигиенического качества продукции животного и растительного происхождения при использовании новых технологий и препаратов», подраздел 3.10.1. «Разработка способов повышения качества молока коров и продуктов убоя с.-х. животных путем использования новых технологий и фармакологических подходов» в 2008-20011 гг.

Экспериментальная и лабораторная часть работы выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы и зоогигиены, в лаборатории массовых анализов ФГОУ ВПО ВГАУ, а также в АИЦ ФГУ Государственный центр агрохимической службы «Воронежский», в ГУ «Воронежская облветлаборато-рия», во Всероссийском НИИ сахарной свеклы и сахара имени А. Л. Мазлумо-ва, в коллективном хозяйстве «имени Куйбышева» Калачеевского района, Во-

ронежской области, а также в филиале ОАО МК «Воронежский» «Калачеев-ский сырзавод» Калачеевского района Воронежской области.

Объектами изучения служили: продукты переработки стевии (стебле-листьевая масса и жом), коровы симментальской породы, кровь, рубцовое содержимое и молоко, полученное от них, а также сыр, выработанный из молока животных опытных и контрольных групп. При проведении исследований фито-кормовую добавку из стебле-листьевой массы стевии скармливали опытному поголовью из расчёта 5 г на кг живой массы в сутки с основным рационом (опытная группа I) (п=10), жом стевии скармливали из расчета 5 г на кг живой массы в сутки с основным рационом (опытная группа II) (п=10), контрольная же группа (п=10) получала основной рацион. Объем и направленность эксперимента отражены в схеме проведения исследований (рис. 1).

Сыр твердый сычужный «Калачеевский»

Органолептическая оценка Микроструктура сыра

Практические предложения Заключение Экономическая эффективность

Рисунок 1 - Схема проведения исследований

Опыт проводился с участием животных - парных аналогов 2-3-й лактации, сформированных в группы с учетом возраста, даты отела, живой массы, продуктивности, содержания жира и белка в молоке. Технология содержания, дое-

ния и кормления подопытных животных была идентична и соответствовала нормам, принятым в хозяйстве. Содержание крупного рогатого скота в период исследований было стойловое, привязное.

Согласно плану эксперимента, у всех трех групп животных (опытные I и II, а также контрольная) исследуемые нами показатели определяли в течение четырех исследований: первое исследование — фоновые показатели начала исследований (8 день лактации); второе исследование - период с 8 по 100 день лактации; третье исследование - период со 101 по 200 день лактации; четвертое исследование - период с 201 по 300 день лактации.

Безопасность продуктов переработки стевии (стебле-листьевой массы и жома стевии) исследовали по следующим методикам: определение токсичных элементов (свинец, кадмий, медь, цинк) проводили по ГОСТ 30178-96; определение количества ртути в образцах по МУ 5178-90; количества мышьяка по ГОСТ 26930-86; количества нитратов и нитритов по ГОСТ 13496.19-93; определение уровеня пестицидного загрязнения (ГХЦГ и ДДТ) проводили по ГОСТ 13496.20-87; количество радионуклидов (цезий -137, стронций-90) определяли по МУК 2.6.1.1194-03; определение наличия афлотоксина В] проводили по ГОСТ 30711-2001; уровень загрязненности микотоксинами (дезоксинивалено-лом и зеараленоном) определяли по МУ 5177-90.

Питательность кормовых добавок оценивали согласно следующим методикам: определение первоначальной влаги и гигровлаги по ГОСТ 13496.3-92; содержание сырого протеина по ГОСТ Р 51417-99; содержание сырой клетчатки по ГОСТ 13496.2-91; количество сырой золы по ГОСТ 13979.6-69; количество кальция по ГОСТ 17258-71; количество фосфора по ГОСТ 26657-97; содержание сырого жира по ГОСТ 13496.15-97; содержание каротина по ГОСТ 13496.17-95.

Исследование рубцового содержимого в количестве 120 проб осуществляли с учётом его микробиологических и физико-химических параметров на 8-й, 100-й, 200-й и 300-й день лактации.

Ветеринарно-санитарные и качественные показателей молока определялись в соответствии с ФЗ № 88 (в ред. ФЗ № 163) «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» и ГОСТ Р 52686-2006 «Сыры и сырные продукты. Общие технические условия».

Гематологические исследования в количестве 120 проб венозной крови, взятой из ярёмной вены до утреннего кормления животных, осуществляли на 8-й, 100-й, 200-й и 300-й дни лактации. Исследования и включали в себя изучение морфологических, биохимических и иммунологических показателей.

Органолептическую оценку сыров проводили по 100-бальной системе. Определение количества молока на выработку 1 кг сыра и расхода сычужного фермента на 100 кг молока проводили расчетным методом. Микроструктуру сыра изучали в соответствии с общепринятым методом приготовления замороженных срезов, а также по предложенному нами вариантом метода ускоренной заливки в парафин.

Экономическую эффективность исследований оценивали в соответствии с утвержденной Методикой определения экономической эффективности исполь-

зования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений (Лоза Г. М., 1980 г.).

2 ОСНОВНЫЕ НАУЧНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ И РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Оценка биологической безопасности экспериментальных кормовых добавок и их питательность

В соответствии с критериями биологической безопасности кормов нами установлены уровни содержания регламентируемых показателей с точки зрения оценки безопасности стебле-листьевой массы и жома стевии. Опираясь на полученные лабораторные данные, содержание токсичных элементов, нитратов, нитритов, остаточных количеств пестицидов, микотоксинов и радионуклидов в фитокормовых добавках (стебле-листьевой массе и жоме стевии) не превышает максимально допустимых уровней (МДУ), что говорит о безопасности при использовании их в кормлении животных (табл. 1).

Таблица 1 - Результаты токсикологического исследования стебле-листьевой массы и жома стевии

Определяемые показатели, единицы измерения По нормативным документам, не более Значение показателей

Жом стевии Стебле-листьевая масса стевии

Токсичные элементы, мг/кг, не более: Свинец 5,0 1,48±0,21 1,46±0,29

Кадмий 0,3 0,П±0,01 0,13±0,03

Мышьяк 0,5 0,025±0,018 0,024±0,012

Ртуть 0,05 0,015±0,003 0,012±0,006

Медь 30 4,23±0,71 4,14±0,82

Цинк 50 24,3±5,8 26,0±5,2

Нитраты 1000 256,1±84 254,0±87

Нитриты 10 4,5±1,13 4,2±1,1

Пестициды, мг/кг, не более: ГХЦГ (аДу-изомеры) 0,05 - 0,2 менее 0,001 менее 0,001

ДДТ и его метаболиты 0,05 - 0,2 менее 0,006 менее 0,007

Радионуклиды, Бк/кг, не более: Цезий-137 600 менее 7,1 менее 7,2

Стронций-90 100 менее 4,6 менее 4,3

Микотоксины, мг/кг, не более: Афлатоксин В) 0,025-0,1 менее 0,004 менее 0,003

Дезоксиниваленол 1,0-2,0 менее 0,12 менее 0,15

Зеараленон 2,0-3,0 менее 0,05 менее 0,06

Количество сухого вещества в 1 кг жома стевии составило 320 г (32 %), а в стебле-листьевой массе 879 г (87,9 %).

Гигровлага стебле-листьевой массы стевии составила 12,1 %, при этом в жоме стевии гигровлаги было больше (68 %). Процентное соотношение первоначальной воды и сухого вещества является оптимальным для кормов данного типа.

Уровень растворимого протеина (РП) составил в жоме стевии - 137 г, а в стебле-листьевой массе стевии - 192 г, а нерастворимый протеин (НРП) был соответственно 2 и 5 г. Количество переваримого протеина (ПП) в жоме составило 93,5 г. а в стебле-листьевой массе - 182 г.

Уровень сырого жира в 1 кг жома стевии составил 6 г, а в 1 кг стебле-листьевой массы — 19 г.

Количество сырой клетчатки в 1 кг жома стевии составило 132 г, а в 1 кг стебле-листьевой массы стевии — 300 г.

Количество кальция в 1 кг жома стевии было 7,5 г. фосфора - 3 г. Соотношение кальция к фосфору составило 2,5:1. Уровень кальция в 1 кг стебле-листьевой массы стевии был 3,5 г, а фосфора - 1,5 г. Соотношение этих показателей составило 2,3:1.

Показатель энергетической кормовой единицы (ЭКЕ) для жома составил 0,3, а для стебле-листьевой массы - 0,63. Обменная энергия — соответственно 9,35 и 7,3 МДж.

2.2 Влияние стебле-листьевой массы и жома стевии на организм коров 2.2.1 Динамика показателей рубцовой микрофауны

Изучение основных микробиологических и физических параметров рубцо-вого содержимого животных показало, что использование предложенных нами фитокормовых добавок из стевии обеспечило положительную динамику орга-нолептических показателей рубцовой жидкости лактирующих коров I и II опытных групп. Так, в I опытной группе за период исследований процент орга-нолептически благополучной рубцовой жидкости (имеющей оливково-зелёный (с оттенками) цвет, ароматный рубцовый запах, слабовязкую консистенцию) вырос на 20%, а во II - на 12% по отношению к фоновым значениям.

Согласно полученным нами данным, в I опытной группе уже ко 2-му периоду исследований статистически достоверно по отношению к фоновым показателям (Р<0,01) на 14,8% увеличилась численность простейших.

Во II опытной группе, получавшей с основным рационом жом стевии, ко второму исследованию достоверное возрастание количества инфузорий (Р< 0,01), по сравнению с фоновым, составило 10,2%. Разница в численности инфузорий в рубцовом содержимом коров опытных групп оказалась в пользу животных I опытной группы (на 4,5%). В отношении контрольной группы отмечались незначительные колебания искомой величины, не имевшие диагностического значения.

Бактериальный пейзаж I опытной группы имел тенденцию к увеличению с фоновых значений 4,18±1,15 до 4,54±1,01 млрд./мл к концу 4 исследования, что соответствовало 7,9%. У II опытной группы прирост данного показателя был на уровне 4,1%. Разница между I и II опытными группами по количеству бактерий к концу 4 исследования составила 3%.

Полученные нами данные указывают на наличие характерных для жнач-ных показателей рН рубиового содержимого (6,4 - 6.6) как в 1 и II опытных, так и в контрольной группах. При этом колебания внутри трупп на разных временных промежутках были статистически недостоверны и не выходили за физиологически обусловленные рамки.

У животных, получавших с рационом предложенную нами кормовую добавку из стсблс-лисгьсвой массы стении (опытная группа IX активность микроорганизмов рубцового содержимого повысилась в среднем на 16.7%. У ко(к>в II опытной группы, получавших жом сгевии. данные значения увеличились до 11,6%.

Анализ значений, характеризующих количество летучих жирных кислот, показал рост этого показателя у животных I опытной группы на 15,6%. В опытной группе II данный показатель вырос с I по 4 исследования до 14,2% В контрольной группе нами было отмечено падение исследуемых параметров рубиового содержимого на 5,4% (рис. 2).

у ^ 1 т

/ /

у ■

"Опм'мая I -Комтролкиая -Олыгмм II

2 исокд.

3 «СУИд

« ««лад

Рисунок 2 - Уровень ЛЖК в р>бцивом содержимом коров двух опытных и контрольной

групп. мМ/л

Морфологическая опенка инфузорий рубцового содержимого коров показала рост числа крупнорсснитчатых простейших на момент завершения эксперимента на 16,3% в I опытной группе, на 9,7% во II опытной группе. В контрольной группе данные показатели не имели заметных различий и находились практически на одном уровне на протяжении всего эксперимента (рис. 3).

"Опытная I -Контрольная "Опытам II

I иома

2 иселгд

Змссмд.

4 нсслед.

Рисунок 3 - Процентное соотношение крупнорсснитчатых инфузорий среди двух опытных и контрольной групп. %

2.2.2 Влияние вторичных пролуктов переработки стевин на уровень обмена веществ

Эффективность испыту емых кормовых добавок оценивалась нами по степени их воздействия на обменные процессы, протекающие в организме продуктивных животных.

Использование кормовых добавок в каждый из периодов эксперимента позволило получить следующие результаты (рис. 4,5).

1 исслед 2 нее лед 3 исслед 4 исслед

РисуНОК 4 - Уровень I .-ПОМПЫ в крови корой двух опытных и контрольной групп. мМ/л

3.4 «

1 исслед. 2 исслед. 3 исслед. 4 исслед.

Рисунок 5 - Уровень холестерина в кропи коров двух опытных и контрольной фупп. мМ/л

Так. показатель уровня глюкозы в крови животных I опытной группы увеличился па 16,5% ко второму исследованию, а потом до конца -»ксперимента был на уровне 2.33±0,01 мМ/л. Общий достоверный (Р<0,05) рост общею белка к концу 4 исследования составил 12.7% но отношению к фону, при тгом прирост обеспечивался за счСт альбуминовой фракции, в то время как процент глобулинов оставался в рамках статистических 1Ю1решностей. За период исследований установлено снижение (на 13.90%) в крови общего холестерина.

В опытной группе II отмечался достоверный рост (Р<0.01) уровня глюкозы на 13,73% общего белка - на 4.21% в том числе альбуминов - на 4.1% Значение общего холестерина за отчетный период снизилось до 8.19%.

В период эксперимента нами определялась активность ферментов, продуктов перекисши о окисления липидов (ПОЛ) и системы антиоксидан гной зашиты.

В опытной группе I уровень щелочной фосфатазы снизился на 10.4%, доля диеновых конькиатов и малоновото диальдегида уменьшилась на 39,57% и 57,86% соот ветственно. Активность ферментативного звена ЛОЗ выросла но СОД - на 22.64% но ГТЮ - на 54,46% по ЛОА плазмы - на 54.03%.

Во второй опытной группе достоверно (1'<0.05) снизился урокиь щеточной фосфатазы на 7.90% на 26.67% - количество диеновых конъюгатсв, на 53,91% -малоновото диальдегида. Активность СОД увеличилась на 17.08% ПК) - на 13,33% ЛОЛ плазмы - на 39.34%.

2.3 Продуктивность животных, всгсрннарно-санитарная и технологическая оценка молока (на фоне применения вторичных продуктов переработки стевни)

Учёт молочной продуктивности подопытных животных, проводившийся в период с 8 по 91 день лактации, принбе следующие результаты (ряс. 6).

Рисунок 6 - Молочная продуктивность коров опытных и контрольной групп, кг

Молочная продуктивность до 28 дня эксперимента была во в;ех трСх группах на одном уровне, в рамках статистической погрешности. Максимальное значение искомого показателя в I опытной группе составило 2013 кг. во II -19.87 кг, в контрольной - 19,65 кг за сутки. К моменту завершения исследований разница между группами составила 2.49% между I и II опытной группами. 4.63% между II опытной и контрольной группами, 7.24% между 1 опытной и контрольной группами.

Оценка биохимического состава молока и его технологических свойств принесла следующие результаты. В I опытной группе (табл. 2) максимальные значения исследуемых показателей были в последнюю фазу эксперимента и составили по жиру - 3,89±0,06% молочному белку - 3.29±0,05,/о. казеину -2,51±0.01%. молочному сахару - 4,85±0.06%. Соотношение жир/белок. жир/СОМО и белок/СОМО составило 1.23: 0.40 и 0,39 соответственно.

Показатели Фон 28 день 49 день 70 день 91 день

Массовая доля жира, % 3,74±0,10 3,74±0,11 3,89±0,03 3,88±0,09 3,89±0,06"

Массовая доля белка, % 3,18±0,08 3,15±0,03 3,28±0,05 3,29±0,06 3,29±0,05"

Казеин, % 2,23±0,05 2,31±0,02 2,43±0,05 2,50±0,02 2,51±0,01*

Сывороточные белки, % 0,95±0,01 0,84±0,005 0,85±0,004 0,79±0,007 0,78±0,006

Массовая доля лактозы, % 4,65±0,06 4,63±0,04 4,82±0,03 4,85±0,08 4,83±0,06*

Соотношение жир / белок 1,31 1,29 1,25 1,23 1,23

Соотношение жир / COMO 0,46 0,44 0,41 0,40 0,40

Соотношение белок / COMO 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39

Р<0,001 по отношению к контролю

Во второй группе (табл. 3) доля составных частей молока на момент 91-го дня исследований распределилась следующим образом. Массовая доля жира составила 3,82±0,02%, белка - 3,20±0,03%, лактозы - 4,76±0,06%, 2,34±0,03%. Соотношение жир/белок, жир/СОМО и белок/СОМО составило соответственно 1,27; 0,44; 0,36.

Таблица 3 - Технологически значимые показатели молока коров II опытной группы

Показатели Фон 28 день 49 день 70 день 91 день

Массовая доля жира, % 3,73±0,01 3,72±0,16 3,80±0,03 3,79±0,05 3,82±0,02*

Массовая доля белка, % 3,17±0,04 3,11±0,02 3,19±0,03 3,18±0,05 3,20±0,01

Казеин, % 2,22±0,01 2,25±0,03 2,31±0,05 2,30t0,04 2,34±0,03'

Сывороточные белки, % 0,95±0,02 0,86±0,006 0,88±0,001 0,88±0,003 0,86±0,002

Массовая доля лактозы, % 4,65±0,06 4,62±0,04 4,74±0,03 4,75±0,08 4,76±0,06*

Соотношение жир / белок 1,33 1,31 1,28 1,30 1,27

Соотношение жир / COMO 0,46 0,45 0,43 0,43 0,44

Соотношение белок / COMO 0,32 0,33 0,33 0,35 0,36

Р<0,05 по отношению к контролю

Для контрольной группы изменения, коснувшиеся искомых показателей, не имели статистически подтверждённого статуса и не выходили за рамки физиологически обусловленных значений.

Также было отмечено снижение термоустойчивости молока коров, получавших кормовые добавки из отходов переработки стевии. В молоке животных контрольной группы отмечено увеличение термоустойчивости с 2,3 до 2,5 к 91 дню эксперимента.

Результаты бродильной и сычужно-бродильной пробы, а также оценка термоустойчивости экспериментального молока также указывают на положительную динамику с точки зрения оптимизации технологических характеристик в группе, где использовались предложенные кормовые добавки (табл. 4, 5, 6).

Показатели Фон 28 день 49 день 70 день 91 день

Бродильная проба, класс 2,4 2,3 2,2 2,1 2,0

Сычужно-бродильная проба, класс 2,3 2,2 2,1 2,1 2,1

Термоустойчивость, группа 2,3 2,2 2,1 2,1 2,1

Содержание спор лактатсбра-живающих масляно-кислых микроорганизмов, тыс./дм3 13,5± 0,03 12,8± 0,05 11,6± 0,01 11,3± 0,03 11,0± 0,04'

КМАФАнМ, КОЕ/см3 183,4 х103± 1,02 180,2 х10'± 2,12 179,4 ><10^ 2,07 175,4 х10*± 2,10 173,4 хЮ^ 3,12"

Р <0,001; Р <0,05 по отношению к контролю

Показатели Фон 28 день 49 день 70 день 91 день

Бродильная проба, класс 2,4 2,3 2,3 2,2 2,2

Сычужно-бродильная проба, класс 2,3 2,2 2,2 2,2 2,2

Термоустойчивость, группа 2,3 2,2 2,2 2,2 2,2

Содержание спор лактатсбра-живающих масляно-кислых микроорганизмов, тыс./дм3 13,4± 0,02 13,0± 0,04 12,6± 0,02 12,1± 0,05 11,9± 0,06*

КМАФАнМ, КОЕ/см3 183,9 х Ю^ 1,05 182,2 х ю^ 1,23 181,7 х 10^ 134 175,4 х 10^ 2,41 178,1 х 10^ 2,85"

Р <0,001; Р <0,05 по отношению к контролю Таблица 6 - Ветеринарно-санитарная характеристика молока коров контрольной

Показатели Фон 28 день 49 день 70 день 91 день

Бродильная проба, класс 2,4 2,4 2,3 2,3 2,3

Сычужю-бродильная проба, класс 2,3 2,3 2,3 2,3 2,3

Термоустойчивость, группа 2,3 2,3 2,4 2,4 2,5

Содержание спор лактат-сбраживащих масляно- 13,4 ± 13,6 ± 13,5 ± 13,5 ± 13,6 ±

кислых микроорганизмов, тыс./дм3 0,03 0,02 0,01 0,02 0,03

КМАФАнМ, КОЕ/см3 184,2 х 10^ 1,03 183,7 х 10^ 1,15 184,4 х ю^ 2,02 184,7 х 1,51 185,0 х 10^ 1,44

За все дни эксперимента бактериальная загрязнённость молока, получаемого в опытных и контрольной группах, была в норме. Однако было отмечено достоверное (Р<0,05) снижение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) по отношению к контролю в I опытной группе к 91 дню эксперимента на 6,3%, а во II опытной группе - на 3,7%.

Для выработки сыра из молока коров опытной группы I потребовалось достоверно (Р <0,001) меньше сычужного фермента на 15,8% к 91 дню эксперимента, чем из молока контрольной группы. В опытной группе II использовали на 11,3% меньше сычужного фермента по сравнению с контролем. К 91 дню исследований в I опытной группе, мы заметили снижение этого показателя на 15,9% по отношению к фону, а во II опытной группе - на 9,9%.

На производство 1 кг сыра к 91 дню эксперимента потребовалось на 8,2% меньше молока опытных животных I группы, чем контрольных. Также отмечено снижение количества молока опытных животных II группы на 3,6% в сравнении с контролем. Сравнивая данные показатели между фоном и 91 днем эксперимента, в I опытной группе мы отметили уменьшение на 8,2%, во II опытной группе - на 3%.

Время свертывания молока сычужным ферментом к 91 дню эксперимента в группе коров, получавших фитодобавку из стебле-листьевой массы стевии, оказалось достоверно (Р <0,05) меньше на 15,5% в сравнении с контрольной группой животных. У коров II опытной группы время свертывания молока сычужным ферментом достоверно (Р<0,05) снизилось на 9,3% по сравнению с контролем.

По результатам наших исследований сыропригодность молока, полученного от поголовья опытной группы I, оказалось выше, чем у контрольной группы и животных II опытной группы. Это является важнейшим критерием качества, обеспечивающим получение сыра с высокими потребительскими характеристиками, а также значительно снижает затраты на его производство.

2.4 Качественные характеристики сыра «Калачеевский» 2.4.1 Органолептическая оценка сыра

Согласно плану наших исследований мы провели органолептическую оценку сыра, произведенного из молока подопытных животных. Экспертами было отобрано 9 головок сыра (по 3 из обеих опытных и 3 из контрольной партии) массой 7 кг. От каждой головки щупом из центра отбирали столбик сыра, отделяли корковый слой и оставляли отрезок длиной 4,5 см, протирали через мелкую сетку и тщательно перемешивали, выделяя средний образец около 50 г. (табл. 7).

Таблица 7 - Органолептическая оценка сы ра «Калачеевский»

Показатели, баллы Сыр из молока I опытной группы Сыр из молока II опытной группы Сыр из молока контрольной группы

Внешний вид 8,1 ±0,02 7,3±0,02 7,1±0,02

Вкус и запах 40,1±0,01 38,2±0,02 37,5±0,01

Консистенция 23,0±0,05 21,5±0,03 20,1±0,04

Рисунок 7,6±0,02 7,3±0,06 7,4±0,04

Цвет теста 4,0±0,01 3,8±0,05 3,4±0,02

Упаковка и маркировка 4,0±0,02 4,0±0,01 4,0±0,02

Общий балл 86,8 82,1 79,5

Сыр оценивали органолсптически ири температу ре 18°С по 100-бальной системе, где определяли внешний вид (максимально 10 баллов), вкус и запах (максимально 45 баллов), консистенцию (максимально 25 баллов), рисунок (максимально 10 баллов), цвет теста (максимально 5 баллов), упаковку и маркировку (максимально 5 баллов).

По результатам дегустации сыр из молока коров I опытной группы оказался лучше на 7.3 балла, чем сыр из молока контрольной. Общая оргаиолсптичс-ская оценка оказалась выше контрольных значений на 8,4%. Сыр из молока опытной ipyniibi II, в сравнении с контролем, был лучше на 2.6 балла, что в процентах составило 3,2%

2.4.2 Мнкроструктурнмс исследовании сыра

Небольшие кусочки сыра «Калачеевский» размером 0,5 * I * I см мы вырезали в центральной и периферической облаете и фиксировали в 10% формалине для приготовления замороженных срезов, применяя окраску Суданом 111+ IV по общепринятым методам, изложенным в руководствах по гистотехникс (Ромсйс. 1954; Росхин. 1954; Кисели. 1961; Лили, 1969; Тиняков Г.Г., 1963). С помощью программы Scope Photo Image Software мы получили слелующие изображения (рис.7)1

Рисунок 7 - Микрострукту ра сыра (замороженные срезы. 20 мкм), окраска Суданом III* IV; Ув.об. х 40, ок. х 15.

Г1о данным микрофоинрафиям сложно провес™ морфометрию основных микрострукту р сыра, так как толщина замороженных срезов была значительной (20 мкм).

Поэтому нами был разработаны методы изготовления парафиновых срезов твердых сычужных сыров после фиксации в 96° спирге. а гакже после фиксации в насыщенном растворе сулемы с формантом (9:1), что позволило наиболее четко и информативно дагь представление о микрострукту ре исследу емого сыра (рис. 8 и 9).

Фиксация материала я 96'спирте (■)« ч ) — I|рояодка ма!срмала я <*>• спирте(1 час) — » 100*сттрте I (30 мин) — ■ ККГ спирте II (30 мин) — в спирт-ксилоле (I |)(20мии> — я ксилоле! (15 мни лопросветленияI — * ксилолеII(10чип) — я ксилол-пфафине (I I) СТ*-+37*С(30 мин) — я парафине I с I*- (40 мин) — я парафине II с Т*- *56*С г» МИН) — Зал никл материала я парафин — Окраска прикнопленных с реши гематокилии-хпизюм

Рисунок 8 - Схема способа заливки фиксированного сыра в парафин после фиксации в 96е спирте

Фтс.щия материала а насыщенном рас!юре сулемы с формалином (9 1)(48 ч) — 70* спирт (2 ч) -»Спирт - раствор Люголя (ли удаление сулемы расгвор Люгсшя добавляли до шста крепкого мая до прекращения просветления» — Проводка ман-риала

• 70* спирте(I час) — ■ ЖГспирте (30 мин) — » 90* спирте(30 мин) -»я 46*спирте (30 мин) — ■ 10СГ спирте I (30 мин) — ■ 100" спирте II (30 мин) — в спирт-ксилоле (1:1) (20 мнн) — в ксилоле 1(15 мии до просаетлени«) — ■ ксилоле II (10 мин) — ■ ксилол-парафине с «*- +37 "С (30 мин) -• в парафине I с I*- -56"С (40 мнн) — в парафине И СI*" -»56\Г(30 мин) — Заливка материала в парафин Окраска приготовленных срею» гематоксилин-эозином

Рисунок 9 - Схема способа заливки сыра в парафин после фиксации в насыщенном растворе сулемы с формалином (9:1)

При использовании разработанных нами режимов заливки материала (сыра) очень легко получить качест венные парафиновые срезы, которые окрашиваются по общепринятой методике окраски гематоксилин-эозином (рис. 10 и II).

Рисунок 10- Процесс обратования колоний микроорганизмов и микронустот в сыре (парафиновые срезы), окраска гематоксилин-эозином; Ув.об х10, ок.х IS.

Па рисунке 10 виден процесс образования колоний микроорганизмов в сыре (парафиновые срезы). Слева - начало процесса образования колоний, заметно образование микропустот, в центре образование колоний, увеличение количества микропустот, справа - колонии микроорганизмов, микропустоты отсутствуют.

Рисунок 11 - Процесс образования микронустот в микрозернах сыра (парафиновые срезы), окраска гематоксилин-эозином; Ув.об. х 40. ок.х 15.

IIa рисунке II при большем увеличении изображен процесс образования микропустот в сыре (парафиновые срезы). Слева: в микрозернах микропустоты

отсутствуют. В центре, в микрозернах появляются мелкие микропустоты. Справа: в микрозернах видны более крупные микропустоты.

Далее мы провели измерения отдельных микроструктур сыра и получили следующие результаты (табл. 8).

Белковые микрозерна по величине в сыре из I опытной группы были достоверно больше контрольных значений на 22,7%, а в сыре из II группы выше контрольных на 6,9%.

Микрозерна белково-липидные по величине в сыре из I опытной группы были достоверно больше контрольных на 12,6%, а в сыре из II опытной группы выше контрольных значений на 7,4%.

Таблица 8 - Микроструктурный состав сыра «Калачеевский»

Диаметр Сыр из молока контрольной группы Сыр из молока I опытной группы Сыр из молока II опытной группы

Микрозерна белковые, мкм 14,30±0,62 18,50±0,60" 15.37±0,67

Микрозерна белково-липидные, мкм 54,50±1,66 62,40±1,48" 58,90±1,54

Колонии микроорганизмов, мкм 49,90±1,72 39,90±1,53" 45,90±1,51

Микропустоты, мкм 128,40±1,27 100,60±1,37" 118,60±1,18"

Р <0,001; Р <0,05 по отношению к контролю

Колонии микроорганизмов, наоборот, были больше в сыре из контроля на 20%, чем в I опытной группе, и на 13,1%, чем во II опытной группе.

Микропустоты также были достоверно больше в сыре из контроля на 21,6%, чем в I опытной группе, и на 7,6%, чем в сыре из молока II опытной группы.

На основании микроструктурных исследований мы можем предположить, что показатели процентного увеличения количества белковых и белково-липидных микрозерен в сыре из молока опытных групп по сравнению с контролем кореллируют с увеличением уровня белковости и жирности молока после использования в кормлении коров фитокормовых добавок. Снижение же бактериальной обсемененности молока опытных групп животных кореллирует со снижением в сыре количества колоний микроорганизмов и микропустот, что мы связываем с жизнедеятельностью микроорганизмов сыра.

2.6 Экономическое обоснование исследований

Как показали проведённые экономические расчёты, использование стебле-листьевой массы и жома стевии в рационе лактирующих коров обеспечивает экономию затрат на производство 1 кг сыра в объеме 2,85 руб. и 2,12 руб. соответственно, при этом улучшаются показатели качества молока и полученного из него сыра.

3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Количество показателей уровня биологической безопасности фитокор-мовых добавок не превышает максимально допустимых уровней (МДУ). Показатель энергетической кормовой единицы (ЭКЕ) для жома составил 0,3, а для стебле-листьевой массы - 0,63. Обменная энергия соответственно 9,35 и 7,3 МДж.

2. Изучение основных микробиологических и физических параметров руб-цового содержимого животных показало, что использование предложенных нами фитокормовых добавок обеспечило положительную динамику рубцового пищеварения.

В крови животных I опытной группе уровень глюкозы увеличился на 16,5%, рост общего белка составил 12,7%, снижение общего холестерина составило 13,90%. В опытной группе II отмечался достоверный рост (Р<0,01) уровня глюкозы на 13,73%, общего белка - на 4,21%. Общее количество холестерина снизилось 8,19%. В опытной группе I уровень щелочной фосфатазы снизился на 10,4%, доля диеновых конъюгатов и малонового диальдегида уменьшилась на 39,57% и 57,86% соответственно.

Активность ферментативного звена АОЗ выросла по СОД - на 22,64%, по ГПО - на 54,46%, по АОА плазмы - на 54,03%. Во второй опытной группе достоверно (Р<0,05) снизился уровень щелочной фосфатазы на 7,90%, на 26,67% -количество диеновых конъюгатов, на 53,91% - малонового диальдегида. Активность СОД увеличилась на 17,08%, ГПО - на 13,33%, АОА плазмы - на 39,34%.

3. Максимальная молочная продуктивность в I опытной группе составила 20,13 кг, во II - 19,87 кг, в контрольной - 19,65 кг. К моменту завершения исследований разница между группами составила 2,49% между I и II опытной группами, 4,63% между II опытной и контрольной группами, 7,24% между I опытной и контрольной группами. По состоянию на 91-й день исследований распределение составных частей молока было следующим: в I группе - массовая доля жира - 3,89±0,06%, молочного белка - 3,29±0,05%, казеина -2,51±0,01%, молочного сахара - 4,85±0,06%. Соотношение жир/белок, жир/СОМО и белок/СОМО составило 1,23; 0,40 и 0,39 соответственно; во II группе - массовая доля жира - 3,82±0,02%, белка - 3,20±0,03%, лактозы -4,76±0,06%, 2,34±0,03%. Соотношение жир/белок, жир/СОМО и белок/СОМО составило 1,27; 0,44; 0,36. Сыропригодность молока оказалась выше в группе I за счёт снижения расхода сычужного фермента на 15,8% (Р<0,01), расхода молока на выработку 1 кг сыра - на 8,1% (Р<0,05), сокращения времени свёртывания сычужным ферментом - на 14,1% (Р<0,01), а во второй группе расход сычужного фермента уменьшился на 9,9% (Р<0,05), расхода молока на выработку 1 кг сыра снизился на 3,6% (Р<0,05), время свёртывания молока сычужным ферментом сократилось на 8,5% (Р<0,05).

4. Органолептические показатели сыра, выработанного из молока опытной группы I, оказались выше относительно опытной группы II на 5,5 балла, а контрольных значений - на 7,3 балла. Анализ морфометрических исследований микроструктуры сыров показал, что белковые микрозерна по величине в сыре из опытной группы I были больше контрольных на 22,7% (Р<0,01), а в сыре из опытной группы II - на 6,9%. Белково-липидные микрозерна в сыре из опытной группы I оказались крупнее контрольных значений на 12,6% (Р<0,05), а в сравнении с опытной группой II - на 5,2%. Размер колоний микроорганизмов был

больше в сыре контрольной группы на 20% в сравнении с опытной группой I и на 13,1% - с опытной группой II. Величина микропустот была больше в сыре из контроля на 21,6%, чем в I опытной группе, и на 7,6%, чем в сыре опытной группы II.

5. Разработаны новые методы изготовления парафиновых срезов твердых сычужных сыров после фиксации в 96° спирте, а также после фиксации в насыщенном растворе сулемы.

6. Использование стебле-листьевой массы и жома стевии в рационе лакти-рующих коров обеспечивает экономию затрат на производство 1 кг сыра в объеме 2,85 руб. и 2,12 руб. соответственно.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. С целью повышения сыропригодности молока, оптимизации показателей рубцового пищеварения и нормализации обменных процессов в организме лак-тирующих коров предлагаем использовать продукты переработки стевии (стеб-ле-листьевая масса и жом стевии) из расчета 5 г на кг массы тела с основным рационом за одно кормление.

2. Представленные разработки апробированы на молокоперерабатываю-щих предприятиях Воронежской области. Результаты исследований рекомендованы к внедрению в учебный и научный процесс в ФГБОУ ВПО Воронежский ГАУ при подготовке специалистов ветеринарного, зоотехнического и технологического профиля. Материалы диссертационной работы являются основой для «Методического пособия по влиянию фитокормовой добавки из стевии на ветеринарно-санитарное качество молока и пригодность в производстве сыров», утверждённого Отделением ветеринарной медицины РАСХН (2012 г.).

3. Предлагаем использовать разработанные нами методы микроскопического исследования твердых сычужных сыров с применением парафиновой заливки материала (сыра):

- после фиксации сыра в 96° спирте по следующей схеме:

- Фиксация материала в 96° спирте (48 ч.);

- Проводка материала в 96° спирте (1 час), в 100°спирте I (30 мин), в 100° спирте II (30 мин), в спирт-ксилоле (1:1) (20 мин), в ксилоле I (15 мин. до просветления), в ксилоле II (10 мин), в ксилол-парафине (1:1) с 1°= +37 °С (30 мин), в парафине I с 1°= +56 °С (40 мин), в парафине II с 1°= +56 °С (30 мин);

- Заливка материала в парафин;

- Окраска приготовленных срезов гематоксилин-эозином;

- после фиксации сыра в насыщенном растворе сулемы с формалином (9:1) по схеме:

- Фиксация материала в насыщенном растворе сулемы с формалином (9:1) (48 ч.);

- 70° спирт (2 ч.), спирт + раствор Люголя (для удаления сулемы раствор Люголя добавлять до цвета крепкого чая до прекращения просветления);

- Проводка материала в 70° спирте (1 час), в 80°спирте (30 мин), в 90° спирте (30 мин), в 96° спирте (30 мин), в 100° спирте I (30 мин), в 100° спирте II (30 мин), в спирт-ксилоле (1:1) (20 мин), в ксилоле I (15 мин. до просветления), в ксилоле II (10 мин), в ксилол-парафине с 1°= +37 °С (30 мин), в парафине I с 1°= +56 °С (40 мин), в парафине II с 1°= +56 °С (30 мин);

- Заливка материала в парафин;

- Окраска приготовленных срезов гематоксилин-эозином.

5 СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Публикации в ведущих рецензируемых научных изданиях

1. Савина, И.П. Оценка питательности и безопасности отходов переработки стевии / И.П. Савина // Вестник ВГАУ. - 2010. - № 3 (26). - С. 42 - 44 (0,38 / 0,38 п.л.).

2. Савина, И.П. Технологические характеристики молока на фоне применения фитокормовой добавки в рационе коров / И.П. Савина, С.Н. Семёнов, К.К. Полянский // Вестник РАСХН. - 2011. - № 6. - С. 74 - 75 (0,25 / 0,19 п.л.).

3. Савина, И.П. Роль стевии в повышении сыропригодности молока / И.П. Савина, С.Н. Семёнов, А.Н. Пономарев, К.К. Полянский // Сыроделие и маслоделие. - 2012. - № 3. - С. 40 - 41 (0,25 / 0,19 пл.).

Публикации в других изданиях

4. Семёнов, С.Н. Оптимизация технологических свойств молока-сырья / С.Н. Семёнов, К.К. Полянский, И.П. Савина // Переработка молока. - 2010. -№ 6 (128). - С. 14 (0,13 / 0,1 п.л.).

5. Полянский, К.К. Дегустационная оценка сыров и ее зависимость от качества исходного сырья / К.К. Полянский, С.Н. Семёнов, И.П. Савина // Перспективы производства продуктов питания нового поколения: мат. IV международной науч.-практ. конф. - Омск : Изд-во «Вариант-Омск», 2011. - С. 228 -229 (0,25 / 0,2 п.л.).

6. Савина, И.П. Методическое пособие по влиянию фитокормовой добавки из стевии на ветеринарно-санитарное качество молока и пригодность в производстве сыров / И.П. Савина, С.Н. Семёнов. - Воронеж : ВГАУ, 2012. - 22 с. (1,38/1,1 п.л.).

7. Савина, И.П. Эколого-биологическое обоснование использования стевии в технологии получения молока / И.П. Савина, С.Н. Семёнов // Животноводство России в условиях ВТО: мат. международной науч.-практ. конф. молодых ученых. - Орел : Орел ГАУ, 2013. - С. 346 - 351 (0,38 / 0,34 п.л.).

8. Савина, И.П. Использование стевии в повышении сыропригодности молока / И.П. Савина, С.Н. Семёнов // Развитие аграрного сектора экономики в условиях глобализации : мат. международной науч.-практ. конф. - Воронеж : ВГАУ, 2013. - С. 207 - 211 (0,31 / 0,24 п.л.).

9. Савина, И.П. Стевия как фактор повышения сыропригодности молока / И.П. Савина, С.Н. Семёнов // Инновационные технологии и технические средства для АПК : мат. международной науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. - Воронеж : ВГАУ, 2014. - Ч. II. - С. 89 - 93 (0,31 / 0,27 п.л.).

Автор выражает огромную благодарность за оказание консультативной помощи в работе над диссертацией:

Почетному работнику высшего образования России, Заслуженному работнику высшей школы Российской Федерации, доктору ветеринарных наук, профессору кафедры анатомии и хирургии ФГБОУ ВПО Воронежский ГАУ Тор-гуну Петру Макаровичу;

Заслуженному деятелю науки России, доктору технических наук, профессору кафедры коммерциализации и товароведения филиала Российского экономического университета имени Г.В. Плеханова Полянскому Константину Константиновичу.

Подписано в печать 23.12.2014 г. Формат 60x84 1/16 П. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № П047. Отпечатано в типографии Воронежского государственного аграрного университета 394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1.