Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Варианты хромосомной транслокации Т(9;22) у больных хроническим миелолейкозом

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Богданов, Константин Викторович

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

2. ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Современные взгляды на возникновение лейкозов. Роль протоонкогенов в развитии опухолевых процессов

1.2. Хромосомные изменения и лейкозы 17 1.2.1. Хронический миелолейкоз и его лечение

1.3. Протоонкоген аЫ, ген Ьсг, кодируемые ими белки, их структура и функции

1.4. Молекулярная организация генома в районе точки разрыва при хромосомной транслокации 1(9\22) ^

1.5. Методы детекции хромосомной транслокации 1(9,22)

1.6. Применение метода РТ-ПЦР в клинической практике для определения хромосомной транслокации 1(9;22)

1.6.1. Применение метода РТ-ПЦР для диагностики и мониторинга минимальной остаточной болезни (МОБ)

1.6.2. Применение метода РТ-ПЦР для диагностики ХМЛ и РЬ-позитивного ОЛЛ

1.7. Клиническое и прогностическое значение вариантов хромосомной транслокации К9;22) у больных ХМЛ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал исследования. Краткая характеристика общей группы больных

2.2. Цитогенетическое исследование

2.2.1. Получение и культивирование клеток костного мозга и крови

2.2.2. Приготовление препаратов хромосом

2.2.3. Дифференциальное окрашивание хромосом

2.2.4. Анализ хромосом и принципы кариотипирования 51 2.3. Молекулярно-биологический метод исследования

2.3.1. Изолирование лейкоцитов из периферической крови больных ХМЛ и доноров путем лизирования раствором 0.83% хлорида аммония

2.3.2. Выделение РНК из изолированных лейкоцитов

2.3.3. Выделение РНК из клеток линии К562 54 2.3.3а. Контроль качества РНК, выделенной из периферической крови больных ХМЛ и клеток линии К

2.3.4. Проведение двухступенчатой РТ-ПЦР 55 2.3.4а. Синтез кДНК в реакции обратной транскрипции 55 2.3.46. Амплификация кДНК в полимеразной цепной реакции

2.3.5. Идентификация продуктов РТ-ПЦР

2.3.6. Распределение больных по группам. Статистическая обработка полученных результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Исследование качества образцов РНК, полученных из периферической крови больных ХМЛ и клеток линии К

3.2. Оценка чувствительности двухступенчатой РТ-ПЦР с использованием коммерческого аналога ТЙ1 полимеразы, ТЕТ-2 термостабильной ДНК-полимеразы

3.3. Изучение частоты встречаемости вариантов хромосомной транслокации 1:(9;22) у больных ХМЛ

3.4. Сравнительная характеристика основных клинико-гематологических показателей у больных ХМЛ с вариантами транслокации Ь3а2 и Ь2а

3.5. Сравнительная прогностическая характеристика ХМЛ с разными вариантами транслокации Ь3а2 и Ь2а

3.5.1. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением полной гематологической ремиссии у больных ХМЛ, получавших терапию интерфероном-альфа

3.5.2. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением полной гематологической ремиссии у больных ХМЛ, получавших терапию миелосаном и гидроксимочевиной

3.5.3. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением цитогенетической ремиссии (редукция РЬ-позитивного лейкозного клона) у больных ХМЛ, получавших терапию интерфероном-альфа

3.5.4. Определение зависимости между вариантом транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) и достижением цитогенетической ремиссии (редукция РЬ-позитивного лейкозного клона) у больных ХМЛ, получавших терапию миелосаном и гидроксимочевиной

3.5.5. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и общей продолжительностью жизни этих пациентов при использовании терапии интерфероном-альфа

3.5.6. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и общей продолжительностью жизни этих пациентов при использовании терапии миелосаном и гидроксимочевиной

3.5.7. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и длительностью хронической фазы ХМЛ при использовании терапии интерфероном-альфа

3.5.8. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и длительностью хронической фазы (длительностью фазы акселерации и БК) ХМЛ при использовании терапии миелосан-гидроксимочевина

3.5.9. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и длительностью фазы акселерации и стадии БК ХМЛ при использовании терапии интерфероном-альфа

3.5.10. Определение зависимости между группами больных ХМЛ с разными вариантами транслокации (Ь3а2, Ь2а2) и вариантом властного криза ХМЛ (миелоидный или лимфоидный вариант)

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Варианты хромосомной транслокации Т(9;22) у больных хроническим миелолейкозом"

Филадельфийская хромосома (Ph-хромосома) - результат реципрокной транслокации t(9;22)(q34;qll), была первой хромосомной аберрацией, связанной со специфической формой онкологического заболевания, хронического миелолейкоза (De Klein et al., 1986). Ph-хромосома обнаруживается в 95% случаев хронического миелолейкоза (ХМЛ), и в 20% случаев острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) у взрослых, в 2% случаев острого миелобластного лейкоза (ОМЛ), а также в 5% случаев детского ОЛЛ (Kurzrock et al., 1988). Показано, что точки разрыва при Ph-транслокации находятся в гене abl хромосомы 9 и в области гена bcr хромосомы 22. Транслокация приводит к образованию слитного (химерного) гена bcr-abl. В зависимости от положения точек разрыва на хромосоме 22, различают несколько типов транслокации. При хромосомной перестройке по типу Ь3а2 или Ь2а2, когда точка разрыва происходит в главной • зоне M-bcr (breakpoint cluster region) гена bcr, образуется слитный онкоген bcr-abl, кодирующий белок р210 с молекулярной массой 210 кД. Когда точка разрыва происходит в минорной зоне m-bcr гена bcr (хромосомная перестройка типа ela2) образуется ген, кодирующий белок р190 с молекулярной массой 190 кД (Groffen et al., 1984; Pasternak et al., 1998). Последний вариант хромосомной транслокации по типу ela2, как правило, характерен для ОЛЛ, но в редких случаях (2-3%) встречается при ХМЛ и ОМЛ (Saglio et al., 1996; Pear et al., 1998). Варианты хромосомной транслокации по типу Ь3а2 и Ь2а2 встречаются при всех вышеназванных лейкозах.

При цитогенетическом анализе клеток костного мозга и периферической крови больных XMJI Ph-хромосому в ряде случаев выявить не удается. Подобная ситуация встречается у 5% больных XMJI и 10-15% больных острыми лейкозами. Причинами этого могут быть недостаточно большие выборки при цитогенетическом анализе (практически возможно обнаружить 1 Ph-позитивную клетку на 1000 нормальных), что недостаточно, особенно при проведении химиотерапии и/или трансплантации костного мозга (ТКМ), сопровождаемой редукцией лейкозного Ph-позитивного клона у больных лейкозами. Это серьезное ограничение, так как успех терапии и последующая тактика ведения больных XMJI во многом зависят от правильной оценки степени клинико-гематологической ремиссии, от полноты эрадикации лейкозного клона (степени редукции Ph-позитивного клона), что в конечном итоге и определяет длительность жизни пациента (Kantaijian et al., 1990).

Еще одно ограничение цитогенетического анализа связано с недостаточной разрешающей способностью светооптической микроскопии. При микроскопическом исследовании Ph-хромосом не удается дифференцировать разные варианты Ph-транслокации. Последняя задача представляется актуальной, так как в настоящее время широко обсуждается вопрос о значимости различных вариантов транслокации t(9;22) в отношении прогноза и течения хронического миелолейкоза (Mills et al., 1989; Delage et al., 1991; Sawyers, 1993; Tanaka et al., 1993; Nakamura et al., 1994; Rozman et al., 1995; Baccarani et al., 1995). Сделано предположение о возможной корреляции между типом Ph-хромосомной транслокации и клиническим ответом на интерферон-альфа (Inoue et al., 1992; Cortes et al., 1995; Posthuma et al., 1999). Однако, проведенные работы не давали возможности адекватно определить связь вариантов транслокации с прогнозом XMJ1, так как имели ряд ограничений. Блот-гибридизация по Саузерну, позволяет различить варианты химерного гена bcr-abl, однако, не способна различить продукты альтернативного сплайсинга мРНК (Shtivelman et al., 1985, 1987). Позже было показано, что разные варианты Ph-транслокации могут быть эффективно идентифицированы с помощью метода РТ-ПЦР (обратная транскрипция с последующей полимеразной цепной реакцией), однако, анализ клинических и биологических особенностей больных с разными вариантами транслокаций проводился при этом в течении короткого времени и на небольшой выборке пациентов.

Вопрос о том имеют ли прогностическое и клиническое значение варианты транслокации по типу Ь3а2 и Ь2а2 у больных XMJI, остается открытым до настоящего времени. Это делает актуальной работу по использованию метода РТ-ПЦР для идентификации вариантов транслокации t(9;22), исследованию частоты встречаемости разных вариантов транслокации у больных XMJI, оценке влияния вариантов транслокации по типу Ь3а2 и по типу Ь2а2 на эффективность терапии, а также общую продолжительность жизни больных XMJI.

Цель и задачи исследования.

Основной целью работы являлась оценка частоты встречаемости разных вариантов транслокации t(9;22)(q34;qll) у больных ХМЛ с помощью метода РТ-ПЦР, исследование связи между вариантами транслокации и клинико-гематологическими показателями больных ХМЛ. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать эффективность использования метода РТ-ПЦР для идентификации вариантов транслокации 1(9;22)(ц34^11) у больных ХМЛ.

2. Исследовать частоту встречаемости разных вариантов транслокации К9;22)(я34;я11) у больных ХМЛ.

3. Провести сравнительный анализ основных клинико-гематологических показателей (лейкоцитоз, тромбоцитоз, спленомегалия-гепатомегалия) у больных ХМЛ с вариантами транслокации Ь3а2 или Ь2а2 в момент постановки диагноза.

4. Изучить влияние разных вариантов транслокации (Ь3а2 или Ь2а2) на продолжительность хронической фазы и общую продолжительность жизни у больных ХМЛ при терапии интерфероном-альфа, миелосаном и гидроксимочевиной.

5. Изучить связь между разными вариантами транслокаций и частотой достижения клинико-гематологической и цитогенетической (редукция РЬ-позитивного лейкозного клона) ремиссий у больных ХМЛ при терапии интерфероном-альфа, миелосаном и гидроксимочевиной.

Научная новизна.

В результате проведенных исследований показано, что метод двухступенчатой РТ-ПЦР с использованием ТЕТ-7 ДНК-полимеразы позволяет эффективно выявлять варианты хромосомной транслокации 1(9;22)(я34;ц11) у больных ХМЛ. Метод позволяет выявить 1 лейкозную клетку на 100 тыс. нормальных клеток. Впервые оценена частота встречаемости различных вариантов транслокации 1(9;22)(ц34;я11) у больных ХМЛ в Российской Федерации. Впервые показано, что эффективность терапии ХМЛ интерфероном-альфа различна у пациентов-носителей гена Ьсг-аЫ (Ь3а2 V.?. Ь2а2), продолжительность хронической фазы у них составляет 25 и 19 месяцев, а общая продолжительность жизни 56.4 и 37 месяцев, соответственно.

Практическая значимость работы.

Показано, что проведение метода РТ-ПЦР позволяет эффективно выявлять разные варианты хромосомной транслокации 1(9 ;22) в периферической крови у больных ХМЛ. Выявляемые варианты хромосомной транслокации Ь3а2 и Ь2а2 позволяют прогнозировать эффективность терапии интерфероном-альфа. Наличие варианта транслокации Ь3а2 у больных ХМЛ является благоприятным прогностическим фактором при терапии интерфероном-альфа.

Разработанная нами модификация РТ-ПЦР метода диагностики вариантов транслокации 1(9;22) описана в методических рекомендациях для врачей: "Интегральная молекулярно-биологическая характеристика гемопоэза и регулирующих его факторов при миелодиспластическом синдроме и лейкозах человека", издательство СПбГМУ им. И. П. Павлова (в печати). Полученные нами данные используются при чтении курса лекций "Современные методы работы с хромосомами в биологии и медицине" для студентов биолого-почвенного факультета СПбГУ и в циклах по гематологии для студентов лечебного факультета СПбГМУ им. И. П. Павлова.

14

Апробация работы.

Основные положения работы были представлены и обсуждены на симпозиуме "Генные технологии в диагностике и лечении злокачественных и наследственных болезней человека" (Москва, 1998), конференции "25 лет первой трансплантации костного мозга в России" (Москва, 1999), симпозиуме "Лейкозы человека и современные тенденции" (Вильс, Германия, 2000) и на научных семинарах лаборатории генной терапии онкогематологических заболеваний СПбГМУ им. И.П. Павлова.

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения экспериментальных данных, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, содержащего 128 публикаций. Работа изложена на 127 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц и 15 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Богданов, Константин Викторович

ВЫВОДЫ

1. Показано, что метод РТ-ПЦР может быть эффективно использован для идентификации цитогенетически неразличимых вариантов транслокации 1(9;22)(ц34;ц11).

2. Частота встречаемости вариантов транслокации Ь3а2 и Ь2а2 у 66 обследованных больных ХМЛ составляет 64% и 35%, соответственно. У одного больного ХМЛ была выявлена коэкспрессия обоих вариантов транслокации ^9;22)(я34;я11).

3. Не обнаружено связи между типом химерного гена Ъсг-аЫ (Ь3а2 или Ь2а2) и клинико-гематологическими показателями (лейкоцитоз, тромбоцитоз, спленомегалия-гепатомегалия), а также вариантом бластного криза (лимфоидный или миелоидный) в момент постановки диагноза.

4. Показано, что больные ХМЛ с вариантами химерного гена Ь3а2 и Ь2а2 различаются по эффективности терапии интерфероном-альфа. Достижение полной гематологической ремиссии при терапии интерфероном-альфа происходит достоверно чаще у носителей транслокации Ь3а2, чем у больных с вариантом транслокации Ь2а2.

107

5. Редукция РЬ-позитивного лейкозного клона Ь3а2 при терапии интерфероном-альфа происходит достоверно чаще, чем клона Ь2а2.

6. Достоверных различий по частоте достижения цитогенетической и полной гематологической ремиссий при терапии гуанин-связывающим алкилирующим агентом миелосаном и ингибитором рибонуклеотидной редуктазы гидроксимочевиной у носителей разных вариантов транслокации не выявлено.

7. Носители транслокации Ь3а2, в сравнении с носителями транслокации Ъ2а2, имеют большую продолжительность хронической фазы (25 и 19 месяцев) и общую продолжительность жизни (56.4 и 37 месяцев) при терапии интерфероном-альфа. Достоверных различий в продолжительности хронической фазы ХМЛ и общей продолжительности жизни при терапии миелосаном и гидроксимочевиной у носителей разных вариантов транслокации не выявлено.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Богданов, Константин Викторович, Санкт-Петербург

1. Боровиков В.П., Боровиков И.П. Введение в щмирамму Statistica // М.: Компьютер Пресс, 1997.- С. 20-35.

2. Георгиев Г.П. О механизме канцерогенеза: "промоторная" гипотеза //Молекулярная биология.- 1981.-Т.15.- С.261-273.

3. Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение критериев непараметрической статистики для оценки различий двух групп наблюдений в медико-биологических исследованиях // М.: Медицина, 1969,- С. 9-15.

4. Киселев Ф.Л., Павлиш O.A., Татосян А.Г. Молекулярные основы канцерогенеза у человека// М.: Медицина, 1986.- С.300-320.

5. Клаус Дж. Лимфоциты. Методы // М.: Мир.-1990.- С.52-53.

6. Напалков Н.П., Анисимов В.Н., Князев П.Г., Лихачев А.Я. Современные представления о механизмах канцерогенеза // М.: ВНИИМИ.-1987.-Вып.5.- С.80-84.

7. Сейц И.Ф., Князев П.Г. Молекулярная онкология // Л.: Медицина, -1986.- С.340-350.

8. Татосян А.Г., Тополь Л.З., Семенова Л.А. Биологическая активность вирусных и клеточных онкогенов // М.: ВНИИМИ.-1986.-Вып.5. С.70-80.

9. Ю.Шизон К. Хронический миелолейкоз у детей // Гематол. и трансфузиол.-1998.-Т.43.- С.22-24.

10. Херрингтон С., Магки Дж. Молекулярная клиническая диагностика. Методы //М.: Мир.- 1999.- С.303-320.

11. Яворковский Л.И. Полимеразная цепная реакция в диагностике онкогематологических заболеваний // Эксп. онкология.-1991.-Т. 13.-С.3-7.

12. Adamson E.D. Oncogenes in development // Development.-1987.-Vol.99.-P.449-471.

13. Amikam D., Henig C., Carter A., Sharon R., Ben-Ishai Z. A correlation between the expression of the bcr-abl chimeric gene and severity of the clinical state of CML patients with time // Scand. J. Immunol.-1995.-Vol.41.-P.529-533.

14. Arcese W., Iori A.P., Di-Nucci G., Martinez-Rolon J., pinto R.M., Mandelli F. What does one do for the CML patient in relapse after allogeneic bone marrow transplantation? // Leuk-Lymphoma.-1993.-Vol.lL-P.213-219.

15. Baccarani M., Tura S., Russo D. et al. Chronic myeloid leukemia, bcr-abl transcript, response to alfa-interferon and survival // Leukemia.-1995.-Vol.9.- P. 1648-1652.

16. Bartram C.R. Application of molecular genetics to diagnosis in leukemia.-Haematology trends'93 (ed. Lechner K., Gadner H.) // Schattauer. -Stuttgart-New York.-1993.- P.280-296.

17. Baskaran R., Dahmus M.E., Wang J.Y. Tyrosine phosphorilation of mammalian RNA polymerase II carboxyl-terminal domain // Proc. Natl. Acad. Sei. USA -1993.-Vol.90.- P.11167-71.

18. Benz M., Schroeder M., Herz M., Stilgenbauer S., Lichter P., Dohner H. Detection of trisomy 8 on blood smears using fluorescence in situ hybridization // Leukemia.-1993.-Vol. 7.- P.752-7.

19. Bernands A., Rubin C.M., Westbrook C.A., Paskind M., Baltimore D. The first intron in the human c-abl gene is at least 200 kilobases long long is a target for translocations in chronic myeloid leukemia // Mol. Cell. Biol.-1987.-Vol.7-.P.3231-3236.

20. Bhatia R., Me Carthy J.B., Verfaillie C.M. Interferon-alpha restores normal beta 1 integrin-mediated inhibition of hematopoietic progenitor proliferation by the marrow microenvironment in chronic myelogenous leukemia // Blood.-1996.-Vol.87.- P.3883-91.

21. Biemaux C., Loos M., Seis A., Hurz G., Stryckmans P. Detection of major bcr-abl gene expression at a very low level in blood cells of some healthy individuals // Blood.-1995.-Vol.8. P.3118-3122.

22. Bishop J.M. Viral oncogenes // Cell.-1985.-Vol.42,- P.23-38.

23. Bishop J.M. Molecular themes in oncogenesis // Cell.-1991.-Vol. 64.-P.235-248.

24. Blick E., Westin J., Gutterman J. Oncogene expression in human leukemia // Blood.-1984.-Vol. 83.- P. 1922-1928.

25. Castro-Malaspina H., Schaison G., Briere J., Pasquier A., Tanzer J., Jacquillat C., Bernard J. Philadelphia chromosome-positive chronicmyelocytic leukemia in children. Survival and prognostic factors // Cancer.-1983.-Vol.52,- P.721-727.

26. Cerione R. and Zheng Y. The Dbl family of oncogenes // Curr. Opin. Cell. Biol.-1996.-Vol.8. P.216-222.

27. Chen W., Peace D.J., Rovira D. T-cell immunity to the joining region of 210 Bcr-Abl protein // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-1992.-Vol.89. P. 1468-1472.

28. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem.-1987.-Vol. 162,- P. 156-159.

29. Clark S.S., Mc Laughlin J., Timmons M., Ben-Meriah Y., Dow L.W., Crist W., Rovera G., Smith S.D., Witte O.N. Expression of a distinctive Bcr-Abl oncogene in Phi-positive acute lymphocytic leukemia (ALL) // Science.-1988.-Vol.239. P.775-778.

30. Cortez D., Stoica G., Pierce J.H., Pendergast A.M. The Bcr-Abl tyrosine kinase inhibits apoptosis by activaing a Ras-dependent signalling pathway // Oncogene.-1996.-Vol. 13.- P.2589-94.

31. Creagan R.P., Ruddle F.H. The clone panel: a systematic approach to gene mapping using interspecific somatic cell hybrids // Cytogenet. Cell. Genet.-1975.-Vol. 14. P. 282-86.

32. Daley G.Q., Van Etten R.A., Baltimore D. Induction of chronic myelogenous leukemia by the p210 bcr-abl gene of the Philadelphia chromosome // Science.-1990.-Vol.247.- P.824-830.

33. Deikmann D., Brills S., Garraet M.D. Bcr encodes a GTPase-actvating protein forp21 Rac // Nature.-l991 .-Vol.351. P.400-4.

34. De Klein A., van Agthoven T., Groffen C., Heisterkamp N., Groffen G., Grosveld G. Molecular analysis of both transcriptional products of a Philadelphia-positive CML patient // Nucleic Acids Res.-1986.-Vol.14.-P.7071-82.

35. Delage R., Soiffer R.J., Dear K., Ritz J. Clinical significance of bcr-abl gene rearrangement detected by polymerase chain reaction after allogenicbone marrow transplantation in chronic myelogenous leukemia // Blood. -1991.-Vol.78.- P.2759-2767.

36. Fainstain E., Marcelle C., Rosner A., Canaani E., Gale R.P., Dreazen O., Smith S.D., Croce C.M. A new fused transcript in Philadelphia chromosome positive acute lymphocytic leukemia // Nature.-1987.-Vol.30.- P.89-94.

37. Fainstain E., Einat M., Gokkel E., Marcelle C., Croce C.M., Gale C.M., Canaani E. Nucleotide sequence analysis of human abl and bcr-abl cDNAs // Molecular Cell Biology.-1989.-Vol.9.- P. 1477-1481.

38. Garcia R., Jove R. Activation of STAT transcription factors in oncogenic tyrosine kinase signalling // J. Biomed. Sci.-1998.-Vol.5.- P.79-85.

39. Goff S.P., Gilboa E., Witte O.N., Baltimore D. Structure of the Abelson murine leukemia virus genome and the homologies cellular gene: studies with cloned viral DNA // Cell.-1980.-Vol.22.- P.777-85.

40. Gordon M.Y., Dowding C.R., Riley G.P., Goldman J.M., Greaves M.F. Altered adhesive interactions with marrow stroma of haemopoietic progenitor cells in chronic myeloid leukemia // Nature.-1987.-Vol.328.-P.342-4.

41. Groffen J., Stephenson J.R., Heisterkamp N. et al. Philadelphia chromosomal breakpoints are clustered within a limited region, bcr on chromosome 22 // Cell.-1984.-Vol.36.- P.93-99.

42. Hehlmann R., Heimpel H., Hasford J., Kolb H.J., Pralle H., Hossfield D.K. Randomized comparison of interpheron-alpha with busulfan and hydroxyurea in chronic myelogenous leukemia // Blood.-1984.-Vol.84.-P.4064-77.

43. Heistercamp N., Stam K., Groffen J., de Klein A. and Grosveld G. Structural organization of bcr gene and its role in the Ph translocation // Nature.-1985.-Vol.320.- P. 758-761.

44. Hughes T.P., Morgan G.J., Martiat P. et al. Detection of residual leukemia after bone marrow transplant for chronic myeloid leukemia: role of polymerase chain reaction in predicting relapse // Blood.-1991.-Vol.77.- P.874-878.

45. Kantaijian H.M., Deisseroth A.B., Kurzrock R., Estrov Z., Talpaz M. Chronic myelogenous leukemia: a concise update // Blood.-1993.-Vol.82.- P.691-703.

46. Kantaijian H.M., Smith T.L., O'Brien S. etal. Prolonged survival in chronic myelogenous leukemia following cytogenetic responce to alpha interferon therapy.// Annals of Internel Medicine.-1995.-Vol. 122,- P.254-261.

47. Konopka J.B., Witte O.N. Activation of the abl oncogene in murine and humanleukemias //Bioch. Biophys. Acta.-1985.-Vol.823.-P.l-17.

48. Kurzrock R., Guttrman J.U., Talpaz M. The molecular genetics of Philadelphia chromosome-positive leukemias // N. Engle. J. Med.-1988.-Vol.319.- P.990-8.

49. Kaplan E.L., Meier P. Nonparametric estimation for incomplete observations //J. Am. Stat. Assoc.-1958.-Vol.53 P.457-481.

50. Levis I.D., Haylock D.N., Moore S., To L.B., Hughes T.P. Peripheral blood is a source of BCR-ABL-negative pre-progenitors in early chronic phase chronic myeloid leukemia // Leukemia.-1997,-Vol. 11.- P.581-7.

51. Li W.J., Smith L.A., Kabat K.G., Kloetzer W.S., Arlinghaus R.B. Differential effects of tumor promoters on p210 bcr-abl expression // Hematol. Pathol.-1989.-Vol.3.- P. 113-23.

52. Lukasova E., Kozubek S., Kozubek M. et al. Localisation and distance between Abl and Bcr genes in interphase nuclei of bone marrow cells ofcontrol donors and patientswith chronic myeloid leukemia // Human Genetics.-1997.-Vol. 100: 525-535.

53. Lugo T.G., Pendergast A.M., Muller A.J., Witte O.N. Tyrosine kinase activity and transformation potency of bcr-abl oncogene products // Science.-1990.-Vol.247.- P. 1079-82.

54. Macera M.J., Szabo P., Lin J.H., De Salvo A.T., Shah H.O., Verma R.S. Direct visualization of the transposed abl gene in a duplicated masked Ph chromosome//Genes. Chromosom. Cancer.-1993.-Vol.8.- P. 127-130.

55. Macera M.J., Smith L.J., Frankel E., Szabo P., Verma R.S. A Philadelphia negative chronic myelogenous leukemia with chimeric bcr-abl gene on chromosome 9 and a b3a2 splice junction. // Cancer. Genet. Cytogenet.-1998.-Vol. 101.- P.143-7.

56. Mc Clain K.L. Expression of oncogenes in human leukemias // Cancer Res.-1984.-Vol.44.- P.5384-5389.

57. Mc Laughlin J., Chianese E., Witte O.N. Alternative forms of Bcr-Abl oncogene have quantitatively different potencies for stimulation of immature lymphoid cells //Mol. Cell. Biol.-1989.-Vol.9.- P. 1866-1868.

58. Meyers T.W., Gelfand D.H. Reverse transcription and DNA amplification by Thermus thermophilus DNA polymerase // Biochemistry.-1991 .-Vol.30.- P.7661-7666.

59. Mills K.I., Hynds S.A., Burnett A.K., Mac Kenzie E.D., Bernie G.D. Further evidence that the site of the breakpoint in the major breakpoint cluster region (M-bcr) may be a prognostic indicator // Leukemia.-1989.-Vol.3.- P.837-40.

60. Miyamura T. Interaction of bcr-abl with the retinoblastoma protein in Philadelphia chromosome-positive cell lines // Int. J. Hematol.-1997.-Vol.62.- P. 115-21.

61. Morgan G.J., Hernandez A., Chan L.C., Hughes T., Martiat P., Wiedemann L.M. The role of alternative splicing patterns of bcr-abl transcripts in the generation of the blast crisis of chronic myeloid leukemia//Br. J. Haem.-1990.-Vol.76,- P.33-38.

62. Muller A.J., Pendergast A.-M., Havlik M.H., Puil L., Pawson T., Witte O.N. A limited set of SH2 domains binds Bcr through a high-affinity phosphotyrosine -independent interaction // Mol. Cell. Biol.-1992.-Vol.12.- P.5087-5093.

63. Nakamura K.T., Okamoto N., Mizutani S. Molecular analysis of bcr-abl mRNA during long-term follow-up of cases of chronic myelogenous leukemia // Rinsho-Ketsueki.-1994.-Vol.35. -P.853-61.

64. Neel B.G., Hayward W.S., Robinson H.L., Fang J., Astrin S.M. Avian leukosis virus-induced tumors have common proviral integration sites and synthesize discrete new RNAs: oncogenesis by promoter insertion // Cell.-1981.-Vol.23.- P.323-334.

65. Nichols J., Nimer S.D. Transcription factors, translocations and leukemia // Blood.-1992.-Vol.80.- P.2953-2963.

66. Nowell P., Hungerford D. A minute chromosome in human granulocytic leukemia // Science.-1960.-Vol. 132.- P. 1497-99.

67. Pasternak G., Hochhaus A., Schultheis B., Hehlmann R. Chronic myelogenous leukemia: molecular and cellular aspects // J. Cancer Res. Clin. Oncol.-1998.-Vol. 12.- P.643-60.

68. Pear W.S., Miller J.P., Xu L., Pui J.C., Soffer B. Efficient and rapid induction of a chronic myelogenous leukemia-like myeloproliferative disease in mice receiving p210 bcr-abl-transduced bone marrow // Blood.-1998.-Vol.92.- P.3780-92.

69. Pendergast A.M., Gishizki M.L., Havlik M.H., Witte O.N. SHI domain autophosphorylation of p210 bcr-abl is requuired for transformation but not growth factor independence. // Mol. Cell. Biol.-1993.-Vol. 13.-P. 1728-36.

70. Pendergast A.M. Nuclear tyrosine kinases: from Abl to Wee 1 // Curr. Opin. Cell. Biol.-1996.-Vol.8.-P. 174-81.

71. Reiffers J., Mahon F.X., Boiron J.M., Faberes C., Marit G., Cony-Makhoul P., Broustet A. Autografting in chronic myeloid leukemia: an overview // Leukemia.-1996.-Vol. 10.- P.385-8.

72. Ridley A.J., Hall A. The small GTP-binding protein rho regulates the assembly of focal adhesions and actin stress fibers in response to growth factors // Cell.-1992.-Vol.70.- P.389-99.

73. Rowley J.D. A new consistent chromosomal abnormality in myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and giemsa staining // Nature.-1973.-Vol.243.- P.290-291.

74. Salgia R., Li J., Ewaniuk., D.S., Pear W., Pisick E., Burky S.A., Ernst T., Sattler M., Chen L., Griffin J.D. Bcr-Abl induces multiple abnormalities of cytoskeletal function // J. Clin. Invest.-1997.-Vol. 100.-P.46-57.

75. Saglio G. etal. Consistent amounts of acute leukemia-associated pi90 bcr-abl transcripts are expressed by CML patients at diagnosis // Blood.-1996.-Vol.87.-P.1075-80.

76. Sawyes C.L., Denny C.T., Witte O.N. Leukemia and the disruption of normal hematopoiesis // Cell.-1991.-Vol.64.-337-50.

77. Sawyers C.L. Molecular consequences of the Bcr-Abl translocation in chronic myelogenous leukemia // Leukemia and Lymphoma.-1993.-Vol.lL-P.101-103.

78. Saiki S., Scharf F. et al. Enzymatic amplification of b-globin genomic sequences and restriction site analysis of sickle cell anemia // Science.-1985.-Vol.230.-P. 1350-1354.

79. Schaefer-Rego K., Dudek H., Popenoe D., Arlin Z., Mears J.G., Bank A., Leibowitz D. CML patients in blast crisis have breakpoints localized to a specific region of the Bcr // Blood.-1987.-Vol. 70.- P.448-55.

80. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosomes // Lancet. -1971. Vol. 2. - P.971.

81. Seeker-Walker L.M., Craig J.M., Hawkins J.M., Hofïbrand A.V. Philadelphia-positive acute limphoblastic leukemia in adults: age distribution, Bcr breakpoint and prognostic significance // Leukemia. -1990.-Vol.5.-P. 196-199.

82. Shtivelman E., Liftshitz B., Gale R.P., Roe B.A., Canaani E. Fused transcript of abl and bcr genes in chronic myelogenous leukemia // Nature.-1985.-Vol.315.- P.550-554.

83. Shtivelman E., Liftshitz B., Gale R.P., Roe B.A., Canaani E. Alternative splicing of RNAs transcribed from the human abl gene and from the bcr-abl fused gene // Cell.-1986.-Vol.47.- P.277-284.

84. Shtivelman E., Gale R.P., Dreazen O. et al. bcr-abl RNA in patients with chronic myelogenous leukemia //Blood.-1987.-Vol.69. P.971-973.

85. Silver R.T. Chronic myeloid leukemia A perspective of the clinical and biological issuues of the chronic phase // Hematol. Oncol. Clin. North. Am.-1990.-Vol.4.- P.319-35.

86. Tanaka K., Hashimoto T., Oguma N., Dohy H., Kamada N. Influence of M-bcr breakpoint sites on the duration of chronic phase in 100 patients with chronic myelocytic leukemia // Cancer Genet. Cytogenet.-1993.-Vol.70.-P.39-47.

87. Trepel M., Scheding S., Groscurth P., Horny H.P., Malipiero U., Brugger W., Dichgans J., Weller M. A new look at the role of p53 in leukemia cell sensitivity to chemotherapy // Leukemia.-1997.-Vol.ll.P. 1842-9.

88. Van Dongen J., Szczepanski T., De Bruijn M. et al. Detection of minimal residual disease in acute leukemia patients // Cytokines and Molecular Therapy.-1996.-Vol.2.- P. 121-133.

89. Verma R., Babu A. Human chromosomes manual of basic techniques // Pergamon Press.-1988.- P.4-256.

90. Wandle U.B., Butzler R., Niederle N., Kloke O., Mengelkoch B., Becher R., Seeber S., Opalka B. Bcr-Abl and negative clonogenic cells in127

91. CML patients undergoing long term interferon treatment // Leukemia. -1994.-Vol.8.- P.776-779.

92. Weinberg R.A. The action of oncogenes in the cytoplasma and nucleus // Science.-1985.-Vol.230.- P.770-776.

93. Welch P.J. and Wang J.Y.J. Abrogation of retinoblastoma protein function by c-Abl through tyrosine kinase-dependent and independent mechanisms//Mol. Cell. Biol.-1995.-Vol. 15.-P.5542-5551.

94. Wen X., Lin H.H., Shih H.M., Kung H.J., Ann D.K. Kinase activation of nonreceptor tyrosine kinase is sufficient to transactivate STAT-mediated gene expression in salivary and lung epithelial cells // J. Biol. Chem.-1999.-Vol.274.- P.38204-38210.

95. Willecke K., Schaefer R. Human oncogenes // Human Genet.-1984.-Vol.66.- P. 10933.

96. Witte O.N., Rosenberg N.E., Baltimore D. A normal cell protein cross-reactive to the major Abelson murine leukemia virus gene product // Nature.-1979.-Vol.281.- P.396-8.