Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики при хламидиозе свиней

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики при хламидиозе свиней"

На вравах рукописи

ЕБСШЕЕВ ВИТАЛИЙ ВАЛЕРЬЕВИЧ

УСОВЕРШЕНСТВОВАВ СРЕДСТВ ДИАШХЯИСИ й СПЕЦЙЗГгЕСЙОЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИГЛ ХЛАЕСГВЗЕ С5131ЕЙ

03.00.07. - Микробиология

16.00.03. - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань 1098

.-асота выполнена в лаборатории вирусологии Всероссийского науч. . -исследовательского ветеринарного института (г.Казань).

Научный руководитель - заслуженный деятель науки Республики Татарстан, доктор ветеринарных наук Р.Х.ХАМАДЕЕВ

Научный консультант - заслуженный деятель науки Российской Феде-ис^ции'и Республики Татарстан, академик АН РТ А.З.РАВИЛОВ

Официальные оппоненты:

|. Доктор ветерншарнкх наук, профессор ГАФЗАРОВ Харис Зарипович '.. Кандидат ветеринарных наук, доцент СИБГАТУЛЛИН Рафаэль Сагидуллович

Ведущее учревдение - Чувашская сельскохозяйственная академия

да заседании диссертационного совета Л - 120.15.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (г.Казань, Научный городок, 2).

С диссертацией можно ознакомится во Всероссийском научно-исследовательской' ветеринарном институте.

Защита состоится " "

1998 года в /Я

часов

Ученый секретарь диссертационного совета, к.в.н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность теми. Значительное место среди инфекционных заболеваний, яаггосяашх уперб свиноводству, ' в последние годы занимает хламидиоз свиней. Извс-стко, что хлашдии вызывают у свиней знзооткчес-кне аборты, мэртворождения и рождение слабых и нежизнеспособных поросят; являются этиологичесгами факторами пневмоний, артритов н других синдромов, которые могут охватывать от 7 до 152, а иногда до 80Х поголовья животных Щербань Г.П., 1978, 1S84-, Бортяичук В.А., 1979, 1991; Хамапеев Р.Х., 1087, 1991).

Несмотря на определенные успехи в изучении хламидиозов сельскохозяйственных животных в последние годы, они до настоящего времени вызывают обоснованное беспокойство ветеринарных специалистов, обуславливая потери ожидаемого приплода в результате массовых абортов, гибели молодняка после рождения и снижения продуктивности животных. Экономический ущерб усугубляется за счет переболевания и выбраковки производителей, получения некачественных продуктоз убоя и отставания в росте и развитии молодняка.

Особенностью хламидиозной инфекции, значительно услоякяввей эпизоотический надзор за ней, является её часто хроническое, со стертой клинической картиной, или латентное течение. Этот факт затрудняет своевременную диагностику хламшшоза свиней, что усложняет организации ■эффективных лечебно-профилактических мероприятий.

Для хламидиозной инфекции характерна также недостаточная kmmvho-генность возбудителя, что препятствует выработке антител в необходимом количестве и способствует продолжительному персистировангао хламткий в организме животных, создавая хронически тлеюоке очаги ияфекшм. Эта особенность возбудителя хламидиоза обуславливает необходимость изыскания и внедрения в ветеринарную практику эффективных средств специфической профилактики, обеспечивающих бормйрсваиие высокого уровня плюрального иммунитета, без чего невозможна эффективная борьба с хламидиозной инфекцией. Если при хламиднозе овец и крупного рогатого скота разработаны и внедрены эффективную средства спещфической профилактики, то при хламид ¡газе свиней зти вопросы находятся в стадии разработки. " '-• - ■ , -

Широкое распространение хлзмидкоза свиней, . регистрируемое в последние годы и его хроническое (скрытое) течение предопределяют необходимость проведения иироких диагностических, исследований с применением сЫсоксчУвстЕИтельных методов. Однако имевшиеся в насхояшее время i лрсенале ветеринарных работников, методы ретроспективной сесологическсй

диагностики хламидиоза СРОК, РИСК) трудоемки и малоэффективны вследствие нестабильности комплементфиксирующих антител в сыворотках крови свиней, что еатрудняет проведение массовых исследований животных на хлаыидкоз.

Резюмируя, следует отметить, что в настоящее время вопросы усовершенствования диагностики и специфической профилактики хламидиоза свиней являются актуальными, требуют глубокого изучения и изыскания новых, более эффективных биологических препаратов и внедрения их в широкую геринарную практику. .

1.2. Цель " задачи нсслаксшазгзгЯ. Целью данной работы явилась разработка технологии получения эритрогитарного хлаыидийного антигена для серологической диагностики хламидиоза в РИГА, разработка методов контроля Ска стерильность безвредность, антнгенность и иммуногенность) и изучение эффективности применения "Вакцины против хламидиоза свиней инактивированной эмульсионной", разработанной во ВНИВИ.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи!

- разработать технологи» изготовления зритроцитарного хлачидийно-го антигена для РИГА с использованием корпускулярного антигена хлами-дий и испытать его на специфичность и активность;

- разработать методику- постановки РИГА с предложенным ¡¡абором ди-ьгностикума и испытать его для диагностики хламидиоза свиней и оценки поствакцияального иммунитета;

- разработать методы контроля и изучить эффективность применения "Вакцины против хламидиоза свиней кнактивированной эмульсионной" в лабораторных и производственных условиях.

1.3. Иаугзгая кишка. Научнач новизна и практическая ценность работы состоит в том, что в результате проведенных исследований впервые:

- разработана технология изготовления хл&чшийного зритроцитарного г агностикума с использованием корпускулярного хламидийного антигена, получаемого из аллантоисной жидкости инфицированных куриных эмбрионов и на его основе создан "Набор препаратов для РИГА при диагностике хламидиозов животных", обладающий более высокой, по сравнению с РОК, чувствительностью и активностью;

- разработана методика постановки РИГА микрометодом с эритрони-тарнш хламкдкйным антигеном . позволившая усовершенствовать и упростить серологическую диагностику хламидиоза, в том числе хламидиоза свиней;

- разработаны и апробированы методы лабораторного контроля со« данной во БНИБИ "Вакцины против хламидиоза свиней инактшзироьанн-..:.

эмульсионной", ¡тозЕоляазше достоверно оценить безвредность, антигеинуо активность и кягуногенность данного препарата;

- проведено испытание разработанной во ВНИВИ вакщшн против хла-мидиоэа свиней и показана ее высокая эффективность.

1.4. Практическая значимость рпбота. На основе проведенных исследований разработаны методические и нормативно-технические документы, утвержденные директором ВНКВИ и начальником ГУВ КМ Республики Татарстан, регламентирукше опытно-промышленное получение и применение:

- "Набора препаратов для РИГА при диагностике хламидкоза животных";

- "Вакцины против хламидиоза свиной инактивированной эмульсионной".

Разработаны "Рекомендации по обеспеченна эпизоотического благополучия свиноводческих хозяйств по хлгмидиозу" (Утверждены ГУВ Ш РТ от 7 мая 1997 года).

Разработанные средства и методы лабораторной диагностики и специфической профилактики хламидиоза евшей внедряются в. ветеринарную практику Республик и областей Среднего Поволжья; что позволяет своевременно диагностировать данное заболевание и провозить эффективные противохламидиознае мероприятия по оздоровлению неблагополучных хозяйств.

1.5. Апробация работа. Основные положения диссертации доложены на республиканских научно-производственных, конференциях по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 1996-1993 гг.),на Всеро-сийской научной конференции "Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней сельскохозяйственных животных и птиц", посвященной 50-лэтио Краснодарской НКВС (Краснодар, 1996 г.), на Всероссийской конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов" (Щелково, 1956 г.), ка научно-практической конференции "Ветеринарные и зеоин-женерные проблемы животноводства" (Витебск, 1096 г.), на республиканской научней конференции молодых ученых и специалистов (Казань, 1995 г.) и на Всероссийской научной конференции "Инфекционные болезни молол няка сельскохозяйственных животных" (Москва, 1996 г.). ,

1.6. Публикация результатов иссяояовгякй. По те«э диссертации опубликованно 11 научных работ, а также разработаны:

- "Временная инструкция по изготовлении и контролв набора препаратов лля диагностики хламидиоза сельскохозяйственных животгк в реакции непрямой гемагглютинацин. (РИГА)" (утвержаена директором ВН51БИ от Г.о ноября 1994 года);

- б -

- "Временное наставление по применению набора препаратов для РИГА при диагностике хлаыидиозов животных" (утверздено директором ВКИВИ от £8 ноября 1994 года);

- "Временная инструкция по нзготовленш и контролю инактивирован-кой эмульсионной вакцины против хламндиоза свиней" (утверздепа директором БНЛВИ от 28 марта 1695 года);

- "Временное наставление по применению вакцины против хламидиоза свиней инактивированной зыульсионксй" (утверждено ГУВ КМ РТ 30 марта 1995 гог1);

- "Рекомендации по обеспечению эпизоотического благополучия свиноводческих хозяйств по хлашдиозу" (утверждены ГУВ КМ РТ от 7 мая 1697 года).

1.7. Оспоееыэ пзлояенкя Екссертацлашгай работа, вцдаигаеаыз для гагцнты:

- результата разработки "Набора препаратов для РИГА при диагностике хлампдиозов животных" и испытание его для серологической диагностики хламидиоза свиней и оценки поствакцинального иммунитета;

- результаты разработки методов лабораторного контроля "Вакцины против хламидиоза свиней инактивированной эмульсионной" на стерильность, безвредность, антигенную активность и иммуногенность на лабораторных животных;

- результаты испытания эффективности инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиоэа свиней в лабораторных и производственных условиях.

1.8. СЗъеи и структура диссэрзащт. Диссертация изложена на 183 страницах- малишпиского текста, вкявчает введение, обзор литературы >50 стр.), материалы и методы, результаты собственных исследований (62 стр.), обсуждение результатов исследований, еыбоды и практические предложения (18 стр.). Список использованной литературы включает £35 рабо" отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 21 таблицей. В приложении (29 стр.) представлены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную м практическую ценность.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Иал&рнаяы и иэтсды исследований.

исследования проводили в 1994 - 1996 годы в лаборатории вирусологии Всеросийского научно-исследовательского ветеринарного института и

ряде хозяйств Рссс;гйской Федерация.

В работе использовали 769 проб сьгворотск крови сакней из различных свиноводческих хозяйств; 5 стайте» хлгкцщй, взделеннкх при разлить« патологиях евшей и крупного рогатого'скота; более 2000 куриных эмбрионов б-8-дневного погрзста; бсиеэ 500 белых мкгей, 40 морских свинок; 10 супоросных свикоматс:: было кепользевэяно в остром лабораторном спите и более 19 тис. свиней в 3-х неблагополучных хозяйстзах было вачцитфоваико для изучения эффективности вакцины против хламидиоза.

Культивирование хлакидий осузествляли в аллантоисной полости развивающихся куриетх змбрпояоэ по методу, разработанному Р.Х.Хг-мадееьум и лр. flSQl >. Для этого использовали куриные эмбрионы 8-дневного возраста с хорошо в {¿раженной сетью кровеносных, сосудов. Хламидиосодержа-оую суспензию .телточных мешюз, оцененную микроскопически на 3-4 креста, разводили до концентрашга Ю"2 и вводили в аддактоисную полость куриных эмбрионов в дозе 0,25 мл.

Кякуйацню эмбрионов проводили в термостате с увлажненной атмосферой при 37-33*С в течение 5 дней. По истечении срока инкубации зибрко-ны умерщвляли, охлаждая их при 4-6'С з течение 13 часов. После чего эмбрионы вскрыззлн, отсасывали, аллантонсиую жидкость и осветляли ее центрифугированием при 2000 оборотов в минуту в течение 30 минут.

Для морфологической гщеяткфгасации хдашикй в патологическом материале и в инфицированных куриные эмбрионах готовили из них мазки и мазки-отпечатки, которые исследовали 'методом световой мгасроскогш под иммерсионной системой. Мазки-отпечатки окрапивали карбол-Фуксином по модифицированному методу Стемпа.

При изготовлении эритрацитарксго хлаыидийного антигена использовали 0,15 М фосфатно-буферные растворы с рН-6,4 п рН-7,2.

Формалипизацию и танизацию эритроцитов производили по методу, описанному Г.2ринелем (1S84).

Специфическую хла'йгаяйпую сыворотку получаса на клинически эдоро-вых овнах, которыхимыуннзкроэадн инакгшфозглной вакциной против xiavfflfliroaä крупного рогатого скота однократно внутрииЕгчкэ з дозе 5 мл. Через 28-80 дней после ашункзацип проводили пробное взятие крови и исследование сывороток l FCK и РКГА. При получении удовлетворите,' него результата животных тотагьпо обескроасшаяи. Подученное сшюротки объединяли. Истощение хлвмэдкйных сыЕсротох от неспею^кческкх желточ-кых ' антител осуществляя» шнукосорбеитом, прктотовлент- на. осаовг-"нормальных" желточных мепкез. курмвых з^йрконов (Хамадс■ а Р.Х., IS.'-H.

Отрицагелънуя енверотку получай» из фози клинически злорошх се-

ронс-гатизаых овец аналогичным способом.

Серслсгическкэ ксслодсг.ап;и ссуаэсталяли методе;:: роакшш с:яг:;ва-шы комплемента (РСК) к реакцией непрямой гемагглютинац-ш (РИГА». исследования сызоротс;с крови св:::;ен в РСК использовать; "Набор актлге-ноь и сызоро-гок для седолэгической диагностики хлагядиэииз сг^сколс-гяйствеиных к:зот:;ь"с" (ТУ-10-19-£5-88) производства БНЖ1 (г.Кг.з:,ч1). Для постаюкк;: РНГА использовав: "Набор препаратов длл РИГА прк ^агностике хдамицкоза ливотнь'х", рагработаный нами.

Кгг чоекениэ оеыишх сс-р;:й "Вакцины против х-чзшикогз спи.;?: иязктв&ирос&шй эмульсионной" проводили по технологи;! разработали.:;'. -лпооратерл;: вирусологии ЕлШВИ. Для г того использовали пролзводс;вс;1:.ис атамуы видеденнно от езиьзй: "РС" - вообудитял! хлсГ-ед;:-;«!/-

го аборта. V: "ЛС" - возбудителе хлакидкозкой сиетшк.

Биомассу хлам.щий длл производства ваодзы ькраЕйгади в нелтеллел и аллаатое.сно;'! полостях рсзвивскетиса курлнлх экЗриолов. Хдс-^у;;«« инактивирозати формальдегидом и глутаровим альдегидом, по;;нерга1:; очистке и концентрирования методом дифференциального цекгр;;^уг1;г-бса-н;:я. Полученную взвесь стандартизировали по оптической плотности, эд-сорбировали на алюмо-калиевых квасцах и эмульгировали в ыа.;ло-ланолиновой смесь.

Контроль вакцины на стерильность и безвредность проводили на бактериальных питательных средах и лабораторных гизэтных согласно ТУ-10-07-253-51, утвержденных ГУВ МОХ СССР 13 октября 1091 года для няактиБИроьашюй эмульсионной вакцины против хлачидиоза крупного рогатого скота.

Антигенную активность вакцины оценивали по уровню комплементезя-вивя^аих антител в сыворотках крови керских свинок через 30 дней после однократной ■внутримышечной вакцинации в дозе 0,5 пл.

Оценку кнмупогешюсти вакцины проводили на белых ььгиах, массой 16-1^ г., которых вакцинировали однократно подкожно в дозе 0,1-0,15 мл и через 21-30 дней подвергали контрольному заражению вирулентной культурой хламидий.

Статистическую обработку цифрового материала, полученного в ходе исследований, проводили согласно методическим рекомендациям "Математическая обработка экспериментального материала на программируемых микрокалькуляторах типа "Электроника" - 1.5<-5б" (Тукааитов Р. X. ,1984).

В проведении исследований по отдельны;.! этапам диссертации прнни-матл участие ведущий научный сотрудник лаборатории вирусологии, доктор ь«т*ричарных наук Хаиадеев Р.Х. и старший научный сотрудник лабераго-гии вирусологии, кандидат ветеринарных наук Хусаинов Ф.М..

- ') -

2.2. разработка л 5:оптг,!~;Э набора дагтаосишума длл пггалопзя :;ла>;п—гЯни ¿-.'¡хлхел л ГйГЛ

2.". 1. Ра^,"С.бот::а зр;!трощ1тар!:ого хламишп'шого ачтпгека для Р1Хн.

При кзготсвшлж с-ритрсшларного зиагиостикума длл РКГА нами С-ы* гзлол-зсзан ксрпус;%уллрлыл глтпгеы лл;л:.:;и;;ы. выращенных в аллантошпоп г. злости гсурнп.к гчбрлсков.

Л",- ^ззрул- лил лкгл;зеых ¿рго-мемтов ¡1 с целью Е-ыслоОоллелия хлами-пиД ссг-?тл?кну« г.—упоу.глуа ккдкста. з&мораяивали при ш:нус .18-20'О ь тс-'!-:-:-:!« 13 часов и быстро оттаивали в водяной бак? прп температура 5?'С гчлслч ? пр-лцессэ разморозки \:п выяааата ¡»рушше хлопья.

>;;;л.:;т;"е.цет ллл-лзлий позволили нзйгрзльггч формалином в концелл -пгют 0,5? в тошно чясов при температура 37-33*С.

Логткгегр-?:::::: ялауалийнсго антигена ;:э аллалтожнол лпдмости я его ке;>!йнт;:;т?о£-к;:Э осусестзляла лп^Ьерегплиа-льгц'м 1кнтр:!$упфоггп:гем. ."-'л:-1:-;лл:; оггга.илл прл 16-030-ЕСОХ оГорогэ® в ыизуг/ в тслзлнб 60 ми-луг. Пзлучс-:-:г«:1 ссахск гатъльяо рзсуспггллрсвалл б 1/10 чгош от •.;-лоллзго с-уъг'-у. и гс"огел;:згрогал;! з Сссч лпга-оуфррлсм г::тг;ссо. Ял л улзл'ллл :мосле с ул'мндллм;; балласта гсмогсллсирлзонкм;! ссз-

.-:;:: т.:нтр.г;ут:*р35т/: при ?.СС0 оборотов б ич:яуту 2 лт-л-'-ллп ГО мллот. поллзллоллу.з мллмеоль, ссцор.лмтуп ^лулргно толгл;?

г: • •• :':, :-:сл :льзогзв ;:злест?е алзкглга. Ант;:- с:: : л-^ролетозалл ¡;г. ло:л;з:;лр:л;;:в олеи ;::ггр:;нх толз-ц лллмнтлр и стопег.ь лс сллстк" мчкроо-м::"-..' -.'ял коз. ~опуо;сглгсь ксчц-'лтраиют хгдояпА п:: 4 креста при мз-чг.-:г.холгп:!! ллл:ллл: Сзлласлплл хлсано-л (зелопий фон).

С:лчлгргнзлгйл: адткгспс« различных сс;Г:й просолили по оптнлеслол лл:тнс:лн ла 3 холе ксслегсгпилй бьш определена оптп'гштал

л-: • -лур:;:;:»". алтигугз, р-азнзл 0,25-0,3 ЕЛ оптической плотности. Лиг-г-пс-стгт/ш, пзготлзлле'злэ ко антигенов с и«авбЛ концснтрапген, улс=ло7Бс-рллл гребозэнчйм вЕялу низкой актга^ости. Увеличение ле мон-;лектрз:лл1 не приводило к зсм'мгному улуч~гн::о качества препарата.

3 ■-•ачсстзз субсгрма длл сэпа:5:глй?гаши хлзмпднйгого аптлг-цг би-¡.спояьзсваяч ф;гкс^с2гша:э сормзлпнсм и танкзкрозгнккв српгроциты

бГОЛЛО.

Ял- "лглг-ли;: рритрсп.тов крозь, взятую о? Олрзла-донора, дофибрп--плрззлл:!, дллзлрозпл!! через марля ::-рлззояилт; -1:1 фос?лтйо-^-ферным расп:рсм о рЬ'-С, I. !ч 100 мл рлзгэ:;он;:с:5 крезп аоЗавдепи смесь, ссстс-ллу:з иг ГО ь\~ лейчрялтлюго фермал;-:- ч ЯО мл фосфз до-буйер-

нсгс рззлзера с рН-6,'1, пер:мт:г:1валп и !.«кубйроза:а! в голлней Сане яра гзмггизал ггъи-э 10-15 умнут, в 1..ч5ш:9.2-х часов. После этого

- ю -

c-рнтроцнта 4-х кратко сшш^и и суспендировали в 400-500 мл фосфат-ио-буферного раствора с рН-б,4 и помещали е рефрижератор с температурой 4-64'.. Чзроз 43 часоз эритроциты дважды отшзали и готовили 30%-ну» взвесь ка фосфатко-буфе-раоа растворе, которую консервировали фор*шш;эу с кокцентраш»: 0,32.

Для проЕйрки форно^гашсированЕцх эритроцитов на спонтанную агглю-тинащю в 2-3 лун.ш планшета вносили ¡¡о 0,4 мл 0,852 раствора хлористого натрия н по одной калле 3%-й-суспензии эритроцитов. Планшеты ветряки ави и оставляли на два часа при комнатной гокпаратуре. Эритро-ш;ты должны оседать на дно луккп в виде пугов.ицц или кольца.

Илл yj;> сорбцганиой спое бкостк аормалг^кзпроЕашых эритроцитов их гааизироваяи. Оптимальная концентрация таштовой »¡слоты с соотношении 1:20 тыс. позволяла максимально увеличить ссрбционну» способность фориалжшзированнья эритроцитов. Более высокие концентрации танина ш&ывапи их склеивание и сакопроизвсльну» агглютшкщш.

Для сенсибилизации корпускулярный хламздийный антигел смешивачи с <Х взвесью эритроцитов в соотноясниц 1:1. Контакт ингридиентов проводили при температуре 57° С в течэнко 2-х часов с последующ отстаиванием при температуре 4-8*С в течение 24 часов.

С целью предотвращения эдлюции корпускулярного антигена при последующем отыиваяиа и хранении препарата в качестве стабилизатора был применен глутаровый альдегид. Било испытано 3 различных режима обработки оритроцитаряого снтнгеиа глутарови,: гльдег.вдо:>: в концентрации 0,12:

первый - tec* процесс сенсибилизации вели в присутствии глутаро-ього альдегида;

второй - глутарэзиЯ альдегид вносили чероз 90 минут контакта чр'дтрошстозз с антигеном и инкубировали евд 30 минут;

тратий - после 8-х часов инкубации эритроцит-арный антиген qcataa-ли I атрибутирование« и ресуспендкровали в прежнем объеме фосфатно-буферного раствора, содержащего глутаровыА ааьдегид;

в Четвертой способе (контрольной) обработка глутаровым альдегидом не проводилась.

В результате установлено, что эршроцитарнче антигены, приготовленные по 3-ау и 4-му способа.!, в РИГА обладали низкой активность». При 1-м и Е-м способах обработки глутаровым альдегидом эритроцитарные антигены проявляли более высокую активность в РИГА. При 1-ом способе наблюдалась неспецафическая гемаггяятинация эритроцитов в контроле с оас-.базителем и отрицательной сывороткой крови. Таким образом, бол»---1 четкие результаты РИГА были получены при а-и способе.

После сенсибилизации эргшроцнтаркш"! антиген трехкратно оттэли от шшрогеагирозавшего глуггсового альдегида и разрувивапхся в процессе сбнсиЗгаизашга эритроцитов 0,5% раствором лопадиной' сыворотки на ФосФатно-буфернок растворе с рН-7,2 и ресуспензироваяи из расчета получения 2,5% ззвеси эритроцитов в сред.-?. Полученный эритроцитернмй хлакяаи&зый аитигеи консерзирозатл нейтральным Фсрмалшгом в концентрации 0,12 и использовал!! з PHFA. В качестве гастрольного антигена использовали несеисибилизирозаянуг) клеточную основу.

Параллельно с опыта;ш по разработке методики получения .эритроца-тарного хлк.'.идийного антигена просолили исследования по г.оабору штамма хллмилий, наиболее подходящего для дачной изтоцики. 3 сравнительных ош.тах кссдедозано 3 втздма хламиций: "250" оделен при хлгмидиогвсч аборте коров, "-G-89" - хламидксзном э:шефа-ите КРС, "СК-89" - хламя-дпезксм конъюнктивите телят. В регутьтате отобран на'йолзе псдходг.кий штамм хламидий - "СК-8'0", Антигены, изготовленные из этого штзумз, проявляли стабильность результата, выявляя игибольсий ткгр специфической хладодийкой сыворотки при отсутствии агглютинации с негативней сывороткой к равбазителем.

г;сгзк'га;-":э эрихроцятг.ргшго хккпцфгЯпого актагсиа па «гедайтазлть и ажгопооха з ;гауиссясч;юк спнгэ. Контроль спек^л-.'^скг.х свойств и активности экспериментальных серий эржрошкг&рнего хяамиди&юго г.чтн-гена проводили з сраЕнешш с FCK путем титрования гакизгкчшх и гетз-рологпчкнх пмыунккх сывороток кревп против хлгмдайгего автогена. Наряду с этим были испольволаны "похзпке" спвсротки крови рЗЗЛКЧлЬК ви-доз лявопедс: свиней, рогатого скота и лсзад«й кз пеблагоподуч:-::« по хле:-*:гзиозу хозяйств.

Исследования погнали высокуп чувствительность и групповую специфичность й1?гностикума для РИГА. Положительная ргшш бала получена СО ВСЗДП ГСМЭЛСГаЧЕЬ1!И CUSSpOTK&St !<ЕСВП: ксятролькой хгОДЩПЙПОЙ сы-ЕсрсткоЯ КРС, стандартной оряктозкой сазороткой и с сывсротксй кммуни-зировачной прелгз хламкдкога евцы. Отрицательная реакцка на&идалась с отрицательной контрольной сагероткой, бруаедезней сазоротксй и сывороткой, позитивной к гарусу ршотрахеиха. При исследовании павег&х сывороток различных видов jnrsomst гиаяиййпхо енгптада 2«гаагл::с& в тиграх 1:5 - 1:320. Пел ергвнеш* результатов РСК и РИГА иаблвда.гзсь корреляшя получеям« даяние.. . ■ ' •

S.g.S. Разработка мгтодвки постагозки'РРГА ><якро'-?э?одс*. с рратро-

¡;ит"р;гым хламэти^нчм антигеном.

Реагокзо стаыглн i.mKz-cv.a-годом з стаадартк микроааиалчх с луисч-

г.-;аи! и - образной формы, объемом на 100 ши с использованием полуаьтома-¡■Ц'"Ч".К1К мжропгаеток. Исследуемые и контрольные- сыворотки кроьи пред-и,:■-.¡только разьоашш физиологическим раствором г. соотношении 1:5 и ¡:на;тньироБали прогреванием при температуре 55-53' С.

В ходе опыта б^и апробированы различные- соотношении сыворотки к антигену: 2:1; 2,5:1; 0:1; 4:1 и 5:1. При этом объем сыворотки был г.истолшшг;, а обгем эрптроцитарноп. антигена варьировался от 10 до £5 мкл в зависимости от вишеиаэвашшк соотношений. Оптимальным оказалось еостнсь, .ние сыворотки и антигена - 2,5:1. В таком соотношении антиген ' реагировал со специфической сывороткой в наиболее высоком титре, не проявляя гемштлвтииацин с отрицате льной контрольной сывороткой и разбавителем. Более низкое соотношение сыворотки и антигена (2:1) вызывало гемагглитииаци» с отрицательной сывороткой. Более высокие соотношения сыворотки и антигена (3:1; 4:1; 5:1) давали положительную реакцию с хламидийной сывороткой в' ысиьиеи разведении или вообце не вызывали полноценной реакции.

Для постановки реакции параллельно были опрсбованы различные температурные режимы: при 4?С (холодильник); при 20°С (комнатная температура) ; при 37° С (термостат), из которых наиболее оптимальным признан признан второй (20°С). При таком режиме оседадие эритроцитов в контроле с разбавителем проходило за наиболее короткий срок времени.

Исходя из выгеизяокенкых фактов, был определен оптимальный режим постановки РИГА шкроштодоы с зрптроцитарным хлаыидийныы антигеном. При этом е качество разбгалтеля использовали 1% раствор пнактивировал-юн сыворотки лошади на физиологическом буферном растворе с рН-7,2. Ь: акцию Ставил-.!; б сбгемз 70 шл. Исследуемо и !юнт;юльныо сыворотки крови титровали в разведениях с 1:5 до 1:6120 в объеме 50 мкд. Зритро-штпркый аптиген в концентрации клето:: 2,5% использовали в объем? £0 мкл. В последние луночки рядов панели антиген вносили без сыворотки (ко. грель эрктроц1;тарного антигена на самопроизвольную геыаггяотииа-Ш1Ю). После внесения всех компонентов реакции плапзеты осторожно встряхивали и оставляли при комнатной температура на 1-1,5 чага.

Результаты реакции оцэнивади визуально после осаждения зритроци-тарного антигена в контрольных (последней;) луночках рядов. Количественную оценку реакции вырагали в титрах.

Реакции считали отрицательней, если эритроциты оседали на дне лунки в виде плотной точки.

Реакцию считали положительной, если эритроцчты агглютинировались и образовывали на дне луночки перевернутый "зонтик" Положительна ре-?/лматом считали агглютинацию эритроцитов с наследуемой сывороткой в

разведен!!!! 1:10 и Eime.

".".5. Испытание "Набора препаратов для РИГА при диагно;?;»» ;t..' иил'.'озов животных" для диагностика хл?»;вяо?а свиней и опенки н,-^,. жекнссти ;;ссгвакютзль иого и::м'лштета_._

На сскозе гритрсактераого хлемидийного антигена для РИГА г*« создан "Набор препаратов для РИГА при диагностике хлеадиозов жеоткчх" . разработали соответствуют*!«} кормат;шпо-техн:пескио документы на производство и применение опытных серии биопрепаратов.

В состав диагностического набора золли:

- зрнтроаитарньп"! хлзмилпйккй антиген (5 флаконов по 9 мл);

- контрольная хл£м:щ!:йная сыворотка крови (1 флакон - 2 мл);

- контрольная отрицательная сыворотка крсзи Я фдаксп - Z мл);

- "нормальная" сыворотка крови лошади (1 флакон - Z мл) ■

Набор рассчитан на исследование 200 проб сивсротск крови.

Компоненты набора расфасовывали в стандартные "петшилланоБм-"

тяаксяы емкость» 10 мл. СритрсштарвиЯ антиген фассвази в нахивиш состоя:!!'!! в ОбЪСМв 0 мл. КОНТрОЛМКЭ и логадинуо сиг.0рс~!0! расфассры-залн по Z мл я подггргали лисфияьной суске. йписоны герметично закрывали стсрильнодг резиновый* прсЗкаш и закатывали аясмишЕгич колп-чч -как:!. После распасовки адакопы зтпкотировали с указанием из агпкетг.-нг,:менова;п!п препарата, номера серии, номера контроля и его гэтгисноо-ти.

При определении срока годности препаратов било установлено, что компоненты набора пригодны для работы в течение 1-го года.

Лабораторное кспххяов спяишх серий эрктроцитарнсго хламлзииного дкагяоетихума для PI-TA проводили в ергвнетш с РСК.

С диагностической целью было исследовано 305 проб сызороток крори езине-й из 7-tst неблагополучных хозяйств. Результаты этих исследсг.зьтй обобщены в таблице W1.

Полученные в ходе исследований результаты (таблица tfi) ползали, что в РИГА положитэлько реагировали 160 (S2X) греб сывороток ¡tporü свиней, тогда как з РСК погсхктадыгая реакция бала получена лгаь з ел (23Х) случаях. Следовательно, в ИГА тнотаташ» реаггревзло в i,o раза больпэ животных, чем з РСК. При этом в РИГА удпвлгссь регпетркро-эать более еticcraS уровень специфически антител. чем в РСК (P<0,06'i. Так, средние титра (Над) хдапздийшя: атктбл б РИГА £ш;«лялкс?> о г 1:12,1*2,7 до 1:91,5*20,3, тогда ;■*■:% з РСК этот вокгзггель б п?:-л'-лах о? 1:5 по 1:18,2*4,2. Средний титр хлзмндийгах ан~«*л в РпГА ч* г.сем хсч-яй:тЕам составил 1:62*7,9, что рев-исаго аналогичный пска„'Л-

Таблица ¡41

Результаты сравнительного исследования в РИГА и РСК сывороток, крови свиной из различных неблагополучных по хламшиоау хозяйств

1 w п/п Исследовано проб кол-во Pear иpos ало Г

Наименование хозяйств в РИГА В FCK j

' всего кол. всего % Обрат,вел.сред, титра сыв. всего кол. всего & Обоа;-. вел. сред. j титра сыв. Ш±гп) |

1 С/к "Крупский" Ульяновской.обл.РФ БО 14 га 12,1.± г,7 6 12 8,3 ± 2,?,

! £1 ОПХ "Ялта" Октябрьский р-он Мэрий Зл 48 37 77 87,8 ± 21.4 21" 44 17,8 ± 4,2

U ОПХ "1 ^"Октябрьский р-он Марий Эл 16 10 53 16,5 ± 4,5 6 32 -5 i 0

| С/к "Пугачевский" Бугулькин.р-он РТ 60 за .so 91,5 ± £6,3 14 23 18,2 ± 4,2

I5' АОЗТ "Путь Ильича" Ульяновской обл.РФ 43 j 18 42 57,2 г 18,5 8 19 17,5 ± 9.7 j

•i . j 0. К-'п "Ленгагогорский" Лениногорск.р-на-РТ 50 ! 38 76 56,5 ± 11,6 18 36 ! 11,1 i 2,8

н К/в "Шинник" Нижне-кауского р-на ГС S5 j 13 37 31,9 ± 8,6 ■11 31 15,8 ± 4

1 1 '! 1 СРЕДНИЕ ПОКАЗАТЕЛИ 305 J 160 52 52 ± 7,9 84 28 14,7 ± 1,7

Примечание: Р<0,05

тель РСК (1:14,711,7) в 4,2 раза.

Испытание 'диагпостикуна для сценка постаакциналького и»ыуаитета V свиней, Еакпинировашшх против хламидлсоа вяакзнз'дозгяяой г-ыульспсн-кой вачциксй (таблица »52), показало, лто чувствительность Р:1ГА с эрит-роцитарным хлаыидийным антигеном несколысо превосходна результат РСК. Так, при исследовании 213 проб нммун::ы:: аяюроюк -тоони сзикей п РИГА в среднем реаг$"- -»зало положительно 33,5.", а в РС:1 - 04,5* проб от со-шего числа исследованных. При'сравнении зелпг-цшы средних тптроз 2-х тестов выявлена достоверная (Р<0,001) разница этих показателей. Так, средний титр (Мт) поствзхцинальних хлгшд;шныл антител га весь срок наблюдений з РИГА составил 1:117^16,2, а з РСК - 1:17,3*2. Таким образом, было установлено, что в РИГА с эр!проц.чггрль21 хла^идгсшьм антигеном титры специфических антител у Баящшровашых сьпней з средне;,! в 6,7 раза были выше, чем в РСК.

Таблица ;=г2

Сравнительное изучение уровня псствакшшзлышх хлашщийных антител у сеииой а РИГА и РСК

Сроки после вакцинации Б днях Исследовано проб Положительно реагировало ¡1

в РИГА в РС:<

кол-во % 1.1 * и кол-во z М i м

21 53 52 93 130,6*19 50 - 94 15*1,5 i

S0 45 45 100' 90,4*11,9 ■14 38 19,3*2,6;

45 65 64 88 119,8*15,4 60 92 13,5*2]

90 50 49 98 127,4*18,4| 47 94 15,5*1,8!

Итого: 213 210 98,5 117*15,2 ¡ 201 94,5 17,3*2 |

Примечание: Во всех случаях Р<0,001 Прокзводственкоо гсгашхганэ 3-х опытш серий "Набора препаратов для РИГА при диагностике хлауидиоаов яивотных" для серологической диагностики хламидыоза свиней проводили в вкрусолсгкчеасш отделе Марийской республиканской ветеринарной лаборатории. Всего в течение 2-х лет в РИГА было исследовано 2933 пробы сыворотки крови различных половозрастных групп свиней из хозяйств, где проявлялись клинические симптомы (аборты, мертзо- и слаборождеикя, артриты, пневмонии и до.), характерные для хлаывдиозчой инфекции свиней. При этом было получено 105 положительных результатов, что составляем. 3,62 от общего числа иссле-доьанкых проб.

. iitx иоолелованплл было подтверждено, что в течении срока '• '" 1 •;«■!)'-год 1 ' компонент разработанного набора препаратов мл -л; а- •'• н.1^'.шнзктпйн0ст-и,- -сбозначенной'-на этикетках и ко проявляли гчг:ii'I тч-• ;'кг.й-гемагт'лю'пшашШ; • i.V.-'-г •.

'•w • ^:г.'!;Гч;Ср-зйСм; -трупповая специфичность"и высокая чувствительность ••Г« • ^•••ригрсдатфн^*ламидиЛ:шм 'Антигеном, а такко простота и дос-•л гноен' разработанного теста погйшйу'рекоыовдопать его в качестве ."ч^г;рьсс-м(.;тода:;"; для «серологической-диагностики хламидиоза свиней и ciithrn напрлкенкопти гюства<цйналъкого иммунитета.

■'2.3. Разработка :Погодой контроля и' сценка з$$енткв:юстн кищгаш ' tipcmm-кШшсяэзг'аашой• &ш:ягшрзв2!шой зыульснокиоЯ

3.3.1. Контроль вакцины на стерильность, безвредность, антигенную активность и иммуногенкость.

Kö.'ii'pasb "влйцгша -;:на"-cicpjtöKOü'ri! » Св8арод:гос1&. Контроль 10 опытных серий вакцины' на'^схерйльность1» проведенный путем высева на бактериальные питатвшкв'средаг Ш},; ОД, МППБ под вазелиновым маслс:.: .и среду-Оабуро, 'пск£гзл.отсугсгвлг'роста иикробиоЛ и грибной ссоры а течение 10-дневного срока н\чбладепий,_что свидетельствовало о стерильности .испытуемого биопрепарата. 5

'"Результата исгйтпшш-безвредности этих серий вакцины, проведенное введекнеы-препарата;Села» югаам-'ваутрибрншинно, в дозе 0,5 мл и морским '-;cbKm>aä- _педкояно Jto 1 ш с последующи наблюдением еа состоянием гашотких.в течещке .14. а',£3 двой соответственно, показали, что и<аел aitBö*H'ft<""ПС'СЛБ" ¥äiaßiiiair»iH;'iKrycTanoi«iSH; их обаее состояние во все;; серипк-опытов Йылэ .удовлегврригльньш.-Следовательно, испытуемые серии вакцшга-у прозив хломкддаза .снипей- ке оказывают патогенного действия на органа и ткани кивотных, что дает основание считать биопрепарат безвредным. : ; ■■

. Кзгцро%> - шздаш. агвагедау?з акхшкюхь. Б опытах по изучении антигшвмуи б .опытднк серий-вакииш .проткь хламид;:оэа свиней на морских с&инкак путем-цх -шмувазации в дозе 0,5 мл и титрования цчерв.3 60 дней сывороток, крови ь FCK со спеинфическш хламвдккнлм к коатраашшм"антигенами. бало-.устачовлепо, что у 91% ьэтшнированкач кавотиых ышшатся .кл^мидийкиг антитела в титра:-; 1:20 и шло. Анализ содержания компломейтсвязивавЕЛХ антител в крови морских свинок <'таблица №3) показа», чтр сроднив титри антител у гажпшровгшлнх .глволных оо специфическим антигеном колебались в пределах ос 1:Е",5 ло 1:170 <п среднем (М±м> но б-ти сериям - 1:60,6*26,4); с контрольном антигоном

у

¡rt

iï ■з

о к

Я

M о

3 н

S

и:

и <и и

к

ä

<и

H

M

ф

п

ч

Еч О

3

«

ci га

и о

И

из

о i i о О

IM ■V) -н -н

—I -г* ; I тЧ

to

N из

О

U3 Cl

—t сз С J

о о

о

W

Ö 1-J

<о о

со •«it О

s ig —i Я 2 a N

(J? я 3 Й S я S

Q. а и, И. il а.

1) <Ü it и а>

О О о О о о

с i i.'J -t из tD

- „ „ ---; ; —

tí

и

----- из

о

Cl,

у о

ii

<и,-

'ВН s гг н о

н^г

а> сО ?

;х

О

'Л

ä

о

к

- 1о -

1:10 ло 1:82,5 (в среднем 1'М±м) - 1:37±12,9), что свидетельствует о г;:;а;он антигенной активности всех испытуемых серий инактнвировашюй ,г'7/,ьси.)Н1»й вакцины против хлашяаюга свиней.

Коагроль юшуногежюЯ акпшпосхл вашзаш. Изучение патогенкостп пропрводстьенных штаммов хламидий для белых мыаей показало, что про-цонт пйели мышей, заракгнных штатом "РС-85", при впутрнбрюашшэм м.едешш материала составил - 72,62, при интраназальном введении -57л, при подко.тасм введении - 44.%. Ь'тадм "ЛС-88" вызывал ааболева1Лпе и Гибель 93% мшзй, ааракенкых интраказально, 60,3% - при Енутрибр;спин-ном введении'и 3-1,32.- при подкокной инъекции.

. Иммуногенность экспериментальных и опытных серий ипактизировакной эмульсионной вакцины испытывали на белых мышах массой 16-18 г,

В ходе опытов были подобраны оптимальные дозы вакцину на одно введении (0,1-0,15 мл), изучена сравнительная эффективность вкутркбрл-щишган и Подкопной вакцинации мьпдеп ц установлена болов высо!:ая эффективность последней.

Результаты исследований (таблица ¡5 4) показали, что вдадваекость белых мышей после контрольного эаракопил вирулентной культурой хлами-дий вгашоа "РС" и "ЛО" колебалось в пределах 73-85% (79,б±4,3?) и 73-&0% (76,С±2,4й) соответственно. Средний процент выживаемости вакцинированных мышей после контрольного вараженил составил 78,2±2,1%.

Таблица КЧ

Результаты изучения иммуногенностк некоторых опытных серий шактнвированкой эмульсионной вакцины против хламидиоза свиной на белых мылах

!Ь'таш кополь-1 зовагшт"! для ! заражения Наименование групп .«азотных Количество кивотных з группе Шгжзасмость б.цыаей | после контрольного , заражения (в X! |

"ГС" опытная • 45 79,6 ± 4,3

контрольнал 45 24 ± 2,4

"ЛС" • опытная 47 76,6 ± 2,4

контрольная 51 35,6 ± 4,7

Итого: опытная 92 78,2 ± 2,1

контрольнал 96 • . 29,3 ± 3,5

Примечание: во всех случаях Р<0,001

выживаемость иктактных мьшей после зара&екиа штаммами хламидкп "РС" я "ЛС" колебалась в пределах 20-26% (£4±2,4Х> и 23-40;*,

- l'J -

(35,6±4,V%) соответственно. Средний гтоцент выживаемости мыаей контрольных групп пссле заражения составил 22,8±3,5%.

В мазках-отпечатках, приготовлениях из органов г.авпих млаей контрольной группы, обнаруживали элементарные тельца хламидкй характерно;": морфология, что подтверждало хлачидийнув этнологии гибели животных. Следовательно, инактивировакная эмульсионная вазщина против хлемгщиоза свиней обладает высокой иымуногенностьв.

£.3.2. Испытание ачтагошюй активности и иумупогенности вагагачы портив хламидиоза свиней на супьрсснтасвиноматках.

Изучение эффективности вакцины в лабораторных условиях проводили в остром опыте на 10 серонегативных по хлтидиозу подсвинках с 1-1,5 месячным сроком супороснооти.

Сешюк разделили на 2 группы: опытную и контрольную. Опытаую группу, состоящую из 4 голов, вакцинировали однократно в дезе 2 ил в области шеи. Контрольную группу, состояауо из 6 «штатных, не анализировали.

Контрольное заражение гиецннировпнных и инта.чтккх о?лш; 1 прэподч-ли через 21 день пссле вакцинации. Возбудитель хламидисснэго аборта свиней ¡штамм "PC") был заеден 2 опытным и 3 'га:гхрс; ы-r.i животдаы; возбудитель пневмонии свиней (штаки "ЛС") - тегге 2 сайты'i я 3 кокг-ральиым свиньям внутривенно по 5'мл 10~6«5 a^fea в 0,3 мл.

После заражения у вакшижрованкых жсотных тенпзратурпой реакции не наблюдали. В контрольной группе через день после варахекия отмечали поыиениг температуры тела у всех яавотпых в ергдпеи до ЕЗ,2°С. Лпхо-раяочпеб состояние длилось в течении сутс::, зато» ~ошгрз?/ра тега постепенно нормализовалась.

в /.оде серологических исследований свиноматок (таблица íS) бало установлено, что перс-д заражением у контрольной группа свиней хлг-vsi-лпйкые антитела не обнаруживались. У вакцинированных животных компле-мёнтевлзывамщие хла«щий:ше антитела выявлялись в средней т:?тре i:45±23,3. На -í день после заражения тнтрп антител у вгашиниреэашшх и контрольных животных повысились до 1:95±43,5 и 1:55,6*24,9 соответственно. Затем у вакцинированных животных наблюдали спад уровня антител, а у контрольной группы уровень хлгвждийкых антител р. кровл позы-шачел ene ло 18 дня (1:63,?.±32) и лига затем происходило постепенное понижение их титров. Перед опоросом хламндиг ъ'е антитела в крови опытной и контрольной гоупп свиней но выявлялись.

¡•-г-.-;Б 1;СК скгсроток кроьн подоглл¡л:-: сгплой поел* контрольного ззрагеия

г; :-сле

Ь ПЖ )

игры х.-.а.вдилык аатигед но группам

ОПЫХКК!

Контрольная

35 Л 5

1:45гС'3,3 1:£6*45,5

1:Е0±Е,1 1:£0-3,1 О

1:30.5*24,9 ?

1:£7,5;12,7

1:2?, 5*12,7' £

0 ¡'

? со/ль тати ¡:;хо:.а с/псрхкссп: с^ллллглгок что внутр;: г-.:-

^¿•¿г;;;' .пргпгрг-.тй в логе В .-■,: с^/сл аз ~ т лормлролллле у ж-

гОТЕЫХ П?С-'¡ОГО ПШШГ.ЧСО.. СП ."СС ?У.2ГО пгогслрзк;.":. нх ст рьзвкглн зкспср;с«Ета£ъ>.::-2 нлсллЦ.ги г,ос,"л, -л:- юл-

оумИтела:.!;: хл^зд-сгнзге аборта я пнетлсшп; сггас-й. У г^ацичпрсганних свпюматск ¡¡сход супсроснссгл ¡¡осле •-•огл.-ролсногс ьгг-гх-глю. йк .благо-аолучк:."! - от 4 ¿¿здсиахск бь::..э лолучэпо К клллнкч-ес:;;: здоровых г.::с-калллсс-олых пс-ухяг со сргдя;?л граи». У 6-т:: св;з:энаго;:

кснтр-одгко;; группа и- 75 ллрсднлл.-хсп к^ог-чт 56 Ск~:г м-:ртло?""ь;:ш-ь15:, а ссхс^ьные (£0) - огсЗ^а-: 5: к•:->>;• г есолссоб.с-г га. Кса к с.-.ксксп;е соолоч;;,! у тглпл покосят б::.::: саго^-д-'гй, ;гх вое сотт^хлял в среднем ¿00 грг:и. £ ¡:з ;:от1;л:пс:-глоз плап-эн-

ты, караиме-;сзакз о?г«:оз и елл^олеллекк:;;; поросят, сонару-

гз&гла глгкзлтарныг Я?;; герзя-гт-.« ;<ур.<ллх эдЗрксиэз

сус;;г:;з;;лл,л зтлч ^зтергагез хлг.:цд$и бж р^-гзоллзов&д-;.

- £.5.3. Оазека с-У<кп;:£Кгст>; пнил^ненг; заката-: ппот;;;. хла\;ш.кс:.а с?:;т-:ей в птс;;звоге?гсЯгк услегпйи.

Испита;;::? опытных сгр;й еакш'.ш гротав хлзкадкога

св!2>0й презагжн Е уейзь&гх 3-« иеслггсгадучкых хозяйств. С зтой целы: Бакиодша слк::гй крою ллй^коза сшг. ькл£-;ен:-. в скстогг/ протиьсх-л&лсиог&гс ¡'¿рэцрде-лш еь СЕГ1Нокд;£!,-г:-:оач, котэриг наряду о ваиша-вдей продусагтслда^и пг:.;рш:грло--сгл;;тг?;плг кс^г» и сбрс-бэгк/ гизотлу:' гжтизжтзегми :о~рацшгзгазгсГ1 группы.

Вакпиккрсвагк только г-глйлкгскя з^срогич свинзЛ. Больных явзгны* перед вакшшаикей подвергали лечешю ачткС; готика,гл гетраж-сышовсгс

рлда ¡t через Ю-12 дней полвчвал i. bCH^r-rt:-; ¡; реглокткыл сзлног'лтс^ вак:;шп:роЕ5Лн за 20-20 дней до ссе:.:ен^н;;л. Г'сего против хламкднолп г-'-ло вгкпюирозаяэ 19£й5 голод свиней, в г ом члс/~ iS4'J7 свиноматок 7г& :{çaicoB-'!poïî?r.c.'iirje.'i^. Вакцину зрс.лди экутртойкечгю в облает» шл: з до?ад: ьяроохь?! хи&яхин - ? ил, 3-С ыгелчкым свиньям - 1 мл.

Из\чпц;е •<ч; , \лчл ег:<эщ:•■лчес:::::: антител у пр'лвитнх .л

гс-.шч (таблица па-зга,:?, uro в"':7:т:на череп 21 день после зведепня о-'/олаг! г.ива-.-т накопление адтлгел к .■ламндн:":нс!.!,;' антитезу у 341 contri! со средним титром з PC?; l:líUl,0. !лл;:с!:;:?,г:ыюго уровни кс:.рт:е:.!эцтсЕ;{-зиг ¿-jjíjIk антлгела достигала ла 30 день псоло Баглпшгулл;. Прл с там pea глре.ллл Pí" слепых з среднем титр:- l:l;'.,3i2,û. Через 3 месяца посте ьагклнацлл ;-■••■ хли-л:-:'? -•нхзт5-"а F'i^^.íf:::;'у ÍU.:. кл?от:-ь;х в средк-м тлтре 1:16,5-1,5. С гП'Л как пролзнт г.слслптольно реагиру.^лчх глоюг-п-лх, гл; к татры антител 6уяи несколько вы ¿е.

Э^ектлллостъ применен::.! вясщши игл/чала на солсзэнка сравнения ;>: даг'нлх ¡то ксличестзу лег.ртез ¡i мьртзсро%деп':л среди С5ИП-> магск. а тас.е падеха и вылрхдепдего убсл порося? до 2-х месглксго возраста в неблагополучных по хдаг/иддезу свиней хозяйствах ло и после применения вакцшш. Данные кс э£$?кгигности применения выадены против чламиднеза свиней обобщены в диаграмме tél.

Как видно из приведенных в диччгрглме дакшлс, до Елещ^пац-'н количество эбертев ¡i HspíboporjjeHHii"'дшЪюй лтиолепт по 3-м неблаге-иодчним хозяйствам б среднем за год оосгаэлпло соответственно 7,v.i; 32/* и 32.. Б результат? применения эаараш количество гбертоа и мзртво-рс-жденин снизилось до 1.3&; 5,9% и 4S, т.е. уменышлссь 3 5,9, 5,4 И 2 раза соответственно. ' В среднем количество абортов и мертвсро.тдеяий по 3-н хозяйствам уместилось в 4,4 раза.

Количество падежа и вызулдениого убоя порссат до 2-х месячного возраста до применения вакцины по 3 хозяйства»! регистрировалось соответственно на уровне 23Х; 10,ZZ ü 4Z. В результате пргаенешш вакцины эти показатели снизились до 10Х, 7,8* и 2% в среднем за год соответственно. В средне», по 3-м хозяйствам паде.т, и Еынуядешшй убей поросят уменьшился в 1,9 раза.

Таким образом, сопоставляя результаты лабораторного контроля и производственного испытания, можно сделать вывод о высокой эффективности разработанной во EíííEí "Баклуши прстиз хламлдиоза свиней ннакти-вироваяной эуульсисыюй", использование которой з системе противэхла мидиоокых м-сспг/'лггий неблагополучных хозяйств способствует оздеровл-;-;¡i!«', погологьл свиней от хлачндиознои ¡гнфе--:иин.

%

Диаграмма

Показатели эффективности применения инаггнвированвон эмульсионной вакцины пропет хламидноза свиней в неблагополучных хозяйствах

Аборты и мертворожденна !- Падеж и вынужденный убон поросят

1 - Ск/Сосновоборский"

2 - С/з им.ПД.Гая

3 -С/з "Звсннговскнй"

1 2 3

До применения вакцины

I 2 3

Посте применения вакцины

- ЙЗ -

3. В ы В О д ы

1. Разработана технология изготовления хламидийного эритроцитар-ного диагностикума с использованием корпускулярного хламидийного антигена штамм "СК-89"), получаемого из аллантоисной жидкости куриных эмбрионов. Предлагаемый антиген-диагностикум обладает родоспецифичес-ким свойством, более высокой (в 2-3 раза) чувствительностью по сравнению с хламидийным антигеном для РСК и может быть использован р качестве экспресс-теста как для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных, так и для оценки поствакцинального проти-вохламидийного иммунитета.

2. На основе разработанного эритроцитарного хламидийного антигена создай "Набор препаратов для РИГА при диагностике хламидиозов животных"; компоненты набора не снижают активности и не приобретают неспецифических свойств в течение 1-го года со дня изготовления при условии хранения в температурном режиме 4-6°С.

3. Предложена методика постановки РИГА с эритроцитарнш хлашздий-ным антигеном с использованием стандартных полистироловых планшетов и полуавтоматических микропипеток. Наиболее четкие результаты получены при соотношении сыворотки и антигена 2,5:1; реакция ставится в объеме 70 мкл ('сыворотки титрируются в объеме 50 ккл, эритрсцитгрный антиген в концентрации клеток 2,5£ используется в объеме 20 мкл) и проводится при комнатной температуре в течение 1-1,5 часа.

4. "Вакцина против хламидиоза свиней инактивированная эмульсионная", разработанная ео ВНИВИ, является стерильным, безвредным, анти-генно активным и йммуногенным препаратом. Внутримышечное введение ииактивирсванкой вакцины морским свинкам обуславливает накопление в сыворотке крови ксмплементсвязываювдх антител в титрах 1:20 и выше у У1Х вакцинированных животных; защищает в среднем 78% подкожно вакцинированных белых мышей от экспериментально!! хламадийной инфекции при 70% гибели интактннх жиботных.

5. Однократное введение кначтивированноа эмульсионной вакцины против хламидиоза свиней супоросным свиноматкам в дозе 2 мл обеспечивает у животных формирование напряженного противохламидийного иммунитета и зкпищает их ст внутривенного заражения вирулентными штаммами хлачидий "РС" и "ЛС", вызывающими аборт и пневмонию у свиней.

6. При изучении динамики накопления специфических антител в крови вакцинированных свиней установлено, что однократная внутримышечная иммунизация животных инактивированной эмульсионной вакциной в дозе 2 мл обу.-лзвлпьает накопление хллмндийных комплементсвязызающих антител у

94-98% животных, которые достигают максимальных титров (1:10-1:80) на 30 день и сохраняются на достаточно высоком уровне в течение 3-х последующих месяцев (срок наблюдений).

7. Совпадаемость результатов изучения антигенности и иммуноген-ности иналтивированной эмульсионной вакцины против хламидиоза свиней на лабораторных животных и в остром опыте на супоросных свиноматках свидетельствует, что разработанная схема контроля вакцины позволяет достоверно оценить ее антигенную и иммукогенную активность.

3. Анализ результатов производственного испытания вакшшы против хламидиоза свиней показал эффективность данного биопрепарата. Применение вакцины в системе противохламидиозных мероприятий в неблагополучных хозяйствах позволило сократить в среднем в 4,4 раза количество абортов и мертворождаемость и уменьшить в 1,9 раза падеж и вынужденный убой поросят хламидийной этиологии .

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ .

Результаты исследований позволили рекомендовать:

1. Для практического применения в научно-исследовательских и производственных лабораториях "Набор препаратов для РИГА при диагностике хламидиозов животных", регламинтируемый следующими нормативно-техническими документами: ..'.,'

"Временная инструкция по изготовлению и контролю набора препаратов для реакции непрямой гемагглютинации (РИГА)" (утверждена директором ВНИВИ (г.Казань) от 28 ноября 1994 года>.

"Временное наставление по . применению набора препаратов. для РИГА при диагностике хламидиоза животных" (утверждено директором ВНИВИ (г.Казань) от 28 ноября 1994 года).

2. Методы лабораторного контроля "Вакцины против хламидиоза свиней инактивированной эмульсионной" на стерильность, безвредность, антигенную активность и иммуногенность, вошедшие:

во "Временную инструкцию по изготовлению и контролю инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиоза свиней" (утверждена директором ВНИВИ (г.Казань).от 28 марта 1995 года)!

во "Временное наставление по применению вакцины против хламидиоза свиней инактивированной эмульсионной" .(утверждено ГУВ КМ Республики Татарстан от 30 марта 1995 года).-

3. "Рекомендации по обеспечению эпизоотического благополучия свиноводческих хозяйств по хлачидиозу" (утверждены ГУВ КМ Республики Татарстан от X мая 1997 года).