Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ, КРИОКОКСЕРВАЦИИ И ПЕРЕСАДКИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ, КРИОКОКСЕРВАЦИИ И ПЕРЕСАДКИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА"

ЪОЩ

ВСЕРОССИЙСКИЙ НА У Ч К О- ИСС Л Е ДО ВАТ Е ЛЬСКI'! И ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На прав г. л. руксг.::с УДК 512.6-4 с. С

Бушманоь Василий Иннокентьевич

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ, КРИОКОНСЕРВАЦИИ И ПЕРЕСАДКИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО, РОГАТОГО СКОТА

ОЗ.СС.13. - Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

цнесерташш на саискание ученой степени каноиаага биологические наук

ГГ. Л}'брОкШЦЫ Л'юСКОйСлОи оопасти 199 3

Диссертационная работа выполнена в отдала трансплантации эц<3рионов сельскохозяйетв ешшх животных Всероссийского научно-исследовательского института яивотноводства'

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор Е.И.СЕРГЕЕВ

Официальные оппоненты - доктор биологических наук,

профессор Ю.Д.КШСКЙ&»

кандидат биологические наук

■ В.В.ЕЛЬЧЩШОВ

Заднее учреждение; Всероссийский научно-исследователш-ский селекционно-генетический институт

Защита диссертация оостозтся г,

в часов на заседании специализированного совета Д.020.16.02. при Всероссийском научно-исследовательском инстн-туте животноводства

Адрес института: 142012» псковская оЗл., Подольский район, пос. Дубровпца.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан * ^ " V.

Учений секретарь специализированного

совета, кандидат биологических

наук И,Н,П>шгйи *

i. свдя хшкпн;ст;ша работы

1.1. Актуальность те;.л

В настоящее время в области трансплантация эмбрионов накоплен большой фактический объем кнфоз^ащш, которая может быть использована для улучсшкя технологи: трансплавтадав я является полезной и вне контекста эмбриолересадок для улучшения воспроизводства скота.

Большое теоретическое в практическое значение гнеет выяснение роле различных факторов при гормональном вызывания су-перОЕуляции, оценке качества я пересадке эмбрионов. Главный сдерхпзащш фактором разнится технологии траясплантацЕК до сих пор остается непредсказуемость в нестабильность реакции яичников коров на гонадотропинв.

Для повышения &Нектгвности пересадок з»брионов лерспек-тивнн поиски путей регулирования фолликулогенеза для получения максимального возможного числа полнодекжп эмбрионов снмальккй генетический прогресс за счет применения транспгаята-цгш эмбрионов ожидается э случае, когда от донора получают 10 эмбрионов, а стельность реципиентов составляет 70£,

Вопросы торговли эьйрпонаыи и ветеринарного контроля ирг их перевозке в настоящее время узе достаточно глубоко обсуг-дены. Отмечено, что более целесообразно импортировать генетический материал в вида свелкх ели заиорогеннкх эмбрионов, что значительно снижает затраты на транспортировку и карантинные мероприятия по сравнению с завозом скота. При этом риск передачи болезней с экбрзонагли самьй ^нйьальнкй.

В практическое отношении эффективность трансплантация определ2»кг следущге критерии!

- 50$ пригодность коров для получения эмбрионов путем суперовуляцаошюй обработка и 75-В5£ позитивных реакций на гормональную обработку;

- при каждом успешном промнэании получение 5-7 эмбрионов;

- 60-7(33 нлзлешссобккх эмбрионов от общего числа извле- -ченянх при стельности 55-603, после пересадни;

ЦЕНТРАЛЬНАЯ . .НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА

мм. К. А. 1- ,

и« в т АгЗОШ

- голучепие з-З телят на каждое успешое иоожвакие.

1.2, Цель д .задачи, исследований заключалась в усовершенствования в размотке 1уш5олее &|т£бкт11вкчх способов гормо-аалького внзь-вашш суперовуляцки у кораь-доноров, определении елекник некоторых экзогенных: и эндогенных факторов на уровень суперовуляши, качество я приживляемость эмйраояов после пересадки, а также э изучении влияния горадяальной обработки в аехзрургического извлечения яа косл«дущую восдроа зводп т ельяую функцию КОрОВ,доцоров эмбрионов.

Для реализации данной дели были поставлена следите задача:

- провеотЕ сравнительную опенку действия гонрд о тронных гипо^изарннх препаратов разного производства па уровень супер-овуляци» качество вибрионов и ах пршзшлемостъ после перэ-садкг;

- изучить влияние эядсгенвях и экзогенных факторов на эффективность трансплантация эыйраоноа в условиях производства;

- оцредалить вэаишсвязь концентрация прогестерона и эст-радаола в крови реципиента с приштляеаоотью эмбрионов после псоесадки, а такав изучить влияние экзогенного введения прогестерона и сур^егона на функций желтого тела у реципиентов

и эмбриональную смертность;

- изучить'Ь^фектигносл- многократного использования высокопродуктивных выбракованных коров в качестве доноров эмбрионов;

- провести сраннительнуэ'оцеаку пржпЕЛя-ейостн сведено лущенных и зашрогеяко-оттаякных эмбрионов, транспортированных

и полученных в хозяйстве.

1.3, раучная ковнзда работы состоят в усовершенствовании существувдих способов гормонального вызывания супзровулящш у высокопродуктивных коров, определений эффективности многократного использования выбракованных коров в качестве доноров экЗ-ряонов, изучении влияния экзогенного введения прогестерона и сурфагона на фуккдап желтого тела у реципиентов а э^риональ-луи смертность.

1.4* Практически .значимости „габоуц заклинается в разработке системы целенаправленного отбора коров для псдодьзоЕаншг их з качестве донороз эмбрнонов. снижении эмбриональной смертности доело нехирургвческой пьресадог я повышении эффективности трансплантации в скотоводстве,

1.5. Апсобеттпя работц.

Основные поколения диссертации доложены г получили поло-зктельнув оценку:

- на еаегсдаых научных конфербяцяях отдела трансплантации эмбрионов п.-х. животных (1969,1990,1991 и 1992 тт.);

- на Республиканской научной конференции "Достстецгл биотехнологии к перспективы их разлития", Львов (октябрь, 1990 г.)

- на кездунарэдаок научной конференции "Трансплантация эмбрионов", Краснодар (август, 1990 г.). ' *

Осноззые положения к практические иредяоженвя вейдр^ек в ллеъкозяЕствах Межрайонного гтемпреотраятия "Краснодарское".

Диссертация состоит из введения, обзора литерачурм, риала и ыгтодов исследования, результатов г обсулдзЕЗЯ, выводов и списка литература* Объем работы - 119 страниц, включая 30 таблиц. Список литературы включает 2С6 работ, в том числе 112 иностранных.

2. ЖЕЕШЯ И НЕГОДК& ИССЛЕДОВАШЯ

Исследования проведены в агрофирме т. Калинина Каневского района Краснодарского края я в отделе трансплантации эмбрионов Ш£а в п зри од с 1938 по 19Э2 год на коровах красной степ-вой и черно-пестрой породи: в возрасте от трех до двенадцати лет как лактиругсщх, так и выбракованных из основного стала. Реципиентами служили телки э возрасте 16-12 месяцев с живой массой 350-390 кг с синхронизированным и спонтанным половым циклеа.

При отборе гс'вотпнх-донороБ учатиз&лз оЗзее состояние здоровья, состояние репродуктивной систа^, периодичность эстральккх цеклов. Гожойаиа.кув обработку коров-доноров древо дала по 4-дневной: схе::в. препаратами ОСГ-п (СИ) в дозе 32 и 40 кг а фс~<.тлптрсяин {Детва) в дозе 1200 ЕД лрп наличии в одном из ялчвяков хорошо зыранеаного зелтою тела. Охоту у доноров и реципиентов выявляли двадпл в день, утром и вече-рои, по налпчзз у них рефлекса неподвн^ности, Осеменяли доноров дваяда <гинтерваша 12 часов заморо^енно-оттаянноК спермой с содержанием не менее 50 пин спермаев з одно;! дозе. Донорам в день охота инъецировала препарат ЯГ "Оаогон-ЕО" в дозе ■ 1500 ЕД. Для извлечения зародысе:! использовала двузаавальние катетера модели "ЯоЕштадт-Айш" СФЕГ). Поиск шбраонов в промывной среде а оценку их качества осуществляли по ыетодпке <1387). В дальнейшем, в зависимости от их качества, лерасача-вала свежеполученпкш еле замораясвада.

Пересадку эмбрионов осуществляли нехдрургачески с есло.ль-эояание;л катетеров йярчн "Кассу" (Франция) и "Нокштадт-Ащ" (ФИ1). Для сеятия напряжения пейки л рогоз ыаткл применяли сакральнув анестезии с дополнительны! введением. релаксантов.

Замораянванию подвергала эмбрионы отличного л хорошего качества с использованием замораназателя "АС-гЗ" (Франция), Б качестве яряопротзктора применяли 1,0М'в 1,4,М раствор глицерина. Насыщение эмбриона кргопрогекторои перед заморозкой, выведение его и отшвку проводили по кет с дика ВФ&а. -

Серед гормональной обработкой у коров брала проб:: крова я определяли концентрации прогестерона а эстрадаола радпош-кунологнческим методом. Весь полученный ызтзрлал обрабатывала биометрическим методом по Е.К.Меркурьевой (19£2).

3. РЕЗШШЫ ИСООаОШНКЙ

3.1. Влияние различных гооцоиалыгкх препаштоз на уровень суне.ровуляцад. качество п штзнеспоссйность .вибрионов.

В исследованиях да групле коров красной степной и черно-пе строй пород бнло олределево влияние различных доз гдло^азар-

- s -

ehx гормонов на уровень суперовулящи я качество эмбрионов,

ils 133 обработанных коров реагировало суперовулкцией I2S алг 94,от числа обработанных. Псложнтельяю: доноров по извлечении зародасей бкло 106 ила 64,1% от числа оперированных. Было извлечено 5,9 зародила, s т.ч, 5,2 нормальных эмбрионов на донора (табл. I). ■ ■

Таблица I

Уровень суаеровуляШЕ и качество эмбрионов у коров-доноров

Препараты

Показатель фоллптрошщ «СГ-с, кг ФСГ-п + ЛГ

доза

1200 КС. . 32 40 Э2+Г50СЕ&

Обработано коров 22 62 16 13 Pearzposaxo суперову-

лдаеё, z-% 20-90,9 77-93,9 16 13 Числе овуляций на

донора I0,IiI,3 9,6+0,5 9,5+1,13 Ю,Ш,09

Положительных' доноров ео азвлаченго зародышей, п-% 16-80,0 67-87,0 11-68,8 I2-9B.3

Число зародазей на

донора ■ 6,7+1,22 $,6±0,51 5,6±0,86 7,8+0,98

в т.ч. нор:^альны1 5,8+1,12 5,2±0;ЗЭ 5,С±0,77 .6,2+0,98

Коровь*-доно|&, обработает;© ФСГ-п в дозе 40 ш* и в дозе 32 ыг в сочетании с "Оеогол-TÎÎO", 1005» реагировали суиеровуля-гщей.а било получено 9,5 £ 10,1 овуляций на донора. Прн обработке коров ^оллк троп дном результаты бнли аналогичными. При-цененЕе препарата "Овогон-таО" в сочетавкз с ОСТ в дозе 32 иг обеспечило получение 6,2 нормальных эмбрионов на донора.

Препарат ^олдйтрспян по своему биологическое^;действии не уступал препарату ФСГ-п ÎCIiA). Доза фоллктроопва 1200 ЕД и ФСГ-п - 3S мг является оптимальной. Препарат JT ("Овогон-Т/.О"), озтил^зируя продолжительность охотн, мделирует "био-хт-ическую сктуацкю" в ы&тке донора и о:;азквает благоярдятЕое деХстане на разглтке змбриозов,

3.2* Дталядя дососу цоксса и сезона уода нз умве^ суддровглязщ к улзн$спосоСно,сть эцбриоцоз ВзригЗельвость в реакции яичшщоз яд гояадотропшш яахо-дгтся в пределах от 0 до 50 овуляций на донора и связана с яндязндувльнша особенностями гивотгшс, условиями кормлении ж содержания. Коровы молочных пород гаеют более вязкую озу-дяторяув реащиа на обработки, чей коровы ыясных пород. Вероятно, имеются реэлстия в показателях суперовудядаа а среди пород молочного скста (табл. 2).

Таблица 2

Влияние порода донора на уровень супеосвулвдия и качество кабриозоз

■ Порода

Показатель Красная степная Черно-пестрая

ФСГ-я ^оллптролан ФСГ-п фоляатрошш

Обработано яоров 21 13 28 9

озу^И^лЗР**" 20-95,2 11-84,6 25-82,1 в 9-100,0 Часло овуляций на

донора 9,911,05 15,0*1,49 Э,3+1,09 6,0+1,63

Еолохгтельных доноров по взЕлечеяяю, ,

я - % 17-85,0 10-90,9 17-68,0 6-66,7 Чгсло эародншеЗ

на донора 5,5+0,81 8,44,33 5,7±0,92 -3,8+1,16 Процент от числа

озулякнЕ 55,5 5£,0 ' 61.2 63,3 , Получено норглалдннх ■

эьйрдоЕОВ на донора 4,6*0,69 7,0+1,29 5,2+0,86 3,-5+1,06 Процент от числа

*ародаае2 87,2 83,3 91,2 ЗЕ,1

т 71 обработанной коровы суаеровугятеИ реагировало 65, клг 51,5?. Ео^ожитедыак доноров по извлоч&аию эьйрионов было 50,гли 70,36» от числа оперлроианннх. Число овуляций на до-вора г.расяоЗ степной породе при обработке ^оллитрошшок и КТ-з составило 15,0 я 9,9, черно-пестрой - 6,0 и 9,0 на до-

нора. Доноров,положительных во гзалечена» эмбрионов,бкло г группе коров красной степной порода 90,9 в 85, СЙ, черно-пестрой - 66,7 г 66По числу извлеченных зародышей на донора коровы красной степной пород: превосходили коров черно-пестрой(8,4 и 5,5; 3,8 и 5,% соответственна. Нормальных эмбрионов на донора было больше у хоров красной степной породи* Коровы красной стегшой порода о^чпе реагировали на одинаковое доэн 'ОТ, тем черно-пестрые.

Число овуляций на донора в зл а осенний периода было висе на 24,4 и 19,7? по сравнению с летним периодом. В весенний а летний периода неошюдотзорекных яйцеклеток бкло больше на 14,3$, дегенерпроваяннх эубрзонов - ва 90,93, чем в среднее за эпьивЗ и осенний периода. Зимний и осенний периода характеризовались более высокий уровнем зоода норьйигьных эмбрионов на донора. Их было больше на 24,4 и 46, ЗЯ (табл. 3).

Таблица Э

Влияние сезона года на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

Показатель

Обработано коров

Реагировало супер-оьуляцией

Положи тел ьяьк доноров ■ по извлечению заро-

дшей, а-% 13-76,4 18-76,2 10-76,9 9-75,0 Число овуляций на

донора 10,7+1,18 10,1+0,87 8,6+1,16 10,3+1,11 Получено зародышей

на донора 6,3+0,87 6,5+0,78 6,Х±1,01 -7,6+1,14 Процент от числа

оаулащЗ 38,0 64,3 70,9 73,7 Число норг.:алыгшс

эмбрионов на донора 5,8+0,63 5,0+0,57 4,1+0,93 6,0+1,СО

Декабрь-февраль Царт- ■ ыаи Июнь-август Сентябрь-ноябрь

18 24 К 13

17 23 13 12

3.3. Злкянке ^оишнтпац^и прогестероне в крови корюд ра уровень супсрозуляцен н качество амбрионор

В исследованиях было проведено сопоставление качества Еелтого тела перед гормонально2 обработкой с урозвеу прогестерона и показателями суперовуляцки (табл. 4).

Таблица 4

Взаимосвязь ыеяду качеством келтых тел, концентрацией прогестерона в крова коров перед горгал^альной обработкой 2 реакцией яичников на гонадотропин

Показатель

Качество гелтого тела

отличное хоросее f™^

Обработано коров 19 23 17

Концентрация прогестерона, шУкв 1,2+0,22 1,5^0,14 1,3+0,14

Реагировало супер-

онумцвв2, П-% 15-78,9 19-62,6 12-70,5 Число овуляций на

донора 11,2+1,3 8,8+1,01 3,311,02 Получено зародышей

на донора 4,8+0,Ж 4,510,65 4,8+0,64 В том числе нормальных

эмбрионов 3,5+0,69 3,0^3,44 3,1+0,53

Из таблицы 4 аадно, что уровень прогестерона в крови коров по группам отличался незначительно. Однако число роа-гирущих суаероауляциеЗ заметно было меньше в группе коров с удовлетворительными желты:,13 телаглг (70,Кэ 12,1$ их реагировало больше в первой я на 8,43 во второй группе коров. Качество желтого тела незначительно влияло на члело овуляций и нормальных эмбрионов. Сопоставление средних-значений.концентрации прогестерона в крови доноров с уровнем овуляций показало четкуп зависимость этих показателей (табд. 5).

Праеылеиая реакция яичников на гонадотропик была получена у 63% коров с высокий уровнем прогестерона (2,0 нг/мл). Коровы почти не реагзроваш: на гонадотродин яри концентрации прогестерона 0,7 яг/мл. Толкло 72,2^ коров реагировало суперовуляцией с концентрацией прогестерона в крови от 0,7 до 1,1

яг/гл ярл среднем уровне обуднцйи 8,5; зародыше"-3,5 л нор-кальякя кя5рионов-2,6 на донора (табл. 6).

Таблица 5

Урезонь озуляцкй в зависимости от концентрадая прогестерона в крови коров ла день гориэнйпъной обработки

Количество Чксяз Кощгнтрапдя Процент от числа

хоров авуладй

"10 4 1,11 0,35 12,6

27 5-8 1,6 + 0,14 34,3

29 Э и более 2,0 1 0,15 36,7

13 отсутствие 0,7 1 0,1В 16,4

реакции на гокадотропин

Таблица 6

Результаты суперозуяящ:: к ч^сло нормальных а;.йраонов у ко роз пря разно:4, зга кцен трахея прогестерона

л

"Показатель прогестерона, кг/мл_

го 0,7 0,7-1,0 1,1-1,25 1,9-2,0 2,5-5,3

Обработано

коров 13 10 27 16 13

Реагировало суперозуляциой,

7,7 72,2 65,0 90,9 83,2

Число овуля^ай

на донора 5,3+1,15 3,510,69 8,3±1,С? П.Ш.6 13,2+1,32

Получало зарс-дше:; на донора 1,5+1,0 3,5+0,73 3,5+0,75 5,$¿1,5 8,5+1,0

3 тем часле коркальжх

ЭмсГрионоз £,210,76 2,410,41 2 ,8±0,53 3,010,62 5,6+1,25

Пр-т ксщзптрЕ!*::;! прогестерона от 1,1 до 1,25 кг/:.'Д супер-СБуляцце5 реагировало Ьа'Л короз яра сред;; ад ч;т.сле двулягяй 8,3,

- и -

зародыше* - 3,6; нориальк'-э: з^бршгов - 2,¿ на дкюра, С уье--тченге:: концентрадлк прогестерона от 1,5 до 2,0 нг/«д ncB'rsa-лось 'чзоло коров,p3áTipj:js;c: супе зозуля л eí: ,до озуля-

га'П - до II,1, ззрод:лк;й-до 5,5, ¿ормслыах эи-Зрнгаоз - до Z,0 на донора. У группе коров, у kotoj&dí уровень прогестерона óivn. от й,5 до 5,ü нгЛл,уровень озулщлг достигал 13,2 jipa чиста эародкае£ - 3,5 к кор;-:зльннх з^брнсяоз - 5,6.

ÍÍ3 прдведэадах дашшх следует, что ия прогноз^роэзягя суперовул^лпи клинически: -даккис состояния я^чш^коа не достаточно и счп ре отра-иг. объект горного з>: ¿кяполйггчее-кого состояния.

3,4, Нех^оУнГячссгтае ^влечение з:тбк:опоь

3 нйзеГ; работе по определении ¡ф^ективностя получеадя зародазей учнгкззлв чясло получешшх заросшей от Ееллчгяи потерь npo:.5JEi-:oÍ средк. При получении малого числа згрсдысей относительно чзсла озуляцш! проводили повторное дрогзгваяде paros :.:аггцз через 2-Й,5 часа после первого. При потерях ирошв-яо£ среды до Ь% от введенной извлекала Ад,3% зароджап от чес- ^ ла озуляии';, от 5 до 10? - 38,и ера потерях среда? cbkso -ь-^адГ ICfi - 35,Повторное про.'лаглпе рогоз маш1 позволяло увеличить знход зародите;: вря уровне потерь среда до Ь% на 9,2?, от 5 до 10,® ва 14,45 а свиэе IOS на 6,6«. Это сгзде*:едьствует о необходимости дальне libero усоз&ршютвоэаиия тешикй и технология гзвлечекня,

В назем исследована: на группе коров голати;ско5 породи Íизучено в"^становление полово" цккдячяоети при однократной bít3L'ü3Jí2:: с;- ■■^эзулякти и яехирургйчоснои извлечен;:;: зарз-дшей в различна сроки после отела (табл. 7),

Из 28 коров в первую охоту бшго осеменена 7,пла 25^, во вторую - 16 (57,1/5) а в третьи - 5 коров (17,Sí;},

Сервис-период составил в 1-й групяе 27 дней, во второй -117 к в третьей - 142 дня. Гормональное эузквгкие суперовудя-ц.чд я извлечение эмбрионов удлшшло сервис-лер:.од у коров-дозоров по группам на 31,33 и 37 дд; е?.. со о та е? с та о.

Таблица 7

Вл^лнгз гоог.ггиа^коЗ обработка £ пехьрурглчес;;ои> ::зълочекгл су.бриозсв на восстоковлеиЕе uocnpoasso-дптелько^ ¿унклдп "

Julian: .

Показатель Дедь/лиии

________________:г._______2______3. _

Чзсло HI'jsoihux IX 8 9

До начала обработка £6/62-^5 65106/21 -120 От извлечения эмбрдо-

нов до 1-й охоты 13/ В-И 12/ S-XS 1Э/П-1? До плодотворного

оск:екькгл 31/12-55 ггДч-ЬЗ „ 37/II-Tu Поодо'слт&яькостъ

сёрзис-пер;;ода 97/79-130 07^103-121 I42/IC5-1&I

3.5. Зависимость гтол^зл^е.-хсти от стадги

ях^азф^дя^ качества г rooo.n: jo:-;csa

В процентном отншениг. поздяях иорул д раачях блгстоцдст б1*ло - 78,(45,7 л 32,7,1}, сос?зетст8скй£ рангах :.;орул -

с поздних бластодаст-- 12,5?. й.:5р:;сЕов отличного и э:сро-сего качества бнло 30,1 к 49,удовлетворительного - '¿5% г дегенерирозаяньсс змбрлоноз - 9,8^.

Бг^ло пересажено 259 э;.:браокоэ телка:,аз вия ISO э.\:бр::сков от косое краской стенкой горо;:^ к 1С5 - чграо-пестрой лорода, а.-бркокоз стлачдого а zoscaero качества оказалось 193 и удовлетворительного - 63» в том числе 1С4 я 46 _ от коров красной степной порода 2 S2 и 17 - черно-пестрой пород», Э^бр^окк, поденные от дояоров разнга пород я вря маз-породноЙ пересадке, яызла одквакову» пр2ГЛЕЛяа*,;ссть. Несколько Base показатель о тельное та от пересадка э:,з5раонов б^л у коров.. черно-зостро:- порода во сравнен!® с красно? стедкол (табл. 6).

Два £;жснен::к :• ндпёздуалького злится з:оровы ка прг-^вля-о;,'иоть Zi горой-донороа былн подвергнуты ¡.'.г.сгскргт-

j-Gi. обработке (I-G) проз еде ~

-*0с\.,г; о::;:: г ::ь:."о;:;;юстк от vx улч^г.твй.

Таблица 6 * Приживляемоетъ эмбрионов в зависимости от их качества и породы донора

Порода

Показатель - Всего

краснея черно-степная пестрая

Яересааено зьйрзонов

Стельных решшдентоз

Процент стельности

В т.ч. эмбрионов отличного а хорошего качества

удовлетворительного

Стельных реципиентов, а-% от пересадка эмбрионов: отличного и хорояего качества

удовлетворительного

150 109 259

53 43 96

35,3 39,5 37,1

104 92 I®

46 17 63

42-40,3 38-41,3 80-40,8 11-23,9 5-29,4 16-25,3

Яэ 14 норов 3 (21,4$) не дали ка одной нриллзллег.юсти эмбраонов. При,чпзляе:лость эмбрионов отличного качества составила 45,хорошего - 39,85?, удовлетворительного - 29,1;". Эмбрионов отечного качества было долучезо 16,хороагл -61,2%, удовлетворительных - 21,92, дегеярировакккл - Ё,7% от общего числа зародааей. Поэтому подбор в группы постоянных до-доров целесообразно проводить с учетов пркклзляауосте подученных от ндх эмбрионов.

Приянвлнемость поздних мсрул отличного я хорошего качества составила 47,1$, ранних бластоцаст - 5С0, удовлетворительных - 29,4^ и поздних бластсцяст - 12,Прикг.вхяемость условно годных ращшх и поздних блзстоцист составила всего 22,2?.

Анализ качества свекеполученнкх и за^оро.-дашо-отталнкых зародышей показал, что большинство из ндх шелк от 1-го до 3-х морфологических отклонений в клеточной структуре, Из 295 исследованных све?£юс зародышей 44,4:3 не шелк адахо; морфологических отклонений, и был получен самки бксокйЙ процент их приживляемо ста (51,9) после нехирургическоГ: пересадки телкам-регаяи-ентам (табл. 9).

Тайдвда 9

Притлвляе;.:ость свеззполученных зародалаей после пересадил без и с видимьми морфологическими отклонениями

Помологические отклонения

Пересажено

Процент от об— Стельных цгго числа рэщшяен

те!)

Морфологически нормальные

131

44,4

66-61,9

От 10 до 20£ бласто-

мероа разрушены 12 4,1 4-33,3

Неравномерное развитие .выделены бластомери

с Ч2стичнцм разрушением Э4 31,9 28-29,8

Дефекты зоны пеллэдида а частичное разрушение

клеточного комплекса 6 2,0 1-1£,7

.9

Выделение бластоыеров сопровождалось снижением пряхавля-еиостл зародышей на '7,1% (44,2^) по сравнению о зародышами без морфологических отклонений. Пряжиэлягмость зародшшй с частичном разрушением бластомеров была еще ниже а составила только 33,3:5. Хотя число их было небольшим (4,1?). Относительно невысокий процент (31,9) составили зародыш с неравномерным развитием, выделенными и частично разрушенными бластомерама. При-.тавляе:,:ость их была низкой и составила 29,6$ от числа переса-геякнх. Дефект вош деллщкла с частичным разрушением клеточного комплекса был у незначительного числа зародышей (2%) а лраялвллемостьэ 16,7*.

Закорачивание а дательное хранение зародышей заметно сникает их лизкеспособность, Вероятно, это является следствием новрезденая зародышей при зашраяавании и оттаивании.

Нэ £21 заморохенно-оттаянного зародапса 73, или 33£, вв. имели вздшых гомологических отклонений в структуре клеток; у 14 (6,3£) били ввделены бласто:1еры,у22 (10^) наблюдалось частичное разрушение бластоыеров 62 {28,1%) - до$ект зоны пеллацзда ила её полное разрушение л 50 (22,6$) наели несколько отклонений от корелы. Пересадка завороженно-оттаянных заро-

73 33,0

14 6,3 5-35,7

22 10,0 7-31,8

62 28.1 19-30,6

50. 22,6 14-28,0

дгае! без лгарфол огаческдс отклонений обеспечивала 43,85

стельнзстеЗ (табл. 10).

Таблица 10

Пряливляетость заыоро^енЕО-оттаяыеас зародьшюЗ а зависимости от ах морфологического качества

Морфологическое Пйчрля^л-п Процент Стедьякх

^его центов.

Но^ыальные, без вшс^сс иорфологхческпх отклоае-

" Еыдаланк бластсаерн

Частичное разрушение блас-тоыероа (от 10 до 203)

?азруазняе ели деформация

• зоны пеллшяида

ЗЬделенн бласгоиерв, частичное их разрушение, грануляция клеток в зоне

. При наличии морфологических отклонений в зародангй пркянв-ляеаость их после пересадки снизалась. Так, при пересадке заро-хлзе2 с внделеннкми бластомераш стельность составила 35,с частичным разруашнявы бластомероэ - 31,855, с разрушением дли деформацией зоны пелллада - 30,6? и при наличия 2-х я более морфологических изменений стельность была зарегастрзрована у 28* реципиентов, что на 13,8? меньше,по сравнение с результатами пересадки нормальных зародаией.

3.6. рлиянде концептсацдд .дрдге.с^ерояа в крови ^дяпдр.чта ра, вдлжлвляемость элевонов

В исследованиях изучена прязквлнеыость эмбрионов в зависл-кости от гормонального профиля перед пересадкой (табл, II).

При вязком уровне прогестерона (до I яг/мл) возрастает концентрация эстразаола в среднем на 43 пг/мл при хоэ^-ищюнта изменчивости 52Пря таком гормональном про:Т.пле крпялвляе-мость эмбрлолоз очень низкая (П,7£). С уьел^че.'мем концентра-

ции прогестерона от I до 3 нг/мл снижается уровень эстрадподп г среднем до 25,6 иг/мя, вариабельность-до 37,7£,и повышай»! . ариянвдяачость эмбрионов до 32,4$. Приведенные дал яке показывают, что дай получения приемлемо* стельности (50$) концент^а-цая прогестерона в крови животных долища быть от 2 до 5 вл/ти

Тайпида II

Приживдяемость вибрионов в зависимости от концентрация прогестерона и эстрадиола ь кровл ревдшентов

Колцентрашя . Число Стельных Процент

реии- рвцщшен- стель-

прогестерон, . эстрада ол, пиентов тов иости

яг/ие дг/мл

"ЬТа! I 0,03** ~ **48,4 + 1,8 " ~19 " " ~ 2 П~7

2,0 + 0,05 25,6 1 0,9 III 36 32,4

3,7 ± 0,08 25,7 + 1,8 44 21 47,7

II,1 1 0,9 26,9 ¿ 1,7 26 Ыу 42,£

Синхронизация охоты кояет увеличивать измектзвость б мор-фо-ф?нкциональнои состоянии эндометрия у реципиентов в оказывать негативное влияние аа прлживляеыость эмбрионов (табл.12).

. . ;. Таблипа 12 Приживляемоетъ эмбрионов у рецоняенгов с естественной я синхронизированной охотой в зависимости от гормонального профиля перед пересадкой

Охота ■

Показатель ..................................

спонтанная евнхроКЕЗИроваяная

Концентрация прогестерона, нг/шг .1,87 3,5 10,6 2,3 3,8 11,9

Эстрадаола, пг/кл 26,7 27,3 26,5 21,2 2},3 26,5

Пересалено вибрионов 6Г7 £1 1Э 24 23 7

Ствльншс рецляаентов 32 12 8 4 9 3

Процент стельности 36,8 57,1 42,110,7 3?, 42,6

При концентрата прогестерона о? I до 3 нг/ил сгольность при спонтанно! охо^е составила Зо,££ Лрстлз Хб^-э ^ахронжв-'

рогаягузз охоту, от 3,5 до 3,8 ег/мя - 57,1 и ЗЭ,1й, соответственно. Одинаковая прп.'зпзляем ость даЗрзозов а группах была при коз^ цезтрацнз прогестерона снкле 10 нг/ал{42,1 л 42,S,í).

Ера уровне прогестерона до I нг/ia асгшаяйемостъ эмбрио-ноз, независимо1 от ах качества,бкла очень нззхоХ. С аовкзенгеа его концентрация увеличивалась г пр^кавляемость эмбрионов отличного 2 горосего качества. Так, ери концентрации прогестерона от I до 2 ег/jk стельность составила 40,63; от 3-5 нг/ал -565 з более 5 нг/ш - 5Q,Í. Аналогичные результаты бстк получены при пересадке эмбрсснсв здозлетворительногс качества, ео при етсг прослеживается. срл^ая заЕИсгмость результатов стельности от горцозалькэго профиля я качества з;лср.:сноз. При уровне прогестерона от I до 3 нг/ая стельность составила 21,1%, от 3-5 лг/аи - 36,ЭЙ, более 5 нг/мл - 31,2^ (табл. 13).

Таблвда 13

Результата пересадка эмбрионов в зависимости от ех качества и гормонального профиля в крови рецзппентов

Концентрация Ячество змбогояоз

прогестёрсза, отечные и хо'зо'изе

нг/ии : Ó,79"O7O4 пересажено ;___эМч£2.2Ц0В_ _ 13 стельных процент ¿едиглентов стельности^ Í

2,1 i 0,07 £4 ' 26 40,6

3,7 1 0,03 25 " м . 56,0

12,3 i 1,3 12 ' 6 50,0

удовлгтзо рс тельнне

0,89 i 0,05 6 I 16,7

1,9 10,09 46 10 21,7

3,7 i 6,10 18 7 зе,9

3,9 í 1,7 IS' 5 31,2

'Гедзау-рецидиеятам за 45 часов до пересадки инъецировали до 30 мг 1%-го масляного раствора прогестерона (табл. 14)*.

Дри введения экзогенного прогестерона заметно повивалась его концентрация в крови с колебаниям от 1,6 до 11,2 нг/ил, при стабильном уровне гстрздиола (22,3-23,2 иг/мл). Отмечено

эаметйое ^иелкчепкс процента стельностей после пересадки еа^о-ро;:еш:о-от хаянных э^бриоков. Так, в контроле при концентрация прогестерона до I нг/ул стельность не зарегистрирована, от I до 3 нг/мл ока составила 37»5£, от 3,6 до 10,4 нг/ш: - 44,4%. 3 опыте при концентрации от 1,6 до 3,0 яг/ш - 40,0?, от 3,1 до 4,9 нгДи - 42,1 и 6,9 - до 11,2 вг/ыя - 50$.

ТасЗлсад 14

Блияняе экзогенного прогестерона на прибавляемое«. заь:ороаенко-оттаянкиг: экбрис«ов

Показатель _^^__

контроль ■ экьогскякй прогестерон

Прогестерон,

Н^Дя 0,£6-1,0 1,0-3,0 3,6-10,4 1,6-3,0 3,1-4,5 6,9-11,1

Эстрадгол, щуш

Пересажено о

а-лорпоноа 7 8" 9 10 14 16

Стельных

реципиентов - 3 4 4 6 6

Процент

стельности . - 37,5 44,4 40,0 42,1 50,0

:традкол, -

■Aw 32,1 25,8 20,7 22,3 23,2 22,5

3.7. Влцйкле заггоражвандя и оттаивания нц жизнеспособность эдбвнонов

Исследования проведены на 233 змбппока^ на разных стэдеях развития а качества. ■

После отта£ваняя пригодных к пересадке оказалось 190 эмбрионов или 81,5$, Обяая стельность телок-рещшиентов составила 36,8?». Еизнеснособкость эмбрионов црк з^мрадиваали и оттаивании заэлсела от стадян их развитая (табл. 15).

Приш'злнемость 5&\;орояекнэ-отгаянных эмбркоков била более высокой при пересадке цоздагх бластоцнст (44$), Кика этот показатель был у поздних по рул (33,7,2) а ранках бластоцкст (37,5S), Ьыло определено влияние качества эмбрионов после за^орагл-вакдя, оттаивания я пересадки на их приживляемость (табл. 16).

Табливд 15

дЕэнеспособиооть с приживляемоеть эмбрионов в зависимости от стадии развитии

Показатель

Общее число

Стадия развития

ыорулы поздние

бластошстн

ранние

поздние

Заморожено и оттаяно эмбрионов 233 96

Пригодных к пересадке (п - %)

Количество пересадок

Стелынх реципиентов

Процент стельности

190-81,5 77-78,5 190 77

70 3£ »в

2&. 33,7

104 80-84,6

68 33

37,5

31 25-80,6 25 II

44,0

Таблица 10

Прихияляетсть эаморокекно-оттаянных эглЗриснов разного качества

Качество эмбрионов

Пересажено эибрионов .

■ Стельных реципиентов.

18 17 I

Процент стельности

Отличные 71

Хорошие 41

Удовлетворительные 54

Условно годные 24

47,9 43,9 31,5 4,2

. При пересадке эмбрионов отличного и хорошего качества была получена высокая яри.'шзляеморть за^орозенко-оттаяшшх эмбрионов (47,8 и 43,3$). Пересадка удовлетворительных и условно годных амбрионоЕ сопровождалась низкой прзаивяяемостав (31,6 п

Отмечено усиление криозащятного действия псвышеняоЗ концентрации глпдернза при насыщении эмбрионов в четыре этапа. Почта при одинаковой выживаемости эмбрионов процент их прикиз-ляемоств бвл несколько выше. Прошшляеаость /эмбрионов заморо-

-19-

searax в I,CJ гдкдерзше составила 41,2J, а в 1,Ш глицерине -Прг^онеЕле раствора сахарозы ускоряло я упрощало подготовку зибряояов к пересадке при вполне приемлешх результатах стельности (табл. 17).

Таблиод 17

дсзвеспособаость а при^влкеуость эмбрионов в завлся-мэста от способа удаления ;;риопрстектора при оттаивании

Сттагланде

Показатель Х.4.М оез с са- с са-

еахароза харозсй хаоозой хароэой

4 этапа 3 этапа 3 &гала I ?гап

34

-28-32,2 20

6

30,0

За'.юратлвйклэ в медленном рзшив я лра 4-х этапном удалении крподрогезтора без раствора сахарозы, после оттаивания оказались пригодными для пересадки ¡62,9$ вибрионов»

. Нами сделана попытка транспортировки глубокозааороаеиннх эмбрионов на дальние расстояния о оттаиванием г пересадкой их в условиях фермы. Эмбрионы, полученные от коров-донорбд черао-гестрой породы,были заморожены, хранились в гидком азоте более -6 иэсяцев п поездом лз Дуйровиц (КЗ) были перевезены в колхоз ш. Калинина Краснодарского края. На ферме они была оттаяны и лереса^ены 72 телкам-рецгаиентан ираско-стедной порода. В per зультате бщо подучено 23 теленка; II телочек я 12 бычксв [табл. 18).

Зэыооонено я от-

таяно ьмбриснов 41 44 35

Природныхк переездке, п-% 34-82,9 37-84Д 29-62,9

Чгсло рещшнеатоэ 34 37 26

СтельнаХ реципи- 14 13 &

ентов 6

Процент стельности : 41,2 35,1 £3,1

Таблица 1&

Результате пересадки за&орсхезяо-оттаянна* транспортированных агбрдопсв

Показатель

Качество эмбрионов

отличные хорошие

удзвлетзо- условно-рптельные годные

Пересагеао эмйраоноа Стельных редягшектов Процент стельности Получено тзлят

15 ?

45,7

7

16 32 5 9

31,3 2&,1 5 9

22,2

9 2

т

Общая стельность от пересадки залоро.^енно-отталзтък эмбрионов составила 32,1*.

4. ШВОШ И ПРАКПГЧЕШЕ ПГЩуЮНШШ

1. Препарат ФСГ (фрллитрошш) Литовского производства по своему биологическому действие не уступает КГ-д производства ОЙ. Вюшченле в схему гормональной обработки преларата ЛГ "Озогон-Тио" увеличивает число озуляциЗ н выход нормально эмбрионов до 6,2 ва донора. Коровы красно-степной породы превосходили черно-аестрых по числу озуляшш Е нормальных эмбрионов. Оптимально!! дозо2 ФСГ-п (США) и ^.олллтропана следует ста тать

32 ыг и 1200 ВД,

2. Сезон года оказывает определенное влияние

на уровень суперовуляцви и выход нормальных эмбрионоз. В осенний, з,иий и весенний периода нормальных эмбрионов .чаяно получить на 24-46% больше, чем в летний период. Коровы красно-степ-вой порода лучше реагирует на одни и те же дозы препаратов ХГ, чеу черно-пестрне. Установлена прямая связь концентрации прогестерона в крови коров-докоров перед обработкой с качеством желтого тела, часлси овуляций и нормальных эмбрионов,

3. Однократная гормональная обработка и нехир^ргпчесхое извлечение не оказывают отрицательного влияния на последующую воспроизводительную способность короз. 3 перзуз охоту ь;аыю плодотворно осеменить 25%, во втору» - 57,1^ и в третье - 17,8)1 ■•.ороз. Сервис-период пра гормональной обработке зависит от на-

чаш использования короз после отела *в качестве доноров эмбрионов. Эффективность извлечения зародгшей зависит ог потер. среди при промывании poros изтки. При потерях среда от аведешю^ до Ь% эффективность извлечения зародышей о; числа овуляций со-, ставляет 48,8Í, от 5 до 102 - 38,556 и более Ш - 35,82. Повторное промывание рогов маяки позволяет увеличить выход'зарода-шей на 9,2, 14,4 и 6,6$, соответственно потерям промывной среда.

4. На 7-Й день извлечения эмбрионов в средней получают до в,б£ ранних в 45,7^ -поздних мор^. 32,7^ ранних 3"12,9>Е поздних бластоцист. Эмбрионов отличного качества - 30,1$, хорошего -49,Gí, удовлетворительного - 25% г детенерированнкх - 9,8$. Приглвляеиость гмбрионов зависит от стадия их развития и качества. Чем больше доврезденай, тем яине приаивдяемость свезенолученных и зауороненно-отЕаяннихэмбрЕОЯоз. Доноры разных пород ярл межпородной пересадке имеет одинаковую при2и£л>.е«0сть,

5. Установлена связь концентрации прогестерона в крови реципиентов с прязивляеыостью эмбрионов после*пересадки. Дм по^ лучения приемлемой стельности (50£) концентрация прогестерона

в кроки реципиентов должна быть от 3 до 5 sr/ил, Инъекция экзогенного прогестерона повисает концентрации его в крова животного и сопроводцается улучшенной приапЕЛяеиости эмбрионов.

6. Пересадка за^орояенно-оттаянныхэмбрионов отличного и хоронзго качества обеспечивает более ах празшвляеаости после нехирургяческо£ пересадки.Увеличение ■ концентрация глицерина до 1,4М а применение раствора сахарозы при оттаивании повышает . ¡жизнеспособность и црлгивляшость эмбрионов, '

Практические предложения. Для увеличения числа овуляций, вихода нормальных э;,;брзояов рекомендуется применять препарат -ЯГ в дозе по I5CQ ИЗ под первое и второе осеыеяенне. Для повн-иежк прлддвляемости эмбраоков - инъецировать.экзогенный 1%-нИ гледлнкй раствор прогестерона в дозе 30 ¡¿г за 52 часа до пёресад-кк. ' '

Сцясог. работ, опублакованкпх по теме диссортацал

I. Сергеээ Н.И., Лебедев З.И., Ефремова ;J.h\, Сг.шслова Н.И, Г.^я'ллиой 13,Vi. Траксстлаятйция о;,:йраоноз в практике скотоводства.

//Зоотехния. - 1991. - ХгЮ. - С. 54-58. '

2. Смыслова Н.И., Бутпмаиов ВчИ. Влияние некоторых факторов на жизнеспособность и приживляем ость заморо-женно—эттаянных эмбрионов, //Бюллетень ВАСХНИЛ, Вып. 104 - ДубрОЕнаы . - - С. 72-75.

3. Бушманоа В.И., Смыслова К.И. Уровень суперову-ляцин, качество и приживляем ость эмбрионов у коров различных пороа //Бюллетень ВАСХНИЛ Вып. 104. - Дубровины. - 1991. - С. 18-21.

4. Бу^маиоа В. 1!, Опыт применения метода трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота //Информационны;! листок - ЦН^И. - Краснодар - 1990. - N¿4-90. -С. 1-4.

1. 3 г. Зак.о 77

1 ~0 • ^ о 0,Vч,

Г!ЛЦ| ЗПЖл.