Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Уровень ингибина-А и маркеры воспаления как прогностические факторы развития бесплодия у женщин, перенесших трихомониаз

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Уровень ингибина-А и маркеры воспаления как прогностические факторы развития бесплодия у женщин, перенесших трихомониаз"

00500434а

На правах рукописи

Гудинская Наталья Игоревна

УРОВЕНЬ ИНГИБИНА-А И МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ КАК ПРОГНОСТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РАЗВИТИЯ БЕСПЛОДИЯ У ЖЕНЩИН, ПЕРЕНЕСШИХ ТРИХОМОНИАЗ

03.01.04 - биохимия

- 1 ДЕК 2011

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Краснодар - 2011

005004345

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: докгор медицинских наук, профессор

Николаев Александр Аркадьевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Нагиев Эйзудин Рамазанович

кандидат медицинских наук, доцент Корочанская Светлана Петровна

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоо хранения и социального развития Российской Федерации (г. Москва).

Защита состоится \ 1 г. в часов на засе-

дании диссертационного смета Д 2<()8.038.02 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования « Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. (861) 262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России

Авторефератразослан «2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д208.038.02,профессор Л.А.Скорикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Выраженное влияние частоты бесплодных браков на демографическую ситуацию в популяции имеет важное социальное значение.

До сих пор остаются малоразработанными и спорными вопросы этиологии, патогенеза, а также выбор наиболее эффективных схем лечения различных форм бесплодия.

В структуре гинекологических нозологий воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ) занимают первое место, в 60% случаев причиной ВЗОМТ являются инфекции, передаваемые половым цутем [А. Л. Тихомиров, С. И. Сарса-ния, 2004]. Н.С. Wiesenfeld [2002] установил прямую зависимость частоты бесплодия от количества перенесенных в прошлом обострений воспалительных заболеваний половых органов.

Уменьшение овариального запаса может быть важным фактором, когда никакое другое очевидное объяснение происхождения бесплодия не найдено [Use A.J. van Rooij, Frank J.M. Broekmans et aL, 2006; Г.И. Табеева, JI.A. Марченко, 2009]. Установлено, что высокой точностью определения овариального резерва обладают методы, основанные на определении уровня различных пептидов, вырабатываемых в яичнике (ингибин-А и ингибин-В, активин-А, ангимюллеровый гормон). Прикладные методы оценки овариального резерва, применяемые для установления риска развития бесплодия, не имеют до настоящего времени объяснения причин этого явления и роли в его патогенезе ингибинов, в частности, ннги-бина-А.

В настоящее время ряд исследователей [A. Bukman, М. J. Heine man, 2004] пришли к выводу, что даже наличие достаточных уровней ингибина-А в крови не всегда гарант успеха при лечении бесплодия. Вероятно, это связано с наличием у пациентов биохимических факторов воспаления (цитокинов,

3

острофазовых белков - БОФ), вызывающих снижение биологической активности ингибина-А. Выяснить этот механизм мы и попытались в нашем исследовании.

Цель исследования

Установить характер изменения уровня ингибина-А и факторов воспаления (цитокинов, БОФ) в сыворотке крови и их взаимосвязь с развитием бесплодия у женщин, страдающих хроническим трихомониазом.

Задачи исследования

1. Разработать способ выделения и очистки ингибина-А.

2. Определить уровень ингибина-А в сыворотке крови женщин, страдающих хроническим трихомониазом.

3. Оценить продукцию ингерферона-гамма (1Шу), ингерлей-кина-1бета (1Ь-1р), ингерлейкина-8 (1Ь-8), интерлейкина-10 (ГЬ-Ю) мононуклеарами периферической крови, и определить уровень БОФ (С-реактивного белка (СРБ), лактоферрина (ЛФ), фибриногена (ФГ), альфа-2-макроглобулина (МГ)) в сыворотке крови женщин, страдающих хроническим трихомониазом.

4. Оценить влияние маркеров воспаления на функциональную активность ингибина-А.

5. Разработать прогностические критерии развития бесплодия у женщин, перенесших трихомониаз, на основании исследования молекулярных маркеров, для улучшения диагностики и тактики лечения.

Научная новизна

1. Впервые по результатам комплексного исследования ин-терлейкинов и БОФ показано, что только уровни СРБ и ЛФ достоверно различаются в группах женщин с развившимся бесплодием и неосложнеиного бесплодием трихомониаза.

2. Показано значение уровней СРБ и ЛФ для прогноза развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, пере несших трихомониаз.

3. Впервые дана характеристика способности молекулы ЛФ образовывать межмолекулярные комплексы с ингибином-А и снижать функциональную активность ингибина-А в биологических тестах.

4.'Впервые разработан способ выделения и очистки ингибина-А, основанный на бутанольной экстракции, преципитации сульфатом аммония и аффинной хроматографии на иммобилизованном лектине клещевины

Научно-практическая значимость работы

Разработана система комплексной лабораторной оценки овариального резерва, основанная на определении уровней ингибина-А и биохимических факторов воспаления (СРБ и ЛФ) у женщин, страдающих хроническим трихомониаз ом, показана прогностическая роль этих факторов в развитии бесплодия.

Разработан способ выделения и очистки ингибина-А.

Разработаны прогностические критерии развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, перенесших трихомониаз, и выведено уравнение прогностической вероятности развития бесплодия.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У женщин, страдающих хроническим трихом ониазом, отмечена высокая вариабельность уровня ингибина-А в сыворотке крови: от 4,3 нг/л до 29,4 нг/л. Вторичное бесплодие развилось на фоне пониженного уровня ингибина-А в 63,2% случаев, а на фоне нормального уровня ингибина-А у 12,9% пациенток.

2. Исследование продукции I , II--1(3,1Ь-8,1Ь-10 мононук-леарами периферической крови у женщин, больных трихомо-

ниазом, показало преимущественное формирование иммунного ответа по типу Th-2.

3. Показано, что только уровни С-реактивного белка (СРБ) и лактоферрина (ЛФ) достоверно отличаются в группах женщин с развившимся впоследствии бесплодием и неосложнен-ного бесплодием трихомониаза.

4. Дана характеристика способности молекулы ЛФ образовывать межмолекулярные комплексы с ингибином-А и снижать функциональную активность ингибина-А в биологических тестах.

5. Показано значение уровней ЛФ и СРВ для прогноза развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, перенесших трихомониаз.

6. Разработан способ выделения и очистки ингибина-А, основанный на бутанольной экстракции, преципитации сульфатом аммония и аффинной хроматографии на иммобилизованном лектине клещевины.

Апробация работы и публикации

Материалы, вошедшие в диссертационную работу, ее основные положения были представлены и обсуждены на: Международном Междисциплинарном научно-практическом Семинаре и Научном Дискуссионном Клубе «IW+SDC"07» «Новые Технологии в Ингегративной Медицине и Биологии» (2007г., Паттайя - Бангкок, Таиланд); II съезде физиологов СНГ (2008г., г. Кишинэу, Молдова); Объединенном иммунологическом форуме (2008г., г. Санкт-Петербург); Международной конференции «Физиология и патология иммунной системы» (2008г., г. Москва); VIII Межрегиональной научно-практической конференции «Лекарство и здоровье человека» (2009г., г. Астрахань).

В соавторстве с д.м.н., профессором A.A. Николаевым, д.м.а О.В. Бойко, д.м.н. Д.Л. Луцким, д.м.н. A.B. Бойко и к.б.н. М.В. Плосконос получен Патент на изобретение «Пига-

тельная двухфазная среда для выделения трихомонад» (Патент № 2272834 от 27 марта 2006г.).

В соавторстве с д.м.н., профессором A.A. Николаевым, подана заявка на изобретение «Способ получения и очистки ин-гибина-А человека», о чем получено положительное решение о выдаче патента от 17.06.2011г. (заявка №2009149599 (073251) от 30.12.2009г.).

Работа прошла апробацию на межкафедральной конференции с участием кафедр общей и биоорганической химии, фармацевтической химии, биохимии, нормальной физиологии, патологической физиологии, микробиологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвигия России; кафедры молекулярной биологии, генетики и биохимии ГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет».

По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 3 статьи в центральной медицинской печати, рекомендованной Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 14 рисунками, содержит 9 таблиц.

Список литературы включает 268 источников, из них 31 отечественных и 237 иностранных авторов.

Материалы и методы исследования

Материалы исследования представлены образцами сыворотки крови 270 больных женщин, получавших лечение по поводу хронического трихомониаза в ЛПУ г. Астрахани, а также сыворотками крови 22 доноров - здоровых женщин (таб.1).

Все больные обследованы в соответствии с принятыми стандартами, включая клинико-инструменгальные и лабора-

торные методы. Диагноз устанавливали в соответствии с МКБ 10-го пересмотра.

Таблица 1. Характеристика биологического материала

Наименование биоматериала характеристика групп количество проб

Сыворотка крови женщин: страдающих хроническим трихомониазом 270

не страдающих трихомониазом, в т.ч. в анамнезе 22

В экспериментах использовано 384 мышей - самок в возрасте 2 недель. В каждой опытной и контрольной группе жи-зотные были одного возраста и веса. Они содержались в стандартных условиях, с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях [1986].

Использовали следующие методы исследования: электрофорез в полиакриламидном геле, иммуноэлектрофорез (ИЭФ), ИФА, аффинную хроматографию, гель-фильтрацию.

Используемые средства: тест-системы на: ингибин-А, lFNy, IL-lß, IL-8, IL-10, СРБ, ЛФ, фибриноген, альфа-2-МГ; носители для электрофореза, хроматографии; буферные растворы.

Статистическую обработку полученных количественных данных осуществляли с помощью пакета статистического анализа Statistica 6, SPSS V 10.0.5, программ «STATLAND», «EXCEL-97», «Basic Statistic» с учетом стандартных методик вариационной статистики, включая вычисление критерия t Стьюденга для оценки достоверности различий. Данные представлены в виде М±т, достоверные различия обсуждались при t=< 0,001.

Результаты исследования

При исследовании сыворотки крови женщин, страдающих хроническим трихомониазом, и практически здоровых фертильных женщин, было установлено: в контрольной группе средний уровень ингибина-А составил 15,2 нг/л., в группе больных трихомониазом отмечена высокая вариабельность результатов: от 4,3 нг/л. до 29,4 нг/л. По уровню ингибина-А больные разделены на две группы: с низким и нормальным уровнем.

Оценка гинекологического статуса больных по данным историй болезни показала, что в группе больных с нормальным уровнем ингибина-А в ходе заболевания вторичное бесплодие развилось у 30 человек (12,4%), и было связано со снижением овариального запаса (нарушения менструальной функции, ановуляция). В группе со сниженным уровнем ингибина-А в ходе заболевания вторичное бесплодие развилось у 24 человек (63,2%).

Для оценки роли ингибина-А в развитии нарушений репродуктивной функции при хроническом трихомониазе, была проведена оценка состояния иммунной системы и маркеров воспаления (рис. 1)

Рис.1 Уровни маркеров воспаления в крови женщин, страдающих трихомониазом 9

У здоровых лиц продукция IL- ip мононуклеарами in vitro в среднем составила 103,6 пкг/мл. У больных показатель спонтанной продукции IL-1 р был в 3 раза повышен (до 292,5 пкг/мл). Спонтанная продукция IL-8 в группе больных была чиже нормативных значений (10,9 пкг/мл), что свидетельствует о снижении, в частности, фагоцитарной активности. Спонтанная продукция IL-10 у больных повышена до 1565,0 пкг/мл или более чем в 8 раз.

Уровень СРБ повышен более чем в 65 раз до 19,5 мкг/мл. Уровень ЛФ в 8 раз выше, чем в группе здоровых. Такое повышение уровня ЛФ не характерно для большинства хронических бактериальных инфекций и чаще наблюдается при острых инфекциях, в том числе, и приЗППП.

В группе больных с нормальным уровнем ингибина-А у 30 женщин отмечено впоследствии развитие бесплодия. Полученные результаты свидетельствуют, что только два маркера воспаления в крови женщин, страдающих трихомониазом, имеют достоверное различие концентрации у женщин с нарушением фертильности и без нарушений фергильности. Это СРБ и ЛФ (рис.2)

■ без нарушений фертильности с нарушениями фертильности

350% "I....................................................................................-............................................................................................................................................

300%........................——...........................................................................................................................2Е-------

250% .....................................................-........................................................................-..........................................

Hi щ

200%......................................-......"......................—...........................................................р...................#---------------

150%

Рис.2. Уровни маркеров воспаления в крови женщин с нормальным уровнем ингибина-А страдающих трихомониазом.

10

Естественно предположить, что эти маркеры воспаления в определенной степени связаны с развитием нарушений репродуктивной функции у женщин, страдающих трихомониа-зом. Мы сочли возможным провести экспериментальное исследование биологической активности ингибина-А, в присутствии Л Ф и СРБ.

Для экспериментального исследования биологической активности ингибина-А нами был разработан метод его выделения и очистки.

Для приготовления экстракта, содержащего ингибин, кусочки плаценты гомогенизировали, добавляли бутиловый спирт, центрифугировали с эфиром.

Затем надосадочную жидкость смешивали с равным объемом насыщенного раствора сульфата аммония, центрифугировали, осадок растворяли в ТРИС-НС1 буфере. Заключительная стадия очистки ингибина-А основана на обнаруженной нами способности лектина клещевины преципитировать ингибин-А и представляет собой аффинную хроматографию ингибина-А на иммобилизованном лектине клещевины.

Препарат ингибина-А гомогенен при электрофорети-ческом контроле чистоты (рис.3).

С - фракция ингибина-А после аффинной хроматографии

А - бутанольный экстракт плаценты;

В - фракция после осаждения сульфатом аммония;

Рис.3. Электрофорез в полиакри-ламидном геле.

Известно, что ингибин-А способен образовывать стабильные комплексы с некоторыми растворимыми белками и эти комплексы снижают способность ингибина-А взаимодействовать с рецеторным аппаратом [F.H. de Jong, 1988]. Полу-¡енные нами результаты свидетельствуют, что только два ларкера воспаления в крови женщин, страдающих трихом о-ниазом, имеют достоверное различие концентраций у женщин с нарушением фертильности и без нарушений фертиль-ности. Это СРБ и ЛФ (рис.2).

Мы поставили задачу исследовать способность ингибина-А образовывать комплексы с этими белками.

Для этого были использованы методы электрофореза и им-му ноэле ктрофореза.

В работе использовали коммерческий препарат СРБ и полученный нами по описанному выше способу ингибин-А.

Было приготовлено два ряда смесей: разведения СРБ на ингибине-А охватывают молярное соотношение ингибина-А к СРБ от 1:7 до 115:1.

Но, ни в одном случае не зафиксировано образование стойких комплексов, способных показать измененную электрофо-

Рис.4, Иммуноэлектро-форез препаратов СРБ и ингибина-А

1. препарат ингибина-А

2. смесь ингибина и СРБ

3. препарат СРБ А - ангисыворотка к белкам сыворотки крови человека

Б - антисыворотка к инги-бину-А человека В - ангисыворотка к СРБ

ретическую подвижность.

На следующем этапе мы исследовали возможность образования комплекса ингибин-А - СРБ методом иммуноэлектро-фореза. Как показано на рис.4, этим методом так же не удалось выявить образование комплексов ингибин- СРБ.

Для выяснения возможности образования межмолекулярных комплексов ингибина-А и ЛФ использованы методы электрофореза и иммуноэлектрофореза.

Было приготовлено два ряда смесей: разведения ЛФ на ин-гибине-А охватывают молярное соотношение ингибин-А : ЛФот 1:6до 65:1.

Все образцы были подвергнуты электрофорезу в полиакри-ламвдном геле и, как видно на рис.5, было отмечено изменение электрофоретической подвижности смеси ЛФ и ингиби-на-А по сравнению с чистыми препаратами этих белков, а также появление дополнительных фракций. При выбранном в этих разведениях молярном соотношении ингибин-А : ЛФ (14:1 и 7:1 соответственно), визуально наиболее ярко проявляется изменение электрофоретической подвижности ЛФ и появление гетерогенности в области зоны его миграции от 2 до 4 фракций.

На следующем этапе мы исследовали возможность образования комплекса ингибин-А - ЛФ методом им му ноэле ктро-

Рис.5. Электрофорез в полиакрила-мидном геле

1. препарат ЛФ

2. препарат ингибина-А

3. смесь ингибина-А и ЛФ № 2-3

4. исходный экстракт плаценты

фореза.

На рис.6 хорошо видно изменение электрофоретической подвижности как ингибина-А, так и ЛФ, находящихся в смеси друг с другом в молярном соотношении ингибин-А : ЛФ примерно 14:1. Количественная оценка результатов иммуно-электрофореза смесей ЛФ - ингибин-А подтвердила вероятность образования межмолекулярных комплексов этих белков.

Рис.6. Иммуноэлектрофо-рез препаратов ЛФ и ингибина-А.

1. препарат ЛФ;

2. препарат ингибина-А;

3. смесь ингибина-А и ЛФ № 2-3;

А - антисыворотка к белкам сыворотки крови человека; Б - антисыворотка к ЛФ; В - антисыворотка к инги-^ бину-А.

а в

Мы сочли возможным попытаться найти доказательства наших предположений, проведя дополнительное исследование межмолекулярных комплексов методами хроматографии. Как видно из рис.7, смесь ЛФ и ингибина-А образует три крупных хроматографических пика, причем пик 2 и пик 3 разделяются не полностью.

Нами проведен иммунохимический анализ фракций, входящих в пик 1, пик 2 и пик 3. Анализ показал, что пик 1, имеющий молекулярную массу около 280 кД, содержит ЛФ, а антитела к ингибину-А в этой хроматографической фракции его не выявляют. Но молекулярная масса фракции пик 1 более чем в 3 раза превышает молекулярную массу ЛФ, которая по разным данным колеблется от 76 до 80 кД.

Рис.7. Гель-

фильтрация смеси ингибина-А и ЛФ № 2-3 (14:1).

Можно предположить, что молекулы ингибина-А служат инициаторами процесса олигомеризации ЛФ, а отсутствие иммунохимической реакции на ингибин-А в составе межмолекулярного комплекса ЛФ - ингибин-А может быть результатом преимущественно гидрофобного взаимодействия молекул ЛФ и ингибина-А.

Способность к образованию олигомерных форм ЛФ показана группой исследователей под руководством S. Baveye [2007]. Было обнаружено, что ЛФ может образовывать диме-ры и тетрамеры. По нашим данным белок, входящий в состав пика 1, не может быть тетрамером ЛФ, т.к. молекулярная масса тетрамера не менее 310 кД, а для димера молекулярная масса пика 1 слишком велика. На этом основании мы считаем наиболее вероятным объяснением существование межмолекулярного комплекса из двух молекул ЛФ и нескольких молекул ингибина-А, связывающих молекулы ЛФ на основе гидрофобного взаимодействия. Этот тип взаимодействия, наряду с электростатическим, рассматривается многими авторами как наиболее вероятный [S. Baveye, 2007].

Мы собрали ингибин-А - негативные хроматографические фракции, входящие в пик 1 и провели рехроматографию, но уже в присутствии 0,2 М гепарина, способного вызывать дис-

Рис, 9. Иммуноэлектрофорез хроматографических фракций смеси ингибина-А и ЛФ в присутствии 0.2 М гепарина.

1. пик 2 (№№ проб 50-55);

2. пик 1 (№№ проб 37-43);

А - ангисыворотка к белкам сыворотки крови человека; Б - ангисыворотка к ингибину-А;

В - антисыворотка к ЛФ.

социацию любых межмолекулярных комплексов, содержащих ЛФ [Е. ЕЗазв-ЯосЬагсЗ а а1.,1998].

Как видно из рис.8, в присутствии гепарина белковый комплекс с молекулярной массой 275-285 кД разделяется на два крупных компонента с молекулярной массой пик 1 равной 82 кД и пик 2 равной 44 кД, что соответствует литературным данным о молекулярной массе ЛФ и ингибина-А соответственно. Иммунохимический анализ подтверждает это предположение.

Рис.8. Гель-фильтрация межмолекулярного комплекса ингибина-А и ЛФ через сефадекс G-200 в присутствии 0,2М гепарина

На рис.9 представлены данные иммуноэлектрофореза после хроматографии комплекса ингибин-А - ЛФ в присутствии 0.2 М гепарина. Очевидно, что происходит диссоциация комплекса и в пике 1 содержится ЛФ, а в пике 2 ингибин-А.

Уменьшение сывороточного уровня ингибина-А вызывает снижение числа овулирующих фолликулов из-за неспособности ФСГ взаимодействовать с рецепторами ооциотов без комплекса с ингибином-А и ведет, соответственно, к снижению фертильности. Но, как показано нами ранее, во многих случаях у больных трихомониазом с нормальным уровнем ингибина-А, отмечается снижение фертильности.

Мы сочли возможным исследовать биологическую активность очищенного препарата ингибина-А и выяснить влияние на эту активность различных маркеров воспаления. Для определения ингибиновой активности использована модель биологического тестирования по методике 8. СЬап и соавт.

Согласно этой методике, определение активности ингибина-А основано на подавлении им веса матки и яичников неполовозрелой мыши-самки, увеличенного под влиянием экзогенного гонад агропина. Эксперимент проведен на 384 мышах - самках в возрасте 2 недель.

[1976].

40

имасеа МЯК (иг)

«ингибиноаая активность {%)

Рис.10. Биотестирование активности ингибина-А.

17

Для исследования влияния межмолекулярных комплексов на функциональную активность ингибина-А мы провели серию опытов.

Опыт № 1 - вводили ингибин-А.

В опыте № 2 использовали смесь ингибина-А и СРБ № 2-3 (8:1). Полученные в опыте № 2 результаты свидетельствуют, что происходит незначительное снижение ингибиновой активности в присутствии СРБ, которое обусловлено случайными причинами и статистически недостоверно.

В опыте № 3 использовали смесь ингибина-А и ЛФ № 2-3 (14:1). Полученные в этом опыте результаты свидетельствуют, что происходит более чем 2-кратное снижение ингибиновой активности в присутствии ЛФ.

В опыте № 4 исходный раствор ингибина-А разводили до необходимой концентрации (1%) раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА). Эта опытная серия позволяет учесть возможное неспецифическое воздействие белковой среды. И, как видно из рис. 10, присутствие достаточно высокой концентрации индифферентного белка никак не влияет на уровень ингибиновой активности.

Полученные нами новые знания о способности ЛФ образовывать комплексы с ингибином-А и, тем самым, снижать его биологическую эффективность, а также отрицательное влияние высоких концентраций СРБ на биологическую активность ингибина-А, дают возможность использовать эти данные для разработки лабораторных методов прогноза развития бесплодия у женщин, страдающих трихомониазом, но имеющих нормальный уровень ингибина-А в крови.

Далее, с помощью регрессионного анализа, определили влияние факторных параметров на развитие осложнений у больныхтрихомониазом при нормальном уровне ингибина-А в крови и вывели уравнение прогностической вероятности развития бесплодия.

ВРБ=0,17+0,00011хХ!+0,01 7хХ2

где: ВРБ - прогностическая вероятность развития бесплодия

0,17 - свободный член;

Х1 и Хт - исследуемые параметры больного:

Х1 - концентрация ЛФ в нг/мл

Хг - концентрация СРВ в мкг/мл

Согласно этой формуле при ВРБ>1,0 очень высока вероятность развития бесплодия, как осложнения хронического трихомониаза даже при нормальном уровне сывороточного ингибина-А.

ВЫВОДЫ

1.- Разработаны критерии и уравнение клинико-диагностической и прогностической вероятности возникновения бесплодия у женщин, перенесших трихомониаз.

2. Разработан способ выделения и очистки ингибина-А.

3. Установлено, что у женщин, страдающих хроническим трихомониазом, отмечена высокая вариабельность уровня ингибина-А в сыворотке крови: от 4,3 нг/л до 29,4 нг/л.

4. Выявлено развитие вторичного бесплодия у женщин на фоне хронического трихомониаза при пониженном уровне ингибина-А в 63,2% случаев, а при нормальном уровне инги-бина-А - у 12,9% пациенток.

5. Доказана значимость уровней ЛФ и СРВ для прогноза развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, перенесших трихомониаз: их уровни в сыворотке крови при развитии бесплодия достоверно выше, чем средние значения при неосложненном трихомониазе.

6.. Обнаружена способность молекулы ЛФ образовывать межмолекулярные комплексы с ингибином-А, что приводит к снижению функциональной активности ингибина-А.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Использовать разработанный способ выделения и очистки ингибина-А в научно - исследовательских лабораториях, лабораторной диагностике, для преподавания биохимии, физиологии, клинической лабораторной диагностики.

2. Разработанные прогностические критерии развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, страдающих хроническим трихомониазом, и выведенное уравнение прогностической вероятности развития бесплодия использовать в клинической практике, в работе врачей - гинекологов, дерматовенерологов, в работе Центров планирования семьи, при отборе групп в центрах ЭКО, а также при преподавании биохимии, физиологии, акушерства и гинекологии, дерматовенерологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики.

3. Новые сведения, полученные в ходе проведённого исследования, существенно расширяющие представления о функциональной активности ингибина-А и факторах, влияющих на эту активность, использовать при подготовке врачей -дерматовенерологов, гинекологов, клинических лаборантов.

4. Для профилактики развития бесплодия и своевременной коррекции назначаемой терапии рекомендуется использовать систему комплексной лабораторной оценки овариального резерва, основанную на определении уровня ингибина-А и биохимических факторов воспаления (СРБ и ЛФ) у всех женщин, страдающих хроническим трихом ониазом.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации 1. Бойко О.В., Николаев A.A., Луцкий Д.Л., Плосконос М.В., Гудинская Н.И., Стахеева В.В. Этиологические и диагностические аспекты бактерионосительства // Фундаментальные исследования. - 2004. - Kol. - С.40

20

*2. Бойко О.В., Николаев A.A., Бойко A.B., Плосконос М.В., Луцкий Д.Л., .Гудинская Н.И. Питательная двухфазная среда для выделения трихомонад // Патент № 2272834 от 27 марта 2006г. - Опубликовано 27.03.2006. - Бюл. №9.

3. Гудинская Н.И., Николаев A.A., Логинов П.В. Уровень ин-гибина-А - предикт развития бесплодия у женщин, перенесших трихомониаз // Труды семинара «Новые Технологии в Ингегративной Медицине и Биологии», Международный Междисциплинарный научно-практический Семинар и Научный Дискуссионный Клуб «IW+SDC'07». - Паттайя - Бангкок, Таиланд, 2007. - С.25.

4. Бойко О.В., Николаев A.A., Бойко В.И., Коцдрашова Ю.В., Журихин A.B., Гудинская Н.И. Иммунологические методы диагностики некоторых видов патологий // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т.9., №3. - С.294.

*5. Гудинская Н.И. Диагностическое значение уровня инги-бина-А у женщин, перенесших трихомониаз, как маркера вероятного развития бесплодия // Клиническая лабораторная диагностика. - 2008. - №9. - С.8-9.

*6. Гудинская Н.И., Николаев A.A., Бойко О.В., Коцдрашова Ю.В., Журихин A.B. Иммунохимические маркеры патологических состояний // Российский иммунологический журнал. -2Ö08. - Т.2., №2-3. - С.287.

7. Николаев A.A., Гудинская Н.И. Прогностическое значение уровня ингибина-А при развитии бесплодия // Научные труды II съезда физиологов СНГ. - Кишинэу, Молдова, 2008. -С.317.

8. Nikolaev A.A., Gudinskaja N.I., Nikolaeva N.N. The women's inhibin - a level working at the Astrakhan as condensate complex // European journal of natural history. - 2009. - №4. - P.75-76.

9.'Николаев A.A., Гудинская Н.И., Николаева H.H. Комплек-сообразование ингибина-А с антибиотиками // Материалы VIH межрегиональной научно-практической конференции «Лекарство и здоровье человека». - Астрахань, 2009. - С.127-128.

10. Николаев A.A., Гудинская Н.И., Николаева H.H. Уровень ингибина-А у женщин, работающих на Астраханском газо-ковденсатном комплексе // Современные наукоемкие технологии. - 2009. - №3. - С.75-76.

* - работа опубликована в журнале, включенном Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий.

Список сокращений

БОФ - белки острой фазы

ВЗОМТ - воспалительные заболевания органов малого таза

ЗП.ПП - заболевания, передающиеся половым путем

ИФА- иммуноферментный анализ

ИДА - иммунодиффузионныйанализ в агаре

ИЭФ- иммуноэлектрофорез

1Шу - интерферон-гамма

1Ь-8 - ингерлейкин-8

1Ь-1Р - ингерлейкин-1бета

10 - ингерлейкин-10 ^А - иммуноглобулин А 1§М - иммуноглобулин М ЛФ - лактоферрин

ЛПУ - лечебно-профилактическое учреждение

МКБ - международная классификация болезней

МГ - макроглобулин

СРБ - С-реактивный белок

УЗИ - ультразвуковое исследование

Гудинская Наталья Игоревна

УРОВЕНЬ ИНГИБИНА-А И МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ КАК ПРОГНОСТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РАЗВИТИЯ БЕСПЛОДИЯ У ЖЕНЩИН, ПЕРЕНЕСШИХ ТРИХОМОНИАЗ

03.01.04- биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 14.11.2011. Тираж 100 экз. Заказ № 312 '2. у Сд. п. л. 1,0 Издательство ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Мигадравсоцразвигия России 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121.