Участие стволовых клеток в репаративной и физиологической регенерации почки

Йылмаз, Татьяна Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Участие стволовых клеток в репаративной и физиологической регенерации почки
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Участие стволовых клеток в репаративной и физиологической регенерации почки"

На правах рукописи

Йылмаз Татьяна Сергеевна

УЧАСТИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК В РЕПАРАТИВНОЙ И ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ ПОЧКИ

03.03.04 - Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

- О СЕН 7010

Казань-2010

004609148

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Киясов Андрей Павлович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация: Российский государственный медицинский университет, г. Москва

«/#» часов на заседании диссертационного совета Д 208.034.01 при ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» (420012, Казань, ул. Бутлерова, 49)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Казанского государственного медицинского университета (420012, Казань, ул. Бутлерова, 49, корпус Б).

Автореферат разослан » ё/ТТЖ^ЮЮ г.

Ямщиков Николай Васильевич доктор биологических наук, профессор Валиуллин Виктор Владимирович

Защита диссертации состоится СЛАС 2010 г. в

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

'—' Залялютдинова Л.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Изучение регенерации органов и тканей остаётся одним из самых значимых и актуальных направлений в современной медицине и биологии. В первую очередь, это обусловлено потребностью практической медицины, так как для разработки новых методов лечения просто необходимы фундаментальные знания относительно активации и взаимодействия различных клеточных типов органа в норме и при патологии.

В рамках этого вопроса недостаточно изученными остаются клеточные основы патогенеза различных заболеваний почки, в частности хронического гломерулонефрита (ХГН).

Проблема ХГН занимает одно из центральных мест в нефрологии. Актуальность этого заболевания обусловлена его высокой распространенностью (3-4 место среди всех заболеваний почек [Рябов С.И., 2000]), поражением в основном работоспособной части населения и неизбежным развитием хронической почечной недостаточности [Ермоленко В.М., 2000]. Кроме того, крайне проблематичной остается терапия ХГН. Так, проводимое медикаментозное лечение мало эффективно и сопряжено с многочисленными побочными действиями, гемодиализ является лишь методом паллиативной терапии, а трансплантация почки по ряду причин часто невозможна. В связи с этим необходимым является поиск новых методов лечения, одним из которых может стать клеточная терапия с использованием стволовых клеток.

Во всем мире ведётся интенсивное изучение участия стволовых клеток в регенерации органов и тканей [Almeida-Porada G., 2010; Jeganathan V., 2010; Kumar А.Н., 2010; Roomans G.M., 2010; Tsivitse S., 2010; Ulicna M., 2010], и возможности применения этих клеток для патогенетической терапии различных заболеваний, в том числе заболеваний почек [Zubko R., 2009].

Существует мнение, что, подобно другим органам, репаративная регенерация почки происходит за счет трёх основных источников [Anglani F.,

2004]: миграции и пролиферации неповреждённых дифференцированных клеток; активации и дифференцировки резидентных стволовых клеток; привлечения и дифференцировки циркулирующих стволовых клеток из костного мозга. Процесс миграции и пролиферации неповрежденных клеток самой почки является основным и наиболее изученным механизмом регенерации [Iruela-Arispe L., 1995; Haseley L. А., 1999; El-Nahas A. M, 2003]. Но, к сожалению, полученные фундаментальные знания мало помогли в разработке эффективной патогенетической терапии ХГН. Поэтому огромные надежды возлагаются на использование экзогенных стволовых клеток, а особенно - гемопоэтических стволовых клеток - для терапии ХГН.

На сегодняшний день уже показано, что трансплантированные стволовые клетки костного мозга участвуют в восстановлении клеток клубочков и канальцев после острого повреждения почки [Kale S., 2003; Lin F., 2003; Lin F., 2005; Fang T.C., 2005]. К сожалению, ничего не известно об участии собственных гемопоэтических стволовых клеток в регенерации клубочков при ХГН у человека. В тоже время, говорить о целесообразности трансплантации этих клеток при ХГН можно будет только после получения ответа именно на этот вопрос.

Кроме того, перед тем как трансплантировать гемопоэтические стволовые клетки с целью лечения заболеваний почек, необходимо знать их распределение в неповрежденном органе, а именно - возможность миграции введенных клеток в интактную почку, пути этой миграции и дальнейшей дифференцировки в почке реципиента.

Цель и задачи исследования

Целью данного исследования явилось изучить возможность участия гемопоэтических С034(+)-клеток в процессах регенерации нефронов у больных хроническим гломерулонефритом, а также хоуминг и дифференцировку мононуклеаров пуповинной крови человека в интактных почках крыс.

В соответствии с этой целью были поставлены следующие конкретные задачи:

1. На основании иммуиогистохимического анализа установить, участвуют ли гемопоэтические СБ34(+)-клетки в регенерации нефронов больных хроническим гломерулонефритом;

2. Изучить зависимость появления С.034(+)-клеток в клубочках почки от степени развития морфологических проявлений гломерулонефрита (воспалительной активности заболевания и выраженности склероза клубочков);

3. Проанализировать пролиферативную активность и миофибробластическую трансдифференцировку клеток клубочков и их изменения в зависимости от степени развития морфологических проявлений гломерулонефрита;

4. Провести сравнительный анализ участия гемопоэтических СБ34(+)-клеток и резидентных клеток клубочка (пролиферирующих клеток, миофибробластов) в регенерации клубочка при хроническом гломерулонефрите;

5. На основании иммуиогистохимического исследования изучить миграцию, распределение и пути дифференцировки трансплантированных мононуклеаров пуповинной крови человека в почке здоровой крысы.

Объект и методы исследования

Изучение участия стволовых клеток в процессах репаративной регенерации почки проводили на 64 нефробиопсиях больных с различными клинико-морфологическими формами течения первичного гломерулонефрита.

Изучение хоуминга стволовых клеток и их распределения в интактной почке проводили на 15 белых беспородных крысах, которым в хвостовую вену вводили фракцию мононуклеаров пуповинной крови человека. Для получения результатов исследования был использован иммуногистохимический метод, позволяющий с помощью специфических маркёров судить о наличии в почках клеток с определённым фенотипом, о

пролиферации и миофибробластической трансдифференцировке клеток почечных клубочков.

Достоверность полученных данных и их научная новизна

Достоверность полученных данных достигнута использованием достаточного и представительного объёма экспериментальных исследований, конкретной постановкой и решением поставленных задач с использованием математического анализа и статистического метода. Достоверность различий между результатами оценивали по ¿-критерию Стьюдента. Оценку связи между качественными непараметрическими признаками проводили с использованием критерия «хи-квадрат».

Автор видит новизну полученных результатов в том, что впервые:

■ иммуногистохимическими методами показано увеличение в клубочках больных ХГН количества СБ34(+)-клеток. Было установлено, что появление этих клеток непосредственно зависит от степени морфологических проявлений заболевания. Кроме того, проведён анализ зависимости наличия СБ34(+)/С031 (-)-клеток от изменений пролиферативной активности и миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков. На основании полученных данных впервые установлено, что чаще всего С034(+)/С031 (-)-клетки обнаруживаются в нефробиоптатах с индексом воспалительной активности, не превышающим 4-х баллов и индексом склероза клубочков, равным 1-2 баллам. Эта стадия гломерулонефрита должна рассматриваться как переломный момент в течение заболевания, когда восстановление клубочковой структуры и функции почек ещё может произойти. Возможно, это связано с тем, что в данный период вклад гемопоэтических стволовых клеток в процесс регенерации клубочков максимален, а склеротические изменения в них незначительны.

■ выявлено, что мононуклеары пуповинной крови человека, трансплантированные в системный кровоток крыс, мигрируют в неповреждённую почку и встраиваются в эпителиальную выстилку дистальных канальцев нефрона.

Теоретическая и практическая значимость

Результаты работы расширяют и углубляют представления о регенерации почки человека. Так, нами установлено, что при ХГН восстановление происходит не только за счёт эндогенного резерва почки, но и гемопоэтических СОЭ4(+)-клеток. Совокупность полученных данных позволила определить критический период в развитии хронического гломерулонефрита с точки зрения прогноза заболевания, которым является индекс воспалительной активности от 1 до 4 баллов и индекс склероза клубочков равный 1-2 баллам. Именно в этот момент в клубочках чаще определялись СЭ34(+)-клетки, не экспрессирующие СБ31. Полученные данные имеют большое практическое значение, так как могут быть использованы для диагностики и определения прогноза течения заболевания у больных гломерулонефритом.

Проведенный эксперимент способствовал обнаружению новых фактов о способности мононуклеаров пуповинной крови человека, трансплантированных в кровоток здоровой крысы, мигрировать в почку и заселять её. На основании того, что клетки человека обнаружены среди эпителия дистальных канальцев, было сделано предположение, что именно дистальные канальцы могут служить "нишей" прогениторных клеток почки.

Безусловно, полученные результаты могут быть использованы для дальнейшего изучения проблемы регенерации почки в норме и при повреждении, в разработке методов лечения хронических заболеваний почки с использованием стволовых клеток. Кроме того, полученные данные должны быть использованы в учебном процессе при подготовке специалистов медико-биологического профиля.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: 1. Наличие С034(+)/С031 (-)-клеток в клубочках почек больных хроническим гломерулонефритом является подтверждением гипотезы об участии прогениторных кроветворных клеток в регенерации органов, в частности почки, и это участие максимально при минимальной и умеренной

воспалительной активности заболевания и минимальном склерозе клубочков. При более выраженном воспалении и склерозе регенерация происходит за счёт пролиферации и миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочка.

2. Мононуклеары пуповинной крови человека, трансплантированные в системный кровоток крыс, мигрируют в неповреждённую почку и встраиваются в эпителиальную выстилку дистальных канальцев нефрона. Сведения об апробации результатов диссертации Основные результаты диссертационной работы доложены на 77-й Всероссийской студенческой научной конференции, посвящённой 125-летию со дня рождения профессора М.Н. Чебоксарова (Казань, 2003); XIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине" (Казань, 2008), XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине" (Казань, 2009), и XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине" (Казань, 2010).

Сведения о публикациях по теме диссертации По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 1 статья в ведущем научном рецензируемом журнале, рекомендованном Высшей аттестационной комиссией для опубликования основных результатов диссертаций. Общий объём публикаций - 1,6 условно печатных листа, в том числе авторский вклад - 0,8 условно печатных листа. Личный вклад соискателя

Приведённые в работе данные получены при личном участии соискателя на всех этапах работы. Соискателем составлен план, поставлены задачи, определены этапы исследования. Автор провёл подбор и анализ литературы, определил и применил наиболее адекватные условия проведения эксперимента. Автор выделял фракцию мононуклеаров из пуповинной крови человека и участвовал во введении этих клеток в хвостовую вену крыс. Им

лично проведены забой животных, забор материала (почки) и его последующая заливка в парафин; нарезаны парафиновые срезы. В ходе исследования соискатель провел 348 иммуногистохимических окрашивания срезов, с которых им было получено 407 фотографий. Статистическая обработка, теоретическое обобщение материалов исследования, оформление, публикации результатов исследования, формулирование выводов и рекомендаций также проведены лично диссертантом.

Внедрение результатов работы

Результаты проведённого исследования внедрены в учебный процесс на кафедре нормальной анатомии, кафедре гистологии, включены в основной курс (рабочая программа) дополнительной образовательной программы "Молекулярная и клеточная медицина" ГОУ ВПО "Казанский ГМУ Росздрава". Иммуногистохимическая оценка к маркёрам С031, С034, РСЫА, а-ГМА при комплексном исследовании ХГН внедрена в практику ГМУ "Детская республиканская клиническая больница" (г. Казань).

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из оглавления, введения, литературного обзора, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 129 страницах машинописного текста, иллюстрирована 6 таблицами, 20 рисунками. Список использованных источников включает 239 наименований, из которых 40 отечественных и 199 зарубежных источников.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объект исследования и экспериментальная модель

Изучение участия стволовых клеток в процессах репаративной регенерации проводили на 64 нефробиопсиях больных с различными клинико-морфологическими формами течения первичного

гломерулонефрита*.

Изучение участия стволовых клеток в физиологической регенерации почки проводили на 15 белых беспородных крысах весом 180-220 г.,

находящихся на стандартном рационе вивария и имеющих свободный доступ к воде, которым в хвостовую вену вводили мононуклеары пуповинной крови человека. Выделение фракции мононуклеаров из пуповинной крови человека проводили путём седиментации на градиенте плотности фиколла плотностью 1,077 г/мл [Hawley R.G., 2004]. В хвостовую вену крыс вводили по 1x10й мононуклеаров, ресуспендированных в 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Крысам из группы контроля (п=3) вводили только физиологический раствор в равном объёме**.

Протоколы исследования с использованием материала человека и лабораторных животных соответствуют требованиям, предъявляемым Республиканским Комитетом по Этическим вопросам при проведении клинических испытаний-исследований лекарственных средств при МЗ РТ (протокол №1 от 11.02.2009г.). Методы исследования

На нефробиоптатах была проведена гистоморфологическая оценка с подсчётом индекса воспалительной активности гломерулонефрита и индекса склероза почечных клубочков полуколичественным методом [Хайруллов A.C., 1991]*. Кроме того, проводили окрашивание по Ван-Гизону и иммуногистохимическое окрашивание.

Иммуногистохимическое окрашивание нефробиоптатов проводили антителами к GD34 (клон QBEnd/10, фирма Novokastra, 1:50), CD31 (клон 1А10, фирма Novokastra, 1:50), PCNA (клон РС10, DAKO, Denmark; разведение 1:100) и П-ГМА (клон 1А4, DAKO, Denmark; разведение 1:50). Полуколичественную оценку выраженности экспрессии CD34 и CD31 в клубочках на серийных срезах проводили три независимых морфолога**. Выраженность экспрессии каждого маркёра выражали в баллах по схеме:

♦Забор биопсийного материала проведён врачом Хайруловым A.C. в условиях стационара Республиканской Клинической Больницы. Данные нефробиопсии являются архивным материалом ПАО РКБ МЗ РТ.

"Оценку экспрессии CD31 и CD34 в ткани почки помимо исследователя проводили д.м.н. Киясов А.П. и к.м.н. Гумерова А.А, которым автор выражает благодарность.

менее 15% клеток клубочков экспрессируют искомый антиген -1 балл, 15-50% - 2 балла, 50-70% - 3 балла, 70-100% - 4 балла. Исследовали как: минимум 5 клубочков и по результатам вычисляли среднее значение активности экспрессии CD34 и CD31 для каждого среза. Преобладание экспрессии CD34 над CD31 на 1 балл и более свидетельствовало о наличие CD34(+)/CD31 (-)-клеток, рассматриваемых нами как гемопоэтические С034(+)-клетки. Подсчёт проводили при помощи морфометрической окулярной сетки на микроскопе Микмед-5 при увеличении х400.

Животных забивали под эфирным наркозом через 2, 5, 7, 14 суток после введения клеток (по 3 крысы на каждый срок) путём перфузии через большой круг кровообращения вначале охлажденным фосфатно-солевым буфером (рН=7,4), затем - охлажденным 4% раствором параформальдегида (рН=7,4). После забоя у животных извлекали почки для морфологического исследования. Ткань почки разрезали на кусочки размерами 0,5x0,5x0,5 мм и помещали в 10% нейтральный формалин на 0,2 М фосфатном буфере (рН=7,4) на 24 часа для фиксации. Далее кусочки промывали в проточной воде в течение 2-3 ч, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм наклеивали влажным способом на тщательно обезжиренные и прокаленные предметные стекла, покрытые тонким слоем яичного белка с глицерином для лучшей фиксации срезов на стекле. Затем препараты высушивали в течение 48 ч в термостате при 370С. Иммуногистохимическое окрашивание [Киясов А.П., 2001] проводили антителами к HLA-ABC (клон W6/32-HL, фирма Novokastra; разведение 1:160). Гистологические срезы изучали под микроскопом (Leica, Германия) с последующим фотографированием через фотопреобразователь на фотокамеру.

♦Морфологические исследования для постановки диагноза были проведены в ПАО РКБ МЗ РТ проф. Петровым С.Б. и врачом Хомяковым А.Е.

"Автор выражает благодарность к.м.н.Газизову И.М., к.м.н. Калинину М.С.,асс. Андреевой Д.И. за помощь в проведении данного раздела работы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Морфологическое исследование нефробиоптатов больных хроническим гломерулонефритом

Решая первую задачу нашего исследования для определения присутствия гемопоэтических СБ34(+)-клеток в нефронах на серийных срезах биоптатов было проведено иммуногистохимическое окрашивание с антителами против СБ31 (маркёр эндотелия) и СБ34 (маркёр эндотелия и клеток-предшественниц гемопоэза). Сравнительный анализ экспрессии данных маркёров выявил, что практически в клубочках 35% нефробиоптатов экспрессия СБ34 преобладала над экспрессией С031, то есть в клубочках появлялись С034(+)/СВ31(-)-клетки. Эти клетки мы расценивали как гемопоэтические СБ34(+)-клетки, которые' могли иметь костномозговое происхождение и мигрировать в почку из кровотока, как дополнительный регенераторный резерв, необходимый для восстановления клубочкового аппарата.

Следующий вопрос, на который необходимо ответить - от чего зависит появление этих клеток в клубочках?

Поскольку гемопоэтические столовые клетки рассматриваются как дополнительный регенераторный резерв, а ХГН - это не что иное, как хроническое иммуновоспалительное повреждение почки с неизбежным развитием почечного склероза, мы решили изучить, есть ли связь между появлением С034(+)/С031(-)-клеток в клубочках и степенью развития морфологических проявлений заболевания, которая оценивалась индексом воспалительной активности заболевания и индексом склероза клубочков.

В зависимости от индекса воспалительной активности (ИВА) гломерулонефрита все нефробиоптаты были поделены на 4 группы: 1 группа нефробиоптатов - ИВА равен 1-2 баллам (п=20). Оценивали это как минимальная воспалительная активность; 2 группа нефробиоптатов - ИВА равен 3-4 баллам (п=19). Оценивали как умеренная воспалительная активность; 3 группа нефробиоптатов - ИВА равен 5-6 баллам (п=13).

Оценивали это как средняя воспалительная активность; 4 группа нефробиоптатов - ИВА равен 7 и более баллам (п=12). Оценивали это как высокая воспалительная активность гломерулонефрита.

В зависимости от индекса склероза клубочков (ИСК) все нефробиоптаты были поделены на 3 группы: 1 группа нефробиоптатов — ИСК равен 1-2 баллам (минимальный склероз) (п=26); 2 группа нефробиоптатов -ИСК равен 3-6 баллам (умеренный склероз или умеренно выраженный склероз) (п=29); 3 группа нефробиоптатов - ИСК равен 7 и более баллам (выраженный склероз) (п=9).

Проанализировав полученные результаты, мы установили, что СБ34(+)/СВЗ 1 (-)-клеткп встречаются в клубочках 46,2% нефробиоптатов при минимальных и умеренных значениях воспаления. Дальнейшее усиление воспалительного процесса сопровождается уменьшением участия стволовых клеток в регенерации клубочков, на что указывает уменьшение процента биоптатов с наличием СЦ34(+)/С031(-)-клсток в клубочках (16% нефробиоптатов).

Подобная картина наблюдалась и в зависимости от выраженности склеротических изменений в клубочках. Так, чаще всего участие С034(+)/С031 (-)-клеток выявлено при минимальном склерозе (в 53,9% нефробиоптатах в клубочках определялись гемопоэтические СБ34(+)-клетки). С ростом склеротических изменений происходит уменьшение процента нефробиоптатов с наличием СБ34(+)/С031(-)-клеток в клубочках (28,6% биоптатов). При выраженном склерозе клубочков гемопоэтические СБ34(+)-клетки не были обнаружены, и, следовательно, они не участвуют на этой стадии заболевания в регенерации клубочков. Безусловно, можно рассматривать склероз как "препятствие" для миграции СВ34(+)/С031(-)-клеток из циркулирующей крови, но является ли склероз причиной уменьшения гемопоэтических СВ34(+)-клеток по мере усиления воспалительной активности? Для выяснения этого необходимо было

определить, усиливаются ли склеротические изменения в клубочках при нарастании в них воспаления.

Из таблицы видно (таблица 1), что при минимальных и умеренных значениях воспаления только в одном нефробиоптате наблюдался выраженный склероз клубочков. Рост же воспалительной активности сопровождался увеличением процента биоптатов с высокими цифрами склероза, и уже более 30% нефробиоптатов имели серьезные склеротические изменения в клубочках.

Таблица 1

Изменение индекса склероза клубочков в зависимости от индекса воспалительной активности ХГН

Индекс воспалительной активности гломерулонефрита, в баллах Индекс склероза клубочков, в баллах

1-2 3-6 7 и более

1-4 58,9% 38,5% 2,6%

(п=39) (п=23) (п=15) (п=1)

Больше 4 12% 56% 32%

(п=25) (п=3) (п=14) (п=8)

п - количество нефробиоптатов; р<0,05

Таким образом, именно склероз является причиной, препятствующей появлению в клубочках гемопоэтических С034(+)-клеток.

Известно, что у больных с прогрессирующей почечной недостаточностью снижается уровень эндотелиальных клеток-предшественниц в крови, а также способность этих клеток к миграции и образованию сосудисто-подобных структур in vitro [De Groot К., 2004]. Основной причиной этого является повышенный уровень азотистых оснований в крови, который, по всей вероятности, обладает токсическим действием и блокирует миграцию эндотелиальных клеток-предшественниц. Исходя из этого, мы проанализировали изменение уровня мочевины в крови больных ХГН в зависимости от активности воспаления почке. Обнаружили, что более чем у половины больных повышенный уровень мочевины крови отмечен при воспалительной активности выше 4-х баллов. С этого же

момента наблюдается уменьшение процента нефробиоптатов с гемопоэтическими С034(+)-клетками в клубочках. Следовательно, уремия может также препятствовать появлению в клубочках С034(+)-Ю1еток.

С ростом воспалительной активности увеличивается частота встречаемости нефробиоптатов с повышенной пролиферацией и миофибробластической трансдифференцировкой клеток клубочка (таблица 2) при одновременном снижении плотности С034(+)/СБЗ 1 (-)-клеток. Подобная закономерность установлена для пролиферации и миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков в зависимости от выраженности клубочкового склероза (таблица 3).

Таблица 2

Зависимость наличия пролиферирующих клеток и миофибробластов в клубочках от индекса воспалительной активности гломерулонефрита

Индекс воспалительной Нефробиопсии с Нефробиоптаты с

активности наличием РСИА в наличием а -ГМК в

гломеруло не фрита, клетках клубочков, % клубочках, %

в баллах

1-4 20,5 17,9

(п=39) (п=8) (п=7)

Более 4 48 44

(п=25) (п=12) (п=11)

п-количество нефробиоптатов; р<0,05

Таблица 3

Зависимость наличия пролиферирующих клеток и миофибробластов в

клубочках от индекса склероза клубочков ■

Индекс склероза Нефробиоптаты Нефробиопсии с

клубочков, в баллах с наличием РСИА в наличием а -ГМК в

клетках клубочков, % клубочках, %

1-2 26,9 15,4

(п=26) (п=7) (п=4)

3-6 24,1 31

(п=29) (п=7) (п=9)

7 и более 66,7 55,6

(п=9) (п=6) (п=5)

п-количество нефробиоптатов, р<0,05

Таким образом, нарастание степени морфологических проявлений гломерулонефрита сопровождается усилением пролиферации неповреждённых клеток клубочков и превращением их в миофибробласты.

Сопоставив эти данные с активацией стволового компартмента, мы установили, что появление С034(+)/СВ31(-)-клеток в клубочках и активная пролиферация клеток клубочков и их миофибробластическая трансдифференцировка находятся в зависимости от степени развития морфологических проявлений гломерулонефрита, и зависимость эта — разная. Так, при минимальных и умеренных значениях воспаления и минимальных значениях склероза регенераторный ответ происходит главным образом за счёт появления в клубочках СВ34(+)/СБ31(-)-клеток. С ростом же воспаления и склероза вклад этих клеток в восстановление клубочков заметно снижается, но в тоже время значительно возрастает пролиферация мезангиальных клеток и число миофибробластов. Мы объясняем это следующим образом. Появление в клубочках гемопоэтических С034(+)-клеток, в первую очередь, направлено на восстановление эндотелиальной выстилки капилляров клубочков, и регенерация идет по пути реституции. В условиях же хронического повреждения вклад в регенерацию циркулирующих в крови гемопоэтических стволовых клеток оказывается недостаточным, и количество эндотелиоцитов прогрессивно уменьшается. Единственными клетками, которые могут восстановить тканевые дефекты, являются пролиферирующие мезангиальные клетки, которые способны трансдифференцироваться в миофибробласты и синтезировать молекулы нефизиологического матрикса. В результате процесс регенерации направляется по пути субституции. Таким образом, мы можем сделать заключение, что индекс воспалительной активности гломерулонефрита от 1 до 4 баллов и индекс склероза клубочков 1-2 балла - это переломный момент в течение гломерулонефрита, когда вероятность восстановления нормальной структуры почки ещё высока, т.к. в клубочках присутствуют гемопоэтические СБ34(+)-клетки, а склеротические изменения в клубочках минимальны. В этот момент решается, что станет

исходом регенерации - восстановление структуры и функции почки или развитие склероза почек.

2. Изучение миграции и распределения гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови человека в почках здоровых крыс после трансплантации

Результатом окрашивания срезов почки крыс после введения мононуклеаров пуповинной крови человека стало обнаружение НЬА-АВС-позитивных клеток в эпителии канальцев на всех исследуемых сроках (2, 5, 7 и 14 суток). Морфология канальцев - небольшой диаметр канальца с широким просветом и невысокими, чётко очерченными эпителиоцитами, позволила установить, что НЬА-АВС(+)-клетки встраиваются в дистальные извитые канальца. При этом не все клетки дистальных канальцев и не все канальцы были окрашены. В каждом окрашенном дистальном канальце могли присутствовать как НЬА-АВС-позитивные, так и НЬА-АВС-негативные эпителиальные. клетки. Ни в каких других клетках почки ни на одном исследуемом сроке не были обнаружены клетки, экспрессирующие НЬА-АВС.

При анализе данных, полученных на материале нефробиоптатов больных ХГН и интактных почек крыс, возникает абсолютно логичный вопрос: почему при ХГН гемопоэтические СБ34(+)-клетки обнаруживаются в клубочках, а в норме они заселяют эпителиальную выстилку именно дистальных канальцев?

Такое различие мы можем объяснить следующим образом: попадая в орган, стволовые клетки в первую очередь направляются туда, где есть повреждение, в случае гломерулонефрита это - клубочки. Попав же в здоровую почку, стволовые клетки не находят "точки приложения" и поэтому, возможно, остаются в органе в качестве дополнительного резерва для процессов физиологической и репаративной регенерации.

В органах стволовые клетки располагаются в специальных "нишах" [Ьаукег Л.М., 2000]. Относительно расположения "ниши" в почке нет единого

мнения [Oliver J.A., 2004; Maeshima A., 2003; Gupta S., 2006; Kim D., 2005; Lazzeri E., 2007; Ronconi E., 2007]. Хотя работ, демонстрирующих, что "нишей" стволовых клеток могут служить дистальные канальцы, найдено не было, исключить такую возможность нельзя. Поэтому мы считаем, что дистальные канальца могут быть "нишей" стволовых клеток. Выводы

1. Гемопоэтические С034(+)-клетки участвуют в регенерации клубочков почки при хроническом гломерулонефрите, и это участие зависит от выраженности морфологических проявлений заболевания (индекса воспалительной активности и индекса склероза клубочков);

2. Клетки с фенотипом CD34(+)/CD31(-) значительно чаще встречаются в нефробиоптатах с индексом воспалительной активности гломерулонефрита не превышающим 4 баллов.

3. С ростом индекса склероза клубочков почки уменьшается процент нефробиоптатов с наличием CD34(+)/CD31(-)-iuieTOK в клубочках. При склерозе 7 и более баллов гемопоэтические С034(+)-клетки в клубочках не обнаруживаются.

4. Усиление воспалительной активности гломерулонефрита более 4 баллов и склероза более 2 баллов характеризуется увеличением пролиферативной активности и миофибробластической трансдифференцировкой клеток клубочков. При высоких значениях индекса склероза процент нефробиоптатов с повышенной пролиферативной активностью и миофибробластической трансдифференцировкой клеток клубочков максимален.

5. Мононуклеары пуповинной крови человека, трансплантированные в организм здоровой крысы, мигрируют в почку и обнаруживаются среди эпителиальных клеток дистальных канальцев. Это позволяет предположить, что дистальные канальца служат "нишей" стволовых клеток почки.

6. Расположение гемопоэтических СВ34(+)-клеток в нефроне зависит от состояния ткани почки. Так, в норме эти клетки обнаруживаются среди

эпителиальной выстилки канальцев, в то время как при гломерулонефрите С034(+)/СБЗ 1 (-)-клетки заселяют клубочки почки. Практические рекомендации

Рекомендовать внедрение в практику патологоанатомических отделений комплексную иммуногистохимическую оценку регенераторного процесса, включающую иммуногистохимическое окрашивание антителами к С031, СБ34, PCNA, а-ГМА при гломерулонефритах для повышения эффективности диагностических мероприятий и прогнозирования течения заболевания.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сметанникова Т.С. Роль эндотелия в увеличении клеточности клубочка при хронических гломерулонефритах / Т.С. Сметанникова // Тезисы 77-й Всероссийской студенческой научной конференции, посвященной 125-летию со дня рождения профессора М.Н. Чебоксарова, Казань - 2003. - С. 57-58.

2. Сметанникова Т.С. Кроветворные стволовые клетки участвуют в регенерации почки при гломерулонефрите / Т.С. Сметанникова, A.C. Хайруллов // Тезисы докладов V Общероссийского съезда анатомов, гистологов и эмбриологов, "Морфологические ведомости" (приложение) -2004. - №1-2,- 2004. - С. 95.

3. Сметанникова Т.С. Участие кроветворных стволовых клеток в регенерации почки при хроническом гломерулонефрите / Т.С. Сметанникова, A.C. Хайруллов, A.A. Гумерова, А.П. Киясов // "Нефрология" - 2006. - №1 -С. 45-49.

4. Сметанникова Т.С. Десмин - маркёр мезангиальных клеток почки / Т.С. Сметанникова, A.A. Гумерова, М.С. Калигин, Титова М.С. // Материалы конференции, посвященной 100-летию Л.И.Фалина. Научно-теоретический медицинский журнал "Морфология", Санкт-Петербург. - 2007. - Том 131, № 3 - С. 92.

5. Калигин М.С. Изучение экспрессии C-kit в пренатальном гистогенезе почки человека. Тезисы докладов / Т.С. Сметанникова, A.A. Гумерова, А.П. Киясов, М.С. Калигин, М.С. Титова // Материалы конференции, посвященной 100-летию Л.И.Фалина. Научно-теоретический медицинский журнал "Морфология", Санкт-Петербург. - 2007. - Том 131, № 3. - С. 92-93.

6. Газизов И.М. Пути миграции и дифференцировки генетически модифицированных стволовых клеток пуповинной крови человека после трансплантации G93A мышам / И.М. Газизов, М.С. Калигин, Т.С. Йылмаз, Д.И. Андреева // Тезисы докладов XIII Всероссийской научно-практической конференции "Молодые учёные в медицине", Казань. - 2008. - С.197-198.

7. Йылмаз Т.С. Влияние различных способов введения гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови на хоуминг в почке / Т.С. Йылмаз, A.B. Табанакова // Материалы Всероссийской конференции студентов и молодых учёных "Пироговские чтения", Москва - 2008. - Том 61, №2, спец.выпуск - С.292.

8. Киясов А.П. Клеточная или регенеративная медицина в терапии более значимой соматической патологии / А.П. Киясов, Т.С. Йылмаз, Д.И. Андреева // "Практическая медицина" - 2008. - №8. - С. 17-22.

9. Andreeva D.I. Can hepatocytes originate from umbilical cord blood stem cells? / D.I. Andreeva, T. Yilmaz, I.M. Gazizov, M.S. Kaligin, S. Abdulkhakov, A.P. Kiassov // Falk symposium 167 "Liver under constant attack - from fat to viruses", Mainz (Germany) - September 20-21,2008. - P.2.

10. Йылмаз Т.С. Пролиферация клеток, активация миофибробластов и наличие гемопоэтических С034+клеток в почках больных хроническим гломерулонефритом зависит от индекса склероза / Т.С. Йылмаз,

A.B. Табанакова, Д.И. Андреева, И.М. Газизов, М.С. Калягин // Материалы XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине", Казань. - 2009. - С.167-168.

11. Андреева Д.И. Влияние трансплантации клеток пуповинной крови человека на активацию стволового компартмента в печени крыс после частичной гепатэктомии / Д.И. Андреева, Т.С. Йылмаз, И.М. Газизов, М.С. Калигин, С.Р. Абдулхаков, А.П. Киясов // Материалы XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине", г.Казань, 29-30 апреля, 2009; С. 159.

12. Андреева Д.И. Активация стволового компартмента в печени крыс после частичной гепатэктомии и трансплантации клеток пуповинной крови человека / Д.И. Андреева, Т.С Йылмаз, И.М. Газизов, М.С. Калигин, Г.О. Певнев // Материалы Всероссийской школы-конференции для молодежи "Аутологичные стволовые клетки: экспериментальные и клинические исследования", Москва - 2009. - С. 16.

13. Абдулхаков С.Р. Клеточные реакции звездчатых клеток печени и гемопоэтических стволовых клеток при хроническом вирусном гепатите С / С.Р. Абдулхаков, Д.И. Андреева, Т.С. Йылмаз И Материалы XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине", Казань. -2009. - С. 159.

14. Андреева Д.И. Возможность дифференцировки мононуклеаров пуповинной крови человека в регенерирующей печени крыс /Д.И. Андреева, И.М. Газизов, М.С. Калигин, М.А. Титова, A.A. Гумерова, A.A. Ризванов., АЛ. Киясов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Актуальные проблемы современной науки и образования", Уфа. - Т.2. - 2010. - С. 483-487.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии «АртПечатьСервис» ИП Мартынов М.Н. Подписано в печать 17.08.10 г. Заказ № 159. Тираж 100 экз. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Объем 1,25 п.л. 420061, г. Казань, ул. Космонавтов, 41. Тел. 295-10-19 Тел./факс: 295-06-44

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Йылмаз, Татьяна Сергеевна

1 .ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Нефрон, образующие его клетки и их маркёры.

2.1.1. Эндотелиальные клетки клубочка.

2.1.2. Подоциты.

2.1.3. Мезангиальные клетки.

2.1.4. Канальцевый эпителий.

2.2. Репаративная регенерация.

2.2.1. Клеточная пролиферация и методы её изучения.

2.3. Репаративная регенерация почки.

2.4. Участие неповреждённых клеток почки в репарации нефрона при остром повреждении.

2.4.1. Регенерация клубочка при остром гломерулонефрите.

2.4.1.1. Острый гломерулонефрит.

2.4.1.2. Репаративный ответ клеток клубочка на модели острого гломерулонефрита.

2.4.2. Регенерация эпителия канальцев при остром повреждении.

2.4.2.1. Острая почечная недостаточность.

2.4.2.2. Регенеративный ответ на модели острой почечной недостаточности.

2.5. Участие неповреждённых клеток почки в репарации нефрона при хроническом повреждении.

2.5.1. Хронический гломерулонефрит.

2.5.2. Хроническое повреждение клубочка.

2.5.2.1. Изменения эндотелиальных клеток.

2.5.2.2. Изменения мезангиальных клеток.

2.5.3. Хроническое повреждение эпителия канальцев.

2.5.3.1. Причины повреждения канальцев.

2.6. Резидентные стволовые клетки и их участие в регенераторном процессе.

2.6.1. Свойства резидентных стволовых клеток.

2.6.2. Резидентная стволовая клетка почки.

2.6.2.1. Локализация, выделение и участие в регенерации резидентных стволовых клеток почки.

2.7. Стволовые клетки костного мозга и их участие в регенерации почки.

2.7.1. Гемопоэтическая стволовая клетка.

2.7.1.1. Источники получения гемопоэтических стволовых клеток.

2.7.2. Мезенхимальная стволовая клетка.

2.7.3. Участие клеток костного мозга в репаративной регенерации почки.

2.7.3.1. Гемопоэтические стволовые клетки в восстановлении канальцевого эпителия после повреждения.

2.7.3.2. Мезенхимальные стволовые клетки в восстановлении каналыдевого эпителия после повреждения.

2.7.3.3. Стволовые клетки костного мозга в восстановлении клеток клубочка.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Объекты исследования.

3.1.1. Характеристика нефробиоптатов.

3.1.1.1. Морфологическое исследование нефробиоптатов больных хроническим гломерулонефритом.

3.1.2. Лабораторные животные.

3.1.2.1. Забор пуповинной крови.

3.1.2.2. Выделение мононуклеаров путем седиментации в градиенте плотности фиколла.

3.1.2.3. Подсчёт количества мононуклеаров и определение их жизнеспособности.

3.1.2.4. Забор материала и приготовление гистологических срезов тканей.

3.2. Гистологические и иммуногистохимические методы исследования.

3.2.1. Депарафинирование и регидратация парафиновых срезов.

3.2.2. Окрашивание по Ван-Гизону.

3.2.3. Окрашивание парафиновых срезов биоптатов почек больных хроническим гломерулонефритом антителами к PCNA и а-ГМА.

3.2.4. Окрашивание парафиновых срезов биоптатов почек больных хроническим гломерулонефритом антителами к

CD34 и CD31.

3.2.5. Окрашивание парафиновых срезов почки крысы антителами kHLA-ABC.

3.3. Оценка выраженности экспрессии CD34 и CD клетками клубочка.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Морфологический анализ биоптатов почек больных хроническим гломерулонефритом.

4.1.1. Экспрессия CD34 и CD31 в нефробиоптатах больных хроническим гломерулонефритом.

4.1.2. Морфологические проявления гломерулонефрита.

4.1.2.1. Изучение присутствия CD34(+)/CD31(-)-клеток в клубочках при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита.

4.1.2.2. Изучение присутствия CD34(+)/CD31(-)-KneTOK в клубочках при различных значениях индекса склероза клубочков.

4.1.2.3. Изучение изменения индекса склероза клубочков при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита.

4.1.2.4. Изучение изменения уровня мочевины крови больных хроническим гломерулонефритом при различных значениях индекса воспалительной активности заболевания.

4.1.3. Изучение пролиферативной активности и миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков у больных хроническим гломерулонефритом.

4.1.3.1. Экспрессия PCNA в нефробиоптатах больных хроническим гломерулонефритом.

4.1.3.2. Изучение пролиферативной активности клеток клубочков при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита.

4.1.3.3 Изучение пролиферативной активности клеток клубочков при различных значениях индекса склероза клубочков.

4.1.3.4. Экспрессия а-ГМА в нефробиоптатах больных хроническим гломерулонефритом.

4.1.4.4. Изучение миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита.

4.1.3.5. Изучение миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков при различных значениях индекса склероза клубочков.

4.1.4. Сопоставление появления CD34(+)/CD31(-)-KrieTOK в клубочках с пролиферацией и миофибробластической трансдифференцировкой клеток клубочков.

4.2. Изучение миграции и распределения трансплантированных мононуклеаров пуповинной крови человека в интакных почках крыс.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Участие стволовых клеток в репаративной и физиологической регенерации почки"

АКТУАЛЬНОСТЬ

В рамках этого вопроса недостаточно изученными остаются клеточные основы патогенеза различных заболеваний почки, в частности, хронического гломерулонефрита.

Проблема хронического гломерулонефрита занимает одно из центральных место в нефрологии. Актуальность изучения патогенеза этого заболевания обусловлена его высокой распространённостью (гломерулонефрит занимает 3-4 место среди всех заболеваний почек [21]), поражением в основном работоспособной части населения, тяжестью прогноза (неизбежное развитие хронической почечной недостаточности [7]). Кроме того, крайне проблематичной остаётся терапия хронического гломерулонефрита, ведь, как известно, гемодиализ является лишь методом симптоматической терапии, направленным на снижение уровня азотистых оснований в крови, а трансплантация почки по ряду причин часто невозможна [40]. Существующая патогенетическая медикаментозная терапия бывает недостаточно эффективна и сопряжена с многочисленными побочными эффектами. В связи с этим необходимым является поиск новых, патогенетически обоснованных и более эффективных методов лечения. Одним из таких методов может стать клеточная терапия с использованием стволовых клеток.

На сегодняшний день идея регенеративной терапии различных заболеваний с использованием стволовых клеток, а также с применением специфических факторов роста, стимулирующих выход стволовых клеток в периферический кровоток, начала претворяться в жизнь [2]. В связи с этим исследователями ведётся интенсивное изучение участия стволовых клеток в регенерации органов и тканей и возможности применения этих клеток для патогенетической терапии различных заболеваний [47, 135, 143, 198, 225, 227], в том числе заболеваний почек [239]. Большую помощь в изучение поведения стволовых клеток оказывают методы иммуногистохимии [9], так как использующиеся специфические маркёры, позволяют не только идентифицировать гемопоэтические стволовые клетки, но и выявлять пути их миграции и дифференцировки.

Существует мнение, что, подобно другим органам, репаративная регенерация почки происходит за счёт трёх основных источников [124]: миграции и пролиферации неповреждённых дифференцированных клеток; активации и дифференцировки резидентных стволовых клеток; привлечения и дифференцировки циркулирующих стволовых клеток из костного мозга. Процесс миграции и пролиферации неповреждённых клеток самой почки является основным и наиболее изученным в регенерации этого органа [77, 84, 176]. Однако эти полученные фундаментальные знания мало помогли в разработке эффективной патогенетической терапии хронического гломерулонефрита. Относительно локализации региональных стволовых клеток в почке, активации и участия их в регенерации органа при повреждении нет однозначного мнения [132, 133, 134, 140, 153, 154, 191, 193, 218], что также препятствует разработке новых терапевтических подходов при лечении заболеваний почки. Поэтому огромные надежды возлагаются на использование экзогенных стволовых клеток [124], а особенно - гемопоэтических стволовых клеток, для терапии хронического гломерулонефрита.

В настоящее время существует большое количество работ, свидетельствующих об участии циркулирующих клеток костного мозга в восстановление канальцевого эпителия после острого повреждения [57, 60, 113, 186].

Вместе с этим, значительно хуже в отношении вклада стволовых клеток в регенерацию нефрона изучена модель хронического гломерулонефрита. Так, открытым остаётся вопрос об активации костномозгового компартмента и участии собственных стволовых клеток в регенерации почки при хроническом гломерулонефрите. В тоже время, именно эти данные крайне необходимы для определения целесообразности проведения трансплантации стволовых клеток для лечения гломерулонефрита.

Кроме того, прежде чем вводить экзогенные гемопоэтические стволовые клетки с целью лечения, необходимо знать, как они распределяются в неповреждённом органе.

В последнее время, как в эксперименте, так и в клинике, в качестве источника гемопоэтических стволовых клеток наибольшее значение приобретает пуповинная кровь [41, 51, 71, 228]. Это связано как с абсолютной безопасностью забора стволовых клеток [228], и возможностью длительного их хранения [228], так и с рядом качественных свойств самих стволовых клеток. Как известно, гемопоэтические стволовые клетки, выделенные из пуповинной крови, обладают значительно более высокой пролиферативной и клоногенной активностью [51, 71] и меньшей иммуногенностью по сравнению с клетками, полученными из взрослого организма [168].

В связи с этим, для корректного сопоставления результатов трансплантации стволовых клеток, полученных из разных источников, а также для оценки возможности применения стволовых клеток пуповинной крови для терапии заболеваний почки необходимо предварительно изучить, что происходит с этими клетками после трансплантации интактным животным: мигрируют ли трансплантированные клетки в почку, если да, то в какие её отделы и каковы пути их дальнейшей дифференцировки.

Таким образом, изучение поведения различных клеточных типов в регенерации почки при хроническом гломерулонефрите позволит установить участие собственных гемопоэтических стволовых клеток в этом процессе и определить возможность и перспективы трансплантации гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови для терапии заболеваний почки.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: изучить возможность участия гемопоэтических СБ34(+)-клеток в процессах регенерации нефронов у больных хроническим гломерулонефритом, а также хоуминг и дифференцировку мононуклеаров пуповинной крови человека в интактных почках крыс. ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. На основании иммуногистохимического анализа установить, участвуют ли гемопоэтические С034(+)-клетки в регенерации нефронов больных хроническим гломерулонефритом;

2. Изучить зависимость появления С034(+)-клеток в клубочках почки от степени развития морфологических проявлений гломерулонефрита (воспалительной активности заболевания и выраженности склероза клубочков);

3. Проанализировать пролиферативную активность и миофибробласическую. трансдифференцировку клеток клубочков и их изменения в зависимости от степени развития морфологических проявлений гломерулонефрита;

4. Провести сравнительный анализ участия гемопоэтических CD34(+)клеток и резидентных клеток клубочка (пролиферирующих клеток, миофибробластов) в регенерации клубочка при хроническом гломерулонефрите;

5. На основании иммуногистохимического исследования изучить миграцию, распределение и пути дифференцировки трансплантировании ых мононуклеаров пуповинной крови человека в почке здоровой крысы.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА В работе получены новые данные об участии собственных гемопоэтических СВ34(+)-клеток в регенерации клубочков почки при хроническом гломерулонефрите у человека. Так, впервые иммуногистохимическими методами показано, что в клубочках больных хроническим гломерулонефритом появляются С034(+)-клетки, не экспрессирующие маркёр эндотелия CD31, что свидетельствует об их принадлежности к гемопоэтическим стволовым клеткам. Было установлено, что появление этих клеток непосредственно зависит от выраженности развития морфологических проявлений гломерулонефрита. Приоритетными следует признать данные по анализу участия гемопоэтических стволовых клеток в регенерации почки в сопоставлении с изменением пролиферативной активности и миофибробластической трансдифференцировки резидентных клеток клубочков в зависимости от воспалительной активности заболевания и степени выраженности склероза клубочков. На основании полученных данных впервые было установлено, что чаще всего CD34(+)/CD31(-)-ioieTKH обнаруживаются в тех случаях, когда индекс воспалительной активности не превышает умереных значений, а индекс склероза почечных клубочков минимален. Несомненной новизной обладают данные о том, что эта стадия должна рассматриваться как переломный момент в течение гломерулонефрита когда восстановление клубочковой структуры и функции почек ещё может произойти. Возможно, это связано с тем, что при данных значениях воспаления и склероза вклад гемопоэтических стволовых клеток в процесс регенерации максимален, а склеротические изменения в клубочках пока незначительны.

Впервые показано, что мононуклеары пуповинной крови человека, трансплантированные в кровоток интактных крыс, мигрируют в почку и встраиваются в эпителиальную выстилку дистальных канальцев. Поскольку при повреждении клубочка СБ34(+)-клетки обнаруживаются в эндотелии клубочков, а в отсутствие такового — среди эпителия дистальных канальцев, мы выдвинули гипотезу, что эпителиальная выстилка дистальных канальцев может служить "нишей" для стволовых клеток почки.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Результаты диссертационного исследования расширяют и углубляют наши представления о клеточных механизмах регенерации почки человека. Так, нами установлено, что при хроническом гломерулонефрите восстановление нефрона происходит не только за счёт эндогенного резерва органа, но и гемопоэтических CD34(+)/CD31(-)-KneTOK. Совокупность данных, полученных на основании иммуногистохимического исследования, позволила выявить критический период в развитии гломерулонефрита, что важно для прогноза заболевания. Им является индекс воспалительной активности гломерулонефрита равный 1-4 баллам и индекс склероза клубочков равный 1-2 баллам. Именно в этот период заболевания в клубочках чаще определялись СВ34(+)-клетки, не экспрессиругощие CD31. Полученные данные имеют большое практическое значение, так как могут быть использованы для диагностики и определения прогноза течения заболевания у больных хроническим гломерулонефритом.

Проведённый эксперимент способствовал обнаружению новых фактов о способности мононуклеаров пуповинной крови человека, введённых в кровоток здоровой крысы, мигрировать в почку и заселять её. На основании того, что клетки человека обнаружены среди эпителия дистальных канальцев, было сделано предположение, что именно дистальные канальцы могут служить "нишей" прогениторных клеток почки.

Безусловно, полученные результаты о появлении С034(+)-клеток в нефроне могут быть использованы для дальнейшего изучения регенерации этого органа в норме и при повреждении, в разработке методов лечения хронических заболеваний почки с использованием стволовых клеток, а также будут полезны в поисках региональной стволовой клетки почки. Кроме того, результаты исследования должны быть использованы в учебном процессе при подготовке специалистов медико-биологического профиля.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ 1. Наличие CD34(+) / CD31(-)- клеток в клубочках почек больных хроническим гломерулонефритом является подтверждением гипотезы об участии прогениторных кроветворных клеток в регенерации органов, в частности почки, и это участие максимально при минимальной и умеренной воспалительной активности заболевания и минимальном склерозе клубочков. При более выраженном воспалении и склерозе регенерация происходит за счёт пролиферации и миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочка.

Результаты проведённого исследования внедрены в учебный процесс на кафедре нормальной анатомии и гистологии ГОУ ВПО "Казанский ГМУ Росздрава", включены в основной курс дополнительной образовательной программы "Молекулярная и клеточная медицина" ГОУ ВПО "Казанский ГМУ Росздрава". Иммуногистохимическая оценка к маркёрам CD31, CD34, PCNA, а-ГМА при комплексном исследовании хронического гломерулонефрита внедрена в практику ГМУ "Детская республиканская клиническая больница" (г. Казань).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные результаты диссертационной работы доложены на 77-й Всероссийской студенческой научной конференции, посвященной 125-летию со дня рождения профессора М.Н. Чебоксарова (Казань, 2003); XIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине" (Казань, 2008), XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине" (Казань, 2009) и XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые учёные в медицине" (Казань, 2010).

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ Диссертация изложена на 129 страницах машинописи и состоит из оглавления, введения, литературного обзора, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация иллюстрирована 6 таблицами и 20 рисунками. Список использованных источников включает 239 наименований, из которых 40 отечественных и 199 зарубежных.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Несмотря на большое количество исследований и кажущуюся хорошую изученность процессов регенерации для многих органов и тканей [22, 23], знаний о клеточных механизмах регенераторного ответа явно недостаточно. Это является одной из причин, препятствующих разработке новых методов лечения и, как следствие, существованию большого количества заболеваний, лечение которых крайне затруднительно, а не редко и, вообще, невозможно. Одним из таких органов является почка.

Трудность изучения процессов регенерации почки обусловлено сложной цитоархитектоникой этого органа, включающего большое количество клеточных типов [46]. Мы в своей работе остановимся на тех из них, которые принимают непосредственное участие в патогенезе хронического гломерулонефрита.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Йылмаз, Татьяна Сергеевна

6. Выводы

1. Гемопоэтические CD34(+)-клетки участвуют в регенерации клубочков почки при хроническом гломерулонефрите, и это участие зависит от выраженности морфологических проявлений заболевания (индекса воспалительной активности и индекса склероза клубочков);

3. С ростом индекса склероза клубочков почки уменьшается процент нефробиоптатов с наличием CD34(+)/CD31 (-)-клеток в клубочках. При склерозе 7 и более баллов гемопоэтические СВ34(+)-клетки в клубочках не обнаруживаются.

6. Расположение гемопоэтических С034(+)-клеток в нефроне зависит от состояния ткани почки. Так, в норме эти клетки обнаруживаются среди эпителиальной выстилки канальцев, в то время как при гломерулонефрите CD34(+)/CD31 (-)-клетки заселяют клубочки почки.

5. Заключение

Конец 20-го - начало 21-го веков ознаменовались интенсивным развитием нового раздела медицины - регенеративной медицины. Одна из её областей - трансплантация стволовых клеток - становиться всё более востребованной для лечения различных, считавшихся ранее неизлечимыми заболеваний. Огромные надежды возлагаются на стволовые клетки и в современной нефрологии, где очень актуальной в течение многих лет остаётся проблема хронического гломерулонефрита (ХГН).

ХГН характеризуется высокой распространённостью, поражением в основном лиц молодого и среднего возраста и неизбежным развитием нефросклероза и хронической почечной недостаточности [7, 21]. Кроме того, крайне проблематичной остаётся лечение данного заболевания. Так, существующая медикаментозная терапия часто мало эффективна и сопряжена с многочисленными побочными эффектами, гемодиализ является лишь методом паллиативной терапии, направленный на снижение уровня азотистых оснований в крови, а трансплантация почки по ряду причин часто невозможна [40]. В связи с этим очень актуален поиск новых, патогенетически обоснованных и более эффективных методов лечения, одним из которых может стать клеточная терапия с использованием стволовых клеток. Прежде чем разрабатывать тактику лечения конкретной почечной патологии, необходимо понять, принимают ли собственные гемопоэтические стволовые клетки периферической крови участие в восстановлении органа. Ответ на этот вопрос позволят оценить целесообразность трансплантации стволовых клеток при заболеваниях почек, а в дальнейшем позволит определить момент заболевания, когда эффективнее всего её проводить.

Кроме того, исследования по участию стволовых клеток в восстановлении почки при различных заболеваниях в основном проведены в экспериментах на животных. Конечно, эти данные необходимы, но они не могут быть полностью экстраполированы на человека. Поэтому для разработки новых методов лечения крайне важно проводить изучение процессов репарации в почке больных людей.

В тоже время, если планируется трансплантация стволовых клеток с целью лечения заболеваний почек, сначала необходимо изучить миграцию и распределение этих клеток в неповреждённом органе. Поэтому целью нашего исследования стало изучение участия собственных стволовых клеток в восстановлении почечных клубочков при ХГН у человека, а также изучение распределения фракции мононуклеаров пуповинной крови человека в неповреждённых почках после трансплантации этих клеток крысам.

Пуповинная кровь человека была выбрана не случайно, ведь в настоящее время интерес к пуповинной крови, как источнику стволовых клеток, постоянно растёт. Это связано не только с минимальным риском для здоровья донора, но и с рядом качественных и количественных характеристик получаемой фракции клеток, выгодно отличающих их от клеток, полученных из других источников [51, 71, 168, 228]. Кроме того, естественной меткой введённых клеток служил лейкоцитарный антиген человека (HLA-ABC), не экспрессируемый клетками крыс, что освобождает от необходимости метить клетки перед трансплантацией.

Относительно участия стволовых клеток в процессах репаративной регенерации почек существует большое количество работ, но основной акцент обычно делается на изучении острой почечной недостаточности [57, 113, 148, 186], в то время как хроническим процессам уделяется гораздо меньше внимания. И действительно, в условиях острого повреждения, когда регенерация протекает за счёт активной пролиферации клеток собственного резерва, очень важно изучать резидентные стволовые клетки и медиаторы, активирующие их к дифференцировке и восстановлению повреждённых структур. В условиях же хронического повреждения, когда пул эндогенных клеток истощён, единственной надеждой на сохранение органа являются мигрирующие из кровотока стволовые клетки (принадлежащие собственному организму или трансплантированные).

Для того, чтобы ответить на вопрос о возможности участия гемопоэтических стволовых клеток в регенерации клубочков, мы проводили иммуногистохимическое исследование с антителами против CD31 (маркёр эндотелиальных клеток) [171, 211] и CD34 (маркёр эндотелиальных клеток и клеток-предшественниц гемопоэза) [64, 68, 91, 172, 188] серийных нефробиоптатов больных различными клинико-морфологическими формами ГН. Сравнительный анализ экспрессии изучаемых маркёров клетками клубочков выявил, что у трети больных экспрессия CD34 преобладает над CD31, т.е. в клубочках обнаруживались клетки с фенотипом CD34(+)/CD31(-), которые расценивались нами, как гемопоэтические С034(+)-клетки. Для того чтобы понять, от чего это зависит появление этих клеток к клубочках, мы изучали зависимость наличия CD34(+)/CD31 (-)-клеток в почечных клубочках от выраженности морфологических проявлений ГН, оцениваемую индексом воспалительной активности заболевания и индексом склероза клубочков. Также сопоставляли участие в регенерации клубочков этих клеток с активацией более изученных путей регенерации - пролиферацией и миофибробластической трансдифференцировкой клеток клубочков.

В результате было установлено, что значительно чаще CD34(+)/CD31(-)-клетки обнаруживаются в почечных клубочках биоптатов с минимальными и умеренными значениями индекса воспалительной активности ГН (1-4 балла) и минимальными значениями индекса склероза клубочков (1-2 балла). Дальнейшее нарастание воспалительных изменений в почке и усиление склеротических процессов в клубочках сопровождалось существенным снижением вклада гемопоэтических CD34(+)-kлеток в регенерацию клубочков. В тоже время число нефробиоптатов с пролиферирующими клетками и миофибробластами в клубочках нарастало по мере усиления воспаления и склероза и становилось максимальным при средних и высоких значениях воспалительной активности ГН (более 4 баллов) и высоких значениях клубочкового склероза (7 и более баллов). На основании этого мы предположили, что активация стволового компартмента и активация пролиферации и миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков - это два разнонаправленных механизма почечной регенерации. По всей вероятности, появление гемопоэтических С034(+)-клеток в клубочках больных ГН необходимо для восстановления эндотелиальной выстилки капилляров, т.е. участие этих клеток в регенерации направляет её по пути реституции. В условиях хронического повреждения этого оказывается недостаточно. Единственными клетками, способными заполнить образовавшиеся пустоты, являются мезангиальные клетки, которые активно пролиферируют, трансдифференцируются в миофибробласты и синтезируют молекулы нефизиологического матрикса. Всё это ведёт к неизбежному развитию склероза клубочков и хронической почечной недостаточности, т.е. процесс регенерации протекает по пути субституции.

Таким образом, стадия ГН, когда индекс воспалительной активности составляет от 1 до 4 баллов, а индекс склероза клубочков равен 1-2 баллам - это тот морфологически благоприятный момент в течение заболевания, когда высока вероятность того, что в результате регенерации может произойти восстановление нормальной структуры и функции органа. Возможно, это связано с присутствием CD34(+)/CD31(-)-ioieTOK и минимальными склеротическими изменениями клубочков. Другими словами, именно в этот момент решается, что станет исходом регенерации - восстановление структуры и функции почки или развитие нефросклероза.

Полученные результаты позволяют ответить на ряд практических вопросов. Мы считаем, что для трансплантации лучше всего применять собственные гемопоэтические С034(+)-клетки, полученные из периферической крови самого больного, т.к. это позволяет избежать развития реакции "трансплантата против хозяина". Местом введения клеток могут служить почечные артерии. Что же касается момента трансплантации, то с одной стороны, введённые при минимальных и умеренных значениях индекса воспаления и при минимальном склерозе СВ34(+)-клетки создадут дополнительный регенераторный резерв уже имеющимся в клубочках CD34(+)/CD31(-)-KneTKaM. С другой стороны, трансплантация ГСК при изначально высоких значениях склероза почки, возможно, приведёт к улучшению структуры почки, подобно тому, как это происходило с печенью при лечении больных с алкогольным циррозом [33]. Окончательный ответ на этот вопрос позволят дать клинические испытания.

Для изучения хоуминга и заселения стволовыми клетками интактных почек мы трансплантировали фракцию мононуклеаров пуповинной крови человека (обогащенную гемопоэтическими стволовыми клетками) в кровоток здоровых крыс и изучали миграцию и распределение введённых клеток по экспрессии специфического маркера клеток человека HLA-ABC.

Нами было показано, что мононуклеары пуповинной крови человека мигрируют в здоровую почку и встраиваются в эпителиальную выстилку дистальных канальцев.

Тот факт, что гемопоэтические С034(+)-клетки при ГН обнаруживаются в клубочках, а при отсутствии повреждения - в канальцах, по-видимому, связан с тем, что стволовые клетки, попав в здоровый орган, где в данный момент в них нет необходимости, сохраняются в нём в качестве "резерва". В органах стволовые клетки располагаются на специальных "нишах" [145]. Относительно локализации "ниши" в почке нет единого мнения [132, 133,134, 140, 153, 154, 191, 193, 218]. На основании результатов нашего исследования мы предполагаем, что именно дистальные извитые канальцы могут служить такой "нишей".

Подводя итог всего нашего исследования, мы пришли к заключению, что гемопоэтические СЭ34(+)-клетки участвуют в процессах регенерации почки, как при повреждении, так и в норме. Причём, распределение этих клеток в нефроне напрямую зависит от состояния органа. Так, при ГН гемопоэтические СБ34(+)-клетки обнаруживаются в почечных клубочках. Кроме того, появление этих клеток в клубочке непосредственно зависит от степени морфологических проявлений ГН. В неповреждённой же почке ГСК располагаются среди эпителиальной выстилки дистальных канальцев, и, по всей вероятности, служат дополнительным резервом для регенерации органа.

Таким образом, полученные нами данные позволили по-новому взглянуть на физиологическое обновление почки и восстановление её после повреждения, а также позволяют говорить о целесообразности дальнейшего изучения данной проблемы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Йылмаз, Татьяна Сергеевна, Казань

1. Аруин Л.И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника / Л.И. Аруин, Л.Л. Капуллер, В.А. Исаков. М.: Триада-Х, 1998. - 496 с.

2. Биологические основы и перспективы терапии стволовыми клетками / Е.Б. Владимирская и др.. М.: ИД МЕДПРАКТИКА-М, 2005. - 392 с.

3. Бозо И .Я. "Фибробласт" — специализированная клетка или функциональное состояние клеток мезенхимного происхождения? / И.Я. Бозо, Р.В. Деев, Г.П. Пинаев. //-Цитология. -2010. Т. 52, № 2. - С. 99-108.

4. Гривцова Л.Ю. Субпопуляции трансплантируемых стволовых кроветворных клеток /Л.Ю. Гривцова, Н.Н. Тупицын //Гематология гемопоэза. 2006. - Т. 3.1. С. 24-42.

5. Ермоленко В.М. Острая почечная недостаточность / В.М. Ермоленко // Нефрология: Руководство для врачей / Под ред. И.Е. Тареевой. М.: Медицина, 2000.-Гл. 38.-С. 580-595.

6. Ермоленко В.М. Хроническая почечная недостаточность / В.М. Ермоленко // Нефрология: Руководство для врачей / Под ред. И.Е. Тареевой. М.: Медицина, 2000.-Гл. 39.-С. 596-657.

7. Картамышева Н.Н. Некоторые механизмы формирования тубулоинтерстициального компонента при хронических заболеванияхпочек Электронный доступ. / Н.Н. Картамышева, О.В. Чумакова //

8. Нефрология и диализ. 2001. — Т.З, №3. Режим доступа: http://www.nephro.ru/magazine/, свободный.

9. Киясов А.П. Современные технологии морфологических исследований/ А.П. Киясов. — Казань: КГМУ, 2001. (Методическое пособие для студентов, аспирантов и врачей-патологов). — 38 с.

10. Ключевые проблемы гломерулонефрита / В. В. Серов и др. // Тер. архив. -1992.-№6.-С. 5-10.

11. Кононский А.И. Гистохимия/А.И.Кононский.-Киев:Вища Школа, 1976.-280с.

12. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов. — Л.: Медгиз, 1969. 424 с.

13. Мецлер Д. Биохимия. Химические реакции в живой клетке: в 3 т. // Д. Мецлер. М.: Мир, 1980. - 3 Т. - 488 с.

14. Наточин Ю.В. Механизмы мочеобразования / Ю.В. Наточин // Нефрология: Руководство для врачей/Под ред. И.Е. Тареевой. М.: Медицина, 2000. - Гл.2. -С. 24-48.

15. Пальцева Е.М. Экспериментальные модели хронических заболеваний почек / Е.М.Пальцева // Клиническая нефрология. 2009. - №2. - С. 37-42.

16. Полак Дж. Введение в иммуногистохимию: современные методы и проблемы / Дж. Полак, С. Ван Норден. -М.: Мир, 1987. 185 с.

17. Прогрессирование хронического гломерулонефрита: клинико-морфологические взаимосвязи Электронный доступ. / Н. Н. Картамышева [и др.] // Нефрология и диализ. 2003. - Т. 5, №4. - Режим доступа: http://www.nephro.ru/magazine/, свободный.

18. Прогрессирование хронического гломерулонефрита связано с развитием ишемии почечного тубулоинтерстиция / М.Ю. Швецов и др. // Терапевтический архив. — 2009. №8. - С. 14.

19. Ракитянская И.А. Роль мононуклеаров в поражении нефрона у больных хроническим гломерулонефритом. Сообщение I. / И.А. Ракитянская, С.И. Рябов // Нефрология. 1997. - Т.1, №2. - С. 45-52.

20. Рябов С.И. Нефрология: Руководство для врачей / С.И. Рябов. СПб.: СпецЛит, 2000. - 672 с.

21. Саркисов Д.С. Очерки истории общей патологии / Д.С. Саркисов. М.: Медицина, 1988.-448 с.

22. Саркизов Д.С. Регенерация и её клиническое значение / Д.С. Саркизов. — М.: Медицина, 1970. 284 с.

23. Семченко В.В. Гистологическая техника / В.В. Семченко, С.А. Барашкова, В .И. Ноздрин Омск: Орёл, 2006. - 272 с.

24. Серов В.В. Иммунопатология почек / Серов В.В., Варшавский В.А., В.А. Куприяновой М.: Медицина, 1983. - 176 с.

25. Серов В.В. Новые данные о клинико-морфологической гетерогенности хронического гломерулонефрита / В.В. Серов // Вестн. РАМН. 1995. - №5. -С. 43-47.

26. Серов В.В. Функциональная морфология почек / В.В. Серов // Нефрология: Руководство для врачей / Под ред. И.Е. Тареевой. М.: Медицина, 2000. - Гл. 1. -С. 12-23.

27. Серов В.В. Что назвать гломерулонефритом: спорные вопросы классификации/В .В. Серов, В.А. Варшавский//Арх. Пат. 1987. -№1- С.67-75.

28. Серов В.В., Варшавский В.А. Морфология гломерулонефрита / Нефрология. Руководство для врачей (под ред. Тареевой И.Е.).-М.: Медицина-2000.1. С. 211-224.

29. Сметанникова Т.С. Кроветворные стволовые клетки участвуют врегенерации почки при гломерулонефрите/Т.С. Сметанникова, А.С. Хайруллов// Морфологические ведомости (приложение) №1-2. - 2004 - С. 95.

30. Стволовые гемопоэтические клетки в крови онкологических больных: экспрессия CD34 и колониеобразование / Л.Ю. Андреева и др. // Гематология и трансфузиология. 1999. - Т. 44, № 4. - С. 3-6.

31. Тареев Е.М. Гломерулонефриты: Общие вопросы. Клиника / Е.М. Тареев // Нефрология: Руководство для врачей / Под ред. И.Е. Тареевой. М.: Медицина, 2000.-Гл. 9.-С. 188-205.

32. Трансплантация аутогенных гемопоэтических стволовых клеток больнымхроническими гепатитами / А.П. Киясов и др. // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2008. - Т.З, №1. - С. 70-75.

33. Угрюмов М.В. Современные методы иммуноцитохимии и гистохимии /М.В. Угрюмов // Итоги науки и техники ВИНИТИ, серия "Морфология". -1991.-Т. 15. С. 115.

34. Участие кроветворных стволовых клеток в регенерации почки при хроническом гломерулонефрите / Т.С. Сметанникова и др. // "Нефрология. -2006.-№1.-Р. 45-49.

35. Хайруллов А.С. 11. Морфо-функциональные критерии оценки активности и прогрессирования гломерулонефрита автореф. дис."." канд. мед. наук / А.С. Хайруллов; Казанский госуд.мед.унив. Казань, 1991. - 20 с.

36. Ченцов Ю.С. Общая цитология / Ю.С. Ченцов. Издательство московского университета, 1984. 352 с.

37. Чиж А.С. Нефрология в терапевтической практике / А.С. Чиж. Минск: Вышэйская школа, 1998. 557 с.

38. Шилов Е. М. Механизмы прогрессирования гломерулонефрита / Шилов // Нефрология: Руководство для врачей // Е.М. Под ред. И.Е. Тареевой.

39. М.: Медицина, 2000. Гл. 9. - С. 224-239.

40. Шумакова В.И. Трансплантация почки / В.И. Шумакова, Я.Г. Мойсюк, Н.А

41. Томилина // Нефрология: Руководство для врачей / Под ред. И.Е. Тареевой. -М.: Медицина, 2000. Гл. 40. - С. 658-682.

42. A clinically useful source of transplantable hematopoietic stem/progenitor cells. Human umbilical cord blood / H.E. Broxmeyer et al. // Int J Cell Cloning. 1990. -Vol. 8.-P. 76-91.

43. A role for podocytes to counteract capillary wall distention / W. Kriz et al. // Kidney Int. 1994. - Vol. 9. - P. 369-375.

44. Abboud H.E. Resident glomerular cells in glomerular injury: mesangial cells / H.E. Abboud//Semin Nephrol. 1991.-Vol. 11.-P. 304-310.

45. Activation-dependent changes in human platelet PECAM-1: phosphorylation, cytoskeletal association, and surface membrane redistribution / P.J. Newman et al. // J Cell Biol. 1992. - Vol. 119. - P. 239-246.

46. Administered mesenchymal stem cells protect against ischemic acute renal failure through differentiation-independent mechanisms / F. Togel et al. // Am J Physiol Renal Physiol. 2005. - Vol. 289. - P. 29 -30.

47. Al-Awqati Q. Stem cells in the kidney / Q. Al-Awqati, J.A. Oliver // Kidney Int. -2002.-Vol. 61. -P. 387-395.

48. Almeida-Porada G./Bone marrow stem cells and liver regeneration//G.Almeida-Porada, E.D. Zanjani, C.D. Porada//Exp Hematol-2010. Vol.38, №7. - P. 574-580.

49. Anderson D.J. Can stem cells cross lineage boundaries? / D.J. Anderson, F.H. Gage, I.L.Weissman // Nat Med. 2001. - Vol. 7. - P. 393-395.

50. Apoptosis in the repair process of experimental proliferative glomerulonephritis / A. Shimizu et al. // Kidney Int. 1995. - Vol. 47, № 1. - P. 114-121.

51. Asanuma K. The role of podocytes in glomerular pathobiology / K. Asanuma, P. Mundel. // Clin Exp Nephrol. 2003. - Vol. 7, № 4. - P. 255-259.

52. Ballen K.K. New trend in umbilical cord blood transplantation / K.K. Ballen // Blood. 2005. - Vol. 105. - P. 3786-3792.

53. Basile D.P. Expression of bsl-2 and bax in regenerating rat renal tubules following ischemic injury / D.P. Basile, H. Liapis, M.R. Hammerman // Am J Physiol. 1997. - Vol. 272. - P. 640-670.

54. Bone marrow cells contribute to regeneration of damaged glomerular endothelial cells / K. Ikarashi et al. // Kidney International. 2005. - Vol. 67. - P. 1925-1933.

55. Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium / D.Orlic et al. // Nature. -2001.-Vol. 410.-P. 701-705.

56. Bone marrow contributes to renal parenchymal turnover and regeneration / R. Poulsom et al. / J Pathol. 2001. - Vol. 195, №2. - C. 229-235.

57. Bone marrow is a reservoir of repopulating mesangial cells during glomerular remodeling / T. Ito et al. // J Am Soc Nephrol. Vol. 12. - 2001. - P. 2625-2635.

58. Bone marrow stem cells contribute to repair of the ischemically injured renal tubule / S. Kale et al. // J Clin Investig. 2003. - Vol. 112. - P. 42-49.

59. Bone marrow-derived cells contribute to glomerular endothelial repair in experimental glomerulonephritis / M.B. Rookmaaker et al. // Am J of Pathology. -2003.-V. 163.-P. 553-562.

60. Bone marrow-derived stem cells initiate pancreatic regeneration/ D. Hess et al.// Nat Biotechnol. 2003. - Vol. 21. - P. 763 - 770.

61. Bone marrow-derived cells mobilized by granulocyte-colony stimulating factor facilitate vascular regeneration in mouse kidney after ischemia/reperfusion injury/S. Akihama et al.// Tohoku J Exp Med. 2007. - Vol. 213, №4. - P.341-349.

62. Bonnet D. Haematopoietic stem cells / D. Bonnet // J Pathol. 2002. - Vol.197, № 4. - P. 430-440.

63. Bonventre J.V. Dedifferentiation and proliferation of surviving epithelial cells in acute renal failure / J.V. Bonventre // J Am Soc Nephrol. 2003. - Vol. 14, Suppl 1. -P. S55-S61.

64. Boukhalfa G. Relationship between alpha-smooth actin expression and fibrotic changes in human kidney / G. Bouhalfa // Exp. Nephrol. 1996. - Vol.4, №4.1. P. 241-247.

65. Burn T.C. The human CD34 hematopoietic stem cell antigen promoter and a 3' enhancer direct hematopoietic expression in tissue culture / T.C. Burn, A.B. Satterthwaite, D.G. Tenen // Blood. 1992. - Vol.80, №12. - P.3051 - 3059.

66. Burrow C.R. A putative Wilms tumor-secreted grown factor activity required for primary culture of human nephroblasts / C.R. Burrow, P.D. Wilson // Proc Nalt Acad Sci USA. 1993. - Vol. 90. - P. 6066-6070.

67. Burton C. The role of proteinuria in the progression of chronic renal failure / C. Burton, K.P. Harris // Am J Kidney D. 1996. - Vol. 27. - P. 765-775.

68. Buttinger E.P. TGF-b signaling in renal disease / E.P. Buttinger, M. Bitzer // J Am Soc Nephrol. 2002. - Vol. 13. - P. 2600-2610.

69. CD34: structure, biology, and clinical utility / D.S. Krause et al. // Blood.1996.-Vol. 87, № l.-P. 1-13.

70. Characterization of renal interstitial fibroblast-specific protein l/S100A4-positive cells in healthy and inflamed rodent kidneys / M.L. Hir et al. // Histochemistry and Cell Biology. 2005. - Vol. 123, №4-5. - P.335-346.

71. Chen H. Reg ulation of tensin-promoted cell migration by its focal adhesion binding and Src homology domain 2 / H. Chen, S.H. Lo // Biochem J. 2003. - Vol. 370.-P. 1039-1045.

72. Cairo M.S. Placental and/or umbilical cord blood: an alternative source of hematopoietic stem cells for transplantation / M.S. Cairo, J.E. Wagner // Blood.1997. Vol. 90, №12. - P. 4665-4678.

73. Congenital nephrotic syndrome in mice lacking CD2-associated protein/N.Y. Shih et al. // Science. 1999. - Vol. 286. - P. 312-315.

74. Contractile cells of the kidney in primary glomerular disorders: An immunohistochemical study using an anti-alpha-smooth muscle actin monoclonal antibody/B.R. Macpherson et al. //Hum. Pathol. 1993. - Vol.24, № 7. -P.710-716.

75. Cuppage F.E. Cell cycle studies in the regenerating rat nephron following injury with mercuric chloride / F.E. Cuppage, M. Chiga, A. Tate // Lab Invest. 1972. -Vol. 26.-P. 122-126.

76. Cytokinses and grown factors in renal disease / I.L. Noronha et al. // Nephrol. Dial. Transplant. 1995. - Vol. 10. - P. 775 - 786

77. Daley G. Realistic prospects for stem cell therapeutics / G. Daley, M. Goodel, E. Snyder // Hemotology. 2003. - P. 398-418.

78. Direct isolation of human central nervous system stem cells / N. Uchida et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2000. Vol. 97. - P. 14720-14725.

79. Dissociation of mesangial cell migration and proliferation in experimental glomerulonephritis/L.A.Haseley et al.//Kidney Int.-1999.-Vol.56, №3.-P. 964-972.

80. Dressier G.R. The cellular basis of kidney development / G.R. Dressier // Annu Rev Cell Dev Biol. 2006. - Vol. 22. - P. 509-529.

81. Duffield J.S. Kidney tubular epithelium is restored without replacement with bone marrow-derived cells during repair after ischemic injury / J.S. Duffield,

82. J.V. Bonventre // Kidney Int. 2005. - Vol. 68, № 5. - P. 1956-1961.

83. Dystrophin expression in the mdx mouse restored by stem cells transplantation / E. Gussoni et al. // Nature. 1999. - Vol. 401. - P. 390 - 394.

84. Eddy A.A. Renal expression of genes that promote interstirial inflammation and fibrosis in rats with protein-overload proteinuria / A.A. Eddy, C.M. Giachelli // Kidney Int. 1995.-Vol. 47.-P. 1546-1557.

85. Effects of antigen retrieval by microwave heating in formalin-fixed tissue sections on a broad panel of antibodies / R. Von Wasielewski et al. // Histochem. -1994.-Vol. 102.-P. 165-172.

86. El-Nahas A.M. Plasticityof kidney cells: role in kidney remodeling and scarring / A.M. El-Nahas // Kidney Int. 2003. - Vol. 64. - P. 1553-1563.

87. Enhanced expression of "muscle-specific" actin in glomerulonephritis /

88. C.E. Alpers et al. // Kidney Int. 1992. - Vol. 41. - P. 1134-1142.

89. Enhancement of neovascularization with cord blood CD 133+ cell-derived endothelial progenitor cell transplantation / C.Yang et al. // Thromb Haemost. -2004.-Vol. 91, №6.-P. 1202-1212.

90. Erica L. Plasticity of marrow-derived stem cells / L. Erica, C. Li, D.S. Krause // Blood. 2003. - Vol. 102, № 10. - P. 3483-3493.

91. Expression of cyclin Dl, Ki-67 and PCNA in non-small cell lung cancer: prognostic significance and comparison with p53 and bcl-2 / V.N. Nguen et al. // Acta Histochem. 2000. -Vol. 102. - P.323-338.

92. Expression of embryonic fibronectin isoform EIIIA parallels alpha-smooth muscle actin in maturing and diseased kidney. / V.L. Barnes et al.// J Histochen Cytochem. 1999. - Vol. 47, №60. - P. 787-798.

93. Expression of smooth muscle cell phenotype by rat mesangial cells in immune complex nephritis. Alpha-smooth muscle actin is a marker of mesangial cell proliferation / RJ. Johnson et al. // J Clin Invest. 1991. - Vol. 87. - P. 847-858.

94. Expression of the CD34 gene in vascular endothelial cells / L. Fina et al. // Blood. 1990. - Vol. 75. - P. 2417-2426.

95. Extracellular matrix deposition and cell proliferation in a model of chronic glomerulonephritis in the rat / S. Harendza et al. // Nephrol Dial Transplant. 1999. - Vol. 14, № 12. - P. 2873-2879.

96. Extraglomerular origin of the mesangial cell after injury. A new role of the juxtaglomerular apparatus / C.Hugo et al. // Clin Invest. 1997.-Vol. 100.1. P. 786 -794.

97. Farquhar M.G. Glomerular permeability I, Feritin transfer across the glomerular capillary wall / M.G. Farquhar, S.L. Wissig, G.E. Palade // J Exp Med. 1961. -Vol. 113.-P. 47-66.

98. Farquhar M.G. Glomerular permeability II, Feritin transfer across the glomerular capillary wall in nephritic rats / M.G. Farquhar, G.E. Palade // J Exp Med. 1961. -Vol. 114.-P. 699-716.

99. Fat is a component of glomerular slit diaphragms /Т. Inoue et al. // Kidney Int. -2001.-Vol. 59.-P. 1003-1012.

100. Fibbe W.E. Mesenchymal stem cells. A potential source for skeletal repair / W.E. Fibbe // Annals of the rheumatic diseases. 2002. - Vol. 61. - P. 29-31.

101. Fine L.G. Progressive renal disease: the chronic hypoxia hypothesis / L.G. Fine, C. Orphanides, J.T. Norman // Kidney Int Supple. 1998. - Vol. 65. - P. S74-S78.

102. From marrow to brain: expression of neuronal phenotypes in adult mice / T.R. Brazelton et al. // Science. 2000. - Vol. 279. - P. 1775 - 1779.

103. Functional expression of HGF and HGF receptor/c-met in adult human mesenchymal stem cells suggests a role in cell mobilization, tissue repair, and woundhealing / S. Neuss et al. // Stem Cells. 2004. - Vol. 22. - P. 405-414.

104. Fusion of bone-marrow-derived cells with Purkinje neurons, cardiomyocytes and hepatocytes / M. Alvarez-Dolado et al. // Nature. 2003. - Vol. 425.1. P. 968-973.

105. Gage F.H. Mammalian neural stem cells / F.H. Gage // Science. 2000. - Vol. 287.-P. 1433-1438.

106. Gluckman E. Cord blood banking and transplant in Europe. Eurocord /

107. E.Gluckman, V. Rocha, С. Chastang // Vox Sang. 1998. - Vol. 74, Suppl 2. -P. S95-S101.

108. Guo J.K. Bone marrow transplantation can attenuate the progression of mesangial sclerosis / J.K. Guo, A. Schedl, D.S. Krause // Stem cells. 2006.1. Vol. 24, №2. -P. 406-415.

109. Gurner A.S. The origin of la-antigen expressing cells in the rat kidney / A.S. Gurner, J. Smith, V. Cattelle//Amer J Pathol. 1987. -Vol.127, №2.-P.342-348.

110. Hassan H.T. Adult bone-marrow stem cells and their potential in medicine / H.T. Hassan , M. El-Sheemy / J R Soc Med. 2004. - Vol. 97, № 10. - P. 465-471.

111. HawleyR.G. Hematopoietic stem cells/R.G. Hawley, A. Ramezani, T.S.Hawley// Methods Enzymol. 2006. - Vol. 419.-P. 149-179.

112. Hawley T.S. Methods in Molecular Biology: Flow Cytometry Protocols / T.S. Hawley, R.G. Hawley, N.J. Totowa; . edited by T.S. Hawley, 2nd ed -Humana Press Inc, 2004. 263 p.

113. Haynesworth S.E. Cell surface antigens on human marrow-derived mesenchymal cells are detected by monoclonal antibodies / S.E. Haynesworth,

114. M.A. Barber, I.A. Caplan // Bone. 1992. - Vol. 13. - P. 69-80.

115. Hematopoietic origin of glomerular mesangial cells / M. Masuya et al. // Blood. -2003. Vol.101, № 6. - P. 2215-2218.

116. Hematopoietic stem cells contribute to the regeneration of renal tubules after renal ischemia-reperfusion injury in mice / F. Lin et al. // J Am Soc Nephrol. -2003.-Vol. 14.-P. 1188-1199.

117. Hematopoietic stem cells differentiate into vascular cells that participate in the pathogenesis of atherosclerosis / M. Sata et al. // Nat Med. 2002. - Vol. 8, № 4. -P. 403-409.

118. Herzog E.L. Plasticity of marrow-derived stem cells / E.L. Herzog, L. Chai, D.S. Krause // Blood. 2003. - Vol. 102, №10. - P. 3483-3493.

119. High levels of interleukin 10 production in vivo are associated with tolerance in SCID patients transplanted with HLA mismatched hematopoietic stem cells /

120. R. Bacchetta et al. // J Exp Med. 1994. - Vol. 179. - P. 493-502.

121. Holthofer H. The glomerular mesangium: studies of its developmental origin and markers in vivo and in vitro / H. Holthofer, K. Sainio, A. Miettinen // APMIS. -1995.-Vol. 103.-P. 354-366.

122. Human renal tubular cells as a cytokine source: PDGF-b, GM-SCF and IL-6 mRNA expression in vitro / J. Frank et al. // Exp Nephrol. 1993. - Vol. 1, №1. -P. 26-35.

123. Human umbilical cord-derived endothelial progenitor cells promote growth cytokines-mediated neorevascularization in rat myocardial infarction / C.H. Huet al. // Chin Med J. 2009. - Vol. 122, № 5. - P. 548-555.

124. Immunocytological localization of epidermal grown factor in the rat kidney after drug-induced tubular injury /D. Nonclercq et al.//Eur J Morphol. 1993. -Vol. 31, № 1-2.-P. 65-71.

125. Immunoelectron microscopic demonstration of Thy-1 antigen on the surfaces of mesangial cells in the rat glomerulus / T. Yamamoto et al. // Nephron. 1986. -Vol. 43, №4.-P. 293-298.

126. Impaired recruitment of bone-marrow-derived endothelial and hematopoietic precursor cells blocks tumor angiogenesis and growth / D. Lyden et al. //Nat Med. -2001.-Vol.7,№ 11.-P. 1194-1201.

127. In search of renal stem cells / F. Anglani et al. // J Cell Mol Med. 2004. -Vol. 8.-P. 474-487.

128. In vitro genetic selection of renal proximal tubules / P.K. Held et al. // Mol Ther. 2006. - Vol. 13, № 1. - P. 49-58.

129. In vivo and in vitro stem cell function of c-kit- and Sea-1-positive murine hematopoietic cells/S. Okada et al.//Blood. 1992. - Vol. 80, №12. - P. 3044-3050.

130. Increased synthesis of extracellular matrix in mesangial proliferative nephritis / J. Floege et al. // Kidney Int. 1991. - Vol. 40, №3. -P. 477-488.

131. Induction of irreversible glomerulosclerosis in the rat by repeated injections of a monoclonal anti-Thy-1.1 antibody / H. Morita et al. // Nephron. 1992. - Vol. 60, № 1. - P. 92-99.

132. Intrarenal injection of bone marrow-derived angiogenic cells reduces endothelial injury and mesangial cell activation in experimental glomerulonephritis /

133. H. Uchimura et al. // J Am Soc Nephrol. 2005. - Vol. 16, №4. - P. 997-1004.

134. Intravenous administration of human umbilical cord blood cells in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis: distribution, migration and differentiation/ S. Garbuzova-Davis et al.//J Hematother Stem Cell Res.- 2003.-Vol.12. P. 255-270.

135. Ischemia- and cytokine-induced mobilization of bone marrow-derived endothelial progenitor cells for neovascularization / T. Takahashi et al. // Nat Med. 1999. - Vol. 5, №4. - P. 434-438.

136. Isolation and characterization of kidney-derived stem cells / S. Gupta et al. / J Am Soc Nephrol. 2006. - Vol. 17. - P. 3028-3040.

137. Isolation and characterization of multipotent progenitor cells from the Bowman's capsule of adult human kidneys / C. Sagrinati et al. // J Am Soc Nephrol. 2006. -Vol. 17.-P. 2443-2456.

138. Isolation of renal progenitor cells from adult human kidney/B.Bussolati et al. // Am J Pathol. 2005. - Vol. 166. - P. 545-555.

139. Jeganathan V.S. / Treatment viability of stem cells in ophthalmology//

140. V.S. Jeganathan, M. Palanisamy // Curr Opin Ophthalmol. 2010. - Vol. 21, №3. -P. 213-217.

141. Johnson R.J. What mediates progressive glomerulosclerosis? The glomerular endothelium comes of age / R.J. Johnson // Am J Pathol. 1997. - Vol. 151. - P. 1179-1181.

142. Kashgarian M. Mesangium and glomerular disease / M. Kashgarian //Lab Investig. 1984. - Vol.52, №6. - P. 569-571.

143. Kelman Z. PCNA: Structure, function and interaction / Z. Kelman // Oncogene. 1997. - Vol. 14. - P. 629-640.

144. Kidney, blood, and endothelium: developmental expression of stem cell leukemia during nephrogenesis / B. Dekel et al. // Kidney Int. 2004. - Vol. 64. -P. 1162-1169.

145. Kim D. Nephrogenic factors promote differentiation of mouse embryonic stem cells into renal epithelia / D. Kim, Dressier G.R.// J Am Soc Nephrol. 2005.1. Vol. 16.-P. 3527-3534.

146. Klahr S. Mechanisms of progression of chronic renal damage / S. Klahr // J Nephrol. 1999. - Vol. 12, Suppl 2. - P. S53-S62.

147. Kriz W. Progression of glomerular diseases: is the podocyte the culprit? / W. Kriz, N. Gretz, K.V. Lemley // Kidney Int. 1998. - Vol. 54. - P. 687-697.

148. Kumar A.H. / Clinical potential of adult vascular progenitor cells.// A.H. Kumar, N.M. Caplice//Arterioscler Thromb Vase Biol.- 2010. Vol. 30,№6. - P. 1080-1087.

149. Lan H.Y. Initiation and evolution of interstitial leukocytic infiltration in experimental glomerulonephritis / H.Y. Lan, D.J. Nikolic-Paterson, R.C. Atkins // Kidney Int. 1991. - Vol. 40. - P. 425-433.

150. Lavker R.M.: Epidermal stem cells: Properties, markers and location / R.M. Lavker, T.T. Sun // Proc Natl Acad Sci USA. 2000. - Vol. 97. - P. 13473-13475.

151. Lee S.H. Mechanism of elongation of primed DNA by DNA polimerase delta,proliferating cell nuclear antigen, and activator 1 / S.H. Lee, J. Hurwitz // Proc Natl Acad Sci USA. 1990. - Vol. 87. - P. 672-676.

152. Lemischka I. The heamatopoietic stem cell and its clonal progeny: mechanisms regulating the hierarchy of primitive hematopoietic cells / I. Lemischka // Cancer Surv.- 1992.-Vol. 15.-P. 3-18.

153. Lin F. Intrarenal cells, not bone marrow-derived cells, are the major source for regeneration in postischemic kidney / F. Lin, A. Moan, P. Igarashi // J Clin Invest. -2005.-Vol. 115, №7.-P. 1756-1764.

154. Little evidence for developmental plasticity of adult hematopoietic stem cells. / A.J. Wagers et al. // Science. 2002. - Vol. 297, №5590. - P. 2256-2259.

155. Lo S.H. Tensin / S.H. Lo // Int J Biochem Cell Biol. 2004. - Vol. 36, № 1. - P. 31-34.

156. Macpherson B.R. Contractile cells of the kidney in primary glomerular disorders: An immunohistochemical study using an anti-alpha-smooth muscle actin monoclonal antibody / B.R. Macpherson // Hum Pathol. 1993. - Vol.24, № 7-P.710-716

157. Maeshima A. Adult kidney tubular cell population showing phenotypic plasticity, tubulogenic capacity, and integration capability into developing kidney // A. Maeshima, H. Sakurai, S.K.Nigam // J Am Soc Nephrol. 2006. - Vol. 17.1. P. 188-198.

158. Maeshima A. Identification of renal progenitor-like tubular cells that participate in the regeneration processes of the kidney/A. Maeshima , S. Yamashita, Y. Nojima // J Am Soc Nephrol. 2003. - Vol. 14. - P. 3138-3146.

159. McCulloch E.A. Perspective on the properties of stem cells / E.A. McCulloch, J.E. Till//Nat Med.-2005.-Vol. 11.-P. 1026-1028.

160. Mechanical stress reduces podocyte proliferation in vitro / A.T. Petermannet al. // Kidney Int. 2002. - Vol. 61. - P. 40-50.

161. MeneP. Mechanism of repair after kidney injury/P. Mene, R.Polci, F.Festuccia // J Nephrol. 2003. - Vol. 16, № 2. - P. 186-195.

162. Mene P. Mesangial cells cultures / P. Mene // J Nephrol. 2001. - Vol. 14, №3. -P. 198-203.

163. Mesenchymal stem cells are renotropic, helping to repair the kidney and improve function in acute renal failure / M. Morigi et al. // J Am Soc Nephrol. — 2004.-Vol. 15.-P. 1794-1804.

164. Metanephric mesenchyme contains multipotent stem cells whose fate is restricted after induction / D. Herzlinger et al. // Development. 1992. - Vol. 114. -P. 565-572.

165. Metcalf D. Hematopoietic stem cells: old and new / D. Metcalf // Biomed Pharmacother. -2001. Vol. 55. - P. 75-78.

166. Mezey E. Bone marrow: a possible alternative source of cells in the adult nervous system / E. Mezey, K.J. Chandross // Eur J Pharmacol. 2000. - Vol. 405, №1-3.-P. 297-302.

167. Miner J.H. Renal basement membrane components / J.H.Miner // Kidney Int. -1999. Vol. 56. - P. 2016-2024.

168. Morigi M. Mesenchymal stem cells are renotropic, helping to repair the kidney and improve function in acute renal failure / M. Morigi et al. // J Am Soc Nephrol. -2004.-Vol. 15, №7.-P. 1794-1804.

169. Multi-organ, multi-lineage engraftment by a single bone marrow-derived stem cell / D.S. Krause et al. // Cell. 2001. - Vol. 105, №3. - P. 369-377.

170. Myelomonocytic cells are sufficient for therapeutic cell fusion in liver / H. Willenbring et al. // Nat Med. 2004. - Vol. 10, № 7. - p. 744-748.

171. Nangaku M. Mechanisms of tubulointerstitial injury in the kidney: final common pathways to end- stage renal failure / M. Nangaku //Intern Med. 2004.1. Vol. 43, № l.-P. 9-17.

172. Navarrete C.V. Cord blood dendritic cells /C.V. Navarrete, J. Gomez, F.E.Borras // Cord blood: biology, immunology, banking, and clinical transplantation / Edited by Hal E. Broxmeyer/-AABB Press Bethesda, Maryland, 2004. Part 9. - P. 187-198.

173. Neointimal and tubulointerstitial infiltration by recipient mesenchymal cells in chronic renal-allograft rejection / P.C. Grimm et al. // N Engl J Med. 2001. - Vol. 345.-P. 93-97.

174. Nephrin is specifically located at the slit diaphragm of glomerular podocytes / V.Ruotsalainen et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1999. - Vol 96. - P. 7962-7967.

175. Newman P.J. Switched at birth: a new family for PECAM-1. / P.J. Newman // J Clin Invest/. 1999. - Vol.l 03, № l.-P. 5-9.

176. Nucleolin regulates gene expression in CD34-positive hematopoietic cells / E. Grinstein et al. // J Biol Chem. 2007. - Vol. 282, № 17. - P. 12439-12449.

177. Ogle B.M. Biological implications of cell fusion / B.M. Ogle, M. Cascalho, J.L. Piatt // Nat Rev Mol Cell Biol. 2005. - Vol. 6, № 7. - P. 567-575.

178. Origins and formation of microvasculature in the developing kidney/ D.R. Abrahamson et al. // Kidney Int. 1998. - Vol. 54, Suppl 67. - P. S7-S11.

179. Optimal time for human umbilical cord blood cell transplantation in rats with myocardial infarction / Y. Xing et al. // Chin Medical Journal. 2009. - Vol. 122, № 23. - P. 2833-2839. V№ol. 122 No. 23

180. Participation of glomerular endothelial cells in the capillary repair of glomerulonephritis / L. Iruela-Arispe et al. // Am J Pathol. 1995. - Vol. 147, № 6. -P. 1715-1727.

181. Pathways to Recovery and Loss of Nephrons in Anti-Thy-1 Nephritis / W. Kriz et al. // J Am Soc Nephrol. 2003. - Vol. 14. - P. 1904-1926.

182. Pavenstadt H. Cell Biology of the Glomerular Podocyte / H. Pavenstadt, W. Kriz, M. Kretzler // Physiological Reviews. 2003. - Vol.83, № 1. - P. 253-307.

183. Peterson B.E Bone marrow a potential source of hepatic oval cells / B.E. Peterson, W.C. Bown,K.D. Patrene//Science.-1999. Vol. 284.-P. 1168-1170.

184. Placental blood collection: Effects on Newborns / F. Bertolini et al. // Blood. -1995. Vol. 85. - P. 3361-3362.

185. Platelet-derived growth factor (PDGF) . and PDGF receptor are induced in mesangial proliferative nephritis in the rat / H. Iida et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. 1991. - Vol. 88, № 15. - P. 6560-6564.

186. Platelet-derived growth factor indirectly stimulates angiogenesis in vitro /N. Sato et al. // Am J Pathol. 1993. - Vol. 142, № 4. - P. - 1119-1130.

187. Podocyte injuries exacerbate mesangial proliferative glomerulonephritis / Y. Morioka et al. // Kidney Int. 2001. - Vol. 60, № 6. - P. 2192-2204.

188. Prevention of mesangial sclerosis by bone marrow transplantation / J.K. Guo et al. // Kidney Int. 2006. - Vol. 70. - P. 910-913.

189. Progressive renal lesions induced by administration of monoclonal antibody1.22-3 to unilaterally nephrectomized rats / Q.L. Cheng et al. // Clin Exp Immunol. 1995.-Vol. 102, № 1. — P.l 81—185.

190. Proliferation of bone marrow-derived cells contributes to regeneration after folic acid-induced acute tubular injury / T.C. Fang et al. // J Am Soc Nephrol. 2005. -Vol. 16.-P. 1723-1732.

191. Purified hematopoietic stem cells can differentiate into hepatocytes in vivo / E. Lagesse et al. // Nat Med. 2000. - Vol. 6. - P. 1229-1234.

192. Pusztaszeri M.P. Immunohistochemical expression of endothelial markers CD31, CD34, von Willebrand factor and Fli-1 in normal human tissues /

193. M.P. Pusztaszeri, W. Seelentag, F.T. Bosman // J Histochem Cytochem. 2006. -Vol. 54, №4.-P. 385-395.

194. Rabkin R. Ammonium chloride alters renal tubular cell growth and protein turnover / R. Rabkin, M. Palathumpat, T. Tsao//Lab Invest. 1993. - Vol. 68, № 4.1. P. 427-438.

195. Recovery of damaged glomerular capillary network with endothelial cell apoptosis in experimental proliferative glomerulonephritis / A. Shimizu et al. // Nephron. 1998. - Vol. 79. - P. 206-214.

196. Regeneration of glomerular podocytes by human renal progenitors / E. Ronconi et al. // J Am Soc Nephrol. 2009. - Vol. 20, № 2. - P. 322-332.

197. Regeneration of ischemic cardiac muscle and vascular endothelium by adult stem cells / K.A. Jackson et al. //J. Clin. Invest. 2001. - Vol. 107. - P. 1395-1402.

198. Regenerative potential of embryonic renal multipotent progenitors in acute renal failure / E. Lazzeri et al. // J Am Soc Nephrol. 2007. - Vol. 18, № 12.1. P. 3128-3138.

199. Remuzzi G. Understanding the nature of renal disease progression / G. Remuzzi, P. Ruggenenti, A. Benigni // Kidney Int. -1997. Vol. 51. - P. 2-15.

200. Renal Histology Электронный ресурс. / Faculty of Medicine Histology. -Режим доступа: http://courseweb.edteched.uottawa.ca/medicine-histology/.

201. Reversal of diabetic nephropathy in human cadaveric kidneys after transplantation into non-diabetic recipiens / G.M. Abouna et al. // Lancet. 1983. -Vol. 2.-P. 1274-1276.

202. Role of the microvascular endothelium in progressive renal disease / D.H. Kang et al. // J Am Soc Nephrol. 2002. - Vol. 13, № 3. - P. 806-816.

203. Roomans G.M. Tissue engineering and the use of stem/progenitor cells for airway epithelium repair / G.M. Roomans // Eur Cell Mater. 2010. - Vol. 19.1. P. 284-299.

204. SchenaF. Cytokine network and resident renal cells in glomerular diseases / F. Schena // Nephrol Dial Transplantation. 1999. - Vol. 14. - P. 22-26.

205. Schlondorff D. The glomerular mesangial cell: an expanding role for a specialized pericyte / D. Schlondorff// FA-SEB J. 1987. - Vol. 1. - P. 272-281.

206. Schnabel E. The tight junction protein ZO-1 is concentrated along slit diaphragms of the glomerular epithelium/E. Schnabel, J.M. Anderson, M.G.Farquhar//

207. J Cell Biol. 1990.-Vol. 111.-P. 1255-1263.

208. Segal M.S. Endothelial health and diversity in the kidney / M.S. Segal,

209. C. Baylis, R.J. Johnson // J Am Soc Nephrol. 2006. - Vol. 17, № 6. - P. 323-324.

210. Serial transplantation reveals the stem-cell-like regenerative potential of adult mouse hepatocytes/K.Overturf et al.//Am J Pathol.-1997.- Vol. 151- P. 1273-1280.

211. Shankland S.J. Cell-cycle control and renal disease / S.J. Shankland // Kidney Int. 1997. - Vol. 52. - P. 294-308.

212. Skeletal muscle differentiation potential of a human adult bone marrow cells / P. Bossolasco et al. // Exptl. Cell Res. 2004. - Vol. 295, №1. - P. 66-78.

213. Stem cells and progenitor cells in renal disease / H. Haller et al. // Kidney Int.— 2005.-Vol. 68, №5.-P. 1932-1936.

214. Sterzel B.R. Cytokines and mesangial cells / B.R. Sterzel, E. Schuze-Lohoff, M. Marx // Kidney Int. 1993. - Vol. 39, Suppl. 10. - P. S26 - S31.

215. Structural characterization of the mesangial cell type IV collagenase and enhanced expression in a model of immune complex-mediated glomerulonephritis /

216. D.H. Lovett et al. // Am J Pathol. 1992. - Vol. 141, № 1. - P. 85-98.

217. Svendsen C.N. Human neural stem cells: Isolation, expansion and transplantation / C.N. Svendsen, M.A. Caldwell, T. Ostenfeld // Brain Path. 1999. -Vol. 9.-P. 499-513.

218. Switched at birth: a new family for PECAM-1 / P.J. Newman // Clin Invest. -1999.-Vol. 103, №1.-P. 5-9.

219. Takeda Т.A. Pathomorphological study on damage and repair process of tubuli after renal ischemia /Т.А. Takeda //Nippon-Jinzo-Gakkai-Shi. 1996. - Vol. 38,11. — P. 493-501.

220. Tensin is expressed in glomerular mesangial cells and is related to their attachment to surrounding extracellular matrix / H. Takahara et al. // J Histochem Cytochem. 2004. - Vol. 52, № 5. - P. 683-692.

221. The activated mesangial cell: a glomerular "myofibroblast"? / R.JJohnson et al. // J Am Soc Nephrol. 1992. - Vol.2. - P. S190-S197.

222. The fusion of bone-marrow-derived proinsulin-expressing cells with nerve cells underlies diabetic neuropathy / T. Terashima et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. -2005.-Vol. 102, №35.-P. 12525-12530.

223. The glomerular slit diaphragm is a modified adherens junction / J. Reiser et al. // J Am Soc Nephrol. 2000. - Vol. 11. - P. 1 -8.

224. The potential of bone marrow-derived cells to differentiate to glomerular mesangial cells / T. Imasawa et al. // J Am Soc Nephrol. 2001. - Vol. 12. - P. 1401-1409.

225. The renal papilla is a niche for adult kidney stem cells / J.A. Oliver et al. // Clin Invest. 2004. - Vol. 114. - P. 795-804.

226. Till J. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells /J. Till, E. McCullochZ/Radiation Research. -1961.-Vol. 14.-P.213-222.

227. Tissue distribution of von Willebrand factor gene expression in vivo / K. Yamamoto et al. // Blood. 1998. - Vol. 92. - P. 2791-2801.

228. Topography of focal proximal tubular necrosis after ischemia with reflow in the rat kidney / P.F. Shanley et al. // Am J Pathol. 1986. - Vol. 122. - P. 462^168.

229. Transplanted hematopoietic stem cells demonstrate impaired sarcoglycan expression after engraftment into cardiac and skeletal muscle / K.A. Lapidos et al. // J Clin Invest. 2004. - Vol. 114.-P. 1577-1585.

230. Transplanted mesenchymal stem cells accelerate glomerular healing in experimental glomerulonephritis / U. Kunter et al. // J Am Soc Nephrol. 2006. — Vol. 17.-P. 2202-2212.

231. Tryggvason K. How does the kidney filter plasma? / K. Tryggvason, J. Wartiovaara// Physiology. -2005. -Vol. 20.-P. 96-101.

232. Tsivitse S. / Notch and Wnt signaling, physiological stimuli and postnatal myogenesis // S. Tsivitse // Int J Biol Sci. 2010. - Vol. 6, №3. - P. 268-281.

233. Tubular injury and regeneration in the rat kidney following acute exposure to gentamicin : a time-course study / D. Nonclercq et al. // Renal Fail. 1992. - Vol. 14.-P. 507-521.

234. Ulicna M. Does cell therapy and tissue engineering represent a promising treatment of diabetic foot ulcers? / M. Ulicna, L. Danisovic, J. Vojtassak // Bratisl Lek Listy. 2010. - Vol.111, №3. - P. 138-143.

235. Umbilical cord blood banking / Ghrysler G.R. et al. // Cord blood: biology, immunology, banking, and clinical transplantation / Edited by Hal E. Broxmeyer/ -AABB Press Bethesda, Maryland, 2004. Part 11. - P. 219-257.

236. Umbilical cord blood hematopoietic stem and repopulating cells in human clinical transplantation / H.E. Broxmeyer et al. // Blood Cells. 1991. - Vol. 17, №3. - P. 313-329.

237. Uremia causes endothelial progenitor cell deficiency / K. de Groot et al. / Kidney Int. 2004. - Vol.66. - P. 641-646.

238. Urinary System Электронный ресурс. / Laboratory Atlas for the study of medical histology. Режим доступа: http://www.medicalhistology.us/, свободный.

239. Vascular endothelial growth factor enhances glomerular capillary repair and accelerates resolution of experimentally induced glomerulonephritis / Y. Masuda et al. // Am J Pathol. 2001. Vol. 159, № 2. - P. 599-608.

240. Verfaillie C. Stem cells: hype and reality / C. Verfaillie, M. Pera, P. Lansdorf // Hematology.-2002. Vol. l.-P. 369-391.

241. Weissman I.L. Stem cells: units of development, units of regeneration, and units in evolution / I.L. Weissman// Cell. 2000. - Vol. 100. - P. 157-168.

242. Wolf G. Angiotensin II: a pivotal factor in the progression of renal disease / G. Wolf// Nephrol Dial Transplant. 1990. - Vol. 14, Suppl. 1. - P. 42-44.

243. Yamada E. The fine structure of the mouse kidney glomerulus / E.Yamada // J Biophys Biochem Cytol. 1955. - Vol. l.-P. 551-566.

244. Yamamoto T. Quantitative and qualitative studies of antibody-induced mesangial cell damage in the rat / T. Yamamoto, C.B. Wilson / Kidney Int. 1987. -Vol. 32.-P. 514-525.

245. Yamashita S. Involvement of renal progenitor tubular cells in epithelial-to-mesenchymal transition in fibrotic rat kidneys / S. Yamashita, A. Maeshima, Y. Nojima // J Am Soc Nephrol. 2005. - Vol. 16. - P. 2044-2051.

246. Zubko R. Stem cell therapy for the kidney? / R. Zubko, W. Frishman // Am J Ther. 2009. - Vol.16, №3. - P. 247-256.

Информация о работе

Йылмаз, Татьяна Сергеевна
кандидата медицинских наук
Казань, 2010
ВАК 03.03.04

Диссертация

Участие стволовых клеток в репаративной и физиологической регенерации почки - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы