Участие генов, кодирующих компоненты систем гемостаза, липидного метаболизма и ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, в формировании предрасположенности к ишемическому инсульту у русских и якутов

Парфенов, Михаил Григорьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Участие генов, кодирующих компоненты систем гемостаза, липидного метаболизма и ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, в формировании предрасположенности к ишемическому инсульту у русских и якутов
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Участие генов, кодирующих компоненты систем гемостаза, липидного метаболизма и ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, в формировании предрасположенности к ишемическому инсульту у русских и якутов"

На правах рукописи

ПАРФЕНОВ МИХАИЛ ГРИГОРЬЕВИЧ

УЧАСТИЕ ГЕНОВ, КОДИРУЮЩИХ КОМПОНЕНТЫ СИСТЕМ ГЕМОСТАЗА, ЛИПИДНОГО МЕТАБОЛИЗМА И РЕНИН-АНГИОТЕНЗИН-АЛЬДОСТЕРОНОВОЙ СИСТЕМЫ, В ФОРМИРОВАНИИ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ИШЕМИЧЕСКОМУ ИНСУЛЬТУ У РУССКИХ И ЯКУТОВ

03 00.03 - молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2007

003059098

Работ пыпочнена в отдете биотечнотогии Института экспериментальном кардиологии Федерального государственного учреждения "Российский кардиоло! ический научно-производственный комплекс" Росздрава, г Москва

Научный руководитель кандидат биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор

О.О. Фаворова

М А. Судомоина

Официальные оппоненты доктор биологических наук, кандидат биологических наук

П А. Сломннский А В Скамров

Ведущая организация ГУ НИИ неврологии РАМН

Защита состоится "30" мая 2007 года в 11 часов на заседании диссертационного совета К 208 073 02 в ФГУ РКНПК Росздрава по адресу 121552, Москва, 3-я Черепковская улица, 15 А

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГУ РКНПК Росздрава

Автореферат разослан "26" апреля 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Т.Н. Венгерова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Во всем мире, в том числе и в России, инсульты являются отпои

из самых важных проблем здравоохранения По материалам ВОЗ, частота ипсулыов

колеблется от 1 5 до 7 4 случаев на 1000 человек населения, нарастая с возрастом поскочьку

для этого заболевания характерно позднее развитие

По данным регистра мозгового инсульта, в России заболеваемость составчяет 3 36 на 1000 человек В целом в России регистрируется ежегодно более 400 000 случаев инсульта, при этом на долю Москвы приходится более 24 000 случаев в год В Якутске заболеваемость составляет 2 88 на 1000 человек (без разделения по национальностям), что несколько ниже общероссийского показателя В России, как и в большинстве развитых стран мира, инсульт занимает второе-третье место в структуре причин общей смертности (21,4%) (после ишемической болезни сердца и онкологических заболеваний) При этом смертное !ь о г инсульта в России - одна из самых высоких в мире Инвалидизация после перенесенного инсульта достигает показателя 3 2 на 10 000 населения, занимая первое место среди всех причин первичном инвалидности Социально-экономическая значимость этого заболевания связана еще и с тем, что среди заболевших инсультом 1/3 - люди трудоспособного возраста, а к труду возвращается не более 20 % больных [Гусев СИ, 2003] В нашей стране, как и в большинстве стран мира, преобладают ишемические инсульты (ИИ), доля которых в структуре заболевания составляет до 80%

Подавляющее большинство ИИ относится к комплексным (мультифакториальным) заболеваниям, и их развитие, клиническое течение и исход обусловлены как влиянием факторов внешней среды, так и наследственной предрасположенностью Определенные успехи в понимании роли отдельных генов в молекулярных механизмах реализации повреждения мозга достигнуты лишь в рамках моногенных патологических состоянии В исследованиях же, посвященных генетике ИИ как комплексного попигенного заболевания как правило, не учитывали совместный вклад множества независимо действующих и/ичи взаимодействующих полиморфных генов Даже при анализе роли отдельных генов в развитии ИИ результаты опубликованных исследований трудно сопоставлять из-за недостаточного внимания, которое уделяли до последнего времени этнической гомогенное ги исследуемых групп

До настоящего времени исследований генетической предрасположенности к ИИ для якутской популяции не проводили, а для русской популяции они касались роли отдельных генов-каидидатов, из которых с нашим исследованием в основном перекрывается только анализ инсерционно-делециопного полиморфизма гена АСЕ [Скворцова ВИ и др , 2003]

Це п> н 3<ua4ii работы Цепыо настоящей работы являлся комплексный анализ совместного вклада в предрасположенность к ИИ ряда генов, белковые продукты которых вовлечены в развитие основных сердечно-сосудистых заболеваний Исследование проводили в двух российских этносах - у русских и якутов, представляющих расы европеоидов и монголоидов, соответ ствснно

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи

1 Провести геномное типирование выбранных на основе анализа литературы полиморфных участков генов-кандидатов (FGA, FGB, АРОЕ, LPL, АСЕ и СМА) для русских и якутов, перенесших ИИ, а также для индивидов без ИИ в анамнезе, совпадающих с больными по этнической принадлежности, полу и возрасту

2 Изучить этнические различия в распределении аллелей и генотипов проанализированных полиморфных участков у русских и якутов, как в группах больных ИИ, так и в контрольных группах

3 Провести комплексный анализ генетической предрасположенности к ИИ методом ' случай-контроль отдельно для русских и якутов с учетом пола и возраста

4 Оiдельно в группах русских и якутов провести комплексный анализ связи носительства аллелей, генотипов и их сочетаний с тяжестью артериальной гипертензии (АГ), предшествующей развитию ИИ

На) чнаи новпзма и праетпчсскаи значимость работы. Впервые для двух популяций России, русских и якутов, проведен комплексный анализ связи носительства аллелей, генотипов и сочетаний аллелей и генотипов полиморфных участков генов FGA, FGB, АРОЕ, LPI, АСЕ и СМА с ИИ и тяжестью АГ до развития ИИ с учетом пола и возраста рассматриваемых индивидов

Выявлены высокодостоверные различия частот большинства аллелей и генотипов исследованных полиморфных участков между индивидами русской и якутской национальности, а также существенные этнические различия во вкладе отдельных полиморфных участков генов в восприимчивость к ИИ, диктующие необходимость этической гомогенности групп при исследовании факторов генетической предрасположенности к полигенным заболеваниям Впервые показано участие в развитии ИИ генов, кодирующих компоненты систем гемостаза (FGB) и липидного обмена (АРОЕ и LPL) в двух этнических группах, а также гена АСЕ ренин-ангиотензин-альдостероновои системы (РААС) только у якутов

При разделении больных ИИ на подгруппы в зависимости от предшествующего заболеванию > ровня артериального давления впервые выявлена ассоциация тяжести АГ с носитетьством аллеля -249С FGB у русских и аллеля 495Т LPL у якутов Кроме того, у

якутов выявлена ассоциация тяжести АГ с носительством сочетания тре\ плетей -249С FGB, е4 АРОЕ и -1903А САМ Таким образом, выявлены факторы генетической предрасположенности к АГ у индивидов русской и якутской этнической принадлежности перенесших ИИ

Проведенная работа создает основу для выявления группы риска ИИ, опираясь на скрининговые исследования населения Ее практическая значимость определяется возможностью проводить превентивную терапию, компенсирующую генетически обусловленные неблагоприятные особенности функционирования систем гемоааза липидного обмена и РААС для тех лиц, у которых выявлена наследственная предрасположенность к ИИ и предшествующей ему АГ

Апробация работы Результаты работы были представлены па Всероссийской конференции молодых ученых-кардиологов, июнь, 2005 г, Москва, Российском национальном конгрессе кардиочогов, октябрь 2005 г, Москва, Московской международной конференции "Биотехнология и медицина", март 2006 г , Москва, Межрегиональной научно-пракгическои конференции "Актуальные вопросы клинической неврологии", январь 2007 г, Ирку1ск межлабораторном семинаре Института экспериментальной кардиологии ФГУ РКИПК Росздрава, апрель 2007

Публикации По материалам диссертации опубликованы 2 статьи и б тезисных сообщении Структура и объем работы Диссертация состоит из разделов "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты и обсуждение", "Выводы" и "Список литературы" Работа изложена на 117 страницах и включает 12 рисунков, 8 таблиц Список литературы содержит 260 ссылок

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Использованные реактивы В работе использовали Taq-иолимеразу и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (ЗАО "Силекс"), эпдонуклеазы рестрикции и отигонуклеотиды (НПО "СибЭнзим"), протеииазу К ("AppliChem"), моноклоиальные антитела к Taq полимеразе, Taq-Start (АО"Мона") Остальные реактивы были получены ог фирм "Merck", "Sigma" или использовались отечественные реактивы категории осч Формирование групп больных НИ и контрольных групп Для настоящего ретроспективного исследования методом "случай-контроль" использовали образцы крови и геномной ДНК следующих групп индивидов

1) контрольная группа из 127 русских индивидов без стойких и преходящих нарушении мозгового кровообращения, средний возраст (ср возраст) ± SD (стандартное отклонение) -61 2 ± 13 8 лет 68 мужчин (ср возраст - 58 4 ± 13 5) и 59 женщин (ср возраст - 64 4 ± 13 6)

2) 200 русских больных ИИ, ср возраст - 64 1 ± 10 8 лет 123 мужчины (ср возрас! - 61 2 ±

9 8) и 77 женщин (ср возраст - 68 7 ± 10 7) Все русские индивиды, вошедшие в исстедование, были обследованы на кафедре неврологии и нейрохирургии РГМУ на базе ГКБ №1 в 2004-2006 гг Во всех случаях диагноз ишемическнй инсульт был подтвержден результатами КТ и/или МРТ Образцы крови вошедших в исследование русских и база данных, содержащая клинические характеристики этих индивидов, были предоставлены д м н Мартыновым М Ю и сотрудниками кафедры неврологии и нейрохирургии РГМУ

3) контрольная группа, включившая в себя 108 здоровых по медицинским показаниям индивидов якутской этнической принадлежности, ср возраст ± SD 57 7 ± 113 лет 64 мужчины (ср возраст - 55 9 ± 12 1) и 44 женщины (ср возраст - 60 3 + 9 6)

4) 115 якутских больных IIII, ср возраст - 58 1 ± 11 5 75 мужчин (ср возраст - 55 9 ± 12 3) и 40 женщин (ср возраст - 62 2 ± 8 4) Диагноз ишемический инсульт поставлен на основании данных анамнеза, клинического осмотра и данных MPT, КТ головного мозга и люмбальной пункции Образцы крови якутов и база данных, содержащая результаты клинических исследований, предоставлены д м н Т Я Николаевой

Группы якутских и русских больных ИИ и контрольная группа русских индивидов были охарактеризованы по уровню "рабочего" АД (те обычно наблюдаемого АД у индивида при котором ои удовлетворительно себя чувствует) - систолического (САД) и диасчодического (ДАД) - согласно рекомендациям 2003 ESH/ESC (табл 1) Информацию получали из медицинских карт, со слов индивидов или их родственников В случае больных ИИ показатели "рабочего" АД относятся к их состоянию до развития заболевания

Все индивиды (или их родственники) давали информированное согласие на проведение генетических исследований

Табпицд 1 Разделение русских и якутских больных ИИ и русских индивидов из

контрольной группы по уровню АД

Показатели АД русские якуты ботьные ИИ п=115 (%)

больные Ш1 п=200 (%) контротьная группа п=127 (%)

огс)тстпие АГ (С \Д < 140 мм рт ст , ДЛД < 90 мм рт ст ) 15(7 5%) 42 (33 1%) 31 (26 9%)

1 степень АГ (С\Д 140-159 мм рт ст, ДЛД 90-99 мм рт ст ) 145 (72 5%) 71 (55 9%) 54 (47 0%)

2 степень АГ (С\Д 160-179 мм рт ст , ДЛД 100-109 мм рт ст ) 37 (18 5%) 11 (8 7%) 22(19 1%)

3 степень АГ (САД > 180 мм рт ст , ДЛД > 110 мм рт ст ) 3 (1 5%) 3 (2 3%) 8 (7 0%)

Выделение геномной ДИК из крови Дтя выделения ДНК необходимой чистоты и

достаточного молекулярной массы ni крови применяли модифицированный метод с использованием экстракции смесью фенол-хлороформ [Sambrook ,1 el al., 1989]. Геномное тнннрованне аВйлтируемых полиморфных участков, Гетнилирование полиморфных участков A4266G (Thr312Ala) renaFGM. С-249Т и С-148Т гена ГСй. I -427С н зпсиВйй-поЛиморфизма гена A!'Ol:. T495Q н С1545(1 (Ser447Ter) гена 1.1'!.. а гакже (i-1403Л гена СМА проводили методом анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов продукта III IM. Ге ноги дарован не полиморфизма А-491Т гена АРОВ проводили методом ПНР с использованием алле.1еспецнфическю£ праймеров. Гепотинпровапие пиеерщйино-ЖлШЙйиного полиморфизма геНЙ АСЕ проводили методом ПЦР в два этапа, применяя па первом лапе прйймеры, фланкяруклдие область делении, и используя на и тором этапе г.ранмеры. лежащие в ойлаеш делении. Во всех случаях уЦР проводили и ампл иф и кагоре МС16 (АО "ДНК Технология"). Продукты ПЦР и рестрикции анализировали методом электрофореза в агарозибм пли шли акрил ам идиом геле различной плотности в присутствии бромида этидия. 1 Ipimep анализа исследуемы\ сШшморфных участков приведен па рис, I.

С/С Т/Т Т/Т Т/Т А/А А/Т А/А А/Т

Рис.1. а. Пример генотпиирования полиморфизма Т-427С гена АРОЕ методом анализа полиморфизма дли!! рестрикционных фрагментов продукта III |Р. I (оказаны фрагмент ы рестрикции после электрофореза в 3%-ном агарозном геле. Ъ. Пример генотипирования полиморфизма А-491Т гена АРОЕ методом ПЦР с аллелеспецйф и чески мй праймерамн. Цифрами (1-5) обознаШны дорожки ¡едя. М - маркер молекулярной массы (дорожка I): генотипы образцов указаны под соответствующими дорожками (2-5), Справа приведены соответствующие длины фрагментов (в и,и.)

Статистический анализ. У индивидов определяли аллельную частоту, час готы носительства генотипов I! аллелей. Анализ отклонения наблюдаемых частот генотипов от равновесия Харли-Ван нберга. анализ неравновесного сцепления и опенку час тот ганлотнпов у рассматриваемых индивидов проводили с помощью алгоритма макеими ¡¡шип математического ожидания, используя свободно распространяемую программ) Нар1оу|ё*у

3 32 Исходную оценку ассоциации аллелей и гаплотипов с ИИ проводили по критерию х2 с использованием той же программы Анализ ассоциации с ИИ носительства аллелей, генотипов и их сочетаний совместно с присутствием определенных фенотнпичееких признаков, проводили с помощью программного обеспечения APSampler, использующего мегод Монте-Карло Марковскими цепями и Байесовскую непараметрическую статистику [Favorov AV et al, 2005] Силу выявленных таким образом ассоциаций оценивали в значениях относительного риска (ОР), рассчитанного как отношение шансов с помощью табпщ сопряженности 2x2 с использованием точного одностороннего критерия Фишера с использованием программы GraphPAD InStat 1 12а Достоверным считали различие сравниваемых величин при значении р<0 05 В случае анализа мультиаллельного эпсилон-полиморфизма АРОЕ вводили поправку Бонферрони Для ОР выбирали 95%-ный доверительный интервал (confidence interval, С1) и не рассматривали в качестве статистически значимых ассоциаций те, для которых CI включал 1 Если при анализе ассоциации с тяжестью АГ наблюдали монотонную зависимость уровня АД от носительства выявленного сочетания аллелей, применяли таблицу сопряженности 2x4, а значение ОР не оценивали

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Выбор генов для анализа ассоциации с IIII В исследование были включены полиморфные участки генов, кодирующих компоненты систем, играющих ключевую роль в поддержании гомеостаза, а именно системы гемостаза (гены FGA и FGB), системы липидного метаболизма (гены ХРОЕ и LPL) и РААС (гены АСЕ и СМА) Для анализа предпочтительно выбирали функционально значимые полиморфные участки, расположенные в кодирующей или в регуляторных областях генов

Анализ этнических различии в распределении аллелей и генотипов проаналщпрованных полиморфных участков у русских п якутов В табл 2 представлено сравнение частот аллелей и генотипов исследованных полиморфных участков генов FGA, ГGB, АРОЕ, LPL, АСЕ и СМА между русскими и якутами (отдельно для больных и для контрольных групп), а также между этими группами внутри каждой популяции Во всех случаях собтюдалось равновесие Харди-Вайнберга Полученные результаты свидетельствуют о значительных этнических различиях в распределении аллелей и генотипов большинства рассматриваемых полиморфных участков генов у русских и якутов Интересно отметить, что различия в основном относятся к аллелям генов, кодирующих компоненты системы гемостаза (FGA и FGB) и РААС (АСЕ и СМА) Что же касается генов системы метаболизма липндов, то из вошедших в работу полиморфных участков гена АРОЕ (три участка) и LPL (два участка) различия частот аллелей и генотипов в русских и якутских

Таблица 2 Сравнение частот аллелей и генотипов полиморфных участков генов FG/^, АРОЕ, ЕРЕ, АСЕ и СМА в группах русских и якутских больных ИИ, контрольных группах русских и якутов, а также между группами внутри каждой популяции

Ген Полиморфизм Аллели/ генотипы русские якут ы р(ри,п)*** (сравнение русских и якутов из контрольны х групп) р(р«,гг) (сравнение русских и якутских больных ИИ) Р(Рсогг) (сравнение русских больных ИИ с контрольно й группой) pfptorr ) (сравнение якутских больных ИИ с контрольно й группой)

контрольная группа п=127 (%)* больные ИИ п=200 (%)** контрольная группа п=108(%) больные ИИ п=115(%)

FGA A4266G (Thr312А1а) Л 198 (78%) 303 (75 7%) 95 (44%) 88 (38 3%) <0 0001 <0 0001 НД нд

G 56 (22%) 97 (24 3%) 121 (56%) 142(61 7%) <0 0001 <0 0001 нд нд

А/А 76 (59 8%) 118(59%) 20(18 5%) 19(16 5%) <0 0001 <0 0001 нд нд

A/G 46 (36 3%) 67 (33 5%) 55 (50 9%) 50 (43 5%) 0 025 нд нд нд

G/G 5 (3 9%) 15(7 5%) 33 (30 6%) 46 (40%) <0 0001 <0 0001 НД нд

FGB С-249Т С 200 (78 7%) 311 (77 8%) 70 (32 4%) 73 (31 7%) <0 0001 <0 0001 НД нд

Т 54(21 3%) 89 (22 3%) 146(67 6%) 111 (48 3%) <0 0001 <0 0001 нд нд

С/С 81 (63 8%) 123 (61 5%) 12(11 1%) 11 (9 6%) <0 0001 <0 0001 нд нд

с/т 38 (29 9%) 65 (32 5%) 46 (42 6%) 51 (44 3%) нд 0 04 нд нд

1ÎY 8 (6 3%) 12(6%) 50 (46 3%) 53 (46 1%) <0 0001 <0 0001 нд нд

С-148Т С 183 (72%) 289 (72 3%) 203 (94%) 222 (96 5%) <0 0001 <0 0001 нд нд

Т 71 (28%) 111 (27 7%) 13 (6%) 8 (3 5%) <0 0001 <0 0001 нд НД

С/С 72 (56 7%) 102 (51%) 95 (88%) 107(93%) <0 0001 <0 0001 нд НД

С/Т 39 (30 1%) 85 (42 5%) 13 (12%) 8 (7%) 0 0008 <0 0001 нд НД

Т/Т 16(12 6%) 13(6 5%) 0 (0%) 0 (0%) <0 0001 0 0028 нд НД

АРОЕ А-491Т А 195 (76 8%) 326 (81 5%) 201 (93 1%) 223 (97%) <0 0001 <0 0001 нд нд

Т 59 (23 2%) 74 (18 5%) 15(6 9%) 7 (3%) <0 0001 <0 0001 нд нд

А/А 75 (59 1%) 129(64 5%) 93 (86 1%) 108(93 9%) <0 0001 <0 0001 нд нд

А/Т 45 (35 4%) 68 (34%) 15(13 9%) 7 (6 1%) 0 0002 <0 0001 нд нд

1 лбины 2 Сравнение частот ал те 1еп и генотипов полиморфных участков генов ЕС А, Ей В А РОЕ 1РЕ АСЕ и СМ А в группах русских и якутских ботьных ИИ контротьных группах русских и якутов, а также между группами вн)три каждой популяции

Ген Полиморфизм Аллели/ генотипы русские якуты Ж™,)*"" (сравнение русских и якутов из контрольны х групп) pfpcorr) (сравнение русских И якутских больных ИИ) р(ри„г) (сравнение русских больных ИИ с контрольно й группой) р(Ра1и) (сравнение якутских больных ИИ с контрольно й группой)

контрольная группа п=127 (%)* больные ИИ п=200 (%)** контрольная группа п=108(%) больные ИИ п=115(%)

ТАГ 7 (5 5%) 3(1 5%) 0 (0%) 0 (0%) 0016 НД НД НД

Т-427С Т 225 (88 6%) 367 (91 Т/о) 191 (88 4%) 220 (95 7%) нд НД НД 0 0036

С 29(11 4%) 33 (8 3%) 25(11 6%) 10(4 3%) НД НД НД 0 0036

ТАГ 98 (77 2%) 168 (84%) 84 (77 8%) 107 (93%) НД 0 022 ИД 0 001

Т/С 29 (22 8%) 31 (15 5%) 23 (21 3%) 6 (5 3%) ИД 0 0061 НД 0 0003

С/С 0 (0%) 1 (0 5%) I (0 9%) 2(1 7%) ИД НД НД НД

эпсилон-полиморфизм е2 24 (9 4%) 31 (7 7%) 21 (9 7%) 10(4 3%) ИД НД НД 0 04

еЗ 208(81 9%) 321 (80 3%) 164 (75 9%) 174 (75 1%) НД НД НД НД

£4 22 (8 7%) 48(12%) 31 (14 4%) 46 (20%) НД 0015 НД НД

е2/е2 2(1 6%) 0 (0%) I (0 9%) 2(1 Т/о) НД НД НД НД

е2/еЗ 19(15%) 28(14%) 16(14 8%) 5 (4 3%) НД 0014 НД 0013

е2/е4 1 (0 8%) 3(1 5%) 3 (2 8%) 1 (0 9%) НД НД НД НД

еЗ/еЗ 84 (66 1%) 126 (63%) 62 (57 4%) 66 (57 4%) НД НД НД НД

еЗ/е4 21 (16 5%) 41 (20 5%) 24 (22 2%) 37 (32 2%) НД НД НД НД

е4/е4 0 (0%) 2(1%) 2 (1 9%) 4 (3 5%) НД НД НД НД

1Р1 Т4950 [НтЛМЩ Т 194(76 4%) 302 (75 5%) 177(81 9%) 179 (77 8%) НД НД НД НД

в 60 (23 6%) 98 (24 5%) 39(18 1%) 51 (22 2%) НД НД НД НД

ТАГ 73 (57 5%) 112(56%) 74 (68 5%) 72 (62 6%) НД НД НД НД

Т/в 48 (37 8%) 78 (39%) 29 (26 9%) 35 (30 4%) НД НД НД НД

с/о 6 (4 7%) 10(5%) 5 (4 6%) 8 (Т/о) НД НД НД НД

Таблица 2 Сравнение частот аллелей и генотипов полиморфных участков генов РСЛ, FGB, АРОЕ, ¿РЬ, АСЕ и СМА в группах русских и якутских больных ИИ, контрольных группах русских и якутов, а также между группами внутри каждой популяции

Ген Полиморфизм Аллели/ генотипы русские якуты р(ри,гг)*** (сравнение русских и якутов из контрольны х групп) Р(Рсогг) (сравнение русских и якутских больных ИИ) Р(Ршгг) (сравнение русских больных ИИ с контрольно й группой) р(ршп) (сравнение якутских бочьных ИИ с контрольно и группой)

контрольная группа п=127 (%)* больные ИИ п=200 (%)** контрольная группа п=108(%) больные ИИ п=115 (%)

C1595G (Ser447Ter) С 230 (90 6%) 369 (92 3%) 202 (93 5%) 208 (90 4%) НД НД НД НД

G 24 (9 4%) 31 (7 7%) 14(6 5%) 22 (9 6%) НД НД НД НД

С/С 105 (82 1%) 171 (85 5%) 94 (87%) 94(81 7%) НД НД НД НД

C/G 20(15 7%) 27 (13 5%) 14(13%) 20(17 4%) НД НД НД НД

G/G 2(1 6%) 2(1%) 0 (0%) 1 (0 9%) НД НД НД НД

АСЕ I/D I 130(51 2%) 185 (46 3%) 152 (70 4%) 140 (60 9%) <0 0001 0 0005 НД 0 022

D 124 (48 8%) 215 (53 7%) 64 (29 6%) 90(39 1%) <0 0001 0 0005 НД 0 022

Г/1 29 (22 8%) 43 (21 5%) 60 (55 6%) 45(39 1%) <0 0001 <0 0001 НД 001

1/D 72 (56 7%) 99 (49 5%) 32 (29 6%) 50 (43 5%) <0 0001 НД НД 0 022

D/D 26 (20 5%) 58 (29%) 16(14 8%) 20(17 4%) НД 0 022 НД НД

СМА G-1903А G 114(46 7%) 168 (43 8%) 161 (74 5%) 177 (77%) <0 0001 <0 0001 НД НД

А 130(53 3%) 216(56 2%) 55 (25 5%) 53 (23%) <0 0001 <0 0001 НД НД

G/G 27 (22 1%) 38(19 8%) 60 (55 6%) 66 (57 4%) <0 0001 <0 0001 НД НД

G/A 60 (49 2%) 92 (47 9%) 41 (38%) 45 (39 1%) НД НД НД НД

А/А 35 (28 7%) 62 (32 3%) 7 (6 4%) 4 (3 5%) <0 0001 <0 0001 НД НД

НД (здесь и далее)- не выявлено достоверных различий

"данные для аллелей и генотипов попиморфизма С-1903Л гена СМА получены дня 122 чеповек **данные для аллелей и генотипов попиморфизма С-1903Л гена СМА получены для 192 человек ***в случае эпсилон-полиморфизма гена АРОЕ приведены значения с поправкой Бонферрони (х2)

контрольных группах значимы только для участка Л-491Т гена АРОЕ, те этнические различия не распространяются на весь этот ген При сравнении распределения аллелей и гепошпов у русских и якутских больных ИИ отличия выражены еще сильнее, чем для контрольных групп Так, при практически полном сохранении различий, выявленных для контрольных групп, достоверных отличии также достигают и частоты некоторых генотипов полиморфизма Т-427С, а также аллелей и генотипов эпсилон-полиморфизма в гене АРОЕ Таким образом, единственным из рассматриваемых генов, аллели и генотипы полиморфных участков которого сходно представлены в обеих популяциях, остается ген LPL Тот факт, что между русскими и якутами у больных наблюдается больше различий, чем в контрольных группах, может указывать на этнические отличия в участии рассматриваемых генов в формировании предрасположенности к ИИ

Важно отметить, что у русских частоты аллелей и генотипов практически всех рассматриваемых нами полиморфных участков (кроме частот аллелей полиморфизма T495G LPL) хорошо согласуются с данными литературы для русской популяции или для других европеоидов (поляков, французов) У якутов же часто наблюдается другая картина Так, в сравнении с данными литературы для других монголоидов (китайцев, японцев), у якутов достоверно отличалось распределение аллелей и генотипов полиморфных участков С-148Т FGB, Т-427С АРОЕ, C1595G ЕРЕ и G-1903A CAÍA Таким образом, этнические различия между русскими и другими европеоидами выражены значительно меньше, чем различия между якутами и другими монголоидами При этом надо отметить, что в последнем случае различия выражены как на уровне целых систем, к которым относятся гены (FGB для гемостаза, АРОЕ и LPL для метаболизма липидов, а СМА для РААС), так и в пределах одного и того же гена, поскольку для АРОЕ и LPL различия наблюдаются только для одного из рассматриваемых в каждом случае полиморфных участков

Дналн! ассоциации аллелей и генотппов исследованных генов с IIII у русских и якутов

В якутской популяции при сравнении больных ИИ с контрольной группой выявляются достоверные различия ряда аллелей и генотипов участка Т-427С и эпсилон-полиморфизма гена АРОЕ и частот аллелей и почти всех генотипов полиморфизма I/D гена АСЕ и (см табл 2) Из таблицы видно также, что для других полиморфных участков у якутов, а также л 1я всех рассматриваемых полиморфных участков у русских не наблюдается различий в частотах отдельных аллелей и генотипов при сравнении больных с соответствующей контрольной группой В целом, можно сказать, что результаты анализа генетической предрасположенности к ИИ, проведенные только на уровне отдельных аллелей и генотипов, как это сделано в табл 2, оказываются у якутов более показательными, чем у русских Возможно, это обусловлено как раз тем, что якутская популяция является генетически

гомогенном h изолированной и, епедовательно, генетические факторы риска развития такого комплексного заболевания, как ИИ, в ней проявляются более четко

Комплексный анализ гсистичсскоп предрасположенности к ИИ с учеюм попа н возраста с использованием алгоритма APSampIci Выявленные в настоящей работе ассоциации с ИИ носительства отдельных генотипов и носительства аллелей (суммы юмо- и гетерозиготного генотипов по данному аллелю), а также носительства сочетаний аллелей и генотипов у русских и якутов приведены в табл 3 Наибольшее количество достоверных ассоциаций с ИИ выявлено для аллелей и генотипов гена АРОЕ, как по отдельности, гак и в сочетаниях У якутов (табт ЗЬ) вклад в генетическую предрасположенность к заболеванию вносят аллели и генотипы всех трех рассматриваемых полиморфных участков (А-491 Г, Т-427С и эпсилон-полиморфизм) АРОЕ У русских (табл За) связь с ИИ наблюдается для аллелей обоих участков в промоторной области, а влияния полиморфизма в кодир) ющси области АРОЕ на риск развития заболевания не выявлено Сравнение таблиц 2 и 3 свидетельствует о том, что частоты встречаемости являются более показательными характеристиками, чем аллельные частоты, и более четко отражают протективное действие редких аллелей -491Т, -427С и е2 АРОЕ Более частые аллели -491А и -427Т, а также геношп -427Т7Т (как наиболее распространенные в обеих популяциях) можно рассматривать как "норму", на фоне которой и проявляется протективное действие аллелей -491Т, -427С а также генотипа -427Т/С (подход, в последние годы получающий распространение) Для эпсилон-полиморфизма сходный с нашим результат, а именно протективный эффект аллеля е2 для ИИ, получили для популяции европеоидов из США [Ferrucci L et al , 1997J Однако в нашей работе отрицательная ассоциация этого аллеля с ИИ выявлена тотько для якутов представляющих монголоидную расу У русских же связи заболевания с этим аллелем мы не наблюдаем, что, впрочем, согласуется с данными ряда других работ для европеоидов, например, [Morrison AC et al, 2002] В то же время для японцев, являющихся, как и якуты монголоидами, напротив, показано, что аллель е2 достоверно чаще встречался у больных ИИ [Kokubo Y et al, 2000] Таким образом, как и в случае этнические различий между русскими и другими европеоидами и между якутами и другими монголоидами (см выше), генетическая предрасположенность к ИИ у монголоидов оказывается более гетерогенной, чем у европеоидов Различия в роли одного и того же аллеля для развития ИИ у двух монголоидных этносов могут быть обусловлены совместным влиянием полиморфизма генов и других, не генетических факторов риска, различающихся в разных популяциях (образ питания, климат и пр )

Вовлечение в формирование предрасположенности к ИИ аллелей участков А-49П и Т-427С АРОЕ показано нами впервые Интересно отметить, что если у якутов аллель -427С

1 .«блица 3 Выявченные в настоящей работе ассоциации с ИИ носитетьства отдельных аллелей к генотипов а также носительства сочетаний алпелей и генотипов

а) русская этническая группа_____

Ген (гены) Аллели или генотипы контрольная группа п= 127 (%) больные ИИ п=200(%) ОР (95% CI) значение р

АРОЕ -491Т возраст до 60 лет

п=61(%) п=69 (%)

27 (44 3%) 21 (304%) 0 43(0 23-0 81) 0 0063

FGB -148С возраст после 60 лет

п—66(%) п=131 (%)

56 (84 8%) 122(93 1%) 1 98(1 26-3 11) 0 002

FGB + LPL (-148С) + (1595С) 109(85 8%) 185(92 5%) 2 037 (1 01-4 21) 0 040

АРОЕ + LPL + LPL (-427С) + (495С)+ (15950 9(7 1%) 3 (1 5%) 0 20 (0 05-0 75) ООН

Ь) якутская этническая группа

Ген (гены) Аллели или генотипы контрольная группа п=108(%) больные ИИ п=115(%) ОР (95% CI) значение p(pLl„)*

АРОЕ -427С 24 (22 2%) 8 (7%) 0 262(0 11-0 61) 0 001

-427Т/Т 84 (77 8%) 107 (93%) 3 82(1 63-8 94) 0 001

-427Т/С 23 (21 3%) 6 (5 2%) 0 203 (0 079-0 52) 0 0003

е2 20 (18 5%) 8 (7%) 0 33 (0 14-0 78) 0015*

е2/еЗ 16(14 8%) 5 (4 3%) 0 26 (0 092-0 74) 0 026*

АСЕ D 48 (44 4%) 70 (60 9%) 1 94(1 14-3 3!) 0 01

мужчины

п=64 (%) п=75(%)

23 (35 9%) 46(61 3%) 2 82(1 41-5 64) 0 0023

1/1 60 (55 6%) 45 (39 1%) 0 51 (0 301-0 88) 0 01

мужчины

п=64(%) п=75 (%)

41 (64 1%) 29 (38 7%) 0 35(0 18-0 71) 0 0023

1/D 32 (29 6%) 50 (43 5%) 1 83 (1 05-3 18) 0 022

APOE+FGB (-491Т) + (-249Т) 14(13%) 5 (4 3%) 0 31 (0 11-0 88) 0019

АРОЕ + LPL (-491Т) + (495Т/Т) 13(12%) 4 (3 5%) 0 26(0 083-0 84) 0015

*в случае эпсилон-полиморфизма гена АРОЕ приведены значения рсогг, для которых учтена поправка Бонферрони (п=2)

связан с ИИ в отдельности, а аллель -491Т только в сочетаниях с аллелями полиморфных участков других генов, то у русских наблюдается обратная картина При этом одиночная отрицательная ассоциация аллеля -491Т с ИИ в русской популяции наблюдается только для индивидов не старше 60 лет, т е выявлена ассоциация с так называемым "молодым инсультом"

Поскольку мы наблюдали ассоциацию с ИИ аллелей всех трех рассматриваемых полиморфных участков гена АРОЕ, мы решили выяснить вносит ли главный вклал в снижение риска развития заболевания каком-либо один из участков, или они оказывают независимый протективный эффект Для этого мы провели анализ неравновесия по сцеплению и определили частоты гаплотипов Оказалось, что у якутских больных ИИ в сравнении с якутами из контрольной группы достоверно реже встречался гаплотип -491А/-427С/с2 (3 04% и 9 3%, соответственно, р=0 006), для двух последних аллелей которого был по отдельности выявлен протективный эффект Сужение рамок гаплотипа до 427С/е2 не изменило величины р Из этого можно сделать вывод, что аллель -491А, как самый распространенный в популяциях, входит в протективный гаплотип только вследствие неравновесного сцепления и сам по себе какого-либо защитного действия не оказывает Как следует из данных табл 3, достоверность связи с заболеванием аллеля -427С на порядок превышает соответствующую величину для аллеля е2 Можно предположить, что роль в развитии ИИ полиморфизма Т-427С в промоторной области гена АРОЕ более важна чем роль эпсилон-полиморфизма Аллеть -491Т не входит в гаплотипы, час юга которых отличается у больных ИИ и в контрольной группе, что указывает на его независимый вклад в формирование риска развития ИИ Можно заключить, что для дальнейшего прояснения роли гена АРОЕ в развитии ИИ имеет смысл исследовать не только и, быть может, не столько эпсилон-полиморфизм, сколько полиморфные участки в промоторе

Роль в этиопатогенезе ИИ уровня экспрессии гена АРОЕ, количества белка ароЕ и его структуры можно рассматривать в разных аспектах С одной стороны, ароЕ, синтезируемый, помимо печени, астроцнтами и микроглией, вовлечен в ряд специализированных форм нейронального гомеостаза [Bu G et al, 1994] и, более того, играет роль в восстановлении поврежденных нейронов [Nathan BP et al, 1994] Эти процессы могут иметь большое значение в развитии и исходе ИИ С другой стороны, ароЕ играет одну из ключевых ролей в транспорте и распределении по тканям холестерола и триглицеридов, в том числе и в ЦНС [Bullido MI et al, 2000] Изменения в этих процессах могут приводить к избыточному накоплению холестерола и последующему развитию атеросклероза, являющегося одним из главных факторов риска развития ИИ и даже в некоторых случаях его промежуточным фенотипом

Вероятно, объяснение протективного эффекта аллеля е2, пусть и незначительного в сравнении со вкладом полиморфизма в промоторной области АРОЕ, стоит искать в функции ароЕ именно как переносчика холестерола Показано, что носительство алтеля е2 связано с пониженной концентрацией холестерола в ппазме крови [Davignon J et al, 1988], что может снижать риск развития атеросклеротическпх изменений и возникновения ИИ

Наблюдаемый памп протективный характер аллелей -491Т и -427С для развития ИИ можно объяснить влиянием носительства эгих аллелей на уровень экспрессии гена АРОЕ Действительно, показано, что участки А-491Т и Т-427С могут являться сайтами связывания транскрипционных факторов [Bullido MJ et al, 2000] В работах на культурах клеток карциномы гепатоцитов и астроциточьг человека наблюдали, что замена пуклеотида А на Т в положении -491 приводит к снижению уровня активности промотора примерно на 60%, а для аллеля -427С, наоборот, характерен повышенный уровень транскрипции [Artiga MJ et al, 1998] Поскольку аллели -49IT и -427С оказывают прямо противоположный эффект на уровень экспрессии гена, возникает вопрос, почему для них обоих выявляется отрицательная связь с развитием ИИ Возможно, для этого есть несколько причин Во-первых, в каждой этнической группе по отдельности ассоциирован с риском ИИ только один из этих двух аллелей причем в каждом случае разный У русских это аллель -491Т, а у якутов - аллель -427С Это может объясняться существованием этнической гетерогенности генетической предрасположенности к ИИ Кроме того, ассоциацию отдельных аллелей АРОЕ с ИИ для русских выявили только в группе до 60 лет, т е в том случае, когда, как считается, вклад генетических факторов предрасположенности к ИИ наиболее выражен Это может указывать на различный вклад генетических факторов в этиопатогенез ИИ с различным механизмом развития, то есть на его клиническую гетерогенность Наконец, для аллеля -427С у русских и для аллеля -491Т у якутов также выявлен протективный эффект, однако уже не по отдельности, а в сочетании с аллелями и/или генотипом полиморфных участков гена LPL При этом если у русских аллель -427С АРОЕ входит в сочетание с аллелями 495G и 1595G LP1, то у якутов в сочетание с аллелем -491Т входит геногпп 495Т/Т LPL, содержащий другой аллель Таким образом различному эффекту на уровень транскрипции АРОЕ в каждом соче 1ании соответствует различное действие аллеля полиморфизма T495G LPL В результате каждое coneiamie приводит к одному и тому же протективному действию в отношении риска развития ИИ Механизмы, лежащие в основе такого действия сочетаний, следует искать в процессах, регулирующих липиднын гомеостаз Известно, что липопротеинлипаза (LPL), наряду с ароЕ, играет важнейшую роль в обмене липидов и липопротеинов (ЛИ) Помимо того, что этот фермент гидролизует находящиеся в ЛИ триглицериды плазмы крови, он также опосредует выведение из кровотока атерогенных

остаточных ЛП [Otarod Ж et al, 2004] Кроме того, LPL может непосредственно влиять па развитие атеросклероза, поскольку, связываясь с ЛП и протеоглнкапами, она способна задерживать липидные частицы и повышать их захват клетками или увеличивать их содержание в стенке артерий [Saxena и et al, 1993] Влияние на активность LPL полиморфизма T495G точно еще не выяснено Однако показано, что носительство аллеля 495G, который входит в выявленное в нашей работе у русских протективное сочетание, ассоциировано с более низким содержанием триглицеридов в плазме крови и меньшей вероятностью развития атеросклероза артерий [Shimo-Nakanishi Y et al 2001] Тот факт что у якутов в протективное сочетание с аллелем -491 Г АРОС входит юмозигота по аллелю 495 Г LPL (495Т/Г), в принципе можно объяснить взаимодополняющим деисшием компонентов сочетания в отношении липидного метаболизма изменение уровня липопротеиплипазы (и/или ее структуры), соответствующее генотипу 495Т/Т, и одновременное снижение уровня экспрессии ароЕ (за счет аллеля -491Т) могут приводить к уменьшению риска развития ИИ за счет снижения атерогенеза

Протективное действие аллеля 1595G LPL, выявленное нами в сочетании с аллелями -427С АРОС и 495G LPL у русских, может объясняться несколькими причинами Показано, что присутствие аллеля 1595G образует стоп-кодон, что приводит к усеченной форме фермента, обладающей повышенными стабильностью, секретируемостыо и активностью [Rip J et al, 2006] Вследствие этого происходит снижение общей концентрации триглицеридов, что в свою очередь может ослаблять атерогенез и приводить к снижению риска развития ИИ В других исследованиях подобный защитный эффект показан как для ИИ [Zhao SP et al , 2003] так и для ряда иных сердечно-сосудистых заболеваний [Gagne SF et al , 1999, Chen Wet al ,2001]

Мы также сравнили частоты гаплотнпов двух рассмафнваемых полиморфных участков гена LPL У русских в контрольной группе по сравнению с больными ИИ достоверно чаще встречается гаплотип 495T/1595G (2 8% и 0%, соответственно, р=0 0049), вероятно, за счет аллеля 1595G, а аллели LPL 495G и 1595G, входящие в рассматриваемое выше сочетание трех аллелей, не являются жестко сцепленными между собой

Кроме того, показали, что у русских аллель 1595С LPL вместе с аллелем -148С гена ГОВ составляет предрасполагающее к ИИ сочетание Вероятно, этот эффект основывается на том, что более высокая концентрация триглицеридов в плазме, связанная с носительством аллеля 1595С LPL, и возможные изменения в уровне фибриногена, связанные с носительством шыеля -148С или сцепленного с ним другого аллеля ГСП, moint способствовать росту атеротромботической бляшки, а это приводит к сужению просвета сосудов и развитию ишемических процессов Кроме того, мы обнаружили, что у русских

аллель -148С гена FGB и в одиночку оказывает предрасполагающий эффект в отношении ИИ однако только в группе в которой заболевание развивается после 60 лет Этот результат противоречит данным некоторых других исследований, в которых либо не находили ассоциации ИИ с аллелями полиморфизма С-148Т [Blake GI et al , 2001] либо выявляли связь с заболеванием для аллеля -455А FGB, находящегося в полном неравновесном сцеплении с аллелем -148Т [Martiskamen М et al, 2003] Однако подобные результаты подтверждаются не во всех исследованиях [Kamath S et al, 2003], и, в целом, ситуация с вкладом аллелей полиморфного участка С-148Т в риск развития ИИ остается не вполне ясной

Кроме связи с ИИ полиморфного участка С-148Т, мы выявили ассоциацию с заболеванием и другого полиморфизма промоторной области гена FGB, С-249Т У якутов был обнаружен протектнвпый эффект аллеля -249Т в сочетании с аллелем -49IT АРОЕ, который, как мы указывали выше, входит и в другое выявленное для якутов протективное сочетание аллелей По-видимому, носительство аллеля -249Т, или, что вероятнее, аллеля, находящегося с ним в неравновесном сцеплении, приводит к таким изменениям в синтезе фибриногена, чло в совокупности со сниженной экспрессией ароЕ происходит ослабление атеротромботпческих процессов в кровеносных сосудах, и, соответственно, уменьшается риск развития ИИ Для полиморфных участков С-148Т и С-249Т гена FGB, а также полиморфизма A4266G гена FGA, расположенного в одном кластере с FGB, мы провели анализ неравновесия по сцеплению и сравнили частоты выявленных гаплотипов у больных ИИ и индивидов из контрольных групп Однако ни для русских, ни для якутов ассоциации какого-либо гаплотипа с ИИ не наблюдалось

Для якутской популяции мы также обнаружили ассоциацию с ИИ аллелей и генотипов полиморфизма 1/D в гене АСЕ При этом аллель I и генотип I/I обладают формально протективным действием, а аллель D и генотип I/D оказывают предрасполагающий к развитию ИИ эффект Интересно отметить, что после разделения общих групп якутов по полу оказалось, что у мужчин сила ассоциации аллелей I и D, а также генотипа 1/1 с ИИ возрастает на порядок (см табл ЗЬ), тогда как у женщин ассоциация не сохраняется Это может свидетельствовать о некоторых различиях в факторах генетической предрасположенности к ИИ у мужчин и женщин, по крайней мере, если в основе механизма развития заболевания лежат патологические изменения в системной гемодинамике и регуляции АД компонентами РААС Полученные нами данные для якутов согласуются с результатами исследования связи полиморфизма I/D АСЕ с ИИ для китайцев [Gao X et al, 2006] Роль аллеля D и содержащего его генотипа I/D в повышении риска развития заболевания можно объяснить следующим образом Как показано в многих работах, этот

аллель ассоциирован с повышенным уровнем АСЕ в плазме крови [Sayed-Tabatabaei FA tt al 2006] Увеличение же количества фермента приводит, во-первых, к повышенному превращению ангиотензина 1 в ангиотензип II - мощный сосудосуживающий фактор а во-вторых, к повышенному разрушению брадикинина, который отвечает за высвобождение оксида азота (II), обеспечивающего расширение сосудов Таким образом, повышается АД, что увеличивает вероятность развития АГ и ИИ Соответственно, у носителей генотипа 1/1 подобного эффекта не происходит, что придает этому генотипу формально протективиое значение Отсутствие в нашей работе какой-тибо ассоциации полиморфного участка I/D гена АСЕ с ИИ у русских согласуется с результатами, полученными для московской популяции [Скворцова ВИ и др , 2003] и для русской популяции в целом [Моляка ЮК и др , 1998] Коми искомый лил'пи связи поснтспьствл алчслен, генотипов и н\ сочскшнн с тяжеетыо АГ, предшествующей развитию ИИ Мы также проанализировали генетическую предраспото/кенносгь к АГ основному модифицируемому фамору риска ИИ, как в i руинах русских и якутских больных ИИ (где АГ предшествовала развитию ИИ) 1ак и в русской контрольной группе, для которых мы располагали данными по уровню АД

Сравнив количество индивидов с наличием АГ в группе русских с ИИ и русской контрольной группе (92 5% н 66 9%, соответственно, см табл 1 ) мы обнаружили, что АГ действительно является важным фактором риска развития ИИ, повышая вероятность возникновения заболевания в 6 раз (95%С1 3 02-11 6, р<0 0001) Индивидов в каждой группе подразделяли на подгруппы с нормальным АД и с АГ 1-ой, 2-ой и 3-ей степени (см табл 1) Ассоциации с наличием или тяжеетыо АГ носительства каких-либо аллелей и генотипов в русской контротыюй группе выявлено не было Однако при анализе связи носительства аллелей и генотипов рассматриваемых полиморфных участков с тяжеетыо АГ в группах русских и якутских больных ИИ потучен ряд интересных результатов Выявлены ассоциации со степенью АГ носительства отдельных аллелей -249С гена FGB у русских и 495Т гена LPL у якутов (рис 2а и 2Ь, соответственно) Надо отметить, что аллель 495Т гена LPL входит в генотип 495Т/Т, для которого нами была показана протектнвпая роль в отношении развития ИИ у якутов Таким образом, влияние, которое носительство этого аллеля, или сцепленного с ним аллеля, оказывает на LPL, может приводить к таким изменениям в липидпом метаболизме, что в итоге наблюдается защитный эффект как для АГ, предшествующей ИИ, так и для самого ИИ

та £0 ео

70 00

% 50 «

2010;

р<0.0001

□ отсутствие о гапертензии

□ степень i

□ степень i El степень 3

100

SOj

то| ю

'А 50 № эо 20 10

р<0.0001

Рис. 2. Ассоциация носительства (в процентах от общего числа пациентов в подгруппе) аллеля -249Й ге|| FGB \ русских (а) и аллеля 495Ï гена I PL у якутов (Ь) СО степенью ЛГ, предшествующей развитию ИИ, Величина р рассчитана по критерию Фишера в 8-польноп таблице.

У якутских больных ИИ выявлено также сочетание трех аллелей: -249С ГСП, с4 АРОЕ и -1903А СИЛ (рпе. 3). частота встречаемости которого монотонно возрастала с повышением уровня АД. Величина р. рассчитанная по критерию Фишера в 8-полыюй таблице, составляла для этого сочетания 0.0003, При этом по отдельности ни один из этих аллелей не ассоциирован с тяжестью АГ, а а случае входящих в это сочетание пар аллелей ассоциация сохранялась, хотя и была менее выраженной, только для пар -249С ЕС В + -1903А СШ (р=0.017) Й к<1 АРОЕ + -1903А СМА </)=0.023) (табл. 4). Для пары же -249С + к4 швисимостьот- тяжести АГтеряла монотонный характер.

50 45 40 35 30 7. 25 20 15 10

ГП отсутствие о гипергеизии

171 степень i Ш степень г 13 степень з

р=0.0003

i'nc. 3. Ассоциация носительства (в процентах от общего числа пациентов в подгруппе) сочетания трех аллелей: -249С FGH. АРОЕ и -I903A СМА со степенью АГ. предшествующей развитию ИИ у яку тов. Величина р рассчитана но кричелио Фишера в 8-ноль ной таблице.

Таблица 4 Сравнение частоты встречаемости сочетания трех аллелей -249С /Т7В, е4 АРОЕ и -1903А СМА (см также рис 3 ) и входящих в него пар аллелей и отдельных аллелей в подгруппах якутских больных ИИ характеризующихся разным уровнем АД до развития ИИ

Ген (гены) Алелли отсутствие АГ п=31 (100%) АГ 1-ой степени п=54 (100%) АГ 2-ой стспепп п=22(100%) АГ 3-ой степспи п=8(100%) Р

FGB+ 4РОЕ+ СМА -249С + е4+ -1903А 0 (0%) 4 (7 4%) 4(18 2%) 4 (50%) 0 0003

FGB + АРОЕ -249С + Е4 7 (22 6%) 7(13%) 7 (31 8%) 4 (50%) по*

FGB + СМА -249С + -1903А 5(16 1%) 9(16 7%) 7 (31 8%) 5 (62 5%) 0017

АРОЕ + СМА е4 + -1903А 2 (6 5%) 8(14 8%) 5 (22 7%) 4 (50%) 0 023

FGB -249С 19(61 3%) 21 (38 9%) 17 (77 3%) 5 (62 5%) НО

АРОЕ е4 10(32 3%) 19(35 2%) 9 (40 9%) 4 (50%) нд

СМА -1903А 12 (38 7%) 21 (38 9%) 9 (40 9%) 7 (87 5%) нд

Значение р в 8-полыюй таблице оценивали только при монотонном характере изменения частоты встречаемости *НО - не определяли

Интересно отметить, что вклада аллелей полиморфизма С-249Т FGB непосредственно в развитие ИИ у русских не наблюдали (см табл За) У якутов же все ассоциированные с тяжестью АГ полиморфные участки, за исключением G-1903A CM I были гакже вов шчепы в формирование восприимчивости непосредственно к ИИ (см габл ЗЬ) Это согласуется с описанными ранее в литературе наблюдениями, что факторы генетической предрасположенности к ИИ и к АГ во многом являются общими

Обращает па себя внимание то, что у русских аллель -249С FGB играет протективную роль в отношении тяжести АГ, тогда как у якутов этот аллель входит в сочетание, предрасполагающее к АГ Одним из объяснений этого факта могут являться значительные различия в распределении аллелей полиморфизма С-249Т FGB у русских и якутов Надо отметить, что, как уже обсуждалось выше, подобные различия вообще характерны для аллелей полиморфных участков генов, кодирующих компоненты системы гемостаза (см табл 2) Можно предположить, что существуют различия во вкладе и других генетических факторов в регуляцию процессов свертывающей и противосвертывающей систем Поэтому итоговый эффект одного и того же аллеля, в рассматриваемом случае -249С FGB, или сцепленного с ним аллеля, у русских и якутов может отличаться Таким образом в первом случае его носительство может приводить (в совокупности с влиянием других компонентов гемостаза) к ослаблению тромботических событий и, следовательно, к меньшей вероятности развития или повышения тяжести АГ, а во втором случае, у якутов, вклад аллеля -249С FGB может способствовать усилению тромбозов и развитию АГ

Как указано выше, для якутов обнаружена ассоциация с АГ, предшествующей ИИ, не только отдельного аллеля, но и сочетаний аллелей, самым "выразительным" из которых

оказалось сочетание -249С ! GB i4 1РОГ и -1903Л С\1А (см рис. 3) В лом случае мы наблюдаем яркий пример эффекта одновременного вклада генов, кодирующих компоненты ipex различных важнейших uicieM - ге\юс!аза (FGB), метаболизма лппидов (АРОГ.) и РЛДС {СМА) Рели HOCHicibciBO аллеля -249С ГСВ может влиять на процессы фомбоза то ноеитсльство аллеля ь4 гена 4POL вероятнее всего, способствует развитию агероск 1ерошчсских изменении Эю нре нюло/кепие основано на том чю для лого алле ш показана связь с повышенным содержанием холестерола сыворотки [Lui ПС et al, 1999J и усилением образования ааросклсротичсских бтяшек [Alteiilxirg M et al 2007J 1акнм образом в совокуппосш происхо цп способствование атеротромботическим процессам закхиоривапшо просвета сосу юн н повышению АД Спетует отмети, чю подобное пре ipaeiiO'iaiающес цлтствис алле ieii -249С I GB и l4 IPOI к AI как к серчечпо-сосу шегому заботеванию у якутов хорошо согласуется с icm чю друпгс ад те ти них учас1ков -2491 I GB и l2 APOL, как выявлено в пашен работе оказывают протективнып аффект в отношении ИИ, во многих случаях также явтяющегося следствием нарушений в сердечно-сосудистой системе

Poib полиморфизма гена химазы в прелрасполатаюшем эффекте обсуждаемою сочетания можно обьяснять различными причинами С одной стороны этот фермент непосредственно участвует в регуляции АД, обеспечивая наряду с ангиогензнп-претзращающим ферментом превращение ант погензииа I в аш иогензип II Таким образом хотя из данных литературы it не известно влияние полиморфизма G-1903A на активность и m уровень фермста можно иредпо южить, что эффект аллеля -1903А (и ти ал1еть, нахо тящипся с ним в неравновесном сцеплении) состош в усилении образования апгпотензина И, что в свою очередь можег приводить к повышению АД и развипио AI С трутои стороны извеспю чю образуемый ашиотеизип II усиливает атеросклеротичсские процессы и ею часю нахо тя1 в атеросклеронтческих бляшках [Potter DD et al 1998J Таким образом аллель -1903А наряду с двумя другими алтетямп из триаллельного сочетания, может шрать роль в атерофомботчеекнх процессах, ответственных за развитие АГ и повышение ее тяжести

Поскольку мы не имеем данных об уровне АД для якутской контрольной группы мы не можем творить с уверенностью о прпроте AI которая нре (шествует развитию ИИ Возможно посте ibcino ныян iciiiioio нами сочетания трех аллелей и/и ги от телыюю алле тя 4951 //7 (см выше) влияют на предрасположенность якутов к '\1 как к таковой вне зависимое!п oi ИИ О шако можно также нре шо южшь чю эти факторы влияю! па формирование восприимчивости к АГ как промежуточною фенотипа ИИ В пользу второго предположения моту г свидетельствовать данные анализа русских ботьных ИИ и

контрольной группы протектнвный эффект аллеля -249С гена FGB в отношении тяжести АГ выявлен только у индивидов, перенесших ИИ, но не в контрольной группе

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, паша работа подтвердила необходимость проведения комплексного анализа генетической предрасположенноеги к ИИ Нами было показано, что все рассматриваемые нами гены, кодирующие компоненты систем гемостаза, лшшдного меыболизма и РА АС за исключением FGA вовлечены в формирование восприимчивости к ПИ и/или АГ предшествующей развитию ИИ и возможно, являющейся его промежуточным фенопшом При этом роль полиморфных участков генов FGB, АРОЕ и LPL в развитии ИИ показана дчя обеих этнических групп, тогда как вклад гена АСЕ в риск развития ИИ и гена СМА в развитие/тяжесть АГ, предшествующей ИИ, выявлен только для якутов Эти результаты, наряду с показанными нами значительными отличиями в распределении аллелей и генотипов почти всех исследованных полиморфных участков большинства генов (FGA, FGB, АРОЕ, АСЕ и СМА) между русскими и якутами, подтверждают исключительную важность учета этнических различий при проведении исследований и преимущество исследования генетически гомогенных популяций Кроме того, обнаруженная связь гена LPL с АГ, предшествующей развитию ИИ, у русских и генов ЕРЕ, FGB, АРОЕ и СМА у якутов выявленные нами возрастные различия во вкладе в развитие ИИ генов FGB и АРОЕ у русских, а также различия во вкладе гена АСЕ в зависимости от пола у якутов показывают эффективность изучения генетической предрасположенности к заболеванию в комплексе с факторами риска ИИ, как пемодифицируемыми (пол, возраст), гак и устранимыми (АГ)

Список- сокращений АГ - артериальная гипертензия, АД - артериальное давление, ДАД -диастолическое АД, ИИ - ишемнческии инсульт, КТ - компьютерная томография, ЛП -липопрогеины, МРТ - магнитно-резонансная томография, ОР - относительный риск, ПЦР -полимеразная цепная реакция, РААС - ренин-ангиотензин-альдостероновая система, САД -систолическое АД, ЭКГ - электрокардиография, АСЕ - ген, кодирующий ангиотензин-превращаюший фермент, АРОЕ - ген, кодирующий аполипопротеин Е, ароЕ - белок аполипопротешг Е, CI - доверительный интервал (confidence interval), СМА - ген, кодирующий хммазу, FGA - ген, кодирующий альфа-фибриноген, FGB - ген, кодирующий бета-фибриноген, ЕРЕ - ген, кодирующий липопротеинлипазу LPL - белок пипопротеинлипаза SD - стандартное отклонение (standard deviation),

выводы

1 Выявлены достоверные различия частот аллелей и большинства генотипов полиморфных участков генов FGA (A4266G), FGB (С-249Т и С-148Т), АСЕ (I/D), СМА (G-1903A) и АРОЕ (A-49IT) между индивидами русской и якутской этнической принадлежности при сравнении как групп больных ИИ так и контрольных групп Частоты аллелей и генотипов полиморфного участка Т-427С и эпсилон-полиморфизма гена АРОЕ, а также всех полиморфных участков гена LPL (T495G и C1595G) у русских и якутов из контрольных групп не отличались При сравнении русских и якутских больных ИИ выявлены достоверные отличия в частотах генотипов -427Т/Т и -427Т/С, а также аллеля е4 и генотипа с2/еЗ гена АРОЕ

2 При сравнении русских больных ИИ с соответствующей контрольной группой не выявлено достоверных различий частот аллелей и генотипов рассматриваемых полиморфных участков После разделения больных на подгруппы, в которых ИИ развивался до и после 60 лет, и сравнения с контрольными подгруппами тех же возрастов выявлены ассоциации носительства аллеля -491Т гена АРОЕ с развитием ИИ до 60 лет и носительства аллеля -148С гена FGB - после 60 лет Выявлены также сочетания двух аллелей -148С FGB и 1595С LPL, а также трех аллелей -427С АРОЕ 495G LPL и I595G LPL, носительство которых ассоциировано с ИИ } русских

3 У якуюв выявлены аллели -427С и е2, генотипы -427Т/Т, -427Т/С и е2/сЗ гена АРОЕ, а также аллель D и генотипы 1/1 и I/D гена АСЕ, носительство которых ассоциировано с ИИ В возрастных подгруппах до и после 60 лет ассоциаций не наблюдали, а разделение больных и контролей по полу приводило к возрастанию уровня достоверности ассоциаций с аллелем D и генотипом 1/1 гена АСЕ у мужчин на порядок величин Кроме того, выявлены попарные сочетания аллелей -491Т АРОЕ и -249Т FGB, а также аллеля -491Т АРОЕ и генотипа 495Т/Т LPL, носительство которых ассоциировано с ИИ у якутов

4 Показано участие генов, кодирующих компоненты систем гемостаза (FGB) и липидного обмена (АРОЕ и LPL), в развитии ИИ в двух этнических группах При этом наблюдаются существенные этнические различия во вкладе отдельных полиморфных участков этих генов в восприимчивость к ИИ исключение составляет протективпый эффект аллелей -491Т и -427С гена АРОЕ наблюдаемый и у русских, и у якутов Вклад гена АСЕ в развитие ИИ наблюдали только у якутов

5 При разделении больных ИИ на подгруппы в зависимости от предшествующего заболеванию уровня АД (с отсутствием АГ и с АГ 1-ой, 2-ой и З-ей степеней) выявлена ассоциация тяжести АГ с носительством аллетя -249С FGB у русских и аллеля 495Т LPL у якутов У якутов выявлена также ассоциация тяжести АГ с носительством сочетания трех

аллелей -249С FGB, е4 АРОЕ и -1903А СМА При этом входящие в это сочетание аттети по отдельности не ассоциированы с тяжестью АГ, а попарно ассоциированы более слабо Таким образом, выявлены факторы генетической предрасположенности к АГ у индивидов русской и якутской этнической принадлежности, перенесших ИИ

СПИСОК ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Paifcnov MG, Nikolaeva TY, Sudomoina MA, Tedorova SA, Gueklit AB, Gusev El, Favorova 00 Polymorphism of apolipoprotein E (APOE) and lipoprotein lipase (LPL) genes and îschaenuc stroke m individuals of Yakut ethnicity J Neurol Sci 2007, 255 42-49

2 MA Судомошш ТЯ Николаева, M Г Парфенов, A Д Алексееиков, A В Фаворов, А В Гехт ЕИ Гусев 0 0 Фаворова Генетическая компонента развития артериальной гипертонии (на выборке якутов, перенесших ишемичсскии ннсулы) Доклады академии наук 2006 410 832-834

3 ТЯ Николаева, M Г Парфенов, M Л Судомошт, Л Б Гехт, С И Гусев, О О Фаворова Полиморфизм гена аполипопротенна Е у больных ишемическим инсультом (на примере якутской этнической группы) Материалы межрегиональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы клинической неврологии" Иркутск, 2007, с 98-101

4 Парфенов M Г Комплексный многовариантныи анализ генетических факторов ишемического инсульта и клинического статуса больных Тезисы докладов Московской международной конференции "Биотехнология и медицина" Москва, 2006, с 66-67

5 TV Andreewski, MA Sudomoina, M G Paifcnov, TY Nikolaeva, A В Gekht, SA Fedorova, A D Alekseenkov, A V Favorov, G Parmigiani, M F Ochs, E I Gusev, О О Favorova Complex analysis of genetic susceptibility to hypertension in ischemic stioke patients lournal ol Hypertension Vol 23, Suppl 2, 2005, S367

6 Степанова С A , Николаева T Я , Парфенов M Г , Судомоина M А , Гехт А Б Гусев Е И Фаворова О О Полиморфизм генов аполипопротенна Е, бета-фибриногена и химазы у якутов с геморрагическим и ишемическим инсультами Якутский медицинский журнал, 2005, 1(9) 66-67

7 Николаева ТЯ , Парфенов M Г, Судомоина M А , Старостина Е В , Ноговицына А H Гехт А Б , Гусев Е И Полиморфизм гена апгиотензии-превращающего фермента у якутов с ишемическим инсультом Якутский медицинский журнал, 2005, 1(9) 45-46

8 Фаворова ОО Николаева ТЯ, Парфенов M Г, Судомоина MA, Алексееиков АД Андреевский ТВ, Гехт А Б, Гусев ЕИ Комплексный анализ факторов генетической прсдраспотожеппости к потигенным формам инсульта Материалы конгресса "Российский национальный конгресс кардиотогов" Томск, 2004, с 493

Заказ № 223/04/07 Подписано в печать 25 04 2007 Тираж 70 экз Уел пл 1,5

ООО ' Цифровичок", тел (495) 797-75-76, (495) 778-22-20 , V >, \vw\v с/г гц , е-тай т/о@с/г ги

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Парфенов, Михаил Григорьевич

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Этиопатогенез ишемического инсульта и факторы риска

1.2. Генетические факторы предрасположенности к ИИ

1.2.1. Моногенные формы ИИ

1.2.2. Полигенные формы ИИ

1.2.3. Экспериментальные модели ИИ

1.3. Поиск генов, определяющих предрасположенность к полигенным формам ИИ

1.3.1. Результаты полного геномного сканирования

1.3.2. Данные, полученные с использованием подхода «ген-кандидат»

1.3.3. Результаты применения метода мета-анализа

1.3.4. Результаты исследования сочетанных ассоциаций

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования

2.2. Использованные реактивы

2.3. Выделение геномной ДНК из периферической крови

2.4. Геномное типирование

2.4.1. Анализ полиморфизма A4266G (Thr312Ala) гена альфа-фибриногена (ПЦР-ПДРФ)

2.4.2. Анализ полиморфных участков С-249Т и С-148Т в гене бета-фибриногена (ПЦР-ПДРФ)

2.4.3. Анализ полиморфного участка А-491Т гена АРОЕ (ПЦР-SSP)

2.4.4. Анализ полиморфного участка Т-427С гена АРОЕ (ПЦР-ПДРФ)

2.4.5. Геномное типирование эпсилон-полиморфизма гена

АРОЕ (ПЦР-ПДРФ)

2.4.6. Анализ полиморфного участка T495G гена LPL (ПЦР-ПДРФ)

2.4.7. Анализ полиморфизма C1595G (Ser447Ter) гена LPL (ПЦР-ПДРФ)

2.4.8. Анализ полиморфизма I/D гена АСЕ

2.4.9. Анализ полиморфизма G-1903А (СМА/В) гена СМА (ПЦР-ПДРФ)

2.5. Статистический анализ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выбор генов и их полиморфных участков для анализа ассоциации с ИИ

3.1.1. Полиморфизм генов FGA и FGB

3.1.2 Полиморфизм генов АРОЕ и LPL

3.1.3. Полиморфизм генов АСЕ и СМА

3.2. Анализ этнических различий в распределении аллелей и генотипов проанализированных полиморфных участков у русских и якутов

3.3. Анализ ассоциации аллелей и генотипов исследованных генов с

ИИ у русских и якутов

3.4. Комплексный анализ генетической предрасположенности к ИИ с учетом пола и возраста с использованием алгоритма APSampler

3.5. Комплексный анализ связи носительства аллелей, генотипов и их сочетаний с тяжестью АГ, предшествующей развитию ИИ 78 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 83 ВЫВОДЫ 85 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

АГ - артериальная гипертензия АД - артериальное давление ГИ - геморрагический инсульт ИИ - ишемический инсульт КТ - компьютерная томография ЛП - липопротеины

МРТ - магнитно-резонансная томография ОР - относительный риск

ПДРФ - полиморфизм длины рестрикционных фрагментов п.н. - пара нуклеотидов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПЦР-SSP - ПЦР с использованием набора аллелеспецифических праймеров

РААС - ренин-ангиотензин-альдостероновая система ср. возраст - средний возраст

ЦНС - центральная нервная система

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат

ЭКГ - электрокардиография

АСЕ-ген, кодирующий ангиотензин-превращающий фермент

АСЕ -ангиотензин-превращающий фермент

АРОЕ — ген, кодирующий аполипопротеин Е ароЕ -аполипопротеин Е

СМА - ген, кодирующий химазу

СМА - химаза

НгО - дистилированная НгО

DMSO - диметилсульфоксид (dimethyl sulfoxide)

ЕМ - максимизация математического ожидания (expectation maximization)

FGA - ген, кодирующий альфа-фибриноген

FGA -альфа-фибриноген

FGB - ген, кодирующий бета-фибриноген

FGB -бета-фибриноген

LPL - ген, кодирующий липопротеинлипазу

LPL - липопротеинлипаза

CI - доверительный интервал (confidence interval)

QTL - локус количественных признаков (quantitative trait locus)

SD - стандартное отклонение (standard deviation)

SDS - додецилсульфат натрия (sodium dodecyl sulfate)

SHRSP - склонные к возникновению инсульта спонтанно-гипертензивные крысы (spontaneously hypertensive stroke-prone rat)

SNP - однонуклеотидный полиморфизм (single nucleotide polymorphism)

TEMED - 1Ч,К,М',М'-тетраметилэтилендиамин (N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Участие генов, кодирующих компоненты систем гемостаза, липидного метаболизма и ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, в формировании предрасположенности к ишемическому инсульту у русских и якутов"

Во всем мире, в том числе и в России, инсульты являются одной из самых важных проблем здравоохранения [1, 2]. По материалам ВОЗ частота инсультов колеблется от 1.5 до 7.4 на 1000 населения, нарастая с возрастом, поскольку для этого заболевания характерно позднее развитие. Наиболее высокая заболеваемость - в возрасте между 50 и 70 годами. Так, в возрасте 50-59 лет частота возникновения инсультов равна 7.4, а в возрасте 60-69 лет - 20 на 1000 населения.

По данным регистра мозгового инсульта в России заболеваемость составляет 3.36 на 1000 человек. В целом в России регистрируется ежегодно более 400 000 случаев инсульта, при этом на долю Москвы приходится более 24 000 случаев в год [3]. В Якутске заболеваемость составляет 2.88 на 1000 человек, что несколько ниже общего российского показателя. В России, как и в большинстве развитых стран мира, инсульт занимает второе-третье место (21,4%) в структуре причин общей смертности (после ишемической болезни сердца и онкологических заболеваний). При этом смертность от инсульта в России - одна из самых высоких в мире [4]. Инвалидизация после перенесенного инсульта достигает показателя 3.2 на 10 тыс. населения, занимая первое место среди всех причин первичной инвалидности. Социально-экономическая значимость этого заболевания связана еще и с тем, что среди заболевших инсультом 1/3 - люди трудоспособного возраста, а к труду возвращается не более 20% больных. Более того, увеличение распространенности инсульта наблюдается за счет лиц работоспособного возраста - до 64 лет [5].

В нашей стране, как и в большинстве стран мира, преобладают ишемические инсульты (ИИ), доля которых в структуре заболевания составляет до 80% [6]. Подавляющее большинство ИИ относится к комплексным (мультифакториальным) заболеваниям, и их развитие, клиническое течение и исход обусловлены как влиянием факторов внешней среды, так и наследственной предрасположенностью. Определенные успехи в понимании роли отдельных генов в молекулярных механизмах реализации повреждения мозга достигнуты лишь в рамках моногенных патологических состояний. В исследованиях же, посвященных генетике ИИ как комплексного полигенного заболевания, как правило, не учитывали совместный вклад множества независимо действующих и/или взаимодействующих полиморфных генов. Даже при анализе роли отдельных генов в развитии ИИ результаты опубликованных исследований трудно сопоставлять из-за недостаточного внимания, которое уделяли до последнего времени этнической гомогенности исследуемых групп.

Целью нашей работы являлся комплексный анализ совместного вклада в предрасположенность к ИИ ряда генов, белковые продукты которых вовлечены в развитие основных сердечно-сосудистых заболеваний. Исследование проводили в двух российских этносах - у русских и якутов, представляющих расы европеоидов и монголоидов, соответственно. Если русские являются самым многочисленным этносом России, то якуты представляют собой генетически изолированную популяцию, отвечающую многим требованиям, предъявляемым при проведении молекулярно-генетических исследований.

Таким образом, в связи с вышеуказанной целью ставились следующие задачи:

1) Провести геномное типирование выбранных на основе анализа литературы полиморфных участков генов-кандидатов (FGA, FGB, АРОЕ, LPL, АСЕ и СМА) для русских и якутов, перенесших ИИ, а также для индивидов без ИИ в анамнезе, совпадающих с больными по этнической принадлежности, полу и возрасту.

2) Изучить этнические различия в распределении аллелей и генотипов проанализированных полиморфных участков у русских и якутов, как в группах больных ИИ, так и в контрольных группах.

3) Провести комплексный анализ генетической предрасположенности к ИИ методом "случай-контроль" отдельно для русских и якутов с учетом пола и возраста.

4) Отдельно в группах русских и якутов провести комплексный анализ связи носительства аллелей, генотипов и их сочетаний с тяжестью артериальной гипертензии (АГ), предшествующей развитию ИИ.

Научная новизна. До настоящего исследования анализа генетической предрасположенности к ИИ для якутской популяции не проводили, а для русской популяции они касались роли отдельных генов-кандидатов, из которых с нашим исследованием в основном перекрывается только анализ инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ. Настоящая работа представляет собой целостное систематическое исследование вклада 10 функционально значимых полиморфных участков б генов-кандидатов в развитие ИИ и предшествующей ему АГ в двух популяциях России. Впервые проведен комплексный анализ связи носительства аллелей, генотипов и сочетаний аллелей и генотипов анализируемых полиморфных участков с ИИ и тяжестью АГ до развития ИИ с учетом пола и возраста рассматриваемых индивидов.

Выявлены высокодостоверные различия частот большинства аллелей и генотипов исследованных полиморфных участков между индивидами русской и якутской национальности, а также существенные этнические различия во вкладе отдельных полиморфных участков генов в восприимчивость к ИИ, диктующие необходимость этнической гомогенности групп при исследовании факторов генетической предрасположенности к полигенным заболеваниям. Впервые показано участие в развитии ИИ генов, кодирующих компоненты систем гемостаза (FGB') и липидного обмена (АРОЕ и LPL), в двух этнических группах, а также гена АСЕ ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС) только у якутов.

При разделении больных ИИ на подгруппы в зависимости от предшествующего заболеванию уровня артериального давления (АД) впервые выявлена ассоциация тяжести АГ с носительством аллеля -249С FGB у русских и аллеля 495Т LPL у якутов. Кроме того, у якутов выявлена ассоциация тяжести АГ с носительством сочетания трех аллелей: -249С FGB, е4 АРОЕ и -1903А СМА. Таким образом, выявлены факторы генетической предрасположенности к АГ у индивидов русской и якутской этнической принадлежности, перенесших ИИ.

Практическая значимость. Изучение ИИ на молекулярно-генетическом уровне открывает возможность индивидуально оценивать степень риска его развития у представителей разных этнических групп, разработать эффективные основы профилактики с учетом генетической конституции и особенностей образа жизни отдельного индивида. Проведенная работа создает основу для выявления истинной группы риска ИИ, опираясь на скрининговые исследования населения. Ее практическая значимость определяется возможностью проводить превентивную терапию, компенсирующую генетически обусловленные неблагоприятные особенности функционирования систем гемостаза, липидного обмена и РААС для тех лиц, у которых выявлена наследственная предрасположенность к ИИ и предшествующей ему АГ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Ишемический инсульт как комплексное полигенное заболевание

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Парфенов, Михаил Григорьевич

выводы

1. Выявлены достоверные различия частот аллелей и большинства генотипов полиморфных участков генов FGA fA4266G), FGB (С-249Т и С-148Т), АСЕ (I/D), СМА (G-1903А) и АРОЕ (А-491Т) между индивидами русской и якутской этнической принадлежности при сравнении как ipynn больных ИИ, так и контрольных групп. Частоты аллелей и генотипов полиморфного участка Т-427С и эпсилон-полиморфизма гена АРОЕ, а также всех полиморфных участков гена LPL (T495G и C1595G) у русских и якутов из контрольных групп не отличались. При сравнении русских и якутских больных ИИ выявлены достоверные отличия в частотах генотипов -427Т/Т и -427Т/С, а также аллеля е4 и генотипа е2/еЗ гена АРОЕ.

2. При сравнении русских больных ИИ с соответствующей контрольной группой не выявлено достоверных различий частот аллелей и генотипов рассматриваемых полиморфных участков. После разделения больных на подгруппы, в которых ИИ развивался до и после 60 лет, и сравнения с контрольными подгруппами тех же возрастов выявлены ассоциации носительства аллеля -491Т гена АРОЕ с развитием ИИ до 60 лет и носительства аллеля -148С гена FGB - после 60 лет. Выявлены также сочетания двух аллелей -148С FGB и 1595С LPL, а также трех аллелей -427С АРОЕ, 495G LPL и 1595G LPL, носительство которых ассоциировано с ИИ у русских.

3. У якутов выявлены аллели -427С и е2, генотипы -427Т/Т, -427Т/С и е2/е3 гена АРОЕ, а также аллель D и генотипы I/I и I/D гена АСЕ, носительство которых ассоциировано с ИИ. В возрастных подгруппах до и после 60 лет ассоциаций не наблюдали, а разделение больных и контролей по полу приводило к возрастанию уровня достоверности ассоциаций с аллелем D и генотипом I/I гена АСЕ у мужчин на порядок величин. Кроме того, выявлены попарные сочетания аллелей —491Т АРОЕ и -249Т FGB, а также аллеля —491Т АРОЕ и генотипа 495Т/Т LPL, носительство которых ассоциировано с ИИ у якутов.

4. Показано участие генов, кодирующих компоненты систем гемостаза (FGB) и липидного обмена (АРОЕ и LPL), в развитии ИИ в двух этнических группах. При этом наблюдаются существенные этнические различия во вкладе отдельных полиморфных участков этих генов в восприимчивость к ИИ; исключение составляет протективный эффект аллелей -491Т и -427С гена АРОЕ, наблюдаемый и у русских, и у якутов. Вклад гена АСЕ в развитие ИИ наблюдали только у якутов.

5. При разделении больных ИИ на подгруппы в зависимости от предшествующего заболеванию уровня АД (с отсутствием АГ и с АГ 1-ой, 2-ой и 3-ей степеней) выявлена ассоциация тяжести АГ с носительством аллеля -249С FGB у русских и аллеля 495Т LPL у якутов. У якутов выявлена также ассоциация тяжести АГ с носительством сочетания трех аллелей: -249С FGB, е4 АРОЕ и -1903А СМА. При этом входящие в это сочетание аллели по отдельности не ассоциированы с тяжестью АГ, а попарно ассоциированы более слабо. Таким образом, выявлены факторы генетической предрасположенности к АГ у индивидов русской и якутской этнической принадлежности, перенесших ИИ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, наша работа подтвердила необходимость проведения комплексного анализа генетической предрасположенности к ИИ. Нами было показано, что все рассматриваемые нами гены, кодирующие компоненты систем гемостаза, липидного метаболизма и РААС, за исключением FGA, вовлечены в формирование восприимчивости к ИИ и/или АГ, предшествующей развитию ИИ и, возможно, являющейся его промежуточным фенотипом. При этом роль полиморфных участков генов FGB, АРОЕ и LPL в развитии ИИ показана для обеих этнических групп, тогда как вклад гена А СЕ в риск развития ИИ и гена СМА в развитие/тяжесть АГ, предшествующей ИИ, выявлен только для якутов. Эти результаты, наряду с показанными нами значительными отличиями в распределении аллелей и генотипов почти всех исследованных полиморфных участков большинства генов (FGA, FGB, АРОЕ, АСЕ и СМА) между русскими и якутами, подтверждают исключительную важность учета этнических различий при проведении исследований и преимущество исследования генетически гомогенных популяций. Кроме того, обнаруженная связь полиморфизма гена FGB с АГ, предшествующей развитию ИИ, у русских и полиморфизма генов LPL, FGB, АРОЕ и СМА у якутов, выявленные нами возрастные различия во вкладе в развитие ИИ генов FGB и АРОЕ у русских, а также различия во вкладе гена АСЕ в зависимости от пола у якутов показывают эффективность изучения генетической предрасположенности к заболеванию в комплексе с факторами риска ИИ, как немодифицируемыми (пол, возраст), так и устранимыми (АГ). Результаты нашей работы также свидетельствуют о преимуществе анализа совместного вклада генов в развитие ИИ и АГ, предшествующей развитию ИИ. Такой подход позволил выявить ассоциации с ИИ и тяжестью АГ, которая предшествует возникновению ИИ, сочетаний аллелей и/или генотипов в том числе и тех генов, для которых по отдельности связи с этими заболеваниями не наблюдали (LPL у русских и якутов, а также FGB у якутов в случае ИИ и АРОЕ, СМА и FGB у якутов в случае тяжести АГ).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Парфенов, Михаил Григорьевич, Москва

1. Гусев Е.И., Скворцова В.И.: Ишемия головного мозга. //М.: Медицина, 2001.327 с.

2. Kaste М., Olsen Т. S., Orgogozo J., Bogousslavsky J, Hacke W.: Organization of stroke care: education, stroke units and rehabilitation. European Stroke Initiative (EUSI). //Cerebrovasc Dis. 2000; 10:3: 1-11.

3. Е.И. Гусев, В.И. Скворцова, JT.B. Стаховская, B.B. Киликовский, Н.Ю. Айриян: Эпидемиология инсульта в России. //Consilium Medicum Том 05, N 5/2003.

4. Верещагин Н.В., Варакин Ю.Я.: Регистры инсульта в России: результаты и методологические аспекты проблемы. //Инсульт, 2001; 1: 34-40.

5. Гусев Е.И.: Проблема инсульта в России //Инсульт,- Выпуск 9, 2003. С. 3-7.

6. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Стаховская JI.B.: Эпидемиология инсульта в России //Инсульт. Выпуск 8,2003. С. 4-9.

7. Sacco R.L., Benjamin E.S., Broderick J.P.: Risk Factors AHA Conference proceedings //Stroke 1997;28:1507-1517.

8. В.И.Скворцова: Артериальная гипертония и цереброваскулярные нарушения //Системные гипертензии Том 07, N 2/2005.

9. Ryglewicz D., Polarowska М., Lechewicz W. et al.: Stroke Mortality Rates in Poland Did Nat Decline Between 1984 and 1992 //Stroke 1997; 28:4:752-757.

10. Ernst E., Resch K.: Fibrinogen as a cardiovascular risk factor: a meta-analysis and review of the literature. //Ann. Intern. Med., 1993, Vol. 118. P. 956-63.

11. Fuh J.L., Wang S.J., Larson E.B., Lin H.C.: Prevalence of Stroke in Kinmen //Stroke 1996;27:8:1338-1341.

12. Петров Р.А., Алексеев В.П., Соломатин А.П.: Сердечно-сосудистая патология в Якутии. Клинико-эпидемиологическое и морфометрическое исследование. Якутск, 1982. -154 с.

13. Петрова П.Г.: Экология, адаптация и здоровье. Якутск, 1996 272 с.

14. Гусев Е.И.: Ишемическая болезнь головного мозга. Актовая речь. //М., 1992 36 с.

15. Wolf PA.: Hypertension. In: Norris J, Hachinski VC, eds. Stroke Prevention. //New York: Oxford University Press 2001; 93-105;

16. Wolf-Maier K, Cooper RS, Banegas JR et al.: Hypertension prevalence and blood pressure levels in 6 European countries, Canada, and the United States. //JAMA 2003; 289: 2363-9..

17. Скворцова В.И.: Инсульт. Участие апоптоза в формировании инфаркта мозга. //Приложение к Журналу неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова. 2001; 2: 12-9;

18. Чазова И.Е.: Инсульт. Лечение артериальной гипертонии как профилактика ишемического инсульта. //Приложение к Журналу неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова. 2001;3:3-7.

19. Bath P.: High blood pressure as risk factor and prognostic predictor in acute ischaemic stroke: when and how to treat it? //Cerebrovasc Dis. 2004; 17 Suppl 1:51-7.

20. MacMahon S.: Blood pressure and the risk of cardiovascular disease. //N Engl J Med 2000; 342: 50-2.

21. Ворлоу Г.П,, Деннис M.C., ван Гейн Ж., Ханкий Г.Ж., Сандеркок П.А.Г., Бамфорд Ж.М., Вордлау Ж.: Инсульт. Практическое руководство для ведения больных. //С-Пб, «Политехника», 1998. 629 с.

22. Под редакцией Германа Д.Г., Скоромец А.А.: Ишемические нарушения церебрального и спинального кровообращения. //Кишинев, "Штиинца", 1980.

23. Парфенов В.А.: Факторы риска и профилактика ишемических цереброваскулярных заболеваний. //ММА имени И.М. Сеченова, Русский медицинский журнал 2002 Том 10, N17.

24. Razvi SS, Bone I.: Single gene disorders causing ischaemic stroke. //J Neurol. 2006 Jun;253(6):685-700.

25. Tournier-Lasserve E.: New players in the genetics of stroke. // N Engl J Med. 2002 Nov 21;347(21):1711-2.

26. Helgason A, Nicholson G, Stefansson K, Donnelly P.: A reassessment of genetic diversity in Icelanders: strong evidence from multiple loci for relative homogeneity caused by genetic drift. //Ann Hum Genet. 2003 Jul;67(Pt 4):281-97.

27. Arcos-Burgos M, Muenke M.: Genetics of population isolates. //Clin Genet. 2002 Apr;61(4):233-47.

28. Федорова С.А., Бермишева M.A., Виллемс P. и др.: Структура генофонда якутов по данным о полиморфизме митохондриальной ДНК //Якутский медицинский журнал. 2003. №1. С.16-21.

29. Dichgans М.: Genetics of ischaemic stroke. //Lancet Neurol. 2007 Feb;6(2): 149-61.

30. Brass LM, Alberts MJ.: The genetics of cerebrovascular disease. //Baillieres Clin Neurol. 1995 Aug;4(2):221-45.

31. Hassan A, Markus HS.: Genetics and ischaemic stroke. //Brain. 2000 Sep;123 ( Pt 9):1784-812.

32. Orlacchio A, Bernardi G.: Research actuality in the genetics of stroke. //Clin Exp Hypertens. 2006 Apr-May;28(3-4): 191-7.

33. Lander ES, Schork NJ.: Genetic dissection of complex traits. //Science. 1994 Sep 30;265(5181):2037-48.

34. Dichgans M, Markus HS.: Genetic association studies in stroke: methodological issues and proposed standard criteria. //Stroke. 2005 Sep;36(9):2027-31.

35. Flossmann E, Schulz UG, Roth well PM.: Potential confounding by intermediate phenotypes in studies of the genetics of ischaemic stroke. //Cerebrovasc Dis. 2005; 19(1): 1-10.

36. Flossmann E, Rothwell PM.: Family history of stroke in patients with transient ischemic attack in relation to hypertension and other intermediate phenotypes. //Stroke. 2005 Apr;36(4):830-5.

37. Flossmann E, Rothwell PM.: Family history of stroke does not predict risk of stroke after transient ischemic attack. //Stroke. 2006 Feb;37(2):544-6.

38. Yamori Y, Tomimoto K, Ooshima A, Hazama F, Okamoto K: Proceedings: Developmental course of hypertension in the SHR-substrains susceptible to hypertensive cerebrovascular lesions.// Jpn Heart J. 1974 Mar;15(2):209-10.

39. Yamori Y, Horie R, Handa H, Sato M, Fukase M: Pathogenetic similarity of strokes in stroke-prone spontaneously hypertensive rats and humans.// Stroke 1976 Jan-Feb;7(l):46-53.

40. Rubattu S, Volpe M, Kreutz R, Ganten U, Ganten D, Lindpaintner K: Chromosomal mapping of quantitative trait loci contributing to stroke in a rat model of complex human disease.// Nat Genet. 1996 Aug;13(4):429-34.

41. Rubattu S, Giliberti R, Volpe M: Etiology and pathophysiology of stroke as a complex trait.// Am J Hypertens. 2000 Oct; 13( 10): 1139-48.

42. Rubattu S, Lee-Kirsch MA, DePaolis P, Giliberti R, Gigante B, Lombardi A, Volpe M, Lindpaintner K.: Altered structure, regulation, and function of the gene encoding the atrial

43. Jeffs B, Clark J.S, Anderson N.H, Gratton J, Brosnan M.J, Gauguier D, Reid J.L, Macrae I.M, Dominiczak A.F:Sensitivity to cerebral ischaemic insult in a rat model of stroke is determined by a single genetic locus.// Nat Genet. 1997 Aug;16(4):364-7.

44. Ikeda K, Nara Y, Matumoto C, Mashimo T, Tamada T, Sawamura M, Nabika T, Yamori Y.: The region responsible for stroke on chromosome 4 in the stroke-prone spontaneously hypertensive rat. //Biochem Biophys Res Commun. 1996 Dec 13;229(2):658-62.

45. Rubattu S, Ridker P, Stampfer MJ, Volpe M, Hennekens CH, Lindpaintner K.: The gene encoding atrial natriuretic peptide and the risk of human stroke. //Circulation. 1999 Oct 19;100(16):1722-6.

46. Sazci A, Ergul E, Tuncer N, Akpinar G, Kara I.: Methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphisms are associated with ischemic and hemorrhagic stroke: Dual effect of MTHFR polymorphisms C677T and A1298C

47. Nilsson-Ardnor S, Janunger T, Wiklund PG, Lackovic K, Nilsson AK, Lindgren P, Escher SA, Stegmayr B, Asplund K, Holmberg D.: Genome-wide linkage scan of common stroke in families from northern Sweden. //Stroke. 2007 Jan;38(l):34-40.

48. Nilsson-Ardnor S, Wiklund PG, Lindgren P, Nilsson AK, Janunger T, Escher SA, Hallbeck B, Stegmayr B, Asplund K, Holmberg D.: Linkage of ischemic stroke to the PDE4D region on 5q in a Swedish population. //Stroke. 2005 Aug;36(8): 1666-71.

49. Staton JM, Sayer MS, Hankey GJ, Attia J, Thakkinstian A, Yi Q, Cole VJ, Baker R, Eikelboom JW.: Association between phosphodiesterase 4D gene and ischaemic stroke. //J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2006 Sep;77(9): 1067-9.

50. Cowley AW Jr.: The genetic dissection of essential hypertension. //Nat Rev Genet. 2006 Nov;7(ll):829-40.

51. Naber CK, Siffert W.: Genetics of human arterial hypertension. //Minerva Med. 2004 Oct;95(5):347-56.

52. Puddu P, Cravero E, Puddu GM, Muscari A.: Genes and atherosclerosis: at the origin of the predisposition. //Int J Clin Pract. 2005 Apr;59(4):462-72.

53. Tuomisto TT, Binder BR, Yla-Herttuala S.: Genetics, genomics and proteomics in atherosclerosis research. //Ann Med. 2005;37(5):323-32.

54. Jannes J., Hamilton-Bruce M.A., Pilotto L., Smith B.J., Mullighan C.G., Bardy P.G., Koblar S.A.: Tissue plasminogen activator -7351C/T enhancer polymorphism is a risk factor for lacunar stroke.// Stroke. 2004 May;35(5): 1090-4.

55. Jood K, Ladenvall P, Tjarnlund-Wolf A, Ladenvall C, Andersson M, Nilsson S, Blomstrand C, Jern C.: Fibrinolytic gene polymorphism and ischemic stroke. //Stroke. 2005 0ct;36(10):2077-81.

56. Saito K, Nakayama T, Sato N, Morita A, Takahashi T, Soma M, Usami R.: Haplotypes of the plasminogen activator gene associated with ischemic stroke. // Thromb Haemost. 2006 Sep;96(3):331-6.

57. Martiskainen M, Pohjasvaara T, Mikkelsson J, Mantyla R, Kunnas T, Laippala P, Ilveskoski E, Kaste M, Karhunen P.J, Erkinjuntti T: Fibrinogen gene promoter -455 A allele as a risk factor for lacunar stroke.// Stroke. 2003 Apr;34(4):886-91.

58. Pongracz E, Tordai A, Csornai M, Nagy Z: Genetics of blood coagulation in young stroke patients.// Ideggyogy Sz. 2002 Mar 20;55(3-4):l 11-7.

59. Liu Y, Pan J, Wang S, Li X, Huang Y: beta-fibrinogen gene -455A/G polymorphism and plasma fibrinogen level in Chinese stroke patients.// Chin Med J (Engl). 2002 Feb; 115(2):214-6.

60. Blake G.J, Schmitz C, Lindpaintner K, Ridker P.M: Mutation in the promoter region of the beta-fibrinogen gene and the risk of future myocardial infarction, stroke and venous thrombosis.// Eur Heart J. 2001 Dec;22(24):2262-6.

61. Carter A.M, Catto A.J, Bamford J.M, Grant PJ: Gender-specific associations of the fibrinogen В beta 448 polymorphism, fibrinogen levels, and acute cerebrovascular disease.// Arterioscler Thromb Vase Biol. 1997 Mar;17(3):589-94.

62. Reiner A.P., Kumar P.N., Schwartz S.M., Longstreth W.T., Pearce R.M., Rosendaal F.R., Psaty B.M., Siscovick D.S.: Genetic variants of platelet glycoprotein receptors and risk of stroke in young women.// Stroke. 2000 Jul;31(7):1628-33.

63. Pongracz E., Tordai A., Csornai M., Nagy Z.: Platelet glycoprotein Ilb/IIIa (LeuPro 33) polymorphism in stroke patients.// Orv Hetil. 2001 Apr 15;142(15):781-5.

64. Slowik A., Dzicdzic Т., Turaj W., Pera J., Glodzik-Sobanska L., Szermer P., Malecki M.T., Figlewicz D.A., Szczudlik A.: A2 alelle of GpIIIa gene is a risk factor for stroke caused by large-vessel disease in males.// Stroke. 2004 Jul;35(7): 1589-93.

65. Meseguer E., Llamas P., Fernandez de Velasco J., Garcia A., Echevarria A., Ona R., Rabano J., Tomas J.F., Garcia de Yebenes J.: Prothrombotic factors in stroke.// Neurologia. 2004 Apr;19(3):99-105.

66. Aznar J., Mira Y., Vaya A., Corella D., Ferrando F., Villa P., Estelles A.: Factor V Leiden and prothrombin G20210A mutations in young adults with cryptogenic ischemic stroke.// Thromb Haemost. 2004 May;91(5):1031-4.

67. Halbmayer W.M., Haushofer A., Hermann K.M., Fischer M.: The 20210A allele of the prothrombin gene: a risk factor for juvenile stroke? Result of a pilot study.// Blood Coagul Fibrinolysis. 1998 Mar;9(2):209-10.

68. Albucher J.F., Guiraud-Chaumeil В., Chollet F., Cadroy Y., Sie P.: Frequency of resistance to activated protein С due to factor V mutation in young patients with ischemic stroke.// Stroke. 1996 Apr;27(4): 766-7.

69. Catto A., Carter A., Ireland H., Bayston T.A., Philippou H., Barrett J., Lane D.A., Grant P.J.: Factor V Leiden gene mutation and thrombin generation in relation to the development of acute stroke.// Arterioscler Thromb Vase Biol. 1995 Jun;15(6):783-5.

70. Petrovic D., Milanez Т., Kobal J., Bregar D., Potisk K.P., Peterlin В.: Prothrombotic gene polymorphisms and atherothrombotic cerebral infarction.// Acta Neurol Scand. 2003 Aug;108(2):109-13.

71. Elbaz A., Poirier O., Canaple S., Chedru F., Cambien F., Amarenco P.: The association between the Val34Leu polymorphism in the factor XIII gene and brain infarction.// Blood. 2000 Jan 15;95(2):586-91.

72. Catto A.J., Kohler H.P., Bannan S., Stickland M., Carter A., Grant P.J.: Factor XIII Val 34 Leu: a novel association with primary intracerebral hemorrhage.// Stroke. 1998 Apr;29(4):813-6.

73. Kain K, Bamford J, Bavington J, Young J, Catto AJ.: Factor XIII--circulating levels and Val34Leu polymorphism in relatives of South Asian patients with ischemic stroke. //J Thromb Haemost. 2005 Jan;3(l):171-3.

74. Catto A.J., Carter A.M., Stickland M., Bamford J.M., Davies J.A., Grant P.J: Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) 4G/5G promoter polymorphism and levels in subjects with cerebrovascular disease.// Thromb Haemost. 1997 Apr;77(4):730-4.

75. Zhan M., Zhou Y., Han Z: Plasminogen activator inhibitor-1 4G/5G gene polymorphism in patients with myocardial or cerebrovascular infarction in Tianjin, China.// Chin Med J (Engl). 2003 Nov;l 16(11):1707-10

76. Hoekstra Т., Geleijnse J.M., Kluft C., Giltay E.J., Kok F.J., Schouten E.G: 4G/4G genotype of PAI-1 gene is associated with reduced risk of stroke in elderly.// Stroke. 2003 Dec;34(12):2822-8.

77. Chen C.H., Eng H.L., Chang C.J., Tsai T.T., Lai M.L., Chen H.Y., Liu C.J., Lin T.M: 4G/5G promoter polymorphism of plasminogen activator inhibitor-1, lipid profiles, and ischemic stroke.// J Lab Clin Med. 2003 Aug;142(2):100-5.

78. Zhang C., Li J., Li L., Luo B: The study of PAI-1 promotor region gene polymorphism in cerebrovascular disease.// Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2001 Oct;18(5):383-7.

79. Cao W., Chen F., Teng L., Wang S., Fu S., Zhang G.: The relationship between apolipoprotein E gene polymorphism and coronary heart disease and arteriosclerotic cerebral infarction.// Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 1999 Aug;16(4):249-51.

80. Ferrucci L., Guralnik J.M., Pahor M., Harris Т., Corti M.C., Hyman B.T., Wallace R.B., Havlik R.J.: Apolipoprotein E epsilon 2 allele and risk of stroke in the older population.// Stroke. 1997 Dec;28(12):2410-6.

81. Kokubo Y., Chowdhury A.H., Date C., Yokoyama Т., Sobue H., Tanaka H.: Age-dependent association of apolipoprotein E genotypes with stroke subtypes in a Japanese rural population.// Stroke. 2000 Jun;31(6): 1299-306.

82. Morrison A.C., Ballantyne C.M., Bray M., Chambless L.E., Sharrett A.R., Boerwinkle E.: LPL polymorphism predicts stroke risk in men.// Genet Epidemiol. 2002 Mar;22(3):233-42.

83. Chowdhury A.H., Yokoyama Т., Kokubo Y., Zaman M.M., Haque A., Tanaka H.: Apolipoprotein E genetic polymorphism and stroke subtypes in a Bangladeshi hospital-based study.// J Epidemiol. 2001 May;l 1(3): 131-8.

84. Meschia JF, Brott TG, Brown RD Jr, Crook R, Worrall BB, Kissela B, Brown WM, Rich SS, Case LD, Evans EW, Hague S. et al.: Phosphodiesterase 4D and 5-lipoxygenase activating protein in ischemic stroke. //Ann Neurol. 2005 Sep;58(3):351-61.

85. Zhao SP, Tong QG, Xiao ZJ, Cheng YC, Zhou HN, Nie S.: The lipoprotein lipase Ser447Ter mutation and risk of stroke in the Chinese. //Clin Chim Acta. 2003 Apr;330(l-2):161-4.

86. Hattori H, Sonoda A, Sato H, Ito D, Tanahashi N, Murata M, Saito I, Watanabe K, Suzuki N.: G501C polymorphism of oxidized LDL receptor gene (OLR1) and ischemic stroke. //Brain Res. 2006 Nov 22;1121(l):246-9.

87. Voetsch В., Benke K.S., Damasceno B.P., Siqueira L.H., Loscalzo J.: Paraoxonase 192 Gln~>Arg polymorphism: an independent risk factor for nonfatal arterial ischemic stroke among young adults.// Stroke. 2002 Jun;33(6): 1459-64.

88. Ucar F., Sonmez M., Ovali E., Ozmenoglu M., Karti S.S., Yilmaz M., Pakdemir A.: MTHFR C677T polymorphism and its relation to ischemic stroke in the Black Sea Turkish population.// Am J Hematol. 2004 May;76(l):40-3.

89. Madonna P., de Stefano V., Coppola A., Cirillo F., Cerbone A.M., Orefice G., Di Minno G.: Hyperhomocysteinemia and other inherited prothrombotic conditions in young adults with a history of ischemic stroke.// Stroke. 2002 Jan;33(l):51-6.

90. Yingdong Z., Zhigang Z., Yang L.: Association of plasma homocysteine level and N5,N10-methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphism with cerebral infarction.// Chin Med Sci J. 2002 Dec;17(4):231-5.

91. Li C., Zhang C., Qiu S., Lu X., Zeng Y., Wu H., Chen W., Luo W., Liu J.: Polymoфhisms of ACE-1 and MTHFR genes and genetic susceptibility of ischemic stroke.// Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2002 Aug 10;82(15): 1046-9.

92. Zhang G., Dai C.: Gene polymorphisms of homocysteine metabolism-related enzymes in Chinese patients with occlusive coronary artery or cerebral vascular diseases.// Thromb Res. 2001 Nov 1; 104(3): 187-95.

93. Wu JM, Wang TG, Li YQ, Song XW, Liu YY, Yun HR, Zhong ZY, Zhou TH.: Genetic mutations of homocysteine metabolism related enzymes in patients with ischemic stroke. //Yi Chuan. 2004 May;26(3):298-302.

94. Fang L, Wu W, Wu YQ.: Relationship between polymorphisms of cystathionine beta-synthase gene and stroke //Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue. 2004 Mar; 16(3): 161-4.

95. Hassan A., Gormley K., O'Sullivan M., Knight J., Sham P., Vallance P., Bamford J., Markus H.: Endothelial nitric oxide gene haplotypes and risk of cerebral small-vessel disease.// Stroke. 2004 Mar;35(3):654-9.

96. Yahashi Y., Kario K., Shimada K., Matsuo M.: The 27-bp repeat polymorphism in intron 4 of the endothelial cell nitric oxide synthase gene and ischemic stroke in a Japanese population.// Blood Coagul Fibrinolysis. 1998 Jul;9(5):405-9.

97. Markus H.S., Ruigrok Y., Ali N., Powell J.F.: Endothelial nitric oxide synthase exon 7 polymorphism, ischemic cerebrovascular disease, and carotid atheroma.// Stroke. 1998 Sep;29(9):1908-11.

98. MacLeod M.J., Dahiyat M.T., Cumming A., Meiklejohn D., Shaw D., St Clair D.: No association between Glu/Asp polymorphism of NOS3 gene and ischemic stroke.// Neurology. 1999 Jul 22;53(2):418-20.

99. Zhang J.H., Kohara К., Yamamoto Y., Nakura J., Tabara Y., Fujisawa M., Katagi R., Miki Т.: Genetic predisposition to neurological symptoms in lacunar infarction.// Cerebrovasc Dis. 2004;17(4):273-9.

100. Wei X., Wang G., Jiang C., Li D., Zhao G.: Association between hypertensive cerebrovascular stroke and renin-angiotensin system gene polymorphism from Chinese cohort in Shanghai.// Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2000 Aug;17(4):256-8.

101. Slowik A., Dziedzic Т., Turaj W., Pera J., Glodzik-Sobanska L., Szermer P., Malecki M.T., Figlewicz D.A., Szczudlik A.: A2 alelle of GpIIIa gene is a risk factor for stroke caused by large-vessel disease in males.// Stroke. 2004 Jul;35(7): 1589-93.

102. Gormley К, Bevan S, Markus HS.: Polymorphisms in genes of the renin-angiotensin system and cerebral small vessel disease. //Cerebrovasc Dis. 2007;23(2-3): 148-55.

103. Slowik A., Turaj W., Dziedzic Т., Haefele A., Pera J., Malecki M.T., Glodzik-Sobanska L., Szermer P., Figlewicz D.A., Szczudlik A.: DD genotype of ACE gene is a risk factor for intracerebral hemorrhage.//Neurology. 2004 Jul 27;63(2):359-61.

104. Frossard P.M., Malloy M.J., Lestringant G.G., Kane J.P.: Haplotypes of the human renin gene associated with essential hypertension and stroke.// Hum Hypertens. 2001 Jan;15(l):49-55.

105. Yuan X.D., Hou Q.X., Wu S.L., Pei H.Z., Li H.F.: A cross-sectional study on angiotensin-converting enzyme and angiotensin II type I receptor gene polymorphism and cerebral infarction.// Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 2003 Sep;24(9):822-6.

106. Zhong Y., Ha D.: Influence of angiotensin II type 1 receptor gene polymorphism on patients with essential hypertension complicated by brain infarction.// Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2002 Jun;19(3):201-4.

107. Lai J, Zhou D, Xia S, Shang Y, Zhu J, Pan J, Hua B, Zhu Y, Cui L.: Association of interleukin-1 gene cluster polymorphisms with ischemic stroke in a Chinese population. //Neurol India. 2006 Dec;54(4):366-9.

108. Yamada Y, Metoki N, Yoshida H, Satoh K, Ichihara S, Kato K, Kameyama T, Yokoi K, Matsuo H, Segawa T, Watanabe S, Nozawa Y.: Genetic risk for ischemic and hemorrhagic stroke. //Arterioscler Thromb Vase Biol. 2006 Aug;26(8): 1920-5.

109. Т.В.Тупицына, П.А.Сломинский, М.И.Шадрина, И.М.Шетова, В.И.Скворцова, С.А.Лимборская: Ассоциация полиморфизма IVS9-675C>A гена HIF-1 alpha, с развитием острого атеротромботического инсульта в московской популяции. //Генетика, Том 42, №6, 2006

110. Flex A, Gaetani Е, Papaleo Р, Straface G, Proia AS, Pecorini G, Tondi P, Pola P, Pola R.: Proinflammatory genetic profiles in subjects with history of ischemic stroke. //Stroke. 2004 Oct;35(10):2270-5.

111. Dziedzic T, Slowik A, Pera J, Szczudlik A.: Interleukin 1 beta polymorphism (-511) and risk of stroke due to small vessel disease. //Cerebrovasc Dis. 2005;20(5):299-303.

112. Revilla M., Obach V., Cervera A., Davalos A., Castillo J., Chamorro A.: A -174G/C polymorphism of the interleukin-6 gene in patients with lacunar infarction.// Neurosci Lett. 2002 May 10;324(l):29-32.

113. Hassan A., Ali N., Dong Y., Carter N.D., Markus H.S.: Atrial natriuretic peptide gene G664A polymorphism and the risk of ischemic cerebrovascular disease.// Neurology. 2001 Nov 13;57(9): 1726-8.

114. Kato N., Ikeda K., Nabika Т., Morita H., Sugiyama Т., Gotoda Т., Kurihara H., Kobayashi S., Yazaki Y., Yamori Y.: Evaluation of the atrial natriuretic peptide gene in stroke.// Atherosclerosis. 2002 Aug;163(2):279-86.

115. Rubattu S., Stanzione R., Di Angelantonio E., Zanda В., Evangelista A., Tarasi D., Gigante В., Pirisi A., Brunetti E., Volpe M.: Atrial natriuretic peptide gene polymorphisms and risk of ischemic stroke in humans.// Stroke. 2004 Apr;35(4):814-8.

116. Ferrari J, Rieger S, Endler G, Greisenegger S, Funk M, Scholze T, Lang W, Lalouschek W, Mannhalter C.: The Thr715Pro polymorphism of the P-selectin gene is not associated with ischemic stroke risk. //Stroke. 2007 Feb;38(2):395-7.

117. Morita A, Nakayama T, Soma M.: Association study between C-reactive protein genes and ischemic stroke in Japanese subjects. //Am J Hypertens. 2006 Jun;19(6):593-600.

118. Zhang L, Zhang H, Sun K, Song Y, Hui R, Huang X.: The 825C/T polymorphism of G-protein beta3 subunit gene and risk of ischaemic stroke. //J Hum Hypertens. 2005 Sep;19(9):709-14.

119. Um J.Y., Kim H.M.: Tumor necrosis factor alpha gene polymorphism is associated with cerebral infarction.// Brain Res Mol Brain Res. 2004 Mar 17;122(1):99-102.

120. Rubattu S, Speranza R, Ferrari M, Evangelista A, Beccia M, Stanzione R, Assenza GE, Volpe M, Rasura M.: A role of TNF-alpha gene variant on juvenile ischemic stroke: a case-control study. //Eur J Neurol. 2005 Dec;12(12):989-93.

121. Lohmussaar E, Gschwendtner A, Mueller JC, Org T, Wichmann E, Hamann G, Meitinger T, Dichgans M.: ALOX5AP gene and the PDE4D gene in a central European population of stroke patients. //Stroke. 2005 Apr;36(4):731-6.

122. Bevan S, Porteous L, Sitzer M, Markus HS.: Phosphodiesterase 4D gene, ischemic stroke, and asymptomatic carotid atherosclerosis. //Stroke. 2005 May;36(5):949-53.

123. Nakayama T, Asai S, Sato N, Soma M.: Genotype and haplotype association study of the STRK1 region on 5ql2 among Japanese: a case-control study. //Stroke. 2006 Jan;37(l):69-76.

124. Lanca V., Alcantara P., Braz-Nogueira J., Bicho M.P.: Cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) T6325C polymorphism might modulate essential hypertension-associated stroke risk.// Rev Port Cardiol. 2004 Mar;23(3):343-55.

125. Jerrard-Dunne P, Cloud G, Hassan A, Markus HS.: Evaluating the genetic component of ischemic stroke subtypes: a family history study. //Stroke. 2003 Jun;34(6): 1364-9.

126. Brass LM, Isaacsohn JL, Merikangas KR, Robinette CD.: A study of twins and stroke. //Stroke. 1992 Feb;23(2):221-3.

127. Zhang K, Calabrese P, Nordborg M, Sun F.: Haplotype block structure and its applications to association studies: power and study designs. //Am J Hum Genet. 2002 Dec;71(6): 1386-94.

128. Juul K., Tybjaerg-Hansen A., Steffensen R., Kofoed S., Jensen G., Nordestgaard B.G: Factor V Leiden: The Copenhagen City Heart Study and 2 meta-analyses.// Blood. 2002 Jul 1;100(1):3-10.

129. Weih M., Junge-Hulsing J., Mehraein S., Ziemer S., Einhaupl K.M: Hereditary thrombophilia with ischemic stroke and sinus thrombosis. Diagnosis, therapy and metaanalysis.// Nervenarzt. 2000 Dec;71(12):936-45.

130. Casas JP, Hingorani AD, Bautista LE, Sharma P.: Meta-analysis of genetic studies in ischemic stroke: thirty-two genes involving approximately 18,000 cases and 58,000 controls. //Arch Neurol. 2004 Nov;61(l 1): 1652-61.

131. Kelly P.J., Rosand J., Kistler J.P., Shih V.E., Silveira S., Plomaritoglou A., Furie K.L:Homocysteine, MTHFR 677C~>T polymorphism, and risk of ischemic stroke: results of a meta-analysis.// Neurology. 2002 Aug 27;59(4):529-36.

132. Cronin S, Furie KL, Kelly PJ.: Dose-related association of MTHFR 677T allele with risk of ischemic stroke: evidence from a cumulative meta-analysis. //Stroke. 2005 Jul;36(7):1581-7.

133. Banerjee I, Gupta V, Ganesh S.: Association of gene polymorphism with genetic susceptibility to stroke in Asian populations: a meta-analysis. //J Hum Genet. 2007;52(3):205-19.

134. McCarron M.O., Delong D., Alberts M.J: APOE genotype as a risk factor for ischemic cerebrovascular disease: a meta-analysis.//Neurology. 1999 Oct 12;53(6):1308-11.

135. Sharma P: Meta-analysis of the ACE gene in ischaemic stroke.// J Neurol Neurosurg Psychiatry. 1998 Feb;64(2):227-30.

136. Szolnoki Z, Somogyvari F, Szabo M, Kondacs A, Fodor L, Melegh В.: Interactions between the MTHFR C677T and MTHFR A1298C mutations in ischaemic stroke //Ideggyogy Sz. 2006 Mar 20;59(3-4): 107-12.

137. Thornton-Wells ТА, Moore JH, Haines JL.: Genetics, statistics and human disease: analytical retooling for complexity. //Trends Genet. 2004 Dec;20(12):640-7.

138. European Society of Hypertension-European Society of Cardiology Guidelines Committee.: 2003 European Society of Hypertension-European Society of Cardiology guidelines for the management of arterial hypertension. //J Hypertens. 2003 Jun;21(6):1011-53.

139. J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis: Molecular Cloning, ed Nolan, C. Cold Spring Harbor Press, 1989, 9.17-9.19.

140. Hu C-J., Sung S-M., Liu H-C., Hsu W-C., Lee L-S., Lee C-C., Tsai C-H., Chang J-G.: Genetic risk factors of sporadic Alzheimer's disease among Chinese in Taiwan.// Journal of the Neurological Sciences, 2000, 181: 127-131.

141. Hixson J.E., Vernier D.T.:Restriction isotyping of human apolipoprotein E by gene amplification and cleavage with Hhal.// J. Lipid Res. 1990, 31: 545-548.

142. Shimo-Nakanishi Y, Urabe T, Hattori N, Watanabe Y, Nagao T, Yokochi M, Hamamoto M, Mizuno Y.: Polymorphism of the lipoprotein lipase gene and risk of atherothrombotic cerebral infarction in the Japanese. //Stroke. 2001 Jul;32(7):1481-6.

143. Komiya I, Yamada T, Takara M, Asawa T, Shimabukuro M, Nishimori T, Takasu N.: Lys(173)Arg and -344T/C variants of CYP11B2 in Japanese patients with low-renin hypertension. //Hypertension. 2000 Mar;35(3):699-703.

144. Favorov AV, Andreewski TV, Sudomoina MA, Favorova 00, Parmigiani G, Ochs MF.: A Markov chain Monte Carlo technique for identification of combinations of allelic variants underlying complex diseases in humans. //Genetics. 2005 Dec; 171(4):2113-21.

145. Svejgaard A., Ryder L.P.: HLA and disease associations: detecting the strongest association. // Tissue Antigens 1994: 43: 18-27.

146. Khouri M.J., Beaty Т.Н., Cohen B.H.: Fundamentals of genetic epidemiology.// New York, Oxford: Oxford University Press, 1993, P. 149-158.

147. Гланц С.: Медико-биологическая статистика.// М., "Практика", 1999, стр. 105-107.

148. Chung D.W., Harris J.E., Davie E.W.: Nucleotide sequences of the three genes coding for human fibrinogen. In: Lui CY, Chien C, eds.// Fibrinogen, Thrombosis, Coagulation, and Fibrinolysis. New York, NY: Plenum Press; 1990:39-47.

149. Roy S.N., Mukhopadhyay G., Redman C.M.: Regulation of fibrinogen assembly: transfection of HepG2 cells with Bb cDNA specifically enhances synthesis of the three component chains of fibrinogen.// J Biol Chem. 1990;265:6389-6393.

150. Standeven KF, Grant PJ, Carter AM, Scheiner T, Weisel JW, Ariens RA.: Functional analysis of the fibrinogen Aalpha Thr312Ala polymorphism: effects on fibrin structure and function.// Circulation. 2003 May 13;107(18):2326-30.

151. Voetsch B, Loscalzo J.: Genetic determinants of arterial thrombosis. //Arterioscler Thromb Vase Biol. 2004 Feb;24(2):216-29.

152. Gong W.X., Cai Y.M., Chen H., Ma S.G.: Preliminary study on single nucleotide polymorphisms and linkage disequilibrium in promoter region of fibrinogen В beta gene.// Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 2003 Dec;20(6):512-6.

153. Nickerson D.A., Taylor S.L., Fullerton S.M., Weiss K.M., Clark A.G., Stengard J.H., Salomaa V., Boerwinkle E., Sing C.F.: Sequence diversity and large-scale typing of SNPs in the human apolipoprotein E gene.// Genome Res. 2000, 10, 1532-1545.

154. Brouwer D.A., van Doormaal J.J., Muskiet F.A.: Clinical chemistry of common apolipoprotein E isoforms.// J Chromatogr В Biomed Appl. 1996, Mar 29;678(1):23-41

155. Bullido M.J., Valdivieso F.: Apolipoprotein E gene promoter polymorphisms in Alzheimer's disease.//Microsc. Res. Techn. 2000, 50, 261-267.

156. Wion KL, Kirchgessner TG, Lusis AJ, Schotz MC, Lawn RM.: Human lipoprotein lipase complementary DNA sequence.// Science. 1987 Mar 27;235(4796): 1638-41.

157. Goldberg IJ.: Lipoprotein lipase and lipolysis: central roles in lipoprotein metabolism and atherogenesis.// J Lipid Res. 1996 Apr;37(4):693-707.

158. Fisher RM, Humphries SE, Talmud PJ.: Common variation in the lipoprotein lipase gene: effects on plasma lipids and risk of atherosclerosis.// Atherosclerosis. 1997 Dec; 135(2): 145-59.

159. Hollenberg NK.: Implications of species difference for clinical investigation: studies on the renin-angiotensin system.// Hypertension. 2000 Jan;35(l Pt 2): 150-4.

160. Д.А.Чудакова, Л.О.Минушкина, Д.А.Затейщиков, B.B.Носиков: Изучение ассоциации полиморфного маркера G(-455)A гена FGB с ишемической болезнью сердца. //Генетика. 2004; 40(10): 1406-9.

161. Zee RY, Cook NR, Cheng S, Erlich HA, Lindpaintner K, Ridker PM.: Multi-locus candidate gene polymorphisms and risk of myocardial infarction: a population-based, prospective genetic analysis. //J Thromb Haemost. 2006 Feb;4(2):341-8.

162. Liu Y, Saha N, Heng CK, Hong S, Low PS.: Fibrinogen genotypes (alpha and beta) are associated with plasma fibrinogen levels in Chinese. Hi Med Genet. 2001 Sep;38(9):E31.

163. Kimura M., Matsushita S., Arai H., Matsui Т., Yuzuriha Т., Higuchi S.: No evidence of association between apolipoprotein E gene regulatory region polymorphism and Alzheimer's disease in Japanese.// J Neural Transm. 2000; 107(12): 1449-56.

164. Lam CY, Fan BJ, Wang DY, Tam PO, Yung Tham CC, Leung DY, Ping Fan DS, Chiu Lam DS, Pang СР.: Association of apolipoprotein E polymorphisms with normal tension glaucoma in a Chinese population. //J Glaucoma. 2006 Jun;15(3):218-22.

165. Мустафина O.E., Туктарова И.А., Бикмеева A.M., Насибуллин T.P., Хуснутдинова Э.К.: Исследование полиморфизма гена аполипопротеина Е в популяциях волго-уральского региона.// Генетика, 2001, том 37, №4, с. 558-562.

166. Breslow J.L.: Apolipoprotein genetic variation and human disease. //Physiol Rev. 1988 Jan;68(l):85-132.

167. Stocks J, Thorn JA, Galton DJ.: Lipoprotein lipase genotypes for a common premature termination codon mutation detected by PCR-mediated site-directed mutagenesis and restriction digestion. //J Lipid Res. 1992 Jun;33(6):853-7.

168. Sugimoto М, Furuta Т, Shirai N, Ikuma М, Sugimura Н, Hishida A.: Influences of chymase and angiotensin I-converting enzyme gene polymorphisms on gastric cancer risks in Japan. //Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2006 Oct; 15(10): 1929-34.

169. Arpa A, del Ser T, Goda G, Barba R, Bornstein В.: Apolipoprotein E, angiotensin-converting enzyme and alpha-1-antichymotrypsin genotypes are not associated with post-stroke dementia. // J Neurol Sci. 2003 Jun 15;210(l-2):77-82.

170. Bu G., Maksymovitch E.A., Geuze H. Schwartz A.L.: Subcellular localization and endocytic function of low density lipoprotein receptor-related protein in human glioblastoma cells.// J. Biol. Chem. 1994, 269, 29874-29882.

171. Nathan B.P., Bellosta S., Sanan D.A., Weisgraber K.H., Mahley R.W., Pitas R.: E. Differential effects of apolipoproteins E3 and E4 on neuronal growth in vitro.// Science 1994, 264,850-852.

172. Davignon J., Gregg R.E., Sing C.F.: Apolipoprotein E polymorphism and atherosclerosis.// Atherosclerosis, 1988,8:1-21.

173. Artiga M.J., Bullido M.J., Sastre I., Recuero M., Garcia M.A., Aldudo J., Vazquez J., Valdivieso F.: Allelic polymorphisms in the transcriptional regulatory region of apolipoprotein E gene.// FEBS Lett. 1998,421, 105-108.

174. Otarod JK, Goldberg 1J.: Lipoprotein lipase and its role in regulation of plasma lipoproteins and cardiac risk. //Curr Atheroscler Rep. 2004 Sep;6(5):335-42.

175. Saxena U, Ferguson E, Auerbach В J, Bisgaier CL.: Lipoprotein lipase facilitates very low density lipoprotein binding to the subendothelial cell matrix. //Biochem Biophys Res Commun. 1993 Jul 30;194(2):769-74.

176. Rip J, Nierman MC, Ross CJ, Jukema JW, Hayden MR, Kastelein JJ, Stroes ES, Kuivenhoven JA.: Lipoprotein lipase S447X: a naturally occurring gain-of-function mutation. // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2006 Jun;26(6): 1236-45.

177. Gagne SE, Larson MG, Pimstone SN, Schaefer EJ, Kastelein JJ, Wilson PW, Ordovas JM, Hayden MR.: A common truncation variant of lipoprotein lipase (Ser447X) confers protection

178. Kamath S, Lip GY.: Fibrinogen: biochemistry, epidemiology and determinants. //QJM. 2003 0ct;96(10):711-29.

179. Gao X, Yang H, ZhiPing Т.: Association studies of genetic polymorphism, environmental factors and their interaction in ischemic stroke. //Neurosci Lett. 2006 May 8;398(3): 172-7.

180. Baudin В.: New aspects on angiotensin-converting enzyme: from gene to disease. //Clin Chem Lab Med. 2002 Mar;40(3):256-65.

181. Sayed-Tabatabaei FA, Oostra BA, Isaacs A, van Duijn CM, Witteman JC.: ACE polymorphisms. //Circ Res. 2006 May 12;98(9):1123-33.

182. Liu Н.С., Hong С.J., Wang S.J., Fuh J.L., Wang P.N., Shyu H.Y., Teng E.L.: ApoE genotype in relation to AD and cholesterol: a study of 2,326 Chinese adults.// Neurology. 1999 Sep 22;53(5):962-6.

183. Altenburg M, Johnson L, Wilder J, Maeda N.: Apolipoprotein E4 in macrophages enhances atherogenesis in a low density lipoprotein receptor-dependent manner. //J Biol Chem. 2007 Mar 16;282(ll):7817-24.

184. Potter DD, Sobey CG, Tompkins PK, Rossen JD, Heistad DD.: Evidence that macrophages in atherosclerotic lesions contain angiotensin II. //Circulation. 1998 Aug 25;98(8):800-7.

Информация о работе

Парфенов, Михаил Григорьевич
кандидата биологических наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.03

Диссертация

Участие генов, кодирующих компоненты систем гемостаза, липидного метаболизма и ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, в формировании предрасположенности к ишемическому инсульту у русских и якутов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы