Полиморфные варианты генома человека и риск развития острого инсульта

Бондаренко, Елена Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Полиморфные варианты генома человека и риск развития острого инсульта
ВАК РФ 03.01.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Полиморфные варианты генома человека и риск развития острого инсульта"

На правах рукописи

005002196

БОНДАРЕНКО Елена Александровна

ПОЛИМОРФНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОМА ЧЕЛОВЕКА И РИСК РАЗВИТИЯ ОСТРОГО ИНСУЛЬТА

03.01.03 - Молекулярная биология

1 7 НОЯ 2011

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2011

005002196

Работа выполнена в Отделе молекулярных основ генетики человека Учреждения Российской академии наук Института молекулярной генетики РАН

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Петр Андреевич Сломинский

Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Валерий Вячеславович Носиков

ФГУП «ГосНИИ генетика»

кандидат биологических наук Генинг Леонид Владимирович

Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН

Ведущая организация: Учреждение Российской академии

медицинских наук Медико-генетический научный центр РАМН

Защита диссертации состоится «£» 5р& 2011 г. в часов

на заседании Диссертационного совета Д.217.013.01 при ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» по адресу: 117545, Россия, Москва, 1-ый Дорожный проезд, д.1. Тел: (495) 315-3747.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов». Автореферат разослан «3» 2011

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук

Т. Л. Воюшина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Сосудистые заболевания головного мозга - актуальная медицинская и социальная проблема На сегодняшний день 9 миллионов человек в мире страдают цереброваскулярными болезнями. Основное место среди них занимают инсульты, каждый год поражающие около б миллионов человек и уносящие 4,6 миллиона жизней. Смертность от церебральных заболеваний в экономически развитых странах составляет 11-12% и уступает лишь смертности от заболеваний сердца и опухолей всех локализаций.

В последние годы отмечается рост распространенности заболеваний острыми нарушениями мозгового кровообращения. Ежегодно в России переносят инсульты более 400000 - 450000 человек. При этом наблюдается «омоложение» инсульта с увеличением его распространенности среди лиц трудоспособного возраста (до 64 лет). Инсульт является лидирующей причиной инвалидизации населения. По данным Национального регистра, 31% пациентов, перенесших инсульт, требуется постоянный уход, а 20% не могут самостоятельно ходить. Лишь около 20% выживших больных способны вернуться к прежней работе.

Многочисленные эпидемиологические исследования доказали важность роли генетической составляющей в частоте развития сосудистых заболеваний головного мозга. Инсульт, за исключением относительно редко встречающихся моногенных форм, при которых структурные особенности определенных генов являются определяющим фактором развития заболевания, - это мультифакторное заболевание, в формировании которого имеют значение как внешние (средовые) факторы, так и индивидуальные генетические особенности. Сложность патогенеза создает большие трудности при изучении природы этого заболевания.

В настоящее время в изучении генетической предрасположенности инсульта, равно как и других мультифакторных заболеваний, используются два основных подхода: анализ генетических ассоциаций с полиморфными вариантами кандидатных генов заболевания и полногеномный ассоциативный анализ.

Первоначальные исследования инсульта с применением анализа генетических ассоциаций были сфокусированы на отдельных генах-кандидатах, которые, как предполагалось, вовлечены в биологические процессы, нарушения которых могли приводшъ к развитию заболевания. Исследовавшиеся гены-кандидаты были ассоциированы, например, с такими патологиями как атеросклероз, тромбозы и

артериальная гипертешия. Статистически достоверные ассоциации с различными типами инсульта были показаны для одноиуклеотидных полиморфизмов (ОНП) с.169Ю>А в гене фактора свертывания крови V (Р5), с.2021СЮ>А в гене протромбина (Е2), с.675_67баеПшО в гене, кодирующем ингибитор активатора плазминогена-1 (РА1-1) и полиморфизмов в гене, кодирующем ОР1Ьа субъединицу тромбошггарного рецептора (йР1ВА). Белковые продукты этих генов вовлечены в систему гемостаза. Ассоциации с риском развития острого инсульта были показаны и для инсерционно-делеционного (1/В) полиморфизма в гене ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ). Однако полученные данные не дают однозначного ответа на вопрос об их патогенетической роли в развитии инсульта. Для изучения вклада полиморфизмов генов в риск развития заболевания необходимо учитывать и этническую компоненту. В российской популяции полиморфизмы с.202100>Л гена Р2, с.169Ю>А гена /-'5, (-5)Т>С Когак гена ОРША, с.675_676(1еНп80 гена РЛ1-1 изучены достаточно слабо.

Применение новейших технологий полногеномного анализа сцепления в семьях позволило выявить два ранее неизученных гена, показавших высокую ассоциацию с риском развития ишемического инсульта в исландской популяции -фосфодиэстеразы 40 (РОЕ4й), и АЮХ5АР, кодирующий активатор 5-липоксигеназы. В последние несколько лет полногеномный ассоциативный анализ на выборках большого объема из разных этнических групп выявил еще 11 новых локусов, которые могут быть вовлечены в патогенез острого и, в частности, ишемического инсультов.

Проведение работ по анализу полиморфизмов генов, которые могут быть вовлечены в патогенез инсульта, позволит с одной стороны лучше понять причины и механизмы развития этого заболевания, а с другой - разработать молекулярно-генетические тесты для определения риска развития острого инсульта и его ранней диагностики. Возможность проведения доклинической диагностики этого заболевания позволит начать разработку принципов и подходов профилактического лечения.

Цель и задачи исследования

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1. Проведение анализа полиморфных ДНК-маркеров в кандидатных генах острого инсульта Е2, Е5, СР1ВА, АСЕ, АЮХ5АР и РВЕ40 у пациентов с ишемическим и геморрагическим инсультом.

2. Поиск новых ДНК-маркеров острого инсульта с использованием метода полногеномного ассоциативного анализа.

Научная новизна и практическая значимость работы

Впервые в диссертациошюй работе определены частоты полиморфных вариантов генов АЮХ5АР (50135114, 5013532, 5013889, 5013525) и РОЕ4В (5ИР41, 5ИР87, 5№45) у больных острым, ишсмичсским и геморрагическим инсультом и здоровых индивидов, принадлежащих к русскому этносу.

Проведен анализ ассоциаций полиморфных локусов генов Р2,0Р1ВЛ, РА1-1, АСЕ с риском развития острого инсульта и его подтипов - ишемического и геморрагического в российской популяции. С помощью программы «ОМП1Ъ> исследованы межгенные взаимодействия у больных острым, ишемическим и геморрагическим инсультом и здоровых индивидов, принадлежащих к русскому этносу.

Выявлены генетические маркеры риска развития заболевания у индивидов с острым, ишемическим и геморрагическим инсультом, а также изучена их взаимосвязь с этими заболеваниями с учетом пола в российской популяции.

Впервые проведен корреляционный анализ между полиморфизмами с.202100>А гена Ь'2, с.169Ш>А гена Р5, (-5)Т>С Когак гена СР1ВА, с.675_676<1еНп50 гена РАМ, 11417_11704ае1287 гена АСЕ, 5МР41, Б№87, 8№45 гена Р1ШО, и 50135114, 5013532, 5013589, 5013525 гена АЮХ5АР и клиническими характеристиками острого инсульта

Впервые с помощью технологии ДНК-микрочипов проведен полногеномный ассоциативный анализ (0\УА5) острого ишемического инсульта в российской популяции и выявлены новые ДНК-маркеры этого типа инсульта.

Результаты работы вносят вклад в общее представление о генетических основах предрасположенности к инсульту. Полученные данные позволяют оценить роль ряда генетических систем в развитии острого инсульта и его подтипов - ишемического и геморрагического, и являются основанием для разработки молекулярно-генетических методов определения лиц с повышенным риском развития данных заболеваний. Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфных участков генов-кандидатов инсульта могут использоваться для медико-генетического консультирования с целью раннего выявления лиц с высоким риском развития заболевания и проведения донозологической профилактики. Учитывая результаты генотипирования больных острым инсультом и его подтипами, можно выделить

группы пациентов с более тяжелым течением заболевания и дифференцировать у них лечебно-профилактические мероприятия, что важно для прогностических целей.

Публикации

Основные результаты исследования опубликованы в 10 работах, включая 6 статей в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ для защиты диссертаций.

Апробация диссертации

Результаты, полученные в данной работе, были представлены на III Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины» (1-4 октября 2009 г., Ростов-на-Дону, Россия), VI Съезде Российского общества медицинских генетиков (14-18 мая 2010г., Ростов-на-Дону, Россия), на конференциях Европейского Общества Генетики человека (ESHO) (28-31мая 2011г., Амстердам, Нидерланды) и «The biology of genomes» (10-14 мая 2011г., Cold Spring Harbor, New York). Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседании Ученого совета ИМГ РАН 17 октября 2011 г. и на заседании секции «Молекулярная биология» Ученого совета ФГУП «ГосНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов» 26 октября 2011 г.

Cmvicrvpa и объем диссертации

Диссертация включает: введение; обзор литературы; материалы и методы исследования; результаты и обсуждение; заключение; выводы; библиографический указатель. Список литературы состоит из 304 источников, среди которых 19 источников отечественной и 285 источников зарубежной литерагуры. Материалы диссертации изложены на /¿¿страницах машинописного текста, содержат iff таблицу и if рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В настоящей работе был проведен анализ группы больных острым инсультом, славян из российской популяции, в остром периоде церебрального инсульта, поступивших в неврологическую клинику ГКБ №31 кафедры фундаментальной и клинической неврологии ГОУ ВПО Российского государственного медицинского университета Росздрава за период 2007-2010 гг., соответствовавших критериям включения в исследование (N=1234). Возраст больных составлял от 18 до 98 лет (средний возраст 67,6 ± 12,3). В исследование вошло 611 женщин и 623 мужчины. Диапкс острый инсульт был поставлен на основании анализа совокупности данных

анамнеза, физикального обследования, исследовании соматического и неврологического статусов, биохимических показателей крови и клинико-инструмснтальной диагностики. В качестве контроля использовалась группа славян из российской популяции в количестве 717 человек без инсультов в анамнезе. Возраст составлял от 20 до 88 лет (средний возраст 46,3 ± 11,4). В данной группе 46% мужчин и 54% женщин. Все образцы крови были взяты с информированного согласия исследуемых лиц.

Для типирования полиморфных вариантов изучаемых генов-кандидатов острого инсульта и проведения полногеномного ассоциативного анализа были использованы препараты ДНК, полученные из цельной крови с использованием набора «АхуРгер Blood GDNA Miniprep Kit» («Axygen», США) согласно рекомендациям производителя. Выделение геномной ДНК из лейкоцитов венозной крови образцов контрольной группы проводилось стандартным методом фенол-хлороформной экстракции (Sambrook et al., 1989).

Анализ полиморфизмов c.20210G>A гена F2 (rs 1799963), c,1691G>A гена F5 (rs6025), (-5)Т>С Kozak гена GP1BA (rs2243093), c.675_676delinsG гена PAI-1 (rs34857375), SG13S114 (rsl0507391), SG13S32 (rs9551963), SG13S89 (rs4769874), SG13S25 (rsl7222814) гена ALOX5AP и SNP87 (rs2910829), SNP41 (rsl52312), SNP45 (rsl2188950) гена PDE4D проводили методом ПЦР в реальном времени с использованием TaqMan зондов. Праймеры и зонды для анализа однонуклеотидных полиморфизмов (ОНП) генов F2, F5, GP1BA, SG13S25 гена ALOX5AP, SNP45 гена PDE4D подбирали с помощью программы Vector NTI Suite 9 (Invitrogen, Carlsbad, CA, США). Система «праймеры-зонд» для полиморфизма c.675_676delinsG гена PAI-1 была опубликована ранее (Wiklund et al., 2005), SG13S32 и SG13S114 гена ALOX5AP (Kajimoto et al., 2005), SG13S89 гена ALOX5AP (Hsieh и др., 2008) и SNP41, SNP87 гена PDE4D (Hsieh et al., 2009). Для амплификации 16 интрона гена АПФ, содержащего делецию 256 п.н., использовали ранее опубликованные праймеры (Rigat et al., 1992).

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ STATISTICA (data analysis software system, version 6.0. www.statsoft.com>. Для расчета отношения шансов применяли программное обеспечение GraphPad InStat (США) (httn://www.graphpad. сошЛ. Для расчета соответствия распределения генотипов в популяциопной выборке закону Харди-Вайнберга использовали программное обеспечение Hardy-Weinberg equilibrium calculator (http://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.shtml). Анализ межгенных

взаимодействий проводился с помощью программы GMDR (Generalized Multifactor-Dimensionality Reduction) (http://sourceforge.net/proiects/gmdr/).

Для проведения полногеномного ассоциативного анализа были сформированы две выборки: выборка больных острым инсультом (N=1290) и контрольная выборка, состоящая из независимых выборок из Ивановской, Владимирской, Смоленской, Курской и Тверской областей (N=740). Полногеномный анализ проводился ЗЛО «Геноаналитика», Россия с использованием ДНК-микрочипов «HumanCytoSNP-12 v.2» ("Illumina", США). Статистическая обработка результатов полногеномного ассоциативного анализа проводилась с помощью программного обеспечения «Genome Studio» "Illumina", США, «SNP & Variation Suite v.7», "Golden Helix", США.

Результаты исследования

1.1 Анализ генов-кандидатов острого инсульта.

1.1.1 Анализ ОНП в генах, кодирующих белки системы свертывания крови и гемостаза

Было изучено 4 полиморфных локуса генов, белковые продукты которых вовлечены в систему гемостаза - c.20210G>A гена F2, с.169Ю>А гена F5, (-5)Т>С Kozak гена GP1BA, c.675_676delinsG гена PAI-1. Частоты генотипов и аллелей сравнивали между группами больных острым (N=1232) ишемическим (N=1009) геморрагическим (N=222) инсультом и контрольной выборкой (N=717), а также между выборками больных острым инсультом и контрольной группой, дифференцированными по полу. Достоверным считали уровень значимости р<0.05.

Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов F2, F5, GP1BA и РА1-1 не выявил достоверных различий между группами больных острым инсультом, его подтипами (ишемическим и геморрагическим) и контрольной группой. Для ОНП c.20210G>A гена F2, c.l691G>A гена F5 и (-5)Т>С Kozak гена GPlBa не было показано достоверных отличий в частотах распространения генотипов и аллелей между больными острым инсультом и соответствующими контрольными группами мужчин и женщин. Только для ОНП c.675_676delinsG гена РА 1-1 в группе женщин с острым инсультом в анамнезе наблюдается статистически достоверное увеличение частоты аллеля 5G по сравнению с соответствующей ей по полу контрольной группой (р=0.04, ОШ=1.2; 95%ДИ 1.0-1.5). Таким образом, полиморфизмы c.20210G>A гена F2, c.l691G>A гена F5 и (-5)Т>С Kozak гена GPlBa не влияют на риск развития острого инсульта, а также его подтипов - ишемического и геморрагического в российской популяции. Данные полиморфизмы не увеличивают риск р<г'вития острого инсульта, как у мужчин, так и у женщин. Ассоциация с

полиморфизмом c.675_676delinsG в гене PAI-l наиболее выражена у женщин. Наличие аллеля 5G увеличивает риск развития острого инсульта в 1.2 раза, и не оказывает влияние на риск развития данного заболевания у мужчин.

1.1.2 Анализ g,11417_11704del287 полиморфизма в гене, кодирующем ангиотснзин-превращающий фермент {АСЕ).

Наиболее изученным полиморфизмом в гене АСЕ является инсерционно-делеционный полиморфизм (I/D полиморфизм) в 16 интроне, который заключается в наличии (вставка, или инсерция - аллель I) или отсутствии (выпадение, или делеция -аллель D) фрагмента в 287 п.н. (Alu-повтор). Данный полиморфизм был ассоциирован с активностью ангиотензин-превращающего фермента в плазме крови и тканях. Показаны статистически достоверные ассоциации между различными подтипами инсульта и D/D генотипом на выборках европейского и неевропейского происхождения. В настоящей работе был проведен анализ I/D полиморфизма (g.ll417_11704del287) гена АСЕ. Частоты генотипов и аллелей сравнивали между группами больных острым инсультом (N=1100), ишемическим (N=903), геморрагическим инсультом (N=195) и контрольной выборкой (N=458), а также между выборками больных острым инсультом и конгрольной группой, дифференцированными по полу.

Проведенный сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта g,11417_11704del287 гена АСЕ показал отсутствие ассоциаций с острым инсультом и его подтипами. Наличие аллеля D не влияло на риск развития острого инсульта ни у мужчин, ни у женщин.

1.1.3 Анализ полиморфизмов rsl0507391 (SG13S114), rs9551963 (SG13S32), rs4769874 (SG13S89) и rsl7222814 (SG13S25) в гене ALOX5AP

Был проведен анализ полиморфизмов SG13S114, SG13S32, SG13S89, SG13S25 гена АЮХ5АР. Частоты генотипов и аллелей данных ОНП сравнивали между группами больных острым (N=1234), ишемическим (N=1009), геморрагическим (N=222) инсультом и контрольной выборкой (N=717), а также между выборками больных острым инсультом и контрольной группой, дифференцированными по полу.

Для ОНП SG13S89 гена ALOX5AP не было обнаружено статистически достоверных ассоциаций с риском развития острого инсульта или его подтипов -ишемического и геморрагического. Для данного ОНП не было показано достоверных различий в частотах распространения генотипов и аллелей между больными острым инсультом и соответствующими контрольными группами мужчин и женщин.

Для ОНП 8013Б32 гена ЛЮХ5АР не было выявлено статистически достоверных ассоциаций с риском развития острого и ишемического инсульта. В выборке больных геморрагическим инсультом носители аллеля С (лица с генотипами А/С и С/С) встречались на 6.7% чаще, чем в контроле (р=0.04; 0111=1.5; 95%ДИ 1- 2.3) (табл.1). Для данного ОНП гена АЮХ5АР, также как и для локуса 5013Б89, не наблюдалось достоверных различий в частотах распространения генотипов и аллелей между больными острым инсультом и соответствующими контрольными группами мужчин и женщин.

Таблица 1. Частоты генотипов и аллелей однонуклеотидных полиморфизмов

(ОНП) в гене АЮХ5АР

ОНП Острый инсульт Ишемический инсульт Геморрагический инсульт Контрольная группа

80138114 ТГ/ТА/АА (Т/А) 0.54/0.39/0.07 (0.73/0.27) 0.54/0.38/0.08 (0.73/0.27) 0.55/0.40/0.05 (0.75/0.25) 0.50/0.40/0.10 (0.70/0-30)

8013832 АА/АС/СС (А/С) 0.22/0.50/0.28 (0.47/0.53) 0.23/0.49/0.28 (0.48/0.52) 0.17/0.55/0.28 (0.44/0.56) 0.23/0.51/0.26 (0.49/0.51)

8013889 вС/ОА/АА (О/А) 0.92/0.08/0 (0.96/0.04) 0.92/0.08/0 (0.96/0.04) 0.93/0.07/0 (0.96/0.04) 0.93/0.07/0 (0.97/0.03)

8013525 ССЮА/АА (С/А) 0.78/0.20/0.02 (0.88/0.12) 0.78/0.20/0.02 (0.88/0.12) 0.80/0.18/0.02 (0.89/0.11) 0.85/0.14/0.01 (0.92/0.08)

Дня локуса 50138114 гена АЮХ5АР были обнаружены статистически достоверные различия в частоте распространения аллелей между группами острого, ишемического инсульта и контрольной группой. В группах острого и ишемического инсульта аллель Т встречался чаще, чем в контрольно группе (р=0.02, р=0.04, соответственно; 0111=1.2, 1.2, соответственно; 95%ДИ 1-1.4, 1-1.4, соответственно). В группе больных геморрагическим инсультом различия в частоте встречаемости аллеля Т по сравнению с контрольной группой не достигают уровня статистической значимости (р=0.05) (табл.1). Для ОНП 50138114 не наблюдалось достоверных различий в частотах распространения генотипов и ачлелей между больными острым инсультом и соответствующими контрольными группами мужчин и женщин.

Наиболее сильные ассоциации с риском развития острого и ишемического инсульта были показаны для ОНП 8013825 в гене АЮХ5АР. Так, в группах больных острым и ишемическим иисультом частота генотипов б/А и А/А была выше, чем в контроле (р=0.0006, р=0.0004 - соответственно). У носителей аллеля А полиморфного

маркера 8013525 риск развития острого инсульта был выше в 1.6 раза (р=0.0002; 95%ДИ 1.3-2.1), а ишемического - в 1.7 раза (р=0.0001; 95%ДИ 1.3 - 2.1). В группах больных геморрагическим инсультом и контрольной группе разница в частоте встречаемости генотипов и аллелей не достигает уровня статистической значимости (р=0.17; р=0.11). При сравнении группы мужчин с острым инсультом в анамнезе с соответствующей по полу контрольной группой не было обнаружено достоверных различий в частоте встречаемости генотипов и аллелей полиморфизма 5013525. В группе женщин с аналогичным диагнозом такие различия были статистически значимы (р=0.0013 - для генотипов; р=0.0003 - для аллелей).

Таким образом, было показано, что аллель Г полиморфизма 50135114 и аллель А полиморфизма 5013525 в гене АЮХ5АР увеличивают риск развития острого инсульта в 1.2 раза (95%ДИ 1.0-1.4) и 1.6 раза (95%ДИ 1.3-2.1), соответственно, а ишемического в 1.2 раза (95%ДИ 1.0-1.4) и 1.7 раза(95%ДИ 1.3-2.1), соответственно. У женщин, носителей аллеля А полиморфизма 5013525, риск развития острого инсульта в 1.8 раза выше (95%ДИ 1.3 -2.5), но данный полиморфизм не вносит вклад в развитие острого инсульта у мужчин. ОНП 50135114 и 5013525 не вносят существенного вклада в риск развития геморрагического инсульта. У носителей аллеля С полиморфного маркера 5013532 риск развития геморрагического инсульта выше в 1.5 раза по сравнению с контрольной группой (95%ДИ 1.0-2.3).

Точный механизм, посредством которого полиморфные варианты в гене АЮХ5АР могут влиять на риск развития инсульта, до настоящего времени не изучен. Все ОНП, для которых были показаны ассоциации с повышенным риском развития инсульта и его подтипов, не приводят к замене аминокислот в белке. Можно предположить, что вариант 5013625, который расположен в промоторной области гена АЮХ5АР, и варианты 50135114 и 5013532, расположенные в интронах, могут оказывать влияние на уровень транскрипции гена, или находиться в неравновесии по сцеплению с другими, неидентифицировашыми ОНП, оказывающими влияние на транскрипцию, сплайсинг, стабильность мРНК гена или эффективность ее трансляции.

1.1.4 Анализ полиморфизмов ге152312 (5ИР41), ге2910829 (5ЫР87), ге12188950 (5№45) в гене РОЕ4В

Был проведен анализ полиморфизмов 5№87 (ге2910829), 5№41 (ге 152312), 5ЫР45 (ге12188950) в гене, кодирующем фосфодиэсгеразу 41) (Р 1)Е10). Частоты генотипов и аллелей сравнивали между группами больных острым (N=1234), пшемическим (N=1009), геморрагическим (N=222) инсультом и контрольной выборкой

(N=717), а также между выборками больных острым инсультом и контрольной группой, дифференцированными по полу.

Для ОНП SNIM1, SNP87 и SNP45 в гене PDE4D не было обнаружено достоверных ассоциаций и риском развития острого и ишемического инсульта. При сопоставлении частот генотипов и аллелей в группах больных геморрагическим инсультом и контроле, не было выявлено достоверных различий для ОНП SNP87 и SNP45 (р=0.45, р=0.2 - для генотипов; р=0.24, р=0.73 - для аллелей). В тоже время в группе больных геморрагическим инсультом частота генотнпа С/Т полиморфизма SNP41 была выше на 4.9%, а частота генотипа С/С- ниже на 4.9%, чем в контрольной группе (р=0.04). SNP41 располагается в некодирующей области, фланкирующей экзон D7-1 гена PDE4D. Хотя функциональная роль данного ОНП гена PDE4D еще не ясна, можно предположить, что он может оказывать влияние на ферментативную активность в целом посредством изменения профиля экспрессии определенных изоформ фермента, что подтверждается данными других исследователей.

Для ОНП SNP41, SNP87 и SNP45 гена PDE4D не наблюдалось достоверных различий в частотах распространения генотипов и аллелей между группами женщин и мужчин больных острым инсультом и соответствующими им по полу контрольными группами.

1.2 Корреляционный анализ ДНК-маркеров с основными клиническими проявлениями инсульта в группе больных острым инсультом Был проведен корреляционный анализ между полиморфизмами с.202100>А гена F2, с.169Ю>А гена F5, (-5)Т>С Kozak гена GP1BA, c.675_676delinsG гена PAI-1, g. 11417_11704del287 генаЛСЕ, SG13SU4, SG13S32, S013S89, S013S25 генаALOX5AP и SNP87, SNP41, SNP45 гена PDE4D и клиническими характеристиками инсульта:

1. тяжесть состояния и выраженность неврологического дефицита по шкале инсульта Национального института здоровья США (NIHSS) на 1-е, 7-е и 21-е сутки.

2. степень функционального восстановления нарушенных неврологических функций по модифицированной шкале Рэнкина на 3-е, 14-е, 21-е сутки и через 3 месяца после начала заболевания;

3. индекс повседневной активности Бартел на 21-е сутки и через 3 месяца после начала заболевания;

4. оценка степени нарушения сознания и комы по шкале Глазго на 1-е сутки;

5. объем зоны поражения головного мозга.

Для оценки ассоциаций между полиморфными вариантами изучаемых генов и клиническими характеристиками больных был использован ранговый коэффициент корреляции по Спирмену (Spearman Rank Order Correlations). Дальнейший анализ полученных достоверных корреляций значений количественных признаков у лиц с разными генотипами был проверен с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Статистически значимыми считали различия при р<0,05 (Реброва, 2002).

Статистически достоверные корреляции были выявлены только между полиморфизмом с.169Ю>А гена F5 и степенью тяжести состояния больного и выраженностью неврологического дефицита. Через 3 месяца поле начала лечения происходило снижение выраженности симптомов инсульта как у носителей генотипа G/G (средний балл по шкале Рэнкина 2.4), так и у носителей генотипа G/A (средний балл по шкале Рэнкина 0.16) (Рис. 1). Но, в тоже время, G/A генотип был ассоциирован с более легким течением заболевания, более низким уровнем инвалидизации, a G/G генотип - с развитием более тяжелых форм инсульта, с более тяжелой симптоматикой и функциональными нарушениями.

Рисунок 1. Зависимость степени тяжести состояния больного и выраженности неврологического дефицита (по модифицированной шкале Рэнкина) с полиморфизмом с.169Ю>А гена F5 через 3 месяца после развития заболевания.

1.3 Анализ ассоциаций между различными комбинациями изучаемых ОНП в выборках больных острым инсультом и контрольной группе С помощью программы «GMDR» были определены двух- и трех-локусные комбинации полиморфизмов с.20210С>А гена Р2, с.169Ю>А гена Г5, (-5)Т>С Когак гена вР1ВА, с.675_676ёеНпзО гена РА1-1, 1417_11704ёе1287 гена АСЕ, 80135114, 5013832, 5013589, 5013525 гена АЮХ5АР и 5ОТ87, 5ЫР41, 5ЫР45 гена РПЕ40 в

выборках больных острым, ишемическим, геморрагическим инсультом и контрольной группе. Для каждой группы заболевания были выявлены модели с максимальным уровнем тестируемой точности (табл.2).

Таблица 2. Анализ двух- и трех-локусных моделей межгенного взаимодействия в выборках больных острым, ишемическим и геморрагическим инсультом и контрольной группе.

Острый инсульт Ишемический инсульт Геморрагический инсульт

Лучшая двух-локусная модель ALOX5AP rs\72228\4 АСЕ g.l 14-17_11704del287 ALOX5AP rs 17222814 ACE g.11417 11704del287 PAI-1 rs34857375 PDE4D rsl52312

Лучшая трех-локусная модель ACE%.\U\1 11704del287 ALOX5AP rs9551963 PAI-1 rs34857375 АСЕ%Л\<\\1 11704del287 ALOX5AP rsl 0507391 PAI-1 rs34857375 —

Значение величины тестируемой сбалансированной точности (Testing Ball. Асс.) для всех исследованных моделей не превышало критического уровня для мультилокусных моделей и обнаруженные межгенные взаимодействия не были статистически значимыми. Внесение поправок по полу и возрасту в двух- и трех-локусные модели не оказывало влияния на значение величины тестируемой сбалансированной точности и исследованные комбинации ДНК-маркеров, вероятно, не оказывают достаточного влияния на риск развития острого инсульта и его подтипов -ишемического и геморрагического.

1.4 Полногеномный ассоциативный анализ ишемического инсульта Для поиска новых ДНК-маркеров острого инсульта был проведен анализ 990 больных ишемическим инсультом и 772 лиц из популяционных выборок с использованием ДНК-микрочипов «HumanCytoSNP-12 v.2» (Illumina, США). Данные микрочипы позволяют анализировать около 300000 генетических маркеров и обеспечивают плотное и однородное покрытие всего генома. В состав итоговой контрольной выборки вошли независимые выборки из Ивановской, Смоленской, Курской и Тверской областей Российской Федерации.

Чтобы избежать получения ложноположительных результатов и для оценки генетической гетерогенности выборок был проведен анализ контрольной выборки и выборки больных ишемическим инсультом методом главных компонент. Выборки из Ивановской, Владимирской, Смоленской, Курской и Тверской областей занимают на

графике одну область, что свидетельствует об их генетическом родстве. Выборка больных острым инсультом занимает на графике одну область с независимой контрольной выборкой, за исключением образцов больных ишемическим инсультом, отличающихся от основной группы по первой и второй главным компонентам и образующих на графике своеобразный «шлейф» (рис.2).

Модель А

Рисунок 2. Результаты анализа независимой контрольной выборки и выборки больных ишемическим инсультом методом главных компонент. Зеленый цвет - больные ишемическим инсультом, синий цвет - образцы контрольной группы.

Модель Б

Рисунок 3. Результаты анализа независимой контрольной выборки и выборки больных ишемическим инсультом методом главных компонент после исключения образцов больных ишемическим инсультом, образующих «шлейф»). Зеленый цвет - больные ишемическим инсультом, синий цвет - образцы контрольной группы.

Данный график анализа главных компонент двух выборок также свидетельствует

об относительной однородности вошедших в них этнических компонент. На рис. 3

представлены результаты анализа независимой контрольной выборки и выборки

больных ишемическим инсультом, после исключения из анализа образцов, образующих

«шлейф». Выборка больных острым инсультом в этом случае образует на графике

однородную область с контрольной выборкой, а специфический «шлейф» отсутствует.

В дальнейший полногеномный ассоциативный анализ были включены обе модели:

модель А, состоящая из выборки больных ишемическим инсультом (N=990) и

контрольной выборки (N=772), и модель Б, состоящая из выборки больных

ишемическим инсультом (N=885) и контрольной выборки (N=772) после исключения из анализа образцов, образующих «шлейф». Анализ ассоциаций между однонуклеотидными ДНК-маркерами и развитием острого инсульта проводили в рамках трех типов наследования - доминантного, ад дитивного и рецессивного.

1.4.1. Доминантный тип наследования В рамках доминантного типа наследования анализ моделей А и Б выявил ОНП с наибольшим значением величины р - rsl842993, расположенный на 7 хромосоме, rs2243684, расположенный на 21 хромосоме, rs8094024, расположенный на 18 хромосоме и rs241698 - в интронной области гена FHIT (fragile histidine triad gene) (табл.3).

Таблица 3. Результаты полногеномного ассоциативного анализа между ДНК-

маркерами с наибольшим значением величины р и развитием ишемического инсульта. Модель А и модель Б. Доминантный тип наследования.

ДНК-маркер Хромосома Локус Значение величины р

Модель А Модель Б

rsl842993 7 межгенная область между псевдогенами ШС100128575 и ШС100129985 2.9x10"8 1.6x10"8

rs2243684 21 межгенная область 5.2х10"7 2.2x10"7

rs8094024 18 межгенная область вблизи псевдогена RSL24D1P11 7.6х10"6 3.4x10"5

rs241698 3 Ген FHIT{fragile histidine triad gene) 5.3x10"6 1.1x10"5

1.4.2. Аддитивный тип наследования

При анализе модели А максимальный уровень статистической значимости достигнут для ОНП ге2243684 (р=7.9х10"7) и Г51842993 (р=1.7х10"6) (табл.4). Эти же ДНК-маркеры были выявлены и при анализе в рамках доминантного типа наследования. При анализе модели Б, кроме ОНП ге2243684 и ге 1842993, для еще одного ОНП - гэ6506070 - значение величины р достигало уровня полногеномной значимости (р=3,1х10"6). ОНП ге6506070 расположен в интроне гена, кодирующего миомезин 1, который играет важную роль в поддержании правильной упаковки миозиновых филаментов в мышцах.

Таблица 4. Результаты полногепомного ассоциативного анализа между ДНК-маркерами с наибольшим значением величины р и развитием ишемического инсульта. Модель А и модель Б. Аддитивный тип наследования.

ДНК-маркер Хромосома Локус Значение величины р

Модель Л Модель Б

rs2243684 21 межгенная область 7.9х10"7 3.4х10"7

rs 1842993 7 межгенная область между псевдогенами LOC100128575 и LOCI 00129985 1.7х10"6 9.5x10"6

rs6506070 18 Интрон гена MYOM1 (myomesin 1) 3.9x10° 3.1x10"*

1.4.3. Рецессивный тип наследования В рамках рецессивного типа наследования наибольшего уровня значимости при анализе модели А достигают 2 ОНП: «4487900 (р=3.5х1СГ6) и «6905808 (р=7.4х106), а при анализе модели Б ге4487900 (р=4.7х10"6) и п;40775 15 (р=5.4х10"6) (табл.5).

Таблица 5. Результаты полногеномного ассоциативного анализа между ДНК-маркерами с наибольшим значением величины р и развитием ишемического инсульта. Модель А и модель Б. Рецессивный тип наследования.

ДНК-маркер Хромосома Локус Значение величины p

Модель A Модель Б

rs4487900 9 интрон гена SDCCAG3 (serologically defined colon cancer antigen 3) 3.5x10"6 4.67xl0"6

rs6905808 6 межгенная область, вблизи гена SLC22A23 (solute carrier family 22, member 23). 7.3Х10"6 2.43x10"3

rs4077515 9 Миссенс полиморфизм в гене CARD9 (caspase recruitment domain family, member 9) 1.7xl0"5 5.4Х10"6

Значение величины р для ОНП гэ6905808, показавшего высокий уровень статистической значимости при анализе модели А, при анализе модели Б не достигает уровня статистической значимости (р=2.43х103) в рамках этой же модели наследования. Высокий уровень статистической значимости в модели Б имеет ОНП гэ4077515 (р=5.4х10~6), который в модели А составлял р=1.7хЮ"05.

rs4487900 локализован в интроне гена SDCCAG3 (serologically defined colon cancer antigen 3), входящего в состав в состав протяженного гаплоблока длиной -120 kb. В данный гаплоблок входят также гены GPSM1, LOC728489 (DNLZ), SNAPC4, CARD9, РМРСА, INPP5E и ША0310. Белок, кодируемый геном SDCCAG3, вовлечен в регуляцию экспрессии рецептора фактора некроза опухоли (TNF) на поверхности клеток и в апти-апоптотический механизм TNF-сигнального пути. Было показано, что определенные ОНП в генах SNAPC4 и РМРСА могут иметь статистически достоверный эффект eis - действия на экспрессию гена CARD9 (Pointon et al., 2010).

ОНП rs6905808 расположен в межгенной области вблизи гена SLC22A23 (solute carrier family 22, member 23). Белок, кодируемый данным геном, относится к большому семейству трансмембранных белков, участвующих в транспорте органических ионов, а также некоторых лекарств, токсинов и эндогенных метаболитов через клеточные мембраны.

ОНП rs4077515 -ОНП c.35G>A в гене CARD9 (caspase recruitment domain family, member 9), приводящий к замене p.Serl2Asn. Белок CARD9 играет главную роль в регуляции врожденного иммунитета и функционирует как цитозольный белок, участвующий в передачи сигнала.

Таким образом, в результате полногеномного ассоциативного анализа было выявлено 7 новых ДНК-маркеров, ассоциированных с ищемическим инсультом -rs 1842993, rs2243684, rs6905808, rs241698, rs6506070, rs4487900, rs4077515. Наиболее сильная ассоциация показана в рамках доминантной модели наследован™ для двух ДНК-маркеров: rs 1842993, расположенного на хромосоме 7р11.2, и rs2243684 на хромосоме 21q21.1.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ роли генетических факторов в патологии человека имеет большое значение для понимания причин и механизмов развития многих заболеваний. В настоящее время для многих моногенных заболеваний уже осуществлено картирование генов на хромосомах, анализ их структуры, а также описаны мутации, определяющие данные заболевания. На современном этапе развития геномики особое внимание уделяется исследованию молекулярно-генетических механизмов формирования мультифакториальных заболеваний, развитие которых обусловлено как генетическими факторами, так и факторами внешней среды.

Инсульт является одной из наиболее важных проблем современного общества, поскольку участвует в формировании основных показателей здоровья населения -

общей смертности и инвалидизации. Многочисленные эпидемиологические и генеалогические исследования доказали важность роли семейной отягощенное™ в частоте развития сосудистых заболеваний мозга.

Были достигнуты значительные успехи в понимании молекулярно-генетических механизмов реализации ишемического повреждения мозга в рамках моногенных патологических состояний таких, как СЛОЛ51Ь. Однако исследования молекулярно-генетических основ полигенных мультифакториачьных форм инсульта хотя и многочисленны, но не дают однозначного ответа о механизмах их патогенеза. Наиболее сильные ассоциации с риском развития острого инсульта и его подтипов -ишемического и геморрагического были показаны для генов-кандидатов /о, 6Р1ВА, АСЕ. Отдельные работы не выявили положительной корреляции между данными полиморфными маркерами в данных генах-кандидатах и риском развития инсульта. Это может быть связано как с недостаточным размером выборок, так и отсутствием четкого определения патогенетических вариантов инсульта. Кроме того, велика вероятность, что структурные особенности ряда рассматриваемых генов-кандидатов определяют не столько независимый риск, сколько формирование модифицируемых факторов риска, а значит, не имеют отношения к формированию индивидуальной генетической предрасположенности, как независимого фактора риска развития инсульта. Кроме того, различные гены могут быть ответственны за различные патогенетические варианты инсульта.

Завершение проекта по картированию гаплотипов в геноме человека (НарМар), а также создание ДНК-микрочипов высокой плотности сделали возможным проведение полногеномного ассоциативного анализа заболеваний как моногенных, так и сложнонаследуемых. Данный метод позволяет выявлять новые, рацее не изучавшиеся в исследованиях вида «случай - контроль» ДНК-маркеры, которые могут быть ассоциированы с развитием той или иной патологии. Исторически первым для поиска генов-кандидатов инсульта был применен полногеномный анализ сцепления, основанный на генетическом картировании семей или расширенных родословных с использованием различных типов ДНК-маркеров. Наиболее сильная ассоциация была показана для двух генов, роль которых в патогенезе инсульта ранее не исследовалась -гена фосфодиэстеразы 40 (РйЕ4В) и гена активатора 5-липоксигеназы (АЮХ5АР).

Проведенные полногеномные ассоциативные анализы острого инсульта на выборках различных этносов выявили 11 новых ДНК-маркеров, ассоциированных с инсультом. Интересно, что в данных исследованиях не было показано ассоциаций для

генов-кандидатов, которые ранее были описаны в исследованиях вида «случай -контроль».

Целью настоящей работы являлись поиск и анализ генетических маркеров риска развития острого инсульта, а также его подтипов - ишемического и геморрагического в российской популяции. Для этого был проведен анализ полиморфных ДНК-маркеров в кандидатных генах острого инсульта F2, F5, GP1BA, АСЕ, ALOX5AP и PDE4D у пациентов с различными клиническими формами острого инсульта из российской популяции. Полиморфизмы rs 1799963 гена F2, rs6025 гена F5, rs2243093 гена GP1BA, g,11417_11704del287 полиморфизм гена АСЕ, SG13S89 (rs4769874) гена ALOX5AP и полиморфизмы SNP87 (rs2910829) и SNP45 (rsl2188950) гена PDE4D, а также их комбинации не влияли на патогенез этих заболеваний у больных из г. Москвы.

Были показаны ассоциации полиморфизмов SG13S114 (rsl0507391) и SG13S25 (rs 17222814) гена ALOX5AP с острым и ишемическим инсультом. Наличие аплеля Т полиморфного варианта SG13SU4 увеличивало риск развития ишемического инсульта в 1.2 раза (95%ДИ 1 - 1.4). Ассоциация с развитием острого инсульта полиморфного варианта SG13S25 (rsl7222814) гена ALOX5AP носит сложный характер. Она наблюдается у пациентов с ишемическим инсультом (р<0.0001, 0111=1.6), и более сильно выражена у женщин (р=0.0003, 0Ш=1.8). Данные полиморфизмы не оказывали влияния на риск развития геморрагического инсульта.

Дпя полиморфизмов SG13S32 (rs9551963) гена AL0X5AP и SNP41 (rsl52312) гена PDE4D показаны ассоциации с геморрагическим инсультом. У лиц с генотипами С/Т и Т/Т полиморфного варианта SNP41 (rs 152312) риск развития геморрагического инсульта был выше в 1.2 раза, а наличие аллеля С по полиморфизму SG13S32 (rs9551963) гена ALOX5AP увеличивало риск данной патологии в 1.5 раза (р=0.04).

При оценке распределения генотипов по полиморфному варианту rs6025 гена F5 у пациентов с различной степенью функционального восстановления нарушенных неврологических функций была выявлена достоверная корреляция. G/A генотип был ассоциирован с более легким течением заболевания и более низким уровнем инвалидизации, чем генотип G/G.

рамках доминантного типа наследования для ДНК-маркера гэ1842993, расположенного на хромосоме 7р11.2 (р=2.9х10'8). Кроме того, не было обнаружено достоверных ассоциаций с локусами, для которых были показаны ассоциации с острым инсультом или его подтипами в других полногеномных ассоциативных исследованиях.

Таким образом, с одной стороны, полученные данные подтверждают участие ряда генетических систем в определении риска развития различных вариантов острого инсульта. С другой стороны, сравните полученных данных с данными, имеющимися в литературе, указывает на крайне высокую гетерогенность таких генетических факторов и их вовлеченность в патогенез острого инсульта в разных исследованиях различных ДНК-маркеров. Это можно объяснить с одной стороны, этнической неоднородностью выборок в различных исследованиях. Частоты генотипов ДНК-маркеров, для которых были показаны ассоциации с риском развития инсульта, могут в значительной степени варьировать в различных популяциях, и, соответственно, различается величина их вклада в патогенез заболевания. Кроме того, для различных этнических групп генетические факторы риска развития заболевания могут отличаться. Однако во многих исследованиях отсутствует четкое разделение пациентов по типу инсульта. Вероятно, за различные патогенетические варианты инсульта могут отвечать различные гены-кандидаты. Так, например, в данной работе было показано, что полиморфизмы 80135114 и 8013525 вносят вклад в риск развития ишемического инсульта и не оказывают влияние на патогенез геморрагического. А полиморфизмы 8013532 гена АЮХ5АР и 8№41 гена 1ЮЕ4В, напротив, показали ассоциацию с риском развития геморрагического инсульта. Учитывая все вышеизложенное, необходимо продолжение работы по поиску ДНК-маркеров риска развития острого инсульта и его подтипов, с учетом популяционной стратификации формируемых выборок и необходимостью более строго подхода к клиническому описанию больных.

Выводы:

1. Показаны ассоциации полиморфизмов 50135114 (ге10507391) и 3013525 (ге 17222814) гена активатора 5-липоксигеназы (4ЮХ5АР) с ишемическим инсультом. Для полиморфизмов 5013532 (ге9551963) гена АЮХ5АР и 5№41 (гз 152312) гена фосфодиэстеразы 40 (РйЕ4ГУ) показаны ассоциации с геморрагическим инсультом.

2. Ассоциация с развитием острого инсульта полиморфного варианта 5013525 (ге 17222814) гена АЮХ5АР носит сложный, характер. Она наблюдается только у пациентов с ишемическим шюультом (р<0.0001, 0Ш=1.6), и более сильно выражена у женщин (р=0.0003,0Ш=1.8).

3. Обнаружены ассоциации полиморфизма ге6025 гена фактора свертывания крови V (К5) с параметрами, характеризующими степень функционального восстановления нарушенных неврологических функций через 3 месяца после острого инсульта. Генотип О/А ассоциирован с более легким течением заболевания и снижением уровня инвал идизации.

4. Полиморфизмы ге 1799963 гена фактора свертывания крови II (/\2), п6025 гена фактора свертывания крови V (/о), ге2243093 гена а-цепи тромбоцитарного рецептора ОР1Ь (СР1ВА), &11417_11704с1е1287 полиморфизм гена ангиогензин-превращающего фермента (АСЕ), 5013589 (^4769874) гена активатора 5-липоксигеназы (АЮХ5АР) и полиморфизмы 5№87 (^2910829) и 51МР45 («12188950) гена фосфодиэстеразы 4Б (.РйЕ4й), а также их комбинации, не ассоциированы с развитием острого, ишемического и геморрагического инсульта и не оказывают влияния на течение этих заболеваний у больных из г. Москвы.

5. В результате полногеномного ассоциативного анализа выявлено 7 новых ДНК-маркеров, ассоциированных с ишемическим инсультом (ге 1842993, гй2243684, ге6905808, ^241698, ^6506070, ге4487900, ге4077515). Наиболее сильная ассоциация показана в рамках доминантной модели наследования для ДНК-маркера гб 1842993, расположенного на хромосоме 7р11.2 (р=2.86><10"8).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Т.В. Тупицына, Е.А. Бондаренко, А.Ю. Боцина, И М. Шстова, С.А. Лимборская, В.И. Скворцова, П.А. Сломинский. «Роль полиморфных вариантов гена индуцибельной NO-синтазы N0S2 в формировании инфаркта мозга у больных с острым ишемическим инсультом», Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2010, №3, с. 3 - 7.

2. Е.А. Бондапенко. Т.В. Тупицына, П.А. Сломинский, И.М. Шетова, H.A. Шамалов, А.Ю. Боцина, В.И. Скворцова, С.А. Лимборская «Полиморфизм гена фосфодиэстсразы 4Д (PDE4D) у больных острым инсультом г. Москвы», Генетика, 2010, Т.46, №6, с. 861-864.

3. Е.А. Бондаренко. Е.И. Мокан, Н.И. Барбакар, Т.В. Тупицына, П.А. Сломинский, И.М. Шстова, H.A. Шамалов, А.Ю. Боцина, В.И. Скворцова, С.А. Лимборская «Анализ полиморфных вариантов гена PDE4D у больных острым инсультом в молдавской популяции», Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2011, №2, с. 5 - 8.

4. Е.А. Бондаренко. П.А. Сломинский, С.А. Лимборская, И.М. Шетова, Д.Ю. Тимофеев, В.И. Скворцова «Полиморфные варианты гена ALOX5AP и риск развития острого инсульта в российской популяции», Генетика, 2011, Т. 47, № 4, с. 570-573

5. В.И. Скворцова, С.А. Лимборская, И.М. Шетова, П.А. Сломинский, H.A. Шамалов, Е.А. Бондаренко. Д.Ю. Тимофеев «Ассоциация полиморфизма гена фосфодиэстеразы 4Д (PDE4D) с развитием церебрального инсульта у больных из московской популяции», Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. Инсульт, 2011, №4, С.3-7.

6. Е.А. Бондаренко. И.М. Шетова, H.A. Шамалов, Е.И. Мокан, Н.И. Барбакар, Г.С. Курочкин, С.С. Протопоп, Л.Т. Лысый, П.А. Сломинский, С.А. Лимборская,

B.И. Скворцова «Анализ ДНК-маркеров и предрасположенности к острому ишемическому инсульту в российской и молдавской популяциях» Генетика, 2011, Т. 47, № 10, с. 1393-1401.

7. Е.А. Бондаренко. Т.В. Тупицына, И.М. Шетова, А.Ю. Боцина «Ген фосфодиэстеразы 4Д (PDE4D) и риск развития острого инсульта больных из г. Москвы». Материалы III Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины», 2009 г., с. 137.

8. Е.А. Бондаренко. Т.В. Тупицына, И.М. Шетова, А.Ю. Боцина, В.И. Скворцова,

C.А. Лимборская «Полиморфные варианты гена PDE4D у больных с острым инсультом из Москвы». Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков, 2010 год, стр.27.

9. SA Limborska, PA Slominsky, EA Bondarenko. AV Khrunin, A Metspalu, IM Shetova, VI Skvortsova «Genome wide association study for acute stroke in Russians». Abstracts of papers presented at the 2011 meeting on "The biology of genomes", 10.05 -14.05 2011, Cold Spring Harbor, New York, p. 173

10. E. Bondarenko. I. Shetova, N. Shamalov, P. Slominsky, S. Limborska, V. Skvortsova Abstracts of papers presented at the 2011 meeting on European Society of Human Genetics, 28.05-31.05 2011, p.266.

Подписано в печать: 31.10.2011

Заказ № 6160 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бондаренко, Елена Александровна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Острый инсульт: клиническое описание.

1.2 Основные факторы риска развития острого инсульта.

1.2.1 Модифицируемые факторы риска развития острого инсульта.

1.2.2 Немодифицируемые факторы риска развития острого инсульта. 21 1.2.2.1 Генетические факторы риска развития острого инсульта

1.3 Анализ генетических ассоциаций.

1.3.1 Метод «Анализ генетических ассоциаций».

1.3.1.1 Система гемостаза.

1.3.1.2 Ренин-ангиотензиновая система.

1.3.2 Полногеномный ассоциативный анализ.

1.3.2.1 Платформа Infinium BeadChip, «Illumina», США.

1.3.2.2 Платформа GeneChip «Affymetrix», США.

1.3.2.3 Сравнение платформ GeneChip «Affymetrix», США и Infinium BeadChip, «Illumina», США. ^

1.3.2.4 Полногеномный анализ сцепления инсульта с использованием ДНК-микрочипов высокой плотности и панелей микросателлитных ДНК-маркеров.

1.3.2.5 Полногеномный ассоциативный анализ острого инсульта. ^

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Общая характеристика анализируемых выборок.

2.2 Молекулярно-генетические методы анализа.

2.2.1 Выделение геномной ДНК из цельной крови человека.

2.2.2 Анализ полиморфизмов генов (с.2021(Ю>А), (с.169Ю>А), вР1ВА (-5Т>С К^ак), РАМ (с.675676ёе1тзО), АЮХ5АР (80138114 8013 832, 8013889, 8013825), РИЕ40 8МР41, 8№>45). 7?

2.2.3 Методы статистического анализа результатов исследования.

2.2.4 Полногеномный ассоциативный анализ.

Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Анализ генов-кандидатов острого инсульта.

3.1.1 Анализ ОНП в генах, кодирующих белки системы свертывания крови и гемостаза.

3.1.2 Анализ g.l 1417 11704<1е1287 полиморфизма в гене, кодирующем ангиотензин превращающий фермент (АСЕ).

3.1.3 Анализ полиморфизмов 80138114, 8013832, 8013889 и 8013825 в гене АЬОХ5АР. ш

3.1.4 Анализ полиморфизмов 8МР41, 8№>89, 8№45 в гене РОЕ4И. ш

3.2 Корреляционный анализ ДНК-маркеров с основными клиническими проявлениями инсульта в группе больных острым инсультом.

3.3 Анализ ассоциаций между различными комбинациями изучаемых ОНП в выборках больных острым инсультом и контрольной группе.

3.4 Полногеномный ассоциативный анализ острого инсульта.

3.4.1 Анализ главных компонент. ^

3.4.2 Анализ ассоциаций между однонуклеотидными ДНК-маркерами и развитием ишемического инсульта с использованием доминантного типа наследования. ^

3.4.3 Анализ ассоциаций между однонуклеотидными ДНК-маркерами и развитием ишемического инсульта с использованием аддитивного типа наследования.

3.4.4 Анализ ассоциаций между однонуклеотидными ДНК-маркерами и развитием ишемического инсульта с использованием рецессивного типа наследования.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полиморфные варианты генома человека и риск развития острого инсульта"

Актуальность проблемы

Сосудистые заболевания головного мозга - актуальная медицинская и социальная проблема. На сегодняшний день 9 миллионов человек в мире страдают цереброваскулярными болезнями. Основное место среди них занимают инсульты, каждый год поражающие около 6 миллионов человек и уносящие 4,6 миллиона жизней. Многие миллионы становятся инвалидами. Смертность от церебральных заболеваний в экономически развитых странах - 11-12% и уступает лишь смертности от заболеваний сердца и опухолей всех локализаций.

В настоящее время в изучении генетической предрасположенности инсульта, равно как и других мультифакторных заболеваний, используются два основных подхода:

1. Анализ генетических ассоциаций, основанный на исследовании полиморфных вариантов генов-кандидатов в выборках больных и случайных контрольных выборках. Такие исследования дают возможность установить вовлеченность в патогенез заболевания конкретных генов-кандидатов и на основе этого в 8 дальнейшем выявить группы лиц с риском развития заболевания. В последние несколько лет анализ генетических ассоциаций используется и для возможного прогнозирования течения и исхода заболевания. 2. Полногеномный ассоциативный анализ, с помощью которого проводится поиск новых, ранее неизученных генов-кандидатов.

За последние годы было проанализировано большое число генов-кандидатов и генных сетей, ассоциированных с повышенным риском развития острого инсульта на различных выборках. Первоначальные исследования инсульта с применением анализа генетических ассоциаций были сфокусированы на отдельных генах-кандидатах, которые, как предполагали, вовлечены в биологические процессы, нарушения которых могли приводить к развитию заболевания. Исследовавшиеся гены-кандидаты были ассоциированы с такими патологиями как атеросклероз, тромбозы и артериальная гипертензия. Статистически достоверные ассоциации с различными типами инсульта были показаны для полиморфизмов с.169Ю>А в гене фактора свертывания крови V (F5), c.20210G>A в гене протромбина (F2), c.675676delinsG в гене, кодирующем ингибитор активатора плазминогена-1 (PAI-1) и полиморфизмов в гене, кодирующем GPIba субъединицу тромбоцитарного рецептора (GP1BA). Белковые продукты этих генов вовлечены в систему гемостаза. Ассоциации с риском развития острого инсульта были показаны и для инсерционно-делеционного (I/D) полиморфизма в гене ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ). Однако полученные данные не дают однозначного ответа на вопрос об их патогенетической роли в развитии инсульта. Кроме того, для изучения вклада полиморфизмов генов в риск развития заболевания необходимо учитывать также и этническую компоненту. В русской популяции полиморфизмы c.20210G>A гена F2, c,1691G>A гена F5, (-5)Т>С Kozak гена GPIBA, c.675676delinsG гена PAI-1 изучены слабо.

Применение новейших технологий полногеномного анализа сцепления в семьях позволило выявить два ранее неизученных гена, показавших высокую ассоциацию с риском развития ишемического инсульта в исландской популяции -фосфодиэстеразы 4D (PDE4D) и активатора 5-липоксигеназы (ALOX5AP). В последние несколько лет полногеномный ассоциативный анализ на выборках большого объема из разных этнических групп выявил 11 новых локусов, которые могут быть вовлечены в патогенез острого и ишемического инсультов.

4 Цели и задачи работы

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Проведение анализа полиморфных ДНК-маркеров в кандидатных генах острого инсульта (ген фактора свертывания крови II СР2), фактора свертывания крови V (775), ген а-цепи тромбоцитарного рецептора вР1Ь (СР1ВА), ген ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ), ген активатора 5-липоксигеназы (АЮХ5АР) и ген фосфодиэстеразы 40 (РОЕ4Б)) у пациентов с ишемическим и геморрагическим инсультом.

2. Поиск новых ДНК-маркеров острого инсульта с использованием метода полногеномного ассоциативного анализа.

Научная новизна

Впервые в диссертационной работе определены частоты полиморфных вариантов генов АЮХ5АР (80138114, 8013832, 8013889, 8013825) и РИЕ40 (8ЫР41, 8№87, 8ЫР45) у больных острым, ишемическим и геморрагическим инсультом и здоровых индивидов, принадлежащих к русскому этносу.

Проведен анализ ассоциаций полиморфных локусов генов F2, Р5, СР1ВА, РА1-1, АСЕ с риском развития острого инсульта и его подтипов - ишемического и геморрагического в российской популяции. С помощью программы «ОМ1Ж» исследованы межгенные взаимодействия у больных острым, ишемическим и геморрагическим инсультом и здоровых индивидов, принадлежащих к русскому этносу.

Впервые проведен корреляционный анализ между полиморфизмами С.202100А гена Р2, с.169Ю>А гена (-5)Т>С Кохак гена вР1ВА, с.675676ёеПпзС гена РАМ, g.ll41711704del287 гена АСЕ, 8КР41, 8№>87, 8М>45 гена РОЕ4И, и 80138114, 8013832, 8013889, 8013825 гена АЮХ5АР и клиническими характеристиками острого инсульта.

Впервые с помощью технологии ДНК-микрочипов проведен полногеномный ассоциативный анализ (О'ЭДАЗ) острого ишемического инсульта в российской популяции и выявлены новые ДНК-маркеры этого типа инсульта.

Практическая значимость работы

Результаты работы вносят вклад в общее представление о генетических основах предрасположенности к инсульту. Полученные данные позволяют оценить роль ряда генетических систем в развитии острого инсульта и его подтипов -ишемического и геморрагического, и являются основанием для разработки молекулярно-генетических методов определения лиц с повышенным риском развития данных заболеваний. Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфных участков генов-кандидатов инсульта могут использоваться для медико-генетического консультирования с целью раннего выявления лиц с высоким риском развития заболевания и проведения донозологической профилактики. Учитывая результаты генотипирования больных острым инсультом и его подтипами, можно выделить группы пациентов с более тяжелым течением заболевания и дифференцировать для них лечебно-профилактические мероприятия, что важно для прогностических целей.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Бондаренко, Елена Александровна

Выводы:

1. Показаны ассоциации полиморфизмов 80138114 (гз10507391) и 8013825 (гб 17222814) гена активатора 5-липоксигеназы (АЬОХЗАР) с ишемическим инсультом. Для полиморфизмов 8013832 (ГБ9551963) гена АЮХ5АР и 8КГР41 (ГБ152312) гена фосфодиэстеразы 4Э (РОЕ4П) показаны ассоциации с геморрагическим инсультом.

2. Ассоциация с развитием острого инсульта полиморфного варианта 8013825 (гз17222814) гена АЬОХЗАР носит сложный характер. Она наблюдается у пациентов с ишемическим инсультом (р<0.0001, 0ИГ=1.6), и более сильно выражена у женщин (р=0.0003, 0111=1.8).

3. Обнаружены ассоциации полиморфизма гб6025 гена фактора свертывания крови V (Е5) с параметрами, характеризующими степень функционального восстановления нарушенных неврологических функций через 3 месяца после острого инсульта. Генотип С/А ассоциирован с более легким течением заболевания и снижением уровня инвалидизации.

4. Полиморфизмы ге 1799963 гена фактора свертывания крови II (К?), ^6025 гена фактора свертывания крови V (Е5), гэ2243093 гена а-цепи тромбоцитарного рецептора 0Р1Ь (СР1ВА), §.1141711704с1е1287 полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ), 8013889 (гб4769874) гена активатора 5-липоксигеназы {АЬОХЗАР) и полиморфизмы 8ЫР87 ^2910829) и 8ЫР45 (гз12188950) гена фосфодиэстеразы 4Б (РОЕ4П), а также их комбинации, не ассоциированы с развитием острого, ишемического и геморрагического инсульта и не оказывают влияния на течение этих заболеваний у больных из г. Москвы.

5. В результате полногеномного ассоциативного анализа выявлено 7 новых ДНК-маркеров, ассоциированных с ишемическим инсультом (гэ1842993, гб2243684, ^6905808, ГБ241698, гз6506070, гз4487900, ^4077515). Наиболее сильная ассоциация показана в рамках доминантной модели наследования для ДНК-маркера ^1842993, расположенного на хромосоме 7р11.2 (р=2.86х10"8).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ роли генетических факторов в патологии человека имеет большое значение для понимания причин и механизмов развития многих заболеваний. В настоящее время для большинства наследственных моногенных заболеваний уже осуществлено картирование генов на хромосомах, анализ их структуры, а также описаны мутации, определяющие данные заболевания. На современном этапе развития геномики особое внимание уделяется исследованию молекулярно-генетических механизмов формирования мультифакториальных заболеваний, развитие которых обусловлено как генетическими факторами, так и факторами внешней среды.

Инсульт является одной из наиболее важных проблем современного общества, поскольку участвует в формировании основных показателей здоровья населения -общей смертности и инвалидизации. В настоящее время более половины всех инсультов приходиться на лиц трудоспособного возраста. Многочисленные эпидемиологические и генеалогические исследования доказали важность роли семейной отягощенности в частоте развития сосудистых заболеваний мозга. Известно, что отягощенность семейного анамнеза по цереброваскулярным заболеваниям и ИБС увеличивает риск развития инсульта.

Были достигнуты значительные успехи в понимании молекулярно-генетических механизмов реализации ишемического повреждения мозга в рамках моногенных патологических состояний таких, как САБАБИ,. Однако исследования молекулярно-генетических основ полигенных мультифакториальных форм инсульта хотя и многочисленны, но не дают однозначного ответа о механизмах их патогенеза. Наиболее сильные ассоциации с риском развития острого инсульта и его подтипов -ишемического и геморрагического были показаны для генов-кандидатов фактора свертывания крови II (7^2), фактора свертывания крови V (/^5), гена а-цепи тромбоцитарного рецептора ОР1Ь (<ЭР1ВА), §.1141711704с1е1287 полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ), а также гена метилентетрагидрофолатредуктазы (МТНЕЯ). Отдельные работы не выявляли положительной корреляции между данными полиморфными вариантами генов-кандидатов и риском развития инсульта. Это может быть связано с недостаточным размером выборок, а также отсутствием четкого определения патогенетических вариантов инсульта в группе больных, хотя известно, что это синдром, имеющий различные механизмы развития. Кроме того, велика вероятность, что структурные особенности ряда рассматриваемых генов-кандидатов определяют не столько независимый риск, сколько формирование таких модифицируемых факторов риска инсульта как нарушение гемостаза, артериальная гипертензия, атеросклероз, а значит, не имеют отношения к формированию индивидуальной генетической предрасположенности, как независимого фактора риска развития ишемического инсульта. Кроме того, возможно различные гены могут быть ответственны за различные патогенетические варианты инсульта.

Исторически первым для поиска генов-кандидатов инсульта был применен полногеномный анализ сцепления, основанный на генетическом картировании семей или расширенных родословных с использованием различных типов ДНК-маркеров (ОНП-маркеры, микросателлитные маркеры). Наиболее сильная ассоциация была показана для двух генов, роль которых в патогенезе инсульта ранее не исследовалась - гена фосфодиэстеразы 4Б (РВЕ4П) и гена активатора 5-липоксигеназы (АЬОХ5АР).

Проведенные полногеномные ассоциативные анализы острого инсульта на выборках различных этносов выявил еще 11 новых ДНК-маркеров, показавших сильную ассоциацию с инсультом. Интересно, что в данных исследованиях не было показано ассоциаций для генов - кандидатов, которые ранее были описаны в исследованиях вида «случай - контроль».

Для этого был проведен анализ полиморфных ДНК-маркеров в кандидатных генах острого инсульта [ген фактора свертывания крови II (7^2), фактора свертывания крови V (7\5), ген а-цепи тромбоцитарного рецептора вР1Ь (вР1ВА), ген ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ), ген активатора 5-липоксигеназы (ALOX5AP) и ген фосфодиэстеразы 4D (PDE4D)] у пациентов с ишемическим и геморрагическим инсультом из российской популяции. Полиморфизмы rs 1799963 гена фактора свертывания крови II (F2), rs6025 гена фактора свертывания крови V (F5), rs2243093 гена а-цепи тромбоцитарного рецептора GPIb (GP1BA), g.l 141711704del287 полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ), SG13S89 (rs4769874) гена активатора 5-липоксигеназы (ALOX5AP) и полиморфизмы SNP87 (rs2910829) и SNP45 (rsl2188950) гена фосфодиэстеразы 4D (PDE4D), а также их комбинации не влияли на патогенез этих заболеваний.

Были показаны ассоциации полиморфизмов SG13S114 (rsl0507391) и SG13S25 (rs 17222814) гена ALOX5AP с острым и ишемическим инсультом. Аллель Т полиморфизма SG13S114 гена ALOX5AP встречался на 3.1% чаще в группе пациентов с острым инсультом, и на 3.3% чаще в группе больных ишемическим инсультом, чем в контрольной группе (0111=1.2, 95%ДИ 1-1.4 для острого инсульта; 0111=1.2 95%ДИ 1-1.4 для ишемического инсульта). Ассоциация с развитием острого инсульта полиморфного варианта SG13S25 (rsl7222814) гена ALOX5AP носит сложный характер. Она наблюдается у пациентов с ишемическим инсультом (pO.OOOl, 0111=1.6), и более сильно выражена у женщин (р=0.0003, 0111=1.8).

Для полиморфизмов SG13S32 (rs9551963) гена AL0X5AP и SNP41 (rsl52312) гена PDE4D показаны ассоциации с геморрагическим инсультом. Так, у носителей аллеля С по полиморфизму SG13S32 (rs9551963) гена ALOX5AP (у лиц с генотипами А/С и С/С) риск развития геморрагического инсульта повышен в 1.5 раза (р=0.04). В группе больных геморрагическим инсультом частота генотипа С/Т по полиморфизму SNP41 (rsl52312) гена PDE4D была выше на 6.2%, чем в контрольной группе (р=0.04).

При оценке распределения генотипов по полиморфному варианту rs6025 гена фактора свертывания крови V (F5) у пациентов с различной степенью функционального восстановления нарушенных неврологических функций (по шкале Рэнкина) была выявлена достоверная корреляция. Через 3 месяца после начала лечения происходило достоверное снижение выраженности симптомов инсульта и функциональных нарушений как у носителей генотипа G/G, так и у носителей генотипа G/A (р=0.03). При этом G/A генотип был ассоциирован с более легким течением заболевания, более низким уровнем инвалидизации, a G/G генотип связан с развитием более тяжелых форм инсульта, с более тяжелой симптоматикой и функциональными нарушениями.

Для поиска новых ДНК-маркеров острого инсульта был проведен полногеномный ассоциативный анализ с использованием ДНК-микрочипов «HumanCytoSNP-12 v.2» («Illumina», США). В результате проведенной работы было выявлено 7 новых локусов, ассоциированных с ишемическим инсультом (rs 1842993, rs2243684, rs6905808, rs241698, rs6506070, rs4487900, rs4077515). Наиболее сильная ассоциация показана в рамках доминантной модели наследования для ДНК-маркера rsl842993, расположенного на хромосоме 7р11.2 (р=2.86х10"8). Кроме того, не было обнаружено достоверных ассоциаций с локусами, для которых были показаны ассоциации с острым инсультом или его подтипами в других полногеномных ассоциативных исследованиях.

Таким образом, полученные данные подтверждают, с одной стороны, участие ряда генетических систем в определении риска развития различных вариантов острого инсульта. С другой стороны, сравнение полученных данных с данными, имеющимися в литературе, указывает на крайне высокую гетерогенность таких генетических факторов и вовлеченность в патогенез острого инсульта в разных исследованиях разных ДНК-маркеров. Это можно объяснить с одной стороны, этнической неоднородностью выборок в различных исследованиях. Частоты генотипов ДНК-маркеров, для которых были показаны ассоциации с риском развития инсульта, могут в значительной степени варьировать в различных популяциях, и, соответственно, различается и величина их вклада в патогенез заболевания. Кроме того, для различных этнических групп генетические факторы риска развития заболевания могут отличаться. С другой стороны, во многих исследованиях отсутствует четкое разделение пациентов по типу инсульта. Вероятно, за различные патогенетические варианты инсульта могут отвечать различные гены-кандидаты. Так, например, в данной работе было показано, что полиморфизмы SG13S114 и SG13S25 в гене ALOX5AP вносят вклад в риск развития ишемического инсульта и не оказывают влияние на патогенез геморрагического. А полиморфизмы SG13S32 гена ALOX5AP и SNP41 гена PDE4D, напротив, показали ассоциацию с риском развития геморрагического инсульта. Кроме того, следует учитывать и подтипы ишемического инсульта. Так, патогенез атеротромботического подтипа и кардиоэмболического существенно различаются, а, следовательно, и генетические факторы риска могут быть разными. Учитывая все вышеизложенное, необходимо продолжение работы по поиску ДНК-маркеров риска развития острого инсульта и его подтипов, с учетом популяционной стратификации формируемых выборок и необходимостью более строго подхода к клиническому описанию больных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бондаренко, Елена Александровна, Москва

1. Баранов B.C. Геномика на пути к предиктивной медицине // Acta naturae. 2009. -№ 3. - С. 77-88.

2. Белова Л.А. Ангиотензин II-образующие ферменты // Биохимия. 2000. - Т.65. -№12.-С. 1589-1599.

3. Воронина E.H., Филипенко М.Л., Сергеевичев Д.С., Пикалов И.В. Мембранные рецепторы тромбоцитов: функции и полиморфизм // Вестник ВОГиС. 2006. - Т. 10. -№ 3. - С. 553-564.

4. Гомазков O.A. Пептиды в кардиологии // Биохимия. Физиология. Патология. Информация. Анализ. М.: Материк Альфа, 2000. - 143с.

5. Гусев Е.И., Коновалов А.Н., Скворцова В.И., Гехт А.Б. Неврология. Национальное руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 1040с.

6. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Современные представления о лечении острого церебрального инсульта // Consilium medicum. 2000. - Т. 2. - №2.

7. Елисеева Ю.Е. Ангиотензин-превращающий фермент, его физиологическая роль // Вопросы медицинской химии. 2001. - № 1.

8. Зубаиров Д. М. Почему свертывается кровь? // СОЖ. 1997. - №3. - С. 46-52.

9. Милосердова О.В., Сломинский П.А., Татарская JI.A. и др. Полиморфные варианты генов ангиотензиногена и ангиотензин-превращающего фермента у Якутов. Отсутствие ассоциации с уровнем кровяного давления // Генетика. 2001. - Т.37. - №5. - С.712 - 715.

10. Мустафинова O.E., Тхаркахова З.Н., Бикмеева A.M. и др. Полиморфизм гена ангиотензинпревращающего фермента и риск мультифакториальных заболеваний // Медицинская генетика. 2002. - Т.1. - №5. - С. 212-220.

11. П.Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. М.: Медиа Сфера, 2002.-С. 166-180, 191-194.

12. Скворцова В.И., Евзельман М.А. Ишемический инсульт. Орел, 2006. - 404 с.

13. Скворцова В.И., Лимборская С.А., Сломинский П.А. и др. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у больных с ишемической болезнью головного мозга // Инсульт. 2001. -№3. С. 21-27.

14. Скворцова В.И., Стаховская Л.В., Айриян Н.Ю. Эпидемиология инсульта в Российской Федерации // Системные гипертензии. 2005. - Т.7. - №1.157

15. Струкова С.М. Современные представления о механизмах свертывания крови // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. 2002. - № 1.

16. Суслина З.А., Варакин Ю.Я., Верещагин Н.В. Сосудистые заболевания головного мозга. Эпидемиология. Основы профилактики. М.: «МЕДпресс-информ», 2006. -256с.

17. Ткачук В.А. Клиническая биохимия. М.: «ГЕОТАР-МЕД», 2004. 515с.

18. Шадрина М.И., Сломинский П.А., Милосердова О.В. и др. Анализ полиморфизма гена ангиотензинпревращающего фермента у больных ишемической болезнью сердца в московской популяции // Генетика. 2001. - Т.37. - №4. - С. 540 - 544.

19. Шулутко Б.И. Артериальная гипертензия. СПб.: Гиппократ, 2001. - 382с.

20. Afshar-Kharghan V., Li С., Khoshnevis-Asl М., Lopez J.A. Kozak sequence polymorphism in the glycoprotein (GP) lb alpha gene is a major determinant of the plasma membrane levels of the platelet GPIb-IX-V complex // Blood. 1999. - Vol. 94. - P.186-191.

21. Agerholm-Larsen В., Nordestgaard B.G., Tybjaerg-Hansen A. ACE gene polymorphism in cardiovascular disease: meta-analyses of small and large studies in whites // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2000 - Vol. 20(2). - P.484-492.

22. Akar N., Akar E., Yilmaz E., Deda G. Plasminogen activator inhibitor -1 4G/5G polymorphism in Turkish children with cerebral infarct and effect on factor V 1691 A mutation // J Child. Neurol. 2001. - Vol.16. - P.294-295.

23. Anderson C. D., Nails M.A., Biffi A. et al. The effect of survival bias on case-control genetic association studies of highly lethal diseases // Circ. Cardiovasc. Genet. 2011. -Vol. 4.-P. 188-196.

24. Ariyaratnam R., Casas J.P., Whittaker J. et al. Genetics of ischemic stroke among persons of non-European descent: a meta-analysis of eight genes involving approximately 32,500 individuals // PLoS Med. 2007. - Vol. 4(4). P.728-736.

25. Artavanis-Tsakonas S., Matsuno K., Fortini M.E. Notch signaling // Science. 1995. -Vol. 268(5208). P.225-232.

26. Aznar J., Mira Y., Vaya A. et al. Factor V Leiden and prothrombin G20210A mutations in young adults with cryptogenic ischemic stroke // Thromb. Haemost. 2004. - Vol. 91(5).-P. 1031-1034.

27. Baker R.I., Eikelboom J., Lofthouse E. et al. Platelet glycoprotein Ibalpha Kozak polymorphism is associated with an increased risk of ischemic stroke // Blood. 2001. -Vol. 98(1). P.36-40.

28. Bakker H., Tans G., Janssen-Claessen T. et al. The effect of phospholipids, calcium ions and protein S on rate constants of human factor Va inactivation by activated human protein C // Eur. J. Biochem. 1992. - Vol. 208(1). - P.171-178.

29. Banerjee I., Gupta V., Ganesh S. Association of gene polymorphism with genetic susceptibility to stroke in Asian populations: a meta-analysis // J Hum. Genet. 2007. -V. 52(3). -P.205-219.

30. Barley J., Blackwood A., Miller M. et al. Angiotensin converting enzyme gene I/D polymorphism, blood pressure and the renin-angiotensin system in Caucasian and Afro-Caribbean peoples // J Hum. Hypertens. 1996. - Vol. 10(1). - P.31-35.

31. Berger K., Stogbauer F., Stoll M. et al. The glu298asp polymorphism in the nitric oxide synthase 3 gene is associated with the risk of ischemic stroke in two large independent case-control studies // Hum. Genet. 2007. - Vol. 121(2). - P. 169-178.

32. Bersano A., Ballabio E., Bresolin N. et al. Genetic polymorphisms for the study of multifactorial stroke // Hum. Mutat. 2008. - Vol. 29(6) - P. 776-795.

33. Bertin J., Guo Y., Wang L. et al. CARD9 is a novel caspase recruitment domain-containing protein that interacts with BCL10/CLAP and activates NF-kappa B // J Biol. Chem. 2000. - Vol. 275(52). - P. 41082-41086.

34. Bertina R.M., Koeleman B.P.C., Koster T. et al. Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C // Nature. 1994 - Vol. 369 (6475). -P. 64-67.

35. Bevan S., Markus H. The genetics of stroke // ACNR. 2004. - Vol. 4(4). - P. 9-11.

36. Bevan S., Porteous L., Sitzer M., Markus H.S. Phosphodiesterase 4D gene, ischemic stroke, and asymptomatic carotid atherosclerosis // Stroke. 2005. - Vol. 36(5). -P.949-953.

37. Bilguvar K., Yasuno K., Niemela M. et al. Susceptibility loci for intracranial aneurysm in European and Japanese populations // Nat. Genet. 2008 - Vol. 40(12). - P. 14721477.

38. Boncoraglio G.B., Bodini A., Brambilla C. et al. An effect of the PAI-1 4G/5G polymorphism on cholesterol levels may explain conflicting associations with myocardial infarction and stroke // Cerebrovasc. Dis. 2006. - Vol. 22(2-3). - P. 191195.

39. Boysen G., Nyboe J., Appleyard M. et al. Stroke incidence and risk factors for stroke in Copenhagen, Denmark // Stroke. 1988. - Vol. 19(11). - P. 1345-1353.

40. Brenner D., Labreuche J., Poirier O. et al. Renin-angiotensin-aldosterone system in brain infarction and vascular death // Ann. Neurol. 2005. - Vol. 58(1). - P. 131-138.

41. Broderick J.P., Viscoli C.M., Brott T. et al. Major risk factors for aneurysmal subarachnoid hemorrhage in the young are modifiable // Stroke. 2003. - Vol. 34(6). -P.1375-1381.

42. Brophy V.H., Ro S.K., Rhees B.K. et al. Association of phosphodiesterase 4D polymorphisms with ischemic stroke in a US population stratified by hypertension status // Stroke. 2006. - Vol. 37(6). - P. 1385-1390.

43. Brott T.G., Adams H.P., dinger C.P. et al. Measurements of acute cerebral infarction: a clinical examination scale // Stroke. 1989. - Vol.20(7). - P. 864 - 870.

44. Brown M.S., Anderson R.G., Goldstein J.L. Recycling receptors: the round-trip itinerary of migrant membrane proteins // Cell. 1983. - Vol. 32(3). - P. 663-667.

45. Brown R.D., Whisnant J.P., Sicks J.D. et al. Stroke incidence, prevalence, and survival: secular trends in Rochester, Minnesota, through 1989 // Stroke. 1996. - Vol. 27(3). -P. 373-380.

46. Burzotta F., Di Castelnuovo A., Amore C. et al. 4G/5G promoter PAI-1 gene polymorphism is associated with plasmatic PAI-1 activity in Italians: a model of geneenvironment interaction // Thromb. Haemost. 1998. - Vol. 79(2). - P. 354-358.

47. Buyru N., Altinisik J., Somay G., Ulutin T. Factor V Leiden mutation in cerebrovascular disease // Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2005. - Vol. 11(3). - P. 339342.

48. Cambien F., Poirier O., Lecerf L. et al. Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction // Nature. 1992. - Vol. 359(6396). - P. 641-644.

49. Camire R.M., Pollak E.S., Kaushansky K., Tracy P.B. Secretable human platelet-derived factor V originates from the plasma pool // Blood. 1998. - Vol. 92(9). - P. 3035-3041.

50. Carmeliet P., Stassen J.M., Schoonjans L. et al. Plasminogen activator inhibitor-1 gene-deficient mice. II. Effects on hemostasis, thrombosis, and thrombolysis // J Clin. Invest. 1993. - Vol. 92(6). - P. 2756-2760.

51. Carter A.M., Catto A.J., Bamford J.M., Grant P.J. Platelet GPIIIa and GPIb variable number tandem repeat polymorphisms and markers of platelet activation in acute stroke //Arterioscl. Thromb. Vase. Biol. 1998.-Vol. 18(7).-P. 1124-1131.

52. Carter A.M., Sachchithananthan M., Stasinopoulos S. et al. Prothrombin G20210A is a bifunctional gene polymorphism // Thromb. Haemost. 2002. - Vol. 87(5). - P. 84653.

53. Casas J.P., Hingorami A.D., Bautista L.E., Sharma P. Meta-analysis of genetic studies in ischemic stroke: thirty-two genes involving approximately 18,000 cases and 58,000 controls // Arch. Neurol. 2004. - Vol. 61(11). - P. 1652-1661.

54. Catto A.J., Carter A.M., Stickland M. et al. Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) 4G/5G promoter polymorphism and levels in subjects with cerebrovascular disease // Thromb. Haemost. 1997. - Vol. 77(4). - P. 730-734.

55. Ceelie H., Spaargaren-van Riel C.C., Bertina R.M., Vos H.L. G20210A is a functional mutation in the prothrombin gene; effect on protein levels and 3'-end formation // J Thromb. Haemost. 2004. - Vol. 2(1). - P. 119-127.

56. Cesari M., Sartori M.T., Patrassi G.M. et al. Determinants of plasma levels of plasminogen activator inhibitor-1: a study of normotensive twins // Arterioscler. Thromb. Vascl. Biol. 1999. - Vol. 19(2). P. 316-320.

57. Chen G.B., Xu Y., Xu H.M. et al. Practical and theoretical considerations in study design for detecting gene-gene interactions using MDR and GMDR approaches // PLoS One.-2011.-Vol. 6(2). P. 1-9.

58. Cheng C.H., Eng H.L., Chang C.J. et al. 4G/5G promoter polymorphism of plasminogen activator inhibitor-1, lipid profiles, and ischemic stroke // J Lab. Clin. Med.-2003.-Vol. 142(2).-P. 100-105.

59. Chesney C.M., Pifer D., Colman R.W. Subcellular localization and secretion of factor V from human platelets // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1981. Vol. 78(8). - P. 51805184.

60. Chiu H.C., Schick P.K., Colman R.W. Biosynthesis of factor V in isolated guinea pig megakaryocytes // J Clin. Invest. 1985. Vol. 75(2). P. 339-346.

61. Cipollone F., Mezzetti A., Fazia M.L. et al. Association between 5-lipoxygenase expression and plaque instability in humans // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2005. -Vol. 25(8).-P. 1665-1670.

62. Cohn A.C., Kotschet K., Veitch A. et al. Novel ophthalmological features in hereditary endotheliopathy with retinopathy, nephropathy and stroke syndrome // Clin. Experiment. Ophthalmol. 2005. - Vol. 33(2). - P. 181-183.

63. Dahlback B., Hildebrand B. Inherited resistance to activated protein C is corrected by anticoagulant cofactor activity found to be a property of factor V // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1994. Vol. 91(4). - P. 1396-1400.

64. Dalma-Weiszhausz D.D., Warrington J., Tanimoto E.Y., Miyada C.G. The affymetrix GeneChip platform: an overview // Methods Enzymol. 2006. Vol. 410. - P. 3-28.

65. Dawson S., Hamsten A., Wiman B. et al. Genetic variation at the plasminogen activator inhibitor-1 locus is associated with altered levels of plasminogen activator inhibitor-1 activity // Arterioscler. Thromb. 1991. Vol. 11(1). - P. 183-190.

66. Degen S.J., Davie E.W. Nucleotide sequence of the gene for human prothrombin // Biochemistry. 1987. - Vol. 26(19). P. 6165-6177.74. del Zoppo G.J. The role of platelets in ischemic stroke // Neurology. 1998. Vol. 51(3 suppl. 3). P. S9 -14.

67. Diaz J.F., Hachinski V.C., Pederson L.L., Donald A. Aggregation of multiple riskfactors for stroke in siblings of patients with brain infarction and transient ischemic attacks // Stroke. 1986. - Vol. 17(6). - P. 1239-1242.

68. Dichgans M., Ludwig H., Muller-Hocker J. et al. Small in-frame deletions and missense mutations in CADASIL: 3D models predict misfolding of Notch3 EGF-like repeat domains // Eur. J Hum. Genetics. 2000. - Vol. 8(4). - P. 280-285.

69. Dikmen M., Giines HV., Degirmenci I. Are the angiotensin-converting enzyme gene and activity risk factors for stroke? // Arq. Neuropsiquiatr. 2006. - Vol. 64(2A). - P. 211-216.

70. Domingues-Montanari S., Mendioroz M., del Rio-Espinola A. et al. Genetics of stroke: a review of recent advances // Expert Rev. Mol. Diagn. 2008. - Vol. 8(4). - P. 495513.

71. Ehrlich H.J., Gebbink R.K., Preissner K.T. et al. Thrombin neutralizes plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) that is complexed with vitronectin in the endothelial cell matrix//J Cell. Biol. 1991.-Vol. 115(6).-P. 1773-1781.

72. Eriksson P., Kallin В., van't Hooft F.M. et al. Allele-specific increase in basal transcription of the plasminogen-activator inhibitor 1 gene is associated with myocardial infarction // Proc. Natl. Acad. Sei. U S A. 1995. - Vol. 92(6). - P. 18511855.

73. Esther C.R. Jr., Howard T.E., Marino E.M. et al. Mice lacking angiotensin-converting enzyme have low blood pressure, renal pathology, and reduced male fertility // Lab. Invest. 1996. - Vol. 74(5). - P. 953-965.

74. Evans J.F., Ferguson A.D., Mosley R.T. et al. What's all the FLAP about?: 5-lipoxygenase-activating protein inhibitors for inflammatory diseases // Trends Pharmacol. Sei. 2008. - Vol. 29(2). - P. 72-78.

75. Eyries M., Michaud A., Deinum J. et al. Increased shedding of angiotensin-converting enzyme by a mutation identified in the stalk region // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276(8).-P. 5525-5532.

76. Faure-Delanef L., Baudin B., Beneteau-Burnat B. et al. Plasma concentration, kinetic constants, and gene polymorphism of angiotensin I-converting enzyme in centenarians // Clin. Chem. 1998. - Vol. 44(10). - P. 2083-2087.

77. Fidani L., Clarimon J., Goulas A. et al. Association of phosphodiesterase 4D gene GO haplotype and ischaemic stroke in a Greek population // Eur. J. Neurol. 2007. - Vol. 14(7). P. 745-749.

78. Fitzgerald L.A., Philips D.R. Platelet membrane glycoproteins // Hemostasis and Thrombosis: Basic Principles and Clinical Practice / Ed. R.W. Colman, J. Hirsh, V.J. Marder, E.W. Saizman. Philadelphia, 2nd ed. - 1987. - P. 572-593.

79. Folsom A.R., Prineas R.J., Kaye S.A., Munger R.G. Incidence of hypertension and stroke in relation to body fat distribution and other risk factors in older women // Stroke.- 1990. Vol. 21(5). - P. 701-706.

80. Fox J.E. Platelet activation: new aspects // Haemostasis. 1996. - Vol. 26(Suppl 4). -P. 102-131.

81. Fox J.E. The platelet cytoskeleton // Thromb. Haemost. 1993. - Vol. 70(6). - P. 884893.

82. Fox J.E., Lipfer L., Clark E.A. et al. On the role of the platelet membrane skeleton in mediating signal transduction // J Biol. Chem. 1993. - Vol. 268(34). - P. 2597325984.

83. Francis G.S. ACE inhibition in cardiovascular disease // N. Engl. J. Med. 2000. - Vol. 342(3).-P. 201-202.

84. Franco R.F., Trip M.D., ten Cate H. et al. The 20210 G->A mutation in the 3'-untranslated region of the prothrombin gene and the risk for arterial thrombotic disease // Br. J. Haematol. 1999. - Vol. 104(1). - P. 50-54.

85. Frank M.B., Reiner A.P., Schwartz S.M. et al. The Kozak sequence polymorphism of platelet glycoprotein Ibalpha and risk of nonfatal myocardial infarction and nonfatal stroke in young women // Blood. 2001. - Vol. 97(4). - P. 875-879.

86. Funk C.D. Prostaglandins and leukotrienes: advances in eicosanoid biology // Science. -2001.-Vol. 294(5548).-P. 1871-1875.

87. Fuster V., Badimon L., Badimon J.J., Chesebro J.H. The pathogenesis of coronary artery disease and the acute coronary syndromes // N. Engl. J. Med. 1992. - Vol. 326(4).-P. 242-250.

88. Galinsky D., Tysoe C., Brayne C.E. et al. Analysis of the apo E/apo C-I, angiotensin converting enzyme and methylenetetrahydrofolate reductase genes as candidates affecting human longevity // Atherosclerosis. 1997. - Vol. 129(2). - P. 177-183.

89. Gehring N.H., Frede U., Neu-Yilik G. et al. Increased efficiency of mRNA 3' end formation: a new genetic mechanism contributing to hereditary thrombophilia // Nat. Genet. 2001. Vol. 28(4). - P. 389-392.

90. Gewirtz A.M., Keefer M., Doshi K. et al. Biology of human megakaryocyte factor V // Blood. 1986. - Vol. 67(6). - P. 1639-1648.

91. Gillum R.F., Gorelick P.B., Cooper E.S. (eds.) Stroke in Blacks. Karger, Basel, 1999.-230 p.

92. Gilon D., Buonanno F., Kistler J. et al. Lack of evidence of an association between mitral-valve prolapse and stroke in young patients // N. Engl. J. Med. 1999. - Vol. 341(1).-P. 8-13.

93. Giovannoni M.P., Cesari N., Graziano A. et al. Synthesis of pyrrolo2,3-d.pyridazinones as potent, subtype selective PDE4 inhibitors // J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2007. - Vol. 22(3). - P. 309-318.

94. Gormley K., Bevan S., Markus HS. Polymorphisms in genes of the renin-angiotensin system and cerebral small vessel disease // Cerebrovasc. Dis. 2007. - Vol. 23(2-3). -P. 148-155.

95. Gouveia L.O., Sobral J., Vicente A.M. et al. Replication of the CELSR1 association with ischemic stroke in a Portuguese case-control cohort // Atherosclerosis. 2011. -Vol. 217(1).-P. 260-262.

96. Graeber M., Muller U. Recent developments in the molecular genetics of mitochondrial disorders // J. Neurol. Sei. 1998. Vol. 153(2). - P. 251-263.

97. Grau A.J., Ruf A., Vogt A., et al. Increased fraction of circulating activated platelets in acute and previous cerebrovascular ischemia // Thromb. Haemost. 1998. - Vol. 80(2).-P. 298-301.

98. Gretarsdottir S., Sveinbjörnsdottir S., Jonsson H.H. et al. Localization of a susceptibility gene for common forms of stroke to 5ql2 // Am. J. Hum. Genet. 2002. Vol. 70(3).-P. 593-603.

99. Gretarsdottir S., Thorleifsson G., Manolescu A. et al. Risk variants for atrial fibrillation on chromosome 4q25 associate with ischemic stroke // Ann. Neurol. 2008. - Vol. 64(4). - P. 402- 409.

100. Gretarsdottir S., Thorleifsson G., Reynisdottir S.T. et al. The gene encoding phosphodiesterase 4D confers risk of ischemic stroke // Nat Genet. 2003. - Vol. 35(2). -P. 131-138.

101. Gross O., Gewies A., Finger K. et al. Card9 controls a non-TLR signalling pathway for innate anti-fungal immunity // Nature. 2006. - Vol. 442(7103). - P. 651-656.

102. Grossmann R., Geisen U., Merati G. et al. Genetic risk factors in young adults with, cryptogenic' ischemic cerebrovascular disease // Blood Coagul. Fibrinolysis. 2002. -Vol. 13(7).-P. 583-590.

103. Gschwendtner A., Bevan S., Cole J.W. et al. Sequence variants on chromosome 9p21.3 confer risk for atherosclerotic stroke // Ann. Neurol. 2009. - Vol. 65(5). - P. 531-539.

104. Gudbjartsson D.F., Holm H., Gretarsdottir S. et al. A sequence variant in ZFHX3 on 16q22 associates with atrial fibrillation and ischemic stroke // Nat. Genet. 2009. -Vol. 41(8).-P. 876-878.

105. Gulcher J.R., Gretarsdottir S., Helgadottir A. et al. Genes contributing to risk for common forms of stroke // Trends Mol. Med. 2005. - Vol. 11(5). - P. 217-224.

106. Hakonarson H. Role of FLAP and PDE4D in myocardial infarction and stroke: target discovery and future treatment options // Curr. Treat. Options Cardiovasc. Med. 2006. -Vol. 8(3).-P. 183-192.

107. Hakonarson H., Thorvaldsson S., Helgadottir A. et al. Effects of a 5-lipoxygenase-activating protein inhibitor on biomarkers associated with risk of myocardial infarction: a randomized trial // JAMA. 2005. - Vol. 293(18). - P. 2245-2256.

108. Hamsten A., de Faire U., Walldius G. et al. Plasminogen activator inhibitor in plasma: Risk factor for recurrent myocardial infarction // Lancet. 1987. - Vol. 2(8549).-P. 3-9.

109. Hankey G.J. Long-term outcome after ischaemic stroke/transient ischaemic attack // Cerebrovasc. Dis. 2003. - Vol. 16(suppl. 1). - P. 14-19.

110. Harker L.A. Therapeutic inhibition of platelet function in stroke // Cerebrovasc. Dis.- 1998.-Vol. 8(suppl. 5).-P. 8-18.

111. Hata J., Matsuda K., Ninomiya T. et al. Functional SNP in an Spl-binding site of AGTRL1 gene is associated with susceptibility to brain infarction // Hum. Mol. Genet.- 2007. Vol. 16(6). - P. 630-639.

112. Heagerty A.M. Angiotensin II: vasoconstrictor or growth factor? // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1991.-Vol. 18(2).-P. 14-19.

113. Helgadottir A., Gretarsdottir S., St Clair D. et al. Association between the gene encoding 5-lipoxygenase-activating protein and stroke replicated in a Scottish population // Am. J. Hum. Genet. 2005. - Vol. 76(3). - P. 505-509.

114. Helgadottir A., Manolescu A., Thorleifsson G. et al. The gene encoding 5-lipoxygenase activating protein confers risk of myocardial infarction and stroke // Natl. Genet. 2004. - Vol. 36(3). - P. 233-239.

115. Helgadottir A., Thorleifsson G., Manolescu A. et al. A common variant on chromosome 9p21 affects the risk of myocardial infarction // Science. 2007. - Vol. 316(5830).-P. 1491-1493.

116. Herman B., Schmitz P.I., Leyten A.C. et al. Multivariate logistic analysis of risk factors for stroke in Tilburg, The Netherlands // Am. J. Epidemiol. 1983. Vol. 118(4). -P. 514-525.

117. Hindorff L.A., Schwartz S.M., Siscovick D.S. et al. The association of PAI-1 promoter 4G/5G insertion/ deletion polymorphism with myocardial infarction and stroke in young women // J. Cardiovasc. Risk. 2002. - Vol. 9(2). P. 131-137.

118. Houslay M.D., Adams D.R. PDE4 cAMP phosphodiesterases: modular enzymes that orchestrate signaling cross-talk, desensitization and compartmentalization // Biochem. J. -2003.-Vol. 370(Pt 1).-P. 1-18.

119. Howard G., Wagenknecht L.E., Cai J. et al. Cigarette smoking and other risk factors for silent cerebral infarction in the general population // Stroke. 1998. Vol. 29(5). - P. 913-917.

120. Hsieh M.S., Yu S.C., Chung W.T. et al. Phosphodiesterase 4D (PDE4D) gene variants and risk of ischemic stroke in the Taiwanese population // Lab. Medicine. -2009. Vol. 40(2). - P. 87-90.

121. Hsieh M.S., Yu S.C., Hsueh Y.M. et al. Gene Variants of Arachidonate 5-Lipoxygenase-Activating Protein (ALOX5AP) and Risks of Ischemic Stroke in the Taiwanese Population // Clinical Molecular Medicine. 2008. - Vol. 1(1). - P. 1-5.

122. Hsu Y.M., Zhang Y., You Y. et al. The adaptor protein CARD9 is required for innate immune responses to intracellular pathogens // Nat. Immunol. 2007. - Vol. 8(2). - P. 198-205.

123. Hynes R.O. Integrins: a family of cell surface receptors // Cells. 1987. - Vol. 48(4). -P. 549-554.

124. Ikram M.A., Seshadri S., Bis J.C. et al. Genomewide association studies of stroke // N. Engl. J. Med. 2009. - Vol. 360(17). - P. 1718-1728.

125. Indolfi C., Awedimento E.V., Di Lorenzo E. et al. Activation of cAMP-PKA signaling in vivo inhibits smooth muscle cell proliferation induced by vascular injury // Nat. Med. 1997. - Vol. 3(7). - P. 775-779.

126. Indolfi C., Di Lorenzo E., Rapacciuolo A. et al. 8-chloro-cAMP inhibits smooth muscle cell proliferation in vitro and neointima formation induced by balloon injury in vivo// J. Am. Coll. Cardiol. 2000. - V. 36(1). - P. 288-293.

127. Inohara N., Ogura Y., Fontalba A. et al. Host recognition of bacterial muramyl dipeptide mediated through NOD2. Implications for Crohn's disease // J. Biol. Chem.2003. Vol. 278(8). - P. 5509-5512.

128. International Stroke Genetics Consortium, Wellcome Trust Case-Control Consortium 2. Failure to validate association between 12pl3 variants and ischemic stroke // N. Engl. J. Med. 2010. - Vol. 362(16). - P. 1547-1550.

129. Isozumi K. Obesity as a risk factor for cerebrovascular disease // Keio J. Med.2004.-Vol. 53(1).-P. 7-11.

130. Jacob C., Martin-Chouly C., Lagente V. Type 4 phosphodiesterasedependent pathways: Role in inflammatory processes // Therapie. 2002. - Vol. 57(2). - P. 163168.

131. Jamieson G.A. Pathophysiology of platelet thrombin receptors // Thromb. Haemost. -1997. Vol. 78(1). - P. 242-246.

132. Jen J., Cohen A.H., Yue Q. et al. Hereditary endotheliopathy with retinopathy, nephropathy, and stroke (HERNS) // Neurology. 1997. - Vol. 49(5). P. 1322-1330.

133. Jenny R.J., Pittman D.D., Toole J.T. et al. Complete cDNA and derived amino acid sequence of human factor V // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1987. Vol. 84(14). P. 4846-4850.

134. Jian M., Cao X., Huang J. et al. Polymorphism of angiotensin I converting enzyme gene in the older Chinese: linked to ambulatory blood pressure levels and circadian blood pressure rhythm // Int. J. Cardiol. 1996. - Vol. 55(1). - P. 33-40.

135. Jood K., Ladenvall P., Tjarnlund-Wolf A. et al. Fibrinolytic gene polymorphism and ischemic stroke // Stroke. 2005. - Vol. 36(10). - P. 2077-2081.

136. Joshipura K.J., Ascherio A., Manson J.E. et al. Fruit and vegetable intake in relation to risk of ischemic stroke // JAMA. 1999. - Vol. 282(13). - P. 1233-1239.

137. Jousilahti P., Rastenyte D., Tuomilehto J. et al. Parental history of cardiovascular disease and risk of stroke. A prospective follow-up of 14371 middle-aged men and women in Finland // Stroke. 1997. - Vol. 28(7). - P. 1361-1366.

138. Joutel A., Chabriat H., Vahedi K. et al. Splice site mutation causing a seven amino acid Notch3 in-frame deletion in CADASIL // Neurology. 2000. Vol. 54(9). - P. 1874-1875.

139. Joutel A., Chabriat H., Vahedi K. et al. Splice site mutation causing a seven amino acid Notch3 in-frame deletion in CADASIL // Neurology. 2000. Vol. 54(9). - P. 1874-1875.

140. Joutel A., Ducros A., Alamowitch S. A human homolog of bacterial acetolactate synthase genes maps within the CADASIL critical region // Genomics. 1996. - Vol. 38(2).-P. 192-198

141. Juul K., Tybjaerg-Hansen A., Steffensen R. et al. Factor V Leiden: The Copenhagen City Heart Study and 2 meta-analyses // Blood. 2002. - Vol. 100(1). - P. 3-10.

142. Kajimoto K., Shioji K., Ishida C. et al. Validation of the association between the gene encoding 5-lipoxygenase-activating protein and myocardial infarction in a Japanese population // Circ. J. 2005. - Vol. 69(9). - P. 1029-1034.

143. Kalafatis M., Rand M.D., Mann K.G. The mechanism of inactivation of human factor V and human factor Va by activated protein C // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269(50). -P. 31869-31880.

144. Kamitani A., Rakugi H., Higaki J. et al. Enhanced predictability of myocardial infarction in Japanese by combined genotype analysis // Hypertension. 1995. - Vol. 25(5).-P. 950-953.

145. Kane W.H., Davie E.W. Blood coagulation factors V and VIII: structural and functional similarities and their relationship to hemorrhagic and thrombotic disorders // Blood. 1988.-Vol. 71(3).-P. 539-555.

146. Kannel W.B., D'Agostino R.B., Belanger A.J. Fibrinogen, cigarette smoking, and risk of cardiovascular disease: insights from the Framingham Study // Am. Heart. J. -1987.-Vol. 113(4).-P. 1006-1010.

147. Karagiannis A., Balaska K., Tziomalos K. et al. Lack of an association between angiotensin converting enzyme gene polymorphism and peripheral arterial occlusive disease // Vase. Med. 2004. - Vol. 9(3). - P. 189-192.

148. Kargman D.E., Tuck C., Berglund L. et al. Lipid and lipoprotein levels remain stable in acute ischemic stroke: the Northern Manhattan Stroke Study // Atherosclerosis. -1998. Vol. 139(2). - P. 391-399.

149. Kaushal R., Pal P., Alwell K. et al. Association of ALOX5AP with ischemic stroke: a population-based case-control study // Hum. Genet. 2007. - Vol. 121(5). - P. 601607.

150. Kennon B., Petrie J.R., Small M., Connell J.M. Angiotensin-converting enzyme gene and diabetes mellitus // Diabet. Med. 1999. - Vol. 16(6). - P. 448-458.

151. Killy D., Wolf P., Cupples A. et al. Familial aggregation of stroke. The Framingham study // Stroke. 1993. Vol. 24(9). - P. 1366-1371.

152. Kohler H.P., Grant PJ. Plasminogen-activator inhibitor type 1 and coronary artery disease // N. Engl. J. Med. 2000. - Vol. 342(24). - P. 1792-1801.

153. Komitopoulou A., Platokouki H., Kapsimali Z. et al. Mutations and polymorphisms in genes affecting hemostasis proteins and homocysteine metabolism in children with arterial ischemic stroke // Cerebrovasc. Dis. 2006. - Vol. 22(1). - P. 13-20.

154. Kostulas K., Gretarsdottir S., Kostulas V. et al. PDE4D and ALOX5AP genetic variants and risk for Ischemic Cerebrovascular Disease in Sweden // J. Neurol. Sci. -2007. Vol. 263(1-2). - P. 113-117.

155. Krege J.H., John S.W.M., Langenbach L.L. et al. Male-female differences in fertility and blood pressure in ACE-deficient mice // Nature. 1995. - Vol. 375(6527). - P. 146-148.

156. Kubo M., Hata J., Ninomiya T. et al. A nonsynonymous SNP in PRKCH (protein kinase C eta) increases the risk of cerebral infarction // Nat. Genet. 2007. - Vol. 39(2). -P. 212-217.

157. Kurth T., Kase C.S., Berger K. et al. Smoking and risk of hemorrhagic stroke in women // Stroke. 2003. - Vol. 34(12). - P. 2792-2795.

158. Lalouschek W., Endler G., Schillinger M. et al. Candidate genetic risk factors of stroke: results of a multilocus genotyping assay // Clin. Chem. 2007. - Vol. 53(4). - P. 600-605.

159. Lane D.A., Grant P.J. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease // Blood. 2000. - Vol. 95(5). - P. 1517-1532.

160. Lefkovits J., Plow E.F., Topol E.J. Platelet glycoprotein Ilb/IIIa receptors in cardiovascular medicine // N. Engl. J. Med. 1995. - Vol. 332(23). - P. 1553-1559.

161. Lei S.F., Tan L.J., Liu X.G. et al. Genome-wide association study identifies two novel loci containing FLNB and SBF2 genes underlying stature variation // Hum. Mol. Genet.-2009.-Vol. 18(9).-P. 1661-1669.

162. Lemmens R., Buysschaert I., Geelen V. et al. The association of the 4q25 susceptibility variant for atrial fibrillation with stroke is limited to stroke of cardioembolic etiology // Stroke. 2010. - Vol. 41(9). - P. 1850-1857.

163. Leroyer C., Mercier B., Oger E. et al. Prevalence of 20210 A allele of the prothrombin gene in venous thromboembolism patients // Thromb. Haemost. 1998. -Vol. 80(1).-P. 49-51.

164. Libby P. Inflammation in atherosclerosis // Nature. 2002. - Vol. 420(6917). - P. 868-874.

165. Lohmussaar E., Gschwendtner A., Mueller J.C. et al. ALOX5AP gene and the PDE4D gene in a central European population of stroke patients // Stroke. 2005. -Vol. 36(4).-P. 731-736.

166. Lopez J.A. The platelet glycoprotein Ib-IX complex // Blood Coagul. Fibrinolysis. -1994.-Vol. 5(1).-P. 97-119.

167. Lopez J.A., Leung B., Reynolds C.C. et al. Efficient plasma membrane expression of a functional platelet glycoprotein Ib-IX complex requires the presence of its three subunits//J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267(18). - P. 12851-12859.

168. Loskutoff D.J., Sawdey M., Mimuro J. Type 1 plasminogen activator inhibitor // Prog. Hemost. Thromb. 1989. - Vol. 9. - P. 87-115.

169. Lusis A.J. Atherosclerosis // Nature. 2000. - Vol. 407(6801). - P. 233-241.

170. Mahoney F.I., Barthel D.W. Functional evaluation: the Barthel index // Md. State. Med. J. 1965. - Vol. 14. - P. 61-65.

171. Manolio T.A., Kronmal R.A., Burke G.L. et al. Short-term predictors of incident stroke in older adults: the Cardiovascular Health Study // Stroke. 1996. - Vol. 27(9). -P.1479-1486.

172. Mansfield M.W., Stickland M.H., Grant P.J. Plasminogen activator inhibitor-1 promoter polymorphism and coronary artery disease in non-insulin dependent diabetes // Thromb. Haemost. 1995. - Vol. 74(4). - P. 1032-1034.

173. Markus H.S. Stroke Genetics. Oxford University Press, 2003. - 362 p.

174. Martens K., Jaeken J., Matthijs G., Creemers J.W. Multi-system disorder syndromes associated with cystinuria type I // Curr. Mol. Med. 2008. - Vol. 8(6). - P. 544-550.

175. Matarin M., Brown W.M., Scholz S., Simon-Sanchez J. et al. A genome-wide genotyping study in patients with ischaemic stroke: Initial analysis and data release // Lancet. Neurol. 2007. - Vol. 6(5). - P. 414-420.

176. McPherson R., Pertsemlidis A., Kavaslar N. et al. A common allele on chromosome 9 associated with coronary heart disease // Science. 2007. - Vol. 316(5830). - P. 1488-1491.

177. Mehrabian M., Wong J., Wang X. et al. Genetic locus in mice that blocks development of atherosclerosis despite extreme hyperlipidemia // Circ. Res. 2001. -Vol. 89(2).-P. 125-130.

178. Mehta R., Shapiro A.D. Plasminogen activator inhibitor type 1 deficiency // Haemophilia. 2008. - Vol. 14(6).-P. 1255-1260.

179. Meschia J.F., Brott T.G., Brown R.D. et al. Phosphodiesterase 4D and 5-lipoxygenase-activating protein in ischemic stroke // Ann. Neurol. 2005. - Vol. 58(3). -P. 351-361.

180. Meschia J.F., Worrall B.B., Rich S.S. Genetic susceptibility to ischemic stroke // Nat. Rev. Neurol.-2011.-Vol. 7(7).-P. 369-378.

181. Meyr D., Girma J.P. von Willebrand factor: structure and function // Thromb. Haemost. 1993. - Vol. 70(1). - P. 99-104.

182. Moroi M., Jung S.M., Yoshida N. Genetic polymorphism of platelet glycoprotein lb // Blood. 1984. - Vol. 64(3). - P. 622-629.

183. Munshi A., Kaul S. Stroke genetics focus on PDE4D gene // Int. J. Stroke. - 2008. -Vol. 3(3).-P. 188-192.

184. Naghavi M., Libby P., Falk E. et al. From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part I // Circulation. 2003. -Vol. 108(14).-P. 1664-1672.

185. Nakayama T., Asai S., Sato N., Soma M. Genotype and haplotype association study of the STRK1 region on 5ql2 among Japanese: a case-control study // Stroke. 2006. -Vol. 37(1).-P. 69-76.

186. Natowicz M, Kelley RI. Mendelian etiologies of stroke // Ann. Neurol. 1987. -Vol. 22(2).-P. 175-192.

187. Neter J.E., Stam B.E., Kok F.J. et al. Influence of weight reduction on blood pressure: a meta-analysis of randomized controlled trials // Hypertension. 2003. - Vol. 42(5).-P. 878-884.

188. Nicolaes G.A., Dahlback B. Factor V and thrombotic disease: description of a janus-faced protein // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2002. - Vol. 22(4). - P. 530-538.

189. Nilsson-Ardnor S., Wiklund P.G., Lindgren P. et al. Linkage of ischemic stroke to the PDE4D region on 5q in a Swedish population // Stroke. 2005. - Vol. 36(8). - P. 1666-1671.

190. O'Donnell M.J., Xavier D., Liu L. et al. Risk factors for ischaemic and intracerebral haemorrhagic stroke in 22 countries (the INTERSTROKE study): a case-control study // Lancet.-2010.-Vol. 376(9735).-P. 112-123.

191. Owen C.A. Jr., Bowie E.J. Generation of coagulation factors V, XI, and XII by the isolated rat liver // Haemostasis. 1977. - Vol. 6(4). - P. 205-212.

192. Paillard F., Chansel D., Brand E. et al. Genotype-phenotype relationships for the renin-angiotensin-aldosterone system in a normal population // Hypertension. 1999. -Vol. 34(3).-P. 423-429.

193. Palmer D., Tsoi K., Maurice D.H. Synergistic inhibition of vascular smooth muscle cell migration by phosphodiesterase 3 and phosphodiesterase 4 inhibitors // Circ. Res. -1998.-Vol. 82(8).-P. 852-861.

194. Panahloo A., Mohamed-Ali V., Lane A. et al. Determinants of plasminogen activator inhibitor-1 activity in treated NIDDM and its relation to a polymorphism in the plasminogen activator inhibitor-1 gene // Diabetes. 1995. - Vol. 44(1). - P. 37-42.

195. Pastores G.M., Lien Y.H. Biochemical and molecular genetic basis of Fabry disease // J. Am. Soc. Nephrol. 2002. - Vol. 13(Suppl. 2). - P. 130-133.

196. Pera J., Slowik A., Dziedzic T. ACE I/D polymorphism in different etiologies of ischemic stroke // Acta Neurol. Scand. 2006. - Vol. 114(5). - P. 320-322.

197. Perez-Ceballos E., Corral J., Alberca I. et al. Prothrombin A19911G and G20210A polymorphisms' role in thrombosis // Br. J. Haematol. 2002. - Vol. 118(2). - P. 610614.

198. Peterson D.M., Stathopoulos N.A., Giorgio T.D. et al. Shear-induced platelet aggregation requires von Willebrand factor and platelet glycoproteins lb and Ilb-IIIa // Blood. 1987. - Vol. 69(2). - P. 625- 628.

199. Petrovic D., Milanez T., Kobal J. et al. Prothrombotic gene polymorphisms and atherothrombotic cerebral infarction // Acta. Neurol. Scand. 2003. - Vol. 108(2). -P. 109-113.

200. Pezzini A., Grassi M., Iacoviello L. et al. Inherited thrombophilia and stratification of ischaemic stroke risk among users of oral contraceptives // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 2007. - Vol. 78(3). - P. 271-276.

201. Podor T.J., Loskutoff D.J. Immunoelectron microscopic localization of type 1 plasminogen activator inhibitor in the extracellular matrix of transforming growth factor-beta-activated endothelial cells // Ann. NY Acad. Sci. 1992. - Vol. 667. - P. 46-.49

202. Pointon J.J., Harvey D., Karaderi T. et al. Elucidating the chromosome 9 association with AS; CARD9 is a candidate gene // Genes Immun. 2010. - Vol. 11(6). - P. 490496.

203. Pollak E.S., Lam H.S., Russell J.E. The G20210A mutation does not affect the stability of prothrombin mRNA in vivo // Blood. 2002. - Vol. 100(1). - P. 359-362.

204. Prisco D., Chiarantini E., Boddi M. et al. Predictive value for thrombotic disease of plasminogen activator inhibitor-1 plasma levels // Int. J. Clin. Lab. Res. 1993. - Vol. 23(2).-P. 78-82.

205. Psaty B.M., Smith N.L., Siscovick D.S. et al. Health outcomes associated with antihypertensive therapies used as first-line agents. A systematic review and metaanalysis // JAMA. 1997. - Vol. 277(9). - P. 739 -745.

206. Quarta G., Stanzione R., Evangelista A. et al. Phosphodiesterase 4D and 5-lipoxygenase activating protein genes and risk of ischemic stroke in Sardinians // Eur. J. Hum. Genet. 2009. - Vol. 17(11).-P. 1448-1453.

207. Reiner A.P., Siscovick D.S., Rosendaal F.R. Hemostatic risk factors and arterial thrombotic disease // Thromb. Haemost. 2001. - Vol. 85(4). - P. 584-595.

208. Reiner A.P., Siscovick D.S., Rosendaal F.R. Platelet glycoprotein gene polymorphisms and risk of thrombosis: facts and fancies // Rev. Clin. Exp. Hematol. -2001. Vol. 5(3). - P. 262-287.

209. Rigat B., Hubert C., Alhenc-Gelas F. et al. An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels // J. Clin. Invest. 1990. - Vol. 86(4). - P. 1343-1346.

210. Robinson F.L., Dixon J.E. The phosphoinositide-3-phosphatase MTMR2 associates with MTMR13, a membrane-associated pseudophosphatase also mutated in type 4B Charcot-Marie-Tooth disease // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280(36). - P. 3169931707.

211. Rodriguez S., Gaunt T.R., Day I.N. Hardy-Weinberg equilibrium testing of biological ascertainment for Mendelian randomization studies // Am. J Epidemiol. -2009.-Vol. 169(4).-P. 505-514.

212. Roest M., van der Schouw Y.T., Banga J.D. et al. Plasminogen activator inhibitor 4G polymorphism is associated with decreased risk of cerebrovascular mortality in older women // Circulation. 2000. - Vol. 101(1). - P. 67-70.

213. Rosamond W.D., Folsom A.R., Chambless L.E. et al. Stroke incidence and survival among middle-aged adults: 9-year follow-up of the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) cohort // Stroke. 1999. - Vol. 30(4). - P. 736 -743.

214. Rosand J., Bayley N., Rost N., de Bakker P.I. Many hypotheses but no replication for the association between PDE4D and stroke // Nat. Genet. 2006. - Vol. 38(10). - P. 1091-1092.

215. Rosendaal F.R., Doggen C.J., Zivelin A. et al Geographic distribution of the 20210 G to A prothrombin variant // Thromb Haemost. 1998. - Vol. 79(4). - P. 706-708.

216. Rosendaal F.R., Koster T., Vandenbroucke J.P., Reitsma P.H. High risk of thrombosis in patients homozygous for factor V Leiden (activated protein C resistance) //Blood.- 1995. Vol. 85(6).-P. 1504-1508.

217. Rosing J., Hoekema L., Nicolaes G.A. et al. Effects of protein S and factor Xa on peptide bond cleavages during inactivation of factor Va and factor VaR506Q by activated protein C // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270(46). - P. 27852-27858.

218. Rubanyi G.M., Polokoff M.A. Endothelins: molecular biology, biochemistry, pharmacology, physiology, and pathophysiology // Pharmacol. Rev. 1994. - Vol. 46(3).-P. 325-415.

219. Rubattu S., Di Angelantonio E., Nitsch D. et al. Polymorphisms in prothrombotic genes and their impact on ischemic stroke in a Sardinian population // Thromb"Haemost.-2005.-Vol. 93(6).-P. 1095-1100.

220. Rundek T., Sacco R.L. Risk factor management to prevent first stroke // Neurol. Clin. -2008.-Vol. 26(4).-P. 1007-1045.

221. Sacco R.L., Elkind M., Boden-Albala B. et al. The protective effect of moderate alcohol consumption on ischemic stroke // JAMA. 1999. - Vol. 281(1). - P. 53-60.

222. Saleheen D., Bukhari S., Haider S.R. et al. Association of phosphodiesterase 4D gene with ischemic stroke in a Pakistani population // Stroke. 2005. - Vol. 36(10). - P. 2275-2277.

223. Samani N.J., Erdmann J., Hall A.S. et al. Genomewide association analysis of coronary artery disease // N. Engl. J. Med. 2007. - Vol. 357(5). - P. 443-453.

224. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory, 1989.

225. Schelling P., Fischer H., Ganten D. Angiotensin and cell growth: a link to cardiovascular hypertrophy? // J. Hypertens. 1991. - Vol. 9(1). - P. 3-15.

226. Schleef R.R., Loskutoff D.J. Fibrinolytic system of vascular endothelial cells. Role of plasminogen activator inhibitors // Haemostasis. 1988. - Vol. 18(4-6). - P. 328-341.

227. Schmugge M., Margaret L., Rand J.F. Platelets and von Willebrand factor // Transfusion and Apheresis Sci. 2003. - Vol. 28. - P. 269-277.

228. Schneiderman J., Sawdey M.S., Keeton M.R. et al. Increased type I plasminogen activator inhibitor gene expression in atherosclerotic human arteries // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - Vol. 89(15). - P. 6998-7002.

229. Shen L., Dahlback B. Factor V and protein S as synergistic cofactors to activated protein C in degradation of factor Villa // J. Biol. Chem. 1994. Vol. 269(29). - P. 18735-18738.

230. Shinton R., Beevers G. Meta-analysis of relation between cigarette smoking and stroke // BMJ. 1989. - Vol. 298(6676). - P. 789 -794.

231. Sirgo G., Perez-Vela J.L., Morales P. et al. Association between 4G/5G polymorphism of the plasminogen activator inhibitor 1 gene with stroke or encephalopathy after cardiac surgery // Intensive Care Med. 2006. - Vol. 32(5). - P. 668-675.

232. Slooter A.J., Rosendaal F.R., Tanis B.C. et al. Prothrombotic conditions, oral contraceptives, and the risk of ischemic stroke // J. Thromb. Haemost. 2005. - Vol. 3(6).-P. 1213-1217.

233. Slowik A., Turaj W., Dziedzic T. DD genotype of ACE gene is a risk factor for intracerebral hemorrhage //Neurology. 2004. - Vol. 63(2). - P. 359-361.

234. Song Q., Cole J.W., O'Connell J.R. et al. Phosphodiesterase 4D polymorphisms and the risk of cerebral infarction in a biracial population: the Stroke Prevention in Young Women Study // Hum. Mol. Genet. 2006. - Vol. 15(16). - P. 2468-2478.

235. Sonoda A., Murata M., Ikeda Y. et al. Stroke and platelet glycoprotein Iba polymorphisms // Thromb. Haemost. 2001. - Vol. 85(3). - P. 573-574.

236. Sonoda A., Murata M., Ito D. et al. Association between platelet glycoprotein Ibalpha genotype and ischemic cerebrovascular disease // Stroke. 2000. - Vol. 31(2). - P. 493^197.

237. Soubrier F., Alhenc-Gelas F., Hubert C. et al. Two putative active centers in human angiotensin I-converting enzyme revealed by molecular cloning // Proc. Nat. Acad. Sci. 1988. - Vol. 85(24). - P. 9386-9390.

238. Spanbroek R., Grabner R., Lotzer K. et al. Expanding expression of the 5lipoxygenase pathway within the arterial wall during human atherogenesis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - Vol. 100(3). - P. 1238-1243.

239. Staton J.M., Sayer M.S., Hankey G.J. et al. Association between phosphodiesterase 4D gene and ischaemic stroke // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 2006. - Vol. 77(9). -P. 1067-1069.

240. Subbarao K., Jala V.R., Mathis S. et al. Role of leukotriene B4 receptors in the development of atherosclerosis: potential mechanisms // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2004. - Vol. 24(2). - P. 369-375.

241. Sykes T.C.F., Fegan C., Mosquera D. Thrombophilia, polymorphisms, and vascular disease // Mol. Pathol. 2000. - Vol. 53(6). - P. 300-306.

242. Szolnoki Z., Havasi V., Bene J. et al. Endothelial nitric oxide synthase gene interactions and the risk of ischaemic stroke // Acta Neurol. Scand. 2005. - Vol. 111(1).-P. 29-33.

243. Szolnoki Z., Somogyvari F., Kondacs A. et al. Evaluation of the modifying effects of unfavourable genotypes on classical clinical risk factors for ischaemic stroke // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 2003. - Vol. 74(12). - P. 1615-1620.

244. Szolnoki Z., Somogyvari F., Kondacs A. et al. Evaluation of the roles of the Leiden V mutation and ACE I/D polymorphism in subtypes of ischaemic stroke // J. Neurol. -2001. Vol. 248(9). - P. 756-761.

245. Szpirer C., Szpirer J., Riviere M. et al. Chromosomal localization of the human and rat genes (PDE4D and PDE4B) encoding the cAMP specific phosphodiesterases 3 and 4 // Cytogenet. Cell Genet. 1995. - Vol. 69(1-2). - P. 11-14.

246. Tabibiazar R., Wagner R.A., Ashley E.A. et al. Signature patterns of gene expression in mouse atherosclerosis and their correlation to human coronary disease // Physiol. Genomics. 2005. - Vol. 22 (2). - P. 213-226.

247. Third J.L., Montag J., Flynn M. et al. Primary and familial hypoalphalipoproteinemia // Metabolism. 1984. - Vol. 33(2). - P. 136-146.

248. Thorelli E., Kaufman R.J., Dahlback B. The C-terminal region of the factor V B-domain is crucial for the anticoagulant activity of factor V // J. Biol. Chem. 1998. -Vol. 273(26).-P. 16140-16145.

249. Thun M.J., Apicella L.F., Henley S.J. Smoking vs other risk factors as the cause of smoking-attributable deaths: confounding in the courtroom // JAMA. 2000. - Vol. 284(6).-P. 706 -712.

250. Tiret L., Rigat B., Visvikis S. et al. Evidence, from combined segregation and linkage analysis, that a variant of the angiotensin I-converting enzyme (ACE) gene controls plasma ACE levels // Am. J. Hum. Genet. 1992. - Vol. 51(1). - P. 197-205.

251. Tracy P.B., Eide L.L., Bowie E.J. Radioimmunoassay of factor V in human plasma and platelets // Blood. 1982. - Vol. 60(1). P. 59-63.

252. Varadi K., Rosing J., Tans G. et al. Factor V enhances the cofactor function of protein S in the APC-mediated inactivation of factor VIII: influence of the factor VR506Q mutation // Thromb. Haemost. 1996. - Vol. 76(2). - P. 208-214.

253. Walker S.P., Rimm E.B., Ascherio A. Body size and fat distribution as predictors of stroke among US men // Am. J. Epidemiol. 1996. - Vol. 144(12). - P. 1143-1150.

254. Welin L., Svardsudd K., Wilhelmsen L. et al. Analysis of risk factors for stroke in a cohort of men born in 1913 //N. Engl. J. Med. 1987. - Vol. 317(9). - P. 521-526.

255. Wellcome Trust Case Control Consortium. Genome-wide association study of 14,000 cases of seven common diseases and 3,000 shared controls // Nature. 2007. - Vol. 447(7145), 661-678.

256. Wiklund P.G., Nilsson L., Ardnor S.N. et al. Plasminogen activator inhibitor-1 4G/5G polymorphism and risk of stroke: replicated findings in two nested case-control studies based on independent cohorts // Stroke. 2005. - Vol. 36(8). - P. 1661-1665.

257. Wilson D.B., Salem H.H., Mruk J.S. et al. Biosynthesis of coagulation factor V by a human hepatocellular carcinoma cell line // J. Clin. Invest. 1984. - Vol. 73(3). - P. 654-658.

258. Wolf P. A., D'Agostino R.B., Belanger A. J., Kannel W.B. Probability of stroke: a risk profile from the Framingham Study // Stroke. 1991. - Vol. 22(3). - P. 312-318.

259. Wolfe C.D.A., Rudd A.G., Howard R. et al. The incidence and case fatility of stroke subtypes in a multi ethnic population. The South London Stroke Register // Journal of Neurology Neurosurgery and Psychiatry. 2002. - Vol. 72(2). - P. 211-216.

260. Woo D., Kaushal R., Kissela B. et al. Association of Phosphodiesterase 4D with ischemic stroke: a population-based case-control study // Stroke. 2006. - Vol. 37(2). -P. 371-376.

261. Wu A.H., Tsongalis G.J. Correlation of polymorphism to coagulation and biochemical risk factors for cardiovascular diseases // Am. J. Cardiol. 2001. - Vol. 87(12).-P. 1361-1366.

262. Yamada Y., Fuku N., Tanaka M. et al. Identification of CELSR1 as a susceptibility gene for ischemic stroke in Japanese individuals by a genome-wide association study // Atherosclerosis. 2009. - Vol. 207(1). - P. 144-149.

263. Zee R.Y., Brophy V.H., Cheng S. et al. Polymorphisms of the phosphodiesterase 4D, cAMP-specific (PDE4D) gene and risk of ischemic stroke: a prospective, nested case-control evaluation // Stroke. 2006 - Vol. 37(8). - P. 2012-2017.

264. Zee R.Y., Cheng S., Hegener H.H. et al. Genetic variants of arachidonate 5-lipoxygenase-activating protein, and risk of incident myocardial infarction and ischemic stroke: a nested case-control approach // Stroke. 2006. - Vol. 37(8). - P. 2007-2011.

265. Zhang J.H., Kohara K., Yamamoto Y. Genetic predisposition to neurological symptoms in lacunar infarction // Cerebrovasc. Dis. 2004. - Vol. 17(4). - P. 273-279.

266. Zhang Y., Wang Y., Cui C. et al. Platelet glycoprotein polymorphisms: risk, in vivo expression and severity of atherothrombotic stroke in Chinese // Clin. Chim. Acta. -2007. Vol. 378(1-2). - P. 99-104.

267. Zhao L., Funk C.D. Lipoxygenase pathways in atherogenesis // Trends Cardiovasc. Med.-2004.-Vol. 14(5).-P. 191-195.

268. Zhernakova A., Festen E.M., Franke L. et al. Genetic analysis of innate immunity in Crohn's disease and ulcerative colitis identifies two susceptibility loci harboring CARD9 and IL18RAP // Am. J. Hum. Genet. 2008. - Vol. 82(5). - P. 1202-1210.

269. Zoller B., Garcia de Frutos P., Hillarp A., Dahlback B. Thrombophilia as a multigenic disease // Haematologica. 1999. - Vol. 84(1). - P. 59-70.

270. ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

271. Е.А. Бондаренко, T.B. Тупицына, П.А. Сломинский, И.М. Шетова, H.A. Шамалов, А. Ю.Боцина, В.И. Скворцова, С.А. Лимборская «Полиморфизм гена фосфодиэстеразы 4Д (PDE4D) у больных острым инсультом г. Москвы», Генетика, 2010, Т.46, №6, с.861-864.

272. Е.А. Бондаренко, П.А. Сломинский, С.А. Лимборская, И.М. Шетова, Д.Ю. Тимофеев, В.И. Скворцова «Полиморфные варианты гена ALOX5AP и риск развития острого инсульта в российской популяции», Генетика, 2011, Т. 47, № 4, с. 570-573

273. Бондаренко Е.А., Тупицына Т.В., Шетова И.М., Боцина А.Ю., Скворцова В.И., Лимборская С. А. «Полиморфные варианты гена PDE4D у больных с острым инсультом из Москвы». Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков, 2010 год, стр.27.

274. E. Bondarenko, I. Shetova, N. Shamalov, P. Slominsky, S. Limborska, V. Skvortsova Abstracts of papers presented at the 2011 meeting on European Society of Human Genetics, 28.05-31.05 2011, p.266.

Информация о работе

Бондаренко, Елена Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.01.03

Диссертация

Полиморфные варианты генома человека и риск развития острого инсульта - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы