Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитохимическая и функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов при хроническом комбинированном химическом отравлении

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Цитохимическая и функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов при хроническом комбинированном химическом отравлении"

На правах рукописи

Алиева Умхаир Бадрутдиновна

ЦИТОХИМИЧЕСКАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙТРОФИЛЬНЫХ

ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ КОМБИНИРОВАННОМ ХИМИЧЕСКОМ ОТРАВЛЕНИИ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград - 2004

Работа выполнена в Дагестанской государственной медицинской академии

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Бакуев Максудин Маккидинович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Капитонова Марина Юрьевна доктор медицинских наук, профессор Гансбургский Андрей Николаевич

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится « »_2004 года в_часов на заседании

диссертационного Совета Д208.008.01 при Волгоградском медицинском универстите по адресу: 400066, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского медицинского университета.

Автореферат разослан «_»_20ЭД года.

Ученый секретарь

диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Изучение вредных воздействий химических и физических факторов окружающей среды на организм становится все более приоритетным в силу значительного роста, связанных с ним заболеваний и функциональных нарушений. В частности, прогрессивное накопление в окружающей среде токсичных отходов производственной деятельности человека повышает вероятность контакта с ними в быту и на производстве. Среди них по частоте контакта на первом плане стоят пестициды, соединения тяжелых металлов и др., неблагоприятное действие которых может проявиться токсическими, аллергизирующими, тератогенными и другими эффектами.

Реализация патогенного действия химических веществ происходит в первую очередь путем, ингибиции или активации ферментных систем организма, обусловливая в конечном итоге метаболические, структурные и функциональные нарушения (Кузьминская Ч.А., 1981; Ревич Б.А:, 1998).

В профпатологии и профилактике токсигенных заболеваний основное значение имеет ранняя диагностика. В этом плане интерес представляют ферментные системы, где в первые часы - сутки, после контакта могут возникнуть изменения. По имеющимся данным литературы (Ларионов В.Г., 1991; Кацнельсон Б.А., Безель B.C., Конышева Л.К., 1992; Ливанов ГЛ., Соболев МБ., 1999; Рослый О.Ф.; Герасименко Т.Н., Федорук АА., 2001) патогенный эффект пестицидов, металлов и их соединений зависит от длительности поступления в организм, свойств химического вещества, путей и скорости выведения, образования ими комплексов в организме, метаболической трансформации и т.д.

Наиболее удобным объектом для цитохимических исследований следует считать клетки периферической; крови, где первыми фиксируются ферментативные, метаболические и структурные изменения из-за легкой их уязвимости (Нагоев Б.С., 1987; Гасимова З.М., Казачков В.Н, Журков B.C., 1993; Costa L.G., 1976).

Хотя в литературе имеется, ряд сведений о ферментативных и функционально-метаболических нарушениях, в клетках крови при интоксикациях (Мякишева К.И., 1978; Ларионов В.Г., 1981; Подрушняк А.Е., 1983), но они чаще касаются действия какого-то одного вещества. К тому же эти данные недостаточны для понимания механизма действия, особенно при комбинированном их поступлении в организм. Поэтому, сведения о состоянии ферментных систем клеток крови, особенно при хронических интоксикациях, могли бы помочь не только ранней диагностике нарушений, но и в выявлении различий патогенного эффекта, изолированного и комбинированного попадания их в организм.

Влияние соединений свинца и меди на функциональное состояние лейкоцитов рассматривается в ряде исследовали Б.Х., 1991; Полякова А.Н. идр, 1995; Бьн

О.Ф. и др., 2001; Mendi J.K., AI-Imarah EL, Al-Suhail A.A., 2000). Однако серьезным их недостатком может считаться использование малого количества показателей. По этой причине полученные данные не могут дать полного представления о состоянии фагоцитарной активности клеток при указанных токсических воздействиях. Лишь комплексный подход с охватом всех показателей фагоцитоза в совокупности с цитохимическими исследованиями основных антимикробных систем - миелопероксидазной и катионных белков, а также ферментов ответственных за энергетическое обеспечение этих процессов, позволили бы выяснить ключевые этапы нарушения функционального состояния неспецифической резистентности организма в целом при различных токсических воздействиях.

Цель и задачи исследования

Целью данного исследования стало изучение цито- и биохимической характеристики нейтрофильных лейкоцитов крови,. а также оценка их функционального состояния при хроническом отравлении солями тяжелых металлов и установление их связи с процессом иммунизации.

Дня достижения данной цели были поставлены следующие задачи: 1) изучить цитохимическими методами, содержание гликогена, липидов и SH-групп, а также эстераз, сукцинатдегидрогеназы нейтрофильных лейкоцитов периферической крови экспериментальных животных при хроническом отравлении уксуснокислым, свинцом, сернокислой медью и их комбинацией до и после иммунизации;

2) рассмотреть состояние антимикробных систем нейтрофильных лейкоцитов, а также его связь с иммунизацией животных исследованием активности миелопероксидазы и содержания катионных белков при отравлении выбранными токсическими веществами;

3) исследовать при данных токсических воздействиях активность лактатдегидрогеназы, пероксидаз в гомогенате лейкомассы и в сыворотке крови;

4) изучить методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле белковый состав плазмы крови у опытных и контрольных животных;

5) определить при выбранных вариантах экспериментов основные показатели фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов и изучить их возможную взаимосвязь с процессом иммунизации.

Научная новизна полученных результатов

Впервые комплексно исследованы важные цитохимические и основные функциональные показатели нейтрофильных лейкоцитов крови при хроническом отравлении сернокислой медью, ацетатом свинца и их комбинацией.

Установлено, что выбранные- токсические соединения подавляют синтез компонентов, ответственных за энергетическое (гликоген) и

пластическое (липиды, SH - группы) обеспечение клеток на уровне миелопоэза.

Показано корригирующее влияние активации иммунной системы животных на токсическое воздействие выбранных солей тяжелых металлов.

В работе впервые подвергнута параллельному рассмотрению с использованием цитохимических и биохимических методов активность миелопероксидазы, являющейся компонентом основной антимикробной системы нейтрофильных лейкоцитов крови, что в значительной степени подтверждает достоверность полученных результатов. Эти данные при совокупности с результатами исследований другой защитной системы клеток - катионных белков, а также основных показателей фагоцитоза, позволяют утверждать о реальном снижении при использованных токсических воздействиях неспецифической противомикробной резистентности организма.

Впервые методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле установлены конкретные белки плазмы крови, ответственные за гипопротеинемию при отравлении ацетатом свинца, сернокислой медью и их комбинацией - - глобулины, - липопротеины и церулоплазмин. Выяснено, что корригирующее влияние процесса иммунизации при этом связано, прежде всего, количественными и качественными сдвигами -глобулинов.

Практическая значимость работы

Выявленные при воздействии указанных токсических веществ сдвиги ферментных систем и других химических компонентов нейтрофильных лейкоцитов имеют значение для клинико-диагностической практики. Полученные результаты могут быть использованы как ранние критерии для диагностики и дифференциальной диагностики отравлений солями тяжелых металлов в судебно-медицинской практике и токсикологии.

Установленный в работе факт реального снижения неспецифической противомикробной резистентности организма при хроническом отравлении солями свинца и меди должны быть учтены при выборе препаратов с лечебной целью и при проведении профилактических мероприятий.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Снижение содержания гликогена в нейтрофильных лейкоцитах крови имеет место во всех трех вариантах экспериментов. Однако оно наиболее выражено при отравлении уксуснокислым свинцом и в варианте с комбинацией. Эти сдвиги являются показателем непосредственного влияния выбранных токсических веществ, особенно, уксуснокислого свинца на синтетические процессы на уровне гранулогенеза, что подтверждается и результатами исследования в клетках липидов и SH-rpynn.

2. Стимуляция иммунной системы опытных животных эритроцитами барана в определенной степени блокирует токсическое

действие использованных веществ, что выражается заметным ростом в нейтрофильных лейкоцитах крови содержания гликогена, липидов и белков, содержащих SH-группы

3. Хроническое отравления сернокислой медью, уксуснокислым свинцом и их комбинацией существенно подавляет активность окислительных ферментов в нейтрофильных лейкоцитах крови, в частности, лактатдегидрогеназы. При этом в наибольшей степени угнетается активность ЛДГ4 -и ответственного за анаэробный гликолиз -основного поставщика энергии в нейтрофильных лейкоцитах крови, что, несомненно, снижает функциональные возможности клеток.

4. Отмеченный при исследовании антимикробных систем, (миелопероксидазы и катионных белков) нейтрофильных лейкоцитов крови дегранулирующий эффект использованных токсических соединений, наряду с появлением в крови паралейкобластов, следует рассматривать как результат их влияния не только на гранулогенез, но и на циркулирующие клетки.

5. Во всех выбранных вариантах экспериментов выявлены качественные и количественные сдвиги белкового состава сыворотки крови, особенно выраженные в зоне спектра - глобулинов и белков, ответственных за транспорт железа и меди (гаптоглобулинов и церулоплазмина). Иммунизация животных в определенной степени корригирует эти изменения, преимущественно за счет - глобулиновых фракций.

6. Использованные токсические вещества при длительном использовании подавляют функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов крови, что выражается в снижении всех показателей фагоцитоза, и особенно, миграционной активности, количества нейтрофильных лейкоцитов крови, участвовавших в фагоцитозе и количества поглощенных кокков. Эти сдвиги следует объяснить, прежде всего, угнетением активности ферментов, ответственных за энергетическое и пластическое обеспечение фагоцитов.

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на Всероссийском съезде АГЭ с международным участием (Ижевск, 1998); на конференции к 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР, профессора В.Г. Елисеева (Москва, 1999); на межвузовской научно-практической конференции «Экофакторы и морфология лимфатической системы и внутренних органов» (Махачкала, 2002); на Международной научной конференции, посвященной 70-летию ДГМА «Биохимия в медицине» (Махачкала. 2002); на конференции, посвященной 70-летию ДГМА (Махачкала, 2002); на научно-практической конференции молодых ученых (Махачкала, 2002); на межрегиональной научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения известного русского ученого Г.А. Меркулова «Актуальные вопросы морфологии» (Тверь, 2003).

Публикация результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 8 работ из которых 5 - в местной печати, 3- в центральной печати.

Внедрение результатов работы в практику

Полученные результаты могут быть использованы при составлении практических рекомендаций, а также при разработках нормативных актов на производствах с высоким содержанием в атмосфере соединений свинца и меди, при судебно-медицинской экспертизе отравлений. Данные диссертационного исследования рекомендуется использовать при чтении лекций на кафедрах гистологии, патанатомии, терапии, патофизиологии, гигиены, токсикологии и судебной медицины.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 131 страницах машинописного текста (в том числе 7 таблиц, 11 микрофото, 35 рисунков) и состоит из введения, глав -обзора литературы, материала и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований - заключения, выводов и списка использованной литературы, содержащего 134 источников на русском языке и 67 на иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено на 96 крысах Wistar весом 180-200 г в 3-х сериях опытов. Все эксперименты проводились согласно международным правилам работы с лабораторными животными («Principles of laboratory animal care», 1985, издание Национального Института здоровья США, № 8823).

Крысы получали полусинтетический корм, состоящий из следующих компонентов: казеин -22%, крахмал-60,7%, подсолнечное масло — 10%, солевая смесь — 4%, витаминная смесь — 0,1%, поливинилхлорид -0,2%. Состав солевой смеси в граммах на 1 кп NaCl -139,3; КН2РО4 - 288,8; Mg SO4 - 57,4; СаСОз -380,4; FeS04 х tH20 -26,4; M11SO4X 7Н20-4,55; ZnS04 х 7Н20 -0,55; C11SO4 х 5Н20-0,48; СоС12 х 6Н20. Состав витаминной смеси в мг на L кп тиамин -0,4; рибофлавин -0,6; никотинамид - 3,0; пирадоксин - 0,4; пантотенат кальция - 1,5; цианкобаламин - 0,003; фолиевая кислота -0,2; фитин - 5,0; аскорбиновая кислота -10,0; викасол - 0,1; сахароза - до 1000 шт.

Крысы Wistar весом в начале эксперимента 180+ 40г содержались в виварии Дагестанской государственной медицинской академии на полусинтетическом корме (см. выше). Проведено четыре серии исследований. Крысы, по 24 на серию (1- контроль; II- ацетат свинца (CHjCOO)2 Pb -10,8мг/кг, Ш- медный купорос - CuS04 -10,4 мг/кг, IV-

(CH3COO)2Pb - 10,8 мг/кг + C11SO4 - 10,4 мг/кг) в течение 5,5 месяцев получали указанные вещества ежедневно однократно в физиологическом растворе per os. Суммарная доза введенных веществ в течение времени эксперимента составила, соответственно, для II группы - 356 мг ацетата свинца, для III группы - 310,2 мг медного купороса и для IV группы -сочетанную дозу 356 мг ацетата свинца и 310,2 мг медного купороса. Контрольная группа крыс получала физиологический раствор. Перед окончанием эксперимента часть крыс была иммунизирована эритроцитами барана (3 х 10® ЭБ на крысу). До и после иммунизации (4-5 и 7-8 дни) брали кровь, определяли выбранные цито и биохимические показатели, а также изучали фагоцитарную и миграционную активность нейтрофильных лейкоцитов. Животных забивали декапитацией. Для исследования брали периферическую кровь, из которой получали лейкоцитарную массу.

Все эксперименты проводились как минимум в трех повторах. Полученные данные подвергались компьютерному анализу по программе Biostat.

Цифровой материал обрабатывали способом вариационной статистики. Разницу между средними величинами определяли по t критерию Стьюдента.

Цитохимические методы исследования :

Для выявления наличия и характера распределения гранул гликогена в нейтофильных гранулоцитах нами использован модифицированный метод по Mac Manus J.F. (1946) с использованием реактива Шиффа и йодной кислоты (Шик - реакция).

Высушенные на воздухе мазки фиксировали в свежеприготовленном спирт - формоле (9:1, на 9мл 96° спирта 1 мл 40 % формалина) 30 секунд. При этом капля фиксатора наноситься на стекло и равномерно распределяется по нему пипеткой или стеклянной палочкой. Промытые в проточной воде (3-5 минут) мазки погружают в 1 % раствор йодной кислоты на 10 минут. После чего промывают в нескольких сменах дистиллированной воды в течение 10 — 15 минут (в целях полного удаления остатка кислоты). Промытые мазки инкубируют в реактиве Шиффа в течение 20-30 минут. После инкубации в реактиве Шиффа его излишек удаляли с мазков путем ополаскивания их в нескольких сменах сернистой воды (200 мл дистиллированной воды + 10 мл 10 % метабисульфита натрия +10 мл 1 N соляной кислоты) в течение 3 минут.

Для цитохимической демонстрации липидов использовали метод с Суданом черным Б (Shechen.Store 1947).

Активность катионных белков в лейкоцитах периферической крови определяли методом В.Е. Пигаревского (1983) с использованием прочного зеленого.

При постановке реакции, мазки предварительно не фиксировали, поскольку раствор прочного зеленого готовится с применением метанола, который, как известно, является и фиксатором.

Высушенные на воздухе мазки из лейкокоцентрата погружали в раствор прочного зеленого на 15 минут. В целях предотвращения изменения свойств раствора (вследствие испарения или контакта с другими химическими агентами), окраску проводили путем нанесения 1-2 капель раствора на поверхность стекла. Инкубацию проводили в темноте под стеклянным колпаком. Окрашенные мазки, предварительно промыв в дистиллированной воде, погружали на 30 секунд в 0,25 % раствор Азура А, для докрашивания ядер.

Для выявления активности МПО в мазках лейкомассы использовали методы по Грехем-Кнолю (1918) и Корновскому (1966). Однако наиболее четкая гранулярная активность в клетках лейкомассы выявлялась при использовании следующей модификации указанного метода определения активности МПО.

Тонкие мазки из лейкомассы высушивали на воздухе не менее 40-60 минут и фиксировали в свежеприготовленном спирт-формоле (9:1), затем, после промывки проточной водой, мазки инкубировали в среде, содержащей 2-5 мл насыщенного при комнатной температуре раствора бензидина в трис-буфере (рН-7,2), 2,5 мл дистиллированной воды и 1 мл перекиси водорода (0,03%) в течение 5 минут.

Докрашивание ядер проводят гематоксилином Эрлиха. Для этого к 10 мл дистиллированной воды добавляют 10 капель гематоксилина, и после фильтрации через бумажный фильтр наносят несколько капель на стекло на 2-3 минуты. При этом достигается фоновое докрашивание цитоплазмы, что весьма существенно для изучения характера распределения гранул в клетках.

Активность миелопероксидазы при цитохимических исследованиях выражали индексом Кеплоу (1965). Одновременно выводили и средне цитохимический коэффициент (СЦК) по Остальди и Верги (1957).

Биохимические методы определения активности миелопероксидазы и лактатдегидрогеназы

Для выявления разновидностей пероксидаз в лейкомассе и сыворотке крови применили диск-электрофорез в полиакриламидном геле. Этот микрохимический анализ, основанный на принципе молекулярно-ситового эффекта, обладает высокой разрешающей способностью и позволяет разграничить большую группу белков по величине заряда и молекулярной массе. Гелевые полоски после электрофореза окрашивали по Шроуэн (1966).

При необходимости определения активности пероксидазы в растворах использовали метод Клебанова (1965): в спектрофотометрическую кювету добавляют: 0,3мл 0,1М фосфатного буфера (рН- 6,0), 0,3 мл 0,01 М перекиси водорода, 0,05 мл 0,2 М О - дианизидина в метаноле, ферментный препарат и

воды до 3 мл. ( ферментный препарат добавляют в последнюю очередь). Содержимое кювет смешивают и определяют изменение поглощения при 460 м М в спектрофотометре. За единицу активности принимается увеличение поглощения на 0,001 в течение минуты (раствор О - дианизидина готовиться непосредственно перед употреблением и держится в темной посуде, мол. вес -244). Для приготовления 0,2 М раствора берут 50 мг о - дианизидина на 1 мл метанола.

Активность изоферментов лактатдегидрогеназы в гелевых полосках выявляли по методу Жеребцова (1967): гели погружают в раствор, состоящий из: лактата № - (0,05 -1М) - 0,2 мл, №АД + - (0,05 - 1,0 мг (мл) - 25мг, феназинметасульфата (0,02 -0,2 мг (мл) - 10 мг, нитросинего тетразолия (0,02 - 0,2 мг (мл) - 10 мг и трис-буфера (ОД - 0,ЗМ) рН-7,4 - 25мл. Компоненты смешивают в указанной последовательности перед употреблением. Реакцию включают внесением 0,1мл образца и останавливают через 20 минут добавлением к инкубационной среде 7 % уксусной кислоты (инкубация проводиться в темноте при 37 °С). В последующем гелевые полоски с выявленными фракциями изоферментов снимают на фотопленку М-200. Активность фракций пероксидаз и лактатдегидрогеназ определяют путем измерения оптической плотности на микрофотометре ИФО — 451.

При определении спектра белков сыворотки крови методом диск-электрофореза, гелевые полоски окрашивали 1 % раствором амидо-черного в 7 % уксусной кислоте в течение 30 минут при 90°С. Избыток красителя удаляли способом отмывания. В последующем столбики геля фотографировали на фотопленку фото - 65.

Фагоцитарную активность нейтрофилов крови определяли по модифицированной методике ИЛ. Себерийского и М.А. Антоновой (1950).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Как следует из представленных результатов (Табл.1) хроническая затравка сернокислой медью приводит к достоверному снижению содержания гликогена в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов (0,75 ±0,05, при контроле -3,1± 0,33).

Картина значительно изменена в случаях иммунизации животных; хотя показатели этого компонента также имеют тенденцию к снижению, однако они не всегда достоверны.

Снижение содержания гликогена в клетках еще более выражено при отравлении уксуснокислым свинцом (0,17±0,01).

Таблица 1

Влияние хронического введения сульфата меди, ацетата свинца и их комбинации на цитохимические показатели лейкоцитов крови (М±т).

отравление

показатели Контроль СиБО< (СН3СОО)2РЬ Их комбинацией

Гликоген 3,1*0,33 0,75±0,05"» 0.17*0,01*** 0,1*0,06***

Липиды 2,97*0,53 2,87*0,77 2^1*0,67 2,46±4,7

БН-группы 93,0±7,2 67,0*8,2* 39,0*6,1** 42,0*4,7**

эстераза 48,0±3,7 33,0*3,1 21,0*3,8** 29,0*2,8*

X сдг 1,44±0,08 1,05 ±0,05 0,88*0,07* 1.14±0,09

1 мпо 1,33*0,32 1,12*0,12 0,63*0,07*» 0,48*0,07**

X о ч КБ 1,05±0,07 0,89±0,04 0,56±0,03** 0,47±0,01**

гликоген 3,3±ОД8 2,85 ±0,2 2,0*0,07" 2,2±0,41*

липиды 2,88±0,66 2,90*0,64 2,62*0,77 2,21*0,26*

БН-группы 98,0±8,3 78,0±9,1 57,0*6,8* 85,0±6,1

I5 эстераза 47,0*5,2 4б,0±5,4 28,0*1,7** 37,0*4,3*

СДГ 1,59*0,32 1,28*0,13 1.29±0,18 1,14*0,09*

£ X мпо 1,58*0,41 1,48±0,22 1,07*0,12* 0,78*0,05**

с КБ 1,11*0,09 1,02±0,07 0,73±0,02» 0,67*0.02*

гликоген 3,2*0,35 2,99*0.35 2,6*0,15* 1.8*0,55**

липиды 2,90±0,бЗ 2,78*0,74 2,3 ±0,11 2,88±0,71

БН-группы 96±5,5 81,0±4,0 65,0*4,5* 67.0*6.5*

£ 5? X X эстераза 56,0*3,8 42,0±3,1 33,0*4,2* 35.0*2,2*

СДГ 1,77*0,29 1,31*0,52* 1,05*0,08* 1,33*0,11*

£ 3 X мпо 1,76*0,41 1,54*0,63 1,25*0,18* 0,77*0,03**

с КБ 1,07*0,06 1.12±0,08 0,83±0,06 0,69*0,05*

Достоверность различий по сравнению с контролем - *р<0,05, **р<0,01, ♦»♦<0.001.

В цитоплазме клеток отмечается изреженность окрашенных гранул. Обращает внимание рост процентного содержания юных и палочкоядерных форм гранулоцитов. Как и в предыдущем варианте опытов, иммунизация приводит к заметному росту цифр этого показателя. Сходные результаты и в случаях комбинации выбранных соединений.

Эти данные позволяют предположить, что выбранные отравляющие вещества влияют на нейтрофильные лейкоциты, прежде всего, на уровне миелопоэза, нарушая при этом синтез и накопление гликогена в клетках. По полученным результатам следует, что, по-видимому, комбинация их потенцирует токсическое действие каждого в отдельности.

Действие сернокислой меди и уксуснокислого свинца менее выражено на содержание липидов в нейтрофильных лейкоцитах. В частности, оно сравнимо с контролем при отравлении сернокислой медью, умеренно снижено при использовании уксуснокислого свинца и наибольшее при комбинации (Табл. 1), иммунизация животных существенно не влияет на этот процесс. В попытках объяснить эти результаты вновь следует предположить возможность влияния выбранных отравляющих веществ на синтез липидов на уровне красного костного мозга, поскольку общеизвестно, что синтетические процессы в циркулирующихся клетках минимальны.

Это положение в определенной степени подтверждается и результатами исследований белков, содержащих SH -группы. Как и в предыдущих случаях, снижение содержания последних наиболее (более, чем двукратное) при отравлении уксусно-кислым свинцом и в варианте с комбинацией выбранных соединений. По-видимому, использованные вещества оказывают блокирующее влияние на все синтетические процессы в нейтрофильных лейкоцитах на уровне гранулогенеза. При этом иммунизация животных хотя и подавляет этот процесс, но не в достаточной степени.

В работе исследованы также возможные сдвиги активности некоторых представителей гидролитических и окислительных ферментов. Так, при изучении активности эстераз установлено, что количество клеток, содержащих окрашенные гранулы, уменьшается во всех трех вариантах опытов (Табл.1). Оно особенно выражено при отравлении уксуснокислым свинцом - выявлены лишь 22 эстеразположительных клеток на 100 мл нейтрофильных лейкоцитов (в контроле -48). Следовательно, хроническое отравление использованными соединениями и, особенно, уксуснокислым свинцом, подавляет (возможно, в первую очередь) синтез и ферментных систем в клетках.

Последнее подтверждается и тем, что в проведенных исследованиях установлены более выраженные сдвиги активности окислительного фермента сукцинатдегидрогеназы. Они достоверны при отравлении сернокислой медью, и особенно значительны при использовании уксуснокислого свинца (Табл.1). Следует отметить, что иммунизация животных заметно не меняет уровень активности фермента регистрированных в нейтрофильных лейкоцитах опытных животных без иммунизации. Нам представляется, что

использованные отравляющие вещества в большей степени влияют на группу окислительных ферментов в нейтрофильных лейкоцитах. Это мнение подтверждается, и в какой-то степени детализируется, результатами исследования одного из ключевых ферментов окислительной системы лактатдегидрогеназы.

В работе активность лактатдегидрогеназы исследована методом диск-электрофореза, который позволяет выявить различные молекулярные формы фермента - изоферменты. Этим методом в гомогенате лейкомассы обычно выявляются 5 фракций, из которых, как считают, I и 2 имеют отношение к аэробному окислению, а 4 и 5 к анаэробному. Удалось установить, что отравление уксуснокислой медью влияет, прежде всего, на активность анаэробных фракций - ЛДГ -4 и ЛДГ -5 (Табл.2). Отмечается их снижение.

Сдвиги активности этих фракций значительны (более, чем в 4 раза) при затравке уксуснокислым свинцом и в варианте с комбинацией . Иммунизация животных заметно не меняет эту картину. Таким образом, отравление животных, особенно уксуснокислым свинцом и комбинацией выбранных соединений, подавляет активность всех фракций лактатдегидрогеназы, однако в большей степени анаэробных - ЛДГ-4 и ЛДГ -5 (Табл. 2).

Табл.2.

Фракции ЛДГ Контроль ОТРАВЛЕНИЕ

Си804 Р (СНЗСОО) 2РВ Р Их комбинации Р

ЛДГ-1 6,3±0,29 6,0±0,11 >0,05 3,3±0,28 <0,01 2,9*0,18 <0.01

ЛДГ-2 19,8±0,37 18,8±0Д8 >0,05 11ДШЗ <0,05 9,8±0,11 <0,01

лдг-з 35,4±0,34 зи±о,зз >0,05 26,1±0,51 <0,001 25,б±038 <0.05

ддг^ 14,3±0,32 8,4±0Д1 <0,01 3,5±0,07 <0,001 3_2±0Д5 <0,01

ЛДГ-5 3,2±0,08 1,2±0.08 <0,01 0,8±0,02 <0.001 0,5±0.01 <0,001

Достоверность различий (Р) в сравнении с контролем.

Таб.2. Показатели активности изоферментов ЛДГ лейкомассы крови крыс при отравлении СиБО* и (СЮ СОО)2 РЬ и их комбинацией. (М±т).

Эти результаты следует считать важными, поскольку, по имеющимся данным литературы (Пигаревский В.Е., 1983; Пикуза О.И., Маянский А.Н., 1986) основным поставщиком энергии для функционирования нейтрофильных лейкоцитов является анаэробный гликолиз. Следовательно, использованные соединения подавляют ключевое звено окислительного метаболизма нейтрофильных лейкоцитов, что не может не влиять на уровень функциональной активности клеток.

Последнее находит свое подтверждение данными, полученными при исследовании основных антимикробных систем нейтрофильных лейкоцитов - миелопероксидазной и катионных белков.

В частности, при отравлении сернокислой медью отмечается умеренное снижение активности миелопероксидазы в нейтрофильных лейкоцитах (Табл.1). Оно значительное при затравке уксуснокислым свинцом. При этом около 50% клеток имеют изреженность и неравномерное распределение гранул с ферментной активностью. Характерно появление в мазках лейкомассы незрелых форма (про - и миелоциты) клеток. Во всех вариантах экспериментов иммунизация животных снижает количество клеток с малой и умеренной активностью.

Обобщая представленные данные, следует отметить, что, по-видимому, причиной снижения активности фермента в нейтрофильных лейкоцитах при отравлении выбранными соединениями являются не только нарушения на уровне гранулогенеза в красном костном мозге, но также влияние их на циркулирующие клетки.

Активность миелопероксидазы исследована и методом диск-электрофореза, что позволяет выявить фракции фермента, относящиеся к различным формам лейкоцитов. Полученные этим биохимическим методом данные дополняют результаты указанных выше цитохимических исследований. В частности, во всех вариантах экспериментов отмечается снижение 2-ой и 3-ей фракций миелопероксидазы, относящихся, соответственно, к моноцитам и нейтрофильным лейкоцитам.

При отравлении сернокислой медью количественное содержание катионных белков существенно не меняется. Картина иная при затравке уксуснокислым свинцом. В мазках лейкомассы резко снижено количество окрашенных гранул. Средний цитохимический показатель -0,56 + 0,03 (в контроле 1,05 + 0,07). Количество клеток, в которых гранулы не выявляются, значительное. Эти сдвиги более выражены в варианте с комбинацией использованных соединений. При этом большая часть нейтрофильных лейкоцитов имеет слабо окрашенную цитоплазму, гранулы клеток слабо контурируются.

Сравнивая цитохимическую картину при определении

миелопероксидазы и катионных белков, можно заметить значительное сходство их сдвигов. Оно, по нашему мнению, объяснимо сходством механизмов их развития. По-видимому, использованные токсические соединения влияют на уровне циркуляции и на содержание катионных белков. Этот дополнительный фактор в комбинации с несомненным влиянием токсических веществ также на уровне гранулогенеза не может не отразиться на функциональных возможностях нейтрофильных лейкоцитов.

В работе исследован также белковый спектр плазмы крови во всех трех вариантах экспериментов. Он был продиктован тем известным фактором, что на функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов существенное влияние оказывают и изменения химического и, особенно, белкового состава плазмы крови. Для этой цели использован указанный ранее один из наиболее

чувствительных микрохимических анализов - диск-электрофорез в полиакриламидном геле, который позволяет выявить до 30 фракций различных групп белков.

При хроническом отравлении сернокислой медью спектр белков плазмы крови меняется значительно. В частности, резко уменьшается количество у - глобулиновых фракций. Уменьшен объем и гаптоглобулинов (aß - глобулины) и почти не выявляется фракция церулоплазмина (Fctg глобулин). В то же время не изменены трансфериновые (ßi -глобулины) и альбуминовые фракции.

Иммунизация животных заметно меняет указанную картину спектра: отмечается рост числа фракций у - глобулинов и увеличивается объем фракций гаптоглобулинов, трансферинов и церулоплазмина.

Затравка животных уксусно-кислым свинцом приводит к ещё большему уменьшению количества фракций у -глобулинов. Значительно снижены гаптоглобины, церулоплазмин, тогда как трансфериновые и альбуминовые фракции близки к контролю. Сходная картина спектра фракций белков и при комбинированном отравлении животных.

Обобщая результаты диск- электрофоретического исследования белков плазмы крови при выбранных вариантах экспериментов можно сделать следующие выводы:

- во всех вариантах опытов без иммунизации отмечается уменьшение количества фракций у -глобулинов;

- уменьшается объем гаптоглобинов и церулоплазмина;

- альбуминовые фракции во всех случаях существенно не меняются.

При иммунизации животных отмечается:

- рост числа фракций у -глобулинов;

- рост объема фракций гаптоглобина и церулоплазмина.

Следовательно, выбранные токсические соединения влияют, прежде

всего, на синтез у-глобулиновых белков, который, как известно, совершается, главным образом, клетками Купера печени и плазмоцитами в составе различных органов и тканей. Иммунизация животных приводит к некоторой коррекции указанных сдвигов.

В работе рассмотрены также основные показатели функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов опытных и контрольных животных в сравнительном аспекте.

Установлено, что у контрольных животных иммунизация приводит к кратковременному росту миграционной активности нейтрофильных лейкоцитов с последующим, к 7-8 дню, снижением до контрольного уровня.

При отравлении серной медью снижение миграционной активности нейтрофильных лейкоцитов достоверное, оно значительное и в случаях после иммунизации; более чем 5-ти кратное и почти 2-х кратное по сравнению с вариантом опыта без иммунизации (табл. 3).

Табл.3

№ Серии опытов До иммунизации, После затравки После иммунизации

На 3-4 сутки 7-8 сутки

1. Контроль (интакт) 80,0 ±3,9 116,0 ±4,3* 72,0 ±3,4

2. Си 804 424 ± 1,9** 22,4 ±2,8** 36,1 ±3,0**

3. Ацетат свинца 59.6 ±3,8** 41,1 ±3,3** 29,8 ±2,2**

4. Си504+Ацетат свинца 77,4 ±1,7 89,1 ±3,7** 70,0 ±3,1

Спонтанная миграционная активность нейтрофилов (в мкм) при хроническом отравлении Си Б04 (СНз СОО)2 РВ и их комбинацией.

Примечание: * Р< 0,01 в динамике опыта

** Р<0,01 в сравнении с контролем

Сходные, но несколько менее выраженные, изменения и при затравке уксуснокислым свинцом. Из этих данных следует, что активация иммунной системы в определенной степени тормозит естественную миграционную активность нейтрофильных лейкоцитов. Этот, пока трудно объяснимый, факт подтвержден исследованиями и других авторов (Кишов М.Г., Магомедова З.С., 1998).

Следует отметить, что у контрольных животных нет зависимости ряда показателей фагоцитоза от процесса иммунизации: фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа, адгезивной активности и индекса деградации при 30* фагоцитозе.

В случаях 60' фагоцитоза динамика показателей фагоцитоза сложная; нет значительной разницы уровня фагоцитарного числа, количества нейтрофильных лейкоцитов, участвовавших в фагоцитозе и количества поглощенных кокков, тогда как во всех вариантах опытов имеет место рост фагоцитарного числа, индекса, деградации и снижение адгезивной активности после иммунизации.

При 120' фагоцитозе после иммунизации снижаются цифры фагоцитарного числа и адгезивной активности по сравнению с предыдущим вариантом и отмечается постепенный рост, независимо от иммунизации, индекса деградации поглощенных кокков.

Таким образом, иммунизация животных приводит к росту количества нейтрофильных лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе. и абсолютного количества поглощенных кокков, а направленность сдвигов всех показателей фагоцитоза до и после иммунизации при 60'и 120' фагоцитозе сходная.

У опытных животных при затравке сернокислой медью показатели фагоцитарного индекса низкие в первом сроке фагоцитоза (30') и отмечается некоторый рост во втором (60') и третьем (120') сроках до и после иммунизации.

Цифры фагоцитарного числа также стабильно низкие во всех трех сроках фагоцитоза. Они заметно не изменены и после иммунизации.

Низкие значения, по сравнению с контролем и адгезивной активности нейтрофильных лейкоцитов. И в этом случае не удается заметить существенных изменений данного показателя связанных с иммунизацией животных.

Изменения индекса деградации поглощенных кокков в нейтрофильных лейкоцитах сходны с предыдущими показателями лишь при 30 ' фагоцитозе. Однако в последующие сроки отмечается его значительный рост, особенно заметный при 120' фагоцитозе. Эти сдвиги однотипны до и после иммунизации.

Количество нейтрофильных лейкоцитов, участвовавших в фагоцитозе, у опытных крыс снижено, по сравнению с контролем, со значительной степенью достоверности. Сходные сдвиги получены и при подсчете абсолютного количества поглощенных нейтрофильными лейкоцитами кокков. В частности, их количество при 30' фагоцитозе до иммунизации -0,79+0,07 (в контроле 3,71 ±0,11) и после иммунизации соответственно: 1,27+0,19 и 1,31 +0,13 (в контроле -9,36 +0,60 и 10,02 ±_0,71). Характерно полное отсутствие зависимости этого показателя от продолжительности фагоцитоза.

Обобщая приведенные выше результаты исследований показателей фагоцитоза нейтрофильных лейкоцитов при затравке сернокислой медью, можно заключить:

- имеет место снижение всех показателей фагоцитоза;

- наибольшее, более чем 3-х кратное, уменьшение отмечается количество нейтрофильных лейкоцитов, участвовавших в фагоцитозе и количества поглощенных клетками кокков.

- нет заметной разницы сдвигов показателей фагоцитоза, связанных с иммунизацией и продолжительностью фагоцитоза.

Затравка опытных животных уксуснокислым свинцом также приводит к снижению значений фагоцитарного индекса нейтрофильных лейкоцитов. При этом не удается заметить зависимости последних от времени фагоцитоза. Во все сроки его цифры стабильны как до, так и после иммунизации. Сходная направленность сдвигов и значений фагоцитарного числа.

Изменения адгезивной активности нейтрофильных лейкоцитов у животных при затравке уксуснокислым свинцом имеют некоторые особенности. Так, при 30' фагоцитозе цифры данного показателя по сравнению с контролем ниже во всех случаях до и после иммунизации. При 60' фагоцитозе они сравниваются, а при 120' фагоцитозе эти значения у опытных животных выше по сравнению с контрольным уровнем.

Следует отметить, что направленность сдвигов индекса деградации поглощенных нейтрофильными лейкоцитами кокков в этом варианте экспериментов совпадает с тем при затравке сернокислой медью; отмечается постепенный рост в зависимости от продолжительности фагоцитоза.

Количество нейтрофильных лейкоцитов, участвовавших в фагоцитозе, как и в первом варианте затравки, также значительно снижено. При этом нет

выраженной разницы в зависимости от иммунизации и продолжительности фагоцитоза.

В проведенных исследованиях не удалось обнаружить каких-либо особенностей сдвигов изученных показателей фагоцитоза, при комбинированной затравке животных. Они сходны с теми в предыдущем варианте опытов.

Суммируя результаты, полученные в двух последних вариантах экспериментов, можно сделать выводы, что у опытных животных:

- отмечается снижение значений фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа вне зависимости от иммунизации и продолжительности фагоцитоза;

- значительно снижается количество поглощенных нейтрофильными лейкоцитами кокков;

- отмечается постепенный рост показателей индекса деградации поглощенных кокков в зависимости от времени фагоцитоза.

Следует отметить, что некоторые показатели фагоцитоза, приведенные нами, расходятся с результатами, полученными рядом исследователей.

Тем не менее, эти данные и результаты наших исследований позволяют сделать вывод, что при хроническом отравлении солями тяжелых металлов имеет место значительное снижение неспецифической резистентности организма.

выводы

1. Содержание гликогена, липидов и 8Ы - групп в нейтрофильных лейкоцитах при хроническом отравлении солями свинца и меди имеет тенденцию к снижению, особенно выраженное при их комбинации. Предварительное введение экспериментальным животным эритроцитов барана заметно уменьшает степень достоверности этих показателей, что следует объяснить стимуляцией основных звеньев иммунной системы организма.

2. Причиной сдвигов указанных показателей нейтрофильных лейкоцитов, ответственных за энергетическое и пластическое обеспечение клеток, следует считать, прежде всего, непосредственное воздействие токсических факторов на уровне красного костного мозга, выражающееся нарушением синтетических процессов на разных этапах миелопоэза.

3. Активация иммунной системы опытных животных эритроцитами баранов в определенной степени нейтрализует токсическое действие выбранных солей тяжелых металлов на процесс гранулоцитопоэза.

4. Активность гидролитического (эстеразы) и окислительного (сукцинатдегидрогеназы) ферментов в нейтрофильных лейкоцитах подавляется при отравлении ацетатом свинца и в варианте с комбинацией вне зависимости от иммунизации, что позволяет утверждать об общем воздействии данного соединения на синтез белковых веществ в клетках.

5. Хроническое отравление животных сернокислой медью, ацетатом свинца и их комбинацией приводит к выраженной гипопротеинемии, связанной со снижением у- глобулинов, 0- липопротеинов и церулоплазмина. Иммунизация животных заметно корригирует эти сдвиги, преимущественно за счет у- глобулиновых.

6. Медный купорос и ацетат свинца способны нарушать миграционную и фагоцитарную способности нейтрофильных лейкоцитов. В механизме их действия главным следует считать способность угнетать ферментные системы, усиливать тканевую гипоксию с торможением окислительных процессов, что в конечном итоге проявляется нарушением основных функции нейтрофильных лейкоцитов.

7. Указанные цитохимические сдвиги ферментных систем и выбранных химических компонентов нейтрофильных лейкоцитов крови при хроническом отравлении солями свинца, меди предшествуют функциональным и морфологическим изменениям в клетках. Поэтому их следует считать одним из ранних признаков отравления животных при действии использованных химических соединений.

Список научных трудов, выполненных по теме диссертации

1.. Алиева У. Б. Цитохимическая характеристика нейтрофилов при хроническом комбинированном химическом отравлении /М.М. Бакуев, Р.З. Зурхаева//Российские морфологические ведомости.-1999.-№№1-2.-С.26-27.

2. Алиева У.Б. Характеристика некоторых цитохимических показателей нейтрофилов при хроническом комбинированном химическом отравлении / У.Б. Алиева, М.М. Бакуев, Р.К. Шахбанов // Сб. науч. тр., посвящ. 100-летию проф. Елисеева В.Г.-М, 1999.-С.84-85.

3. Алиева У.Б. Активность МПО нейтрофилов при хроническом отравлении солями меди / Алиева У.Б., М. М. Бакуев, М.Г. Кишов //Матер, межвуз. науч.-практ. конф. «Экофакторы и морфология лимфатической системы и внутренних органов».- Махачкала, 2002.-С.6.

4. Алиева У.Б. Цито- и биохимическая характеристика пероксидазы крови при хроническом отравлении солями меди /У.Б. Алиева, М.М. Бакуев, Х.Г. Сулейманова // Матер, междунар. науч. конф. Юбил. вып. «Биохимия -медицине».-Махачкала, 2002.-С. 10-12.

5. Алиева У.Б. Функциональное состояние нейтрофилов крови при хроническом действии ацетата свинца, сульфата меди и нитратами натрия / У.Б. Алиева, М.М. Бакуев, О.М. Смирнова //Сб. науч. тр. ДГМА. Юбил. вып. - Махачкала, 2002.-Т.1.-С.85-87.

6. Алиева У.Б. Цито - и биохимическая характеристика миелопероксидазы нейтрофилов крови при хроническом отравлении солями свинца // Тез. докл. 56-й науч. конф. молодых учен, и студентов.- Махачкала, 2002.-С.82-85.

7. Алиева У.Б. Функциональное состояние нейтрофилов при хроническом химическом отравлении // Тез. докл. 56-й науч. конф. молодых учен, и студентов.- Махачкала, 2002.-С.80-82.

8. Алиева У.Б. Цито - и биохимическое исследование активности миелопероксидазы и спектр белков плазмы крови при хроническом отравлении ацетатом свинца /У.Б. Алиева, М.М. Бакуев, Х.Г. Сулейманова // Губернские медицинские вести.-2003.-№1.-С.8-9.

АВТОРЕФЕРАТДИССЕРТАЦИИ

Подл, в печать 27.10.03. Формат 60 х 84/16 Бум. тип. N1. Печать офсетная.

_Усл. печ. л. 1.0 Тираж 100. Заказ 7._

Волгоградский государственный медицинский университет, 400131, Волгоград, Пл. Павших борцов, 1.

Р- 240 '

РНБ Русский фонд

2004-4 20289

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Алиева, Умхаир Бадрутдиновна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. Обзор литературы .13

ГЛАВА II. Материалы и методы исследования .30

ГЛАВА III. Результаты исследования

3.1. Цитохимические исследования клеток крови при отравлении солями свинца, меди и их комбинацией.

3.1.1.Исследование содержания гликогена, липидов и SH-групп в клетках периферической крови.38

3.1.2. Изучение активности эстераз и СДГ циркулирующих нейтрофилов.47

3.1.3. Исследование основных антимикробных систем (миелопероксидазы и катионных белков) циркулирующих нейтрофилов.52

3.2. Исследование активности ЛДГ, пероксидазы и белков плазмы крови биохимическими методами.

3.2.1. Исследование активности ЛДГ.61

3.2.2. Диск-электрофорез белков плазмы крови.67

3.2.3. Диск-электрофорез пероксидаз крови.73

3.3. Исследование функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов.83

ГЛАВА IV. Обсуждение полученных результатов.91

ВЫВОДЫ.103

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цитохимическая и функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов при хроническом комбинированном химическом отравлении"

Одним из приоритетных медико-биологических проблем, особенно последнего времени, следует считать профилактику неблагоприятных воздействий химических и физических факторов окружающей среды. Известно, что организм человека постоянно подвергается действию целого ряда токсических веществ, которые в малых концентрациях вызывают лишь обратимые нарушения определенных физиологических процессов. При их длительном и в больших концентрациях действии возможны необратимые биохимические, а в последующем и морфологические изменения в различных органах и системах.

В настоящее время с определенной полнотой изучено лишь изолированное действие на организм различных токсических соединений, тогда как их комбинированное действие исследовано недостаточно и лишь на примере некоторых систем.

В частности, действие бинарных смесей свинец-медь и свинец-цинк с целью выведения определенных гигиенических нормативов для определенных групп населения изучены рядом авторов [59, 64, 68,102,111].

Авторами исследованы, в основном, морфофункциональные свойства эритроцитов населения экологически неблагоприятных районов. Установлены сдвиги осмотической резистентности, цитоархитектоники эритроцитов, содержания в них SH-групп и др.

Длительное действие предельно допустимых доз солей тяжелых металлов на клетки крови рассмотрено в работах ряда исследователей [6, 67, 115, 119, 120]. Установлено, что при этом отмечаются изменения гемопоэза, а в отдельных случаях - заболевания крови.

Авторы отмечают, что повреждение гемопоэза выражается в дегенеративных изменениях клеток крови. Эти изменения могут быть обнаружены на всех стадиях дифференцировки клеток и проявляются в виде повреждения клеточных мембран, структуры цитоплазмы и ядра, в нарушении субклеточных структур - митохондрий и лизосом.

Все это, как считают, сокращает продолжительность жизненного цикла клеток и способствует их преждевременной гибели. Предполагается, что дегенеративно измененные клетки, разрушаясь, в ряде случаев превращаются в антигены и сенсибилизируют организм. Образующиеся при этом антитела, действие которых направлено против собственных лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов, изменяют физико-химические свойства клеток и становятся дополнительными факторами, повреждающими клетки.

Однако, следует отметить, что в этом плане со значительной полнотой исследованы лишь эритроциты крови и недостаточно рассмотрены клетки лейкоцитарного ряда.

Из представленных авторами данных можно предположить, что действие указанных токсических факторов, по-видимому, осуществляется в основном, на уровне гемопоэза. Нам представляется, что для подтверждения этого мнения следует подвергнуть детальному исследованию и клетки белой крови, так как трудно представить вариант, когда указанные цитохимические вещества влияют на одни клетки, образующиеся в процессе миелопоэза, и инертны в отношении к другим, хотя возможность преимущественного воздействия их на эритроциты и эритропоэз в целом нельзя отрицать.

В приведенных выше исследованиях акцентируется внимание лишь на клинических и морфологических аспектах вопроса.

Однако, как отмечается в единичных работах [1, 117, 118], где исследованы показатели клеток крови при силикозе, бериллиозе и других профессиональных заболеваниях, не сопровождающихся сколько-нибудь выраженными сдвигами в морфологическом составе крови, имеют место четкие метаболические изменения.

Нам представляется, что это перспективное направление, в плане раскрытия тонких механизмов токсического действия тяжелых металлов, в частности, свинца и меди, на систему крови, заслуживает внимания. Это мнение базируется на известном факте, что в патологических процессах биохимические изменения опережают морфологические.

Влияние соединений свинца и меди на функциональное состояние лейкоцитов рассмотрено в некоторых работах [9, И, 14, 102, 111, 183] с 7 использованием лишь ограниченного количества показателей. По этой причине полученные данные не могут дать полного представления о состоянии фагоцитарной активности клеток при указанных токсических воздействиях. Лишь комплексный подход с охватом всех показателей фагоцитоза в совокупности с цитохимическими исследованиями основных антимикробных систем - миелопероксидазной (МПО) и системы катионных белков, а также ферментов, ответственных за энергетическое обеспечение этих процессов, позволили бы выяснить ключевые этапы нарушения функционального состояния лейкоцитов, а следовательно и состояние неспецифической резистентности организма в целом.

Исследование функционального состояния лейкоцитов при действии бинарной смеси - свинец-медь было бы неполным без рассмотрения возможных изменений белкового состава, в том числе и ферментов, плазмы крови. В работах ряда авторов [4, 36, 110, 114] изучено лишь общее содержание белков плазмы крови. Во всех исследованиях указывается, что при данных токсических воздействиях имеет место гипо- и диспротеинемия. Однако для более четкого представления о количественных и качественных изменениях отдельных белков и сдвигах активности различных ферментов, на наш взгляд, необходимо применение более современных методов микрохимического анализа. Результаты их позволили бы расшифровать некоторые детали сложного механизма развития патологического процесса при выбранных токсических воздействиях.

В связи с этим нам представлялось актуальным комплексное исследование цитохимических показателей и функционального состояния нейтрофильных лейкоцитов (HJI) крови в эксперименте при хроническом воздействии наиболее часто встречающихся токсических факторов окружающей среды - соединений свинца и меди, а также их комбинации. При этом важно было рассмотреть и возможное корригирующее влияние стимуляции иммунной системы организма на выявленное сдвиги.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Цито - и биохимическая характеристика нейтрофильных лейкоцитов крови, а также оценка их функционального состояния при хроническом отравлении солями тяжелых металлов и установление их связи с процессом иммунизации животных.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить цитохимическими методами содержание гликогена, липидов и SH -групп, а также активность эстераз и сукцинатдегидрогеназы нейтрофильных лейкоцитов периферической крови экспериментальных животных при хроническом отравлении уксуснокислым свинцом, сернокислой медью и их комбинацией до и после их иммунизации.

2. Рассмотреть состояние основных антимикробных систем нейтрофильных лейкоцитов, а также его связь с иммунизацией животных исследованием активности миелопероксидазы и содержания катионных белков при отравлении выбранными токсическими веществами.

3. Исследовать при данных токсических воздействиях активность лактатдегидрогеназы, пероксидаз в гомогенате лейкомассы и в сыворотке крови.

4. Изучить методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле белковый состав плазмы крови у опытных и контрольных животных.

5. Определить при выбранных вариантах экспериментов основные показатели фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов и изучить их возможную взаимосвязь с процессом иммунизации.

Научная новизна:

Впервые комплексно исследованы важные цитохимические и основные функциональные показатели нейтрофильных лейкоцитов крови при хроническом отравлении сернокислой медью, ацетатом свинца и их комбинацией.

Установлено, что выбранные токсические соединения подавляют синтез компонентов, ответственных за энергетическое (гликоген) и пластическое (липиды, SH - группы) обеспечение клеток на уровне миелопоэза.

Показано коррегирующее влияние активации иммунной системы животных на токсическое воздействие выбранных солей тяжелых металлов.

В работе впервые подвергнуто параллельному рассмотрению с использованием цитохимических и биохимических методов активность миелопероксидазы, являющейся компонентом основной антимикробной системы нейтрофильных лейкоцитов, что в значительной степени подтверждает достоверность полученных результатов. Эти данные при совокупности с результатами исследований другой защитной системы клеток — катионных белков, а также основных показателей фагоцитоза, позволяют утверждать о реальном снижении при использованных токсических воздействиях неспецифической противомикробной резистентности организма.

Впервые методом диск-электрофореза в полиакриамидном геле установлены конкретные белки плазмы крови, ответственные за гипопротеинемию при отравлении ацетатом свинца, сернокислой медью и их комбинацией - у глобулины, (3-липопротеины и церулоплазмин. Выяснено, что корригирующее влияние процесса иммунизации при этом связано прежде всего количественными и качественными сдвигами у - глобулинов.

Практическая ценность работы:

Выявленные при воздействии указанных токсических веществ сдвиги ферментных систем и других химических компонентов нейтрофильных лейкоцитов имеют значение для клинико-диагностической практики. Они могут быть использованы как ранние критерии для диагностики и дифференциальной диагностики отравлений различного генеза.

Установленный в работе факт реального снижения неспецифической противомикробной резистентности организма при хроническом отравлении солями свинца и меди должны быть учтены при выборе препаратов с лечебной целью и при проведении профилактических мероприятий.

Внедрение результатов работы в практику:

Результаты работы Moiyr быть использованы:

- при составлении практических рекомендаций, а также при разработках нормативных актов на производствах с высоким содержанием в атмосфере соединений свинца и меди;

- при чтении лекций на кафедрах терапии, патофизиологии, гигиены и токсикологии.

Публикация материалов исследования:

По основным положениям диссертации опубликовано 8 работ.

Апробация работ:

Результаты исследования докладывались и обсуждались на:

- всероссийском съезде АГЭ с международным участием (Ижевск, 1998);

- конференции к 100 - летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР, профессор В.Г.Елисеев (Москва, 1999);

- межвузовской научно-практической конференции «Экофакторы и морфология лимфатической системы и внутренних органов» (Махачкала, 2002);

- международной научной конференции посвященной 70-летию ДГМА «Биохимия в медицине» (Махачкала, 2002);

- конференции, посвященной 70-летию ДГМА (Махачкала, 2002);

- научно-практической конференции молодых ученых (Махачкала, 2002);

- Межрегиональной научной конференции посвященной к 100-летию со дня известного русского ученого Г.А.Меркулова «Актуальные вопросы морфологии» (Тверь, 2003).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Алиева, Умхаир Бадрутдиновна

выводы

1. Содержание гликогена, липидов и SH - групп в нейтрофильных лейкоцитах при хроническом отравлении солями свинца и меди имеет тенденцию к снижению, особенно выраженное при их комбинации. Предварительное введение экспериментальным животным эритроцитов барана заметно уменьшает степень достоверности этих показателей, что следует объяснить стимуляцией основных звеньев иммунной системы организма.

2. Причина сдвигов указанных показателей нейтрофильных лейкоцитов, ответственных за энергетическое и пластическое обеспечение клеток, следует считать, прежде всего, непосредственное воздействие токсических факторов на уровне красного костного мозга, выражающееся нарушение синтетических процессов на разных этапов миелопоэза.

3. Активация иммунной системы опытных животных эритроцитами баранов в определенной степени нейтрализует токсическое действие выбранных солей тяжелых металлов на процесс гранулоцитопоэза.

4. Активность гидролитического (эстеразы) и окислительных лактатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы ферментов в нейтрофильных лейкоцитах подавляется при отравлении ацетатом свинца и в варианте с комбинацией вне зависимости от иммунизации, что позволяет утверждать об общем воздействии данного соединения на синтез белковых веществ в клетках.

5. Использованные токсические соединения значительно снижает активность основного компонента антимикробной системы нейтрофильных лейкоцитов-миелопероксидазы, что подтверждается параллельно проведенными цито-и биохимическими исследованиями фермента. Это, несомненно, приводит к снижению и общей неспецифической резистентности организма.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Алиева, Умхаир Бадрутдиновна, Волгоград

1. Абеягузина Р. В., Имельбаева Э. А. Исследования фагоцитов крови у крыс при интоксикации натриевой солью 2,4 дихлорфеноксиуксусной кислоты // Морфология.-2000. №3- С. 9.

2. Адо А. Д. Краткий очерк истории и современного состояния учения о фагоцитозе. М., 1961.

3. Адо А. Д., Маянский А. Н. Современное состояние учения о фагоцитозе // Иммунология. 1983.-№1- С. 20-27.

4. Айтбаев Т. X. Изменения некоторых белковых компонентов сыворотки крови при свинцовой интоксикации: Автореф. дисс. к. м. н. Алма-Ата, 1967.

5. Алексеева О. Г., Волкова А. П. Изучение фагоцитарной реакции нейтрофилов крови в токсикологических экспериментах // Гигиена и санитария. М. 1966 -№8 - С. 70-74.

6. Алданазаров А. Т. Изменения системы крови при сатурнизме: Дисс. на соиск. .д.м.н. Алма-Ата, 1974.

7. Алмазов В. А. Лейкоциты. Физиология системы крови .- Л.: «Наука». — 1968. -С. 93-112.

8. Артамонова В. Г., Плющ О. Г., Шевелева М. А. Некоторые аспекты профессионального воздействия соединений свинца на сердечнососудистую систему // Медицина труда и пром. экология. 1998. - №12. - С. 6-10.

9. Асперов Р. Д., Жумалатова Б. X. Действие свинца на резистентность организма к вирусам // Здравоохранение Казахстана. 1991. №8 - С. 33 - 36.

10. Ю.Ашмарин И. П., Кокряков В. Н., Лызлова С. Н., Раменская Н. П. Взаимодействие катионных белков, гранул и миелопероксидазы лейкоцитов // Вопр. мед. химии. -1977. т.23. - С. 534-537.

11. Н.Бах А. Н. Перекисная теория биологического окисления.- Проблемы кинетики и каталаза. М.:Изд-во АН СССР.- 1940 - Т. 4. - С. 18.

12. Бахов Н. И., Александрова Л. 3., Титов В. Н. // Лаб. дело. 1988. - №6. - С. 3-13.

13. Бедереу В. В. К вопросу диагностики хронической свинцовой интоксикации // Здравоохранение.- Кишинев. 1986. - №6. - С.48-50.

14. Быков А. А., Ревиг Б. А. Оценка риска загрязнения окружающей среды свинцом для здоровья детей в России // Мед. труда и промыш. экология. -2001,-№5.-С. 6-11.

15. Быкова И. А., Иполитов В. П., Чумаченко В. А. Фагоцитоз и иммунитет // Докл. Всесоз. Симп., посвящ. 100-летию создания И. И. Мечниковым фагоцитарной теории иммунитета. М., 1983. - С. 39-40.

16. Быков А. С., Мазуренко Н. С., Селезнев А. С. О роли иммуноглобулинового покрова в процессе фагоцитоза микроорганизмов // Арх. патологии. -1981-т. 43 С. 10-16.

17. Билибин А. Ф. Сепсис: Вопросы патогенеза и лечение / /Тер. архив. 1978. -№8-С. 119-123.

18. Бородин Ю. И., Нурмухаметова Б. Н. Ультраструктурные изменения клеточной выстилки в синусах лимфатических узлов при отравлении хлорорганическим пестицидом // Морфология. 2000. - №1 - С. 7-10.

19. Бондаренко И. Б. Оптимизация оценки активности миелопероксидазы в нейтрофилах крови // Лаб. дело 1986. - №5 - С. 313-314.

20. Венглинская Е. А., Руканцев Б. И„ Шубич М. Г. Флюоресцентно -цитохимическое выявление свободного цитоплазматического катионного белка в лейкоцитах // Лаб. дело. 1976. - №5. - С. 270-273.

21. Верболович В. Миоглобин, гемоглобин, цитохромоксидаза и сукцинатдегидрогеназа при экспериментальной свинцовой интоксикации: Автореф. дисс. к. м. н. Алма-Ата., 1967.

22. Виксман М. Е., Маянский А. М. Применение реакции восстановления нитросинего тетразолия для оценки функционального состояния нейтрофилов человека // Казан, мед. журн. 1977. - т. 58. - С. 99-100.

23. Виксман М. Е., Маянский А. М. Характеристика опсонических факторов по реакции восстановления НСТ Нейтрофилами человека // Бюлл. экспер. биол. и мед.-1980.-№12.-С. 214.

24. Виноградова Т. В. Зависимость уровней циркулирующих иммунных комплексов от функционального состояния фагоцитирующей системы: Автореф. канд. дисс., к. м. н.- М.,1988. С. 286.

25. Виноградова Т. В. и др. Взаимосвязь между уровнем циркулирующих иммунных комплексов и функциональным состоянием фагоцитирующей системы // Иммунология. 1986. - №5. - С. 63-65.

26. Виниченко Н. С., Дурнев В. И. Оценка суммарной миелопероксидазной активности нейтрофилов крови // Лаб. дело. 1986. -№5 - С.313.

27. Врублевская Т. Я., Соловей О. И., Волянык М. П. Контроль содержания тяжелых металлов (Си, Рв, гп) в плазме крови человека // Клин. лаб. диагност. 2002. - №4 - С. 35-38.

28. Гатагонова Т. М. Функциональное состояние сердечно-сосудистой системы у рабочих, занятых в производстве свинца // Медицина труда и промыш. экология. 1995. - №1. - С.15-22.

29. Гасимова 3. М., Казачков В. И., Журков В. С. Особенности реакций взаимодействия лейкоцитарных клеток крови крыс при эмбриотоксическом действии химических соединений // Гигиена и санитария. 1993. - №11. -С.50-52.

30. Герасименко Т. И., Рослый О. Ф., Домнин С. Г. К вопросу о влиянии соединений цинка на токсичность свинца в производстве медных сплавов // РЖ. Токсикология.- 1999. №4. - С. 48.

31. Герасименко Т. И., Домнин С. Г., Рослый О.Ф. и др. Оценка комбинированного действия бинарных смесей свинец медь и свинец - цинк // Мед. труда и пром. экология.- 2000. - №8. - С. 96-40.

32. Гильденскиольд Р. С., Новиков Ю. В., Хамидулин Р. С. и др. Тяжелые металлы в окружающей среде и их влияние на организм // Гигиена и санитария. 1992. - №5-6. - С.6-9.

33. Глухова Л. Г. Гематологический аспект контракта с хлор и фосфорорганическими ядохимикатами // Гигиена и санитария.- 1987. - №7. -С.53-56.

34. Гончарук Е. Г., Бардов В. Г., Картыш А. П. и др. Экспериментальное изучение механизма комбинированного действия на организмионизирующего излучения, пестицидов, нитратов, солей свинца и кадмия // Врачеб. дело. 1995. - №5-6. - С. 9-11.

35. Дегтярева Т. Д., Кацнельсон Б. А. и др. Оценка эффективности средств биологической профилактики свинцовой интоксикации // Мед. труда и пром. экология. 2000. - №3. - С. 40-43.

36. Дегтярева Т. Д., Кацнельсон Б. А. и др. Использование биологически активных веществ в профилактике токсического действия некоторых тяжелых металлов // Гигиена и санитария. 2001. - №5. - С. 71-74.

37. Дейнека С. Е.,. Хлус К. Н. Стеараты металлов некоторые аспекты токсикодинамики // Гигиена и санитария. - 1992. - №3. - С. 20-23.

38. Долгушин И. И., Зурочка А. В., Чукиев А. В. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности репаративных реакций поврежденной ткани // Вест. РАМН. 2000. - №2. - С.14-19.

39. Жаркова Н. С. Экспериментальное обоснование действия аэрозалий свинца и мышьяка // Вопросы токсикологии промышленных химических веществ: Сб.-Алма-Ата, 1971.-С.95-96.

40. Жекова М. М., Ашмарин И. П. Выброс миелопероксидазы нейтрофилов при сорбции бактерий // Журн. микроб, эпидем. и иммунобиол. 1976. - №3. - С. 70-73.

41. Житова Е. И., Кудрящова К. И., Алымова А. Ф. Функциональная активность фагоцитов как показатель неспецифической реактивности организма // Тр. Горьк. мединститута. 1967. - С. 48-52.-Вып.22.

42. Зайцева Н. В., Тарыкина Т. И., Землянова М. А. Влияние на здоровье населения выбросов свинца автотранспортом // Гигиена и санитария. 1999. -№3.-С. 3-5.

43. Ефстафьева Е. В., Башкин В. Н. и др. Физиологические и биогеохимические аспекты действия пестицидов на организм человека // Гигиена и санитария. 1994. - №2. - С. 45-47.

44. Иваницкий В. А. Информационная характеристика катехоламинового обмена при воздействии пестицидов. // Проблемы гигиены и токсикологии пестицидов.- Киев. 1981. - С.101-102.

45. Иваницкий А. М., Стасенкова К. П., Соколов А. Б. // Вопросы питания. -1985. №2. - С.63-66.

46. Иванов С. Д., Семенов В. В., Кованько В. Г. Влияние малых доз облучения на аккумуляцию низких концентраций свинца в организме и поведенческую активность животных // Токсикологический вестник. 2002. - №5. - С. 39-44.

47. Иванова Н. И. Возрастные особенности фагоцитарной реакции нейтрофилов // Врач. дело. 1976. - №5. - С. 49-52.

48. Измеров Н. Ф. К проблеме оценки воздействия свинца на организм человека // Медицина труда и промышленная экология. 1998. - №12. - С. 1-4.

49. Ильичева С. А., Бульбулян М. А., Заридзе Д. Г., Оценка канцерогенности свинца у работников типографии // Мед. труда и промыш. экология. 2002. - №8. - С. 15-19.

50. Истаманова Т. С., Алмазов В. А. Лейкопения и агранулоцитозы: Л.: Медгиз. 1961. - С. 186.

51. Кавалджиева Б. А., Николаева П. Диагностическая значимость некоторых показателей энергетического обмена эритроцитов у рабочих, имеющихпрофессиональный контакт со свинцом // Гигиена труда и проф. заболевания. -1990. -№11.-С.46-48.

52. Карпова J1. С., Малов А. М. Иммунный статус у детей с различным уровнем в крови Hg, Рв и Си // РЖ. Токсикология. 2000. - №9. - С. 20.

53. Касохов Т. Б. Вторичная иммунология и интерфероновая недостаточность у детей при экопатогенном воздействии свинца: Автореф. канд. дисс.к. м. н. -М, 1999.

54. Кацнельсон Б. А., Безель В. С., Конышева J1. К. О системном анализе токсико-кинетических закономерностей на основе камерного моделирования в свете задач гигиенической токсикологии // Гигиена и санитария. 1992. -№5-6.-С. 9-11.

55. Колбасин П. Н. некоторые особенности биоэнергетики нейтрофилов крови при комбинированном воздействии пестицидов на фоне различных уровней физической нагрузки // Гигиена и санитария. 1992. - №7-8. - С. 68-69.

56. Кокряков В. Н. Катионные белки лизосом нейтрофильных гранулоцитов при фагоцитозе и воспалении // Вопр. мед. химии. 1990. - №6. - С. 13-16.

57. Кокряков О. К., Пигаревский В. Е., Алешина Г. М., Шамова О. В. Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций. -Горький, 1989. С. 98-103.

58. Кравченко О. К., Ермоленко А. Е. Значение гигиенического мониторинга о выявлении закономерностей развития хронической свинцовой интоксикации на предприятиях аккумуляторной промышленности // Мед. труда и пром. экология. 1998. - №12. - С. 14-18.

59. Кузьминская У* А Результаты изучения биохимических механизмов действия ряда пестицидов // Проблемы гигиены и токсикологии пестицидов. -Киев.-1981.-С. 14-19.

60. Кундиев Ю. И., Стежка В. А. и др. Зависимость изменения иммунных и биохимических механизмов поддержания гомеостазиса от материальной кумуляции свинца в организме // Медиц. труда и пром. экология. 2001.-№5.-С.11-18.

61. Ландриган Ф. Современные проблемы эпидемиологии и токсикологии профессионального воздействия свинца // Гигиена труда и проф. заболевания. 1991. - №6. - С. 25-27.

62. Ларионов В. Г. Цитоэнзимохимические изменения лимфоцитов крови при острой интоксикации гетерофосом в эксперименте // Проблемы гигиены и токсикологии пестицидов. Киев. - 1981. - С. 139-140.

63. Ливанов Г. А., Соболев м. Б., ревиг Б. А. Свинцовая опасность и здоровье населения // Семейный врач. 1999. - №2. - С. 18-22.

64. Луганов И. С., Сейц И. Ф. Методы выделения лейкоцитов и тромбоцитов из крови человека // Лаб. дело. 1967. - №9. - С.521-526.

65. Любченко П. Н. Дисахаридазная активность тонкой кишки при хроническом профессиональном воздействии свинца // Сов. медицина. 1988. - №2. -С.109-113.

66. Магомедова 3. С. Патофизиологические аспекты изменений в иммунной системе при воздействии солей свинца, пестицидов, нитратов: Автореф. канд. дисс.к.м.н. Ростов н/Дону, 1999.

67. Мазинг Ю. А. Нейтрофильные гранулоциты и системы защиты организма // Арх. патологии. 1991. - №9. - С. 70-73.

68. Мазинг Ю. А, Функциональная морфология катионных белков лизосом нейтрофильных гранулоцитов // Вопр. мед. химии. 1990. - №6. - С. 8-16.

69. Макарьева И. В. Функциональные пробы лейкоцитов в диагностике лейкопений токсического генеза // Медицина труда и пром. экология. 1995. -№12.-С. 36-38.

70. Макашев К. К. Нарушение обменных процессов при сатурнизме // Социальная гигиена и организация здравоохранения, гигиена труда и проф. патологияСб.- Алма-Ата, 1970. С. 209-210.

71. Маянский А. Н., Бояринова Л. В. Опсоническая кооперация в системе нейтрофильного фагоцитоза // Усп. совр. биол.-Т. 96. С.224-237.-Вып.2.

72. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. // Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука. 1989. С.116.

73. Маянский А. Н., Пикуза О. И. Клинические аспекты фагоцитоза.- Казань, 1993.

74. Мечников И. И. Ответ некоторым критикам фагоцитарной теории: Критический обзор // Академическое собрание сочинений. 1954. - №5. -С. 282-283.

75. Михлин Д. М. Пероксиды и пероксидазы /химизм медленного окисления/. -М.: Наука, 1947.-С. 113.

76. Нагоев Б. С., Шубич М. Г. Функциональная активность лейкоцитов больных пневмонией // Клин. мед. 1979. - т. 57. - №4. - С. 31-34.

77. Нагоев Б. С., Абидов М. Т., Каменская Г, А., Пак С. Г. К вопросу о роли протеиназ нейтрофильных гранулоцитов при экспериментальной эндотоксемии: Сб. науч. тр. Нальчик. - 1991. - С. 7-11.

78. Осипов А. Н., Рязанов И. А. и др. Изменения структурно-функциональных показателей клеток крови мышей при длительном воздействии свинца и кадмия // Токсикологический вестник. 2001. -№1. - С.2-6.

79. Пальцин А. А., Колкер И. И., Червинская Н. В., Победин В. Г. Электронно-авторадиографическое исследование взаимодействия полиморфноядерныхлейкоцитов человека со стафилококками // Арх. патол. 1982.- Т. 44. -С. 12-18.-Вып.7.

80. Паранько Н. М., Рублевская Н. И. Гигиеническая характеристика загрязнения тяжелыми металлами окружающей среды промышленного региона и иммунный статус детей // Гигиена и санитария. 1999. - №2. - С.51-54.

81. Пашкевич И. А., Успенская Ю. А., Нефедова В. В., Егорова А. Б. Анализ ядрышкового аппарата клеток костного мозга при свинцовой интоксикации // Гигиена и санитария. 2002. - №4. - С. 58-59.

82. Петров Е. Ю., Зорин А. Д., Минеев Б. А. Анализ причин загрязнения тяжелыми металлами атмосферного воздуха г. Кстово Нижегородской области // Гигиена и санитария. 1999. - №5. - С. 12-15.

83. Пигаревский В. Е., Мазинг Ю. А., Кокряков В. И. Методика совместного выявления пероксидазы и катионных белков в гранулоцитах крови // Лаб. дело. 1982. - №5. - С. 263-265.

84. Пигаревский В. Е., Мазинг Ю. А. Лизосомально-катионный тест: Метод, рекоменд. М., 1987.

85. Пигаревский В. Е., Толыбеков А. С., Тучков В. С., Блинкова Э. Н. Морфологические проявления секреторной активности нейтрофильных лейкоцитов при воспалении // Арх. патол. 1976. - Т. 38.- С. 55-56.-Вып.5.

86. Пигаревский В. Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М.: Медицина. -1983.

87. Пигаревский В. Е., Мазинг Ю. А., Кокряков В. Н. Возрастные иммунодефицитные системы нейтрофильных гранулоцитов // VIII-Всесоюзный съезд патологоанатомов. Тбилиси, 1989. Тбилиси.-1989.-С. 232-234.

88. Пигаревский В. Е. Клинико-морфологические тесты оценки функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов // Арх. патол. -1987. Т. 49. - С. 77-84.-Вып.2.

89. Пикуза О. И., Маянский А. Н. Особенности активации кислородо-зависимого метаболизма нейтрофилов при воздействии лимфоцитов у новорожденных детей, больных ОРЗ и пневмонией // Педиатрия. 1986. - №7. - С. 27-29.

90. Пинигин М. А. Состояние и перспективы количественной оценки влияния химического загрязнения атмосферы на здоровье населения // Гигиена и санитария. 2001. - №5.- С. 53-58.

91. Подунова JI. Г. Некоторые итоги деятельности санэпидслужбы по изучению влияния свинца на состояние здоровья работающих // Медицина труда и пром. экология. 1998. - №12. - С. 4-6.

92. Покровских А. А., Тутельян В. А. современные представления о лизосомах // Усп. совр. биол. т. 68. - №3. - С. 318-339.

93. Понов Т. В. и др. Метод определения активности пероксидазы в крови // Гигиена и санитария. 1971. - №10. - С.89-91.

94. Райхлин Н. Т., Шнайдман И. М. Гистохимия соединительной ткани при силикозе .- М.: Медицина. 1970. - С. 248.

95. Ревич Б. А., Быков А. А., Ляпунов С. М. Опыт изучения воздействия свинца на состояние здоровья детей г. Белово // Мед. труда и промыш. экология. 1998. - №12. - С.25-32.

96. Ревич Б. А. Свинец и здоровье детей: Обзор // РЖ. Экология человека. -1998.-№7.-С. 1-23.

97. Роговин В. В. Пероксидазная активность клеточных органелл лейкоцитов и других клеток. /Электронномикроспическое исследование/: Автореф. докт. дисс., д. м. н.- М. 1981. - С. 19.

98. Роговин В. В., Пирузян JI. А., Муравьев Р. А. Пероксидазосомич. — М.: Наука, 1977.-С.205.

99. Роговин В. В., Муравьев Р. А., Пирузли JI. А. и др. Электронно-цитохимическое исследование природы пероксидазной активности влизосомах моноядерных фагоцитов костного костного мозга и селезенки // Изв. АН СССР. Сер. Биол. 1974. - №4. - С. 522-533.

100. Рослый О. Ф., Домнин С. Г., Герасименко Т. И. Особенности комбинированного действия свинца, меди и цинка // Мед. труда и промыш. экология. 2000. - №10. - С. 28-30.

101. Рослый О. Ф., Герасименко Т. И., Федорук А. А. Экспериментально-гигиеническая оценка двух бинарных смесей свинец медь и свинец - цинк // Гигиена и санитария. - 2001. - №2. - С. 65-67.

102. Рубин Б. А., Воронков JI. А., Капустина Г. И. Об участии пероксидазы в окислительных превращениях НАДФ, Нг // Биохимия. 1968. - т. 33.- С. 121-125.-Вып.1.

103. ИЗ. Саркисов Д. С. Лейкоциты и микробы // Мед. газета. 1984. - 19 октября.

104. Сафронов В. Г., Титов В. В., Хасанова Р. М., Набиев Р. Ф. Морфологические и биохимические показатели крови при отравлении белых крыс соединениями свинца, кадмия и ртути // РЖ. 2002. - №1. - С.6.

105. Свинкина Н. В., Грибова И. А. // Проблемы гематол. 1976. - №7. - С. 15-18.

106. Соколов В. В., Нарциссов Р. П., Ахундов Р. Ф. Цитохимия ферментов в профпатологии.-М.: Медицина. -1975.

107. Соколов В. В., Грибова И. А. Гематологические показатели здорового человекаМ.: Медицина. 1972. - С. 104.

108. Соколов В. В., Иванова Л. А., Толчева Э. И. Материалы 1-го Всесоюзного съезда врачей лаборантов. - Харьков, 1973. -Т.4.-С. 96-98.

109. Соркина Н. С. Ранняя диагностика и вопросы лечения хронической свинцовой интоксикации : Дисс. к . м. н. М., - 1971.

110. Соркина Н. С., Евлашко Ю. П. // Клин. мед. 1970. - №3. - С. 83-89.

111. Струков А. И., Пауков В. С., Кауфман О. Я. Клеточный скелет лейкоцитов в норме и патологии // Арх. патол. 1983. - Т. 45. - С. 81-87.- Вып.6.

112. Сулейманов Ш. Н. Изменения физико-химических свойств крови при хронической свинцовой интоксикации: Автореф. дисс. к. м. н.- Актюбинск. -1975.

113. Тарасова JI. А, Сорокина н. С., Молодкина Н. Н. К вопросу о биологическом мониторинге состояния здоровья работающих в контакте со свинцом // Мед. труда и пром. экология. 1998. - №12. - С.11-13.

114. Турусов В. С., Ракитский В. Н. Классификация пестицидов согласно их канцерогеннности для человека // Вопр. онкологии. 1997. - 43 (З).-С. 299303.

115. Уразбаева Р. Е. Влияние свинцовой интоксикации на аллергию немедленного типа // Гигиена труда и проф. заболевания. 1986. - №8. -С.50-51

116. Фролова В. М., Хангулов С. В., Янковский О. Ю., Роговин В. В. Изучение пероксидазосом нейтрофильных лейкоцитов человека // Вопр. мед. химии. -1985. Т. 31.-С. 54-57.-Вып.6.

117. Шафран М. Г. Миелопероксидаза нейтрофильных лейкоцитов // Успехи совр. биологии. 1981. - т. 92. - №3. - С. 363-379.

118. Шафран М. Г. Выделение и некоторые свойства миелопероксидазы костного мозга человека // Вопр. мед. химии. 1979. - №2. - С. 149-153.

119. Шинкаренко Л. Н. Цитохимическое изучение некоторых ферментов в периферической крови у здоровых детей // Здравоохранение Казахстана. -1973. -№11.-С.38.

120. Шубиг М. Г. Лейкоцитарные факторы естественной резистентности организма // Факторы естественного иммунитета при различных физиологических патологических состояниях. Омск. - 1976. - Вып. 4. - С. 16-17.

121. Шубиг М. Г. // Лаб. дело. 1966. - №6. - С.323-327.

122. Янковский О. Ю., Раненская Н. П., Кокряков В. Н. и др. Метод выделения миелопероксидазы из полиморфноядерных лейкоцитов кролика и коровы // Вестник Ленинградского ун-та. 1978. -№5. - С. 99-ЮЗ.-Вып.З.

123. Янковский О. Ю., Довнар Т. Е., Ткаченко А. А. К механизму антимикробного действия миелопероксидазы. Роль абсорбции фермента на поверхности клетки-мишени // Журн. микроб, эпид. и иммун. 1981. - №6. -С. 58-61.

124. Янковский О. Ю., Яблуновская И. А. Образование комплекса между миелопероксидазой и опсонинами плазмы крови человека. 1995. - №9. - С. 320-322.

125. Abramson М., Gross J. Further studies on a collagenase in middle ear cholesteatoma // Ann.Otol.Rhinol.Laryngol. 1971. -Vol. 80 - N.2.- P. 177.

126. Alexander J.W., Miller S., Hegg M.E. Cyclic variation of the antibacterial function of neutrphils in laboratory animals // Fed. Proc.- 1970.- Vol.29.- P.753a.

127. Bagchi D., Bagchi M., Hassoun E.A., Stohs S,J. In vitro and in vivo generation of reactive oxygen species, DNA damage and lactate dehydrogenase leakage by selected pesticides // Toxicology.- 1995. Vol.104.- N1-3.- P.129-140.

128. Baggiolini M., Bretz U., Gusus B. Biochemical characterization of azurophil and specific granules from human and rabbit polymorphonuclear leukocytes // Schweiz. Med. Wochenschr. 1974. - V.104.- N4.- P. 129-132.

129. Baggiolini M., Hirsch J.G., de Duve C. Further biochemical and morphological studies of granule fractions from rabbit heterophil leukocytes //J.Cell Biol.- 1970.-Vol.45.- N3.- P. 586-597.

130. Baggiolini M., Hirsch J.G., de Duve C. Resolution of granules from rabbit geterophil leukocytes into distinct population by zonal sedimentation // J.Cell. Biol.- 1969. Vol. 40.- N2.- P.529-541.

131. Bainton D.F. The discovery of lysosomes. // J. Cell. Biol. 1981 - Vol.91. -N3.- P.3.- P.66s-76s.

132. Bainton D.F. Sequential degranulation of the two types of polymorphonuclear leukocyte granules during phagocytosis of microorganisms. // J.Cell. Biol. 1973. Vol.58-N2,- P.249-264.

133. Bainton D.F., Farquhar M.G. Differences in enzyme content of azurophil and specific granules of polymorphonuclear leukocytes. II. Cytochemistry and electron microscopy of bone marrow cells // J.CelLBiol. 1968. -Vol.39 - N2.- P.299-317.

134. Barrington E.J. Digestive enzymes. // Adv. Сотр. Physiol. Biochem 1962. -Vol.1 - P. 1-65.

135. Bessis M., Maigne J. // Diagnosis of acute leukemia varieties by peroxidase reaction studied by electron microscopy. Its value and its limitations // Rev. Eur. Etud. Clin. Biol., 1970.-Vol.15.-N6.- P.691-698.

136. Borel J.F. Studies on chemotaxis. Effect of subcellular leukocyte fractions on neutrophils and macrophages.// Int. Arch.Allergy Appl. Immunol. 1970. - V.39.-N2-3.- P.247-271.

137. Botha CJ, Swan GE, Minnaar PP. Pharmacokinetics of ammonium tetrathiomolybdate following inravenous administration i sheep. // J.S.Afr.Vet. Assoc.- 1995.- Vol. 66.-N1.- P.6 10.

138. Bretz U., Baggiolini M. Biochemical and morphological characterization of azurophil and specific granules of human neutrophilic polymorphonuclear leukocytes. //J.Cell. Biol. 1974 - V.63. -Nl.- P.251-269.

139. Carmignani M., Volpe A.R., Boscolo P., Qiao N., Di Gioacchino M., Grilli A., Felaco M. Catcholamine and nitric oxide systems as targets of chronic lead exposure in inducing selective functional impairment. // Life Sci.- 2000.- Vol.68.-N4.-401-415.

140. Chamberlain A.C. Prediction of response of blood lead to airborne and dietary lead from experiments with lead isotopesc// Proc.R.Soc.Lond. В Biol. Sci 1985. -V.224.-N 1235.-P. 149-182.

141. Cohn Z.A. The fate of bacteria within phagocytic cells. I. The degradation of isotopically labeled bacteria by polymorphonuclear leucocytes and macrophages // J.Exp.Med. 1963. - V. 117. - P.27-42.

142. Costa L.G. Basic toxicology of pesticides // Occup. Med.- 1997.- Vol. 12.- N2.-P.251-268.

143. Dunford H.B., Stillman J.S. On the function and mechanism of action of peroxidases. // Coord. Chem. Revs. 1976. - V.I9 - N.3. P.141-145.

144. Dunn W.B., Hardin J.H., Spicer S.S. Ultrastuctuctural localization of myeloperoxidase in human neutrophil and rabbit heterophil and eosinophil leukocytes// Blood. 1968. - V. 32. - N6.- P.395-344.

145. Edwards H.H., Morrison M. Localization of thyroid peroxidase and the site of iodination in rat thyroid gland // Biochem.J. 1976. - Vol.158. - N2 - P.477-479.

146. Eife R., Weiss M., Muller Hocker M., et al. Chronic poisoning by copper in tap water: II. Copper intoxications with predominantly sistemic symptoms. // Eur. J.Med.Res.- 1999.- Vol.4.-N6. P.224-228.

147. Elliott K., O'Connor M. Peptide transport and hydrolysis. // Ciba Found. Sump.50. Oxford, ASP. 1977. - P.385

148. Evans W.H., Karnovsky M.L. The biochemical bases of phagocytosis. IV. Some aspects of carbohydrate metabolism during phagocytosis // Biochemistry. -1962.-V.1.-P. 159-166.

149. Farquhar M.G., Bainton D.F., Baggiolini M., de Duve C., Cytochemical localization of acid phosphatase activity in granular fractions from rabbit polymorphonuclear leukocytes // J.Cell Biol. 1972. - Vol.-54.- N1.- - P 141-156.

150. Gallin J.I. Human neutrophil heterogeneity exists, but is it meaningful? // Blood.- 1984. Vol.63. N5.- P.977-983.

151. Goldstein I.M., Kaplan H.B., Radin A., Frosh M. // Independent effects of IgG and complement upon human polymorphonuclear leukocyte function // J.Immunol. 1976. - V. 117. N4.- P. 1282-1287.

152. Goldstein I.M., Roos D., Kaplan H.B., Weissman G. Complement and immunoglobulines stimulate superoxide production by human leukocytes independently of phagocysis. // J.Clin. Invest. 1975. - V. 56. - N5.- Vol.P.l 1551163.

153. Gordon R.A., Roberts G., Amin Z., Paloucek F.P. Massive lead concentration following an environmental exposure // J.Toxicol.Clin.Toxicol. -1997.- Vol.35.-N5.-P.524.

154. Grignaschi V.J., Fernandes S.M. Isoenzimes de las peroxidases leucocitarias. // Rev. Asoc. Bioguim. Argent. 1974 - V.39- P.99-101.

155. Grobler D.G, Swan G.E. Copper poisoningin the Kruger National Park: field investigation in wild ruminants. Onderstepoort J.Vet. Res.- 1999.- Vol.66.- N3.-P.157-168.

156. Harlan J.M. Leukocyte-endothelial interactions // Blood. 1985. - V.65.-N3.- P.513-525. // Blood. - 1985. - V.65. - P.513-525.

157. Harrison J.E., Schultz J. Studies on the chlorinating activity of myeloperoxidase // J.Biol.Chem. 1976. - V.251- N5.- P.1371-1374.

158. Heimann W., Wisser K. Zur Kinetik der peroxidatischen Reaktien. // Nahrung. 1968.-V.12-N1.-P.45-52.

159. Hirsch J.G., Cohn Z.A. Degranulation of polymorphonuclear leukocytes following phagocytosis of microorganisms. // J.Exp. Med. — 1960. V.112 -P.1005-1016.

160. HofFstein S., Goldstein I.M., Weissmann G. Role of microtubule assembly in lysosomal enzyme secretion from human polymorphonuclear leukocytes. A reevaluation // J.Cell. Biol. 1977.- V.73.-N1.- P. 242-256.

161. Klebanoff S.J., Clark R. The neutrophil functions and clinical disorders. -Amsterdam: North Holland Publ.Co. 1978.- P.313.

162. Klebanoff S .J., Green W.L. Degradation of thyroid hormones by phagocytosing human leukocytes // J.Clin.Invest. 1973 - V.52. - N1. - P.60-72.

163. Klebanoff S.J., White L.R. Iodination defect in the leukocytes of a patient with chronic granulomatous disease of childhood. // New Engl.J.Med.- 1969. V.280-N9.- P .460-466.

164. Koeffler H.P., Ranyard J., Pertcheck M. Myeloperoxidase: its structure and expression during myeloid differentiation // Blood. 1985. - V.65- N2.- P. 484491.

165. Lanphear B.P. Dietrich K., Auinger P., Cox C. Cognitive deficits associated with blood lead concentrations <10 microg/dL in US children and adolescents. // Public Health Rep.- 2000.- Vol.115.- N6.- 521-529.

166. Leder L.D. Origin and cytogenetic significance of monocyte peroxidase // Klin. Wochenschr. 1966. - V.44.- N14.- P.854-855.

167. Malmguist J. Serum Myeloperoxidase in leukemia and polycytaemia vera. // Scand. J. Haemat. 1972. - V.9 - N4. - P.311-317.

168. Martinez O., Lopez de Goenaga M.I. // Acta Med.Colomb. 1997 - Vol.22.-N5.-P. 233-239.

169. McCall C.E., Caves J., Cooper R., DeChatelet L.R. Functional characteristics of human toxic neutrophils. // J.Infect.Dis. 1971.- Vol.124.- N1.- P.68-75.

170. McCall C.E., DeChatelet L.R., Cooper M.R., Ashburn P. The effects of ascorbic acid on bactericidal mechanisms of neutrophils. // J.Infect.Dis. — 1971.-Vol.124.- N2.-P. 194-198.

171. McCall C.E., DeChatelet L.R., Cooper M.R., Shannon C. Human toxic neutrophils. Metabolic characteristics // J.Infect.Dis. 1973.- Vol.127.- N1.- P.26-33.

172. McKinney P.E. Acute elevation of blood lead levels within hours of lead shot ingestion. // J.Toxicol. Clin Toxicol. 2000.- Vol.38.- N4. - P.435-440.

173. Mehdi J.K., al-Imarah F.J., al-Suhail A.A. Levels of some trace metals and related enzymes in workers at storage-battery factories in Iraq. // East. Mediterr. Health J. 2000.- Vol.6.- N1.- P.76-82.

174. Metcalf D. Tranformation of granulocytes to macrophages in bone marrow colonies in vitro. //J.Cell.Physiol.- 1971.-Vol.77.-N2.-P.277-280.

175. Murphy P. The neutrophil. Oxford: Plenum Med. Press., 1976. - P. 217.

176. Ogata M., Sanada H., Mizugaki J. Myeloperoxidase deficiency in leukocytes. // Proc. Natl.Acad.Sci.USA. 1978 - V.54 - N6. - P. 304-306.

177. Oliver J.M. Cell biology of leukocyte abnormalities membrane and cytoskeletal function in normal and defective cell. A review // Am. J. Path. - 1978.- V.93-N1.- P.221-270.

178. Polland T.D. Role of microtubule assembly in lysosomal enzyme secretion from human polymorpfonuclear leukocytes. // J.Cell. Biol. 1981. - V91. - N2. -P.190-191.

179. Salmon S.E., Cline M.J., Schultz J. and Lehrer R.I. Myeloperoxidase deficiency. Immunologic study of a genetic leukocyte defect. // New End. J. Med.- 1970. Vol.282. N5.- P.250-253.

180. Sbarra A J., Jacobs A.A., Strauss R.R., Paul B.B., Mitchel G.W.Jr. The biochemical and antimicrobial activities of phagocyting cell // Amer.J.Clin.Nutr. -1971. V.24. -N2.- P. 272-281.

181. Selvaraj R.J., Paul B.B., Strans R.R., Jacobs A.A., Sbarra A.J. Enhanced killing of myeloperoxidase-coated bacteria in the myeloperoxidase H202 - CL system. // J.Infect.Dis. - 1978. - V. 137 - N4. - P.481-485.

182. Shen X., Rosen J.F., Guo D., Wu S. Childhood lead poisoning in China. // Sci. Total Environ. 1996. - Vol.181.-N2.- P.101-109.

183. Sithisarankul P., Cadorette M., Davoli C.T., et al. Plasma 5-aminolevulinic acid concentration and lead exposure in children. // Environ. Res. 1999. -Vol.80.-N1.-P.41-49.

184. Ulevitch R.J., Henson P., Holmes D., Good R.A. An in vitro study of exocytosis of neutrophyl granule enzymes in chronic granulomatous disease neutrophils. // J. Immunol. 1974. - Vol.112 - N4.- P.1383-1386.

185. Vig E.K, Ни H. Lead toxicity in older adults. // J.Am.Geriats.Soc.- 2000. -Vol.48.-N11.- P.1501-1506.

186. Weissmann G., Goldstein I.M., Hoffstein S. // Mechanisms of degranulation of neutrophils // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1975. - V.253.- P.750-762.

187. Werner S. Improved staining for peroxidase with Benzidine and improved double staining immunoperoxidase procedure. // Histochem. and Cytochem. -1972.- V.20. N4. - P. 272-278.

188. Williams R.C.Jr., Dossett J.H., Quie P.G. Comparative studies of immunoglobulin opsonins in osteomyelitis and other established infections. // Immunology. 1969 - V. 17. - N2.- P. 249- 265.

189. Wright S.D., Jong M.T. Adhesion-promoting receptors on human macrophages recognize Escherichia coli by binding to lipopolysaccharide // J. Exp. Med. 1986 - V.164. -N6.- P.1876-1888.

190. Zigmond S.H., Sullivan S.J., Lauffeburger D.A. Kinetic analysis of chemotactic peptide receptor modulation // J.Cell. Biol. 1982.- V.92.- N1.-P.34-43.