Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитогенетическое исследование популяций коренного и пришлого населения Ямало-Ненецкого АО в контексте мониторинга экологической обстановки

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Цитогенетическое исследование популяций коренного и пришлого населения Ямало-Ненецкого АО в контексте мониторинга экологической обстановки"

На правах рукописи УДК 576.316:575.224:612.014.482:575.174.2

I ПX ПОНОМАРЕВА Анна Владимировна

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОПУЛЯЦИЙ КОРЕННОГО И ПРИШЛОГО НАСЕЛЕНИЯ ЯМАЛО-НЕНЕЦКОГО АО В КОНТЕКСТЕ МОНИТОРИНГА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ОБСТАНОВКИ

Генетика-03.00.15

Авт ореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 2004

Работа выполнена в лаборатории молекулярной и эволюционной генетики человека, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.

Научный руководитель: кандидат биологических наук,

Л.П. Осипова

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

кандидат биологических наук, В.Г. Матвеева, Государственный Новосибирский областной клинический диагностический центр, г. Новосибирск

доктор биологических наук, профессор Л.В. Высоцкая

Новосибирский государственный университет, г. Новосибирск

доктор медицинских наук, М.И. Воевода

Институт терапии СО РАМН

Ведущее учреждение: Институт общей генетики им. Вавилова,

г. Москва

Защита диссертации состоится Ю! И ■ ОЦ на утреннем заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук (Д-ООЗ.011.01) в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале Института по адресу: 630090, г. Новосибирск, проспект Лаврентьева, 10. Факс: (3832) 33-12-78; e-mail: dissov@bionet.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН. Автореферат разослан ЮИ^Т. 2004г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

А Д. Груздев

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность_проблемы. Воздействие неблагоприятных

антропогенных факторов на геном человека является одним из важных показателей экологического неблагополучия. Мутации генома проявляются на различных уровнях, поэтому анализ генетических последствий антропогенных загрязнений должен базироваться на комплексной системе мониторинга, включающей разные уровни - от молекулярно-генетического до биоценологического. Ухудшение экологической обстановки особенно болезненно сказывается на коренных народностях Севера, которые на протяжении долгого времени приспосабливались к гармоничному сосуществованию с природой в экстремальных климатических условиях. Исследования воздействия антропогенных факторов на геном человека стали актуальны, в частности, в связи с активным развитием нефтегазового комплекса на Севере России, а также после многочисленных случаев широкомасштабного радиационного загрязнения населенных людьми территорий. В исследованиях, проведенных в Пуровском районе Ямало-Ненецкого АО (Осипова и др., 1998а; Щербов и др., 2001), был выявлен ряд факторов, позволивших предположить существование различного рода техногенных (глобальных, региональных, локальных) воздействий, негативно влияющих на экологическую ситуацию в данном регионе и неблагоприятно отражающихся на здоровье человека. В свете вышеперечисленных факторов и актуальности проблемы возникла необходимость в проведении данной работы, которая является частью обширной комплексной программы исследований, проводимой в Пуровском районе ЯНАО рядом институтов СО РАН.

Цели и задачи исследования. Нашей целью было исследовать спектр и частоты хромосомных аберраций в различных группах жителей Ямало-Ненецкого автономного округа, проживающих в условиях экологического неблагополучия. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. В ходе экспедиций по Ямало-Ненецкому автономному округу собрать необходимое для исследований количество материала и сформировать адекватные по месту проживания, возрасту и национальности группы людей для их дальнейшего цитогенетического обследования.

2. Оценить полученные данные в обследованных группах по частотам хромосомных аберраций в сравнении с контрольными показателями.

3. Оценить частоты маркерных для действия радиации хромосом, в связи с имеющимися данными о присутствии радиационной компоненты в комплексе экологически неблагоприятных факторов ЯНАО.

4. Провести сравнение цитогенетических показателей в группах взрослых и детей для выявления и оценки вероятного воздействия ядерных испытаний, проводимых в 1950-1960 гг., на контактное поколение.

5. Оценить спектр и частоты хромосомных аберраций в разных этнических группах населения Самбургской тундры для выявления вероятных межэтнических различий.

6. В рамках данной работы провести сравнительное исследование спектра хромосомных аберраций человека, выявляемых на препаратах, окрашенных рутинным и ОТО-способом.

Научная новизна и практическая ценность. Впервые в рамках комплексной программы исследований проведено цитогенетическое обследование коренных жителей Ямало-Ненецкого автономного округа и пришлого населения, проживающего на данной территории более 20 лет. Выявлено превышение над контрольным уровнем среднегрупповых частот хромосомных аберраций, а также частот дицентрических и кольцевых хромосом, как в выборке коренных жителей, так и в выборке пришлых жителей. В совокупности с другими исследованиями комплексной программы показано, что Пуровский район ЯНАО попал, в частности, под негативное влияние ядерного полигона "Северный". Полученные результаты могут быть использованы при разработке комплекса мероприятий для реабилитации здоровья пострадавшего населения.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации были представлены на 1-м Российском научном симпозиуме «Оценка рисков

загрязнения окружающей среды» (Санкт-Петербург, 1998); на специализированном семинаре «Радиационная ситуация и здоровье населения в Урало-Сибирском регионе: прошедшие десятилетия и взгляд в будущее» (Новосибирск, 1998); на международном симпозиуме «Geochemistry of the Earth's Surface» (Reykavik, 1999); на П-м международном совещании, посвященном памяти профессора Перельмана А.И. (Новороссийск, 1999); на Х[-м международном конгрессе «Circumpolar Health» (Harstad, Norway, 2000); на II (IV)-M Российском съезде медицинских генетиков (Курск, 2000); на международной конференции «Modern problems of radiobiology, radioecology and evolution» (Дубна, 2000); на IV-м Съезде по радиационным исследованиям (Москва, 2001); на 1-й международной научно-практической конференция «Медицинские и экологические эффекты ионизирующей радиации» (Томск, 2001); на заседании Президиума СО РАН 9 октября 2002 г.; на П-й Республиканской научно-практической конференции (Якутск, 2003). По теме диссертации имеется 16 публикаций.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает введение, обзор литературы, описание материалов и методов, изложение полученных результатов и их обсуждение, выводы, список цитированной литературы (181 наименование). Работа изложена на 109 страницах машинописного текста, содержит 9 таблиц и 15 рисунков.

Автор выражает глубокую признательность Главе Пуровского района ЯНАО С.А. Ламбину за поддержку проводимых исследований.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Цитогенетический метод исследования был выбран как объективный критерий оценки нестабильности генома под воздействием техногенных факторов (Bender, 1988; Albertini et al., 2000). Были изучены популяции коренных жителей Пуровского района ЯНАО: тундровые ненцы, лесные ненцы, селькупы, коми, а также выборка пришлых жителей, проживающих на территории района более 20 лет. В качестве контрольной группы обследованы жители г. Новосибирска. Кроме того, мы использовали данные литературы по

спонтанному уровню хромосомных аберраций (Бочков и др., 1993, 2001; Захаров и др., 1982;Poul-Ruling, 1990).

Материалом для хромосомного анализа служили митотические клетки лимфоцитов периферической крови. Культивирование лимфоцитов проводилось стандартными полумикро- и макрометодами (Графодатский, Раджабли, 1988) в собственной модификации. Цитогенетический анализ проводился на зашифрованных препаратах. Учитывали весь спектр структурных аберраций хроматидного и хромосомного типов, принятый в качестве критериев оценки мутагенного воздействия (Cao et al., 1981). Основной массив препаратов анализировали на рутинной окраске хромосом. На GTG-окрашенных препаратах идентифицировали характер повреждений хромосом. GTG-дифференциальное окрашивание хромосом проводили по методу А.С. Графодатского и СИ. Раджабли. Определение достоверности различий частот хромосомных аберраций в исследованных выборках проводили методом ф (преобразование Фишера). Для общих выборок коренного и пришлого населения был также проведен однофакторный дисперсионный анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУВДЕНИЕ

В работах по радиационной цитогенетике принято считать дицентрические и кольцевые хромосомы специфическими маркерами радиационного воздействия (Carrano, Natarajan, 1988; Пилинская, 1996). В нашей работе мы также выделяем эти хромосомные перестройки как маркерные для действия радиации.

В контрольной группе жителей г. Новосибирска (N=105) общая частота хромосомных аберраций составила 1,55% ±0,24, а частота дицентрических и кольцевых хромосом - 0,11% ±0,06, что вполне укладывается в контрольные показатели, полученные другими авторами. Так, согласно литературным данным, общая частота хромосомных аберраций в зависимости от экологической обстановки и природного радиационного фона в среднем составляет 1,5%. Частота маркерных аберраций для России составляет в среднем 0,1% (Бочков и др., 1993, 1999; Захаров и др., 1982; Poul-Ruling, 1990).

1. Анализ цитогенетических показателей в выборках коренных и пришлых жителей.

Всего было обследовано 369 лиц, из них коренных жителей Самбургской тундры (преимущественно тундровых ненцев) - 250 человек, и пришлого европеоидного населения - 119 человек Результаты представлены в таблице 1

Таблица 1

Результаты исследования цитогенетических показателей у коренных и пришлых жителей ЯНАО

Человек Всего клеток Всего клеток с аберрациями (М) инд. разброс % общ% ± т Дицентрики и кольца инд. разброс % %±ю

Коренные жители .....««г™?' . ЬоШ1'^ .........7 - 23б/ I 860 0 - 23,8 ♦♦♦3,23 ± 0,21 92 0-5,5 ♦♦♦0,35 ± 0,07

взрослые 178 18642 691 0-23,8 ♦♦♦3,71 ± 0,27 82 0-5,5 ♦♦♦0,44 ±0,10

-V.л.-*»." , 'ЯвШ'Ч ■ * ¿и- 7989 169 0-18 «♦2,12 ±0,32 10 0-1,3 0,13 ± 0,08

Пришлые жители всего 119 12686 344 0-10 »♦♦2,71+0,28 53 0-3,2 ♦♦♦0,42 ±0,11

Г гшщ -ящ т 0-10 ♦♦♦2,74 ±0,30 45 0-3 ♦♦♦0,39 ±0,11

дети 12 1120 27 0-4 ♦♦2,41 ±0,90 8 0-3,2 ♦0,71± 0,49

, е.'й ¡¡¡¡Р щ в»""" ЙВ»- гуущ- . ■ •< И

Для того чтобы оценить среднюю частоту хромосомных аберраций у жителей, заведомо не подвергшихся непосредственному воздействию

ядерных испытаний на полигоне «Северный», обе группы разделили на подгруппы детей (средний возраст обследованных -14 лет) и взрослых.

Из табл. 1 следует, что во всех выделенных группах и подгруппах общая частота хромосомных аберраций (ЧХА) достоверно превышает контрольный уровень. Если рассматривать частоты маркерных для действия радиации дицентрических и кольцевых хромосом (ЧДК) в обследованных группах, то оказывается, что везде (за исключением детей коренных жителей) ЧДК достоверно выше контроля. Сходные уровни частот дицентриков и колец выявлены рядом авторов у жителей Алтайского края, пострадавших при испытаниях на Семипалатинском полигоне (Шевченко и др., 1994, 1995; Пономарева, Матвеева, 2000; Святова и др., 2002).

Далее мы провели сравнение ЧХА между группами и подгруппами коренных и пришлых жителей (табл. 2).

Таблица 2

Сравнение общей частоты аберраций хромосом между подгруппами коренных и пришлых жителей

Воете : Взрослые : Дети

коренные пришлые коренные пришлые коренные пришлые

ЧХА 3,23% " 2,71%' 3,71% 2,74% " 2,12% ; 2,41% '

р<0,001 05: :•

Интересно отметить, что в общей группе коренных жителей Самбургской тундры ЧХА достоверно больше, чем в общей группе пришлого населения. Так же достоверно выше ЧХА в подгруппе взрослых коренных жителей по сравнению с пришлыми взрослыми. Показатели же ЧХА в подгруппах детей очень близки. Вероятно, эти факты можно объяснить особенностями питания коренных и пришлых жителей т.к. основными пищевыми продуктами коренного населения являются мясо северного оленя, боровая и водоплавающая дичь, рыба. Как показали исследования, эти продукты существенно загрязнены радиоцезием. Так, например, мясо оленя

загрязнено 137Cs в пределах 48-315 Бк/кг, вяленая оленина - 1200 Бк/кг (Щербов и др., 2000, 2001; Осипова и др., 2003). Пролонгированное поступление 137Cs и

90 о

Sг в организм коренных жителеи по цепям питания служит источником хронического внутреннего воздействия малых доз радиации. Более низкий показатель ЧХА в подгруппе детей коренных жителей по сравнению с подгруппой взрослых вполне укладывается в наше предположение о непосредственном воздействии ядерных испытаний на старшее поколение. К тому же, дети коренных жителей большую часть своего времени (весь учебный год) проводят в интернатах. Питание в интернате существенно ограничивает употребление детьми загрязненных радиоцезием продуктов.

Совершенно другая картина наблюдается при сравнении частот маркерных для действия радиации кольцевых и дицентрических хромосом в подгруппах. ЧДК во всех подгруппах (кроме детей коренных жителей) достоверно выше контроля. Достоверное различие ЧДК между группами коренных и пришлых наблюдаются только в подгруппе детей, где очевиден резкий контраст между показателями, а ЧДК коренных и пришлых взрослых довольно близки (табл. 3).

Таблица 3

Сравнение частоты дицентрических и кольцевых хромосом в подгруппах коренных и пришлых жителей

Всего - Взрослые Дети

коренные пришлые коренные пришлые коренные пришлые

ЧДК 442%' 0,44% 0,39% 0,13% 0,71%

р>0,05 р<0,01

Значительное отклонение ЧДК у детей пришлых жителей от средних показателей, помимо прочих причин, может быть объяснено и малочисленностью подгруппы (N=12).

При сопоставлении наших данных (средняя ЧХА у всех обследованных детей составляет 2,2%, а ЧДК - 0,2%) с подобными цитогенетическими

исследованиями групп детей, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами (в основном видно, что показатели у детей

Самбургской тундры несколько ниже, чем у детей Семипалатинской области или Украины. Так, в группе школьников Бескарагайского района Семипалатинской области (загрязнение почвы плутонием-239) ЧХА равна 3,6%, а частота дицентриков 0,4%. (Губицкая и др., 1999). В группе детей Народического района Житомирской области (загрязнение цезием-137 через 2-3 года после Чернобыльской аварии) ЧХА равна 3,8%, а суммарная частота дицентриков и колец (0,4%) в 3 раза превысила спонтанную частоту (Пилинская и др., 1992). Более низкие показатели у детей Самбургской тундры, видимо, обусловлены совокупностью различных факторов, и корректная их оценка в настоящее время представляется затруднительной. Возможно, цитогенетические показатели у детей, пострадавших при аварии на ЧАЭС, превышают таковые у детей Самбургской тундры из-за более короткого временного интервала между воздействием и обследованием.

Таким образом, разделение групп жителей на детей и взрослых выявило тенденцию к увеличению средней частоты хромосомных аберраций у взрослой части населения по сравнению с детьми, а также обнаружило резкий контраст частоты маркерных для действия радиации аберраций в подгруппах коренных и пришлых детей.

2. Разделение выборок коренных и пришлых жителей на три группы в зависимости от индивидуального уровня частоты хромосомных аберраций

Все выборки были разделены на три группы в зависимости от индивидуальной частоты хромосомных аберраций для более подробного сопоставления результатов исследования коренного и пришлого населения по уровню хромосомных аберраций (ХА) и характеру его распределения в когортах (рис. 1)

Рисунок 1. Распределение коренных и пришлых жителей по группам. Светлыми цветами маркированы столбцы, обозначающие количество человек в каждой группе. Темными цветами маркированы столбцы, обозначающие количество человек с дицентрическими и кольцевыми хромосомами внутри каждой группы.

I группа - лица с «контрольным» уровнем хромосомных аберраций

II группа - лица с умеренным увеличением числа хромосомных аберраций

III группа - лица с высоким уровнем хромосомных аберраций (ХА>3%).

Картина распределения числа лиц по группам в общих выборках коренных и пришлых жителей несколько отлична. Однако, как у коренных жителей, так и у пришлых прослеживается тенденция к увеличению числа лиц с радиационными маркерами в группах, наиболее отягощенных хромосомными аберрациями.

Далее, при разделении выборки коренных жителей на взрослых и детей прослеживается прямо противоположная картина в распределении числа лиц по группам (рис. 2).

Распределение коренных взрослых по группам

О всего человек

7

е с

5 I 50

ш из них с маркерами

I гр. II гр. III гр.

Распределение коренных детей по группам

о

□ всего человек

а из нихс маркерами

1гр.

Игр.

III гр.

Рисунок 2. Распределение числа коренных взрослых и коренных детей по группам. Светлым цветом маркированы столбцы, обозначающие количество человек в каждой группе. Темным цветом маркированы столбцы, обозначающие количество человек с дицентриками и кольцами внутри каждой группы.

Полученное распределение по группам в выборках коренных взрослых и детей можно трактовать как подтверждение предпосылки о том, что взрослое коренное население в 1955-1962 гг. подвергалось внешнему радиационному воздействию при испытаниях на полигоне «Северный». И до сегодняшних дней у большинства взрослых лиц обнаруживается высокий уровень ЧХА. Вероятно, некоторый вклад в повышенную частоту ХА взрослых жителей, вносят лимфоциты с дицентрическими и кольцевыми хромосомами, вышедшие в кровяное русло из стволового слоя спустя несколько десятилетий после радиационного воздействия (Awa, 1991). 3. Анализ цитогенетических показателей с учетом этнической компоненты.

Для выявления вероятных межэтнических различий частоты хромосомных аберраций и частоты маркеров радиационного воздействия, мы сгруппировали обследованных лиц по этнической принадлежности.

Всего выделено 6 групп русские, метисы, тундровые ненцы, лесные ненцы,

селькупы и коми

Таблица 4

Результаты исследования онтогенетических показателей у жителей ЯНАО сгруппированных по этнической принадлежности

Человек Всего клеток Всего клеток с аберрациями (14) инд. разброс % общ% ± ш Дицентрики и кольца инд. разброс % %±т

в*»* 0-8 2 97 ± 0 60 я. ^ »2 4 , "042 ±023

лесные ненцы 51 4811 131 0-23,8 "*2 72 ± 0 46 10 0-25 021 ±013

ш 'п^атг т 0-20 "*з,1б+аг7 «1 0-5,5 ***0,39 ±010 .

селькупы 33 3130 144 0-21 ***4 60 ± 0 73 8 0-2 0 26 ±018

ЗПВЯ! 1Ш тг-*' ' ■ " ■ 0-6 * Т 0-32 "0,&5±0,46

русские 108 11571 317 0-10 *"2 74 ± 0 30 46 0-3 "*0 40 ±012

«я» В« ' ■,«. «г* г4~Ж. * „

Уровни значимости достоверно*** (р<0,001), достоверно ** (р<0,01), достоверно* ( р<0,05), и без звезды - недостоверно (р>0,05) выше контроkьного уровня

Как и следовало ожидать, во всех выделенных этнических группах общая частота аберрантных клеток достоверно выше контрольного уровня Также выше контрольного уровня частота маркерных аберраций -дицентрических и кольцевых хромосом (у селькупов и лесных ненцев превышение не значимо)

Наиболее интересными оказались результаты в группах селькупов и метисов. Наибольшая ЧХА наблюдается у селькупов. В этой же группе отмечен самый высокий процент аберраций хромосомного типа и, кроме того, в группе селькупов у 12% людей обнаружены «rogue cells» -мультиаберрантные клетки. Несмотря на эти высокие показатели, в группе селькупов одна из самых низких ЧДК (0,26%). В группе метисов отмечена наименьшая ЧХА. Однако, процент людей отягощенных rogue cells в этой группе второй по значимости после селькупов - 9%. Также, в группе метисов обращает на себя внимание необычайно высокий уровень частоты дицентриков и колец - 0,63% (в 6 раз выше контроля).

Трудно однозначно трактовать полученные результаты. Группа метисов очень мала (N=11) и, возможно, высокий уровень ЧДК в данном случае обусловлен недостаточной выборкой. Большинство взятых в исследование селькупов проживает в пос. Толька Пуровская, который территориально располагается на юге района, в отличие от остальных обследованных населенных пунктов. Возможно, этим и объясняется выявленная у селькупов высокая ЧХА, т.к. установлено, что юг Пуровского района является наиболее загрязненным радионуклидами, в частности по цезиию-137 (Щербов и др., 2001). Необычайно высокий процент людей с rogue cells в группе селькупов, возможно объясняется воздействием на организм жителей инкорпорированных с пищей а-излучателей, которые попав внутрь живого организма, становятся источником внутреннего облучения более сильным, чем у- и Р-излучатели. Следует заметить, однако, что до сих пор вопрос о природе возникновения rogue cells остается открытым (Бочков и др., 1999).

В целом, разделение обследованных лиц по этнической принадлежности выявило определенные тенденции. Однако, большинство выборок (за исключением тундровых ненцев и русских) довольно малы. Для получения более четкой картины наметившихся тенденций необходимо увеличить размер выборок.

4. Сравнительное исследование спектра хромосомных аберраций, выявленных на препаратах, окрашенных рутинным и GTG-способом.

В рамках работы по исследованию хромосомных нарушений у жителей Самбургской тундры нам представилось интересным провести сравнительное исследование спектра хромосомных аберраций, выявленных на препаратах, окрашенных рутинным и ОТО-способом у одних и тех же лиц Нашей целью было сопоставить чувствительность и информативность двух последних методов в свете дальнейшего их применения для первичного мониторинга популяций, подвергающихся пролонгированному воздействию малых доз радиации Выборка состояла из 23 житекей Пуровского района В среднем анализировали каждым способом по 100 клеток на человека Результаты исследования представлены в таблице 5

Таблица 5

Сравнительные результаты цитогенетического обследования группы жителей ЯНАО на препаратах, окрашенных рутинным и GTG-способом (Пономарева и др., 2001)

Рутинная окраска СТв - окраска Р

N % N %

Всего метафаз 2000 - 2000 - Р>0,05

Всего аберр-х клеток 67 ; 3 35 ± 0 79 66 3 30±О78 Р>0,05

., Аберрации Аберрации хроматид- хромосомного типа ного типа 21 1,05 ±0,45 20 1,00 ±0,44 Р>0,05

II; 1 2 <5 Ю±014 Р>0,05

22 22 Р>0,05

34 г ' 25 . „ 1 1,25 ±0,49 - Р>0,05

7 й 35 ±026 12 (Ш)±0 34 Р>0,05

йЗНйй5! 2 ^104014 6 03О±О24 Р>0,05

" в?есо 2 <5ю±ом 1 005 *0,^ ; Р>0,05

45 -1 . . . 44 2,20 ± 0,62 Р>0 05

Из таблицы 5 видно, что различие в частотах всех типов аберраций хромосом, выявленных с помощью рутинной и GTG- окрасок, не значимо (Р>0,05). Однако обнаружена тенденция к увеличению частоты стабильных аберраций при анализе GTG-окрашенных хромосом и увеличению частот фрагментов при анализе на рутинной окраске. А также выявлен сдвиг в соотношении частот стабильных и нестабильных аберраций в сторону транслокаций при дифференциальной окраске хромосом. Для статистического подтверждения выявленных тенденций необходимо увеличить обследуемые выборки и количество метафаз, анализируемых у каждого индивида.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в данной работе выявлено, что у коренных и пришлых жителей Пуровского района средняя частота хромосомных аберраций, а также частота маркеров радиационного воздействия (кольцевые и дицентрические хромосомы) достоверно превышает контрольный уровень. Достоверное превышение как общей частоты хромосомных аберраций, так и частот маркерных аберраций, характерных для действия радиации, в группе взрослого коренного населения по сравнению с группой детей коренных жителей является показателем предполагаемого непосредственного воздействия короткоживущих радионуклидов в период ядерных испытаний на контактное поколение. Таким образом, полученные данные цитогенетического анализа согласуются с остальными результатами комплексных исследований, которые показали, что территория Пуровского района ЯНАО находится под прессом различных техногенных воздействий, оказывающих негативное влияние на генофонд и здоровье коренного населения. В сложившейся экологической обстановке первостепенное значение имеет остаточное радиоактивное загрязнение региона и компонентов пищевых цепей, вызванное, в основном, атмосферными испытаниями ядерных устройств в Северном полушарии в 1950-1960-х гг. Тогда как загрязнение компонентов природы тяжелыми металлами (РЬ, СЗ, Н и др.), образующимися при сжигании попутного газа в факелах и в выхлопных газах автотранспорта, а также при дальних переносах от предприятий цветной металлургии, хотя и имеет место, однако не

превышает предельно допустимых концентраций и не может рассматриваться в настоящий момент в качестве ведущего фактора антропогенной нагрузки в Пуровском районе (Щербов и др., 2001; Осипова и др., 2003).

Сравнительный анализ цитогенетических показателей жителей Пуровского района, хромосомы которых окрашивали рутинным и GTG-способом, не выявил значимых различий как в спектре обнаруженных аберраций, так и в их частотах. Показана адекватность использования рутинной окраски хромосом для первичного мониторинга популяций, находящихся в неблагоприятных экологических условиях.

ВЫВОДЫ

В результате цитогенетических исследований у коренного и пришлого (но длительно проживающего на Севере) населения Пуровского района ЯНАО впервые выявлено:

1. Достоверное (р<0,001) превышение над контрольными показателями (1,55% ±0,24) общей частоты хромосомных аберраций как в группе коренных жителей (3,23% ±0,21), так и в группе пришлого населения (2,71% ±0,28);

2. Достоверное (р<0,001) превышение над контрольным уровнем (0,11%± 0,06) частоты маркерных для действия радиации дицентрических и кольцевых хромосом в группах коренного (0,35% ± 0,07) и пришлого (0,42% ± 0,11) населения;

3. Достоверное (р<0,001) увеличение общей частоты хромосомных аберраций у взрослой части коренного населения (3,71% ±0,27) по сравнению с детьми коренных жителей (2,12% ±0,32). Одной из причин этого, возможно, является непосредственное влияние ядерных испытаний, проводимых в 1950-1960-х гг., на хромосомный аппарат лиц старшего поколения. 78% обследованных лиц этой выборки имеют частоту хромосомных аберраций, превышающую контрольный уровень;

4. Достоверное (р<0,001) превышение общей частоты хромосомных аберраций в группе взрослого коренного населения (3,71% ±0,27) над таковой в группе взрослого пришлого населения (2,74% ± 0,30).

5. Общая частота хромосомных аберраций у детей коренных и пришлых жителей практически одинакова (2,12% и 2,41%, соответственно; р>0,05);

6. При разделении выборки по этническому признаку максимальная частота хромосомных аберраций (4,60% + 0,73) наблюдается в группе селькупов, минимальная (2,42% ± 0,90) - в группе метисов. Напротив, максимальная частота дицентриков и колец наблюдается в группе метисов (0,63% ± 0,46), а минимальная - в группе лесных ненцев (0,21% ± 0,13). В группе селькупов выявлен также необычайно высокий уровень rogue cells (0,29%).

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Пономарева А.В., Матвеева В.Г., Осипова Л.П., Посух О.Л. Хромосомные нарушения у жителей самбургской тундры в условиях экологического неблагополучия // Сибирский экологический журнал, Т. 7, № 1, 2000, С. 6771.

2. Пономарева А.В., Матвеева В.Г., Осипова Л.П. Спектр хромосомных аберраций человека при рутинном и дифференциальном (GTG) окрашиваниях // Цитология и генетика, 2001, №.6, С. 38-42.

3. Осипова Л.П., Посух ОЛ., Матвеева В.Г., Пономарева А.В., Ф.В.Сухоруков, БЛ.Щербов, В.Д.Страховенко, К.П.Куценогий, Рапута В.Ф., Смоляков Б.С., Ривин Г.С., Климова Е.Г. Комплексная оценка техногенных воздействий на генофонд и биологическое здоровье человека (на примере тундровых ненцев) // Интеграционные программы фундаментальных исследований, Новосибирск, изд-во СО РАН, 1998, С. 327-342.

4. Осипова Л.П., Посух О.Л., Пономарева А.В., Саблина О.В., П.Л.Перельман, Б.Л.Щербов, ВДСтраховенко, Ф.В.Сухоруков, Куценогий К.П., Матвеева В.Г., Ривин Г.С., Смоляков Б.С. Окружающая среда и ее влияние на генофонд человека: опыт комплексных исследований // Вестник ВОГиС, 1999, № 8, С. 11-16.

5. Осипова Л.П., Посух ОЛ., Пономарева А.В., Матвеева В.Г., Щербов Б.Л., Страховенко В.Д., Сухоруков Ф.В. Медико-генетические исследования популяции тундровых ненцев и оценка радиационной ситуации в регионе их проживания // Сибирский экологический журнал, Т. 7, № 1,2000, С. 73-78.

Подписано к печати 04.10.2004

Формат бумаги 60x90. Печ. л. 1. Уч. Изд. л. 0,7

Тираж 110 экз. Заказ 117

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр. ак. Лаврентьева, 10

$21022

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пономарева, Анна Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Комплексная междисциплинарная оценка последствий антропогенных воздействий.

1.2 Радиационное загрязнение - один из важных компонентов экологического неблагополучия. «горячие точки» россии.

1.2.1 Семипалатинский ядерный полигон.

1.2.2 «Северный» полигон (о. Новая земля).

1.2.3 Чернобыльская атомная электростанция.

1.2.4 Производственное объединение «Маяк».

1.3 Исторический экскурс в радиобиологию.

1.3.1 Дрозофила как удобный модельный объект в радиобиологии.

1.3.2 Растения - дополнительные возможности для экспериментов.

1.3.3 Мышь - как модельный объект, наиболее приближенный к человеку.

1.3.4 Человек - самая актуальная тема для исследований в радиобиологии.

1.4 Развитие представлений о механизмах образования аберраций хромосом

1.5 Методы биодозиметрии и биоиндикации.

1.5.1 Микроядерный тест.

1.5.2 Гликофориновый (GPA) тест.

1.5.3 Метод ЭПР-спектрометрии эмали зубов.

1.5.4 Хромосомный анализ.

1.6 Проблемы оценки малых доз облучения.

1.7 Спонтанный уровень хромосомных аберраций.

1.8 Роль цитогенетического анализа в интегральной оценке отдаленных # последствий воздействия радиации на здоровье человека. феномен геномной нестабильности.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Краткое описание обследованных популяций.

2.2 Материал для исследований.

2.3 Методы.

2.3.1 Культура лимфоцитов периферической крови.

2.3.2 Окрашивание препаратов хромосом.

2.3.3 Статистическая обработка.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Анализ цитогенетических показателей в выборках коренных и пришлых жителей. Разделение данных выборок на группы взрослых и детей.

3.2 Разделение выборок коренных и пришлых жителей на три группы в зависимости от уровня частоты хромосомных аберраций.

3.3 Анализ цитогенетических показателей с учетом этнической компоненты

3.4 Сравнительное исследование спектра хромосомных аберраций, выявленных на препаратах, окрашенных рутинным и GTG-способом.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цитогенетическое исследование популяций коренного и пришлого населения Ямало-Ненецкого АО в контексте мониторинга экологической обстановки"

Актуальность проблемы.

Одной из основных задач экологии является выяснение последствий антропогенного загрязнения окружающей среды, которое несет большую опасность ныне живущим и будущим поколениям людей. Поиск решений этой сложной, многосторонней проблемы возможен только при выборе соответствующих объектов и регионов исследований и объединении усилий квалифицированных специалистов разного профиля.

В настоящее время возрастает роль техногенных загрязнений биосферы в результате научно-технического прогресса. Под воздействие мутагенных физических, химических и биологических факторов попадает геном значительной части жителей земного шара. От продуктов деятельности человека страдают не только густонаселенные области, но, в частности, высокоширотные районы Западной Сибири. Они подвергаются мощному прессу негативных воздействий в связи с интенсивным развитием нефтегазового комплекса, а также в связи с последствиями испытаний ядерных устройств на Северном (Новоземельском) полигоне. Ухудшение экологической обстановки особенно болезненно сказывается на коренных народностях Севера, которые на протяжении долгого времени приспосабливались к гармоничному сосуществованию с природой в экстремальных климатических условиях, вырабатывая особенную структуру поведения по отношению к окружающей среде.

Воздействие неблагоприятных антропогенных факторов на геном человека является одним из основных показателей экологического неблагополучия. Мутации генома проявляются на молекулярно-генетическом, биохимическом, цитогенетическом, морфологическом и физиологическом уровнях, поэтому анализ генетических последствий антропогенных (в том числе и радиационных) загрязнений должен базироваться на комплексной системе мониторинга, включающей разные уровни - от молекулярно-генетического до биоценологического.

Подробное исследование этого вопроса стало более актуально после многочисленных случаев широкомасштабного загрязнения радионуклидами населённых людьми территорий.

Последствия атомной бомбардировки Японии и аварии на Чернобыльской АЭС уже детально исследованы многими физическими, экологическими и генетическими лабораториями всего мира. Это вызвано тем, что перечисленные инциденты носили ярко выраженный характер и вызвали широкий резонанс мировой общественности. О влиянии же ядерных испытаний на окружающую среду долгое время умалчивалось. Лишь в 1990-е годы начались активные исследования в районах, прилегающих к Семипалатинскому полигону. Северные же территории России, прилегающие к Новоземельскому полигону, только недавно попали в зону внимания ученых, хотя причин на подробное комплексное исследование в этом случае не меньше, чем в Алтайском крае.

В исследованиях, проведенных ранее в Пуровском районе Ямало-Ненецкого АО (Осипова и др., 1998а) был выявлен ряд негативных тенденций: резкий рост ранее несвойственных коренному населению этого региона онкологических заболеваний; характерные изменения показателей крови, которые ранее обнаруживались у населения районов, затронутых радиационными воздействиями; повышенная частота вторичных иммунодефицитных состояний. Все это в совокупности позволило предположить существование различного рода техногенных (глобальных, региональных, локальных) воздействий, негативно влияющих на экологическую ситуацию в данном регионе и неблагоприятно отражающихся на здоровье человека.

В свете вышеперечисленных факторов и актуальности проблемы возникла необходимость в проведении данной работы.

В ИЦиГ СО РАН в рамках Интеграционного проекта фундаментальных исследований проводится разработка модели мониторинга и комплексной оценки техногенного воздействия на генофонд и здоровье человека. В этой модели в качестве объекта исследования используются малочисленные коренные популяции народов севера России.

Одним из способов исследования был выбран цитогенетический метод как объективный критерий оценки нестабильности генома под воздействием техногенных факторов (Carrano et al., 1988; Albertini et al., 2000). Учитывая имеющиеся предпосылки возможного радиационного воздействия на указанные популяции (Щербов, 2001), мы выделили из многих критериев нестабильности генома маркерные повреждения хромосом, которые широко используются в мировой практике для биоиндикации радиационного воздействия.

Цели и задачи исследования

Нашей целью было исследовать спектр и частоты хромосомных аберраций в различных группах жителей Ямало-Ненецкого автономного округа, проживающих в условиях экологического неблагополучия.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. В ходе экспедиций по Ямало-Ненецкому автономному округу собрать необходимое для исследований количество материала и сформировать адекватные по месту проживания, возрасту и национальности группы людей для их дальнейшего цитогенетического обследования.

2. Оценить полученные данные в обследованных группах по частотам хромосомных аберраций в сравнении с контрольными показателями.

3. Оценить частоты маркерных для действия радиации хромосом, в связи с имеющимися данными о присутствии радиационной компоненты в комплексе экологически неблагоприятных факторов ЯНАО.

4. Провести сравнение цитогенетических показателей в группах взрослых и детей для выявления и оценки вероятного воздействия ядерных испытаний, проводимых в 1950-1960 гг., на контактное поколение.

5. Оценить спектр и частоты хромосомных аберраций в разных этнических группах населения Самбургской тундры для выявления вероятных межэтнических различий.

6. В рамках данной работы провести сравнительное исследование спектра хромосомных аберраций человека, выявляемых на препаратах, окрашенных рутинным и GTG-способом.

Научная новизна и практическая ценность.

Впервые в рамках комплексной программы исследований проведено цитогенетическое обследование коренных жителей Ямало-Ненецкого автономного округа и пришлого населения, проживающего на данной территории более 20 лет. Выявлено превышение над контрольным уровнем среднегрупповых частот хромосомных аберраций, а также частот дицентрических и кольцевых хромосом, как в выборке коренных жителей, так и в выборке пришлых жителей. В совокупности с другими исследованиями комплексной программы показано, что Пуровский район Тюменской области ЯНАО попал под негативное влияние ядерного полигона "Северный". Полученные результаты могут быть использованы при разработке комплекса мероприятий при реабилитации здоровья пострадавшего населения.

На материале, собранном в рамках вышеупомянутой работы, получены данные о частоте и спектре хромосомных нарушений, выявленных с помощью рутинной и дифференциальной (GTG) окрасок хромосом. Выполнено сравнение эффективности этих методов для проведения первичного мониторинга популяций, находящихся в неблагоприятных экологических условиях.

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены: на 1-м Российском научном симпозиуме «Оценка рисков загрязнения окружающей среды», Санкт-Петербург, 1998 г. докладом «Комплексная оценка техногенных воздействий на генофонд и биологическое здоровье коренной народности Севера - тундровых ненцев»; на II (IV)-m Российском съезде медицинских генетиков, Курск, 2000г. стендовым докладом "Хромосомные нарушения у жителей Самбургской тундры в условиях экологического неблагополучия"; на международной конференции «Modern problems of radiobiology, radioecology and evolution», Dubna, 2000, докладом «Impact of irradiation on the tundra Nentsi population in Purovsk district of YNAO»; на IV-м Съезде по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность), Москва, 2001 г. докладом «Медико-биологические аспекты пролонгированного действия инкорпорированных радионуклидов в популяциях коренных жителей Севера»; на заседании Президиума СО РАН 9 октября 2002 г. докладом по результатам интеграционного проекта «Оценка техногенных воздействий на генофонд человека в северных регионах». Вклад автора.

Автор участвовала в двух экспедициях по Пуровскому району ЯНАО для сбора образцов крови и анкетных данных (апрель, июль 1998 г.). Проводились посадка культуры лимфоцитов крови и приготовление препаратов хромосом (1997-2000 гг.). Лично автором проанализировано 176 образцов крови (16600 метафаз). Публикации.

По теме диссертации опубликовано 16 работ.

Структура и объем диссертации.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Пономарева, Анна Владимировна

ВЫВОДЫ

В результате цитогенетических исследований у коренного и пришлого (но длительно проживающего на Севере) населения Пуровского района ЯНАО впервые выявлено:

1. Достоверное (р<0,001) превышение над контрольными показателями (1,55% ±0,24) общей частоты хромосомных аберраций как в группе коренных жителей (3,23% ± 0,21), так и в группе пришлого населения (2,71% ± 0,28);

2. Достоверное (р<0,001) превышение над контрольным уровнем (0,11% ±0,06) частоты маркерных для действия радиации дицентрических и кольцевых хромосом в группах коренного (0,35%) ± 0,07) и пришлого (0,42%) ± 0,11) населения;

3. Достоверное (р<0,001) увеличение общей частоты хромосомных аберраций у взрослой части коренного населения (3,71% ± 0,27) по сравнению с детьми коренных жителей (2,12% ± 0,32). Одной из причин этого, возможно, является непосредственное влияние ядерных испытаний, проводимых в 1950-1960 гг., на хромосомный аппарат лиц старшего поколения. 78%о обследованных лиц этой выборки имеют частоту хромосомных аберраций, превышающую контрольный уровень;

4. Достоверное (р<0,001) превышение общей частоты хромосомных аберраций в группе взрослого коренного населения (3,71%) ± 0,27) над таковой в группе взрослого пришлого населения (2,74% ± 0,30).

5. Общая частота хромосомных аберраций у детей коренных и пришлых жителей практически одинакова (2,12% и 2,41%, соответственно; р>0,05);

При разделении выборки по этническому признаку максимальная частота хромосомных аберраций (4,60% ± 0,73) наблюдается в группе селькупов, минимальная (2,42% ± 0,90) - в группе метисов. Напротив, максимальная частота дицентриков и колец наблюдается в группе метисов (0,63% ± 0,46), а минимальная - в группе лесных ненцев (0,21% ± 0,13). В группе селькупов выявлен также необычайно высокий уровень rogue cells (0,29%).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленная работа выполнялась в рамках комплексной программы исследований по оценке техногенного воздействия на генофонд и здоровье жителей Пуровского района Ямало-Ненецкого АО.

Результаты цитогенетической части исследований выявили присутствие радиационной компоненты среди других возможных экологически-неблагоприятных факторов, влияющих на здоровье жителей Самбургской тундры.

Нами показано, что у коренных и пришлых (проживающих на Севере более 20 лет) жителей Пуровского района общая частота хромосомных аберраций и маркеров радиационного воздействия (кольцевые и дицентрические хромосомы) достоверно превышает контрольный уровень. Показателем непосредственного воздействия короткоживущих радионуклидов в период ядерных испытаний на старшее поколение является достоверное превышение как общей частоты хромосомных аберраций, так и частот двуударных аберраций хромосомного типа, характерных для действия радиации, в группе взрослого коренного населения по сравнению с группой детей коренных жителей. Превышение общей частоты хромосомных аберраций в группах детей коренных и пришлых жителей над контролем, возможно, объясняется загрязнением компонентов биогеоценозов Пуровского района

137 90 техногенными радионуклидами Cs и Sr, которые поступают в организм по пищевым цепям. Видимо, здесь также наблюдается феномен геномной нестабильности, выявляемый у детей облученных родителей.

Таким образом, полученные нами данные цитогенетического анализа согласуются с остальными результатами комплексных исследований, которые показали, что территория Пуровского района ЯНАО находится под прессом глобальных, региональных и локальных техногенных воздействий, оказывающих негативное влияние на генофонд и здоровье коренного населения. В сложившейся экологической обстановке первостепенное значение имеет остаточное радиоактивное загрязнение региона и компонентов пищевых цепей, вызванное в основном атмосферными испытаниями ядерных устройств в Северном полушарии в 1950-1960-х гг. Тогда как загрязнение компонентов природы тяжелыми металлами (Pb, Cd, Hg и др.), образующимися при сжигании попутного газа в факелах и в выхлопных газах автотранспорта а также при дальних переносах от предприятий цветной металлургии, хотя и имеет место, однако не превышает предельно допустимых концентраций и не может рассматриваться в настоящий момент в качестве ведущего фактора антропогенной нагрузки в Пуровском районе (Осипова и др., 2003).

Сравнительный анализ цитогенетических показателей у 23 жителей Пуровского района (4000 метафаз), хромосомы которых окрашивали рутинным и GTG-способом, не выявил значимых различий как в спектре обнаруженных аберраций, так и в их частотах. Тем не менее, показаны тенденции к увеличению частоты стабильных аберраций при анализе GTG-окрашенных хромосом и увеличению частот фрагментов при анализе на рутинной окраске. Показана адекватность использования рутинной окраски хромосом для первичного мониторинга популяций, находящихся в неблагоприятных экологических условиях.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пономарева, Анна Владимировна, Новосибирск

1. Андрюшин И.А., Варава В.П., Волошин Н.П., Захаров B.C. и др. Ядерное разоружение, нераспространение и национальная безопасность. 2001, Саранск: "Красный Октябрь".

2. Бактон К., Эванс Г.О. Методы анализа хромосомных аберраций человека. Женева: ВОЗ, 1976, 64 с.

3. Биологические эффекты малых доз радиации: теоретические и практические аспекты. Бюллетень №3, 2000, Минск: Полиграф, С. 29.

4. Бочков Н.П., Филиппова Т.В., Яковенко К.Н. Принципы цитогенетического обследования для выявления профессиональных вредностей // Цитология и генетика, 1984, № 6, С. 422-428.

5. Бочков Н.П., Катосова Л.Д. Генетический мониторинг популяций человека при реальных химических и радиационных нагрузках // Вестник РАМН, 1992, №4, С. 10-14.

6. Бочков Н.П. Аналитический обзор цитогенетических исследований после Чернобыльской аварии // Вестник РАМН., 1993, № 6, С. 51-55.

7. Бочков Н.П., Чеботарев А.Н., Катосова Л. Д., Платонова В.И. База данных для анализа количественных характеристик частоты хромосомныхаберраций в культуре лимфоцитов периферической крови человека // Генетика, 2001, Т. 37, № 4, С. 549-557.

8. Васильева JI.А. Биологическая статистика. Новосибирск, 2000, С. 81-90.

9. Воробцова И.Е., Богомазова А. Н. Стабильные хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови лиц, пострадавших в результате аварии на ЧАЭС // Радиационная биология. Радиоэкология, 1995, Т. 35, В. 5, С. 636-639.

10. Воробцова И.Е. Генетические и соматические эффекты ионизирующей радиации у человека и животных (сравнительный аспект) // Радиационная биология. Радиоэкология, 2002, Т. 42, № 6, С. 639-643.

11. Н.Гераськин С.А. Концепция биологического действия малых доз ионизирующего излучения на клетки // Радиационная биология. Радиоэкология, 1995, Т. 35, № 5, С.571-580.

12. Гераськин С.А., Севанькаев А.В. Цитогенетические эффекты малых доз: результаты Н.В. Лучника и современное состояние вопроса // Радиационная биология. Радиоэкология, 1996, Т. 36, Вып. 6, С. 860-864.

13. Герменчук М. Радиоэкологическая ситуации на территории Республики Беларусь после аварии на Чернобыльской АЭС // Специальный доклад Чернобыльской Миссии ООН, Минск, 2001.

14. Графодатский А.С., Раджабли С.И. Хромосомы сельскохозяйственных и лабораторных млекопитающих. Атлас, Новосиб.: Наука, 1988, С. 10-15.

15. Губицкая Е.Г., Ахматуллина Н.Б., Всеволодов Э.Б., Вишневская С.С., Шарипов И.К., Чередниченко О.Г. Частота аберраций хромосом у жителей Семипалатинской области // Генетика, 1999, Т. 35, № 6, С.842-846.

16. Дубасов Ю.В., Думик В.П., Зеленцов С.А. и др. Бюллетень ЦОИ по атомной энергии, 1994, Т. 1, С. 18-29.

17. Дубасов Ю.В., Зеленцов С.А., Красилов Г.А и др. Вестник научной программы «Семипалатинский полигон Алтай», 1994, № 4, С. 78-86.

18. Дубинин Н.П., Арсеньева М.А., Керкис Ю.Я. Генетические последствия влияния малых доз радиации на человека // Радиационная генетика. М.: Издательство Академии Наук СССР, 1962, С. 5-23.

19. Дубинин Н.П. Эволюция популяций и радиация. М. Атомиздат. 1966. 744 с.

20. Захаров А.Ф., Бенюш В.А., Кулешов Н.П., Барановская Л.И. Хромосомы человека. Атлас. М.: Медицина, 1982. С. 195-197.

21. Иваницкая М.В. Радиационный мониторинг // Информ.-1999, №3, С. 63.

22. Израэль Ю.А. Экология и контроль состояния природной среды. М.: ГИМИЗ, 1984.

23. Информационный бюллетень ЦОИ, 1993а, № 9, С. 73.

24. Информационный бюллетень ЦОИ, 19936, № 9, С. 5-48.

25. Информационный бюллетень ЦОИ, 1993, Спецвыпуск.

26. Квитко К.В., Мюллер А. Новый объект для генетических исследований -Arabidopsis thaliana (L) Heynh II Исследования по генетике. Л.: Изд-во ЛГУ, 1961, Т. 1,79 с.

27. Коптюг В.А. Конференция ООН по окружающей среде и развитию (Рио-де-Жанейро, июнь 1992г.) // Информационный обзор СО РАН, Новосибирск, 1992.

28. Корогодин В.И. Проблемы пострадиационного восстановления. М.: Атомиздат, 1966, 392 с.

29. Кошелева JI. Белые пятна на экологической карте // Озерский вестник, 2000, №61, С. 2-3.

30. Кудряшов Ю.Б. Основные принципы в радиобиологии // Радиационная биология. Радиоэкология, 2001, Т. 41, вып. 5, С. 531-547.

31. Ли. Д.Е. Действие радиации на живые клетки. М.: Атомиздат, 1963, 288 с.

32. Лучник Н.В. Биофизика цитогенетических поражений и генетический код. Л.: Медицина, 1968, 296 с.

33. Любашевский Н.М., Стариченко В.И., Балонов М.И. и др. Радиоактивное загрязнение полуострова Ямал и оценка радиационной опасности для населения // Экология, 1993, N4, С. 39-45.

34. Мазурик В.К., Михайлов В.Ф. Радиационно-индуцируемая нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение // Радиационная биология. Радиоэкология, 2001, Т. 41, вып. 3, С. 272-289.

35. Мельнов С.Б. Экологическая генетика человека в постчернобыльский период // Бюллетень семинара «Биологические эффекты малых доз радиации: теоретические и практические аспекты». Тезисы докладов. Минск. 20-21 декабря, 1999 г., №1, С. 29.

36. Михайлов В.Н. Ядерные испытания СССР, Т. 2, Нью-Йорк: Begell-Atom, 1999, 182 с.

37. Моссэ И.Б. Радиация и наследственность: генетические аспекты противорадиационной защиты. Минск: Университетское, 1990, 208 с.

38. Моссэ И.Б. Современные проблемы биодозиметрии // Радиационная биология. Радиоэкология, 2002, Т. 42, № 6, С. 661-664.

39. Паншин И.Б. Цитологическая природа генов white и cubitus interuptus // Биол. журн., 1938, № 7, С. 831-868.

40. Патт Г.М., Брюс A.M. Физические и биологические факторы действия излучений//Радиобиология. -М.: Медгиз, 1960, С. 127-173.

41. Пелевина И.И., Алещенко А.В., Антощина М.М., Готлиб В.Я., Кудряшова О.В., Семенова Л.П., Серебряный A.M. Реакция популяции клеток на облучение в малых дозах // Радиационная биология. Радиоэкология, 2003, Т. 43, вып.2,С. 161-166.

42. Пилинская М.А., Шеметун A.M., Дыбский С.С., Редько Д.В., Еремеева М.Н. Цитогенетический эффект в лимфоцитах периферической крови как индикатор действия на человека факторов Чернобыльской аварии // Радиобиология, 1992, Т. 32, С. 632-239.

43. Пилинская М.А. Цитогенетические эффекты в соматических клетках лиц, пострадавших вследствие Чернобыльской катастрофы, как биомаркер действия ионизирующих излучений в малых дозах // Интернациональный журнал радиационной медицины, 1999, № 2(2), С. 60-66.

44. Пилинская М.А., Дыбский С.С. Частота стабильных хромосомных аберраций, установленная с помощью метода FISH у 49 ликвидаторов чернобыльской аварии с различными дозами облучения // Цитология и генетика, 2001, № 4, С. 50-54.

45. Платонова В.А., Почивало А.В., Шеменев М.А. и др // Здоровье детей и радиация: актуальные проблемы и решения /Под ред. Л.С. Балевой, А.Д. Царегородцева. М.: Медиа Сфера, 2001, С. 68-69.

46. Пономарева А.В., Матвеева В.Г., Осипова Л.П., Посух О.Л. Хромосомные нарушения у жителей самбургской тундры в условиях экологического неблагополучия // Сибирский экологический журнал, 2000а, Т. 7, № 1, С. 67-71.

47. Пономарева А.В., Матвеева В.Г. Исследование цитогенетических нарушений у жителей Алтая в зонах радиационного загрязнения // Сибирский экологический журнал, 20006, Т. 7, № 1, С. 73-78.

48. Пономарёва А.В., Матвеева В.Г., Осипова Л.П. Спектр хромосомных аберраций человека при рутинном и дифференциальном (GTG) окрашиваниях // Цитология и генетика, 2001, № 6, С. 38-42.

49. Посух О.Л., Осипова Л.П., Крюков Ю.А, Ивакин Е.А. Генетико-демографический анализ популяции коренных жителей Самбургской тундры // Генетика, 1996, Т. 32, № 6, С. 822-829.

50. Прошина Е.В., Сускова B.C., Виноградова Т.В. и др // Здоровье детей и радиация: актуальные проблемы и решения /Под ред. Л.С. Балевой, А.Д. Царегородцева. М.: Медиа Сфера, 2001, С. 158-161.

51. Пяткин Е.К., Баранов А.Е. Биологическая индикация дозы с помощью анализа аберраций хромосом и количества клеток в периферической крови // Итоги науки и техники. Радиационная биология.-М., 1980, Т. 3, С. 103-179.

52. Радиация. Дозы, эффекты, риск. Сборник. М.: Мир, 1990, С. 40-42.

53. Рассел B.JI. Действие излучений на внутриутробное развитие млекопитающих // Радиобиология. М.: Медгиз, 1960, С. 56-127.

54. Резвая Г.Л. Радиация вокруг нас. Опасно ли это? Мн.: Наш город, 1998, 128 с.

55. Романова Е.П., Федюк Е.А. Использование автоматизированного микроядерного теста для биологической дозиметрии лучевых поражений // Цитология и генетика, 1997, Т. 31, № 3, С. 61-69.

56. Святова Г.С., Абильдинова Г.Ж., Березина Г.М. Результаты цитогенетического исследования популяций различного радиационного риска Семипалатинского региона // Генетика, 2002, Т. 38, № 3, С. 376-382.

57. Севанькаев А.В. Радио-чувствительность хромосом лимфоцитов человека в митотическом цикле. М.: Энергоатомиздат, 1987, 160 с.

58. Севанькаев А.В., Саенко А.С. Соматический мутагенез как биологический дозиметр радиационного воздействия // Радиационная биология. Радиоэкология, 1997, Т. 37, № 4, С. 560-564.

59. Сипягина А.Е., Балева Л.С., Сусков И.М. и др // Междунар. конф. "Проблемы радиационной генетики на рубеже веков" Тез. докл. М.: РУДН, 2000, С. 325.

60. Степанова Е.И., Мишарина Ж.А., Вдовенко В.Ю. Отдаленные цитогенетические эффекты у детей, облученных внутриутробно в результате аварии на Чернобыльской АЭС // Радиационная биология. Радиоэкология, 2002, Т. 42, № 6, С. 700-703.

61. Сусков В.И., Кузьмина Н.С. Проблема индуцированной геномной нестабильности в детском организме в условиях длительного действия малых доз радиации // Радиационная биология. Радиоэкология, 2001, Т. 41, № 5, С. 606-614.

62. Сухоруков Ф.В., Маликова И.Н., Гавшин В.М., Ковалев С.И. и др. Техногенные радионуклиды в окружающей среде Западной Сибири (источники и уровни загрязнения) // Сибирский экологический журнал, 2000, Т. 7, № 1, С. 31-38.

63. Таскаев А.И., Шевченко В.А., Попова О.Н. и др. Эколого-генетические последствия аварии на Чернобыльской АЭС для флоры // Докл. на заседании Президиума Коми Научного центра УрО АН СССР, 7 июля 1988 г., Сыктывкар, 1988, 60 с.

64. Тимофеев-Ресовский Н.В., Иванов В.И., Корогодин В.И. Теория мишени. Применение принципа попадания в радиобиологии. М.: Атомиздат, 1968, 228 с.

65. Тихонов А.Н. Электронный парамагнитный резонанс в биологии // Сор. образовательный журнал, 1997, № 11, С. 8-15.

66. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека. М.: Мир, 1990, 378 с.

67. Фэрс Д., Лоренц Э. Канцерогенное действие ионизирующих излучений // Радиобиология. -М.: Медгиз, 1960, С. 378-434.

68. Циммер К.Г. Проблемы количественной радиобиологии. М.: Госатомиздат, 1962, 100 с.

69. Чадов Б.Ф., Артемова Е.В., Иванов Ю.Н. Выделение хромосомных мутаций у Drosophila melanogaster II Генетика, 1985, Т. 21, № 7, С. 11431150.

70. Чеботарев А.Н., Бочков Н.П., Катосова Л.Д., Платонова В.И. Временные колебания спонтанного уровня хромосомных аберраций в культуре лимфоцитов периферической крови человека // Генетика, 2001, Т. 37, № 6, С. 848-853.

71. Чехович А.В., Померанцева М.Д., Рамайя Л.К., Шевченко В.А Генетические нарушения у лабораторных мышей, экспонированных в районе Чернобыльской АЭС спустя 4 года после аварии // Генетика, 1993, Т. 29, №2, С. 312-322.

72. Шевченко В.А., Кальченко В.А., Рубанович А.В, Колобовникова Т.М. Изменчивость проферментов лейцинаминопептидазы в хроническиоблучаемых популяциях Centaurea Scabiosa II Молекулярные механизмы генетических процессов. -М.: Наука, 1982, С. 159-167.

73. Шевченко В.А., Померанцева М.Д. Генетические последствия действия ионизирующих излучений. М.: Наука, 1985, 279 с.

74. Шевченко В.А. Печкуренков В.П., Абрамов В.И. Радиационная генетика природных популяций. -М.: Наука, 1992, 220 с.

75. Шевченко В.А., Сусков И.И., Снигирева Г.П., Елисова Т.В., Семов А.Б. Генетический статус населения, подвергшегося воздействию ядерных испытаний // Вестник научной программы «Семипалатинский полигон», 1994, №3, С. 5-33.

76. Шевченко В.А. Эволюция представлений о генетической опасности ионизирующих излучений для человека // Радиационная биология. Радиоэкология, 2001, Т. 41, вып. 5, С. 615-626.

77. Шумный В.К. Комплексная междисциплинарная оценка последствий антропогенных воздействий // Сибирский экологический журнал, 2000, Т. 7. № 1,С. 1-4.

78. Пур-Тазовского междуречья) // Сибирский экологический журнал, 2000а, Т. 7, № 1, С. 51-59.

79. Яблоков А.В. Миф о безопасности малых доз радиации: Атомная мифология. -М.: Центр экологической политики России, 2002, С. 19-20.

80. Aarkrog A., Trapeznikov A.V., Molchanova V., Yushkov P.I., Karavaeva

81. Albertini R.J., Anderson D., Douglas G.R., Hagmar L., Hemminki K., Merlo

82. F., Natarajan A.T., Norppa H., Shuker D.G., Tice R., Waters M.D., Aitio Antero IPCS guidelines for the monitoring of genotoxic effects of carcinogens in humans // Mutation Research, 2000, V. 463, P. 111-172.

83. Ashburner M. Drosophila. A Laboratory Handbook. Cold Spring Harbor Press: Cold Sprig Harbor, N.Y., 1989, P. 299-418.

84. Awa A.A. Relationship between the radiation dose and chromosome aberration in atomic bomb survivors of Hiroshima and Nagasaki // J. Radiat. Res. Supplm, 1991, N 5, P. 265-274.

85. Bauchinger M. Chromosome aberrationen und ihre zeitliche Veranderungen nach Radium-Rontgentherapie gynakolo gischer // Tumoren. Strahlentherapie., 1968, Bd. 135, P. 553-564.

86. Bauchinger M. Chromosome aberrations in human lymphocytes as a quantitative indicator of radiation exposure. Mutagen—induced chromosome damage in man // Eds. Evans H. J. and Lloyd D. C.—Edinburg: University Press, 1978, P. 9-13.

87. Bauchinger M. Cytogenetic effects in human lymphocytes as a dosimetry system // Biological Dosimetry. Eds Eisert NG and Mendelsohn ML, Springer- Verlag Berlin Heidelberg, 1984, P. 15-24.

88. Bauer H., Kaufmann B.P., Demerek M. X-ray induced chromosomal alterations in Drosophila melanogaster II Genetics, 1938, № 23, P. 610-30.

89. Baverstock K. Radiation-induced genomic instability: fa paradigm-breaking phenomenon and its relevance to environmentally induced cancer // Mutat. Res., 2000, V. 454, № 1-2, P. 89-109.

90. Bender M.A. // Science, 1957, № 126, P. 974.

91. Bender M.A., Gooch P.C. Types and rates of X-ray—induced chromosome aberrations in human blood irradiated in vivo II Proc. Natl. Acad. Sci. (US), 1962, V. 48, P. 522-532.

92. Bonassi S., Znaor A., Norppa H., Hagmar L. Chromosomal aberrations and risk of cancer in humans: an epidemiologic perspective // Cytogenet. Genome Res., 2004, V. 104, P. 376-382.

93. Buckle V., Kearney L. New methods in citigenetic // Current opinion in genetics and development, 1994, N 4, P. 374-382.

94. Carrano A.V., Natarajan A.T. Considerations for population monitoring using cytogenetic techniques // Mutation Research, 1988, V. 204, P. 379-406.

95. Ionizing radiation: Sources and biological effects // United Nations Scientific Committee on the Effects of Atomic Radiation, United Nations, 1982, 1987, 1992, New -York.

96. Grigliatti T. Mutagenesis // Drosophila: a practical approach /Ed. D.B. Roberts. Oxford: IRL Press, 1986, P. 39-58.

97. Gubb D. et al. A selective screen to recover chromosomal deletions and duplications in Drosophila melanogaster II Genetics, 1988, V. 119, P. 377-326.

98. Hagmar L., Stromberg U., Tinnerberg H., Mikoczy Z. The usefulness of cytogenetic biomarkers as intermediate endpoints in carcinogenesis // International Journal of Hygiene and Environmental Health, 2001, V. 204, P. 4347.

99. Heddle J.A., Cimino M.C., Hayashi M., Romanga F. et all. Micronuclei as an index of cytogenetic damage: past, present, and future // Environmental and Molecular Mutagenesis, 1991, V. 18, P. 277-291.

100. Hollaender A. (ed.) // Radiation biology, 1954-1956, Vol. 4, Mc Grow-Hill, New York.

101. Holmberg K., Meyer A.E., Harms-Ringdahl M., Lambert В // Int. J. Radiat. Biol., 1998, V. 73, P. 21-34.

102. Kadhim M.A., Lorimore S.A., Hepburn M.D. et al // Lancet. 1994, V. 344, P. 987-988.

103. Kamada N. Biological dosimetry of atomic bomb survivors exposed within 500 meters from the hypocenter and the health consequences // J. Radiat. Res. (Tokyo), 1999, Dec.40, Suppl., P. 155-164.

104. Kellerer R.F., Rossi H.H. The theory of radiation action // Current Topics Radiat. res., V. 8, P. 85-158.

105. Kiefer J. Biological Radiation Effects. Berlin: Springer-Verlag, 1990, P. 444.

106. Langlois R.G., Nisbet B.A., Bigbee W.L., Ridinger D.N., Jensen R.H. An improved flow cytometric assay for somatic mutations at the glycophorin A locus in humans // Cytometry, 1990, V. 11(4), P. 513-521.

107. Lazutka J.R. Chromosome aberrations and rogue cells in lymphocytes of Chernobyl clean-up workers // Mutat. Res., 1996, Mar 9, V. 350(2), P. 315-329.

108. Lea D.E., Catcheside D.G. The mechanism of the induction by radiation of chromosome aberrations in Tredescantia II J. Genetics, 1942, V. 44, P. 216-245.

109. Lloyd D.C., Purrot R.G. and Reedcr E.J. The incidence of unstable chromosome aberrations in peripheral blood lymphocytes from unirradiated and occupational^ exposed people // Mutat. Res., 1980, V. 72, N. 3, P. 523-532.

110. Lloyd D.C. and Edwards A.A. Biological Dosimetry after Radiation Accidents. "Chromosomal aberrations" Basic and Applied aspects // Eds. Obe G. and Natarajan A.T., Springer-Verlag, Berlin Heidelberg New York London, 1990, P. 212-222.

111. Lloyd D.C., Edwards A.A. Chromosomal damages in human lymphocytes induced by low doses of irradiation // Gematol. Transfuziol., 1993, Jan,38(1), P. 3-7.

112. Lloyd D.C., Lucas J.N., Edwards A.A., Deng W., Valente E., Hone P.A., Moquet J.E. A study to verify a reported excess of chromosomal aberrations in blood lymphocytes of Namibian uranium miners // Radiat. Res., 2001, Jun; V. 155(6), P. 809-817.

113. Luning K.G., Searle A.G. Estimates of genetic risks from ionizing radiation // Mut. Res., 1971, V. 12, P. 291-304.

114. Mikhailov V.N. Catalog worldwide nuclear testing // New-York; Begell-Atom, 1999.

115. Moorhead P.S., Nowell P.C., Mellman W.J. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood // Exptl. Cell Res., 1960, V. 20, P. 613-616.

116. Muller H.J. Artificial transmutations of genes. In: Great experiments in biology, Gabriel M.L., Fogel S. (eds.), 1955, Prentice Hall. Englewood Chiffs (Reprint of the 1927 paper), P. 260-266.

117. Nauman C.H., Underbrink A.G., Sparrow A.H. Influence of radiation dose rate on somatic mutation induction in Tradescantia stamen hairs // Radiat. Res., 1975, V. 62, P. 79-96.

118. Nauman C.H., Schairer L.A., Sparrow A.H. Influence of temperature on spontaneous and radiation-induced somatic mutation in Tradescantia stamen hairs // Mut. Res., 1978, V. 50, № 2, P. 207-218.

119. Neel J.V., Schull W.J., Awa A.A. The children of parents exposed to atomic bombs: estimates of the genetic doubling dose of radiation for humans // Am. J. Hum. Genet., 1990, V. 46, P. 1053-1072.

120. Neuhaus M.J. Production of hatched V-chromosomes in Drosophila melanogaster males // Nature, 1936, V. 137, P. 996-997.

121. Obe G, Johannes I, Johannes C, Hallman K, Reitz G, Facius R. Chromosomal aberrations in blood lymphocytes of astronauts after long-term space flights // Int. J. Radiat. Biol., 1997, Dec; V. 72(6), P. 727-734.

122. V.D. Impact of irradiation on the tundra Nentsi population in Purovsk district of YNAO // Abstr. International conference: Modern problems of radiobiology, radioecology and evolution. Dubna, September 6-9, 2000, P. 140.

123. Poul-Ruling J. Chromosome aberrations of blood lymphocytes induced by low-level doses of ionizing radiation //Adv. Mutat. Res., 1990, N. 2, P. 155-190.

124. Puck T.T., Marcus P.I // J. Exptl. Med., 1956, 103, № 5, P. 653.

125. Puro J. Mutational response of the premeitic germ-cell stages of adult Drosophila melanogaster to X-irradiation // Annales Loologici Fennici. 1966, V. 3,P. 99-126.

126. Rozgaj R., Kasuba V., Simic D. The frequency of dicentrics and acentrics and the incidence of rogue cells in radiation workers // Mutagenesis, 2002, Mar; 17(2), P. 135-139.

127. Sankaranarayanan K., Sobels F.H. Radiation Genetics // The genetics and biology of Drosophila / M. Ashburner, E. Novitski. N.Y.: Academic Press, 1976, V.1,P. 1090-1250.

128. Sankaranarayanan K. Ionizing radiation genetic risk estimation // Mut. Res., 1991, V. 258, P. 3-122.

129. Sankaranarayanan K. Ionizing radiation genetic risk estimation and molecular biology: impactand inferences // TIG, 1993, V. 9, N 3, P. 79-64.

130. Sax K. Proc. Natl Acad. Sci. U.S., 1942, V. 28, P. 229.• 163. Schull W.J., Nell J.V., Hashizume A. Radiation and the sex ratio in man //

131. Science, 1958, V. 128, P. 343-348.

132. Sevan'kaev A.V., Tsyb A.F., Lloyd D.C., Zhloba A.A., Moiseenko V.V., Skrjabin A.M., Climov V.M. 'Rogue' cells observed in children exposed to radiation from the Chernobyl accident // Int. J. Radiat. Biol., 1993, Mar; 63(3), P. 361-367.

133. Spasrow A.H., Schairer L.A., Nowrocky M.M., Sautkulis R.C. Effect of low temperature and low-level chronic gamma-radiation on somatic mutation rates in Tradescantia II Radiat. Res., 1971, V. 47, P. 273-282.

134. Spasrow A.H., Underbrink A.G., Rossi H.H. Mutations induced in Tradescantia by small doses of X-rays and neufrons: analysis of dose-response• curves // Science, 1972, V. 176, № 4037, P. 916.

135. Stadler L.J. The rate of induced mutation in relation to dormancy, temperature and dose // Anat. Record., 1928, V. 41, P. 97.

136. Stram D.O., Sposto R., Preston D., Abrahamson S., Honda Т., Awa A.A. Stable chromosome aberrations among A-bomb survivors: an update // Radiat. Res., 1993, Oct. 136(1), P. 29-36.

137. Straume Т., Lucas J.N., Tucker J.D. et al. Biodosimetry for radiation worker using multiple assays // Helth Phys., 1992, V. 62, № 2, P. 122-130.

138. Straume Т., Lucas J.N. A comparison of the yields of translocations and dicentrics measured using fluorescence in situ hybridization // Int. J. Radiat. Biol., 1993, V. 63, №2, P. 185-187.

139. Streffer C., Muller W.U., Kryscio A., Bocker W. Micronuclei-biological indicator for retrospective dosimetry after exposure to ionizing radiation // Mutat. Res., 1998, Aug 3; 404(1-2), P. 101-105.

140. Swanson C.P. The effect of Oxigen Tension on the Productivity of Chromosome Breakage by Ionizing Radiations: an Interpretation // In: Radiobiol. Symp. Ed. Z.M. Back and P. Alexander. London, 1954, P. 254-261.

141. Thoday J.M. Sister-union isolocus breaks in irradiated Vicia faba. The target theory and physiological variation // Heredity. 1953, V. 6, Suppl. 1, P. 299-309.

142. Valencia R., Abrahamson S., et al. Chromosome mutation tests for mutagenesis in Drosophila melanogaster. A report of the U.S. Environmental Protection Agency Gene-Tox Program // Mutat. Res., 1984, V. 134, P. 61-88.

143. Vogel F. Risk calculations for hereditary effects of ionizing radiation in humans //Hum. Genet., 1992, V. 89, P. 127-146.

144. Wallace B. Genetic changes within populations after X-irradiations // Genetics, 1951, V. 36, P. 612-618.

145. Wurgler F.E., Vogel E.W. In vivo mutagenecity testing using Somatic cells of Drosophila melanogaster II Chemical Mutagens / Ed. F.J. De Serres. N.Y.: Plenum Press, 1986, V. 10, P. 1-72.

146. Zaire R., Notter M., Riedel W., Thiel E. Unexpected rates of chromosomal instabilities and alterations of hormone levels in Namibian uranium miners // Radiat. Res., 1997, May; 147(5), P.579-584.