Цитогенетическое исследование культур лимфоцитов периферической крови людей в отдаленные сроки после острого внешнего облучения

Дудочкина, Наталья Евгеньевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Цитогенетическое исследование культур лимфоцитов периферической крови людей в отдаленные сроки после острого внешнего облучения
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Цитогенетическое исследование культур лимфоцитов периферической крови людей в отдаленные сроки после острого внешнего облучения"

Федеральное государственное учреждение «Федеральный медицинский биофизический центр ни. А.И. Бурназяна» ФМБА России

На правах рукописи

□□34Б1Э51

Дудочкина Наталья Евгеньевна

ЦИТОГЕНЕП1ЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КУЛЬТУР ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЛЮДЕЙ В ОТДАЛЕННЫЕ СРОКИ ПОСТЕ ОСТРОГО ВНЕШНЕГО ОБЛУЧЕНИЯ

03.00.01 - радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2009

0-£> —

003461951

Работа выполнена в Федеральном Государственном учреждении «Федеральный медицинский биофизический центр имени А.И. Бурназяна» ФМБА России

Научный руководитель:

доктор биологических наук Нугис Владимир Юрьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Домрачёва Елена Васильевна

кандидат биологических наук Снигирёва Галина Петровна

Ведущая организация: Институт медико-биологических проблем РАМН

Защита состоится « 5 » марта 2009 г. в 10_ час 00 мин на заседании диссертационного совета Д 462.001.01 при Федеральном медицинском биофизическом центре им. А.И. Бурназяна ФМБА России по адресу 123182, г. Москва, ул. Живописная, Д. 46

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Федерального медицинского биофизического центра им. А.И. Бурназяна ФМБА России

Автореферат разослан « 29 » января 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 462.001.01, доктор медицинских наук

Н.К.Шандала

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Необходимость развития атомной энергетики и широкое использование в промышленности н медицине источников ионизирующих излучении сопровождались и сопровождаются риском возникновения радиационных аварий с появлением пациентов, подвергшихся радиационному воздействию в тех или иных дозах, в том числе и приводящих к развитию у них острой лучевой болезни (ОЛБ). Соответственно появилась необходимость диагностики самого факта переоблучения и оценки поглощённых доз с целью прогнозирования тяжести ОЛБ и осуществления ее адекватной терапии.

На практике для своевременного получения данных о дозовых нагрузках на пострадавших при радиационных авариях, необходимо комплексное использование методов, как физической дозиметрии, так и биологической индикации дозы. В области использования последней к настоящему времени накоплен огромный опыт, совершенствуются прежние и появляются новые методы определения дозовых нагрузок на человека.

Наиболее доступным и достоверным биологическим методом оценки действия ионизирующего излучения (помимо исследования ЭПР-сишала в эмали зуба) на современном этапе является цитогенетичсскии метод. Анализ аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови является общепризнанным методом биологической индикации дозы и применяется на практике в случаях радиационного поражения людей уже более 40 лет. Метод хорошо разработан для случаев внешнего острого относительно равномерного облучения при условии его использования в ближайшие сроки после радиационного воздействия. Огромную роль цитогенетический анализ сыграл в ситуации аварии на ЧАЭС, когда в начальный период он явился практически единственным источником сведений о дозовых нагрузках на пострадавших.

Одной из проблем, всегда стоявших перед методами цитогенетической индикации дозы, также была ее оценка в отдаленные сроки после радиационного поражения. Ретроспективная оценка дозы нужна для верификации факта облучения и определения тяжести радиационного поражения в целях проведения адекватной медико-социальной экспертизы, если в ближайшие сроки после облучения дозиметрическое исследование по тем или иным причинам не проводилось. Важное значение также имеет определение канцерогенного и генетического риска для людей, непосредственно подвергшихся воздействию ионизирующего излучения. Отсутствие достоверных данных о поглощенных

дозах создает объективные трудности при решении этой проблемы.

При аварии на ЧАЭС большое число лиц подверглись тотальному облучению в широком диапазоне доз, и у многих из них был осуществлен цитогенетический анализ культур лимфоцитов в ближайшие сроки после радиационного воздействия. Это привлекло внимание к данному контингенту, как к источнику сведений, пригодных для уточнения закономерностей элиминации аберраций хромосом и разработки методов ретроспективной оценки дозы. Такое исследование было начато, однако оно было ограничено временем не более 5 лет после облучения (В.Ю.Нугис,.2003). Судьба же аберраций хромосом в более отдаленные сроки так же представляет значительный интерес, т.к. несмотря на наличие ИКН-метода изучение возможности использования для ретроспективной оценки дозы нестабильных аберраций хромосом остается актуальной.

Цель работы.

Оценить возможность ретроспективной индикации дозы с помощью классического метода окраски хромосом по результатам исследования культур лимфоцитов периферической крови в отдаленные сроки (преимущественно больше 5 лет) после острого внешнего облучения пациентов, пострадавших при различных радиационных авариях.

Задачи.

1. Провести анализ аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови у лиц, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской АЭС, в отдаленные сроки (больше 5 лет) после облучения.

2. Путём сравнения полученных данных с результатами ранее выполненных (в том числе и в ближайшие сроки после аварии на Чернобыльской АЭС) исследований изучить закономерности элиминации различных типов аберраций хромосом.

3. Осуществить анализ аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови у пациентов, пострадавших при различных (кроме аварии на Чернобыльской АЭС) радиационных инцидентах.

4. Использовать специальную компьютерную программу, разработанную доктором биол. наук И.В.Филюшкиным, для восстановления величины полученной дозы из распределений клеток по числу содержащихся в них аберраций хромосом в отдалённые сроки у лиц, пострадавших в результате различных радиационных аварий.

5. На основании полученных результатов оценить возможность ретроспективной оценки дозы при применении классического метода анализа аберраций хромосом, используя имеющиеся сведения о первоначальных оценках дозы.

Новизна исследования.

Работа основана па изучении в течение длительного времени с помощью классического цитогснетнчсского метода нестабильных аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови у достаточно однородного контингента больных, подаерпиихся облучению в сходных условиях во время аварии па Чернобыльской АЭС, у которых имеются данные исследования хромосомных аберраций в ближайшие сроки после воздействия и госпитализированных для динамического наблюдения и проведения необходимых исследований со значительной повторностью. Это дало возможность впервые изучить закономерности элиминации аберраций хромосом в отдаленные сроки (примерно от 5 до 20 лет) после облучения и оценить перспективы их использования для ретроспективного определения дозы воздействия. Ранее подобное исследование данного контингента было осуществлено спустя не более 5 лет после облучения. Также впервые проведено онтогенетическое обследование в широком диапазоне времени (до примерно 50 лет после облучения) лиц, пострадавших при других радиационных авариях. На всём этом материале был апробирован оригинальный компьютерный метод ретроспективной оценки дозы.

Теоретическое и практическое значение работы.

Проведенное динамическое наблюдение на протяжении длительного времени за частотами аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС, для которых были известны результаты цитогенетических исследований в ближайшие сроки после облучения, позволило изучить закономерности элиминации повреждений нестабильного типа и изменения уровней выявляемых с помощью классического метода атипичпых хромосом, относящихся к аберрациям стабильного типа. Эти данные также дают возможность косвенно оценивать скорость пролиферации клеток, относящихся к лимфоидноЯ ткани. На основе полученных результатов были построены уравнения множественной регрессии, включающие, во-первых, восстановленную компьютерным методом оценку дозы и, во-вторых, время, прошедшее после облучения, или частоту атипичных хромосом п отдаленные сроки, что позволяет осуществлять ретроспективную оценку дозы на основании классического цитогенетического анализа.

Положения, выносимые на защиту.

1. Для элиминации нестабильных аберраций хромосом в период от 5 до 20 лет после облучения на ф°не высокой индивидуальной вариабельности характерно следование экспоненциальной модели со свободным коэффициентом. При этом частоты

атипичных хромосом к концу периода наблюдения в среднем снизились до примерно 30%, 50% и 90% для пациентов, у которых первоначальные оценки дозы составляли 0,72,3 Гр, 2,8-4,3 Гр и 4,7-9,8 Гр соответственно.

2. Использование линейных уравнений множественной регрессии, включающих восстановленную компьютерным методом оценку дозы и время, прошедшее после облучения, или частоту атипичных хромосом в отдалённые срою! позволяет ретроспективно оценивать поглощённые дозы после осуществления классического цитогенетического анализа, по крайней мере, до 20 лет после облучения, хотя возрастание временного промежутка между моментами облучения и подсчёта аберраций хромосом приводит к увеличению ошибок измерения.

3. В сроки более 20 лет после облучения оценка дозы по уравнению, включающему восстановленную оценку дозы и частоту атипичных хромосом, обладает большей эффективностью, чем использование для этой цели уравнения, включающего восстановленную оценку дозы и время, прошедшее после радиационного инцидента.

Апробация диссертации состоялась на заседании секции № 4 Ученого совета ФГУ «Федеральный медицинский биофизический центр имени А.И. Бурназяна» ФМБА России 16 октября 2008 г. Основные положения работы были представлены на III международной конференции «Генетические последствия чрезвычайных радиационных ситуаций» и семинаре «Перспективные проблемы космической радиобиологии применительно к длительным орбитальным и межпланетным пилотируемым полетам», г. Дубна 4-7 октября 2005 г.; на V съезде по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность), г. Москва, 10-14 апреля 2006 г.; на международной научно-практической конференции «Чернобыльские чтения-2008», Беларусь, г. Гомель, 24-25 апреля 2008 г.; на 36-ом ежегодном съезде Европейского общества по радиационным исследованиям (European Radiation Research Society), Франция, г. Typ, 1-4 сентября 2008 г.

Внедрение результатов исследования.

По полученным данным написаны методические рекомендации «Возможности ретроспективной оценки дозы при использовании стандартного метода окраски хромосом» (утверждены зам. руководителя ФМБА России Л.Н. Бежиной 14 января 2008 г., per. № 3-08). Результаты исследования внедрены в практику работы лаборатории радиационной гематологии и цитогенетики ФМБЦ им. А.И. Бурназяна

Личный вклад автора.

Цитогенетические исследования материала, взятого у пациентов, поступавших в клинику Федерального медицинского биофизического центра им. АИ.Бурназяна ФМБА

России (г. Москва), осуществлялись одновременно в лаборатории радиационной гематологии и цитогенетики (заведующий - доктор биол. наук В.Ю.Нугмс) ФМБЦ им. А.И.Бурназяна и в лаборатории цитогенетики (заведующий - доктор биол. наук А.В.Севанькаев) РНЦ Института медицинской радиологин РАМН (г. Обнинск). При этом автор принимала личное участие в отборе пациентов, постановке культур лимфоцитов, приготовлении препаратов хромосом и подсчете хромосомных аберраций. Статистическая обработка и анализ полученных результатов выполнены полностью ею.

Публикации.

Основные положения диссертации изложены в 8 публикациях: 4 статьях, 3 тезисах докладов, 1 методических рекомендациях.

Обт.ем и структура диссертации.

Диссертация состоит из глав «Введение», «Обзор литературы», «Материал и методы исследования», «Результаты», «Обсуждение», «Выводы» и «Список литературы». Она включает 231 источник литературы (104 на русском и 127 на иностранных языках), изложена на 184 страницах и содержит 13 таблиц и 30 рисунков.

СОДЕРЖАШ1Е РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Материалом для данного исследования послужила венозная кровь 47 пациентов, которые пострадали при различных радиационных авариях и были повторно госпитализированы в клинику через 2,2-51 год после облучения. В таблице 1 представлены некоторые общие сведения, характеризующие обследованный контингент. Отдельно выделены пациенты, пострадавшие при аварии на Чернобыльской АЭС и подвергшиеся смешанному гамма-бета-облучению. Следует особо отметить, что у данных пациентов в ближайшие сроки после радиационного воздействия была проведена цитогенетическая (по средней частоте дицетриков в культурах лимфоцитов периферической крови) оценка средних поглощенных доз. Также анализ полученных цитогенетичсских данных показал, что основная масса тела (за исключением кожи) подавляющего большинства чернобыльских пациентов подверглась относительно равномерному облучению.

Культивирование лимфоцитов периферической крови и приготовление препаратов хромосом были осуществлены или в соответствии с вариантом методики флуоресцент + Гимза (РРО) и последующим анализом аберраций хромосом только в клетках первого митоза независимо от времени культивирования (50-95 ч), или согласно

модификации стандартного метода, рекомендуемого МАГАТЭ (IAEA, 2001) и инкубацией стимулированных фитогемагглютинином клеток, в течение 48 ч, что также приводило к исследованию в основном клеток первого митоза в культуре.

Таблица 1

Общие сведения об обследованных пациентах

Диапазон Диапазон Общее

Число исходных времени число

Варианты Число обследова оценок обследования повторных

аварий аварий иных средних доз после взятий

пациентов на всё тело (Гр) облучения (года) периферичес кой крови

Чернобыльская АЭС 1 24 0,7-9,8 5,1-20,5 88

Гамма-нейтрон- 5 6 0,8-4,1 17,3-51,1 15

ное облучение

Гамма-бета- 5 13 0,6-3,7 27,1-48,7 29

облучение

Гамма- 4 4 0,7-3,8 2,2-30,7 10

облучение

Всего 15 47 0,6-9,8 2,2-51,1 142

Цитогенетический анализ проводили под иммерсией при 1000-кратном увеличении. В зависимости от успешности роста культур при каждом обследовании было проанализировано от 60 до 1536 метафаз. Учитывали как аберрации хромосомного (парные фрагменты, дицентрики, центрические и ацентрические кольца, атипичные хромосомы), так и хромаггидного (одиночные фрагменты, хроматидные обмены) типов. Для каждого дицентрика или центрического кольца сопутствующим считали один парный фрагмент.

Статистическая обработка результатов. Сравнение эмпирических распределений дицентриков и нестабильных аберраций по клеткам с теоретическим распределением Пуассона осуществляли по и-критерию Папворта. Этот критерий, в отличие от метода х2, дает возможность выявить, является ли несоответствие какого-либо распределения пуассоновскому следствием более высокой или более низкой дисперсии. Кратко, данный критерий основан на равенстве средней и дисперсии в распределении Пуассона. Вычисляемая по специальной формуле величина "и" распределена по нормальному закону. Поэтому при -1,96 < и < +1,96 распределение является пуассоновским с уровнем значимости большим/равным 5%. Положительные значения величины и демонстрируют

повышенную ("сверхдисперсия"), а отрицательные - сниженную ("недодисперсия") величину дисперсии по сравнению с ожидаемой при распределении Пуассона.

Рсгресснонный анализ данных осуществлялся с помощью компьютерной программы с^з^^са 6.0». При этом, кроме линейной зависимости, в различных ситуациях при изучении закономерностей элиминации аберраций хромосом использовались следующие три основные модели экспоненциальной зависимости:

где Ут - величина цитогенетического показателя через время Т (дни) после облучения, Уо

- величина цитогенетического показателя немедленно после облучения, а, а], аг, Ь, Ь], Ьз, с

- коэффициенты. Тип I можно обозначить как одиночную экспоненциальную зависимость, тип 1[ - как одиночную экспоненциальную зависимость со свободной константой, а тип III - как двойную экспоненциальную зависимость.

Компьютерный метод ретроспективной оценки дозы. Компьютерное восстановление дозы в отда^нные сроки после облучения по результатам цитогенетического анализа культур лимфоцитов периферической крови осуществлялось с помощью программы, разработанной доктором биол. наук И.В.Фнлюшкиным. В качестве исходных данных использовались распределения клеток по числу содержащихся в них дицентриков или нестабильных аберраций. В основе данного подхода лежит факт отклонения распределений клеток по числу содержащихся в них дицентриков от теоретического распределения Пуассона в сторону «сверхдисперсии» и представление о симуляции неравномерности облучения при элиминации нестабильных аберраций хромосом с течением времени. Таким образом, в популяции первоначально облученных в одной дозе клеток появляются как бы «нсоблучёниые» неаберрантные клетки. Поэтому И.В.Филюшкин преобразовал первоначальную (многоканальную) версию своей компьютерной программы, предназначенную для оценки распределения доз по лимфоцитам при неравномерном радиационном воздействии, в новую (двуканальную: облучённая - необлучённая фракция клеток) версию, направленную на решение задачи ретроспективной оценки дозы.

Ут/Уо = ахсхр(ЬхТ),

Ут/Уо = с + ехр(а + ЬхТ),

Ут/Уо = а|хехр(Ь]хТ) + а2хехр(Ь2хТ)

(I тип) (И тип) (III тип),

Результаты исследований

1. Изучение элиминации аберраций хромосом у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС

Для математико-статистического описания закономерностей изменения величины различных цитогенетических показателей через 5-20 лет после аварии пациенты были разделены на 3 группы в зависимости от величины полученных доз, оцененных в ближайшие сроки после радиационного поражения: I группа - лица, облучённые в дозах от 0,7 до 2,3 Гр (8 человек, 33 повторные культуры с индивидуальной частотой взятия от 1 до 15); II группа - лица, облученные в дозах от 2,8 до 4,3 Гр (12 человек, 36 повторных культур с индивидуальной частотой взятия от 1 до 9); III группа - лица, облучённые в дозах от 4,7 до 9,8 Гр (5 человек, 19 повторных культур с индивидуальной частотой взятия от 1 до 10). В качестве основной математической модели дня описания изменения частот цитогенетических показателей была выбрана простая экспоненциальная зависимость со свободной константой (тип II).

На рис. 1 представлена динамика изменения через 5-20 лет после облучения отношений частот, наблюдаемых в отдалённые сроки, к первоначально зарегистрированным частотам для дицентриков, всех нестабильных аберраций (хромосомного типа), дицентриков на 1 клетку с дицентриками и (}<1г соответственно. Как можно видеть, наблюдается значительная индивидуальная вариабельность при элиминации как дицентриков, так и нестабильных аберраций. Особенно это заметно на примере группы I, т.к. вследствие более низкого исходного уровня аберраций хромосом по сравнению с группами II и III относительное снижение в среднем оказывается меньше и диапазон колебаний лучше виден.

Очень высокая индивидуальная вариабельность обнаруживается и для частот дицентриков на 1 клетку с дицентриками и показателя <2с1г, в целом более выраженная в последнем случае. При этом, несмотря на общую тенденцию к снижению величины обоих показателей в группах II и III в ряде случаев наблюдается превышение над исходными значениями. В связи с тем, что в группе I как частота дицентриков на 1 клетку с дицентриками, так и <3(1г в среднем имеют наименьшие значения (для указанной частоты дицентриков у ряда пациентов она уже исходно равнялась 1, т.е. предельному минимальному значению), то в рассматриваемые сроки после воздействия радиации присущие им регрессионные кривые не только в целом располагались выше регрессионных кривых для групп II и III, но и практически не зависели от времени, прошедшего после облучения. Более того, для показателя 0& в группе I наблюдалась

даже некоторая, хота и не достоверная, тенденция к увеличению его значений. Однако в целом, данный показатель, несмотря на мнение, высказываемое в рекомендациях МАГАТЭ (IAEA, 2001) не может исиользоваться для ретроспективной оценки дозы. Изменение частоты атипичных хромосом (аномальных моноценгриков) также было изучено с помощью классической методики окраски хромосом, несмотря на то, что в этом случае идентифицируется лишь небольшая доля всех образующихся при облучении реципрокных транслокаций и иивсрсий. На рис. 2 представлена динамика отношений частот аномальных моноцентриков к исходным данным у пациентов, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС и разделённых на три дозовые группы за тот же срок после облучения. Обращает на себя внимание, что, начиная примерно с 10 лет после облучения, в группе I средние частоты атипичных хромосом выходят на уровень около 30%, в группе II - на уровень 53% и в группе III - на уровень 92% от их исходных средних частот у пациентов из указанных групп.

У одного из обследованных больных (исходная оценка дозы - 4,3 Гр) примерно через 20,7 лет после облучения был диагностирован хронический миелолейкоз (XMJ1) с типичным его онтогенетическим маркером - Ph-хромосомой. К сожалению, последний за-забор периферической крови для постановки повторной культуры лимфоцитов был произведен более, чем за 7 лет 7 месяцев до развития клинических проявлений заболевания. В то же время среди атипичных хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови у различных чернобыльских пациентов из обследованной когорты довольно часто встречались аномальные моноцентрики, обычно обозначаемые как Ph-подобные. Однако никаких особых отличий по частотам этих перестроек у пациента, с развившимся в последствии XMJI, по сравнению с остальными пострадавшими в указанный период обследования не наблюдалось.

В связи с использованием разными авторами различных экспоненциальных моделей, было интересно проверить, какая из них более адекватно отражает общую тенденцию элиминации на притяжении всего периода наблюдений от двух месяцев до 20 лет после облучения. К сожалению, в связи с произошедшими политическими изменениями, количество пациентов, которые повторно госпитализировались спустя свыше 5 лет после облучения, сократилось до 24 человек, т.к. большая часть пострадавших из числа поступивших в клинику в острый период в настоящее время проживает на Украине. Чтобы избежать влияния на ход линий регрессии особенностей

А 0.7.2.3 Гр а 2.8-4,3 Гр о 4.7 -«.8 Гр

< ^ ........ о V "" 1 -.6............... А „'/¡Г ....._.„:.„.......

3000 4000 5000 еооа гоос

ДИЦЕНТРИКП / 1 КЛЕТКА С ДИЦЕНТРИКАМН

о * 0.7-2.3 Гр в 2,8-4,3 Гр о 4,73.8 Гр

♦ .

¿Ъ?..... ' '„'о* ' ' *

1 1 ■'"«/к р - - - - - *ч- - В

- 0 -1

< „

А * 0,7.2.3 Г в 2,8-4.3 Г о 4.7-9,8 Г

( и О * Г' л ~«Г я^-» .................- .......* ........ .......

......••^-••"р-

5000

140

л. ЬР7-гДГр в 2.8-4.3 Гр о 4.7-9.8 Гр

80 60 40 20 » о

-. . ,-Т-г— .......

А . ° А

' * * о - в

Рис. К Динамика отношений средних частот цитогенетических показателей в отдалённые сроки после облучения к их первоначальным частотам (по оси ординат) в течение 5-20 лет после облучения у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС (по оси абсцисс -время, прошедшее после облучения, дни)

щ*

3 mí ta h

; rr

& 2:

300

< tr

K 3

LJ К

= я

к и ñ ^

o c

-- о

□ > 0,7-2.3 Гр о 2,8-4,3 Гр о 4,7-9,8 Гр

i □ ; > а а

о С □ о >

a >........... □ а -о- ° ••••'•••«Чй...... № П о о" I í—-......)>........... ...i.... °о Р ° . п че а. "п сГ"-а- — ....................* "."."Т."".";

. . . . i . , . , i i

4000 5000 6000

ДЕНЬ ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ

Рис. 2. Динамика отношений частот атипичных хромосом в отдалённые сроки после облучения к их первоначальным частотам в течение 6-20 лет после облучения улиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС.

элиминации аберраций хромосом у отдельных людей, для указанной выше цели были использованы только те 24 пациента, которые ложились в клинику на обследование как в период до 5 лет, так и после этого срока. На рис. 3 представлены соответствующие линии экспоненциальной регрессии типов И и III, описывающие элиминацию дицентриков и нестабильных аберраций для II дозовой группы. Хотя коэффициенты корреляции для кривых типа II и III различались очень незначительно и равнялись соответственно 0,970 и 0,978 для дицентриков и 0,948 и 0,959 для нестабильных аберраций. Однако видно, что двойная экспоненциальная модель лучше соответствует эмпирическим точкам в наиболее отдалённые исследованные сроки. В двух остальных дозовых группах наблюдалась абсолютно тождественная картина.

Цитогенетическис исследования, проведенные в сроки до 5 лет после чернобыльской аварии, продемонстрировали зависимость скорости падения уровней дицентриков и всех нестабильных аберраций от исходной полученной дозы: чем она была выше, тем выше была и скорость снижения частот хромосомных повреждений. Чтобы проверить, сохраняется ли данный эффект в более поздние сроки были выделены 6 пациентов, у которых частота повторных заборов крови была достаточно высокой (от 6 до 15). Для

описания процесса некоторых цитогенетических показателей у каждого из этих пациентов в общем временном диапазоне от 5 до 20 лет после облучения была использована экспоненциальная модель I типа Коэффициент b в этом уравнении фактически отражает темп процессов элиминации. Как оказалось, достоверная корреляция его величины с исходно оцененными дозами для частот дицентриков и всех нестабильных аберраций хромосомного типа на 100 клеток и процентов клеток с дицентриками и всеми нестабильными аберрациями отсутствовала. При этом время снижения величины цитогенетических показателей в 2 раза в настоящем исследовании в период от 5 до 20 лет после облучения составило для частоты дицентриков 1120 дней с 95%-доверительным интервалом от 798 до 1873 дней, для процента клеток с дицентриками 1364 дня с 95%-доверительным интервалом от 957 до 2382 дней, для частот всех нестабильных аберраций 1313 дней с 95%-доверительным интервалом от 1073 до 1691 дня и для клеток с нестабильными аберрациями хромосом 1593 дня с 95%-доверительным интервалом от 1189 до 2424 дней.

Первоначально в качестве вводного материала для компьютерной программы, предложенной И.В.Филюшкиным для восстановления полученных доз в отдалённые сроки после облучения, предлагалось использовать распределения клеток по числу содержащихся в них дицентриков. Как уже указывалось, идея заключалась в том, что элиминация аберраций приводит к имитации неравномерности радиационного воздействия, даже если исходно облучение носило равномерный характер. Это предполагало возникновение сверхдисперсности распределения аберраций. Однако с течением времени элиминация аберраций хромосом приводит к исчезновению или малой вероятности регистрации классов клеток с числом дицентриков больше 1. В этом случае ретроспективная оценка дозы автоматически будет производиться просто по средней частоте дицентриков и, естественно, окажется заниженной по сравнению с реальной полученной дозой. Поэтому было решено с той же целью использовать также распределения клеток по числу содержащихся в них нестабильных аберраций хромосомного типа, которые чаще содержат (после облучения) классы клеток с 2 и более повреждениями хромосом (дицентрики только один из видов нестабильных аберраций). Действительно, из 88 повторно взятых культур лимфоцитов через 5-20 лет после аварии на Чернобыльской АЭС сверхдисперсное распределение дицентриков наблюдалось в 44 случаях, а нестабильных аберраций - в 70 случаях. При этом, наличие клеток с числом дицентриков / нестабильных аберраций больше 1 явно реже встречалось при меньших дозах.

< «

I*.

2 ы

s S |1

< s*

ж £

UJ ^

S О £C GJ Й

i« g*

I-

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

■\г»

V* ъ в

... й" q, d " •Р п i

-------- -С---, D __ о -------

2000 3000 4000 5000 6000 ДЕНЬ ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ

8*.

ÜQ ил m fcr

Щ sr

sä« 2 ä

< sr к <

Mj rc

S Й

ЕЕ

Iе

к ^

4 о

А □

D 7k о V „ о V □

а с □ о а

а га"«£)ч 0:1 а 1 о

а 1 п° о ">Но и '"в»-« D

2000 3000 4000 5000 6000 ДЕНЬ ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ

Рис. 3. Сравнение двух экспоненциальных моделей - II типа (одиночная экспонента со свободной константой - сплошная линия) и III типа (двойная экспонента - прерывистая линия), описывающих элиминацию дицентриков (верхний график) и всех нестабильных аберраций хромосомного типа (нижний график) в течение 20 лет после облучения во II дозовой группе пациентов, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС.

1. Ретроспективная оценка дозы радиационного воздействия с помощью компьютерного метода у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС

С помощью компьютерной программы было произведено восстановление дозы из распределений клеток по числу содержащихся в них диценгриков или нестабильных аберраций. Из полученных двух оценок (по дицентрикам и нестабильным аберрациям) для каждого случая была рассчитана средняя восстановленная оценка дозы. Дня построения с помощью линейного регрессионного анализа единой зависимости первоначальной оценки дозы от ее величины, восстановленной с помощью компьютерной программы, на протяжении всего 20-летнего пострадиационного периода наблюдений дальнейшие расчёты были произведены с привлечением данных, полученных ранее для сроков от 61 дня до примерно 5 лет после облучения (В.Ю.Нугис, 2003). На рис. 4 представлен соответствующий график, демонстрирующий, несмотря на сильную корреляцию (г = 0,829, р < 0,0001), заметное смещение восстановленных оценок в сторону меньших значений величин доз по сравнению с первоначальными результатами индикации дозы. Дальнейший регрессионный анализ показал, что, несмотря на значительную индивидуальную вариабельность, отношение восстановленной оценки дозы к её первоначально определённому значению статистически достоверно (со средней силой - г = 0,487, р < 0,00001) зависело от времени, прошедшего после облучения.

В связи с этим было принято решение получить уравнение множественной регрессии для установления зависимости первоначально определённого значения дозы от сё восстановленного компьютерным методом значения и времени, прошедшего после облучения. На рис. 5 приведен график линейной связи между первоначально определённой величиной дозы и дозой, рассчитанной по этому уравнению, т.е. ретроспективной оценкой дозы. Можно видеть, что в среднем обе оценки не смешены относительно друг друга, т.к. график выходит из начала координат под углом 45°.

Учитывая сохраняющиеся реальные различия уровней атипичных хромосом в выделенных дозовых группах в отдалённые периоды после облучения, была также получена зависимость первоначально оцененных значений дозы от её компьютерно восстановленных величин и наблюдаемых на моменты повторных обследований частот атипичных хромосом на 100 клеток. Это ещё один способ ретроспективной оценки дозы. График линейной зависимости первоначально полученных оценок дозы от ретроспективных оценок дозы, рассчитанных по этому второму уравнению, приведен на рис. 6. Как и в предыдущем варианте (рис. 5), оценки дозы в среднем не смещены относительно друг друга.

В таблице 2 представлены данные по проценту отклонений ретроспективных оценок дозы за пределы ± 25%-, ± 33%- и ± 50% от её исходно определённой величины в

различные периоды времени после воздействия радиации. Как можно видеть, присоединение к общему массиву данных результатов всё более поздних исследований приводит к росту числа отклонений за обозначенные границы. Поэтому, применительно к использованию полученных зависимостей и в других возможных случаях отсроченного поступления пациентов, следует построить кривые зависимости для определённых периодов времени после облучения и использовать их в зависимости от сроков повторного исследования. Имеющийся материал в чисто техническом плане позволяет достаточно легко сделать это.

3. Изучение элимннации аберраций хромосом и ретроспективная оценка дозы у лиц, пострадавших при различных радиационных инцидентах, за исключением аварии на Чернобыльской АЭС

Подсчёт аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови в отдалённые сроки после облучения был также произведен у 23 пациентов, пострадавших в различных. У 2 пациентов кровь была взята (2 и 1 раз соответственно) в промежутке от 2 лет 2 месяцев до 2 лет 8 месяцев после облучения. От всех остальных пострадавших материал был получен в общем временном диапазоне примерно от 17 лет 3 месяцев до 51 года 2 месяцев после воздействия радиации. В этой последней группе обнаруженные частоты дицентриков и нестабильных аберраций были очень малы и варьировали соответственно от 0 до 2,5 и от 0,2 до 6,5 на 100 клеток, а сверхдисперсное распределение дицентриков и нестабильных аберраций было обнаружено соответственно в 9 и 17 культурах из их общего числа, равного 51. Частоты атипичных хромосом колебались от О до 10,5 на 100 клеток.

Распределения клеток по числу содержащихся в них дицентриков и всех нестабильных аберраций, как и в случае с пострадавшими при аварии на Чернобыльской АЭС, были использованы для восстановления дозы с помощью компьютерной программы, разработанной доктором биол. наук И.В.Филюшкиным. Первоначальные оценки доз для каждого из пациентов этой группы были получены путём усреднения имевшихся значений доз, оцененных разными методами: физическим, цитогенетическим, гематологическим и по ЭПР-сигналу эмали зуба, а также выбора наиболее достоверных величин. Ретроспективные оценки доз были рассчитаны по 2 приведенным выше уравнениям множественной регрессии, полученным на материале чернобыльских пациентов.

Рис. 4. Зависимость первоначальной онтогенетической оценки дозы от ей восстановленного компьютерным методом значения в отдалённые сроки (до 20 лет) после облучения у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС.

Рис. 5. Зависимость первоначальной цитогенетической оценки дозы (Оо, Гр) от её ретроспективной оценки, рассчитанной по уравнению множественной регрессии Оо = (0,386 ± 0,136) + (0,971 ± 0,032)х Бт + (0,000304 ± 0,000036)хТ (г=0,864, р < 0,0001), где Бт - восстановленная компьютерным методом оценка дозы (Гр), Т - время, прошедшее после облучения (дни).

Рис. 6. Зависимость первоначальной цитогенетической оценки дозы (Оо, Гр) от её ретроспективной оценки, рассчитанной по уравнению множественной регрессии, Оо = (1,136 ± 0,100) + (0,518 ± 0,048)х От + (0,145 ± 0,014)х Ат (г = 0,876, р < 0,0001), где От -восстановленная компьютерным методом оценка дозы (Гр), Ат - наблюдаемая на момент повторного обследования частота н атипичных хромосом на 100 клеток.

Таблица 2

Процент отклонений ретроспективных оценок дозы от их исходно определённых

величин у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС, в различные периоды

времени после облучения при использовании для расчётов уравнений

множественной регрессии, включающих восстановленную дозу и время, прошедшее после

облучения, (доза + время) или частоту атипичных хромосом (доза+маркер)

Период Число Процент (число) отклонений

времени выполненных ретроспективных оценок на заданную после цитогенетических величину от исходно определённой дозы

Вариант уравнени я

Доза + время

Доза + маркер

облучения До 6 лет

До 12 лет

До 20 лет

До 6 лет

До 12 лет

До 20 лет

анализов 226

271

307 226 271 307

±25% 20,8% (47)

24,0% (65)

30,9% (95)

17,7% (40)

18,8% (51)

34,9% (107)

± 33% 13,7% (31)

15,9% (43)

20,8% (64)

10,2% (23)

13,7% (37)

23,5% (72)

± 50% 4% (9)

7,7% (21)

13,7% (42)

2,7% (6)

7,0% (19)

9,8% (30)

На рис. 7 результаты ретроспективной оценки дозы, рассчитанные на основании исследования 3 культур лимфоцитов периферической крови, взятой от 2 пациентов в диапазоне 2 года 2 месяца -2 года 8 месяцев после облучения, наложены на зависимости первоначальных оценок дозы от её ретроспективных оценок, полученные на материале чернобыльском контингенте в сроки до 6 лет после аварии. У одного пациента ретроспективные оценки дозы на основании цитогенетического анализа 2 культур были настолько близки при использовании любого из двух уравнений, что на графиках они практически слились, причём находились в пределах 95%-доверительных интервалов для индивидуальных значений. Напротив, единственная ретроспективная оценка дозы, выполненная для другого пациента, существенно выходила за эти рамки, отклоняясь в сторону больших значений в обоих случаях. По-видимому, есть достаточно правдоподобное объяснение этому и связано оно с тем, что данный пострадавший подвергся резко неравномерному облучению с наличием существенного по объёму локального поражения в крайне высоких дозах. Так как использованная компьютерная программа основывается на уподоблении процесса элиминации появлению якобы необлучённых участков, т.е. «возникновению» неравномерности радиационного воздействия, то восстановленная оценка дозы отразила не столько среднюю дозу на всё тело, сколько дозу на наиболее поражённые регионы. Необходимо заметить, что данное отклонение для неравномерно облучённых пациентов, по-видимому, имеет значение только в относительно ранние сроки после облучения. Спустя большие сроки, скорее

всего, реальные процессы элиминации уравнивают случаи равномерного и неравномерного воздействия радиации в отношении ретроспективной оценки дозы предлагаемым способом.

Аналогично, на рис. 8 метки, соответствующие индивидуальным результатам ретроспективных оценок доз, рассчитанных для пациентов, пострадавших в разных радиационных инцидентах, при их повторных цитогенетических обследованиях через примерно 17-51 год после облучения наложены на зависимости исходных оценок дозы от еб ретроспективных оценок, полученные на материале чернобыльского контингента, но уже совокупно для сроков до 20 лет после аварии. Как видно, использование для ретроспективных оценок дозы у данного контингента уравнения множественной регрессии, включающего восстановленную оценку дозы и время, прошедшее после облучения в целом даст неудовлетворительные результаты. Если точки, соответствующие культурам лимфоцитов, взятых в диапазоне 17-20 лет после облучения, по большей части лежат в пределах 95%-доверительных интервалов для индивидуальных значений, то в более поздние сроки наблюдается явный выход за эти пределы в сторону завышения ретроспективных оценок. Всё это обусловлено общим снижением уровня нестабильных аберраций хромосом, который в промежутке от 20 до 50 лет уже, по-видимому, меняется очень мало и, поэтому уравнение, полученное при анализе данных чернобыльских пациентов в сроки до 20 лет после облучения, уже не работает. По-другому обстоит дело при использовании уравнения множественной регрессии, включающего восстановленную оценку дозы и частоту атипичных хромосом в отдалённые сроки после облучения. Рис. 8 демонстрирует, что сделанные оценки дозы большей частью лежат в пределах 95%-доверительного интервала для индивидуальных значений.

4. Частоты хроматидных аберраций в отдалённые сроки после облучения у лиц, пострадавших при различных радиационных ситуациях

Хотя по своей сути хроматидные фрагменты и обмены относятся к нестабильным аберрациям, однако наблюдение за изменениями их уровней - это не наблюдение за их элиминацией, а наблюдение за их индукцией в каждый отдельный момент времени при взятии образца крови. Здесь возникает активно обсуждаемая сейчас проблема пострадиационной хромосомной нестабильности, одним из показателей которой является частота хроматидных аберраций. Па рис. 9 представлены их индивидуальные частоты в культурах лимфоцитов периферической крови в определённом текущем году после облучения и их средние значения (± стандартные ошибки среднего) у 24 пациентов, пострадавших при Чернобыльской АЭС, в отдаленные сроки после облучения

РЕТРОСПЕКТИВНАЯ ОЦЕНКА ДОТЫ, Гр

РЕ1Р0С12КПВНЛЛ ОКфНКА ДОЗЫ, Гр

Рис. 7. Расположение ретроспективных оценок доз для 2 пациентов (3 культуры лимфоцитов), обследованных через 2 года 2 месяца -2 года 8 месяцев после облучения на графиках зависимостей исходной величины дозы от её ретроспективной оценки, полученных на основании уравнений множественной регрессии для восстановленной с помощью компьютерной программы оценки дозы и времени (до 6 лет), прошедшего после облучения, (слева) или частоты атипичных хромосом (справа).

• I21<S<7II<II11

РЕПюа]ЕктвнляодакАДозы,гр гетросгопшнляоцшклдош,гр

Рис. 8. Расположение ретроспективных оценок доз для пациентов, пострадавших при различных радиационных инцидентах, через 17-20 (закрашенные квадраты) и >20 (прозрачные квадраты) лет после облучения на графиках зависимостей исходной величины дозы от её ретроспективной оценки, полученных на основании уравнений множественной регрессии для восстановленной с помощью компьютерной программы оценки дозы и времени, прошедшего после облучения, (слева) или частоты атипичных хромосом (справа).

5 6 7 в 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 ТЕКУЩИЙ ГОД ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ

Рис. 9. Частоты хроматидных аберраций у лиц, пострадавших при аварии на (представлены как индивидуальные величины, так и их средние величины со стандартными ошибками среднего в каждый текущий год после данного радиационного инцидента).

аварии на Чернобыльской АЭС, которые были подвергнуты цитогенетическому обследованию в настоящей работе. Данные приведены за весь 20-летний период наблюдения, включая результаты первоначального анализа. Как можно видеть на рис. 9, исходно и в некоторые годы после облучения наблюдаются значительные индивидуальные колебания частот хроматидных аберраций. В отдельных случаях данный показатель явно выходит за границы своего спонтанного уровня. Соответственно наличию или отсутствию таких значений колеблется и средняя частота аберраций хроматидного типа, которая, как можно отметить, начиная с 13-ого года после облучения, перестаёт значительно варьировать и находится примерно на уровне 1 аберрации на 100 клеток и меньше. Могут ли полученные данные свидетельствовать о хромосомной нестабильности у чернобыльского контингента пациентов? По-видимому, нет, т.к., собственно говоря, отсутствует «массовость» выхода частот хроматидных аберраций за фоновые значения. Отдельные превышения этого уровня так и остаются индивидуальными событиями, по-видимому, не связанными с предыдущим облучением.

Учитывая участие ряда форменных элементов крови в защите организма от

действия инфекционных агентов и известную связь между последними и индукцией хроматидных аберраций, была предпринята попытка оценить корреляцию между частотами хроматидных аберраций в культурах лимфоцитов периферической крови и числом всех лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов и процентом нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови. В этот анализ были включены все обследованные больные: как чернобыльские пациенты, так и лица, пострадавшие при других радиационных инцидентах. Статистически значимая корреляция между этими показателями отсутствовала.

ВЫВОДЫ

1. В течение всего отдаленного периода, от 2 до 50 лет, сохраняются цитогенетические маркеры имевшего место однократного внешнего облучения.

2. Элиминация нестабильных аберраций, включая диценгрики, обнаруживаемая при классической окраске хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС, в период от б до 20 лет после облучения, несмотря на большие индивидуальные различия, в среднем осуществляется в согласии с одноэкспоненциальной моделью со свободной константой. Для описания того же процесса за весь период наблюдения примерно от 2 месяцев до 20 лет после воздействия радиации необходимо использовать двуэкспоненциальую модель.

3. В период от 6 до 20 лет после аварии на Чернобыльской АЭС время, за которое частота аберраций хромосом уменьшается в 2 раза составляет: для частоты дицентриков - 3 года, для процента клеток с дицентриками - 3,7 лет, для частот всех нестабильных аберраций - 3,6 лет, и для клеток с нестабильными аберрациями хромосом - 4,4 года.

4. Полученные на материале лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС, уравнения множественной регрессии, включающие, с одной стороны, восстановленные с помощью специальной компьютерной программы оценки доз и, с другой стороны, время, прошедшее после облучения, или частоты атипичных хромосом, регистрируемые в отдалённые сроки, позволяют производить ретроспективные дозовые оценки, по крайней мере, до 20 лег после воздействия радиации, хотя увеличение времени между моментом поражения и проведением ццгогенетического анализа приводит к увеличению ошибок индивидуальных измерений.

5. Результаты повторных цитогенетических обследований пациентов, пострадавших при других, кроме чернобыльской аварии, радиационных авариях,

демонстрируют возможность применения для ретроспективной оценки дозы в течение 20 и более лет после облучения уравнения множественной регрессии, включающего, помимо восстановленной с помощью компьютерной программы оценки дозы, частоту атипичных хромосом, но не время, прошедшее после радиационного воздействия.

6. При использовании классического метода окраски хромосом к концу 20-летнего периода цитогенетического наблюдения за лицами, пострадавшими при аварии на Чернобыльской АЭС, на фоне высокой индивидуальной вариабельности усредненное отношение суммарного выхода атипичных хромосом в повторно взятых культурах к их исходно определённым частотам составляло примерно 30%, 50% и 90% для пациентов, у которых первоначальные оценки дозы составляли 0,7-2,3 Гр, 2,84,3 Гр и 4,7-9,8 Гр соответственно.

7. Частота аберраций хроматидного типа в культурах лимфоцитов периферической крови у пострадавших пациентов в некоторые годы после облучения подвержена значительным индивидуальным колебаниям, но лишь в отдельных случаях с явным выходом за границы спонтанного уровня, что не свидетельствует о развитии феномена хромосомной нестабильности. Связь между уровнями хроматидных аберраций и количеством / процентом лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови отсутствует.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Нугис В.Ю., Дудочкина Н.Е. Компьютерный способ использования нестабильных аберраций для ретроспективной оценки дозы после острого облучения // III Международной конференции «Генетические последствия чрезвычайных радиационных ситуаций» и семинар «Перспективные проблемы космической радиобиологии применительно к длительным орбитальным и межпланетным пилотируемым полётам», Дубна, 4-7 октября 2005 г. Тезисы докладов. - М. Издательство Российского университета дружбы народов, 2005. - С. 85-86.

2. Нугис В.Ю., Дудочкина ILE. Закономерности элиминации аберраций хромосом у людей после острого облучения по данным культивирования лимфоцитов периферической крови в отдаленные сроки // Радиационная биология. Радиоэкология. -2006.-Т. 46,№ 1.-С. 5-15.

3. Нугис В.Ю., Дудочкина Н.Е. Ретроспективная оценка дозы с помощью компьютерного анализа распределений клеток по числу аберраций // V съезд по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная

безопасность), Москва 10-14 апреля 2006 г. Тезисы докладов. - М., 2006. - Т. 1. - С. 64.

4. Нугис В.Ю., Дудочкина Н.Е. Цитогенетические показатели в отдаленные сроки после острого облучения людей. Компьютерный метод ретроспективной оценки дозы // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2007. - Т. 47, № 1. - С. 74-79.

5. Нугис В.Ю., Дудочкина Н.Е. Возможности ретроспективной оценки дозы при использовании стандартного метода окраски хромосом // ФМБА России, методические рекомендации, 2007, per № 3-08. - 15 с.

6. Нугис В.Ю., Севанькаев A.B., Хвостунов И.К., Дудочкина Н.Е., Голуб Е.В., Надежина Н.М., Галстян И.А. Длительное наблюдение за элиминацией аберраций хромосом в культурах лимфоцитов у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС: ретроспективная оценка дозы // Чернобыльские чгения-2008. Материалы международной научно-практической конференции, Гомель, 24-25 апреля 2008 г. -Гомель: "Сож", 2008. - С. 190-196.

7. Sevan'kaev A.V., Khvostunov I.K., Lloyd D.C., Voisin Ph., Shepel N.N., Galstian I.A., Dudocbkina N.E., Nadejina N.M., Nugis V.Yu. The chromosomal aberration assay for biological dosimetry a long time after exposure // Чернобыльские чтения-2008. Материалы международной научно-практической конференции, Гомель, 24-25 апреля 2008 г. -Гомель: "Сож", 2008. - С. 248-253.

8. Nugis V.Yu., Sevan'kaev A.V., Khvostunov I.K., Dudochkina N.E., Golub E.V., Nadejina N.M., Galstyan I.A. The continuous observation by chromosome aberration elimination at irradiated persons // Radioprotection. - 2008. - V. 43, № 5. - P. 46.

Подписано в печать: 28.01.2009

Заказ № 1503 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Дудочкина, Наталья Евгеньевна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Цитогенетический анализ культур лимфоцитов периферической крови как метод биологической индикации дозы.

2.2. Элиминация радиационно-индуцированных нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови с течением времени после облучения и возможности их использования для ретроспективной оценки дозы.

2.3. Методы учёта стабильных перестроек хромосом и их применение при реконструкции поглощенных доз у пострадавших после воздействия ионизирующих излучений.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Характеристика обследованных групп.

3.2. Методики культивирования лимфоцитов периферической крови и приготовления препаратов хромосом классическим методом.

3.3. Статистическая обработка результатов.

3.4. Компьютерный метод ретроспективной оценки дозы.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Изучение элиминации аберраций хромосом у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС.

4.2. Ретроспективная оценка дозы радиационного воздействия с помощью компьютерного метода у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС.

4.3. Изучение элиминации аберраций хромосом у лиц, пострадавших при различных радиационных инцидентах, за исключением аварии на Чернобыльской АЭС.

4.4. Сравнение частот хроматидных аберраций с показателями периферической крови у пациентов в отдалённые сроки после облучения.

5. ОБСУЖДЕНИЕ.

5.1. Изменение уровней аберраций хромосом с течением времени после облучения у лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС.

5.2. Частоты хроматидных аберраций в отдаленные сроки после облучения у лиц, пострадавших при различных радиационных ситуациях.

5.3. Ретроспективная оценка дозы с помощью компьютерного метода у лиц, пострадавших при различных радиационных авариях.

6. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цитогенетическое исследование культур лимфоцитов периферической крови людей в отдаленные сроки после острого внешнего облучения"

Актуальность темы

Атомная энергетика начала создаваться в СССР параллельно с развитием ядерно-оружейного комплекса с 1954 г. после пуска в г. Обнинске первой в мире атомной электростанции и развивалась впоследствии в направлении строительства других атомных электростанций и конструирования транспортных энергетических установок для подводных лодок и ледоколов под руководством таких великих учеиьтх, как И.В.Курчатов, Е.П.Славский, А.Ф.Иоффе, П.Л.Капица, Ю.Б.Харитон, М.Г.Первухин, В.И.Вернадский, Б.Л.Ванников, Л.А.Арцимович, А.Д.Сахаров, В.Л.Гинзбург и многих других [2, 39, 45, 51, 52, 99].

Изменилась политическая жизнь страны, поменялись приоритеты, более лояльными стали и международные отношения со странами Европы и Америки. Но проблема укрепления ядерного щита нашей страны и развития атомной промышленности с использованием научных достижений для их реализации в мирных целях и сейчас остается актуальной и первостепенной задачей, которую надо решать современным ученым. Вопреки сложившимся трудностям наука продолжает свое движение вперед, и первостепенными задачами на современном этапе ее развития являются разработка и внедрение на практике основного принципа - обеспечение безопасности мирного населения и всего живого на нашей планете, снижение риска возникновения ядерных катастроф и аварий до минимума, совершенствование методов диагностики и лечения людей, подвергшихся действию ионизирующего излучения.

На каждом этапе создания и развития ядерно-оружейного комплекса персонал, работавший в непосредственном контакте с источниками ионизирующих излучений, подвергался их реальному воздействию, и всегда существовал, как он существует и сейчас, риск возникновения радиационных аварий.

В начальные периоды становления атомной промышленности имелся недостаток детальных знаний о механизмах действия ионизирующих излучений и последствиях их воздействия на организм человека и все живое на Земле.

Целями стремительно развивающейся атомной промышленности были не только совершенствование оборонной мощи и развитие энергетики, но и решение задач, направленных на защиту человека от действия радиации. В результате большое внимание было уделено научному развитию биологии и медицины, их тесному сотрудничеству в решении поставленных вопросов. В результате проведения теоретических и экспериментальных работ, осуществления клинических наблюдений стало известно, что последствием действия рентгеновского, гамма-, гамма-бета- и гамма-нейтронного излучений в соответствующих дозах [28] является развитие острой лучевой болезни (ОЛБ) [23, 29]. Появилась необходимость и своевременного прогнозирования ОЛБ, точного определения степени её тяжести и осуществления адекватной терапии. За весь этот, более чем 50-летний период, был накоплен колоссальный опыт по диагностике, лечению и прогнозированию различных форм ОЛБ и её осложнений и последствий.

К методам оценки дозы излучения и прогнозирования течения ОЛБ относятся физическая и биологическая дозиметрия. Целью применения методов физической дозиметрии является определение поглощенных доз облучения в отдельных органах, тканях, частях тела и во всем теле пострадавшего для оценки тяжести радиационного поражения, планирования лечения и оценки исхода аварийного облучения пациента. Перед физической дозиметрией поставлены следующие два основных вопроса.

1. Какова численная величина максимальной дозы облучения в теле пострадавшего и где эта доза локализована?

2. Какова количественная оценка распределения доз в теле пострадавшего?

Опыт показывает, что физическая дозиметрия способна дать ответ лишь на первый вопрос. Дать ответ на второй поставленный вопрос, к сожалению, физическая дозиметрия не может, в связи с ограничениями методов и из-за неполноты и неточности информации об истинных обстоятельствах радиационной аварии [77, 82]. Следовательно, на практике для своевременного получения данных о дозовых нагрузках на пострадавших при радиационных авариях, необходимо комплексное использование методов, как физической дозиметрии, так и биологической индикации дозы. В области использования последней к настоящему времени накоплен огромный опыт, совершенствуются прежние и появляются новые методы определения дозовых нагрузок на человека.

Тесты биологической и клинической дозиметрии получили широкое распространение на практике при оценке тяжести радиационного воздействия. Однако эти методы не являются дозиметрией в прямом смысле, а лишь оценивают биологические и клинические проявления у пострадавших и соотносят их с аналогичными при равномерном гамма-облучении при известной средней дозе и ее мощности.

Наиболее доступным и достоверным биологическим методом оценки действия ионизирующего излучения (помимо исследования ЭПР-сигнала в эмали зуба) на современном этапе является цитогенетический метод.

Анализ аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови является общепризнанным методом биологической индикации дозы и применяется на практике в случаях радиационного поражения людей уже более 40 лет. Метод хорошо разработан для случаев внешнего острого относительно равномерного облучения при условии его использования в ближайшие сроки после радиационного воздействия. Огромную роль цитогенетический анализ сыграл в ситуации аварии на ЧАЭС, когда в начальный период он явился практически единственным источником сведений о дозовых нагрузках на пострадавших [77, 82].

Одной из проблем, всегда стоявших перед методами цитогенетической индикации дозы, была ее оценка в отдаленные сроки после радиационного поражения. Ретроспективная оценка дозы нужна для верификации факта облучения и определения тяжести радиационного поражения в целях проведения адекватной медико-социальной экспертизы, если в ближайшие сроки после облучения дозиметрическое исследование по тем или иным причинам не проводилось. Важное значение также имеет определение канцерогенного и генетического риска для людей, непосредственно подвергшихся воздействию ионизирующего излучения. Отсутствие достоверных данных о поглощенных дозах создает объективные трудности при решении этой проблемы. Определение поглощенных доз является особенно сложной, если с момента облучения прошло не одно десятилетие. Анализ, имеющихся к настоящему моменту цитогенетических методов ретроспективной оценки дозы радиационного воздействия, имеется в методических рекомендациях МАГАТЭ и обзорах ведущих специалистов [87, 88, 125, 144].

Как известно, повреждения хромосом в зависимости от того, имеют ли они тенденцию к сохранению своего числа при делении клеток или их частота в пролиферирующей популяции по тем или иным причинам снижается, принято делить на стабильные (транслокации, инверсии, инсерции) и нестабильные (дицентрики и другие полицентрики, кольца, фрагменты). При этом именно дицентрики обычно используются для оценки средних поглощенных доз в ближайшие сроки после острого облучения. Однако закономерное снижение их общей частоты с течением времени после воздействия радиации создает естественные трудности для дозовых оценок в отдаленный период. Следовательно, существуют две основные группы оценки дозы в отдаленный период после радиационного воздействия: анализ нестабильных (использование средней частоты дицентриков и времени их «полужизни»; Dolphin- и Qdr-методы) и стабильных (метод G-дифференциального окрашивания хромосом и FISH-метод) перестроек хромосом.

Более или менее подробно элиминация аберраций хромосом с их известным исходным уровнем была изучена в основном после парциального или локального терапевтического облучения лиц со злокачественными новообразованиями и ограничивалась рамками дозового диапазона этих лечебных процедур. Насколько обнаруженные количественные закономерности можно было перенести на случаи тотального радиационного воздействия и другие диапазоны доз, оставалось не ясным. При этом ретроспективная оценка доз по нестабильным аберрациям часто базировалась на недостаточно обоснованной концепции 3-х летнего периода «полужизни» дицентриков.

При аварии на ЧАЭС большое число людей подверглось тотальному облучению в широком диапазоне доз, и у многих из них был осуществлен цитогенетический анализ культур лимфоцитов в ближайшие сроки после радиационного воздействия [77, 82]. Это привлекло внимание к данному контингенту, как к источнику сведений, пригодных для уточнения закономерностей элиминации аберраций хромосом и разработки методов ретроспективной оценки дозы. Было начато осуществление таких исследований на материале пациентов, госпитализированных в клинику (бывшего) Института биофизики Минздрава СССР (ныне — Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА России, Генеральный директор - доктор мед. наук, профессор К.В.Котенко) в острый период и затем поступавших повторно для обследования. Однако эта работа была ограничена временем не более 5 лет после облучения [60]. Судьба же аберраций хромосом в более отдаленные сроки так же представляет значительный интерес.

В попытках найти удобные способы цитогенетической оценки дозы в отдаленные периоды после облучения большое значение придавалось и придается таким методам учета стабильных аберраций хромосом (в основном транслокаций), как G- и FISH- методы окраски хромосом. Однако на практике они оказываются еще более дорогостоящими, чем стандартный метод исследования аберраций хромосом. При этом использование FISH-метода в его первоначально задекларированном виде, основанном на оценке доз непосредственно по калибровочным кривым (для транслокаций), полученным после острого облучения in vitro периферической крови здоровых доноров, ограничилось дозовыми нагрузками не более 1,5-2,0 Гр. При больших дозах уровни стабильных аберраций хромосом в отдаленные сроки после облучения оказались ниже ожидаемых, что связанно, по-видимому, с частым нахождением стабильных и нестабильных аберраций хромосом в одних и тех же клетках. В результате они подвергаются совместной элиминации. Поэтому изучение возможности использования для ретроспективной оценки дозы нестабильных аберраций хромосом остается актуальной.

Цель работы

Оценить возможность ретроспективной индикации дозы с помощью классического метода окраски хромосом по результатам исследования культур лимфоцитов периферической крови в отдалённые сроки (преимущественно больше 5 лет) после острого внешнего облучения пациентов, пострадавших при различных радиационных авариях.

Задачи

1. Провести анализ аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови у лиц, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской

АЭС, в отдаленные сроки (больше 5 лет) после облучения.

4. Использовать специальную компьютерную программу, разработанную доктором биол. наук И.В.Филтошкиньтм, для восстановления величины полученной дозы из распределений клеток по числу содержащихся в них аберраций хромосом в отдалённые сроки у лиц, пострадавших в результате различных радиационных аварий.

Новизна исследования

Работа основана на изучении в течение длительного времени с помощью классического цитогенетического метода нестабильных аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови у достаточно однородного контингента больных, подвергшихся облучению в сходных условиях во время аварии на Чернобыльской АЭС, у которых имеются данные исследования хромосомных аберраций в ближайшие сроки после воздействия и госпитализированных для динамического наблюдения и проведения необходимых исследований со значительной повториостью. Это дало возможность впервые изучить закономерности элиминации аберраций хромосом в отдаленные сроки (примерно от 5 до 20 лет) после облучения и оценить перспективы их использования для ретроспективного определения дозы воздействия. Ранее подобное исследование данного контингента было осуществлено спустя не более 5 лет после облучения. Также впервые проведено цитогенетическое обследование в широком диапазоне времени (до примерно 50 лет после облучения) лиц, пострадавших при других радиационных авариях. На всём этом материале был апробирован оригинальный компьютерный метод ретроспективной оценки дозы.

Теоретическое и практическое значение работы

Проведенное динамическое наблюдение на протяжении длительного времени за частотами аберраций хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС, для которых были известны результаты цитогенетических исследований в ближайшие сроки после облучения, позволило изучить закономерности элиминации повреждений нестабильного типа и изменения уровней выявляемых с помощью классического метода атипичных хромосом, относящихся к аберрациям стабильного типа. Эти данные также дают возможность косвенно оценивать скорость пролиферации клеток, относящихся к лимфоидной ткани. На основе полученных результатов были построены уравнения множественной регрессии, включающие, во-первых, восстановленную компьютерным методом оценку дозы и, во-вторых, время, прошедшее после облучения, или частоту атипичных хромосом в отдалённые сроки, что позволяет осуществлять ретроспективную оценку дозы на основании классического цитогеиетического анализа.

Положения, выносимые на защиту

1. Для элиминации нестабильных аберраций хромосом в период от 5 до 20 лет после облучения на фоне высокой индивидуальной вариабельности характерно следование экспоненциальной модели со свободным коэффициентом. При этом частоты атипичных хромосом к концу периода наблюдения в среднем снизились до примерно 30%, 50% и 90% для пациентов, у которых первоначальные оценки дозы составляли 0,7-2,3 Гр, 2,8-4,3 Гр и 4,7-9,8 Гр соответственно.

2. Использование линейных уравнений множественной регрессии, включающих восстановленную компьютерным методом оценку дозы и время, прошедшее после облучения, или частоту атипичных хромосом в отдалённые сроки позволяет ретроспективно оценивать поглощённые дозы после осуществления классического цитогеиетического анализа, по крайней мере, до 20 лет после облучения, хотя возрастание временного промежутка между моментами облучения и подсчёта аберраций хромосом приводит к увеличению ошибок измерения.

Основные положения работы были представлены на III международной конференции «Генетические последствия чрезвычайных радиационных ситуаций» и семинаре «Перспективные проблемы космической радиобиологии применительно к длительным орбитальным и межпланетным пилотируемым полетам», г. Дубна 4-7 октября 2005 г.; на V съезде по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность), г. Москва, 10-14 апреля 2006 г.; на международной научно-практической конференции «Чернобыльские чтения-2008», Беларусь, г. Гомель, 24-25 апреля 2008 г.; на 36-ом ежегодном съезде Европейского общества по радиационным исследованиям (European Radiation Research Society), Франция, г. Тур, 1-4 сентября 2008 г.

Объём и структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Дудочкина, Наталья Евгеньевна

6. ВЫВОДЫ

2. Элиминация нестабильных аберраций, включая дицентрики, обнаруживаемая при классической окраске хромосом в культурах лимфоцитов периферической крови лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС, в период от 5 до 20 лет после облучения, несмотря на большие индивидуальные различия, в среднем осуществляется в согласии с одноэкспоненциальной моделью со свободной константой. Для описания того же процесса за весь период наблюдения примерно от 2 месяцев до 20 лет после воздействия радиации необходимо использовать двуэкспоненциальую модель.

3. В период от 5 до 20 лет после аварии на Чернобыльской АЭС время, за которое частота аберраций хромосом уменьшается в 2 раза составляет: для частоты дицентриков - 3 года, для процента клеток с дицентриками - 3,7 лет, для частот всех нестабильных аберраций - 3,6 лет, и для клеток с нестабильными аберрациями хромосом - 4,4 года.

4. Полученные на материале лиц, пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС, уравнения множественной регрессии, включающие, с одной стороны, восстановленные с помощью специальной компьютерной программы оценки доз и, с другой стороны, время, прошедшее после облучения, или частоты атипичных хромосом, регистрируемые в отдалённые сроки, позволяют производить ретроспективные дозовые оценки, по крайней мере, до 20 лет после воздействия радиации, хотя увеличение времени между моментом поражения и проведением цитогенетического анализа приводит к увеличению ошибок индивидуальных измерений.

5. Результаты повторных цитогенетических обследований пациентов, пострадавших при других, кроме чернобыльской аварии, радиационных авариях, демонстрируют возможность применения для ретроспективной оценки дозы в течение 20 и более лет после облучения уравнения множественной регрессии, включающего, помимо восстановленной с помощью компьютерной программы оценки дозы, частоту атипичных хромосом, но не время, прошедшее после радиационного воздействия.

6. При использовании классического метода окраски хромосом к концу 20-летнего периода цитогенетического наблюдения за лицами, пострадавшими при аварии на Чернобыльской АЭС, на фоне высокой индивидуальной вариабельности усредненное отношение суммарного выхода атипичных хромосом в повторно взятых культурах к их исходно определённым частотам составляло примерно 30%, 50% и 90% для пациентов, у которых первоначальные оценки дозы составляли 0,7-2,3 Гр, 2,8-4,3 Гр и 4,7-9,8 Гр соответственно.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Дудочкина, Наталья Евгеньевна, Москва

1. Акоев И.Г., Максимов Г.К., Тяжелова В.Г. Количественные закономерности радиационного синдрома. М.: Энергоиздат, 1981. - 114 с.

2. Алексеев В.В. К истории создания и развития атомной промышленности на Урале // Сборник воспоминаний / Составитель Т.Г.Новикова. Науч. коне, член-корреспондент РАН Б.В. Литвинов. М.: ЦНИИатоминформ. - 1995. - № 7-8. - 180 с.

3. Алексеев Г.И. О клинике и диагностике острой лучевой болезни // Военно-медицинский журнал. 1986. - № 4. - С. 21-26.

4. Анкина М.А., Завитаева Т.А., Семенова Т.Г. и др. Исследование стабильных аберраций хромосом G-дифференциальным окрашиванием в лимфоцитах крови человека после облучения в высокой дозе // Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. — Т. 41, № 1.-С. 43-47.

5. Асмолов В.Г., Боровой А.А., Демин Э.Ф. Авария на Чернобыльской АЭС. Год спустя // Атомная энергия. 1988. - Т. 64, № 1. - С. 3-23.

6. Ахматуллина Н.Б. Отдаленные последствия действия радиации и индуцированная нестабильность генома // Радиац. биология. Радиоэкология. 2005. — Т. 45,№6.-С. 680-687.

7. Барабанова А.В., Баранов А.Е., Гуськова А.К. и др. Острые эффекты облучения человека. М.: ЦНИИатоминформ, 1986. - 79 с.

8. Баранов А.Е., Гуськова А.К., Протасова Т.Г. и др. Опыт лечения пострадавших при аварии на ЧАЭС и непосредственные исходы заболевания // Мед. радиология. 1991. - Т. 36, № 3. - С. 29-32.

9. Беликов А.Д., Лисовский И.В., Петров О.И. Особенности военно-врачебной экспертизы пострадавших при радиационных авариях на атомных подводных лодках // Военно-врачебная экспертиза ВМФ / Под ред. Г.Ю.Шараевского. М.: Воениздат, 1997.-С. 111-115.

10. Бочков Н.П. Хромосомы человека и облучение. М.: Атомиздат, 1971.168 с.

11. Бочков Н.П. Анализ типов аберрантных клеток необходимый элементбиологической индикации облучения // Мед. радиология. 1993. - Т. 38, № 2. - С. 3235.

12. Бочков Н.П., Демин Ю.С., Лучник Н.В. Классификация и методы учета хромосомных аберраций в соматических клетках // Генетика. 1972. - Т. 8, № 5. - С. 133-141.

13. Бочков Н.П., Козлов В.М., Пилосов Р.А., Севанькаев А.В. Спонтанный уровень хромосомных аберраций в культуре лейкоцитов человека // Генетика. 1968. -Т. 4, №6.-С. 93-98.

14. Бутомо Н.В., Гребенюк А.Н., Легеза В.И. Основы медицинской радиобиологии / Под ред. И.Б.Ушакова. С-Пб: ООО «Издательство Фолиант», 2004.- 384 с.

15. Владимиров В. Г. Предисловие // Радиобиологические подходы к диагностике лучевых поражений (сборник научных трудов). Л., 1987. - С. 3-5.

16. Владимиров В.Г., Смирнов А.Д. Биологическая дозиметрия при воздействии ионизирующей радиации // Военно-медицинский журнал. 1978. — № 2.- С. 76-79.

17. Вовк О.И., Степаньков И.Б., Тонкопий И.Б., Пьянкова Ю.Л. Морфофункциональное состояние лимфоцитов периферической крови у ликвидаторов: последствий аварии на ЧАЭС. М.: Госатомиздат, 1963. - С. 74-68.

18. Волкова М.А. Хронический миелолейкоз // Клиническая онкогематология / Ред. М.А.Волкова. М: Медицина, 2001. - С. 237-262.

19. Воробцова И.Е., Богомазова А.Н. Стабильные хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови лиц, пострадавших в результате аварии на ЧАЭС // Радиац. биология. Радиоэкология. 1995. - Т. 35, вып. 5. - С. 636-639.

20. Воробцова И.Е., Михельсон В.М., Воробьева М.В. и др. Результаты цитогенетического обследования ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС, проведенного в разные годы // Радиац. биология. Радиоэкология. 1994. — Т. 34, вып. 6.-С. 798-803.

21. Воробцова И.Е., Семенов А.В. Комплексная цитогенетическая характеристика лиц, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской АЭС // Радиац. биология. Радиоэкология. 2006. - Т. 46, № 2. - С. 140-151.

22. Воробцова И.Е., Такер Дж.Д., Тимофеева Н.М. и др. Влияние возраста и облучения на частоту транслокаций и дицентриков, определяемых методом FISH, в лимфоцитах человека // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000. - Т. 40, № 2. - С. 142-148.

23. Воробьев А.И. Острая лучевая болезнь // Тер. архив. 1986. - Т. 58, № 12.-С. 3-8.

24. Воробьев А.И., Бриллиант М.Д., Баранов А.Е. Принципы биологической дозиметрии при острой лучевой болезни // Клиническая медицина. 1975. - № 5. - С. 47-56.

25. Гогин Е.Е., Емельяненко В.М., Бенецкий Б.А., Филатов В.Н. Сочетанные радиационные поражения. М: Известия, 2000. - 240 с.

26. Гузеев Г.Г. Хромосомные аберрации в культурах лимфоцитов здоровых людей и онкологических больных после лучевой терапии: Автореф. канд. . мед. наук. М.: Институт медицинской генетики АМН СССР, 1976. - 24 с.

27. Гузеев Г.Г., Севанькаев А.В., Байсоголов Г.Д., Дунчик В.Н. Динамика хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови после лучевой терапии // Мед. радиология. 1975. - Т. 20, № 12. - С. 17-21.

28. Гуськова А.К. Актуальные вопросы клинической радиобиологии и пути их экспериментального разрешения // Радиац. биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, № 4. - С. 604-612.

29. Гуськова А.К., Байсоголов Г.Д. Лучевая болезнь человека. М.: Медицина, 1971. -383 с.

30. Гуськова А.К., Барабанова А.В., Баранов А.Е. и др. Инструкция по диагностике, медицинской сортировке и лечению острых радиационных поражений. -М., 1978.-47 с.

31. Гуськова А.К., Надежина Н.М., Метляева Н.А. и др. Острая лучевая болезнь // Реакция организма человека на воздействие опасных и вредных производственных факторов. Справочник. -М.: Издательство Стандартов, 1991. Т. 2. - С. 173-189.

32. Гуськова А.К., Садчикова Э.И., Пушкарева С.Г. Упрощенные клинические методы и средства экспресс-диагностики и прогноза ОЛБ // Мед.радиология. 1984. - Т. 29, № 11. - С. 56-61.

33. Данилов З.И. Возможности цитогенетического анализа в клинической оценке дозы облучения // Здравоохр. Белоруси. 1992. - № 4. - С. 67-73.

34. Еголина Н.А., Захаров А.Ф. Спирализация хромосом китайского хомячка после воздействия 5-бромдезоксиуридином на клетки в двух последовательных митотических циклах // Цитология. 1972. - Т. 14, № 2. - С. 165-171.

35. Елисова Т.В. Изучение процессов восстановления повреждений хромосом в нестимулированных лимфоцитах периферической крови человека методом фракционированного облучения и варьирования температуры // Генетика. -1975. Т. 11, №2.-С. 168-174.

36. Елисова Т.В. Стабильные и нестабильные аберрации хромосом у человека и других млекопитающих в связи с вопросами биологической дозиметрии // Радиац. биология. Радиоэкология. 2008. - Т. 48, № 1. - С. 14-27.

37. Жлоба А.А., Севанькаев А.В. Идентификация аберраций хромосом, отражающих нестабильность генома потомков облученных клеток // Докл. РАН. -1991. Т. 316, № 5. - С. 1239-1244.

38. Жучихин В. Первая атомная. Записки инженера-исследователя. Русские сенсации. М: ИздАТ, 1993. - 112 с.

39. Захаров А.Ф., Бенюш В.А., Кулешов Н.П., Барановская Л.И. Хромосомы человека (атлас ). М.: Медицина, 1982. - 264 с.

40. Зайцев Г.Н. Математический анализ биологических данных. М.: Наука, 1991.- 183 с.

41. Иванов Б., Леонард А., Декнюдт Г. Хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови человека при однократном и фракционированном рентгеновском облучении // Генетика. 1980. - Т. 16, № 3. - С. 551-555.

42. Ильин Л.А., Москалев Ю.И. Информация об аварии на ЧАЭС и еепоследствиях, подготовленная для МАГАТЭ // Атомная энергия. 1986. - Т. 70, № 5. -С. 301-320.

43. Ильичев С.В., Кочетков О.А., Крючков В.П. и др. Ретроспективная дозиметрия участников ликвидации последствий аварии на ЧАЭС. Киев, 1996. — 43 с.

44. История атомного проекта СССР. Документы и материалы. Т 1. 19381945. Ч. 1 / Под общей редакцией Л.Д. Рябева 1-ого заместителя министра по атомной промышленности РФ. Москва Саров: Наука; Физматгиз, 1998. - 432 с.

45. Кобзев Ю.Н., Флейшман Е.В. Хромосомные изменения при гемобластозах // Клиническая онкогематология / Ред. М.А.Волкова. М.: Медицина, 2001.-С. 92-115.

46. Комар В.Е. Радиобиологические подходы к поиску методов диагностики лучевых поражений // Радиобиологические подходы к диагностике лучевых поражений (Сборник научных трудов). Л., 1987. - С. 3-5.

47. Комар В.Е. Современное состояние проблемы биологической индикации лучевых поражений // Радиобиология. 1992. - Т. 32, вып. 1. - С. 84-97.

48. Комар В.Е., Тесленко В.М. Радиобиологические основы диагностики лучевых поражений // 1 Всес. радиоб. съезд (Москва, 21-27 августа 1989 г.): Тезисы докл. Пущино, 1989. - Т. 3. - С. 669-670.

49. Кривошеева Л.П., Рябуха А.К. Цитогенетические изменения лейкоцитов периферической крови через 4-4,5 года после лучевой терапии // Радиобиология. — 1979. Т. 19, вып. 4. - С. 621-623.

50. Круглов А. Как создавалась атомная промышленность в СССР. М., 1994.-237 с.

51. Литвинов Б.В. Атомная энергия не только для военных целей. — Екатеринбург: Уро РАН. 2002. - ISBN 5-7691-1132. - С. 11-71.

52. Мазник Н.А., Винников В.А. Ретроспективная цитогенетическая дозиметрия по результатам классического хромосомного анализа у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС // Радиац. биология. Радиоэкология. 2005. - Т. 45, № 6.-С. 700-708.

53. Мазник Н.А., Винников В.А., Мазник B.C. Оценка распределенияиндивидуальных доз облучения у ликвидаторов последствий аварий на ЧАЭС по результатам цитогенетического анализа // Радиац. биология. Радиоэкология. 2003. -Т. 43, №4.-С. 412-419.

54. Мазурик В.К. Радиобиологические основы биохимической индикации лучевого поражения // Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР. Сер. Радиационная биология. М., 1980. - Т. 3. - С. 103-179.

55. Мазурик В.К., Михайлов В.Ф. Радиационно-индуцируемая нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение // Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. - Т. 41, № 3. - С. 272-289.

56. Международный симпозиум «Наука и общество: история советского атомного проекта (40-е 50-е гг. )», Дубна, 14-18 мая 1996 г.: Тезисы докладов. - М.: ИздАТ. - 1997. -Т. 1. - 608 с. - Т. 2. - 1999. - 528 с.

57. Методы анализа хромосомных аберраций у человека / Под. ред. К.Бактон и Г.Эванса. Женева: Всемирная Организация Здравоохранения, 1975. - 64 с.

58. Нугис В.Ю. Оценка дозы облучения по цитогенетическим исследованиям периферической крови и костного мозга // Радиационная медицина / Под ред. Л.А.Ильин. М.: 2001. - Т. 2. - С. 35-46.

59. Нугис В.Ю. Цитогенетические критерии оценки дозы и равномерности острого внешнего гамма-облучения организма человека по результатам исследования культивируемых лимфоцитов / Дисс. . доктора биол. наук. М., 2003. - Т. 1.- 305 с. -Т.2.-255 с.

60. Обухова Т.Н. Молекулярно-цитогенетический анализ хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови у лиц, подвергшихся радиоактивному облучению в малых дозах. Автореферат дисс. . канд. биол. наук. -М, 1998.-20 с.

61. Обухова Т.Н., Домрачева Е.В. Регистрация стабильных аберраций в лимфоцитах периферической крови методом G-дифференциального окрашивания хромосом и FISH // Радиац. биология. Радиоэкология. 1998. - Т. 38, вып. 6. - С. 793799.

62. Окладникова Н.Д., Пестерникова B.C. Хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови людей через 43-46 лет после острой лучевой болезни // Радиац. биология. Радиоэкология. 2005. - Т. 45, № 3. - С. 287-290.

63. Пилинская М.А. Цитогенетические эффекты в соматических клетках лиц, пострадавших вследствие Чернобыльской катастрофы, как биомаркер действия ионизирующего излучения в малых дозах // Международный журнал рад. медицины. 1999.-№2.-С. 60-66.

64. Пилинская М.А. Частота хромосомных аберраций в критических группах населения Украины в отдаленные сроки после Чернобыльской аварии // Проблемы радиационной генетики на рубеже веков: Тезисы докладов. М., 2000. - С. 311.

65. Пилинская М.А., Дыбский С.С. Частота хромосомных обменов в критических группах жертв Чернобыльской аварии по данным традиционного цитогеиетического анализа и метода FISH // Международный журнал рад. медицины. -2000.-№ 1.-С. 83-95.

66. Пилинская М.А., Шеметун A.M., Дыбский С.С., Редько Д.В. Цитогенетический эффект в лимфоцитах периферической крови как индикатор действия на человека факторов Чернобыльской аварии // Радиобиология. 1992. -Т.32, вып. 6. - С. 632-639.

67. Потетня О.И., Севанькаев А.В., Потетня В.И. и соавт. Влияние мощности дозы и пострадиационной гипертермии на цитогенетический эффект при облученииклеток в стадии G0 источниками б0Со и 252Cf // Мед. радиология. 1989. - Т. 34, № 2. - С. 73-78.

68. Пяткин Е.К., Баранов А.Е. Биологическая дозиметрия с помощью анализа аберрантных хромосом и количества клеток в периферической крови // Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР. Сер. Радиационная биология. М., 1980. - № 3. -С. 103-179.

69. Пяткин Е.К., Баранов А.Е., Покровская В.Н. Аберрации хромосом нестабильного типа в стимулированных ФГА культурах костного мозга человека в отдаленные сроки после тотального облучения // Тер. архив. 1977. - Т. 49, № 8. - С. 101-105.

70. Пяткин Е.К., Нугис В.Ю. Элиминация радиационно-индуцированных повреждений хромосом в культуре лимфоцитов периферической крови человека. I. Частота аберраций в первом и во втором митозе // Цитология. 1981. - Т. 23, № 11.-С. 1310-1316.

71. Пяткин Е.К., Нугис В.Ю., Чирков А.А. Анализ аберраций хромосом и прогнозирование тяжести костно-мозгового синдрома при остром радиационном поражении человека // Гематология и трансфузиология. 1991. - Т. 36, № 10. - С. 2126.

72. Пяткин Е.К., Нугис В.Ю., Чирков А.А. Оценка поглощенной дозы по результатам цитогенетического исследования культур лимфоцитов у пострадавших при аварии на ЧАЭС // Мед. радиология. 1989. - Т. 34, № 6. - С. 52-57.

73. Пяткин Е.К., Филюшкин И.В., Нугис В.Ю. Оценка равномерности облучения по результатам цитогенетического исследования лимфоцитовпериферической крови человека // Тер. архив. 1986. - Т. 58, № 9. - С. 30-33.

74. Рябуха А.К., Кривошеева Л.П. Результаты цитогенетического анализа лимфоцитов периферической крови пациентов в различные сроки после лучевой терапии (до 9 лет) // Радиобиология. 1983. - Т. 23, вып. 3. - С. 383-386.

75. Севанькаев А.В. Влияние гамма-облучения на хромосомы человека in vitro. Сообщение IX. Зависимость выхода аберраций от времени фиксации клеток при облучении в стадии G0 //Генетика. 1981.-Т. 17, №4. - С. 719-725.

76. Севанькаев А.В. Некоторые итоги цитогенетических исследований в связи с оценкой последствий Чернобыльской аварии // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000. - Т. 40, № 5. - С. 801-804.

77. Севанькаев А.В. Радиочувствительность хромосом лимфоцитов человека в митотическом цикле. М.: Энергоатомиздат, 1987. - 159 с.

78. Севанькаев А.В., Анкина М.А., Завитаева Т.А. и др. Сравнительное иссследование частоты стабильных и нестабильных аберраций хромосом при у-облучении лимфоцитов крови in vitro // Радиационная биология. Радиоэкология. -1995. Т. 35, вып. 5. - С. 611-617.

79. Севанькаев А.В., Бочков Н.П. Влияние гамма-облучения на хромосомы человека. Сообщение I. Зависимость частоты хромосомных аберраций от дозы при облучении // Генетика. 1968. - Т. 4, № 5. - С. 130-137.

80. Севанькаев А.В., Голуб Е.В., Хвостунов И.К. и др. Ретроспективная оценка доз с отдалённый пострадиационный период разными биологическими методами // Радиац. биология. Радиоэкология. 2004. - Т. 44, № 6. - С. 637-652.

81. Севанькаев А.В., Насонов А.П. Калибровочные дозовые кривые хромосомных аберраций лимфоцитов человека // Мед. радиология. 1978. - Т. 23, № 6. - С. 26-33.

82. Севанькаев А. В., Насонов А.П. Биологическая дозиметрия по хромосомным аберрациям в культуре лимфоцитов человека. Методические рекомендации. Обнинск: НИИ Мед. радиологии АМН СССР, 1979. - 11 с.

83. Севанькаев А.В., Саенко А.С. Соматический мутагенез как биологический дозиметр радиационного воздействия // Радиац. биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, № 4. - С. 560-564.

84. Сидоров О.С. Сравнительная оценка методов биологической дозиметрии при определении доз аварийного облучения в отдаленный период. Автореферат дисс. . канд. биол. наук. Обнинск: Медицинский радиологический научный центр РАМН, 2004. - 24 с.

85. Снигирева Г.П., Шевченко В.А., Новицкая Н.Н. Использование FISH-метода для реконструкции поглощенных доз, полученных участниками ликвидации аварии на ЧАЭС // Радиац. биология. Радиоэкология. 1995. - Т. 35, № 5. - С. 654660.

86. Степанова Е.И., Мишарина Ж.А., Вдовенко В.Ю. Отдалённые цитогенетические эффекты у детей, облученных внутриутробно в результате аварии на Чернобыльской АЭС // Радиац. биология. Радиоэкология. 2002. - Т. 42, № 6. - С. 700-703.

87. Суворова JI.A., Галстян И.А., Надежина Н.М., Гордеева А.А., Нугис В.Ю. Состояние периферической крови при отдалённых последствиях острой лучевой болезни // Медицинская радиология и радиационная безопасность. 2007. - Т. 52, № 4.-С. 14-24.

88. Сусков И.И., Кузьмина Н.С. Проблема индуцированной геномной нестабильности в детском организме в условиях длительного действия малых доз радиации // Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. - Т. 41, № 5. - С. 606-614.

89. Филюшкин И.В., Нугис В.Ю., Чистопольский А.С. Ретроспективная оценка дозы облучения по распределению дицентриков в лимфоцитах периферической крови // Атомная энергия. 1995. - Т. 79, № 4. - С. 285-294.

90. Цыб А.Ф., Степаненко В.Ф. Вокруг Семипалатинского полигона // Мед. радиология. 1990. - Т. 35, № 12. - С. 3-9.

91. Цыб А.Ф., Степаненко В.Ф., Дегтева М.О., Кожеуров В.П. Вокруг Семипалатинского полигона и в Южно-уральской зоне радиоактивного загрязнения // Доклад Всесоюзной конференции Советского комитета. Курган, 1991. - 54 с.

92. Чеботарев А.Н., Селезнева Т.Г., Платонова В.И. Модифицированный метод дифференциальной окраски сестринских хроматид // Бюллетень эксперим. биол. и медицины. 1978. - Т. 85, № 2. - С. 242-243.

93. Шевченко В. А., Снигирева Г.П. Последствия Чернобыльской катастрофы: здоровье человека / Под ред. Е.Б.Бурлаковой. М., 1996. - С. 24-49.

94. Шевченко В.А., Снегирева Г.П. Цитогенетические эффекты у лиц, пострадавших в результате аварии на Чернобыльской АЭС // Радиац. биология. Радиоэкология. 1995. - Т. 35, №5. - С. 646-654.

95. Юнис Дж.Дж. Клиническая значимость метода задержки конденсации хромосом при изучении острых лейкозов и неходжкинских лимфом // Современная онкология и гематология / Ред. В.Ф.Фербенкс. М.: Медицина, 1987. - С. 351-390.

96. An international system for human cytogenetic nomenclature / Eds. D.G. Hardner, H.P. Klinger. N.Y.: JSCN, 1985. - 117 p.

97. Ansuaga J., Bruckner M., Hlatky L. . Chromosomal aberrations in human lymphocytes irradiated in vitro of varying age// Int. J. Radiat. Biol. 2004. - V. 80, № 7, -P. 507-515.

98. Andreev S.G., Eidelman Yu.A. Intrachromosomal exchange aberrations predicted on the basis of globular interphase chromosome model // Radiat. Prot. Dosim. -2002 V. 99, № 14. - P. 193-196.

99. Awa A.A. Chromosome aberrations in A-bomb survivors, Hiroshima and Nagasaki // Chromosomal aberrations. Basic and Applied Aspects / Eds. G. Obe, A.T. Natarajan.-Berlin: Springier-Verlag, 1989.-P. 180-189.

100. Awa A.A. Cytogenetic and oncogenetic effects of the ionizing radiations of the atomic bombs / Ed. J. German. N.Y.: Wiley, 1974. - P. 637-674.

101. Awa A.A. Persistent chromosome aberrations in the somatic cells of A-bomb survivors, Hiroshima and Nagasaki // J. Radiat. Res. 1991. - V. 31, Suppl. - P. 265-274.

102. Awa A.A. Review of thirty years study of Hirosima and Nagasaki atomic bomb survivors. 2 Biological effects. G. Chromosome aberration in somatic cells// Radiat. Res. 1975. - V. 16, Suppl. - P. 122-131.

103. Awa A.A., Nakano M., Ohtaki K. et al. Factors that determine the in vivo dose-response relationship for stable chromosome aberration in A-bomb survivors// Radiat. Res. 1992. - V. 38, Suppl. - P. 206-214.

104. Awa A., Sofuni Т., Honda T. et al. Relationship between the radiation dose and chromosome aberrations in atomic bomb survivors of Hiroshima and Nagasaki // Rad. Res. 1978.-V. 19, № l.-P. 126-140.

105. Bajerska F., Liniecki J. The yield of chromosome aberrations in rabbit lymphocytes after irradiation in vitro and in vivo // Mutat. Res. 1975. - V. 27, № 2. - P. 271-284.

106. Bassi L., Carloni M., Meschini R. Persistent chromosome aberrations induced by human peripheral leukocytes // Int. J. Radiat. Biol. 2003. - V. 79, № 12. - P. 943-954.

107. Barjaktarovic N., Savage J.R.K. R.b.e. for d(42 MeV)-Be neutrons based on chromosome-type aberrations induced in human lymphocytes and scored in cellat first division // Int. J. Radiat. Biol. 1980. - V. 37, № 6. - P. 667-675.

108. Bauchinger M., Braselman H., Savage J. et al. Collaborative exercise on the use of FISH chromosome painting for retrospective biodosimetry of Mayak nuclear-industrial personnel // Int. J. Radiat. Biol. 2001. - V. 77, № 3. - P. 259-267.

109. Bauchinger M., Gotz G. Distribution of radiation lesions in human chromosomes and dose-effect relation analyzed with G-banding // Radiat. Environm. Biophys. 1979. - V. 16, № 2. - P. 355-366.

110. Bauchinger M., Salassidis K., Braselman H. et al. FISH-based analysis of stable translocations in a Techa River population // Int. J. Radiat. Biol. 1998. - V. 73, №6.-P. 605-612.

111. Bauchinger M., Schmid E., Dresp J. Calculation of the dose-rate dependence of the dicentric yield after Co gamma-irradiation of human lymphocytes // Mutat. Res. -1989.-V. 211,№3.- P. 265-272.

112. Bender M. A., Awa A., Brooks A.L. et al. Current status of cytogenetic procedures to detect and quantify previous exposures to radiation // Mutat. Res. 1988. - V. 196, №2.-P. 103-159.

113. Bender M.A., Brewen J.G. Factors influencing chromosome aberration yields in the human peripheral leukocytes system // Mutat. Res. 1969. - V. 8, № 2. - P. 383-399.

114. Bender M.A., Gooch P.C. Persistent chromosome aberrations in irradiated human subjects. Three and one-half year investigation // Radiat. Res. 1963. - V. 18, № 3. -P. 389-396.

115. Biological dosimetry: chromosomal aberration analysis for dose assessment. -Vienna: IAEA, Technical Reports Series, 1986. № 260. - 69 p.

116. Bloom A.D., Neriishi S., Kamado N. et al. Cytogenetic investigation of survivors of atomic bombing of Hiroshima and Nagasaki // Lancet. 1966. - V. 2, № 7465. - P. 672-674.

117. Bogen K.T. Reassessment of human peripheral T-lymphocyte lifespan deduced from cytogenetic and cytotoxic effects of radiation // Int. J. Radiat. Biol. 1993. -V. 64,N2.-P. 195-204.

118. Braselman H., Schmid E., Bauchinger M. Chromosome aberrations in nuclear power plant workers: the influence of dose accumulation and lymphocyte life-time // Mutat. Res. 1994. - V. 306, № 2. - P. 197-202.

119. Brewen J.G., Preston R.J., Littlefield L.G. Radiation-induced human chromosome aberration yields following an accidental whole-body exposure to 60Co gamma-rays // Radiat. Res. 1972. - V. 49, № 3. - P. 647-656.

120. Buckton K.E. Chromosome aberrations in patients treated with X-irradiationfor ankylosing spondylitis // Eds. Ishihara T. and Sasaki M.S. Radiation-induced chromosome damage in man. - New York : Alan R. Liss Inc., 1983. -P. 491-511.

121. Buckton K.E. Identification with G and R banding of the position of breakage points induced in human chromosomes by in vitro X-irradiation // Int. J. Radiat. Biol. V. 29, № 6. - P. 64.

122. Buckton K.E. Chromosome aberrations in patients treated with X-irradiation for ankylosing spondylitis // Radiation-induced chromosome damage in man / Eds. T. Ishihara, M.S. Sasaki. New York: Alan R. Liss., 1983. - P. 491-511.

123. Buckton K.E., Brown W.M.C., Smith P.G. Chromosome investigations on lymphocytes from irradiated patients // Nature. 1967. - V. 214, № 3. - P. 470-473.

124. Buckton K.E., Langlands A.O. Further studies on chromosome aberration: Production after wholebody irradiation in man // Int. J. Radiat. Biol. 1971. - V. 19, № 4. -P. 369-378.

125. Buckton K.E., Langlands A.O., Smith P.G. Chromosome aberrations induced in human peripheral blood by 2-MeV X-irradiation to the whole body and in vitro // Radiation-induced cancer. Vienna: IAEA, 1969. - P. 135-144.

126. Buckton K.E., Pike M.C. Chromosome investigations on lymphocytes from irradiated patients: effect of time in culture // Nature. 1964. - V. 202, № 4933. - P. 714715.

127. Burak L.E., Kodama Y., Nakano M., Ohtaki K. et al. FISH examination of lymphocytes from Mayak workers for assessment of translocation induction rate under chronic radiation exposures // Int. J. Radiat. Biol. 2001. - V. 77, № 8. - P. 901-908.

128. Caspersson Т., Zech L., Johansson C., Modest E.J. Identification of humanchromosomes by DNA-binding fluorescent agents // Chromosoma. 1970. - V. 30. - P. 215-227.

129. Chenal C., Legue F., Nourgalieva K. et al. Exposition of human to low doses and low dose rate irradiation: an urgent need for new markers and new models // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000. - Т. 40, № 5. - P. 627-629.

130. Coborukova A., Lukasova E., Kozubek S., Kozubek M., Govorun R.D., Koutna I., Bartova E. The exchanging chromosome aberrations of human peripheral limphocytes after gamma-irradiated // Int. J. Radiat. Biol. 2001. - V. 77, № 4. - P. 419429.

131. Cremer Т., Popp S. Rapid metaphase and interphase detection of radiation-induced chromosome aberrations in human lymphocytes by chromosomal suppression FISH // Cytometry. 1990. - № 11. - P. 243-324.

132. Cytogenetic analysis for radiation dose assessment: a manual. Technic Reports Ser. № 405. Vienna: IAEA, 2001. - 127 p.

133. Dolphin G.W. Biological dosimetry with particular reference to chromosome aberration analysis. A review of methods // Handling of radiation accidents. Vienna, 1969. -P. 215-224.

134. Dolphin G.W., Lloyd D.C., Purrott R.J. Chromosome aberration analysis as a dosimetric technique in radiological protection // Health Phys. 1973. - V. 25, N 1. - P. 715.

135. Dosimetric and medical aspects of the radiological accident in Goiania in 1987 / Vienna: IAEA, 1998. IAEA-Tecdoc-1009. - 94 p.

136. Edwards A.A., Lloyd D.C., Purrott R.J. Radiation induced chromosome aberrations and the Poisson distribution // Radiat. Environ. Biophys. 1979. - V. 16, № 2. -P. 89-100.

137. Edwards A., Voisin P., Sorokine-Durm J. The chromosome aberrations, irradiated in the lymphocytes of human's blood // Radiat. Prot. Dosim. 2004. - V. 111, № 2.-P. 211-219.

138. Evans H.J. Dose-response relations from in vitro studies // Human radiation cytogenetics / Eds. H.J. Evans, W.M. Court Brown, A.S. Mc Lean. Amsterdam: North-Holland Publ. Сотр., 1967. - P. 20-36.

139. Fabry L., Lemaire M. Aberrations chromosomiques produites dans leslymphocytes humains par irradiation in vivo et in vitro // C. r. Soc. Biol. 1985. - V. 179, №2.-P. 236-242.

140. Fabry L., Lemaire M. Dose response relationships for radiation induced chromosome aberrations in human lymphocytes in vivo and in vitro // Strahlenther. and Onkol. 1986. - V. 162, № 1. - P. 63-67.

141. Finnon P., Moquet J.E., Edwards A.A., Lloyd D.C. The Co-60 gamma ray dose-response for chromosomal aberration in human lymphocytes analysed by FISH // Int. J. Radiat. Biol. 1999. - V. 75. - P. 121-122.

142. Fry S.A., Littlefield L.G., Lushbaugh C.C. et al. Follow-up of survivors of serious radiation accidents in the United States // The Medical Basis for Radiation Accident Preparedness / Eds. R.C.Ricks, S.A.Fry. New York: Elsevier, 1990. P. 373-396.

143. Guidelines for the study of genetic effects in human populations. — Geneva: WHO, Environmental Health Criteria 46. 1985. - 126 p.

144. Gundy S., Varga L.P. Chromosomal aberrations in healthy persons // Mutat. Res. 1983.-V. 120, №2-3.-P. 187-191.

145. Hubner K.F., Littlefield L.G. Experience in the practical application of biological indicators // bga-Schriften. 1986. - № 2. - P. 17-34.

146. Ishihara Т., Kumatori Т., Sugiyama H., Kurisu A. Chromosome aberrations in persons accidentally exposed to Ir 192 gamma-rays // J. Radiat. Res. 1973. - V. 14, № 4. -P. 328-335.

147. Ivanov В., Praskova L., Mileva M. et al. Spontaneous chromosomal aberration levels in human peripheral lymphocytes // Mutat. Res. 1978. - V. 52, N 3. - P. 421-426.

148. Jong H. Cytogenetic methods in the analysis of dose-response after x-irradiation of human lymphocytes // Genome. 2003. - V. 46, № 2. - P. 943-946.

149. Kadhim M.A., Macdonald D.A., Goodhead D.T. et al. Transmission of chromosomal instability after plutonium a-particle irradiation // Nature. 1992. - V. 355, № 6362.-P. 738-740.

150. Kligerman A.D., Halperin E.C., Erexon G.L. A cytogenetic comparison of the responses of mouse and human peripheral blood lymphocytes // Radiat. Res. — 1988. — V. 115, №2.-P. 334-346.

151. Kodama Y., Nakano M. Biotechnology contributes to biological dosimetry // RERF. 1992-1993. - № 2. - 65 p.

152. Kodama V., Ohtaki K., Nakano M. Chromosome aberration as biological indicators for radiation damage following partial body irradiation // Radiat. Res. — 2005. -V. 164, №3.-P. 618-626.

153. Kossel F. Assessment of body doses from measured values of indicators: Gamma-radiation, electrons // bga-Schriften. 1986. — № 2. - P. 157-163.

154. Langlands A.O., Smith P.G., Buckton K.E. Chromosome damage induced by radiation // Nature, 1968. - V. 218, № 5147. - P. 1133-1135.

155. Ryonfa L., Shigeru Y. Chromosome aberrations of the human lymphocytes after the irradiation of ionc the С // J. Radiat. Res. 2000. - V. 41, № 4. - P. 35-54.

156. Leonard A., Balties J., Leonard E.D. Chromosome aberrations in patients irradiated for pelvic tumors // Radiat. Res. 1995. - V. 141, № 1. - P. 95-98.

157. Leonard A., Decat D. Relation between cell cycle and yield of aberrations observed in irradiated human lymphocytes // Can. J. Genet. Cytol. 1979. - V. 21, № 4. -P. 473-478.

158. Leonard A., Deknudt G., Leonard E.D. Persistence of chromosome aberration in an accidentally irradiated subject // Radiat. Prot. Dosim. 1988. - V. 22, № 1. - P. 55-57.

159. Liehr Т., Glaussen U. Radiation-induced chromosome aberrations in human lymphocytes // Curr. Mol. Med. 2002. - V. 2. - P. 283-297.

160. Liniecki J., Bajerska A., Wyszynska K., Cisowska B. Gamma-radiation-induced chromosomal aberrations in human lymphocytes: dose-rate effects in stimulated and not-stimulated cells // Mutat. Res. 1977. - V. 43, № 2. - P. 291-304.

161. Lloyd D.C. New developments in chromosomal analysis for biological dosimetry // Radiat. Protect. Dosim. 1998. - V. 77, №1-2. - P. 33-36.

162. Lloyd D.C., Edwards A.A., Leonard A. et al. Chromosomal aberrations in human lymphocytes induced in vitro by very low doses of X-rays // Int. J. Radiat. Biol. -1992. V. 61, N 3. - P. 335-343.

163. Lloyd D.C., Purrott R.G. Chromosome aberration analysis in radiologicalprotection dosimetry // Radiat. Prot. Dosim. 1981. - V. 1, № 1. - P. 19-28.

164. Lloyd D.C., Purrott R.G., Reeder E.J. The incidence of unstable chromosome aberrations in peripheral blood lymphocytes from unirradiated and occupationally exposed people// Mutat. Res. 1980. - V. 72, N 3. - P. 523-532.

165. Lucas I.N., Awa A. Rapid translocation frequency analysis in human decades after exposure to ionizing radiation // Int. J. Radiat. Biol. 1992. - V. 62, № 1. - P. 32-45.

166. Lucas J. N., Awa A. A., Straume T. Rapid translocation frequency analysis in human decades after exposure to ionizing radiation // Int. J. Radiat. Biol. 1992. - V. 62, № l.-P. 53-63.

167. Lucas J.N., Poggensee M., Straume T. The persistence of chromosome translocations in a radiation worker accidentally exposed to tritium //Cytogenet. Cell Genet. 1992. - V. 60, № 3-4. - P. 255-256.

168. Lucas I.N., Tenjinn T. Rapid human chromosome aberration analysis using FISH // Int. J. Radiat. Biol. 1989. - V. 56, № 1. - P. 11-36.

169. Maznik N.A., Vinnikov V.A. Retrospective cytogenetic biodosimetry using fluorescence in situ hybridization (FISH) technique in persons exposed to radiation due to the Chernobyl accident // УкраГнський Радюлопчний Журнал. 2005. - Т. 13. - С. 6672.

170. Millard R.E. Abnormalities of human chromosomes following therapeutic irradiation // Cytogenetics. 1965. - V. 4, № 3. - P. 277-294.

171. Nakano M., Kodama Y., Ohtaki K. Detection of stable chromosome aberration by FISH in A-bomb survivors: Comparison with previous solid Giemsa staining data on the same 230 individuals // Int. J. Radiat. Biol. 2001. - V. 77, № 9. - P. 971-977.

172. Natarajan A.T., Vyas R.C., Darroudi F. Chromosome aberrations in human lymphocytes // Int. J. Radiat. Biol. 1992. - V. 61, № 2. - P. 199-203.

173. Norman A., Sasaki M.S., Ottoman R.E., Fingerhut A.G. Elimination of chromosome aberrations from human lymphocytes // Blood. 1966. - V. 27, № 5. - P. 706714.

174. Ohtaki K. G-banding analysis of radiation-induced chromosome damage in lymphocytes of Hiroshima A-bomb survivors // Japn. J. Human Genet. 1992. - V. 37, № 4.-P. 245-262.

175. Ohtaki K., Shimba H., Awa A.A. Comparison of type and frequency ofchromosome aberration by conventional and G-staining methods in Hiroshima atomic bomb survivors // Radiat. Res. 1992. - V. 23, № 2 - P. 441-449.

176. Pincel D., Straume Т., Gray J. Cytogenetic analysis using quantitative, high-sensitive, fluorescence hybridization // Proc. Nat. Acad. Sci. (USA). 1986. - V. 83, № 3. -P. 2934-2938.

177. Pinkel D., Landegent J., Collins C. Biological dosimetry. Radiation-induced mitotic delay can lead to an underestimated of the part of the body exposed after irradiaion // Proc. Nat. Acad. Sci. (USA). 1988. - V. 85, № 2. - P. 9138-9142.

178. Pohl-Ruling J., Fischer P., Lloyd D.C. et al. Chromosomal damage induced in human lymphocytes by low doses of D-T neutrons // Mutat. Res. 1986. - V. 173, N 4. -P. 267-272.

179. Popp S., Remm В., Hausmann M. et al. Towards a cumulative biological dosimeter based on chromosome painting and digital image analysis // Kemtechnik. — 1990. -V. 55, №4.-P. 53-63.

180. Preston R.J. Chromosome aberration yields induced in human lymphocytes // Health Physics. 2004. - V. 87, № 1. - P. 3-14.

181. Preston R.J., Brewen J.G., Jones K.P. Chromosome aberrations induced in human bone-marrow in cells by gamma-irradiation // Int. J. Radiat. Biol. 1972. - V. 21, № 2.-P. 397-400.

182. Preston R.J., Brewen J.G., Gengozian N. Persistence of radiation-induced chromosome aberrations in marmoset and man // Radiat. Res. 1974. - V. 60, № 3. - P. 516-524.

183. Purrot R.J., Reeder E. Chromosome aberration yields in human lymphocytes induced by fractionated doses of X-radiation // Mutat Res. 1976. V. 34, № 3. P. 437-446.

184. Purrot R.J., Reeder E. The effect of changes in dose rate on the yield of chromosome aberrations in human lymphocytes exposed to gamma radiation // Mutat Res. -1976. V. 35, № 3. - P. 437-444.

185. Ramalho A.T., Curado M.P., Natarajan A.T. Lifespan of human lymphocytes estimated during a six year cytogenetic follow-up of individuals accidentally exposed in the 1987 radiological accident in Brazil // Mutat. Res. 1995. - V. 331, N 1. - P. 47-54.

186. Ramalho A.T., Nascimento A.C.H. The fate of chromosomal aberrations in 137Cs exposed individuals in the Goiania radiation accident // Health Phys. 1991. - V. 60,1. N l.-P. 67-70.

187. Ramalho A.T., Nascimento A.C.H., Natarajan A.T. Dose assessments by cytogenetic analysis in the Goiania (Brazil) radiation accident // Radiat. Prot. Dosim. -1988.-V. 25, N 2. P. 97-100.

188. Salassidis K., Schmid E., Peter R.U. et al. Dicentric and translocation analysis for retrospective dose estimation in humans exposed to ionising radiation during the Chernobyl nuclear power plant accident//Mutat. Res. 1994. -V. 311,№ 1. - P. 39-48.

189. Salomaa S., Lindholm C., Tankimanova M.K. et al. Stable chromosome aberrations in the lymphocytes of a population living in the vicinity of the Semipalatinsk nuclear test site // Radiat. Res. 2002. - V. 158. - P. 591-596.

190. Sasaki M.S., Miyata H. Biological dosimetry in atomic bomb survivors // Nature. 1968.-V. 220, № 5173. - P. 1189-1193.

191. Sasiadek M., Jagielski J., Smolik R. Localization of breakpoints in the karyotype of workers professionally exposed to benzene // Mutat. Res. 1989. - V. 224, № 2.-P. 235-240.

192. Scheid W., Weber J., Trant H. Chromosome aberrations induced in human lymphocytes by an X-irradiation accident: results of a 4-year postirradiation analysis // Int. J. Radiat. Biol. 1988. - V. 54, № 3. - P. 395-402.

193. Schmid E. Radiation induced chromosome aberrations analyzed by FISH with a triple combination of combination of composite whole chromosome-specific DNA probes // Int. J. Radiat. Biol. 1992. - V. 62, № 6. - P. 691-695.

194. Schmid E. Radiation-induced chromosome aberration analyzed by two-color FISH // Int. J. Radiat. Biol. 1993. - V. 64, № 2. - P. 75

195. Schmid E., Bauchinger M., Bunde E. et al. Comparison of the chromosomedamage and it's dose response after medical whole-body exposure to Co-60 gamma-rays and irradiation of blood in vitro // Int. J. Radiat. Biol. 1974. - V. 26, № 1. - P. 31-37.

196. Schmid E., Bauchenger M., Hug O. Chromosomenaberrationen menschlicher lymphocyten nach rontgenbestrahlung in vitro. I. Qualitative und quantitative aspekte der dosiswirkungsbeziehung // Mutat. Res. 1972. - V. 16, № 3. - P. 307-317.

197. Schwartz J.L., Jordan R. Chromosome aberration after partial-body irradiation // Carcinogenesis. 1997. - V. 18, № 2. - P. 201-205.

198. Scott D., Lyons C.Y. Homogeneous sensitivity of human peripheral blood lymphocytes to radiation-induced chromosome damage // Nature. 1979. - V. 278, № 5706.-P. 756-758.

199. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosomes // Lancet. -1971.-V. 2.-P. 971-972.

200. Sevan'kaev A.V., Lloyd D.C., Edwards A.A. et al. Protracted overexposure to a 137Cs source: I. Dose reconstruction // Radiat. Prot. Dosim. 1999. - V. 81, № 2. - P. 8590.

201. Sevan'kaev A.V., Lloyd D.C., Edwards A.A. et al. High exposure to radiation received by workers inside the Chernobil sarcophagus // Radiat. Prot. Dosim. 2005. - V. 113, №2.-P. 152-161.

202. Silberstain E.B., Ewing C.J., Bahr G.K., Kereiakes J.G. The human lymphocytes as a radiobiological dosimeter after total body irradiation // Radiat. Res. -1974. V. 59, № 3. - P. 658-664.

203. Snigiryova G., Braselmann H., Salassidis K. et al. Retrospective biodosimetry of Chernobyl clean-up workers using chromosome painting and conventional chromosome analysis // Int. J. Radiat. Biol. 1997. - V. 71, № 2. - P. 77-87.

204. Sorokine-Durn I., Durand V., Delbos M. et al. A French view on FISH painting as a biodosimeter // Radiat. Prot. Dosim. 2000. - V.88, № 1. - P. 35-44.

205. Stephan G., Pressl S., Koshpessova G., Gusev B.I. Analysis of FISH-paintedchromosomes in individuals living near the Semipalatinsk nuclear test site7/ Radiat. Res. -2001.-V. 155.-P. 796-800.

206. Stewart C.C., Stevenson A.P., Habbersett R.C. Dose estimation based on chromosomal aberrations in human peripheral lymphocytes // Int. J. Radiat. Biol. 1988. -V. 53, № l.-P. 77-87.

207. Straume Т., Lucas J.A. Comparison of the yields of translocations and dicentrics measured using fluorescence in situ hybridization // Int. J. Radiat. Biol. 1993. -V. 64, №2.-P. 185-187.

208. Town E.J., Whitehouse C.A. Frequencies of chromosome aberrations in a control population determined by G-banding // Mutat. Res. 2001. - V. 490, № 1. - P. 171177.

209. Town E.J., Whitehouse C.A., Holdsworth D. Dose-response relations for dicentric yields in G0 lymphocytes of man and crab eating monkey following acute and chronic gamma-irradiation // Int. J. Radiat. Biol. 2000. - V. 76, № 3. - P. 355-365.

210. Town E.J., Whitehouse C.A., Tarone R.E. FISH chromosome aberration analysis on retired radiation workers from the Sellafield nuclear facility // Radiat. Res. -2004.-V. 162.-P. 249-256.

211. Virsik R.P., Harder D. Recovery kinetics of radiation-induced chromosome aberrations in human Go lymphocytes // Radiat. Environ. Biophys. 1980. - V. 18, № 2. -P. 221-238.

212. Voisin Ph., Roy L., Benderitter M. Why can't we find biological indicator of dose? // Radiat. Prot. Dosim. 2004. - V. 112, № 4. - P. 465-469.

213. Vulpis N. Impiego della "dosimetria da aberrazione chromosomiche" nella irradiazione acuta parziale: studio in vitro mediante culture miste di linfociti umani // Radiobiol. Radioter. Fis. med. 1970. - V. 25, № 4-5. - P. 195-211.

214. Whitehouse C.A., Edwards A.A., Tawn E.J. et al. Translocation yields in peripheral blood lymphocytes from control populations // Int. J. Radiat. Biol. 2005. - V. 81, №2.-P. 139-145.

215. Mb \AL ^-bcviM. c^pauzcocM,chromosomes in individuals living near the Semipalatinsk nuclear test site // Radiat. Res. -2001.-V. 155.-P. 796-800.

216. Stewart C.C., Stevenson A.P., Habbersett R.C. Dose estimation based on chromosomal aberrations in human peripheral lymphocytes // Int. J. Radiat. Biol. 1988. -V. 53, № l.-P. 77-87.

217. Straume Т., Lucas J.A. Comparison of the yields of translocations and dicentrics measured using fluorescence in situ hybridization // Int. J. Radiat. Biol. 1993. -V. 64, №2.-P. 185-187.

218. Town E.J., Whitehouse C.A. Frequencies of chromosome aberrations in a control population determined by G-banding // Mutat. Res. 2001. - V. 490, № 1. - P. 171177.

219. Town E.J., Whitehouse C.A., Holdsworth D. Dose-response relations for dicentric yields in G0 lymphocytes of man and crab eating monkey following acute and chronic gamma-irradiation // Int. J. Radiat. Biol. 2000. - V. 76, № 3. - P. 355-365.

220. Town E.J., Whitehouse C.A., Tarone R.E. FISH chromosome aberration analysis on retired radiation workers from the Sellafield nuclear facility // Radiat. Res. -2004. -V. 162.-P. 249-256.

221. Virsik R.P., Harder D. Recovery kinetics of radiation-induced chromosome aberrations in human G0 lymphocytes // Radiat. Environ. Biophys. 1980. - V. 18, № 2. -P. 221-238.

222. Voisin Ph., Roy L., Benderitter M. Why can't we find biological indicator of dose? // Radiat. Prot. Dosim. 2004. - V. 112, № 4. - P. 465-469.

223. Vulpis N. Impiego della "dosimetria da aberrazione chromosomiche" nella irradiazione acuta parziale: studio in vitro mediante culture miste di linfociti umani // Radiobiol. Radioter. Fis. med. 1970. - V. 25, № 4-5. - P. 195-211.

224. Whitehouse C.A., Edwards A.A., Tawn E.J. et al. Translocation yields in peripheral blood lymphocytes from control populations // Int. J. Radiat. Biol. 2005. - V. 81, №2.-P. 139-145.

Информация о работе

Дудочкина, Наталья Евгеньевна
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.01

Диссертация

Цитогенетическое исследование культур лимфоцитов периферической крови людей в отдаленные сроки после острого внешнего облучения - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Цитогенетическое исследование культур лимфоцитов периферической крови людей в отдаленные сроки после острого внешнего облучения - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы