Цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого

Быстрова, Екатерина Вячеславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого"

На правах_ру кописи

0034ИЛ=ио

БЫСТРОВА ЕКАТЕРИНА ВЯЧЕСЛАВОВНА

Цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология 03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 з гЮп

Саранск 2009

003483609

Работа выполнена на кафедре биохимии ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н. П. Огарева»

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор

Кузьмичева Лидия Васильевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Ямщиков Николай Васильевич

доктор медицинских наук Копытова Татьяна Викторовна

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится « 4 » декабря 2009 года в - ' часов на заседании диссертационного совета Д.212.117.01 при ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н. П. Огарева» 430005, Республика Мордовия г. Саранск, ул. Большевистская, 68

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н. П. Огарева» (430005, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68 ) Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте Мордовского государственного университета www.mrsu.ru E-mail: dsovet@mrsu.ru

Автореферат разослан « » ноября 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук ¿Л*/'

профессор / В. П. Балашов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Рак легкого остается актуальной проблемой медицины и теоретической биологии. Ежегодно в России заболевают раком легкого свыше 63 ООО человек, в том числе свыше 53 ООО мужчин. Более 34,2 % случаев, выявляются на IV стадии заболевания. Ежегодно от рака легкого в России погибает свыше 60 ООО человек, что составляет более 20 % всех умерших от злокачественных новообразований (Мерабишвили В. М., 2000; Аксель Е. М„ 2003; Аничков Н. М., 2004, Лориган П., 2009). Несмотря на все возрастающий интерес к изучению состояния иммунной системы при этом заболевании, многие аспекты этой проблемы все еще остаются неизученными. В литературе имеются лишь единичные сведения об изменении функциональной активности лимфоцитов периферической крови при опухолевых заболеваниях (Wo Е., 2002; Ichihara F., 2004; Олейник Е. К., 2007). Между тем раскрытие этого вопроса может иметь существенное значение для уточнения механизмов иммуносупрессорного действия опухоли, разработки новых и совершенствования существующих методов лечения этого заболевания.

1988), можно опосредованно судить о состоянии процессов анаболизма и катаболизма в организме в целом. По мнению Р. П. Нарциссова, лимфоцит является «энзиматическим зеркалом тканей» и определение активности дегидрогеназ лимфоцитов - это тонкий тест на последствия перенесенной гипоксии и интенсивность гликолитических процессов (Маевский Е. И., 2000; Пастушенков В. Л., 1993). Немаловажную роль в развитии патологического процесса играют лизосомальные ферменты лимфоцитов. Они участвуют в иммунопатологических реакциях, играют значительную роль в синтезе иммуноглобулинов, в катаболизме антител (Герасимов А. А.,

1989). При раке легкого эти ферменты во многом определяют формирование сопутствующих воспалительных реакций в легочной ткани (Олейник Е. К., 2007).

(Ярилин А. А., 1998). Он определяет баланс субпопопуляций, соответствующий нормальному функционированию иммунной системы. При онкологических заболеваниях происходит изменения процесса апоптоза лимфоцитов, направленное на уничтожение популяции, способной на иммунный ответ против клеток опухоли (\Уо Е., 2002). В конечном счете взаимодействие опухоли и лимфоцитов существенно влияет на прогрессию опухоли и на течение заболевания и прогноз.

Цель и задачи исследования. Цель работы - исследовать цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого на различных стадиях заболевания.

Для реализации поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить изменение содержание эндотоксинов мембранотропного действия и биогенных аминов в крови при раке легкого.

2. Оценить цитоэнзиматический статус лимфоцитов периферической крови в зависимости от тяжести заболевания.

3. Исследовать апоптотическую активность лимфоцитов периферической крови при раке легкого.

4. Провести корреляционный анализ основных показателей, характеризующих функциональную активность лимфоцитов периферической крови и стадии заболевания.

Научная новизна работы. Впервые рассмотрены показатели эндогенной интоксикации и изменения ферментного профиля лимфоцитов периферической крови при раке легкого разной степени тяжести. Накопление эндотоксинов и повышение содержания биогенных аминов в крови больных раком легкого вносит вклад в изменение цитоэнзиматического статуса лимфоцитов периферической крови.

Впервые показана прямая зависимость изменения интенсивности процесса апоптоза лимфоцитов от стадии заболевания.

С помощью корреляционного анализа выявлена обратная взаимосвязь между активностью дегидрогеназ и стадией рака легкого и прямая корреляция между активностью кислой, щелочной фосфатаз и стадией заболевания.

Научно-практическая значимость работы. Предложенный подход к оценке состояния лимфоцитов периферической крови по совокупности показателей, характеризующих интенсивность эндотоксикоза, содержание биоаминов в крови и функциональную активность лимфоцитов, закономерно изменяющихся при раке легкого разной степени тяжести, может быть использован для решения прикладных задач по разработке эффективных методов паллиативной помощи. Определение интенсивности апоптоза лимфоцитов может быть использовано для характеристики тяжести заболевания.

использованы в клинической практике наряду с общепринятыми исследованиями для оценки общего состояния организма больного.

Полученные данные используются в проведении занятий по курсам «Биохимия крови», «Молекулярная биология», «Иммунология».

Основные положения, выносимые на защиту.

При раке легкого разной степени тяжести развивается эндогенная интоксикация, которая проявляется существенным повышением в крови уровня молекул средней массы, продуктов перекисного окисления липидов, биогенных аминов, при одновременном снижении антиоксидантной активности по сравнению с нормой.

У больных раком легкого наблюдается существенное изменение ферментного профиля лимфоцитов, характеризующееся снижением активности дегирогеназ и значительным повышением активности кислой и щелочной фосфатаз, что говорит о нарушении процессов гликолиза и цикла Кребса и преобладания реакций катаболизма.

В зависимости от тяжести заболевания повышается интенсивность апоптоза лимфоцитов, определяемая с красителем Hoechst 33258 и с моноклональными антителами к CD95+.

Выявлена прямая корреляция между активностью фосфатаз, апоптозом лимфоцитов периферической крови и обратная зависимость между активностью дегидрогеназ и степенью тяжести заболевания.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены и обсуждены на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Гоа, Индия, 2007), на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (ОАЭ, Дубай, 2007), на Международной научной конференции «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Тайланд, Бангкок, 2007). Основные положения диссертационной работы изложены и обсуждены на конференции «Биология: Теория, практика, эксперимент», посвященной 100-летию со дня рождения доктора биологических наук, профессора Сапожниковой Е. В. (декабрь 2008), на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (ОАЭ, Дубай, 2008), на Международной научной конференции «Диагностика, терапия, профилактика социально значимых заболеваний человека» (Турция, Анталия, 2008), на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов МГУ имени Н. П. Огарева (2008), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье молодежи - будущее нации» (Саранск, 2008).

Публикации по теме диссертации. По материалам диссертации опубликована 1 работа в журнале, рекомендованном ВАК, и 16 статей и тезисов докладов региональных и международных конференций.

Объем ц структура работы. Диссертационная работа в объеме 139 страниц машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, собственных результатов, обсуждения,

выводов, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 16 рисунками и 6 таблицами. Библиография включает 237 источников литературы, из них 154 отечественных и 83 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы исследования. Материалом исследования служила кровь пациентов Республиканского онкологического диспансера с диагнозом рак легкого различной степени тяжести. Исследование проводилось при поступлении в стационар до проведения какого-либо лечения. Распределение больных раком легкого по группам проводился в зависимости от стадии заболевания. Забор крови проводился с согласия больных, с предоставлением им информации о целях и результатах исследования. В исследуемой группе отсутствуют больные с I стадией рака легкого, что объясняется низкой частотой выявления заболевания на этой стадии в связи с практически бессимптомным протеканием (Логинов А. Г., 2005).

В качестве контрольной служила кровь доноров, полученная с Республиканской станции переливания крови. Половой и возрастной состав доноров подбирался как можно ближе к таковому у исследуемой группы больных. Исследования проводили на кафедре биохимии биологического факультета Мордовского госуниверситета имени Н. П. Огарева.

Методы исследования. Продукты свободнорадикалыюго окисления лнпидов определяли по методу Хышиктуева Б. С. (1996) в изопропанольной фазе, содержание малонового диальдегида - по методу Конюховой С. Г. (1989). Активность каталазы в сыворотке крови определяли по методике Королюк М. А. (1988). Уровень молекул средней массы оценивали спектрофотометрическим методом (Киреев С. С., 1990) при длине волны 280 нм и 254 нм для определения белков и нуклеопротеидов. Количество циркулирующих иммунных комплексов определяли по методике Гриневич Ю. А. (1998). Общую и эффективную концентрацию альбумина определяли флуорометрически (Миллер Ю. И., 1994). Индекс токсичности, определяемый по формуле ОКА/ЭКА - 1 , использовали для характеристики степени интоксикации организма.

Определение гистамина и серотонина проводили в одной пробе по Прошиной (1981), адреналина и норадреналина - по Паю А. Ю. (1980) на основании образования флуоресцентных продуктов.

Лимфоциты выделяли центрифугированием в градиенте плотности полиглюкин - урографин (Boeyum А., 1995). Подсчет осуществляли с метиленовым синим, жизнеспособность определяли с трипановым синим. Активность ферментов проводили биохимическими и гистохимическими методами.

Биохимически активность сукцинатдегидрогеназы оценивали по методу Пастушенкова В. Л., Митина Ю. А. (1993) в митохондриальной фракции, полученной по методике Прохоровой М. И. (1982), активность лактатдегидрогеназы определяли кинетическим методом («Диаком ЛДГ»),

определение активности кислой и щелочной фосфатаз - оптимизированным кинетическим методом. Гистохимически проводили выявление активности лактатдегидрогеназы в лимфоцитах (по Ф. Хейлоу, Д. Кваглино), активности сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах (по Д. Кваглино, Ф. Хейхоу ), кислой фосфатазы в лимфоцитах (по Г. Гомори), выявление щелочной фосфатазы в лимфоцитах (по Л. Каплоу).

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента - (t). Вычисляли среднее арифметическое выборочной совокупности (М), ошибку среднего арифметического (ш), среднее квадратичное отклонение (о). Достоверность различия определяли в каждой серии по отношению к исходному значению (р). Результаты опытов статистически обработаны с помощью Microsoft Exel «Биометр».

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Любая клетка многоклеточного организма не может существовать обособленно, ее функциональная активность и метаболизм напрямую зависят от состояния организма в целом. Передача сигналов от организма к клетке осуществляется через микросреду, окружающую эту клетку. Для лимфоцитов периферической крови окружающей микросредой является плазма крови. Содержание в ней некоторых продуктов эндотоксикоза и биологически активных веществ может значительно сказаться на функциональной активности лимфоцитов. При многих патологических процессах, как правило, происходят однонаправленные изменения, которые главным образом способствуют адаптации организма (Браун А. Д., Моженок Т. П., 1987; Гомазков О. А., 2003; Кузьмичева Л. В., 2002). При раке легкого повреждение легочной ткани влечет за собой развитие хронической гипоксии, появление очага распада, что обусловливает воспалительные реакции дыхательных путей и кардинально изменяет метаболизм (Луценко С. В., 2003). Важным фактором является резкое увеличение показателей эндогенной интоксикации (Киселевский М. В., ТугузА. Р., 2001).

Изменения показателей эндотоксикоза при раке легкого

Легкие активно участвуют в формировании свободнорадикального статуса организма. В силу анатомо-физиологических особенностей в легких имеются все условия для развития окислительного стресса: прямой контакт с кислородом атмосферного воздуха, высокие концентрации ненасыщенных жирных кислот, являющихся основным субстратом свободнорадикального окисления (СРО) липидов, наличие альвеолярных макрофагов, продуцирующих в процессе фагоцитоза активные формы кислорода (Wong Н. R., 1997; Игнатова Г. Л., Волчегорский И. А., Волкова Э. Г., 1998). Длительная активация СРО приводит к накоплению конечных токсических

продуктов и развитию синдрома липидной пероксидации (Владимиров Ю. А., 2000). Продукты СРО липидов, воздействуя на метаболизм различных клеток и изменяя функционирование систем организма, обусловливают затяжное течение патологического процесса в легких, что приводит к избыточному фиброзу. При этом считается, что в случае болезни и интоксикации происходит возрастание СРО, продукты которого и являются ответственными за повреждение клеток и тканей (Киселева Р. Е., Кузьмичева JI. В., 2004).

По данным, полученным в результате нашего исследования, наблюдается резкое увеличение содержания диеновых коньюгатов (ДК), кетодиенов и сопряженных триенов в сыворотке крови больных II стадией рака легкого. На III и IV стадиях заболевания данные показатели несколько уменьшаются, но не достигают контрольного уровня (табл. 1). В тоже время соотношение диеновых коньюгатов к ненасыщенным жирным кислотам находится в прямой зависимости от стадии заболевания (г = 0,62), что может свидетельствовать об усугублении патологического процесса при развитии заболевания.

Таблица 1.

Содержание продуктов СРО в изопропанолыюй фазе сыворотки крови

практически здоровых людей и больных раком легкого

Группа обследованных Изопропанольная фаза МДА, мкМ/л

Е232, ед/мл Е232/220 Е278, ед/мл Е278П20

Доноры 1,65±0,02 0,58+0,01 1,19+0,01 0,86±0,02 5,31+0,57

Больные II стадией рака легкого 5,87+2,91" 1,27±0,25* 3,58+1,37** 1,74±0,04*** 6,82±0,87*

Больные III стадией рака легкого 4,17±0,67* 1,58+0,38** 2,82+0,22** 1,00±0,25** 9,61±1,25*

Больные IV стадией рака легкого 4,88+1,17* 1,59+0,31* 3,71+0,69* 1,02+0,49** 9,01 ±2,54**

Примечание: достоверность различий между опытной и контрольной группами: *-р<0,05; **-р <0,001; *"-р< 0,001

Содержание малонового диальдегида (МДА) возрастает на II стадии рака легкого, продолжает увеличиваться на III стадии и на IV стадии остается на стабильно высоком уровне (рис. 1).

Если рассматривать динамику содержания продуктов СРО, то можно выявить общую направленность их изменения. После резкого повышения показателей на II стадии рака легкого наблюдается их стабилизация или даже снижение. При раке легкого, показатели, характеризующие антиоксидантную систему, в частности активность каталазы, значительно

снижаются по сравнению с контрольными. Здесь наблюдается обратная зависимость от стадии развития заболевания. На фоне повышения содержания продуктов СРО и МДА, активность каталазы в сыворотке крови снижается у больных II стадией рака легкого на 19 %, у больных III и IV стадиями рака легкого соответственно на 41 % и 45 % по сравнению с контрольной группой. Депрессия ферментов антиоксидантной системы ведет к неконтролируемому усилению циклических свободнорадикальных процессов, что, в итоге, ведет к срыву адаптации на клеточном уровне и на уровне организма в целом.

; ■ лк- ——люил * кл н с г --->-- кл и слтл ш млл |

Рис. 1. Изменение содержания продуктов СРО липидов при раке легкого

Рассматривая показатели эндотоксикоза при раке легкого, можно отметить наиболее значительное повышение содержания молекул средней массы (рис. 2).

Рис. 2. Изменения содержания МСМ, индекса токсичности по альбумину и критерия интоксикации при раке легкого

У больных раком легкого II стадии содержание в сыворотке крови МСМ увеличилось в 3,9 раза, у больных III и IV стадии соответственно в 5,7 и 7,7 раза по отношению к контрольным показателям. МСМ действуют как вторичные эндотоксины, оказывая ингибирующее действие на целый ряд метаболических процессов: дыхание митохондрий, синтез гемоглобина, активность лактатдегидрогеназы, вызывают иммунотоксические реакции, нарушают микроциркуляцию и лимфодинамику в сосудах. Под влиянием МСМ происходит разобщение процессов окисления и фосфолирирования, нарушаются механизмы регуляции клеточного дыхания, снижается биосинтез белка (Владыко А. С. с соавт., 1990; Оболенский В. А., 1993; Киселева Р. Е., Кузьмичева JI. В. с соавт., 2004).

В результате исследования эффективной и общей концентрации альбумина (ЭКА и ОКА) было показано снижение обоих показателей по сравнению с контрольной группой. Так, ЭКА у больных II стадией рака легкого снижается на 19 %, снижение ОКА на этой стадии развития заболевания менее значительно - на 10 % по сравнению с контрольной группой. На III и IV стадиях заболевания происходит дальнейшее снижение содержания ЭКА соответственно на 34 % и 55 %. В то же время наблюдается снижение ОКА на III и IV стадиях на 16 % и 18 %, однако статистически значимых различий со II стадией рака легкого здесь не наблюдается. Увеличение тяжести заболевания сопровождается аналогичной динамикой индекса токсичности по альбумину. ИТ возрастает главным образом за счет снижения эффективной концентрации альбумина. ЭКА находится в обратной корреляционной зависимости от стадии рака легкого (г = - 0,55). Большое внимание уделяется изучению взаимодействия молекул средней массы с сывороточным альбумином, выполняющим важнейшую детоксикационную функцию. Учитывая независимый характер изменения МСМ и ЭКА, у больных рассматривали критерий интоксикации (КИ), отражающий уровень дисбаланса между накоплением и детоксикацией (связыванием) токсинов в плазме крови. На фоне сильно повышенного содержания молекул средней массы снижение ЭКА ведет к увеличению критерия интоксикации (см. рис. 2). Выяснилось, что у больных II стадии рака легкого критерий интоксикации равен 23, что почти в 5 раз превышает критерий интоксикации доноров (КИ = 4,8). С возрастанием тяжести заболевания увеличивается и критерий интоксикации, так на III и IV стадиях он составил 42 и 66, что больше нормальных значений соответственно в 8,8 и 13,7 раза. Резкое повышение критерия интоксикации происходит за счет того, что ЭКА альбумина снижается на фоне значительного повышения содержания МСМ.

Формирование целого ряда патологических состояний связано с образованием растворимых комплексов АГ-АТ. Длительно циркулирующие иммунные комплексы в крови (особенно малые и средние) адсорбируются на эндотелиальных клетках сосудов, активируют систему комплемента на ограниченном участке сосудистого русла. Это приводит к локальному воспалению, сопровождающемуся изменением суммарного заряда клетки,

нарушением клеточной проницаемости, освобождением лизосомальных ферментов, активацией прокалликриина (Константинова Н. А., 1996). При тяжелых формах рака легкого наблюдается значительное повышение содержания ЦИК. Так, содержание ЦИК у больных II стадией рака легкого увеличилось на 19 % , на III стадии заболевания происходит дальнейшее увеличение на 29 %, а у больных IV стадией - на 54 % по сравнению с контрольной группой.

В целом, полученные данные свидетельствуют о резком увеличении интенсивности эндогенной интоксикации при опухолевом процессе в легочной ткани. Эндотоксины могут влиять на метаболизм и на функциональную активность органов и систем, в частности на иммунную систему и лимфоциты. Однако существует целый ряд гуморальных факторов, непосредственно действующих на клетки крови. Среди них особого внимания заслуживают биогенные амины, такие как гистамин (Г), серотонин (С), адреналин (АД) и норадреналин (НА).

Изменение содержания биогенных аминов при раке легкого

Биогенные амины, такие как адреналин, норадреналин и гистамин, способны влиять на функциональную активность клеток иммунной системы. По данным Сепиашвили Р. И., Балмасовой И. П. (2005), биогенные амины могут являться причиной снижения иммунологической реактивности при злокачественных опухолях.

Физиологически активные формы гистамина являются сигнальными молекулами и действуют на специфические рецепторы плазматических мембран лимфоцитов (Бережная Н. М., 2003). Катехоламины (КА) участвуют в регуляции матричных синтезов и основных процессов, определяемых геномом: длительной адаптации, роста, деления, миграции и дифференциации клеток, клеточного стресса (Меньшиков В. В., 1989). Являясь регуляторами иммунной системы, они могут играть роль в уклонении опухоли от иммунного ответа организма. Уклонение может происходить в результате увеличения количества лимфоцитов - супрессоров, а также избирательной гибели путем апоптоза 1ЧК-лимфоцитов, ответственных за противоопухолевую защиту (Сепиашвили Р. И., 2005).

В результате проведенных исследовании нами выявлено, что при раке легкого происходит изменение уровня биогенных аминов в крови по сравнению с контрольной группой (рис. 3). Содержание АД в плазме крови больных II, III и IV стадиями рака легкого резко возрастает соответственно в 2,4, 3,8 и 4,4 раза по отношению к нормальным показателям. Уровень НА в плазме крови больных раком легкого II, III и IV стадиями повышается в 2,8, 2,9 и 3,1 раза соответственно. Между содержанием в крови АД и НА на II, III и IV стадиях заболевания наблюдается положительная корреляция: г = 0,61; г = 0,88; г = 0,85 соответственно.

Из литературных данных известно, что при опухолевых заболеваниях повышение уровня гормонов и других биологически активных веществ в жидкостях организма обусловлено сложным взаимодействием опухоли и

организма, а также природой самой опухоли (Переводчикова Н. И., 1989). Новообразования неэндокринного происхождения способны к выработке тех или иных гормонов, это так называемая эктопическая опухолевая продукция гормонов. Эта способность связана с наличием в легких клеток, основным свойством которых является синтез пептидных гормонов, которые поглощают экзогенно введенные предшественники биогенных аминов, декарбоксилируют их с последующим образованием биогенных аминов и / или пептидных гормонов. Гиперпродукция гормонов при росте опухоли может явиться вторичной реакцией на опухолевый процесс и определять тем самым возникновение паранеопластических синдромов, связь которых с изменением функциональной активности клеток, синтезирующих биоамины, подтверждена исследователями (Смирнова Е. А., 1985).

500 450 400 350 300 е> 250 200 150 100 50 0

контрольная II стадия III стадия IV стадия группа

[ • адреналин — норадреюлин А пстамин серотонин]

Рис. 3 Изменение содержания биогенных аминов в крови при раке легкого

Таким образом, отмеченное нами значительное повышение уровня КА может объясняться как гормонопродуцирующей активностью опухоли, так и резким повышением выработки КА надпочечниками.

Наряду с КА на функциональную активность лимфоцитов значительно влияет гистамин. В ряде работ детально проанализировано, что гистамин, также проявляет выраженную способность к иммуномодуляции в широком диапазоне (Сепиашвили Р. И., 2005). Экзогенный гистамин в больших количествах оказывает ингибирующее действие на лимфоциты и способен вызывать апоптоз. В ходе исследования выявлено значительное повышение концентрации гистамина при раке легкого. Причем концентрация этого биоамина зависит от тяжести заболевания. В крови больных раком легкого II и III стадий уровень гистамина возрастает соответственно в 2,4 и 2,3 раза по отношению к контрольным показателям. На IV стадии рака легкого содержание гистамина снижается относительно такового на II и III стадии, но остается повышенным по сравнению с контрольным уровнем в 1,3 раза.

Содержание серотонина снижается с увеличением тяжести заболевания. У больных II стадией рака легкого уровень серотонина в крови снижается на 25 %. Индекс Г/С у больных этой группы равен 0,12, наблюдается сильная отрицательная корреляция между содержанием гистамина и серотонина (г = - 0,77). При обследовании больных III стадиен рака легкого было выявлено снижение уровня серотонина на 30% по отношению к контрольной группе. Индекс Г/С здесь также равен 0,12. Похожая динамика изменения содержания серотонина наблюдается у больных IV стадией рака легкого. На фоне снижения концентрации серотонина (на 56 %) индекс Г/С остается сильно смещенным в сторону гистамина (0,11). Это дает возможность предположить, что будут преобладать эффекты экзогенного гистамина, то есть общее ингибирование лимфоцитов и повышение апоптотической активности этих клеток.

При длительном течении заболевания пролонгированный свободнорадикальный стресс и резкое повышение уровня адреналина, норадреналина и гистамина истощает механизмы обезвреживания продуктов перекисного окисления и извращает репарацию фосфолипидного бислоя мембран лимфоцитов, что приводит к срыву адаптационных процессов и, как следствие, к гибели клетки (Киселева Р. Е., Кузьмичева JI. В., 2004).

Стресс-реактивность лимфоцитов периферической крови неизбежно приводит к изменениям метаболизма, направленным на адаптацию к условиям жизнедеятельности. Как показали наши исследования, активность внутрилимфоцитарных энзимов больных раком легкого достоверно отличалась от нормы.

Изменение цитоэнзиматического статуса лимфоцитов периферической крови при раке легкого

Анализ энзиматического статуса показал, что профиль лимфоцитарных ферментов характеризовался высокими уровнями активности кислой и щелочной фосфатаз и более низкими значениями дегидрогеназ по сравнению с контрольной группой.

Активность ферментов определяли биохимическими и цитохимическими методами. Активность ферментов ЛДГ, СДГ, ЩФ и КФ лимфоцитов периферической крови практически здоровых людей составляет 272,93 ± 12,57 Ед/л, 82,90 ± 2,69 Ед/л, 7,15 ± 0,05 Ед/л и 0,212 ± 0,01 Ед/л соответственно. Гистохимическими методами в цитоплазме лимфоцитов контрольной группы определяется умеренная активность дегидрогеназ, связанных с гликолизом ЛДГ, с циклом Кребса - СДГ. В участках локализации ЛДГ в лимфоцитах отмечается окрашивание в синий цвет. Активность СДГ в лимфоцитах обнаруживается по отложению синих гранул диформазана в цитоплазме, ядра окрашиваются в красный цвет. В местах локализации ЩФ обнаруживаются гранулы черного цвета. В участках цитоплазмы лимфоцитов, где имеется КФ, отмечается отложение гранул темно-коричневого цвета, свидетельствующее о локализации КФ в

цитоплазме лимфоцитов, ядра окрашены в синий цвет. По Ь. Кар1о\у, активность ЛДГ, СДГ, КФ и ЩФ в крови практически здоровых людей составила 1,8 ±0,2, 2,3 ± 0,1, 0,2 ± 0,01 и 0,1 ±0,01.

При исследовании активности ферментов лимфоцитов периферической крови у больных раком легкого с разной степенью тяжести наблюдалось достоверное изменение уровней активности данных ферментов по сравнению с донорами.

У больных раком легкого II стадии активность ЛДГ и СДГ в лимфоцитах соответственно снижается на 72,3 % и 29,8 % (рис. 4), активность ЩФ и КФ повышается в 3,7 и 4,5 раза по отношению к контрольным показателям (рис. 5).

Данные, полученные в результате гистохимического исследования, соответствуют данным, полученным в результате биохимического анализа. Активность ЛДГ и СДГ снижается соответственно до 0,9 ±0,3 и 1,5 ± 0,2. Одновременно активность КФ и ЩФ увеличивается соответственно до 0,5 ± 0,02 и 0,3 ± 0,05 (по Ь. КарШ).

группа

-♦-ЛДГ -«-СДГ |

Рис. 4. Изменение активности дегидрогеназ при раке легкого

"......Т"" 1

—

конгропьтя II стадия Ш стадия IV стадия группа

Рис. 5. Изменения активности кислой и щелочной фосфатаз при раке легкого

Активность ЛДГ и СДГ в лимфоцитах периферической крови больных III стадией рака легкого снижается на 77,7 % и 36,6 %, а активность ЩФ и КФ повышается на 5,2 и 4,6 раза соответственно по отношению к контрольной группе. Соответственно при гистохимическом исследовании активность ЛДГ и СДГ - 0,7 ± 0,3 и 1,2 ± 0,2, активность КФ и ЩФ -1,1 ± 0,1 и 0,5 ± 0,05 (по Ь. Кар1ош).

В лимфоцитах периферической крови больных раком легкого IV стадии активность ЛДГ и СДГ соответственно снижается на 80,2 % и 51,5 %, а активность ЩФ и КФ повышается на 5,9 и 5,8 раза по отношению к контрольным показателям. Гистохимические показатели активности ферментов, по Ь. Кар1о\у, составили ЛДГ - 0,7 ± 0,2, СДГ - 1,0 ± 0,22, КФ -2,1 ±0,1 и ЩФ-1,0±0,1.

По данным, полученным в результате нашего исследования, наблюдается прямая корреляционная зависимость между значениями активности КФ (г = 0,52) и ЩФ (г = 0,61) и стадией заболевания. В то же время между активностью СДГ и ЛДГ и стадией рака легкого обнаружена слабая обратная корреляционная зависимость (соответственно г = - 0,38 и г = -0,25).

Выявленные отклонения отражают иммунобиологическое состояние лимфоцитов у больных раком легкого различной степени тяжести. В механизмах клеточного повреждения существенное значение принадлежит нарушению целостности мембран лизосом и выходу содержащихся в них ферментов. Почти на всех стадиях развития опухолевого процесса присутствует очаг повреждения ткани (Аничков Н. М., Кветной И. М., Коновалов С. С., 2004). При повреждении тканей лизосомальные ферменты активируются, разрушая клетку и межклеточные образования. Высокая активность КФ, маркера лизосом, в лимфоцитах периферической крови больных раком легкого свидетельствует о преобладании процессов внутриклеточного катаболизма. Возрастание внутрилимфоцитарной КФ у пациентов с увеличением тяжести заболевания свидетельствует о высокой иммунологической готовности гетерогенной популяции лимфоцитов. Кроме того, повышенное содержание КФ в лимфоцитах отражает процессы активации иммунокомпетентных клеток в ответ на антигенную стимуляцию либо вирусами, либо аутоантигенами.

Изменения дегидрогеназной активности лимфоцитов указывают на дискоординацию путей метаболизма в условиях патологии легких. Установленное снижение ЛДГ лимфоцитов больных патологией легких отражает кризис процессов анаэробного превращения углеводов. Ингибирующее действие на этот энзим может оказывать адреналин, содержание которого при раке легкого значительно повышается. Снижение активности СДГ лимфоцитов уменьшает скорость реакций цитратного цикла. При раке легкого наблюдается максимальное отклонение активности дегидрогеназ лимфоцитов, как отражение напряженности компенсаторно-

приспособительных реакций в условиях гипоксии и эндотоксикации у данной группы пациентов.

Таким образом, состояние энзиматического статуса лимфоцитов при раке легкого можно охарактеризовать, как стойкое преобладание процессов катаболизма. На фоне хронической гипоксии происходит преобразование углеводного обмена внутри клетки. Изменяется соотношение активности лактатдегидрогеназы, которая характеризует работу анаэробного этапа окисления глюкозы, и сукцинатдегидрогеназы, ключевого фермента цикла Кребса. Эти изменения в обменных процессах лимфоцитов у больных раком легкого являются отражением связи двух основных энергообразующих систем: гликолиза и окислительного фосфорилирования. В результате прогрессирующего энергодефецита лимфоциты, в целях адаптации к сложившимся условиям, могут переходить на иные пути получения энергии, в частности на катаболизм белков и нуклеиновых кислот. Об этом может свидетельствовать резкое повышение активности кислой фосфатазы. Срыв процессов адаптации неизбежно ведет к гибели клетки.

Апоптоз лимфоцитов периферической крови больных раком легкого

Как показали наши исследования, апоптотический индекс лимфоцитов периферической крови, определяемый с красителями Hoechst 33258 и МКА к CD95+, у больных раком легкого разной степени тяжести изменяется и зависит от механизмов взаимодействия вышеперечисленных реагентов с клеточными структурами. По результатам работы наибольшую чувствительность к выявлению лимфоцитов, вступивших на путь апоптоза, имеет метод с моноклональными антителами к CD95+.

У больных раком легкого на II, III и IV стадиях гибель лимфоцитов, определяемая с Hoechst 33258, возрастает соответственно в 1,8, 2,4 и 2,8 раз по отношению к контрольной группе. Между показателями апоптотического индекса и степенью тяжести заболевания наблюдается сильная прямая зависимость (г = 0,72). Апоптотический индекс лимфоцитов, определяемый с МКА у больных II, III и IV стадиями заболевания, увеличивается в 1,9, 2,5 и 3,1 раз соответственно по отношению к контрольным показателям. Интенсивность свечения клетки зависит от количества специфических рецепторов на ее поверхности, их аффинности, от активности клетки (рис. 6).

Значительное повышение апоптоза лимфоцитов периферической крови при раке легкого можно объяснить срывом адаптации клеток под воздействием развивающей стресс-реакции на клеточном уровне. По данным Сепиашвили Р. И. (2005), высокие концентрации биогенных аминов, в частности адреналина и гистамина способны запустить реакцию апоптоза NK-лимфоцитов. Подобную реакцию лимфоцитов периферической крови вызывают и содержащиеся в крови эндотоксины мембранотротного действия. В итоге, значительное повышение гибели лимфоцитов вызывает иммуносупрессию, что обеспечивает иммунологическую

привилегированность опухоли, а также способствует развитию ряда

осложнений рака легкого, таких как воспаление легких, абсцесс легкого и т. д. По данным V. J. Kidd (1998), одним из факторов, способных стимулировать апоптоз клетки является высокая активность протеолитических ферментов. В то же время, снижение активности гликолитических ферментов ведет к энергетическому кризису, одним из исходов которого также является гибель клетки (D. С. S. Huang, М. Hahne, М. Schroeter et al, 1999).

Hoechst 33258 MKA на CD95

□ контрольная группа 11! стадия ■ III стадия ■ IV стадия

Рис. 6. Изменение апоптотического индекса при раке легкого

Таким образом, предложенный подход к диагностике состояния лимфоцитов периферической крови по совокупности показателей, характеризующих интенсивность эндотоксикоза, содержание биоаминов в крови и функциональную активность лимфоцитов, закономерно изменяющихся при раке легкого разной степени тяжести, может быть использован для решения прикладных задач по разработке эффективных методов паллиативной помощи. Определение интенсивности апоптоза лимфоцитов может быть использовано для характеристики тяжести заболевания. Результаты могут быть использованы в клинической практике наряду с общепринятыми исследованиями для оценки общего состояния организма больного.

выводы

1. При раке легкого значительно повышается содержание продуктов свободнорадикального окисления липидов, молекул средней массы, циркулирующих иммунных комплексов, возрастает величина индекса токсичности по альбумину, снижается эффективная концентрация альбумина и активность каталазы.

2. Уровень адреналина, норадреналина и гистамина при раке легкого возрастает по сравнению с контрольными значениями. Содержание адреналина повышается в прямой зависимости от стадии рака легкого, на IV стадии в 4,4 раза. Наиболее высокие значения норадреналина в крови больных наблюдаются на III и IV стадиях заболевания, но статистически значимых различий между ними нет. Уровень гистамина резко увеличивается на II стадии, на III и IV происходит небольшое снижение, но показатель остается повышенным по сравнению с контрольными значениями. Содержание серотонина снижается в обратной зависимости от стадии заболевания.

3. В лимфоцитах периферической крови при раке легкого отмечается снижение активности лактатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы, при повышении активности кислой и щелочной фосфатаз, что свидетельствует о нарушениях в гликолизе и цикле Кребса и усилении реакций катаболизма.

4. При исследовании апоптоза лимфоцитов периферической крови выявлено значительное повышение апоптотического индекса в зависимости от тяжести заболевания.

5. Наблюдается прямая корреляция между активностью фосфатаз, апоптотическим индексом лимфоцитов, обратная корреляционная зависимость между активностью дегидрогеназ и тяжестью заболевания. Наблюдаемые изменения цитоэнзиматического статуса свидетельствуют о значительной стресс-реактивности лимфоцитов периферической крови, что может объяснить резкое повышение апоптоза этих клеток при раке легкого.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Романова Е. В. Хроническое воспаление как фактор развития эпителиальных новообразований // Мордовия: наука, инновации, новые технологии. - 2007. - №4. - С. 28 - 29.

2 Кузьмичева Л. В., Орешина Ю. В., Ревина В. В., Романова Е. В. Свободнорадикалыюе окисление мембранных липидов лейкоцитов при хронической пневмонии // Вест. Мордов. ун-та. - 2007. -№ 4. - С. 88 - 91.

3 Кузьмичева Л. В., Романова Е. В., Борченко Р. В., Макогон И. П., Ушенина М. И. Показатели эпдотоксикоза в сыворотке крови при некоторых эпителиальных новообразованиях // Успехи современного естествознания. Материалы Междунар. науч. конф. «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» 1-11 марта 2007 г., Индия (Гоа). - 2007. - № 3. -С. 86-87.

4 Киселева Р. Е., Кузьмичева Л. В., Дарькина Ю. А., Романова Е. В. Динамика активности мембраносвязанных ферментов в нейтрофилах под влиянием низкоэнергетического гелий-неонового лазера // Успехи современного естествознания. Материалы Междунар. науч. конф. «Перспективы развития вузовской науки» 20 - 23 сентября 2007 г., Россия (Сочи). -2007,-№ 10.-С. 41.

5 Кузьмичева Л. В., Романова Е. В., Макогон И. П., Ушенина М. И. Исследование показателей эндотоксикоза в сыворотке крови при эпителиальных новообразованиях // Фундаментальные исследования. Материалы Междунар. науч. конф. «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» 15-22 октября 2007 г., ОАЭ (Дубай). -2007.-№ 12.-С. 115-116.

6 Романова Е. В., Кузьмичева Л. В., Матюшкин А. П. Изменение активности сукцинатдегидрогеназы и цитохромоксидазы при бронхолегочных заболеваниях // Фундаментальные исследования. Материалы Междунар. науч. конф. «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» 4 декабря 2007 г., Китай (Пекин). - 2007. - №12. -С. 86-87.

7 Кузьмичева Л. В., Борченко Р. В., Романова Е. В., Макогон И. П., Орешина Ю. В. Определение продуктов свободнорадикального окисления в сыворотке крови при легочной патологии - Успехи современного естествознания. Материалы Междунар. науч. конф. «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины» 20-30 декабря 2007 г., Тайланд (Бангкок) - 2008. - №2. - С. 104.

8 Романова Е. В. Эндогенная интоксикация при злокачественных новообразованиях легких // Биология: Теория, практика, эксперимент: материалы Международ, науч. конф., посвящ. 100-летию со дня рождения д-ра биол. наук, проф. Сапожниковой Е. В.: В 2-х кн. / редкол.: Р. В. Борченко (отв. ред.) [и др.]. - Саранск, 2008. - Кн. 1. - С.54 - 57.

9 Кузьмичева Л. В., Романова Е. В., Матюшкин А. П., Брагин В. А., Кулаев М. Т Содержание биогенных аминов в крови больных раком легкого

// Современные наукоемкие технологии. Материалы Междунар. науч. конф. «Диагностика, терапия, профилактика социально значимых заболеваний человека» 16 - 23 августа 2008 г., Турция (Анталия). - 2008. - №7. - С. 38 -39.

10 Кузьмичева Л. В., Романова Е. В., Матюшкин А. П., Ушенина М. И., Кулаев М. Т. Активность некоторых ферментов и апоптоз лимфоцитов при злокачественных новообразованиях легкого // Успехи современного естествознания. Материалы Междунар. науч. конф. «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» 15-22 октября 2008 г., ОАЭ (Дубай). - 2008. - №9. - С. 91 - 92.

11 Кузьмичева Л. В., Романова Е. В., Ушенина М. И. Эндогенная интоксикация как осложнение легочной патологии // XXXVI Огаревские чтения: материалы науч. конф.: в 3-х ч. - Ч. 2. Естественные науки. -Саранск: Изд - во Мордов. ун-та, 2008. - С. 40 - 41.

12 Матюшкин А. П., Ушенина М. И., Романова Е. В., Кузьмичева Л. В. Роль ксенобиотиков в развитии хронических заболеваний и злокачественных новообразований // Здоровье молодежи - будущее нации: сб. ст. Всероссийской науч. - практ. конф. с международным участием/ Мордов. пед. ин-т; под ред. О. С. Шубиной, Н. А. Мельниковой. - Саранск,

2008. - С. 82 - 84.

13 Романова Е. В., Кузьмичева Л. В., Борченко Р. В., Матюшкин А. П., Ушенина М. И. Цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов при раке легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2009. - Приложение №1. - С. 164- 165.

14 Кузьмичева Л. В., Романова Е. В., Ушенина М. И. Активность дегидрогеназ лимфоцитов периферической крови больных эпителиальными новообразованиями легких // XXXVII Огаревские чтения: материалы науч. конф.: в 3-х ч. - Ч. 2. Естественные науки. - Саранск: Изд - во Мордов. ун-та,

2009. - С. 23 - 24.

15 Романова Е. В., Матюшкин А. П., Кузьмичева Л. В. Гибель лимфоцитов периферической крови больных новообразованиями легких эпителиального генеза - XXXVII Огаревские чтения: материалы науч. конф.: в 3-х ч. - Ч. 2. Естественные науки. - Саранск: Изд - во Мордов. ун-та, 2009.-С. 21 -22.

16 Романова Е. В., Матюшкин А. П., Кузьмичева Л. В. Влияние содержания катехоламинов на апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого - Морфологические ведомости. - 2009. - №1,2. -С.143 -144.

17 Кузьмичева Л. В., Брагин В. А., Борченко Р. В., Быстрова Е. В. Влияние оксида азота на липидный состав мембран эритроцитов // Успехи современного естествознания. Материалы Междунар. науч. конф. «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине», 13-20 октября 2009 г., Франция (Париж). - 2009. - №11. - С. 74 - 75.

АД - адреналин

АТ-АГ - иммунный комплекс антиген-антитело Г - гистамин

ДК - диеновые коныогаты

ИТ - индекс токсичности по альбумину

КА - катехоламины

КД - кетодиены

КИ - критерий интоксикации

КФ - кислая фосфатаза

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

МДА - малоновый диальдегид

МКА - моноклональные антитела

МСМ - молекулы средней массы

НА - норадреналин

ОКА - общая концентрация альбумина

ПОЛ - перекисное окисление липидов

С -серотонин

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

СРО - свободнорадикальное окисление

СТ - сопряженные триены

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

ЩФ - щелочная фосфатаза

ЭКА - эффективная концентрация альбумина

Подписано в печать 28.10.09. Объем 1,25 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1493. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Быстрова, Екатерина Вячеславовна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Функциональная характеристика лимфоцитов.

1.2 Эндогенная интоксикация как причина изменения микросреды лимфоцитов.

1.3 Морфологические и биохимические проявления апоптоза.

1.4 Этиология и патогенез рака легкого.

2 Материалы и методы исследования.

2.1 Материалы исследования.

2.2 Методы исследования.

3 Собственные результаты.

3.1 Изменения микросреды лимфоцитов периферической крови при раке легкого.

3.1.1 Изменения показателей эндотоксикоза при раке легкого.

3.1.2 Изменения содержания биогенных аминов в крови при раке легкого

3.2 Изменение цитоэнзиматического статуса лимфоцитов периферической крови при раке легкого.

3.3 Апоптоз лимфоцитов периферической крови больных раком легкого

4 Обсуждение.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого"

Актуальность темы

Рак легкого остается актуальной проблемой медицины и теоретической биологии. Ежегодно в России заболевают раком легкого свыше 63 ООО человек, в том числе свыше 53 ООО мужчин. Более 34,2 % случаев, выявляются на IV стадии заболевания. Ежегодно от рака легкого в России погибает свыше 60 ООО человек, что составляет более 20 % всех умерших от злокачественных новообразований (Мерабишвили В. М., 2000; Аксель Е. М., 2003; Аничков Н. М., 2004, Лориган П., 2009). Несмотря на все возрастающий интерес к изучению состояния иммунной системы при этом заболевании, многие аспекты этой проблемы все еще остаются неизученными. В литературе имеются лишь единичные сведения об изменении функциональной активности лимфоцитов периферической крови при опухолевых заболеваниях (Wo Е., 2002; Ichihara F., 2004; Олейник Е. К., 2007). Между тем раскрытие этого вопроса может иметь существенное значение для уточнения механизмов иммуносупрессорного действия опухоли, разработки новых и совершенствования существующих методов лечения этого заболевания.

Лимфоциты периферической крови являются легко доступным материалом для исследования, по которому, учитывая общность направленности метаболических процессов, происходящих в лимфоцитах крови и других органах (White А., 1981; Нарциссов Р. П., 1984; Малич Т. С., 1988), можно опосредованно судить о состоянии процессов анаболизма и катаболизма в организме в целом. По мнению Р. П. Нарциссова, лимфоцит является «энзиматическим зеркалом тканей» и определение активности дегидрогеназ лимфоцитов - это тонкий тест на последствия перенесенной гипоксии и интенсивность гликолитических процессов (Маевский Е. И., 2000; Пастушенков В. Л., 1993). Немаловажную роль в развитии патологического процесса играют лизосомальные ферменты лимфоцитов. Они участвуют в иммунопатологических реакциях, играют значительную роль в синтезе иммуноглобулинов, в катаболизме антител (Герасимов А. А., 1989). При раке легкого эти ферменты во многом определяют формирование сопутствующих воспалительных реакций в легочной ткани (Олейник Е. К., 2007).

Изменение цитоэнзиматического статуса лимфоцитов периферической крови при легочной патологии протекает на фоне повышения содержания продуктов эндогенной интоксикации и изменения уровня ряда биологически активных веществ (Кузьмичева JL В., Киселева Р. Е., 2004). Причем мембранотропные эндотоксины воздействуют на лимфоциты, вызывая у них ряд адаптивных перестроек метаболизма (Добротина Н. А., 2004). В случае когда адаптация оказывается неэффективной, клетка погибает (Кузьмичева JI. В., Киселева Р. Е., 2004). Обычный путь гибели лимфоцитов периферической крови - апоптоз (Majno G., 1995; Cohen J. J., 1992). Апоптоз - нормальный процесс, который является важнейшим регулятором количественного и качественного состава популяции лимфоцитов (Ярилин А. А., 1998). Он определяет баланс субпопопуляций, соответствующий нормальному функционированию иммунной системы. При онкологических заболеваниях происходит изменения процесса апоптоза лимфоцитов, направленное на уничтожение популяции, способной на иммунный ответ против клеток опухоли (Wo Е., 2002). В конечном счете взаимодействие опухоли и лимфоцитов существенно влияет на прогрессию опухоли и на течение заболевания и прогноз.

Цель и задачи исследования

Цель работы — исследовать цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого на различных стадиях заболевания.

Для реализации поставленной цели решались следующие задачи: 1 Определить изменение содержание эндотоксинов мембранотропного действия и биогенных аминов в крови при раке легкого.

2 Оценить цитоэнзиматический статус лимфоцитов периферической крови в зависимости от тяжести заболевания.

3 Исследовать апоптотическую активность лимфоцитов периферической крови при раке легкого.

4 Провести корреляционный анализ основных показателей, характеризующих функциональную активность лимфоцитов периферической крови и стадии заболевания.

Научная новизна работы

Впервые рассмотрены показатели эндогенной интоксикации и изменения ферментного профиля лимфоцитов периферической крови при раке легкого разной степени тяжести. Накопление эндотоксинов и повышение содержания биогенных аминов в крови больных раком легкого вносит вклад в изменение цитоэнзиматического статуса лимфоцитов периферической крови.

Научно-практическая значимость работы

Предложенный подход к оценке состояния лимфоцитов периферической крови по совокупности показателей, характеризующих интенсивность эндотоксикоза, содержание биоаминов в крови и функциональную активность лимфоцитов, закономерно изменяющихся при раке легкого разной степени тяжести, может быть использован для решения прикладных задач по разработке эффективных методов паллиативной помощи. Определение интенсивности апоптоза лимфоцитов может быть использовано для характеристики тяжести заболевания.

Полученные в работе данные расширяют представления о патологических изменениях в лимфоцитах периферической крови и общих изменениях метаболизма при раке легкого. Результаты могут быть использованы в клинической практике наряду с общепринятыми исследованиями для оценки общего состояния организма больного.

Основные положения, выносимые на защиту:

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Гоа, Индия, 2007), на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (ОАЭ, Дубай, 2007), на Международной научной конференции

Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Тайланд, Бангкок, 2007). Основные положения диссертационной работы изложены и обсуждены на конференции «Биология: Теория, практика, эксперимент», посвященной 100-летию со дня рождения доктора биологических наук, профессора Сапожниковой Е. В. (декабрь 2008), на Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (ОАЭ, Дубай, 2008), на Международной научной конференции «Диагностика, терапия, профилактика социально значимых заболеваний человека» (Турция, Анталия, 2008), на научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов МГУ имени Н. П. Огарева (2008), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье молодежи — будущее нации» (Саранск, 2008).

Публикации по теме диссертации

По материалам диссертации опубликована 1 работа в журнале, рекомендованном ВАК, и 16 статей и тезисов докладов региональных и международных конференций.

Объем и структура работы

Диссертационная работа в объеме 139 страниц машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, собственных результатов, обсуждения, выводов, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 16 рисунками и 6 таблицами. Библиография включает 237 источников литературы, из них 154 отечественных и 83 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Быстрова, Екатерина Вячеславовна

115 Выводы

1. При раке легкого значительно повышается содержание продуктов свободнорадикального окисления липидов, молекул средней массы, циркулирующих иммунных комплексов, индекса токсичности по альбумину, на фоне снижения эффективной концентрации альбумина и активности ферментов антиоксидантной системы.

2. Содержание адреналина, норадреналина и гистамина в крови больных раком легкого повышается в зависимости от стадии заболевания. Уровень серотонина снижается, что приводит к значительному смещению индекса гистамин/серотонин в сторону гистамина.

3. В лимфоцитах периферической крови отмечается достоверное угнетение активности ЛДГ и СДГ, при параллельном повышении активности гидролитических ферментов — кислой и щелочной фосфатаз, что свидетельствует о кризисе гликолитического пути и преобладании реакций катаболизма.

4. При исследовании апоптотической активности лимфоцитов периферической крови, флуоресцентной микроскопией с красителем Hoechst 33258 и моноклональными антителами к рецепторам CD95, выявлено значительное повышение апоптоза лимфоцитов в зависимости от тяжести заболевания.

5. Ферментный профиль и апоптотическая активность лимфоцитов периферической крови больных раком легкого находится в зависимости от стадии заболевания. Наблюдается прямая корреляция между активностью фосфатаз, апоптотической активностью лимфоцитов и обратная корреляционная зависимость между активностью дегидрогеназ и тяжестью заболевания.

6. Наблюдаемые изменения цитоэнзиматического статуса на фоне повышения содержания катехоламинов, гистамина и эндотоксикоза могут свидетельствовать о значительной стресс-реактивности лимфоцитов периферической крови, что может объяснить резкое повышение апоптоза этих клеток при раке легкого.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Предложенный подход к диагностике состояния лимфоцитов периферической крови по совокупности показателей, характеризующих интенсивность эндотоксикоза, содержание биоаминов в крови и функциональную активность лимфоцитов, закономерно изменяющихся при раке легкого разной степени тяжести, может быть использован для решения прикладных задач по разработке эффективных методов паллиативной помощи.

Данные о метаболических аспектах иммунопатологии при новообразованиях разной степени тяжести, найдут практическое приложение в области диагностики. Определение интенсивности апоптоза лимфоцитов может быть использовано для характеристики тяжести заболевания. Результаты могут быть использованы в клинической практике наряду с общепринятыми исследованиями для оценки общего состояния организма пациента.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Быстрова, Екатерина Вячеславовна, Саранск

1. Аббасова С. Г., Липкин В. М., Трапезников Н. Н., Кушлинский Н. Е. Система Fas — Fas-L в норме и при патологии // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 1999. - №3. -С. 3-17.

2. Абелев Г. И. Иммунология опухолей человека./ Под ред. Д. Г. Заридзе. М.: Научный мир, 2000. - 343 с.

3. Адо А. Д. О некоторых свойствах и взаимодействии рецепторов мембран лимфоцитов // Иммунология. — 1993. — № 6. — С. 12—17.

4. Адо А. Д., Федосеева, В. Н., Камышева В. А. ГМ — лимфоциты против рака // Патологическая, физиологическая и экспериментальная терапия. 1999. -№ 1. - С. 4 - 8.

5. Адо А. Д., Федосеева В. Н. Активность дегидрогеназ в лимфоцитах крови у больных раком легкого // Физиологическая и экспериментальная терапия. 1999. - №1. - С. 4 — 6.

6. Айрапетянц М. Г., Гуляева Н. В. Роль свободнорадикального окисления липидов в механизме адаптации //Вестн. АМН СССР. 1988. - № 11.-С. 49-55.

7. Аксель Е. М. Заболеваемость и смертность от рака легкого в России // Новое в терапии рака легкого (терапия рака легкого начала XXI века) / под ред. проф. Н. И. Переводчиковой. М.: Медицина, 2003. — С.8— 13.

8. Алехин Е. К., Красимова И. Л. Иммунотропная активность Hi-антигистаминных препаратов // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1998. - № 2. - С. 79 - 84.

9. Аматуни В. Г., Сафарян М. Д. Определение соотношений между оксидантной и антиоксидантной системами в. характеристике течения бронхиальной астмы // Терапевтический архив. 1991. - №-8. - С. 63-66.

10. Аматуни В. Г., Егоян А. К., Нариманов М. 3. Тучно-клеточный механизм патогенеза бронхиальной, астмы и перекисное окисление мембранных липидов-У/ Тер. архив. 1989. - № 3 — С. 34 - 36.

11. Аничков» Н. М., Кветной И. М., Коновалов С. С. Биология опухолевого роста (молекулярно-медицинские аспекты). — Спб.: «Издательство «ПРАЙМ ЕВРОЗНАК», 2004. - 224 с.

12. Антонов В. Г., Козлов В. К. Патогенез онкологических заболеваний: иммунные и биохимические феномены. Внеклеточные и клеточные механизмы общей иммунодепрессии и иммунной резистентности» // Цитокины и воспаление. — 2004. Т.З, №1. — с. 8 — 19.

13. Арсенин С. JI. Молекулярно-биологическая диагностика в онкологии // Клиническая.лабораторная диагностика. — 2006. — № 10. С. 25 -32.

14. Барабой В! А. Механизмы стресса и» перекисное окисление липидов // Успехи соврем, биол. 1991. - Т. III, вып. 6. - С. 923 - 931.

15. Барабой В. А., Брехман И. И., Голотин В. Г. и др. Перекисное окисление и стресс. — СПб.: Наука,Л992. 160 с.

16. Барышников А. Ю., Шишкин Ю. В. Программированная клеточная смерть-(апоптоз) // Российский онкологический журнал. 1996. — №1-. - С. 58-60.

17. Белогубова Е. В:, Кондратьева Т. В., Того А. В. Полиморфизм гена GSTM1 в группах предрасположенности и резистентности к раку легкого // Вопросы онкологии. 2000. - № 6. - С. 549 - 554.

18. Белогубова Е. В., Того А. В., Суворова И. К. и др: Распределение аллелей гена CYP1A1 у больных раком-легкого, доноров среднего возраста ипожилых людей без онкологической патологии // Вопросы онкологии. -2004.-№2.-С. 165-168.

19. Белоцкий С. М., Авталион Р. Р. Воспаление. Мобилизация клеток и клинические эффекты. — М.: Издательство БИНОМ, 2008. — 240 с.

20. Белушкина Н. Н., Северин С. Е. Молекулярные основы патологии апоптоза // Архив патологии. — 2001. № 1. — С. 16 — 19.

21. Бережная Н. М., Сепиашвили Р. И. Тучные клетки и гистамин: физиологическая роль // Аллергология и иммунология. —Т. 4. —№3. —2003 — 29-38 с.

22. Борисова А. М. Иммунитет у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких // Клиническая медицина. 1997. -№ 1.-С. 15-21.

23. Ботвиньева В. В. Иммунная система при острых, затяжных и хронических инфекционно—воспалительных заболеваниях органов дыхания // Тер. архив. 1995. - № 1. - С. 21 - 25.

24. Браун А. Д., Моженок Т. П. Неспецифический адаптационный синдром клеточной системы. JL: Наука, 1987. - 231 с.

25. Брюханов A. JI. Каталаза и СОД: распространение, свойства и физиологическая роль в клетках аэробов // Биохимия. — 2004. — Т. 69. № 9. — С. 1170-1175.

26. Буженко 3. А. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. Киев, 1974. - 246 с.

27. Вайсфельд И. JL, Кассиль Г. Н. Гистамин в биохимии и физиологии. -М.: Наука, 1981.-277 с.

28. Васильев Н. В., Чердынцева Н. В., Коляда Т. И. Иммунная система при повышенном онкологическом риске и злокачественном росте. -Томск: Изд во Томского ун - та, 2005. - 308 с.

29. Виноградова Т. Д., Капелько М. А., Вельтищев Ю. Е. Взаимосвязь между уровнем циркулирующих иммунных комплексов и функциональным состоянием фагоцитирующей системы // Иммунология. — 1986.-№5.-С. 63-65.

30. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т. 6. - № 12. — С. 13-19.

31. Владимиров Ю. А., Азизова О. А., Деев А. Н. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. — М.: ВИНИТИ, 1991. Т. 29. - 252 с.

32. Владимирская Е. Б., Румянцев А. Г. Дифференцировочные потенции стволовых гемопоэтических клеток // Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2002. - №1 — 11 с.

33. Владыко А. С., Беляков Н. А., Шугаев А. И. Диагностическое значение уровня молекул средней массы в крови при оценке, тяжести эндотоксикоза // Вестник хирургии . 1990. - № 8. - С. 126 - 129.

34. Волчегорский И. А., Налимов А. Г., Яровинский Б. Г., Лифшиц Р. И. Составление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан- изопропанольных экстрактах крови //Вопр. мед. химии. 1989. -№ 1. - С. 127-131.

35. Втюрин Б. В. Некоторые вопросы функциональной морфологии лизосом // Архив патологии. 1974. - №4. - С. 8 - 17

36. Гаврилов В. Б., Бидула М. М., Фурманчук Д. А. Оценка интоксикации организма по нарушению баланса между накоплением и связыванием токсинов в плазме крови // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. - № 2. - С. 13 - 17.

37. Ганцев Ш. X. Онкология. М.: Медицинское информационное агенство, 2004. - 516 с.

38. Георгиев Г. П. Как нормальная клетка превращается в раковую // Соросовский образовательный журнал. 1999. - № 4. — С. 17 — 22.

39. Георгиев Г. П. Молекулярно — генетические механизмы прогрессии опухолей // Соросовский образовательный журнал. 2000. — № 11.-С.2-7.

40. Герасимов А. А. Активность лизосомальных ферментов лейкоцитов при бронхиальной астме у детей. Дис. канд. биол. наук. Москва, 1989.-278с:

41. Глинский М. А., Латышева Т. В., Семенова Л. П. Определение катехоламинов, серотонина и 5-гидроксииндолуксусной кислоты а одной пробе крови // Клиническая лабораторная диагностика. 2007. - № 6. — С. 25 -28.

42. Гомазков О. А. Окислительный стресс на молекулярном, клеточном и органном уровнях // Биохимия. 2003. - Т. 68. - № 7. - С. 1005- 1007.

43. Григорович Н. А., Алекса Т. Ф. Использование цитофлуоресцентных методов для идентификации лимфоцитов, и макрофагов, оценка их функционального состояния // Иммунология. — 1984.- № 1. С. 10-15.

44. Гущин И. С. Немедленная гиперчувствительность //Пат. физиология. 1993. - № 2. - С. 59 - 64.

45. Давтян Т. К., Аванесян Л. А. О взаимоотношении иммунного и адаптивного ответов // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121, № 3. -С. 275-286.

46. Дильман В. М. Эндокринологическая онкология. Ленинград:.1. Медицина, 1983.-432 с.

47. Добрецов Р. Е. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. -М.: «Ириус», 1994. 226 с.

48. Добротина Н. А., Копытова Т. В. Эндоинтоксикация организма человека: методологические и методические аспекты. —Н. Новгород: Изд-во Института прикл. физики РАН, 2004. 62 с.

49. Елисеева Л. С. Биологический эффект связывания серотонина с иммуноцитами // Иммунология. 1998. - № 5. - С. 42 - 45.

50. Ерюхин Н. А., Насонкин О. С., Лебедев Л. С. Эндотоксикоз как проблема клинической хирургии // Вестник хирургии. — 1993. — № 3. — С. 1 7.

51. Завгородняя Е. Г., Шахмардоков М. 3., Исаева М. Н. Модифицированный метод определения функциональной активности лимфоцитов крови с использованием акридинового оранжевого // Клиническая лабораторная диагностика. —1993. — № 2. — С. 75 76.

52. Закеева И. Р., Бережной А. Е., Гнучев Н. В., Георгиев Г. П., Ларин С. С. Ингибиторные рецепторы лимфоцитов и их. роль в противоопухолевом иммунитете // Вопросы онкологии. 2007. — Т. 53, №2. — С. 140-149.

53. Зеленина Н. В., Андреева Л. И., Горанчук В. В. Действие непродолжительного умеренного нагревания организма здорового человека на периферические лимфоциты // Цитология. 2000. — Т.42, № 2. -С. 166-169.

54. Зенков Н. К., Ланкин В. 3., Меныцикова Е. Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 343 с.

55. Игнатова Г. Л., Волчегорский И. А., Волкова Э. Г. Состояние процессов перекисного окисления липидов при хроническом бронхите // Терапевтический архив. — 1998. № 3. - С. 36 — 37.

56. Игнатьева Г. А. Иммунная система и патология //Иммунология.1999.- №4.-С. 26-33

57. Игнатьева С. Н., Кубасов Р. В. Особенности изменения ферментного статуса лейкоцитов студентов в течение года // Клиническая лабораторная диагностика. — 2009. — №1. — С. 36 — 39.

58. Каган В. Е. Биологическое назначение гистамина // Лаб. дело. — 1987.-№9.-С. 712-714.

59. Каган В. Е., Смирнов А. В., Савов В. М. и др. Перекисное окисление липидов в митохондриальных мембранах, индуцируемые ферментативным дезаминированием биогенных аминов // Вопросы мед. химии. -1984.-№ 1.-С. 112-118.

60. Казьмина Н. В. Ферменты метаболизма лимфоцитов у больных раком легкого // Сибирский онкологический журнал. 2008. - №1. — С. 63-64.

61. Камышников В. С. Справочник по клинико — биохимической диагностики: в 2 т. — Минск: Беларусь, 2000. 2 т. — 463 с.

62. Карнаухов. В. Н. Люминесцентный спектральный анализ клетки. М.: Наука, 1978.-208 с.

63. Карякина Е. В. Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика. 2004. - № 3. - С. 3 — 7.

64. Киселева Р. Е., Кузьмичева Л. В. Адаптационные возможности иммунокомпетентных клеток. Саранск: Изд — во Мордов. ун - та, 2004. -180 с.

65. Киселева Р. Е., Альба Н. В., Кузьмичева Л. В., Альба Д. Л. Биохимические аспекты эндотоксикоза. Саранск: Мордов. гос. ун-т, 2002. - 100 с.

66. Киселева Р. Е. Альбумин сыворотки крови при загрязнении окружающей среды и инфекционных заболеваниях /Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. Книга 2. М.: «ГЕОТАР», 1998. - С. 382 -385.

67. Киселевский М. В., Тугуз А. Р. Патобиохимические и патоиммунологические механизмы послеоперационных осложнений у онкологических больных // Новое в онкологии: Сб. науч. трудов. 2001. — №5.-С. 65-69.

68. Клебанов Г. И., Теселкин Ю. О., Бабанкова И. В. с соавт. Антиоксидазная активность сыворотки крови // Вестн. РАМН. — 1999. № 2. С. 15-22.

69. Козначеева Е. И., Глан П. В. Оценка действия лекарственных препаратов на активность СДГ в кратковременной культуре лимфоцитов // Лабораторное дело. 1985. - №2. - С.35 - 38.

70. Кондрашова М. Н., Маевский Е. И., Бабаян Г. В. с соавт. Адаптация к гипоксии посредством переключения метаболизма на превращения янтарной кислоты //Митохондрии. Биохимия и ультраструктура / Под ред С. Е. Северина. Л.: Наука, 1973. С. 112 - 129 .

71. Константинова Н. А. Иммунные комплексы и повреждение тканей. М: Медицина, 1996. - 256 с.

72. Королюк М. Д., Иванова Л. И., Майорова И. Г. с соавт. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело. 1988. —N1. — С.16-18.

73. Коткина Т.И., Титов В.Н. Диагностическое значение исследования альбумина сыворотки крови // Лаб. дело. 1991. - № 7. - С. 6 -11.

74. Котова С. А., Белова О. Б., Пилецкий Р. В. Взаимодействие гистамина с лимфоцитами (связывание, поглощение, регуляция) больных атопическими заболеваниями под воздействием иммуномодуляторов // Иммунология. 1997. - № 3. - С. 38 - 42.

75. Котова С. А., Бережная Н. Mi',. Белова О. Б. Метаболизм циклического аденозинмонофосфата в лимфоцитах периферической крови больных атопией при воздействии гистамина // Экспериментальная и клиническая*фармакология. — 1994. — № 1. G. 61 - 64.

76. Котова С. А., Бережная Н. М. Внутриклеточная регуляция взаимодействия гистамина с рецепторами, в норме: и при атопии // Иммунология. 1992. - № 5. - С. 4 - 6.

77. Кременецкая A. M., Воробьёв И: А.,, Сидоров Ю. В- Морфология лимфоцитов // Тер. арх. 1998. - №7. - С.37 - 39.

78. Крылин В. В. Катехоламины: Биосинтез (лекция) // Клиническая лабораторная диагностика. — 2007. — № 3. С. 21 - 35.

79. Кузьмичева JI. В., Киселева Р. Е. Адаптация лимфоцитов на клеточном и субклеточном уровнях / Материалы VI Конгресса Международной Ассоциации Морфологов // Морфология. 2002. - Т. 121, №2-3.-С. 85.

80. Кузьмичева Л. В. Цитохимическое исследование лимфоцитов периферической крови в норме и при облучении, низкочастотным гелий-неоновым лазером и.ульрафиолетовым светом: Автореф. . дис. канд. биол. наук. Саранск, 1995. — 21 с.

81. Кулинский В. И., Колесниченко Л. С. Общая гормонология // Биомедицинская химия. 2004. - № 4. -С. 344 - 366.

82. Кушманова О. Д., Ивченко Г. М. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. — М:: Медицина, 1974. — 234 с.

83. Ларский Э. F., Бархатова В. П., Демина Е. Г. Определение катехоламинов крови; методом. высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией // Лабораторное дело. 1985.-№5.-С. 519-522.

84. Лемехов В. Г., Барчук А. С., Пинаев Р. Н. Оценка эффективности хирургического лечения ранних форм рака легкого (РФРЛ) // Вопросы онкологии. 2007. - Т. 53. - №3. - С. 291 - 294.

85. Логинов А. Г. Состояние энергетического метаболизма лимфоцитов регионарного лимфатического узла // Бюллетень СО РАМН. — 2005.-№2.-С. 139-142.

86. Локтев Н. А. Основы количественной гистохимии Ставрополь. - 1999. -128 с.

87. Лукьянова Н. Ю. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей //Вопр. онкол. — 2000. — Т. 46, № 2. — С. 121-128.

88. Луценко С. В., Киселев С. М. Молекулярные механизмы опухолевого ангиогенеза // Биохимия. 2003. — Т.68. — № 3. — С. 349 - 352.

89. Лушников Е. Ф., Загребин В. М. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития // Архив патологии. 1987. - Т. 49, вып. 2 .-С. 89-94.

90. Лушников Е. Ф., Абросимов А. Ю. Гибель клетки (апоптоз). М.: Медицина, 2001.-192 с.

91. Ляшенко В. А., Дроженников В. А., Молотковская И. М. Механизмы активации иммунекомпетентных клеток. — М.: Медицина, 1988. -239 с.

92. Маевский Е. И. с соавт. Анаэробное образование сукцината и облегчение его окисления — возможные механизмы адаптации клетки к кислородному голоданию // Российский биомедицинский журнал. 2000. — № 12.-С. 53-59.

93. Марциновский В. Ю., Хроменков Ю. Н., Хваталин Н. В. Взаимосвязь функциональных и иммунологических нарушений //Тер. архив.- 1998.-№5.-С. 32-35.

94. Медведев А. Е. Регуляция биогенными аминами энергетических функций митохондрий // Вопросы медицинской химии. — 1990. № 5. — С. 18-21.

95. Меньшиков В. В. Методы клинической биохимии гормонов и медиаторов. М.: Медицина, 1989. - 98 с.

96. Меньшиков В. В. Физиология и биохимия биогенных аминов. — М.: Наука, 1974.-326 с.

97. Мерабишвили В. М., Дятченко О. Ф. Статистика рака легкого (заболеваемость, смертность, выживаемость) // Практическая онкология. — 2000.-№3. —С. 3-7.

98. Молина JI. П. Роль эндогенной интоксикации в нарушении иммунного статуса при неспецифическом хроническом воспалении: Автореф. . дис. канд. биол. наук. Саранск, 1998. — 18 с.

99. Мушканбаров Н. Н., Кузнецов С. JI. Молекулярная биология. М.: ООО «Медицинское фармацевтическое агенство», 2003. - 544 с.

100. Нарциссов Р. П. Применение n-нитротетразолия фиолетового для количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека //Арх. анат.1969. — № 5. — С. 55-91.

101. Нарциссов Р. П. Прогностические возможности клинической цитохимии // Советская педиатрия. 1984. — № 2. — С. 267 - 275.

102. Оболенский В. А. Уровень средних молекул в определении степени интоксикации у больных с гнойными ранами // Вестник хирургии. -1993.- № 3. С. 34-38.

103. Олейник Е. К., Олейник В. М., Бахпаев И. Е. Злокачественные новообразования // Вопросы онкологии. — 2001. — Т. 47. — № 4. -С. 436-439.

104. Палеев Н. Р. Хронические неспецифические заболевания легких. -М.: Медицина, 1985. 240 с.

105. Пастушенков В. Л., Митин Ю. А. Цитохимический метод оценки активности дегидрогеназ в лимфоцитах // Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - № 2. - С. 42-43.

106. Паю А. Ю. Определение свободных и связанных с белками адреналина и норадреналина в плазме крови // Лабораторное дело. 1980. — №5.-С. 297-300.

107. Переводчикова Н. И. К проблеме мелкоклеточного рака легкого // Вопросы онкологии. 1989. - №2. - С. 151 - 154.

108. Петров Р. В., Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии // Иммунология. 1994, — № 6. -С. 6-9.

109. Плюшкис Ю. А., Мурза В. А. Определение гистамина в различных фракциях крови // Лаб. дело. 1980. - №8. - С. 472 - 475.

110. Погорелов В. М., Козинец Г. И. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе //Гематология и трансфузиология. -1995.-Т.40, №5.-С.21-25.

111. Полоцкий Б. Е. Рак легкого некоторые аспекты клиники, диагностики и лечения // Русский медицинский журнал. — 2005. - Т. 13. - № 23.-С. 1521 -1530.

112. Попова Н. К., Науменко Е. В., Колпаков В. Г. Серотонин и поведение. Новосибирск: Наука, 1978. - 302 с.

113. Прошина Л. Я. Определение серотонина и гистамина в одной пробе // Лаб. дело. 1981. - №2. - С. 90 - 93.

114. Пшениникова М. Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Патология, физиология и экспериментальная терапия. 2001. - №2. - С. 26 - 30.

115. Рак легкого / под ред. П Лоригана; ред. серии А. Т. Скарин. М.: ООО «Рид Элсивер», 2009. - 196 с.

116. Резников А. Г. Методы определения гормонов. — Киев: Наукова думка, 1980. С. 341 - 350.

117. Робинсон М. В. Морфоцитохические особенности лимфоцитов в норме при дестабилизирующих воздействиях и при аутоиммунных процессах и заболеваниях: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Новосибирск, 1994. - 58 с.

118. Романенко А. М. Апоптоз и рак // Архив патологии. 1996. - № З.-С. 18-22.

119. Саакян И. Р., Саакян А. Г. Двойная реципрокная регуляция системы окисления сукцината в митохондриях сердца и печени в условиях патологии // Вопросы медицинской химии. 1999. - Т.44, вып. 2. - С. 56-64.

120. Савченко А. А., Лапешин П. В., Дыхно Ю. А. Особенности состояния иммунного статуса у больных немелкоклеточным раком»легкого в зависимости от метастазирования // Медицинская иммунология. 2007. — №2.-С. 284-285.

121. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М.: Медгиз, 1960. - 254с.

122. Сепиашвили Р. И. Основы физиологии иммунной ситемы. М.: Медицина - Здоровье, 2003. - 240 с.

123. Сепиашвили Р. И., Балмасова И. П. Физиология естественных киллеров. М.: «Медицина-Здоровье», 2005. — 231 с.

124. Сепиашвили Р. И., Балмасова И. П. Естественные киллеры и биогенные амины: паракринная регуляция в иммунной системе // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. 2005. - № 8. - С. 927 - 938.

125. Симоненкова В. А. Ультраструктура лимфоцитов периферической крови человека при действии экстремальных факторов //

126. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 1998. — № 1 — С. 19-22.

127. Скулачев В. П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии; клетки и органы:- роль активных форм кислорода // Соросовский образовательный журнал. — 2001. Т. 7, № 6. - С. 4 — 10:

128. Скулачев, В: П. Старение организма особая? биологическая функция, а не результат поломки сложной живой системы: биохимическое обоснование гипотезы Вейсмана //Биохимия; - 1997.- Т. 62. - С. 1394 - 1399:

129. Скулачев В. П. Феноптоз: запрограммированная; смерть организма// Биохимия. 1999:- Т. 64-№12. - С. 1679 - 1688.

130. Смирнова Е. А., Райхлин Н. Т. Участие эндокринных клеток в образовании опухолей легких // Вопросы онкологии. 1980. - № 10. -С. 7-12.

131. Смирнова Е. А. Электронно микроскопическая: и биохимическая характеристика гормональной активности мелкоклеточного рака легкого // Вопросы онкологии. - 1985. - № 6. - С. 38 - 42.

132. Степовая Е. А., Новицкий В. В., Гольдберг В: Е., Рязанцева Н. В. с соавт. Особенности состояния мембран и метаболизма эритроцитов у больных раком легкого // Вопросы онкологии. 2004. -№ 1. - С. 63 - 67.

133. Швембергер И. Н., Гинкул JI. Б. Апоптоз: роль в нормальном онтогенезе и патологии // Вопросы онкологии. 2002. - Т.48. - №2. -С. 153-158.

134. Творогова М; Г., Титов В. Н. Щелочная фосфатаза: методические приемы исследования и диагностическое значение // Лаб. дело: ,- 1991. -.№11. -С 10-17.

135. Титов В. Н. Альбумин, транспорт ненасыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдром // Клинич. лаб. диагностика. 1999. -№4. — С.З - 11.

136. Трахтенберг А. X. Рак легкого. -М.: Медицина, 1987. -304 с. .

137. Туинов Л. А; Механизмы естественной детоксикации иантирадикальной защиты // Вестник РАМН. 1995. - № 3. - С. 9-13.

138. Уманский С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология. 1996. — Т. 30, вып. 3. — С. 487 — 502.

139. Федосеев Г. Б., Сыромятникова Н. В., Лабода Е. В. Характеристика обмена серотонина при различных формах неспецифических заболеваний легких // Клиническая медицина. — 1987. № 12. - С. 80 — 85.

140. Хоменко А. Г., Озерова Л. В., Ерохин В. В. Диагностика и лечение фиброзирующих альвеолитов // Терапевтический архив. — 1987. — № 3. С. 46-48.

141. Худолей В. В. Нерешенные вопросы и перспективы сравнительной онкологии // Вопросы онкологии. 1992. — №11. - С. 13451355.

142. Хышиктуев Б. С., Хышиктуева Н. А., Иванов В. Н. Методы определения продуктов перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха и их клиническое значение // Вопр. мед. химии 1990. -№ 1.-С. 13-15.

143. Чиссов В. И., Трахтенберг А. X., Франк Г. А. Злокачественные новообразования легких // Российский онкологический журнал. 2003. -№ 2. - С. 4- 10.

144. Чучалин А. Г. Основные направления в изучении патологии органов дыхания // Терапевтический архив. 1987. - №3. - С. 52 - 54.

145. Шубич М. Г. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и при патологии. М.: Медицина, 1980. - 224 с.

146. Яновская А. С. Способ определения популяции лимфоцитов в мазках // Бюллетень экспериментальной биологии. 2000 - №29. - С. 58 -69.

147. Ярилин А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. -N 6. - С. 10 - 23.

148. Ярилин А. А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме // Пат. Физиол. 1998. - № 2. - С. 38 - 48.

149. Abbas А. К. Die and let live elimination dangerous lymphocytes // Cell. - 1996. - Vol. 84. - P. 655 - 657.

150. Anisimov V. N. Carcinogenesis and aging // Adv. Cancer Res. 1983. -V.40.-P. 265-324.

151. Ashkenasi A., Dixit V. M. Death Receptors: Signaling and Modulation // Science. 1998. -V. 281. -P. 1305-1308.

152. Barr R. D. Lysosomal acid hydrolases in human lymphocyte subpopulations // J. Haematol. 1976. - V. 32. - P. - 565 - 572.

153. Bates S., Vousden К. H. Mechanisms of p53-mediated apoptosis // Cell. Mol. Life Sci. 1998. -V. 55 (1). -P. 28-37.

154. Berlett B. S., Stadtman E. R. Protein oxidation in aging disease and oxidative stress //J. Biol. Chem. 1997. - V. 272 (33). - P. 20313-20316.

155. Bertram J. S. The molecular biology of cancer. —- MokAspects MecL, 2001, vol. 21, p. 167-180.

156. Billings С. H., Howard P. Asbestos exposure, lung cancerand asbestosis. — Monaldi Arch. Chest Dis., 2000, vol. 55p. 151-162.

157. Borther C. D., Adenburg N. В. E., Cidlowski J. A. The role of DNA fragmentation in apoptosis // Trends in Cell Biol. 1995. - Vol. 5. - P. 21 - 26.

158. Brown I. R. Serum albumin: amino acid sefuence. Albumin structure,ifunction and uses. -New York: Academic Press, 1985. P. 161-245.

159. Buja L. M., Eigenbrodt M. L., Eigenbrodt E. N. Apoptosis and necrosis: basis types and mechanisms of cell death //Arch. Path. Lab. Med. 1993.-Vol. 117.-P. 1208- 1214.

160. Buttke Т. M., Sandstrom P. A. Oxidative stress as mediator of apoptosis // Immunol. Today. 1994. - Vol. 15. - P. 7 - 10.

161. Campisi J. Senescent cells, tumor suppression, and organismal aging: Good citizens, bed neighbors // Cell. 2005. - Vol.120. - P. 5123 -5125.

162. Carson D. A., Ribeiro J. M. Apoptosis and disease //Lancet 1993. — Vol. 341.-P. 1251- 1254.

163. Chandra D., Liu J. W., Tang D. G. Early Mitochondrial activation and cytochrome с upregulation during apoptosis // The journal of biological chemistry. -2002. -Vol. 277. -N. 52. P. 50842 - 50854.

164. Cohen J. J. Apoptosis: the physiologic pathway of cell death // Immunol. Today. -1993. Vol. 14. - P.126-130.

165. Cohen J. J., Ducke R. C., Fadok V. A., Sellins K. S. Apoptosis and programmed cell death in immunity //Ann. Rev. Immunol. 1992. - Vol. 10. - P. 267-293.

166. Cross S. A., Ewen S. W., Cross S. A., Rost F. W. A study of metods available for cytochemical localisation of histamin by fluorescence inducede with o-phtaldehyde or acetaldehyde / Histohem J. 1971 - Vol. 3. - 471-476 p.

167. Darzynkiewicz Z., Traganos F. Measurement of apoptosis // Advantage Biochemistry Engineering Biotechnology. 1998. - Vol. 62. - P. 104 — 111.

168. Dean R. Т., Fu S., Stacker R. et al. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation // Biochem. J.- 1997.-V.324 P.l-18.

169. Delvenne P., Hubert P., Jacobs N. Epithelial metaplasia: an inadequate environment for antitumor immunity // Trends in Immunology. 2004. - Vol. 25.—P. 169- 172.

170. Dichenson J. M., Stephen Hill I. Integrations between adenosine Al -and histamine Hl-receptors // Institute Biochemistry. 1994. - № 8. - P. 959 -969.

171. Dive C., Evans C. A., Whetton A. D. Induction of apoptosis newtargets for cancer chemotherapy // Semin. Cancer Biol. 1994. - Vol. 3. — P. 417 -427.

172. Eggleston G. Mendelsohn // Amer. J. Med. 1979 - V. 66. - P. 757764.

173. Fabisiak J. P., Tyurin V. A., Tyurina Y. Y. et al. Nitric oxide dissociates lipid oxidation from apoptosis and phosphatidylserine extemalization during oxidative stress // Biochemistry. 2000. - V. 39. - P. 127-138.

174. Fabisiak J.P., Tyurin V.A., Tyurina Y.Y. et al. Random versus selective membrane, phosphohpid oxidation in apoptosis: role of phosphatidylserine // Biochemistry. 1998. - V. 37. - P.13781 - 13790.

175. Fadok V.A., Voelker D.R., Champbel P. A. et al. Exposure of phosphatidilserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggered specific recognition and removal by macrophages // Journal' Immunology,— 1992. — Vol. 48,№15. -P. 2207-2216.

176. Fong K. et al. Molecular pathogenesis of lung cancer. J. Thorac. Cardiovasc. Surg., 1999, vol. 118, p. 1136-1142.

177. Foster J. F. Albumin: Structure, Function and Use //'Biochem. Biophys. Acta. 1993. - V.665. - P. 454 - 462.

178. Gellatly K. S., Moorhead G., DuffS., Lefebvre D. D., Plaxton W. C. Highly sensitive technique for measuring human peripheral- blood' lymphocyte activity // Plant Physiology. 1994. - P. 223 - 232.

179. Gross A., McDonell J. M., Korsmeyer S. J. Bcl-2 family members and the mitochondria in apoptosis // Genes Dev. 1999. -Vol. 13. -N. 15. - P. 1899-1911

180. Gurtu V., Kain S. R., Zhang G. Fluorometric and colorometric detection of caspase activity associated with apoptosis / Ann. Biochem. 1997. -Vol. 251, №4.-P. 98-102.

181. Hailiwell В., Gutteridge J. M. C. Free radicals in biology and medicine. N. Y.: Oxford University Press, 1987. 346 p.

182. Harris D. Regulation of antioxidant enzymes // FASEB J. 1992.

183. Vol. 6, № 9. P. 2675 - 2683.

184. Hengartner M.O. The biochemistry of apoptpsis // Nature. -2000. -Vol. 407. -P. 770-776.

185. Horvitz H. R., Yuan J. A first insight into the molecular mechanisms of apoptosis // Cell. 2004. - Vol.116. - P. 53 - 56.

186. Huang D.C.S, Hahne M., Schroeter M. et al. Activanion of Fas by FasL induces apoptosis by a mechanism that cannot blocked by Bcl-2 or Bcl-XL // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1999. Vol. 96. - P. 14871 - 14876.

187. Huppertz В., Frank H.G., Kaufmann P. The apoptosis cascade-morphological and immunohistochemical methods for its visualization / В .Huppertz, // Anat. Embryol. (Berl). 1999. -V. 200 (1). - P. 1-18.

188. Ichihara F., Kono K., Takahashi A. et al. Increased populations of regulatory T cells in peripheral blood and tumor-infiltrating lymphocytes in patients with gastric and esophageal cancer // Immunity. 2004. - Vol. 21. - P. 503-514.

189. Inohara N., Ekhterae D., Garcia I. et al. Mtd — a novel Bcl-2 family member activates apoptosis in the absence of heterodimerization with Bcl-2 and Bcl-XL // The journal of biological chemistry. -1998. -Vol. 273. N. 15. P. 8705-8710.

190. Jacobson M.D., Weil M., Raff M.C. Programmed cell death in animal development //Cell. 1997. - V. 88. - P. 347-354.

191. Kawajiri К., Nakachi К. The CYP1A1 gene and cancer susceptibility //Crit. Rev. Oncol. Hematol. 1993.-V. 14. - P: 77 - 87.

192. Kidd V. J; Proteolytic activities that mediate apoptosis // Annu. Rev. Physiol. 1998. - V.60. - P. 533 - 573. .

193. Kirsch D. G., Doseff A., Chau B. N. et al. Caspase-3-dependent cleavage of Bcl-2 promotes release of cytochrome с // The journal of biological chemistry. 2001. -Vol. 274. - №30. - P. 21155-21161.

194. Kitamura H. et al. Atypical adenomatous hyperplasiaof the lung: implications for the pathogenesis of peripheral: lungadenocarcinoma // Am: J: Clin. Pathoh 1999:- Vol.111.-P: 610,-615.

195. Klaus G.G.B., Kunki A. The role of germinal centers in the generation of immunological memory // Siba Faund. symp. 1982. - Vol. 84. - P. 265 - 280.

196. Korshunov S.S., Krasnikov B.F., Pereverzev M.O. et al. The antioxidant functions of cytochrome с II FEBS Lett. 1999. -V.462.-P. 192198;

197. Kroemer G. Mitochondrial implication in apoptosis. Towards an endosymbiont hypothesis of apoptosis evolution // Cell Death Differ. 1997. -V.4.-P. 443-456.

198. Maciorowski Z., Delic V., Padoy E. et al. Comparative analysis of apoptosis measured by Hoechst and flow cytometry in non'Hodgkin's lymphomas / Cytometry. 1998. - Vol. 32, №6. - P. 44 - 50.

199. Majno G., Joris I. Apoptosis, oncosis and necrosis: an overview of cell death // Amer. J. Path. 1995. - Vol. 146. - P. 3 - 15.

200. Martin A. G., Feamhead H. O. Apocytochrome с blocks caspase-9 activation and Bax-induced apoptosis // The journal' of biological chemistry. -2002. -Vol. 277. P. 50834-50841.

201. Muzio M. Signalling by proteolysis: death receptors induce apoptosis // Int. J. Clin. Lab. Res. 1998. - V.28. -P. 141-147.

202. Nechushtan A., Smith C.L., Lamensdorf I. et al. Bax and Bak coalesce into novel mitochondria-associated clusters during apoptosis // The journal of cell biology.-2001.-Vol. 153.N.6.-P. 1265-1276.

203. Nomura M., Shimizu S., Ito T. Apoptotic cytosol facilitales Bax translocation to mitochondria that involves cytosolie factor regulated by Bcl-2 // Cancer research. -1999. -Vol. 59. -P: 5542-5548.

204. Potten C.S., Wilson J.W., Booth C. Regulation significance of apoptosis in the stem cells of the gastrointestinal epithelium // Stem cells. -1997. Vol. 15.-N. 2. -P.82-93.

205. Raff M. Cell suicide for beginners // Nature. 1998. - V.396. -P. 119-122.

206. Renkvist N. et al. A listing of human tumorrecognized,by T cells. — Cancer Immunol. 2001. vol. 50; p. 3-10.

207. Rinkenberger J. L., Korsmeyer S. J. Errors of homeostasis and deregulated apoptosis // Curr. Opin. Genetics &Development. 1997. - Vol. 7 -P.569-596.

208. Roya S., Nicholsona D.W. Cross-talk in cell death signaling // The journal of Experimental Medicine. 2000. - Vol. 97. - N. 11. - P. 2403 - 2404.

209. Sahara S., Aoto M., Eguchi Y. et al. Acinus is a caspase-3-activated protein required for apoptotic chromatin condensation // Nature. 1999. -Vol. 401.-№6749. -P. 168-173.

210. Skulachev V.P. Mitochondria in the programmed death phenomena; a principle of biology: "It is better to die than to be wrong" // IUBMB Life: -2000: Vol.49. - P. 365 - 372.

211. Stacker S. A. Lymphangiogenesis and cancer metastasis. —Nat. Rev. Cancer. 2002. - Vol. 2. - P. 573 - 583.

212. Stadtman R. E.3 Levine R. L. Protein oxidation // Ann. NY Acad. Scien.-2000.-Vol. 899.-№ l.-P. 191-208.

213. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide // Science. -1995. — Vol.267. P. 1445-1449.

214. Storey К. B. Oxidative stress: animal adaptations in nature // Brazilian J. of Medical and Biological Research. 1996. - Vol. 29. - № 12. - P. 1715 - 1733.

215. Taylor R. et al. Passive smoking and lung cancer: acumulative meta-analysis. — Aust. N. Z. J. Public Health. 2001. - Vol. 25. - P. 203 -205.

216. Thiery J. P. Epithelial-mesenchymal transitions in tumorprogression. — Nature Cancer Review. 2002. - Vol. 2. - P. 442 - 454.

217. Thompson С. B. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease // Science. 1995. - V.267. - P.1456-1462.

218. Tisdale M. J. Cancer anorexia and cachexia. — Nutrition. 2001. -Vol. 17.-P. 438-445.

219. Tompson С. B. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease //Science. 1995. - Vol. 267. - P. 1456 - 1462.

220. Trigatti B.L., Gerber G.E. A direct role for serum albumin in the cellular up-take of long-chain fatty acid // Biochemical Society. — London: Acad. Scien.-1998.-Vol. 89. -P. 19-28.

221. Wang X. The expanding role of mitochondria in apoptosis // Genes Dev. 2001. - Vol. 15. - № 22. - P. 2922 - 2933.

222. White A., Hadler P., Smith E. et al. Principles of Biochemistry. New York: McGrew-Hill Book Company, 1981. - 1878 p.

223. Williams G. M. Mechanisms of chemical carcinogenesis and application in human cancer risk assessment. Toxicology. - 2001. -Vol. 166.-p. 3- 10.

224. Wong H. R., Wispe J. R. The stress response and the lung // Am. J. Physiol. 1997. - Vol. 27. - №3. - P. 21 - 29.

225. Woo E., Yen H., Chu C. et al. Regulatory T-cells from lung cancer patients directly inhibit autologous T-cell proliferation // Journal immunology. -2002. Vol. 168. - P. 4272 - 4276.139

226. Wyllie A. H., Kerr J. F. R., Currie A/R. Cell death: the significance of apoptosis //Int. Rev. Cytol. 1980. - Vol. 68. - P. 251 - 306.

227. Zhu L., Ling S., Yu Z.-D. et al. Modulation of mitochondrial Ca2+ homeostasis by Bcl-2 // The journal of biological chemistry. 1999. -Vol. 247. -№47.-P. 33267-33273.

Информация о работе

Быстрова, Екатерина Вячеславовна
кандидата биологических наук
Саранск, 2009
ВАК 03.00.25

Диссертация

Цитоэнзиматический статус и апоптоз лимфоцитов периферической крови при раке легкого - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы