Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цито- и морфогенез первичного рака печени на фоне описторхоза

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Цито- и морфогенез первичного рака печени на фоне описторхоза"

На правах рукописи

Хадиева Елена Дмитриевна

ЦИТО- И МОРФОГЕНЕЗ ПЕРВИЧНОГО РАКА ПЕЧЕНИ НА ФОНЕ ОПИСТОРХОЗА

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология, 14.03.02 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

^ьь

Тюмень-2010

004601566

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научные руководители:

доктор медицинских наук, Соловьев Георгий Сергеевич профессор

доктор медицинских наук, профессор, заслуженный

деятель науки РФ, Бычков Виталий Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских профессор

наук, Семченко Владимир Васильевич

ФГОУ ВПО Омский государственный аграрный университет, г. Омск

доктор медицинских профессор

Ведущая организация

наук, Гиниатуллин Равиль Усманович

ОГУЗ Центр организации специализированной медицинской помощи «Челябинский государственный институт лазерной хирургии», г. Челябинск

: ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится « » (уСс&иЛ!_2010г. в ' час на заседании Диссертационного Совета Д 208.101.02 при ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава», 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава»

Автореферат разослан « ¿У 2010г.

Ученый секретарь {чА^яУ,__

диссертационного совета ' ' С. А. Орлов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Экологическая онкология - это раздел общей и частной онкологии, изучающий канцерогенное влияние на организм и разрабатывающий меры профилактики развития опухолей. Доля нагрузки биотических и абиотических факторов в канцерогенезе человека достигает 80,0% (Пальцев М.А., 2004). Профилактические меры более эффективны при воздействии абиотических факторов, так как ликвидация антропогенных флюктуации, прежде всего промышленных загрязнений, существенно снижает онкологическую заболеваемость и смертность населения. Воздействие на биоту (вирусы, паразиты и др.) в качестве профилактических мероприятий малоэффективно, а ликвидация их как видов - задача невыполнимая (Сергиев В.П., 2003). Биологические агенты, например, Opisthorchis felineus, обладают большой экологической валентностью и могут сохранять целостность и способность к дальнейшему развитию в широком диапазоне перемен природы (Беэр СЛ., 2005). Кроме того, мариты (половозрелые описторхисы) способны сохраняться как вид путем адаптивных преобразований, включая генетические (Ильинских E.H. с соавт., 2000).

Западная Сибирь богата запасами нефти, газа, лесом и биоресурсами (рыбы семейства карповых, сиговых и осетровых); в 2000 году доля газа и нефти составила 80,0% и 60,0% соответственно от всего объема, добытого в России углеводородного сырья. Промышленное освоение нефтегазовых провинций, лесоразработки и рыбный промысел осуществляются в основном в зоне гиперэндемичного очага описторхоза — системного паразитарного заболевания человека, существенно снижающего активность и потенциал жизни ин-вазированного населения региона. Привычка коренного населения многократного употребления в пищу сырой и недостаточно обезвреженной рыбы семейства карповых, прежде всего, Leuciscus idus (язь), которые до 80% поражены метацеркариями Opisthorchis felineus в течение 1-2 лет проживания прививается у пришлых лиц и поэтому пораженность описторхисами превышает 80,0% взрослого населения очага. Гельминтоз проявляется в суперинвазионной форме, которая характеризуется опасными для здоровья и жизни осложнениями, прежде всего, развитием рака печени, где происходит многолетняя вегетация паразитов.

Заболеваемость раком печени населения гиперэндемичного очага составляла в разные годы 35,7-49,8 на 100000 населения, что в 10-15 раз выше показателей заболеваемости в регионах без описторхоза (Шайн A.A., 1974, 2003). В связи с этим возникает необходимость выявления конкретной роли описторхозной инвазии в развитии рака и на основе полученных научных фактов разработать стратегическую концепцию предупреждения онкогенеза, что послужит существенным вкладом в комплекс мер по снижению заболеваемости и смертности населения. Необходимость разработки превентивных мер в контексте гепатоканцерогенеза диктуется еще и тем, что лечение больных раком печени в настоящее время является пока мало перспективным (Baweja М. et all., 2005).

Цель исследования - выявить цито- и морфогенез рака печени на фоне суперинвазионного описторхоза.

Задачи исследования:

1. Проследить эволюцию клеточных преобразований, в том числе ком-митированных клеток, печени при описторхозе на экспериментальном и клиническом материалах.

2. Выявить динамику цито- и морфогенеза рака печени у людей и при экспериментальном моделировании неоплазм на фоне суперинвазионного описторхоза.

3. Определить молекулярно-генетические изменения у больных опи-сторхозом, в тканях печени и опухолей человека и животных.

4. Провести сравнительный анализ канцерогенеза печени при паразито-ценозе: описторхис + вирус гепатита С.

Научная новизна работы. Впервые в эксперименте и на клиническом материале выявлены перманентная пролиферация и дифференцировка комми-тированных клеток печени при описторхозной инвазии. На светооптическом и ультраструктурном уровнях проведено изучение и дана характеристика клеточных преобразований пролиферирующих элементов и их дефинитивных структур при суперинвазионном описторхозе.

Прослежены цитогенез холангиоцеллюлярного рака печени, его топография и морфогенетические аспекты. Установлены молекулярно-генетические нарушения у больных суперинвазионного описторхоза (СО), в ткани печени, опухоли на клиническом и экспериментальном материалах. Обнаружены гисто- и морфогенетические особенности рака печени при сочетании вирусного гепатита С и СО.

Теоретическая и практическая значимость работы. Раскрыты маркерные феномены в печени при описторхозе в различных режимах поступления инвазионного материала. Выявлены комплекс механизмов регуляции биологических потенций коммитированных клеток печени, эволюция их превращений, роль в цитогенезе эпителиев, цито- и морфогенезе опухолей данного органа. Установлены многочисленные мутации генетического аппарата человека и животных в хронической фазе гельминтоза, что является предпосылкой перманентной пролиферации элементов холангиоцеллюлярного дифферона и формирования опухолевого роста. Результаты исследования имеют фундаментальное и прикладное значения, могут быть использованы в учебном процессе, при подготовке пособий, лекций по клеточной биологии, гистологии, патологической анатомии и онкологии

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Описторхисы при многочисленных повторных поступлениях в организм человека и животных вызывают перманентную пролиферацию и диффе-ренцировку долгоживущих коммитированных клеток печени вследствие мутации каскада генов, отвечающих за апоптоз и пролиферацию элементов холангиоцеллюлярного дифферона.

2. В эксперименте на фоне суперинвазионного описторхоза печеночные канцерогены (Ы - ПЕЫА, N - ЭМКА) инициируют из коммитированных кле-

ток доброкачественные новообразования и холангиокарциномы с нежной и грубой стромой, локализующиеся в портальных трактах, паренхиме перипро-токовых н прогоковых пространствах.

3. Цито- и морфогенез холангиоцеллюлярного рака печени у человека с суперинвазионным описторхозом повторяют экспериментальную модель без формирования доброкачественных форм.

4. При паразитоценозе (описторхис + вирус гепатита С) возникают диморфные карциномы печени с высоко расположенной зоной трансформации коммитированных клеток: холангиогепатоцеллюлярный рак с преобладанием первого или второго компонентов.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационного исследования доложены и обсуждены на 2 Международном семинаре по паразитарным зоонозам (Тайланд, 1995), совещании «Окружающая среда и проблемы паразитарного заражения (Санкт-Петербург, 1996), 7 Европейском мультиколлоквиуме по паразитологии (Италия, 1997), Международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья» (Тюмень, 1997), Международном Конгрессе по гастроэнтерологии (Вена, 1998), окружной научно-практической конференции «Актуальные проблемы судебной и клинической медицины» (Ханты-Мансийск, 1999), VI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999), окружной научно-практической конференции «Хирургия печени, желчных протоков и поджелудочной железы» (Ханты-Мансинск, 2001), Международном Форуме по проблемам науки, техники и образования, 2002, VI Российском съезде врачей-инфекционистов (Санкт-Петербург, 2003), Международном сипозиуме «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» (Тюмень, 2005), Международной конференции гистологов, посвященной памяти проф. П.В.Дунаева (Тюмень, 2008), III съезде Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009), II Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2010), заседаниях Тюменского областного общества патологоанатомов и проблемной комиссии «Морфогенез клеток, тканей и органов человека в онтогенезе» (Тюмень, 2008, 2010). По материалам диссертации опубликовано 32 печатных работы, из них 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии с секционным курсом и гистологии, цитологии, эмбриологии ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росдрава», патологической анатомии и судебно-медицинской экспертизы, гистологии, цитологии, эмбриологии ГОУ ВПО ХМАО-Югры «Ханты-Мансийская государственная медицинская академия», в практику патолого-анатомического отделения У ХМАО-Югры «Окружная клиническая больница».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 5 таблицами и 45 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов и выводов.

Список литературы содержит 229 источников (132 отечественных, 97 иностранных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Модель описгорхоза создавали у сирийских хомяков - самцов массой 95,8±4,8 г., содержащихся в стандартных условиях вивария (Лоскутова З.Ф., 1990). Метацеркарии из язей (Leuciscus idus) одного биотопа выделяли путем ферментативного переваривания по методу Глазкова Г.А. (1977). При выполнении экспериментов соблюдались все правила работы с лабораторными животными (Приказ МЗ РФ №755 от 12.08.77).

Животные разделены на V групп: I группа - контрольная, II группа -животные с однократным заражением 50 метацеркариями O.felineus, суперинвазии проводили через 20 суток 50 личинками, троекратно (III группа). Опухоли печени у хомяков (IV, V группы) моделировали по методу Bhamarapravati, N. Thamavit W. (1978) с модификацией Бычкова В.Г. (1988). Ткань печени фиксировали в 10% нейтральном формалине, 2% забуференном растворе че-тырехокиси осмия (префиксатор - глютаральдегид на 0,2 М фосфатном буфере. Препараты окрашивали гематоксилином и эозином, альциановым синим, по Слинченко, Хейлу, Ван Гизон, реактивами Шиффа по Мак-Манусу и Ша-бадашу с контролями амилазой, толуидиновым синим. Ферменты выявляли по Гомори (ЩФ), Берстону (КФ), Лойда-СДГ (Лилли Р., 1969).

Трансмиссионная электронная микроскопия выполнялась на микроскопе LEO-912 АВ (Zeiss). Апоптотический индекс (%о) определяли на полутонких срезах, митотический индекс гепатоцитов (МИГ) и холангиоцитов (МИХ) выражали в %о. Прогрессивно-регрессивный индекс (P/R) представляет отношение суммы регенераторных показателей гепатоцитов (МИГ, ДГ, ГГ) к величине апоптоза (АИГ), вызванных различными индукторами при данной инвазии (Бычков В.Г. с соавт., 2006). С целью выявления морфологических, иммуноги-стохимических (ИГХ) особенностей холангиоцеллюлярного рака печени при суперинвазионном описторхозе отобран секционный и биопсийный материалы. Фрагменты ткани печени и опухоли фиксировали в 10% нейтральном формалине с последующим приготовлением парафиновых блоков. С каждого блока делали серийные срезы толщиной 5 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

ИГХ-исследования проводили непрямым иммунопероксидазным методом реактивами по рекомендациям фирмы-изготовителя. Результаты ИГХ -реакции оценивали методом полуколичественного анализа: а) число иммуно-реактивных клеток: «-» - менее 5%, «+» - 5-25%, «+++» - 50-75%, «++++» - 75100%; б) интенсивность окраски: «+» - слабая экспрессия, «++» - сильная экспрессия. Пролиферативную активность оценивали путем подсчета клеток, экс-прессирующих Ki - 67 в %. Для проведения ИГХ - исследования использовали первичные антитела: Ki-67, р-53, bcl-2, Cytokeratin 7, Cytokeratin 20, EMA. Применяли наборы: c-erbB-2 Oncoprotein Kit, Estrogen/Progesteron Receptor Kit. Все антитела и реактивы фирмы Novo Castra Laboratories Ltd.

Таблица 1

Экспериментальная часть

№ п/п Модель п Объект исследования Методы исследования

1. Описторхоз 220 Печень Гистологический, гистохимический, электронно-микроскопическнй

2. Суперинвазн-онный описторхоз (СО) 180 Печень Гистологический, гистохимический, электронно-микроскопический, мо-лекулярно-генетический

3. CO + N-DMNA (70 иг/кг) 88 Печень, опухоль Гистологический, гистохимический, электронно-микроскопический, мо-лекулярно-генетический

4. CO + N- DENA (70 мг/кг) 82 Печень, опухоль Гистологический, гистохимический, электронно-микроскопический, мо-лекулярно-генетический

Клиническая часть

№ п/п Вариант наблюдения Вид материала Объект исследования п Методы исследования

1. Суперинвазионный описторхоз (СО) Секционный Печень 120 Гистологический, гистохимический, имму-но-гистохимический, молекулярно-генетический

2. СО + ПРП Пункционная биопсия Печень, опухоль 35 35 Гистологический, гистохимический, имму-но-гистохимический, молекулярно-генетический

3. СО + Г1РП Секционный Печень, Опухоль 85 Гистологический, гистохимический, имму-но-гистохимический, молекулярно-генетический

4. СО + ХВГ-С Пункционная биопсия Печень 22 Гистологический, гистохимический, имму-но-гистохимический, молекулярно-генетнческий

5. СО + ХВГ-С Секционный Печень 5 Гистологический, гистохимический, имму-но-гистохимический, молекулярно-генетнческий

Гистологические, иммуногистохимические и электронномикроскопиче-ские исследования проводили в патолого-анатомическом отделении У ХМАО-Югры «Окружная клиническая больница» (гл. врач В.В. Белоусов). Мутацию генов р 53, В - raf, K-ras, c-Kit, р 16, APC выявляли методом ПЦР с соответствующими праймерами в плазме крови больных СО, в печени умерших от хо-

лангиоцеллюлярного рака (ХЦР). У хомяков с суперинвазионным описторхо-зом и ХЦР+СО мутации этих генов определяли в тканях печени в ООО «Центр молекулярно-генетической диагностики Сабирова А.Х.» (г. Тюмень). Дизайн исследования представлен в табл. 1.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Структурные преобразования печени сирийских хомяков при экспериментальном описторхозе. В процессе работы изучалась динамика изменений элементов гепато- и холангиоцеллюлярного дифферонов (ГЦД, ХЦД), однако учитывая то, что на фоне СО в 95,0% наблюдается развитие преимущественно холангиоцеллюлярной карциномы (Бычков В.Г., 1988; Ильинских E.H. с соавт., 2000; Крылов Г.Г., 2005), поэтому в данной работе изложены результаты в основном эволюции клеток ХЦД при первичном и повторном заражениях.

Морфологическое исследование печени при однократном заражении. Патоморфология печени при экспериментальном описторхозе в ранней фазе изучена достаточно подробно (Рычагова И.Г., 1995; Крылов Г.Г., 2005; Вакулина О.Э., 2008; Баранов C.B., 2009). Особый интерес представляет преобразование печени на 10 сут заражения животных метацеркариями Opisthorchis felineus: общая плотность инфильтратов занимала 19,2 ± 5,8% площади срезов, причем увеличивается доля эозинофильных лейкоцитов до 24,17 ± 2,02%, плазматических клеток - 18,52 ±1,45%, фибробластов - 9,52 ± 0,8%. В составе клеточных коопераций появляются новые элементы, не наблюдавшиеся в более ранние сроки, - коммитированные клетки (КК), доля их составила 6,92± 0,93%.

КК в данном периоде болезни округлой формы со светлым ядром, цито-плазменно-ядерный индекс составляет 2,1±0,8. Диаметр их колеблется от 24,08 до 29,07 Pix (26,48±0,53, CV = 6,3±1,41). Кроме того, встречаются свободно лежащие КК овальной формы с более темным ядром, цитоплазменно-ядерный индекс - 2,9±0,7, размеры клеток по длиннику колеблются от 39,0 до 49,82 Pix (44,90±1,47, CV = 10,37±2,32), в поперечнике - от 18,36 до 2.6,08 Pix (22,33±0,85, CV = 12,0±2,68). В острую (до 29 сут.) и хроническую фазы экспериментального описторхоза в печени наблюдаются различные процессы в органе - эконише паразитов: иммунное воспаление, гибель паренхиматозных клеток, регенерация их, пролиферативные и мезенхимальные реакции.

Коммитированные элементы (овальные клетки) - дифференцирующиеся стволовые клетки печени (Uryvaeva I.Y., 1992), индукция пролиферации и дифференцировки которых возможна только после тяжелых повреждений генома, причем частичная гепатэктомия к таковым не относится (Урываева И.В., 2001). При описторхозе сирийских хомяков после 10 сут. инвазии в составе инфильтратов появляются коммитированные клетки, которые к 24 сут. полностью созревают в холангиоциты, формирующие дуктулярные структуры. Только единичные коммитированные клетки в процессе дифференцировки эволюционируют в гепатоциты, что подтверждает известное правило Leduc (Leduc E.H., 1964). По мере течения болезни животных пролиферация, диффе-

ренцировка и формирование псевдожелез (провизорные структуры) достигают максимальных потенций после 29 сут. и не заканчиваются к 120 сут. инвазии. Данный процесс становится определяющим в картине преобразований печени при хроническом описторхозе в контексте развития осложненных форм гельминтоза.

Патология печени при суперинвазионном описторхозе сирийских хомяков

7 сутки сунеринвазик. Повторное поступление заразного начала сопровождается обострением воспалительных, деструктивных, пролиферативных реакции, акцент которых в ранний период суперинвазий приходится на холан-гиоцсллюлярнын дифферон. Достоверно, по сравнению с периодом, предшествующим повторному заражению, повышается митотическая активность эпителиальной выстилки протоков (7,16±2,23%о), восстанавливается апокриновая секреторная деятельность клеток.

29 сутки суперинвазин. Данный период гельминтоза характеризуется началом яйцепродукции супсринвазиониыми описторхисами при сохраняющейся активности паразитов первой волны заражения. Определяется резкое расширение и деформация дуктул, форма и размер которых соответствует размеру находящихся в них описторхисов и внутрипротоковых гранулем, включающих метаболиты и яйца гельминтов.

Сохраняется значительной пролиферативная активность холангиоцитов, МИХ - 6,06±1,13%о. Выраженный аденоматоз и папиллосклероз регистрируются преимущественно в крупных протоках, в мелких дуктулах эпителий уплощается. Межклеточные контакты слабые, для клеток характерна обособленность. В отдельных зонах непрерывность эпителиальной выстилки нарушается. Полиморфные ядра ориентированы в клетках на различных уровнях, в ци-топлазменно-ядерном отношении сохраняется тенденция к уменьшению 5,0±1,20. В динамике отмечается снижение слизеобразования и выраженности апокриновой секреции.

62-е сутки суперинвазии. Хронизация суперинвазионного описторхоза сопровождается усилением склеротических процессов, ослаблением степени воспалительных, деструктивных реакций. Выраженность пролиферации холангиоцитов снижается более медленными темпами - МИХ - 4,92±0,78%о , что достоверно (р <0,01) выше, чем в аналогичный период первичного заражения. Для эпителия характерно сокращение секреторной, синтетической активности, слизеобразования. Снижение пролиферативной активности ХЦД происходит более медленными темпами, чем при инвазии, а митотический индекс эпителия достоверно (р < 0,001) превышает аналогичный показатель на 62-е сутки первичного заражения. Подобная реакция прослеживается и в гепатоцеллю-лярном диффероне, где сокращение числа двуядерных и гипертрофированных клеток незначительно. Отражением общей пролиферативной активности печеночной паренхимы является накопление в толще воспалительного инфильтрата эпителиоцитов и формирующихся псевдожелезистых структур. Данный фе-

номен, вероятно, может являться следствием дублирующего ростстимули-рующего влияния различных поколений описторхисов.

Таким образом, при СО наблюдается усиление пролиферации элементов ХЦД, хронизация суперинвазий не сопровождается восстановлением митоти-ческой активности холангиоцитов и межклеточных связей. Для клеток характерна дисплазия с недоразвитием органелл, наиболее выраженная во вновь образованных эпителиоцитах. Обобщая результаты эксперимента можно с уверенностью утверждать, что при СО происходит перманентная пролиферация элементов ХЦЦ (коммитированные клетки) с дальнейшей дифференцировкой их в холангиоциты. В процессе дифференцировки ультраструктурная организация холангиоцитов позволяет разделить их на 2 субпопуляции: а) холангиоциты с регенераторной гиперплазией двуядерного эпителия, б) эпителиоциты, формирующие внепротоковые псевдожелезистые структуры. Эволюция последних развивается по 2 вариантам - кистозный и склеротический.

Результаты моделирования холангиокарцином у хомяков с суперинвазионным описторхозом

Динамика развития опухолей печени при затравке описторхозных животных канцерогенами наиболее полно повторяет эволюцию клеточных превращений при суперинвазионной форме экспериментального описторхоза. При повторяющихся суперинвазиях печень из относительно покоящегося органа превращается в постоянно пролиферирующий.

При сочетанном воздействии описторхисов и канцерогена выраженность гиперплазии клеток значительно превышала таковую только при инвазии. Клеточные пролифераты распространялись в виде обширных полей по портальным трактам, вокруг вен, перисинусоидально, сдавливая и оттесняя печеночные дольки. Площадь пролифератов к 30 сут. от начала инвазии и 10 сут. после дачи канцерогена составляла 18,00±2,11% поля зрения при малом увеличении микроскопа. Гепатоциты в этот срок эксперимента выглядели с минимальными изменениями, однако отмечались апоптотические тельца и скопления макрофагов вокруг них. К 60 сут. опыта определялась тенденция к образованию железистых структур из коммитированных клеток и холангиоцитов, которые в составе желез секретировали слизь. Новообразованные железы и недифференцированные клетки занимали до 1/3 площади препарата. В более поздние сроки железы увеличивались, эпителий их активно секретировал ШИК-позитивный субстрат, диаметр желез достигал размеров сегментарных и долевых протоков. К 180, 240 сут. опыта наблюдались превращения клеточных элементов, которые классифицированы как гиперплазия и доброкачественные опухоли при экспериментальном химическом канцерогенезе.

I. Желчепротоковая гиперплазия возникает в 100% случаев экспериментального описторхоза при повторных заражениях. Коммитированные клетки дифференцировались только в элементы ХЦД. Узлы - регенераты и отдельные гепатоциты наблюдались в печени без связи с желчепротоковой гиперплазией. Необходимо отметить, что новообразованные железы встречаются в большом количестве под капсулой печени и внутри ее. Эволюция превраще-

ния этих желез синхронно повторяет динамические изменения железистых структур, расположенных интрамурально. В протоковом эпителии отмечалось снижение активности деления эпителиоцитов (МИ - 7,16±3,34%о).

Изменения в печени при суперинвазионном описторхозе и воздействии канцерогена укладываются в картину фиброкистозной болезни сирийских хомяков. Данные Hover K.L. (1985) и наши наблюдения показывают, что кисты не переходят в злокачественные новообразования, в чем можно убедиться при изучении выстилки (уплощение эпителиоцитов, отсутствие атипичных форм клеток, чрезвычайно низкий уровень митотической активности (МИ-0,02%о) и регрессивная динамика их при удлинении сроков эксперимента).

II. Билиарпан цистаденома. В 22 наблюдениях в печени определялись образования неправильной формы и четкими границами, беловатого с желтым оттенком цвета. Размеры опухолей чрезвычайно вариабельны в зависимости от срока эксперимента, диаметр их колебался от 3 до 23 мм. Коэффициент множественности 1,44. Принципиальным отличием от кист при фиброкистозной болезни является большое количество сосочковых и псевдососочковых структур и состояние выстилающих внутреннюю поверхность опухоли эпителиоцитов. Перехода цистаденомы в аденокарциному не наблюдается.

III. Цистаденокарцинома отмечена у б хомяков. Существенных макроскопических отличий от цистаденомы эта опухоль не имеет. Возникновение злокачественного новообразования наблюдалось только после 360 сут эксперимента. Эпителий, выстилающий опухоль, отличался по своим фенотипиче-ским признакам от клеток при гиперплазии, фиброкистозной болезни и циста-деномах. Клетки с гиперхромными ядрами, иногда занимающие почти всю цитоплазму, отличаются полиморфностью; встречаются многочисленные напластования одних крупных клеток на другие и инвазия их в окружающую соединительную ткань. В некоторых случаях отмечается, наряду с атипичными клетками, эпителиоциты с выраженными метапластическими превращениями по типу колоноцитов.

IV. Хомапгиокарцинома встретилась в 39 случаях, все опухоли нелетальные, коэффициент множественности 1,14. Макроскопически опухоль представлена единичными или несколькими узлами, поверхность которых гладкая или бугристая. Границы опухоли четкие или размытые. Ткань неоплазм плотной консистенции, на разрезе - сероватого или беловато-желтого цвета, спаяна с окружающими тканями и органами. В 3 наблюдениях отмечались кровоизлияния или некрозы. Микроскопическое исследование позволило выделить несколько типов холангиокарцином: аденокарциномы с нежной стромой, аденокарциномы с грубой стромой, папиллярные и миксоидные аденокарциномы.

Возникновение опухолей произошло у животных с суперинвазиями через 270 сут., когда максимальная потеря массы тела хомяков достигала 23,8% но сравнению с контрольной группой (без инвазии).

Таким образом, при частых суперинвазиях в течение 270-360 сут. эксперимента опухоли печени сирийских хомяков не развивались. Не возникали неоплазмы и при затравке животных одним канцерогеном. Возникновение и раз-

витие опухолей наблюдалось только при сочетании описторхозной инвазии и N - БЕЫА и ВМЫА. Суперинвазии (от 4-х до 10) значительно увеличивали частоту выхода опухолей эпителиальной природы и уменьшали продолжительность латентного периода с 360 сут. до 270 сут.

Патоморфология печени при СО у населения гиперэндемичного очага

Хронический описторхоз с суперинвазиями характеризуется продуктивным холангитом с экссудативным компонентом различной степени выраженности и формированием фиброза печени. Нередко воспаление имеет гнойный характер, заболевание осложняется абсцессами печени, сепсисом и желчным перитонитом. Независимо от частоты суперинвазий в печени постоянно наблюдается пролиферация коммитированных клеток с дифференцировкой в хо-лангиоциты и формированием новообразованных тубулярных и железистых структур.

Патология печени при паразитоценозе (описторхисы + вирус гепатита С) характеризуется выраженным фиброзом: перидуктулярный, портальный, перидуктулярный, нодулярный и перицеллюлярный; отмечается феномен «капилляризации» синусоидов и склероз стенок центральных венул. По шкале Кпос1е11 степень склероза достигала 2,8 балла, индекс гистологической активности ХВГ-С - 2,0 балла, некроз гепатоцитов - 4,1 балла.

У пациентов ХВГ-С в сочетании с СО отмечена активная пролиферация коммитированных (овальных) клеток (КК). Несмотря на гибель клеток гепато-целлюлярного дифферона при паразитоценозе, дифференцировка коммитированных клеток в гепатоциты наблюдается редко (<2,5%), которые также подвергаются дистрофии и апоптозу.

Таким образом, суперинвазионный описторхоз заметно экзальтирует структурно-функциональную патологию печени больных ХВГ-С. При паразитоценозе (вирус гепатита С + ОйзПпеиз) имеет место более интенсивное повреждение гепатоцитов вследствие фибропластических реакций печени, характерных для описторхоза («капилляризация» синусоидов, перицеллюлярный фиброз и др.).

Развитие злокачественных опухолей возникает за пределами билиар-ного тракта: из недифференцированных элементов ХЦЦ формируются мелкие комплексы анаплазированных клеток с дальнейшим ростом и размножением. В некоторых наблюдениях отмечаются поля недифференцированных клеток с аппозиционным или инфильтрирующим ростом, среди которых выявляются железистые образования из клеток нормального строения, что свидетельствует о моноклоновости опухолевых и нетрансформированных клеток.

На фоне СО выявлены следующие морфологические формы ПРП: недифференцированный, умереннодифференцированный, холангиоцеллюлярный раки с нежной и грубой стромой; диморфный (холангиогепатоцеллюлярный) рак возникает на фоне паразитоценоза (О. йНпеив + вирус гепатита С).

Молекулярно-геиетическое исследование. У больных СО с длительным сроком инвазии (более 10 лет) в плазме крови с различной частотой выяв-

лены мутации генов р 53, K-ras, B-raf, c-Kit, р 16, APC. В печени умерших от осложнений холангиоцеллюлярного рака на фоне СО обнаружены в тканях опухоли и прилегающей паренхиме мутации генов р 53 - в 100%, B-raf + р 53 в 50,0%, K-ras и c-Kit - 33,3% н bel 2 - 40,0% ; в отдаленных участках от опухоли - мутация генов K-ras + B-raf обнаружен в 2 наблюдениях.

Среди больных ХВГ - С выявлены мутации генов: K-ras - 8,33%; APC -8,33 %. У больных СО + ХВГ- С обнаружены мутации следующих генов: р53 -50,0% (5ех, 6 ех, 7 ех, 8 ех); р16 - 21,4%; K-ras - 50,0%; B-raf - 42,95%, c-Kit -35,7%), APC - 35,7%. Обнаружены сочетания мутаций генов: р53 + р16 + B-raf; р53 + K-ras + B-raf; K-ras + APC. Выявленные мутации можно считать маркерными, а экспрессия генов в других локусах печени свидетельствует о теоретически возможном мультлцентрическом развитии холангиокарцином.

В процессе изучения болезни в экспериментах и клинике стало очевидным, что на ее модели можно изучить и выявить механизмы развития многих общепатологических процессов и нозологических форм (гиперчувствительность 1-111 типов, иммунопатология, воспаление, регенерация, опухолевой рост, эозинофильные висцеральные поражения, в т.ч. сосудов, вторые болезни). Наиболее оптимальной моделью явился описторхоз для изучения канцерогенеза.

В процессе становления хозяино-паразитарной системы в филогенезе отработаны механизмы регуляции оптимального объема биомассы элементов ХЦД для поддержания O.felineus как вида; стимуляция пролиферации и диф-ференцировки собственных стволовых клеток печени в овальные - коммити-рованные - малые холангиоциты - дифференцированные холангиоциты -псевдожелезы - железистые, тубулярные есть новообразованные структуры «параллельной билиарной системы». Холангиоцеллюлярная выстилка, безусловно, реагирует на ростстимулирующий эффект гельминта с образованием аналогичных гистологических структур (гиперплазия II-III стадий по Автан-дилову Г.Г. (1990). Камбиальные клетки, расположенные под базальной мембраной, дифференцируются и формируют выстилку и железы с возможной последующей кишечной метаплазией эпителия.

При описторхозе (одноразовое заражение) и суперинвазиях без массивных некрозов паренхимы, как после затравки крыс дипином или ретросином (Урываева И.В., 2001), у сирийских хомяков и человека наблюдается интенсивная пролиферация коммитированных клеток (КК) печени повсеместно: в портальных трактах, паренхиме, перисинусоидально вокруг вен, в составе инфильтратов и гранулем. Дифференцировка КК наблюдается преимущественно (92,6%) в элементы ХЦД, эволюция которых предусматривает двувекторные тренды: железистый и склеротический варианты.

В печени хомяков с СО и N-диметилнитрозамином наблюдаются стратегически аналогичные преобразования в печени, но на качественно другом уровне: в процессе моделирования опухолей наблюдается пролиферация коммитированных клеток с выраженными ультраструктурными нарушениями, характеризующими трансформированные клетки, расширение или отсутствие межклеточных связей, интенсивная пролиферация купферовских клеток, ак-

тивная пролиферация эпдотелиальных элементов и формирование сосудистых образований.

С 270 сут. эксперимента в печени формируются холангиокарциномы с нежной и грубой стромой (коэффициент множественности - 1,14), обнаружено, что опухоли не возникали ранее 250 сут эксперимента. В период 250-270 сут. опыта опухоли влияли на макроорганизм, что проявлялось к 320 сут. потерей массы тела fia 28,8% по сравнению с хомяками контрольной группы. Холангиокарциномы хомяков локализовались в портальных трактах, среди паренхимы печени ГЦЦ и перипротоковых структурах.

Таким образом, можно предположить, что индуцированные новообразования развивались синхронно, скачкообразно, из трансформированных клеток ХЦЦ. Анализ патоморфологических изменений паренхимы и стромы печени при суперинвазионном описторхозе у людей подтверждает ранее опубликованные результаты (Зубов H.A., 1973; Глумов В.Я., 1981; Бычков В.Г., 1988; Рычагова И.Г., 1985; Крылов Г.Г., 2005 и др.). На секционном материале гиперэндемичного очага описторхоза выявлены следующие основные патологические преобразования билиарной системы печени: продуктивный холангит, эрозивно-язвеиный холангит с формированием перидуктальных абсцессов, гранулематозное воспаление (в!гутрипротоковые, перипротоковые гранулемы), холангиоэктазы, в том числе, интрамуральные, подкапсульные, внутрикап-сульные; перидуктальный, перидуктулярный, нодулярный, перивенозный и перицеллюлярный фиброз.

В паренхиме органа наибольшие преобразования наблюдаются в холан-гиоцеллюлярном ростке, заключающиеся в перманентно репаративной гиперрегенерации эпителия слизистой оболочки билиарного тракта с многочисленными дефектами в местах контактирования паразита с выстилкой. Независимо от возраста умерших в печени постоянно происходит пролиферация коммити-рованных клеток, эволюция которых повторяет динамику КК у лабораторных животных.

Особенностью патологии печени при паразитоценозе (описторхис + вирус гепатита С) являются более выраженные альтеративные и продуктивные реакции, более интенсивная пролиферация коммитированных клеток печени с преимущественной дифференцировкой в элементы ХЦД, гепатоцеллюлярный дифферон пополняется вновь образованными гепатоцитами менее чем в 2,5% от числа пролиферирующих КК.

Таким образом, О. felineus у лабораторных животных и человека вызывает пролиферацию стволовых клеток печени с дифференцировкой в комми-тированные, а последние - преимущественно в холангиоциты. Избирательная дифференцировка КК в элементы ХЦД детерминирована целенаправленной индукцией ростстимулируютцего фактора паразита с его потребностью в нут-рицевтическом материале и сохранении гельминта как вида. Описторхисы вследствие мутации генов создают пул долгоживущих элементов ХЦД, находящихся в состоянии перманентной пролиферации и дифференцировки.

Репаративная регенерация слизистой оболочки протоков как механизм создания трофической биомассы имеет значение, но оно несравнимо меньше

по сравнению с молекулярно-генетической регуляцией пролиферативного процесса. Кроме того, при хронической фазе экспериментального описторхоза выявлены экспрессия гена VEGER (фактора роста сосудистого эндотелия) и мутация гена EGER - эпидермалыюго фактора роста (Баранов C.B., 2009), т.е. при паразитозе в процессе онто- и филогенеза выработаны оптимальные механизмы трофологической цепи для гельминта и обеспечения условий для ее поддержания (стимуляция пролиферации, ускоренное обновление производных мезенхимы).

Моделирование неоплазм на фоне СО и канцерогенез в печени при опи-сторхозе показали, что экониша O.felineus представляет собой постоянно про-лиферирующий орган вследствие стимуляции стволовых и коммитированных клеток с последующей дифференцировкой их в долгоживущие холангиоциты. Под воздействием инициирующего канцерогена возникает мутация клеток и трансформация их в опухолевые.

Вследствие перманентной пролиферации незрелых элементов ХЦД объясняется преимущественное преобладание холангиоцеллюлярного рака. При сочетании СО и ХВГ-С небольшая доля пролиферирующего пула клеток дифференцируется по линии ГЦД, что реализуется при воздействии инициато-ра(ов) канцерогенеза в виде формирования диморфных опухолей (холангиоге-патоцеллюлярный рак).

Степень дифференцировки зависит от уровня зоны трансформации недифференцированных элементов: чем выше локус возникновения анапласти-ческого пула клеток, тем менее дифференцированным реализуется рак (Коп-нин Б.П., 2000, 2006; Коган Е.А., 2002, 2008).

Ученые допускают зону трансформации на уровне стволовых клеток (Копнин Б.П., 2007). Аналогичные этапы морфогенеза ХЦР и недифференцированного рака выявлены в нашей работе. Исходя из тотипотентности стволовых клеток в случаях их трансформации в злокачественные становится объяснимым феномен диморфных опухолей, часто наблюдаемых в патолого-анатомической практике (Карселадзе А.И., 2009).

В процессе выполнения работы стало очевидным, что описторхоз может послужить различным научным направлениям моделью для изучения цитоге-неза клеток паренхимы печени, канцерогенеза других органов (желудок, поджелудочная железа), регенерации, популяционных аспектов клеточных реакций и хозяино-паразитарных отношений в контексте открытых биологических систем.

выводы

1. В условиях Западной Сибири описторхоз человека имеет суперинвазионную форму, при которой в печени наблюдается перманентная пролиферация коммитированных клеток с дифференцировкой преимущественно в холан-гиоциты, являющихся трофическим субстратом паразита.

2. В хронической фазе суперинвазионного описторхоза (СО) у человека и животных в плазме крови, ткани печени с различной частотой выявлены мутации генов р53, K-ras, B-raf, р16, c-Kit, АРС и их сочетания, при паразигоце-нозе - СО и хронический вирусный гепатит С (ХВГ-С) - мутации этих генов наблюдаются недостоверно чаще (р<0,05).

3. В эксперименте у сирийских хомяков с суперинвазионным описторхо-зом после затравки N-DENA и N-DMNA (70 мг/кг) в печени через 270-360 суток формируются доброкачественные и злокачественные опухоли холангио-целлюлярного цитогенеза по типу многоступенчатого развития.

4. На фоне суперинвазионного описторхоза человека из недифференцированных коммитированных клеток развиваются злокачественные новообразования различной степени зрелости по типу одноступенчатого канцерогенеза. При микст-патологии: СО + ХВГ-С наблюдается развитие диморфных неоплазм - холангиогепатоцеллголярных раков. В ткани злокачественных опухолей выявлены мутации генов: р 53, K-ras, B-raf, c-Kit, р 16, АРС, bcl-2.

5. Источником первичных раков печени являются перманентно проли-ферирующие долгоживущие недифференцированные коммитированные клетки, трансформирующиеся под воздействием инициаторов канцерогенеза в опухолевые элементы на различных этапах эволюции. Гистогенетическая форма и дифференцировка опухолевых клеток зависит от уровня зоны малиг-низации поли- или унипотентных клеток - предшественников.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ketrits А.В. The effect of opisthorchiosis on the pathological changes of abdominal cavity / Ketrits A.B., Bychkov V.G., Solovjev G.S., Maltseva Ye.D. et al. / 2-nd Seminar on Food-Borne Parasitic Zoonoses: current problems, Epidemiology, Food safety and control. Abstracts. Thailand, Khon Kaen. - 1995. - P. 29.

2. Bychkov V.G. Opisthorchiosis and carcinoma / Bychkov V.G., Solovjev G.S., Maltseva Ye.D., Krylov G.G. et al. / 2-nd Seminar on Food-Borne Parasitic Zoonoses : current problems, Epidemiology, Food safety and controle. Abstracts. Thailand, Khon-Kaen. - 1995. - P. 30.

3. Bychkov V.G. The role pedagogic and medical health in the area with opisthorchiosis. / Bychkov V.G., Maltseva Ye.D., Solovjov G.S., Ketrits A.B. et al. / 2nd Seminar on Food-Borne Parasitic Zoonoses : current problems, Epidemiology, Food safety and controle. Abstracts. Thailand, Khon-Kaen. - 1995. - P. 33-34.

4. Крылов Г.Г. Патоморфологические изменения экониши Opistorchis fe lineus у различных хозяев. / Крылов Г.Г., Воробьев В.А., Мальцева Е.Д., Ры-чагова И.Г. и др. / Паразитологические проблемы больших городов: Тезисы

докладов II совещания «Окружающая среда и проблемы паразитарного загрязнения». СПб., 1996. - С. 49-50.

5. Bychkov V.G.Possible ways of primary cholangic-cellulary cancer decrease in the hyperendemic opisthorchosis regions. / Bychkov V.G., Zuevsky V.P., Maltseva Ye.D. / VI European multicolloqium of parasitology. Italy, Parma. - 1996. - P. 280.

6. Bychkov V.G. Opisthorchosis study in Russia /Bychkov V.G., Yaroslavsky V.E., MaltsevaYe.D. /VI European multicolloqium of parasitology. Italy, Parma. -1996,-P. 443.

7. Крылов Г.Г. Гисто- и морфогенез холангиокарципом, индуцированных НДМА у сирийских хомяков с суперинвазионным описторхозом. / Крылов Г.Г., Бычков В.Г., Мальцева Е.Д., Орлов С.А. / Международный симпозиум «Медицина и охрана здоровья». Тюмень, 1997. - С. 291-292.

8. Krylov G. Biliary syndrome with patients suffering superinvasive opisthor chiosis /Krylov G., Bychkov V., Maltseva Ye. , Shchepetkina I. et al. / Abstracts World Congress of Gastroenterology, 1998, Vienna. - P.648.

9. Мальцева Е.Д. Онкологическая ситуация в гиперэндемичном очаге опи-сторхоза. / Мальцева Е.Д. / Актуальные вопросы судебной и клинической медицины. Ханты-Мансийск. - 1999. - С. 42.

10 Мальцева Е.Д. Холангиоканцерогенез при суперинвазионном опистор хозе. /Мальцева Е.Д. / Актуальные вопросы судебной и клинической медицины. Ханты-Мансийск, 1999. - С. 43.

11. Бекетов Б.Н. Фармакотерапевтическая инициация канцерогенеза на модели экспериментального описторхоза. / Бекетов Б.Н., Бычков В.Г., Молокова O.A., Мальцева Е.Д. /Тезисы докладов VI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М., 1999. - С. 15.

12. Мальцева Е.Д. Новые методы морфологической диагностики опухолевых образований печени. /Мальцева Е.Д. / Сборник научных докладов окружной конференции хирургов «Хирургия печени, желчных протоков и поджелудочной железы». Ханты-Мансийск, 2001. - С. 49.

13. Мальцева Е.Д. Иммуногистохимия - клинике. / Мальцева Е.Д. / Сборник научных докладов окружной конференции хирургов «Хирургия печени, желчных протоков и поджелудочной железы». Ханты-Мансийск, 2001. - С 52.

14. Бычков В.Г. Гистогенез рака печени на фоне суперинвазионного описторхоза. / Бычков В.Г., Турусов B.C. Хадиева Е.Д., Янин B.J1. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2002. - № 7-8. - С. 141.

15. Булынников К.С. Патология печени при вирусных гепатитах и суперинвазионном опиисторхозе (по данным аутопсий). / Булынников К.С., Соколов С.А., Хадиева Е.Д., Леончикова И.В., Ушакова O.A. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2002. - № 7-8. - С. 145.

16. Янин В.Л. Эмбрио-фетальные стандарты как основа концепции оценки и прогнозирования уровня популяционного здоровья на территории ХМАО. / Янин В.Л., Соловьев Г.С., Хадиева Е.Д., Дурыгин А.Н. и др. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2002. — № 7-8. - С. 146.

17. Бычков В.Г. Opistorchis felineus - биотический фактор окружающей среды Западной Сибири: ультраструктура паразита и основная патология /

Бычков В.Г., Крылов Г.Г., Щудло М.М., Хадиева Е.Д. и др. /Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования. М., 2002. - С. 86-93.

18. Труханова Л.С. Изменения в печени хомячков, индуцированные М-ни трозодиэтиламином, при суперинвазионном описторхозе. / Труханова Л.С., Крылов Г.Г., Хадиева Е.Д., Куликова Л.Н. и др. // Вопросы онкологии, 2003. -Т. 49,-№4.-С. 476-483. *

19. Хадиева Е.Д. Плоскоклеточная метаплазия слизистых оболочек на фоне хронического описторхоза (наблюдение из практики). / Хадиева Е.Д., Лининг Д.А. /Сборник «Развитие современных медицинских технологий в Окружной клинической больнице». Ханты-Мансийск, 2003. - С. 224-227.

20. Хадиева Е.Д. Иммуногистохимическая характеристика холангиоцеллю-лярного рака при суперинвазионном описторхозе. /Хадиева Е.Д. /Сборник научно-практических статей «Развитие современных медицинских технологий в Окружной клинической больнице». Ханты-Мансийск, 2003.- С. 228-232.

21. Бычков В.Г Особенности течения вирусных гепатитов у больных опи-сторхозом различных эндемичных очагов. / Бычков В.Г., Соколов С.А., Крылов Г.Г., Хадиева Е.Д. и др. / Материалы VI Российского съезда врачей-инфекционистов. СПб, 2003. - С. 60.

22. Бычков В.Г. Теория самоорганизации в изучении морфогенеза описторхоза и его осложнений /Бычков В.Г., Матаев С.И., Зуевский В.П., Хадиева Е.Д. и др. /Материалы Международной конференции «Перспективы синергетики в XXI веке". Белгород, 2003. - Т. 1. - С. 278-280.

23. Бычков В.Г. Описторхоз в Сибири - канцерогенный гельминтоз / Бычков В.Г., Сабиров А.Х., Крылов Г.Г., Хадиева Е.Д. и др. / Материалы Международного симпозиума «Молекулярные механизмы функции клетки». Тюмень, 2005.-С. 288-289.

24. Бычков В.Г. Овальные клетки печени при суперинвазионном описторхозе и в сочетании с частичной гепатэктомией / Бычков В.Г., Хадиева Е.Д., Сабиров А.Х., Пантелеев С.М. и др. // Медицинская наука и образование Урала, 2005,-№5.-С. 78-79.

25. Сабиров А.Х. Экологическая онкология: Стратегия профилактики опухолевых болезней в нефтегазовом регионе (Западная Сибирь). /Сабиров А.Х., Бычков В.Г., Сергиев В.П., Хадиева Е.Д и др. /Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования. М., 2005. - Т. 3. - С. 119-126.

26. Бычков В.Г. Пролиферативный и мутагенный эффекты Ор^ЛогсЫз ГеНпеиБ (КдуоИа, 1884) и профилактика их последствий /Бычков В.Г., Хадиева Е.Д., Сабиров А.Х., Сергиев В.П. и др.// Сибирский вестник гепатологии и гастроэнтерологии, 2006. - № 20. - С. 138-142.

27. Бычков В.Г. Молекулярно-генетические подходы в паразитологии (на примере описторхоза) / Бычков В.Г., Сергиев В.П., Сабиров А.Х., Хадиева Е.Д. и др. //Мед.паразитол. и паразитар. болезни, 2007. - № 2. - С. 3-6.*

28. Бычков В.Г. Гисто- и морфогенез эпителиев печени / Бычков В.Г., Хадиева Е.Д., Сабиров А.Х., Крылов ТТЛ Морфология, 2008. - Т. 133. - № 3. -С. 26-27. *

29. Бычков В.Г. Динамика клеточных преобразований печепи при экспериментальном описторхозе / Бычков В.Г., Хаднева Е.Д., Крылов Г.Г., Сабиров А.Х. и др. // Мед. паразитол. и паразитар. болезни, 2008. - № 3. - С. 9-12. *

30. Бычков В.Г. Холангиоканцерогенез при суперинвазионном описторхозе / Бычков В.Г., Хадиева Е.Д., Сабиров А.Х., Крылов Г.Г. /Тезисы Всероссийской конференции «Актуальные аспекты паразитарных заболеваний в современный период». Тюмень, 2008. - С. 44-45.

31. Сабиров А.Х Нарушение генома при суперинвазионном описторхозе (СО). / Сабиров А.Х., Крылов Г.Г., Бычков В.Г., Хадиева Е.Д. /Тезисы Всероссийской конференции «Актуальные аспекты паразитарных заболеваний в современный период». Тюмень, 2008. - С. 178-179.

32. Бычков В.Г. Динамика пролиферации и дифференцировки овальных (коммитированных) клеток печени при описторхозе. /Бычков В.Г., Хадиева Е.Д., Кравец Н.В., Плотников А.О. и др. / Материалы III съезда Российского общества патологоанатомов. Самара. 2009. - Т. 2. - С. 69-71.

* отмечены журналы, рекомендованные ВАК, для опубликования основных результатов диссертации.

ХАДИЕВА ЕЛЕНА ДМИТРИЕВНА

ЦИТО- И МОРФОГЕНЕЗ ПЕРВИЧНОГО РАКА ПЕЧЕНИ НА ФОНЕ ОПНСТОРХОЗА

03.03.04 - КЛЕТОЧНАЯ БИОЛОГИЯ, ЦИТОЛОГИЯ, ГИСТОЛОГИЯ 14.03.02 - ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ АНАТОМИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

Подписано в печать 24.03.2010 Формат 60x84/16. Печ. л. 1,0. Печать ризограф. Тираж 100. Зак. №279.

Типография ООО «Печатник», лицензия ПД N2 17-0027 Тюмень, ул. Республики, 148 корп. 1/2. Тел. (3452) 20-51-13, тел./факс (3452) 32-13-86

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Хадиева, Елена Дмитриевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Описторхоз - системное заболевание.

1.2. Влияние описторхозной инвазии на структурнофункциональные состояния органов пищеварительной системы.

1.3. Первичный рак печени и описторхоз.

1.4. Клеточные основы роста печени и гепатоканцерогенеза.

Глава 2. Материал и методы исследования.

Глава 3. Результаты собственных исследований. Структурно-функциональное состояние паренхимы и стромы печени при экспериментальном описторхозе.

3.1. Морфологическое исследование печени при однократном заражении.

3.2. Патоморфология печени сирийских хомяков при суперинвазионном описторхозе.

Глава 4. Результаты моделирования холангиокарцином у хомяков с суперинвазионным описторхозом.

4.1. Динамика клеточных преобразований в печени при воздействии N-DENA на фоне описторхозной инвазии.

4.2. Динамика клеточных превращений в печени при воздействии

N-DMNA на фоне описторхозной инвазии.

Глава 5. Описторхоз - фоновое заболевание ПРП человека.

5.1. Патология печени при суперинвазионном описторхозе.

5.2. Патология печени при паразитоценозе (описторхисы + вирус-гепатита С).

5.3. Цито- и морфогенез холангиоцеллюлярного рака.

Глава 6. Молекулярно-генетические нарушения при описторхозе и опухолях печени.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цито- и морфогенез первичного рака печени на фоне описторхоза"

Актуальность проблемы. Паразитарные болезни остаются одними из наиболее массовых нозологических форм и не уступают свое приоритетное место несмотря на интенсивные усилия специалистов многих биологических и медицинских направлений науки и практики.

После открытий и первых описаний описторхоза гельминтоз стал проблемой пристального внимания биологов и врачей. Были разработаны основные положения, касающиеся эпидемиологии, клиники, морфологических проявлений паразитоза (Плотников Н.Н., Брегадзе И.Л., 1976; Зубов Н.А., 1973; Глумов В .Я., 1984; Бычков В.Г., 1988; Бычков В.Г. с соавт., 2005-2009 и ДР-)

Описторхоз в прошлом и текущем тысячелетиях остается в группе наиболее опасных биогельминтозов, две трети мирового ареала которого приходится на территорию России (Беэр С.А., 1985; Бронштейн A.M., Озерецков-ская Н.Н., 1985), где зарегистрировано более 2-х миллионов инвазированных. Истинное число больных описторхозом значительно превышает данные официальной статистики, так как, поправочный коэффициент при данной инвазии достигает 15 (Сергиев В.П., 1991).

Значимость данного паразитоза, характеризующегося многочисленными осложнениями, определяется тем, что длительное течение, быстрое по темпам и массовости вовлечения в процесс новых контингентов населения существенно снижает активность и потенциал жизни людей гиперэндемичных очагов (Бычков В.Г., 1988, 1992; Бычков В.Г. с соавт., 2009); описторхоз включен в «Перечень заболеваний, представляющих опасность для окружающих» (постановление Правительства Российской Федерации № 715 от 1 декабря 2004 г).

Многолетние исследования заболеваемости населения очагов различной напряженности показали, что патология органов пищеварительной системы у инвазированных встречается в 2,5-3,0 раза чаще по сравнению с лицами без описторхоза (Бронштейн A.M., 1986).

В Среднем Приобье расположен гиперэндемичных очаг описторхоза, болезнь характеризуется особой формой течения, висцеральной патологией, опасными осложнениями и неутешительным прогнозом - это суперинвазионный описторхоз (СО) (Бычков В.Г., 1992). Ранние и поздние суперинвазии на фоне хронического стресса создают особый фон тканевого и клеточного иммунитета (Каленова Л.Ф., 2002, 2005, 2006), состояние перманентной пролиферации элементов печени, желудка, поджелудочной железы, кишечника и склеротические изменения в них (Крылов Г.Г., 2005).

В результате огромных усилий врачей различных специальностей, в гиперэндемичном очаге пораженность населения гельминтозом в последнее десятилетие снизилась с 74,2% в 1991 г до 63,7% в 2002 г., но встречаются поселения, где взрослый контингент (старше 15 лет) инвазирован описторхи-сами в 100%, в городах Среднего Приобья показатели болезненности заболеваниями органов пищеварения превышают таковые по стране в целом: 386,8 на 1000 населения и 105,7 - соответственно (Аникин А.Ю. с соавт., 2002), т.е. экстенсивные показатели описторхозной болезни в гиперэндемичном очаге за последнее время претерпели несущественные изменения, а проявления и осложнения ее в виде различных форм патологии брюшной полости, в т.ч. опухолевой, демонстративно превалируют по сравнению с другими регионами России.

В настоящее время социальные, медицинские и биологические вопросы описторхоза не потеряли актуальности, т.к. заболеваемость населения в гиперэндемичных очагах поддерживается на высоком уровне вследствие закрепившихся традиций питания населения. Описторхоз до сих пор остается одной из распространных форм паразитарной патологии в регионах Среднего Приобья и Обь-Иртышского бассейна (Степанова Т.Ф., 2004; Крылов Г.Г., 2005; Гузеева Т.М., 2008).

Особую важность проблема гельминтоза приобретает в регионах добычи, переработки нефти и газа, т.к. это углеводородное сырье, его ингредиенты обладают инициирующими и промоторными эффектами в контексте канцерогенеза (Бруевич Т.С., 1980; Z.X. Gao et al., 1994), резко изменяют нозологическую панораму населения (Овчинникова E.JI. с соавт., 2004; Филимонова М.В. , Макарова А.В., 2004; Ховрин А.И., 2004; Прокопьев М.Н. с соавт., 2004).

Установлено влияние описторхозной инвазии на органы - экониши гельминта и системы организма, в которых паразит не вегетирует (Крылов Г.Г., 2005; Калюжина Е.В. с соавт., 2008), описторхоз манифестирует соматическую патологию, что заметно экзальтирует течение основных заболеваний (Бекк А.А. с соавт., 2008).

Однако основной проблемой осложненных форм суперинвазионного описторхоза (СО) является выявление механизмов развития первичного рака печени, цито- и морфогенез которого до сих пор полностью не установлены.

Цель исследования - выявить цито- и морфогенез первичного рака печени на фоне суперинвазионного описторхоза.

Задачи исследования:

1. Проследить эволюцию клеточных преобразований, в т.ч. комми-тированных клеток, печени при описторхозе на экспериментальном и клиническом материалах.

2. Выявить динамику цитоморфогенеза рака печени у людей и при экспериментальном моделировании неоплазм на фоне суперинвазионного описторхоза.

3. Определить молекулярно-генетические изменения у больных описторхозом, в тканях печени, опухолей человека и животных.

4. Провести сравнительный анализ канцерогенеза печени при пара-зитоценозе: описторхис + вирус гепатита С.

Научная новизна работы. Впервые в эксперименте и на клиническом материале выявлены перманентная пролиферация и дифференцировка коммитированных клеток печени при описторхозной инвазии. На светооптиче-ском и ультраструктурном уровнях проведено изучение и дана характеристика клеточных преобразований пролиферирующих элементов и их дефинитивных структур при СО.

Прослежены цитогенез холангиоцеллюлярного рака печени, его топография и морфогенетические этапы. Установлены молекулярно-генетические нарушения у больных СО, в ткани печени, опухоли на клиническом и экспериментальном материалах. Обнаружены гисто- и морфологические особенности раков печени при сочетании вирусного гепатита С и СО.

Теоретическая и практическая значимость работы. Раскрыты маркерные феномены в печени при описторхозе в различных режимах поступления инвазионного материала.

Выявлены комплекс механизмов регуляции биологических потенций коммитированных клеток печени, эволюция их превращений, роль в цитоге-незе эпителиев, цито- и морфогенезе опухолей данного органа.

Установлены многочисленные мутации генетического аппарата человека и животных в хронической фазе гельминтоза, что является предпосылкой перманентной пролиферации элементов холангиоцеллюлярного диффе-рона и формирования опухолевого роста. Результаты исследования имеют фундаментальное и прикладное значения, могут быть использованы в учебном процессе, при подготовке пособий, лекций по клеточной биологии, гистологии, патологической анатомии и онкологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Описторхисы при многочисленных повторных поступлениях в организм человека и животных вызывают перманентную пролиферацию и диф-ференцировку долгоживущих коммитированных клеток печени вследствие мутации каскада генов, отвечающих за апоптоз и пролиферацию элементов холангиоцеллюлярного дифферона.

2. В эксперименте на фоне суперинвазионного описторхоза печеночные канцерогены (N - DENA, N - DMNA) инициируют из коммитированных клеток доброкачественные новообразования и холангиокарциномы с нежной и грубой стромой, локализующиеся в портальных трактах, паренхиме и пери-протоковых пространствах.

3. Цито- и морфогенез холангиоцеллюлярного рака печени у человека с суперинвазионным описторхозом повторяют экспериментальную модель без формирования доброкачественных форм.

4. При паразитоценозе (описторхис + вирус гепатита С) возникают диморфные карциномы печени с высоко расположенной зоной трансформации коммитированных клеток: холангиогепатоцеллюлярный рак с преобладанием первого или второго компонентов.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационного исследования доложены и обсуждены на: 2 Международном семинаре по паразитарным зоонозам (Таиланд, Кен-Кан, 1995), совещании «Окружающая среда и проблемы паразитарного заражения» (Санкт-Петербург, 1996), 7 Европейском мультиколлоквиуме по паразитологии (Италия, Парма, 1997), Международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья» (Тюмень, 1997), Международном Конгрессе по гастроэнтерологии (Вена, 1998), окружной научно-практической конференции «Актуальные проблемы судебной и клинической медицины» (Ханты-Мансийск, 2001), VI Российском съезде врачей-инфекционистов (Санкт-Петербург, 2003), Международном симпозиуме «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» (Тюмень, 2005), Международной конференции гистологов, посвященной памяти проф. Дунаева П.В. (Тюмень, 2008), III съезде Российского общества патологоанатомов (Самара, 2009), заседаниях Тюменского областного общества патологоанатомов и проблемной комиссии «Морфогенез клеток, тканей и органов человека в онтогенезе» (Тюмень, 2008, 2010). По материалам диссертации опубликовано 32 печатных работы, из них 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии с секционным курсом и гистологии, цитологии, эмбриологии ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава», патологической анатомии с курсом судебно-медицинской экспертизы и гистологии, цитологии, эмбриологии ГОУ ВПО ХМАО-Югры «Ханты-Манскийская государственная медицинская академия», в практику патолого-анатомического отделения У ХМАО-Югры «Окружная клиническая больница».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 5 таблицами и 45 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, обсуждения результатов и выводов. Список литературы содержит 229 источников (132 отечественных, 97 иностранных).

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Хадиева, Елена Дмитриевна

ВЫВОДЫ

1. В условиях Западной Сибири описторхоз человека имеет суперинвазионную форму, при которой в печени наблюдается перманентная пролиферация коммитированных клеток с дифференцировкой преимущественно в холангиоциты, являющихся трофическим субстратом паразита.

2. В хронической фазе суперинвазионного описторхоза (СО) у человека и животных в плазме крови, ткани печени с различной частотой выявлены мутации генов р53, K-ras, B-raf, pi6, c-Kit, АРС и их сочетания, при парази-тоценозе - СО и хронический вирусный гепатит С (ХВГ-С) — мутации этих генов наблюдаются недостоверно чаще (р<0,05).

3. В эксперименте у сирийских хомяков с суперинвазионным опистор-хозом после затравки N-DENA и N-DMNA (70 мг/кг) в печени через 270-360 суток формируются доброкачественные и злокачественные опухоли холан-гиоцеллюлярного цитогенеза по типу многоступенчатого развития.

4. На фоне суперинвазионного описторхоза человека из недифференцированных коммитированных клеток развиваются злокачественные новообразования различной степени зрелости по типу одноступенчатого канцерогенеза. При микст-патологии: СО + ХВГ-С наблюдается развитие диморфных неоплазм - холангиогепатоцеллюлярных раков. В ткани злокачественных опухолей выявлены мутации генов: р 53, K-ras, B-raf, c-Kit, р 16, АРС, bcl-2.

5. Источником первичных раков печени являются перманентно проли-ферирующие долгоживущие недифференцированные коммитированные клетки, трансформирующиеся под воздействием инициаторов канцерогенеза в опухолевые элементы на различных этапах эволюции. Гистогенетическая форма и дифференцировка опухолевых клеток зависит от уровня зоны ма-лигнизации поли- или унипотентных клеток-предшественников.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Хадиева, Елена Дмитриевна, Тюмень

1. Азимов Ф.Х. Холангиоцеллюлярный рак (особенности диагностики и лечения). //Практическая онкология, 2008. - Т. 9. - № 4.- С. 229-235.

2. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.,1990.- 278с.

3. Автандилов Г.Г. Метод плоидометрии в диагностике стадий развития новообразований. М., 2006. 14 с.

4. Аничков Н.М. Биологические и клинико-морфологические аспекты учения о метастазировании злокачественных опухолей.//Медицинский академический журнал, 2003. № 1. -С. 3-13.

5. Армякина О.Л., Ашанин Б.С., Герасимов В.Н., Савоненкова Л.Н. Инфекционные заболевания гепатобилиарной системы по данным морфологии. /Российский съезд врачей-инфекционистов: VI: Материалы. СПб., 2003. -С. 14.

6. Баранов С.В. Репаративная регенерация и имплантационный рост опорных тканей на фоне динамики морфо-функционального состояния печени при описторхозе: Автореф. дис. канд.мед.наук. Тюмень, 2009. 23с.

7. Бекетов Б.Н., Бычков В.Г., Молокова О.А. и др. Проблема фарма-кокинетики лекарственных веществ у больных описторхозом. / Международный симпозиум «Медицина и охрана здоровья»: Тезисы. Тюмень, 1998.-С. 77-80.

8. Белобородова Э.И. Избранные главы клинической гастроэнтерологии. Часть III. Томск: Изд. НТЛ, 2004. 180с.

9. Беэр С.А. Описторхоз. Гельминтозы человека: /Под. ред. Ф.Ф. Сопрунова. М., 1985.-С. 102-119.

10. Бобровский Е.А., Бобровская Е.Е.,Терехов И.М. Изменения печени при хроническом описторхозе./ VI Российский съезд врачей инфекционистов: Материалы. СПб., 2003. - С. 41.

11. Болевич С.Б., Коган Е.А., Корнев Б.М. и др. Легочная гипертен-зия при хронических заболеванияхпечени / Интерстициальные болезни легких под ред. Н.А. Мухина. М., Литера, 2007. С. 357-359.

12. Бронштейн A.M., Озерецковская Н.Н. Медико-статистическая и экономическая оценки некоторых показателей здоровья местного населения эндемичного очага описторхоза. // Мед.паразитология и паразитар. болезни, 1985.-№ 6.-С. 30-34.

13. Бронштейн A.M. Сообщение II. Заболеваемость описторхозом и дифилоботриозом коренного населения поселка Кышик Ханты-Мансийского автономного округа.//Мед. паразитология и паразитар. болезни, 1986. № 3. -С.44-48.

14. Бронштейн A.M. Сообщение 4. Анализ пораженности описторхозом пришлого населения в одном из эндемических очагов Среднего При-обья.// Мед. паразитология и паразитар. болезни, 1987. № 3. - С. 52-57.

15. Бруевич Т.С. Бластомогенность продуктов переработки нефти, 1980. -М.:«Медицина». 272 с.

16. Бычков В.Г. Частота злокачественных опухолей в условиях г. Ханты-Мансийска.//Вопросы онкологии, 1977. -Т. 23. № 7. - С. 58-61.

17. Бычков В.Г., Ярославский В.Е., Гиновкер А.Г. Клинико-морфологическая структура суперинвазионного описторхоза. //Мед. паразитология и паразитар. болезни 1984. № 5. - С. 13-16.

18. Бычков В.Г., Гиновкер А.Г., Худякова В.В. Мутагенные факторы среднего Приобья. /Ежегодная конференция европейского общества по мутагенам внешней среды: XIV: Тезисы докладов. М., 1984 С.85.

19. Бычков В.Г., Молокова О.А., Зуевский В.П. Гранулематозное воспаление при описторхозе.//Архив патологии, 1987. -Т. 49. в. 3. - С. 44-48.

20. Бычков В.Г. Описторхоз в гиперэндемичном очаге и проблема канцерогенеза: Автореф. дис. . докт.мед.наук. М., 1988.-49 с.

21. Бычков В.Г., Яроцкий Л.С. Проблема онкогенности паразитов. // Мед.паразитология и паразитар. болезни, 1990. № 3. - С. 46-49.

22. Бычков В.Г. Описторхоз и рак печени у населения гиперэндемичного очага. Новосибирск.: ВО «Наука», 1992. 175 с.

23. Бычков В.Г., Калюжина М.И. Морфофункциональное состояние тонкой кишки при хроническом описторхозе. / Материалы научно-пракческой конференции. Томск, ТГУ 1994. С. 21-22.

24. Вакулина О.Э. Морфо функциональные параллели состояния печени и регенерации скелетных тканей при описторхозной инвазии (клини-ко-экспериментальное исследование): Автореф. дис. канд.мед.наук. Тюмень, 2008.- 18 с.

25. Верин В.К. Дивергентная дифференцировка гепатоцитов и холангиоцитов в эмбриональном и репаративном гистогенезе: Автореф. дис.докт. мед. наук. Л., 1983.- 34с.

26. Вишневский В.А., Тарасюк Т.И. Диагностика и хирургическое лечение рака проксимальных печеночных протоков (опухолей Клатскина) //Практическая онкология, 2004. Т. 5. - № 2. - С. 126-134.

27. Гелыдтейн В.И. Возникновение и прогрессия экспериментальных опухолей печени: Дис. . д-ра мед.наук. М., 1966. 477 с.

28. Гелыптейн В.И., Чипышева Т.А., Банников Г.А. Эволюция гиперпластических очагов в печени крыс при воздействии диэтилнитрозамина //Вопр. онкол., 1984. -Т. 6. № 1.-С. 17-22.

29. Гиновкер А.Г., Ильинских Н.Н., Шкурко И.И. Хромосомные нарушения и иммунореактивность золотистых хомячков, инвазированных O.felineus. // Паразитология, 1981. Т. 15. - № 1. - С. 62-68.

30. Гиновкер А.Г. Компенсаторно-приспособительные реакции организма хозяина при описторхозе: Автореф. дис. . док.биолог. наук. М., 1984.-36 с.

31. Глумов В.Я. Морфогенез и патоморфология хронического гепатита и цирроза печени при описторхозе: Автореф. дис. . док.мед. наук. М., 1981.-39 с.

32. Давыдов М., Демидов Л., Поляков Б. Современное состояние и проблемы онкологии. // Врач, 2006. № 13. - С.3-7.

33. Даниленко В.И. Системный анализ морфогенеза рака молочной железы: Автореф. дис. . док.мед. наук. М., 1983. 40 с.

34. Долгих В.Т. Опухолевый рост. М.: Медицинская книга, 2001.- 81с.

35. Доронин А.В. Ранняя фаза описторхоза (клиника и лечение): Автореф. дис. .канд. мед.наук. М., 1972. -16 с.

36. Жукова О.Б., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. Апоптоз и вирусная инфекция. Томск: Изд. ТГУ, 2006. 142 с.

37. Заридзе Д.Г. (ред.) Канцерогенез. М., 2004. С.574.

38. Зиновьев А.С., Маренко В.Ф. Патогенез смешанных инфекций./ Паразитоценология. Теоретические и прикладные проблемы. Киев. «Наукова Думка», 1985.-С. 161-168.

39. Зубов Н.А. Патологическая аенатомия описторхоза и его осложнений: Автореф. дис. .докт.мед.наук. Свердловск, 1973. -25 с.

40. Зуевский В.П., Гиновкер А.Г., Павловская B.C. Экология человека (учебное пособие). Томск. МГП «Раско», 2002. -С. 140.

41. Ильинских Н.Н., Кудрявцев Д.П. Цитогенетические последствия применения циклофосфана у экспериментальных животных на фоне опи-сторхозной инвазию / I научно-практическая конференция «Актуальные вопросы гастроэнтерологии»: Материалы. Томск, 1993. С. 73.

42. Каленова Л.Ф. Хроническая описторхозная инвазия хронический стресс.// Научный вестник Тюменской медицинской академии. Тюмень, 2002.-№7-8.-С. 73.

43. Камерон И.Л., Пул Т.Б. Трансформированная клетка / перевод с анг. В.И.Струка, Е.А.Баглея, С.А.Пащенко. Киев. «Наукова Думка», 1985. -384 с.

44. Карселадзе А.И. Некоторые основополагающие понятия онко-морфологии в свете достижений современной молекулярной биологии. // Архив патол. 2009. Т. 71. - вып. 5. - С. 17-20.

45. Кеннеди К.Р. Экологическая паразитология (перевод с англ. ред. К.М.Рыжикова и О.Н.Бауера). М: «Мир», 1978.-230 с.

46. Коган Е.А., Угрюмов Д.А., Жак Г. Морфологические и молеку-лярно-биологические особенности процессов кератинизации и апоптоза в плоскоклеточном раке легкого // Архив патологии, 2000. Т 62. - вып. 3. - С. 16-21.

47. Коган Е.А. Молекулярно-генетические основы канцерогенеза. //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 2002. Т. 12. - № 3. - С. 32-36

48. Коган У.А., Сидорова И.С., Унанян A.JI. и др. Молекулярно-биологические особенности экспрессии матриксных металлопротеаз в патогенезе аденомиоза и пути его фармакологической коррекции // «Молекулярная медицина», 2007. № 1. - С. 20-25.

49. Коган Е.А. Опухолевый рост. Патология /Под ред. М.А.Пальцева, В.С.Паукова, М.: ГЭОТАР-МЕДИА, 2008. Т. 1. - С. 221-226.

50. Колосов А. Е., Журавлев В.А., Головизнин А.А., Новичков Е.В. Морфология и прогноз гепатоцеллюлярного рака печени. / Тезисы 2-го съезда международного союза ассоциаций патологоанатомов. М., 1999. С. 154 -155.

51. Кондинский Г.В. Эколого-эпидемиологический анализ смешанных инфекций инвазий (модель «брюшной тиф - описторхоз»): Автореф. дис. . .докт.мед.наук. Киев, 1984. -40 с.

52. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрес-соров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза// Биохимия, 2000,- Т. 65.-вып. 1.-С. 5-33.

53. Копнин Б.П. Современные представления о механизмах злокачественного роста / X Российский онкологический конгресс: Материалы. М. Клевер Принт, 2006. С. 99-102.

54. Копнин Б.П. Нестабильность генома и онкогенез // Молекулярная биология, 2007. Т. 41. - № 2. - С. 369-380.

55. Крутовских В.А. Роль нарушений межклеточных щелевых контактов в генезе рака и других патологических состояний.//Арх. патологии, 2000. Т. 62. - вып. 1. - С. 3-7.

56. Крылов Г.Г. Пролиферативный эффект описторхиса кошачьего -основа жизнеобеспечения паразита. / Описторхоз: Современное состояние проблемы, перспективы развития: Сборник тезисов. Тюмень, 1991. С. 111113.

57. Лихтенштейн А.В. Генодиагностика рака: проблемы, достижения и перспективы // Российский биотерапевтический журнал, 2007. Т. 6. - № 1. -С. 5-8.

58. Лили Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир, 1969.- 648 с.

59. Лоскутова З.Ф. Виварий. М., 1980. -168 с.

60. Маев И.В., Полунина Т.Е., Полунина Е.В. Хронический гепатит С этиология, патогенез, лечение. // Клин.мед., 2009. - № 11. - С. 12-17.

61. Майстренко Н.А., Шейко С.Б., Алентьев А.В., Азимов Ф.Х. Хо-лангиоцеллюлярный рак (особенности диагностики лечения).// Практическая онкология, 2008. Т. 9. - № 4. - С. 229-235.

62. Манзюк Л.В. Холангиоцеллюлярный рак печени / Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний /под ред. Н.И. Переводчиковой. Практическая медицина, 2005. -С. 248-249.

63. Мельников В.И., Гиновкер А.Г., Скареднов Н.И. Морфологические и функциональные изменения слизистой оболочки желудка в ранней фазе описторхоза. // Мед .паразитология и паразитар.болезни, 1972. № 4. -С. 391-393.

64. Мельников В.И. Функционально-морфологические изменения слизистой оболочки желудка и основные желудочные синдромы в различные фазы описторхоза: Автореф. дис. .канд. мед. наук. Тюмень, 1974. 16 с.

65. Мельников В.И., Налобин А.В. Аллергический псевдоопухолевый гастрит при ранней фазе описторхоза. // Мед. паразитология и паразитар. болезни, 1977. № 6. - С. 700-703.

66. Morozov S.V., Trufanova Y.M., Isakov V.A., Kaganov B.S. The reproduce transient elastography in patients with chronic liver diseases.// Gastroenterology,2008.- Vol. 134(4).- Suppl 1, A-310. Материалы ODW 2008. San Diego 2008 r.

67. Морозов С.В., Исаков В.А., Каганов Б.С. Современные методы неинвазивной оценки выраженности фиброза печени. // Инфекционные болезни, 2009. Т.7. - №4. - С. 44-49.

68. Мушкамбаров А.Н., Кузнецов С.Л. Молекулярная биология. М.: МИА, 2003.-544 с.

69. Новик А.А., Камилова Т.А., Цыган В.Н. Введение в молекулярную биологию канцерогенеза М. ГЭОТАР-МЕД, 2004. 224 с.

70. Овчаров Е.А., Долгинцев В.К., Мамонов Ю.П., Борш Е.Е. Многофакторная модель заболеваемости с временной утратой трудоспособности нефтяников Западной Сибири // Тюменский медиц. журнал, 2000. № 1. - С. 37-39.

71. Озерецковская Н.Н., Карзин В.В. Некоторые особенности клиники язвенной болезни и других поражений желудочно-кишечного тракта при хроническом описторхозе. // Сов.медицина, 1971. № 10. - С. 106.

72. Озерецковская Н.Н. Особенности клиники и лечения описторхоза в зависимости от действия некоторых экзогенных и эндогенных факторов. // Вестн. АМН СССР, 1975. № 6. - С. 36-43.

73. Озерецковская Н.Н., Бычков В.Г., Скареднов Н.И. Клинико-морфологическая классификация описторхоза. // Мед.паразитология и пара-.зитар. болезни, 1985. № 5. - С. 8-11.

74. Павлов Б.А. Острая фаза описторхоза (острый описторхоз). Томск, 1979.-76 с.

75. Пальцев М.А. (ред.) Введение в молекулярную медицину. М., 2004. 496 с.

76. Пальцев М.А. Молекулярная медицина: достижения и перспективы // Молекулярная медицина, 2004. № 4. - С. 3-8

77. Пальцев М.А. (ред.) Патология. М., 2007. Т. 1. -280 с.

78. Пальцев М.А., Коган Е.А. Молекулярная патология: проблемы, достижения и перспективы // Омский научный вестник (Прил.). Материалы III пленума Президиума Российского общества патологоанатомов, 2007. № 3(61).-С. 3-8.

79. Принципы, правила и процедуры, используемые МАИР при оценке риска канцерогенности для человека различных факторов. // Вопросы онкологии, 2007. Т. 53. - № 66. - С. 621- 641.

80. Рыбников В.И. Описторхоз как вероятный фактор риска заболевания раком женских половых органов. / Актуальные проблемы описторхоза.1. Томск, 1986.-С. 105-106.

81. Рыбников В.И. Эпидемиология рака женских половых органов в Западной Сибири. Томск: ТГУ, 1987. 199 с.

82. Рычагова И.Г. Морфогенез клеточных реакций печени при различных клинико-морфологических формах описторхоза (ультраструктурное исследование): Автореф. дис. . докт. мед. наук. Челябинск, 1995. -40 с.

83. Рычкова Е.К., Козина О.И., Сазонова JI.B. Поражения почек при описторхозе. / Съезд терапевтов Тюменской области: I: Материалы. Тюмень, 1970. С. 88-89.

84. Сейц И.Ф., Князев П.Г. Молекулярная онкология. JT.M., 1986. -352 с.

85. Сергиев В.П. Болезни человека как отражение межвидовой борьбы (актовая речь). М., 2003. 55 с.

86. Сергиев В.П., Лобзин Ю.В., Козлов С.С. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы). СПб.: Фолиант, 2006. 586 с.

87. Серов В.В. Учение о патоморфозе: прошлое и настоящее. //Арх. патологии, 1997. Т. 59. — вып. 4. — С. 3-5.

88. Серов В.В., Апросина З.Г., Игнатова Т.М. Хронический вирусный гепатит. //Вестник РАМН, 2003. № 4. - С. 34-38.

89. Сидорова В.Ф. Постнатальный рост и восстановление внутренних органов у позвоночных. М.: Наука, 1969. 189 с.

90. Соколов В.Е. Систематика млекопитающих. Отряды зайцеобразных грызунов. М., «Высшая школа», 1977. 494 с.

91. Соколов С.А. Клинико-патогенетические взаимосвязи иммунологических и биохимических показателей у больных хроническим вирусным гепатитом в сочетании с описторхозом: Автореф.дис. канд.мед.наук. Тюмень, 2002. 27 с.

92. Соколов С.А., Чесноков Е.В., Орлова Т.В. Заболевания печени вирусной этиологии. Тюмень, «Академия», 2005. 464 с.

93. Соловьев Г.С. Принцип провизорности у высших млекопитающих животных и человека // Автореф. дис. . докт. мед. наук. Новосибирск, 2002. 44 с.

94. Степанова Т.Ф. Описторхоз. Тюмень: ТГУ., 2002.- 197с.

95. Степанова Т.Ф., Подклетнова Л.Ф. Паразитоценотические аспекты инвазионно-ифекционной патологии (описторхоз и туберкулез). Тюмень: ТГУ., 2002.-112с.

96. Струнников В.А., Урываева И.В., Бродский В.Я. Двухмутаци-онная гипотеза канцерогенеза и защитное значение полиплоидии сома-тичских клеток //Докл. АН СССР, 1982. Т. 264. - С. 1246-1249.

97. Трапезников Н.Н., Соловьев Ю.Н., Шингарова Г.Х. Методологические вопросы изучения онкогенеза. М.М., 1988. 207 с.

98. Турусов B.C. (ред.) Канцерогенные вещества. Материалы Международного агентства по изучению рака. / Перевод с английского А.Ф.Карамниевой. М.М., 1987.-333 с.

99. Урываева И.В., Фактор В.М. Фракция роста печени, ее состав по плоидности и изменение при старении // Онтогенез, 1975. Т.6. - С. 458- 465.

100. Урываева И.В., Фактор В.М. Взаимоотношения деления и функции клетки. Устойчивость печени к токсическому действию СС14 после частичной гепатэктомии // Цитология, 1976. Т. 18. - С. 1354-1359.

101. Урываева И.В., Делоне Г.В., Маршак T.JI. Развитие ядерных аномалий и цитомегалической дегенерации при повреждении генома в клетках печени // Докл. РАН, 1996. Т. 348. - С. 703-705.

102. Урываева И.В Репликативный потенциал гепатоцитов и стволовые клетки печени // Известия академии наук. Серия биологическая, 2001. -№ 6. С. 728-737.

103. Усов Д.В., Бычков В.Г., Копысов Г.В., Гладышев С.П. Клинико-морфологические аспекты перихоледохеального лимфаденита. // Клин, медицина, 1984. -Т.62. №1. - С. 156- 159.

104. Фактор В.М., Урываева И.В. Полиплоидизация гепатоцитов мыши при многократных воздействиях четыреххлористым углеродом // Бюл. эксперим. биологии и медицины, 1980. № 11. - С. 614-616.

105. Фактор В.М., Чернышова Э.В., Урываева И.В., Хрущов Н.Г. О природе делящихся клеток в регенерирующей печени ксеногенных радиационных химер // Бюл. эксперим. биологии и медицины, 1974. № 9. — С. 103106.

106. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М., 2002. — 536 с.

107. Хамидуллин Р.И., Вылегжанин Н.И. К вопросу о связи между описторхозом и первичным раком печени.// Казанский мед. журнал, 1977.-№1. С. 67-69.

108. Хамидуллин Р.И. Описторхоз и первичный рак печени.: Авто-реф. дис. . докт.мед.наук. М., 1985. — 40 с.

109. Хрущов Н.Г., Фактор В.М., Урываева И.В., Чернышева Э.В. Стволовые кроветворные клетки в интактной и регенерирующей печени взрослых мышей //Бюл. эксперим. биологии и медицины, 1977. № 2. — С. 209-210.

110. Чумаков П.М. Функция гена р 53: выбор между жизнью и смертью. // Биохимия, 2000. Т. 65. - Вып. 1. - С. 34-47.

111. Шайн А.А., Рыбка А.Г., Собянина Т.А. и др. Влияние опистор-хозной инвазии на скорость роста опухоли в эксперименте. / Актуальные проблемы описторхоза. Томск, 1986. С. 77-79.

112. Шайн А.А. Первичный рак печени в Тюменской области: Авто-реф. дис. . докт. мед. наук. М.,1974.- 32 с.

113. Шайн А.А. Рак органов пищеварения. М.: «Скорпион», 2000.368 с.

114. Шайн А.А. Общая онкология. Тюмень: «Поиск», 2003. — Т. 1. —310с.

115. Шехтер А.Б., Берченко Г.Н. Фибробласты и развитие соединительной ткани: ультраструктурные аспекты биосинтеза, фибриллогенозах и катаболизма коллагена. //Арх. патологии. — Т. 40. вып. 8. - С. 70-74.

116. Шлычков А.В., Дроздов В.Н., Черба А.Р. Опыт успешного лечения висцеральной патологии при ассоциированном описторхозе в эндемичном очаге инвазии / Российский съезд врачей инфекционистов: VI: Материалы. СПб., 2003.-С. 440-441.

117. Щипков В.П., Кривошеина Г.Н. Общая и медицинская генетика. М.«Академия», 2003. 256 с.

118. Шульцев Г.П., Целенчук Я.П., Ольхин В.А. Нефротический синдром при описторхозе. //Клин, медицина, 1973. — Т. 51. -№ 8. — С. 132-135.

119. Afdhal N.H., Nunes О. Evaluation of liver fibrosis: a concise review.// Am J Gastroenterology. 2004.-Vol. 99-.P.1160-1174.

120. Albores-Saavedra J., Henson D.E., Sobin L.H. Histological typing of tumours of the gallbladder and extra-hepatic bile ducts. 2nd ed. Berlin, Germany. -Springer-Verlag, 1991. - 264 p.

121. American Joint Committee on Cancer Staging NewYork. -Springer-Verlag, 2005.-P. 1-150.

122. Bannasch P., Massner B. Die Feistruktur des Nitrosomorpholin induzierten cholanGiofibroms der Ratte // Virchovs Archivs, 1977. -Vol. 24. P. 295-315.

123. Bedossa P., Dargere D., Paradise V. Sampling variability of liver fibrosis in chronic hepatitis C. //Hepatology .2003.-Vol.38- P. 1449-1457.

124. Bhamarapravati N., Nimsomburana P. Geographical pathology of cir-rosis and carcinoma of the liver in Thailand / Proceeding of the 16th General Assemble of the Japan Medical Congress. Tokio, 1963.-Vol. 3.-P. 376-382.

125. Bhamarapravati N., Thamavit W. Animal studies on liver fluke inves-tation, dimetylni-trosamin and bile duct carcinoma (letter). // Lancet. 1978. -Vol. 1. - № 8057. - P. 206-207.

126. Bhamarapravati N., Thamavit W., Vajra Sthrira S. Liver changes in hamsters infected with a liver fluke of man, Opisthorchis viverrini //Amer. J. Trop. Med. Hyg., 1978. - Vol. 27. - № 4. - P. 787-794.

127. Bjorkhem-Bergman L., Torndal U.B., Eken S. et al. Selenium prevents tumor development in a rat model fur chemical carcinogenesis // Carcinogenesis, 2005. P. 125-131.

128. Braga H.J., Imam K., Bluemke D.A. MR imaging of intrahepatic cholangiocarcinoma: use of ferumoxides for lesion localization and extention //Am. J. Roentgenol., 2001.- Vol. 177. № 1. - P. 11-114.

129. Bravo A.A., Sheth S.G., Chora S. Liver biopsy. //Engl J Med.2001.-Vol.344.-P.459-500.

130. Breitenstein S., Apestegui C., Clavien P.A. Positron emission tomography (PET) for cholangiocarcinoma //HPB (Oxford), 2008.-Vol. 10. № 2. -P. 120-121.

131. Brunt M.E. Grading and Staging the Histopathoiogical Lesions of Chronic Hepatitis: The Knodell Histology Activity Index and Beyond.// Hepa-tolog.2000.- Vol.3l(l).-P.241-246.

132. Buchmann A., Schwarz A., Schmitt R. et al. Development of cytochrome Р-450-altered preneoplastic and neoplastic lesions during nitrosamine -induced hepato-carcinogenesis in the rat // Cancer Res., 1987. Vol. 47. - P. 29112918.

133. Cadranel J.F., Rufat P., Degos F. Practices of liver biopsy in France: results of a prospective nationwide survey. For the Group of Epidemiology of the French Association for the Study of the Liver (AFEF). //Hepatology. 2000. -Vol.32.-P. 477-481.

134. Castera L., Negre I., Samii K., Buffet C. Pain experienced during percutaneous liver biopsy .//Hepatology. 1999.-Vol. 30-P.1529-1530.

135. Castera L., Vergniol J., Foucher J. et al. Prospective Comparison of Transient Elastography, Fibrotest APRI, and Liver Biopsy for the Assessment of Fibrosis in Chronic Hepatitis C.// Gastroenterology. 2005.-Vol.l28-P. 343-350.

136. Cboi B.I., Han J.K., Hong S.T. et al. Clonorchiasis and cholangiocar-cinoma: etiologic relationship and imaging diagnosis //Clinical Microbiology Reviews, 2004. Vol. 17, № 3. - P. 540-552.

137. Chalasani N., Said A., Ness R., et al. Screening for hepatocellular carcinoma in patients with cirrhosis in the United States: results of a national survey .//Am J Gastroenterol .1999.-Vol. 94-P. 2224-2229.

138. Clary В., Jamigan W., Pitt H. et al. Hilar cholangiocarcinoma //Gastrointest.Surg.,2004. Vol. 8. - № 3. - P. 298-302.

139. Edwards B.K., Brown M.L., Wingo P.A. et al. Annual Report to the Nation on the Status of Cancer, 1975-2002, Featuring Population — Based Trends in Cancer Treatment / J.N.C.I., 2005. № 9. - P. 1407-1427.

140. Factor V.M., Radaeva S.A. Oval cells hepatocytes relationships in dipininduced hepatocarcinogenesis in mice // Exp.Toxicol Pathol., 1993. - Vol. 45. -P. 239-244.

141. Factor V.M., Radaeva S.A., Thorgeirsson S.S. Origin and fate of oval cells in dipin-induced hepatocarcinogenesis in the mice // Amer. J. Pathol., 1994. -Vol. 145. P. 409-422.

142. Farber E. Ethionine carcinogenesis // Adv. Cancer Res, 1963. Vol. 7. -P. 383-474.

143. Friedman S.L., Rockey O.C., Bissell D.M. Hepatic fibrosis 2006: report of the Third AASLD Single Topic conference.// Hepatology.2007.-Vol. 45-P. 242-249.

144. Gao Z.X. Preliminary study on healthe effects in the residents exposed to liguefied petroleum gas. / Chung. Hua. Yn. Fang Hsueh TSA / Chin., 1994. -Vol. 28.-№3.-P. 154-157.

145. Giannini E.G., Zaman A., Ceppa P. et al. A simple approach to non-invasively identifying significant fibrosis in chronic hepatitis С patients in clinical practice. //J Clin Gastroenterol. 2006.-Vol. 40-P. 521-527.

146. GuidoM., Rugge M. Liver biopsy sampling in chronic viral hepatitis.// Semin Liver Dis. 2004.-Vol.24-P.89-97.

147. Habib S.L., Srikanth N.S., Scappaticci F.A. et al. Altered expression of cytochrome P450mRNA durin chemical-induced hepatocarcinogenesis and following partial hepatectomy //Toxical Appl. Pharm., 1994. Vol. 124. - P. 139-148.

148. Harada Т., Maronpot R.R., Enomoto A. et al. Changes in the liver and gallbladder / Eds U. Mohr, D.L.Dungworth, C.C.Capen et al. Vol. 2 Pathobiology of the aging mouse. Washington D.C.:ILSI Press, 1996. - P. 207-241.

149. Hoover K.L. Oval cell hyperplasia, liver, mouse, rat // Jones T.C., Mohr U.,Hunt R.D. (eds). Digestive system. ILSI Monograph. Washington D.C.: ILSI Press, 1985.-P. 125-127.

150. Ilyinskih E.N., Loguinov S.V., Rodicheva N.S. et al. Mutagenic and carcinogenic effects of one of the trematodes Opisthorchis felineus.// J. of BUON, 1997.-№4.-P. 367-372.

151. Imbert-Bismut F., Ratziu V., Pieroni L., Chariot!e F., Benhamou Y, Роупаго T. MULTIVIRC Group. Biochemical markers of liver fibrosis in patientswith hepatitis С virus infection: a prospective stud.//Lancet 2001/-Vol. 357-P. 1069-1075.

152. Ishak K., Baptista A., Bianchi L., et ai. Histological grading and staging of chronic hepatitis.// J Hepatol.l995.-Vol.-22-P.696-699.

153. Jensen O.M. Endoscopic screening for varices in cirrhosis: findings, implications, and outcomes. //Gastroenterology. 2002.- Vol.122-P.1620-1630.

154. Kban S.A., Davidson B.R., Goldin R. et al. Guidelines for the diagnosis and treatment of cholangiocarcinoma consensus document //Gut, 2002. — Vol. 51. Suppl. 6.-P. 1-9.

155. Kban S.A., Thomas H.C., Davidson B.R., Taylor-Robinson S.D. Cholangiocarcinoma. Lancet. - 2005. - Vol. 366. - № 9493. - P. 1303-1305.

156. Kim Y.J., Yun V., Lee W.J. et al. Usefulness of 18F-FDG PET in intrahepatic cholangiocarcinoma //Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2003. Vol. 30. - № 11.-P. 1467-1472.

157. Klatskin G. Adenocarcinoma of the hepatic duct at its bifurcation within the porta hepatic: an unusual tumor with distinctive clinical and pathological features // Amer. J. Med., 1965. Vol. 38. - P. 241-256.

158. Knudson A.G. Mutation and cancer // Proc. Nat. Acad. Sci., 1971. -Vol. 68. P. 820-823.

159. Knudson A.G. Human cancer genes / Genes, Chromosomes, and Neoplasia. / Eds. F.E. Arrighi et al. N.Y. Press Raven, 1981. P. 453-462.

160. Koeda N., Iwai M., Kato A., Suzuki K. Validity of 13- С phenylalanine breath test to evaluate functional capacity of hepatocyte in patients with liver cirrhosis and acute hepatitis. // Aliment Pharmacol Ther, 2005. Vol. 21.-P.851-859.

161. Lackner C., Struber G., Liegl В., et al. Comparison and validation of simple noninvasive tests for prediction of fibrosis in chronic hepatitis C// Hepatol-ogy,2005.- Vol. 41.- P.1376-1382.

162. Landis S.H., Murray Т., Bolden S. et al. Cancer statistics 1998 // CA Cancer J. Clin., 1998. Vol. 48. - № 6. - P. 6-29.

163. Lim J.H. Cholangiocarcinoma: morphologic classification according to growth pattern and imaging findings // AJR, 2003. Vol. 181. - № 3. - P. 819827.

164. Leduc E.H. Regeneration of the liver //The Liver. Vol. 11. Acad. Press., 1964.-P. 112-187.

165. Liu C.H., Hsu S-J., Lin J-W. et al. Noninvasive diagnosis of hepatic fibrosis in patients with chronic hepatitis С by Splenic Doppler impendance index. // Clin Gastroenterol Hepatol, 2007.- Vol. 5.- P.l 199-1206.

166. Lowry O.H., Rosenbrough N.F., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurements with the Folin phenol reagent // J. Biol.Chem., 1951. Vol. 193. - P. 265-275.

167. Maeda H. Carcinogenesis via microbial infection / Gan To Kagaicu Ryoho, 1998. -№251. -P. 1474-1485.

168. Maharaj В., Maha'a; R.J. Leary W.P., Cooppan R.M., Naran A.D., Pirie D., et al.Sampling variability and its influence of the diagnostic yield of percutaneous needle biopsy of the liver.// Lancet, 1986.- Vol. 1.-P.523-525.

169. McGill B.D.,Rakala J., Zinsmeister A.R., Ott B.J. A 21-year experience with major hemorrhage after percutaneous liver biopsy.// Gastroenterology,1990.- Vol. 99.-P.1396-1400.

170. Milazzo L., Piazza M„ Sangaletti 0., et al. 13C Methionine breath test г novel method to detect antiretroviral drugrelated mitochondrial toxicity.// J An-timicrob Chemother ,2005.- Vol. 55.- P. 84-89.

171. Mohr U. International classification of rodent tumors. The Mouse . -Berlin; Heidelberg; New York: Springer Verlag, 2001. - P. 1-474.

172. Mori Y., Koide A., Tatematsu K. et al. Effects of a naphtyl isotio-cyanate and aheterocyclicl amine, PhIP, cytochrome P 450, mutagenic activation of varios carcinogens and uronidation in rat liver. / Mutagenesis, 2005. - № 1. -P. 15-22.

173. Nakajima Т., Kondo Y., Miyazaki M. et al. A histopathologic study of intrahepatic cholangiocarcinoma histologic classification and modes of spreading //Hum.Pathol., 1988.-Vol. 19. № 10.-P. 1228-1234.

174. O'Brien M.J., Keating N.M., Elderiny S., et al. An assessment of digital image analysis to measure fibrosis in liver biopsy specimens of patients with chronic hepatitis CM Am J Clin Pathol, 2000.- Vol. 114.- P.712-718.

175. Omura Т., Sato R. The carbon monoxide-binding pigment of liver microsomes II Solubilization, purification and properties // J. Biol. Chem., 1964. — Vol. 239.-P. 2379-2385.

176. Opie E.L. The pathogenesis of tumors of the liver produced by Butter Yellow // J. Exp. Med., 1994. Vol. 80. - P. 231-246.

177. Paajarvi G., Viluksela M., Pohjanvirta R. et al. TCDD activates Mdm2 and attenuates the p 53 response to DNA damaging agents. / Carcinogenesis, 2005. №1. — P. 293-305.

178. Park M.S., Kim Т.К., Kim K.W. Differentiation of extrahepatic bile duct cholangiocarcinoma from denign stricture findings at MRCP versus ERCP // Radiology, 2004. Vol. 233. - № 1. - P. 234- 240.

179. Percy C., Van Holten V., Muir C. et al. International ckassification of diseases for oncology. 2nd ed. Geneva World Health Organisation, 1990.

180. Perri F,. Marras R.M., Ricciardi R., Quitadamo M„ Andriulii A. 13C-breath tests in hepatology (cytosolic liver function).// Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2004,- Vol. 8.- P.47-49.

181. Pinzani M. Non- invasive evaluation of hepatic fibrosis: don't count your chickens before they're hatched.// Gut,2006.- Vol.55.- P.310-312.

182. Regev A., Berho M., Jeffers L.J., Milikowski C., Molina E.G., Pyr-sopoulos N.T. et al. Sampling error and intraobserver variation in liver biopsy in patients with chronic HCV infection. //Am. J. Gastroenterol., 2002.-Vol.97.-P.2614-2618.

183. RousseletM.S., Michalak S., Dupre F., et al. Sources of variability in histological scoring of chronic viral hepatitis. //Hepatology, 2005.-Vol.41.-P.257-264.

184. Siddique I., El-Naga H.A., Madda J.P., Memon A., Hasan F. Sampling variability on percutaneous liver biopsy in patients with chronic hepatitis С virus infection. //Scand. J. Gastroenterol., 2003.-Vol.38.-P.427-432.

185. Siddigue M.M., Balram Ch., Fiszer-Maliszewska L. et al. Evidence for Selective Expression of the p. 53 Codon 72. Polymorphs: triplication in Cancer Development. / Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention, 2005. № 9. -P. 2245-2252.

186. Slattery J.M., Sabany D.V. What is the current state-of-the-art imaging for detection and staging of cholangiocarcinoma? //The Oncologist, 2006. -Vol.11.-№8.-P. 913-922.

187. Sotomaa R., Liyanarachchi S., Mecklin J P et al. p 53 Codon 72 and MDM2 SNP 309 Polymorphism and Age of Colorectal Cance Onset in Lynch Syndrome /

188. Stal P., Hultgranz R., Moller L., Eriksson L.C. The effect of dietary irion on initiation and promotion in chemical 1 hepato-carcinogenesis // Hepatology, 1995.-21.-P. 521-528.

189. Standish R.A., Cholangitas E., Dhillon A. et al. An appraisal of the histopathological assessment of liver fibrosis. //Gut., 2006.-Vol.55.-P.569-578.

190. Stauber R.E., Lackner C. Noninvasive diagnosis of hepatic fibrosis in chronic hepatitis C. //World J. Gastroenterol., 2007.-Vol.l3(32).-P.4287-4294.

191. Talwalker J.A., Kurtz D.M., Schoenleber S.J., et al. Ultrasound-based transient elastography for the detection of hepatic fibrosis: systematic review and meta-analysis. //Clin. Gastroenterol. Hepatol., 2007.-Vol.5.-P.1214-1220.

192. Tbongprasert S. The role of chemotherapy in cholangiocarcinoma //Ann. Oncol., 2005. Vol. 16. - Suppl. 2. - P. 93-96.

193. Terao К., Nakano M. Cholangiofibrosis induced by short-term feeding of 3- methyl-4- (dimethylamino) azobenzene: an electron microscopic observation // Gann, 1974. Vol. 65. - P. 249- 260.

194. Thamavit W, Bhamarapravati N, Sahaphony S. et al. Level of Opistorchis infection and carcinogen dose dependence of cholangiocarcinoma induction in Syrian golden hamsters //Virchovs Archiv В., 1987. — Vol. 54. P. 52-58.

195. Thamavit W., Ngamying M, Boonpucknavig V. et al. Enhancement of DEN-induced hepatocellular nodule development by Opisthorchis viverrini infection in Syrian golden hamsters //Carcinogenesis, 1987. Vol. 8. - P. 13511353.

196. The French METAVIR Cooperative Study Group. Intraobserver and interobserver variations in liver biopsy interpretation in patients with chronic hepatitis C. //Hepatology, 1994.-Vol.20.-P. 15-20.

197. Turusov V.S., Mohr U. Pathology of Tumors in Laboratory Animals (Vol. Ill Tumors of the Hamsters. IARC. Lyon, 1996. - 469 p.

198. Uryvaeva I.Y. A model of hepatic regeneration and carcinogenesis due total cell injury inducet by dipin and partial hepatectomy. //Monogr. Dev. Biol. Basel. Karger, 1992. V. 23. - P. 230-236.

199. Vah Thiel D.H., Gavaler J.S., Wright H., Tzakis A. Liver biopsy. Its safety and complications as seen at a liver transplant center. //Transplantation, 1993.-Vol.55.-P. 1087-1090.

200. Wai C.T., Greenson J.K., Fontana R.J., et al. A simple noninvasive index can predict both significant fibrosis and cirrhosis in patients with chronic hepatitis C. //Hepatology, 2003.-Vol.38-P.518-526.

201. Ward J.M., Fox J.G., Anver M.R. et al. Chronic active hepatitis and associated liver tumors in mice caused by a persistent bacterial infection with a novel Helicobacter species//J. Natl. Cancer Inst., 1994. Vol. 86. - P. 12221227.

202. Weinbren K., Mutum S.S. Pathological aspects of cholangiocarcinoma //J. Pathol, 1983.-Vol. 139. -№ 2. P. 217-238.f)

203. Welzel T.M ., McGlynn K.A. et al. Impact of classification of hilar cholangiocarcinomas (Klatskin tumors) on incidence of intra- and extrahepatic cholangiogiocarcinoma in the United States //JNCL, 2007. Vol. 99. - № 5. - P. 407-408.

204. Witzigmann H., Wiedmann M., Wittekind C. The rapiekonzepte und Ergebnisse bei Klatskin-Tumoren //Dtsch. Arztebl., 2008. Bd. 105. - № 9. - s. 156-161.

205. Wong Ch. M., Yam J. - P, Ching Y - P. et al. Rho GT Pase - Ac-tivatin Protein Deleted in Liver C- Cancer Suppresses Cell Proliferation and Invasion in Hepatocellular Carcinoma /Cancer Research, 2005. - № 19. - P. 8861-8868.

206. Yin M., Talwalker J.A., Glaser K.J., et al. A preliminary assessment of hepatic fibrosis with magnetic resonance elastography. //Clin. Gastroenterol. Hepatol., 2007.-Vol.5.-P. 1207-1213.

207. Yokoyama Y., Nisbio H., Ebata T. et al. New classification of cystic duct carcinoma//World J. Surg., 2008.-Vol. 32.-№ 4.-P. 621-626.

208. Zaitoun A.M., Al Mardini H., Awad S., Ukabam S., Makadisi S., Record C.O. Quantitative assessment of fibrosis and steatosis in liver biopsies from patients with chronic hepatitis C. //J. Clin. Pathol., 200l.-Vol.54.-P.461-465.

209. Zerban H., Bannasch P. Sponguosis hepatitis in rats treated with low doses of hepatotropic nitrosamines // Cancer Lett., 1983. Vol. 19. - № 3. - P. 247-252.

210. Ziol M., Handra-Luca A., Kettaneh A. et al. Noninvasive assessment of liver fibrosis by measurement of stiffness in patients with chronic hepatitis C. //Hepatology, 2005.-Vol.41 (1 )-P.48-54.