Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Трипаносомозы лошадей в условиях Иордании и Палестины

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Трипаносомозы лошадей в условиях Иордании и Палестины"

На правах рукописи

АЛИ АДНАН

ТРИПАНОСОМОЗЫ ЛОШАДЕЙ В УСЛОВИЯХ ИОРДАНИИ И ПАЛЕСТИНЫ (ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ПАТОГЕНЕЗ, ВЛИЯНИЕ ЦИМЕЛАРСАНА НА МОРФОЛОГИЮ TRYPANOSOMA EQUIPERDUM)

03.00.19.- Паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 2004 г.

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина».

Шугаьш руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Меньшиков Владимир Григорьевич

Научный консультант: доктор ветеринарных наук,

профессор Меньшикова Зинаида Николаевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Заболоцкий Вячеслав Титович доктор ветеринарных наук, профессор Тимофеев Борис Александрович

Ведущая организация: Всероссийский научно -исследовательский

институт гельминтологии им.К.КСкрябина.

Защита состоится «12» Мая. 2004 г в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 220.042.01 в Московской академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат диссертации разослан Апреля 2004

Ученый секретарь диссертационного совета

Брылина В.Е.

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В настоящее время трипаносомозы остаются важной медико-биологической и ветеринарной проблемой, особенно для стран Ближнего Востока. Так, по данным секретаря эпизоотического бюро Louis Touratier (2002) трипаносомозы лошадей и ослов составляют до 70% среди болезней этих животных. В Иордании и Палестине частота распространения трипаносомозов и их клиническое проявление сильно варьирует в зависимости от географической зоны (Robertson, A, 1976). Эти болезни на среднем востоке являются причиной уменьшения продуктивности, увеличения смертности и большим экономическим ущербом (Luckins, A.G. 1988, Pathak et al., 1993; Radostits, O.M. et al., 1994). Страны несут значительные убытки на внешнем рынке при сбыте продуктов коневодства и реализации поголовья племенных и товарных лошадей.

К сожалению, до сих пор нет полных эпизоотологических данных по распространению T.equiperdum и T.evansi на территории моей страны.

В этой связи, первостепенную значимость приобретают исследования вновь синтезируемых лечебных препаратов. Использование светооптических и субмикроскопических методов исследования, позволяет открыть своеобразные стороны механизма действия трипаноцидных препаратов и определить возможности направленного синтеза эффективных лекарственных веществ (Mamman M, Peregrine A, 1994., Меньшиков В.Г., 1998).

Судя по ограниченным литературным данным, многие зоны Иордании неблагополучны по трипаносомозам (M.N.Abo-Shehada 1999). Для разработки радикальных мер борьбы необходимо знание эпизоотического процесса (видового состава возбудителей, переносчиков и их взаимоотношений). Требуется также детализация вопросов этиологии, диагностики и лечения трипаносомозов.

Цель и задачи исследований. Целью нашего исследования было: изучить эпизоотологическую ситуацию по трипаносомозам лошадей и ослов в условиях Иордании и Палестины, уточнить видовой состав возбудителей трипаносомозов и определить характер изменения морфологии Trypanosoma equiperdum под влиянием цимеларсана.

Для выполнения этой цели были поставлены следующие задачи; 1. Провести анализ распространения трипаносомозов среди непарнокопытных животных в Иордании и Палестины.

2. Изучить в сравнительном аспекте субмикроскопическую организацию Trypanosoma equiperdum «Иорданий 2001», выделенных от лошадей и ослов в Иордании и Trypanosoma equiperdum Antar-4.

3. Определить патогенное влияние паразитов на лимфатические узлы и селезенку в динамике паразитемии.

4. Выявить характер изменения ультруструктуры Trypanosoma equiperdum под влиянием Cymelarsan.

Научная новизна. В результате исследований в условиях Иордании и

POt НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С.Петербург

1 О» 1

Палестины определены зоны, неблагополучные по трипаносомозам домашних животных.

Уточнен видовой состав трипаносом в зонах интенсивного ведения коневодства в Иордании.

Впервые изучена ультраструктура Trypanosoma equiperdum «Иордании 2001».

Определена трипаноцидная эффективность препарата Cymelarsan и его влияние на ультраструктуру трипаносом, что выражалось деструкцией гликокалекса мембранных органелл цитоплазмы и ядра.

Практическая ценность работы. Полученные данные могут быть использованы для проведения лечебно-профилактических мероприятий против трипаносомозов домашних животных.

Получены материалы по ультраструктуре возбудителя случной болезни Dourine (араб. - Bou-Dinar) Trypanosoma equiperdum. Показаны важные моменты взаимоотношения паразита и хозяина, влияние лекарственных веществ на трипаносом и животных, что может быть рекомендовано при синтезе трипаноцидных препаратов.

Материалы исследований использованы при написании статей t и методических рекомендаций по текущему контролю знаний для студентов факультета ветеринарной медицины, а также в учебном процессе при преподавании дисциплины «Паразитология» на ФВМ, ВБФ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

1. Международной конференции ассоциации ветеринарных врачей арабских стран по теме «Борьба с болезнями животных» (Ирак, 2001).

2. III Научно-практической конференции по болезням лошадей (Москва,

2002).

3. Научно-практической конференции, посвященной 110-летию Маркова (Ставрополь, Вестник Ветеринарии, 2002).

4. Научно-практической конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2003).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Эпизоотологическая ситуация по трипаносомозам в Иордании и Палестине.

2. Морфологические и субмикроскопические параметры изолята возбудителя случной болезни непарнокопытных Иордании и Палестины.

3. Морфологические изменения трипаносом, лимфатических органов, селезенки мышей в динамике паразитемии.

4. Определение оптимальной терапевтической дозы Cymelarsan, изучение его трипанцидного действия в сравнении с беренилом.

5. Изучение изменений ультраструктуры трипаносом под влиянием Cymelarsan.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, содержит 3 таблицы и 25

рисунков. Список использованной литературы, включает 194 источника, в том числе 157- иностранных. В приложении представлено ....документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работы.

Публикации. По материалам собственных исследований опубликованы 4 научные работы, в которых отражено основное содержание диссертации

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследования Штаммы трипаносом, подопытные животные и трипаноцидные препараты

Работа выполнена в течение 2000-2003 г.г. на кафедре паразитологам и инвазионных болезней животных ФГОУ ВПО «МГЛВМиБ им.К.И.Скрябина» и в лаборатории паразитологии Иорданского Университета Науки и Техники. Эпизоотологические исследования проводили в 9 областях Иордании и Палестины, а также анализировались данные ветеринарной отчетности Департамента ветеринарии Иордании.

В настоящей работе использован штамм Trypanosoma equiperdum «Иордании 2001», выделенный от аборигенных лошадей и любезно предоставленный профессором Mahmoud N. Abo-Shehada. Пассажи и поддержание штаммов трипаносом проводили на белых мышах линии CD1 массой 18-20 г, которых заражали через каждые 3-4 дня кровью от больных животных внутрибрюшинно стандартной дозой 0,1-0,2 мл с содержанием 5-8 трипаносом в поле зрения микроскопа при увеличении 280.

Опыты по изучению действия препарата цимеларсана (Cymelarsan) на трипаносом проводили на белых мышах, зараженных штаммом Т. equiperdum. Всего в опытах было использовано 350 белых мышей.

Препараты применяли из расчета на 20 г веса животного по методике И.И. Казанского.

Трипаносом для электронной микроскопии выделяли из крови через 10-30 минут после экспозиции препарата.

Выделение трипаносом из крови

Для получения максимального количества трипаносом, свободных от форменных элементов крови, у мышей на 3-ий день после заражения при паразитемии 80-100 трипаносом в поле зрения микроскопа х 280 брали кровь из ретроорбитального сплетения пастеровской пипеткой. Кровь разводили 1:10 цитратно-солевым раствором рН 7,2 с добавлением 10 % лошадиной сыворотки и оставляли на час при комнатной температуре.

Надосадочную жидкость, в которой содержались трипаносомы, отсасывали и переносили в центрифужные пробирки. Трипаносомы при этом оставались в надосадочной жидкости. Ее повторно центрифугировали при 3,5 тыс. об/мин 5 мин с целью осаждения трипаносом. Процесс выделения

трипаносом контролировали микроскопически, с последующей биологической пробой на белых мышах. Трипаносомы в виде тонкого белого налета оседали на дно пробирки. Такая процедура практически не повреждала трипаносом, они сохраняли подвижность и патогенность.

Методы подготовки препаратов для электронной микроскопии

Непременным условием для изучения объектов в электронном микроскопе является прикрепление их к тончайшим пленкам-подложкам. Способы приготовления различных пленок-подложек приводятся в различных руководствах по технике электронной микроскопии. Мы использовали метод приготовления пленок-подложек из формвара, предложенных Меньшиковой З.Н.(1991).

Пленки, полученные таким способом, были равномерны по толщине и обладали большой механической прочностью. Отработанный нами метод выделения трипаносом, давал возможность получать достаточное количество трипаносом, свободных от форменных элементов крови. В своих исследованиях мы фиксировали и заливали трипаносомы по Sabatini D. et al (1963).

Осадок трипаносом фиксировали 1 % раствором глютарового альдегида на фосфатном буфере 30 минут. Затем суспензию трипаносом дважды отмывали от фиксатора 4% раствором сахарозы на фосфатном буфере. Последующую фиксацию проводили раствором осмиевой кислоты по Palade G., в течение часа. Осмиевый фиксатор отмывали ацетат-вероналовым буфером в процессе центрифугирования при 500-800 об/мин 3-5 минут.

Дегидратация трипаносом проходила в серии спиртов, возрастающей концентрации, по следующей схеме:

* 30° этиловый спирт - 2 часа.

5 0° этиловый спирт - 3 0 мин.

70° этиловый спирт - 12-18 час.

100° этиловый спирт - 1 час (3 раза по 20 мин.)

Все манипуляции по фиксации и обезвоживанию проводили при +4°С. Обезвоживание заканчивали в окиси пропилена (дважды по 30 мин.) или в абсолютном ацетоне.

Последующие этапы заключались в постепенном пропитывании и заливке обезвоженной массы трипаносом смесью эпона и аралдита или смесью компонентов аралдита по Luft I. (1961).

Приготовление контрастирования и ультратонких срезов

Приготовление ультратонких срезов производили с помощью стеклянных ножей на ультратоме шведской фирмы IKB-8802 А. Для повышения контрастности срезы окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца по Venable J,CoggeshalR.(1965).

При контрастировании срезов уранилацетатом использовали 3,8%-ный водный раствор уранилацетата по Watson M. (1968) или 7,55-ный водный

раствор этой соли. Контрастирование проходило при температуре 37° в течение 2-3 часов. Дополнительно окрашивали срезы трипаносом цитратом свинца по Reynolds E. (1963) в течение 1 минуты. Хороший контраст получили при окраске препаратов готовым цитратом свинца по Venable J., Coggeshal R. (1965).

Микроскопирование объектов

Элсктронномикроскопическое исследование проводили на микроскопе JEM-100 С при напряжении 80 kv, апертурной диафрагме 25 нм. Фотографирование проводили на пластинах для ядерных исследований типов «МР», «MA», «MK» при инструментальном увеличении 7-15 тыс. Для получения высококачественных рисунков срезов трипаносом, мы отсканировали готовые пластины - негативы, на сканере HP ScanJet 3400, и обработали их в программе Photoshop 6.O. Задача исследования значительно облегчалась возможностью увеличения изучаемых объектов в 4-6 раз в процессе обработки рисунков в Photoshop 6.O.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Распространение трипаносомозов непарнокопытных на территории Иордании и Палестины

Общее количество непарнокопытных на территориях Иордании и Палестины около 50 тыс. голов (лошади, ослы, мулы, лошаки).

Распространение трипаносомозов среди животных на территории

Иордании и Палестины. Таблица 1.

Область Климат, зона Лошади Верблюды Ослы КРСиМРС

исследовано % пораженных исследовано ! % пораженных исследовано % пораженных исследовано % пораженных

Свима Пустыня (влажная) 60 34 135 30.5 45 11 72 3

Джерико Пустыня (влажная) 95 31 215 27 75 9 117 4

Ирбид предгорье 26 7 66 2 27 0 54 0

Дженин предгорье 43 12 17 0 23 0 75 4

Маан Пустыня (сухая) 17 14 125 7 24 0 113 3

Хеврон предгорье 123 22 157 11 84 4 135 2

11акаб Пустыня (сухая) 37 9 74 8 47 3 92 0

Газа Морская (влажная) 19 0 14 5 33 2 23 0

Рамаллах предгорье 74 2 0 0 65 2 62 0

Среди исследованных лошадей наибольший процент занимают лошади арабской породы как символ арабской традиции. Все это поголовье является составным компонентом природного очага трипаносомозов. Как известно Иордания и Палестина находится в тесном сотрудничестве с другими ближневосточными государствами, Сирия, Ирак, Саудовская Аравия и неблагоприятная эпизоотическая обстановка по трипаносомозам в этих государствах сильно влияет на эпизоотическую обстановку в моей стране.Кроме того, на территории Иордании и Палестины широко распространены переносчики трипаносомозов слепни рода Tabanus и кровососущие мухи рода Stomoxys, которые обитают вдоль реки Иордан и ее притоков. Эти заболевания зарегистрированы в разных регионах Иордании - Свима, Джерико( область Мертвого моря) Ирбид, Газа, Майн, Хеврон,, Дженин, Накаб ,Рамаллах

Результаты изучения эпизоотологической ситуации по трипаносомозам животных в Палестине и Иордании отражены в таблице 1, из которой видно, что самая неблагополучная по трипаносомозу лошадей область Свима, где процент заражения составляет 34%, наиболее благополучная область Газа, где не обнаружено зараженных животных; по трипаносомозу верблюдов - самая неблагополучная область - Хеврон (33%), а благополучная - Рамаллах (0%).

Светооптическое изучение в динамике паразитемии: трипаносом, лимфатических узлов и селезенки

Trypanosoma equiperdum представляет собой интересный объект для изучения микроскопической организации, поскольку она относятся к патогенным трипаносомам, способным вызывать у животных сходные по клиническим признакам заболевания. Светооптическими исследованиями нами установлены основные органеллы и включения трипаносом — пелликула, жгутик и ядро, форма и размеры которых изменялись в динамике паразитемии. На третий день инвазии они были вытянуты и компактны; на пятый день становились более округлыми с многочисленными вакуолями внутри и деформированной пелликулой снаружи (рис. 1, день 5-й).

При заражении мышей (№2) исходным материалом (рис. 1) от мышей на 5 день паразетемии (№5) у животных обнаруживали трипаносом на 3-й день инвазии (№4) и на 5 день (№6) мыши сохранялись - трипаносомы при этом были незначительно деформированы, более вытянуты, содержимое цитоплазмы заполнено осмиофильным веществом. Таким образом, в динамике паразитемии происходит постоянное изменение формы пелликулы, цитоплазмы и ядра. Патоморфологические изменения в паренхиматозных органах, убитых в различные сроки после заражения животных выражались в полнокровии. Гистологическими исследованиями этих органов на 3 день болезни установлены изменения со стороны сосудов, которые были расширены и полнокровны. Эндотелий их был набухший, дезориентирован и выступал в просвет сосудов.

В более поздние сроки наблюдали полнокровие застойного характера. Значительные изменения находили в селезенке. Так, стенки капсулы и трабекулы были разволокнены фибробластами и форменными элементами.

Часть эритроцитов в пульпе находились в состоянии дегенерации или полного распада. Стенки синусов были растянуты многочисленными оптически светлыми гранулами, эндотелий синусов был разобщен. Селезенка и лимфоузлы приобретали ржаво-коричневый цвет вследствие накопления в них гемосидери-на, свидетельствующем о патологическом внутрисосудистом гемолизе. При исследовании лимфатических узлов висцеральных грудных и параэнтеральных bronhialis medii portales, pectales, gastrici, hepatici отмечали отечность капсулы и лимфоидных структур, корковое и мозговое вещество их было отечно и густо заполнено лимфоцитами, которые располагались группами и одиночно.

Исходная S'il день) 3-й день 5'(3 день) 5-й день 5'(5 день)

рис 1. Изменение структуры трипаносом в динамике паразетемии.

Таким образом, при вскрытии грызунов, зараженных возбудителем случной болезни, отмечали периваскулярные отеки кровеносных сосудов, многочисленные скопления трипаносом, находящихся по одиночке, в форме конгломератов или полностью закрывающих просвет капилляров. Лимфатические узлы и селезенка, являясь биологическим фильтром, подвергались значительным изменениям. В свою очередь в сосудистом эндотелии, который является ключевым элементом проницаемости и регулятором сосудистого тонуса, находили изменение формы и нарушение целостности монослоя эндотелия. Увеличение и поражение лимфатических параэнтеральных узлов брюшины и средостения указывают на тяжелое течение болезни и неблагополучный прогноз.

Ультраструктура Trypanosoma equiperdum штамма «Иордания 2001» возбудителя трипаносомозов непарнокопытных животных Иордании и

Палестины

В результате электронномикроскопических исследований ультратонких срезов возбудителя трипаносомозов непарнокопытных животных была установлена сложная субмикроскопическая организация этого вида трипаносом. Тело трипаносомы ограничено плазматической мембраной и покрывающим слоем гликокалекса, которые вместе получили название пелликулы. Общая толщина ее составляет 19,90 ± 0,73 нм (таблица 2). У трипаносом, выделенных из крови лабораторных животных на третий день инвазии, покрывающий слой электронноплотный, в виде чехла равномерно охватывает клетку со всех

сторон, толщиной 12-14 им. У некоторых клеток, полученных на 5-6 день течения болезни, этот слой был нечетко выражен или отсутствовал вовсе, и тогда тело трипаносом было покрыто только плазматической мембраной (рис 3). Плазматическая мембрана трипаносомы трехслойная (элементарная). Каждый слой отчетливо различается. При фиксации глутаровым альдегидом с дофиксацией осмиевой кислотой толщина каждого слоя составляла 2,5-3,5 нм. При этом толщина наружного осмиофилыюго слоя была несколько больше, чем внутреннего. Средний электронно-светлый (осмиофильный) слой, как правило, был равномерно расположен между осмиофильными слоями. Наружный листок мембраны плотно прилегает к покрывающему слою.

Таблица 2.

Структурные элементы и органеллы Т.ечшрегс1ит Показатели, (нм).

1. Гликокалекс 11-13

2. Кинетопласт 0,5 х 1,8

3. Пелликула 19,9 ±0,73

4. Рибосома -2,0

5.Субпелликулярные трубочки 24,48 ± 0,69

б.Плазматическая мембрана 7,5 -9,0

Под внутринем слоем плазматической мембраны равномерно расположены субпелликулярные микротрубочки. Эти структуры хорошо просматриваются при электронной микроскопии поперечных ультратонких срезов клетки. В жгутиковом кармане их обнаружить не удалось. Субпелликулярные микротрубочки прямолинейны, имеют постоянные размеры.На поперечных срезах клеток на различных уровнях они выглядят как кольца, расположенные в один ряд под плазматической мембраной. Каждая микротрубочка окружена электронно-светлой зоной, в которой нет рибосом или других включений. Стенки микротрубочки состоят из отдельных линейных или спиральнонитчатых структур. На поперечных срезах они выглядят пустотелыми. Диаметр их колеблется в пределах 20-24 нм. Расстояние между центрами двух соседних микротрубочек 48.7 нм. На продольных срезах трубчатые структуры выявляются в виде полых цилиндров с осмиофильными стенками, идущими параллельно друг другу. Толщина стенки микротрубочки составляет 4-5 нм, внутренний диаметр 12-14 нм. Контакта субпелликулярных трубочек с плазматической мембраной и внешней средой не установлено. Некоторые микротрубочки заканчиваются на жгутиковом кармане, тогда как другие тянутся вдоль всей клетки трипаносомы. Жгутик трипаносом берет начало от базального тела, которое расположено у его основания непосредственно в цитоплазме, несколько впереди от кинетопласта. Ультраструктура жгутика весьма сложна. Снаружи жгутик окружен поверхностной мембраной, являющейся продолжением пелликулы. Внутренняя полость жгутика заполнена электроннопрозрачным веществом, в которое включены фибриллярные структуры. Основную часть жгутика занимает комплекс жгутиковых фибрилл, расположенных в виде правильного круга. Субфибриллы проходят через

отграничивающую мембрану и как бы охватывают с боков базальное тело, лежащее у основания жгутика (рис. 2) По форме базальное тело напоминает цилиндр. Вдоль аксонемы, выше отграничивающей мембраны базального тела, проходит параксиальный корд, имеющий решеткоподобную структуру. В свободной части жгутика этой структуры не установлено. Нередко в жгутиковом кармане и под оболочкой жгутика выявляются пиноцитозные пузырьки, везикул или «осколки» везикул. В отдельных местах жгутик соединен с пелликулой клетки связующими комплексами, к которому подходят мембраны эндоплазматического ретикулума Ундулирующая мембрана не выявлена.

рис 2. Тангенциальный срез Т. equiperdum пелликулы, субпелликулярных

трубочек, кинетопласта, жгутикового кармана (х18000) Основное вещество цитоплазмы занимает большую часть клетки Trypanosoma equiperdum. В цитоплазме выявлены многочисленные органеллы, включения, нити, гранулы, вакуоли и мембраны. Все эти компоненты образуют сложную взаимосвязанную систему. В отдельных участках цитоплазмы рассеяно большое число электронноплотных частиц - рибосом около 2,0 нм в диаметре. Довольно часто они наблюдаются в виде скоплений — полисом. Ультратонкие срезы Trypanosoma equiperdum позволили выявить тесную связь между рибосомами и эндоплазматическим ретикулом. При этом рибосомы могут быть расположены на мембранах, которые ограничивают пузырьки, мешочки и цистерны.Выявленная у трипаносом система эндоплазматической сети соответствует шероховатому или гранулярному ретикулу. На отдельных снимках мембраны гранулярного ретикулума занимают значительную или небольшую часть цитоплазмы, что является свидетельством лабильности этой системы. Мембраны эндоплазматического ретикулума, лишенные рибосом, составляют «гладкий» или агранулярный ретикулум. В цитоплазме помимо свободных и связанных с эндоплазматическим ретикулумом рибосом отмечается наличие большого количества включений, которые имеют самую разнообразную форму и величину, являясь непостоянным компонентом клетки. В первую очередь к ним относится система вакуолей Многочисленные вакуоли имеют разнообразный размер и форму (рис 3) Встречаются вакуоли округлой и продолговатой формы, величина их колеблется от 1.5 до 5 мкм Иногда одна

вакуоль занимает большую часть цитоплазмы. Количество их различно в зависимости от состояния клетки В старых дегенерирующих клетках количество и размеры вакуолей возрастает. Мембраны этих вакуолей большей частью одноконтурные. Иногда встречаются вакуоли и с двухконтурными мембранами (рис 3). Просвет вакуолей, как правило, электронопрозрачный, однако иногда выявляется гомогенное содержимое с высокой электрооптической плотностью (рис 2).

рис 3. Тангенциальный срез Т. equiperdum. Отчетливо просматривается пелликула, субпелликуллярные трубочки, эндоплазматический ретикулум (х 23000).

В цитоплазме исследованных трипаносом обнаруживали единичные электроннопрозрачные гранулы, ограниченной мембраной, с электроноплот-ными включениями. Такие гранулы в литературе описываются как полифосфатные.Расположсние вакуолей и полифосфатных гранул не имеет определенной закономерности, хотя чаще они обнаруживались между кинетопластом, аппаратом Гольджи и жгутиковым карманом. По всей видимости, положение включений и характер их содержимого связаны с физиологическим состоянием клетки. В цитоплазме около базального тела, у основания жгутика, расположен удлиненный овальной или округлой формы кинетопласт размером 0,5 х 2,0 мкм. Эта органелла снаружи покрыта двойной мембраной. В свою очередь каждая мембрана имеет трехслойное строение. В матриксе кинетопласта выявлены две четкие зоны - периферическая и центральная. Периферическая зона электронно-светлая и лишена структурных компонентов. В центральной электронноплотной зоне расположены длинные параллельные извитые фибриллы толщиной 0,8-1,0 нм, которые лежат перпендикулярно оси кинетопласта. Форма и размеры кинетопласта варьируют Комплекс Голджи состоит из ряда плоских трубочек (цистерн), микропузырьков и вакуолей На некоторых снимках наблюдали отдельные моменты деления жгутикового кармана, ядра и всей клетки трипаносом. Последовательное изучение всех стадий деления клетки трипаносом является самостоятельной проблемой, требующей специального изучения При изучении субмикроскопической организации Trypanosoma equiperdum, выделенных из крови больных животных на 4-ый день развития инвазии, популяции

трипаносом, в основном, была представлена полуразрушенными клетками На (рис 3) демонстрируются такие особи, ограниченные лишь плазматическими мембранами без покрывающего слоя. Во многих местах плазматическая мембрана и покрывающий слой отсутствуют и субпелликуллярные трубочки выглядят обнаженными. Мембрана их разрыхлена, границы слоев сглажены. Цитоплазма трипаносом разрежена, в ней мало или совсем отсутствуют рибосомы. Одновременно выявляли большое количество вакуолей и

рис 4 Продольный разрез Т. equiperdum через кинетопласт - митохондрион жгутиковый карман (х 18000). электроннопрозрачных локусов. Митохондриальные структуры обнаруживали крайне редко. Кинетопласт также подвергался деструктивным изменениям, выра -жавшимся в увеличении электроннопрозрачной периферической зоны, фрагментации, разволокнении и дислокации фибриллярной ДНК-содержащей части к периферии. В свою очередь, в ядрах таких клеток уменьшилось количество хроматина, ядерные мембраны разобщались с образованием обширных электронопрозрачных зон между ними. Часто наблюдали «пустые» ядра. При этом структура жгутика претерпевала незначительные изменения и можно было наблюдать основные его компоненты. Вышесказанное позволяет сделать вывод что клетки трипаносом, выделенные на 6 день развития инвазии,значительно отличаются по морфологии от трипаносом, выделенных из крови мышей на 3 день после зараженея

Таким образом, можно заключить, что ультраструктура Trypanosoma equiperdum сходна со структурой трипаносом группы Brucei:

-Митохондрион, изученных трипаносом представлен отдельными структурами с электронноплотным матриксом, с выраженной связью с кинетопластом.

-Кристы и подобные им структуры обнаружены в митохондриальных органеллах и кинетопласте

На основании электронномикроскопических исследований мы составили схему ультратонкого строения Trypanosoma equiperdum (см. схему штамма Иордания 2001).

Ультраструктурный анализ трипаносом стал отправным этапом в изучении влияния трипаноцидных препаратов на структуру простейших

Лекарственные препараты в практике лечения трипаносомозов

Изучение действия лекарственных препаратов на трипаносом представляет теоретический и практический интерес. Широко использованные препараты на территории Иордании и Палестины для лечения трипаносомозов животных принадлежат к четырем основным химическим группам:

1. Sulphonatednaphtylamine- Suramin.

2. Phenanthridine - homidium bromide (chloride), pyrithidium bromide, iso-metamidium chloride.

3. Diamidine - diminazene aceturate.

4. 6-Aminoquinaldine - quinapyramine di-methylsulphate.

Эта группы препаратов обладают различной трипаноцидной активностью и до сегодняшнего дня широко используются в практике лечения и профилактики трипаносомозов животных.

Нами были испытаны препараты беренил и цимеларсан при экспериментальном трипаносомозе на белых линейных мышах.

Diminazene aceturate (Diamidine, Berenil, Veriben) - комбинированный препарат в 1 грамме которого содержится 445 мг диминазенацетурата и 555 мг феназона. Препарат действует на паразитов рода Trypanosoma и Babesia.

В начале 90-х годов компанией Merial был создан трипаноцидный препарат цимеларсен, который синтезирован как альтернатива suramin-y и quinapiramin-у,к которым приобрели устойчивость жгутиконосцы. Многие годы (Rami M, Atarhouch T, Bendahman MN, Azlaf R, Kechna R, Dakkak A., 2003., Suswam E. A., Taylora D. W., Rossa C. A. and R. J. Martin., 2001). Цимеларсен обладает быстрым трипаноцидным эффектом, трипаносомы разрушаются в течение нескольких часов. В рекомендованных дозах препарат переносится животными хорошо. Задачей наших исследований было изучение сравнительной эффективности беренила и цимеларсена, а также выявление самой эффективной дозы, действующей на Trypanosoma equiperdum.

В практике лечения трипаносомозов животных в Иордании и Палестины широкое применение нашли препараты, механизм влияния которых представляет интерес для теории и практики. На примере Cymelarsan мы поставили задачу изучить изменение ультраструктуры Trypanosoma equiperdum под его влиянием

Cymelarsan (bis (aminoethythio)-4 melaminophenylarsine dehyd- ochloride) (син. Melarsomine, RM 110)

Cymelarsan

Для исследования терапевтической эффективности препаратов против Т. equipeгdum, предварительно экспериментальную группу мышей заражали штаммом Т. equipeгdum и давали развиться инфекции в течение 48 часов до обработки их препаратом.

В предварительных опытах мы использовали Cymelaгsan в дозах 0,12; 0,25; 0,38 мг/кг или 0,05; 0,1; 0,15 мл 0,005% раствора соответственно на 20 г веса мыши, Cymelaгsan вводили мышам подкожно.

Получили наилучший терапевтический эффект при применении дозы 0,25 мг/кг, Специфическое действие препарата Cymelaгsan проявлялось улучшением клинического состояния мышей, несмотря на то, что в первые минуты их экспозиции, паразитемия значительно возрастает за счет полного и незавершенного процесса деления.

Из литературных данных известно, что беренил в дозе 3,5 мг/кг обладает четко выраженным трипаноцидным действием. В наших исследованиях беренил, введенный в дозе 0,1 мл 0,07% раствора (3,5 мг/кг) подкожно оказывал менее выраженное действие на трипаносом.

Изменение ультраструктуры T.rypanosoma equiperdum под влиянием

Суте!агэап

При изучении субмикроскопической организаций трипаносом, выделенных из крови больных животных в эти сроки, установлено, чтоизменения паразитов происходит уже в первые минуты экспозиции лекарственных веществ, несмотря на то, что популяция трипаносом состояла из «целых» клеток.

Однако при исследовании в электронном микроскопе подобных трипаносом пол влиянием Cymelaгsan выявили, что гликокалекс становился различной электронной плотности, с элементами разволокнения В одних полях зрения цитоплазматическая мембрана была утолщена до 13 нм (рис 5), в других -истончена до 7 нм (рис 5).

рис 5 Тангенциальный срез T.equiperdum выделенных из крови через 15мину после введения препарата Один участок гликокалекса утолщен, цитоплазматическая мембрана разрушаю, содержимое цитоплазмы заполнено осмиофобным вещест (х 18000)

У большинства трипаносом гликокалекс разрушался или полностью исчезал, наблюдали оголении цитоплазматической мембраны клетки и жгутика, в котором можно видеть только пароксиальный корд. Мембрана жгутикового пакета в одних участках становилась рыхлой, в других уплотненной. Субпелликулярньте трубочки были устойчивее других структур клетки и сохраняли видимую интактность (рис 6) Цитоплазма некоторых трипаносом не имела заметных изменений, но преимущественно имела большее количество вакуолей, везикул, ламеллярно-упакованных структур и включений различной электронной плотности Структура кинетопласта-митохондриона под влиянием Cymelaгsan-a претерпевала значительные изменения в течение первых 15 минут. Центральная фибриллярная нить кинетопласта и ограничивающая мембрана расслаивалась При более продолжительной экспозиции препарата не выявлялась во все. Рибосомы, которые у интактных трипаносом равномерно распределены в цитоплазме, собирались в виде полисом или они полностью разрушались. Мембрана эндоплазматического ретикулума и комплекса Гольджи теряли структурную организацию. Ядро увеличивалось, между внутренним и внешним покрывающим листком мембраны возрастает осмиофобная зона (рис 5,6) При экспозиции 30 минут в изучаемых объектах преобладали популяции разрушенных и полуразрушенных трипаносом, реже обнаруживают «целые» особи. Ультраструктурные изменения в эти сроки выражались более отчетливо. Гликокалекс полностью исчезает. Матрикс цитоплазмы становится разреженным с наличием редких плотных включений. Наблюдали «пустые» трипаносомы, содержащие только однослойную мембрану (рис 6) пелликулы, остатки ядра и микротрубочек.

рис б Влияние Cymelarsan на Тequiperdum при экспозиции 30минут Поперечный срез Т equiperdum через ядро и субпелликулярные трубочки Содержимое започнено осмиофобным веществом Наружная ядерная мембрана растянута (отек ядерной мембраны) Субпелпикулярные трубочки заполнены осмиофильным веществом (х 2 3000)

Ядерные мембраны отслаивались и образовывали «прогрессирующие отеки». Кульминационным моментом действия препаратов является полная деструкция мембранных органелл цитоплазмы и ядра с перфорацией цитоплазматической мембраны трипаносом. Разрушение гликокалекса и всей пелликулы происходит, видимо, за счет подавления синтеза мукополисахаридов, являющихся составными элементами этих слоев. Нарушение окислительно-востановительных процессов в трипаносоме приводит к деструкции кинетопласта-митохондриона и комплекса Гольджи.

Проведенными исследованиями выявлено нарушение ультратонкого строения мембран пелликулы и жгутикого кармана, ламеллярных органелл цитоплазмы и эндоплазматического ретикулума. Кровяные формы трипаносом имеют плазматическую мембрану, покрытую гликокалексом, содержащим вариабельные гликопротеины, которые обеспечивают трипаносомам защиту от иммунных реакций хозяина, благодаря антигенной изменчивости. Ингибирование биосинтеза или нарушение контактов антигенов с мембраной может привести к лизису трипаносом в крови хозяина. На поверхности трипаносом находится антиген, участвующий в процессе проникновения паразита в клетку хозяина. Ингибирование процесса биосинтеза этого антигена препятствует заражению хозяина и способствует уничтожению трипомастигот (Тимофеев Б.А., 1998).

ВЫВОДЫ

1. В Иордании и Палестине установлены неблагополучные районы по трипаносомозам непарнокопытных животных: Свима 34%, Джерико 31%, Хеврон 22% , Нака69%, Маан 14%, Рамалла2%, и Газа0%.

2. Штамм Trypanosoma equiperdum «Иордании 2001» имеет морфологическое сходство с эталонным штаммом трипаносом Antar-4.

3. установлено, что тело, изучаемого вида Trypanosoma equiperdum «Иордании 2001» покрыто трехслойной цитоплазматической мембраной и гликокалексом, толщина пелликулы составляет 19,9 ± 0,75 нм.В задней части паразита пелликула инвагинирует в цитоплазму и переходит на жгутик.У основания жгутика расположен кинетопласт размером 0,5 х 1,8 мкм, ограничен двумя мембранами толщиной 7,5 нм. Внутренняя часть кинетопласта заполнена прерывистой осмиофильной зонами в соотношении 1:3. В непосредственной связи с кинетопластом расположен митохондрион внутренняя часть которого заполнена кристами размером 0,5 х 0,6мкм.

4. Подтверждена чувствительность белых мышей к возбудителю случной болезни штамма «Иордании 2001». При заражении лабораторных животных штаммом Trypanosoma equiperdum, возбудитель обнаруживали в периферической крови через 48 часов, гибель происходила через 98-110 часов при наивысшей паразитемии.

5. Гистологическими исследованиями селезенки и лимфатических узлов белых мышей зараженных указанным штаммом установлены изменения сосудов, которые были полнокровными, эндотелий набухший, стенки сосудов

растянуты гранулами и конгломератами трипаносом. Селезенка и лимфоузлы приобретали ржаво-коричневый цвет вследствии накопления в них гемосидерина, свидетельствующем о внутрисосудистом гемолизе.

6. Электронномикроскопическими исследованиями установлено, что в первый час после инъекции мышам лечебной дозы cymelarsan, трипаноцидный эффект, выражался усилением репликации с последующей деструкцией мембранных органелл, включений ядра и цитоплазмы.

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты изучения эпизоотологии трипаносомозов животных будут использованы при разработке мер борьбы со случной болезнью непарнокопытных животных в условиях Иордании и Палистины

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать цимеларсан в практику лечения случной болезни непарнокопытных животных в условиях Иордании и Палстины.

2. Использовать метод электронной микроскопии при дифференциальной диагностики возбудителей трипаносомозов и направленном синтезе трипаноцидных препаратов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1) Меньшиков В.Г Али Аднан Патогенез при трипаносомозах//Материалы III научно-практической конференции по болезням лошадей.-М.-2002.-С.26-.27

2) Али Аднан, Меньшиков В.Г. Морфологические характеристики лимфоид-ных органов грызунов при заражении возбудителем случной болезни/Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями.-М.-2003.-С.23-25.

3) Меньшиков В.Г Али Аднан Субмикроскопические и биофизические аспекты функционирования системы паразит-хозяин при трипаносомозах// Вестник ветеринарии.-2002.-Т.24/3.-С.23-24.

4) Али Аднан, Меньшиков В.Г. Изменение ультраструктуры Trypanosoma equiperdum под влиянием цимеларсана. //Ветеринарная Медицина. .-2О04.-№4. В печати

СХЕМА СТРУКТУРЫ Trypanosoma equiperdum - штамм «Иордания 2001»

АГ - аппарат Гольджи, АК - аксонема, АР - агранулярный (гладкий) ретикуллум, В-включения, БТ - базальное тело, Г - гликокалекс, ГР- гранулярный (шероховатый) ретикулум, Ж - жгутик, ЖК - жгутиковый карман, К -кинетопласт, КН-корневые нити, М - митохондрион, П - пелликула, Н -нуклеола (ядрышко), ПВ - плотные включения, ПК - параксиальный корд, ПП -пиноцитозный пузырек, Р - рибосома, СК - связующие комплексы, СТ -субпелликуллярные трубочки, ЦМ - цитоплазматическая мембрана, Я - ядро, ЯМ - ядерные мембраны.

Формат 60x90/16. объем 1,0 п. л Печать офсетная. Бумага офсетная. Тираж 100 экз. Заказ № 23

* - 627 1

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Али Аднан

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Историческая справка, вопросы систематики.'.

2.2. Сведения о трипаносомах и их распространении.

2.3. Морфология и стадии развития трипаносом.

2.4. Субмикроскопическая организация трипаносом.

2.4.1 Пелликула, гликокалекс, жгутик.

2.4.2 Цитоплазма, органеллы и включения.

2.4.3 Ядро и ядрышко.

2.4.4 Деление трипаносом.

2.4.5 Патогенез при трипаносомозах.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ "

3.1. Материалы и методы исследования.

3.1.1. Штаммы трипаносом, подопытные животные, трипоноцидные препараты.

3.1.2. Выделение трипаносом из крови.

3.1.3. Метод подготовки препаратов для морфологических исследований.

3.1.4. Методы подготовки препаратов для электронной микроскопии.

3.1.5. Приготовление и контрастирование ультратонких срезов.

3.1.6. Микроскопирование объектов, обозначения на рисунках.

3.2. Результаты собственных исследований.

3.2.1.Распространение трипаносомозов непарнокопытных на территории Иордании и Палестины.

3.2.2. Светооптическое изучение в динамике паразитемии: трипаносом, лимфатических узлов и селезенки.

3.2.3. Ультраструктура Trypanosoma equiperdum непарнокопытных животных Иордании и Палестины.

3.2.4.Лекарственные препараты в практике лечения трипаносомозов.

3.2.5. Изменение ультраструктуры Trypanosoma equiperdum. под влиянием Cymelarsan.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Трипаносомозы лошадей в условиях Иордании и Палестины"

1.1 Актуальность проблемы.

В Иордании и Палестине проживает около семи миллионов человек, 80% из которых занято сельским хозяйством и, главным образом, животноводством, в том числе и коневодством. В Иордании насчитывается более 50 тысяч голов непарнокопытных (лошадей, ослов и мулов).

В настоящее время трипаносомозы остаются важной медико-биологической и ветеринарной проблемой, особенно для стран Ближнего Востока. Так, по данным секретаря эпизоотического бюро Louis Touratier (2002) трипаносомозы лошадей и ослов составляют до 70% среди болезней этих животных.

В Иордании и Палестине частота распространения трипаносомозов и их клиническое проявление сильно варьирует в зависимости от географической зоны (Robertson, А, 1976). Эти болезни на среднем востоке являются причиной уменьшения продуктивности, увеличения смертности и большим экономическим ущербом (Luckins, A.G. 1988, Pathak et al., 1993; Radostits, O.M. et al., 1994).

Страны несут значительные убытки на внешнем рынке при сбыте продуктов коневодства и реализации поголовья племенных и товарных лошадей. Оживленные производственные связи Иордании с другими странами, пролегание на ее территории иракского и трансаравийского нефтепроводов и многочисленных разтветвленных трасс, способствует ухудшению эпизоотологической ситуации и распространению трансмиссивных кровепаразитарных заболеваний, положение осложняется недостаточным контролем над ввозом животных, слабой диагностической базой и ростом резистентности трипаносом к лекарственным веществам. Это привело к тому, что трипаносомозы вновь стали значимыми а мероприятия при них - менее успешными.

К сожалению, до сих пор нет полных эпизоотологических данных по распространению T.equiperdum и T.evansi на территории нашей страны.

В этой связи, первостепенную значимость приобретают исследования вновь синтезируемых лечебных препаратов.

Использование светооптических и субмикроскопических методов исследования, позволяет открыть своеобразные стороны механизма действия трипаноцидных препаратов и определить возможности направленного синтеза эффективных лекарственных веществ (Mamman М, Peregrine А, 1994., Меньшиков В.Г., 1998).

Судя по ограниченным литературным данным, многие зоны Иордании неблагополучны по трипаносомозам (M.N.Abo-Shehada 1999).

Для разработки радикальных мер борьбы необходимо знание эпизоотического процесса (видового состава возбудителей, переносчиков и их взаимоотношений). Требуется также детализация вопросов этиологии, диагностики и лечения трипаносомозов.

1.2 Цель и задачи исследований.

Целью нашего исследования было: изучить эпизоотологическую ситуацию по трипаносомозам лошадей и ослов в условиях Иордании, уточнить видовой состав возбудителей трипаносомозов и определить характер изменения морфологии Trypanosoma equiperdum под влиянием цимеларсана.

Для выполнения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести анализ распространения трипаносомозов среди непарнокопытных животных в Иордании.

2. Изучить в сравнительном аспекте субмикроскопическую организацию Trypanosoma equiperdum «Иордании 2001», выделенных от лошадей и ослов в Иордании и Trypanosoma equiperdum Antar-4.

3. Определить патогенное влияние паразитов на лимфатические узлы и селезенку мыши.

4. Выявить характер изменения ультруструктуры Trypanosoma equiperdum под влиянием Cymelarsan.

1.3 Научная новизна.

В результате исследований в условиях Иордании определены зоны, неблагополучные по трипаносомозам домашних животных.

Уточнен видовой состав трипаносом в зонах интенсивного ведения коневодства в Иордании.

Впервые изучена ультраструктура Trypanosoma equiperdum «Иорданий

2001».

Определена трипаноцидная эффективность препарата Cymelarsan и его влияние на ультраструктуру трипаносом, что выражалось деструкцией гликокалекса мембранных органелл цитоплазмы и ядра.

1.4 Практическая ценность работы.

Полученные данные могут быть использованы для проведения лечебно-профилактической работы трипаносомозов домашних животных.

Получены материалы по ультраструктуре возбудителя случной болезни Dourine (араб. - Bou-Dinar) Trypanosoma equiperdum.

• Показаны важные моменты взаимоотношения паразита и хозяина, влияние лекарственных веществ на трипаносом и животных, что может быть рекомендовано при синтезе трипаноцидных препаратов.

Материалы исследований использованы при написании статей и методических рекомендаций по текущему контролю знаний для студентов факультета ветеринарной медицины, а также в учебном процессе при преподавании дисциплины «Паразитология» на ФВМ, ВБФ.

1.5 Апробация работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

1. Международной конференции ассоциации ветеринарных врачей арабских стран по теме «Борьба с болезнями животных» (Ирак, 2001).

2. III Научно-практической конференции по болезням лошадей (Москва, 2002).

3. Научно-практической конференции, посвященной 110-летию Маркова (Ставрополь, Вестник Ветеринарии, 2002).

4. Научно-практической конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2003).

1.6 Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту

1. Эпизоотологическая ситуация по трипаносомозам в Иордании и Палестины.

2. Морфологические и субмикроскопические параметры изолята возбудителя случной болезни непарнокопытных Иордании и Палестины.

• 3. Морфологические изменения трипаносом, лимфатических органов, селезенки мыши в динамике паразитемии.

4. Определение оптимальной терапевтической дозы Cymelarsan, изучение его трипанцидного действия в сравнении с беренилом.

5. Изучение ультраструктуры трипаносом под влиянием Cymelarsan.

1.70бъем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, содержит 3 таблицы и 25 рисунков. Список использованной литературы, включает 194 источника, в том числе 157 - иностранных. В приложении представлено .документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работы.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Али Аднан

5. ВЫВОДЫ

1. В Иордании и Палестине установлены неблагополучные районы по трипаносомозам непарнокопытных животных: Свима 34%, Джерико 31%, Хеврон 22% , Накаб 9% , Маан 14% , Рамалла 2% , и Газа0%.

2. Штамм Trypanosoma equiperdum «Иорданий 2001» имеет морфологическое сходство с эталонным штаммом трипаносом Antar-4.

3. Установлено, что тело, изучаемого вида Trypanosoma equiperdum «Иорданий 2001» покрыто трехслойной цитоплазматической мембраной и гликокалексом, толщина пелликулы составляет 19,9 ± 0,75 нм.В задней части паразита пелликула инвагинирует в цитоплазму и переходит на жгутик. У основания жгутика расположен кинетопласт размером 0,5 х 1,8 мкм, ограничен двумя мембранами толщиной 7,5 нм. Внутренняя часть кинетопласта заполнена прерывистой осмиофильной зонами в соотношении 1:3. В непосредственной связи с кинетопластом расположен митохондрион внутренняя часть которого заполнена кристами размером 0,5 х 0,6мкм.

4. Подтверждена чувствительность белых мышей к возбудителю случной болезни штамма «Иорданий 2001». При заражении лабораторных животных штаммом Trypanosoma equiperdum, возбудитель обнаруживали в периферической крови через 48 часов, гибель происходила через 98-110 часов при наивысшей паразитемии.

5. Гистологическими исследованиями селезенки и лимфатических узлов белых мышей зараженных указанным штаммом установлены изменения сосудов, которые были полнокровными, эндотелий набухший, стенки сосудов растянуты гранулами и конгломератами трипаносом. Селезенка и лимфоузлы приобретали ржаво-коричневый цвет вследствии накопления в них гемосидерина, свидетельствующем о внутрисосудистом гемолизе.

6. Электронномикроскопическими исследованиями установлено, что в первый час после инъекции мышам лечебной дозы cymelarsan, трипаноцидный эффект, выражался усилением репликации с последующей деструкцией мембранных органелл, включений ядра и цитоплазмы.

6.1. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты изучения эпизоотологии трипаносомозов животных будут использованы при разработке мер борьбы со случной болезнью непарнокопытных животных в условиях Иордании и Палстины

6. II. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать цимеларсан в практику лечения случной болезни непарнокопытных животных в условиях Иордании и Палстины.

2. Использовать метод электронной микроскопии при дифференциальной диагностики возбудителей трипаносомозов и направленном синтезе трипаноцидных препаратов

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Али Аднан, Москва

1. Абуладзе К.И., Демидов Н.В., Непоклонов А.А. и др. Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных//М., Агропромиздат.-1990.-С.281,285, 345-349.

2. Али. Аднан., Меньшиков В.Г. Изменение ультраструктуры trypanosome equiperdum под влиянием цимеларсана //Ветеринарная Медицина.-2004.-№4. В процессе печати.

3. Анджелопулос Е.В. Пелликулярные микротрубочки во время роста и деления клеток Trypanosomatidae//III-fi конгресс протозоологов.-Ленинград.- В кн.: Успехи протозоологии.-1969.-С.58-59.

4. Бирюзова В.И. Способы изготовления клеток-подложек и их монтаж на предметные сетки при исследовании в электронном микроскопе// В кн.: Электронномикроскопические методы исследования биологических объектов.-1963 .-С. 15-26.

5. Бурнашева С.А., Федорова Л.Г., Любима М.Н. Структурная организация и биохимические основы движения ресничек и жгутиков// Успехи совр.биол.-1963.-Т.56, 3.-С.365.

6. Вартонь А. Цитологическое изучение некоторых видов трипано-зом в связи с их способностью к дискинетопластии// Автореф.дисс.-1972.

7. Вечеркин С.С., Цыганова Г.А., Романов В.Г., Пузий А.Д. Случная болезнь лошадей и перспективы ее ликвидации в Киргизии// X конф. Укр.об-ва паразитол./Материалы.-Ч.З.:Киев.-1988.-С. 13-15.

8. Каллиникова В.Д. Кинетопласт трипанозомид и некоторые вопросы цитоплазматической наследственности // Н-й съезд Всес.общ.генетиков и селекционеров. Тез.докладов. изд."Наука", 1972

9. Каллиникова В.Д., Вартонь А. Цитохимическое сравнение некоторых видов трипаносом в связи со способностью к дискенотопластии. Т. cruzi и Т. equiperdum // Цитология.-1972.-№ 14.-Вып. 5.-С. 647-654.

10. Каллиникова В.Д. цитология жгутиковых Простейших отряда Kinetoplastida//JI.-1983.

11. Кленова И.Ф., Яременко Н.А// Ветеринарные препараты в России.-2001 .-С.248-250.

12. Крылов М.В. Возбудители протозойных болезней домашних животных//С.-Петербург.-1994.-С.39-44.

13. Крылов М.В./Определитель парзитических простейших (человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений).-Санкт Петербург.-1996.

14. Лосаберидзе Н.Ш. субмикроскопическая организация Strigomonas опсорей//Сообщ.АН.ГССР.-1970.-Т.З .-С.24.

15. Малышев С.Н.,Петровский В.В Морфологические особенности возбудителей су-ауру и суры//Тр.ВИЭВ.-1982.-Т.56.-С.88-90.

16. Меньшиков В.Г., Дьяконов Л.П. Электронно-микроскопическое изучение трипаносом в динамике паразитемии и под влиянием трипаноцидных препаратов// Современные проблемы протозоологии. Vilnus.-1982.-C.221.

17. Меньшиков В.Г. Диагностика и меры борьбы с трипаносомозами лошадей в условиях России / Методические рекомендации // М-1996.

18. Меньшиков В.Г. Морфофункциональные изменения трипаносом под влиянием трипаноцидных препаратов// Вестник ветеринарии.-1998.-№7/1.-С. 41-45.

19. Меньшиков В.Г. Определение эффективности лекарственных веществ по морфо-функциональному состоянию паразита-хозяина при трипаносомозах животных //М. 6.-1992.

20. Новиков В.П. Некоторые материалы по изучению антигенной изменчивости возбудителя су-ауру// Сб. научн. работ. ЛВИ.-1992.-В.З.-С.72.

21. Павлова Н.В. Эпизоотология протозойных болезней// Паразитология и инвазионные болезни с/х животных.-М.-1990.-С.283-284.

22. Петровский В.В. Трипаносомозы//Протозойные болезни с.х.животных,-1982.-С. 149-171.

23. Пехов А.П. Электронномикроскопическое исследование бактерий и фагов//М.: 1962.

24. Пиз Д. Гистологическая техника в электронной микроскопии// М.: 1963.

25. Сабаншиев М.С. Трипаносомозы животных// Автореферат на соискание ученой степени доктора наук.-1993.

26. Сейд-Мохамед Ахмед Махдьуб.Влияние трипаноцидных препаратов на ультраструктуру T.equiperdum и Т-антигена на реабилитацию животных после лечения// Автореферат. Москва.-1992.

27. СеравинЛ.Н.Двигательные системы простейших//Л.Наука.-1967.

28. Сухарева Н.Н., Титова Т.С., Суханова Н.В. Трипаноцидное действие фторурацила на Crithidia oncopelti в присутствии модификаторалипидного метаболизма// Изв.АН СССР сер.биол.-1991.-№5.-С.683.

29. Тимофеев Б. А. Общие закономерности патогенеза протозойных болезней сельскохозяйственных животных // С/х биология.-1985, №9 С. 112-119.

30. Тимофеев Б.А Каримов Б.А. Иммунитет при некоторых кровопаразитарных болезней//С/Х биологияю.-1989.-№2.-С.119-126.

31. ТимофеевБ.А.,Зайченко И.Ю. Материалы по изучению цитокин ов при трипаносомозе животных// Вестник ветеринарии.-1998, № 7/1.-С.36-39.

32. Черепова Н. Проучвания върху някои Flagellata с оглед на тяхната структура, функция и другие свойства, съобщение. Електрон-номикроскопски изследования върху ультраструктурата на Trypanosoma Еяшрегдит.//Изв.Микробиол.ин-та.София.-1969. кн.ХХ.-С.263-273.

33. Шалашников А. Исследование над кровопаразитизмом холоднокровных и теплокровных животных. I. О свободных крово -празитарных формах у лягушек, рыб, птиц, крыс, сусликов, хомяков, лошадей, верблюдов и мулов// Архив ветнаук.-1888.-Т.З.-С.4.

34. Якимов В.Л. Болезни домашних животных, вызываемые простейшими (РгоЮгоа)//Сельхосгиз.-1931.-С.115.

35. Якимов В.Л. К вопросу об идентификации некоторых русских трипанозом//Хроника арх.ветнаук.-1915 .-Т. 14.-С.З 88.

36. Якимов В.Л. Трипанозомоз верблюдов в Туркестанском крае//Хроника арх.ветнаук.-1916.-Т.5.-С.53 6.

37. Янышевская О.Д., Букова Н.К. Сравнительное изучение морфологических и антигенных свойств T.equperdum и Т. evansi// Сб.научн.тр. ВГНКИ.-1994.-Т.56.-С.68-71.

38. Alexeieff A. Sur la function glycoplastique du kinetoplaste (=kinetinucleus) chezles flagelles//C.R.Soc.Biol., 1917, 80, 512.

39. Ali B.H., Hassan Т., Malik K.H. The efficacy of furazolidone against experimental infection with Trypanosoma evansi in camels// Med.Vet.-1986.-N.2.-P. 197-200.

40. Anderson E., Saxe L., Beams H. Electron microscope observations of Trypanosoma equiperdum//J.Parasitol.-1956.-V.42;l.-P.l 1-16.

41. Anderson W.A., Ellis R.A. Ultrastructure of Trypanosoma lewisi: flagellum, microtubules and the kinetoplast//J.Protozool.-1965.-V.12.-P.483.

42. Angelopoulos E. Pellicular microtubules in the family Trypanosomatidae//J.Protozool.-l 970.-V. 17.-P. 39-51.

43. Anosa, V.O., Logan-Henfrey, 1.1., and Shaw, M.K. A light and electron microscopic study of changes in blood and bone marrow in acute hemo-rhagic Trypanosoma vivax infection in calves// Vet. Pathol./-1992.-V.29.-P33-45.

44. Anose V., Jsann T. Studies on the parasitemia luecocyte and bone marrow cell counts and of splenectmiced and intact mice//Sontrolblott fur Veterinarmedicine.-1989.-V.27.-N3.-P. 169-180.

45. Armstrong J., Brown K., Valentine R. The ingestion of protein molecules by blood forms of Trypanosoma rhodesiense// Trans. Roy.Soc.Trop.Med.Hyg.-1964.-V.58.-P.291.

46. Babes V. Beobachtungen ueber die metachromatischen Korperchen, Sporenbildung, Verzweigung, Kolben- und Kapselbildung pathogener Bakterien//Z.Hyg.Infejt.Kr.-1895.-V.20.-P.412.

47. Balbiani G. Evolution des micro-organismes animaux et Vegitaux parasites. Les Mastigofores// J. Micrograph.-1888.-V.12.-P.-394.

48. Balis J. Notre sur la raparbition de Trypanosome equiperdum dues 1'organism du rot//Rev. Elevage. Med. Veter.-1968.-V.21.-Nl P.101-102.

49. Barcinski M.A. Apoptosis in trypanosomatids// J.Cell.Sc.Session.-1998.-N4.-P.24.

50. Barotte J. Les trypanosomiase de l'Afrique du Nord//Mem. Soc. Sci.nat.Maroc.-1925.-V.l l.-P.l.

51. Berger В J, Fairlamb AH.Properties of melarsamine hydrochloride (Cymelarsan)in aqueous solution//Antimicrob Agents Chemother.-1994.-V.3 8(6).-P. 1298-302.

52. Bird M., Molloy J., Ormerod W. Granules and tubules in the cytoplasm of the sleeping sickness trypanosome: an electron microscope study//Trans.Roy.Soc.Trop.Med.Hyg.-1966.-V.60.-P.753-760

53. Boisson C. ,Mattei X., BoissonM.E. Le flagella de T.gambiense etudie au microscope electronique//C.r.Seanc.Soc.Biol.-1965.-V.159.-P.228-230.

54. Brack C. Elektronenmikroscopische Untersuchungen zum Lebensz-yklus von Trypanosoma cruzi. Unter besonderer Beruchesichtigung der Entwic lun-gsformen im Ueber-trager Rhodnius prolixus//Acta trop.-1968.-V.25.-P.289-356.

55. Brooker B. The fine structure of crithidia fasciculate with special reference to the organelles involved in the ingestion und digestion of protein//Z.zellforsch.-1971 .-V. 116(4).-P.532.

56. Brooker В., Preston T. The cytostome in trypanosomes and allied fl age 11 ates//J. Protozool.-1967.-V. 14.-P.41

57. Brown K., Armstrong J.,Valentine R.The ingestion of protein moec-ulesby blood forms ofTrypanosoma rhodesiense//Exp.Cell.Res.-1965.-V.39.-P.129.

58. Bruce D. Preliminary report of tsetse fly disease or nagana in Zululand// Durban Bennet & David.-1895.

59. Brun R., Lun Z. Drug sensitivity of Chinese Trypanosoma evansi and Trypanosome equiperdum isolate// Vet.Parasitology.-1994.-V.52.-N2.-P.37.

60. Clark T.B, Wallace F.C.A comparative study of kinetoplast ultrastructure in the Trypanosomatidae//J.Protoz.-1960.-V.7.-P.l 15-124.

61. Cosgrove W., Anderson E. The Kinetoplast of Crithidia fasciculate//Anat.Rec.-1954.-V. 120.-P.813.

62. Dioz, Ungria C., Zeuss M. Transmision jel Trypanosoma evansi у Trypanosoma crusi a Partir de heces de animales infectodas por via bucal//Rev. veter.venez.-1971 .-P. 197.

63. Doflein F.DieProtozoen Parasiten und Kranknei tserreger. Jena 1901.

64. Donelson I, Rice F.A. Molecular biology of trypanosome antigenic variation// Microbiol. Rev.-1985.-V.49.-N.2.-P.107.

65. Dutton J.E. Preliminary note upon a trypanosome occurring in the blood of man//Thonison. Yates. Lab. Rept.-1902.-V.4.-P.455.

66. Eisler M.C. Pharmacokinetics of the chemoprophilactic and chemotherapeutic trypanocidal drug isometamidium chloride (Samorin) in cattle// Drug Metabolism and Distribution.-1996.-V.24.-P.1355-1361.

67. Evans G. Report on "surra" disease in the Dera Ismail Khan district// Punjab Covt. Milit. Dept.-1880.-P.493,446.

68. Fairlamb, A.H., Cerami, A. Metabolism and functions of trypan -othione in the Kinetoplastida// Annu. Rev. Microbiol.-1992.-V.46.-P. 695-729.

69. Fawcett D.W. Cilia and flagella//The cell, Acad.Press N.Y.-1961.-V.2-P.217.

70. Fiori C., Delanoe P., Delanoe (Mme). Sur un cas de trypanosomiase constate chez un cheval a Mazagan// Bull.Soc.Path.exot.-1915.-V.8.-P.503.

71. Friend D.S. Cytochemical staining of multivesicular body and Goldgy vesicles//J.Cell Biol.-1969.-V.41.-P.269.

72. Fuge H. Electron microscopy studies on the intra-flagellar structures of trypanosomes//J.Protozool.-1969.-V.16.-P.460.

73. Fuge H. Zum Feinbau des Periplasten and der Geissel von Trypanosoma brucei and Trypanosoma gambiense//Z.Zellforsch.-1968.-V.89.-P.201-211.

74. Fussganger R., Bauer F. Brenyl-ein neuse chemotherapeuticum in der Veterinamedizin//Med. Und Chem.-1955.-Band.V

75. Geigy R., Steiger R., Hecker H. Beitrage zur Pinocytose von Trypanosoma (Trypanozoon) brucei, Plimmer, Bradfort. // Acta trop.-1970.-V.27.-3.-P.271-277.

76. Gill B.S, Sen D.K. Studies on surra. Action of berenil, suramin and quinpyramine on Trypanosoma evansi.// Indian J. Veter.Sc.-1964.-V.34,3.-P.135.

77. Goldfischer S., Essner.E., Schiller.B. Nucleoside diphosphatase and thiamine pyrophosphatase activities in the endoplasmic reticulum and Goldgy apparatus//J.Histochem.Cytochem.-1971 .-V. 19.-P.349.

78. Gonzales N.S., Gazzulo J.J. Effects of trypanocidae drugs on by Trypanosoma cruzi//Biochem.Pharmacol.-1989.-V.38.-N.17.-P.2873-2877.

79. Gosgrove W.B. Why kinetoplast?// Protozool.-1973.-V.20(2).-P.191.

80. Grasse P. P. La reproduction par induction du flagella de Trypanosoma equiperdum // C.R. Acad.Sci.-1961.-V.252.-P.3917.

81. Grassi B. Intorno ad alcuni protisti endoparassitici ed appartenente alle classi dei Flagellati, Lobosi, Sporozoi e Ciliati Atti// Soc.Ital.Sci.nat.-1881.-V.24.-P.135.

82. Gruby D. Recherches et observations sur une nouvelle specie d'hematozaire, trypanosome senguinis// C.R.Acad.Sci.-1843.-V.17.-P.l 134.

83. Haeckel E. Generalle Morphologic dur organism// J.G.Reimer/Berlin.-1866.-P.574.

84. Heister N., Bose R. Development of Trypanosoma theileri in tabanus// IX Inter.Cong. Of protozoology/Berlin.-1983.-P.54.

85. Hoare C. A. The Trypanosomes of Mammals//Oxford and Ediburch.-1972.-P.-593-604

86. Hoare C.A. Developmental stages of Tiypanosomatid flagellates: a new terminology//Nature (London).-1966.-V.212.-P.1385.

87. Hoare C.A. The present of our knowledge regarding the origin, evolution and classification of trypanosomes and allied forms// Arch. Russ. Protistol.-1925.-V.3.-P. 177.

88. Honigberg B.M., Balamuth W., Bovee E.C., Corliss E.C., Cojdics M., Hall R.P., Kudo R.R., Levine N.D., Loeblich A.R., Weiser J.Jr., Wenrich D.H. A revised classification of the philium Protozoa// J. Protozool., 1964, 11, 7-20.

89. Jordan A.M. Trypanosomiasis Control and African Rural Development// Longman Ltd Group.-1986.

90. Judge D., Anderson M. Ultrastructure of Tiypanosoma lewisi//J.Parasit.-1964.-V.50.-P.757-762.

91. Kalu A.U. Activity of trypanocides in ruminants and possible mechanism of action//Ann.conf.of the Nigerian Soc.For Anim.Prod.port Harcourt; March 30th-April 2nd.-1983.

92. Kent W.S. A manual of the infusoria. V.I. London, 1880.

93. Killick-Kendrick R. The apparent loss of the kinetoplast of trypanosome evansi after treatment of an experimentally infected horse with Berenil// Ann. Trop. Med. Parasitol.-1964.-V.58.-P.481-501.

94. Kleine F.K. Weintere Wissenchaftliche Beobachtungen uber die Entwicklung von Trypanosomen in glossinen// Deutsch.med.Wschr.-1909.-V.35.-P.924.

95. Kleinschmidt A., Schleich F. Ultrastructure of Trypanosoma brucei//Z.Tropenmed.Parasit.-1951 .-V.2.-P.219-224.

96. Kraneveld. F.C., Houwink A.L., Keidel H.J. Electron microscopical investigations on trypanosomes. I. Some preliminary data regarding the structure of Trypanosoma evansi// Proc.K.Akad.Wetensch. Amst.J.C.Biol, and Med.Sci.-1951.-V.54.-P.393-399.

97. Kudicka R. Ein Beitrag zur Kenntnis der menschlichen Trypanosomakrankheit// Cbl.Bart.( 1 .Orig.).-1911 .-V.61 .-P. 113.

98. Kussel J., Moore K., Weber M. The ultrastructure of Crithidia fasciculate and morphological changes induced by grouth in acriflavin//J.Protozool.-1967.-V.14.-P.283-296.

99. Laveran A., Mesnil F. Sur la structure du trypanosome des grenouilles et sur l'extension du genere Trypanosoma Gruby//C.R.Soc.Bio.-1901.-V.53.-P.678.

100. Laveran A., Mesnil F. Trypanosomes et trypanosomiases//2-nd ed. Paris.-1912.

101. Lavier G. Sur le polimorphisme reel de certains trypanosomes reputes monomorphes//Ann. Parasitol.-1993.-V.l 1.-P.280.

102. Lewis T.R. The microscopie organisms found in the blood of man and animals and relation the disease//Ann.Rept. Commis.Covt.India. Calcutta.-1878.-V.14.-P.157.

103. Louis Touratier. Эпидемиология трипаносомозов лошадей, проблема дифференциальной диагностики случной болезни и сурры // Материалы Ш-ей научно-практической конференции по болезням лошадей. М. -2002.-С. 25-26.

104. Luckins, A. G. Trypanosoma evansi in Asia//Parasitol.Today.-1988.-V.4.-137-142.

105. Luckins, A. G. Equine trypanosomiasis// Eq.J.Vet.Edu.-1994.-V.6(5).-P.259-262.

106. Luft I.H. Improvement in epoxy resin embedding methods// J.Biophys.Biochem.Cytol.-1961.-V.9.-P.409.

107. Lun ZR, Min ZP, Huang D, Liang JX, Yang XF, Huang YT. Cymelarsan in the treatment of buffaloes naturally infected with Trypanosoma evansi in south China// ActaTrop.-1991.-V.49(3).-P.233-236.

108. M.N.Abo-Shehada et al. Prevalence of Surra among camels and horses in Jordan// Preventive Veterinary Medicine.-1999.-V.38.-P.289-293.

109. Mamman M., Peregrine A. S. Pharmacokinetics of diminasene of goats // Res. In Veter. Sc.-1994.-Vol. 57.-N2.-P.255.

110. Mamman M., Vatande O., Moloo S., Peregine A. Variation of sensitivity of Trypanosome congelense to diminasene during the phases// Veter. Parasitology.-1993 .-V.5 0.-N. 1 /2.-Р. 1 -14.

111. Mayer C. Spicilegium observation num anatom de organo electrico in Raiis anelectricis et de Haematozois// Bonnae.-1843.-P.l 1.

112. Meyer A. Orientie renale Untersuchungen uber Verbreitung Morphologie und chemic des Volutius// Bot.Zeitung.-1904.-V.62.-P.l 13.

113. Milder R.V., Deane M.P. On the chrondriome of naturally dyskinetoplastie trypanosomes, Trypanosome equinum and T.Equiperdum//Rev.Inst.Med.trop.S.Paulo.-l 969.-V. 11 .-P. 187.

114. Milder R., Deane M. Ultrastructure of Trypanosome conorhini in the crithidial phase// J.Protozool.-1967.-V.14:l.-P.65.

115. Minchin E.A. The structure of trypanosome lewisi in relation to microscopical technique//Quart.J.Micr.Sci.-1909.-V.53.-P.755.

116. Molloy J., Ormerod W. Two types of Cytoplasma granules in T.rhodesiense// Exptl.parasit.-1965.-V. 17.-P.57.

117. Molyneux D. H. Reletionship between eperytrozoon coccides and Trypanosoma (Trypanozoon) brucei in experimentally infected mice//Ann. Trop.Med. und Parasitol.-1970.-V.64;4.-P.325-328.

118. Molyneux D. H., Ashford R.W. The biology of Trypanosoma and Leishmania. Parasites of Man and Domestics Animals//Taylor and Francis. London. -1983.-P.144-145.

119. Morre D.J., Hamilton R.L., Mollenhouer H.H., Mahley R.W., Cunningham W.P., Chesthom R., Loquire V.S. Isolation of a goldgi apparatus-rich fraction from rat liver. I. Method and morphology//J.Cell.Biol.-1970.-V.44.-P.484.

120. Moulton J.E, Krause J. Ultrastructure of Trypanosome theileri in bovine spleen culture//Cornell.Veter.-1972.-V.62.-P.l.

121. Muhlpfordt H. Uber de Bedeutung und feinstructur des blepharoplasten bei parasitishen flagellaten. I. teil//Z.Tropeumed. Parasitol.-1963.-V.14.-P.357-398.

122. Muhlpfordt H. Vergleichende Untersuchung ueber die Wirkung des Trypaflavius auf den Blepharoplast Verschiedener Trypanomenarten// Zsch.Tropeumed.-1959.-V. 10.-P. 19.

123. Muhlpfordt H., Bayer M. Uber die bedeutung und Feinstructur des blepharoplasten en parasitachen Flagellation// Z. Tropeumed. und Parasit.-1961.-V. 12.-334.

124. Musa M. Muse. Preliminary report about Mr Dafa Mia sharaff El Deen Dairy infected with Trypanosomes// Res.Admin.-1989.-P.l-2.

125. Mutayba B.M., Comba G.K., Kays E.N., Waind G. Effects of chronic experimental Trypanosoma congolense infection of the ovaries and adrenal glands in Femak goats// Res in Veter.S.C.-1988.-V.44,N 2.-P.140-146.

126. Neal R.A., van Bueren Jacqueliri. Comparative studies of drug susceptibility of five strains of Trypanosoma cruzi in vivo and in vitro// Trans.Roy.Soc. Trop. Med. and Hyg.-1988.-V.82.-N.5.-P.709-714.

127. Noble E The morphology and life cycles of trypanosomes//Quart.Rev.Biol.-1955.-V.30; 1 .-P. 1-28.

128. Opperdoes F.R// Ann.Rev.Microbiol.- 1987.-V.41.-P. 127.

129. Ormerod W. A comparative study of cytoplasmic analusions (Volutin granules) in different species of trypanosomes// J.gen. Microbiol.-1958.-V.19.-P.278.

130. Ormerod W.E. The study of Volutin granules in trypanosomes//Trans.R.Soc.trop.Med.Hyg.-1961 .-V.55.-P.313.

131. Ormerod W.E. The apprearence of "valutin granules" in Trypanosoma rhodesiense studied by phasecontrast and electron microscopy//Parasitology.-l 962.-V.52.-3-4.-P. 10.

132. Palade G.E. Study of Fixation for Electron Microscopy// J.Exptl.Med.-1952.-V.95.-P.285-298.

133. Pathak K.M., Arora J.K., Kapor M.Camal trypanosomosis in Rajasthan, India//Vet.Parasitol.-1993.-V.49.-P.319-323.

134. Payne RC, Sukanto IP, Partoutomo S, Jones TW, Luckins AG, Boid R. Efficacy of Cymelarsan in Friesian Holstein calves infected with Trypano soma evansi//Trop Anim Health Prod.-1994.-V.26(4).-P.219-226.

135. De Petris S. Ultrastructure of the cell wall of Escherichia coli//J.of ultract.Res.-1967.-V.19.-l/2.-P.45-83.

136. Plimmer H., Bradford J. A preliminary note on the morphology and distribution of the organism found in the tsetse fly disease// Proc.Roy.Soc.B.-1899.-V.65.-P.274.

137. Posten Mieram, Cheever Allen, Dworak James, Mc Daniel James. A histopatological analysis of myocarditis mice infected with Trypanosoma Cruzi// Trans.Roy.Soc.Trop.Med. and Hyg.-1986.-N.l.-P50-55.

138. Preston F. The form and function of cytostome Cytopharynx of the Culture forms of the Elasmobranch flaemo-flagellate Trypanosoma rojae Laveran and Mesnil// J.Protozool.-l969.-V. 16:2.-P.320.

139. Prowazek S. Studien uber sangetiertrypanosomen//J.Arb.K.Gesundh. Amte.-1905.-V.22.-P.351.

140. Rabinowitsch L., Kempner W. Beitrag zur Kenntniss der Blutpasiten, speciell der Rattentrypanosomen// Z. Hyg. Infektkr.-1899.-V.30.-P.251.

141. Radostits, О. M., Blood , D.C., Gay, C.C. (Eds) // Veterinary Medicine, -1994.-A Textbook of the Disease Cattle, Sheep, Pigs, Goats and Horses, eighth edn. Bailliere Tindall. London.-P.1219.

142. Rami M, Atarhouch T, Bendahman MN, Azlaf R, Kechna R, Dakkak A. Camel tiypanosomosis in Moracco//Vet Parasitol.-2003.-V. 115(3)-P.223-31.

143. Reynolds E. S. The use of lead citrate at huge pH as an electron opaque in electron microscopy// J/Ctll Biol.-1963.-V.l7, N 1.-P.208.

144. Robertson, A. Hanbook on Animal Deases in the Tropics// third edn.-British Veterinary Association.-1976.-P. 196.

145. Robertson J.D. The Ultrastructure of cell membranes and their derivatives in the structure and functions of Subcellular components// Biochem.Soc.Symp.No.-1959.-V. 16.-P.3.

146. Robertson J.D. Ultrastructure of excitable membranes and the crayfish median-giant synapse//Ann. New.York Acad. Sc.-1961.-V.94.-P.339.

147. Robinson E.M. Dourine infection in joung equines//Onderstepoort J.Vet.Res.-1948.-P.23-39.

148. Rosenbusch F. Trypanosomen-Studien//Arch.Protistenk.-1909.-V.15.-P.263.

149. Roskin G., Schischlajewa S. Die Kernteilung bei Trypanosomen // Arch.Protistenk.-1928.-P. 460-464.

150. Roth L.E. A filamentous component of Protozoan fibrillar systems//J.Ultrastructure Res.-1958.-V. 1 .-P.223.

151. Rowiand E.C., Sibley-Phillips S. Bone marrow eosonophil levels in Trypanosoma cruzi infected mice//J.Parasitol.-1984.-V.70.-N.5.-P.819-820.

152. Rudzinska M., Vickerman K. The fine structure. In "infections Blood Disease of Man and Animals" // Ed.D.Weinman & Ristic M. Acad.Press. New York.-1968.-P.217-306.

153. Rutter T.G. Diseases of camals. Protozoa diseases// Vet. Bulletin.-1967.-V.37.-P.611-618.

154. Sabatini D.D., Bensch К., Barrnett RJ. Cytochemistry and Electron Microscopy: The Preservation of Cellular Structure and Enzymatic Activity by Aldehyde Fixatein//J.Cell.Biol.-1963.-V.17.-P.19-58.

155. Schonefelo A. Kottcher D., Moloo S.K. The sensitivity to Trypanocidal drugs of Trypanosoma vivax//Trop.Med.Parasitol.-1987.-V.38.-N3.-P.179.

156. Seaman G.R. Large-seal isolation of kinetosomes from the ciliated Protozoan Tetrahymena pyroformis// Exp.Cell.res.-1960.-V.21.-P.292.

157. Shulz H., Mac Clure E. Elektronenmikroskopische Untersuchungen des Trypanosoma cruzi mit besonderer Beruecksichitigung des Periplasten und des Blepharoplasten// Z. Zellforsch.-1961.-V.55.-P.389.

158. Steel J.H. Investigation into an abscoure and fatal disease among transport mules in British//Burma.-1885.

159. Steinert M., Novikoff A.B. The existence of a cytostome and the occurrence of pinocitosis in the trypanosome, Trypanosoma mega// J.Biophys.Biochem.Cytol.-1960.-V.8.-P.563-569.

160. Stephen-Jw.W & Fantham. On the peculiar morphology of a trypanosome from a case of sleeping sickness and the possibility of its being a new Species (T. rhodesiense)// Proc. Roy. Soc.-1910.-V.83.-P.28.

161. Suliman, H.B., and Feldman, B.F. Pathogenesis and aetiology of anaemia in trypanosomiasis with special reference to T. brucei and T. evansi// Vet. Bull.-1989.-V.59.-P.99-107.

162. Swellengrebel N. La volutine chez les trypanosomes// Comptes Rev.Soc.Biol.-1908.-V.64.-P.38.

163. Swezy O. The kinetonucleus of flagellates and the binuclear theory of Hartman//Univ.California Publ.Zool.-1916.-V. 16.-P.685.

164. Tizard, I.R., Holmes, W.L., York, D.A., and Mellors, A. The generation and identification of the hemolysin of Trypanosoma congolense // Experientia (Switzerland).-1977.-V. 33.-P. 901-902.

165. Trager W., Rudzinska M. The riboflavin requirement and the effects of acriflavin on the fine structure of the kinetoplast of leishmania tarentolae//J.Protozool.-1964.-V. 11 .-P. 133.

166. Trinquier, M., Perie A, J., Callens, M., Opperdoes, F. & Willson, M. Specific inhibitors for the glycolytic enzymes of Trypanosoma brucei// Bioorg. Med. Chem.-1995.-V.3.-P. 1423-1427.

167. Turner CM, Aslam N, Angus SD. Inhibition of growth of Trypanosoma brucei parasites in chronic infections// Parasitol Res.-1996.-V.82(l).-P.61-65.

168. Uilenberg G. A field guide for the diagnosis, treatment and prevention of animal trypanosomiasis//!7AO, Rome.-1998.

169. Valentin G. Ube ein Entozoon im Blute von Salmo fario// Arch. Anat. Physiol. Wiss. Med. (Berlin).- 1841.-P.435.

170. Vecherkin, S.S.et al// Veterinariya.-Moscow.-1975.-V.2.-P.70.

171. Velu H. Une tiypanosomiase du cheval au Maroc. Etude clinique et experimentale// Rev.gen.Med.Vet.-1918.-V.27.-P.489.

172. Venable J.H, Coggeshal R. A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy//J. Cell Biol.-1965.-V.25.-P. 407-408.

173. Verducci G., Perito S., Rossi R. et al. Identification of trypanocidal factor against Trypanosoma equiperdum in normal serum// Parasitology.-1989.-V.98.-N3.-P.401-407.

174. Vickerman K. On the surface coat and flagellar adhesion in trypanosomes//J. Cell. Sci.-1969.-V.5.-P.163-193.

175. Vickerman K. The fine structure of Trypanosoma congolense in its bloodstream phase//J. Protozoology.-1969.-V.16;l.-P.54-69.

176. Vickerman K. The mechanism of clinical development in trypanosomes of the Trypanosoma brucei sub-group: An hypothesis based on ultrastructural observation//Trans.R.Soc.trop.Med.Hyg.-1962.-V.56.-P.487-495.

177. Vickerman K. Ultrastructure of Trypanosoma and relation to function//The Africal Trypanosomiases. London.-1970.-P.60.

178. Vickerman K.Electron microscope studies akinetoplastic trypanosomes//J.Protozoology.-1963 .-V. 10.-P. 15.

179. Wasielewsky Т., Senn G. Beitrage zur Kenntniss der Flagellaten des Rattenblutes//Zschr.Hyg.Infektkr.-1900.-V.33.-P.444.

180. Watson M. L. Staining of tissue sections for electron microscopy with heavy metals//J. Biophys. Biochem.Cytol.-1968.-V.4.-P.475-479.

181. Wellde B.T., Reardon M.J., Chumo D.A. Mel-B experimental infection og goats with Trypanosoma Brucei ssp. And effects of treatment with suramin and Mel-B//Ann. Trop.Med. and Parasit.-1989.-V.83.-Suppl.-Nl.-P.161.

182. Wenyon C. Protozoology//London.-1926.-V.l.

183. Wery M., Croodt-Lasseel M. The Ultrastructure de Trypanosoma cruzi en culture sur milieu semi-synthetique//Ann.Soc.Belge Med.Trop.-1966.-V.46.-P.337-348.

184. Whitelow D.D., Monlton J.E., Morrison W.I., Murray M. Trypanosome Brucei and relapse after chemotherapy// Parasitology.-1985.-V.90.-N2.-P.255-268.

185. Woodcock H. The haemoflagellates: a review of present knowledge relating to the trypanosomes and allied forms//Quart.J.micr.Sci. (N.S.).-1906.-V.50.-P.151.

186. Zhang J., Battr T. Identification of Trypanosome evansi, Trypansome equiperdum and brucei using DNA prob.//Vet.Parasitol.-1994.-N.53.-P.207.

187. Zelleke, D., Kassa, В., Abebe, S. Efficacy of RM 110 a novel trypanocide in the treatment of Trypanosoma evansi infection in camels// Trop. Anim. Hlth. Prod.-1989.-V.21.-P.223-226.