Транскортин крови: свойства, функциональная роль при стрессорных состояниях организма

Галицкий, Эдуард Алексеевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Транскортин крови: свойства, функциональная роль при стрессорных состояниях организма
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Транскортин крови: свойства, функциональная роль при стрессорных состояниях организма"

На правах рукописи

УДК 577.175.33:575.326.599:591 044.612.4.616.12-007

ГАЛИ II К И Й ЭДУАРД АЛЕКСЕЕВИЧ

ТРАНСКОРТИН КРОВИ: СВОЙСТВА, ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ ПРИ СГРЕССОРНЫХ СОСТОЯНИЯХ ОРГАНИЗМА

03.00.04 "БИОХИМИЯ"

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

Москва - 1997

Работа выполнена в Гродненском государственном университете имени Янки Куиалы и Институте биохимии ПАН Республики Беларусь

Научный консультант:

Академик НАН РБ,

доктор медицинских наук, профессор

Ю.М. Островский

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Г.А. Яровая

доктор биологических наук, профессор A.M. Лягинская

заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Л.Ф. Панченко

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт биомедищшской химии РАМН

Защита состоится ¿д&уября 1997 г. в 14:00 на заседании диссертационного совета Д001.02.01 при Институте Питания РАМН (г. Москва, Устьинский проезд, 2/14).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института.

Автореферат разослан "19" сентября 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук у—

В.М. Жминченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации. Изменения факторов внешней н внуфен-неи среды, способные привести к включению адапгаинонных механизмов, вы-¡ыиаюг различные стадии напряжения организма или отдельных его физноло! ц-чеекнх систем. ¡5 связи с этим адаптация человека к экстремальным воздействиям, разработка принципов управления этими состояниями имеют чрезвычайно важное значение для практической медицины. Особый интерес к изучению экстремальных состояний организма связан с тем. что стрессорные воздействия являются своеобразной моделью, которая создает большие возможности для рас-крышя особенностей процессов метаболизма в необычных, чрезвычайных ситуациях и позволяет обнаружить тт исследовать такие сюроиы обмена нешесгн. которые в обычных условиях скрыты, замаскированы и не прояатяются в полной мере. Выяснение гормонально-белковых взаимоотношений при различных физиологических и патологических состояниях лежит в основе фундаментальной проблемы сердечно-сосудистых заболевании (инсульт, инфаркт, тромбозы), а предупреждающие меры н коррекция подобных нарушений представляет огромную социальную и экономическую значимость.

Своевременное выявление скрытых и начальных признаков сердечнососудистых заболевании связано с необходимостью проведения комплексных методов исследования в условиях дозированной физической нагрузки для выявления резервных возможностей миокарда с целью последующей коррекции выявленных нарушении.

Поскольку активация надпочечников является одной из приспособительных реакции организма в отпет на изменение работы сердца в стадии комиенса-юрной перестройки функции миокарда, то увеличение содержания кортпкоете-роидов в крови, наряду с изменением гемодпнамических показа юлен, может служить важным дифференцирующим признаком заболеваний сердца, сопровождающихся его гипертрофией или мпоиатиеп п нарастанием явлении целое ха-точпости кровообращения.

Актуальной задачей является ранняя диагностика патологии сердца с намечающимися явлениями недостаточности кровообращения (скрытые формы). Ее решение может быть найдено путем исследования взаимодействии коргико-стсрондов с белками крови, которые являются важной характеристикой эффективности действия гормонов п. следовательно, мерой осуществления адаптационного процесса в целом.

Транскортин (КСГ) машется основным пысокоаффннным стерондсвязы-ваюшим белком плазмы крови. Физиологическая роль белка до настоящего времени не установлена, однако уже сегодня ясно, что коргнкостероид-белковьш взаимодействиям принадлежит важная роль в системе регуляции и проявления

эндокринных функций. По всей вероятности, изменение содержания кортико-стероидсвязывающего глобулина и его связывающей способности по отношению к кортикостерондам плазмы играет важную роль в патогенезе ряда эндокринных заболеваний, обших патологических состоянии организма, а также при стрессе.

Учитывая такое состояние проблемы, в настоящей работе мы попытались охарактеризовать функциональную активность специфического стероидсвязы-ваюшего глобулина на различных стадиях острого и хронического стресса (перенапряжение компенсаторно-приспособительных систем организма и развитие патологического состояния), а также изучить физико-химические и структурно-функциональные свойства транскортнна, выделенного в чистом виде из плазмы крови крыс с экспериментальной недостаточностью кровообращения.

В связи возникшим после аварии на Чернобыльской АЭС радиоактивным загрязнением ряда районов и опасностью накопления радионуклидов в организме человека и животных, представляются необходимыми исследования влияния внутреннего облучения в малых дозах на функциональные системы и механизмы, их регуляции. Радиационный фактор, как и другие раздражители, вызывает в организме ответную реакцию, направленную на поддержание гомеостаза. По сути мы имеем дело с радиационным стрессом. При оценке влияния ионизирующего излучения на отдельные звенья эндокринной системы необходимо учитывать, что в основе реализации биологического эффекта в тканях стероидных гормонов находится сложный механизм, который включает взаимодействие корти-костероидов с белками крови и в последующем с рецепторными белками цитозо-ля. активацию и транслокашио образовавшегося комплекса в клеточное ядро с Последующим взаимодействием с хроматином, реализующимся в инициации транскрипционных процессов и, наконец, в синтезе функциональных белков (В.Б. Розен и др., 1986).

Однако необходимо учитывать и особенность поражающего Действия ионизирующего излучения. Данные кардиологического скрининга (У.М. Саус1ик, 1994; Л. А. Низовцова, 1994; И.С. Цибульская, 1992) в загрязненных районах свидетельствуют об увеличении частоты сердечно-сосудистых заболеваний, что безусловно, требует установления причин этой патологии с целью ее проф1иакшки и лечения.

Изменение кортикостероидного спектра крови отражает характер этой реакции организма больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями и другими формами патологии (Ю.М. Селезнев, 1982; А.И. Робу, 1982). Функциональная активность надпочечников оказывает существенное влияние на сократительную и метаболическую способность миокарда.

Решение задачи ранней диагностики патологии сердца с намечающимися явлениями недостаточности кровообращения (скрытые формы) могут способствовать исследования взаимодействий кортикостероидов с белками крови, кото-

рые являются важной характеристикой эффективности гормонов, и следовательно, мерой осуществления адаптационного процесса в целом. Эти механизмы реализуются при различных генезах сердечной л других видов патологии ( А.П. Бирюков и 1р.. 1996: В.М. Шамарии и др.. 1996).

Связь работы с крупными наушыми программами, юмамн. Работа выполнена в рамках тем: ). «Из\тшть стероид-белковые взаимодействия в крови при различных стадиях развития недостаточности кровообращения. Разработать и предложить Министерству здравоохранения РБ методы ранней диашоетики заболеваний сердца, сопровождающихся явлениями недостаточности кровообращения«. гос. регистрации 81093364. 1483 г.: 2. «Изучить биохимические процессы, связанные с образованием свободных радикалов при слабых хронических радиационных поражениях человека I? животных*. Гос. программа по преодолению в РБ последствий катастрофы на ЧАЭС на 1990-1994 п.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось комплексное изучение свойств транскортина плазмы крови при различных функциональных состояниях коры надпочечников и развитии недостаточности кровообращения в клинических и экспериментальных условиях. Для реализации этой цели решались следующие задачи:

1. В эксперименте на животных изучить функциональную активность коры надпочечников и гормон-белкового взаимодействия ¡1 крови при недостаточности кровообращения.

2. Выявить особенности структурно-функциональных свойств транскортина животных и человека на различных стадиях недостаточности кровообращения.

3. Изучить функциональное состояние коры надпочечников и системы гормонального гомеостаза на беременных животных с хронической серлсчно-сосул! 1стой пелостаточностью.

4. Разработать в эксперименте метод ранней диагностики заболеваний сердца, сопровождающихся явлениями недостаточное!» кровообращения по показателям стероид-белковых взаимодействий в крови и адаптировать .метод к клиническим условиям.

5. Изучить гормон-белковые взаимоотношения при развитии недостаточности кровообращения у беременных крыс подвергнутых воздействию инкорпорированных радионуклидов 1 !1 (ЮОкЬк/кг) и ' СЧ (1ь кБк/к:).

6. Исследовать некоторые биохимические показатели при действии инкорпорированных радионуклидов !|1 (ЮОкБк/кг) и ь Ся (16 кБк/кг).

Наущая новизна результатов. Проведено углубленное изучение распределения кортикостероидов в плазме крови между белковыми компонентами и количеством свободных гормонов, которое определяется стероидсвязываюшимн

свойствами и концентрацией тралскортнна, а также физико-химических свойств КСГ при недостаточности кровообращения.

Показано, что стрессорное состояние сопряжено с нарушением гормон-транскортиновых взаимодействий. Изучена характеристика стероид-белковых взаимоотношении.

Впервые выявлено снижение биосинтеза транскортина срезами печени in vitro при экспериментальной недостаточности кровообращения у крыс и показана роль нарушения гормон-транскортиновых взаимодействий в формировании стрессорного состояния.

Клиническими исследованиями впервые установлено, что у больных гипертонической болезнью и ншемической болезнью сердца, осложненных недостаточностью кровообращения, нарушается комплексирование глюкокортикои-дов с транскортином (снижается сродство белка к стероидам, концентрация связывающих мест на белке и его содержание в плазме крови).

Показано, что дозированная физическая нагрузка с исследованием гяюко-кортикоидного спектра в крови является адекватным методическим приемом для выявления латентной недостаточности кровообращения.

При дополнительном стрессорном воздействии (внутреннее облучение инкорпорированными радионуклидами Ш1 и ll7Cs) у беременных крыс с сердечной недостаточностью отсутствует стеровдогенная реакция в ответ на физическую нагрузку, что может расцениваться как полная несостоятельность адаптации.

Дана биохимическая характеристика радиационного стресса, в частности, изучено влияние инкорпорированных 137Cs и Ш1 на дыхание и окислительное фосфорилпрование митохондрий, изучены процессы ПОЛ в тканях, исследована активность ферментов СДГ, МДГ, креатинкиназы в тканях крыс при внутреннем облучении.

Пре,пложен метод ранней диагностики недостаточности кровообращения у больных гипертонической болезнью и ИБС на основании данных о нарушении биосинтеза транскортина при моделировании недостаточности кровообращения.

Практическая значимость полученных результатов. Полученные в экспериментах результаты используются для ранней диагностики недостаточности кровообращения. Разработаны методические рекомендации!! «Стероид-белковые взаимодействия и ранняя диагностика недостаточности кровообращения при сердечно-сосудистых заболеваниях» (1983 г.), ¿Диагностика латентной недостаточности кровообращения при сердечно-сосудистых заболеваниях» (19S3 г.), утвержденных МЗ РБ. Совместно с МГА РФ и Гродненским университетом изданы методические рекомендации «Биохимические критерии дефицита кровообращения» (1984 г.), которые внедрены в клиническую практику.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Установлена строгая синхронизация по фазам динамики развития компенсаторной гипсрфофнн сердца ( КГС) п сопутствующего адаптационного синдрома. что определяет принципиальную возможность использования количественных параметров одного процесса для характеристики другого.

2. Исследование юрмон-белковых взаимодействий и содержание свободных, общих 11-ОКС в крови больных гипертонической болезнью (ГБ) и пшеми-ческон болезнью (ИБС) при физической ширузке позволяет выделить два типа изменении в глюкокортпкопдном спектре: увеличение содержания свободных и обших 11-ОКС при неизменном связывании гормонов бедками сыворотки крови или отсутствие изменений уровня свободных и общих 11-ОКС при сниженном связывании глюкокортикондов транскортнноч крови. Первый тип изменении рьтгтлен у больных без признаков нелостаточ.иости кровообращения (сииия Н.,), второй — у больных с начальной стадией! (Н,) недостаточности кровообращения.

3. Кортикостероидсвязывающий глобулин (КСГ). очищенный до гомогенного состояния из плазмы крови крыс с экспериментальной недостаточностью кровообращения, отличается по сорбшгонным и физико-химическим свойствам от выделенного из плазмы крови шпактпых крыс. У животных с экспериментальной недостаточностью кровообращения нарушается комплексообразование глюкокоргпкоидов с транскортштом, снижается биосинтез гранскотина срезами печени ¡и \ilro.

У больных гипертонической болезнью и ншемической болезные сердца, осложненных недостаточностью кровообращения нарушается комплсксоооразо-вание глюкокоргикоидов с транекорпшом.

4. В начале терминально!! с!адни компенсаторной пшерфофип сердца при беременности у крыс наступает сокращение функциональною резерва надпочечников и стероидсвязываюшеи способности гранскортпна. Инкорпорированные Ш1 (100 кБк/кг) н '^Св (16 кБк/кг) через 3 месяца у беременных крыс с недостаточностью кровообращения ведут к резком), снижению стероидсвязываюшеи способности траиекоршна.

5. Развитие патологического состояния (недостаточности кровообращения) характеризуется нарушением основных стероил-связываюших свойств транскортина плазмы крови. Снижаются константа сродства к тлюкокоршкоп-там. число (количество) сия ;ываюпш\ мест на бе.тке. а ыкже уровень кортико-еи'роидсиязывающего глобулина в плазме крови.

6. Дозированная физическая шнрузка е псслелованпем стероидного спектра крови является адекватным методическим приемом выявления латентной недостаточности кровообращения.

7. Инкорпорирование, радионуклидов Ш1 (100 кБк/кг) + 137Ся (16 кБк/кг) приводит к активации ПОЛ в большинстве тканей организма, однако ангиоксп-

дантная система и механизмы детоксикации способны компенсировать развитие процесса, о чем свидетельствует отсутствие изменений в содержании вторичных и конечных продуктов ПОЛ. У облученных животных снижается содержание количества общих литшов, фосфолипидов, холестерина, активность ЛДГ, МДГ, СДГ, креатннкиназы, эффективность фосфорилировання (АДФ/О) митохондриями печени при окислении сукшшата и 2-оксоглутарата.

Личный вклад соискателя. Автор являлся ответственным исполнителем темы «Изучить стеронд-белковые-взаимодействия в крови при различных стадиях развития недостаточности кровообращения. Разработать п предложить Министерству здравоохранения БССР методы ранней диагностики заболеваний сердца, сопровождаюццгхся явлениями недостаточности кровообращения», № гос. регистрации 81093364, 1983; научным руководителем темы «Изучить биохимические процессы, связанные с образованием свободных радикалов при слабых хронических радиационных поражениях человека и животных». Гос. программа по преодолению в РБ последствий катастрофы на ЧАЭС на 1990-1994 гт. Соискатель разрабатывал модели эксперимента, осуществлял их выполнение, проводил обработку данных, их анализ.

Апробация результатов диссертации. Материалы работы были представлены и докладывались на заседаниях лабораторий Института биохимии АН БССР, 1985-1988 гг.: на 1 международном симпозиуме «Binding proteins: steroid hormones* (Франция, 1986); на международном конгрессе »Steroid protein interaction. Basic and clinical aspects» (Италия, 1987). Материалы диссертации доложены и обобщены на областных научно-практических конференциях акушеров-гинекологов Гродненской области (1968, 1988); 8, 9, и 10-й областных научно-практических конференциях « Достижения медицинской науки в практику здравоохранения» (1986-1988); итоговой конференции Гродненского государст-; венного медицинского института (1989, 1993) , 3-ей международной конференции «Экологическая патолопи и ее фармакокоррекцпя» (Чита, 1991); 4-й союзной конференции «Эндокринная система и вредные факторы внешней среды» (Иваново, 1991); Всесоюзной конференции «Раднобиологпя последствий аварии на ЧАЭС» (Минск, 1991); Радиобиологическом съезде (Киев, 1993); Белорусско-японском симпозиуме '"Acute and Late Consequences of Nuclear Catastrophes: Hiroshima-Nagasaki and Chernobyl" (Минск, 1994); 4-й международной конференции «Application of semiconductor detectors in nuclear physical problems» (Юрмала, 1995); международном симпозиуме «Витамины и здоровье населения Беларуси и смежных регионов» (Гродно, 1995); 1-й международной практической конференции «Экологические проблемы Балтийского гидрорешона республики Беларусь» (Брест, 1996).

Олубликованность результатов. Основные положения диссертации изложены в 39 научных работах, в том числе: 18 статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на ..„."^страницах машинописи и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, литературного указателя и двух приложений. Работа содержит 21 таблицу и 6S рисунков. Список цитируемой литературы включает 340 бнблшлрафпческпх наименовании, из которых 244 отечественных и 96 зарубежных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования выполнены на 1070 беспородных крысах-самках массой 100-200 г, содержащихся в условиях вивария. Контрольных животных забивали в з'словиях, исключающих влияние сгрессорных факторов. Недостаточность кровообращения моделировали коарктацпей брюшной аорты по методу А.Х. Когана (1961).

Функциональное состояние надпочечников изучалось через 2, 4, 6 и 8 недель после создания коарктации аорты с целью выявления связи функции коркового слоя надпочечников с развитием компенсаторной гипертрофии сердца (Ф.З. Меерсон, 1986), и на 7, 14 и 21 дни развития беременности (фазы имплантации, окончания плацентации и перед родами - состояние максимальной нагрузки на сердечно-сосудистую систему (В.В. Коржова. Л.Ф. Левина. 1977). В качестве функциональной пробы использовали физическую нагрузку плаванием длительностью 5 мннуг с дополнительным грузом, составляющим ЗГс oi массы ¡ела животных (A.A. Виру, 1976). Каждой экспериментальной группе coonieiei/¡овала гр\пиа контрольных животных по массе и срокам беременности. Обследовано 226 больных гипертонической болезнью в период криза п больных пшемичсской болезнью, прояатяютепся нестабильной формой стенокардии покоя и напряжения с признаками недостаточности кровообращения, (по классификации И.Д. Стражеско, В.Х. Василенко, 1985) и 65 контрольных лиц. Больные были обследованы п первые сутки поступления в клинику. Забор крови проводили утром натощак. В течение 5 минут в положении сидя \ обследуемых лиц проводилась велоэргометрическая проба мощностью 500 кГм/мнн. Показатели гемодинамики определялись до и сразу же после нее в клиниках терапии Гродненского медицинскою института.

У больных производится забор крови в покое и спустя 10 минут после ■ окончания физической нагрузки на вслоэр'гометре. В крови определяли содержание общих, белково-связанных и свободных 1 1 ОКС, а также связывающую способность, константу ассоциации и концентрацию связывающих мест на транскортине.

Параметры связывания транскортина определяли по методу (I.D. Baxter et al., 1970) путем инкубации разбавленной до 0,5% плазмы крови с возрастаюши-

ми количествами кортикостерона или кортизола в присутствии следовых количеств 3Н-кортизола при 4°С в течение часа. Расчет констант ассоциации и концентрацию связывающих мест на белке проводили в координатах Скетчарда (G. Scatchard, 1949).

Все рутинные биометрические расчеты данных сатурацлонного анализа были в достаточной мере автоматизированы. В частности, разработан специальный алгоритм, rio которому составлена программа вычисления Скетчардовскпх кривых на ЭВМ, с выдачей информации в графическом изображении.

Выделение транскортина из плазмы крови крыс проводили методом аффинной хроматографии на кортизолсефарозе (О.Л. Стрельченок и др., 1978).

Радиоактивность проб измеряли сцинтилляцнонным счетчиком Mark-II ("Nuclear Chicago", США).

Биосинтез транскортина срезами печени in vitro был изучен по методу нм-мунопреципитации вновь синтезированного 14С-транскортина из 14С-гидролизата белка.

Определение содержания 11-оксикортпкостероилов. а также раздельное определение свободных и связанных с белком 11-окси-кортикостероидов в плазме крови проводили флуориметрическпм методой (Л.В. Павлпхина и др., 1967).

Определение общих липидов, холестерина проводили по общепринятым методикам, описанным в литературе (Л.М. Прохорова, 1965). Содержание общих фосфолипидов определяли по содержанию лшищного фосфора (Кейтс, 1975). Все вышеуказанные показатели выражали в мг%.

Исследование концентрации продуктов ПОЛ и Ферментативных активностей. В первую опытную группу входили крысы, которым на протяжении 16 дней внутрижелудочно через зонд вводили I37Cs по 1 кБк/кг. Суммарная доза 16 кБк на кг массы. Животные находились в течении года на общем рационе виварии год после инкорпорирования. Вторую группу составили крысы, которым однократно инъецировали i31I 100 кБк/кг, затем 16 кБк/кг 13,Cs в режиме первой группы. Срок пребывания на рационе вивария после последнего введения нуклидов — 6 месяцев. Третья группа получала перорально 137Cs в том же режиме, что и первая. Срок инкубации — 6 месяцев. У этих групп исследовались продукты ПОЛ. Состояние перекисного окисления липидов исследовали хемилюминесцентпым методом (Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков, 1973) в плазме крови, гомогенатах печени и почек крыс, получавших 137Cs и 137Cs+131I. Накопление гидроперекисей липидов — первичных продуктов ПОЛ — оценивали по характерному для диеновых конъюгатов УФ-спектру поглощения раствора липидов в смеси этанол-гептан (5:1), принимая коэффициент молярной экстннкиии при Хмакс.=232 нм равным г^-Ю^М '-см'1 (И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977). Определение количества продукции МДА проводили по S. Stoks, Т. Dormandy (1971) в модифи-

кашш (В.Н. Беннсович, JI.H. Идельсон, 1973). Концентрацию глутатнона определяли спектрофотометрически на двухлучевом спектрофотометре «Perkin-Elmer-402» (Швеция) в диапазоне длин волн or 330 до 500 нм. Четвертая iруина облагалась инкорпорированным 1:|! 100 кБк о шокрашо в/м, затем '"Cs на протяжении 16 дней по 1 кБк/кг массы. Срок после затравки — 3 месяца. Опытным группам соответствовали интакшые животные. Последнюю дозу п срок инкорпорированных радионуклидов l3'Cs+blT мы использовали лля беременных крыс с недостаточностью кровообращения. Поэтому в дальнейшем мы попытались лшь биохимическую характеристику развивающегося "радиационного стресса" через 3 меслца после внутреннею облучения инкорпорированными радионуклидами 1311 (100кБк/кг) и "7Cs (16 кЬк/кг).

Активность сукцннатдепшрогеназы и малатдегидрогеназы определяли по метолу (Виноградов А. Д.. 1967). Активность ферментов регистрировали при ЗО'С и рассчитывали на белок, который определяли бнурстовым методом (М.И. Пле-хан, 1961). Активность ЛДГ по B.C. Асатиани (1965).

Методы выделения митохондрий и изучения функциональных параметров митохондрий печени крыс. За основу был взят метод дифференциального центрифугирования (Schneider, 1948).

Скорость потребления кислорода митохондриями печени регистрировали на иолярографе ОН-Ю2 ПЗепгрия) в тсрмостатпрусмоп ячейке объемом 1 мл с открытом платиновым электродом при температуре 26 С.

Количество белка митохондрий в ячейке составляло 3 мт.

Другие биохимические методы, используемые в работе. Концентрацию оелка опреде.'шли но стандартному методу (О. Lowry. 1951). а также спектрофо-томе1рически по поглощению при 235 и 2S0 нм (J. Whitaker. et al. 1980). Белок митохондрий определят бшретоимм методом (С.Е. Северин, Г.Л. Соловьева, ! 989).

Количество белка находили по калибровочному графику, построенному по

стандартному раствору яичного альбумина.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Моделирование нелостаточности кровообращения у крыс и опенка сте-рои i-белкового взаимодействия на различных стадиях ее развития. Изучение стеропд-связываюшей способности транскортпна v больных ГБ н ИБС.

В экспериментах изометрическую функцию сердца у крыс воспроизводили путем коаркташш аорты. Развивающаяся при этом компенсаюрная гиперфункция сердца (КГС) начинается до появления гипертрофии, она продолжается после нее и в дальнейшем может сочетаться с недостаточностью сердца. КГС явля-

ется не только первым звеном процесса - причиной его последующих звеньев, но и перекрывает другие, происходящие в миокарде явления во времени.

Какие же сдвиги стероидного спектра крови характерны для состояния недостаточности кровобрашення, т.е. для тон стадии развития КГС, где дефицит насосной функции сердца уже отчетливо виден по данным гемодинамики. Через 8-13 недель после стенозирования аорты в крови опытных крыс по сравнению с контрольными наблюдается снижение суммарных Н-ОКС, в основном, за счет белково-связанных форм (рис. 1). Поскольку абсолютная концентрация гормонов в крови при прочих равных условиях (экскреция, метаболизм) является векторной функцией гормонсинтеза, (т.е. новообразующиеся кортикостероиды в железах не накапливаются (Р. НасИаё, 1986), то обнаруженные сдвиги указывают на снижение секреторной способности коры надпочечников. Это заключение находится в соответствии с многочисленными экспериментальными и клиническими литературными данными, свидетельствующими об истощении функциональных резервов желез при развитии застойной недостаточности кровообращения (Е.В. Батай, 1980; В.Е. Дашкевич, 1985; А. Р1гег, 1969).

Угнетение гормонообразования в надпочечниках является закономерным результатом предшествующего хронического функционального перераздражения коркового слоя в динамике нарастания гнпоксических явлений (И.И. Евнина, 1971) при развития и усугублении дефицита насосной функции сердца после ко-аркташш аорты у крыс (Ф.З. Меерсон, 1988). Действительно, во все предшествующие сроки (2, 4, 6 недель) в крови опытных животных по сравнению с контрольными наблюдалось увеличение содержания суммарных Н-ОКС, а также белковосвязанных и свободных форм гормонов. В сроки 6, 8, 13 недель, в основном. возрастали биологически активные гормоны. Эти изменения свидетельствуют о гиперфункции надпочечников.

Характерное чередование периодов повышения, стабилизации и снижения уровня кортнкостерондов в крови является основной характеристикой любой, более или менее, длительной неспецифпческой стресс-реакции, в которой обычно различают фазы: тревоги, резистентности и истощения (Г. Селье, 1977). Обращает на себя внимание одинаковое смысловое содержание понятий компенсаторной гипертрофии сердца и стресса. В обоих случаях речь идет об адаптации. Конечно, стресс — это мультикомпонентный процесс, но если взять одно из основных его эффекторных звеньев, а именно - роль надпочечников, то в них так же, как и в сердце, нагрузка приводит к увеличению функции, которая обеспечивается повышением количества соответствующих клеточных структур, т.е. ростом массы органа. Компенсация нагрузки в пределах физических возможностей обеих систем определяет период устойчивой гиперфункции, которая постепенно приводит к исчерпанию функционального резерва - перераздражению сократительных и секреторных элементов и, наконец, их дегенерации. Четкая временная

сийхроттацня КГС и стерондогенной реакции, очевидно, обусловлена причинно-следственными взаимоотношениями между ними. Стеноз аорты является одновременно шпрузкой на серлие (сопротивление сердечному выбросу) н на надпочечники (гипоксия - мощный стрессируюнпш фактор).

□ 1 ¡32 ШЗ !5 4

Ш Э 6

Общие

Связанные

Свободные

Рис. 1. Содержание обших, связанных с белком и свободных 11-ОКС (мкмоль/л) в плазме крови крыс при физической нагрузке (плавание) через 13 недель после коаркташш аорты. Группы:

1 - контроль без нагрузки

2 — кош роль, 5 мин. нагрузка

3 — контроль. 5 мин. шнрузка — 10 мин. восстановительный период

4 — оперированные животные без на! рузкн

5 -- оперированные животные. 5 мин. нагрузка

6 — оперированные животные, 5 .мин. нагрузка + 10 мин восстановительный период

* — достоверность различий в группах 1-4 к контролю; - достоверность различий в группах 5,6 к 4 группе

Синхронность и корреляция стерондогенной реакции и КГС по амплитуде в принципе, позволяют использовать количественные параметры одного процесса .тля характеристики трутого. По уровню кортикостсроидов в крови можно характеризовать стадию КГС и. наоборот, по показателям гемодинамики — фазу стсроилогетттюй реакции.

Данные рис. 2 показывают, что в терминальных стадиях КГС (через 13 недель после операции стенозирования аорты) у крыс отмечается снижение процента связывания экзогенного |'Н]-гидрокортизона белками плазмы крови за счет уменьшения его сродства к транскортнну. Снижение резервирующей спо-

собностн транскортнна в данной ситуации, казалось бы, можно рассматривать как целесообразную приспособительную реакцию гомеостатических механизмов по поддержанию уровня кортикостероцдов в крови в ответ на резкое падение их содержания при истощении секреторной деятельности надпочечников по мере развитом длительного стресса. Однако выясняется, что такое снижение выявляется и на более ранних стадиях развития КГС при отсутствии изменений исходного уровня гормонов в крови (8 недель) и даже при его увеличении (6 недель). Поэтому данный сдвиг, а тем более утрата транекортнном специфичности в отношении связывания стероидов, очевидно, не может быть результатам естественного реагирования балансирующих механизмов стабилизации гормонального фона.

Процент связывания

п-р М/мг белка

Ка«107»М"1

Рис. 2. Параметры связывания 'Н -гидрокортизона плазмой крови крыс при физической нагрузке (плавание) через 13 недель после коарктации аорты. Обозначения как на рис. 1.

По мнению некоторых авторов (В.В. Виноградов, 1990), нарушение специфического связывания глюкокортикоидных гормонов белками крови при активизации функций коры надпочечников является результатом срыва адаптационного синдрома. Экстраполяция полученных данных на временную шкалу опыта показывает, что снижение резервирующей способности транскортнна имеет место как раз в тех зонах, которые вышеприведенной схемой процесса развития КГ С и стероидогенной реакции определяются как терминальные: 6 недель — конец стадии резистентности; 8 недель — начало стадии истощения; 13 недель — выраженное истощение. Последним подчеркивается обоснованность допущения о вероятности срыва адаптации в этот период.

Поскольку усиленная мышечная работа является одновременно функциональной нагрузкой на сердце, системы гормонообразования в надпочечниках (стрессирующий фактор) и биосинтеза транскортнна в печени (через включение

гомеостатнческих механизмов, а также непосредственно через усиление пшок-сического фона), было весьма заманчиво использовать этот методический прием для оценки функциональных ресурсов всех задействованных систем и в конечном тоге для выявления латентной педосгаточности кровообращения.

Согласно рекомендациям (А.Л. Виру, 1976) в опытах на крысах использовали стандартную нагрузочную пробу — плавание с грузом в 3% от массы тела. Эффективность пробы оценивали но амплитуде и воспроизводимое ni секреторного ответа надпочечников на равнодозированнум физическую нагрузку у контрольных животных. Режим проведения пробы строго соответствовал клииичс-uuiM аналогам: 5 мин нагр^чки, затем 10 мин восстаповпгслыюго периода, гз течение которого в клинике проводятся все карднометрические измерения).

Однако, в последующие сроки опыта (б. S и S3 недель недостаточности кровообращения), равнодозированная физическая нагрузка вызывает снижение процента связывания экзогенных гормонов in vitro, уменьшение константы ассоциации и количества связывающих мест на транскортине. Согласно (А.11. Бобков, 1973) этот сдвиг должен квалифицироваться как срыв адаптации, обусловленный несостоятельностью приспособительных механизмов.

Сокращение числа связывающих мест для кортикостероидов на транскортине может указывать на снижение его исходного уровня в крови за счет угнетения биосинтеза в печаш и, следовательно, уменьшения выброса последнего п кровяное р>сло при физическом перенапряжении (ст~реесс). Кроме того, здесь возможен варианте синтезом дефектного гранекортнна. по аналогии с клиническими энзи.мопатпями (классического или ретикулярною типа) (В.Б. Розен, 1973: I. Poller. 1979). В частности, снижение показателей (Ка) и (ш может отражать утрату специфичности транскортниа. т.е. сродства к кортикостероидам в процессе его биосинтеза из-за сбоев в работе генетического и белоксинтезируто-шею аппарата гепатоцптов в принятых условиях (Л.И. Надольник, 19SS).

Судя по динамике изменения стероидного спектра крови после коаркта-шш аоргы, серьезные нарушения юрмонообразова тельной функции надпочечников имеют место уже в начале стадии истощения КГС. В промежутке между 6 и 8 неделями эксперимента в крови опытных животных наблюдается прогрессирующее снижение исходного уровня II-OKC, в том числе белковосвязанных и свободных форм гормонов. Применяя дополнительное стресеируюшее воздействие. можно ле] ко оценить наличные функциональные ресурсы стероилогенеза во все сроки опыта. В начальных стадиях развития КГС надпочечники еще способны ответить повышением гормональной активности на физическую нагрузку, а в начале терминальной фазы компенсаторной гиперфункции сердца железы в функциональном отношении полностью подавлены, вплоть до развития неадекватной реакции, что соответствует данным (В.Е. Дашкевич, 19S5). Очевидно, к

этому времени ферментные системы стерондогенеза исчерпывают свой функциональный потенциал, что приводит их к фактическому истощению.

Если снижение связывающей способности транскортина еще при сохраняющейся возможности воспроизведения стероидной реакции в ответ на раздражение ранее трактовалось как срыв приспособительного стресса (А.И. Бобков, 1973), то отсутствие функционального ответа надпочечников в аналогичных условиях (т.е. при уменьшении связывающей способности транскортина) должно оцениваться как результат полной несостоятельности адаптации.

Таким образом, исследование стероидного спектра крови при дозированной физической нагрузке является удобным методическим приемом для выявления латентной недостаточности кровообращения.

Снижение связывающей способности при инфаркте миокарда с одновременным увеличением свободных гормонов ряд авторов (E.H. Герасимова, Чазова Л.В., 1973) расценивают как срыв приспособительной реакции организма. Однако, исследуя содержание свободного гидрокортизона методом белкового конкурентного связывания в крови больных пшемической болезнью сердца с нестабильной стенокардией напряжения и покоя, мы не нашли увеличения уровня свободного гормона. Судя по данным Скэтчардовского анализа, сродство глю-кокортикоидов к белку не изменяется, что предполагает активное связывание стероидов и возможное увеличение содержания белковосвязанных форм гормонов. Последнее подтверждается данными флуориметрического исследования крови больных (рис. 3). Обнаружено достоверное увеличение уровня общих II-оксикортнкостероидов за счет белковосвязанных форм.

1. — II-ОКС сумма »— Р<е,0О1

2. — I I -üliC ■ связанные ■ с 1 белком

3. — II-ОКС свободные -

4. — F•связанные с белком-

5. — F■свободные■

6. — В■связанные с белком

7. — В ■ свободные

Рпс. 3. Содержание общих, связанных с белком и свободных 11-ОКС, Р и В (мкмоль/л) в плазме крови больных ишемической болезнью сердца.

В кровн больных гипертонической болезнью в период криза увеличивается содержание общих И-ОКС за счет белковосвязанных и свободных форм гормонов (рис. 4). Активное связывание стероидов белками кровн снижает концентрацию свободных глюкокортикоидов, тем самым ограничивается амплитуда стрес-

сорной реакции организма. Гипертонический криз на фоне гипертонической болезни. осложненной ИБС. сопровождается еще более высоким подъемом уровня белковосвязанных и свободных форм стероидов.

По мере прогрессирования патологического процесса у больных с недостаточностью кротюоорашеппл. гипертонический криз уже не вызываем подъема уровня исследованных форм 11-ОКС. Наоборот, отмечается достоверное снижение содержания свободных форм 1 ¡-ОКС в крови больных с Н, стал г гей недостаточности кровообращения по сравнению с группой больных без ее признаков, а V больных с Нпп счадией. даже по сравнению с контролем. Одновременно умень-шаен-я связывание юрмоков транскортином (рис. 51 за счет снижения концентрации связывающих мест и, что особенно важно, сродства стероидов к белкам. Утрата трпнетгортниом специфичности в отношении связывания коршкостероп-дов (К,) является отчетливым информационным признаком срыва адаптации.

' . 3 -..¡.сп-' -" " - ,I С /

Рис. 4. Содержание общих, связанных с белком и свободных 11-ОКС. (мкмоль/л! в плазме кропи больных гипертонической болезнью н ашемичсскоЛ болезнью сердца.

сердив ■и•гипертонической- болезнь» ,

стался ■ чп - <п=31)

Рис. 5. Параметры связывания 'Н-гидрокортпзона (М±пт) транскортином плазмы крови больных гипертонической болезнью н ищсмичсской болезнью сердца.

Таким образом, гипертоническая болезнь, осложненная ишемической болезнью сердца, может привести к серьезным нарушениям приспособительного процесса, связанным с неадекватностью стероидогенной реакции в результате истощения функциональных резервов надпочечников и системы стабилизации стероидного гомеостаза. Исходя из характерного соотношения сдвигов в гормональном спектре крови при возрастании функциональной нагрузки на сердце и надпочечники до порогового значения, приводящего к декомпенсации, следует отметить эквивалентность клинических п экспериментальных моделей, что дает основаине считать перспективным использование стероидных тестов в диагностических целях.

Исследование гормон-белковых взаимодействий и содержания свободных, общих 11-ОКС в крови больных ГБ, ИБС и ГБ+ИБС при физической нагрузке позволило выделить два типа изменений в глюкокортнкоидном спектре: увеличение содержания свободных и общих 11-ОКС при неизменном связывании гормонов белками сыворотки крови и отсутствие изменений уровня свободных и общих 11-ОКС при сниженном связывании глюкокортикоидов транскортнном крови. Первый тип изменений выявлен у больных без признаков недостаточности кровообращения (стадия Нс), второй - у больных с начальной стадией (Н,) недостаточности кровообращения.

Эти тесты могут быть полезны для дифференциальной диагностики в тех случаях, когда по данным функциональной диагностики нельзя однозначно решить вопрос о наличии недостаточности кровообращения (стадия Н,) и приходится прибегать к косвенным данным - анамнезу и субъективным оценкам клинических проявлений.

При анализе полученных данных в диагностических целях для тестирования (Н[) используются установленные выше основные критерии: отсутсвие повышения содержания общих 11-ОКС и снижение связывающей способности транскортина после физической нагрузки с уменьшением величины Ка. Следует подчеркнуть, что при интерпретации данных стероид-белкового взаимодействия важным информационным признаком яшшется изменение величины константы ассоциации (Ка), характеризующей специфичность транскортина в отношении связывания кортикостероидов, которая позволяет оценить имеющееся снижение связывающей способности белков крови in vitro или как адекватную приспособительную реакцию (при неизмененном сродстве), или как срыв адаптации (при его уменьшении).

Для раннего выявления и диагностики недостаточности кровообращения следует рекомендовать исследования гормонального спектра крови больных в условиях нагрузочного теста на велоэргометре, что наряду с общепринятыми приемами является дополнительным методом дифференциальной диагностики. Предлагаемые биохимические тесты могут применяться в комплексе с обычны-

мн методами функциональной диагностики, особенно в том случае, когда по данным гемодинамики трудно решить вопрос о стадии недостаточности кровообращения (Н„ или Н.).

2. Выделение и сравнительная характеристика транскортина кт>ые в норм с и прн_экспериментальнон недостаточности кровообрашения.

Н соответствии с поставленной задачей были проведены исследования сфуетурно-функшюнальных и физико-химических свойств гранскорчнна. выделенного )! гомогенном состоянии из плазмы шиакшых крыс и крыс с экспериментальной недостаточностью кровообращения (15 недель после коаркташш брюшной аорты).

Активность кортикостероидсвязывающего глобулина (КСГ), выделенного из плазмы животных с недостаточностью кровообращения, оказалась в 4.5 раза ниже. В табл. 1 представлены результаты исследования комплексообразуюших и некоторых фпзико-хнмнчеекнх свойств белков.

Таблица 1

Физико-химические и комплексообразутощне свойства транскортина.

Белок животных с

Параметры Белок интактных недостаточ-

животных ностью кровообра щеп I (я

Молекулярный вес (электрофорез в 10^ ПААГ с ДДН-\а) 60000 60000

рН максимального связывания 7,80 8,20

Изоэлектричеекая точка КСГ 6,12-7.80 5.13-7.18

Изоэлектричеекая точка эквимоль-ною комплекса КСГ-коршзол 6.23 6,95

Равновесный диализ: К,-108'М"' 2,79+0,50 9,84±1.20

Концентрация связывающих мес! (пмоль/мт белка) 0.98=0,05 0,39x0,08

Методами равновесного диализа и тверлофазной адсорбции было выяатено, что транскортнн, выделенный из плазмы крови оперированных животных, характеризуется гораздо большим сродством к кортпзолу. КСГ. выделенный из плазмы контрольных животных, обладает одним связывающим центром на моль белка, что согласуется с литературными данными и свидетельствует о е1 о 1 омогенностн. В тех же условиях транскортнн, выделенный из плазмы животных с недостаточностью кровообращения, связывает кортизол в отношении 1:0,3. Анализ графиков Скетчарда (рис. 6) свидетельствует о наличии только одного типа центров

связывания как у белка контрольных, так и у животных с недостаточностью кровообращения.

При изоэлектрическом фокусировании комплекса КСГ-кортнзол в полц-олборатной системе в градиенте рН 4,0-8,0 белок концентрировался в виде одной диффузной полосы в области рН 6,23 и 6,95 соответственно для белка интактных животных и животных с недостаточностью кровообращения (табл. I).

Таким образом, развитие патологического состояния, а именно, недостаточности кровообращения характеризуется значительным нарушением физико-химических свойств транскортина. В связи с вышеизложенным представляется актуальным определение основных параметров комплексообразования КС Г на различных стадиях острого и хронического стресса.

Рнс. 6. Графики Скэтчарда, полученные методом равновесного диализа.

1 — транскортнн из плазмы интактных крыс (концентрация белка — 4,28-10"8 М);

2 — транскортнн животных с недостаточностью кровообращения (концентрация белка — 2,81-Ю'8 М). В — связанный стероид, И — свободный стероид.

Кортикостерондсвязываюший глобулин у больных гипертонической болезнью, осложненной недостаточностью кровообращения.

Были проведены исследования функциональной активности кортикосте-роидсвязывающего глобулина у больных гипертонической болезнью на различных этапах прегрессирования патологического процесса (пшемической болезни сердца н недостаточности кровообращения).

Показано, что гипертонический криз на фоне гипертонической болезни, осложненной пшемической болезнью сердца (ИБС), сопровождается высоким подъемом уровня глюкокорти кондов в крови (в 1,5-2 раза) (рис. 7) и снижением связывающей способности транскортина.

По мере прогрессирования патологического процесса, когда у больных развивается недостаточность кровообращения, гипертонический криз уже не вызывает подъема уровня 11-оксикортикостероидов в крови, что характеризует снижение гормонообразовательной функции коры надпочечников, которое про-

в/и

является уже на ранних стадиях недостаточности кровообращения. Одновременно у этих групп больных было обнаружено нарушение связывания глюкокортн-копдов с транскоргпном. Резко падает связывающая способность КСГ за счет снижения концентрации связывающих мест на белке и, в некоторых случаях, (выраженные формы недостаточности кровообращения) сродства транскоргина к стероидам (рис. 8).

40-•

- -

20-

* *

проаент связывания

I. Здоровые люди

й. - ,. - стадия Нт п-13 1

!0 Т

'Л

" т

4 •

I 1 2

1±

5 6

Ка-»10 м~*

2. Больные

гипертонической • болезнью, стадия нО

п=20

5. - - стадия Н,д п=14 гА

Концентрация связ. мест на белке <риоль''НГ)

3. Больные гипертонической

и ишемической болезнью сердца, недостаточность, стадия Нп п=21

6. - .. - стадия Н-с

п=7

Рис. 7. Содержание 11-ОКС (мкм оль/л) в плазме крови больных гипертонической болезнью, осложненной ишемнческоп болезнью сердца и недосгаюч-ностыо кровообращения.

1,0 I

И.4

В.?

•4:

сумма

IX -ОГ.С связанные с•белком .

±±

5 ь

I I

II - ОМС-свободные

Здоровые люди п=24

Больные

Iипертоничйскои (Чп.нп^нЬ*? . стадия

0. Больные гипертоническом и ишемичвскои

■лО.^езиою серима - с с ао'-ннп» и недогт-н | очмостью рс.|_ч стадия и,.

-'ПГнЯ I

•обращения

п-13

- „ - стадия Н^д п-М

6. - .. - стадия н

л =7

2В

Рис. 3. Паромефы снязьшания Н-гидрокортизона плазмой крови и концентрация транскортина у больных гипертонической болезнью, осложненной ишемической болезнью сердца и недостаточностью кровообращения.

Изменение константы сродства и падение резервной емкости транскортн-на у больных гипертонической болезнью и ИБС с выраженными формами сердечной недостаточности свидетельствуют об утрате белком специфичности в отношении связывания стероидов. Снижение связывающей способности транс-кортнна при дефиците кровообращения может развиваться вследствие гемоди-намических изменений, приводящих к ишемии печени и других органов и развитию метаболического ацидоза (E.H. Герасимова, JI.B. Чазова, 1973). В этих условиях возможны нарушения биосинтеза транскортнна в печени.

Радиоиммуным методом была определена концентрация транскортнна в плазме исследуемых больных. Из полученных результатов следует (pire. 9), что сшгжение связывающей способности КСГ коррелирует с уровнем его в плазме крови. Нарастание явлений сердечной декомпенсации приводит к достоверному снижению содержания транскортнна в плазме крови.

2S0

1 2 3 4 . 5

Рис. 9. Концентрация транскортнна (мг/л) в плазме крови. 1 — здоровые; 2 — больные гипертонической болезнью н ншемической болезнью сердца, без признаков недостаточности кровообращения; 3 — больные ГБ и ИБС с недостаточностью кровообращения 1 стадии; 4 — больные ГБ и ИБС с недостаточностью кровообращения II А стадии: 5 — больные ГБ и ИБС с недостаточностью кровообращения II Б - III стадии.0 - различия достоверны по отношению к здоровым.

Следует, однако, отметить, что снижение уровня КСГ в крови (в 1,4 раза) не соответствует уменьшению связывающей емкости белка (в 2,6-2,8 раза).

Таким образом, значительное падение связывающей емкости транскортнна при развитии недостаточности кровообращения обусловлено, наряду с изменением сорбционных и некоторых других физико-химических свойств кортпко-стероидсвязывающего глобулина, снижением концентрации белка в плазме крови.

При изучении биосинтеза транскортина срезами печени in vitro было установлено, что содержание ,4С-иммунореактивного КСГ, синтезируемого в печени 13-недельных оперированных крыс, заметно уменьшено по сравнению с контролем (рис. 10).

Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод о том. что .пительпое воздействие стресса связано не только с нарушением кортикостеро-ндного гомеостаза. по и вызывает нарушение взаимодействия трапскоргнна с глюкокоршкошачп. Длительный стресс в конечном more приводит к снижению биосинтеза транскортина в печени и концентрации его в плазме кропи, обусловливает изменение физико-химических, структурно-функциональных н сорбционных свойств самого коршкостероидсвязывающего глобулина. Проведенное исслечовянтте открывает возможность использования показателей стероид-белковых взаимодействий для характеристики адаптационно-приспособительных систем организма при стрессорных воздействиях, а также в диагностических целях при некоторых сердечно-сосудистых заболеваниях, сопровождающихся недостаточностью кровообращения.

хЮ3

Рис. 10. Содержание иммунореак— пюного "С-транскоркша в печени крыс (электрофорез в ПЛАТ в присутствии [% DDS-Na: а- интаклные животные, б - животные с не тоста— точностью кровообращения (13 недель после операции).

3. Моделирование недостаточности кровообращения у беременных крыс и

исследование параметров связывания тшнекортпном глюкокортпконлов. Сте-

роид-белковые взаимодействия у беременных крыс с недостаточностью кровооб-

ращения на фоне инкорпорированных радионуклидов '311 (100 кБк/кг) — " 14 (1 (S

кБк/кг).

Мы попытались оиеппть по гормон-белковым взаимодействиям в крови

развитие этих адаптационных механизмов у беременных крыс на S педеле опыта, т.е. с признаками скрытой недостаточности кровообращения.

Судя по динамике изменения резервирующей емкости транскортина в

процессе развития КГС, первые ее симптомы у беременных крыс начинают проявляться уже в стадии резистентности или в начале истощения, когда стероидо-

8 , -- д 6 - я I

4 - -1 -

1 3 5 7 9 11 13 15 Сегменты геля

генная реакция идет на убыль (рпе. 11-13). Следовательно, существует возможность использования подобных данных в качестве информационных признаков дефицита кровообращения у беременных и роженнин. Поскольку родовой акт представляет собой мощный стресс для организма женщины, а усиленная мышечная работа является функциональной нагрузкой на сердце, то у рожешшц, даже со скрытой формой дефицита насосной функции миокарда, может развиваться декомпенсация сердечно-сосудочной деятельности. Поэтому, представляет большой интерес использовать нагрузочную пробу в опытах на беременных крысах с коарктацней аорты для выявления функциональных ресурсов системы гормонообразования в надпочечниках п биосинтеза транскортина в печени и в конечном итоге для представления о возможной стероидной реакции н выявления латентной недостаточности кровообращения.

50 -40

за -20 10 -е

I I Г

а I а > ъ I

2 3 4 5 Процент связывания

Ка к-Ю'м

1 2 3 4 5

п-о М/'мг - белка

1 — Контроль 2 — 2 ■ нед. 3—4 нед. 4 — 6■нед.

з — Покой

х - достоверно к покою; хх ххх - достоверно vi контролю в покое; достоверно при P<'J

3 — В ■ над . ь — Нагрузка достоверно к контролю с ^нагр^зкой;

Рис. 11. Параметры связывания 3Н-пшрокортизона плазмой крови крыс при физической нагрузке в зависимости от срока после коаркташш аорты на 7 сутки беременности.

40 SO -■ 20 -1В --

Т х

I Т

2 ,0

25--2Э

I ■ I. I I I:

ШШи

12 3 4 Процент связывание

2 3 4 5 Ка-х- 10?м-1

5 i- 0

DD. ■ lililll

1 2 3 4 5' п-р•М/мг- белка

1 —Контроль 2 —2-нед. за — Покой

■4-нед. 4 — 6■нэд.

5 — 8 нед. Ь —Нагрузка

х - достоверно к покою; хх - достоверно к контролю с нагриз-кой; ххх - достоверно к контролю б покое; достоверно при Р<0,Р5

Рис. 12. Параметры связывания 3Н-гидрокортизона плазмой крови крыс при физической нагрузке в зависимости от срока после коаркташш аорты на 14 сутки беременности.

Эффективность пробы оценивали по амплитуде и воспроизводимости секреторного ответа надпочечников на равнодозированную физическую нагрузку у коп грольных животных.

Таким образом, из приведенных экспериментальных данных следует, что уже в начале стадии нсюшения в механизмах адаптации выявляются довольно ктубокпе патологические сдвиги, коюрые при определенных условиях (физическое перенапряжение, болевой аресе) могут привести к весьма опасным осложнениям как для матери, так и для плода.

Известно, что уровень стеропд-бедковою взаимодействия при данной концентрации гормона и прочих равных условиях определяется количеством связывающих мест на белке (п) и сродством стероида к белку (Ка). Расчет этих величин показал, чю снижение связывания нирокортизонп у беременных с пороком сердиа при начальных признаках недостаточности кровообращения происходит за счет уменьшения сродства гормонов к белку и в меньшей степени за счет уменьшения количества мест на транскортине.

40 |

; -

i ,с-1

l I

:î

I-"- . 2 f

П f

К :>< f

I t

ь - + 1...:

riDCUQHT СЕЯ-ЫВ5НПЯ пТРОЛЬ 2 '

Кг x I О 11 ■■ — - i ней . 4

i ! i !

Ч-р 1Г

I i \ ..

« — I Cl-.oil X - Д'-n..TCE.fpMO i . HQhCW ; XX - Д XXX - r.CCTOF.riPHC :- КОНтрО-ПЮ F nohua; до

- 6 пая . — S чоа .

t — H.rjrpyiK.5

ТОБ5ГНО к i-.'j-11 ;__1t нагрей: с и;

otiapi- ' г,~

при р<а,сЕ

Pire. 13 Параметры связывания 3Н-гнлрокорт1поп.1 плазмой крови крыс при физической ширчзке îî зависимосш oi срока после коаркташш aopibi на 21 сутки беременности.

Беременность, несмотря на всю "физиолошчность" этого состояния, всегда предъявляет повышенные требования к материнскому организму. Если же она протекает на фоне какой-либо патологии или воздействия вредных факторов внешней и внутренней среды, то это ведет к дополнительной мобилизации!! систем. ответственных за поддержание гомеостаза.

Памп была смоделирована ситуация, когда беременность у крыс развивалась на фоне дефицита насосной функции сердца после коарктации аорты. Кроме того часть животных в этих условиях подвергалась внутреннему облучению Ш1 в сочетании с 137Cs.

i _

чеп .

У опытных крыс наблюдается снижение процента связывания экзогенного 3Н-гидрокортизона белками плазмы крови за счет уменьшения его сродства к транскортану (рис. 14).

Для выявления скрытых форм недостаточности функции органа и его наличных резервов обычно используется дозированная физическая нагрузка. Поскольку усиленная мышечная работа является одновременно функциональной нагрузкой на сердце, системы гормонообразования в надпочечниках (егрессн— рующий фактор) и биосинтеза транскортина в печени (через включение гоместа-тнческих механизмов), а также непосредственно — через усиление гипоксическо-го фона, этот прием мы использовали для оценки функциональных ресурсов надпочечников.

7 -I

Процент п-пМ/мг белка Ка«10'М

связывания

Рис. 14. Параметры связывания 3Н-гндрокортизона плазмой крови интактных крыс при физической нагрузке через 8 недель после коарктации аорты на фоне введения Ш1+137С5

Группы: 1 — контроль без нагрузки, 2 — контроль 5 мин нагрузка, 3 — контроль без нагрузки + 13']+1ЭТС8, 4 - контроль 5 мин нагрузки + ,3Ч+'37Сз, 5 -оперированные животные без нагрузки, 6 — оперированные животные 5 мин нагрузки, 7 — оперированные животные без нагрузки + 131В-13'С5,8 — оперированные животные 5 мин нагрузки + ш1+П7Ся

*- достоверно к контролю; ** -достоверно к группе животных с нагрузкой + изотопы; *** - достоверно к группе животных без 1311+137СЧ; **** - достоверно к группе животных без нагрузки

Снижение связывающей способности транскортина при еще сохраняющейся возможности воспроизведения стеропдогенной реакции в ответ на раздражение обычно рассматривается как срыв приспособительного процесса (А.И. Бобков, 1973). Отсутствие функционального ответа надпочечников в аналогич-

ныхусловиях (т.е. при резком уменьшении связывающей способности транскор-тина) следует трактовать как результат полной несостоятельности адаптации.

Внутреннее облучение !31[ с 1ГСз беременных животных привело к снижению функциональной активности коры надпочечников. В покое наблюдалось падение уровня П-ОКС по сравнению с контролем, а при физической шнрузке не было ответа па стрессорный фактор. На рис. 15 виден при эюм и самый низкий процент связывающей способности плазмы крови.

Рис. 15. Параметры связывания Н-тидрокоргизона птазмоп беременных крыс (21 лень» при физической нагрузке через 8 недель после коарктаппп аорты на фойе введения 1 'Cs. Обозначения как на рис. 14.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том. ч т беременность, протекающая на фоне дефипша насосной функции сердца и. соответственно. недостаточности кровообращения, сопровождается ушегенпем гормоно-образоваiига и надпочечниках. Это является закономерным результатом предшествующего хронического функционального перераздражения коркового слоя в динамике нарасшния гнпоксическпх явлений (11.11. Пвшша. Э.И. Ивашкевич. 197 ! ) при развитии и усугублении дефицита насосной функции сердца после ко-арктащш аорты у крыс (Ф.З. Меерсон, 1965).

Применяя дополнительное стессирующее воздействие — внутреннее облу-ченне инкорпорированными радионуклидами I с Cs мы попытались оиепшь наличные функциональные резервы ciepoiuuiенеза в тшх условиях. Отсутствие стероплогенноп реакции в ответ на физическую нагрузку в данных условиях может расцениваться как полная несосотояцельность алапташш, развившейся под действием внутреннего облучения на фоне предшествовавшей недостаточности кровообрашен ия.

4. Биохимическая характеристика "радиационного стресса" вызываемого инкорпорированными радионуклидами (13'1 и 137Cs)

50 ■

Процент связывания

n-п-р М/'мг беяка

Ка МО «М-1

Ионизирующая радиация, воздействуя на организм, обладает уникальной способностью влиять на все процессы жизнедеятельности живой системы, инициировать во всем облученном объеме тканей свободнорадпкальные реакции окисления липидов. Определяя радиационное поражение организма, как один из видов стресса, при анализе литературных данных и результатов собственных исследований авторы выделяют первичные этапы стресс-реакции, вычленяют активацию ПОЛ как первичное звено стресса и рассматривают последующую ги-персекрепию катехоламннов и глюкокортикоидов как реакцию организма с отрицательной обратной связью, напрвленную на противодействие окислительному сдвигу, вызванному стрессором. Сложный комплекс изменений, развивающийся в организме в ответ на воздействие ионизирующего ихтучения, во многом определяется и функциональным состоянием гипоталамо-гапофизарно-надпочечниковой системы (А.С. Черкасова и др. 1969). Степень изменений системы ПОЛ, в том числе и во времени, зависит не только от силы и природы повреждающего фактора, но и от устойчивости организма к стрессу (от вида, возраста, пола ц т.д.) (Н.В. Гуляева, 1989).

Продолжительное напряжение компенсаторно-восстановительных процессов. характерное для облученного организма и требующее дополнительных резервов, может привести к срыву функциональной деятельности нейроэндок-ринной системы, изменению гормонального гомеостаза в сторону преобладания прооксидантных продуктов и систем (В.И. Дедов. 1984). Изменение скорости органного кровотока, которое отмечают на начальных стадиях стресса (Н.В. Ое-торои1оз е1 а1., 1980; М.П. Горизонтова, 1986), также вызывает усиление процесса ПОЛ. Отмечают также, что заболевания у больных пз загрязненных районов принимают более тяжелый и затяжной характер, труднее поддаются лечению (С.А. Ляликов, 1996).

Инкорпорированный 13?С5 в дозе 16 кБк/кг в день приводит к накоплению первичных продуктов ПОЛ - диеновых коньюгатов в печенн, сердце, мышцах и надпочечниках (табл. 2). Не отмечено изменении в почках и тимусе. Содержание малонового диальдегида достоверно увеличивается в мышцах (табл. 3). Вместе с тем, следует, отметить, что количество флуоресцирующих продуктов ПОЛ в исследуемых тканях не увеличено (табл. 4), а в сердце и селезенке даже несколько снижено.

Сочетанное введение в организм животного 137С$ 16 кБк/кг в день и Ш1 — 100 кБк вызывает аналогичные изменения в содержании продуктов ПОЛ. Увеличивается количество диеновых коньюгатов в печени, сердце, селезенке, мышце и надпочечниках.

Таблица 2

Содержание диеновых коньюгатов (нМ) в различных тканях крыс через 6 мес. после инкорпорации радионуклидов шСз и ШТ

Ткань

Печень Почка

Серди е Селезенка Мышца Тимус

Надпочечники

Контроль

147,7 = 8.7 ¿2,7=8,1 36.6±2.6 38,0=2,8 39.0=3.2 444,1=33.1 337,8+15,7

Сл

О и ы г ы

ш,

386.7± 105,4 47,0=15,8 53.1 =2.5' 66.2±14,0* 176 6=29.""' 523.8=53.6 528,6+73,9

- достоверно по отношению I:контролю (Р<0.С"

298.4x45.8" 67.5з:10,6

52.2x2.7* 71,6=14,4" I 18.6=13.-"" 591,7=62.0 '562,7+47,2*

224,2=14,0* 49.8x5.8 47."=6.5 45,9x7,0 31.0=8.9 559,1=99,0 504.5±11,3*

Таблица 3

Содержание малонового диальдегнда (м М) в различных тканях крыс через 6 мес. после инкорпорации радионуклидов Ь'С> и _

Ткань

Контроль

Опыты

Сэ

7Сз- 1311

Печень

Почка Сердце Селезенка Мышца

2.65=0,1

ТД 7x0.32 21.87 - ! .38 12.25-0.S3 1.56=0.27

2.84=0.22 5.97=0.88 16.01=2.3! 10.31=0.53 3.65=0.37*

2 89±0 23 7.69=0.38 1 9.47=1.88 i4.59_l.24 2.73=0.52

3,60=0.45 ".58=0.81 19.16=1."4 10.50=1.69 2,08=0.25

— достоверно но ошошению к контролю (Р<0.05)

Таблица■

Содержание флуоресцентных продуктов лерекненого окисления липидов (усл. ед.) в различных тканях крыс через 6 мес. после инкорпорации радионуклидов "7Сь и Ш1

Ткань

Кон трол ь

(3 п ы т ы

137Сз 13Ч ,37Сз+ |311

Печень 849,8+26,9 781,9+27,8 728,1+17,9* 798,3+38,0

Почка 15.7 -0.5 16.7x0.6 15.4=0.6

Сердце 183,92:9.4 149,6+5.7* 158.4x8.4* 194.6±5.2

Селезенка 292.2=6.9 180,9=4.1* 18'7.8x5.7 326,0 л 9.1

Мышца 319,3x2,7- 313,5x15,2 28 9,8±2,9* 362,8x24,4*

Тимус 139,3+1,5 147,6±4,5 149,2+4,5 143,1=6,8

Надпочечники 76,0±3,7 75,0+2,9 72.6±1,8 93,8±4,0*

- достоверно по отношению к контролю (Р<0,05)

Совместное введение крысам Ш1 и "'Се неоднозначно оказывало влияние на процессы ПОЛ в тканях печени и почки. Если в печени наблюдалось достоверное удлинение периода индукции на 51,4%, то в ткани почкн отмечалось повышение уровня перекисей липндов и способности их к. переокислению (БВ и МВ повышены на 47,5 и 73,6% соответственно). Скорость переокнслення лппи-дов в почке возросла на 143,2%.

Внутреннее облучение Ш1 (100кБк/кг) и 137 С £ (16 кБк/кг) через 3 месяца после воздействия привело: а) к снижению активности ЛДГ в печени, мозгу, скелетной п сердечной мышцах и повышению в почках (табл. 5); б) к снижению активности СДГ в мозгу, скелетной и сердечной мышцах и повышению в печени п почках (рис. 16); в) к снижению активности МДГ в скелетной и сердечной мышцах и повышению в печени и мозгу (рис. 17); г) к снижению креатннкиназнон активности в сердечной мышце и сыворотке крови и повышению в мозгу.

200 150

V 100

50 0

| □ Контроль | ', Ш Опыт .

8 * *

ш ш

печень мозг ск.м.

§р 'Ф

§ _

серд.м. почка

Рис. 16. Активность СДГвтканях крыс (нмоль ЯК мпн 'мг 'белка) через 3 месяца после инкорпорации радионуклидов 1ГСз и ш1, * - различия достоверны

150

! у 100 "

50 0

I □ Контроль! Опыт !

печень мозг ск.м. серд.м. почка

Рис. 17. Активность МДГ в тканях крыс (мкмоль НАДНмин'мг"1 белка), через 3 месяца после инкорпорации радионуклидов ,37Сх и ш1, * - различия достоверны

Таблица 5

Активность ЛДГ в тканях крыс через 3 месяца после инкорпорации раднонукли-

лов '-'С^н '-''I (мкмоль НАДН-мин"'-мг"' белка)

Ткани Контроль Опыт [_Р к К

Мпп М=пт

печень 16,46=0.64 7,91 :0,37 <0,001

мозг 7,9410.15 2.52=0.02 <0.001

скелешая мышна 53,20-1.50 25.89=1.57 <0.001

сердечная мт.тгапа 43.76±1.25 23.68=4.34 <0.001

почки 7.02=0.26 8.23=0.31 <0.01

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из главных звеньев в системе поддержания стероидного гомеосгаза являются белки крови, особенно транскортин. От буферной емкости КСБ зави-С1п уровень биологически активных форм гормонов в крови и, следовательно, напряженность адаптивного процесса в целом при стресс-синдроме.

Таким образом, проведенные исследования позволяют заключить, что транскортин играет важную роль в проявлении функциональной активности ад-реналоиых желе $ на ра зличных стадиях стресса. Увеличение концен трации бел-ковосвязанпыч форм глюкокортикоилов в фазу усюйчпвой гиперфункции коры надпочечников при стрессе защищаем органтм от избыточного поступления свобо 1ных форм гормонов в к.1С1ку и ее повреждения. Развитие перенапряжения адапташюшю-прпсиособптельных систем организма в случае продолжающегося действия стресс-фактора характеризуется снижением сорбшюиной способности грапекоршпа за счет уменьшения концентрации связывающих мест па белке, что является, по-видимому, одним из проявлений общею адаптационного синдрома, направленного на поддержание гомеостатического равновесия в организме. Развитие патологического состояния (недостаточности кровообращения) сопровождается нарушением биосинтеза белка, снижением его концентрации в плазме крови, а также изменением сорбционных и некоторых физико-химических свойств кортпкостероидсвязывающего глобулина.

У больных гипертонической болезнью (ГБ) и ишемнческоп болезнью сердца ( ИБС?) и здоровых лиц определяли в крови содержание общих, белковое-вязанных н свободных окснкортикостероидов 11-ОКС, их связывающую способность, константу ассоциации и концентрацию связывающих мест на транс-кортине. Одновременно исследовали широкий спектр гемодннамических показателе й.

Анализ полученных данных позволил выделить два типа изменений в глю-кокортнкоидном спектре: 1 — увеличение содержан1ш свободных и общих 11-

ОКС при неизмененном связывании гормонов белками сыворотки кровн; 2 — отсутствие изменений уровня свободных и общих 11 -ОКС при сниженном уровне стероид-белкового взаимодействия in vitro, за счет снижения сродства транс-кортнна к кортикостероидам. Первый тип изменений выявлен у больных ГБ и ИБС без признаков недостаточности кровообращения (стадия Н0), второй — у больных с начальной стадиен (Н,) недостаточности кровообращения, что является принципиально новым подходом, особенно в том случае, когда по данным гемодинамики трудно решить вопрос о стадии недостаточности кровообращения (Н0 пли Н^.

Разработанный и предлагаемый нами метод может применяться во всех случаях, когда необходимо получить информацию об адекватности приспособления организма, т.е. для оценки функционального резерва надпочечников и системы кортпкостероидного гомеостаза. Необходимость такого подхода связана с выбором оптимальной физической нагрузки при поликлинической реабилитации кардиологических больных в постннфарктном периоде.

Во время беременности у крыс с экспериментальной недостаточностью кровообращения (начало заключительной стадии компенсаторной гипертрофии сердца) наступает сшгжение уровня 11-ОКС, константы ассоциации и количества связанных мест на транскортине. К концу беременности у животных на фоне сниженного связывания гормонов транскортином надпочечники не способны адекватно отвечать на дополнительный стресс (дозированная физическая нагрузка), что проявляется в снижении уровня 11-ОКС. При дополнительном стрессирующем воздействии — внутреннем облучении инкорпорированными радионуклидами "'I (ЮОкБк/кг) и ,37Cs (16 кБк/кг) через 3 месяца выявлена полная несостоятельность адаптации.

Таким образом, внутреннее сочетанное облучение беременных животных с экспериментальной недостаточностью кровообращения оказывает дестабилизирующее влияние на состояние стероид-белковых взаимодействий в кровн, что приводит к ослаблению компенсаторно-приспособительных механизмов адаптации и нарушению функционального состояния сердечно-сосудистой системы.

Внутреннее облучение ,311 (ЮОкБк/кг) и 137Cs (16 кБк/кг) через 3 месяца после воздействия привело: а) к снижению активности ЛДГ в печени, мозгу, скелетной и сердечной мышцах и повышению в почках; б) к снижению активности СДГ в мозгу, скелетной и сердечной мышцах и повышению в печени и почках; в) к снижению активности МДГ в скелетной и сердечной мышцах и повышению в печени и мозгу; г) к снижению креатинкиназнон актвностн в сердечной мышце и сыворотке крови и повышению в мозгу.

Изменения, обнаруженные при радиационном стрессе у животных через 3 месяца после инкорпорирования Ш1 и 137Cs вызывают изменения в ферментативных системах организма, что может быть использовано для диагностики скрытых

радиационных поражений у населения, проживающего в загрязненных районах Беларуси. Последнее представляется важным для опенки последствий, связанных с влиянием сложившейся радиационной обстановки в резулыате катастрофы на ЧАЭС п пониманием .механизмов этого воздействия на живой организм.

ВЫВОДЫ

1. Установлена строгая синхронизация фаз динамики развития компенсаторной гипертрофии ссрдиа и сопутствующего адаптационного синдрома, чго определяет принципиальную возможность использования количественных параметров одного процесса для характеристики другого.

2. При увеличении нагрузки на надпочечники (ГБ (П„) —> ГБ г ИБС (Нл —► ГБтИБС (Н,) -> ГБтИБС (Нм) -н> ГБ^ИБС (Н2Б)) у больных наблюдается специфическая динамика стерондогенной реакции, присущая процессу компенсаторной гипертрофии сердца: повышение уровня 11-ОКС при Н0 и снижение сте-ропдбелкового взаимодействия при Н(. Выявление скрытой недостаточности кровообращения после велооргометрпческой пробы с помощью предложенных тестов (отсутствие реакции надпочечников на нагрузку при снижении стеропд-связывающен способности транскоргана) в 82% случаев совпадает с диагностикой Н, по изменению гемодинампчеекпх показателей. В случаях, когда исполь-здвание традиционных методов фмшшоиальной диагностики не лает возможности однозначно определить наличие или отсутствие недостаточности кровообращения. применение стероидных тестов noMoiaer дифференцировать варианты с Н0 и Н„

3. При развитии патологического состояния у больных гпперто1!ической болезнью и игпемпческоп болезнью сердца, осложненных недостаточностью кровообращения, нарушается ко.мплексооиразованне коршкостероидов с транс-кортнном, (снижается связывающая емкость белка, сродство к глюкокортнкои-лам. а также концентрация траскортпна в плазме крови).

4. Гранскортпн выделенный и очищенный до гомогенного состояния из плазмы кровп крыс с экспериментальной недостаточностью кровообращения, отличается от белка интактных крыс по физико-химическим свойствам, параметрам связывания стероидов. Установлено, что различия в свойствах исследуемых белков обуслоатены изменением конформации молекулы "Тгатоло-тического" транскортппа. Скорость синтеза транскортина срезами печени крыс in vitro снижена при экспериментальной недостаточности кровообращения.

5. Во время беременности у крыс с дефицитом насосной функции сердца (начало заключительной стадии компенсаторной гипертрофии сердца) (начало заключительной стадии компенсаторной гипертрофии сердца) наступает снижение уровня 11-ОКС, константы ассоциации и количества связанных мест на

транскортнне. К концу беременности у животных с недостаточностью крово-бращения на фоне сниженного связывания гормонов транскортином надпочечники не способны адекватно отвечать на дополнительный стресс (дозированная физическая нагрузка), что проявляется в снижении уровня 11-ОКС. При дополнительном стресснрующем воздействии — внутреннем облучении инкорпорированными радионуклидами Ш1 (100кБк/кг) и '"Ся (16 кБк/кг) через 3 месяца выявлена полная несостоятельность адаптации.

6. Внутреннее облучение животных ,37С5 (16 кБк/кг) + 1311 (100 кБк/кг) через 6 месяцев приводит к активации ПОЛ в большинстве тканей организма, однако в исследуемые сроки, антиокспдантная система и механизмы детоксикацни реакшюнноспособных первичных продуктов ПОЛ способны компенсировать развитие процесса, о чем свидетельствует отсутствие изменений в содержании вторичных и конечных продуктов ПОЛ. Концентрацию МДА и С^Н можно использовать как критерий для оценки интенсивности процессов ПОЛ.

7. Инкорпорирование радионуклиды 13'1 (100 кБк/кг) и 137Ся (16 кБк/кг вызывает через 3 месяца снижение активности ЛДГ в печени, мозгу, скелетной и сердечной мышцах, снижение активности СДГ в мозгу, скелетной и сердечной мышцах, снижение активности МДГ в скелетной и сердечной мышцах, отмечается достоверное снижение активности креатинкиназы в сыворотке крови и сердечной мышце и повышение в тканн мозга. При совместном введении ,3|1 и '"Сх через 3 мес после инкорпорирования снижается количество общих липндов, холестерина и общей фракции фосфолипидов печени и скелетной мышце, холестерина и фосфолипидов в почках н плазме кровп, отмечается снижение эффективности фосфорилирования на сукцпнате и 2-оксоглутарате митохондриями печени.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Галиикий Э.А., Буткевич Н.Д., Русин Н.И., Виноградов В.В., Глюкокоргнко-ндный спектр н адаптационная реакция организма ирп хронической пшеми-ческой болезни сердца. //' Здравоохранение Белоруссии.- 19S3.- N2.- С. 22-24.

2. Виноградов В.В., Галицкий Э.А., Надольник Л.П., Русин II.И., Дорошкевич В.П., Ильина И.И., Зайцев В.И. Стероид-белковые взаимодействия в крови и ранняя диагностика недостаточности кровообращения при сердечнососудистых заболеваниях,- Минск, МЗ БССР. 19S3. - 1-8 е.- /Информ. письмо/.

3. Виноградов В.В., Галиикий Э.А., Надольник Л.И., Русин Н.И., Дорошкевич

B.П., Ильина И.И., Зайцев В.II. Диашостика латентной недостаточности кровообращения при сердечно-сосудистых заболеваниях: Метод, рекомендации,- Минск, МЗ БССР, 1983,- 15 с.

4. Виноградов В.В., Галицкпй Э.А., Надольник Л.И, Ильина И.И., Русин H.H. Комплексное применение биохимических и инструментальных методов для диагностики ранней стадии недостаточности кровообращения // Тез. докл. конф. "О внедрении научн. достижен. сотр. ГГМИ в практику здравоохр. Гродненской области".- Гродно, 1983.- С. 8.

5. Виноградов В.В., Галиикий Э.А., Надольник Л.И.. Белуга В.Б..Стрултло

C.А., Дорошкевич В.П.. Переверзева H.A. Биохимические критерии дефицита кровообращения: Метод, рекомен танин.- М.. МГАСССР.- 1984.- 1-35 с.

6. Галиикий Э.А., Переверзева H.A.. Виноградов В.В., Надольник Л.И.. Лион Е.К.. Белуга В.Б. Автоматизация расчета Скчтчардовского анализа,- Деп. в ВИНИТИ, 1985/9-10/N7137-B.- 19 с.

7. Галин к и и Э.А., Переверзева H.A.. Надольник Л.П.. Анон Е.К.. Бели а В.Б., Виноградов В.В. Диагностика недостаточности кровообращения по стероидному спектру крови и показателям гемодинамики на ЭВМ // Мед. реферат, журн,- 1986,- N4, Р 22.767,- 1 -20 с.

8. Белута В.Б., Галицкий Э.А., Надольник Л.Н. Функция надпочечников > здоровых беременных и родильниц с недостаточностью кровообращения // Тез. докл. конф. ГГМИ "Достижения науки в практику".- Гродно.- 1986.- С. 86.

9. Beluga V.B.. Galitskv Е., Nadolnik L.N.. Vinogradov V.Y. Corticosteroid binding to rat globulin in experimental circulatory insufficiency // First International Symposium on Binding of Proteins: Steroid Hormones, Lyon (France), April 28-30. 1986,- P. 33.

10. Галицкий Э.А., Белуга В.Б., Надольник Л.И. Некоторые показатели гормон-белковых взаимодействий у беременных, рожениц и родильниц // Тез. докл. 8-й научн. практ. конференции.- Гродно, 1986.- С. 86.

11. Nadolnik L.I., Beluga V.B., Galitsky E., Vinogradov V.V. Corticosteroid-bindiiig globulin (CBG) in circulatory insufficiency // International congress "Steroid protein interactions. Basic and clinical aspect".- Torino (Italy), September 29-30,

1987,-P. 127.

12. Надольник Л.И., Галицкий Э.А., Белуга В.Б., Буткевнч Н.Б., Водоевич В.П., Виноградов В.В. Функциональная активность надпочечников н гормон-белковых взаимодействий у больных гипертонической болезнью с осложненным течением // Кардиология.- 1988.- N3.-T.28.- С. 61-63.

13. Надолышк Л.И., Галицкий Э.А., Белуга В.Б., Виноградов В.В. Выделение и сравнительная характеристика транскортина крысы в норме и при экспериментальной недостаточности кровообращения // Вопросы мед. химии.-

1988,-N5,-С. 25-30.

14. Виноградов В.В., Галицкий Э.А., Белуга В.Б., Надольник Л.И. Ранняя диагностика недостаточности кровообращения по данным глюкокортикоидного спектра крови // Здравоохранение Белоруссии,- 1989.- N7,- С. 15-18.

15. Белуга В.Б., Галицкий Э.А. Особенности родов и развития новорожденных у женщин с приобретенными пороками сердца // Тез. докл. пленума акушер-гинекологов Литвы,- Вильнюс, 1990,- С. 24.

16. Виноградов В.В., Галицкий Э.А., Надольник Л.И., Белуга В.Б. Динамика П-окснкортнкостероидов и связывающая способность транскортина в различные сроки после коарктацпи брюшной аорты у крыс // Депонирована в ВИНИТИ N 5Р55-В от 14.09.90,- С. 1-12.

17. Галицкий Э.А. Депонирование радиоактивных элементов // Здоровье, Бел-СЭ, 1990,- С. 169-170.

18. Дорошкевич H.A., Галицкий Э.А., Анцулевич С.Н. Активность процессов пе-рекненого окисления липидов в коре надпочечников крыс при длительном введении радиоизотопов //Тез. докл. 4-ой союзной конферен. "Эндокринная система и вредные факторы внешней среды", г. Иваново, 1991.- С. 68.

19. Дорошкевич H.A., Галицкий ЭА., Анцулевич С.Н. Влияние длительного воздействия инкорпорированных радионуклидов на процессы перекисного окисления липидов у животных // Здравоохранение Белоруссии. Мин. 1991. Деп. в ВИНИТИ 19.04.91 N1672-B91.- С. 16.

20. Белуга В.Б., Галицкий Э.А., Виноградов В.В. Глюкокортикоидный спектр крови и адаптационная реакция организма беременных с приобретенными пороками сердца// Здравоохранение Белоруссии.- 1991.- N3.- С. 15.

21. Селевич М.И., Галицкий Э.А., Абакумов Г.З. Действие облучения на процессы свободнорадикального окисления липидов в тканях крыс // Изв. АН БССР, сер. биология, 1991.- С. 7.

22. Галицкий Э.А., Селевич М.И., Абакумов Г.З. Действие радиоактивных веществ на процессы перекисного окисления липидов в тканях животных //

Тез. докл. Всесоюз. конф. "Ралпобиол. последствий аварии на ЧАЭС". Мн., 1991,-С. 23.

23. Селевич М.И., Галникни Э.А., Абакумов Г.З. Содержание липидов в тканях крыс при внутреннем облучении радиоактивными изотопами цезия и йода // Тез. докл. Всесоюз. конф. "Радиобиол."последствия аварии на ЧЛЭС". Мн.. 199!.- С. 125.

24. Галипкпй Э.А., Дорошкевич H.A., Апцулештч С.Н., Казаков И.В., Куц Ф.И., Белоусов О.Л. Тканевая специфичность активации процессов нерекпсного окисления лигашов при воздействии инкорпорированных радионуклидов //

Тез. докл. Всесоюз. конф. "Радиобиол. последствия аварии на ЧЛЭС". Мн.. ¡991.-С. 24.

25. Селевич Т.А.. Галиикий Э.А., Абакумов Г.Э.. Козаков И.В... Куц Ф.И.. Белоусов О.Л. Уровень липидов в тканях крыс, содержавшихся в районах радиоактивного загрязнения//Изв. АН БССР, сер. биология, 1991.- С. 51.

26. Галиикий Э.А., Селевич М.И. Влияние внутреннего облучения на содержание липидов в различных тканях крыс // Изв. АН БССР, сер. биология, 1992.-N3-4.-С. 43-46.

27. Галпцкий Э.А., Абакумов Г.З., Селевич М.И. Действие облучения на процессы свободнорадикального окисления липидов в тканях крыс // Изв. АН БССР. сер. биология. 1992,- XI.- С. 119.

2S. Абакумов Г.З., Галиикий Э.А., Селевич M.I1., Перекисное окисление липидов (ПОЛ) в плазме крови людей проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами // Маг. докладов Радиобиологического свезла. Киев. ¡993,-С. 3.

29. Маидрик К.А., Галнцкнй Э.А., Беньковский Г.II., Воропай U.A. Активность окислительных ферментов в тканях крыс при внутреннем облучении ,5'| и 13 C's // Мат. докладов Радиобиологического съезда, Киев, 1993.- С. 642.

30. Галишащ Э.А., Заводник И.Б., Мандрик К.А., Петушок Н.Э. Эффекты малых дот радиации на некоторые показатели процессов перекпеного окисления в тканях крыс // Мат. докладов Радиобиологического сьезла, Киев, 1993,- С. 207.

31. Селевич М.И., Галиикий Э.А., Абакумов Г.З. Влияние внутреннего облучения па содержание отдельных липидов в различных тканях крьтс // Мат. докладов Радиобиологического сьезда, Киев. 1993.- С. 898-899.

32. Галиикий Э.А. Глюкокортикоилная функция налпочечников при недостаточности кровообращения на фоне введения радиоизотопов // Мат. между -нар. науч. конференции ГГМИ, Гродно, 1993.- С. 168-169.

33. Галиикий Э.А., Мандрик К.А., Бакун М.И., Кара Л.Р. Влияние внутреннего облучения Ш1 и 137Cs на активность креатинкиназы в тканях крыс // Мат. ме-ждунар. науч. конференции ГГМИ, Гродно, 1993.-С. 192-193.

34. Galitsky E.A. Study of parameters of steroid-protein interaction in the blood of rat in circulatory insufficiency combined with radioisotope administration (Cs-137 and 1-131) // Междунар. бел.-японск. симпозиум "Acute and Late Conseguences of Nuclear Catastrophes: Hiroshima-Nagasaki and Chernobyl" Minsk, Oct. 3-5, 1994.-P. 107.

35. Галицкпй Э.А., Мандрнк K.A., Забродская C.B., Активность креатинкиназы в тканях крыс после внутреннего облучения 1!iI н 137Cs н введения оксодигндро-тпохрома //' Междунар. симпозиум "Витамины и здоровье населения Беларуси и смежных регионов", Гродно, 1995.- С. 204.

36. Galitsky E.A. Application of parameters of steroid-protein interaction in the blood to reveal latent circutory insufficiency // IV International Conference "Application of semiconductor detectors in nuclear physical problems" Jurmala, 1995.- P. 115.

37. Galitsky E.A., Larin F.S. Glucocorticoid function of rat adrenal glands in circulatory insufficiency combined with radioisotope administration // IV International Conference "Application of semiconductor detectors in nuclear physical problems" Jurmala, 1995.- P. 116.

38. Мандрик K.A., Галицкин Э.А., Метаболический "след" в организме крыс после внутреннего облучения Ш1 и 137Cs // 1-я междунар. науч. практ. конференция "Экологические проблемы Балтийского гидрорегиона республики Беларусь" г.Брест, 1996,- С. 32-33.

39. Галиикпй Э.А., Петушок Н.Э., Заводник И.Б. Уровень малонового диальде-гида и восстановленного глутатиона в тканях крыс после введения 137Cs и Ш1 // Известия Академии наук Беларуси, серия биол. наук, 1996,- №4.- С. 84-86.

Информация о работе

Галицкий, Эдуард Алексеевич
доктора биологических наук
Москва, 1997
ВАК 03.00.04

Автореферат

Похожие работы