Антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных поведенческих реакций

Умрюхин, Алексей Евгеньевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных поведенческих реакций
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных поведенческих реакций"

На правах рукописи

УМРЮХИН Алексей Евгеньевич

АНТИТЕЛА К НЕЙРОМЕДИАТОРАМ В МЕХАНИЗМАХ СТРЕССОРНЫХ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

03.03.01 - физиология

г о::::;! тз

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 2013

С05061975

005061975

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии лечебного факультета Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации и в лаборатории системных механизмов эмоционального стресса Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт нормальной физиологии имени П.К. Анохина» Российской академии медицинских наук

Научный консультант:

академик РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Судаков Константин Викторович

Официальные оппоненты:

Анохин Константин Владимирович - член-корреспондент РАН, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор, руководитель отдела нейронаук, НБИКС-Центр, НИЦ "Курчатовский институт"

Морозов Сергей Георгиевич - член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией нейроиммунопатологии, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно исследовательский институт общей патологии и патофизиологии» РАМН

Данилова Раиса Александровна - доктор биологических наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории физиологии сенсорных систем и управления поведением животных, кафедра высшей нервной деятельности МГУ им. М.В. Ломоносова

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт Высшей Нервной Деятельности и Нейрофизиологии РАН

Защита диссертации состоится «11» сентября 2013 г. в 11 ч. на заседании Диссертационного совета Д.001.008.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина» РАМН по адресу: 125009, г. Москва, ул. Моховая, д. 11, стр. 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт нормальной физиологии имени П.К. Анохина» РАМН

Автореферат разослан «6» июня 2013 г. Ученый секретарь Диссертационного совета

кандидат биологических наук

О.В. Кубряк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Острой медико-социальной проблемой в современных условиях является проблема психоэмоционального стресса. Она вызвана ускорением темпа жизни, увеличением психоэмоциональных нагрузок на людей, ростом и скученностью населения, механизацией производства, монотонней условий труда людей, действием на людей неблагоприятных факторов экологии, военными конфликтами и другими причинами. Возникающие в таких условиях психоэмоциональные перегрузки приводят к развитию значительного числа разнообразных психосоматических заболеваний, таких как депрессии, неврозы, психозы, нарушения сна, сосудистые заболевания мозга, сердечнососудистые заболевания, язвенно-дистрофические поражения желудочно-кишечного тракта, снижение иммунитета, онкологические заболевания, аутоиммунные процессы, ревматические заболевания, нарушения половых функций, гормональные расстройства и др. [Судаков К.В., 1998,2003,2005,2010; Gannon L. et al., 1989; Cohen S. and Williamson G.M., 1991; Cohen S. et al., 1991; Steptoe A., 1991; Cobb J.M. and Steptoe A., 1996; Miller D.B. et al., 2002; Pacak К., et al. 2001; Tsigos С., et al. 2002; Arafah B.M., 2006].

В связи с этим актуальной задачей в расшифровке механизмов таких заболеваний и в разработке методов их лечения является экспериментальное изучение механизмов психоэмоционального стресса и индивидуальной устойчивости к нему.

В соответствии с представлениями научной школы П.К. Анохина - К.В. Судакова психоэмоциональный стресс развивается у человека и животных в «конфликтных ситуациях», в которых субъекты ограничены в возможности удовлетворения жизненно важных биологических или социальных потребностей, т.е. достижения полезных приспособительных результатов [Судаков К.В., 1992,1998]. Избегание конфликтной ситуации и сопровождающие избегание положительные эмоции нивелируют патогенное действие отрицательных эмоций. Напротив, длительная невозможность удовлетворения ведущих потребностей приводит к развитию стойкого напряжения адаптивных механизмов организма и в последующем вызывает нарушения саморегуляции физиологических процессов [Юматов Е.А., 1986, 1987; Roohafza H. et al., 2010; Ehrström S. et al., 2009; Fair P.A., Becker P.R., 2000; Habib K.E. et al., 2001].

П.К., I960; Мясников АЛ., 1965; MacLean Р., 1990; Горизонтов П.Д. с соавт., 1983; Судаков К.В., 1981, 1998]. Среди лимбико-ретикулярных структур головного мозга в механизмах регуляции поведения в условиях психоэмоционального стресса важную роль занимает гиппокамп. Как показывают экспериментальные факты, гиппокампу принадлежит важная роль в процессе отбора и закрепления эмоционально значимых событий, в регуляции двигательной и исследовательской активности, а также в регуляции гипоталамо-гипофизарно-надпочечникового механизма адаптации к стрессогенным воздействиям [Buchanan T.W. et al., 2008; Maier S.F., 2003; Barrett J.E. et al„ 1990].

В условиях однотипных конфликтных ситуаций у разных индивидов обнаруживается различная устойчивость разных функциональных систем гомеостатического уровня к стрессогенным нагрузкам. Это позволяет выделить в условиях однотипных конфликтных ситуаций животных, устойчивых и предрасположенных к срессу по выживанию и нарушению физиологических функций [Судаков К.В., 1998,2005]. Одним из прогностических критериев индивидуальной устойчивости к эмоциональному стрессу служат показатели двигательной и исследовательской активности крыс в тесте открытое поле. Крысы, активные по поведению в тесте открытое поле, проявляют признаки устойчивых, в то время как пассивные по поведению животные - признаки предрасположенных к повреждающему действию конфликтных ситуаций [Юматов Е.А., 1987; Коплик Е.В. с соавт., 1995; Коплик Е.В., 2002].

Эмоциональный стресс вызывает индивидуальные изменения содержания нейромедиаторов в лимбико-ретикулярных структурах мозга у устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу животных [Белова Т.Н., Кветнанский Р., 1981]. Эти изменения лежат в основе пластических перестроек эмоционального возбуждения в условиях конфликтных ситуаций. У устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу животных обнаружены различия в содержании в головном мозге ряда олигопептидов, таких как ß-эндорфин, пептид, вызывающий дельта сон, вещество П и другие [Юматов Е.А., 1986; Федянина Н.Г., 1987]. Это позволяет заключить, что в основе центральных механизмов, определяющих устойчивость к эмоциональному стрессу, лежит специфическая организация молекулярных и нейрохимических свойств нейронов эмоциогенных лимбико-ретикулярных структур - специфическая нейромедиаторная интеграция эмоционального возбуждения [Юматов Е.А., 1986].

В церебральных механизмах эмоционального стресса и индивидуальной устойчивости к нему менее изучено участие веществ иммунной природы. Во

взаимодействиях нейронов и глиальных элементов обнаружено участие иммунных факторов: цитокинов, ростовых факторов, интерферонов и антител [Черешнев В.А. с соавт., 2002; Полетаев А.Б. с соавт., 2002; Пальцев М.А. с соавт., 2010; Кориева Е.А., 1993; Идова Г.В. с соавт., 2001,2006; Чейдо М. А., Идова Г. В., 1998; Девойно Л.В., Ильюченок Р.Ю., 1983; Хаитов P.M., Алексеев Л.П., 2004; Магаева C.B., Морозов С.Г., 2005; Самотруева М.А. с соавт., 2009; Anisman H. et al., 2008; Elenkov I.J., 2008; Dantzer R. et al. 2000; Banks W.A. et al., 1995; Kelley K.W. et al., 2003].

Известно, что иммунная, эндокринная и нервная системы объединены в организме общими регуляторными факторами пептидной и иной природы, общими рецепторными молекулами, общими сигнальными путями и клеточными элементами [Черешнев В.А., 2002; Хаитов P.M., Лесков В.П., 2001; Магаева C.B., Морозов С.Г., 2005; Корнева Е.А. 1993; Акмаев И.Г., 1998; Абрамов В.В., 1991]. Введен новый термин нейроиммунноэндокринной регуляции, основывающийся на представлениях о единстве этих трех искусственно разделенных регуляторных систем организма: нервной, иммунной и эндокринной [Черешнев В.А. с соавт., 2002]. Учитывая долговременный характер развертывания иммунпых реакций, регуляторный спектр влияний иммунных факторов должен охватывать длительные промежутки времени [Черешнев В.А. с соавт., 2002; Магаева C.B., Морозов С.Г., 2005].

Факторы иммунной природы играют роль исполнительных механизмов функциональных систем гомеостатического уровня [Журавлев Б.В., Муртазина Е.П., 1996; Sulin V.Yu. et al., 1999; Муртазина Е.П., Журавлев Б.В., 1994; Калюжный Л.В., Литвинова C.B., 1993; Шерстнев В.В. с соавт., 2002; Котов А.В. с соавт., 2001].

Для изучения роли иммунных факторов в механизмах поведения предложен метод инверсной иммунорегуляции функций мозга [Данилова Р.А., Ашмарин И.П., 1994]. Метод основан на использовании антител в качестве регуляторных биологически активных соединений. При этом происходит активация естественных путей иммунокоррекции функции органов за счет усиленной продукции антител к различным биорегуляторам: нейротрансмиттерам, нейропептидам, нейрогормонам и другим соединениям [Евсеев В.А., 2007]. Образование антител к эндогенным биологически активным соединениям индуцируется путем введения конъюгатов биологически активных соединений с белками. Показано изменение активности ингибитора моноаминооксидазы при иммунизации к данному ферменту. Иммунизация крыс к аминооксидазе плазмы крови изменяет сохранение и воспроизведение памятного следа в тесте «Условно рефлекторного

ч.

пассивного избегания» [Danilova R.A. et al., 1999; Данилова Р.А. с соавт., 2000; Бузинова Е.В. с соавт., 1998; Белопольская М.В. с соавт., 2002].

Показано, что медиаторами нейроиммунных взаимодействий могут выступать антитела к нейромедиаторам [Евсеев В.А., 2007]. В исследованиях [Евсеев В.А. с соавт., 1995, 1996,2001,2002,2003,2005; Захарова И.А., 2009] были продемонстрированы защитные эффекты антител к дофамину и глутамату на моделях болевого и алкогольного абстинентного синдромов. Иммунизация коньюгатом дофамина с бычьим сывороточным альбумином мышей разных линий, приводящая к росту в крови уровня антител к дофамину, сопровождалась изменением уровня дофамина в коре и стрйатуме, повышением активности мозговых дофаминовых рецепторов, а также разнонаправленными изменениями уровня поведенческой активности у мышей линий С57В1/6 и BALB/C. В наших предшествующих опытах было показано, что иммунизация коньюгатом серотонина с БСА способствует развитию стрессорного состояния у крыс, что сопровождается усилением язвообразования и повышением у них массы надпочечников после стрессорного воздействия. В работах В.А. Евсеева с соавторами изучены эффекты иммунизации коньюгатом глутамата с БСА при моделировании у крыс судорожных и болевых расстройств [Евсеев В.А., 2007].

Однако, остается недостаточно изученной роль антител к дофамину и глутамату в механизмах эмоционального стресса и оборонительных поведенческих реакций у крыс с различной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу. Неизвестно влияние аптител к дофамину и глутамату на динамику содержания нейромедиаторов при эмоциональных реакциях в лимбико-ретикулярных структурах головного мозга, из которых важную роль играет гиппокамп.

Цель работы

Выяснение влияния эмоционального стресса на уровень аутоантител к дофамину и глутамату в крови и на стрессорные поведенческие реакции крыс. Исследование стрессорных поведенческих реакций у крыс на фоне иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата с БСА и изменений уровня нейромедиаторов в динамике стрессорных реакций в центральной эмоциогенной структуре головного мозга дорсальном гиппокампе у крыс на фоне иммунизации. Изучение действия блокаторов дофаминовых Д1 и глутаматных NMDA рецепторов на стрессорные поведенческие реакции животных, иммунизированных коньюгатами дофамина и глутамата с БСА.

Задачи исследования

1. Изучить у поведенчески активных и пассивных крыс уровень аутоантител к дофамину и глутамату в крови и определить у них состояние органов маркеров эмоционального стресса через четыре недели после предварительных стрессорных нагрузок.

2. Исследовать поведение активных и пассивных крыс в тестах «Открытое поле» и «Условно-рефлекторное пассивное избегание» через четыре недели после стрессорных нагрузок.

3. Исследовать стрессорные поведенческие реакции у активных и пассивных крыс в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание» после иммунизации животных коньюгатами дофамина и глутамата с БСА.

4. Оценить влияние иммобилизационной стрессорной нагрузки на состояние надпочечников у поведенчески активных и пассивных крыс после иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата с БСА.

5. Исследовать стрессорные поведенческие реакции в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание» у активных и пассивных крыс при внутрибрюшинном введении блокаторов дофаминовых Д1 и глутаматных 1ЧМОА и рецепторов на фоне иммунизации животных коньюгатами дофамина и глутамата с БСА.

6. Методом микродиализа исследовать у поведенчески активных и пассивных крыс содержание дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной стрессорной нагрузки и постстрессорного периода на фоне иммунизации животных коньюгатами дофамина и глутамата с БСА.

Концепция

Стрессорные нагрузки вызывают у поведенчески активных и пассивных крыс повышение уровня аутоантител к нейромедиаторам дофамину и глутамату в крови, при этом у активных и пассивных крыс различно изменяются паттерны поведения в тестах «Условно-рефлекторное пассивное избегание» и «Открытое поле», а также повышается масса надпочечников у активных и тимуса у пассивных животных. Иммунизация коньюгатами дофамина и глутамата с БСА у поведенчески активных и пассивных крыс сопровождается изменением интеграции содержания дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе. Иммунизация коньюгатом глутамата с БСА у поведенчески активных крыс изменяет стрессорные поведенческие реакции в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание» и вызывает снижение уровня кортикосгерона в крови. У поведенчески пассивных крыс после иммунизации коньюгатом

глутамата с БСА меняется действие блокатора глутаматных ИМОА рецепторов на стрессорные поведенческие реакции в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание».

Научная новизна исследования

Результаты проведенного исследования раскрывают новые аспекты участия антител к нейромедиаторам дофамину и глутамату в механизмах стрессорного поведения у крыс с различной устойчивостью к эмоциональным стрессорным нагрузкам. Показано, что после стрессорных воздействий в крови у крыс повышается уровень аутоантител к дофамину и глутамату. При этом выявлено снижение двигательной и исследовательской активности крыс, повышение массы надпочечников у поведенчески активных и тимуса у поведенчески пассивных животных, а также сокращение латентного периода избегания электрокожного воздействия у пассивных крыс при повторном предъявлении теста условно-рефлекторного пассивного избегания.

Изучено изменение поведенческих стрессорных реакций у поведенчески активных и пассивных крыс на фоне возросшего уровня антител к глутамату в крови после иммунизации коньюгатом глутамата с БСА. Показано, что на фоне возросшего уровня антител к глутамату в крови после иммунизации поведенчески активных крыс коньюгатом глутамата с БСА у них сокращается латентный период избегания электрокожного воздействия в тесте условно-рефлекторного пассивного избегания. Выявлено, что при повышенном уровне антител к глутамату после введения коньюгата глутамата с БСА у поведенчески активных крыс после стрессорного воздействия снижаются масса надпочечников и содержание кортикостерона в крови. У поведенчески пассивных животных на фоне возросшего уровня антител к глутамату после введения коньюгата глутамата с БСА внутрибрюшинное введение блокатора глутаматных Ы\ГОА рецепторов сокращает латентный период избегания электрокожного раздражения в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание».

Впервые методом микродиализа показано, что при повышении уровня антител к дофамину на фоне иммунизации коньюгатом дофамина с БСА у поведенчески активных и пассивных крыс в дорсальном гиппокампе возрастает содержание дофамина и разнонаправлено меняется содержание норадреналина. На фоне повышения уровня антител к глутамату при иммунизации коньюгатом глутамата с БСА у поведенчески активных и пассивных крыс в дорсальном гиппокампе снижается содержание норадреналина, разпонаправлено меняется содержание дофамина и глутамата. У поведенчески активных крыс на фоне повышенного уровня антител к глутамату в

дорсальном гнппокампе в постстрессорном периоде выявлено выраженное увеличение содержания ГАМК.

Теоретическая и практическая значимость исследования Результаты данного исследования в теоретическом плане раскрывают новые стороны участия антител к нейромедиаторам дофамину и глутамату в механизмах эмоционального стресса и поведенческих реакций у особей с различной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу. Показано, что возрастание уровня антител к дофамину и глутамату в крови у активных и пассивных крыс меняет характер их стрессорных поведенческих реакций. На фоне возросшего уровня антител к дофамину при иммунизации крыс коньюгатом дофамина с БСА в дорсальном гиппокампе меняется по сравнению с контрольными неиммунизированными животными содержание дофамина и норадреналина в динамике стрессорной нагрузки и постстрессорного периода. На фоне иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата с БСА обнаружена различная нейрохимическая интеграция содержания дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе у поведенчески активных и пассивных крыс в динамике стрессорной нагрузки и постстрессорного периода.

Проведенные исследования участия антител в механизмах стрессорных поведенческих реакций у крыс с различным характером прогностической устойчивости к эмоциональному стрессу представляют практическое значение для понимания механизмов индивидуальной устойчивости поведенческих и гормональных функций к повреждающему действию эмоциогепных стрессорных нагрузок. Они открывают новые пути воздействия на иммунные механизмы устойчивости различных функциональных систем организма к стрессу. Полученные данные об участии антител к нейромедиаторам в механизмах поведенческих стрессорных реакций являются перспективными для использования их в учебных курсах лекций и практических занятий по физиологии и иммунологии.

Положения, выносимые на защиту

1. Стрессорные нагрузки вызывают повышение уровня аутоантител к дофамину и глутамату в крови поведенчески активных и пассивных крыс. Это сопровождается изменением стрессорных поведенческих реакций в тестах «Условно-рефлекторное пассивное избегание» и «Открытое поле», а также изменением состояния надпочечников и тимуса.

2. Повышение в крови уровня антител к глутамату при иммунизации поведенчески активных крыс коньюгатом глутамата с БСА вызывает изменение у них стрессорных

поведенческих реакций в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание», снижение относительной массы надпочечников после стрессорного воздействия и снижение содержания кортикостерона в крови.

3. Возрастание в крови уровня антител к глутамату при иммунизации поведенчески пассивных крыс коньюгатом глутамата с БСА приводит к усилению действия блокатора глутаматных 7Ч\ГОА рецепторов на стрессорные поведенческие реакции в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание». Внутрибрюшинное введение блокатора глутаматных ЫМИА рецепторов иммунизированным пассивным крысам вызывает сокращение латентного периода избегания электрокожного воздействия в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание» после стрессорной нагрузки, чего не наблюдается у неиммунизированных контрольных животных.

4. Повышение в крови уровня антител к дофамину и глутамату при иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата с БСА различно изменяет у поведенчески активных и пассивных крыс содержание дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе в динамике стрессорной нагрузки и постстрессорного периода. На фоне повышения уровня антител к дофамину и глутамату в крови поведенчески активные и пассивные крысы характеризуются различной динамикой нейромедиаторной интеграции в дорсальном гиппокампе во время стрессорной нагрузки и в постстрессорном периоде.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на III Съезде физиологов СНГ (Ялта, Украина, 2011), на седьмом международном междисциплинарном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, Украина, 2011), на XXI Съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Калуга, Россия, 2010), на Итоговой научной конференции молодых исследователей с международным участием «Татьянин день» (Москва, Россия, 2010), на Первой Международной междисциплинарной конференции «Современные проблемы системной регуляции физиологических функций» (Сафага, Египет, 2010), на шестом международном междисциплинарном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Украина, Судак. 2010), на международном симпозиуеме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в здоровье и патологии» (Санкт-Петербург, Россия, 2009), на пятом международном междисциплинарном Конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, Украина, 2009), на четвертом международном междисциплинарном Конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, Украина, 2008), на II Съезде физиологов СНГ (Кишинев, Молдова, 2008), на третьем

международном междисциплинарном Конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, Украина, 2007), на втором международном междисциплинарном Конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, Украина 2006). Результаты работы были неоднократно доложены и апробированы на заседаниях и сессиях ФГБУ «НИИ нормальной физиологии им. ИХ Анохина» РАМН и ГБОУ ВПО Первый Государственный Московский медицинский университет им. И.М. Сеченова.

Публикации

По теме диссертационного исследования опубликовано 40 печатных работ, из них 15 в журналах, входящих в перечень ВАК.

Структура н объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, заключения и выводов. Работа изложена на 243 страницах машинописного текста, и содержит 49 рисунков и 2 таблицы. Список использованной литературы представлен 411 источниками, из них 138 отечественных и 273 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основной объем исследования

Эксперименты проведены на 390 крысах самцах Вистар, массой 280-320г. Животных содержали при комнатной температуре в условиях свободного доступа к пище и воде в условиях светового режима с 8.00 до 20.00. Перед началом экспериментов поведение животных исследовали в открытом поле.

Поведенческие тесты: «Открытое поле», «Условно рефлекторное пассивное избегание»

После недельной адаптации крыс к условиям вивария их тестировали в тесте «Открытое поле» (ОП). Регистрировали следующие показатели: латентный период первого движения и первого выхода в центральную зону поля, количество пересеченных животными центральных и периферических квадратов, количество стоек в периферической и центральной зонах тестовой площадки, количество исследованных объектов, длительность груминга, количество дефекаций и уринаций. Время тестирования составляло 3 минуты.

Параметры результативного поведения крыс оценивали в тесте «Условно рефлекторное пассивное избегание» (УРГГИ). Экспериментальная камера состояла из 2-х отсеков: освещенного и затемненного с электропроводящим полом. При первом

предъявлении теста УРГТИ крысу помещали в освещенный отсек и измеряли латентный период ее перехода в темный отсек. После перехода в темный отсек животному предъявляли в нем электрокожное раздражение током силой 1,5 мА, частотой 1 Гц, длительностью импульса 100 мс в течение 5 секунд. Повторное предъявление теста УРГТИ проводили через 72 часа после первого тестирования и через один чае после окончания одночасовой иммобилизациоиной стрессорной нагрузки. Оценивали латентный период перехода животного в темный отсек.

Методика стрессорных воздействий путем иммобилизации животных с электрокожным раздражением

Крыс подвергали стрессорной нагрузке путем фиксации животных за лапы на платформе в течение 1 часа с одновременным стохастическим электрокожным раздражением током силой 0,1-0,2 мА по порогу вокализации, частотой 50 Гц. Длительность периодов электрокожного раздражения была различной и равнялась 30 или 60 секунд, интервал между периодами раздражения варьировал от 90 до 180 секунд.

В серии опытов исследовали действие повторных стрессорных нагрузок на содержание аутоантител к дофамину и глутамату в крови крыс. Повторные стрессорные нагрузки при этом создавали путем двукратной иммобилизации крыс в течение одного часа по описанной методике с интервалом между стрессорными нагрузками в одни сутки. Уровень аутоантител определяли в крови крыс через четыре недели после стрессорных нагрузок.

Исследование состояния надпочечников и тимуса

Через один час после окончания иммобилизациоиной стрессорной нагрузки крыс декапитировали и выделяли надпочечники и тимус, которые взвешивали и вычисляли их относительную массу как отношение массы надпочечников к массе крысы, умноженное па 100.

Определение уровня кортикостерона в крови

Содержание кортикостерона в крови крыс исследовали методом иммуноферментпого анализа с использованием стандартного набора для определения кортикостерона крыс AC-14F1 (Immunodiagnostic Systems Ltd, UK). Измерение оптической плотности образцов после проведения реакций производили на ИФА ридере Multiscan EX (Thermo Fisher Scientific Inc., USA) в соответствии с инструкциями, прилагающимися к набору для определения содержания кортикостерона.

Метод иммунизации животных коньюгатами нейромедиаторов с БСЛ

Коньюгат ГЛУ с БСА синтезировали с использованием глутарового альдегида по методике [Seguela Р. et al. 1984]. Коньюгат ДА с БСА синтезировали реакцией ковалентного связывания с диазотированным белком по методике [Peskar В., Spector S., 1973].

Крыс иммунизировали коньюгатом ДА с БСА дважды возрастающими дозами. Первую иммунизацию коньюгатом производили с полным адьювантом Фрейнда подкожно. Вторую иммунизацию с неполным адьювантом Фрейнда осуществляли через 2 недели после первой. Неиммунизированным коньюгатом контрольным животным по однотипной схеме вводили БСА с полным адьювантом Фрейнда в сроки первой иммунизации и с неполным адьювантом Фрейнда в сроки реиммунизации. Общее время иммунизации крыс коньюгатом ДА с БСА составляло три недели.

Коньюгатом ГЛУ с БСА крыс иммунизировали трижды возрастающими дозами. Вторую иммунизацию осуществляли через две недели после первой, третью через две недели после второй. Неиммунизированным коньюгатом контрольным животным по такой же схеме вводили БСА с полным адьювантом Фрейнда в сроки первой иммунизации и с неполным адьювантом Фрейнда при второй иммунизации. Общее время иммунизации крыс коньюгатом ГЛУ с БСА составляло четыре недели, поскольку по данным [Евсеев В.А., 2007] при иммунизации коньюгатом ГЛУ с БСА образование антител к глутамату выражено слабее по сравнению с образованием антител к ДА после иммунизации коньюгатом ДА с БСА.

Синтез коньюгатов дофамина с БСА и глутамата с БСА и последующую иммуиизациею животных проводили совместно с Л.А. Ветрилэ, И.А. Захаровой и H.A. Трековой (лаборатория нейроиммунопатологии НИИ общей патологии и патофизиологии) под руководством проф., д.м.н. В.А. Евсеева.

Определение уровня антител к дофамину и глутамату

Антитела к дофамипу и глутамату определяли в сыворотке крови крыс методом твердофазного иммупоферментного анализа на плоскодонных полистироловых 96-луночпых планшетах (Dynatech). В качестве тест-антигенов использовали конъюгаты дофамина и глутамата с гетерогенным белковым носителем - гамма-глобулином лошади, синтезированные по описашшм выше методикам. Концентрация тест-антигена составляла 3 мкг/мл. Тест-антиген наносили в карбонат-бикарбонатном буфере (рН=9,5, Na2COj -0,794 г, NallCOj - 1,464 г, дистиллированная вода до 500 мл) по 100 мкл на лунку (0,3 мкг аптигена на лунку). Планшеты инкубировали в течение 18 ч при + 4°С, после чего

промывали 4 раза физиологическим раствором с твином-20 (0,05%). Сыворотку крови титровали при первоначальном разведении 1:2 в фосфатно-солевом буферном растворе (рН=7,4, NaCl - 8,0 г, КН2Р04 - 200 мг, Na2HP04 х 12Н20 - 2,8 г, КС1 - 200 мг, Твин-20 -0,5 мл, дистиллированная вода до 1 литра). После инкубации в течение часа при +37°С в термостате, планшеты промывали 4 раза физиологическим раствором с твином-20 (0,05%) и обрабатывали диагностическими антителами к иммуноглобулинам крысы, меченными пероксидазой хрена в разведении 1:2000 (по 100 мкл на лунку), инкубировали 1 час при +37°С в термостате. Затем планшеты промывали аналогичным способом и в лунки вносили по 100 мкл субстратного буфера (рН=4,8, 6 мл 0,1 М раствора лимонной кислоты и 6 мл 0,2 М раствора Na2HP04 х I2H2O, 5 мкл 33% Н2О2, 5 мг о-фенилендиамин гидрохлорида (Sigma). Инкубировали в темноте 1 час при комнатной температуре, останавливали цветную реакцию внесением по 25 мкл на лунку 6Н раствора H2SO4 и определяли оптическую плотность в каждой лунке при длине волны 492 нм с использованием считывающего устройства "Mini-reader"(Dynatech). В качестве контроля использовали сыворотки крови неиммунизированных крыс.

В серии опытов содержание аутоантител к дофамину и глутамату определяли в крови крыс после повторных стрессорных нагрузок. Уровень аутоантител оценивали по оптической плотности и выражали коэффициентом К в условных единицах (усл. ед.), представляющим собой отношение значения оптической плотности исследуемой сыворотки к среднему значению оптической плотности сывороток контрольных нестрессированных животных. О наличии повышенного уровня аутоантител свидетельствовало значение К превышающее единицу.

В серии опытов по иммунизации крыс конъюгатами ДА с БСА и ГЛУ с БСА в сыворотках опытных и контрольных животных определяли титры антител к ДА и ГЛУ. Обнаружение исследуемых антител в титрах 1:512 и выше свидетельствовало о возрастании их уровня у опытных животных по сравнению с контролем.

Определение уровня антител к дофамину и глутамату в крови животных проводили совместно с Л.А. Ветрилэ и И.А. Захаровой (лаборатория нейроиммунопатологии НИИ общей патологии и патофизиологии) под руководством проф., д.м.н. В.А. Евсеева.

Метод микродиализа

Содержание дофамина, норадреналина, глутамата с ГАМК в дорсальном гиппокампе определяли у крыс прижизненно в условиях свободного поведения методом микродиализа с последующей высокоэффективной жидкостной хроматографией с электрохимической детекцией.

Операции по вживлению микродиализных зондов в дорсальный гиппокамп проводили под хлоралгидратным наркозом (внутрибрюшинно, 400 мг/кг). Координаты дорсального гиппокампа в соответствии с атласом [Paxinos G., Watson С., 1998] были принятые следующие: АР=4,6 мм, Lat=2,5 мм, Vent= 4,6 мм от брегмы. Использовали концентрические зонды СМ А 12 (СМА Microdialysis, Sweden) с размером пор 20 кД. Время сбора каждого диализата составляло 20 мин. Перед началом эксперимента зонды перфузировали искусственной цереброспинальной жидкостью в течение 2 часов для установления равновесных концентрацией веществ между интерстициальным пространством и внутренним содержимым зондов.

Искусственную цереброспинальную жидкость готовили непосредственно перед опытом из деионизированной воды. Ее состав включал в себя следующие компоненты: NaCl - 8,2 г/л, КС1 - 0,225 г/л, СаС1£2Н20 - 0,355 г/л, MgCl£6H20 - 0,205 Na2HPO£.2H20 -0,215 г/л, NaH2POit2H20 - 0,042 г/л, глюкоза - 1,3 г/л. Перед использованием раствора искусственной цереброспинальной жидкости контролировали значение его рН, составляющее 7,4.

Схема эксперимента включала в себя последовательный сбор восьми диализатов. Первые два диализата собирали у крыс в исходном состоянии. Значения веществ в двух исходных диализатах характеризовали исходный уровень содержания нейромедиаторов. В начале сбора третьего диализата животных фиксировали на платформе. Во время стрессорной нагрузки собирали третий, четвертый и пятый диализаты. После освобождения животных по окончании стрессорного воздействия производили сбор шестого, седьмого и восьмого диализатов.

После окончания опытов крыс декапитировали, извлекали головной мозг и замораживали в жидком азоте для последующего изготовления гистологических срезов с целью проверки положения микродиализных зондов в дорсальном гиппокампе. Срезы изготавливали на замораживающем криотоме. Толщина срезов составляла 20 мкм. Срезы окрашивали крезил-виолетом.

Метод высокоразрешающей жидкостной хроматографии

Определение содержания дофамина и норадрепалина в диализатах производили на хроматографе LC-304T (BAS, West Lafayette, США), снабженном инжектором Rheodyne 7725 с петлей на 50мкл для внесения образцов. Изучаемые вещества разделяли на обращеннофазной колонке Reprorsil С18 (3 мкм, 2x100 мм). В качестве подвижной фазы применяли 0,1 М цитратно-фосфатный буфер, содержащий 0,3 мМ ионпарного реагента октилсульфоната натрия, 0,1 мМ ЭДТА, 8% ацетонитрила; рН раствора составлял 3,6.

Скорость потока подвижной фазы составляла 0,7 мл/мин, температура нормальная. Электрохимическое определение веществ выполнено на амперометрическом детекторе LC-4B с ячейкой TL-5 (BAS, WestLafayette, США) при потенциале +0,65 В против Ag/AgCl электрода сравнения.

Измерение содержания глутамата и ГАМК в диализатах из дорсального гиппокампа осуществляли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентной детекцией. Для дериватизации глутамата и ГАМК использовали 0,1 M боратный буфер о-фтальальдегид сульфитный реактив в О,IM боратном буфере (pH 9,5). Калибровку проводили стандартным раствором ГАМК в концентрации 0,01мкМ/мл в 0,1 н НСЮ4. Исследования проводили с использованием колонки Agilent Hypersil ODS 5 мкм, 4,6x250. Регистрацию продуктов разделения проводили на флуоресцентном детекторе Agilent 1100 (USA) при длине волны возбуждения 230 нм и длине волны эмиссии 392 нм. Подвижная фаза для определения ГАМК состояла из 0,06М NaH2P04xH20, 0.0032М Na2HP04, 0,025мМ ЭДТА, 1,24мМ CHjOH, рН=5,6. Скорость подвижной фазы составляла 1,5 мл/мин.

Расчет концентраций веществ производили методом одноточечной градуировки с использованием внешнего стандарта. При этом концентрацию анализируемых компонентов определяли путем сравнения площадей пиков, полученных при использовании рабочего раствора, с площадями пиков, полученных при введении градуировочных растворов с известными концентрациями стандартов анализируемых веществ. Использовали компьютерную систему автоматизации хроматографии «Мультихром» (ЗАО Амперсенд, Россия).

Данные содержания нейромедиаторов в диализатах из дорсального гиппокампа выражали в процентах от их исходного уровня в первых двух диализатах.

Введение блокаторов дофаминовых Д1 и глутаматных NM DA рецепторов

Использовали блокатор дофаминовых Д1 рецепторов SCH 23390 (Sigma Aldrich Corp., USA). Препарат вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг/кг массы тела за 30 минут до начала часовой иммобилизационной стрессорной нагрузки, таким образом, за 2 часа 30 минут до тестирования поведения крыс в тесте УРПИ (второе предъявление).

Использовали блокатор глутаматных NMDA рецепторов МК-801 (Sigma Aldrich Corp., USA). Препарат вводили внутрибрюшинно в дозе 0,3 мг/кг массы тела за 30 минут до начала часовой иммобилизационной стрессорной нагрузки, таким образом, за 2 часа 30 минут до тестирования поведения крыс в тесте УРПИ (повторное предъявление).

Этические правила

Эксперименты проведены в соответствии с Правилами лабораторной практики в Российский Федерации (GLP), утвержденными Приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации № 267 от 19.06.2003 г.; в соответствии с требованиями Приказа № 1179 Министерства здравоохранения СССР от 11.10.1983 г.; в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» НИИ нормальной физиологии им. П.К. Анохина РАМН (протокол №1 от 3.09.2005 г.); а также в соответствии с требованиями «Правил по обращению, содержанию, обезболиванию и умерщвлению экспериментальных животных» Министерства здравоохранения СССР (1977 год) и РСФСР (1977 год).

Статистический анализ данных

Результаты опытов представлены в виде средних величин ± стандартная ошибка среднего. Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы Statistica 8.0 (StatSoft Inc, USA). Достоверность различий оценивали после проверки нормальпости распределения данных. При нормальном распределении данных достоверность различий оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента. При ненормальном распределении для оценки достоверности различий использовали дисперсионый анализ. С его помощью выделяли факторы, оказывающие достоверное влияние на выявленные различия, затем группы сравнивали попарно с использованием непараметрических критериев Манна-Уитни в случае сравнения зависимых совокупностей или критерия Вилькоксона при сравнении независимых групп.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ I. Исследование поведения крыс в тесте «Открытое поле»

Цель данной серии опытов заключалась в изучении индивидуальных особенностей двигательной и исследовательской активности крыс в условиях невыраженного эмоциогенного стрессорного воздействия в тесте «Открытое поле» (ОП). Исследование проведено на 818 крысах самцах Вистар.

Значения показателей, зарегистрированных в тесте открытое поле, у крыс трех выделенных групп представлены в таблице 1.

По результатам тестирования поведения в ОП рассчитывали суммарный критерий активности крыс (СКА) как сумму количества пересеченных центральных и периферических квадратов, количества стоек в центральной и периферической зонах и количества исследованных объектов. По значениям СКА каждая крыса была отнесена в

группу поведенчески активных, пассивных или амбивалетных особей. В группу активных по поведению крыс вошли 180 крыс, в группу пассивных по поведению 186 крыс.

Таблица 1. Показатели поведения крыс в тесте ОП. * - р<0,05 и ***- р<0,001 между группами поведенчески активных и пассивных крыс

показатель труппа активных п=180 группа пассивных п=186 достоверность различия

латентный период первого движения 1,75±0,30 2,71*0,41 не выявлено

латентный период выхода в центральную зону 61,44*7,1! 62,55*10,04 не выявлено

кочнч. пересеченных периферических квадратов 98,63+2,4! 56,45^1,64 *••

количество пересеченных центральных квадратов 10Д8*1,34 3,90+0,55 ***

количество стоек в периферической зоне 17,47=1:1,28 11,26*0,82

количество стоек в центральной зоне 0,44+0,12 0,06*0,04 ***

количество исследованных объектов 3,84*0,59 2,13*0,35 *

СКА 160,65*1,86 73,81*1,45 **4

Таким образом, по результатам тестирования в ОП были выделены крысы с высокой и низкой поведенческой активностью. Как известно, особи с высокими показателями двигательной и исследовательской активности в тесте ОП являются прогностически устойчивыми к нарушениям физиологических функций в условиях эмоциогенных конфликтных ситуаций, а особи с низкой поведенческой активностью в тесте ОП - прогностически предрасположенными к стрессогенным воздействиям [Юматов Е.А., 1986; Коплик Е.В., 1995; Судаков К.В., 1998].

Проведенные в данной серии исследования позволили нам изучать в дальнейших опытах влияния иммунных факторов у поведенчески активных и пассивных особей с высокой и низкой прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу. II. Содержание аутоантитея к дофамину и глутамату в крови поведенчески активных и пассивных в открытом поле крыс после иммобилизационных стрессорных нагрузок

Опыты проведены на 12 активных и 12 пассивных по поведению в ОП крысах самцах линии Вистар. Содержание аутоантител к дофамину (ДА) и глутамату (ГЛУ) было исследовано после иммобилизационных стрессорных нагрузок, которые создавали двукратно путем часовой иммобилизации крыс на платформе со стохастическим электрокожным раздражением силой по порогу вокализации. Поведенчески активные и пассивные крысы были разделены на две группы, в каждую из которых вошли по 6

поведенчески активных и 6 пассивных особей. Первую группу составили интактные неетрессированные (контрольные) крысы. Крыс второй группы подвергали двукратным стрессорным нагрузкам с интервалом в сутки, после чего через четыре недели их декапитировали. Содержание аутоантител к ДА и ГЛУ в крови опытных крыс оценивали с помощью показателя, представляющего собой отношение оптической плотности, полученной в образцах сыворотки крови каждого подопытного животного, к среднему значению оптической плотности сыворотки нестрессированных (контрольных) крыс. О наличии антител свидетельствовало значение отношения больше единицы.

Результаты определения содержания аутоантител к ДА и ГЛУ в крови поведенчески активных и пассивных крыс первой и второй групп представлены на рис. 1.

1.8

1,6

1,4 £1,2

I ^ ©0,8 £о,6 -

0,4 -

0,2 0 -

ДА ГЛУ

Рис. 1. Уровень аутоантител к ДА и ГЛУ в крови новеденчески активных (1) и пассивных (2) крыс. Светлые столбики - уровень ауатоантител в крови нестрессированных крыс первой группы, заштрихованные столбики - у стрессированных в начале четырех недельного периода крыс второй группы. ДА - аутоантигела к дофамину, ГЛУ -аутоантитела к глутамату. * - р<0,05 но сравнению с контрольными крысами первой группы.

Проведенные опыты показали, что иммобилизационные стрессорные нагрузки сопровождаются через четыре недели возрастанием уровня аутоантител к ДА и ГЛУ в крови активных и пассивных по поведению в ОП крыс. Возрастание содержания аутоантител к ДА и ГЛУ после иммобилизационных стрессорных нагрузок было одинаково у активных и пассивных по поведению в ОП крыс.

Относительная масса надпочечников и тимуса у поведенчески активных и пассивных крыс после иммобилизационных стрессорных нагрузок, сопровождающихся повышением в крови уровня аутоантител к ДА и ГЛУ

Результаты исследования относительной массы надпочечников у поведенчески активных и пассивных крыс через четыре недели после двукратных иммобилизационных стрессорных нагрузок представлены на рис. 2.

Проведенные опыты показали, что у поведенчески активных крыс через четыре недели после иммобилизационных нагрузок относительная масса надпочечников была достоверно выше по сравнению с нестрессированными активными животными.

У крыс данной серии исследовали состояние тимуса. Результаты определения относительной массы тимуса у поведенчески активных и пассивных крыс после иммобилизационных стрессорных нагрузок представлены на рис. 3.

дг 0,014

"g 0,012

I 0,01 -j

8j 0,008 -X

с 0,006 j с

| 0,004

1 0,002 i

Рис. 2. Относительная масса надпочечников у поведенчески активных (светлые столбики) и пассивных (заштрихованные столбики) крыс после иммобилизационных стрессорных нагрузок. 1 - у нестрессированных крыс первой группы, 2 — у дрессированных животных второй труппы.

* - р<0,05 по сравнению с активными крысами первой (контрольной) группы;

* - р<0,05 по сравнению с пассивными крысами второй группы.

?0,07

S 0,06

о л

2 0,05 ? 0,04 5 0,03 § 0,02 о 0,01

Рис. 3. Относительная масса тимуса у поведенчески активных (светлые столбики) и пассивных (заштрихованные столбики) крыс после иммобилизационных стрессорных на^узок. 1 - у нестрессированных крыс первой группы, 2 - у стрессировакных животных второй группы.

* - р<0,05 по сравнению с пассивными крысами первой труппы

Проведенные опыты этой серии показали, что возрастание в крови содержания аутоантител к ДА и ГЛУ через четыре недели после иммобилизационных стрессорных нагрузок сопровождалось у поведенчески активных крыс достоверным возрастанием относительной массы надпочечников, а у пассивных крыс - повышением относительной массы тимуса.

Поведенческие реакции в тесте ОП у поведенчески активных и пассивных крыс после илтобилизационных стрессорных нагрузок, сопровождающихся повышением в крови уровня аутоантител кДАиГЛУ

Крыс тестировали в ОП через четыре недели после двукратных стрессорных нагрузок. Результаты данной серии опытов представлены в таблице 2.

Таблица 2. Поведение активных и пассивных крыс в тесте ОП после стрессорных нагрузок, сопровождающихся повышением содержания в крови аутоантител к ДА и ГЛУ.

* - р<0,05 по сравнению со значениями соответствующих показателей поведения у крыс первой группы.

1 группа 2 фуппа

активные пассивные активные пассивные

Латентный период первого движения (с) 3,17±1,25 9,3316,57 7,6713,15 4,6711,78

Латентный период выхода в центральную зону (с) 14.83±4.50 79,83132,75 112,00±31,75 ч 96,33137,44

Количество пересеченных периферических квадратов (п) 36.83±6.29 22,83±5,99 15,1715,65 ч 10,1716,80

Количество пересеченных центральных квадратов (п) 15.1712.89 3,8312,23 3,50±2,74 * * 2,0011,44

Количество стоек в периферической зоне (п) 4.17±2.24 1,1710,48 0,6710,49 * * 0,1710,17

Количество стоек в центральной зоне (л) 1.3310.61 0,0010,00 0,1740,17 * А 0,0010,00

Количество исследованных объектов (п) 4.1711.01 2.3311.02 + 1,17*1,17 ** 0,3310,33 г

Продолжительность груминга (л) 1,8311,22 10.5015.03 * 5,8314,05 0,0010,00 *

Количество фекальных болюсов (л) 0,17Ю,17 0,3310,21 0,5010,22 0,6710,42

Количество уринаций (л) 1,1710,54 0,5010,34 0,6710,33 0,6710,21

Результаты опытов показали, что повышение в крови уровня аутоантител к ДА и ГЛУ после иммобилизационных стрессорных нагрузок сопровождалось снижением двигательной и исследовательской активности животных. Снижение активности было выражено сильнее у поведенчески активных крыс по сравнению с пассивными.

Поведенческие реакции в тесте УРПИу поведенчески активных и пассивных крыс после иммобилизационных стрессорных погрузок, сопровождающихся повышением содержания в крови аутоантител к ДА и ГЛУ

Проведенные опыты показали, что поведение в тесте УРПИ стресс ироваиных в начале четырехнедельного периода поведенчески активных крыс не отличалось от поведения нестрессированных (контрольных) активных животных.

Результаты опытов по исследованию поведения в тесте УРПИ поведенчески пассивных крыс представлены на рис. 4. Проведенные опыты показали, что повышение в крови содержания аутоантител к ДА и ГЛУ после иммобилизационных стрессорных нагрузок через четыре недели сопровождалось укорочением латентного периода перехода в темный отсек при втором предъявлении теста УРПИ у поведенчески пассивных крыс.

первая группа вторая группа

Рис. 4. Латентные периоды переходов поведенчески пассивных крыс в темный отсек в тесте УРПИ. Светлые столбики - первое предъявление теста УРПИ, заштрихованные столбики - второе предъявление теста УРПИ. Первая группа - нестрессированные животные, вторая группа - после иммобилизационных стрессорных нагрузок.

* - р<0,05 по сравнению с первым предъявлением теста УРПИ;

# - р<0,05 по сравнению с вторым предъявлением теста УРПИ у пассивных крыс первой (контрольной) группы.

Таким образом, опыты показали, что иммобилизационные стрессорные нагрузки сопровождаются возрастанием в крови уровня аутоантител к ДА и ГЛУ. Повышение в крови содержания аутоантител к ДА и ГЛУ у поведенчески активных и пассивных крыс сопровождается снижением у них двигательной и исследовательской активности в тесте ОП, причем более выраженного у активных крыс по сравнению с пассивными. Также возрастание в крови содержания аутоантител к ДА и ГЛУ у поведенчески пассивных крыс сопровождается укорочением латентного периода перехода в темный отсек при втором предъявлении теста УРПИ.

III. Поведенческие реакции в тесте УРПИ у поведенчески активных и пассивных крыс после иммунизации коньюгатом дофамина с бычьим сывороточным альбумином

Опыты данной серии проведены на 48 крысах самцах Вистар, из которых 25 были активными и 23 пассивными по поведению в ОП. Опыты по измерению уровня антител к ДА показали, что через три недели после начала иммунизации крыс коньюгатом ДА с БСА в их крови выявляются антитела к ДА в титре 1:1024-1:2048. Поведенческие реакции крыс исследовали в тесте УРПИ через три недели после начала их иммунизации коньюгатом ДА с БСА па фоне повышенного содержания антител к ДА в крови.

Проведенные опыты этой серии показали, что иммунизация крыс коньюгатом ДА с БСА сопровождается возрастанием латентного периода перехода в темный отсек при первом предъявлении теста УРПИ у поведенчески активных крыс. У пассивных крыс влияния иммунизации коньюгатом ДА с БСА на поведение в тесте УРПИ не выявлено.

У псиммуннзированных коньюгатом и иммунизированных коньюгатом ДА с БСА поведенчески активных и пассивных крыс в данной серии не было обнаружено изменений относительной массы надпочечников после иммобилизационной нагрузки.

IV. Поведенческие реакции в тесте УРПИ у поведенчески активных и пассивных крыс после иммунизации коньюгатом глутамата с бычьим сывороточным альбумином

Опыты были проведены па 48 крысах самцах Вистар, из которых 22 были активными и 26 пассивными в ОП. Опыты по измерению уровня антител к ГЛУ показали, что через четыре недели после начала иммунизации крыс коньюгатом ГЛУ с БСА в их крови выявляются антитела к ГЛУ в титре 1:512-1:1024. Таким образом, поведенческие реакции крыс исследовали в тесте УРПИ через четыре недели после начала их иммунизации коньюгатом ГЛУ с БСА на фоне повышенного содержания антител к ГЛУ в крови.

Результаты опытов по исследованию поведения в тесте УРПИ активных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА, представлены на рис. 5.

Проведенные опыты показали, что иммунизация поведенчески активных крыс коньюгатом ГЛУ с БСА сопровождается укорочением латентного периода перехода в темный отсек при втором предъявлении теста УРПИ после иммобилизационной стрессорной нагрузки.

Рис. 5. Латентные периоды переходов в темный отсек в тесте УРПИ у поведенчески активных крыс. 1 -неиммунизированные коньюгатом (контрольные) животные, 2 - иммунизированные коньюгатом ГЛУ с БСА крысы. Светлые столбики - первое предъявление теста УРПИ, столбики с косой иприховкой - второе предъявление теста УРПИ без предшествующей иммобилизационной нагрузки, столбики с поперечной штриховкой - второе предъявление теста УРПИ после иммобилизационной нагрузки.

* - р<0,05 по сравнению с латентным периодом при первом предъявлении теста УРПИ;

# - р<0,05 по сравнению с латентным периодом при втором предъявлении теста УРПИ после стрессорной нагрузки у активных неиммунизированных коньюгатом животных (1);

t - р<0,05 по сравнению со вторым предъявлением теста УРПИ после стрессорной нагрузки у пассивных иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс.

У поведенчески пассивных крыс не было обнаружено влияния иммунизации коньюгатом ГЛУ с БСА на поведение в тесте УРПИ.

Относительная масса надпочечников у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА

Проведенные опыты показали, что относительная масса надпочечников после иммобилизационной нагрузки была достоверно ниже у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА, по сравнению с неиммунизированными коньюгатом активными и пассивными животными.

Содержание кортикостерона в крови поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА

Опыты проведены на 24 крысах самцах Вистар, из которых 12 были поведенчески активными и 12 поведенчески пассивными в ОП. Результаты исследования содержания кортикостерона в крови поведенчески активных иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс представлены на рис. 6.

Проведенные опыты показали, что содержание кортикостерона было достоверно ниже у поведенчески активных нестрессированных иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс по сравнению с активными нестрессированными неиммунизированными коньюгатом животными. Через час после окончания часовой иммобилизационной

нагрузки содержание кортикостерона в крови иммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс было также достоверно ниже по сравнению с неиммунизированными коньюгатом активными стрессированными животными.

| 20 -

Рис. 6. Содержание кортикостерона в крови поведенчески активных крыс. 1 - неиммушонро ванные коньюгатом (контрольные) животные; 2 - иммунизированные коньюгатом ГЛУ с БСА крысы. Светлые столбики - нестрессированные животные, заштрихованные столбики - после иммобилизационной стрессорнон нагрузки.

* - р<0,05 по сравнению с уровнем у активных нестрессированных крыс;

# - р<0,05 по сравнению с уровнем у неиммушпированных коньюгатом крыс.

У поведенчески пассивных крыс иммунизация коньюгатом ГЛУ с БСА не сопровождалась изменением содержания кортикостерона в крови.

V. Действие блокатора дофаминовых Д1 рецепторов на поведенческие реакции в тесте «Условно рефлекторное пассивное избегание» у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом дофамина с БСА

Опыты проведены на 72 крысах самцах Вистар, из которых 34 были активными и 38 пассивными по поведению в ОП. В опытах данной серии действие блокатора дофаминовых Д1 рецепторов у иммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс сравнивали в двумя типами контрольных групп: первую контрольную группу составили неиммунизировакные крысы, которым вводили блокатор после введения БСА и адъюванта Фрейнда по однотипной с иммунизацией схеме; вторую контрольную группу составили иммунизированные коньюгатом ДА с БСА животные, которым вводили физиологический раствор.

Результаты опытов по исследованию поведения активных крыс в тесте УРПИ на фоне введения им блокатора дофаминовых Д1 рецепторов представлены на рис. 7.

Проведенные опыты показали, что у поведенчески активных крыс введение блокатора дофаминовых Д1 рецепторов на фоне трех недельной иммунизации коньюгатом ДА с БСА сопровождалось укорочением латентного периода перехода в темный отсек при

втором предъявлении теста УРПИ после иммобилизационной стрессорной нагрузки.

1 2 з

Рис. 7. Латентные периоды переходов в темный отсек в тесте УРПИ у поведенчески активных крыс. 1 -введение блокатора Д1 рецепторов неиммунизированным коньюгатом животным (введение БСА и ПАФ), 2 - введение физиологического раствора иммунизированным коньюгатом ДА с БСА крысам, 3 — введение блокатора иммунизированным коньюгатом ДА с БСА крысам.

Светлые столбики - первое предъявление теста УРПИ, столбики с косой штриховкой - второе предъявление теста УРПИ без предшествующей иммобилизационной нагрузки, столбики с поперечной штриховкой -второе предъявление теста УРПИ после иммобилизационной нагрузки. * - р<0,05 по сравнению с первым предъявлением теста УРПИ;

О - р<0,05 по сравнению со вторым предъявлением теста УРПИ, произведенным после стрессорной нагрузки у иммунизированных коньюгатом крыс на фоне физиологического раствора (2).

У поведенчески пассивных животных, иммунизированных коньюгатом ДА с БСА, введение блокатора дофаминовых Д1 рецепторов не изменяло поведенческие реакции в тесте УРПИ.

VI. Влияние блокатора глутаматных \МОА рецепторов на поведенческие реакции в тесте «Условно рефлекторное пассивное избегание» у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом глутамата с БСА

Опыты проведены на 72 крысах самцах Вистар, из которых 38 были активными и 34 пассивными по поведению в ОП. В опытах данной серии действие блокатора глутаматных )ЧМОЛ рецепторов у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс сравнивали с двумя типами контрольных групп: первую составили неиммунизированные животные, которым вводили блокатор глутаматных ИМБА рецепторов после введений бычьего сывороточного альбумина и адъюванта Фрейнда по схеме, одинаковой с иммунизацией; во вторую контрольную группу вошли иммунизированные животные, которым вводили физиологический раствор. Результаты опытов по исследованию поведенческих реакций в тесте УРПИ у активных крыс на фоне введения им блокатора глутаматных ГШОА рецепторов представлены на рис. 8.

-160

I ' § 120 с

| 80-

Рис. 8. Латентные периоды переходов в темный отсек в тесте УРПИ у иоведенчески активных крыс. I -введение блокатора ККША рецепторов неиммунюированным коньюгатом животным (введние БСА и ПАФ), 2 - введение физиологического раствора иммунизированным коньюгатом ГЛУ с БСА крысам, 3 -введение блокатора иммунизированным коньюгатом ГЛУ с БСА крысам.

Светлые столбики - первое предъявление теста УРПИ, столбики с косой штриховкой - второе предъявление теста УРПИ без предшествующей иммобилизационной нагрузки, столбики с поперечной штриховкой -второе предъявление теста УРПИ после иммобилизационной нагрузки. * - р<0,05 но сравнению с первым предъявлением теста УРПИ;

0 - р<0,05 по сравнению с иммунизированными коньюгатом крысами, которым перед вторым предъявлением теста УРПИ вводили физиологический раствор (2);

t - р<0,05 но сравнению со вторым предъявлением теста УРПИ после введения физиологического раствора без стрессорной нагрузки у иммунизированных коньюгатом крыс (2).

Рис. 9. Латентные периоды переходов в темный отсек в тесте УРПИ у иоведенчески пассивных крыс. I -введение блокатора ЫМПА рецепторов неиммунизированным коньюгатом животным (введение БСА и ПАФ), 2 - введение физиологического раствора иммунизированным коньюгатом ГЛУ с БСА крысам, 3 -введение блокатора иммунизированным коньюгатом ГЛУ с БСА крысам.

0 - р<0,05 но сравнению со вторым предъявлением теста УРПИ у иммунизированных коньюгатом крыс, которым вводили физиологический раствор (2).

Проведенные опыты показали, что латентный период перехода в темный отсек при втором предъявлении теста УРПИ без иммобилизационной стрессорной нагрузки был достоверно короче у поведенчески активных иммунизированных животных после введет« блокатора глутаматных NMDA рецепторов по сравнению с активными иммунизированными крысами после введения физиологического раствора.

Результаты опытов по исследованию поведенческих реакций в тесте УРПИ у пассивных крыс на фоне введения им блокатора глутаматных NMDA рецепторов представлены на рис. 9.

Проведенные опыты показали, что латентный период перехода в темный отсек при втором предъявлении теста УРПИ у поведенчески пассивных иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс было достоверно короче после введения им блокатора глутаматных NMDA рецепторов по сравнению с пассивными иммунизированными коньюгатом крысами после введения физиологического раствора. Укорочение латентного периода после введения блокатора было отмечено у поведенчески пассивных иммунизированных коньюгатом крыс при проведении второго предъявления как после стрессорной нагрузки, так и без нее.

VII. Содержание дофамнна и норадреиалииа в дорсальном гиппокамие в динамике стрессорной нагрузки и постстрессорного периода у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом дофамина с БСА

Опыты проведены на 30 крысах самцах Вистар, из которых 14 были активными и 16 пассивными по поведению в ОП. Опыты по измерению уровня антител к ДА показали, что через три недели после начала иммунизации крыс коньюгатом ДА с БСА в их крови выявляются антитела к ДА в титре 1.1024-1:2048. Содержание нейромедиаторов исследовали в дорсальном гиппокампе через три недели после начала иммунизации крыс коньюгатом ДА с БСА на фоне повышенного содержания антител к ДА в крови.

Содержание дофамина у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ДА с БСА

Результаты опытов по изучению содержания ДА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной стрессорной нагрузки и часового постстрессорного периода у неиммунизированных коньюгатом (контрольных) поведенчески активных и пассивных крыс представлены на рис. 10.

Проведенные опыты показали, что у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом крыс иммобилизационная стрессорная нагрузка сопровождалась возрастанием содержания дофамина в дорсальном гиппокампе в интервале с 40й по 60ю

минуту стрессорпого воздействия. Тенденция к повышенному уровню дофамина у поведенчески активных крыс сохранялась в течение начальных 40 минут постстрессорпого периода. У поведенчески пассивных неиммунизированных коньюгатом крыс содержание дофамина в дорсальном гиппокампе достоверно снижалось в интервале с 40й по 60ю минуту стрессорной нагрузки и оставалось сниженным в течение исследованных 60 минут постстрессорного периода. Содержание дофамина в заключительные 20 минут стрессорной нагрузки и в начальные 40 минут постстрессорного периода у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом крыс было достоверно выше по сравнению с содержанием у поведенчески пассивных неиммунизированных коньюгатом крыс.

Результаты опытов по изучению содержания ДА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной стрессорной нагрузки и часового постстрессорного периода у иммунизированных коньюгатом ДА с БСА поведенчески активных и пассивных крыс представлены на рис. 11.

У поведенчески активных иммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс было выявлено достоверное возрастание содержания ДА в дорсальном гиппокампе в начальном двадцатиминутном интервале иммобилизационной нагрузки. Возросшее содержание ДА у поведенчески активных иммунизированных коньюгатом крыс сохранялось в течение всей продолжительности часовой иммобилизации.

Следует отметить, что у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом животных возрастание содержания ДА было обнаружено во время заключительных 20 мипут часовой иммобилизации и при этом выявленное у неиммунизированных коньюгатом крыс увеличение содержания не достигло порога достоверности.

Анализ разброса дисперсий значений содержания ДА в дорсальном гиппокампе в серии последовательных измерений выявил достоверность стимулирующего влияния иммунизации коньюгатом ДА с БСА на содержание ДА в последовательных измерениях у поведенчески активных крыс.

Содержание ДА в дорсальном гиппокампе у поведенчески пассивных иммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс во время начальных 40 минут постстрессорного периода было достоверно выше по сравнению с неиммунизированными пассивными животными.

0-20 мин 20-40 40-60 мин постстрессорный период

Рис. ¡0. Содержание ДА в дорсальном гиппокампе у неиммунизированных коньюгатом (контрольных) крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и иостстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

* р<0,05 по сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 по сравнению с поведенчески пассивными крысами.

4 150

-40 мин -20 мин исходное состояние

0-20 мин 20-40 40-60 мин постстрессорный период

Рис. 11. Содержание ДА в дорсальном гиппокампе у иммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и иостстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

* - р<0,05 по сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 но сравнению с поведенчески пассивными крысами.

Содержание норадреналина у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ДА с БСА

Результаты опытов по изучению содержания НА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной нагрузки и часового постстрессорного периода у неиммунизированных (контрольных) поведенчески активных и пассивных крыс представлены на рис. 12.

У поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом крыс было выявлено возрастание содержания НА в дорсальном гиппокампе по сравнению с его исходным

уровнем во время часовой иммобилизационной нагрузки и последующего часового посгстрессорного периода. У поведенчески пассивных неиммунизированных коньюгатом животных содержание НА снижалось в заключительные 20 минут часового постстрессорного периода по сравнению с исходными значениями. Содержание НА в гиппокампе в начальные 20 минут иммобилизационной стрессорной нагрузки и в заключительные 20 минут постстрессорного периода было достоверно выше у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом крыс по сравнению с поведенчески пассивными неиммунизированными коньюгатом животными.

Результаты опытов по исследованию содержания НА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной нагрузки и часового постстрессорного периода у иммунизированных коньюгатом ДА с БСА поведенчески активных и пассивных крыс представлены на рис. 13.

Содержание НА в дорсальном гиппокампе у поведенчески активных иммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс достоверно снижалось с 20й по 60ю минуту часового постстрессорного периода по сравнению с его исходным содержанием. Содержание НА в дорсальном гиппокампе в начальные 20 минут иммобилизационной нагрузки и во время часового постстрессорного периода было достоверно ниже у иммунизированных коньюгатом ДА с БСА поведенчески активных крыс по сравнению с неиммунизированными коньюгатом поведенчески активными животными.

Содержание НА в дорсальпом гиппокампе у поведенчески пассивных иммунизировапиых коньюгатом ДА с БСА крыс достоверно возрастало в заключительные 20 минут часового постстрессорного периода по сравнению с его исходным уровнем. В интервале с 40й по 60ю минуту постстрессорного периода содержание НА в дорсальном гиппокампе было достоверно выше у иммунизированных коньюгатом ДА с БСА поведенчески пассивных крыс по сравнению с неиммунизированными коньюгатом поведенчески пассивными животными.

300 -

> 250 1

Г 200 -

; 150 ;

-40 мин -20 мин исходное состояние

)-20 мин 20-40 40-60 стрессорная нагрузка

Им

0-20 мин 20-40 40-60 мин постстрессорный период

Рис. 12. Содержание НА в дорсальном пшпокампе у ненмыунизированных коньюгатом (контрольных) крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и иостстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

* - р<0,05 по сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 по сравнению с поведенчески пассивными крысами.

-40 мин -20 мин исходное состояние

>-20 мин 20-40 40-60 стрессорная нагрузка

0-20 мин 20-40 40-60 мин постстрессорный период

Рис. 13. Содержание НА в дорсальном пшпокампе у иммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и иосгстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные жизотные.

* - р<0,05 по сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 по сравнению с поведенчески пассивными крысами.

Таким образом, иммунизация поведенчески активных крыс коньюгатом ДА с БСА сопровождалась снижением содержания НА в дорсальном гиппокампе в начальные 20 минут иммобилизационной стрессорной нагрузки и во время часового постстрессорного периода. У поведенчески пассивных крыс иммунизация коньюгатом ДА с БСА сопровождалась возрастанием содержания НА в дорсальном пшпокампе в заключительные 20 минут часового постстрессорного периода.

VIH. Содержание дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе в динамике стрессорной нагрузки и постстрессорного периода у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом глутамата с БСА

Опыты проведены на 24 крысах самцах Вистар, из которых 11 были активными и 13 пассивными по поведению в ОП. Опыты по измерению уровня антител к ГЛУ показали, что через четыре недели после начала иммунизации крыс коньюгатом ГЛУ с БСА в их крови выявляются антитела к ГЛУ в титре 1:512-1:1024. Содержание нейромедиаторов исследовали в дорсальном гиппокампе через четыре недели после начала иммунизации крыс коньюгатом ГЛУ с БСА на фоне повышенного содержания антител к ГЛУ в крови.

Содержание дофамина в дорсальном гиппокампе у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА

Результаты опытов показали, что у неиммунизированных коньюгатом (контрольных) крыс этой серии профиль содержания ДА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобшшзационной нагрузки и постстрессорного периода достоверно не отличался от содержания ДА в динамике у неиммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс предыдущей опытов (рис. 10).

Результаты опытов по изучению содержания ДА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобшшзационной нагрузки и часового постстрессорного периода у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА поведенчески активных и пассивных крыс представлены па рис. 14.

У поведенчески активных крыс после их иммунизации коньюгатом ГЛУ с КСА была выявлена тенденция к снижению содержания ДА по сравнению с исходными его значениями во время часовой иммобилизации и в течение часового постстрессорного периода. Содержание ДА с 20й минуты иммобилизационной нагрузки до ее окончания было достоверно выше у неиммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс по сравнению с иммунизированными коньюгатом активными животными. Возрастание содержания ДА в дорсальном гиппокампе с 40й минуты иммобилизационной нагрузки до ее окончания, обнаруженное у неиммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс, не было выявлено у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА активных животных.

Содержание ДА в дорсальном гиппокампе у поведенчески пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА, достоверно возрастало по сравнению с

исходными значениями в интервале с 20й по 60ю минуту иммобилизационной нагрузки, также содержание ДА превышало исходные значения в начальные 40 минут последующего постстрессорного периода. Содержание ДА с 20й минуты часовой иммобилизационной сгрессорной нагрузки до ее окончания и затем в последующие 40 минут постстрессорного периода было достоверно выше у иммунизированных коньюгатом поведенчески пассивных крыс по сравнению с неиммунизированными коньюгатом пассивными животными.

350 ;

300

§ 250 -

2 200-

§150-

ЭД я

-40 мин -20 мин исходное состояние

Рис. 14. Содержание ДА в дорсальном гигаюкампе у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и носгстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

* - р<0,05 по сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 по сравнению с поведенчески активными крысами.

Таким образом, иммунизация коньюгатом ГЛУ с БСА у поведенчески пассивных крыс выражено изменяла содержание ДА в дорсальном гиппокампе в динамике стрессорной нагрузки и постстрессорного периода. Содержание ДА у поведенчески пассивных неиммунизированных коньюгатом крыс снижалось с 20й минуты иммобилизационной нагрузки, оставалось сниженным в течение всей продолжительности стрессорного воздействия и затем в течение последующих 40 минут постстрессорного периода. После иммунизации поведенчески пассивных крыс коньюгатом ГЛУ с БСА содержание ДА у них возрастало в указанных интервалах иммобилизационной нагрузки и постстрессорного периода.

>-20 мин 20-40 40-60 стрессорная нагрузка

0-20 мин 20-40 40-60 г. постстрессорный период

Содержание норадреналина у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА

Результаты опытов показали, что у неиммунизированных коньюгатом (контрольных) крыс этой серии профиль содержания НА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной нагрузки и постстрессорного периода достоверно не отличался от содержания НА в динамике у неиммунизированных коньюгатом ДА с БСА крыс предыдущей серии опытов (рис. 12).

Результаты опытов по изучению содержания НА в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной стрессорной нагрузки и часового постстрессорного периода у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА поведенчески активных и пассивных крыс представлены на рис. 15.

Рис. 15. Содержание НА в дорсальном гиппокампе у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и постстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные. * - р<0,05 по сравнению с исходным состоянием; р - р<0,05 но сравнению с поведенчески пассивными крысами.

Содержание НА у иммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс с 40й по 60ю минуту иммобилизационной нагрузки, а также с 20й по 40ю минуту постстрессорного периода достоверно превышало исходные значения. В начальные 20 минут стрессорного воздействия содержание НА в дорсальном гиппокампе у иммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс было достоверно ниже по сравнению с неиммунизированными коньюгатом поведенчески активными животными.

Содержание НА в дорсальном гиппокампе у поведенчески пассивных крыс на всем протяжении иммобилизационной нагрузки и постстрессорного периода достоверно не изменялось по сравнению с исходными его значениями у этих животных. В интервале с 20й по 40ю минуту иммобилизационной нагрузки содержание НА было достоверно ниже

у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА пассивных животных по сравнению с неиммунизиро ванными коньюгатом поведенчески пассивными крысами.

Таким образом, иммунизация крыс копьюгатом ГЛУ с БСА изменяла профиль содержания НА в дорсальном гиппокампе во время стрессорной нагрузки и постстрессорного периода у поведенчески активных и пассивных крыс. У иммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс в начальные 20 минут иммобилизационной нагрузки содержание НА в дорсальном гиппокампе было достоверно ниже по сравнению с неиммунизиро ванными коньюгатом поведенчески активными животными. У иммунизированных коньюгатом поведенчески пассивных крыс содержание НА в дорсальном гиппокампе в интервале с 20й по 40ю минуту иммобилизационной нагрузки было достоверно ниже по сравнению с неиммунизированными коньюгатом поведенчески пассивными животными.

Следует отметить, что на фоне иммунизации коньюгатом ГЛУ с БСА содержание НА у поведенчески активных крыс в заключительные 20 минут постстрессорного периода достоверно превышало его содержание у пассивных животных. У неиммунизированных коньюгатом крыс в заключительные 20 минут постстрессорного периода было выявлено аналогичное превышение у поведенчески активных по сравнению с пассивными.

Содержание глутамата у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА

Результаты опытов по изучению содержания ГЛУ в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной нагрузки и часового постстрессорного периода у поведенчески активных и пассивных неиммунизированных коньюгатом (контрольных) крыс представлены на рис. 16.

Содержание ГЛУ в дорсальном гиппокампе у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом крыс недостоверно снижалось по сравнению с исходными значениями во время иммобилизационной нагрузки. Достоверное снижение содержания ГЛУ по сравнению с исходными значениями было выявлено у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом крыс с 20й минуты исследованного часового постстрессорного периода до его окончания.

-40 мин -20 мин исходное состояние

3-20 мин 20-40 40-60 стрессорная нагрузка

0-20 мин 20-40 40-60 мин постстрессорный период

Рис. 16. Содержание ГЛУ в дорсальном гиннокампе у неиммунизированных коньюгатом (контрольных) крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и постстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

* - р<0,05 но сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 но сравнению с поведенчески активными крысами.

350 300 I 250

С1

о 200 -

-40 мин -20 мин исходное состояние

1-20 мин 20-40 40-60 стрессорная нагрузка

0-20 мин 20-40 40-60 мин постстрессорный период

Рис. 17. Содержание ГЛУ в дорсальном гиннокампе у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузкн и постстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

Содержание ГЛУ в дорсальном гиппокампе у поведенчески пассивных неиммунизированных коньюгатом крыс достоверно возрастало по сравнению с исходными значениями в начальные 20 минут стрессорпого воздействия, после чего в течение оставшихся 40 минут иммобилизационной нагрузки уровень ГЛУ не отличался достоверно от значений в исходном состоянии покоя. Содержание ГЛУ в дорсальном гиппокампе у неиммунизированных коньюгатом поведенчески пассивных крыс достоверно возрастало сразу после окончания стрессорпого воздействия. В начальные 20 минут постстрессорного периода содержание ГЛУ у поведенчески пассивных

неиммунизированных коньюгатом крыс достоверно превышало исходные значения содержания ГЛУ у этих животных.

Содержание ГЛУ в дорсальном гиппокампе у поведенчески пассивных неиммунизированных коньюгатом крыс в начальные 20 минут стрессорной нагрузки и в течение исследованного часового постстрессорного периода достоверно превышало его содержание у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом животных.

Результаты опытов по изучению содержания ГЛУ в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной нагрузки и часового постстрессорного периода у поведенчески активных и пассивных иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс представлены на рис. 17.

Проведенные опыты показали, что содержание ГЛУ в дорсальном гиппокампе у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА поведенчески активных и пассивных крыс в динамике иммобилизационной нагрузки и постстрессорного периода не изменялось по сравнению с исходными его значениями у этих животных. При этом у поведенчески пассивных крыс после иммунизации коньюгатом ГЛУ с БСА не было выявлено достоверного возрастания содержания ГЛУ в дорсальном гиппокампе в начальные 20 минут стрессорного периода и в начальные 20 минут постстрессорного периода, которое было обнаружено у неиммунизированных коньюгатом поведенчески пассивных животных. У поведенчески активных крыс после их иммунизации коньюгатом не было обнаружено снижения содержания ГЛУ в дорсальном гиппокампе с 20й по 60ю минуту постстрессорного периода, которое было выявлено у неиммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс.

Содержание ГАМК у активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА

Результаты опытов по изучению содержания ГАМК в дорсальном гиппокампе в динамике иммобилизационной нагрузки и часового постстрессорного периода у неиммунизированных коньюгатом (контрольных) поведенчески активных и пассивных крыс представлены на рис. 18.

Проведенные опыты показали, что содержание ГАМК у поведенчески активных неиммунизированных коньюгатом крыс во время иммобилизационной нагрузки достоверно возрастало по сравнению с его уровнем в исходном состоянии покоя. В интервале с 40й по 60ю минуту постстрессорного периода содержание ГАМК у этих животных достоверно снижалось по сравнению с исходными значениями.

700

600

X в о 500

400

X 5 300

8 к 200

100-

Л Ов

-40 мин -20 мин исходное состояние

1-20 мин 20-40 40-60 стрессормая нагрузка

□4 Д

0-20 мин 2040 40-60 мин постстресеорный период

Рис. 18. Содержание ГАМК в дорсальном гипнокампе у неиммунизированных коньюгатом (контрольных) крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной на|рузки и носгстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

* - р<0,05 но сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 но сравнению с поведенчески пассивными крысами.

700

600

¡ПО

о 400 о

5 зоо

1 200 ь-

^ 100

-40 мин -20 мин исходное состояние

0-20 мин 20-40 40-60 ь постстресеорный период

Рис. 19. Содержание ГАМК в дорсальном гиппокампе у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс в динамике исходного состояния, иммобилизационной нагрузки и носгстрессорного периода. Белые столбики - поведенчески активные крысы, черные столбики - поведенчески пассивные животные.

* - р<0,05 по сравнению с исходным состоянием;

# - р<0,05 по сравнению с поведенчески пассивными крысами.

У поведенчески пассивных неиммунизированных коньюгатом животных содержание ГАМК достоверно снижалось с 40й по 60ю минуту часовой иммобилизационпой нагрузки по сравнению с исходными значениями и оставалось ниже исходных значений в течение начальных 20 минут посгстрессорного периода.

Содержание ГАМК во время иммобилизационной нагрузки и в следующие за ее окончанием начальные 20 минут постстрессорного периода было достоверно выше у неиммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс по сравнению с неиммунизированными коньюгатом пассивными животными.

Результаты опытов по изучению содержания ГАМК в дорсальном шппокампе в динамике иммобилизационпой нагрузки и постстрессорного периода у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА поведенчески активных и пассивных крыс представлены на рис. 19.

Содержание ГАМК у поведенчески активных иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА крыс в интервале с 40й по 60ю минуту иммобилизационпой нагрузки достоверно возрастало по сравнению с его исходными значениями у этих животных. Достоверно превышающий исходные значения уровень ГАМК был выявлен у иммунизированных коньюгатом поведенчески активных животных в течение всего исследованного часового постстрессорного периода. Содержание ГАМК у иммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс по сравнению с неиммунизированными коньюгатом поведенчески активными животными было достоверно ниже в начальные 40 минут стрсссорного воздействия. Однако в течение исследованного часового постстрессорного периода содержание ГАМК у иммунизированных коньюгатом поведенчески активных крыс достоверно превышало содержание у неиммунизированных коньюгатом поведенчески активных животных.

У поведенчески пассивных крыс иммунизация коньюгатом ГЛУ с БСА не сопровождалась изменением содержания ГАМК в дорсальном гиппокампе по сравнению с неиммунизированными коньюгатом поведенчески пассивными животными. Содержание ГАМК в заключительные 20 минут стрессорной нагрузки и последующие начальные 40 минут постстрессорного периода было достоверно выше у иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА поведенчески активных крыс по сравнению с иммунизированными коньюгатом поведенчески пассивными животными.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучено участие антител к дофамину и глутамату в механизмах стрессорных реакций у крыс с различной поведенческой активностью, отражающей их прогностическую устойчивость к эмоциональному стрессу. Показано, что антитела к дофамину и глутамату различного происхождения меняют стрессорные поведенческие реакции крыс. Проведенные опыты показали, что через четыре недели после иммобилизационных стрессорных нагрузок в крови как активных, так и пассивных крыс обнаруживаются повышенные уровни аутоантител к дофамину и глутамату. Возрастание в крови уровня аутоантител к дофамину и глутамату сопровождается изменением состояния органов мишеней стрессорных нагрузок и изменением поведения избегания

электрокожного воздействия. У поведенчески активных крыс при повышении в крови уровня аутоантител к дофамину и глутамату через четыре недели после стрессорных воздействий выявлено повышение массы надпочечников, а у поведенчески пассивных животных - повышение массы тимуса. Повышение уровня аутоантител в крови к дофамину и глутамату после стрессорных нагрузок у пассивных крыс сопровождалось в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание» изменением стрессорных поведенческих реакций. На фоне повышенного после стрессорных нагрузок уровня аутоантител у пассивных животных выявлено сокращение латентного периода избегания электрокожного воздействия при повторном предъявлении теста условно-рефлекторное пассивное избегание.

При иммунизации крыс коньюгатом дофамина с БСА в их крови повышается уровень антител к дофамину. Показано, что возрастание в крови уровня антител к дофамину на фоне иммунизации коньюгатом сопровождалось после стрессорной нагрузки удлинением времени нахождения поведенчески активных крыс в светлом отсеке теста «Условно-рефлекторное пассивное избегание» и не изменяло состояние надпочечников. Повышение в крови уровня антител к глутамату на фоне иммунизации крыс коньюгатом глутамата с БСА изменяло после иммобшшзационной стрессорной нагрузки стрессорные поведенческие реакции активных крыс и состояние надпочечников. У активных крыс на фоне повышенного уровня антител к глутамату выявлено после стрессорной нагрузки сокращение латентного периода избегания электрокожного воздействия при втором тестировании в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание». При этом у активных крыс было выявлено после стрессорной нагрузки снижение массы надпочечников, сопровождавшееся снижением содержания кортикостерона в крови.

У пассивных по поведению в «Открытом поле» крыс возрастание в крови уровня антител к глутамату после их иммунизации коньюгатом глутамата с БСА сопровождалось усилением действия блокатора глутаматных ИМЛА рецепторов на стрессорные поведенческие реакции. При этом после стрессорной нагрузки сокращался латентный период избегания ноцицептивного воздействия у пассивных крыс при повторном тестировании в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание».

На фоне иммупизации крыс коньюгатом глутамата с БСА в динамике стрессорного воздействия и постстрессорного периода в дорсальном гиппокампе меняется содержание дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК. Выявленные методом микродиализа особенности влияния антител на содержание дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе имели различный характер у животных с разным

уровнем поведенческой активности в тесте «Открытое поле». Проведенные нами исследования показали, что у активных иммунизированных коньюгатом глутамата с БСА крыс на фоне повышенного в крови уровня антител к глугамату наблюдается возрастание содержания ГАМК в дорсальном гиппокампе в постстрессорном периоде. При исследовании профиля содержания глутамата в дорсальпом гиппокампе у крыс, иммунизированных коньюгатом глутамата с БСА, обнаружено, что на фоне повышенного уровня антител к глугамату у поведенчески пассивных животных снижается содержание глутамата в начале стрессорного воздействия и постстрессорного периода. На фоне иммунизации коньюгатом глутамата с БСА снижался уровень дофамина у активных и повышался у пассивных крыс. Иммунизация коньюгатом глутамата не оказывала выраженного действия на содержание норадреналина у поведенчески активных и пассивных крыс.

Возрастание в крови уровня антител к дофамину после иммунизации крыс коньюгатом дофамина с БСА, как показали проведенные нами опыты, сопровождается иным характером изменений содержания дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе в динамике стрессорного воздействия и постстрессорного периода. На фоне иммунизации коньюгатом дофамина с БСА у активных и пассивных крыс во время стрессорного воздействия и постстрессорного периода выявлено повышение уровня дофамина в дорсальном гиппокампе. Иммунизация коньюгатом дофамина с БСА сопровождается снижением уровня норадреналина у поведенчески активных и его повышением у пассивных крыс в динамике стрессорной нагрузки и постстрессорного периода.

Проведенное нами исследование показало, что антитела различного происхождения к нейромедиаторам дофамину и глугамату изменяют стрессорные поведенческие реакции у крыс. Влияние антител при этом имеет разный характер у животных с высоким и низким уровнем поведенческой активности в тесте «Открытое поле», отражающим их прогностическую устойчивость к эмоциональному стрессу. Изменение стрессорных поведенческих реакций при повышении в крови уровня аутоантител к дофамину и глугамату после стрессорных нагрузок отличается от изменения поведения у крыс при их иммунизации коньюгатами нейромедиаторов с БСА. Изменение стрессорных поведенческих реакций у крыс при повышенном уровне антител к дофамину и глутамату в крови сопровождается изменением органов мишеней эмоционального стресса. Возрастание уровня антител к дофамину и глугамату в крови изменяет динамику содержания дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе во

время стресеорной нагрузки и постстрессорного периода. При этом после иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата с БСА поведенчески активные и пассивные крысы характеризуются различной интеграцией содержания дофамина, норадреналина, глутамата и ГЛМК в дорсальном гиппокампе при возрастании в крови уровня антител к дофамину и глутамату.

ВЫВОДЫ

1. Стрессорные нагрузки приводят у крыс к возрастанию уровня аутоантител к дофамину и глутамату в крови. Возрастание уровня аутоантител в крови к дофамину и глутамату после стрессорных нагрузок сопровождается изменениями стрессорных поведенческих реакций и состояния надпочечников и тимуса. Обнаруженные особенности имеют различный характер у крыс с разным уровнем поведенческой активности в тесте «Открытое поле», отражающим их прогностическую устойчивость к эмоциональному стрессу.

2. Возрастание уровня антител к глутамату при иммунизации коньюгатом глутамата с БСА сопровождается у поведенчески активных крыс изменением стрессорных поведенческих реакций. У активных иммунизированных крыс сокращается время избегания электрокожного раздражения в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание».

3. Повышенный уровень антител к глутамату при иммунизации крыс коньюгатом глутамата с БСА сопровождается у активных крыс снижением уровня кортикостерона в крови как нестрессировашплх, так и подвергнутых стрессорным нагрузкам крыс.

4. На фоне повышенного уровня антител к глутамату при иммунизации крыс коньюгатом глутамата с БСА у поведенчески пассивных крыс обнаружено изменение действия блокатораглутаматпых ИШ)А рецепторов на поведение избегания электрокожного воздействия в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание». У поведенчески пассивных крыс на фоне повышенного уровня антител к глутамату в крови после стрессорной нагрузки выявлено сокращение времени избегания электрокожного раздражения в тесте «Условно-рефлекторное пассивное избегание».

5. Возрастание уровня антител к дофамину и глутамату в крови у крыс изменяет во время стрессорного воздействия и в постстрессорном периоде динамику содержания дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в дорсальном гиппокампе. Возрастание уровня антител к дофамину после иммунизации коньюгатом дофамина с БСА сопровождается у поведенчески активных и пассивных крыс возрастанием содержания дофамина в дорсальном гиппокампе во время стрессорной нагрузки и постстрессорного

периода. Возрастание уровня антител к глутамату после иммунизации коньюгатом глутамата с БСА сопровождается у поведенчески активных и пассивных крыс снижением содержания норадреналина в дорсальном гиппокампе.

6. Поведенчески активные и пассивные крысы при возрастании уровня антител к дофамину и глутамату в крови после иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата с БСА характеризуются различным содержанием в дорсальном гиппокампе дофамина, норадреналина, глутамата и ГАМК в динамике стрессорного воздействия и постстрессорного периода. На фоне возросшего уровня антител к глутамату у поведенчески активных крыс в постстрессорном периоде возрастает содержание ГАМК и во время стрессорной нагрузки и постстрессорного периода снижается содержание дофамина в дорсальном гиппокампе. У поведенчески пассивных животных снижается содержание глутамата в начальных стадиях стрессорного воздействия и постстрессорного периода, а также повышается содержание дофамина во время стрессорного воздействия и в постстрессорном периоде. На фоне повышенного уровня антител к дофамину содержание норадреналина у поведенчески активных крыс снижается, а у поведенчески пассивных - возрастает.

7. Возрастание в крови уровня антител к дофамину и глутамату различного происхождения сопровождается изменениями паттерна стрессорных поведенческих реакций и состояния органов маркеров стресса у крыс. Иммунизация крыс коньюгатами дофамина и глутамата с БСА наряду с изменением поведения в динамике стрессорного воздействия и постстрессорного периода меняет интеграцию нейромедиаторов в дорсальном гиппокампе. При этом усиливается действие блокатора глутаматных NMDA рецепторов на стрессорные поведенческие реакции. Выявленные закономерности имеют разный характер у поведенчески активных и пассивных крыс.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Умрюхип А.Е.. Судаков К.В. Поведение в открытом поле и состояние надпочечников и тимуса у крыс после стрессорных нагрузок при возрастании в крови уровня аутоаитител к дофамину и глутамату // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2013. Т. 155. № 5. С. 532-535.

2. Умрюхип А.Е. Антитела в механизмах вегетативных и поведенческих функций организма // Фундаментальные исследования. 2013. № 3. С. 425-430. URL: http://rae.m/fs/?scction=content&op=show_article&article_id=10000568 (дата обращения: 08.04.2013).

3. Умрюхип А.Е. Нейромедиаторные гиппокампальные механизмы стрессорного поведения и реакций избегания // Вестник новых медицинских технологий. 2013. №

1. URL: htty://medtsu.tuIa.ru/VNMT/Bulletin/E2013-l/4240.pdf (дата обращения 08.04.2013).

4. Умрюхии А.Е.. Чекмарева Н.Ю., Сотников C.B., Ветрилэ Л .А., Захарова И.А. Микродиализное исследование содержания глутамата и ГАМК в дорсальном шппокампе у крыс на фоне иммунизации коньюгатом глутамата с бычьим сывороточным альбумином // Неврологический вестник. 2013. T. XLV, № 1. С. 27-33.

5. Умрюхнн А.Е.. Чекмарева Н.Ю., Сотников C.B., Ветрилэ Л.А., Захарова И.А. Поведение крыс в тесте «Условно рефлекторное пассивное избегание» после стрессорной нагрузки на фоне иммунизации коньюгатом глутамата с БСА // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2013. №

2. С. 52-55.

6. Sudakov S.K., Bashkatova V.G., Proskuriakova T.V.. Umriukhin A.E. Effects of peripherally acting opioid ligands on central opioid receptors and ß-endorphin release in stressed rats II Journal of behavioral and brain science. 2012. № 2. P. 162-166.

7. Судаков C.K., Башкатова В.Г., Колпаков A.A., Умрюхии A.B. Центральная и периферическая мю-опиоидная система в механизмах эмоционального стресса // Вестник Российской академии медицинских наук. 2011. № 3. С. 3-6.

8. Судаков К.В., Иванова Е.А., Коплик Е.В. Котов A.B., Кравцов А.Н., Мещеряков А.Ф., Перцов С.С., Сотников C.B., Умрюхии А.Е- Умрюхии П.Е. Иммунные звенья системной организации поведения II Журнал Успехи физиологических наук. 2011. Т.42. №3. С. 81-96.

9. Судаков С.К., Сотников C.B., Чекмарева Н.Ю., Колпаков A.A., Чумакова Ю.А., Умпюхни А.Е. Изменения уровня b-эидорфина в поясной коре мозга крыс при периферическом введении лоперамида и метилналоксона в покое и во время эмоционального стресса // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т.148, №2. С. 124-126.

10. Сотников C.B., Степанюк В.Л., Умпюхип А.Е. Влияние стрессорной нагрузки на содержание ФНО-альфа и Ил-4 в крови крыс, активных и пассивных по поведению в тесте открытое поле И Журнал высшей нервной деятельности имени И.П. Павлова. 2009. Т.59, №6. С. 736-742.

11. Ветрилэ Л .А., Евсеев В.А., Умрюхии А.Е.. Кравцов А.Н., Сотников C.B., Захарова И.А. Аутоантитела к нейромедиаторам в механизмах развития стрессорных реакций у крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008. Т.146. №12. С.623-627.

12. Умрюхии А.Е., Дюкарева Е.В., Ветрилэ Л.А., Трекова П.А., Кравцов АН., Евсеев

В А., Судаков К.В. Динамика содержания дофамина и норадреиалина в дорсальном шппокампе у крыс при их иммунизации коньюгатом дофамина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. Т.143-. Jfe4. С-374-377.

13. Ум рюхи и А.Е.. Кравцов А.Н., Ветрилэ Л .А., Трекова H.A., Евсеев В.А., Судаков К.В. Стрессорные реакции у крыс в условиях иммунизации к серотонину // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. Т. 140. № 12. С. 604-607.

14. Умрюхии А.Е.. Кравцов А.Н. Взаимодействие иитерлейкииа 2 с норядреналином на отдельных нейронах дорзалыюго гиппокампа крыс: влияние эмоциональной стрессорной нагрузки // Российский Физиологический Журнал им. ILM. Сеченова. 2004. Т.90. №8. С. 94-95.

15. А.Н. Кравцов, А.Е. Умрюхии. Нейрональные и поведенческие эффекты медиаторов иммунной системы // Аллергология и иммунология. 2004. Т. 5. №1. С. 194-195.

16. Bashkatova V., Prast H., Umriukhin A.. Sudakov S. Interactions of peripheral and central ц opioid systems during emotional stress//BMC Pharmacology 2010. N. 10(Suppl 1): AI3. http://www.bi0medcentral.c0m/l 471 -2210/10/S1/A13

17. Умрюхин А.Е.. Кравцов А.Н., Чекмарева Н.Ю., Сотников C.B., Ветрилэ Л.А., Захарова И.А., Евсеев В.А., Судаков К.В. Эффекты иммунизации крыс коньюгатами дофамина и глутамата с БСА при введении антагонистов Д1 и NMDA рецепторов // Патогенез. 2010. Т. 8. №1. С. 62.

18. Ветрилэ Л.А., Умрюхин А.Е.. Кравцов А.Н., Сотников C.B., Захарова И.А. Аутоантитела к нейромедиаторам при психоэмоциональном стресс-синдроме. // Патогенез. 2008. Т. 6. № 2. С. 38-39.

19. Кравцов А.Н., Умрюхин А.Е.. Дюкарева Е.В., Ветрилэ Л.А., Трекова H.A. Иммунизация крыс коньюгатом дофамина с бычьим сывороточным альбумином: поведение животных и содержание дофамина в дорзальном гиппокампе в условиях стрессорной нагрузки // 2006. Патогенез. №1. С. 58.

20. Умрюхин А.Е.. Чекмарева Н.Ю., Сотников C.B., Кравцов А.Н., Умрюхин П.Е., Захарова И.А., Ветрилэ JI.А.,Судаков К.В. Кортикостерон у активных и пассивных крыс на фоне иммобилизации: влияние иммунизации крыс коньюгатом глутамата с БСА: Седьмой международный междисциплинарный конгресс «Нейронаука для медицины и психологии» Судак, Украина 2011. С. 424-425.

21. Чекмарева Н.Ю., Умрюхин А.Е.. Сотников C.B., Судаков К.В. Динамика содержания норадреналина в дорсальном гиппокампе и результативное поведение активных и пассивных крыс на фоне иммобилизационной стрессорной нагрузки. Седьмой международный междисциплинарный конгресс «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2011. С. 448.

22. Кравцов А.Н., Умрюхин А.Е.. Сотников C.B., Чекмарева Н.Ю., Ветрилэ Л.А., Захарова И.А., Судаков К.В. Роль центральных глутаматергических механизмов в формировании результативного поведения крыс в тесте УРПИ: Научные труды III Съезда физиологов СНГ. Ялта, Украина. 2011. С. 87-88.

23. Умрюхин А.Е.. Кравцов А.Н., Чекмарева Н.Ю., Сотников C.B., Ветрилэ Л.А., Захарова И. А., Евсеев В. А., Судаков К.В. Стрессорные реакции крыс в условиях иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата : XXI Съезд физиологического общества имени И.П. Павлова. 19-25 сентября 2010 года. Калуга. С. 631-632.

24. Чекмарева Н.Ю., Сотников C.B., Умрюхин А.Е.. Судаков К.В. Содержание норадреналина в дорсальном гиппокампе в условиях иммобилизации у крыс с разной поведенческой активностью: влияние интерлейкина 1 бета: XXI Съезд физиологического общества имени И.П. Павлова. Калуга.19-25 сентября 2010 года. С. 666.

25. Кравцов А.Н., Умрюхин А.Е.. Чекмарева Н.Ю., Сотников C.B., Судаков К.В. Содержание ИЛ-4 и ФНОа в крови крыс с разной поведенческой активностью в условиях стрессорной нагрузки : XXI Съезд физиологического общества имени И.П. Павлова. Калуга. 19-25 сентября 2010 года. С. 309-310.

26. Горностаев Д.В., Умрюхин А.Е. Морфофункциональная организация аденогипофиза, надпочечников и тимуса у крыс с различной поведенческой активностью после иммобилизационной стрессорной нагрузки: Итоговая научная конференция молодых исследователей с международным участием «Татьянин день». Москва. 2010. С. 34-35.

27. Кравцов А.Н., Сотников C.B., Умрюхин П.Е., Умрюхин А.Е. Цитокины крови у крыс с разной поведенческой активностью: влияние иммобилизационной стрессорной нагрузки: Шестой международный междисциплинарный конгресс «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2010. С, 175.

28. Kravtsov A.N., Umryukhin P.E., Sotnikov S.V., Chekmareva N.Yu, Umryukhin A.E. Concentration of IL-4 and TNF A after immobilization stress exposure in blood of rats with different behavioral activity: First International Interdisciplinary Congress "Modern Problem in Systemic Regulation of Physiological Functions". Safaga, Egypt. 2010. pp. 114-116.

29. Umriukhin A.E.. Sotnikov S.V., Kravtsov A.N., Vetrile L.A., Zaharova I.A. Microdialysis study of dopamine and serotonin content in dorsal hippocampus of rats immunized by dopamine- and glutamate-bsa conjugates: influence of stress: II International Symposium "Interaction of the nervous and immune systems in health and disease". 2009. P.70.

30. Умрюхин A.E.. Сотников C.B., Кравцов А.Н., Ветрилэ Л.А., ЗахароваИ.А., Судаков К.В. Стрессорная нагрузка крыс в условиях иммунизации коньюгатом дофамина с бычьим сывороточным альбумином: эффекты блокады дофаминовых Д1 рецепторов: Материалы пятого международного междисциплинарного Конгресса «Нейропаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2009. С. 225-226.

31. Захарова И.А., Ветрилэ Л.А., Умрюхин А.Е.. Кравцов А.Н., Сотников C.B. Нейроиммунные взаимодействия при психоэмоциональном стресс-синдроме. Антитела к глутамату и гамма-аминомасляной кислоте: Материалы пятого международного междисциплинарного Конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2009. С. 108-109.

32. Умрюхин А.Е.. Кравцов А.Н., Сотников C.B., Евсеев В.А., Ветрилэ Л.А., Судаков К.В. Эндогенные антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных реакций: Материалы четвертого международного междисциплинарного Конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2008. С. 302-304.

33. Кравцов А.Н., Умрюхин А.Е.. Сотников C.B., Ветрилэ Л.А., Евсеев В.А. Влияние иммунизации крыс коньюгатом глутамата на нейрохимические процессы в дорсальном гиппокампе при эмоциональном стрессе: Материалы четвертого международного междисциплинарного Конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2008. С. 166-167.

34. Умрюхин П.Е., Сотпиков C.B., Умрюхин А.Е. Содержание про- и антивоспалительных цитокинов в крови крыс при стрессорной нагрузке после введения пептида дельта-сна: Материалы четвертого международного междисциплинарного Конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2008. С. 305-306.

35. Сотников C.B., Умрюхин А.Е. Содержание про- и антивоспалительных цитокинов в крови крыс с разной поведенческой активностью в открытом поле после иммобилизационной нагрузки: Материалы четвертого международного междисциплинарного Конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2008. С. 284-285.

36. Умрюхин А.Е.. Кравцов А.Н., Сотников C.B., Ветрилэ Л.А., Евсеев В.А., Судаков К.В. Иммунные факторы в механизмах индивидуальной устойчивости крыс к эмоциональному стрессу: Научные труды II Съезда физиологов СНГ. Кишинев, Молдова. 2008. С. 230-231.

37. Умрюхин П.Е., Умрюхин А.Е. Влияние пептида дельта-сна на уровень цитокинов крови крыс при стрессе: Научные труды II Съезда физиологов СНГ. Кишинев, Молдова. 2008. С. 235.

38. Умрюхин А.Е.. Ветрилэ Л.А., Трекова H.A., Кравцов А.Н., Дюкарева Е.В., Сотников C.B. Влияние иммунизации крыс коньюгатом глутамата с бычим сывороточным альбумином на основные проявления эмоционального стресса. // Патогенез, приложение 1.2007. С. 2425.

39. Дюкарева Е.В., Умрюхин А.Е. Интерлейкин-1 бета в механизмах отрицательных эмоциональных реакций при раздражении вентромедиапьного гипоталамуса у крыс: Материалы третьего международного междисциплинарного Конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2006. С. 87-88.

40. Умрюхин А.Е.. Дюкарева Е.В., Сотников C.B. Индивидуальная устойчивость к эмоциональному стрессу при иммунизации крыс к нейромедиаторам: Материалы третьего международного междисциплинарного Конгресса «Нейронаука для медицины и психологии». Судак, Украина. 2007. С. 284-285.

Подписано в печать 05.096.2013 г. Заказ № 33 Типография ООО "Медлайн-С" 125315, г. Москва, Ленинградский пр-т, д.78, к.5 Тел. (499)152-00-16 Тираж 200 шт.

Текст научной работыДиссертация по биологии, доктора медицинских наук, Умрюхин, Алексей Евгеньевич, Москва

Первый Московский Государственный медицинский Университет

имени И.М. Сеченова Научно-исследовательский институт нормальной физиологии имени П.К. Анохина

Российской академии медицинских наук

05201351656 На пРавахРУкописи

УМРЮХИН Алексей Евгеньевич

АНТИТЕЛА К НЕЙРОМЕДИАТОРАМ В МЕХАНИЗМАХ СТРЕССОРНЫХ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

03.03.01 - Физиология

диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Научный консультант: академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор, Судаков Константин Викторович

Москва - 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ..............................................................................................................7

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.........................................................................................18

Механизмы поведения и эмоционального стресса с системных позиций

теории функциональных систем П.К. Анохина..............................................18

Индивидуально-типологические характеристики стрессорных

поведенческих реакций......................................................................................22

Нейроиммунные взаимодействия в механизмах поведения и

эмоционального стресса....................................................................................26

Роль гиппокампа в церебральных механизмах поведения и эмоционального

стресса.................................................................................................................38

МЕТОДЫ................................................................................................................45

1. Поведенческие тесты: «Открытое поле», «Условно рефлекторное пассивное избегание»........................................................................................45

2. Методика стрессорных воздействий путем иммобилизации животных с электрокожным раздражением.........................................................................46

3. Исследование состояния надпочечников и тимуса....................................46

4. Определение уровня кортикостерона в крови............................................47

5. Метод иммунизации животных коньюгатами нейромедиаторов с БСА..47

6. Определение уровня антител к дофамину и глутамату в крови...............49

7. Метод микродиализа......................................................................................51

8. Метод высокоразрешающей жидкостной хроматографии........................52

9. Введение блокаторов дофаминовых Д1 и глутаматных ЫМБА рецепторов..........................................................................................................54

10. Этические правила.......................................................................................54

11. Статистический анализ данных..................................................................54

РЕЗУЛЬТАТЫ........................................................................................................56

I. ИССЛЕДОВАНИЕ ПОВЕДЕНИЯ КРЫС В ТЕСТЕ «ОТКРЫТОЕ ПОЛЕ» ..............................................................................................................................56

II. СОДЕРЖАНИЕ АУТОАНТИТЕЛ К ДОФАМИНУ И ГЛУТАМАТУ В КРОВИ ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС ПОСЛЕ ИММОБИЛИЗАЦИОННЫХ СТРЕССОРНЫХ НАГРУЗОК........................59

2.1 Относительная масса надпочечников и тимуса у поведенчески активных и пассивных крыс после иммобилизационных стрессорных нагрузок, сопровождающихся повышением в крови уровня аутоантител

к дофамину и глутамату.................................................................................61

2.2 Поведенческие реакции в тесте «Открытое поле» у активных и пассивных по поведению крыс после иммобилизационных стрессорных нагрузок, сопровождающихся повышением в крови уровня аутоантител

к дофамину и глутамату.................................................................................64

2.3 Поведенческие реакции в тесте «Условно рефлекторное пассивное избегание» у активных и пассивных по поведению крыс после иммобилизационных стрессорных нагрузок, сопровождающихся повышением содержания в крови аутоантител к дофамину и глутамату67

III. АНТИТЕЛА К ДОФАМИНУ И ГЛУТАМАТУ В КРОВИ ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС ПОСЛЕ ИХ ИММУНИЗАЦИИ КОНЬЮГАТАМИ ДОФАМИНА И ГЛУТАМАТА С БЫЧЬИМ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ...........................................71

IV. ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В ТЕСТЕ УСЛОВНО РЕФЛЕКТОРНОЕ ПАССИВНОЕ ИЗБЕГАНИЕ У ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС ПОСЛЕ ИММУНИЗАЦИИ КОНЬЮГАТОМ ДОФАМИНА С БЫЧЬИМ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ.................................................................................................73

4.1 Относительная масса надпочечников у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ДА с БСА...................78

V. ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В ТЕСТЕ УРПИ У ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС ПОСЛЕ ИММУНИЗАЦИИ КОНЬЮГАТОМ ГЛУТАМАТА С БЫЧЬИМ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ.................................................................................................82

5.1 Относительная масса надпочечников у активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА..............................................87

5.2 Содержание кортикостерона в крови поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА................91

VI. ДЕЙСТВИЕ Б ЛОКАТОРА ДОФДМИНОВЫХ Д1 РЕЦЕПТОРОВ НА ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В ТЕСТЕ «УСЛОВНО РЕФЛЕКТОРНОЕ ПАССИВНОЕ ИЗБЕГАНИЕ» У ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС, ИММУНИЗИРОВАННЫХ КОНЬЮГАТОМ ДОФАМИНА С БЫЧЬИМ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ..............95

VII. ДЕЙСТВИЕ БЛОКАТОРА ГЛУТАМАТНЫХ NMDA РЕЦЕПТОРОВ НА ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В ТЕСТЕ «УСЛОВНО РЕФЛЕКТОРНОЕ ПАССИВНОЕ ИЗБЕГАНИЕ» У ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС, ИММУНИЗИРОВАННЫХ КОНЬЮГАТОМ ГЛУТАМАТА С БЫЧЬИМ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ...............................................................................................102

VIII. СОДЕРЖАНИЕ ДОФАМИНА И НОРАДРЕНАЛИНА В ДОРСАЛЬНОМ ГИППОКАМПЕ В ДИНАМИКЕ СТРЕССОРНОЙ НАГРУЗКИ И ПОСТСТРЕССОРНОГО ПЕРИОДА У ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС, ИММУНИЗИРОВАННЫХ КОНЬЮГАТОМ ДОФАМИНА С БЫЧЬИМ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ...............................................................................................109

8.1 Содержание дофамина в дорсальном гиппокампе у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ДА с БСА .........................................................................................................................110

8.2 Содержание норадреналина у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ДА с БСА....................................116

IX. СОДЕРЖАНИЕ ДОФАМИНА, НОРАДРЕНАЛИНА, ГЛУТАМАТА И ГАММА-АМИНОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ В ДОРСАЛЬНОМ ГИППОКАМПЕ В ДИНАМИКЕ ИММОБИЛИЗАЦИОННОЙ СТРЕССОРНОЙ НАГРУЗКИ И ПОСТСТРЕССОРНОГО ПЕРИОДА У

ПОВЕДЕНЧЕСКИ АКТИВНЫХ И ПАССИВНЫХ КРЫС, ИММУНИЗИРОВАННЫХ КОНЬЮГАТОМ ГЛУТАМАТА С БЫЧЬИМ СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ...........................................................125

9.1 Содержание дофамина в дорсальном гиппокампе у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА .........................................................................................................................126

9.2 Содержание норадреналина у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА..................................133

9.3 Содержание глутамата у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА............................................140

9.4 Содержание ГАМК у поведенчески активных и пассивных крыс, иммунизированных коньюгатом ГЛУ с БСА............................................148

ОБСУЖДЕНИЕ....................................................................................................156

Индивидуально-типологические характеристики крыс в зависимости от их

исходного поведения в тесте «Открытое поле»............................................156

Возрастание в крови уровня аутоантител к дофамину и глутамату после

повторных стрессорных нагрузок..................................................................158

Поведение пассивного избегания электрокожного раздражения у крыс при повышенном уровне аутоантител к дофамину и глутамату, вызванных

повторными стрессорными нагрузками.........................................................160

Состояние надпочечников и тимуса у крыс при повышенном уровне аутоантител к дофамину и глутамату после повторных стрессорных

нагрузок.............................................................................................................163

Стрессорные поведенческие реакции в тесте УРПИ на фоне повышенного уровня антител к дофамину и глутамату при иммунизации крыс

коньюгатами дофамина и глутамата с БСА..................................................172

Стрессорные поведенческие реакции у крыс в тесте УРПИ при введении блокаторов дофаминовых Д1 и глутаматных NMDA рецепторов на фоне иммунизации коньюгатами дофамина и глутамата с БСА..........................176

Проницаемость гематоэнцефалического барьера в механизмах действия

антител...............................................................................................................185

Мозговые нейрохимические механизмы стрессорного поведения при

иммунизации коньюгатами нейромедиаторов с БСА..................................188

Гиппокампальные ГАМКергические механизмы стрессорной нагрузки и содержание кортикостерона в крови у поведенчески активных и пассивных

крыс на фоне иммунизации коньюгатом ГЛУ с БСА..................................195

ЗАКЛЮЧЕНИЕ................................................................................:...................200

ВЫВОДЫ.............................................................................................................204

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...................................................................................207

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Острой медико-социальной проблемой в современных условиях является проблема психоэмоционального стресса. Она вызвана ускорением темпа жизни, увеличением психоэмоциональных нагрузок на людей, ростом и скученностью населения, механизацией производства, монотонней условий труда людей, действием на людей неблагоприятных факторов экологии, военными конфликтами и другими причинами. Возникающие в таких условиях психоэмоциональные перегрузки приводят к развитию значительного числа разнообразных психосоматических заболеваний, таких как депрессии, неврозы, психозы, нарушения сна, сосудистые заболевания мозга, сердечно-сосудистые заболевания, язвенно-дистрофические поражения желудочно-кишечного тракта, снижение иммунитета, онкологические заболевания, аутоиммунные процессы, ревматические заболевания, нарушения половых функций, гормональные расстройства и др. [108; 111; 112; 116; 150; 185; 186; 187; 237; 307; 333; 368; 385].

В соответствии с представлениями научной школы П.К. Анохина -К.В. Судакова психоэмоциональный стресс развивается у человека и животных в «конфликтных ситуациях», в которых субъекты ограничены в возможности удовлетворения жизненно важных биологических или социальных потребностей, т.е. достижения полезных приспособительных результатов [110; 114]. Избегание конфликтной ситуации и сопровождающие избегание положительные эмоции нивелируют патогенное действие отрицательных эмоций. Напротив, длительная невозможность удовлетворения ведущих потребностей приводит к развитию стойкого напряжения адаптивных механизмов организма и в последующем вызывает

нарушения саморегуляции физиологических процессов [137; 138; 153; 180; 227; 248].

Первичными реакциями в условиях эмоциогенных конфликтных ситуаций является формирование отрицательных эмоциональных состояний, в основе чего лежит активация лимбико-ретикулярных структур головного мозга [10; 32; 73; 81; 108; 110; 287; 296]. Среди лимбико-ретикулярных структур головного мозга в механизмах регуляции поведения в условиях психоэмоционального стресса важную роль занимает гиппокамп. Как показывают экспериментальные факты, гиппокампу принадлежит важная роль в процессе отбора и закрепления эмоционально значимых событий, в регуляции двигательной и исследовательской активности, а также в регуляции гипоталамо-гипофизарно-надпочечникового механизма адаптации к стрессогенным воздействиям [160; 170; 298].

В условиях однотипных конфликтных ситуаций у разных индивидов обнаруживается различная устойчивость разных функциональных систем гомеостатического уровня к стрессогенным нагрузкам. Это позволяет выделить в условиях однотипных конфликтных ситуаций животных, устойчивых и предрасположенных к срессу по выживанию и нарушению физиологических функций [110; 111]. Одним из прогностических критериев индивидуальной устойчивости к эмоциональному стрессу служат показатели двигательной и исследовательской активности крыс в тесте открытое поле. Крысы, активные по поведению в тесте открытое поле, проявляют признаки устойчивых, в то время как пассивные по поведению животные - признаки предрасположенных к повреждающему действию конфликтных ситуаций [66; 68].

предрасположенных к эмоциональному стрессу животных обнаружены различия в содержании в головном мозге ряда олигопептидов, таких как (3-эндорфин, пептид, вызывающий дельта сон, вещество П и другие [126; 138]. Это позволяет заключить, что в основе центральных механизмов, определяющих устойчивость к эмоциональному стрессу, лежит специфическая организация молекулярных и нейрохимических свойств нейронов эмоциогенных лимбико-ретикулярных структур - специфическая нейромедиаторная интеграция эмоционального возбуждения [138].

В церебральных механизмах эмоционального стресса и индивидуальной устойчивости к нему менее изучено участие веществ иммунной природы. Во взаимодействиях нейронов и глиальных элементов обнаружено участие иммунных факторов: цитокинов, ростовых факторов, интерферонов и антител [25; 36; 50; 53; 55; 74; 88; 95; 100; 130; 134; 148; 158; 202; 218; 316].

Известно, что иммунная, эндокринная и нервная системы объединены в организме общими регуляторными факторами пептидной и иной природы, общими рецепторными молекулами, общими сигнальными путями и клеточными элементами [2; 3; 54; 55; 74; 131]. Введен новый термин нейроиммунноэндокринной регуляции, основывающийся на представлениях о единстве этих трех искусственно разделенных регуляторных систем организма: нервной, иммунной и эндокринной [54]. Учитывая долговременный характер развертывания иммунных реакций, регуляторный спектр влияний иммунных факторов должен охватывать длительные промежутки времени [54; 74].

Факторы иммунной природы играют роль исполнительных механизмов функциональных систем гомеостатического уровня [46; 57; 80; 84; 98; 372].

Для изучения роли иммунных факторов в механизмах поведения предложен метод инверсной иммунорегуляции функций мозга [34]. Метод основан на использовании антител в качестве регуляторных биологически активных соединений. При этом происходит активация естественных путей

иммунокоррекции функции органов за счет усиленной продукции антител к различным биорегуляторам: нейротрансмиттерам, нейропептидам, нейрогормонам и другим соединениям [42]. Образование антител к эндогенным биологически активным соединениям индуцируется путем введения конъюгатов биологически активных соединений с белками. Показано изменение активности ингибитора моноаминооксидазы при иммунизации к данному ферменту. Иммунизация крыс к аминооксидазе плазмы крови изменяет сохранение и воспроизведение памятного следа в тесте «Условно рефлекторного пассивного избегания» [26; 35; 338; 79].

Показано, что медиаторами нейроиммунных взаимодействий могут выступать антитела к нейромедиаторам [42]. В исследованиях [11; 43; 44; 47; 51; 83; 90] были продемонстрированы протективные эффекты антител к дофамину и глутамату на моделях болевого и алкогольного абстинентного синдромов. Иммунизация коньюгатом дофамина с бычьим сывороточным альбумином мышей разных линий, приводящая к росту в крови уровня антител к дофамину, сопровождалась изменением уровня дофамина в коре и стриатуме, повышением активности мозговых дофаминовых рецепторов, а также разнонаправленными изменениями уровня поведенческой активности у мышей линий С57В1/6 и ВАЬВ/С. В наших предшествующих опытах было показано, что иммунизация коньюгатом серотонина с БСА способствует развитию стрессорного состояния у крыс, что сопровождается усилением язвообразования и повышением у них массы надпочечников после стрессорного воздействия [106]. В работе [42] проведен анализ результатов исследований действия иммунизации коньюгатом глутамата с БСА в условиях судорожных и болевых расстройств у крыс.

Однако, остается недостаточно изученной роль антител к дофамину и глутамату в механизмах эмоционального стресса и оборонительных поведенческих реакций у крыс с различной прогностической устойчивостью к эмоциональному стрессу. Неизвестно влияние антител к дофамину и глутамату на динамику содержания нейромедиаторов при эмоциональных

реакциях в лимбико-ретикулярных структурах головного мозга, из которых важную роль играет гиппокамп.

Цель исследования

Информация о работе

Умрюхин, Алексей Евгеньевич
доктора медицинских наук
Москва, 2013
ВАК 03.03.01

Диссертация

Антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных поведенческих реакций - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных поведенческих реакций ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных поведенческих реакций"

Текст научной работыДиссертация по биологии, доктора медицинских наук, Умрюхин, Алексей Евгеньевич, Москва

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антитела к нейромедиаторам в механизмах стрессорных поведенческих реакций
ВАК РФ 03.03.01, Физиология