Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Токсические комбинированные эффекты тяжелых металлов при их определении биологическим методом анализа на бактериях

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Крестьянинов, Павел Алексеевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основы биологического метода анализа

1.2. Живые организмы различных систематических групп, используемые в качестве аналитических индикаторов

1.2.1. Микроорганизмы как аналитические индикаторы

1.2.1.1. Основные аспекты жизнедеятельности микроорганизмов с аналитической точки зрения

1.2.1.2. Этапы количественного микробиологического анализа

1.2.1.3. Перспективные индикаторные микроорганизмы

1.2.2. Беспозвоночные как аналитические индикаторы

1.2.3. Позвоночные как аналитические индикаторы

1.3. Формирование аналитического сигнала в биологическом методе анализа

1.4. Проблема изучения синергических и антагонистических эффектов при совместном воздействии токсикантов на живые организмы

1.4.1. Синергические и антагонистические эффекты при совместном воздействии катионов тяжелых металлов на микроорганизмы

1.4.2. Синергизм и антагонизм при совместном воздействии катионов тяжелых металлов на гидробионтов

1.4.3. Специфика совместного действия катионов тяжелых металлов на сельскохозяйственные растения

1.4.4. Проблема совместного действия катионов тяжелых металлов и других токсикантов на биологические объекты

1.5. Выводы по обзору литературы

ГЛАВА 2. ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА

2.1. Оборудование, реактивы и материалы

2.1.1. Оборудование

2.1.2. Реактивы и материалы

2.2. Обоснование выбора объектов исследования

2.3. Методика исследования

2.3.1. Подготовка посуды и индикаторных организмов

2.3.2. Выполнение эксперимента

2.3.3. Математическая обработка результатов экспериментов.

ГЛАВА 3. КОМБИНИРОВАННОЕ ДЕЙСТВИЕ КАТИОНОВ

ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ НА БАКТЕРИИ.

3.1. Изучение действия смеси катионов цинка и меди на Bacillus subtilis niger

3.2. Изучение действия смеси катионов цинка и кадмия на Bacillus subtilis niger

3.3. Изучение действия смеси катионов цинка, меди и кадмия на Bacillus subtilis niger

3.4. Изучение действия смеси катионов цинка, меди, кадмия и ртути на Bacillus subtilis niger

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ ВИДА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ НА

КОМБИНИРОВАННЫЕ ЭФФЕКТЫ

4.1. Обоснование выбора питательных сред для решения поставленных задач

4.2. Способы приготовления питательных сред

4.3. Изучение комбинированного действия катионов цинка и кадмия на бактерии на выбранных питательных средах

ГЛАВА 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ

В СМЕСЯХ С УЧЕТОМ КОМБИНИРОВАННЫХ ЭФФЕКТОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Токсические комбинированные эффекты тяжелых металлов при их определении биологическим методом анализа на бактериях"

Актуальность темы

Возрастающие масштабы антропогенного воздействия на биосферу и негативные прогнозы ее состояния как на ближайшее, так и на отдаленное будущее требуют от специалистов в области различных наук консолидации усилий по выработке эффективной природоохранной стратегии. Одной из важных задач, требующих решения в рамках этой стратегии, является изучение комбинированного действия загрязняющих веществ на живые организмы. В последние десятилетия количество загрязнителей, поступающих в окружающую среду в виде промышленных, бытовых отходов, а также в результате техногенных катастроф, увеличилось в десятки раз. Современное загрязнение почти всегда подразумевает наличие в окружающей среде целого комплекса поллютантов, совместное действие которых может приводить к неожиданным эффектам. Так, специалистами в области экотоксикологии отмечаются факты несогласованности результатов биотестирования сточных вод (токсичность) и данных гидрохимического анализа ("благополучные" результаты). В качестве одной из возможных причин указываются комбинированные эффекты (синергизм) при присутствии нескольких химических веществ.

Комбинированные эффекты при действии смесей загрязнителей на биологические объекты трудно поддаются изучению. С одной стороны, система анализа, основанная на химических, физико - химических и физических методах, хотя и позволяет надежно определять малые количества веществ в воде, воздухе, пищевых продуктах и др., в то же время не обеспечивает исследователя информацией о биологической активности загрязняющих веществ. С другой стороны, биотестирование в его классическом варианте подчас дает качественные или полуколичественные результаты.

В связи с вышеисложенным, представляется актуальным исследование совместного действия приоритетных загрязнителей на живые организмы и разработка новых методов изучения комбинированных эффектов. Наиболее важным и перспективным из подобных методов является биологический метод анализа.

Биологический метод анализа - это новое и еще недостаточно развитое направление аналитической химии, использующее достижения различных отраслей биологии. Аналитическими индикаторами в данном методе служат живые организмы, преимущественно микроорганизмы и простейшие. Для биологического метода характерна специфическая методика эксперимента, аппаратура и способы количественного учета ответного сигнала индикаторного организма с применением биометрических приемов обработки экспериментальных данных. Благодаря использованию в рамках биологического метода живых организмов (индикаторных организмов), исследователь получает прямую информацию о биологической активности разнообразных веществ. Интегральность отклика индикаторного организма на действие смесей загрязняющих веществ позволяет с помощью биологического метода исследовать явления синергизма и антагонизма, с трудом поддающиеся изучению другими методами.

Цель работы. Целью данной работы явилось изучение комбинированного действия катионов тяжелых металлов на бактерии, используемые в качестве аналитических индикаторов в биологическом методе анализа. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи :

- выбрать чувствительные индикаторные организмы и наиболее опасные с экологической точки зрения катионы тяжелых металлов;

- разработать методику исследования совместного действия катионов тяжелых металлов на бактерии, включающую универсальный подход к изучению комбинированных эффектов, предполагающий их количественную оценку путем получения функциональных моделей комбинированного действия биологически активных веществ на живые организмы;

- изучить воздействие смесей катионов тяжелых металлов различной сложности на выбранные индикаторные организмы, получить и исследовать функциональные модели токсичности и комбинированных эффектов;

- провести анализ влияния вида питательной среды, используемой для культивирования индикаторных организмов, на комбинированные эффекты;

- использовать полученные функциональные модели для учета мешающего влияния катионов тяжелых металлов при их определении биологическим методом в смесях.

Положения, выносимые на защиту:

- выбор бактерий Bacillus subtilis niger в качестве индикаторных организмов для решения поставленных задач;

- методика исследования комбинированного действия катионов тяжелых металлов на бактерии;

- функциональные модели токсичности и комбинированных эффектов при действии смесей Zn2+- Cu2+, Zn2+- Cd2+, Zn2+- Cu2+- Cd2+, Zn2+-Cu2+- Cd2+- Hg2+ на Bacillus subtilis niger.

Научная новизна работы

В рамках развития биологического метода анализа разработана методика изучения комбинированного действия катионов тяжелых металлов на бактерии. Предложены бактерии Bacillus subtilis niger как аналитические индикаторы при изучении совместного действия катионов тяжелых металлов. Разработана универсальная расчетная система, позволяющая получать и анализировать функциональные модели токсичности и комбинированного действия. Созданы, изу

Л ] Л I | Л I Л г I чены и обсуждены модели действия смесей Zn - Си , Zn - Cd , Zn - Си -Cd2+, Zn2+- Cu2+- Cd2+- Hg2+ на Bacillus subtilis niger. Исследовано влияние вида питательной среды на характер и структуру комбинированных эффектов. Полученные модели применены при определении концентрации тяжелых металлов в смесях.

Практическая значимость работы

Предложенный подход к изучению комбинированного действия позволяет глубоко и всесторонне исследовать и прогнозировать совместное воздействие загрязняющих веществ на живые организмы. Информация о комбинированном действии приоритетных загрязнителей может быть использована при решении задач охраны окружающей среды. Расширяются возможности определения катионов тяжелых металлов биологическим методом при совместном присутствии.

Апробация работы, публикации

Основное содержание работы изложено в 15 работах (статей - 3, тезисов докладов - 12). Результаты работы доложены на Третьей Всероссийской конференции "Экоаналитика 98" (Краснодар, 1998), на Первом съезде токсикологов России (Москва, 1998), на Четвертой Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды "Экоаналитика - 2000" (Краснодар, 2000), на Шестой конференции "Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2000" (Новосибирск, 2000), а также на 7 молодежных сессиях и конференциях.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов, и списка литературы, включающего 98 ссылок.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Крестьянинов, Павел Алексеевич

ВЫВОДЫ

1. Предложены бактерии Bacillus subtilis niger как чувствительные аналитические индикаторы на катионы цинка, меди, кадмия и ртути. Изучено действие отдельно взятых катионов тяжелых металлов на бактерии, определены минимальные ингибирующие концентрации катионов, находя

6 -4 щиеся в интервале 4-10" - 2-10 М.

2. Разработана методика исследования комбинированного действия катионов тяжелых металлов на бактерии, включающая универсальный подход к изучению комбинированных эффектов, предполагающий их количественную оценку путем получения функциональных моделей комбинированного действия биологически активных веществ на живые организмы.

3. Впервые получены, исследованы и обсуждены функциональные модели токсичности и комбинированных эффектов при действии смесей катионов Zn2+- Cu2+, Zn2+- Cd2+, Zn2+- Cu2+- Cd2+, Zn2+- Cu2+- Cd2+- Hg2+ на Bacillus subtilis niger. Обнаружены и количественно оценены антагонистические эффекты при действии смесей катионов цинка и меди, цинка и кадмия на бактерии, и синергические - при действии смесей, включающих сочетания катионов меди и кадмия, кадмия и ртути, цинка и ртути. Показано, что добавление ртути к смеси катионов других исследованных тяжелых металлов приводит к резкому увеличению синергизма.

4. Изучено влияние вида питательной среды, используемой для культивирования индикаторных организмов, на комбинированные эффекты. Показано, что вид питательной среды влияет на структуру комбинированных эффектов и не оказывает влияния на их характер.

5. Показана возможность учета мешающего влияния катионов тяжелых металлов при их определении биологическим методом в двух- и трехкомпонентных смесях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В диссертационной работе выполнено исследование комбинированного | ^ | Л | Л | действия катионов тяжелых металлов (Zn , Си , Cd , Hg ) на бактерии, используемые в качестве аналитических индикаторов в биологическом методе анализа. Выбор комбинированных эффектов в качестве объектов исследования обусловлен значительной ролью совместного действия загрязнителей в ухудшении состояния окружающей среды и сильным влиянием определяемых веществ на аналитический сигнал при их биологическом определении в смесях.

В рамках предварительного исследования изучено действие отдельно взятых двухвалентных катионов цинка, меди, кадмия и ртути на ряд штаммов водных и почвенных бактерий, и отобраны наиболее чувствительные к данным катионам штаммы бактерий: Bacillus laterosporus 533, Bacillus sphaericus 386, Bacillus subtilis niger 723, Sarcina lutea. Для выбранных штаммов определены минимальные ингибирующие концентрации катионов тяжелых металлов, находящиеся в интервале 3 * 10"6 - 6-10"4 М.

Качественно изучено воздействия парных смесей катионов на выбранные штаммы бактерий. В среднем в 60% случаев зафиксирован синергизм, в 30% случаев аддитивный характер взаимного влияния, и в 10% случаев - антагонизм. На основании полученных данных для подробного исследования выбраны комбинированные эффекты при действии смесей катионов Zn2+ - Cu2+, Zn2+-Cd2+, Zn2+ - Cu2+ - Cd2+, Zn2+- Cu2+ - Cd2+ - Hg2+ на бактерии Bacillus subtilis niger 723.

Разработана методика исследования комбинированного действия катионов тяжелых металлов на бактерии, включающая универсальный подход к изучению комбинированных эффектов. Этот подход предполагает исследование индивидуального действия компонентов смеси на индикаторные организмы, получение функциональной модели гипотетического аддитивного действия веществ, экспериментальное изучение совместного действия веществ с получением модели токсического действия, и количественную оценку комбинированных эффектов путем формирования функциональной модели взаимного влияния компонентов исследуемой смеси на индикаторные организмы. Разработаны расчетные системы, позволяющие эффективно обрабатывать результаты, полученные согласно вышеописанной методике.

Впервые получены, исследованы и обсуждены функциональные модели токсичности и комбинированных эффектов при действии смесей катионов Zn2+-Cu2+, Zn2+- Cd2+, Zn2+- Cu2+- Cd2+, Zn2+- Cu2+- Cd2+- Hg2+ на Bacillus subtilis niger. Подтверждена достоверность полученных моделей. Средняя погрешность прогноза токсичности смесей катионов находится в пределах 8.1%-12%.

При действии смесей катионов цинка и меди, цинка и кадмия на бактерии

94- 94зафиксирован антагонизм, наиболее сильно проявляющийся в смеси Zn - Cd . При увеличении концентрации катионов характер комбинированного действия приближается к аддитивному.

При действии трехкомпонентной смеси Zn2+ -Cu2+ - Cd2+ на бактерии структура комбинированных эффектов сложнее, чем в случае двухкомпонент-ных смесей. При добавлении катионов кадмия к смеси катионов цинка и меди помимо антагонизма цинка и меди возникают два противоположных эффекта: антагонизм цинка и кадмия и синергизм меди и кадмия. Эти эффекты конкурируют между собой, что приводит к изменению общей картины комбинированного действия. По мере возрастания концентрации катионов кадмия в исследуемой системе суммарный эффект изменяется от сильного антагонизма до почти аддитивного. Л I ^ I Л 1 Л I

При действии четырехкомпонентной смеси Zn -Си - Cd - Hg на бактерии структура комбинированных эффектов значительно сложнее, чем в случае двух- и трехкомпонентных смесей. При добавлении катионов ртути к смеси катионов цинка, меди и кадмия возникают 3 дополнительных эффекта парного взаимного влияния: "ртуть - цинк" (синергизм), "ртуть - медь" (аддитивный эффект), "ртуть - кадмий" (синергизм). Это приводит к резкому увеличению синергизма в исследуемой смеси катионов.

95

Изучено влияние вида питательной среды на комбинированные эффекты на примере смеси катионов цинка и кадмия. Показано, что вид питательной среды оказывает влияние на структуру комбинированных эффектов. При этом характер совместного действия катионов тяжелых металлов на исследуемых питательных средах остается неизменным.

Предложенный в данной работе подход к изучению комбинированных эффектов позволяет успешно исследовать и прогнозировать совместное воздействие загрязняющих веществ на живые организмы, и может применяться при изучении комбинированного действия любых веществ. Информация о комбинированном действии приоритетных загрязнителей может быть использована при решении задач охраны окружающей среды. Также полученные данные расширяют возможность определения катионов тяжелых металлов биологическим методом при совместном присутствии. В связи с этим, показана возможность определения цинка в двух- и трехкомпонентных смесях тяжелых металлов с учетом комбинированных эффектов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Крестьянинов, Павел Алексеевич, Нижний Новгород

1. Омелянский В. J1. Микроорганизмы как химические реактивы. Л.: 1924. -54 с.

2. Работиова И. J1. Микроорганизмы как реагенты при количественном определении витаминов и аминокислот // Успехи соврем, биол. 1947.- Т. 23, вып. 2. С. 305 - 309.

3. Одинцова Е. Н. Микроорганизмы как биологические индикаторы на витамины // Успехи соврем, биол. 1949.- Т. 27, вып. 1. С. 63 - 72.

4. Коренман И. М. Биологические методы химического анализа // Тр. по хим. и хим. технол. Горький : 1962. № 2. - С. 437 - 444.

5. Брагинский JI. П. Проблемы аналитической химии. М. : Наука, 1977. С. 27.

6. Туманов А. А. Некоторые особенности химического анализа пленок и поиск новых методов определения малых количеств вещества // Изв. СО АН СССР. Сер. хим. наук. 1978. № 9, Вып. 4. - С. 10 -16.

7. Tumanov A. A. Biological methods of analysis // Trends in Analyt. Chem. 1984.-V. 3, № 3. P. 67-71.

8. Туманов А. А. Биологические методы анализа // Журн. аналит. химии. -1988.-Т. 43, №1.-С. 20-36.

9. Туманов А. А. Биологический метод анализа вещества. Н Анализ окружающей природной среды : Межвуз. сб. Горьк. гос. ун-т, 1980. - С. 3-13.

10. Туманов А. А., Китаева И. А., Баринова О. В. Биологические методы определения физиологически активных веществ в объектах окружающей среды // Журн. аналит. химии. 1993. - Т. 48, № 1. - С. 6-18.

11. Туманов А. А., Глухова М. Н. Микроорганизмы как аналитические индикаторы. Методика и техника эксперимента // Анализ окружающей природной среды : Межвуз. сб. Горьк. гос. ун-т, 1980. - С. 14-20.

12. Туманов А. А., Осипова Н. И. Парамеции как аналитические индикаторы // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1966. - Вып. 1(15). -С. 145-147.

13. Биологический метод определения токсичных примесей в комбикормах / Туманов А. А., Эльберт Г. К., Филимонова И. А., Постнов И. Е., Зимин А. Б., Колесова J1. Г., Ежова О. С. // Пищевая технология : Изв. Вузов. 1986, №3.-С. 102- 105.

14. Личинки хирономид как аналитические индикаторы /Туманов А. А., Орлов В. Н., Корнеева Н. В., Мельниченко О. А., Гелашвили С. С. // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1974. - Вып. 3(38). - С. 41 -43.

15. Плесневые грибы рода Aspergillus как аналитические индикаторы /Филимонова И. А., Туманов А. А., Постнов И. Е., Осипова Н. И. // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1973. - Вып. 3. - С. 50 - 51.

16. Микробиологическое определение некоторых элементоорганических соединений олова и свинца / Туманов А. А., Клюквина Т. Д., Постнов И. Е. // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1974. - Вып. 3(38). -С. 156- 158.

17. Актиномицеты как аналитические индикаторы на неорганические ионы Яуманов А. А., Постнов И. Е., Осипова Н. И., Филимонова И. А .// Тр. похимии и химической технологии. Горький, 1974. - Вып. 3(38). - С. 37 -38.

18. Aspergillus awamori как аналитический индикатор на некоторые жизненно необходимые катионы / Филимонова И. А., Постнов И. Е., Осипова Н. И., Туманов А. А. // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1973. -Вып. З.-С. 52-53.

19. Туманов А. А., Глухова М. Н., Ионова Г. Б. Споровые бактерии как аналитические индикаторы на цианид калия // Физико химические методы анализа : Межвуз. сб. / Отв. редактор д-р хим. наук , проф. А. А. Туманов. - Горький : ГТУ, 1989. - С. 32 - 34.

20. Туманов А. А., Китаева И. А. А. с. 1146324 СССР // Б. И. 1985, №i 1.

21. Туманов А. А., Китаева И. А. А. с. 1551724 СССР // Б. И. 1990, №11.

22. Химико биологический метод оценки содержания фенола в воде с помощью дафний / Туманов А. А., Постнов И. Е., Осипова Н. И., Зимин А. Б. // Методы биотестирования вод. - Черноголовка, 1988. - С. 104-106.

23. Постнов И. Е., Туманов А. А. Биологический метод анализа: проблемы избирательности и чувствительности определения биологически активных веществ// Журн. аналит. химии. 2000. - Т. 55, № 2. - С. 208-211.

24. Постнов И. Е., Туманов А. А. и др. А. с. 1168168 СССР//Б. И. 1985, №27.

25. Биологический метод определения цианидов / Туманов А. А., Постнов И. Е., Осипова Н. И., Зимин А. Б. // Материалы особой чистоты. Горький, 1988.-С. 113-115.

26. Биологический метод определения катионов тяжелых металлов в воде / Туманов А. А., Филимонова И. А., Постнов И. Е., Осипова Н. И. // Методы биоиндикации и биотестирования природных вод. JI. : Гидрометеоиздат, 1987.-Вып. 1.-С. 42-48.

27. Кульский Л. А. Серебряная вода. Киев: Наукова думка, 1968. 104 с.

28. Пожаров А. В., Папутская Н. И., Лебедев В. Ф. А. с. 1010128 СССР // Б. И. 1983, №13.

29. Туманов А. А., Фролова С. М., Глухова М. Н. Метод определения органического оловосодержащего соединения в воде // Методы биотестирования вод. Черноголовка, 1988. -С. 11- 80.

30. Елизарова В. А. Марганец и медь как факторы роста фитопланктона в ме-зотрофном водоеме (Рыбинское водохранилище) // Биология внутренних вод. 2000, №3. - С. 35-41.

31. Микробиологические методы определения витаминов, аминокислот и антибиотиков. М.: Колос, 1968. - 479 с.

32. Осипова Н. И., Постнов И. Е., Туманов А. А., Филимонова И. А. А. с. 501057 СССР//Б. И. 1976, №4.

33. Инфузории в биотестировании. Тезисы докладов международной заочной научно практической конференции. - Санкт - Петербург: Архив ветеринарных наук, 1998. - 304 с.

34. ПНД ФТ 14.1:2:3:4. 98. Методика определения токсичности воды по хе-мотаксической реакции инфузорий. М.: 1998. - 17 с.

35. Фомин Г. С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам. Энциклопедический справочник. - 2-е изд. перераб. и доп. - М.: Изд-во "Протектор", 1995. - 624с., ил.

36. Методы биотестирования качества водной среды / Под. ред. О. Ф. Филен-ко. М. : Изд-во МГУ, 1989. - 124 с.

37. Биологический метод определения остаточных количеств фосфороргани-ческих пестицидов в почве / Туманов А. А., Филимонова И. А., Постнов И. Е., Осипова Н. И., Зимин А. Б., Марошина Е. М. // Химия в сельском хозяйстве. 1984. - Т. 22, № 1. - С. 61 - 62.

38. Туманов А. А., Постнов И. Е. Водные беспозвоночные как аналитические индикаторы // Гидробиологический журнал. Киев, 1983. - Т. 19, Вып. 5. -С.3-16.

39. Туманов А. А., Малкина Л. А., Осипова Н. И. Количественное определение активных начал пчелиного яда // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1963. - Вып. 2(8). - С. 339 - 345.

40. Туманов А. А., Осипова Н. И. Определение микроколичеств некоторых элементов с помощью биологических индикаторов // Промышленность химических реактивов и особо чистых веществ. М.: ИРЕА, 1964. - С. 150 -157.

41. Туманов А. А., Осипова Н. И. Биологический метод определения микроконцентраций элементов // Получение и анализ веществ особой чистоты. -М.: Наука, 1966. С. 238 - 246.

42. Lebister Reticularis как тест объекты для целей анализа /Туманов А. А., Орлов В. Н., Корнеева Н. В., Мельниченко О. А .// Тр. по химии и химической технологии. - Горький, 1974. - Вып. 3(38). - С. 39-40.

43. Биопотенциал как аналитический индикатор / Туманов А. А., Ульянов М. Ю., Осипова Н. И., Бирюкова М. А. // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1968. - Вып. 1. - С. 161 - 163.

44. Некоторые культуры тканей как аналитические индикаторы / Туманов А. А., Носова JI. С., Малкина Л. А., Осипова Н. И. // Тр. по химии и химической технологии. Горький, 1968. - Вып. 1. - С. 156- 160.

45. Туманов А. А., ГлуховаМ. Н., Субботина Г. М. Ответные реакции микроорганизмов на изменение химического состава среды и трансформация их в аналитический сигнал // Журн. аналит. химии. 1998. - Т. 53, № 12. - С. 1252 - 1260.

46. Туманов А. А., Коростылева Е. А. Биосенсоры в анализе объектов окружающей среды // Журн. аналит. химии. 1990. - Т. 45, № 7. - С. 1304 -1311.

47. Туманов А. А., Коростылева Е. А. Ферментативные методы определения фосфорорганических соединений в природных и сточных водах // Химия и технология воды. Киев : Наукова думка, 1989. - Т. 11, №4. - С. 329 - 336.

48. Жмур Н. С. Государственный и производственный контроль токсичности вод методами биотестирования в России. М.: Международный Дом Сотрудничества, 1997. 117 с.

49. Основы аналитической токсикологии. Р. Дж. Сланаган и соавт. М. : Медицина, 1997. 363 с.

50. Химическая энциклопедия: В 5 т.: т.4: Полимерные Трипсин / Редкол.: Зефиров Н. С. (гл. ред.) и др. -М.: Большая Российская Энцикл., 1995. -639 с. ил.

51. Путинцев А. И., Филенко О. Ф., Решетников С. И. и др. Комплексная диагностика загрязнения почвенных растворов с использованием водных биотестов. // Токсикологический вестник. 1998. - № 4. - С. 27-32.

52. Мерц В. Современные обобщенные показатели при мониторинге природных и сточных вод. // Журн. аналит. химии. 1994. - Т. 49, № 6. - С. 557566.

53. La mesure en continu de la toxicite des eaux /Le Pennes M., Ollivier J.- у.// Eau, ind., nuisances. 1994, № 171. - C.43-46.

54. Жмур H. С. Токсикологический мониторинг источников загрязнения водных объектов. // Токсикологический вестник. 1999. - №3. - С. 7-13.

55. Лысцов В. Н., Скотникова О. Г. О возможности взаимного усиления вредных воздействий загрязняющих агентов окружающей среды // Журнал Всесоюзного химического общества им. Д. И. Менделеева. 1991. - Т. 36, №1.-С. 61-65.

56. Сенцова О. Ю., Максимов В. Н. Действие тяжелых металлов на микроорганизмы // Успехи микробиологии : сб. ст.. М. : Наука, 1985. С. 227-249.

57. Мур Дж., Рамамурти С. Тяжелые металлы в природных водах : контроль и оценка влияния : Пер. с англ. М.: Мир, 1987.

58. Фелленберг Г. Загрязнение природной среды. Введение в экологическую химию : Пер. с нем. М. : Мир, 1997. - 232 е., ил.

59. Экологическая биотехнология : Пер. с англ. / Под ред. К. Ф. Форстера, Д. А. Дж. Вейза. Л. : Химия, 1990. - 382 с.

60. Ховрычев М. П. Поглощение ионов меди клетками Candida utilis // Микробиология. 1973. - Т. 42, Вып. 5. - С. 839-844.

61. Микодеструкторы промышленных материалов / Коваль Э. 3., Сидоренко Л. П.; Отв. Ред. Билай В. И.; АН УССР. Ин-т микробиологии и вирусологии им. Д. К. Заболотного. Киев : Наук. Думка, 1989. - 192 с.

62. Иванов А. Ю., Фомченков В. М. Электрофизический анализ повреждения бактериальных клеток Echerichia coli ионами серебра // Микробиология. -1992.-Т. 61, №3. -С. 464-471.

63. Евдокимова Г. А., Мозгова Н. П. Аккумуляция меди и никеля почвенными грибами // Микробиология. -1991. Т. 60, № 5. - С. 801-807.

64. Кореневский А. А., Каравайко Г. И. Сорбция молибдена биомассой микроорганизмов //Микробиология. 1993. - Т. 62, № 4. - С. 709-715.

65. Radha S., Seenayya G. Enviromental factors affecting the bioavailability and toxicity of Cd and Zn to an anaerobic bacterium // Sci. Total Environ. 1992. -V. 125.-P. 123-126.

66. Бинтам Ф. Т., Коста M., Эйхенбергер Э. и др. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов : Пер. с англ. / Под ред. X. Зигеля, А. Зигель. М. : Мир, 1993.-368 е., ил.

67. Маслюков А. П., Рахманин Ю. А., Матюшин Г. А. и др. О некоторых особенностях механизма бактерицидного действия тяжелых металлов // Доклады Академии Наук. 1992. - Т. 323, № 6. - С. 1180-1185.

68. Маслюков А. П., Рахманин Ю. А., Матюшин Г. А., Дюмаев К. М. Биохимическая модель и механизм обеззараживания воды химическими дезин-фекантами // Доклады Академии Наук. -1991. Т. 320, № 3. - С. 729-732.

69. Авакян 3. А. Токсичность тяжелых металлов для микроорганизмов // Микробиология. Т. 2. - 1973. - С. 5-45.

70. Филенко О. Ф. Традиционное и новое в эколого рыбохозяйственном нормировании. // Токсикологический вестник. - 1999. - №3. - С. 2-6.

71. Бойкова Э. Е. Действие тяжелых металлов на сообщества морских простейших в эксперименте in situ в весенне-летний период // Экспериментальная водная токсикология. Рига : Зинатне, 1990. - Вып. 14. - С. 187201.

72. Сейсума 3. К., Легздиня М. Б., Марцинкевича С. Я. и др. Комбинированное влияние цинка и меди, ртути и кадмия на планктон в экспериментальных условиях in situ // Экспериментальная водная токсикология. Рига : Зинатне, 1990. - Вып. 14. - С. 202-215.

73. Максимов В. Н., Гупта А. Комбинированное действие некоторых тяжелых металлов на морской фитопланктон // Вестн. МГУ. Сер. 16. 1992. - № 2. -С. 51-57.

74. Dirilgen N., Inel Y. Effects of zinc and copper on growth and metal accumulation in duckweed, Lemna minor // Bull. Environ. Contain, and Toxicol. 1994. - V. 53, № 3. - P. 442-449.

75. Kraak M. H. S., Lavy D., Schoon H., Toussaint M., Peeters W. H. M. and Van Straalen N. M. Ecotoxicity of mixtures of metals to the zebra mussel Dreissena polymorphs // Environ. Toxicol. Chem. 1994. - № 13. - P. 109 -114.

76. Fargasova A. Toxicity of metals on Daphnia magna and Tubifex tubifex // Ecotoxicol. and Environ. Safety. 1994. - V. 27, № 2. - P. 210-213.

77. Iuchelka С. M., Snell T. W. Rapid toxicity assessment using rotifer indestion rate //Arch. Environ. Contam. and Toxicol. -1994. V. 26, № 4. - P. 549-554.

78. Belabed W., Restali N. Evaluation de la toxicite de quelques metaux lourds a Г aide du test daphnie // Techn., Sci., meth. -1994, № 6. P. 331-335.

79. Roux D. I., Kempster P. L. Effect of cadmium and copper on survival and reproduction of Daphnia pulex // Water S. Aft. 1993. - V. 19, № 4. - P. 269274.

80. Чеснокова С. М., Трифонова Т. А. Индикация техногенного загрязнения почв и снежного покрова городского ландшафта методом биотестирования // Экология и промышленность России. 1996. - № 10. - С. 4-7.

81. Гиль Т. А., Стом Д. И. Использование многофакторного эксперимента при оценке комбинированного действия полифенолов и тяжелых металлов // Экспериментальная водная токсикология. Рига : Зинатне, 1990. - Вып. 14. - С. 216-224.

82. Чалова И. В. Исследование комбинированного действия парных смесей токсических веществ на планктонных ракообразных (Ceriodaphnia affinis). // Токсикологический вестник. 1998. - № 3. - С. 18-21.

83. Прозоровский В. Б., Бейм А. М., Зоммер Е. А. Влияние температуры и жесткости воды на скорость наступления гибели рыб при отравлении некоторыми токсикантами. // Токсикологический вестник. 1995. - №1. - С. 711.

84. Влияние нефти и пестицидов на гидробионтов Каспия / Дохолян В. К., Магомедов А. К., Федотова JI. В., Коваленко J1. Д. // Эксперим. исслед. влияния загрязнителей на вод. организмы : Апатиты, 1979. С. 31-36.

85. Экологическая химия : Пер с нем. / Под ред. Ф. Корте. М. . Мир, 1997. -396 е., ил.

86. Скальный А. В., Есенин А. В. Мониторинг и оценка риска воздействия свинца на человека и окружающую среду с использованием биосубстратов человека. // Токсикологический вестник. 1996. - № 6. - С. 16-23.

87. Кацнельсон Б. А. Проблема комбинированного действия токсических веществ при их нормировании в воздухе рабочей зоны. // Токсикологический вестник. 1993. - № 2. - С. 15-20.106

88. Таблицы планов эксперимента для факторных полиномиальных моделей. Справочное издание. Ред. В. В. Налимов. М.: Металлургия, 1982. 752 с.

89. Худсон Д. Статистика для физиков. М.: Мир, 1970. 296 с.

90. Общая теория статистики. Под ред. А. Я. Боярского, Г. Л. Громыко. 2-е изд. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1985. - 367 с.

91. Дж. Мейнелл, Э. Мейнелл. Экспериментальная микробиология : Пер с англ. / Под ред. А. С. Кривинского. М. : Мир, 1967. - 348 с.

92. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М. О. Биргера. 2-е изд. испр. и доп. - М.: Медицина, 1973.-456 с.

93. Бакулина Н. А., Краева Е. Л. Микробиология. 2-е изд., перераб. и доп. -М.: Медицина, 1980. - 448 с.