Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Теоретические основы, разработка и совершенствование биотехнологических методов воспроизводства овец

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Теоретические основы, разработка и совершенствование биотехнологических методов воспроизводства овец"

На правах рукописи

Айбазов Али-Магомет Муссаевич

Теоретические основы, разработка и совершенствование биотехнологических методов воспроизводства овец

06.02.01 — Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук

Ставрополь — 2003

Работа выполнена в Всероссийском НИИ овцеводства и козоводства (ВНИИОК) и Ставропольском НИИ животноводства и кормопроизводства (СНИИЖК).

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ,

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Ульянов Алексей Николаевич

Защита состоится 19 июня 2003 года в 9 часов на заседании диссертационного совета Д 006.078.01 при Ставропольском научно-исследовательском институте животноводства и кормопроизводства по адресу: Россия, 355017, г Ставрополь, пер. Зоотехнический, 15

С диссертаций можно ознакомиться в библиотеке СНИИЖК.

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Сидорцов Владимир Игнатьевич

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Вологиров Мушагид Кушбиевич

Ведущая организация: Донской государственный аграрный университет

Автореферат разослан

$_2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

ЛгЛМ*

/Бурдуковская Т.К.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1.Актуальность темы. Разработанный отечественными учеными метод длительного хранения спермы в замороженном виде позволяет накапливать большие запасы замороженной спермы, длительно хранить и перевозить ее на любые расстояния. Благодаря этому методу открылись широкие перспективы для углубленной селекционно-племенной работы, сохранения и рационального использования генофонда выдающихся баранов-производителей. Однако, как показывает практика, в овцеводстве потенциальные, возможности этого прогрессивного метода реализуются не в полной мере, в первую очередь из-за невысокой (25-35 %)оплодотворяемости овец, осемененных замороженной-оттаянной спермой. В связи с этим возникла необходимость дальнейших научных поисков и экспериментальных исследований, направленных, прежде всего, на выяснение причин, снижающих биологическую полноценность спер-миев в процессе криоконсервации, разработку и совершенствование защитных сред для разбавления спермы и технологии оттаивания замороженной спермы с целью повышения эффективности метода длительного хранения.

Перспектива использования замороженной-оттаянной спермы открывает широкие практические возможности и, в то же время, ставит задачу более интенсивного использования ценных баранов-производителей с высокой препо-тентностью не только в случной период, но и в другие сезоны года путем накопления от них замороженной спермы. Поскольку длительное использование баранов на протяжении года вносит определенные коррективы в осуществление воспроизводительной функции, большой научный и практический интерес представляет изучение влияния сезона года и режима половой нагрузки производителей на их половую активность, качество и количество спермопродукции и устойчивость спермы к глубокому замораживанию.

Разработка биотехнологических методов позволит существенно повысить масштабы участия высокопродуктивных самцов в процессе воспроизводства, увеличит интенсивность отбора Яяраяпч тпицшт. ПЧРШГЯ НУ ппрмрннпй

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С. Петербург 09

етербург _ л

ценности и, тем самым, увеличит эффективность селекционно-племенной работы. Наряду с этим возникает необходимость более интенсивного использования наиболее ценных в генетическом плане самок для совершенствования генетически обусловленных продуктивно- биологических качеств отдельных пород и линий овец. В определенной степени решить проблему интенсивного использования высокоценных овец для ускорения генетического прогресса позволят методы регулирования воспроизводительной функции овец, важнейшими из которых являются синхронизация полового цикла, технология получения и трансплантации эмбрионов. Однако, вследствие недостаточной изученности и разработанности, использование указанных биотехнологических методов для ускоренного размножения ценных генотипов овец до сегодняшнего дня ограничено.

1.2. Цель и задачи исследования. Основной целью исследований являлось теоретическое обоснование, разработка и усовершенствование биотехно-логическЬх методов и приемов размножения овец, направленных на интенсификацию воспроизводства и улучшение селекционно-племенной работы в овцеводстве.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи как отдельные этапы решения проблемы в целом:

- разработать новые и усовершенствовать существующие синтетические среды для разбавления спермы барана перед криоконсервацией, изучить их влияние на качество и биологическую полноценность замороженной-оттаянной спермы;

- изучить эффективность внутриматочного осеменения овец замороженной спермой методом лапароскопии;

- изучить половую активность, уровень спермопродукции баранов и устойчивость спермы к глубокому замораживанию в зависимости от сезона года и режима использования баранов- производителей;

- разработать на этой основе оптимальный режим использования баранов,' позволяющий накапливать замороженную сперму в неслучной сезон; ■■ V

- создать генофондное хранилище замороженной спермы высокопродуктивных баранов - производителей;

- провести сравнительную оценку гормональных способов синхронизации полового цикла у овец;

- разработать эффективный способ индукции полиовуляции и трансплантации ранних эмбрионов у овец;

- изучить рост и развитие ягнят-трансплантатов и их сверстников, а также воспроизводительную функцию баранчиков - трансплантатов.

1.3. Научная новизна и теоретическая значимость работы. В результате проведенной работы разработаны новые И усовершенствованы существующие синтетические среды для разбавления спермы барана, дана всесторонняя экспериментальная оценка технологии криоконсервации спермы при температуре жидкого азота (-196 °С), изучены причины снижения оплодотворяющей способности Половых клеток в процессе замораживания, даны предложения по решению этой биологической проблемы. Впервые проведено внутриматочное осеменение овец методом лапароскопии при помощи эндоскопического оборудования.

Проведено теоретическое и экспериментальное обоснование возможности круглогодичной эксплуатации высокопродуктивных баранов-производителей с целый накопления от них спермы в замороженном виде. Изучена динамика половой активности баранов и уровня спермопродукции в зависимости от режима их эксплуатации и сезона года.

Впервые в стране.создан и успешно функционирует генофондный банк спермы высокопродуктивных баранов-производителей отечественных и импортных пород, а также редких и исчезающих пород и популяций.

Проведена сравнительная оценка эффективности различных гормональных препаратов для синхронизации половой охоты у овец. Определены схемы индукции множественной овуляции у овец, позволяющие получать стабильные результаты. Впервые .проведена сравнительная оценка хирургического (лапаротомия) и нехирургического (лапароскопия) методов трансплантации

эмбрионов, доказано преимущество использования эндоскопического оборудования для пересадки ранних эмбрионов методом лапароскопии.

В сравнительном аспекте изучены рост и развитие ягнят-трансплантатов и их сверстников-нетрансплантатов, полученных от тех же овец-доноров, исследована репродуктивная функция взрослых баранов-трансплантатов.

Установлена возможность ускоренного размножения генетически ценных овец путем трансплантации их зародышей менее ценным овцам-реципиентам без снижения продуктивности потомства. .

Изучены теоретические аспекты, разработаны и предложены биотехнологические приемы ускоренного воспроизводства овец, направленные на качественное совершенстЬование стада и улучшение селекционно-племенной работы в овцеводстве.

1.4. Практическая значимость работы. Материалы исследований позволили рекомендовать в производство усовершенствованную технологию криоконсервации спермы, существенными моментами которой являются новые синтетические среды для разбавления спермы перед замораживанием и оптимальный режим оттаивания замороженной спермы.

Данные рекомендации широко используются в овцеводческих хозяйствах как Ставропольского края, так и других регионов России. Оптимальный режим половой эксплуатации высокоценных баранов-производителей во вне-случной сезон применялся на Ставропольском и Невинномысском головном племпредприятиях, способствуя накоплению максимального количества замороженной спермы от элитных производителей. Способ синхронизации половой охоты у овец применяется овцеводческими хозяйствами, позволяя планировать и управлять процессами воспроизводства, получать одновозрастной молодняк и повысить его сохранность. Результаты исследований по индукции множественной овуляции и трансплантации эмбрионов использовались как для получения большего количества потомков от генетически ценных овец-доноров, так и в международных экспериментах по созданию трансгенных животных.

1.5. Реализация результатов исследований. Основные научные положения и практические предложения вошли в «Рекомендации по оптимальному режиму использования высокоценных племенных баранов при длительной их эксплуатации на протяжении года (ВАСХНИЛ, М., 1987); «Замораживание и использование спермы баранов-производителей» (рекомендации). М., 1989; «Подготовка баранов и технология криоконсервации спермы (методические рекомендации)», Ставрополь, 1990; «Рекомендации по организации осеменения овец», М., 1991; «Методические рекомендации по раннему прогнозированию, отбору и выращиванию высокопродуктивных баранов-производителей тонкорунных и полутонкорунных пород», Ставрополь, 2001.

Материалы диссертации вошли в наставления, памятки и учебные пособия, цитируются в научных работах, изданных как в России, так и за рубежом, используются при проведении обучения в высшей школе бонитеров, входят в учебно-методические пособия для подготовки ветврачей, зооинженеров и техников по искусственному осеменению.

1.6. Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены на ежегодных заседаниях ученого совета ВНИИОК и СНИИЖК 1980-2002гг., совместном заседании бюро Отделения животноводства и Совета по технологии производства продуктов животноводства ВАСХНИЛ 30 мая 1985 года; зоотехнической секции научно-технического совета МСХ СССР 26 сентября 1985 года; Международной конференции по животноводству, Бишкек, 1995; Международной конференции по животноводству, Боровск, 1995; Всероссийской конференции по биотехнологии, Ставрополь, 1996; координационном совещании и научно-практической конференции по овцеводству и козоводству, Ставрополь, 1996; Международной конференции памяти Ф.Ф.Эйснера, Харьков, 1996; Международной.конференции молодых ученых, Аскания-Нова, 1998; Международной конференции по биотехнологии, Ставрополь, 2001; на всероссийских и краевых семинарах, совещаниях и выставках племенных животных 1980 - 2002 гг.

По результатам работы оформлены заявки и получены: авторское свидетельство №1755431 от 18.04.1989 г.; патент РФ № 2115386 от 24.03.1997 г.; патент Украины № 29515 от 15.11.2000 г.

Результаты работы экспонировались на ВДНХ в 1988 году и за достигнутые успехи в развитии народного хозяйства СССР автор награжден медалью ВДНХ (удостоверение 29073 от 9.11.1988 г.).

1.7. Публикации. Основные материалы исследований изложены в 52 печатных работах.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 265 страницах машинописного текста, иллюстрирована 54 таблицами и 8 рисунками. Основные раздель1 работы: общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методика исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, заключение, выводы и практические предложения. Список литературы включает 397 источников, в т. ч.199 иностранных авторов.

1.9. На защиту выносятся следующие положения диссертации:

- экспериментальное обоснование, разработка и совершенствование синтетических сред для разбавления и замораживания спермы барана;

- эффективность внутриматочного осеменения овец замороженной - оттаянной спермой методом лапароскопии;

- половая активность, качество и количество спермопродукции баранов -производителей в различные сезоны года при разных режимах половой нагрузки;

- интенсификация использования генетически высокоценных баранов путем накопления от них спермы в замороженном виде и создание генофондного хранилища спермы элитных производителей;

- синхронизация полового цикла у овец применением различных гормональных препаратов;

- индукция полиовуляции у овец, экспериментальная оценка хирургической и нехирургической трансплантации ранних эмбрионов;

- оценка роста и развития ягнят-трансплантатов и их сверстников;

- обоснование применения биотехнологических методов и приемов воспроизводства овец для интенсификации селекционно-племенной работы.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическими планами НИР, входящими в программу РАСХН (ГКНТ 0.51.06.06.04,Н1, НТП О.СХ.77.08.02.Н2, НТП 0.СХ.42.01.07.НЗ, № гос. регистрации 01.960007942) в лаборатории воспроизводства Всероссийского НИИ овцеводства и козоводства, в связи с реорганизацией института продолжена в Ставропольском НИИ животноводства и кормопроизводства, в опытном хозяйстве «Темнолесское», Ставропольском и Невинномысском племпредприятиях, в ведущих племзаво-дах Ставропольского края. Производственная апробация биотехнологических методов и приемов воспроизводства овец проводилась в овцеводческих хозяйствах Ставропольского края, Ростовской области и Республики Татарстан.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методика исследований

В опытах использовали клинически здоровых животных .тонкорунных пород овец в возрасте от 2 до 6 лет, содержащихся на полноценном рационе. Отбор баранов-производителей, кормление, уход, содержание и их использование проводили в соответствии с требованиями «Инструкции по технологии работы и организаций по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных» (М., 2000). у

Комплексную оценку спермы, получаемой в искусственную вагину, проводили по общепринятым методикам.

Все исходные компоненты, предназначенные для приготовления синтетических сред для разбавления спермы, имели степень чистоты «ХЧ» или «ЧДА» и были проверены на безвредность для спермиев в соответствии с утвержденными методиками контрпя их качества. Среды готовили по общепринятой методике, их качество проверяли'методом биоконтроля. Разработку состава сред для разбавления спермы перед замораживанием проводили с уче-

том известных данных о криопротективном и других защитных свойствах отдельных компонентов и выясненных нами механизмов повреждения и повреждающих факторов. Оптимальное соотношение компонентов находили на основании подвижности и выживаемости спермиев после оттаивания и сохранности акросом.

Концентрацию водородных ионов в средах определяли потенциометрами типа рН-340 со стеклянными электродами. Осмотическое давление спермы и сред определяли криоскопическим методом при помощи термометра Бэкма-на. Относительную вязкость синтетических сред определяли в стеклянном вискозиметре Оствальда ВПЖ-2 по ГОСТ 10028-67.

Все сравнительйые опыты проведены на разделенных эякулятах. Разбавление и замораживание спермы в гранулах проводили по общепринятой методике с собственными модификациями. Оттаивание замороженной спермы проводили в водяной бане при +38°С и в специально сконструированном оттаива-теле, поддерживающем стабильную температуру. Оценку качества оттаянной спермы проводили по подвижности спермиев после оттаивания и по выживаемости при температуре + 38 °С. Активность дегидрогеназ определяли по методике Н.П.Шергина (1944). Структурные нарушения акросомы и наружных оболочек спермиев определяли по методике И.И.Соколовской и соавт., (1981).

Половую активность баранов определяли по затрате времени на выделение одного эякулята и по их количеству, получаемому от каждого производителя за неделю. Качество и количество спермопродукции баранов в зависимости от сезона года и режима половой нагрузки, оценивали по общепринятым методикам.

Оплодотворяющую способность спермы проверяли на клинически здоровых овцах, подобранных по принципу аналогов. В широких научно-хозяйственных опытах и при производственной проверке подбирали отары, фермы или хозяйства, где условия кормления, ухода и содержания овец соответствовали зоотехническим нормам, в которых можно было выполнить все элементы методики.

Выборку маток в охоте проводили при помощи вазэктомированных баранов-пробников. Внутриматочное осеменение методом лапароскопии проводили по методике в-Еуапв е.а., (1987) с собственными модификациями.

В качестве овец-доноров эмбрионов отбирали высокоценных племенных овцематок, а также выбракованных из племенного стада по тем или иным причинам. В качестве овец-реципиентов использовали малопродуктивных взрослых овец, имеющих хорошую молочность и материнский инстинкт. Для синхронизации половой охоты использовали синтетические аналоги простаглан-дина Ф-2а- «эстрофан» (Чехия), «эстуфалан», «клатрапростин» (Россия) и про-гестагены ацетат мегестрола и флюогестон ацетат.

Для индукции полиовуляции у овец-доноров применяли СЖК (Россия), фоллигон (Голландия) и ФСГ-п (США). Кратность, дозировка и схема применения гормональных препаратов приведены по ходу изложения собственных исследований.

Эмбрионы извлекали на 4-5 день после осеменения методом лапарото-

мии. Морфологическую оценку ранних эмбрионов овец проводили по методи-

1

ке Л.К.Эрнст и соавт. (1989). Трансплантацию эмбрионов производили хирургическим (лапаротомия) и нехирургическим (лапароскопия) методами. При-живляемость пересаженных эмбрионов устанавливали первично путем выявления овцематок-реципиентов в стадии половой охоты в последующих половых циклах, а окончательно - по результатам ягнения.

Некоторые параметры роста и развития ягнят-трансплантатов и их сверстников изучали по методике Н.А.Кравченко (1973).

Методические особенности отдельных опытов приведены по ходу изложения собственных исследований. Материалы обработаны биометрически методом определения достоверности различий (критерий Стьюдента).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 2.2.1. Совершенствование технологии криоконсервации спермы баранов

Задачей первостепенной важности в области теоретических и прикладных иследований криобиологии спермы барана является разработка практических способов длительного' хранения спермы при высокой сохранности ее биологической полноценности. Однако, несмотря на многолетние поиски и разработки ученых, оплодотворяющая способность спермы, замороженной и сохраняемой при температуре жидкого азота (-196 °С), остается на невысоком уровне (25-35 %.).

В лабораторных и научно-производственных опытах, выполненных в период с 1981 по 2000 год, основное внимание было уделено конструированию защитных сред для разбавления спермы барана, изучению их криопротектор-ных свойств. Кроме того, изучалось влияние различных температурных режимов оттаивания на качество оттаянной спермы, выяснились некоторые причины снижения биологической функциональности половых клеток, подвергнутых замораживанию-оттаиванию.

Установлено, что сохранение биологической полноценности спермиев после криоконсервации в значительной степени зависит от состава защитных синтетических сред и криопротекгорной эффективности ингредиентов. В своих опытах мы исходили из классического принципа, что среды должны содержать электролиты и неэлектролиты одновременно и существует оптимум их соотношения, обуславливающий защитные свойства разбавителей.

Исследования неэлектролитного состава сред выявили, что их защитные свойства повышаются от применения сочетания moho-, ди- и трисахаридов. Наилучшими защитными свойствами обладала среда, содержащая следующий состав и соотношение компонентов, масс. %: раффиноза - 14,0; сахароза - 3,0; глюкоза - 0,5; глицерин - 4,5; желток куриного яйца - 16,0. Электролиты в составе сред стабилизировали рН, оптимальное значение которого для спермиев барана составляло 6,8 - 6,9, однако не способствовали сохранению качества спермы. Подвижность спермиев, замороженных в раффинозо-сахарозо-

глюкозной среде, составляла после оттаивания 4,5 - 4,8 баллов при выживаемости при +38 °С более 10 часов. Добавление к указанной среде ТШЯ-буфера (электролита) не оказало заметного влияния на качественные показатели оттаянной спермы. Сперма, замороженная в глюкозо-цитратной среде, основу которой составляет электролит (натрий лимоннокислый, трех замещенный 5-водный), по подвижности после оттаивания практически не уступала замороженной в углеводной среде (4,3-4,5 балла), однако после 8-часовой инкубации оттаянной спермы при + 38 °С лишь единичные спермии сохраняли прямолинейное поступательное движение, тогда как в рафинозо-сахарозо-глюкозной среде подвижность спермиев составила 1,6-1,7 балла (Р<0,01)

Поскольку оценка по подвижности и выживаемости не может с достаточной точностью отразить биологические свойства половых клеток, сперма, замороженная в испытуемых средах, была повергнута проверке на оплодотворяющую способность. Наиболее -высокая (42,9%) оплодотворяемость оказалась в группе овец, для осеменения которых использовали сперму, замороженную в раффинозо-сахарозо-глюкозной среде. Добавление к ней ТЫБ-буфера снижало ее оплодотворяющую способность на 6,2 % , а при замораживании спермы в глюкозо-цитратном разбавителе оплодотворяемость овец составила всего 26,5 % (таблица 1).

Таблица 1

Влияние различных сред на оплодотворяемость овец

Синтетическая среда Осеменено овец» гол. Из них объягнилось от первого осеменения Получено ягнят Живая масса ягнят при рождении, кг

гол. % гол. % одинцов двоен

Раффинозо- сахарозо- глюкозная 49 21 42,9±7,05 27 129,0 4,9 3,6

Раффинозо-сахарозо-глюкозная + ТШБ-буфер. 49 18 36,7±6,8 22 122,0 4,7' 3,6

Глюкозо-цитратная 49 13 26,5±6,3 17 130,0 . 4,8 3,4

\

Сахара в защитных средах на ряду с компенсацией осмотического давления, участвуют в гликолизе, предотвращают агглютинацию. Кроме того, способствуя переходу внеклеточной воды в структурированное состояние, сахара в большей степени защищают спермии от криоповреждений.Наконец, углеводы обладают хорошо выраженными редуцирующими свойствами и при использовании их в качестве компонентов сред несут функцию антиоксидан-тов, снижая окислительно-восстановительный потенциал,-

В связи с расширением поиска компонентов защитных сред для разбав-1 ления спермы барана были изучены криопротекторные свойства полиглюкина, реополиглюкина и по^ивинилпирролидона (ПВП). Кроме того, в творческом содружестве с Отделением химии поверхности института физической химии АН Украины изучили криозащитные свойства высокодисперсного кремнийор-ганического соединения «метилаэросил- А 300» в составе углеводно-

желточной среды.

Таблица 2

Влияние различных сред на оплодотворяемость овец

' Синтетическая среда Осеменено овец гол. Из них объягнилось Получено ягнят

гол. % гол. %

Лактозная 50 • 12 24,0±6,04 19 158,0

То же + 6 % полиглюкина 50 17 34,6±6,70 24 141,0

То же + 5 % реополиглюкина 51 16 32,0±6,60 22 138,0

Раффинозо-сахарозо-глюкозная 494 195 39,5±1,64 259 133,0

То же + 3 % поли-винипирролидона 255 128 ' 50,2±2,60 172. 134,0

То же + 1 % метил аэросила 28 13 46,4±5,35 17 130,0

В лабораторных экспериментах установлено, что лучшими защитными свойствами обладали низкомолекулярный (Мт = 12600) ПВП в концентрации

3 % и метилаэросил А-300 в концентрации 0,1 %. Добавление ПВП и метил-аэросила А-300 в оптимальной концентрации в состав углеводно-желточной среды достоверно повышало подвижность и выживаемость оттаянной спермы по сравнению с контрольными пробами (Р<0,01) что, в свою очередь, привело к увеличению оплодотворяемости овец (таблица 2).

Проводя собственные исследования и анализируя литературные источники, было обращено внимание на заметное несоответствие между показателями качества оттаянной спермы (подвижность и выживаемость) с показателями оплодотворяемости овец, осемененных замороженной-оттаянной спермой. В лучших вариантах опытов 45-55 % спермиев после оттаивания сохраняли прямолинейно-поступательное движение при выживаемости вне организма 8-12 часов. Следовало бы ожидать, что оплодотворяемость овец составит 40-50 %. Однако в действительности этот показатель, как правило, не превышал 25-35%. Поскольку оценка качества оттаянной спермы по подвижности и выживаемости всегда была выше показателей реальной оплодотворяемости при цервикальном осеменении, было высказано предположение, что при сохранении подвижности, часть спермиев после криконсервации теряет свое основное функциональное назначение - способность оплодотворить яйцеклетку.

Используя метод раздельной оценки акросом (И.И.Соколовская и соавт., 1981) выявлено, что в оттаянной сперме значительное число спермиев имеют различной степени' структурные повреждения, характеризующиеся набуханием, отслоением и разрывами поверхностных мембран, особенно в области ак-росомы. Экспериментально доказано, что существенные структурные повреждения в спермиях наступают уже в процессе технологической обработки перед криоконсервацией. Так, если'в свежеполученной сперме лишь до 31 %'спермиев имели те или иные нарушения биомембран, то после разбавления этот показатель увеличивался до 35 %, а после 3-х часовой эквилибрации - до 49 %, в то время как подвижность спермиев после эквилибрации практически не уступала подвижности после разбавления (7,5-8 баллов), В еще большей степени структурные повреждения акросомы и цитоплазматической оболочки сперми-

ев проявились после замораживания-оттаивания. Выявлено, что в оттаянной сперме лишь от 15 до 35 % спермиев не имели видимых структурных повреждений биомембран. Это свидетельствует о том, что морфологические нарушения имели место не только в погибших половых клетках, но и у значительной части спермиев, сохраняющих после оттаивания прямолинейное поступательное движение.

Новая защитная среда с метилаэросил А-300 значительно лучше сохраняла биомембраны спермиев на разных этапах технологической обработки спермы. Достигаемая добавлением метилаэросил А-300 стабилизация белково-липидных комплексов проявлялась также в большем количестве спермиев с активными ферментами дегидрогеназами. Цитохимические исследования сохранения активности эндогенных дегидрогеназ в оттаянных образцах спермы показали, что в экспериментальной среде с метилаэросилом количество спермиев с активно функционирующими митохондриями, снабжающими клетки энергией, было на 47 % больше, чем в контрольной среде (Р<0,01).

Стабилизация биологической полноценности замороженной-оттаянной спермы должна выражаться в защите белково-липидных комплексов мембранных структур спермиев и разработка защитных синтетических сред является при этом определяющим, хотя и не единственным фактором. Выявлено, что на качественные показатели спермы в значительной степени влияют температурный режим и способ оттаивания. Наивысшую подвижность и выживаемость спермиев обеспечивало оттаивание гранул замороженной спермы при + 40 ... 50 °С при условии использовании специального оттаивателя, обеспечивающего стабильную температуру в рабочей камере и сток жидкой (оттаявшей) фракции. Повышение температуры оттаивания до + 70 °С приводило к достоверному снижению качества спермы, также как и оттаивание в водяной бане при + 38 °С (Р< 0,01). Однако снижение качества спермы в этих случаях объясняется разными причинами. При оттаивании в водяной бане после расплавления первых порций спермы в сосуде находятся две фазы: жидкая и твердая (неоттаявшая). Образовавшаяся'жидкая фракция служиттеплоносителем, ко^-

векционно перемещаясь от нагретых стенок сосуда к еще нерастаявшей грануле спермы, что неизбежно связано с ее многократным нагревом и охлаждением. Кроме того, значительно снижается скорость теплообмена, что неблагоприятно отражается на выживаемости спермы и целостности биомембран. Напротив, повышение температуры оттаивания до +70 °С приводит к снижению качества спермы вследствие перегревания части спермиев при контакте жидкой фазы со стенками оттаивателя.

Установлено, что оттаивание при + 40 ...50 °С достоверно повышает количество половых клеток с неповрежденной акросомой по сравнению с оттаиванием при + 70 °С и в водяной бане при + 38 °С (Р< 0,05), что позволило повысить оплодотворяющую способность спермы с 44 % до 50 %.

Получение спермы от баранов, разбавление и криоконсервация, приготовление защитных сред с использованием желтка куриного яйца сопряжены с • контаминацией посторонней микрофлорой. С целью санации спермы в состав синтетических сред вводят различные препараты, наиболее распространенным из которых является спермосан- 3. В то же время имеются сообщения о его негативном влиянии на биологическую полноценность спермиев. Задача собственных экспериментов в этой части работы заключалась в разработке состава новой синтетической среды, обеспечивающей эффективную санацию спермы при одновременном сохранении ее биологической полноценности. С этой целью использовали препарат «Лактобрил» (ТУ 9291-001-07532800-93), представляющий лиофилизированную композицию биологически активных веществ, неспецифических лактоглобулинов, незаменимых аминокислот молока. В лабораторных опытах была определена оптимальная концентрация лактоб-рила в составе углеводно-желточной среды, обладающая бактерицидным действием для золотистого стафилококка, вульгарного протея, бактерий группы кишечной палочки, сальмонелл, пиогенного стрептококка. Выяснено, что в концентрации 0,02 ... 0,04 % он безвреден-для спермиев, что'выразилось в удлинении сроков их выживаемости при + 38 °С, по сравнению с контролем на 60 - 70 % (Р< 0,01). Значительное снижение бактериальной обсемененности,

•улучшение санитарно-биологических показателей спермы и абсолютной выживаемости спермиев привело к повышению оплодотворяющей способности спермы, замороженной в среде с «Лактобрилом» до 52,5%.

Достижения в технологии криоконсервации спермы барана побудили исследователей к изучению вопроса о длительности сохранения функциональной полноценности замороженной спермы. Известно, что при сверхнизких температурах (-196 °С) биологические объекты, в том числе и половые клетки, переходят в состояние обратимого анабиоза. Считается, что в этом состоянии в клетках практически прекращаются обменные процессы. Поэтому существует априорное мнение, что замороженная сперма неограниченно долго сохраняет свою полноценность.'Так как указанная проблема имеет не только прикладное, но и теоретическое значение, мы сочли необходимым изучить оплодотворяющую способность спермы, сохраняемой в жидком азоте до 27 лет (таблица 3).

Таблица 3

Результаты осеменения овец замороженной оттаянной спермой разного срока хранения -

Группа опыта Срок хранения, лет Осеменено овец, гол Из них объягнилось Получено ягнят

гол % гол %

1 до 1 года 130 43 33,1*3,41 48 112,0

2 6 120" 40 33,3±3,71 48 120,0

3 8 120 41 34,2±2,64 47 115,0

4 18 125 48 38,4±2,17 53 110,0

5 27 120 51 42,5±2,32 58 113,0

Итого 615 223 36,3±1,16 254 114,0

Результаты осеменения овец (п =615) показали ,что оплодотворяющая способность спермы не зависела от сроков хранения и составила от 33,1 до 42,5 %. Это свидетельствует о том, что биологическая полноценность замороженной спермы в процессе длительного хранения не снижается. Увеличение оплодотворяющей способности овец, осемененных спермой 18 и 27 летнего

хранения, по-видимому, объясняется значительными усовершенствованиями технологии оттаивания замороженной спермы, использованием глубокоцерви-кального осеменения. Главным выводом из результатов многолетних экспериментов является то, что длительное - до 27 лет -хранение спермы баранов жидком азоте не снижает ее биологической полноценности, чго является важным доказательством полного обратимого анабиоза спермиев при -196°С. Подтверждение этого вывода мы получили в исследованиях К.Т.Касымова (2002) и G.Evans е.а. (1987).

2.2.2. Внутриматочное осеменение овец методом лапароскопии

Несмотря на значительные успехи ученых и практиков в совершенствовании технологии криоконсервации спермы барана, в настоящее время не приходится говорить о широком использовании замороженной спермы для осеменения овец. Основной причиной этого остается относительно большой расход замороженной спермы на плодотворное осеменение и невысокая для практики ее оплодотворяющая способность. В то время же время имеются сообщения, что при внутриматочном (внутритрубном) введении замороженной-оттаянной спермы, оплодотворяемость овец достигает 75-80 % (G.Evans, W.Maxwell, 1987; Н.А.Желтобрюх, 1981). Однако техника внутриматочного осеменения овец хирургическим методом (лапаротомия) довольно сложна, требует значительных затрат и ее проведение возможно лишь в специально оборудованных операционных. Кроме того, она сопряжена с послеоперационными осложнениями у овец, впоследствии ведущими к бесплодию.

В собственных исследованиях ставилась задача разработки способа внутриматочного осеменения овец замороженной спермой, позволяющего, во-первых, повысить оплодотворяемость овец; во-вторых, уменьшить расход спермы элитных производителей и, в-третьих, избежать негативных последствий хирургического вмешательства. Решение этих задач позволило бы предложить для широкого практического применения новый способ осеменения овец.

В собственных исследованиях использовали комплект эндоскопического оборудования «Karl Storz» (Германия). Результаты внутриматочного осеменения овец (п = 1881) методом лапароскопии в двух ведущих племзаводах Ставропольского края ( ГПЗ «Советское руно» Ипатовского и КПЗ «Маныч» Апа-насенковского районов) представлены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты внутриматочного осеменения овец методом лапарокопии

Изучаемые ГПЗ «Советское руно» КПЗ «Маныч»

показатели свежепо- заморо- свежепо- заморо-

лученная женная лученная женная

Осеменено овец, гол 498 428 516 439

Объягнилось овец

гол 292 252 328 281

% 58,6 58,8 63,3 64,0

Получено ягнят

гол 474 390 . 424 340

% 162,3 154,6 129,5 121,0

В т.ч. баранчиков 241 197 192 154

ярочек 233 193 232 186

Как видно из результатов опыта,от осеменения 1014 овец свежеполучен-ной спермой получено 898 ягнят (плодовитость 144,8 %), в том числе 465 ярочек и 433 баранчика1. От осеменения 867 овец замороженной спермой получено 730 ягнят (плодовитость 137,0 %), в том числе 379 ярочек и 351 баранчик.

Таким образом, получены убедительные свидетельства того, что при внутриматочном осеменении оплодотворяющая способность замороженной спермы не уступает свежеполученной (соответственно 61,5 и 61,2 %).

Если же принять во внимание, что доза вводимой замороженной-оттаянной спермь. содержала расчетно всего 10-12 млн. спермиев вместо вводимых 80 - 120 млн. при цервикапьном осеменении, то станут ясными широкие .возможности внутриматочного осеменения овец методом лапароскопии дам интенсификации использования высокоценных баранов и получения от них максимального количества потомства.

2.2.3. Круглогодовое использование высокопродуктивных баранов - производителей

Разработка метода длительного хранения спермы барана в замороженном виде открывает перспективу круглогодичного накопления биологически полноценной спермы баранов-производителей с тем, чтобы во время сезонного проявления овцам половых рефлексов располагать нужными запасами спермы высокоценных баранов-улучшателей как для углубленной селекционно-племенной работы, так и для массового повышения продуктивности. Поскольку длительная половая эксплуатация баранов на протяжении года вносит определенные коррективы в осуществление репродуктивной функции, стало необходимым, во-первых, исследовать возможность накопления замороженной спермы баранов-производителей вне сезона размножения, во-вторых, разработать для этого оптимальный режим использования баранов, и, в-третьих, изучить биологическую полноценность спермы, заготовленной в разные сезоны года.

В нашей работе была поставлена конкретная цель - разработать технологию использования высокоценных баранов-производителей вне сезона размножения для накопления от них замороженной спермы и изучить ее биологическую полноценность.Для этого изучали активность половых рефлексов и уровень спермопродукцйи баранов в зависимости от сезона года и режима их использования; устойчивость спермы к замораживанию и биологическую полноценность спермы, замороженной в разные сезоны года. На основании изучения этих вопросов предполагалось разработать оптимальный режим использования высокоценных баранов-производителей при их длительной эксплуатации на протяжении года.

Опытами, проведенными в течение 3-х лет на взрослых племенных баранах тонкорунных пород, доказано, что в условиях Ставропольского края бараны проявляют высокую половую активность не только в осенний (случной) сезон, но и в другие сезоны года.'Наивысшая половая активность-вне сезона

размножения проявлялась у баранов-производителей в зимний период, когда было получено 88 -°0 % запланированных эякулятов (таблица 5).

Таблица 5

Влияние сезона года на активность половых рефлексов баранов

Месяц Число баранов Получено эякулятов Время на получение эякулята, мин М±ш Индекс половой активности, А

Всего от одного барана в неделю

ед. %

Январь 17 286 7,5 90,3 0,44±0,12 2,3

Февраль 17 502 7,3 88,0 0,89±0,08 1,12

Март 16 489 6,5 78,3 258±0,07 0,39

Апрель 15 ' 487 6,5 78,3 1,97±0,13 0,51

Май 15 434 6,1 73,5 1,78±0,12 0,56

' Июнь 15 187 4,9 59,0 1,65±0,16 0,61

Октябрь 17 630 8,3 100,0 0,46±0,08 2,2

В весенние месяцы этот показатель снижался до 73 -78 % (Р< 0,01), а в июне доходил до минимальных значений - 59 % (Р< 0,01). При этом начиная с апреля 2 барана из 17 (12%) полностью отказались от садок. Наименьшее время на выделение одного эякулята бараны затрачивали зимой - 0,67±0,10 мин., к этот показатель сопоставим со скоростью осуществления половых рефлексов баранами в случной сезон (0,46±0,08 мин.). В весенний период этот показатель возрастал на достоверную величину (2,11±0,07 мин. при Р< 0,001), снижаясь в летний период до 1,65±0,16 мкн. Некоторое повышение уровня половой активности в июне, по-видимому, объясняется их стрижкой в мае. Основным выводом является то, что, несмотря на определенное снижение уровня половых рефлексов в весенний и летний периоды, связанное, вероятно, с угнетающим влиянием на воспроизводительную функцию увеличивающегося фотопериода и нарушением терморегуляции у неостриженных животных, бараны -производители сохраняют достаточно высокую половую активность во все се-

зоны года, что свидетельствует о возможности круглогодичного получения спермы.

В связи с возможным влиянием сезона получения спермы на ее качество и количество, были изучены основные характеристики спермы, взятой в разные сезоны года (таблица 6).

Таблица 6

Влияние сезона года на количество и качество спермы, барана

Сезон года Число баранов, гол Исследовано эякулятов Средние показатели спермы Получено спермиев на одного барана в неделю, млрд., М±т

подвижность, балл М±ш концентрация млрд./мл М±ш объем, мл М±т

Зима 17 788 9,2 ±0,06 4,18 ±0,04 0,94 ±0,02 28,3 ± 1,31

Весна 16 1410 8,8 ±0,23 3,67 ±0,06 0,88 ±0,03 21,4 ±0,95

Лето . 15 187 8,5 ±0,31 3,61 ± 0,05 0,84 ±0,03 17,8 ± 1,25

Осень 17 630 8,8 ±0,20 4,33 ±0,07 1,23 ±0,03 35,3 ± 1,14

Выяснено, что в зимний период подвижность спермиев в среднем была 9,2 ± 0,06 балла, тогда как в весенний и летний периоды этот показатель снижался соответственно до 8,8 ± 0,23 и 8,4 ± 0,31 балла при статистически недостоверных различиях. Концентрация спермиев в зимних эякулятах была достоверно выше (Р< 0,01), чем в весенних и летних (соответственно 4,18 ± 0,04, 3,67 ± 0,06 и -3,61 ± 0,05 млрд./мл). Объем полученных эякулятов составлял 0,94 ± 0,02, 0,88 ± 0,03 и 0,84 ± 0,03 мл соответственно по сезонам и был в зимних эякулятах также достоверно выше (Р< 0,01).

Таким образом, результаты трехлетних опытов свидетельствуют о том, что качественные и количественные показатели спермы, такие как подвижность, объем, концентрация, несмотря на определенную тенденцию к снижению в весенний и, в особенности, летний периоды, остаются на достаточно высоком уровне во все сезоны года и отвечают минимальным требованиям.

Для суждения об оптимальном режиме использования баранов были испытаны три режима их половой нагрузки. В теченйе Шести месяцев (с января

по июнь) от баранов-производителей получали по 6, 8 или 10 эякулятов (соответственно 3, 4 и 5 дуплетных садок) в неделю. Качественные и количественные характеристики спермы в зависимости от^сезона года и режима половой нагрузки представлены в таблице 7.

Установлено что, после шестимесячного непрерывного использования баранов с нагрузкой 10 садок в неделю средний объем эякулята уменьшился с 1,07 до 0,57 мл, или на 47 %, при восьми садках ■*- с 1,17 до 0,66 мл (43 %), а при получении шести эякулятов в неделю - с 1,17 до 1,07 мл, или только.на 9%, при этом в группе баранов, использовавшихся с максимальной нагрузкой (десять садок в неделю), заметное снижение объема эякулята (до 30 %) произошло уже к концу первого месяца опыта.

По общему количеству выделяемых за неделю спермиев между группами баранов, используемых с более интенсивной нагрузкой (10 и 8 эякулятов в неделю), и животными с нагрузкой 6 садок различия наблюдались только в первые два месяца опыта. К концу опыта в первых двух группах уровень спермопродукции снизился на достоверную величину (с 31,3 до 16,9 млрд., Р< 0,001 и с 34,3 до 16,9 млрд., Р<0,001), тогда как у баранов с нагрузкой 6 эякулятов в неделю изменение этого показателя было незначительным ( с 25,7 до 18,9 млрд.). Характерно, что снижение общего уровня спермопродукции в группе баранов, использовавшихся с нагрузкой 10 садок в неделю, происходило как за счет уменьшения объема спермы в эякулятах, так и в связи со значительным понижением половой активности баранов в конце опыта. Среди баранов этой группы количество отказов от второй садки в марте - июне составляло в среднем 19 %, тогда как в группах с нагрузкой 6 и 8 эякулятов в неделю число отказов не превышало 6 %. В то же время половая активность, определяемая затратой времени на выделение одного эякулята, была выше у баранов, используемых с меньшей нагрузкой.

Особенно заметными эти различия были в последние два месяца опыта (май-июнь). В этот период от баранов, используемых с нагрузкой 10 и 8 садок в неделю, получено 70 % и 82 % запланированных по режиму эякулятов,

Таблица 7

Основные показатели спермопродукции баранов в зависимости от сезона года и режима использования

Месяцы Средний объем эякулята, мл, М±ш Средняя концентрация спермы, млрд./мл, М±т Получено спермиев в среднем на одного барана в неделю, • млрд., М±т

режим использования баранов - производителей

5x2 4x2 ' 3x2 5x2 4x2 3x2 5x2 4x2 3x2

Январь 1,07±0,03 1,17±0,05 1,17±0,05 4,23 ±0,09 3,90±0,07 3,90±0,06 31,3±3,76 34,3±3,76 25,7±1,41

Февраль . 0,70±0,03 0,88±0,04 1,06±0,05 4,33±0,03 3,96±0,05 3,90±0,06 29,7±2,93 27,9±2,93 22,4±1,02

Март 0,67±0,03 • 0,82±0,04 0,93±0,06 4,08±0,06 3,50±0,07 3,80±0,08 21,8±1,07 21,8+1,07 20,0±0,84

Апрель 0,60±0,03 0,8810,05 0,95±0,06 3,85±0,07 3,30±0,07 3,10±0,08 20,4±1,21 20,4± 1,21 17,3±1,52

Май 0,63±0,03 0,77±0,03 1,07±0,05 4,00±0,05 3,40±0,06 3,20±0,07 20,9± 1,26 20,9±1,26 20,5±2,01

Июнь 0,5^,05 0,66±0,06 1,07±0,09 3,44±0,11 3,20±0,16 3,40±0,13 16,9±0,91 16,9±0,91 18,9±1,18

Вреднем за период 0,65±0,03 0,80±0,05 ' 1,04±0,06 3,99±0,06 ?,54±0,07 3,53±0,08 23,2±2,10 23,3+2,10 20,4±1,38

тогда как при 6 садках в неделю в эти сроки было получено 88 % эякулятов. В результате группа баранов с максимальной нагрузкой имела некоторое преимущество по общему количеству полученной спермы лишь в первые два месяца эксплуатации, тогда как в конце опытного периода этот показатель был даже ниже, чем в группе с минимальной нагрузкой (16,9±0,91 против 18,9±1,18 млрд.). Как видно, при длительном непрерывном использовании баранов увеличение числа садок с 6 до 8 и 10 в неделю не привело к достоверному повышению общего уровня спермопродукции производителей:

В специальном опыте изучали устойчивость спермы к замораживанию в зависимости от сезона года и режима половой нагрузки баранов. Установлено, что изменение устойчивости эякулятов к замораживанию в связи с сезоном получения спермы было незначительным (таблица 8).

Таблица 8

Устойчивость спермы к замораживанию в зависимости от сезона года

Параметры Всего Сезон года

зима весна лето

Заморожено эякулятов 2106 763 1228 115

Из них устойчивы к замораживанию, число % 1858 88,2 ±0,7 719 94,2 ±0,8 1049 85,4 ± 1,2 90 78,3 ± 1,3

Заморожено спермы, мл 1902,0 708,0 1069,0 96,0

В т.ч. пригодной для хранения, мл % 1676,0 88,1 ± 0,4 692,0 97,8 ±0,7 912,0 85,3 ± 0,6 72,0 74,3 ± 1,3

Из 2106 эякулятов, полученных за весь период опыта, устойчивыми к замораживанию оказались 1858 эякулятов, или 88 %. Из общего количества замороженной спермы (1902 мл) пригодным для дальнейшего хранения оказалось 1676 мл или 88,1 %. Наиболее устойчивой к криокронсервации была сперма, полученная зимой (94,2%) при вполне приемлемом качестве спермы после оттаивания весенних (85,4%) и летних (78,3 %) эякулятов.

Подвижность спермы, заготовленной в различные сезоны года, после оттаивания варьировала в незначительных пределах (от 4,2 до 4,5 балла), в то время как выживаемость спермы, загоювленной в летний период, Снижалась на достоверную величину по сравнению с зимним (Р<0,01) и весенним (Р<0,05) периодами. Режим половой нагрузки не отразился на качественных показателях оттаянной спермы и был близко сходен во всех группах. -

Результаты лабораторных опытов были подтверждены в научно-производственном опыте, проведенном с целью выяснения биологической полноценности спермы, замороженной в различные сезоны года. Установлено, что не имеется достоверных различий в оплодотворяемости овец, осемененных замороженной-оттаянной спермой осенней, зимней, весенней и летней заготовки (таблица 9).

Таблица 9

Результаты ягнения овец, осемененных спермой, заготовленной в различные сезоны года

Сезон заготовки замороженной спермы Осеменено овец, гол. Из них объягнилось от первого осеменения Получено ягнят

гол. % гол. %

Осень 80 36 45,0 ±8,0 47 131,0

Зима 151 ' 73 48,3 ± 5,8 93 127,0

Весна 349 66 44,2 ±5,5 86 130,0

Лето 140 53 37,9 ±5,6 66 124,0

Этот показатель по сезонам года составлял соответственно 45,0, 48,3, 44,2 и 37,9 % при недостоверных различиях между группами.

Сопоставляя результаты' лабораторных и научно-производственных

ы.

опытов можно сделать заключение, что половая активность и уровень спермо-продукции баранов-производителей сохраняются на достаточно высоком уровне во все сезоны года. Сохранение биологической полноценности замороженной спермы, заготовленной в разные сезоны года, свидетельствует о возможности успешного круглогодичного накапливания спермы от высоко-

ценных элитных производителей. При этом установлено, что наиболее приемлемым является режим половой нагрузки 6 эякулятов в неделю (3 дуплетные садки с интервалом между ними 48 часов). Полученные результаты убедительно доказывают не только биологическую обоснованность и практическую возможность накопления замороженной спермы от высокопродуктивных баранов в неслучной период, но и экономическую эффективность данного биотехнологического приема. Оптимальный режим половой нагрузки позволяет заготавливать в неслучной период от каждого барана до 4-4,5 тыс. доз замороженной спермы. Несмотря на то, что расход замороженной спермы на плодотворное осеменение в 2 - 3 раза больше, в целом заготавливаемого количества спермы достаточно для получения дополнительно 1200 - 1500 ягнят ежегодно. Это позволяет значительно интенсифицировать использование элитных производителей с высокой препотентностью, не прибегая к перегрузкам в течение случного сезона, ни к специальным приемам кормления и содержания, при нормальном рабочем дне обслуживающего персонала и соблюдении выходных дней.

Достигнутые значительные успехи в разработке технологий криоконсер-вации спермы барана, а также выяснение принципиальной возможности накопления качественной замороженной спермы во все сезоны года позволили создать генофондное хранилище (банк) спермы, где в настоящее время сохраняется более 110 тыс. доз спермы от 230 элитных баранов-производителей 14 пород различного направления продуктивности.

2.2.4 Совершенствование технологии искусственного осеменения овец с синхронизированным половым циклом

При существующей системе осеменения овец, основанной на естественном прихождении овец в охоту, случка продолжается обычно 1,5.-2 мес., результатом чего является растянутый период ягнения. Наличие в отарах разновозрастных ягнят создает большие трудности в сохранении и выращивании молодняка, его оценки и, в конечном счете, приводит к снижению темпов вое-.

производства. Повышение интенсивности воспроизводства в овцеводстве тесно связано с разработкой доступных и эффективных методов направленного регулирования воспроизводительной функции овец. Особое место среди них занимает метод синхронизации охоты в границах полового сезона, сущность которого заключается в регуляции наступления половой охоты у определенного количества овец для оптимизации технологии осеменения. Однако предложенные способы синхронизации полового цикла имеют ряд недостатков, которые в значительной степени затрудняют их практическое применение (Н.А.Желтобрюх, 1981).

Эксперименты, проведенные в'течение ряда лет, позволяют иметь собственные суждения об эффективности, технологичности и целесообразности различных способов синхронизации, результаты которых могут представить определенный теоретический и практический интерес. В опытах использовались отечественный прогестаген ацетат мегестрола, а также флюогестон ацетат, выпускаемый 1Шегуе1 (Голландия) под торговой маркой «Хроногест». Подопытным взрослым овцам на 12 дней интравагинально вводили пессарии, пропитанные 1% спиртовым раствором прогестагенов из расчета 30 мг препарата на один пессарий.

В исследованиях, проведенных в половой сезон, выяснили, что после ин-травагинальной аппликации ацетата мегестрола и флюогестон ацетата синхронизация стадии возбуждения полового цикла наступала у 97-100% овец. При этом 94,8 % овец (690 из 728) пришли в охоту во временной отрезок между 24 и 60 часами после удаления губок. Установленным "фактом является также и то, что в первые 24 часа после удаления пессариев ни одна из обработанных овец не проявила признаков охоты, что свидетельствует об абсолютном торможении половых рефлексов в. период обработки (таблица 10).

Таким образом, установленная динамика прихождения овец в охоту после внутривлагалищной аппликации ацетата мегестрола и флюогестон ацетата позволяет с высокой точностью определять сроки проведения осеменения и на этой основе разработать технологический регламент.

Таблица 10

Прихождеиие овец в охоту после иитравагинального применения прогестагенов

Время после извлечения пессариев, час Количество овец в охоте

Ацетат мегестрола Флюогестон ацетат

' гол % гол %

24 - - - -

36 22 8,7 178 37,4

48 . 158 62,7 282 59,2

60 34 13,5 16 3,4

72 18 7,1 - -

84 8 3,2 - -

96 6 2,4 - -

более 96 6 2,3 - -

Всего 252 100 ' 476 100

Наиболее важным критерием эффективности предлагаемых приемов является оплодотворяемость овец в синхронизированную охоту, которая в наших опытах в среднем составила 84 %, что соответствует оплодотворяемости овец в естественную половую охоту.

С теоретической и практической точек зрения определенный интерес представляет динамика прихождения подопытных овец в естественную охоту во второй цикл. Собственные исследования показали, что'подавляющее большинство подопытных овец (до 90 %) проявили признаки половой охоты в течение 4 дней (с 16 по 19 день полового цикла). Это позволяет утверждать, что практически значимый синхронизирующий эффект проявляется и во вторую, неиндуцированную, охоту. Учет ягнения подопытных овец показал высокую (85 %) оплодотворяемость при их хорошей плодовитости (126 %).

Из биологически активных веществ для воспроизводства важное значение имеют простагландины, в частности, группы Ф 2 альфа. Часть собственных исследований была направлена на сравнительное изучение эффективности синхронизации полового цикла у овец применением синтетических аналогов простагландина Ф 2а При этом использовали препараты «Эстрофан» (1 группа, п=170), «Клатрапростин» (2 группа, п=190) и «Эстуфалан» (3 групп«,

п=180). Схема синхронизации предусматривала двукратное фронтальное, без

учета стадии полового цикла, введение с интервалом 11 дней препарата ПГФ

и

2а в дозе 125 мкг по АДВ.

Выяснено, что различные синтетические аналоги ПГФ 2а с высокой эффективностью могут применяться для синхронного вызывания стадии возбуждения полового цикла у овец в эстральный сезон. В течение 96 часов после второй инъекции ПГФ 2а 90-100% овец проявили признаки половой охоты, при этом достоверных различий в синхронизирующем эффекте различных препаратов не установлено. В среднем по всем группам 82 % (Нш=74-88 %) овец пришло в охоту в период между 48 и 72 часами (рис. 1).

45 -

Часы

Рис. 1 Динамика прихождения овец в охоту после их синхронизации препаратами ПГФ2-альфа

Сходная динамика прихождения овец в охоту, обработанных различными препаратами, свидетельствует об их аналогичной лютеолитической активности. В то же время следует отметить, что применение отечественных препаратов «Клатрапростин» и «Эстуфалан» по сравнению с чешским «Эетрофа-ном» снижает себестоимость синхронизации в 2-3 раза.

Таким образом, применение основных типов гормональных препаратов -прогестагенов и простагландинов - позволяет эффективно синхронизировать половую охоту у овец в границах полового сезона, регулировать и программировать воспроизводство стада.

2.2.5 Сравнительная оценка способов стимуляции множественной овуляции у овец-доноров

В селекционной работе с овцами важное значение имеет целенаправленное и рациональное использование ценных и уникальных генотипов животных. Разработанные к настоящему времени биотехнологическ'ие методы и приемы позволяют практически полностью реализовать биологический резерв воспроизводительной функции выдающихся баранов-производителей и, тем самым, в значительной степени интенсифицировать их использование в воспроизводстве стада. В то же время методы интенсивного использования генетического потенциала высокопродуктивных овец разработаны недостаточно. Известно, что овцы располагают огромным репродуктивным потенциалом, однако возможности генеративной функции яичников при традиционных методах размножения реализуются не полностью. За весь период хозяйственного использования высокопродуктивные овцы приносят не более 7-8 потомков что, безусловно, не может удовлетворять современным Требованиям селекци-

г

онно-племенной работы. Поэтому одним из приоритетных направлений биологической науки является разработка биотехнологических методов, направленных на максимальное размножение генетически высокоценных овец.

Метод получения эмбрионов от высокоценных овец-доноров и их трансплантация менее ценным овцам-реципиентам может в определенной степени решить эту проблему. Ключевым моментом в технологии трансплантации является разработка способа вызывания множественной овуляции. Кроме того, этот способ незаменим и в решении другой важной биотехнологической проблемы - создании трансгенных животных. Как известно, способ получения трансгенных животных предусматривает микроинъекции генных конструкций в пронуклеусы зигот. Однако снижение жизнеспособности эмбрионов и невысокая вероятность интеграции чужеродной ДНК в геном зародыша требует большого количества эмбрионов.

В собственных исследованиях часть экспериментов была направлена на разработку эффективного способа вызывания множественной овуляции у овец. В качестве овец - доноров использовали высокопродуктивных взрослых овцематок ставропольской породы, отнесенных к классу элита.

Установлено, что эффективность стимуляции множественной овуляций зависит от многих причин, в первую очередь, от применяемого гонадотропно-го препарата (таблица 11).

Таблица 11

Эффективйость применения различных гонадотропинов для индукции полиовуляции у овец-доноров

Показатели Гонадотропин

СЖК Фоллигон ФСГ

Количество обработанных животных 25 47 35

Ответило полиовуляцией, гол % 20 80,0 45 95,7 31 88,6

Общее число овуляций, всего в т.ч. на одного донора 131 5,2 ±0,41 564 12,0±0,23 501 14,3±0,19

Общее число извлеченных эмбрионов в т.ч. на одного донора 93 3,7 ±0,09 385 8,2 ± 0,07 311 8,9 ±0,06

Среднее число пригодных к пересадке эмбрионов, полученных от одного донора 3,3 6,3 6,0

Из 25 овец - доноров, обработанных нативным гонадотропином СЖК в дозе 2000 МБ 20 животных (80,0 %) ответили полиовуляцией (5,2 овуляций на донора при -Lim = 3-9). Следует подчеркнуть, что из ответивших полиовуляцией овец лишь 8 (40%) животных проявили интенсивную реакцию (6-9 овуляций).- При использовании высокоочшценного гонадотропина ФСГ -п в дозе 24 мг из 35 обработанных овец множественную овуляцию проявили 31 (88,6%). При этом среднее число овуляций на одного донора составило 14,3 при Lim 4-22 овуляции. В этой группе животных-интенсивную (6 -9) овуляцию проявили 12 животных (38,7 %), а у 19 овец (61,3 %) зафиксирован высокий (более 10 овуляций) уровень яичникового ответа на введение экзогенного гормона. В группе овец, для обработки которых использовался гонадотропин фоллигон, индукцию полиовуляции удалось вызвать у 45 из 47 доноров

j РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ j I БИБЛИрТЕКА I СПетсфбург I

i 09 900 акт Л

(95,7%). При этом не было различий в овуляторной активности препарата в дозах 1800 и 2000 МЕ (соответственно, 93,3 и 96, 9 %). Среднее число овуляций на одного положительного донора составило 12,0 при Lim = 6-18. Интенсивную овуляторную реакцию проявили 17 овец (37,8 %,), в то время как остальные 28 (62,2 %) доноров проявили высокий уровень полиовуляции. Таким образом, установлено, что лучшей способностью индуцировать множественную овуляцию у оврц обладал гонадотропин фоллигон (96,9 %). При использовании ФСГ -п в дозе 24 мг этот показатель снижался на недостоверную величину ( 88,6 %), однако по уровню суперовуляции, оцениваемому по количеству овуляций на одного положительного донора, он превосходил фоллигон ( 14,3 против 12,0). Как по способности вызывать множественную овуляцию, так и по его уровню, оба эти препарата достоверно превосходили нативный гонадотропин СЖК ( соответственно 80% , Р <0,05 и 5,2 овуляции, Р <0,001).

Полученные данные дают основание утверждать, что применение высо-коочищенного препарата ФСГ -п и гонадотропина фоллигон для вызывания множественной овуляции у овец более эффективно, чем применение нативно-го СЖК. Наши исследования подтвердили мнение ряда авторов (Л.К.Эрнст, Н.И.Сергеев, 1989; R.D. Elsden, K.I. Betteridge, 1978), что применение хирургической техники вымывания эмбрионов (лапаротомия) не гарантирует многократного использования доноров. Несмотря на соблюдение основных требований асептики и антисептики во время проведения операций, уже после первого промывания яйцепроводов у 8 % животных отмечали слипчивое воспаление воронки и связок яйцепроводов. После повторной операции спайки яйцепроводов и рогов матки регистрировали у 43 % животных, а после третьего хи-рургическо1 о вмешательства — у 96 % подопытных овец.-Только у 1 донора из 26 (3,8 %) удалось провести четырехкратное промывание яйцепроводов. •

В связи с этим нам представляется, что молодых овцематок, составляю- " щих основу племенного стада, для получения эмбрионов в течение года целесообразно использовать не более одного-двух раз. Затем спустя один половой цикл их следует осеменить для получения от них потомства обычным споса-

бом. Такую процедуру можно повторять и в последующие годы. Тем не менее, мы считаем, что в качестве овец-доноров эмбрионов, в основном, должны использоваться высокоценные овцематки, выбракованные из племенного стада по различным причинам. Важным условием при этом является нормальное осуществление у таких животных репродуктивных функций (половых циклов). Наши исследования показали, что даже сравнительно старые 7-8 летние овцематки при создании необходимых условий кормления и содержания положительно отвечают на гормональную обработку и в течение одного полового цикла от них можно получать 8-10 зародышей, а за весь половой сезон - до 20 - 25 полноценных эмбрионов для'трансплантации.

2.2.5 Эффективность трансплантации эмбрионов у овец

Одним из важных критериев эффективности технологии вызывания множественной овуляции и последующей трансплантации эмбрионов является приживляемость зародышей в организме реципиента и количество полученных ягнят- трансплантатов. В собственных экспериментах по пересадке ранних эмбрионов у овец получены следующие результаты (таблица 12).

Таблица 12

Эффективность пересадки эмбрионов

Год Количество реципиентов Пересажено эмбрионов Объягнилось реципиентов Получено ягнят трансплантатов Осеменено доноров в естественном половом цикле Получено ягнят (сибсов) от доноров

всего %

1995 35 70 17 48,6 18. 18 17

1996 30 60 16 53,3 16 26 25

1997 32 64 9 59,3 18 20 18

Всего 97 194 52 53,7 52 64 60

Установлено, что приживляемость эмбрионов составила в средне^ 53,7% (Lim = 48,6 - 59,3 %). Из 97 реципиентов, которым было пересажено 194 эмбриона, объягнилось 52, от которых получено 52 трансплантата.

В естественном половом цикле, последовавшем после вымыванйя эмбрионов, было осеменено 64 овцы - донора, от которых получено 60 ягнят-нетрансплантатов (полных сибсов).

Важным этапом метода трансплантации является введение эмбрионов в яйцепроводы или рога матки овцам-реципиентам. Для пересадки эмбрионов обычно используется традиционная хирургическая операция - лапаротомия. Однако нарушение целостности «материнской среды», связанное с хирургической пересадкой, неблагоприятно влияет на дальнейшее развитие эмбриона. Чем меньше стрессовых явлений при пересадке ранних эмбрионов, тем меньше наблюдается физиологически необратимых процессов в организме у приемлющей матери, направленных на отторжение гомотрансплантата. Поэтому одна из задач опытов состояла в разработке способа безоперационной трансплантации эмбрионов, повышающего многократность использования животных и снижающего сложности осуществления трансплантационных приемов.

В наших экспериментах изучена принципиальная возможность нехирургического введения эмбрионов овец в рога матки или яйцепроводы методом лапароскопии. Для этого использовали комплект эндоскопического оборудования (специальные станки, эндоскопы, инструментарий для введения эмбрионов) фирмы «Karl Storz» (Германия).

Доказано, что нехирургическая трансплантация эмбрионов методом лапароскопии по технологичности .и эффективности не только не уступает, но и превосходит традиционно применяемую технику трансплантации эмбрионов хирургическим методом. Из 80 реципиентов, которым хирургическим способом были пересажены эмбрионы, объягнилось 42 овцематки (52,7 %), от которых получено 43 ягненка. При использовании лапароскопического метода для нехирургической трансплантации эмбриойов из 87 реципиентов объягнилось 48 (55,4 %), от которых получено 50 ягнят. При этом установлено, что использование эндоскопического оборудования значительно упрощает и ускоряет технику трансплантации эмбрионов и сводит к минимуму постоперационные осложнения.

Иммуногенетическая экспертиза достоверности происхождения установила, что антигены реципиентов, от которых были получены трансплантаты, в их крови отсутствовали. Группы крови трансплантатов соответствовали группам крови овец- доноров и баранов, спермой которых они были осеменены. Это убедительно свидетельствует о том что все ягнята - трансплантаты были получены от пересаженных зигот.

2.2.6 Рост и развитие ягнят - трансплантатов

Одни • из показателей целесообразности и эффективности трансплантации эмбрионов как биотехнологического метода, являются рост и развитие ягнят-трансплантатов. В наших исследованиях мы ставили целью изучить в сравнительном аспекте рост и развитие ягнят-трансплантатов и их сверстни- ■ ков-нетрансплататов. Для этого были отобраны 50 ягнят-трансплантатов и 50 их полных сибсов, т.е. ягнят, рожденных овцами-донорами после естественного прихождения в охоту и осеменения теми же баранами. Сравниваемые группы находились в одинаковых условиях ухода, содержания и кормления.

Установлено, что продолжительность эмбриогенеза ягнят-трансплантатов (включая период нахождения в половых путях донора) составила в среднем 148,3 дня (1лт=142-153). Этот срок плодоношения является нормой для животных данной породы. Необходимо отметить, что течение беременности и, соответственно, роды проходили в обеих сравниваемых группах без явных патологий.

Таким образом, метод эмбриотрансплантации не нарушает нормальной продолжительности эмбрионального развития ягнят-трансплантатов.

Показатели постнатального развития ягнят-трансплантатов и их аналогов-сверстников представлены в таблице 13.

Как видно из результатов опыта, ягнята-трансплантаты рождались круп-• ными (баранчики 5,3 ± 0,63 кг, ярочки 4,4 ± 0,73 кг). Живая масса нетрансплантатов, полученных от овец-доноров, была недостоверно ниже и составила соответственно у баранчиков - 5,2 ± 0,88 кг, у ярочек - 4,3 ± 0,91 кг.

Таблица 13

Динамика живой массы ягнят-трансплантатов и их сверстников

Возраст ягнят Живая масса кг М±ш

баранчики ярочки

трансплантаты сибсы трансплантаты сибсы

При рождении 5,3±0,63 5,2±0,88 4,4+0,73 4,3±0,91

1 месяц 12,8±0,73 13,3±1,06 11,8±0,87 11,2±1,10

4 месяца 29,1+1,14 30,4±1,13 25,1±1,03 24,3±0,98

6 месяцев 33,3±1,36 36,1±1,29 28,3±1,36 27,9±1,18

12 месяцев 57,5±1,95 59,2±1,74 42,3±1,93 43,2±1,7

За молочный период баранчики-трансплантаты развивались интенсивно и прибавили в живой массе в среднем по 23,7 кг, в то время как их сверстники за этот период прибавили немного больше - 25,2 кг (разница 5,9 %).

К годовалому возрасту баранчики-трансплантаты достигли живой массы в средней 57,5 ± 1,91 кг, тогда как их сверстники-сибсы - 59,2 ± 1,24 кг.

Ярочки-трансплантаты к моменту отбивки (4 мес.) несколько превосходили своих сверстниц-нетранслантатов по живой массе (25,1 ± 1,03 против 24,3 ± 0,98 кг). Затем к 6 месячному возрасту эта разница практически нивелировалась (28,3 ± 1,36 против 27,9 ± 1,18 кг). В 12 месячному возрасту трансплантаты уступали своим сверстницам по живой массе на 0,9 кг (42,3 ± 1,93 против 43,2 ± 1,77 кг), однако эти различия были недостоверными.

Таким образом, ягнята-трансплантаты хорошо развивались и к годовалому возрасту по живой массе rie уступали своим сверстникам, рожденным овцами-донорами.

В возрасте 15 мес. ярки-трансплантаты и их сверстницы были пробони-тированы. Показатели продуктивности подопытных ярок приведены в таблице 14.

Как показывают материалы таблицы, все ярки-трансплантаты отвечали требованиям желательного типа и распределились следующим образом: элита - 85 % и I класса- 15 %.

Таблица 14

Продуктивность ярок-трансплантатов и их сверстниц в возрасте 15 месяцев

Показатели Класс Ярки

трансплантаты сверстницы

М±ш М±ш

Живая масса, кг элита 53,4 ±2,16 56,3 ± 1,54

I класс 46,6 ± 1,57 -

Настриг чистой шерсти, кг элита 3,49 ±0,33 3,68 ±0,25

I класс 2,86 ±0,17 -

Длина шерсти, см элита 11,8 ±0,65 11,6 + 0,41

1 класс 9,3 ±0,38 -

Среди их сверстниц-сибсов 89 % животных были отнесены к классу элита, а 11 % - к I классу. Необходимо отметить, что по живой массе элитные ярки-нетрансплантаты превосходили трансплантатов на 2,9 кг или 5,4 % (1<1=1,35), по настригу чистой шерсти на 0,19 кг или 5,5 % (и! = 0,8) при практически одинаковой длине шерсти (11,8 и 11,6 см).

Отобранные баранчики-трансплантаты в 18-месячной возрасте не отличались от аналогов-нетрансплантатов по показателям репродуктивной функции (таблица 15).

Таким образом, на основании проведенных исследований и анализа полученных результатов могут быть сделаны выводы, что показатели развития ягнят-эмбриотрансплантатов не имели существенных различий от показателей их полных сибсов, полученных методом искусственного осеменения от тех же овец-доноров. Наши данные подтверждают высказанное рядом исследователей (А.И.Лопырин и соавт., 1951; Ф.М.Мухамедгалиев и соавт., 1981; (М.М.Тойшибекбв, 1986; О.И.Бердонгарова и соавт., 1987) мнение о том, что ягнята-трансплантаты, развившиеся в организмах маток-реципиентов, по динамике изменения живой массы, а также по всему комплексу экстерьерных признаков не уступают, а иногда по некоторым показателям'превосходят контрольных ягнят, полученных от доноров.

Таблица IS

Показатели репродуктивной функции баранов-производителей

Признак Баранчики

трансплантаты сверстники

Возраст начала племенного использования, мес. 18 17,5

Живая масса к началу племенного использования, кг 88,5 89,3

Количество исследованных эякулятов 312 310

Объем нативной спермы, мл 368,0 361,0

Объем одного эякулята, мл 1,18+0,12 1,16+0,33

Концентрация спермиев, млрд./мл 3,05±0,66 3,01+0,52

Подвижность спермиев, баллов 8,2+0,06 8,4+0,09

Подвижность спермиев после оттаивания, баллов 4,3±0,08 4,4±0,09

Оплодотворяющая способность спермы, %: свежеполученной замороженной-оттаянной

86,9 91,0

48; 8 50,3

Полученные нами экспериментальные данные изучения роста и развития трансплантатов в течение длительного времени свидетельствуют о том, что метод пересадки зигот овец, несмотря на определенные сложности, может стать одним из эффективных путей ускоренного размножения генетически высокоценных животных. С одной стороны, трансплантация эмбрионов позволяет сохранять и увеличивать поголовье редких животных, животных желательного генотипа, вида, происхождения. С другой стороны, этот биотехнологический прием является эффективным средством для исследования взаимодействия мать-плод и, таким образом, может внести важный вклад в составление более эффективных программ разведения животных. Наконец,' широкое ис-пользобание трансплантации эмбрионов может увеличить скорость генетического прогресса (от 5 до 100 %) в зависимости от улучшаемого признака и использования селекционных методов. По данным G.W.Bradford, B.W. Kennedy (1980), ёсли бы весь ремонтный молодняк можно было получать от 10 % луч-

ших животных, то генетический прогресс в этом случае наступал бы в 3-4 раза быстрее, чем при настоящем уровне интенсивной селекции. Несмотря на то, что стоимость трансплантации эмбрионов пока еще высока и не всегда экономически оправдана, этот метод будет способствовать ускоренному размножению ценных генотипов, и повысит научно-методический уровень селекционно-племенной работы в овцеводстве.

Выводы

1. Снижение оплодотворяющей способности замороженной спермы барана обусловлено значительными структурными повреждениями акросомы и наружной цитоплазматической оболочки спермиев. При сохранении подвижности после оттаивания у 45 - 55% спермиев лишь 25 - 35 % из них не имеют повреждений. Количество спермиев с повреждениями увеличивается по мере прохождения технологических этапов криоконсервации: разбавление, экви-либрация, замораживание, оттаивание.

2. Новые защитные среды для разбавления спермы барана в большей степени, чем предлагаемые до сих пор, предохраняют спермин от повреждений акросомных структур и биологических мембран, способствуя лучшей сохранности функциональной полноценности. Оплодотворяемость овец, осеме-. ненных спермой, замороженной в разработанных нами и запатентованных разбавителях, составила 47-55%.

3. Нехирургическое внутриматочное осеменение овец методом лапароскопии с использованием комплекта эндоскопического оборудования позволяет получить 65 - 70 % оплодотворений при уменьшении расхода замороженной спермы в 5 - 6 раз.

4. Бараны-производители тонкорунных пород при обеспечении полноценного кормления и надлежащего ухода и содержания способны проявлять высокую половую активность в течение всего года. В то же время половая активность и основные показатели спермы баранов (объем, подвижность, кон-

центрация) подвержены влиянию сезонных факторов и несколько снижаются в весенний и, в особенности, летний периоды.

5. Устойчивость спермы к глубокому замораживанию сохраняется на достаточно высоком уровне во все сезоны года при тенденции к снижению в весенний и летний периоды. Оплодотворяющая способность спермы, заготовленной в различные сезоны года, составляет 38 - 48%.

6. Оптимальный режим половой нагрузки баранов 6 эякулятов в неделю позволяет получать от них в неслучной сезон до 200 мл спермы и заморозить в этот период до 4 - 4,5 тысяч доз от одного барана и тем самым в 2 - 3 раза увеличить интенсивность использования элитных производителей.

7. Технология накапливания замороженной спермы в неслучной сезон является важным практическим приемом сохранения генофонда выдающихся баранов, обеспечивая возможность использования таких производителей для углубленной селекционной работы на протяжении длительного времени. На этой оснбве создан и успешно функционирует генофондное хранилище (банк) спермы высокоценных баранов, где в настоящее время сохраняется более 110 тысяч доз спермы от 230 элитных производителей 14 пород различного направления продуктивности.

8. Оплодотворяющая способность спермы, замороженной в 1973 году и использованной для осеменения овец в год заготовки, через 6, 8, 18, и 27 лет хранения в жидком азоте, составила соответственно 33,1; 33,3; 34,2; 38,4 и ч \5%. Более высокая оплодотворяемость овец при использовании спермы 18 и 27 летнего хранения объясняется значительными усовершенствованиями технологии оттаивания замороженной спермы и техники осеменения.

9. Интравагинальное применение ацетата мегестрола и флюогестон ацетата в дозе 30 мг вызывает синхронное проявление стадии возбуждения полового цикла у 90-100% обработанных овец при оплодотворяемости 84 %. Синхронность проявления охоты (85-90 %) сохраняется и во второй половой цикл.-

10. Отечественные синтетические аналоги простагландина Ф2 - альфа -«Клатропростин» и «Эстуфалан» после двукратного введения в дозе 125 мкг

по АДВ с интервалом в 11 дней индуцируют наступление половой охоты у 82% обработанных овец в течение 72 часов после второй инъекции. По синхронизирующему эффекту они не превосходят распространенный чешский препарат «Эстрофан», однако при их использовании стоимость обработки снижается в 2-3 раза.

11. Нативный сывороточный гонадотропин СЖК в дозе 2000 МБ вызывает множественную овуляцию у 80 % обработанных овец. Более высокой активностью (88,6 %) обладает очищенный препарат ФСГ-п в дозе 24 мг, в то время как гонадотропин «Фоллигон» в дозе 2000 М Е. вызывает полиовуляцию у 95,7 % овец-доноров. Наиболее высокую гонадотропную активность проявляют ФСГ-п и фоллигон (соответственно 14,3 и 12,0 овуляций на одного донора), в то время как этот показатель После применения СЖК оказался достоверно ниже (5,2 овуляций, Р <0,001).

12. Приживляемость ранних эмбрионов после пересадки нехирургическим (лапароскопия ) и хирургическим (лапаротомия) методами составила соответственно 55,4 % и 52,7 %. В отличие от хирургического вмешательства лапароскопия является малотравматической для овец-реципиентов, позволяет избежать негативных послеоперационных последствий и тем самым повышает многократность использования овец-реципиентов.

13. Продолжительность эмбриогенеза ягнят-трансплантатов (включая период нахождения в половых путях донора) составила в среднем 148,0 дней (Нт=142-153). Этот срок плодоношения является нормой для овец тонкорунных пород.

14. Ярки-трансплантаты к годовалому возрасту достигали живой массы 42,3±1,93 кг и не уступали своим сверстницам, полученным от овец-доноров (43,2±1,77 кг). В 15 месячном-возрасте ярки-трансплантаты отвечали требованиям желательного типа (элита - 85 %, I класс - 15 %). Их сверстницы-нетрансплантаты, рожденные овцами-донорами, отнесены соответственно к классу элита 89%, к I классу -11%.

15. В 1,5 летнем возрасте баранчики-трансплантаты по живой массе не уступали сверстникам (88,5 кг против 89,3 кг). Качественные и количественные показатели спермы баранчиков - трансплантатов характеризовались следующими параметрами: подвижность - 8,2 балла, объем эякулята - 1,18 мл, концентрация спермиев - 3,05 млрд./мл. Аналогичные показатели у нетрансплантатов составили 8,4 балла, 1,16 мл и 3,01 млрд./мл.

Предложения производству

1. Для разбавления спермы барана перед криоконсервацией предлагаются новые синтетические среды (авторское свидетельство №1755431 от 18.04.1989 г. и патент РФ №2115386 от 24.03.1997 г.). Указанные среды значительно лучше сохраняют биологическую полноценность замороженной спермы, что обеспечивает стабильное получение 50-55 % оплодотворений.

2. В целях повышения эффективности использования высокоценных баранов-производителей рекомендуется на племпредприятиях и в племзаводах проводить заготовку от них замороженной спермы вне полового сезона. Для поддержания высокой половой активности баранов и получения спермы хорошего качества предлагается использовать их с оптимальной нагрузкой 6 эя-кулятов (3 дуплетные садки) в неделю. Такой режим обеспечивает заготовку 4-4,5 тысяч доз замороженной спермы, что в 2-3 раза увеличивает интенсивность использования элитных производителей — -

3. Для рационализации процессов воспроизводства рекомендуется способ синхронизации половой охоты у овец, основанный на применении отечественных аналогов простаглацдина Ф 2 альфа «Клатропростин» и «Эстуфалан» в дозе 250 мкг, обеспечивающий синхронное проявление половой охоты у 7585% овец при их оплодотворяемости 80-85 %.

4. В целях ускоренного размножения ценных генотипов овец и повышения уровня селекционно - племенной работы в овцеводстве рекомендуется метод трансплантации эмбрионов. Получение 8-10 полноценных эмбрионов от генетически ценных животных обеспечивается применением ФСГ - п в дозе 24 мг

или фоллигона в дозе 2000 МЕ. Трансплантацию эмбрионов у овец предлагается проводить методом лапароскопии, используя для этого эндоскопическое оборудование.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ивахненко, В.К. Влияние электролитов в составе сахарно-желточных сред на качество замороженной спермы барана /В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Разведение овец и коз. Шерстоведение: Сб. науч. тр. /ВНИИОК. - Ставрополь, 1982. - С.77-79.

2. Айбазов, А-М.М. Влияние состава синтетической среды на качество замороженной спермы барана /А.М.М. Айбазов //.Актуальные проблемы развития агропромышленного комплекса; Тезисы докладов краевой научно-практич. конф. молодых ученых / СНИИСХ. - Ставрополь, 1983. - С.127-129.

3. Желтобрюх, H.A. Сезонные изменения уровня спермопродукции баранов / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Разведение овец и коз. Шерстоведение: Сб. науч. тр. / ВНИИОК. - Ставрополь, 1983. - С.82-86.

4. Желтобрюх, H.A. Влияние режима оттаивания на качество и оплодотворяющую способность замороженной спермы барана / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Разведение овец и коз. Шерстоведение: Сб. науч. тр. /ВНИИОК. - Ставрополь, 1984. - С.118-122.

5. Желтобрюх, H.A. Влияние сезонных факторов и режима использования на спермопродукцию баранов / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Животноводство. -1985. - №3. - С. 17-21

6. Айбазов, А-М.М. Рациональное использование высокоценных баранов-производителей / А.-М.И.Айбазов // Научно-производственная конференция по овцеводству и козоводству. Тезисы научных сообщений /ВНИИОК. -Ставрополь, 1986. - С.119-120.

7. Желтобрюх, H.A. Режимы использования баранов-производителей при длительной их эксплуатации в течение года /Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Повышение эффективности селекционно-племенной рабо-

ты в овцеводстве и козоводстве: Сб. науч. тр. / ВНИИОК. - Ставрополь, 1986. -С. 43—48.

8. Желтобрюх, H.A. Рекомендации по оптимальному режиму использования высокоценных баранов при длительной их эксплуатации на протяжении года /Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Москва, 1987. - 13 с.

9. Желтобрюх, H.A. Оплодотворяющая способность спермы баранов, замороженной в • рафинозной и лактозно-гуммиарабиковой средах /Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Методы и приемы эффективной селекции овец и коз: Сб. науч. тр. / ВНИИОК.-Ставрополь, 1987. -С. 79-84.

10. Айбазов, А-М.М. Усовершенствование технологии криоконсервации спермы и использование ценных баранов-производителей: Автореф. дисс... канд. вет. наук / А.-М.М.Айбазов - Ставрополь, ССХИ, 1987. - 22 с.

11. Желтобрюх, H.A. Криозащитное действие препаратов поливинил-пирролйдона в синтетических средах для замораживания спермы барана / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Разработка и применение методов увеличения продуктивности овец и коз и улучшения качества их продукции: Сб. науч. тр. / ВНИИОК. - Ставрополь, 1989. - С. 97-101.

12. Желтобрюх, H.A. Повышение эффективности использования ценных баранов в весенне-летние месяцы /H.A. Желтобрюх, В.К. Ивахненко, А.-М.М. Айбазов // Овцеводство. - 1990. - № 1. - С. 17-18.

13. Желтобрюх, H.A. Подготовка баранов и технология криоконсервации

н

спермы /Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Методические рекомендации. - Ставрополь, 1990. - 16 с.

14. Рабочев, В.К. Новые криопротекторы для замораживания спермы баранов / В.К.Рабочев, А.М.МАйбазов, К.К.Ашурбегов // Современные достижения науки и практики в области селекции овец и коз: Тезисы науч. сообщен. - Ставрополь, 1991. - С.233-234.

15. Рабочев, В.К. Разработка системы рационального использования высокоценных баранов-производителей и овцематок /В.К. Рабочев, А.-М.М. Ай-

базов, М.М. Кунижев // Мат. науч.-произв. конф по овцеводству и козоводству / ВНИИОК . - Ставрополь, 1992. - С. 52 - 62.

16. Результаты австрало-российского эксперимента по использованию замороженной и свежеполученной спермы мериносовых баранов австралийской и ставропольской пород методом лапароскопии /В.А.Мороз, Т.К.Бурдуковская, А.-М.М.Айбазов и др. // Генетика, селекция и качество продукции овец и коз: Сб. науч тр. / ВНИИОК. - Ставрополь, 1992. - С.93-109.

17. Пат. 1755431 СССР А 61 Д 19/02. Среда для разбавления спермы баранов / М.М.Айбазов, Н.П.Гапаган, В.И.Богомаз и др. (СССР). - № заявки 4702977; Заявлено 18 апреля 1989 г; опубликовано 15 апреля 1992 г. - 4 с.

18. Результаты первого этапа австрало-рс>ссийского эксперимента /В.А.Мороз, Т.К.Бурдуковская, А.-М.М.Айбазов и др.// Овцеводство. -1993. -№ 3. - С.10-14.

19. Использование новых гормональных средств и метода лапароскопии при трансплантации эмбрионов у овец /В.К. Рабочее, А.-М.М. Айбазов, М.М. Кунижев и др. // Генетика, селекция и качество продукции овец и коз: Сб. науч тр. /ВНИИОК. - Ставрополь, 1993. - С.107-111.

20. Воспроизводству овец - лапороскопическое осеменение /В.А.Мороз,

B.К.Рабочев, А.-М.М.Айбазов и др.// Тр. междунар. конф. по животноводству / Бишкек. - 1995.

21. Итоги и перспективы использования гормональных препаратов при трансплантации эмбрионов в овцеводстве /В.К.Рабочев, А.-М.М.Айбазов, К.К.Ашурбегов и др.// Мат. 2-ой Междунар. конф. Актуальные проблемы биологии в животноводстве». Тезисы докладов и сообщ. / Боровск. - 1995.-

C.234 - 235.

22. Приживляемость зигот овец с учетом иммуногенетической совместимости / Л.Н.Чижова, А.-М.М.Айбазов, Л.В.Ольховская и др. // Генетика, селекция и качество продукции овец и коз: Сб. науч тр. /ВНИИОК. - Ставрополь, 1995. - £.93-97.

23. Российско-австрийский трансгенез «Химозин» (предварительные результаты) /Л.К.Эрнст, М.И.Прокофьев и др. // Генетика, селекция и качество продукции овец и коз: Сб. науч тр. /ВНИИОК. - Ставрополь, 1995. - С.97-102.

24.'Айбазов, А-М.М. Трансплантация эмбрионов у овец - биотехнологический метод ускорения генетического прогресса /А.-М.М. Айбазов, М.И.Утина // Современные достижения биотехнологии: Мат. Всероссийской конф./ Ставрополь. - 1996. - С. 22-23.

25. Айбазов, А-М.М. О концепции применения биотехнологических способов воспроизводства / А.-М.М.Айбазов // Современные достижения биотехнологии: Мат. Всероссийской конф./ Ставрополь. - 1996. - С. 23 - 24.

26. Айбазов, А-М.М. Биотехнологические методы воспроизводства овец / А.-М.М.Айбазов, М.И.Утина // Современные достижение биотехнологии:

' Мат. Всероссийской конф./ Ставрополь. - 1996. - С. 24-25.

27. Айбазов, А-М.М. Биотехнологические основы и практические приемы воспроизводства овец / А.-М.М.Айбазов, //Мат. коорд. совещ. науч.-произв. конф. по овцеводству и козоводству /ВНИИОК.- Ставрополь, 1996.

28. Айбазов, А-М.М. Биотехнологические методы воспроизводства в селекции овец / А.-М.М.Айбазов, М.И.Утина // Современ. методы селекции с/х : Мат. Междунар. конф. пам. Ф.Ф. Эйснера / Харьков. - 1996. - С. - 113.

29. Мороз, В.А. Перспективная биотехнология получения трансгенных овец /В.А.Мороз, А.М.М.Айбазов // Вестник Ветеринарии - 1997. - № 6. -С.92-99.

30. Пат. 2115386 РФ 6 А 61 Д 19/02. Среда Сан-Лакт для замораживания спермы барана / С.Н. Слипченко, А.-М.М.Айбазов, К.К.Ашурбегов и др. - Заявка № 97104558; Заявлено 24,03 1997. Зарегистр. 20 июля 1998 г; Приоритет 24.03.1997 г. РФ. - 5С.

31.|Состояние и перспективы применения биотехнологических методов воспроизводства овец /А.-М.М.Айбазов, С.Н.Слипченко, К.К.Ашурбегов и др.// Мат. научно-практической конференции по овцеводству и козоводству,. посвященной 65-летию ВНИИОК. -Ч. 111 .-Ставрополь, 1997 - С. 142-147.

32. Применение простагландинов для синхронизации половой охоты у овец в случной сезон /А.-М.М.Айбазов, С.Н.Слипченко, К.К.Ашурбегов и др. // Сб. науч. трудов ВНИИОК. - вып. 42 //Ставрополь. - 1997. - С. 66-68.

33. Айбазов, А-М:М. Применение лапароскопии при внутримат^юм осеменении и трансплантации эмбрионов у овец /А.М.М.Айбазов // Вестник ветеринарии,-1998.-№ 5(11). - С. 51 -55

34. Пат.29515 Украина, МКИ3 6 А 61 Д 19/04. Середовище Сан-Лакт для заморожування сперми барашв / В.М.Туринский, О.И.Катрошенко, В.Ф.Хашан (Украина), С.Н.Слипченко, А-М.М.Айбазов, К.К.Ашурбегов. (РФ). - № 97115428; Заявлено 12.11.1997; Опубл. 15.11. 2000 Бюлл. № 6; Приоритет 15.11.2000. Украина. - 2 с.

35. Айбазов, А-М.М. Ягнята-трансплантаты: рост, развитие и репродуктивная функция / А.М.М.Айбазов // Вестник ветеринарии. - № 15(1/2000). - С. 41-42.

36. Айбазов, А.М.М. Сравнительная оценка протектекторных свойств глицерина и этиленгликоля при замораживании и оттаивании эмбрионов овец /А-М.М.Айбазов // Мат. Межд. конф. по биотехнологии. - Ставрополь. - 2001 -С.154.

37. Айбазов, А-М.М. Трансплантация эмбрионов - метод интенсивного использования в селекции высокоценных овец /А.-М.М. Айбазов, К.К. Ашур-бегов, Л.С. Малахова // Сб. науч. тр./ ВНИИОК Ставрополь. - Вып. 46. - 2001. -С. 149-152.

38. Айбазов, А-М.М. Биотехнологические методы воспроизводства овец и коз / А.-М.М.Айбазов, К.К.Ашурбегов, Л.С.Малахова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2002.-№ 3. - С.25-27.

АЙБАЗОВ Али-Магомет Муссаевич

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора сельскохозяйственных наук

Подписано'в печать 15.04.03 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Усл. печ. лис. 2,0. Заказ 178. ■ Тираж 100 экз.

355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 15.

Ротапринт СНИИЖК

* 7 6 8e

vééo'

Содержание диссертации, доктора сельскохозяйственных наук, Айбазов, Али-Магомет Муссаевич

ф 1 .Общая характеристика работы.

2.0бзор литературы.

2.1. Длительное хранение спермы барана в замороженном виде.

2.2. Влияние сезонных факторов внешней среды и режима использования производителей на их половую активность и уровень спермопродукции

2.3. Нейрогуморальная регуляция половых процессов у овец.

2.4. Биотехнические приемы регулирования воспроизводительной функции овец.

2.4.1. Синхронизация полового цикла в границах сезона размножения

2.4.2. Гормональная стимуляция множественной овуляции у овец

2.4.3. Способы получения и оценки эмбрионов

2.4.4. Техника пересадки эмбрионов

2.4.5. Рост и развитие ягнят-трансплантатов 64 3.Собственные исследования

3.1. Разработка биотехнологических методов сохранения и рационального использования генофонда высокопродуктивных животных

3.1.1. Совершенствование технологии криоконсервации спермы барана

3.1.2. Разработка технологии внутриматочного осеменения овец с использованием метода лапароскопии

3.1.3. Круглогодовое использование высокопродуктивных баранов-производителей

3.1.3.1. Половая активность баранов в зависимости от сезоны года

3.1.3.2. Влияние режима использования на половую активность и уровень спермопродукции баранов в различные сезоны года. 117 3.1.3.3. Устойчивость спермы к замораживанию в зависимости от сезона года и режима использования баранов

3.1.4. Научно-производственные опыты

3.1.5. Результаты осеменения овец замороженной спермой, заготовленной в различные сезоны года.

3.1.6. Результаты осеменения овец замороженной-оттаянной спермой различных сроков хранения

3.2. Направленное регулирование воспроизводительной функции овец

3.2.1. Совершенствование технологии искусственного осеменения овец с синхронизированным половым циклом

3.2.1.1. Синхронизация половой охоты у овец применением про-гестагенных препаратов

3.2.1.2. Синхронизация половой охоты у овец применением препаратов простагландина

3.2.2. Сравнительная оценка различных способов гормональной стимуляции множественной овуляции у овец-доноров

3.2.3. Эффективность трансплантации эмбрионов у овец

3.2.4. Продуктивные характеристики баранов-производителей и овец-доноров

3.2.5. Рост и развитие ягнят-трансплантатов 171 4.0бсуждение результатов собственных исследований 176 5.Заключение

6.Выводы

7.Предложения производству

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Теоретические основы, разработка и совершенствование биотехнологических методов воспроизводства овец"

1.1.Актуальность темы. Разработанный отечественными учеными метод длительного хранения спермы в замороженном виде позволяет накапливать большие запасы замороженной спермы, длительно хранить и перевозить ее на любые расстояния. Благодаря этому методу открылись широкие перспективы для углубленной селекционно-племенной работы, сохранения и рационального использования генофонда выдающихся баранов-производителей. Однако, как показывает практика, в овцеводстве потенциальные возможности этого прогрессивного метода реализуются не в полной мере, в первую очередь из-за невысокой (25-35 %)оплодотворяемости овец, осемененных замороженной-оттаянной спермой. В связи с этим возникла необходимость дальнейших научных поисков и экспериментальных исследований, направленных, прежде всего, на выяснение причин, снижающих биологическую полноценность спермиев в процессе криоконсервации, разработку и совершенствование защитных сред для разбавления спермы и технологии оттаивания замороженной спермы с целью повышения эффективности метода длительного хранения.

Перспектива использования замороженной-оттаянной спермы открывает широкие практические возможности и, в то же время, ставит задачу более интенсивного использования ценных баранов-производителей с высокой препотентностью не только в случной период, но и в другие сезоны года путем накопления от них замороженной спермы. Поскольку длительное использование баранов на протяжении года вносит определенные коррективы в осуществление воспроизводительной функции, большой научный и практический интерес представляет изучение влияния сезона года и режима половой нагрузки производителей на их половую активность, качество и количество спермопродукции и устойчивость спермы к глубокому замораживанию.

Разработка биотехнологических методов позволит существенно повысить масштабы участия высокопродуктивных самцов в процессе воспроизводства, увеличит интенсивность отбора баранов, точность оценки их племенной ценности и, тем самым, увеличит эффективность селекционно-племенной работы. Наряду с этим возникает необходимость более интенсивного использования наиболее ценных в генетическом плане самок для совершенствования генетически обусловленных продуктивно- биологических качеств отдельных пород и линий овец. В определенной степени решить проблему интенсивного использования высокоценных овец для ускорения генетического прогресса позволят методы регулирования воспроизводительной функции овец, важнейшими из которых являются синхронизация полового цикла, технология получения и трансплантации эмбрионов. Однако, вследствие недостаточной изученности и разработанности, использование указанных биотехнологических методов для ускоренного размножения ценных генотипов овец до сегодняшнего дня ограничено.

1.2. Цель и задачи исследования. Основной целью исследований являлось теоретическое обоснование, разработка и усовершенствование биотехнологических методов и приемов размножения овец, направленных на интенсификацию воспроизводства и улучшение селекционно-племенной работы в овцеводстве.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи как отдельные этапы решения проблемы в целом:

- разработать новые и усовершенствовать существующие синтетические среды для разбавления спермы барана перед криоконсервацией, изучить их влияние на качество и биологическую полноценность замороженной-оттаянной спермы; изучить эффективность внутриматочного осеменения овец замороженной спермой методом лапароскопии;

- изучить половую активность, уровень спермопродукции баранов и устойчивость спермы к глубокому замораживанию в зависимости от сезона года и режима использования баранов- производителей; разработать на этой основе оптимальный режим использования баранов, позволяющий накапливать замороженную сперму в неслучной сезон; создать генофондное хранилище замороженной спермы высокопродуктивных баранов - производителей; провести сравнительную оценку гормональных способов синхронизации полового цикла у овец; разработать эффективный способ индукции полиовуляции и трансплантации ранних эмбрионов у овец; изучить рост и развитие ягнят-трансплантатов и их сверстников, а также воспроизводительную функцию баранчиков — трансплантатов.

1.3. Научная новизна и теоретическая значимость работы. В результате проведенной работы разработаны новые и усовершенствованы существующие синтетические среды для разбавления спермы барана, дана всесторонняя экспериментальная оценка технологии криоконсервации спермы при температуре жидкого азота (-196 °С), изучены причины снижения оплодотворяющей способности половых клеток в процессе замораживания, даны предложения по решению этой биологической проблемы. Впервые проведено внутриматочное осеменение овец методом лапароскопии при помощи эндоскопического оборудования.

Проведено теоретическое и экспериментальное обоснование возможности круглогодичной эксплуатации высокопродуктивных баранов-производителей с целью накопления от них спермы в замороженном виде. Изучена динамика половой активности баранов и уровня спермопродукции в зависимости от режима их эксплуатации и сезона года.

Впервые в стране создан и успешно функционирует генофондный банк спермы высокопродуктивных баранов-производителей отечественных и импортных пород, а также редких и исчезающих пород и популяций.

Проведена сравнительная оценка эффективности различных гормональных препаратов для синхронизации половой охоты у овец. Определены схемы индукции множественной овуляции у овец, позволяющие получать стабильные результаты. Впервые проведена сравнительная оценка хирургического (лапаротомия) и нехирургического (лапароскопия) методов трансплантации эмбрионов, доказано преимущество использования эндоскопического оборудования для пересадки ранних эмбрионов методом лапароскопии.

В сравнительном аспекте изучены рост и развитие ягнят-трансплантатов и их сверстников-нетрансплантатов, полученных от тех же овец-доноров, исследована репродуктивная функция взрослых баранов-трансплантатов.

Установлена возможность ускоренного размножения генетически ценных овец путем трансплантации их зародышей менее ценным овцам-реципиентам без снижения продуктивности потомства.

Изучены теоретические аспекты, разработаны и предложены биотехнологические приемы ускоренного воспроизводства овец, направленные на качественное совершенствование стада и улучшение селекционно-племенной работы в овцеводстве.

1.4. Практическая значимость работы. Материалы исследований позволили рекомендовать в производство усовершенствованную технологию криоконсервации спермы, существенными моментами которой являются новые синтетические среды для разбавления спермы перед замораживанием и оптимальный режим оттаивания замороженной спермы.

Данные рекомендации широко используются в овцеводческих хозяйствах как Ставропольского края, так и других регионов России. Оптимальный режим половой эксплуатации высокоценных баранов-производителей во вне-случной сезон применялся на Ставропольском и Невинномысском головном племпредприятиях, способствуя накоплению максимального количества замороженной спермы от элитных производителей. Способ синхронизации половой охоты у овец применяется овцеводческими хозяйствами, позволяя планировать и управлять процессами воспроизводства, получать одновозра-стной молодняк и повысить его сохранность. Результаты исследований по индукции множественной овуляции и трансплантации эмбрионов использовались как для получения большего количества потомков от генетически ценных овец-доноров, так и в международных экспериментах по созданию трансгенных животных.

1.5. Реализация результатов исследований. Основные научные положения и практические предложения вошли в «Рекомендации по оптимальному режиму использования высокоценных племенных баранов при длительной их эксплуатации на протяжении года (ВАСХНИЛ, М., 1987); «Замораживание и использование спермы баранов-производителей» (рекомендации). М., 1989; «Подготовка баранов и технология криоконсервации спермы (методические рекомендации)», Ставрополь, 1990; «Рекомендации по организации осеменения овец», М., 1991; «Методические рекомендации по раннему прогнозированию, отбору и выращиванию высокопродуктивных баранов-производителей тонкорунных и полутонкорунных пород», Ставрополь, 2001.

Материалы диссертации вошли в наставления, памятки и учебные пособия, цитируются в научных работах, изданных как в России, так и за рубежом, используются при проведении обучения в высшей школе бонитеров, входят в учебно-методические пособия для подготовки ветврачей, зооинже-неров и техников по искусственному осеменению.

1.6. Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены на ежегодных заседаниях ученого совета ВНИИОК и СНИИЖК 1980-2002гг., совместном заседании бюро Отделения животноводства и Совета по технологии производства продуктов животноводства ВАСХНИЛ 30 мая 1985 года; зоотехнической секции научно-технического совета МСХ СССР 26 сентября 1985 года; Международной конференции по животноводству, Бишкек, 1995; Международной конференции по животноводству, Боровск, 1995; Всероссийской конференции по биотехнологии, Ставрополь, 1996; координационном совещании и научно-практической конференции по овцеводству и козоводству, Ставрополь, 1996; Международной конференции памяти Ф.Ф.Эйснера, Харьков, 1996; Международной конференции молодых ученых, Аскания-Нова, 1998; Международной конференции по биотехнологии, Ставрополь, 2001; на всероссийских и краевых семинарах, совещаниях и выставках племенных животных 1980 - 2002 гг.

По результатам работы оформлены заявки и получены: авторское свидетельство №1755431 от 18.04.1989 г.; патент РФ № 2115386 от 24.03.1997 г.; патент Украины № 29515 от 15.11.2000 г.

Результаты работы экспонировались на ВДНХ в 1988 году и за достигнутые успехи в развитии народного хозяйства СССР автор награжден медалью ВДНХ (удостоверение 29073 от 9.11.1988 г.).

1.7. Публикации. Основные материалы исследований изложены в 52 печатных работах.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 265 страницах машинописного текста, иллюстрирована 54 таблицами и 8 рисунками. Основные разделы работы: общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методика исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, заключение, выводы и практические предложения. Список литературы включает 397 источников, в т. ч.199 иностранных авторов.

1.9. На защиту выносятся следующие положения диссертации:

- экспериментальное обоснование, разработка и совершенствование синтетических сред для разбавления и замораживания спермы барана;

- эффективность внутриматочного осеменения овец замороженной - оттаянной спермой методом лапароскопии;

- половая активность, качество и количество спермопродукции баранов-производителей в различные сезоны года при разных режимах половой нагрузки;

- интенсификация использования генетически высокоценных баранов путем накопления от них спермы в замороженном виде и создание гено-фондного хранилища спермы элитных производителей;

- синхронизация полового цикла у овец применением различных гормональных препаратов;

- индукция полиовуляции у овец, экспериментальная оценка хирургической и нехирургической трансплантации ранних эмбрионов;

- оценка роста и развития ягнят-трансплантатов и их сверстников;

- обоснование применения биотехнологических методов и приемов воспроизводства овец для интенсификации селекционно-племенной работы.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом НИР, входящим в программу РАСХН (ГКНТ 0.51.06.06.04.Н1, НТП 0.СХ.77.08.02.Н2, НТП 0.СХ.42.01.07.НЗ, № гос. регистрации 01.960007942) в лаборатории воспроизводства Всероссийского НИИ овцеводства и козоводства, в связи с реорганизацией института продолжена в Ставропольском НИИ животноводства и кормопроизводства, в опытном хозяйстве «Темно-лесское», Ставропольском и Невинномысском головном племпредприятиях, а также в ведущих племзаводах Ставропольского края. Производственная апробация биотехнологических методов и приемов воспроизводства овец проводилась в овцеводческих хозяйствах Ипатовского, Апанасенковского, Неф-текумского, Кочубеевского районов Ставропольского края, а также в хозяйствах Ростовской области и Республики Татарстан.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Айбазов, Али-Магомет Муссаевич

226 Выводы

1. Снижение оплодотворяющей способности замороженной спермы барана обусловлено значительными структурными повреждениями акросомы и наружной цитоплазматической оболочки спермиев. При сохранении подвижности после оттаивания у 45 — 55% спермиев лишь 25 — 35 % из них не имеют повреждений. Количество спермиев с повреждениями увеличивается по мере прохождения технологических этапов криоконсервации: разбавление, эквилибрация, замораживание, оттаивание.

2. Новые защитные среды для разбавления спермы барана в большей степени, чем предлагаемые до сих пор, предохраняют спермин от повреждений акросомных структур и биологических мембран, способствуя лучшей сохранности функциональной полноценности. Оплодотворяемость овец, осемененных спермой, замороженной в разработанных нами и запатентованных разбавителях, составила 47-55%.

3. Нехирургическое внутриматочное осеменение овец методом лапароскопии с использованием комплекта эндоскопического оборудования позволяет получить 65 - 70 % оплодотворений при уменьшении расхода замороженной спермы в 5 - 6 раз.

4. Бараны-производители тонкорунных пород при обеспечении полноценного кормления и надлежащего ухода и содержания способны проявлять высокую половую активность в течение всего года. В то же время половая активность и основные показатели спермы баранов (объем, подвижность, концентрация) подвержены влиянию сезонных факторов и несколько снижаются в весенний и, в особенности, летний периоды.

5. Устойчивость спермы к глубокому замораживанию сохраняется на достаточно высоком уровне во все сезоны года при тенденции к снижению в весенний и летний периоды. Оплодотворяющая способность спермы, заготовленной в различные сезоны года, составляет 38 — 48%.

6. Оптимальный режим половой нагрузки баранов 6 эякулятов в неделю позволяет получать от них в неслучной сезон до 200 мл спермы и заморозить в этот период до 4 - 4,5 тысяч доз от одного барана и тем самым в 2 — 3 раза увеличить интенсивность использования элитных производителей.

7. Технология накапливания замороженной спермы в неслучной сезон является важным практическим приемом сохранения генофонда выдающихся баранов, обеспечивая возможность использования таких производителей для углубленной селекционной работы на протяжении длительного времени. На этой основе создан и успешно функционирует генофондное хранилище (банк) спермы высокоценных баранов, где в настоящее время сохраняется более 110 тысяч доз спермы от 230 элитных производителей 14 пород различного направления продуктивности.

8. Оплодотворяющая способность спермы, замороженной в 1973 году и использованной для осеменения овец в год заготовки, через 6, 8, 18, и 27 лет хранения в жидком азоте, составила соответственно 33,1; 33,3; 34,2; 38,4 и 42,5%. Более высокая оплодотворяемость овец при использовании спермы 18 и 27 летнего хранения объясняется значительными усовершенствованиями технологии оттаивания замороженной спермы и техники осеменения.

9. Интравагинальное применение ацетата мегестрола и флюогестон ацетата в дозе 30 мг вызывает синхронное проявление стадии возбуждения полового цикла у 90-100% обработанных овец при оплодотворяемости 84 %. Синхронность проявления охоты (85-90 %) сохраняется и во второй половой цикл.

10. Отечественные синтетические аналоги простагландина Ф2 — альфа — «Клатропростин» и «Эстуфалан» после двукратного введения в дозе 125 мкг по АДВ с интервалом в 11 дней индуцируют наступление половой охоты у 82% обработанных овец в течение 72 часов после второй инъекции. По синхронизирующему эффекту они не превосходят распространенный чешский препарат «Эстрофан», однако при их использовании стоимость обработки снижается в 2-3 раза.

11. Нативный сывороточный гонадотропин СЖК в дозе 2000 МЕ вызывает множественную овуляцию у 80 % обработанных овец. Более высокой активностью (88,6 %) обладает очищенный препарат ФСГ-п в дозе 24 мг, в то время как гонадотропин «Фоллигон» в дозе 2000 М.Е. вызывает полиовуляцию у 95,7 % овец-доноров. Наиболее высокую гонадотропную активность проявляют ФСГ-п и фоллигон (соответственно 14,3 и 12,0 овуляций на одного донора), в то время как этот показатель после применения СЖК оказался достоверно ниже (5,2 овуляций, Р <0,001).

12. Приживляемость ранних эмбрионов после пересадки нехирургическим (лапароскопия ) и хирургическим (лапаротомия) методами составила соответственно 55,4 % и 52,7 %. В отличие от хирургического вмешательства лапароскопия является малотравматической для овец-реципиентов, позволяет избежать негативных послеоперационных последствий и тем самым повышает многократность использования овец-реципиентов.

13. Продолжительность эмбриогенеза ягнят-трансплантатов (включая период нахождения в половых путях донора) составила в среднем 148,0 дней (lim=142-153). Этот срок плодоношения является нормой для овец тонкорунных пород.

14. Ярки-трансплантаты к годовалому возрасту достигали живой массы 42,3± 1,93 кг и не уступали своим сверстницам, полученным от овец-доноров (43,2± 1,77 кг). В 15 месячном возрасте ярки-трансплантаты отвечали требованиям желательного типа (элита — 85 %, I класс — 15 %). Их сверстницы-нетрансплантаты, рожденные овцами-донорами, отнесены соответственно к классу элита — 89%, к I классу -11%.

15. В 1,5 летнем возрасте баранчики-трансплантаты по живой массе не уступали сверстникам (88,5 кг против 89,3 кг). Качественные и количественные показатели спермы баранчиков - трансплантатов характеризовались следующими параметрами: подвижность — 8,2 балла, объем эякулята —1,18 мл, концентрация спермиев — 3,05 млрд./мл. Аналогичные показатели у нетрансплантатов составили 8,4 балла, 1,16 мл и 3,01 млрд./мл.

229

Предложения производству

1. Для разбавления спермы барана перед криоконсервацией предлагаются новые синтетические среды (авторское свидетельство №1755431 от 18.04.1989 г. и патент РФ №2115386 от 24.03.1997 г.). Указанные среды значительно лучше сохраняют биологическую полноценность замороженной спермы, что обеспечивает стабильное получение 50-55 % оплодотворений.

2. В целях повышения эффективности использования высокоценных баранов-производителей рекомендуется на племпредприятиях и в племзаводах проводить заготовку от них замороженной спермы вне полового сезона. Для поддержания высокой половой активности баранов и получения спермы хорошего качества предлагается использовать их с оптимальной нагрузкой 6 эякулятов (3 дуплетные садки) в неделю. Такой режим обеспечивает заготовку 4-4,5 тысяч доз замороженной спермы, что в 2-3 раза увеличивает интенсивность использования элитных производителей

3. Для рационализации процессов воспроизводства рекомендуется способ синхронизации половой охоты у овец, основанный на применении отечественных аналогов простагландина Ф 2 альфа «Клатропростин» и «Эстуфалан» в дозе 250 мкг, обеспечивающий синхронное проявление половой охоты у 75-85% овец при их оплодотворяемости 80-85 %.

4. В целях ускоренного размножения ценных генотипов овец и повышения уровня селекционно — племенной работы в овцеводстве рекомендуется метод трансплантации эмбрионов. Получение 8-10 полноценных эмбрионов от генетически ценных животных обеспечивается применением ФСГ — п в дозе 24 мг или фоллигона в дозе 2000 МЕ. Трансплантацию эмбрионов у овец предлагается проводить методом лапароскопии, используя для этого эндоскопическое оборудование.

230

Заключение

В последние годы в нашей стране происходят глубокие экономические преобразования, в том числе и в сельском хозяйстве. К сожалению, произошло беспрецедентное сокращение численности овцепоголовья по всей стране. В Ставропольском крае, являющемся базой племенного тонкорунного овцеводства, за последние 10 лет численность поголовья овец сократилась с 7,0 млн. до 1,2 млн. голов.

В первую очередь это явилось следствием неконкурентоспособности отечественного овцеводческого сырья на внутреннем и мировом рынке.

Стабилизация и, затем, дальнейшее развитие овцеводства возможны лишь при значительном повышении рентабельности отрасли за счет совершенствования технологии содержания овец, повышения их шерстной и мясной продуктивности. Наиболее важное из этих условий — значительный рост продуктивности овец — возможно лишь при существенном повышении селекционно-племенной работы на основе широкого применения всего арсенала как традиционных, так и современных приемов воспроизводства стада.

Воспроизводство является тем ключевым процессом в разведении животных, который определяет не только количественный рост стада, но и позволяет активно влиять на качество получаемого молодняка. Используя в воспроизводстве лучших животных, возможно целенаправленно повышать качество потомства. Именно эти требования лежат в основе всех программ по селекционно-племенной работе.

После разработки и широкого внедрения в производство метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, возможности влияния на селекционный процесс коренным образом изменились. Прежде всего, этот метод обеспечивает значительное повышение эффективности использования в воспроизводстве высокоценных производителей.

Благодаря массовому применению методов искусственного осеменения в период 30-70-х годов произошло значительное повышение продуктивности всех видов домашних животных. С полным основанием можно утверждать, что метод искусственного осеменения явился одним из крупнейших достижений отечественной науки 20-го века. Только благодаря широкому применению этого метода стало возможным в короткие сроки преобразовать малопродуктивное грубошерстное овцеводство в нашей стране в тонкорунное и полутонкорунное, а также создать ряд новых ценных пород овец.

Поскольку эффективность селекционно-племенной работы, в первую очередь, зависит от интенсивности использования наиболее генетически ценных производителей, стойко передающих свои продуктивные качества потомству, значение метода искусственного осеменения будет непрерывно возрастать. Наряду с этим, изменение условий хозяйствования, создание небольших фермерских хозяйств и другие преобразования в овцеводстве требуют иных подходов к организации воспроизводства стада, чем традиционные. Независимо от форм собственности, от крупных племенных и товарных ферм до небольших фермерских хозяйств и даже сельских подворий, основная экономическая задача состоит в значительном росте продуктивности овец и, как следствие, повышении рентабельности отрасли.

Применением биотехнических методов и приемов регулирования воспроизводительной функции овец можно значительно увеличить реализацию генетических возможностей наиболее ценных животных. Однако разработанные к настоящему времени биотехнические методы и организационные приемы искусственного осеменения не в полной мере обеспечивают возможность рационального использования в воспроизводстве наиболее ценных баранов-производителей и овцематок.

С одной стороны, количество баранов с высокой препотентностью даже в племенных хозяйствах не велико и, в связи с несовершенством способов проверки баранов по качеству потомства, и без того непродолжительный срок их использования сокращается на 2-3 года.

С другой стороны, в связи с четко выраженной сезонностью размножения большинства пород овец при существующей технологии искусственного осеменения ценные производители в течение года используются ограниченное время. Так, при осеменении овец свежеполученной спермой бараны-производители используются на пунктах в течение 1 - 2 половых циклов (20 -35) дней. В результате спермой одного производителя за сезон осеменяется только 500 - 600 маток.

Повышение эффективности использования элитных высокоценных баранов - производителей возможно при удлинении срока их эксплуатации и заготовке замороженной спермы вне сезона размножения. Одним из путей реализации потенциальных возможностей наиболее ценных баранов является разработка эффективного метода длительного хранения спермы в замороженном виде, честь открытия которого принадлежит отечественным ученым.

Однако на пути решения этой проблемы имеются значительные трудности, в первую очередь, резкое снижение оплодотворяющей способности спермы барана после замораживания при температуре жидкого азота (— 196°С). Как показали многочисленные исследования, оплодотворяемость овец при цервикальном осеменении, как правило, не превышает 25-35 %. Наряду с другими причинами, снижение оплодотворяющей способности замороженной спермы связано, в первую очередь, с несовершенством синтетических сред, применяемых для разбавления спермы перед замораживанием и технологии замораживания-оттаивания.

Было высказано предположение, что разбавление спермы и последующее замораживание и оттаивание сопровождаются гибелью значительной части половых клеток из-за процессов кристаллизации и рекристаллизации. Более того, обработка спермы сопровождается появлением структурных нарушений цитоплазматических оболочек половых клеток. Результаты дальнейших исследований показали, что подбором оптимального соотношения ингредиентов синтетической среды, введением в ее состав новых криопро-текторов как экзо-, так и эндоцеллюлярного действия удается сохранить качественные показатели замороженной-оттаянной спермы на достаточно высоком уровне.

Последующие лабораторные и научно-производственные опыты подтвердили значительное повышение сохранности биологической полноценности спермиев после криоконсервации. Оплодотворяющая способность спермы барана, замороженной в разработанных нами экспериментальных средах, проверенная на достаточно большом поголовье (п=6500) стабильно составляла 50-55 %.

Разумеется, в своих опытах мы не исключали и другие пути повышения эффективности метода замораживания спермы барана. В частности, в экспериментах с применением оттаивателя со свободным стоком жидкой (оттаявшей) фракции нам удалось доказать, что принципиально важным является не температура оттаивания, а скорость теплообмена, поэтому при использовании специальных оттаивателей температура оттаивания +40.55°С лучше сохраняет биологическую полноценность спермиев.

Результаты собственных исследований по созданию новых синтетических сред для разбавления спермы барана перед криоконсервацией и совершенствованию технологии замораживания и оттаивания позволили оформить заявку, и Государственный комитет по изобретениям и открытиям при правительстве СССР выдал авторское свидетельство № 1755431 на изобретение «Среда для разбавления спермы баранов» с приоритетом от 18.04.1989.

Современные технологии получения спермы, разбавления и криоконсервации, приготовления защитных сред с использованием желтка куриного яйца сопряжены с нежелательной контаминацией ее посторонней микрофлорой. Это значительно снижает биологическую полноценность и оплодотворяющую способность спермиев, запас их живучести, подавляет факторы гуморальной защиты матки овец при осеменении. Вводимые в сперму с целью ее санации антибиотики и сульфаниламидные препараты неблагоприятно воздействуют на спермин, кроме того, обуславливают у животных иммуно-депрессивные явления, адаптацию и селекцию резистентных к ним микроорганизмов.

В собственных исследованиях удалось доказать высокий санирующий эффект бактерицидного препарата «лактобрил» в составе синтетических сред. Кроме того, он нетоксичен, не обладает тератогенным действием, а содержащиеся в нем неспецифические иммуноглобулины, незаменимые аминокислоты молока повышают естественную резистентность и биологическую полноценность замороженной-оттаянной спермы. Результаты экспериментов были оформлены в заявку на изобретение и Российское агентство по патентам и товарным знакам выдало патент № 2115386 на изобретение «Среда Сан-лакт для замораживания спермы» с приоритетом от 24.03.1997. О теоретической важности и экономической значимости результатов, полученных в наших экспериментах по совершенствованию технологии криоконсервации спермы свидетельствует и тот факт, что Правительство Украины в лице Департамента интеллектуальной собственности приняло решение выдать патент Украины на изобретение № 29515 «Середовище Сан-лакт для заморо-жувания сперми барашв» с приоритетом от 15.11.2000 г.

Таким образом, доказана принципиальная возможность существенного повышения оплодотворяющей способности половых клеток в подвергнутой замораживанию-оттаиванию сперме барана.

Одним из путей повышения эффективности использования замороженной спермы является внутриматочное осеменение овец, при котором оплодо-творяемость овец достигает 75 %. Однако известные способы внутриматоч-ного осеменения (лапаротомия, трансцервикальное осеменение) не находят широкого применения из-за сложности и постоперационных осложнений.

В собственных исследованиях, проведенных на большом количестве животных (п = 1881), нам удалось разработать способ внутриматочного осеменения овец методом лапароскопии. Для этих целей использовали комплект эндоскопического оборудования. Полученные результаты свидетельствуют о том, что оплодотворяемость овец как при использовании свежеполученной, так и замороженной-оттаянной спермы были практически одинаковой (61, 5% и 61,8 %). Необходимо особо подчеркнуть, что доза оттаянной спермы при внутриматочном осеменении была в 4-5 раза меньше, чем при церви-кальном осеменении и содержало расчетно 10-12 млн. спермиев, что значительно снижает расход спермы на плодотворное осеменение. Исключительно важным является и тот факт, что работа по проведению лапароскопического осеменения была организована на рядовой кошаре и подготовка к ней не требовала специальных затрат. Группа специалистов из трех человек при помощи двух подсобных рабочих за 8-ми часовой рабочий день проводила осеменение 200-250 овец.

Таким образом, с полным основанием можно утверждать, что предложен новый биотехнологический способ воспроизводства овец.

Достигнутые несомненные успехи в усовершенствовании технологии криоконсервации спермы барана и перспектива рационального использования замороженной-оттаянной спермы открывает широкие практические возможности. Прежде всего, этот метод позволяет значительно повысить нагрузку на ценных производителей, эффективно проводить проверку баранов по качеству потомства, создавать банки спермы высокопродуктивных баранов как культурных, так и исчезающих ценных пород и популяций овец, реа-лизовывать ценный генофонд как внутри страны, так и за ее пределами.

Впервые идею о необходимости сохранения генофонда редких и исчезающих пород сельскохозяйственных животных высказал отечественный генетик А.С.Серебровский в 1928 году. Эта проблема актуальна и сегодня.

Принципиальная возможность использования высокопродуктивных баранов-производителей вне случного сезона была доказана исследованиями многих авторов (М.М.Асланян, О.И.Лисовая, 1966, Н.В.Логинова, 1966; В.М.Давиденко и соавт., 1979 и другие). Было высказано предположение, что длительное использование баранов на протяжении года вносит определенные коррективы в осуществление репродуктивной функции.

На основании детального комплексного изучения половой активности баранов в разные сезоны года при неодинаковой половой нагрузке, определения уровня спермопродукции, устойчивости спермы к замораживанию и других вопросов, нами предложена система использования высокоценных баранов-производителей при их длительной эксплуатации на протяжении года.

Сохранение биологической полноценности замороженной спермы в течение года, доказанное в наших опытах, открывает новые возможности интенсификации использования баранов-производителей, проверенных по качеству потомства, путем круглогодичного накопления от них спермы, с целью использования ее для осеменения большего количества овец в течение полового сезона.

Оптимальный режим половой нагрузки позволяет заготавливать в неслучной период от каждого высокопродуктивного барана в среднем 4 - 4,5 тысячи доз замороженной спермы. Несмотря на то, что расход спермы на плодотворное осеменение овец при использовании замороженной спермы в 2-3 раза больше, чем при осеменении свежеполученной спермой, в целом метод позволяет дополнительно получать 1200 - 1500 потомков от элитных производителей и в 2 - 3 раза повысить интенсивность их использования, не прибегая ни к перегрузкам их в течение сезона, ни к организации напряженного их использования, ни к специальным приемам кормления этих баранов, при нормальном рабочем дне обслуживающего персонала и соблюдении выходных дней.

Результаты исследований свидетельствуют о технологической реальности и экономической целесообразности предлагаемых мероприятий. Полученные данные легли в основу «Рекомендаций по оптимальному режиму использования высокоценных племенных баранов», одобренных Бюро Отделения животноводства и Совета по технологии производства продуктов животноводства ВАСХНИЛ 30 мая 1985 г. и на зоотехнической секции НТС МСХ СССР 26.09.1985 г.

Несмотря на то, что способ хранения спермы барана в замороженном виде не находит еще широкого применения в производстве, он является уникальной возможностью сохранения ценного генетического материала от выдающихся производителей. Именно с этой целью по заданию МСХ СССР в 1973 году была начата работа по созданию при Всесоюзном институте овцеводства и козоводства (ныне СНИИЖК) хранилища замороженной спермы наиболее ценных баранов отечественных и зарубежных пород. Особое внимание при этом уделялось заготовке спермы от завозимых из-за рубежа производителей, являющихся улучшателями многих отечественных пород овец. К настоящему времени для длительного хранения в замороженном виде заложено свыше 110 тысяч доз спермы от 230 баранов таких ценных пород как австралийский меринос, иль-де-франс, финский ландрас, тексель и другие. За успешную работу в создании генофондного хранилища спермы высокоценных производителей автор был награжден медалью ВДНХ (1988).

Сложившиеся организационные формы воспроизводства в овцеводстве в настоящее время уже не отвечают изменившимся требованиям и условиям хозяйствования и поэтому требуют дальнейшего совершенствования. При существующей системе искусственного осеменения, основанной на естественной продолжительности полового цикла, случка продолжается 1,5-2 месяца, результатом чего является слишком растянутый период ягнения. Наличие в отарах разновозрастных ягнят создает трудности в сохранении и выращивании молодняка и, в конечном счете, приводит к потере продукции.

Интенсифицировать процесс воспроизводства позволяет метод синхронизации полового цикла. В своих исследованиях мы попытались изыскать высокоэффективные, нетрудоемкие и относительно недорогие способы синхронизации половой охоты у овец. Многолетние эксперименты позволили получить достаточно объективные результаты по изучаемой проблеме и предложить производству интравагинальный и инъекционный способы синхронизации. Обработка животных позволяет синхронизировать охоту у 90100% маток, планировать начало случки, регулировать количество овец в охоте, сократить сроки осеменения до 7-20 дней и, соответственно, сроки ягнения. Незначительное повышение расходов на проведение синхронизации компенсируется значительным снижением трудовых затрат, повышением технологичности проведения осеменения и ягнения. При этом оплодотворяемость овец сохраняется на довольно высоком уровне (80-85%) при плодовитости 120-130%.

Трансплантация эмбрионов признана перспективным биотехнологическим методом интенсификации воспроизводства ценных генотипов овец. Метод позволяет получить несколько потомков от выдающихся родителей в течение короткого периода времени и, тем самым, ускорить селекционный прогресс. Однако трансплантация эмбрионов - сложный, многокомпонентный биотехнологический метод, требующий тщательных и детальных исследований закономерностей воспроизводительных функций овец. На их изучение и разработку приемлемого для производства метода вызывания множественной овуляции и трансплантации эмбрионов и были направлены наши усилия.

На основе детального изучения закономерностей нейрогуморальной регуляции полового процесса у самок были разработаны и апробированы способы стимуляции суперовуляции у овец применением различных гормональных препаратов (СЖК, ФСГ-П, фоллигон ), обеспечивающие получение от овцы-донора 8-10 полноценных эмбрионов. Отработана техника вымывания эмбрионов у овец из рогов матки и яйцепроводов с результативностью 75-90%. Проведено более 300 эмбриопересадок на различных стадиях развития эмбрионов с приживляемостью 55-65%. Изучена возможность нехирургического (методом лапароскопии) имплантирования эмбрионов при помощи комплекта эндоскопического оборудования «Karl Storz» (Германия).

Иммуногенетической экспертизой доказана достоверность происхождения всех полученных ягнят-трансплантатов. Исследованы рост и развитие ягнят-трансплантатов по сравнению со своими сверстниками - нетрансплантатами, изучена репродуктивная функция баранчиков — трансплантатов в 1,5-летнем возрасте, проведена бонитировка ярок-трансплантатов в 15 месячном возрасте.

Полученные данные значительно расширяют представления о возможности направленного регулирования воспроизводительной функции овец.

Таким образом, определенные успехи в совершенствовании технологии криоконсервации спермы барана, позволяющие получать 50-55 % оплодотворений, разработка оптимального режима использования элитных высокоценных производителей в течение года, повышающая интенсивность их использования в 2 — 3 раза, совершенствование способов синхронизации половой охоты и технологии трансплантации эмбрионов позволяют рекомендовать новые биотехнологические методы и приемы воспроизводства овец. Отличаясь значительной простотой, они высокоэффективны, что является основой для рационализации многих производственных процессов, связанных с воспроизводством стада.

Разработанные биотехнологические методы и усовершенствованные организационные приемы воспроизводства овец, обеспечивающие рациональное использование наиболее генетически ценных животных, являются надежной научно-практической базой для повышения эффективности селекционно-племенной работы, органически вписываются в общую систему мер, направленных на ускорение селекционного прогресса и будет способствовать повышению доходности овцеводства.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора сельскохозяйственных наук, Айбазов, Али-Магомет Муссаевич, Ставрополь

1. Агранеико, В.А., Федорова Л.И. Замороженная кровь и ее клиническое применение. М.: Медицина 1983. - С.5-19.

2. Акмаев, И.Г. Структурные основы механизмов гипоталамической регуляции эндокринных функций / И.Г. Акмаев. М.: Наука, 1979. — С. 44-58.

3. Алешин, Б.В. Влияние аминазина на функции и структуру передней доли гипофиза при некоторых экспериментальных воздействиях. // Проблемы эндокринологии и гормонотерапии / Б.В.Алешин, Л.А.Ус. 1960. — Т. 6 — № 3. -С. 32-45.

4. Аминов, P.M. Влияние величины интервала между садками при ду-плетном методе взятия семени от быков-производителей на качество второго эякулята // Биостимуляторы в животноводстве. Ташкент, 1967. - С. 103-104.

5. Амирагова, М.Г. О взаимоотношении нервных и гуморальных гормональных факторов регуляции у высших животных./ М.Г.Амирагова. // Вестник АМН СССР. 1966. - № 1. - С. 45-50.

6. Амиров, A.A. Индукция суперовуляции у свиней высокоочищенным фолликулостимулирующим гормоном / А.А.Амиров, А.С.Кривохарченко, Л.И.Вильянович, Л.Б.Иванова // Сельскохозяйственная биология.- Сер. Биол. животных . 2002.- № 6. -С. 69 -72

7. Андреев, Е.Л. Кормление баранов-производителей при больших нагрузках / Е.Л.Андреев // Проблемы животноводства. — 1937. — № 8. — С. 121-125.

8. Асланян, М.М. Характеристика качественных и количественных показателей семени баранов асканийской породы по сезонам года / М.М.Асланян, О.И.Лисовая // Разведение овец: Сб.науч. тр./ Укр. НИИЖ, 1963. T.XI.- С. 6780.

9. Афонин, А.Т. Нормализация половой активности и спермопродукции у баранов-производителей во внеслучной сезон / А.Т.Афонин // Научн.-техн. бюлл. ВАСХНИЛ. Сиб. отд. -1983. Т.26. - С.36-37.

10. Балашов, Н.В. Ветеринарный контроль при искусственном осеменении животных / Н.В.Балашов. — М.:Колос, 1980. 271 с.

11. Бердонгарова, О.И. Пересадка зародышей овец / О.И.Бердонгарова, К.Джанабеков, Р.Б.Абильдинов // Биоморфология с.х. и промысловых животных. 1985. - № 5. - С.26-29.

12. Берштейн, А.Д., Влияние неэлектролитов на переживаемость сперматозоидов / А.Д.Берштейн, В.В.Петропавловский // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1937.-Т.З.-Вып. 1.-С.41-43.

13. Биохимия гормонов и гормональной регуляции // Панков Ю.А. Гормоны гипофиза. М.: Наука, 1976. - С. 44-93.

14. Биохимия гормонов и гормональной регуляции // Юдаев H.A., Утеше-ва З.Ф. Гормоны гипоталамуса. -М.: Наука, 1976. С. 10-44.

15. Бордюнков, Ю.Т. Изменение деятельности гипофиза, структуры и функции яичников под влиянием электрического раздражения гипоталамуса / Ю.Т.Бордюнков //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины — 1963. -Т. 56.-№9.-С. 102-107.

16. Боярский, В.М. Влияние сезона и режима использования баранов на качество семени после замораживания и оттаивания / В.М.Боярский // Научн. исследования аспирантов ВИЖ. Дубровицы. - 1978. — Вып. 55. — С.24-26.

17. Боярский, В.М. Изучение влияния сезонных факторов на семя баранов с цель. Разработки метода круглогодичного накопления запасов биологически полноценного семени в замороженном виде: Автореф. дисс. .канд. биол. наук / В.М.Боярский Дубровицы, 1980.-19 с.

18. Боярский, В.М. Режим использования баранов и качество семени / В.М.Боярский // Овцеводство. 1977. - № 9. - С.34.

19. Боярский, В.М. Результаты осеменения овец замороженным семенем / В.М.Боярский // Овцеводство. 1978. -№ 8. - С.30.

20. Бугров, А.Д. Шинкаренко Н.И. Замораживание спермы быков с диме-тилформамидом/ А.Д.Бугров, Н.И.Шинкаренко // Молочно-мясне скотарство. — Вып. 26.- К.: Урожай. 1971. - С. 16-18.

21. Варнавский, А.Н. Изучение акросомы сперматозоидов баранов с помощью фазоконтрастной микроскопии / А.Н.Варнавский // Докл. ВАСХНИЛ. -1978. — № 8 — С 33-34.

22. Варнавский, А.Н. Ультраструктура живчиков быка и барана после глубокого замораживания в жидком азоте / А.Н.Варнавский // Сельскохозяйственная биология. 1969. - Т.4. - № 3. -С.469-472.

23. Ветеринарное акушерство и гинекология /А.П.Студенцов,

24. B.С.Шипилов, Л.Г.Субботина и др. М.: Колос, 1980. - С. 22-24.

25. Волков, A.C. Влияние числа активных живчиков в оттаянном семени на оплодотворяемость овец / А.С.Волков // Животноводство. — 1974. — № 10. —1. C.69-71.

26. Вязовская, Р.Д. Влияние раздражения и удаления верхних шейных симпатических узлов на переднюю долю гипофиза в условиях действия аминазина. //Проблемы эндокринологии и гормонотерапии/ Р.Д.Вязовская — 1960. — Т. 6.-№2.-С. 64-71.

27. Гистология и эмбриология домашних животных //Мартыненко H.A. Морфологическая оценка качества ранних эмбрионов. — М., 1978. — С. 76-79.

28. Глазко, В.И. . Использование трансплантации эмбрионов для ускорения генетического прогресса / В.И.Глазко, Т.Т.Глазко, А.А.Созинов //Докл. ВАСХНИЛ . 1992 . - № 3. - С. 28 - 30.

29. Глазко, В.И. Проблемы клонирования млекопитающих / В.И.Глазко //Зоотехния . 2001. - № 8. - С.23 - 28

30. Голдовский, A.M. Анабиоз и общая проблема жизни / А.М.Голдовский // Журнал общей биологии. 1963. - Т. 24. - № 2. — С. 18-29.

31. Голубец, Л.В. Повышение эффективности приживляемости заморо-женно оттаянных эмбрионов / Л.В.Голубец, И.С.Кыса, Я.А.Вестфаль // Зоотехния. - 2002. — № 10. - С. 25 - 27

32. Гольдман, И.Л. Оценка биологической полноценности зигот методом культивирования /И.Л.Гольдман, Н.Г.Клецко, В.Д.Волынчук // Сборник исследований по генетике с.-х. животных. 1976. - Вып. 43. - С.107-108.

33. Граевский Э.Я., Медведева Ю.А. О причинах повреждения протоплазмы при глубоком охлаждении // Журнал общей биологии. 1948. — Т. 9. — № 6. -С.61-63.

34. Граевский, Э.Я. Стеклообразное состояние протоплазмы в условиях глубокого охлаждения / Э.Я.Граевский // Успехи современной биологии. -1948.-Т XXV. -Вып. 2. С. 18-22.

35. Грехам, Е.Ф. Криоконсервация и биохимическая оценка спермы быков и баранов / Е.Ф.Грехам // Биология воспроизведения сельскохозяйственных животных. Харьков. — 1977. - С.25-51.

36. Григорян, С., Действие антиоксидантов на сперму барана при глубоком ее замораживании / С.Григорян, Назарян В.К. // Животноводство. — 1981. — № 9. С.49-50.

37. Груздев, B.C. Опыты с искусственным оплодотворением яиц млекопитающих / В.С.Груздев // Врач. 1987. - № 42.

38. Давиденко, В.М. Анатомические особенности шейки матки овец, обуславливающие затруднение цервикального осеменения / В.М.Давиденко // Тр./ Укр. НИИЖ Степных районов «Аскания-Нова». 1974. - Т.2. - С.38-41.

39. Давиденко, В.М. Влияние некоторых факторов на качество спермы при замораживании / В.М. Давиденко, И.С.Шинкаренко, О.И.Игнатенко // На-уч.-техн. бюлл. Укр. НИИЖ Степных районов «Аскания-Нова». -1977. 4.1. -С.60-63.

40. Давиденко, В.М. Качество семени барана в зависимости от породы, возраста и настрига шерсти / В.М. Давиденко, И.С.Шинкаренко, М.А.Клеопина // Животноводство. 1983. - №7. - С.56-58.

41. Давиденко, В.М. Режим использования баранов и устойчивость семени при замораживании и оттаивании / В.М. Давиденко, И.С.Шинкаренко, О.И.Игнатенко // Животноводство. -1981. — №9. С. 48-49.

42. Давиденко, В.М. Спермопродукция баранов асканийской тонкорунной породы в зависимости от сезонных и метеорологических факторов / В.М. Давиденко, И.С.Шинкаренко, О.И.Игнатенко // Овцеводство. 1979. - №9. - С.94-100.

43. Давиденко, В.М. Способность спермы переносить глубокое замораживание в зависимости от индивидуальных особенностей баранов / В.М. Давиденко, И.С.Шинкаренко, О.И.Игнатенко // Овцеводство. Киев. — 1980. — Вып. 19. — С.98-101.

44. Действие различных прогестагенных препаратов при стимуляции синхронизации охоты у овец /А.И.Лопырин, В.И.Донская, Л.П.Рак и др. // Овцеводство. № 8. - С. 27-30.

45. Донская, В.И. Синхронизация охоты у овец инъекциями прогестерона с пролонгаторами / В.И.Донская, Л.П.Рак, П.В.Сурков // Тез. докл. научно-произв. конф. ВНИИОК- Ставрополь, 1968. С.78-82.

46. Донская, В.И. Сравнительная оценка различных способов стимуляции полиовуляции у овец./ В.И.Донская, М.М.Кунижев // Разведение овец и коз. Шерстоведение: Сб. науч. Тр. /ВНИИОК Ставрополь, 1983. - С. 87- 90.

47. Донская, В.И., Сравнительная оценка эффективности интравагиналь-ного и перорального применения ацетата мегестрола при синхронизации охоты / В.И.Донская, Л.П.Рак, М.И. Язвинский // Тр. / ВНИИОК. 1972. - Вып. 32. -Т. 1. - С. 206-209.

48. Желтобрюх, H.A. Влияние состава разбавителей и режима охлаждения на качество замороженной спермы барана / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко // Проблемы интенсификации овцеводства: Мат. V научн.-произв. конф. / ВНИИОК. Ставрополь, 1974.-Т. 11. - С. 171-174.

49. Желтобрюх, H.A. Морфофункциональные нарушения в спермиях барана в процессе замораживания / Н.А.Желтобрюх // Мат. научн.-произв. конф./ ВНИИОК Вып. V. - Ставрополь. - 1973. - С. 209-212.

50. Желтобрюх, H.A. Нарушения в спермиях баранов в процессе эквилиб-рации и замораживании / Н.А.Желтобрюх // Овцеводство. 1972. - №10. — С.ЗЗ.

51. Желтобрюх, H.A. Основные причины снижения оплодотворяющей способности барана / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко // Тр./ ВНИИОК. 1976. - Вып. 38. - С.77-84.

52. Желтобрюх, H.A. Применение сахарно-желточных сред для замораживания спермы барана / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко // Тр./ ВНИИОК. -1977. Вып. 39. -Т.1. - С.111-118.

53. Желтобрюх, H.A. Совершенствование технологии замораживания и оттаивания спермы барана / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко // Мат. научн.-произв. конф. / ВНИИОК. 1977. - С.27-28.

54. Желтобрюх, H.A. Воспроизводство овец / Н.А.Желтобрюх, В.Я.Никитин. Ставрополь, 2000. - 160 с.

55. Жильцов, Н.З. Новое в биологии воспроизведения сельскохозяйственных животных / Н.З.Жильцов // Зоотехния. — 1999. — № 11. — С. 31.

56. Жуковская, Н.В. Совершенствование методов криоконсервирования и оценка качества спермы с.-х. животных: Автореф. дис. .канд. биол. наук. / Н.В.Жуковская. Лесные поляны, 1998. - 22 с.

57. Завадовский, М.М. Активизация половой циклики у овец в "мертвый" сезон и организация уплотненных окотов / М.М.Завадовский //Вестник Московского университета. — 1945. — Вып. 2. — С. 18-21.

58. Завадовский, М.М. Нельзя ли вызывая искусственную овуляцию у овец достигнуть многоплодия? / М.М.Завадовский, Л.П.Падучева // Труды по динамике развития. 1935. - Т. IX. - С. 139-151.

59. Замораживание и использование спермы баранов-производителей (рекомендации). — М.: Агропромиздат, 1989. 20 с.

60. Иванов, Г.М. Влияние интенсивности использования баранов-производителей на спермопродукцию и сроки племенной службы: Автореф. дис. .канд. биол. наук. / Г.М.Иванов. Ставрополь, 1970. - 20 с.

61. Иванов, И.И. Искусственное оплодотворение у млекопитающих / И.И.Иванов // Экспериментальное исследование: СПб. 1907. - С. 134.

62. Избасаров, У.К. Физиологические и биохимические показатели спермы каракульских баранов по сезонам года / У.К.Избасаров // Тр./ ВНИИ каракулеводства. 1970. - Т. 19. - С.216-219.

63. Инструкция по искусственному осеменению овец и коз. — М.: Агро-промиздат. — 1986. 28 с.

64. Кабак, Я.М. Значение нейросекреции гипоталамуса в регуляции гона-дотропной (лютеинизирующей) функции передней доли гипофиза / Я.М.Кабак, Е.В.Соколова //Журнал общей биологии. 1965. - Т. 26. -№1. - С. 83-95.

65. Казаков, В.М. Об искусственном вызывании охоты у овец / В.М.Казаков //Животноводство. — 1962. № 8. - С. 58.

66. Калев, Г. Осеменение овец глубокозамороженной спермой, разбавленной различными средами / Г.Калев, Д.Загорский, К.Бапырджиев и др. // Животноводство. 1970. - №7. - С. 28-31.

67. Калпокас, В.К. Технология трансплантации эмбрионов /

68. B.К.Калполакс, О.В.Столярова, П.Н.Легостаев // Овцеводство. 1990. - № 1. —1. C. 20-21.

69. Касымов, К. Трансплантация эмбрионов у овец / К. Касымов, Г. Алимжанов, Н. Науанов и др. // Зоотехния. 1994. -№ 8. — С. 29-30.

70. Касымов, К.Т Глубокое замораживание спермы баранов в жидком азоте / К.Т.Касымов, Ж.Б.Ашимов // Пути повышения продуктивности животноводства в Казахстане.: Алма-Ата. 1975. - С.48-49.

71. Касымов, К.Т. Биотехнологические методы размножения ценного генофонда овец в Казахстане / К.Т.Касымов // Аграрная наука. — 2002. — № 2. — С. 19-20.

72. Касымов, К.Т. Оплодотворяющая способность спермы при глубоком замораживании / К.Т.Касымов, Ж.Б.Ашимов // Овцеводство. — 1975. — № 8. — С. 9-11.

73. Квасницкий, A.B. Новое в физиологии размножения животных / А.В.Квасницкий; М., 1950. 104 с.

74. Квасницкий, A.B. Опыт пересадки яйцеклеток от одного животного кдругому/ А.В.Квасницкий // Советская зоотехния. 1949. - № 1. - С.25-28.

75. Керимбаев М.Б. Определение режима взятия семени / М.Б.Керимбаев // Животноводство. 1980. -№ 10. - С. 28-30.

76. Керимбаев, М.Б. Опыт по замораживанию семени баранов каракульской породы / М.Б.Керимбаев // Овцеводство. 1980. — №11. — С.38-39.

77. Клинский, Ю.Д. Использование простагландинов для регуляции воспроизводительной функции овец / Д.Ю.Клинский, А.Н.Алексеенко // Животноводство. 1980. -№ 4. - С. 54-57.

78. Клинский, Ю.Д. Синтетические аналоги простагландинов и использование их в животноводстве (обзор) / Д.Ю.Клинский, А.Н.Алексеенко // Сельское хозяйство за рубежом. 1977. — № 11. - С. 44-48.

79. Клинский, Ю.Д. Эффективность СЖК в зависимости от ее биологического качества / Ю.Д.Клинский //Овцеводство. — 1967. —№ 8. — С. 11-12.

80. Коваленко, П.П. Влияние сезона года на морфологические показатели спермы: Автореф. дис. канд. биол. наук. / П.П.Коваленко. — Краснодар, 1972. -19 с.

81. Когут, Г.И. Консервирование лейкоцитов в защитной среде, содержащей низкомолекулярный поливинилпирролидон, глубоким замораживанием (-196°С): Автореф. дис. канд. мед. наук. /Г.И.Когут. — Киев, 1972. — 20 с.

82. Колесов, С.Г. Анабиоз патогенных микроорганизмов / С.Г.Колесов. — М.: Сельхозгиз, 1959. 222 с.

83. Короткое, А.И. Хранение семени баранов при температуре —78°С / А.И.Коротков, М.Марченко, М.Маскалюк // Земледелие и животноводство Молдавии. 1960. -№ 1. - С.42-44.

84. Кошевой, Г. Об использовании замороженного семени баранов / Г.Кошевой, Е.М.Платов // Сельские зори. 1968. -№ 4.

85. Красовская, О.В. Трансплантация яйца кролика в матку другого животного / О.В.Красовская // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. — 1936. -Т. 15. -№ 2. — С. 112-118.

86. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных

87. А.Д.Курбатов, Е.М.Платов, Н.В.Корбан и др. Л.: Агропромиздат, Лен. отд. -1988.-256 с.

88. Кржншковский, К.Н. Наблюдение за жизнеспособностью сперматозоидов высших животных / К.Н.Кржишковский, Г.Н.Павлов //Архив ветеринарных наук. 1924. - Т. 1.-С. 126-130.

89. Кузнецов, М.П. К вопросу сохранения спермы барана при температуре -78 °С / М.П.Кузнецов, Л.П.Куприянова // Тр. / ВНИИОК. 1959. - Т.ХХШ. -С. 171-190.

90. Кузнецов, М.П. Осеменение овец глубокозамороженной спермой барана / М.П.Кузнецов, А.С.Волков // Докл. Советских ученых к VI Межд. конгрессу по размнож. и искусств, осеменению животных. — Москва. — 1968. — С. 118-120.

91. Курбатов, А.Д. Изменение свойств и признаков у животных при развитии их в организме инопородных матерей /А.Д.Курбатов //Тр. / Пушкинская научно-исследоват. лаборатория разведения с.-х. животных. 1952. — С. 68-72.

92. Кушнир, В.М. Перспективы развития теории и практики криоконсер-вации спермы / В.М.Кушнир // Конкурентоспособное производство продукции животноводства в Республике Беларусь: Сб. работ Межд. науч.-произв. конф. -Жодино, БелНИИЖ. 1998. - С.146-148.

93. Леднев, П.И. Сезонные изменения спермопродукции баранов в условиях предгорной зоны Ташкентской области: Автореф. . дис. канд. биол. наук. / П.И.Леднев. Душанбе, 1972. - 21 с.

94. Логвинов, Д.Д. О массовости патологических родов у первотелок / Д.Д.Логвинов // Зоотехния. 1993. - №7. - С.39-40.

95. Логинова, Н.В. «Любопытный эксперимент» / Н.В.Логинова, В.И.Донская, А.А.Сипко // Овцеводство. 1968. - №11. - С. 35.

96. Логинова, Н.В. Искусственное вызывание овуляции и охоты у овец / Н.В.Логинова // Тр. /ВНИИОК. 1939. - Вып. 10. - С. 93-124.

97. Логинова, Н.В. Оценка различных способов замораживания семени / Н.В.Логинова, Н.А.Желтобрюх // Овцеводство. 1968. - № 9. - С.22-25.

98. Логинова, H.B. Синхронизация охоты у овец / Н.В.Логинова, В.И.Донская, Л.П.Рак //Животноводство. 1966. - № 9. с. 70-74.

99. Логинова, Н.В. Увеличение нагрузки баранов производителей в случной сезон / Н.В.Логинова // Проблемы животноводства. 1936. - № 6. — С.28-32.

100. Лозина-Лозинский, А.К. Жизнеспособность и анабиоз при низких температурах у животных / А.К.Лозина-Лозинский // Анабиоз. — М.: АН СССР. 1955.-С. 241-244.

101. Лозина-Лозинский, А.К. Влияние солей на холодоустойчивость инфузорий и причины смерти при охлаждении / А.К.Лозина-Лозинский // Журнал общей биологии. 1948. - Т. IX. - Вып. 6. - С.48-52.

102. Лопатко, М.И. Метод замораживания семени баранов при температуре -183 °С, -196 °С /М.ИЛопатко // Животноводство. 1962. - № 10. - С.86-88.

103. Лопырин А.И. Влияние измененных условий эмбриогенеза на рост и развитие ягнят / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, П.Л.Карпов // Советская зоотехния. 1951. - № 11. - С. 83-95.

104. Лопырин А.И. Влияние организма матери на развитие плода / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, П.Л.Карпов //Докл. / АН СССР. Сер. биол. -1950.-С. 101-102.

105. Лопырин, А.И. Биология размножения овец / А.И.Лопырин. М.: Колос, 1971.-318 с.

106. Лопырин, А.И. Влияние организма матери на изменение экстерьера ягнят при межпородных пересадках зародышей / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, П.Л.Карпов //Труды совещания по биологическим основам повышения продуктивности. М., 1952.-С. 120-124.

107. Лопырин, А.И. Искусственное вызывание охоты у овец /А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, В.И.Донская // Вестник сельскохозяйственной науки. 1962. - №11. - С. 82-87.

108. Лопырин, А.И. Искусственное осеменение овец / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова. М.: Сельхозгиз, i960. - С. 23-46.

109. Лопырин, А.И. К методике замораживания семени барана / gp А.И.Лопырин, Н.ВЛогинова // Овцеводство. 1958. - № 8. - С. 31 -34.

110. Лопырин, А.И. Краткие итоги и перспективы дальнейших исследований по замораживанию семени барана / А.И.Лопырин // Овцеводство. — 1970.- № 9. С. 29-32.

111. Лопырин, А.И. Опыт межпородной пересадки зародышей / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, П.Л.Карпов // Советская зоотехния. — 1950. — №8.- С.50-64.ф 109. Лопырин, А.И. Повышение плодовитости овец и коз / А.И.Лопырин.- М.: Сельхозгиз, 1952. 231 с.

112. Лопырин, А.И. Увеличение многоплодия овец гормональным воздействием / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова // Успехи зоотехнических наук. -1937. Т.4. - №1. - С. 46-64.

113. Лопырин, А.И., Жизненность и наследственность овец, развившихся из пересаженных зародышей / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, П.Л.Карпов // Научные исследования института за 1953 год: Сб. науч. тр. Ставрополь, 1953.fc' -С. 67-70.

114. Лянсберг, Э.С. Синтетические среды для хранения семени барана: Автореф. . дис. канд. биол. наук. / Э.С.Лянсберг. — Дубровицы, 1970. —19 с.

115. Максимов, Ю.А. Рациональное использование племенных производителей / Ю.А.Максимов. М. - 1964. - С. 223.

116. Максимов, H.A. Внутренние факторы устойчивости растений к морозу и засухе / Н.А.Макимов // Тр. прикладной ботаники, генетики. — 1929. — Т.ХХИ. — Вып. I. -С.1-41.

117. Максимов, H.A. О вымерзании и хладостойкости растений / Н.А.Максимов. СПб. - 1913. - С.330.

118. Маликов, Д.И. Использование тонкорунных баранов-производителей / Д.И.Маликов // Животноводство. 1953. — № 3. — С.79-73.

119. Мануйлов, И.М. Пути усовершенствования биотехнологии размножения овец: Автореф. . дис. докт. вет. наук / И.М.Мануйлов. Ставрополь. —1998.-43 с.

120. Маркарян, Р.Н. Влияние режима использования баранов-производителей на их половую активность и семяпродукцию /Р.Н.Маркарян // Известия Арм. ССР с.-х. науки. 1964. - № 2. - С. 105 - 115.

121. Мацкепладзе, И.Б. Сохранение и использование семени быка и барана в замороженном состоянии /И.Б.Мацкепладзе, К.Ф.Гугушвили, М.А.Брегадзе и др. // Животноводство. 1960. - № 2. — С.77-79.

122. Медеубеков, К.У. Глубокое замораживание и длительное хранение семени баранов-производителей / К.У .Медеубеков, К.Т.Касымов // Воспроизводство и выращивание молодняка в овцеводстве. — Алма-Ата. — 1984. — С.20-25.

123. Милованов, В.К. Внедрение в практику и продолжение совершенствования технологии длительного хранения семени барана / В.К.Милованов, В.М.Боярский, А.И.Варнавский // Бюлл. / ВНИИ животноводства. 1979. — Вып. 59. - С.28-35.

124. Милованов, В.К. Дальние перевозки замороженного семени барана / В.К.Милованов, А.И.Варнавский, П.П.Кундышев и др. // Животноводство. — 1978. -№ 1. — С.33-35.

125. Милованов, В.К. Лизофосфатиды и их значение в технологии хранения семени быка и барана / В.К.Милованов, В.С.Голубь, Н.З.Жильцов // Докл. ВАСХНИЛ. 1975. - № 1. - С.24-25.

126. Милованов, В.К. О природе криогенных повреждений живчиков барана / В.К.Милованов, А.И.Варнавский, В.А.Наук // Вестник с.-х. науки. 1970. -№10. - С.86-93.

127. Милованов, В.К. Уровень и перспективы научных исследований / В.К.Милованов, И.И.Соколовская // Животноводство. — 1980. -№ 10. С.48-50.

128. Морозов, В.А. Разработка проблемы хранения семени сельскохозяйственных животных в замороженном состоянии / В.А.Морозов // Животноводство. 1959. - № 7. - С.66-72.

129. Морозов, В.А. Сохранение семени барана в замороженном состоянии / В.А.Морозов // Овцеводство. 1957. - № 10. - С. 30-33.

130. Морозов, В.А. Сохранение семени барана в замороженном состоянии посредством гипертонических растворов / В.А.Морозов // Докл. ВАСХНИЛ. — 1957. № 11. — С.44-48.

131. Назарян, В.К. Усовершенствование метода длительного хранения семени барана путем применения антиоксидантов из группы аминов: Автореф. . дис. канд. биол. наук. / В.К.Назарян. Дубровицы, 1983. - 26 с.

132. Наук, В.А. Влияние технологической обработки семени на проницаемость мембран живчиков и устойчивость их белково-липидных комплексов / В.А.Наук // Овцеводство. 1972. - № 10. - С. 31-33.

133. Наук, В.А. К вопросу о малой устойчивости живчиков барана при глубоком замораживании семени / В.А.Наук, В.К.Скворцова // Овцеводство. — 1970.-№ 8.-С. 23-24.

134. Наук, В.А. О целесообразности отказа от «эквилибрации» при замораживании семени быков / В.А.Наук // Животноводство. 1974. - № 10. — С.24-26.

135. Наук, В.А. Сохранение семени барана и изменение содержания аминокислот при низких температурах / В.А.Наук // Разведение и кормление с.-х. животных. — Кишинев: Штиинца, 1973. — С. 111-113.

136. Небогатиков, Г.В. Применение быстрозатвердевающих акриловых пластмасс для изучения анатомии воспроизводительной системы овец / Г.В.Небогатиков // Научн. исследов. аспирантов ВИЖа. Дубровицы. —1971. — С.81-83.

137. Ожин, Ф.В. Максимальное использование баранов тонкорунных пород / Ф.В.Ожин // Наука — социалистическому животноводству. — М. — 1963. — С.338-343.

138. Организация осеменения овец (рекомендации). М., 1991. — 20 с.

139. Осташко, Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей / Ф.И.Осташко. — Киев.: Урожай, 1968. — 342 с.

140. Осташко, Ф.И. Длительное хранение семени производителей сельскохозяйственных животных/Ф.И. Осташко. -М.: Сельхозиздат, 1962.-318 с.

141. Осташко, Ф.И. Применение фотоэлектроколориметра для определения концентрации семени быков / Ф.И.Осташко // Мясное и молочное животноводство. 1960. -№ 2. -С. 16-18.

142. Падучева, A.JI. Гормональные препараты в животноводстве / А.Л.Падучева; М.: Россельхозиздат, 1979. С. 102.

143. Панышева, Л.В. Половой цикл романовской овцы /Л.В.Панышева // Докл. / ВАСХНИЛ. 1939. - Вып. 1. - С. 28-30.

144. Платов, Е.М. Дыхание семени быка и барана после замораживания / Е.М.Платов // Вестник с.-х. науки. 1967. - №4. - С.72-73.

145. Платов, Е.М. Замораживание семени барана в лактозо-желточно-этиленгликолиевой среде /Е.М.Платов //Овцеводство — 1965. — № 9. — С. 11.

146. Платов, Е.М. Замораживание семени барана в синтетической полиса-харидной среде / Е.М.Платов, В.А.Малиновская // Животноводство. — 1977. — № 7. С.54-57.

147. Платов, Е.М. Замораживание семени быка в глицериновой компенсированной среде / Е.М.Платов // Животноводство. 1963. — № 8. - С.31.

148. Платов, Е.М. Замораживание спермы барана в средах с полисахаридами / Е.М.Платов, Н.Я.Аванов, Н.Г.Балашов // Овцеводство. 1980. — № 10. -С. 38-39.

149. Платов, Е.М. О причинах низкой суягности овец от замороженного семени / Е.М.Платов // Овцеводство. 1970. — № 8. - С. 25-26.

150. Платов, Е.М. Осмотическое действие глицерина на спермии быка / Е.М.Платов // Вестник с.-х. науки. 1960. -№11.- С.28-30.

151. Платов, Е.М. Пути и перспективы замораживания спермы / Е.М.Платов, А.М.Малиновский, Л.И.Леонтьева и др. // Овцеводство. — 1981. — №9.-С. 34-36.

152. Платов, Е.М. Разработка и практическое применение технологии замораживания спермы баранов /Е.М.Платов. // Научн.-практич. конф. по овцеводству и козоводству: Тез. научн. сообщений / ВНИИОК. Ставрополь. -1982. - С.254-256.

153. Платов, Е.М. Эффективность замораживания спермы барана / Е.М.Платов, А.С.Волков // Животноводство. 1979. — № 5. - С.53-56.

154. Подготовка баранов и технология криоконсервации спермы (методические рекомендации) / Сост.: Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, М.М.Айбазов: ВНИИОК. Ставрополь, 1990. - 15 с.

155. Поликарпова, Е.Ф. Среда и половая функция овец / Е.Ф.Поликарпова // Тр. / Институт морфологии животных им. А.Н. Северцева. — 1951. Вып. 2. — С.118-124.

156. Поманский Е.А. Уплотнение окотов в связи с половой сезонностью каракульских овец / Е.А.Поманский, В.И.Стояновская // Проблемы животноводства. 1936. -№ 3. - С. 77-82.

157. Поповиченко, Н.В. Роль гипоталамической нейросекреторной системы в приспособительных реакциях организма / Н.В.Поповиченко. — Киев: Нау-кова думка, 1973.- 123 с.

158. Прокофьев, М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных / М.И.Прокофьев. — JL: Наука, 1983. 264 с.

159. Рабочев, В.К. Сравнительная оценка отдельных способов хранения семени баранов: Автореф. . дис. канд. биол. наук. / В.К.Рабочев. — Ставрополь, 1968.-23 с.

160. Ре, JI. Консервация жизни холодом. / Jl.Pe. — М.: Медгиз, 1962. — 240с.

161. Результаты трансплантации зародышей у крупного рогатого скота / Н.И.Сергеев, Ю.Д.Клинский, И.Я.Шихов и др. // Эндокринология и трансплантация зигот сельскохозяйственных животных. М.: Колос. — 1982. — С. 16-42.

162. Рекомендации по использованию баранов-производителей при искусственном осеменении / Сост.: Р.М.Аминов, П.М.Леднев, Я.Н.Сон; — Ташкент, 1985.- 18 с.

163. Рекомендации по оптимальному режиму использованию высокоценных племенных баранов при длительной их эксплуатации на протяжении года /Сост.: Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, М.М.Айбазов: ВАСХНИЛ, ВНИИОК. -Ставрополь, 1987.- 13 с.

164. Рекомендации по организации осеменения овец. М., 1991. — 23 с.

165. Розен, В.И. Механизм действия гормонов на клетку // Основы эндокринологии / В.И.Розен. М.: Высшая школа, 1984. - С. 186-196.

166. Савченко, О.Н. Значение гонадотропных гормонов в стимуляции функции яичников (обзор литературы) / О.Н.Савченко // Акушерство и гинекология. Медицина. 1973. - № 8. - С. 26-33.

167. Сенягин, А.Ф. Хранение семени баранов при плюсовых и минусовых температурах / А.Ф.Сенягин // Биостимуляторы в животноводстве. — Ташкент. — 1967. -С.141-144.

168. Сергеев, Н.И. Биотехника трансплантации эмбрионов / Н.И.Сергеев, С.А.Мазепкин // Овцеводство. 1987. - №2. - С. 36-40.

169. Сергеев, Н.И. Об осеменении коров-доноров с множественной овуляцией / Н.И.Сергеев, Г.И.Иванов, А.В.Овчинников //Молочное и мясное скотоводство. 1979. - № 2. - С. 38-39.

170. Синхронизация охоты у овец и телок путем однократной инъекции прогестагена / М.И.Прокофьев, П.И.Леднев, Т.В.Галиев. и др. // Животноводство. 1973.-№ 2.-С. 77-80.

171. Слипченко, С.Н. Разработка новых методов и средств профилактики и лечения острого послеродового и пострансплантационного гнойно-катарального эндометрита у коров: Автореф.дис. докт. вет. наук / С.Н.Слипченко. Воронеж, 1994. - 45 с.

172. Смирнов, И.В. Действие некоторых физических и биологических факторов при замораживании спермы барана / И.В.Смирнов, В.М.Давиденко, О.И.Игнатенко // Животноводство. — 1978. — № 5. С.58-60.

173. Смирнов, И.В. Сохранение семени сельскохозяйственных животных при температурах -78 °С, -183 °С / И.В.Смирнов // Социалистическое животноводство. 1951. -№ 1. - С.94-95.

174. Смирнов, Л.Ф. Когда проводить случку романовских овец при одном и двух окотах в год / Л.Ф.Смирнов // Овцеводство. 1935. - № 8. - С. 9-11.

175. Соколовская, И.И. О значении акросомы в оценке семени самцов / И.И.Соколовская, Р.Н.Овайдис, А.Абилов // Животноводство. 19819- № 10. -С.45-47.

176. Соколовская, И.И. Пересадка зигот / И.И.Соколовская // Проблемы оплодотворения с.-х. животных. М., 1957. - С. 87-98.

177. Стоянов, В.К. Опыт глубокоцервикального осеменения овец глубо-козамороженным семенем / В.К.Стоянов // Животноводство. — 1980. — № 1. — С.45-46.

178. Сурков, П.В. Технология искусственного осеменения и ягнения овец с синхронизированной охотой / П.В.Сурков // Овцеводство. 1970. — № 9. — С. 24-26.

179. Тапильский, И.А. Сперматогенез и половая активность баранов в Узбекистане в зависимости от сезона года / И.А.Тапильский // Тр / Узб. НИИЖ. — 1961.-Вып. 6.-С. 125-131.

180. Тараненко, Л.Г. О механизме действия лактогенных гормонов / Л.Г.Тараненко // Гормоны в животноводстве // Тр./ ВАСХНИЛ. М.: Колос, 1977. -С.51-58.

181. Теоретические и практические аспекты трансплантации зигот в племенном овцеводстве / М.М.Тойшибеков, Е.Беталханов, Б.Орзалиев и др. // Генетика и селекция сельскохозяйственных животных. — Алма-Ата, 1986. — С. 5356.

182. Тойшибеков, М.М. Трансплантация эмбрионов в овцеводстве: Авто-реф. . дис. докт. с-х. наук / М.М.Тойшибеков. Алма-Ата. -1986. - 32 с.

183. Тонких, A.B. Гипоталамо-гипофизарная область и регуляция физиологических функций организма / А.В.Тонких. М.: Наука, 1965. — С.30-36.

184. Трансплантация зигот в племенном овцеводстве // Ф.М.Мухамедгалиев, М.М.Тойшибеков, Р.Б.Абельдинов и др. Наследование хозяйственно-полезных признаков ягнятами, полученными путем межпороднойпересадки зигот. Алма-Ата: Наука, 1981. - С. 38-48.

185. Трансплантация эмбрионов у овец / И.Я.Шихов, Л.А.Истомина, Э.Поладов и др. // Овцеводство. 1985. - № 6. - С. 25-27.

186. Третьяков, H.H. К изучению роли внешних факторов в половых циклах овец / Н.Н.Третьяков // Докл. / АН СССР. 1949. - Т. 64. - № 4. - С. 51-54.

187. Удельнова, И.М. О цитофизиологических особенностях дрожжевых организмов после глубокого охлаждения и оттаивания / И.М.Удельнова // Журнал общей биологии. 1957. - T. XVIII. - Вып. 5. - С. 24-27.

188. Ульянов, А.Н. В какие сроки случного сезона целесообразно использовать баранов линкольн / А.Н.Ульянов, А.П.Коваленко // Овцеводство. — 1977. — № 8. С. 28-30.

189. Умаров, М. Освоение и внедрение технологии длительного хранения спермы / М.Умаров, С.Ходжаев // Вопросы повышения продуктивности овец в Таджикистане: Сб. науч. тр. Душанбе, 1982. - С. 62-72.

190. Хабибуллин, Х.Х. Сохранение и перевозка спермы быков при низких температурах / Х.Х. Хабибуллин // Молочное и мясное животноводство. —1957. -№ 5.-С. 39-42.

191. Худайбергенов, В.Д. Динамика физиологических показателей спермы баранов-производителей в зависимости от возраста и режима использования / В.Д.Худайбергенов // Сб. трудов аспирантов и молодых ученых. — Фрунзе. — 1975.-Вып. VI. С.34-35.

192. Цимборович, А.Ф. Влияние светового режима на половые функции у овец / А.Ф.Цимборович // Научные записки Херсонского сельскохозяйственного института. — 1955 Вып. 5. - С. 8-12.

193. Шайдуллин И.Н. Сахара в средах для замораживания семени животных/ И.Н.Шайдуллин, В.А.Варнавская // Животноводство. — 1982. — № 7. — С.52-53.

194. Шайдуллин, И.Н. Усовершенствование метода замораживания семени барана: Автореф. . дис. канд. биол. наук. / И.Н.Шайдуллин. Дубровицы, 1980.-24 с.

195. Шмидт, П.Ю. Анабиоз / П.Ю.Шмидт. М.: Академкнига, 1948. - 234с.

196. Эрнст, JI.K. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных / Л.К.Эрнст, Н.И.Сергеев. М.: Агропромиздат, 1989. - С. 127-129.

197. Юдович, С.С. Опыт проведения уплотненного окота на волошских овцах и метисах меринос х волошская / С.С. Юдович // Тр./ ВНИИОК. 1939. -10.-С. 33-42.

198. Юзликаев, Р. Круглогодовое использование каракульских баранов улучшателей / Р.Юзликаев // Животноводство. 1981. - № 9. - С.53-55.

199. Amir D., Volcani R., Genazi A. Seasonal fluctuatins in the sexual activity of awassi, germen mutton merino, corridale, border-Leicester and Dorset horn rams // J. Agr. Sci. 1965.-V.64. -N I. -P.l 15-134.

200. Anderson G.B., Baldwin J.M., Cupps P.T., Drost M. Enduced trainning in feet heifers by embryo transfer. // J. Anim. Sci. 1979. - V. 49, N 4 - P. 1037-1042.

201. Aono M., Yasuda Т., Shioji Т., Kondo Т., Kurachi K. Absence of inhibition by hyper prolactinaemia on ovarian response to exogenous gonadotrophin //Acta endocrinol.- 1978.-V. 89.-P. 142-148.

202. Armstrong D.T., Evans G. Factors influencing success of embryo transfer in sheep and goats. //Teriogenology. 1983. - 19: P. 31-42.

203. Armstrong D.T., Grinwich R.L. Blockade of spontaneous and LH-enduced ovulation in rats by indomethacin, an inhibitor of prostaglandin synthesis // Prostaglandins. 1972. -N 1. -P.21 -28.

204. Averill R.L.W., Rowson L.E.A. // J. Endocrinology. 1964. -16. - №2. -P.326-336.

205. Ayalon N., Weis J., Lewis J. Fertility losses in normal cows and repeat of breeders. Proc. 6th. Int.// Congr. Anim. Reprod. 1978. - V.l. - P.393-396.

206. Bacze J., Meszaros J., Perjes J. Untersuchungen zur Verbesserung des su-perovulationser folges bei Kiin. // Zuchthygiene. 1979. - V. 14. - N 61. - S. 26-30.

207. Baird D.T. Local utero ovarian relationships. // In. "Control of ovulation". Crighton B.B., Foxcroft G.B., Haynes N.B., Lamming G.E., eds. Butterworths. London/-1978 - p.217-233

208. Baker A.A., Snaw G.A., Donwey B.R. Effect of PMSG, HSG or GnRH on ovulation in sheeps. // J. Anim. Sci. 1974. - V.39. - N 1. - P. 197. - (Abstr)

209. Barraclough Ch. A., Gorski R.A. Evidence that the hypothalamus responsible for and rogeninduced sterility of the female rat. // Endocrinology. — 1961. — V.68.N1.P. 68-79.

210. Beeham D., Sreenar J.M. Embrio transferin farm animals. Ed.K.J.Betteridge, Canada, Department of agricul. 1977. — Monograph. 16. — P. 16.

211. Betteridge K.J. Embryo transfer in farm animals. A review of techniques and Applications. Agriculture Canada Monograph. 1977. - 16. - P. 34-41.

212. Betteridge K.J., Eaglensome M.D., Randall G.C.B., Nitchell D. Collection, description and transfer of embryos from cattle 10-16 days after oestrus. // Re* prod and Fert. 1980. - V.59. - N1. - P.205-216.

213. Bindon B.M., Roberts E.M. Control of ovarian activity in ewes with progestagens // J. Reprod. Fertil. 1964. - N 7. - P. 3.

214. Booth W.D., Newcomb R., Strange H., Rowson L.E.A., Sacher H.B. Plasma oestrogen and progesterone in relation to super ovulation and egg recovery in the sheep // Vet. Rec. 1975. - V.97. - N 19. - P. 366-369.

215. Bravo C. Freezing of ram semen // VI1 intern. Kongerss fur Tierische Fortpflanzung and Haustirbesamung. -Munhen. — 1972. S.740.

216. Brock H., Rollson L. The production of viable bovine ova // J. Agric. Sci. - 1952. - V.42. - P.479

217. Bruce N.W., Miller K. The effect of prostaglandin F2a on ovarian blood flow and corpora lutea // Nature. New Biol. 1974. - V. 49. - P. 176-177.

218. Can. Dept. Agrie. 1977. - N16. - P. 10-13.

219. Carmenate C., Hernandez I. Comprtimento de las características físicas y morfológicas dei semen avino durante bas difírentes épocas del ano // Rev. Cub. Re-prod. Anim. 1982. -NI. - P. 17-29.

220. Cassou R. La methode des Paillettes en Plastiq ve adaptee a la generalistion de la congelation // V Congr. International per la reproduzione anímale e lia fe-condazione artificíale. Trnto. -1964. - P.854.

221. Chiboka O. Semen characteristics of West African Dwarf rams // Anim. Reprod. Sci. 1980. - N 3 - P.247-252.

222. Church R.B., Shea B. Some aspects of bovine embryo transfer. In. egg transfer in cattle, ed. L.E.A. Rowson. Commision of the European Communities. LuxemburgE.U.R.- 1976.-491.-P. 83-86.

223. Colas G. Effect of initial frizzing temperature, addition of glycerol and dilution on the survival and fertilizing ability of deep frozen ram semen // J.Reprod. Fértil. 1972. - V. 42. - N 2. - P.275-277.

224. Coonrod S.A., Coren.R., McBride B.L., Bowen M.J., Kraemer D.C. Successful non-surgical collection of ovine embryos // Theriogenology. — 1986. — V.25. — P. 149-151.

225. Cooper M.J. Control of oestrous cycles of heifers with a synthetic prostaglandin analogue. // Vet. Rec. 1974. - V. 95. - P. 200-203.

226. Cooper M.J., Rowson L.E.A. Control of oestrus cycle in Friesian heifers with © 80996, a synthetic prostaglandin analogue structurally related to PG F2a H Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys . - 1975. -N 15. - P.427-436.

227. Covem 'P.T., Laing J.A. Ovulation rate in ewes treated with pregnant mares serum gonadotrophin and luteinizing hormone releasing factor. // J. Agr. Sci. — 1976.-86. — N l.-P. 127-129.

228. Cullen R., Shearer G.S. Observations on the synchronization of oestrous in ewes during the breeding season and the effect of the subsequent fertility.

229. Данов Д.Т., Ковачев К.Д., Кръстева С.Х. Накои форми на увреждане и отклонение от нормалната ултраструктура на сперматозоидите на коча // Biol, et immunol. reprod. 1984. - N 9. - P.87-94.

230. Deaver R.D., Stilley N.J., Dailey R.A. Concentration of ovarian and pituitary hormones following prostaglandin F // J. Anim. Sei. 1986. - V. 62. — P. 422427.

231. Devies H.I., Dan R.B. A note on the Fertility of ewes Treated with Multiple Injections of progesterone Followed by Pregnant Mare Serum. // Austral. Vet. J. — 1957. -N 33. -P.4.

232. Djanuar R. Effects of high temperature on spermatogenesis of rams // Communic. Veterin.- 1965.-N 1.-P. 13-18.

233. Drost M. A fild study on embryo transfer in sheep. //J. Amer. Vet. Medic. Assoc. - 1975. - 166. - №12. - P. 1176-1179.

234. Dutt R,- Induction of oestrus and ovulation in the anoestrual ewes by use progesterone and pregnant mare serum. // J. Anim. Sei. 1953. — N12. — P. 3.

235. Dutt R.H., Hamm P.T. Effects of exposure to high environmental temperature and shearing on semen production of rams in winter // // J. of Anim. Sei. — 1957. -V. 16. — N2. -P.328-334.

236. Dutt R.H., Rush L. The effect of low environmental temperature of initiation of breeding season and fertility in sheep // J. of Anim. Sei. — 1955. — V. 14. — N 3. — P.885-896.

237. Dutt R.H., Simpson E.C. Environmental temperature and fertility of Southdown rams early in the breeding season // // J. of Anim. Sei. — 1957. — V. 16. — N 1. -P.136-143.

238. Edgguist L., Einarrson S., Gustaffson B. Effect of prostaglandin F2U on sperm transport in the reproductive tract of the ewe. // Acta Vet. Scand. 1975. — № 16. — P.149-151.

239. Effect of breed, seasonal light rhythm and ambient temperature on ram semen/ El-Sherbiny A.A., Abdel Rahman., Khalil M. e.a. // Minufiya G. Agr. Res. -1982.-N 5. P. 203-226.

240. Ellendorf F., Smidt O. Neural control of cyclic reproductive functions in ^ the mamal. // A. Review J. Of interdis ciclinary cycle research. Amsterdam. — 1970. —1. V.1.P.201-208

241. Elsden R.D., Betteridge K.J. Embryo transfer in farm animals. //Monogr.,1977.

242. Elsden R.D., Nelson L.D., Seidel G.E. Superovulating cows with follicule. Stimulating hormone and pregnant mare's serum gonadotrophin. // Theriogenology. —1978. — V.9. — N. 1. P. 17-26.

243. Elsden R.P., Nelson L.D., Seidel G.E. Embryo transfer in fertile and infertile cows. // Theriogenology. -1978. V.l 1 - N 1. - P. 17-25.

244. Emmens C.W., Blackshow A.W. The fertility of frozen ram and bull semen // Austral. Veterin. J. 1955. -V.31. - N 3. - P.76-79.

245. Evans G., Maxwell C. Salamon's Artificial insemination of Sheep and Goats. Butterworth Guilford, U.K. - 1987. - P.93-106.

246. Flerco B., Izentagothai J. Oestrogen Sensitive nervous structures in the hypothalamus. // Acta endocr., Copengagen. 1957. - V.26. — P. 121-127.

247. Folch J., Colas G. Caracteres siminales y poder fecundat del esperma de morenco de las rezas ile de france y berrishon du cher II An. IRNA Ser. Prod. Anim. 1979.-N10.-P.l 17-127.

248. Foote R.H., Onuma H. Superovulation, ovum collection. Culture and ^ transfer. A review.J. Dairy. Sci. 1970. - N 53. - P. 1681-1692.

249. Fornusek L., Vetvickova V., Petelikova I. Usinek redidel pro dlouhodobe uchovavani na akrosomy beranich spermii // Veter.-Med. (CSSR). 1981. — N.26. — V.4.-P.213-221.

250. Frarer A.F. Progress in the Artificial Insemination of sheep with Frozen Semen // VI Congr. Intern. Reprod. Anim. Insem. Artif. Paris. - 1968. - V.4. -P.714-718.

251. Fukui E., Roberts E.M. Sperm transport after no surgical intrauterine insemination with frozen semen in owes treated with prostaglandin F2a //J- Reprod. Pert./ 1977.-V.51.-N 1.-P.141-143.

252. Galil K., Galil A. Seasonal variation in some characteristics of ejaculated spermatozoa of Sudan Desert Sheep in the tropics // J. Agr. Sci. 1982. — V. 99. - N 1. — P.35-47.

253. Gordon J. The induction of pregnancy in the anoestrous ewe by hormonal therapy. 3. The use of repeated progesterone and pregnant mare serum thera // J.Agr. Sci. - 1963. - V.60. N 1.

254. Gordon J. Problems and prospects in cattle egg transfer // Irish Veter. J. -1975. -V. 29 — N. P. 39-62.

255. Gordon J. The use of progesterone and serum gonadotropin (PMS) in the control of fertility in sheep. II. Studies in the extra seasonal production of lambs // J. Agr. Sei. 1958. - V.50. - N 2.

256. Gossens G., Camps W. Het diepriezen van rundersperma in tablet form // Tijdscrift Diergeneesk. 1966. - N 11. - S.91.

257. Greve T., Lehn-Jensen H., Rasbech N.O. Ei transplantation seim Rind nicht chururgisches Aufsam mem von bovinen embryonen in der Prakis // Teiriirzte. Praxis. 1978. -Jg.6-N.3. - P. 313-324.

258. Greve T., Lehn-Jensen H., Rasbech N.O. Morphological evolution of bovine embryos recovered non-surgically from superovulated dairy cows on days 6,5 to 7,5. A field study. // Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys. 1979. - V.19. - N5. -P. 1599-1611.

259. Greve T., Lehn-Jensen H., Raslech N.O. Egg transfer in sheep effect of injecting PMSG on different days // Theriogenology 1979, 5(1) - V. 5. - N 1. - P. 1519.

260. Haffes E.S.E. Techniques of collection and transplantation of ova in farm ^ animals// J:Amer. Veter. Med. Assoc. 1958. -V.133.-N 10.-P. 506.

261. Haffes E.S.E., Badreldin A.Z., Darwish V.H. Seasonal variations in semen characteristics of sheep in subtropics // J.Agr. Sci. 1955. -V. 45. - P.283-292.

262. Hahn J., Schneider C. Effect ofAthe donor egg quality and transfer results // Am. Biol. Anim. Biochim. Biophys. - 1979. - 19. -N 5. - P. 1613-1617.

263. Hammarstedt R.H., Amman R.P., Ruinsky T. // Biol.Reproductions. -1976.-N 14. — P.381-397.

264. Hant W.L., Aldelman D. Superovulatory response to different PMG dose

265. Theriogenology 1979. - 17. - N 1. - P. 100-103.

266. Hanter R.H.F., Lawson R.A.S., Rowson L.E.A. // J. Reprod. and Fert. — 1972. -30. — N. I. -P.325.

267. Haresign W., Acritopoulou L. Controlled breeding in sheep using the prostaglandin analogue. // Livest. Product. Sci. 1978. - V. 5. - № 3. - P.313-319.

268. Harper M.E.K., Chang M.C. Some aspects of the biology of mammalian eggs and spermatozoa. // Ln. Advances in reproductive Physiology edit. Bishop

269. M.N.H. 1975. -V. 5. — P.167-174.

270. Hawk H.W., Convey H.H. The use of progesterone and serum gonadotropin (PMS) in the control of fertility in sheep // Biol. Reproduct. - 1975. — V. 13.— N1. -P.322-328. m

271. Hawk H.W., Estemcamp L.E. Controlled breeding in sheep using the prostaglandin analogue ICI 80996 //Biol. Reproduct. 1973.-V. 34.-N 1. -P.347-349.

272. Healey P. Effect of freezing on the ultra structure of the spermatozoon of domestic animals//J. Reprod. Fertil. 1969. -V 18. -N 1.

273. Holmberg O. Seasonal variation in libido and semen characteristics in the ram // Nord. Veterinarmed. 1968. - N 20. - P. 11.

274. Jones R.C., Mann T. Lipid peroxides in spermatozoa; formation, role of plasmalogen and physiological significance // Proc. R. Soc. London.: Ser.B. - 1976. -193. -1113. -P.317-333.

275. Karech P.I., Goodman R.S., Segan S.J. Feedback basis of seasonal breeding test of an hypothesis // J. Reprod. Pert. - 1980. - V.58 Sump . Rep. - N 15. — P.521-535.

276. Kastyak L. Wplyw rozney crestossci uritkovania rosplodowego trikow na ilosc i jakosc ich nasienie // Leszyty naukowe. -1962. V. 12. - N 1. - P.67-78.

277. Kordts E., Fewson D. Differensenbeziehungen zwischen den Spermabe-fimgen des ersten und zweiten Sprunges bei Deckbullen // Kieler Vilchwirtschaftliche Forschungsberichte. 1956. - V.8. - N 1. - P.49-73/

278. Lamond D.R. Multiple births in sheep an assessment // Theriogenology. — 1974. -N 1. — P.181-212.

279. Lasten D.B. // J. Reprod. and Fert. 1973. - 28. -N 1. - P. 285-289.

280. Lawson R.A.S., Adams C.E., Rowson L.E.A. // J. Reprod. Pert. 1972. -V.29 N.l - P.105-116.

281. Leiphitz C. Ein Beitrag zur Tierkuhlung von rindersperma in Pillenform: Grosse der Pillen //Dtsch. Tiererztl. Wschr. 1963. - N7. - S. 12-18.

282. Lindner H.R., Amsterdam A., Salamon Y., Tsafriri A., Nimrod A., Lamprecht S.A., Zor U., Koch Y. Intraovarian factors in ovulation: determinants of follicular response to gonadotrophins // J. Reprod. Fert. 1977. -V. 51. - P.215-235.

283. Lindstrom U. Artificial insemination program in England // A.I. Digest. -1967. V. 13. - N 2. - P.240-245.

284. Loubser P., Van-Neikerk C. Seasonal changes in sexual activity and semen quality in the Angora ram. 2. Semen volume, quality and freezability // S. Air. G. Anim. Sci. — 1983.-V. 13.-N3.-P. 161-163.

285. Lovelock J. The immobilization of spermatozoa by freezing and hawing and protective action of glycerol // Biochem. J. 1954. - V.58. - P.618-622.

286. Lugar J. Synchronization of the oestrus cycle with prostaglandin F2a for use in artificial insemination of cattle (A review) // Veter. Med. Small Anim. Clin. — 1977.-V. 72.-P. 87-92.

287. Luyet B. The vitrification of organic colloids and protoplasm // Biody-namic. — 1939 — V. 29.-N 1.

288. Luyet В., Hodapp E. Revival of frog's spermatozoa vitrified in liquid air // Proc. Soc. Exp. Biol. 1938.-V. 39.-N3.-P. 433-434.

289. Magssood M. Seasonal variation in the testis histology of the ram // The Veterinary Record. 1951. -V. 63. -N 37. -P.597-598.

290. Mahmood S., Koul G.L., Biswos J.S. Comparative efficacy of FSH-p and PMSG on superovulation in Pashmina goats. // Theriogenelogy. — 1991. — V.35. — N 6. -P.l 191-1196.

291. Makheryce D.A., Bhattacharya P. Seasonal variation in semen quality and hemoglobin and cell volume contents of the blood in bulls // Indian J. Vet. Sci. and Anim. Husb. 1953. - V. 22. - P.2.

292. Marinov P. La accion proteolitica del acrosome como metodo de valoracion del efecto crioprotector de diluyentes para la congelacion de semen ovino // Biol. Immunol. Reproduct. Cofia. - 1981. - N 5. - P. 44-48.

293. Маринов П. Влияние на някои фактори иъерху дълвокото замрядава-ние на семенна точност от коч // Biol. Immunol. Reproduct. Cofia. - 1983. — N 7. - P. 74-82.

294. Mesanos P., Gamsik R., Schavarc F. Prezivatel spermii barana pri pouziti roznych druhov riedidiel pohlbokom zmrazeni v tekutom dusuku // Vet. Med. 1977. -V. 22.-NIO. P. 599-604.

295. Maurer R. Superovulation and embryo transfer in sheep. // J. Meat. Animal. 1986. - N 8. - P. 27-39.

296. McKelvey W.A.C., Robinson J.J. Aitken R.P., Robertson I.S. Repeated recoveries of embryos from ewes by laparoscopy // Theriogenology. 1986. —N25. -P.855-865.

297. McKelvey W.A.C., Robinson J.J. Repeated recoveries of ovine ova by laparoscopy // Theriogenology. 1986. -N 25. - P. 171-173.

298. Mckensie F.E., Berliner V. The reproductive capacity of rams // Res. Bui. Mo. Exp. Sth.- 1937. -265.

299. Menger H., Hamad M. Der einfluss des Absamrhytmus und der Absam-frequenz auf die Spermaqualitat von Besamungsschafbocken // Mh.Veter. Med. -1981. V.36. - N 3. - S.93-97.

300. Mollova M. Changes in the structure of ram spermatozoa after equilibration and deep frizzing // Biol. Immunol. Reproduce. 1980. — V. 33. - N 3. — P. 393395.

301. Moor R.M., Rowson L.E. Influence of the embryo and uteris on luteal function in the sheep // Nature. 1963. - V. 201. - N 4918. - P. 108-109.

302. Moor R.M., Trouson A.O. Hormonal and follicular factors affecting maturation of sheep oocytes in vitro and their subseguent develop mental capacity // J. Re-prod. and Fertil. 1980. - V. 49. - N 1. - P. 101 -109.

303. Moore M.W., Shelton J.N. Egg transfer in sheep // Austral. J. Agric. Rec. 1963. - V. 13. - N 4. - P.718-724.

304. Mul A.I. Pharmacological of luteolitisis // Trend. Vet. Pharmacol. Toxicol. Proc. 1st Eur. Congr. Zeist (1979) Amsterdam. - 1980. - V.23. -N 4. - P.927-939.

305. Mutiga E.R., Baker A.A. Superovulation of sheep using follicle stimulating hormone and prostaglandin F // Theriogenology. 1982. — V. 11. - N 1. - P. 104.

306. Nagaze H., Niva T. Deep-freezing bull semen in concentrated pellet form. I. Factors effecting survival of spermatozoa // Vth Cong. Intern. Per la reproduzione animale e la fecondazione artficialle. — Trento. — 1964. — P.440.

307. Nakanoto R., Akahori T., Katayama K., Tojo S. Binding of LH and FSH to porcine granulöse cells during follicular maturation // J. Reprod. Fert. — 1977. — V.51. -P.23-27.

308. Nash T. How temperature changes affects rams // Sheep Breeder and Sheepman Magazine. 1984. - 104. - N 5. - P.262-266.

309. Nelson L.D., Bowen R.A., Homan N.R., Seidel G.E. Seminal treatments for superovulated heifers // Proc. 89th Ann. Res. Conf. Colorado State Univ. Abstr. -1976.-P. 109.

310. Newcomb R., Rowson L.E.A. Tpounson A.O. The eatery of superovulated eggs into the uterus. // Egg transfer in cattle ed. L.E.A. Rowson. / Commission of the European Communities EUR. — 1976. Luxembourg. - P. 1-15.

311. Niskovic M. Changes in serum GH following injection of hypothalamic extract in sheep // J. Anim. Sei. 1972. - V. 29. - P. 195.

312. Niswender G.D., Schwall R.H., Fits T.A., e. a. // Recent Progr. Horm. Res. — 1985. — V. 41. —№ 1.-p.101-151.

313. Novotny S. Ucinek vysokyck teplot na spermiogenesi plemennyck byku // Nas. Chov. 1958. - N 13. - P.104-108.

314. Nowak R., Rodway R.G. Length if melatonin exposure and onset of ovarian activity in anoestrus ewes // J. Reprod. and Fertil. 1987. - V.80. — N1. - P. 343347.

315. O'Dell N., Almquist J., March L. Freezing bovine semen. III. Effect of freezing rate on bovine spermatozoa frozen and stored at —79 °C // J. Dairy. Sei. -1958. V. 41. - N 1. - P. 340-345.

316. O'Shea T. Metabolism of semen after freezing. I. Effects of washing, skim milk solids and potassium and magnesium on the metabolism of thawed ram and bull spermatozoa // Austral. J. Biol. Sei. 1969. - V.22. - N 3. - P.212-214.

317. Ojeda S.R., Jemeson H.E., McCulm S.M. Hypothalamic areas in prostaglandin induced gonadotrophin release // Endocrinology. — 1977. — V.100. -P.1585-1595.

318. Ortavant R. Influence de la duree d'ecloiremen et de la temperature sur la Spermatogenese des animaux domestidues // Meded. Veeartsenijscholl Rijksuniv Gent.-1966.-V. 10. — N 2/ P.47-56/

319. Oxender W D , Naden P.A., Louis T.M. A review of prostaglandin F2« for ovulation control in cows and sheep // Amer. J.Vet. Res. 1974. - V. 35. - N 7. -P.997-1001.

320. Philippo M., Kowson L.E.A. Embryo transfers in sheep // Ann. Biol. Anim., biochim. biophys. 1975. - V. 15. - N2. - P. 233-240.

321. Phillippo M., Rowson L.E.A. Prostaglandins and superovulation in the bovine. // Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys. 1975 - 15. - P. 223-240.

322. Pincus G. Observations on the development of cow ova in vivo and in vitro // Proc. Natur. Egg transfer and breeders conf. San Antario, Texas. 1949. - N1. -P. 18.

323. Poldge C.H., Rowson G.E.A. Fertilizing capacity of bull spermatozoa after freezing at -79 °C // Nature. London. - 1952. - V. 169. - N 4302. - P.626-627.

324. Powell W.L., Hammerstrom S., Samuelson B., Sjoberg B. Prostaglandin F2a receptor in human corpora lutea // Lancet. 1974. - V. 1. - P. 120.

325. Quin P.I., White J.G., Cleland K.W. Chemical and ultra structure change in ram spermatozoa after washing, cold, shock and freezing // J. of Reprod. And Fertil. 1969. — V. 18. - N 2. - P.209-220.

326. Quinliran T.D., Robinson T.S. Numbers of spermatozoa in the genital tract after artificial insemination of ptogestagen treated ewes // J. Reprod. Fert. — 1969.-V. 19.-P. 73-76.

327. Rhodes A. Semen collection and evaluation // Current therapy in therio-genology. 1980. - N 4. -P.944-947.

328. Roberts E.M. The use of intravaginals pongees impregnated with 6-methyl-17-acetoxyprogesterone (MAP) to synchronies ovarian activity in cyclic ewes // Proc. Austral. Soc. Anim. Product. 1966. - N 6.

329. Robinson T.J. Fertility of anoestrous ewes following injection of progesterone and pregnant mare serum (PMS) // Austral. J. Agr. — 1956. — V. 7. —N3.

330. Robinson T. J. Synchronization of oestrus by intra vaginal and subcutane-^ ous application of projecting impregnated sponges // Proc. Austral. Soc. Anim. Product. 1964.-N 5.

331. Rosenfeld M.G., Joshi M.S. Possible role of specihe fluid peptilase in implantation in the rat // J. Rtprod. Fert. 1977. - 51. - P. 137-139.

332. Rowson L E.A., Fervit Q., Brand A. Synchronization of oestrus en cattle by means of prostaglandin F2a H Proc. 7-the Intern. Congr. Anim. Reprod. A. J.Mynich. 1972. - N2. - P.865-869.

333. Rowson L. Cattle twins from egg transplants. N.Z.J. Agric. 1972. — V.124. -Nl. -P.20.

334. Rowson L.E. The storage of bull semen at low temperature // Vet. Res.1953.-N65.-P. 35.

335. Rowson L.E.A. Egg transfer in cattle // Seminar CEC Luxemburg, EUR / 5491.-1976.-P. 393-395.

336. Rowson L.E.A. Methods of inducing multiple ovulation in sheep // J. Endocrinol. 1957. -N 7. - P. 260-270. ^ 344. Rowson L.E.A., Lawson R.A.S., Moor R.M. Twinning in cattle. // Theveter. Rec. — 1976. V. 85.-N21 - P. 583-584.

337. Rowson L.E.A., Moor R.M. Non-surgical transfer of cow eggs. // J. Re-prod. Fértil.- 1966.-N 11.-P. 311-312.

338. Sacala J. Wplyv frekkencie adbern spermy od dykov na jas kvalility // Polnozhospodarstvo. 1961. - V. 8. - N 1. - S. 40-43.

339. Sahni K.L., Tiward S.B. The effect of two ejaculation frequencies of the semen characteristics and rambouillet rams at different seasons // Indian Vet. J. — 1975. V. 52. - N 6. - P. 421-425.

340. Salamon S. Artificial insemination of sheep // University of Sydney. — N.S.W. 1976. - 2006. - P. 104.

341. Salamon S. Deep freezing of ram semen: recovery of spermatozoa after pelleting and comparison with other methods freezing // Austral. J. Biol. Sci. — 168. — V. 21. -N 2. — P.481-486.

342. Salamon S. Fertility following deposition of equal numbers of frozen-^ thawed ram spermatozoa by single and double insemination // Austr. J of Agrie. Res.- 1977. V.28. - N 3 - P. 108-115.

343. Salamon S. Observation on fertility of ram semen frozen by different methods // Austral. J. Exp. Agrie. And Anim. Husb. 1967. - N 7. - P.29.

344. Salamon S. Studies on the A.I. of merino sheep. The effect of frequent ejaculation on semen characteristics and fertility capacity // Austr. Agrie. Res. — 1962. — V. 13.-N6.-P. 1137-1150.

345. Salamon S., Lightfoot R. Fertility of ram spermatozoa frozen by the pelletmethod. III. The effect of insemination technique, oxitocin and lambing // J. Reprod.

346. Fértil. 1970.-N22.-p. 114-116. m>

347. Salamon S., Lightfoot R. fertilization and embryonic loss in sheep after insemination with deep frozen semen // Nature. 1967. - V. 216. - N 5111. — P. 194195.

348. Salamon S., Visser D. Effect of composition of trisbaseol diluents and of thawing solution on survival of ram spermatozoa frozen by the pellet method // Austral. J. Biol. Sei. 1972. - V. 25. - N3. - P. 215-220.

349. Sapford C.S. Seasonal changes in spermatogenesis in rams: Their relation to plane of nutrition and to vitamin A status // Austr. J of Agric. Res. — 1951. V. 2. -N 3. -P. 331-341.

350. Scaulon P., Sreenan J., Gordon J. Hormonal induction of superovulation in sheep // J. Agric. Sei. Camb. 1968. - N 70. - P. 179.

351. Schiewe M.C., Bush M., Stuart L.S., Wildt D.E. Laparoscopic embryo transfer in domestic Sheep: Preliminary study // Theriogenology. 1986. — V. 22. -P. 675-682.

352. Schinler H. Seasonal fluctuations in fertility and other characteristics of bull semen used for artificial insemination in Israel // Bull. Res. Conncil. Israel. — 1964.-V. 4.-N2.

353. Seasonal changes in the semen of rams / Cupps P.T., McGowan B., Rahlmann D.E. e. a. // J. of Anim. Sei. 1960. - V. 19. - N 1. - P.208-213.

354. Shally A.V., Arimura A., Kastin A.J. et.al. Gonadotrophinrelising hormone: one polypeptide regulated secretion of luteinizing and follicle stimulating hormone // Science. - 1971. - V. 173. - P.1036-1037.

355. Shandaker B.D., Lnstra D.D. Seasonal changes in sexual activity and serum levels of LH and testosterone in Finnish Landrace and Suffolk rams // J. Anim. Sei. 1976. - V. 43. - N 4. - P.644-650.

356. Sharp P.T., Fräser H.M. Control of reproduction / The endocrine hypothalamus. Ed. S.L. Seffcoate , S.S.M. Hatchin son, London: Asad, press. — 1978. -P. 271-332.

357. Shea B.T., Hines D.J., Lightaat D.E., Oilis G.W., Olson S.U. The transfer of bovine embryos in egg transfer in cattle. Ed. L.E.A. Rowson. Commission of the European Commission Luxemburg, EUR. 1976. - 5491. - P. 145-152.

358. Shelton J.H. An assessment of never progestins for control of oestrus and ovulation in the ewe // Proc. Austral. Soc. Anim. Product. -1964. V.5.

359. Shukla D.D., Bhattachaiya P. Seasonal variation in reaction-time and semen quality of sheep // Indian J. Veter. Sci. and Anim. Husb. 1952. - V. 22. - Past 2.-P. 109-122.

360. Siedel J. E., Siedel S.M. Embryo transfer costs and success rates // Ad-vanc, Anim. breeder. 1978. -N 1. -P.6-10.

361. Smith A.U. Biological effect of freezing and super cooling // London,1961.

362. Smith J.T., Allisson A., Use of progestagen impregnated sponges inserted intravaginally or subcutaneously for the control of oestrus cycle in the sheep. // Nature. 1971. - V. 206. - P. 4979.

363. Smorag L., Kareta V. Semen quality of Ramboullet rams and their crosses (with native) during hotter part of the years // Indian Veter. T. 1975. - V. 52. — N 8. -P.614-619.

364. Sreenan J.M. Successful non surgical transfer of fertilized cow eggs // Veter. Rec. - 1975. - V.96. -N 22. - P. 490-491.

365. Stewart T., Alien W.R., Moor R.M. Pregnant mare serum gonadotropin, ratio of follicle stimulating hormone and luteinizing hormone activities measured by radioreceptor assay // J. Endocrinol. 1976. - 71. - P. 371-382.

366. Sugie T., Soma T., Tsunoda J., Mizouchi K. Embiyo transfer in goat and sheep //Arch. Androl. 1980. - V. 5.-N 1.-P. 107.

367. Swanson L.W., Hafe A.D. LH and prolactin in blood serum from oestrus to ovulation in Holstein heifers // J. Ani. i. Sci. 1971. - V. 33. - P. 1038-1041.

368. Tarkowski A.K. An air abrying method for chromosome preparation from mouse eggs //Cytogenetics. - 1966. - N 5. - P. 394-400.

369. Thimonier J., Palet J., Chupin D, Egg transfer in cattle. Seminar CEC Luxemburg, FHR. 5491. - 1976. - P. 279-291.

370. Tramanmi G., Prandi A., Bracchessi D. Effect of melatonin treatment on the onset of ovarian activity reproductive parameters and PRL plasma levels of immature ewes // Anim. Reprod. Sc. 1987. - V. 13. - N 4. - P. 283-290.

371. Trounson A.O., Moor N,W. Fertilization in the ewe following multiple ovulation and uterine insemination // Aust. J. Biol. Sci. 1974. - V.27. - P. 301-309.

372. Trounson A.O., Rowson L.E.A. Research on embryo transfer in domestic animals // J.R. Agric. Soc. England. 1976. - V. 137. - P. 77-85.

373. Tully D., Burfening P. Libido and scrotal circumference of rams as affected by seasonal of the year and offered photoperiod // Theriogenology. — 1983. — V. 20.-N4.-P. 435-448.

374. Turgeon J., Barraclough C.A. Temporal patterns of LH release following grates preoptic electrochemical stimulation in proestrus rats // Endocrinology,/ 1973, vol. 92, p, 755-761.

375. Turman E.J„ Laster D.B., Renbarger R.E., Stephens D.E. Multiple sirths in beef cows treated with equine gonadotrophin (PMS) and chorionic gonadotrophin (HGG) // J. Anim. Sci. 1971. - V.32. - P. 962-967.

376. Wierzchal E., Smorag Z. Superovulatia u bydta owice przy uzyciu prepa-ratu serogonadotrophin // Med. Wet. / 1978,34. N 11, P.653-655.

377. Wagner J.E., Reinoke E.F., Nellor J.E., Henneman H,A. Hormonal control of reproductive activity in the cycling and anoestrous ewe. // J. Anim. Sci. — 1960. — V.19.-P.2.

378. Walker S.K., Wames G.M., Quinn P., Seamark R.F., Smith D.H. Laporo-scopic techniques for the transfer of embryos in sheep // Aust. Vet. J. 1985. —V.62. -P.105-106.

379. Warren W.R., Bercovits A., Kreider Y., Godgke R. Induction of estrus and superovulation in ewes // Theriogenology. -1975. — V.14. — N 1. P, 74.

380. Warvick B.I., Barry R.O. Proc. 1st. Nat. Egg Transfer Breed Conf. San Antonio, Texas, /1934, p. 225-227.

381. Watson P. Use of a Giemsa stain to defect changes in acrosomes of frozen ram spermatozoa//Veter. Res.- 1975.- V. 97.-N 1.-P.12-15.

382. White I.G., Blackshaw A.W., Emenes C.W. Metabolic and motility studies relating to the low temperature storage of ram and bull spermatozoa // The Austral. Veter. J. 1954. - V. 30. - N 4. - P.85-94.

383. Wiener G. Slee J.V. Maternal and genetic influences on follicle and fleece development in Lincouln and Welsh Mountain sheep a study involving, egg transfer. // J. Animal Production. 1965. - V. 7. - N 3. - P. 78.

384. Wiggin H., Almquist I. Effect of glycerol equilibration time and thawing rate upon acrosomal maintenance and motility of bull spermatozoa frozen in plastic straws //J. Anim. Sei. 1975. -V. 40. -N 2. - P. 302-305.

385. Willadsen S.M., Polge C., Rowson S., Moor R // J. Reprod. and Fert. -1976.-46.-N1.-P. 151-154.

386. Wishart D.F. Egg transfer in cattle, seminar CEC Luxemburg EUR. — 1976.-5491.-P. 267-278.

387. Wisser D., Salamon S. Fertility following insemination with deep frozen-thawed ram reconcentrated and unconcentrated ram semen // Austral. J. Biol. Sei. -1974. V. 2. - N 4. - P. 423-425.

388. Yeates N.T.M. Influence of variation in length of the day upon the breeding season in sheep. // Nature -1947. V. 160. - N 4065. - P. 429-430.

389. Zolman J., Convey E.M., Britt J.H. Relationsheep between the luteinising hormone response to gonadotrophin releasing hormone and endogenous steroids //J. Anim. Sei. 1974. - V. 39. - P. 355-359.

390. Zondec B., Aschheim S. Hypophys vorderlappen und Ovarium Baziehun-gen der endokrinen Drusen zur Ovarialfunction // Arch, gynukol. — 1927. — Bd. 130. -N l.-S. 27-45.

391. СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК

392. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО'ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГОСУДАРСТВЕННОМ КОМИТЕТЕ СССР Пб НАУКЕ И ТЕХНИКЕ (Г0СК0МИ30БРБТЕН И Й )

393. На основании полномочий, предоставленных Правительством СССР,

394. Госкомизобретений выдал настоящее авторское свидетельствона изобретение:

395. Среда дои разбавления спермы баранов"

396. Автор (авторы): Магомет %ссаевич и друше,указанные в описании1. Заявитель:1. Заявка Кг

397. ИНСТИТУТ Ш ПОВЕРЖЮТИ АН УССР4702977 Приоритет изобретения 18 апреля ХЭБЭ^

398. Зарегистрировано в Государственном реестре • изобретений СССР15 апреля 1932г. Действие авторского свидетельства распространяется на всю территорию Союза ССР.1. Председатель Комитета1. Начальник отделаж