Технология производства препарата Фузобаквелт и его применение при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец

Спиридонов, Андрей Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Технология производства препарата Фузобаквелт и его применение при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Технология производства препарата Фузобаквелт и его применение при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец"

□03484473 На правах рукописи

СПИРИДОНОВ Андрей Владимирович

Технология производства препарата Фузобаквелт и его применение при некро бактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец

03.00.23 - биотехнология

2 6 НОЯ 2009

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2009

003484473

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Грязнева Татьяна Николаевна.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Мирзаев Микаиль Нурбагандович; доктор ветеринарных наук Панасюк Сергей Дмитриевич.

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии»

Защита диссертации состоится «/Г >>Фмса£рЯ 200У г. в «/У» часов на заседании диссертационного совета Д.220.042.01 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23. тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан « /У » МОсЯ^рА 200^1

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В перспективных планах развития экономики РФ предусмотрено увеличение мясо-молочной продукции в целях более полного удовлетворения населения в качественных продуктах питания.

Для этого предусматривается создание прочной кормовой базы животноводства, разработка и внедрение системы профилактических мероприятий по снижению ущерба от болезней и падежа животных при различных болезнях.

К заболеваниям, приносящим значительный экономический ущерб сельскому хозяйству страны, относятся некробактериоз (фузобактериоз) крупного рогатого скота и копытная гниль овец (Караваев Ю.Д., 2006; Сидорчук А.А., 2008).

Для профилактики и лечения животных, больных некробактериозом и копытной гнилью, предложено большое количество средств и методов, однако наблюдающееся в последние годы все более широкое распространение болезней конечностей свидетельствует о недостаточной эффективности специфических профилактических препаратов и терапевтических средств (Кононов А.Н., 2001; Панасюк С.Д., 2005; Лопатин C.B., 2006).

Поэтому разработка новых эффективных и экологически безопасных лекарственных препаратов для лечения больных некробактериозом и копытной гнилью животных является актуальной задачей для ветеринарии и экономики РФ.

Цель и задачи исследований.

Цель настоящих исследований - разработать технологию производства препарата Фузобаквелт и оценить его терапевтическую эффективность при некро-бактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изыскать компоненты, перспективные для включения в состав терапевтического препарата против некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

2. Сконструировать опытные образцы препарата Фузобаквелт и определить их антибактериальные свойства in vitro.

3. Изучить физико-химические свойства и безвредность препарата.

4. Определить терапевтическую эффективность препарата Фузобаквелт при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

5. Разработать технологию производства препарата Фузобаквелт и методы его контроля.

6. Определить экономическую эффективность препарата Фузобаквелт в сравнительном аспекте.

7. Разработать комплект нормативной документации на препарат Фузобаквелт и зарегистрировать его на территории РФ.

Научная новизна. Впервые, для ветеринарной практики предложено лекарственное средство Фузобаквелт на основе клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом (запатентованная отечественная субстанция «Велтон») для лечения некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

Доказано, что субстанция Велтон может быть использована в качестве основы лечебно-профилактических препаратов для наружного применения при инфекционных болезнях конечностей крупного и мелкого рогатого скота.

Разработана технология промышленного производства препарата Фузобаквелт с использованием отечественного сырья и оборудования. Срок хранения препарата составляет не менее 24 мес.

Усовершенствован метод определения в сложных смесях клатрата четвертичного аммониевого соединения с карбамидом способом двухфазного титрования с помощью анионного стандартного раствора (додецилсульфат натрия) в щелочной среде в присутствии индикатора метиленового синего.

Установлено, что препарат Фузобаквелт безвреден для животных и не обладает сенсибилизирующими и кумулятивными свойствами.

Препарат Фузобаквелт обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, в т.ч. спорообразующих бактерий и кандид. Препарат активен против возбудителей некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

Доказано, что терапевтическая эффективность Фузобаквелта при некробак-териозе крупного рогатого скота составляет 93,3%, а при копытной гнили овец -100% при наружном применении препарата 1 раз в день в течение 10 сут. или при использовании средства в виде ножных ванн.

Практическая значимость. Для применения в ветеринарии в качестве лекарственного средства при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец предложен высокоэффективный, безвредный препарат Фузобак-

велт, который прошел производственные испытания в животноводческих хозяйствах РФ.

В опытах на лабораторных животных, крупном рогатом скоте и овцах изучен механизм действия препарата Фузобаквелт, дана оценка его влияния на организм животных при использовании при некробактериозе и копытной гнили, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской, Брянской и Нижегородской областей.

На базе ООО «НПО «ВЕЛТ» (г. Оренбург) создана технологическая линия и организовано серийное производство лекарственного средства Фузобаквелт. Получено 3 серии препарата, отвечающие требованиям СТО.

Результаты исследований включены в СТО 71954720-0003-2009 на лекарственное средство Фузобаквелт, утвержденное в установленном порядке 29.04.2009 г.

Разработана и утверждена 29.04.2009 г. инструкция по применению Фузоба-квелта для лечения и профилактики некробактериоза крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец.

Препарат Фузобаквелт зарегистрирован на территории РФ (Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных № ПВР-2-11.8/02362 от 29.04.2009 г).

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ при изучении студентами и слушателями ФПК дисциплин «Ветеринарная микробиология», «Микробиология и иммунология», «Санитарная микробиология».

Личный вклад соискателя. Автору принадлежит непосредственное участие в разработке технологии производства Фузобаквелта, определении антимикробной активности препарата в отношении тест-штаммов разных видов микроорганизмов, испытании терапевтической эффективности Фузобаквелта в хозяйствах Московской области, разработке нормативной документации и методов стандартизации препарата, анализе и обобщении полученных результатов.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с директором НИИ биоцидов и нанобиотехнологий Ивановой Е.Б., которой выражаю глубокую благодарность за помощь и поддержку.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований

изложены в 2 научных отчетах и доложены на XV Московском международном ветеринарном конгрессе, на секции «Болезни крупного рогатого скота» (Москва, 2008); на V международном симпозиуме «ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, рыбного хозяйства и пищи» в 7 Рамочной Программе» (г. Пущино, 2008); на международной конференции «Наука и образование для целей биобезопасности» (г. Пущино, 2008); на международной научно-практической конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения» (г. Дубровицы, 2008), на международной ветеринарной конференции «Балтийский Форум» (Санкт-Петербург, 2009), на IV Фестивале науки (Москва, 2009).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 7 статей, в т.ч. 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 175 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, практическое использование полученных научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (135 источников, в т.ч. 42 - иностранных авторов). Работа содержит 37 таблиц, 24 рисунка, 10 страниц приложений.

На защиту вносятся следующие положения и результаты:

1. Компонентный состав препарата Фузобаквелт.

2. Технология приготовления препарата Фузобаквелт.

3. Результаты изучения терапевтической эффективности препарата Фузобаквелт при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа была выполнена в 2006-2009 г.г. на кафедрах микробиологии и биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ и в хозяйствах Московской (ООО «Племза-вод Коммунарка» Ленинского района, ОАО «Вохринка» Раменского района, ООО «Авдеевское» Зарайского района, ООО «Татищеве» Нарофоминского района, ООО «Совхоз «Головково» Нарофоминского района), Брянской (СХПК «Верещаки», Новозыбковского района), Нижегородской (Канавинская СББЖ) областей. Ряд исследований были проведены в НПО «Велт» (г. Оренбург) и

НИИ биоцидов и нанобиотехнологий (г. Москва).

Антимикробную активность препарата Фузобаквелт in vitro изучали с использованием культур тест-штаммов микроорганизмов E.coli 1257, S.aureus 209, P.aerugi-nosa 1544, C.albicans 690, B.cereus 96. В процессе проведения исследований использовали выделенные от больных животных F.necrophorum.

Для приготовления Фузобаквелта применяли субстанцию Велтон - ООО «НПО «Велт», медный купорос - ГОСТ 19347, деготь березовый - ТУ 9144-00500333546-98, изопропиловый спирт - ГОСТ 9805 и др.

При промышленном производстве Фузобаквелта для смешивания компонентов использовали гомогенизатор УПЭС с объемом рабочей емкости 300 дм3.

Для определения безвредности, антимикробной активности in vivo и терапевтической эффективности Фузобаквелта было использовано 115 белых мышей, 20 белых крыс, 10 морских свинок, 6 кроликов, 260 голов крупного рогатого скота, 48 овец. Всего было исследовано 116 проб патологического материала от больных животных. Выделено и изучено 18 культур F.necrophorum, 600 проб молока, 5 проб мяса крупного рогатого скота и 10 проб мяса овец.

Исследования проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2002).

Остаточные количества препарата в мясе и молоке определяли согласно «Методам контроля химических веществ в объектах окружающей среды, воздухе рабочей зоны и пищевых продуктах» (2004).

Лечебно-профилактическую эффективность Фузобаквелта оценивали в соответствии с методическими рекомендациями «Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупного рогатого скота» (2000); методическими рекомендациями по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец (2004) и др.

Экспериментальные данные обрабатывали методом статистического анализа с использованием компьютерной программы «Statistica 6,0».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изыскание компонентов, перспективных для включения в состав терапевтического препарата против некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец

Проведя исследования по изучению бактерицидных свойств различных веществ и взяв на вооружение опыт практикующих ветеринарных врачей небла-

гополучных по некробактериозу хозяйств Московской области, мы остановились на трех субстанциях, перспективных для включения в состав терапевтического препарата против некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец - клатрат дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом (субстанция Велтон), деготь березовый и медный купорос.

Субстанция Велтон - запатентованная отечественная основа биоцидов, производимых НПО «Велт» (г. Оренбург), обладает антимикробной активностью в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, включая возбудителей туберкулеза, сибирской язвы и клостридиозов; споровых форм бактерий; вирусов; патогенных микроскопических грибов.

Деготь березовый содержит фенол, толуол, ксилол, смолы и другие вещест-. ва, оказывающие дезинфицирующее, местнораздражающее действие, ускоряет процессы ороговения.

Медный купорос является антибактериальным средством и применяется во многих хозяйствах, неблагополучных по некробактериозу, с профилактической целью в виде ножных ванн.

Таким образом, основным действующим веществом лечебного препарата Фузобаквелт была определена антимикробная субстанция Велтон, а в качестве вспомогательных веществ - деготь березовый, необходимый для улучшения кровообращения в пораженной конечности, и медный купорос, как антисептик и подкислитель среды.

Приготовление опытных образцов препарата Фузобаквелт

Перед тем, как приступить к конструированию Фузобаквелта, была определена бактерицидная активность трех компонентов препарата - субстанции Велтон, дегтя березового и медного купороса к возбудителю некробактериоза крупного рогатого скота КпесгорИогит, выделенного от больных коров.

Для этого были подготовлены бумажные диски, которые пропитывали субстанцией Велтон в концентрациях по действующему веществу от 1 до 20%, а также дегтем березовым и растворами медного купороса (1-10% концентрации).

На кровяной агар сплошным газоном засевали Р.песгорЬогат и накладывали на среду диски. Культуру фузобактерий выращивали в анаэробных условиях при 37°С в течение 2 сут. и определяли зоны отсутствия роста возбудителя.

Было установлено, что бактерицидную активность в отношении возбудителя некробактериоза проявила только субстанция Велтон. Зона отсутствия роста фузобактерий при этом составила 1,5±0,5 см. Деготь и медный купорос in vitro не подавляли рост возбудителя.

Основной задачей, стоявшей перед нами при конструировании опытных образцов Фузобаквелта, являлся оптимальный подбор объемных соотношений компонентов препарата, обладающих наивысшей антимикробной активностью в отношении F.necrophorum. Учитывали также сохранение аморфного состояния и стабильности физико-химических свойств препарата.

Было приготовлено 12 вариантов средства, из которых было отобрано 6 вариантов, обладающих устойчивыми физико-химическими свойствами. В отобранных вариантах компоненты препарата не расслаивались, аморфное состояние средства было однородным и стабильным. Наиболее выраженной бактерицидной активностью in vitro обладал вариант № 6, в присутствии которого зона отсутствия роста фузобактерий составила более 2,5 см.

На основе варианта препарата № 6 был приготовлен опытный образец Фузобаквелта, содержащий в своем составе в качестве действующего вещества субстанцию Велтон (10%), деготь березовый (10%), медный купорос (5%), спирт изопропиловый и воду дистиллированную.

Изучение физико-химических свойств препарата

Целью данных исследований являлось изучение основных физико-химических свойств Фузобаквелта, определяющих условия его применения в качестве лекарственного средства при некробактериозе и копытной гнили животных.

По внешнему виду Фузобаквелт представляет собой жидкость от темно-коричневого до черного цвета с рН 3,5±0,5, плотностью 1,030±0,02 г/см3 и коэффициентом преломления - 1,360±0,005.

Фузобаквелт не обладает коррозионным действием в отношении различных металлических поверхностей, являющихся элементами конструкций животноводческих помещений, оборудования, инвентаря по уходу за животными и др.

При нагревании Фузобаквелта от плюс 45 до плюс 100°С в водяной бане и от плюс 110 до 130°С и давлении 1,0 и 2,2 кгс/см2 агрегатное состояние препарата не изменялось. Бактерицидная активность Фузобаквелта, подвергшегося тегаю-

вой обработке в течение 30 мин. при температурах плюс 45, 50 и 65°С, в отношении E.coli 1257, S.aureus 209 и B.cereus 96, составила 100%.

При охлаждении Фузобаквелта от минус 20 до минус 50°С средство не замерзало, однако агрегатное состояние препарата изменялось. Происходило расслаивание водной и спиртовой частей Фузобаквелта, а деготь образовывал в водной части препарата не растворяемую фракцию, препятствующую ее замерзанию. При комнатной температуре препарат восстанавливал свой первоначальный вид после интенсивного встряхивания. Охлаждение препарата не влияло на его бактерицидную активность.

Определение бактерицидной активности Фузобаквелта in vitro

Для определения бактерицидных свойств Фузобаквелта использовали тест-штаммы грамположительных, грамотрицательных и спорообразующих бактерий в концентрации 2 млрд. микробных клеток в 1 мл суспензии.

Установлено, что бактерицидная активность препарата в отношении тест-штаммов микроорганизмов составила 100% при воздействии на суспензионные культуры микроорганизмов в течение 30 мин.

Для определения бактерицидной активности препарата Фузобаквелт в отношении F.necrophorum, фузобактерии культивировали в среде Китта-Тароцци в течение 48 ч. Затем суспензию засевали на МПА и в МПБ. Посевы инкубировали в анаэростате в течение 3 суток. В пробирки с 1 мл Фузобаквелта вносили по 0,2 мл 2-миллиардной взвеси суточной культуры фузобактерий. После 60-минутной экспозиции делали посев в среду Китга-Тароцци. Учет роста возбудителя проводили через 24 часа культивирования. Затем на кровяной агар сплошным газоном наносили суспензию из пробирки со средой Китта-Тароцци и через 24 часа культивирования в анаэростате при 37°С подсчитывали количество выросших колоний.

Было установлено, что препарат Фузобаквелт проявляет бактерицидную активность in vitro в отношении возбудителя некробактериоза крупного рогатого скота. Полученные данные позволяют рассматривать Фузобаквелт, как эффективное антибактериальное средство против широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, в т.ч. спорообразующих бактерий, эше-рихий, стафилококков, кандид, а также Fusobacterium necrophorum.

Определение острой и хронической токсичности Фузобаквелта

Острую и хроническую токсичность лекарственного средства Фузобаквелт изучали на лабораторных (белые мыши, белые крысы, морские свинки, кролики) и на сельскохозяйственных (телята, овцы) животных.

Согласно «Классификации опасности веществ по степени воздействия на организм» (ГОСТ 12.1.007-76), по параметрам острой токсичности при введении в желудок, при нанесении на конъюнктиву и роговицу глаз Фузобаквелт был отнесен к 3 классу умеренно опасных веществ, а при ингаляционном воздействии, нанесении на поврежденную и неповрежденную кожу - к 4 классу малоопасных веществ. Величина ЛД5о препарата для белых мышей составила 2000±50 мг/кг.

Препарат не проявлял сенсибилизирующего, кожно-резорбтивного и кумулятивного действия, не влиял на морфологический состав крови животных, не вызывал аллергических реакций и изменений антитоксической функции печени.

Таблица 1. Влияние Фузобаквелта на показатели крови телят

Показатель Срок наблюдения

до опыта 1 сут. 5 сут. 10 сут.

Нв, г/л 112,1+8,8 112,8+6,9 110,1 +6,6 111,2+9,5

Эритроциты, 10|2/л 7,47+0,6 7,5+0,5 7,04+0,4 7,01+0,4

Лейкоциты, 10у/л 6,12+0,5 6,10+0,3 6,15+0,4 6,28+0,3

Белок, г/л 72,6+6,0 73,0+6,6 70,4+6,8 71,8+6,9

Глюкоза, ммоль/л 4,50+0,05 4,60+0,06 4,50+0,03 4,62+0,04

Лактатдегидрогеназа, МЕ 209+10,5 210+8,6 210+12,2 212+12,5

Малатдегидрогеназа, МЕ 29,1+6,2 29,6+4,2 27,4+6,6 30,1+5,2

Как видно из данных таблицы № 1, гематологические и биохимические показатели крови телят до опыта и во все дни исследований практически не различались.

Таким образом, обработка лабораторных и сельскохозяйственных животных препаратом Фузобаквелт не оказывает острого и хронического действия на организм животных.

Изучение ранозаживляющего действия препарата Фузобаквелт

Исследования по изучению ранозаживляющего действия Фузобаквелта проводили на 9 кроликах и 9 телятах в возрасте 6 месяцев. Животных разделили на 3 группы по 3 головы в каждой.

Кроликам в области ягодичной мышцы делали разрез глубиной 0,5-0,8 см. Диаметр раны составлял около 3 см. Через 24 ч после нанесения разрезов смазывали раны Фузобаквелтом, кроликов 2 группы обрабатывали мазью Вишневского, животных 3 группы обрабатывали 5%-ным раствором йода.

Телятам в области крупа делали вырезы кожи, подкожной фасции с повреждением ягодичных мышц диаметром 5-7 см и глубиной до 1,5 см. Обработку препаратами проводили 1 раз в 3-4 дня в течение 20 дней.

Изучали процесс эпителизации ран, и скорость уменьшения площади раны. Результаты учитывали на 1, 7,14,21,28 и 33 дни исследований (табл. 2,3).

Таблица 2. Заживление ран у кроликов при обработке их различными препаратами (в % от первоначального)

День исследований Фузобаквелт Мазь Вишневского Настойка йода

1 100 100 100

7 76 81 85

14 42 56 60

21 7 25 30

28 0 5 10

У кроликов, обработанных Фузобаквелтом, к 23 дню исследований раны заживали с полным отторжением струпа. Эпителизация ран у кроликов, обработанных мазью Вишневского, завершалась к 35-му дню, а у обработанных йодом - к 40 дню исследований.

Таблица 3. Динамика заживления ран у телят (в % от первоначального)

Препарат Дни после нанесения на рану

1 7 14 21 28 33

Фузобаквелт 100 77 54 18 0 Полная эпителизация

Мазь Вишневского 100 83 63 26 11 Полная эпителизация

Контроль 100 87 69 38 15 0,9

Площадь ран у телят, обработанных Фузобаквелтом, через 14 дней уменьшилась на 54%. У животных, обработанных мазью Вишневского, процесс заживления протекал медленнее, площадь ран к 14-му дню составила 63% от первоначальной, в контрольной группе - 69%.

Таким образом, Фузобаквелт обладает ранозаживляющими (репаративными) свойствами при лечении лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Производственные испытания терапевтической эффективности препарата Фузобаквелт при лечении коров, больных некробактериозом

При производственных испытаниях терапевтической эффективности Фузо-баквелта в условиях неблагополучных по некробактериозу хозяйств были созданы опытные и контрольные группы больных животных. Коров опытной группы лечили Фузобаквелтом, нанося его на поврежденные участки кожи 1 раз в день в течение 10 сут. Коров контрольной группы лечили Террамицином в соответствии с инструкцией по применению.

Было установлено, что на 3 сут. лечения коров опытной группы, отечность кожи и подкожной клетчатки заметно уменьшались, изъязвленные участки кожи подсыхали, уменьшалось истечение из ран (рис. 1).

Рис. 1. Пораженная некробактериозом конечность коровы до лечения (а) и на 3 сутки после начала лечения Фузобаквелтом (б)

На 5 сутки применения Фузобаквелта исчезали признаки воспаления вокруг ран, мелкие язвы и ранки на коже конечностей затягивались. На 7 сутки применения препарата у коров уменьшалась хромота опирающейся конечности.

На 10 сут. с начала постановки опыта у более 90% коров опытной группы клинические признаки некробактериоза исчезали (табл. 4).

Таблица 4. Результаты производственных испытаний Фузобаквелта при некробактериозе крупного рогатого скота

№ П/'П Группа животных Кол-во животных, гол. Продолжительность лечения, сут. Выздоровело Эффективность, %

гол. %

1. Опытная 165 10 154 93,3 93,3

2. Контрольная 105 10 6 5,7 5,7

Таким образом, терапевтическая эффективность Фузобаквелта в неблагополучных по некробактериозу хозяйствах составила 93,3% при его применении ежедневно, однократно, в течение 10 сут.

Экономическая эффективность использования Фузобаквелта на рубль затрат составила 123,4 руб, что в 13 раз выше, чем при использовании террамицина.

Терапевтическая эффективность препарата Фузобаквелт при некробактериозе и копытной гнили овец

Было исследовано 48 голов овец горьковской породы разного возраста. У животных отмечалось поражение в основном передних конечностей, проявляющееся гнойным воспалением кожи свода межкопытной щели.

В результате проведенных исследований было установлено, что у всех 48 больных овец конечности поражены возбудителем копытной гнили. У 15 овец был также выделен возбудитель некробактериоза Р.песгорЬогиш и 8.аигеиз.

Фузобаквелт применяли в виде ножных ванн 1 раз в день в течение 7 сут. Овец ежедневно, однократно ставили на 15 мин в металлическую емкость, наполненную препаратом, уровень верхнего мениска которого составлял 5 см.

На 5 сут. лечения у овец заметно уменьшались отечность кожи и подкожной клетчатки конечностей, изъязвленные участки кожи подсыхали, а раны затягивались. На 7 сутки применения препарата у овец исчезала хромота опирающейся конечности, признаки некробактериоза и копытной гнили полностью исчезали. Все овцы выздоравливали.

Таким образом, при лечении овец, пораженных некробактериозом и копытной гнилью, терапевтическая эффективность применения Фузобаквелта составила 100%.

Исследование молока и мяса животных, леченных Фузобаквелтом, на наличие компонентов препарата и определение сроков ожидания для молочной и мясной продукции после применения средства

В молоке и мясе леченных Фузобаквелтом животных определяли фенольные субстанции дегтя, используя качественный метод, основанный на взаимодействии водного раствора фенола с бромом с образованием кристаллического осадка трибромфенола в форме игл или пучков из игл.

Были созданы 2 группы коров - опытная (20 гол.) и контрольная (10 гол.).

Опытную группу больных некробактериозом коров лечили Фузобаквелтом в течение 10 сут. Препарат наносили животным 1 раз в день в виде аппликаций на поврежденную кожу конечностей и в межкопытцевую щель. На одну обработку коровы расходовали, в среднем, до 50 мл Фузобаквелта.

Ежедневно, в утреннее и вечернее доение, от коров опытной и контрольной групп отбирали по 200 мл проб молока и проводили исследования.

Ни в одной исследуемой пробе молока осадка трибромфенола в смеси с бромистым трибромфенолом не было обнаружено, что свидетельствует о том, что компоненты дегтя при лечении коров Фузобаквелтом в молоко не попадают.

При органолептическом исследования 15 проб мяса, полученного от 1 коровы и 2 овец, которых лечили Фузобаквелтом, а также мясного бульона посторонние запахи не были выявлены, следы фенольной субстанции не обнаружены.

Таким образом, сроки ожидания для молочной и мясной продукции после применения крупному рогатому скоту и овцам Фузобаквелта, отсутствуют и молоко, говядину и баранину можно использовать без ограничений.

Технология промышленного производства препарата Фузобаквелт и методы его контроля

На базе ООО «НПО «Велт» (г. Оренбург) было организовано серийное производство лекарственного препарата Фузобаквелт и разработаны методы контроля качества средства.

Для промышленного производства Фузобаквелта используют субстанцию Велтон - 10%; деготь березовый - 10%; медный купорос - 5%; изопропиловый спирт - 20%; вода дистиллированная.

Технологический цикл производства Фузобаквелта включает следующие стадии (рис. 2): I - внесение дегтя в гомогенизатор; II - приготовление спиртового раствора субстанции Велтон; III - растворение медного купороса в спиртовом растворе субстанции Велтон; IV - внесение смеси медного купороса и спиртового раствора субстанции Велтон в гомогенизатор; V - перемешивание при 500 об/мин и 3-кратная циклическая гомогенизация смеси с интервалом 3 часа; VI - фасовка; VII - маркировка; VIII - контроль качества.

Контроль качества Фузобаквелта осуществляют по таким параметрам, как внешний вид, цвет, запах, концентрация водородных ионов, плотность, коэффициент преломления, массовая доля субстанции Велтон, массовая доля дегтя.

Рис. 2. Технологическая схема производства препарата Фузобаквелт

1 - деготь березовый; 2 - изопропиловый спирт; 3 - субстанция Велтон; 4 - медный купорос;

5 - гомогенизатор УПЭС; 6 - внешний вид, цвет, запах; 7 - плотность; 8 - коэффициент

преломления; 9 - рН; 10 - массовая доля субстанции Велтон; 11 - массовая доля дегтя.

На базе ООО «НПО «Велт» было изготовлено 3 серии Фузобаквелта, которые были представлены для предрегистрационных испытаний в ФГУ ВГНКИ и препарат был зарегистрирован для применения на территории РФ.

Изучение стабильности физико-химических свойств Фузобаквелта

при хранении

Стабильность свойств Фузобаквелта при хранении определяли по методу ускоренного старения. Испытаниям подвергались 3 серии образцов Фузобаквелта, которые хранили при температуре 50°С в течение 305 суток, что соответствует 28 месяцам хранения средства при 20°С (2 года и 4 месяцам). Образцы Фузобаквелта анализировали по всем контролируемым показателям каждые 2 месяца.

Было установлено, что при хранении средства в течение 28 месяцев все показатели качества препарата сохранялись в пределах нормы, регламентированной в СТО 71954720-0003-2008.

выводы

1. Новое лекарственное средство Фузобаквелт, включающее в качестве основного действующего вещества антимикробную субстанцию Велтон (10%), в качестве вспомогательных компонентов - деготь березовый (10%) и медный купорос (5%) является эффективным препаратом для наружного применения при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

2. Технологические стадии промышленного производства Фузобаквелта включают приготовление спиртового раствора субстанции Велтон, растворение в нем медного купороса, внесение в гомогенизатор марки УПЭС дегтя березового и смеси спиртового раствора субстанции Велтон с медным купоросом, перемешивание смеси при 500 об/мин с 3-кратной циклической гомогенизацией смеси с интервалом в 3 часа, фасовка препарата с помощью установки УД-2, маркировка, контроль качества.

3. По разработанной технологии промышленного производства Фузобаквелта получено 3 серии препарата, отвечающего требованиям СТО. По внешнему виду Фузобаквелт представляет собой жидкость от темно-коричневого до черного цвета с рН 3,5±0,5. Плотность Фузобаквелта составляет 1,030±0,02 г/см3, коэффициент преломления - 1,360±0,005, установленный срок годности - не менее 2 лет при температуре хранения от минус 5 до плюс 35°С. Препарат не обладает коррозионным действием в отношении различных металлических поверхностей, являющихся элементами конструкций животноводческих помещений, оборудования и инвентаря по уходу за животными.

4. По параметрам острой токсичности при введении в желудок, при нанесении на конъюнктиву и роговицу глаз Фузобаквелт относится к 3 классу умеренно опасных веществ, при нанесении на поврежденную и неповрежденную кожу и при ингаляционном воздействии относится к 4 классу малоопасных веществ и не обладает видовой чувствительностью. При длительном применении препарат не проявляет сенсибилизирующего, кожно-резорбтивного и кумулятивного действия, не влияет на морфологический состав крови животных, не вызывает аллергических реакций и изменений антитоксической функции печени. ЛД50 Фузобаквелта для белых мышей составляет 2000±50 мг/кг.

риоза Р.песгорЬогит. При использовании бумажных дисков, обработанных препаратом, зона отсутствия роста изучаемых бактерий на плотной питательной среде составила 2,6±0,5 см.

6. Фузобаквелт обладает бактерицидным, противовоспалительным и раноза-живляющим действием. У кроликов, обработанных препаратом, заживление искусственно нанесенных ран проходило по первичному натяжению и к 23 дню исследований раны заживали с полным отторжением струпа. Эпителизация ран у кроликов, обработанных мазью Вишневского, завершалась к 35-му дню, а у обработанных йодом - к 40 дню исследований. Площадь ран у телят, обработанных Фузобаквелтом, к 14 дню с начала постановки опыта уменьшалась на 54%, в контрольной группе животных - на 31%.

7. Терапевтическая эффективность Фузобаквелта при некробактериозе крупного рогатого скота составляет 93,3% при ежедневном его применении в виде аппликаций на пораженные конечности, однократно, в течение 10 сут. При лечении овец, больных некробакгериозом и копытной гнилью, терапевтическая эффективность применения препарата в виде ножных ванн 1 раз в сутки в течение 7 дней составила 100%. Компоненты препарата не накапливаются в молоке и в мясе, сроки ожидания для молочной и мясной продукции после применения средства отсутствуют и молоко, говядину и баранину можно использовать без ограничений.

8. Экономическая эффективность применения лекарственного средства Фузобаквелт при некробактериозе крупного рогатого скота составляет на рубль затрат 123,4 руб. Препарат зарегистрирован для применения на территории РФ.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. По результатам исследований составлены и утверждены 2 научных отчета: промежуточный отчет «Экспериментальные испытания безопасности и антимикробной активности препарата Фузобаквелт; заключительный отчет «Изучение терапевтической эффективности препарата «Фузобаквелт» при некробактериозе круп-ного рогатого скота».

2. Результаты исследований включены в СТО 71954720-0003-2009 на лекарственное средство Фузобаквелт.

3. Разработана и утверждена в установленном порядке 29.04.2009 г инструкции по применению Фузобаквелта для лечения и профилактики некробакте-

риоза крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец.

4. Препарат Фузобаквелт зарегистрирован на территории РФ 29.04.2009 г. (свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных № ПВР-2-11.8/02362)

5. В опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мышах, проводимых в условиях вивария кафедры микробиологии ФГОУ ВПО МГАВ-МиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами Ш-1У групп патогенности, показана безвредность и антимикробная активность препарата Фузобаквелт.

6. В опытах на крупном рогатом скоте и овцах изучен механизм действия Фу-зобаквелта при лечении животных при некробактериозе и копытной гнили, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской области (ОАО «Вохринка», Раменского района; ООО «Авдеевское», Зарайского района; ООО «Татищево», Нарофоминского района, ООО «Совхоз «Головково», Наро-фоминского района), Брянской области (СХПК «Верещаки», Новозыбковского района) и Нижегородской области (Канавинская СББЖ).

7. Результаты исследований по применению препарата Фузобаквелт используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ студентами и слушателями ФПК при изучении дисциплин «Ветеринарная микробиология», «Микробиология и иммунология», «Санитарная микробиология».

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать препарат Фузобаквелт зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лекарственного средства при некробактериозе крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец при обработке пораженных конечностей в виде аппликаций или ножных ванн 1 раз в сут., в течение 10 дней.

2. В качестве профилактического средства при некробактериозе крупного рогатого скота Фузобаквелт рекомендуется применять при обрезке копыт для однократной обработки конечностей.

3. Рекомендовать препарат Фузобаквелт ветеринарным специалистам для применения в качестве антимикробного, противовоспалительного и ранозажив-ляющего средства при поражениях конечностей животных разных видов грампо-ложительными и грамотрицательными бактериями, в т.ч. спорообразующими и кандидами.

4. Результаты исследований по изучению антимикробной активности Фузо-баквелта, а также по определению острой и хронической токсичности препарата и оценке его терапевтической эффективности при некробактериозе крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплинам «Ветеринарная микробиология», «Микробиология и иммунология» и «Санитарная микробиология» в высших учебных заведениях по специальностям 111201 «Ветеринария» и 110401 «Зоотехния».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Спиридонов A.B. Применение Велтолена для дезинфекции животнодческих помещений неблагополучного по некробактериозу хозяйства /Спиридонов A.B., Волков И.А., Грязнева Т.Н. //Ветеринарная медицина.- 2007.-№ 1.-С. 19-20.

2. Волков И.А. Оценка терапевтической эффективности препарата «Фузобак-велт» при лечении коров, больных некробактериозом /Волков И.А., Спиридонов A.B., Грязнева Т.Н. //Ветеринарная медицина.- 2007.- № 1.- С. 17.

3. Грязнева Т.Н. Результаты производственных испытаний нового эффективного нанолекарства «Фузобаквелт» /Грязнева Т.Н., Спиридонов A.B. Иванова Е.Б. //Жизнь без опасностей.- 2008.- № 2.- С. 82-84.

4. Иванова Е.Б. Применение нанолекарства «Фузобаквелт» при некробактериозе крупного рогатого скота /Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Спиридонов A.B. //Достижения науки и техники в АПК.- 2008.- № 4.- С. 40-41.

5. Иванова Е.Б. Перспективные инновационные проекты, обеспечиваю-щие биобезопасность сельскохозяйственной продукции /Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Водолажский В.А., Спиридонов A.B., Чекмарев С.А. //Наука и образование для целей биобезопасности: Сб. науч. тр.- Пущино: ИЦ «Биоресурсы и экология».-2008,- С. 49-53.

6. Спиридонов A.B. Терапевтическая эффективность Фузобаквелта при некробактериозе и копытной гнили животных /Спиридонов A.B. //Материалы Международной научно-практической конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения.- Дубровицы: ВИЖ.- 2008,- С. 438.

7. Грязнева Т.Н. Производственные испытания препарата Фузобаквелт /Грязнева Т.Н., Спиридонов A.B. Иванова Е.Б. //Научно-информационный журнал «Нанотехнологии и охрана здоровья».- 2009.- № 3 (1).- С. 40-42.

Отпечатано в ООО «Компания Спугник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 06.11.2009 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов: 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Спиридонов, Андрей Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Эпизоотическая ситуация по некробактериозу в России на современном этапе развития животноводства.

1.2. Биологические свойства возбудителя некробактериоза и молекулярные основы его патологического действия.

1.3. Средства специфической профилактики некробактериоза в России и за рубежом.

1.4. Методы и средства лечения животных при некробактериозе и их эффективность.

1.5. Применение четвертичных аммониевых соединений и их производных в качестве основы терапевтических средств для животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Изыскание компонентов, перспективных для включения в состав терапевтического препарата против некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

2.2.2. Приготовление опытных образцов препарата Фузобаквелт.

2.2.3. Изучение физико-химических свойства препарата.

2.2.4. Определение бактерицидной активности Фузобаквелта in vitro.

2.2.5. Определение острой и хронической токсичности Фузобаквелта.

2.2.6. Изучение ранозаживляющего действия препарата Фузобаквелт.

2.2.7. Производственные испытания терапевтической эффективности препарата Фузобаквелт при лечении коров, больных некробактериозом.

2.2.8. Терапевтическая эффективность препарата Фузобаквелт при некробактериозе и копытной гнили овец.

2.2.9. Исследование молока и мяса животных, леченных Фузобаквелтом, на наличие компонентов препарата и определение сроков ожидания для молочной и мясной продукции после применения средства.

2.2.10. Технология промышленного производства препарата Фузобаквелт и методы его контроля.

2.2.11. Изучение стабильности физико-химических свойств Фузобаквелта при хранении.

2.2.12. Экономическая эффективность применения препарата Фузобаквелт в сравнительном аспекте.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология производства препарата Фузобаквелт и его применение при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец"

Актуальность темы. Скотоводство является одной из важнейших отраслей сельского хозяйства Российской Федерации. В перспективных планах развития экономики страны предусмотрено неуклонное развитие скотоводства, увеличение мясо-молочной продукции, в целях более полного удовлетворения промышленности в сырье, а населения - в качественных продуктах питания (24).

Для выполнения этой важной хозяйственной задачи предусматривается создание прочной кормовой базы, разработка и внедрение системы профилактических мероприятий по снижению ущерба от заболеваний и падежа животных при различных болезнях (25).

Несмотря на очевидность научных достижений и успехов в противоэпи-зоотической работе, наше скотоводство терпит огромный экономический ущерб от инфекционных болезней, который складывается в основном из следующих элементов: а) прямого убытка из-за падежа животных; б) потерь из-за снижения продуктивности скота; в) расходов на профилактические мероприятия; г) затрат на приобретение лекарственных препаратов; д) уменьшения в стране сырьевых ресурсов и др.

Велики затраты на карантинные и на ограничительные мероприятия, которые нередко превышают непосредственные'потери от гибели животных. В значительной мере, предпосылками для возникновения инфекционных болезней животных являются как нарушения ветеринарно-санитарных мероприятий на объектах ветнадзора, так и недостаточная эффективность используемых средств специфическойпрофилактики болезней (25).

Практика животноводства показывает, что только в условиях его стойкого благополучия по инфекционным болезням можно обеспечить высокую продуктивность животных, получение безопасной и качественной продукции и защиту населения от зооантропонозов. При этом система ветеринарно-санитарных мероприятий, изначально направленная на охрану здоровья животных, способствует улучшению эпидемиологической обстановки в стране (32).

Одним из заболеваний, приносящих значительный экономический ущерб скотоводству, является некробактериоз (фузобактериоз) крупного рогатого скота (31).

Хотя к заболеванию восприимчивы все виды домашних и многие виды диких животных (также заражению подвержен человек), в последние десятилетия наибольшую проблему представляет некробактериоз молочных коров и бычков на откорме (21).

По сообщениям Караваева Ю.Д. с соавт. (16), в процессе переболевания некробактериозом коровы теряют 30-40% массы тела. Потери молочной продуктивности 1 головы дойного стада могут достигать 400 кг за лактацию, а снижение привесов у животных на откорме - более 200 граммов в день. Экономические потери от некробактериоза у молодняка на доращивании могут достигать 3000 рублей на одного теленка за счет снижения племенной ценности и увеличения затрат кормов.

Технологические, хозяйственные и природные факторы играют существенную роль в распространении и течении болезни (12).

Существуют различные теории о пути проникновения возбудителя болезни в, хозяйство. Принято считать, что первичный* занос возбудителя на ферму происходит вместе с больными или инфицированными животными, но последние исследования1 показали, что возбудитель некробактериоза Р.песгорй)гит, в норме является обычным компонентом микрофлоры слизистых оболочек у млекопитающих, и в ¡их организм попадает с.кормом: Затем инфекция приобретает стационарный, характер с тенденцией к усилению ^ тяжести патологического процесса (16).

В России с начала 90-х годов 20-го века многочисленными группами авторов начались усиленные исследования по изысканию биологических препаратов, в частности вакцин разного типа для профилактики некробактериоза животных (40).

По мнению Сидорчука A.A. (67), в хозяйствах, где некробактериоз был установлен недавно, применение специфических препаратов без дополнительных лечебно-профилактических мероприятий позволяет взять эпизоотическую ситуацию под контроль. Однако в ряде хозяйств, где отмечается длительный период неблагополучия по этой болезни и многократный пассаж возбудителя на восприимчивом поголовье, использование вакцин против некробактериоза не дает положительного результата. В этих случаях целесообразным является применение антибактериальных препаратов для наружной обработки пораженных конечностей, парентеральная антибиотикотера-пия, оптимизация рационов кормления животных по белково-минеральному комплексу, профилактика травматизма, своевременная выбраковка животных, не поддающихся лечению, и т.д.

Для лечения животных, больных некробактериозом, предложено большое количество средств и методов, однако наблюдающееся в последние годы все более широкое распостранение болезни свидетельствует о недостаточной эффективности используемых терапевтических средств.

Поэтому разработка новых эффективных и безвредных лекарственных препаратов для лечения больных некробактериозом животных является актуальной задачей для ветеринарной,практики и экономики РФ.

Цель и задачи исследований.

Цель настоящих исследований - разработать технологию производства препарата Фузобаквелт и оценить его терапевтическую эффективность при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

2. Сконструировать опытные образцы препарата Фузобаквелт и определить их антибактериальные свойства in vitro.

3. Изучить физико-химические свойства и безвредность препарата.

5. Разработать технологию производства препарата Фузобаквелт и методы его контроля.

6. Определить экономическую эффективность препарата Фузобаквелт в сравнительном аспекте.

Научная новизна.

1. Впервые, для ветеринарной практики предложено лекарственное средство Фузобаквелт на основе клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом (запатентованная отечественная субстанция «Велтон») для лечения некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

2. Доказано, что субстанция Велтон может быть использована в качестве основы лечебно-профилактических препаратов для наружного применения при инфекционных болезнях конечностей крупного и мелкого рогатого скота.

3. Разработана технология промышленного производства препарата-Фузобаквелт с использованием отечественного сырья и оборудования. GpoK хранения препарата составляет не менее 24 мес.

4. Усовершенствован метод определения в сложных смесях клатрата четвертичного аммониевого соединения с карбамидом способом двухфазного титрования с помощью анионного стандартного раствора в щелочной среде в присутствии индикатора метиленового синего.

5. Установлено, что препарат Фузобаквелт безвреден для животных и не обладает сенсибилизирующими и кумулятивными свойствами.

6. Препарат Фузобаквелт обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, в т.ч. спорообразующих бактерий и кандид. Препарат активен против возбудителей некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец.

7. Доказано, что терапевтическая эффективность Фузобаквелта при некробактериоза крупного рогатого скота составляет 93,3%, а при копытной гнили овец - 100% при наружном применении препарата 1 раз в день в течение 10 сут. или при использовании средства в виде ножных ванн.

Практическая значимость.

1. Для применения в ветеринарии в качестве лекарственного средства при некробактериозе крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец предложен высокоэффективный, безвредный препарат Фузобаквелт, который прошел производственные испытания в животноводческих хозяйствах РФ.

2. В опытах на лабораторных животных, крупном рогатом скоте и овцах изучен механизм действия препарата Фузобаквелт, дана оценка его влияния на организм животных при использовании при некробактериозе и копытной гнили, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность-препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской, Брянской и Нижегородской областей.

3. На базе ООО «НПО «ВЕЛТ» (г. Оренбург) создана технологическая линия и организовано серийное производство лекарственного средства Фузобаквелт. Получено 3 серии препарата, отвечающие требованиям СТО:

4. Результаты исследований включены в СТО 71954720-0003-2009 на лекарственное средство Фузобаквелт, утвержденное в установленном порядке 29.04.2009 г.

5. Разработана и утверждена 29.04.2009 г. инструкция по применению Фузобаквелта для лечения и профилактики некробактериоза крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец.

6. Препарат Фузобаквелт зарегистрирован на территории РФ (Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных № ПВР-2-11.8/02362 от 29.04.2009 г).

7. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ при изучении студентами и слушателями ФПК дисциплин «Ветеринарная микробиология», «Микробиология и иммунология», «Санитарная микробиология».

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований изложены в 2" научных отчетах и доложены на XV Московском международном ветеринарном конгрессе, на секции «Болезни- крупного рогатого скота» (Москва, 2008); на V международном симпозиуме «ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, рыбного хозяйства-и пищи» в 7 Рамочной Программе» (г. Пущино, Московской обл., 2008); на международной конференции «Наука и образование для целей биобезопасности» г. Пущино, Московской обл., 2008); на международной научно-практической конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения» (г. Дубровицы, Московской обл., 2008), на международной ветеринарной конференции «Балтийский Форум» (Санкт-Петербург, 2009), в IV Фестивале науки (Москва, 2009).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 7 статей, в т.ч. 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК (Достижения науки и техники АПК, Ветеринарная медицина).

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Спиридонов, Андрей Владимирович

4. ВЫВОДЫ

3. По разработанной технологии промышленного*производства Фузобаквелта получено 3 серии препарата, отвечающего требованиям СТО. По внешнему виду Фузобаквелт представляет собой жидкость от темно-коричневого до черного цвета с рН 3,5±0,5. Плотность Фузобаквелта составо ляет 1,030±0,02 г/см , коэффициент преломления - 1,360±0,005, установленный срок годности - не менее 2 лет при температуре хранения от минус 5 до плюс 35°С. Препарат не обладает коррозионным действием в отношении различных металлических поверхностей, являющихся элементами конструкций животноводческих помещений, оборудования и инвентаря по уходу за' животными.

4. По параметрам острой токсичности при введении- в желудок; при нанесении на конъюнктиву и роговицу глаз Фузобаквелт относится1 к 3 классу умеренно опасных веществ,- при нанесении на поврежденную и неповрежденную кожу и при ингаляционном воздействии относится к 4 классу малоопасных веществ и не обладает видовой чувствительностью. При длительном применении препарат не проявляет сенсибилизирующего, кожно-резорбтивного и кумулятивного действия, не влияет на морфологический состав крови животных, не вызывает аллергических реакций и изменений антитоксической функции печени. ЛД50 Фузобаквелта для белых мышей составляет 2000±50 мг/кг.

5. Лекарственное средство Фузобаквелт обладает in vitro бактерицидной активностью в отношении культур тест-штаммов E.coli 1257, S.aureus 209, P.aeruginosa 1544, C.albicans 6902, B.cereus 96, а также возбудителя некробак-териоза F.necrophorum. При использовании бумажных дисков, обработанных препаратом, зона отсутствия роста изучаемых бактерий на плотной питательной среде составила 2,6±0,5 см.

6. Фузобаквелт обладает бактерицидным, противовоспалительным и ра-нозаживляющим действием. У кроликов, обработанных препаратом, заживление искусственно нанесенных ран проходило по первичному натяжению и к 23 дню исследований раны заживали с полным отторжением струпа. Эпи-телизация ран у кроликов, обработанных мазью Вишневского, завершалась к 35-му дню, а у обработанных йодом - к 40 дню исследований. Площадь ран у телят, обработанных Фузобаквелтом, к 14 дню с начала постановки опыта уменьшалась на 54%, в контрольной группе животных - на 31%.

7. Терапевтическая эффективность Фузобаквелта при некробактериозе крупного рогатого скота составляет 93,3% при ежедневном его применении в виде аппликаций на пораженные конечности, однократно, в течение 10 сут. При лечении овец, больных некробактериозом и копытной гнилью, терапевтическая. эффективность применения препарата в виде ножных ванн-1 раз в сутки в течение 7 дней составила 100%. Компоненты препарата не накапливаются в молоке и в мясе, сроки ожидания для молочной и мясной продукции после применения средства отсутствуют и молоко, говядину и баранину можно использовать без ограничений.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

2. Результаты исследований включены в СТО 71954720-0003-2009 на лекарственное средство Фузобаквелт.

3. Разработана и утверждена в установленном порядке 29.04.2009 г инструкции по применению Фузобаквелта для лечения и профилактики некро-бактериоза крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец.

5. В опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мышах, проводимых в условиях вивария кафедры микробиологии ФГОУ ВПО ч

МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами Ш-1У групп патогенности, показана безвредность и антимикробная-активность препарата . Фузобаквелт.

6. В опытах на крупном рогатом скоте и овцах изучен механизм действия Фузобаквелта при' лечении животных при некробактериозе и- копытной гнили, показана-высокаяшечебно-профилактическая-эффективность препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской области (ОАО «Вохринка», Раменского района; ООО «Авдеев-ское», Зарайского района; ООО «Татищево», Нарофоминского района, ООО «Совхоз «Головково», Нарофоминского района), Брянской области (СХПК «Верещаки», Новозыбковского района) и Нижегородской области (Канавин-ская СББЖ).

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

3. Рекомендовать препарат Фузобаквелт ветеринарным специалистам для, применения в качестве антимикробного, противовоспалительного и ра-нозаживляющего средства при поражениях- конечностей- животных разных видов' грамположительными и грамотрицательными бактериями, в т.ч. спо-рообразующими и кандидами.

4. Результаты исследований по. изучению- антимикробной активности Фузобаквелта, а также по определению острой и хронической токсичности препарата и оценке его терапевтической эффективности при некробактериозе крупного рогатого скота и овец и копытной гнили овец рекомендуется исС пользовать в учебном процессе по дисциплинам «Ветеринарная микробиология», «Микробиология и иммунология» и «Санитарная микробиология» в высших учебных заведениях по специальностям 111201 «Ветеринария» и 110401 «Зоотехния».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Спиридонов, Андрей Владимирович, Москва

1. Аголари Д.П. Эффективность препаратов при болезнях копыт у жвачных (некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец): Автореф. дисс. канд.вет.наук /Д.П. Аголари; М.: МГАВМиБ,- 2001.-18 с.

2. Александров Д.И. Изыскание и разработка средств лечения крупного рогатого скота при некробактериозе: Автореф. дис.канд. вет. наук /Д.И. Александров; Казань: Всерос. НИВИ- 2003. - 19 с.

3. Архангельский И.И. Некоторые вопросы иммунитета при копытной гнили овец / Архангельский И.И., Караваев Ю.Д., Сидорчук A.A. и др.// Тр. ВИЭВ. 1983. - т. 57. - С. 81-86.

4. Балабанов В.А. Некробактериоз животных /В.А. Балабанов.-М.: Росагропромиздат.- 1971.- 136 с.

5. Белов A.B. Лечение и профилактика некробактериоза крупного рогатого скота: Автореф. дисс. . канд.вет.наук /A.B. Белов.-Воронеж.: ВГАУ им. К.Д.Глинки. -2000.- 22 с.

6. Богомолова Н.С. Применение новых антисептиков и дезинфектан-тов в хирургии / Н.С Богомолова.- М.: Изд. «Сфера». 2007.-30 с.

7. Битов И;А. Разработка промышленной технологии производства эритроцитарного диагностикума и экспресс-метода диагностики некробактериоза крупного рогатого скота: : Автореф. дис.канд. вет. наук / И.А. Битов. -Щелково: ВНИТИБП. 2003.- 24 с.

8. ВолковИ.А.ОценкатерапевтическойэффективностипрепаратаФу-зобаквелт при лечении коров, больных некробактериозом /Волков И.А., Спиридонов A.B., Грязнева Т.Н. //Ветеринарная медицина.- 2007.- №1,- С. 17.

9. Грязнева Т.Н. Результаты производственных испытаний нового эффективного нанолекарства «Фузобаквелт» /Грязнева Т.Н., Спиридонов A.B. Иванова Е.Б. //Жизнь без опасностей.- 2008.- № 2.- С. 82-84.

10. Драчева, JI.B. Химические препараты санитарии и дезинфекции /Л.В. Драчева. Л.: НИИВС.- 2004.- 200 с.

11. Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупного рогатого скота: Рекомендации. Изд. 3-е /Сидорчук A.A., Аголори Д.П., Панасюк С.Д., и др. М, 2003. -14 с.

12. Джупина С.И. Избранные труды по эпизоотологии /Джупина С.И; -М.: Издатель ООО «Ветеринарный консультант». -2006.-423 с.

13. Иванова Е.Б. Применение нанолекарства «Фузобаквелт» при некробактериозе крупного рогатого скота /Иванова Е.Б., Грязнева Т.Н., Спиридонов A.B. //Достижения науки и техники в АПК.- 2008,- № 4.- С. 40-41.

14. Караваев Ю.Д. Специфическая профилактика копытной гнили овец /Караваев Ю.Д., Панасюк С.Д., Сидорчук A.A. и др. // Тр. ВИЭВ. Т. 69.2006.- С. 33-43.

15. Клищенко O.A. Современный подход к выбору дезинфицирующих средств для объектов ветеринарного надзора. /O.A. Клищенко, КА.Якунин, Д.Б.Полутов.- Проблемы ООИ: Сб.науч.тр.- М.: Россельхозиздат.- Вып. 6.2006.- С. 66.

16. Коваленко Я.Р. Анаэробные инфекции сельскохозяйственных животных/Я.Р. Коваленко.- М.: Сельхозгиз.- 1954,- 400 с.

17. Кононов А.Н. Эпизоотология и специфическая профилактика копытной гнили овец в Ставропольском крае /Кононов А.Н., Панасюк С.Д., Кружнов H.H. и др. // Сб. науч. тр. ВГНКИ.- 2001. Т. 62.- С. 113-117.

18. Лайшев А.Х. Некробациллез северных оленей /Лайшев А.Х., Семенов Н.С. Якутск: ЯГУ.- 1971.- 146 с.

19. Лукьяновский В.А. Профилактика и лечение заболеваний копытец у коров /В.А. Лукьяновский.- М.: Россельхозиздат.- 1985. 100 с.

20. Лопатин C.B. Некробактериоз крупного рогатого скота и пути решения проблемы / C.B. Лопатин, A.A. Самоловов // Аграрная Россия.- 2001.-№ З.-С. 34-38.

21. Лопатин C.B. Причины возникновения и способы профилактики нек-робактериоза крупного рогатого скота /C.B. Лопатин, A.A. Самоловов //Достижения науки и техники АПК. 2003. -№ 5. -С. 21-23.

22. Лопатин C.B. Естественная резистентность организма крупного рогатого скота при некробактериозе в пастбищный и стойловый период содержания /C.B. Лопатин, A.A. Самоловов // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. -2003. -№ 3. -С. 76-78.

23. Лопатин C.B. Транспозоны в передаче патогенных свойств Fusobacte-rium necrophorum subs. Necrophorum /C.B. Лопатин, В.И. Семенихин, A.C. Донченко// Сибирский-вестник сельскохозяйственной науки. -2003. -№ 4. -С. 85-89.

24. Лопатин C.B. Показатели естественной резистентности организма коров при некробактериозе / C.B. Лопатин. // Проблемы с/х производства на современном этапе и пути их решения: Сб. науч. тр.- Белгород: БГСХА.-2003.-С. 160.

25. Лопатин C.B. Лечебная эффективность некрогеля в разных регионах России при некробактериозе крупного рогатого скота /C.B. Лопатин, A.A. Самоловов // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. №3. — Новосибирск, 2004. -С. 107-108.

26. Лопатин C.B. Распространение абсцессов печени у крупного рогатого скота в Новосибирской области и роль F. necrophorum в их этиологии /C.B. Лопатин, М. Магерова, A.A. Самоловов //Сибирский вестник сельскохозяйственной науки.- 2005. -№ 2. -С. 15-19.

27. Лопатин, C.B. Опыт применения комплексной системы мероприятий при некробактериозе животных в ЗАО "им Кирова"/ C.B. Лопатин. //Сборник трудов, посвященный 70-летию ДальЗНИВИ. Благовещенск: ДальЗНИВИ.-2005.- С. 94-95.

28. Лопатин C.B. Профилактика некробактериоза крупного рогатого скота /C.B. Лопатин. //Молочное и мясное скотоводство.- 2006.- №1.- С. 33-35.

29. Лопатин C.B. Некрогель при некробактериозе животных /C.B. Лопатин, A.A. Самоловов// Ветеринария.- 2006.- №1.- С.26-27.

30. Лопатин C.B. Сравнительная индикация Fusobacterium necrophorum бактериологическим методом и с помощью гнездовой ПЦР /C.B. Лопатин, A.A. Самоловов, Ю.Д. Караваев //Сибирский вестник сельскохозяйственной науки.- 2006. -№ 2. -С. 92-96.

31. Лопатин'C.B. Профилактика некробактериоза крупного рогатого скота / C.B. Лопатин //Аграрная наука.- 2006.- № 2.- С. 25-27.

32. Лопатин C.B. Эффективность препаратов при некробактериозе животных /C.B. Лопатин // Молочное и мясное скотоводство.- 2006.- № 4.- С.39.41.

33. Максимович B.B. Некробактериоз сельскохозяйственных животных / В.В. Максимович, Э.И. Веремей //Материалы к республиканскому совещанию ветеринарных специалистов по проблеме некробактериоза.- Мозырь, 1999.- 56 с.

34. Мачахтыров И.Г. Эпизоотология и вакцинопрофилактика некробактериоза северных оленей в Республике Саха (Якутия): Автореф. дис. канд. вет. наук/ И.Г. Мачахтыров;- Якутск.: Якут. гос. с.-х. акад.- 2000.- 24 с.

35. Меныпенин В.В. Разработка промышленной технологии изготовления вакцины против некробактериоза животных: Автореф. дис. . канд.вет.наук/ В.В. Меныпенин; М.: Всерос. Гос. НИИ контроля, стандарт, и сертиф.вет.препар.- 1998.-21 с.

36. Мельник Н.В. Разработка, усовершенствование и оптимизация промышленных технологий производства диагностикумов и противобактериаль-ных вакцин: Автореф.дисс. . д-ра вет.наук/ Н.В. Мельник; -М.: ВИЭВ.-1997.-46 с.

37. Михеева Е.А. Морфогенез иммунных нарушений при некробакте-риозе крупного рогатого скота: автореф. дис.канд. вет. наук : спец. 16.00.02 /Е.А. Михеева; Ижевск.: Урал. гос. с.-х. акад.- 2004. - 22 с.

38. Носов И.И. Клиника, этиология и лечебно-профилактические мероприятия при массовых заболеваниях конечностей у овец в Ленинградской обл: Автореф. дисс.канд.вет.наук /И.И. Носов.- Л.: С.-Петербург, гос. акад. вет. медицины. 1956. - 23 с.

39. Островский Н.С. Гнойно-некротические заболевания пальца у крупного рогатого скота: Автореф. дисс. .д-ра наук/ Н.С. Островский. Л.: С.-Петербург, гос.акад.вет.медицины. - 1964.-38 с.

40. Пантелеева Л.Г. Современные антиикробные дезинфектанты. Основные итоги и перспективы разработки новых средств / Л.Г. Пантелеева // Дезинфекционное дело -2005.- № 2. С. 31-33.

41. Панасюк С.Д. Эффективность ассоциированных вакцин против копытной гнили овец / Панасюк С.Д., Сидорчук A.A., Караваев Ю.Д. // Мат. пленума секции паразитоценологии АН СССР.5 Витебск, 1988. С. 19-21.

42. Панасюк С.Д. Специфическая профилактика инфекционных болезней конечностей крупного рогатого скота и овец /Панасюк С.Д., Кружнов H.H., Кириллов'Л.В. //Сб. науч. тр. ВГНКИ. 1996. - Т. 59. -С. 16- 82.

43. Панасюк С.Д. Значение ассоциаций анаэробных микроорганизмов внорме и патологии с/х животных /Панасюк С.Д. // Сб. науч. тр. ВГНКИ. — 1999-Т. 61. С. 64-73.

44. Панасюк С.Д. Экспериментальное подтверждение значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии инфекционных заболеваний конечностей с/х животных /Панасюк С.Д., Сидорчук A.A., Баусина B.J1. //Сб. науч. тр. ВГНКИ. -2005. Т. 65. - С. 205-212.

45. Правила по профилактике и ликвидации некробактериоза животных /Сидорчук A.A., Караваев Ю.Д., Кириллоа JI.B. и др.- МСХиП России, Департамент ветеринарии №13.41313-00 от 11.07.2000 г.- М., 2001 -9 с.

46. Пхакадзе Т.Я. Применение новых антисептиков и дезинфектантов в хирургии / Т.Я. Пхакадзе// Дезинфекционное дело. -2005.- № 4. С.25- 27

47. Пышкина Т.Н. Усовершенствование промышленной технологии производства инактивированной эмульгированной вакцины против некробактериоза животных: Автореф.дисс. . канд.вет.наук/ Т.Н. Пышкина; Щелково.: ВНИИ биолог.промышленности.- 2000.-28 с.

48. Радчук H.A. Ветеринарная микробиология и иммунология / H.A. Радчук, Г.В. Дунаев. М.: Агропромиздат, 1991.- 500 с.

49. Романенко М.Н. Разработка и совершенствование тест-систем на основе молекулярно-биологических методов для диагностики некробактериоза: Автореф. дис.канд. вет. наук/ М.Н. Романенко; Щелково.: Всерос. НИИ и технолог, ин-т биолог, промыш-ти.- 2004.-22 с.

50. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ: (утверждены фармакологическим комитетом МЗ СССР).- М.: ЗАО «ИИА «Ремедиум».- 2002.- 398 с.

51. Самоловов A.A. Некробактериоз животных / A.A. Самоловов. -Новосибирск: ОАО Новосибирское Книжное Издательство.- 1993.- 128 с.

52. Самоловов A.A. Некробактериоз крупного рогатого скота / A.A. Самоловов. Новосибирск.: ОАО Новосибирское Книжное Издательство.-1998.-140 с.

53. Самоловов A.A., Изучение и состояние проблемы некробактериоза северных оленей /A.A. Самоловов., В.П. Кечин., К.А. Лайшев. Новосибирск: ОАО Новосибирское Книжное Издательство.- 2001.- 178 с.

54. Самандас A.M. Эколого-эпизоотические основы интегрированной защиты северных оленей от гнуса, оводов и некробактериоза на Таймыре: Автореф. дис.канд. вет. наук/ A.M. Самандас; Тюмень: ГНУ ВНИИВЭА.-2005.- 20 с.

55. Семенихин В.И. Полимеразная цепная реакция в диагностике Fuso-bacterium Necroforum / В.И. Семенихин, A.A. Самоволов, Н.В. Некрасова.-Новосибирск: ОАО Новосибирское Книжное Издательство.-2000 78 с.

56. Силков A.M. Влияние тканевых биостимуляторов на иммунологическую реактивность организма и испытание их для профилактики некроба-циллеза и бронхопневмонии телят северных оленей: Автореф. дисс. . канд.вет.наук /A.M. Силков; JL: ЛВИ.- 1965.- 21 с.

57. Семенов Б. С. Болезни пальцев крупного рогатого скота в промышленных комплексах / Б.С. Семенов.-JI.: Колос.- 1981. 100 с.

58. Сидорчук A.A. Роль ассоциаций анаэробных бактерий в патологии с с/х животных / Сидорчук A.A., Панасюк С.Д. // Мат. пленума секции пара-зитоценологии АН СССР Витебск, 1988 - С. 21-24.

59. Сидорчук A.A. Система мероприятий по борьбе с некробактерио-зом КРС / Сидорчук A.A., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. // Ветеринария. -1994-№ 1.-С. 12-14.

60. Сидорчук A.A. Перспективы применения^ цинко-содержащих препаратов при инфекционных болезнях конечностей жвачных /Сидорчук A.A.,

61. Панасюк С.Д., Кононов А.Н. // Вестник ветеринарии. Ставрополь, 1997. - № 5.-Т.З.- С. 78-81.

62. Сидорчук A.A. Состояние изученности и проблемы борьбы с нек-робактериозом КРС / Сидорчук A.A., Панасюк С.Д., Кружнов H.H. // Мат. международного симпозиума зав. кафедрами эпизоотологией и инфекционных болезней. Кишинев, 1998 - С. 70-73.

63. Сидорчук A.A. Некробактериоз КРС: применение вакцины "Неко-вак" в системе мероприятий по профилактике и борьбе с болезнью /Сидорчук A.A., Панасюк С.Д., Кружнов H.H. // Тр. ВИЭВ. 1998. - Т. 78 - С. 33-38.

64. Сидорчук A.A. Система мероприятий по борьбе с некробактериозом КРС и копытной гнилью овец / Сидорчук A.A., Панасюк С.Д., Кружнов H.H. II Ветеринария. 1999. - № 6. - С. 23-27.

65. Сидорчук A.A. Специфическая профилактика копытной гнили овец /Сидорчук A.A., Кононов А.Н., Панасюк С. // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных: Сб. науч. тр. Ставропольской гос. с/х академии. Ставрополь, 2001 - С. 34-36.

66. Сидорчук A.A. Применение вакцины "Нековак" в системе мероприятий по профилактике и борьбе с некробактериозом крупного рогатого скота /Сидорчук A.A., Панасюк С.Д., Кружнов H.H. // Сб. науч. тр. ВГНКИ — 2001 Т. 62-С. 108-113.

67. Сидорчук A.A. Некробактериоз: прошлое, настоящее и будующее /Сндорчук A.A., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. //Ветеринарная медицина.— 2002.- № 2.- С. 3 4.

68. Сидорчук A.A. Проблемы борьбы с некробактериозом КРС в России /Сидорчук A.A., Панасюк С.Д. // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии: Сб. науч. тр. Троицк, 2004. - С. 149-150.

69. Сидорчук A.A. Специфическая профилактика инфекционных заболеваний конечностей крупного рогатого скота и овец в Российской Федерации / Сидорчук A.A., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. // Ветеринарная служба Ставрополья.- 2005. № 3 .- С. 5-10.

70. Сидорчук A.A. Проблемы борьбы с некробактериозом: заблуждения и реальность /Сидорчук А., Кириллов JI.B., Панасюк С.Д. // Ветеринария. -2006.-№2.- С. 5-6.

71. Спиридонов A.B. Применение Велтолена для дезинфекции живот-нодческих помещений неблагополучного по некробактериозу хозяйства /Спиридонов A.B., Волков И.А., Грязнева Т.Н. //Ветеринарная медицина.-2007.-№ 1.- С. 19-20.

72. Таршис Mf Г. Болезни.животных, опасные для.человека / М: Г. Тар-шис, Б.Л. Черкасский. М.: Колос.- 1997.- 400 с.

73. Тимонина" В.Я. Групповой метод профилактики и лечения некро-бактериоза с.-х. животных: Автореф. дисс. канд.вет.наук /В.Я. Тимонина.

74. Казань.: Всерос. НИВИ.- 1983.-20 с.

75. Тириков И.Г. Оптимизация лечебно-профилактических мероприятий при некробактериозе крупного рогатого скота: Автореф. дисс. канд. вет. н. / И.Г. Тириков.- Новосибирск.: Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. 1991 .-18 с.

76. Федотов B.C. Некробациллез северных оленей и меры борьбы с ним: Автореф. дисс. д-ра вет. наук /B.C. Федотов. М.: Моск. вет. акад. им. К.И.Скрябина. - 1969.- 37 с.

77. Федосеенко В.А. Усовершенствование средств специфической профилактики некробактериоза крупного рогатого скота: Автореф. дисс. канд. вет.н. / В.А. Федосеенко; М.: Моск. гос.акад.вет.медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина.- 1998.-16 с.

78. Чеботарева Т.М. Профилактика и лечение болезней конечностей у крупного рогатого скота / Т.М. Чеботарева // Науч.-техн. бюл. ИЭВСиДВ. -Новосибирск.: ОАО Новосибирское Книжное Издательство.- 1991. № 1.1. C. 34-40.

79. Шумилов М.Ф. Эпизоотология, некоторые вопросы патогенеза и меры борьбы с некробактериозом северных оленей в условиях Магаданской области: Автореф. дисс. канд.вет.наук.- Омск, 1974.- 24 с.

80. Щербаков, А.П. Лечение и профилактика гнойно-некротических болезней пальцев у крупного рогатого скота и копытной гнили овец: Автореф. дисс.д-ра. вет. наук / А.П. Щербаков; Л.: Ленинградский вет.ин-т. -19941-25 с.

81. Шоркина О.И. Коррекцияиммунного статуса в профилактике гной-но-некротйческих заболеваний пальцев у голштинского скота: Автореф. дис. канд. вет. наук / О.И. Шоркина; Казань .: Каз НИВИ,-, 1997. - 21 с.

82. Baggesen, D;L. Effects of the antimicrobial growth promoter tylosin on subclinical infection of pigs with Salmonella enterica serotype Typhymurium /

83. D.L. Baggesen//Am. J. Vet. Res., 1999.-Vol. 60(10).-P. 1201-1206.

84. Berg, J.N. Identification of common antigens in ribosome-rich extracts from Fusobacterium necrophorum./ J.N.Berg, J.W.Evans //Am J Vet Res. 1985 -P. 65-80.

85. Chirinos, J.A. The evolution of Lemierre syndrome: report of 2 cases and review of the literature./ J.A. Chirinos, D.M. Lichtstein, J. Garcia, L.J. Tamariz. // Medicine, 2002.- P. 458-465.

86. Dirksen, G. Acidosis/ G. Dirksen // In Philipson A.T. (Ed.): Physiology of digestion and metabolism in the Ruminant. Newcastle-upon-Tyne , Oriel Press, 1970.-P. 612-625.

87. Esther van Pragg Ph.D. Schmorrs disease or skin necrosis due to Fusobacterium necroforum/ Esther van Pragg Ph.D.// Am. J. Vet. Res., 2007. Vol. 60(10).-P. 1607-1706.

88. Evans, J.W.Development of enzyme-linked immunosorbent assays for the detection of Fusobacterium necrophorum antibody in animal sera/ J.W. Evans, J.N. Berg//Am J Vet Res. 1985.-Vol. 15-P. 132.

89. Forrester, L.J. Aggregation of platelets by Fusobacterium necrophorum/ L.J. Forrester, B.J. Campbell, J.N. Berg, J.T. Barrett. // J Clin Microbiol. 1985. -Vol. 17-P. 245.

90. Ginderich, D.A. Tylosin antimicrobial activity and pharmacokinetics in cows / D.A. Ginderich et al. // Can. Vet. J., 1977. Vol. 18(4). - P. 96-100.

91. Horose, M. Aggregation of bovine platelets by Fusobacterium necropho-rum/M. Horose, H.Kiyoyama, H.Ogawa, T.Shinjo // Vet Microbiol.- Vol. 19. -1992.-P. 343.

92. Ishii, T. Cytotoxic effects of a leukocidin from Fusobacterium necrophorum on bovine hepatic cells/ T.Ishii, M .Kanoe, T.Inoue, K .Kai et al. // Med «Microbiol Immunol.- Vol. 17 1988-P. 27-32.

93. Ines, I. Sternoclavicular joint septic arthrintis./ Ines I. Mbaga, John N. Greene, and Ramon L. Sandin// Cancer Control Journal Volume 5 Number 3. 2003.-P. 45-78.

94. Kanoe, M.Bovine platelet aggregation by Fusobacterium necrophorum/ M. Kanoe , M. Yamanaka .// J Med Microbiol.- 1989.- Vol. 20.-P. 13.

95. Kanoe, M, Iwaki K. Adherence of Fusobacterium necrophorum to bovine ruminal cells/ M .Kanoe, K .Iwaki // J Med Microbiol. 1987 Vol. 10 - P. 69-73.

96. Kanoe, M.Adherence of Fusobacterium necrophorum to Vero cells/ M.Kanoe //Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg A. 1985 Vol. 11.- P. 100.

97. Kanoe, M. Location of haemagglutinin in bacterial cells of Fusobacterium necrophorum subsp. Necrophorum/ M.Kanoe // Microbios. 1998- Vol. 13. — P. 33-34.

98. Kanoe, M.Effects of leukocidin from Fusobacterium necrophorum on bovine peripheral leukocytes in vitro/ M.Kanoe// Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg A. 1988- Vol. 19. P. 463.

99. Kanoe, M.Use of enzyme-linked-immunosorbent assay for detection of IgG and IgM antibodies to Fusobacterium necrophorum in cattle/ M.Kanoe// Microbios. 1996-Vol. 17.-P. 257.

100. Knothe, H. A review of the medical considerations of the use of tylosin and other macrolide antibiotics as additives in animal feeds / H. Knothe // Infec- • tion, 1977.-Vol. 5.-P. 183-187.

101. Lechtenberg, K.F. Antibiotic susceptibility of Fusobacterium necrophorum isolated from liver abscesses / K.F. Lechtenberg et al. // Am. J. Vet. Res., 1998.-Vol. 59.-P. 44-47.

102. Mori, K. Morphological changes of platelets during the process of platelet aggregation in gray platelet syndrome/ K.Mori// Tohoku J Exp Med. 1986-Vol.20. -P. 425.

103. Nagaraja,.T. G. Bacterial flora of liver abscesses in feedlot*cattle fed tylosin or no tylosin / T. G. Nagaraja et al. // J. Anim. Sci., 1999. Vol. 17. - P. 973978.

104. Nagaraja, T. G. Effects of tylosin on concentrations of Fusobacterium necrophorum and fermentation products in the rumen of cattle fed a highconcentrate diet / T. G. Nagaraja et al. //Am. J. Vet. Res., 1999. Vol. 60(9). - P. 1061-1065.

105. Nagaraja, T. G. Liver abscesses in feedlot cattle: a review / T. G. Nagaraja et al. // J. Anim. Sci., 1998. Vol. 76. - P. 287-298.

106. Narayanan, S. Fusobacterium necrophorum leukotoxin induces activation and apoptosis of bovine leukocytes/ S.Narayanan// Infect Immun. 2002. Vol. 23. -P. 40-45.

107. Nagai, S.Purification and partial characterization of Fusobacterium necrophorum hemagglutinin/ S. Nagai //Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg A. 1984 -Vol. 16.-P. 100-108.

108. Narongwanichgarn, W.Differentiation of Fusobacterium necrophorum subspecies from bovine pathological lesions by RAPD-PCR/ W. Narongwanich-garn//VetMicrobiol. 2001.-Vol. 17. -P. 300-305.

109. Okada, Y.Adherence of Fusobacteriurru necrophorum subspecies necrophorum to different animal cells/Y.Okada//Microbios. 1999-Vol. 16. -P. 78-89

110. Riviere, J. Handbook of comparative pharmacokinetics and residues of veterinary antimicrobials/ Riviere J. et al// CRC Press: Boca Raton , 1991. — Vol. 10. -P. 229-261.

111. Sinave, C.P. The Lemierre syndrome: Suppurative thrombophlebitis of the interaalljugular vein secondary to oropharyngeal infection/ C.P.Sinave // Medicine 1989-Vol. 16.-P. 85-94.

112. Shinjo, T.Stability of hemagglutinating and hemolytic activities in Fusobacterium necrophorum biovar A strains/ T.Shinjo// Nippon Juigaku Zasshi. 19861. Vol. 19.-P. 68-89.

113. Shinjo, T.Adherence of Fusobacterium necrophorum biovar A and B strains to erythrocytes and tissue culture cells/ T.Shinjo// Microbiol. 1988- Vol. 22.- P. 45-56.

114. Shinjo, T, Kiyoyama H.Pathogenicity of a non-hemagglutinating mutant strain of Fusobacterium necrophorum biovar A in mice/ T.Shinjo// Nippon Jui-gakuZasshi. 1986.-Vol. 17.-P. 89-103.

115. Smith, G.R. Susceptibility of wallabies to Fusobacterium necrophorum/ G.R. Smith// Vet Rec. 1986 Vol. 18. - P. 56-78.

116. Takayama, Y.Adherence of Fusobacterium necrophorum subsp. necrophorum to ruminal cells derived from bovine rumenitis./ Y.Takayama, //Microbiol. 2000.-Vol. 23.-P. 77-89.

117. Tan, Z.L. Biochemical and biological characterization of ruminal Fusobacterium necrophorum./ FEMS Microbiol Lett., 1994. P. 67-70.

118. Tan Z.L.Fusobacterium necrophorum infections: virulence factors, pathogenic mechanism and control measures. / Z.L. Tan // Vet Res Commun. 1996 -Vol. 27.-P. 47-50.

119. Turner,A.C. Serological response" of mice to Fusobacterium necropho-rum/A. Turner., D.E.Bidwell// Res Vet Sci., 1986.- Vol. 25.-P. 89-105.

Информация о работе

Спиридонов, Андрей Владимирович
кандидата биологических наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.23

Диссертация

Технология производства препарата Фузобаквелт и его применение при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Технология производства препарата Фузобаквелт и его применение при некробактериозе крупного рогатого скота и копытной гнили овец - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы