Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Технология получения антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс

ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Технология получения антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс"

На правах рукописи

КИС Ирина Владимировна

Технология получения антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

004613954

2 5 НОЯ 2010

Москва-2010

004613954

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор технических наук, профессор

Сапожникова Алла Ионовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Бедоева Залихан Михайловна;

кандидат биологических наук Устинова Галина Ивановна

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности»

Защита состоится « » 2010 г. в . на заседа-

нии диссертационного совета Д 220.\)42.01 при ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан « 2010 года и размещен

на сайте http://mgavm.ru.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Коллаген - основной структурный белок соединительной ткани, выполняющий важные биохимические функции, основной из которых является репаративная. Повышенный интерес к коллагену обусловлен тем, что он сочетает в себе многие свойства синтетических полимеров, а также свойства биологических полимеров [Телишевская Л.Я., 2000; Ермишина И.Г., 2002; Албулов А.И., 2004; Абоянц Р.К., 2006].

Используя коллаген в качестве биологически активной матрицы, и совмещая его с лекарственными средствами направленного действия, в последние годы удалось создать множество эффективных и стабильных форм монопрепаратов [Каспарьянц С.А., Гордиенко И.М., 1990; Сапожникова А.И., 1999; Пхакадзе Т.Я., 2001; Митронин A.B., 2004].

В настоящее время важньм направлением в современной химиотерапии бактериальных инфекций является предотвращение или замедление развития резистентности микроорганизмов, а так же борьба с уже сформировавшейся лекарственно устойчивой микрофлорой. Поэтому разработка комплексных лекарственных средств пролонгированного действия, содержащих несколько совместимых компонентов - антибиотиков, антисептиков и др., способных при сочетании взаимно усиливать активность, расширять спектр антимикробного действия и которые будут иметь эффективность при полиэтиологичных заболеваниях животных является актуальной задачей.

Цель и задачи работы. Цель работы заключается в разработке технологии получения антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Оптимизировать биотехнологические параметры получения геля коллагена из отходов кожевенного сырья.

2. Разработать технологию изготовления комплексного антисептического коллагенсодержащего средства.

3. Оценить активность in vitro и безвредность на лабораторных животных разработанного антисептического средства.

4. Определить стабильность средства в процессе хранения.

5. Изучить терапевтическую эффективность средства Колмедокс и установить сроки выведения остаточных количеств доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглкжоната из организма коров после курсового применения препарата.

6. Разработать проект нормативно-технической документации по изготовлению, контролю качества и применению антисептического коллагенсодер-жащего средства.

Научная новизна. Впервые разработана технология изготовления комплексного антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс. Средство представляет собой светло-коричневую жидкость в форме раствора, содержащего доксициклина 20 мг, метронидазола 20 мг, хлоргексидина биглю-коната 4 мг, лидокаина 5 мг, коллагена 1 мг и растворителя (триэтиленгли-коль) до 1,0 см3. Оптимизированы биотехнологические параметры получения коллагена из отходов кожевенного сырья. Установлено, что внесение в состав коллагена 1мг/см3 приводит к замедлению высвобождения in vitro антисептических компонентов на 24 часа по сравнению с контрольным вариантом (без коллагена). При содержании коллагена 5 мг/см3 в антисептическом средстве, элиминация доксициклина, метронидазола и хлоргексидина замедляется в два раза - с 36 часов до 72 часов.

Практическая значимость работы. Предложено новое коллагенсодер-жащее антисептическое средство Колмедокс для лечения эндометритов у коров и инфицированных ран у домашних животных.

На базе ООО «Ветбиохим» совместно с ветспециалистами производственного подразделения разработаны технологические параметры и изготовлены четыре опытно-производственные серии средства Колмедокс.

Материалы исследований включены в проект нормативно-технической документации (СТО 76418883-0028-2009, технологический регламент изготовления и инструкция по применению).

Разработанный проект нормативно-технической документации, пакет документов на антисептическое средство Колмедокс, необходимых для регистрации на территории РФ, приняты в Россельхознадзоре и направлены для дальнейшего испытания в ФГУ «ВГНКИ».

Апробация работы. Основные положения и результаты работы были доложены и обсуждены на II - ом съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии» (Казань, 2009), материалы по разработке антисептического средства рассмотрены и одобрены на заседании научно-методической комиссии ФГОУ ВПО МГАВМиБ 01.06.2009 и научно-производственном совещании ООО «Ветбиохим» 04.06.2010, на международной конференции, посвященной 90-летию со дня основания ФГОУ ВПО МГАВМиБ «Актуальные проблемы товароведения сырья и продуктов животного происхождения, промышленных и продовольственных товаров, экологии» (Москва, 2009), на Московской международной научно-практической конференции «Биотехнология: экология крупных городов» (Москва, 2010).

Публикации. По результатам исследований опубликовано 6 научных статей, в т.ч. 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 159 страницах машинописного текста, в т.ч. 40 страниц приложений и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практическое использование полученных научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы, включающий 160 источников, в том числе 50 иностранных. Материалы диссертации иллюстрированы 14 рисунками и 21 таблицей.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту.

1. Усовершенствованная технология получения коллагена, позволяющая получить на его основе средство Колмедокс.

2. Состав и технология производства нового коллагенсодержащего антисептического средства Колмедокс.

3. Динамика высвобождения in vitro антисептических компонентов из коллагенсодержащего средства Колмедокс.

4. Результаты оценки антимикробной активности in vitro, безвредности на лабораторных животных и терапевтической эффективности разработанного антисептического средства Колмедокс.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2007 по 2010 гг. на кафедре товароведения и технологии сырья животного происхождения им. С.А. Каспарьянца ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины биотехнологии имени К.И.Скрябина». Ряд экспериментов был проведен на базе ООО «Ветбиохим». В качестве подопытных животных использованы 162 беспородные белые мыши массой 18 - 20 г и 5 кроликов породы шиншилла.

Гель уксуснокислого коллагена получали по запатентованной методике [Каспарьянц С.А., Сапожникова А.И., Гордиенко И.М., Белевцова Д.В. и др. 1995; 1999] в нашей модификации из некондиционных шкур (порезы) крупного рогатого скота, приобретенных на убойных пунктах хозяйств Московской области.

Гель коллагена исследовали на стерильность в соответствии с ГОСТ 28085-89.

Содержание белка в геле коллагена определяли методом Къельдаля (2002), аминокислот — на аминокислотном анализаторе (модель 835 производства «Hitachi») в Аккредитованном испытательном лабораторном центре «БИОТЕСТ» Московского государственного университета прикладной биотехнологии (МГУПБ).

Антимикробную активность монокомпонентных образцов и препаративной формы антисептического средства Колмедокс определяли методом серийных разведений с использованием следующих тест-культур микроорганизмов: Staphylococcus aureus 493; Streptococcus pneumonia 19; Escherichia coli 1597; Salmonella dublin 29; Pasteurella multocida 225; Microsporum canis 213; Trichophyton mentagrophytes 135; Trichophyton verucosum 130.

Для изучения влияния коллагена на продолжительность высвобождения антисептических компонентов (доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата) была смоделирована биосистема in vitro по принципу диффузии высокомолекулярных веществ через полупроницаемую мембрану.

Изучение острой, субхронической токсичности и раздражающего действия на слизистые оболочки средства Колмедокс проводили по методикам, описанным в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению

новых фармакологических веществ» (2005).

Для установления срока и режима хранения была изучена стабильность опытных образцов антисептического средства Колмедокс. Испытания проводили в течение 24 месяцев при температуре 4 - 6 °С и 25 °С.

Определение подлинности и массовой доли доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата в средстве Колмедокс проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определение подлинности ли-докаина проводили по качественной реакции на ароматические первичные амины и хлориды. Массовую долю лидокаина определяли титрометрическим методом. Подлинность и массовую долю коллагена определяли по оксипроли-ну колориметрическим методом.

Терапевтическую эффективность средства Колмедокс изучали при эндометритах крупного рогатого скота в хозяйствах Московской, Вологодской, Калужской и Смоленской областях и при лечении инфицированных ран у домашних животных (кошки и собаки) в условиях ветеринарных клиник.

Остаточное количество доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата в образцах мышечной ткани и молока определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с пределом детектирования 0,01 мкг/см3.

Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием компьютерной программы «БТАНЭТЮА».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Усовершенствование технологии получения геля коллагена

В связи с тем, что некондиционные шкуры (порезы) крупного рогатого скота являются одним из основных недубленых отходов кожевенного сырья и не представляют экономической ценности для хозяйств, мы, с учетом, стоявших перед нами задач, сочли целесообразным использовать именно их для наработки геля коллагена.

Различные способы получения дисперсий коллагена, как правило, включают в себя такие основные стадии как предварительная обработка коллаген-содержащего сырья щелочно-солевым раствором и последующее растворение его слабыми органическими кислотами. Особую роль здесь играет выбор хи-

мических реагентов, их соотношений и концентраций.

Наши исследования были направлены в основном на подбор и сравнительное испытание трех вариантов состава щелочно-солевого раствора, содержащего перекись водорода:

I вариант - 20 г/л гидроксида натрия (NaOH), 10 г/л перекиси водорода (Н2О2) и 3 г/ л сульфида натрия (Na2S).

II вариант - 50 г/л гидроксида натрия (NaOH), 10 г/л перекиси водорода (Н2О2) и 3 г/л сульфида натрия (Na2S).

III вариант - 100 г/л гидроксида натрия (NaOH), 10 г/л перекиси водорода (Н202) и 3 г/л сульфида натрия (Na2S).

Для каждого варианта (в трех повторностях) готовили равнозначные образцы шкуры массой 1 кг.

Образцы шкуры очищали от механических примесей, разрезали на кусочки размером 5x5 см, помещали в емкость с перемешивающим устройством, промывали теплой водопроводной водой. После удаления промывной жидкости, в емкость с образцами вносили щелочно-солевой раствор и выдерживали в полученной смеси в течение 30 часов при 25°С. В результате воздействия щелочно-солевого раствора во всех образцах отмечено полное удаление волосяного покрова, в первом и втором вариантах частичное набухание коллагена. В третьем варианте, набухание и разрыхление кусочков было более выраженным, по всей видимости, за счет более высокой концентрации гидроксида натрия.

Обработанное щелочно-солевым раствором сырье трехкратно промывали холодной водопроводной водой 1:10 и один раз 0,1М раствором уксусной кислоты (СН3СООН) для нейтрализации щелочи. Подготовленный коллагенсо-держащий материал измельчали на мясорубке и смешивали 1:5 с 1М раствором уксусной кислоты для растворения коллагена. Через 3-е суток измельченный материал приобретал форму геля. Причем было отмечено, что образцы первого варианта содержали плотные кусочки не растворившегося материала, по всей видимости, как следствие недостаточного разрыхления коллагена из-за сравнительно низкой концентрации щелочи. Для получения однородного продукта все образцы подвергали обработке на проточном гомогенизаторе Vertís с добавлением дистиллированной воды (Н2О) 1:5. Таким образом, из каждого

каждого образца шкуры массой один килограмм получали десять килограмм геля коллагена (рис. 1).

I. П&кдьчение И Промывка Щ. Оорвооткз IV. Проыьвкя V. Растворение в

шкуры КРС кусочков щелоодо- водой н 0.1М 1М рпстворе

(кусо«ки водопроводной солевым раствором уксусной

рашсром водоЛ раствором: уксусной кислоты

<♦5 см) t = 25 ®С;1 = 30 кислоты

Рис. 1. Схема технологического процесса изготовления уксуснокислого геля коллагена

В полученных образцах геля коллагена определяли содержание белка и аминокислотный состав. Концентрация белка в 1 и 2 вариантах существенно не отличалась и составила 21,2±0,03 мг/см3 и 20,6±0,01 мг/см3 соответственно. Содержание белка в третьем варианте было ниже на 11,2 % и составило 18,3±0,01 мг/см3, по всей видимости, высокая концентрация NaOH в растворе повлияла на нарушение структуры коллагена и частичную его потерю в процессе промывки.

По результатам аминокислотного анализа коллагена, во всех образцах установлено высокое содержание таких аминокислот как глицин (5,18 - 6,00 мг/ см3), гидроксипролин (2,34 - 2,72 мг/ см3), пролин (2,14 - 2,48 мг/ см3) и глу-таминовая кислота (1,50 - 1,74 мг/ см3).

В результате проведенной серии опытов по отработке получения геля коллагена с использованием щелочно-солевого раствора с различной

концентрацией гидроксида натрия установлено, что наиболее приемлемой оказалась концентрация компонентов щелочно-солевого раствора по второму варианту, который использовали при разработке технологии изготовления антисептического средства.

Обоснование и оптимизация изготовления антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс

При выборе оптимального состава лекарственной формы антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс нами был испытан ряд вариантов композиций.

В качестве антисептических веществ испытывали доксициклин, метрони-дазол и хлоргексидин биглюконат, которые применяются при лечении метритов животных и инфицированных ран, используются в монокомпонентных коллагенсодержащих лекарственных формах, имеют различный механизм действия на микробную клетку и не оказывают побочного действия на организм млекопитающих. При составлении оптимальной композиции готовой лекарственной формы препарата важно было подобрать растворитель для всех компонентов.

Нами были испытаны три растворителя - дистиллированная вода, моно-пропиленгликоль и триэтиленгликоль при разных значениях температуры и в зависимости от последовательности растворения компонентов. Учитывая изо-электрическую точку коллагена и кислотность среды в раневом содержимом (рН 5-6), готовили базовую лекарственную форму в виде раствора.

В результате проведенных исследований установлено, что дистиллированная вода в качестве растворителя оказалась неудачным вариантом из-за не стабильности водного раствора доксициклина как в моноварианте, так и в сочетании с другими компонентами. В монопропиленгликоле и триэтиленгликоле удалось получить растворы доксициклина и метронидазола. Хлоргексидин биглюконат обладал высокой растворимостью во всех трех растворителях.

При изучении влияния температурного фактора на растворимость компонентов, было установлено, что наиболее оптимальной для растворения метронидазола оказалась температура в диапазоне 60-80°С. Растворение доксициклина происходило также быстро, однако в течение суток препаративная форма приобретала темно-коричневый цвет за счет быстрого окисления. При

10

температуре 40°С доксициклин растворился полностью в течение 15-20 мин, при этом сохранялась стабильность приготовленного раствора препарата.

При испытании в качестве растворителя монопропиленгликоля и триэти-ленгликоля были получены сходные результаты. Учитывая экономическую составляющую, дальнейшие испытания проводили с использованием триэти-ленгликоля.

В качестве обезболивающего компонента в полученные образцы добавляли 5 мг/см3 лидокаина. Для получения биокомпозитов в раствор антисептических веществ вносили гель коллагена из расчета 1 - 5 мг/см3 по белку.

Оценка антибактериальной активности монокомпонентных образцов (содержащих один из антисептических компонентов: доксициклин, метронидазол или хлоргексидин биглюконат) и средства Колмедокс показала, что значение минимальной подавляющей концентрации (МПК) средства для St. aureus и E.coli составило соответственно 0,20±0,05 мкг/см3 и 0,40±0,05 мкг/см3, то есть увеличилось более чем в 10 раз по сравнению с монокомпонентными образцами. Взаимоусиливающий эффект от применения комбинации антисептических веществ, вероятно, обусловлен тем, что они имеют различный механизм действия на микробную клетку. Так, доксициклин действует за счет подавления белкового синтеза, взаимодействуя с ЗОз-субъединицами рибосом микробных клеток, метронидазол нарушает репликацию ДНК и ингибирует внутриклеточное дыхание чувствительных микроорганизмов, а хлоргексидин нарушает осмотическое равновесие бактериальных клеток (потеря калия, фосфора).

Таким образом, на основе проведенных исследований было подобрано оптимальное соотношение компонентов, которые обеспечивают получение опытно-лабораторных образцов средства с выраженной антимикробной активностью (рабочее название Колмедокс). Средство Колмедокс представляет собой светло-коричневую жидкость в форме раствора, содержащего докси-циклина 20 мг, метронидазола 20 мг, хлоргексидина биглюконата 4 мг, лидо-каина 5 мг, коллагена 1 мг и растворителя (триэтиленгликоль) до 1,0 см3.

В условиях ООО «Ветбиохим» согласно разработанному технологическому регламенту нами было изготовлено 4 опытно-производственных серии средства Колмедокс.

Опытно-производственные серии средства Колмедокс в форме раствора готовили в реакторе (рис. 2) с соблюдением правил асептики. Для приготовления средства в реактор вносили триэтиленгликоль и стерилизовали его при температуре 100 °С путем пропускания пара через «рубашку» реактора. Далее охлаждали растворитель до температуры 80 °С путем пропускания через «рубашку» реактора холодной воды. В реактор вносили при постоянно работающей мешалке лидокаин, метронидазол, затем снижали температуру до 40 °С и вносили доксициклин, гель коллагена и раствор хлоргексидина биглюконата. Растворение очередного компонента осуществляли после полного растворения предыдущего. Для удаления растворимого кислорода из раствора проводили барбатацию азотом. Далее проводили фасовку готовой формы во флаконы. Приготовленное таким образом средство Колмедокс контролировали по всем показателям качества, предусмотренных СТО и передавали ветспециалистам для определения терапевтической эффективности.

антисептического средства Колмедокс

Изучение динамики высвобождения in vitro действующих веществ из антисептического средства Колмедокс

Одним из критериев оценки активности препаративной лекарственной

формы является определение скорости высвобождения антисептических компонентов и продолжительности их действия на месте введения.

При изучении in vitro влияния коллагена на продолжительность высвобождения трех антисептических компонентов из препаративной формы нами было испытано более двадцати образцов, содержащих коллаген в концентрациях 1 мг/см3 и 5 мг/см3, и образцы, не содержащие коллаген.

Все испытуемые образцы содержали доксициклина 20 мг/см3, метронида-зола 20 мг/см3 и хлоргексидина биглюконата 4 мг/см3.

I* ** ДОДНЦВНИИ * ивтрояишяд Ютрд H-JH1HH |

-в-

№2.

ж.

—

ж

время высвабюкде-яия, час

*• довстщиап« »"мярсиндаа! 1Лоу«кшдщ||

Рис. 3. Динамика высвобождения доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата in vitro из образцов антисептического средства: а - без коллагена; б - содержащего 1 мг/см3 коллагена; в - содержащего 5 мг/см3 коллагена

В результате проведенных исследований (рис.3) было установлено, что из трехкомпонентных образцов полное высвобождение доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата в диализный раствор происходило за 36 часов. Внесение в состав коллагена приводит к значительному замедлению диффузии. Так при внесении коллагена 1 мг/см3 высвобождение антисептиче-

13

ских компонентов замедляется на 24 часа по сравнению с вариантом без коллагена. А при содержании коллагена 5 мг/см3 в средстве Колмедокс в течение 72 часов элиминировало только около 70% антисептических компонентов.

Этот факт свидетельствует о том, что внесение коллагена приводит к образованию нестойких биокомплексов с антисептическими компонентами, что влияет на скорость их диссоциации и последующей диффузии через диализную мембрану.

В результате проведенных исследований установлено также, что наиболее прочным оказался биокомпозит коллаген-хлоргексидин биглюконат.

Изучение in vitro антимикробной активности антисептического кол-лагенсодержащего средства Колмедокс

На основании проведенных микробиологических исследований было установлено, что антисептическое средство Колмедокс является высокоактивным средством в отношении штамма золотистого стафилококка и кишечной палочки при значении минимальной подавляющей концентрации (МПК) 0,25±0,07 м к г/см3 и 0,40±0,06 мкг/см3 соответственно. Менее выраженным антимикробным действием характеризуется препарат в отношении штаммов Streptococcus pneumonia (3,12±0,50 мкг/см3), Salmonella dublin (4,57±0,23 мкг/см3), Pasteurella multocida (10,40±0,27 мкг/см3). Штаммы грибных культур оказались более устойчивы к испытуемому средству и значение МПК составило в среднем 23,4±0,22 мкг/см3.

Токсикологические параметры антисептического коллагенсодержащего

средства Колмедокс

Изучение острой токсичности. Изучение параметров острой токсичности антисептического средства Колмедокс показало, что при однократном внут-рижелудочном введении предельно допустимого объема (1см3) средства все опытные мыши оставались живы. Поэтому готовили образец средства Колмедокс с суммарным содержанием антисептических компонентов 220 мг/см3, т.е. в 5 раз превышающих оригинальные (44 мг/см3).

В результате исследований установлено, что при внутрижелудочном введении лекарственного средства Колмедокс мышам среднесмертельная доза (ЛД50) составила 6667±58,5 мг/кг массы животного.

На основании полученных данных антисептическое коллагенсодержащее средство Колмедокс в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.007-76 можно отнести к 4 классу опасности - вещества малоопасные (ЛД50 > 5000 мг/кг).

Изучение субхронической токсичности. Изучение параметров субхронической токсичности антисептического средства Колмедокс проводили на беспородных белых мышах массой 18 - 20г. Препарат вводили ежедневно в течение 21 суток перорально при помощи зонда в желудок в следующих дозах: 1 группе - 1/5 от ЛД50 (1333,4 мг/кг); 2 группе - 1/10 от ДЦзо (666,7 мг/кг); 3 группе - 1/20 от ЛД50 (333,35 мг/кг); 4 группе (контрольная) - композиция ли-докаин - коллаген - триэтиленгликоль без антисептических веществ. Наблюдение за клиническим состоянием мышей вели на протяжении 31 суток от начала опыта.

Клинический анализ крови показал, что уровень гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов не изменялось на протяжении эксперимента, т.е. статистически значимых изменений не выявлено.

В результате проведенных исследований установлено, что изменений массы органов при применении средства Колмедокс мышам не выявлено в сравнении с контролем.

Изучение раздражающего действия на слизистые оболочки (конъюнк-тивальная проба). Исследование раздражающего действия антисептического средства Колмедокс проводили на 5 кроликах породы шиншилла. Дня постановки пробы 1 каплю антисептического средства Колмедокс вводили глазной пипеткой с вытянутым тонким концом в конъюнктивальный мешок правого глаза животных, а в левый глаз (контрольный) животных закапывали 1 каплю физиологического раствора. Реакцию учитывали через 15 минут и спустя 24,48 часов по внешнему виду конъюнктивы и по реакции склеры.

В течение всего срока наблюдения видимых изменений со стороны слизистой оболочки, как левого глаза (контрольного), так и правого (опытного) не выявлено. Отмечали лишь небольшое слезотечение, роговица глаза была прозрачная, без видимых изменений. Таким образом, изучаемое средство не обладает раздражающим эффектом при воздействии на слизистые.

Стабильность средства Колмедокс в процессе хранения

Хранение - этап технологического цикла товародвижения от выпуска готовой продукции до потребления или утилизации, цель которого — обеспечение стабильности исходных свойств или их изменение с минимальными потерями. Таким образом, при разработке новых лекарственных средств устанавливаются параметры стабильности, как действующего вещества, так и готовой формы препарата.

Органолептические, физико-химические и биологические свойства антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс исследовали по таким показателям качества как внешний вид, цветность, номинальный объем, безвредность, подлинность и массовая доля метронидазола, доксициклина, хлор-гексидина биглюконата, лидокаина, коллагена.

Опытные серии средства Колмедокс были заложены на хранение в течение 24 месяцев при температуре 4-6°С и 25°С. Пробы отбирали каждые 6 месяцев и проводили испытания по выше указанным показателям качества.

В течение всего опыта такие показатели как внешний вид, цветность, номинальный объем, безвредность оставались практически без изменений.

Так же установлено, что в течение всего срока наблюдения содержание лидокаина и коллагена изменяется незначительно, т.е. разница в значениях не достоверна и находится в пределах ошибки.

Определение подлинности и количественного содержания антисептических компонентов (метронидазола доксициклина и хлоргексидина биглюконата) в испытуемых образцах проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Полученные результаты показали, что в процессе всего срока хранения (24 месяца) средства Колмедокс при температуре 4-6°С не происходит достоверных изменений содержания антисептических веществ (доксициклина - 19,5 -20,0 мг/см3; метронидазола - 19,7 - 20,0 мг/см3; хлоргексидина биглюконата -3,9 - 4,0 мг/см3). Изучение содержания антисептических веществ в препарате при хранении в условиях 25 °С также не выявило достоверных отклонений от нормативных требований к препарату.

Из этого можно сделать заключение о сохранности основных

характеристик препарата, а именно, концентрации и компонентного состава действующих веществ без существенных изменений как минимум 24 месяца. Вследствие чего принято, что срок хранения готовой формы средства Колме-докс составляет 2 года.

Терапевтическая эффективность антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс

Эффективность средства при лечении эндометритов крупного рогатого скота. Терапевтическую эффективность средства Колмедокс определяли совместно с ветспециалистами Н.А Костромитиновым (ООО «Ветбиохим») и Е.В.Ивановым (ООО «Торговый дом Простор») на крупном рогатом скоте в различных хозяйствах - Племзавод «50-лет СССР», Вологодская область; ОАО «МосМедыньагропром», Калужская область; ОАО «Совхоз им. Кирова», Лотошинский район МО; СКП «Радищево», Гагаринский район Смоленская область при непосредственном участии ветспециалистов этих хозяйств.

Для изучения сроков выведения доксициклина, метронидазола и хлоргек-сидина биглюконата в опыте были использованы 9 коров черно-пестрой породы 3-5 летнего возраста (Племзавод «50-лет СССР») с признаками серозного и серозно-гнойного эндометрита (зоотехнический брак). Антисептическое средство Колмедокс вводили внутриматочно по 50 см3 один раз в сутки в течение пяти дней. Через 3, 4 и 5 дней после последнего внутриматочно го введения средства отбирали пробы молока и проводили убой по 3 животных. По результатам послеубойного осмотра было установлено, что признаков эндометрита не отмечено у 7 туш коров, у 2 - не значительные изменения в виде небольших участков серозного воспаления эндометрия. Таким образом, применение средства Колмедокс имеет выраженный терапевтический эффект при лечении эндометритов у коров.

В отобранных образцах молока и мышечной ткани определяли остаточные количества антисептических веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. На 4 сутки после окончания применения средства в мышечной ткани не отмечено содержания хлоргексидина биглюконата, но обнаруживались метронидазол и доксициклин. На 5 сутки концентрация всех антисептических веществ была ниже предела чувствительности метода. На основа-

нии полученных результатов можно рекомендовать использование молока в пищевых целях и убой животных на мясо не ранее чем, через 5 суток после последнего внутриматочного применения средства коровам.

Эффективность средства при лечении рай у собак и кошек. Изучение терапевтической эффективности антисептического средства Колмедокс при лечении инфицированных ран разной степени тяжести у кошек и собак проводили ветспециалисты на базе научно-производственного центра ООО «Агро-ветсервис» Бурятской государственной сельскохозяйственной академии и в условиях ветеринарной клиники ООО «Вита».

Животным опытной группы на поверхность раны аэрозольно наносили антисептическое средство Колмедокс один раз в сутки, контрольной - эритромициновую мазь, сверху мази накладывали марлевую повязку. Курс лечения антисептическим средством Колмедокс составил 4-5 суток, а эритромициновой мазью - 5 - 9 суток.

Таким образом, в результате проведенных испытаний установлено, что при применении коллагенсодержащего антисептического средства Колмедокс происходит более ускоренный процесс заживления ран у кошек и собак.

ВЫВОДЫ

1. Оптимизирована схема получения коллагена из некондиционных шкур (порезы) крупного рогатого скота путем обработки щелочно-солевым раствором, содержащим 50 г/л гидроксида натрия, 10 г/л перекиси водорода и 3 г/л сульфида натрия в течение 30 ч при 25°С для удаления волосяного покрова и набухания коллагена с последующим промыванием и растворением в 1 М растворе уксусной кислоты.

2. Разработана технология изготовления комплексного коллагенсодержащего антисептического средства Колмедокс, содержащего в качестве действующих веществ 20 мг доксициклина, 20 мг метронидазола, 4 мг хлоргексиди-на биглюконата, 5 мг лидокаина, 1 мг коллагена и растворителя (триэтиленг-ликоль) до 1,0 см .

3. Установлено in vitro пролонгирующее действие коллагена на антисептические компоненты (доксициклин, метронидазол и хлоргексидин биглюконат). Скорость высвобождения антисептических компонентов обратно пропорцио-

нальна концентрации коллагена в препаративной форме. Внесение в композицию 1 мг/см3 коллагена приводит к задержке высвобождения антисептических компонентов на 24 часа по сравнению с контрольным вариантом (без коллагена). При концентрации коллагена 5 мг/см3 в антисептическом средстве, элиминация доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата замедляется в два раза - с 36 часов до 72 часов. Наиболее медленно высвобождается хлоргексидин биглюконат.

4. Средство Колмедокс по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к 4 классу опасности - вещества малоопасные, т.к. ЛД50 для белых мышей составляет 6667±58,5 мг/кг массы животного.

5. Антисептическое средство Колмедокс стабильно при хранении в диапазоне температур 4 - 25 °С в течение 24 месяцев.

6. Антисептические компоненты (доксициклин, метронидазол и хлоргексидин биглюконат) полностью выводятся из организма животных через 5 суток после последнего внутриматочного применения средства коровам.

7. Уровень рентабельности опытного производства комплексного антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс составил 37,08%.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты исследований включены в отчет «Разработка технологии изготовления и изучение фармакотоксикологических параметров лекарственного средства Колмедокс для внутриматочного применения животным» за 2009 г по договору о творческом и научно-техническом сотрудничестве от 14.01.09.

Результаты исследований использованы при разработке проекта нормативно-технической документации на антисептическое коллагенсодержащее средство Колмедокс в ветеринарной практике (СТО 76418883-0028-2009, технологический регламент и инструкция по применению).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Технология получения геля коллагена рекомендуется для производства лекарственных форм на основе коллагена.

2. Технология получения средства Колмедокс рекомендована для разработки аналогичных антисептических препаратов.

3. Новое комплексное антисептическое коллагенсодержащее средство Колмедокс может быть рекомендовано ветеринарным специалистам и владельцам животных для профилактики и лечения эндометритов крупного рогатого скота, и лечения инфицированных ран у домашних животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кис И.В., Сапожникова А.И., Костромитинов H.A. Изучение стабильности лекарственного средства Колмедокс - спрей в процессе хранения / Актуальные проблемы товароведения сырья и продуктов животного происхождения, промышленных и продовольственных товаров, экологии: межвед. юбилейный сб. науч. трудов - М.: ФГОУ В ПО МГАВМиБ. - 2009. - С. 210 - 215.

2. Кис И.В., Сапожникова А.И. Некоторые потребительские свойства антисептического коллагенсодержащего лекарственного средства Колмедокс // Ветеринарная медицина. - 2009. - № 4. - С. 54 - 56.

3. Кис И.В., Костромитинов H.A., Суменкова Е.А. Терапевтическая эффективность применения лекарственного средства Колмедокс-спрей при случайных ранах у мелких домашних животных / Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии: Сб. материалов конференции II съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. - Казань: ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». - 2009. - С. 108 - 111.

4. Кис И.В. Влияние коллагена на продолжительность высвобождения in vitro антимикробных компонентов из антисептического средства Колмедокс // Ветеринарная медицина.-2010,-№ 1. - С. 14-17.

5. Кис И.В., Сапожникова А.И., Костромитинов H.A. Технология получения препаративной формы антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс // Сельскохозяйственная биология. - 2010. - № 2. - С. 29-33.

6. Кис И.В., Баранцева О.В. Биотехнологические аспекты получения бело-ксодержащих препаратов из отходов сырья животного происхождения // Биотехнология: экология крупных городов: Сб. тезисов Московской международной научно-практической конференции. - М: ЗАО «Экспобиохим-технологии», РХТУ им. ДИ. Менделеева. - 2010. - С. 208 - 209.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 29.10.2010 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов (495)730-47-74, 778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кис, Ирина Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9 1.1 Коллаген как основной белок отходов кожевенного производства: получение и эффективное использование

1.1.1 Строение и свойства коллагена как основного белкового компонента отходов кожевенного производства

1.1.2 Способы получения коллагена

1.1.3 Использование коллагена в технологии производства лекарственных средств

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Усовершенствование технологии получения геля коллагена

2.2.2 Обоснование и оптимизация изготовления антисептического кол-лагенсодержащего средства Колмедокс

2.2.3 Изучение динамики высвобождения in vitro действующих веществ из антисептического средства Колмедокс

2.2.4 Изучение in vitro антимикробной активности антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс

2.2.5 Токсикологические параметры антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс

2.2.5.1 Изучение острой токсичности

2.2.5.2 Изучение субхронической токсичности

2.2.5.3 Изучение раздражающего действия на слизистые оболочки (конъюнктивальная проба)

2.2.6 Стабильность средства Колмедокс в процессе хранения

2.2.7 Терапевтическая эффективность антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс

2.2.7.1 Эффективность средства при лечении эндометритов крупного рогатого скота

2.2.7.2 Эффективность средства при лечении инфицированных ран у собак и кошек

3. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРОИЗВОДСТВА АНТИСЕПТИЧЕСКОГО КОЛЛАГЕНСОДЕРЖАЩЕГО

СРЕДСТВА КОЛМЕДОКС

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ 101 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 102 ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Минимальная подавляющая концентрация - МПК Высокоэффективная жидкостная хроматография - ВЭЖХ Смертельная (летальная) доза - ЛД

Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология получения антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс"

Актуальность темы. На протяжении последних лет многочисленные исследования направлены на получение растворов-коллагена из отходов* кожевенного производства и оценку возможности их использования в технологии приготовления лекарственных и косметических средств[3, 12, 34, 66, 69, 86, 92, 115, 154].

Коллаген - основной структурный белок соединительной ткани, выполняющий важные биохимические функции, основной из которых является репаративная. Повышенный интерес к коллагену обусловлен тем, что он объединяет многие свойства синтетических полимеров (прочность, эластичность, способность формоваться в различные структуры и др.)? а также свойства биологических полимеров (способность к биодеградации и образованию обратимых комплексов с лекарственными средствами, пролонгируя их действие по месту применения) при этом активно проявляется синергизм действия основы - носителя и инкорпонированных в нее лекарственных средств; биосовместимость; отсутствие токсичности, канцерогенности и пр. [1,2].

Продолжительность лечебного воздействия препаратов на основе коллагена зависит, в основном, от срока рассасывания полимера, определяющего его способность к биодеструкции [47]. Эти свойства коллагена позволяют получать пластические материалы направленного действия: ранозаживляю-щие, антибактериальные, гемостатические и другие[1, 12, 21, 34, 35, 86, 101, 115, 117, 129, 154].

Биокомпозитные материалы, созданные на основе коллагена, практически не имеют противопоказаний к применению за исключением индивидуальной непереносимости лекарственных средств, входящих в их состав. Рядом авторов [11, 20, 55, 74, 79, 94] предложены коллагенсодержащие препараты, которые в качестве антисептического компонента содержат либо док-сициклин, либо метронидазол или хлоргексидин биглюконат.

В настоящее время важным направлением в современной химиотерапии бактериальных инфекций является предотвращение или замедление развития резистентности микроорганизмов, а так же борьба с уже сформировавшейся лекарственно устойчивой микрофлорой. Поэтому разработка комплексных лекарственных средств пролонгированного действия, содержащих несколько совместимых компонентов - антибиотиков, антисептиков и др., способных при сочетании взаимно усиливать активность, расширять спектр антимикробного действия и которые будут иметь эффективность при поли-этиологичных заболеваниях животных является актуальной задачей.

Цель и задачи работы.

Цель работы заключается в разработке технологии получения антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Оптимизировать биотехнологические параметры получения геля коллагена из отходов кожевенного сырья.

2. Разработать технологию изготовления комплексного антисептического коллагенсодержащего средства.

3. Оценить активность in vitro и безвредность на лабораторных животных разработанного антисептического средства.

4. Определить стабильность средства в процессе хранения.

5. Изучить терапевтическую эффективность средства Колмедокс и установить сроки выведения остаточных количеств доксициклина, метронида-зола и хлоргексидина биглюконата из организма коров после курсового применения препарата.

6. Разработать проект нормативно-технической документации по изготовлению, контролю качества и применению антисептического коллагенсодержащего средства.

Научная новизна. Впервые разработана технология изготовления комплексного антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс. Средство представляет собой светло-коричневую жидкость в форме раствора, содержащего доксициклина 20 мг, метронидазола 20 мг, хлоргексидина биглюконата 4 мг, лидокаина 5 мг, коллагена 1 мг и растворителя (триэти-ленгликоль) до 1,0 см . Оптимизированы биотехнологические параметры получения коллагена из отходов кожевенного сырья. Установлено, что внесение в состав коллагена 1мг/см приводит к замедлению высвобождения in vitro антисептических компонентов на 24 часа по сравнению с контрольным вариантом (без коллагена). При содержании коллагена 5 мг/см3 в антисептическом средстве, элиминация доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата замедляется в два раза - с 36 часов до 72 часов.

Практическая значимость работы. Предложено новое коллагенсо-держащее антисептическое средство Колмедокс для лечения эндометритов у коров и инфицированных ран у домашних животных.

На базе ООО «Ветбиохим» совместно с ветспециалистами производственного подразделения разработаны технологические параметры и изготовлены четыре опытно-производственные серии средства Колмедокс.

Материалы исследований включены в проект нормативно-технической документации (СТО 76418883-0028-2009, технологический регламент изготовления и инструкция по применению).

Разработанный проект нормативно-технической документации, пакет документов на антисептическое средство Колмедокс, необходимых для-регистрации на территории РФ,- приняты в Россельхознадзоре и направлены для дальнейшего испытания, в ФГУ «ВГНКИ».

Апробация работы. Основные положения* и результаты работы были доложены и обсуждены на Н-ом съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токI сикологии» (Казань, 2009), материалы по разработке антисептического сред1 f ства рассмотрены и одобрены на заседании научно-методической комиссии ФГОУ ВПО МГАВМиБ 01.06.2009 и научно-производственном совещании ООО «Ветбиохим» 07.06.2010, на международной конференции, посвященной 90-летию со дня основания ФГОУ ВПО МГАВМиБ «Актуальные проблемы товароведения сырья и продуктов животного происхождения, промышленных и продовольственных товаров, экологии» (Москва, 2009), на Московской международной научно-практической конференции «Биотехнология: экология крупных городов» (Москва, 2010).

Публикации. По результатам исследований опубликовано 6 научных статей, в т.ч. 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 159 страницах машинописного текста, в т.ч. 40 страниц приложений и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практическое использование полученных научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы, включающий 160 источников, в том числе 50 иностранных. Материалы диссертации иллюстрированы 14 рисунками и 21 таблицей.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Кис, Ирина Владимировна

5. ВЫВОДЫ

1. Оптимизирована схема получения коллагена из некондиционных шкур (порезы) крупного рогатого скота путем обработки щелочно-солевым раствором, содержащим 50 г/л гидроксида натрия, 10 г/л перекиси водорода и 3 г/л сульфида натрия в течение 30 ч при 25°С для удаления волосяного покрова и набухания коллагена с последующим промыванием и растворением в 1 М растворе уксусной кислоты.

2. Разработана технология изготовления комплексного коллагенсодер-жащего антисептического средства Колмедокс, содержащего в качестве действующих веществ 20 мг доксициклина, 20 мг метронидазола, 4 мг хлоргек-сидина биглюконата, 5 мг лидокаина, 1 мг коллагена и растворителя (триэти-ленгликоль) до 1,0 см .

3. Установлено in vitro пролонгирующее действие коллагена на антисептические компоненты (доксициклин, метронидазол и хлоргексидин биг-люконат). Скорость высвобождения антисептических компонентов обратно пропорциональна концентрации коллагена в препаративной форме. Внесение в композицию 1 мг/см коллагена приводит к задержке высвобождения антисептических компонентов на 24 часа по сравнению с контрольным вариантом (без коллагена). При концентрации коллагена 5 мг/см в антисептическом средстве, элиминация доксициклина, метронидазола и хлоргексидина биглюконата замедляется в два раза - с 36 часов до 72 часов. Наиболее медленно высвобождается хлоргексидин биглюконат.

4. Средство Колмедокс по параметрам острой- токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к 4 классу опасности - вещества малоопасные, т.к. ЛД50 для белых мышей составляет 6667±58,5 мг/кг массы животного. I

5. Антисептическое средство Колмедокс стабильно при хранении в диапазоне температур 4 — 25 °С в течение 24 месяцев.

6. Антисептические компоненты (доксициклин, метронидазол и хлоргексидин биглюконат) полностью выводятся из организма животных j через 5 суток после последнего внутриматочного применения средства коровам.

7. Уровень рентабельности опытного производства комплексного антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс составил 37,08%.

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты исследований включены в отчет «Разработка технологии изготовления и изучение фармакотоксикологических параметров лекарственного средства Колмедокс для внутриматочного применения животным» за 2009 г по договору о творческом и научно-техническом сотрудничестве от 14.01.09.

Результаты исследований использованы при разработке проекта нормативно-технической документации на антисептическое коллагенсодержа-щее средство Колмедокс в ветеринарной практике (СТО 76418883-0028-2009, технологический регламент и инструкция по применению).

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Технология получения геля коллагена рекомендуется для производства лекарственных форм на основе коллагена.

2. Технология получения средства Колмедокс рекомендована для разработки аналогичных антисептических препаратов.

3. Новое комплексное антисептическое коллагенсодержащее средство Колмедокс может быть рекомендовано ветеринарным специалистам и владельцам животных для профилактики и лечения эндометритов крупного рогатого скота, и лечения инфицированных ран у домашних животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кис, Ирина Владимировна, Москва

1. Абоянц Р.К. Информация о препаратах, выпускаемых ОАО «Лужский завод «Белкозин» // ФАРМиндекс Практик. 2006. - Спец. выпуск. - С. 3.

2. Адамян A.A. Современные подходы к выбору средств местного лечения ран // Вестн. спорт, медицины России. 1996. - № 1 -2. - С. 46 - 47.

3. Амирбеков М., Иренков И.П., Аноятбеков М., Строганов И.В. Докси-ветин антибиотик пролонгированного действия // Ветеринария. — 1999.-№6.-С. 43-45.

4. Андреев С.М. Коллаген: структура и функции. Часть 1 // Косметика и медицина. 2001. - № 3 (22). - С. 41-46.

5. Андреев С.М. Коллаген: структура и функции. Часть 2 // Косметика и медицина. 2001. - № 4 (23). - С. 14-23.

6. Андреев С.М. Коллаген: структура и функции. Часть 3 // Косметика и медицина. 2001. - № 5 (24). - С. 34-42.

7. Баблоян, О.О. Модификация коллагена, создание и освоение новых технологических процессов его переработки: Автореферат дис. . д-ра техн. наук. М., 1984. - 50 с.

8. Ю.Багирова В.Л., Н.Б. Демина, Девяткина И.А. Современные аспекты использования вспомогательных веществ в технологии лекарственных-препаратов // Фарматека. 1998. - № 6. - С. 34 - 36.

9. П.Барер Г.М., Царев В.Н., Янушевич О.О., Соловьева О.В. Эффективность применения геля Коллост в комбинации с антибактериальными препаратами для лечения парадонтита // Парадонтология. 2002. - № 3 (24). - С.62 - 64.

10. Белевцова Д.В. Оценка качества коллагенсодержащих отходов и получаемых на их основе золей коллагена: Автореферат дис. . к-та техн. наук: 05.19.08; ФГОУ ВПО МГАВМиБ. М., 2006. - 24 с.

11. Белевцова Д.В. Способ получения коллазоля / Тез. докладов на XVI Международных Плехановских чтениях. М.: РЭА им. Г.В. Плеханова. -2003.-С. 285.

12. Белогуров В.В. Использование гидротированного коллагена для стимуляции репаративных процессов в кожно-мышечной ране у собак: Автореферат дис. . к-та вет. наук: 16.00.05; МГАВМиБ. М., 2005. - 21 с.

13. Белозёрова О.В., Д.Э. Умарбаева, Г.П. Зарецкая Перспективы использования коллагена для изготовления одежды // Швейная промышленность. 1994. - № 4. - С. 40.

14. Берченко Г.Н., Кесян Г.А. Влияние коллагеновых препаратов на заживление гнойных ран больных / Клинический опыт и проблемы кол-лагенопластики: Матер, науч.-практич. конф. М. — 1999. — С. 48 - 49.

15. Берниковский В.В. Биотехнологическая разработка некролитической мази и ее исследования: Автореферат дисс. . канд. биол. наук: 03.00.23 / В.В. Берниковский; Кубанский государственный аграрный университет. Краснодар, 2007. - 24 с.

16. Волкова Н.В., Лечение ожоговых ран у животных / Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. научных трудов молодых ученых. -М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ. 2009. - Выпуск 5. - С. 55.

17. Волова Л.Т., Колсанов Л.В., Кириленко А.Г. Биотехнологические аспекты получения коллагенсодержащих раневых покрытий и их применение в клинике // Вестник новых медицинских технологий. 2002. -Т. IX, №4. -С. 36-38.

18. Гамко Л.М., Черненок В.В. Мазь на коллагеновой основе при лечении ран у кроликов // Ветеринария. 2007. - № 3. - С. 45 - 47.

19. ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. Введен 10.03.76. М.: Издательство стандартов, 1977.-5 с.

20. ГОСТ 51417-99 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина. Метод Къельдаля. Введен 22.12.99. — М.: Издательство стандартов, 2002. 8 с.

21. ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности. Введен 31.03.89. М.: Издательство стандартов, 1989.- Юс.

22. Государственная фармакопея. Одиннадцатое издание, выпуск 1. Общие методы анализа / Гл. редактор Машковский М.Д. М.: Медицина, 1987.-С. 198.

23. Государственная фармакопея. Одиннадцатое издание, выпуск 2. Общие методы анализа: лекарственное растительное сырье / Гл. редактор Машковский М.Д. -М.: Медицина, 1987. С. 140.

24. Иванова Л.А., Сыченников И.А., Кондратьева Т.С. Коллаген в технологии лекарственных форм. М.: Медицина, 1984. - 112 с.

25. Истранов Л.П., Дронов А.Ф., Абоянц Р.К. Получение, характеристика и клиническое изучение пленочных покрытий для лечения ран // Клини-ко-экспериментальное обоснование новых методов диагностики и лечения. М., 1975. - С. 11 - 13.

26. Истранов Л.П., Дронов А.Ф., Агуреева Н.В. Свойства коллагеновых покрытий (материалов) при лечении кожных ран // Экспериментальная и клиническая стоматология. 1975. — Т. 6. - С. 103 — 109.

27. Истранова Е.В. Технологические аспекты изучения лекарственных форм метилурацила на основе коллагена: Автореферат дис. . к-та фарм. наук. М., 1977. - 24 с.

28. Кальницкая О.И. Ветеринарно-санитарный контроль остаточных количеств антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения: Автореферат дис. . д-ра вет. наук: 16.00.06; ГОУ ВПО МГУПБ. М., 2008. - 45 с.

29. Каспарьянц С.А., Сапожникова А.И., Гордиенко И.М., Месропова Н.В. Получение растворов коллагена I типа: Методические указания. М.: MB А, 1984.-6 с.

30. Каспарьянц С.А., Гордиенко И.М. Практикум по курсам технологии кожи и меха и основам товароведения готовой продукции. — М.: MB А. 1989.-С. 40-42.

31. Каспарьянц С.А. Технология кожи и основы товароведения готовой продукции. -М.: МВА. 1986. - 176 с.

32. Кис И.В. Влияние коллагена на продолжительность высвобождения in vitro антимикробных компонентов из антисептического средства Кол-медокс // Ветеринарная медицина. 2010. - № 1. - С. 14-17.

33. Кис И.В., Сапожникова А.И. Применение коллагенсодержащего антисептического препарата Авикол-Н при заболеваниях кожи бактериальной и грибковой этиологии // Ветеринарная медицина. 2007. — № 4. -С.15- 17.

34. Кис И.В., Сапожникова А.И., Костромитинов H.A. Технология получения препаративной формы антисептического коллагенсодержащего средства Колмедокс // Сельскохозяйственная биология. 2010. - № 2. -С. 29-33.

35. Кендрью Дж. Структурные белки I // В кн.: Белки. T.III, ч. II "Биохимия белковых веществ" / Под ред. Г. Нейрата и К. Бейли. М.: Ин. лит-ра, 1959.-С. 339-453.

36. Красильников А.П., Адарченко A.A., Собещук О.П. Сопоставление антибактериальной активности антибиотиков и антисептиков // Госпитальные инфекции и лекарственная устойчивость микроорганизмов. — М., 1992.-С. 72-74.

37. Кузин М.И., Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция. М.: Медицина, 1990.-592 с.

38. Лагунин С.В, Виолин Б.В., Сазонова Е.М. Изучение токсичности комплексного антибактериального препарата на основе доксициклина и линкомицина в опытах на цыплятах // Ветеринарная практика. 2005. №2(29).-С. 48, 49.

39. Лившиц B.C. Лекарственные формы на основе биодеструктурирую-щихся полимеров (обзор) // Хим. фарм. журнал. 1991. - Т.25. - № 1. -С. 15-18.

40. Лукьяновский В.А., Каспарьянц С.А., Филлипов Ю.И. Коллагеновые средства для лечения ран у животных // Ветеринария. — 1979. — № 10. С. 83-84.

41. Мазуров В.И. Биохимия коллагеновых белков: Учеб. Пособие. М.: Медицина, 1974. - 284 с.

42. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ. / Под общ. ред. Р.У. Хабриева. — М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. С. 41 - 65.

43. Методы экспериментальной химотерапии / Под ред. Г.Н. Першина. — М.: Медицина, 1971. С. 526 - 530, 532.

44. Минкин Е.В. Влияние предварительной обработки коллагена на его растворение. Дис. . канд. техн. наук М., 1964. - 156 с.

45. Митронин А.В., Царев В.Н. Клинико-микробиологическая оценка эффективности эндоканального применения биоактивного геля Коллапан в лечении хронического периодонтита // Новое в стоматологии.- 2004. №5. С.50 - 60.

46. Михайлов А.Н. Коллаген кожного покрова и основы его переработки. -М.: Легкая индустрия, 1971. 528 с.

47. Михайлов А.Н. Химия и физика коллагена кожного покрова. М.: Легкая индустрия, 1980. - 232 с.

48. МУК 4.2.1980-04. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. Введены 4.03;2004. М., 2004.

49. Мурадян Р.Г. Современные методы местного лечения ран, стимулирующие репаративные процессы: Экспериментально-клиническое исследование: Автореф. дисс.д-ра мед. наук. — М., 1996. — 46 с.

50. Никитин В.Н., Перский Н.Э., Утевская Л.А. Возрастная и эволюционт ная биохимия коллагеновых структур; Киев: Наукова думка, 1977. -279 с.61.0гвоздин В.Ю. Управление качеством: Основы теории и практики. -М.: Дело и Сервис, 2007. С. 107.

51. ОСТ 42-2-72 Лекарственные средства. Порядок установления сроков годности. Введен 01.07.73. М., 1972. - 6 с.

52. Павлов С.А. Шестакова И.С., Касьянова A.A. Химия и физика высокомолекулярных соединений в производстве искусственной кожи, кожи и меха. М.: Легкая индустрия, 1976. — 527 с.

53. Падейская E.H. Препараты группы 5-нитроимидазола для лечения анаэробных и протозойных инфекций // Инфекции и антимикробная терапия. 2000. - Т. 2. - №. 4.

54. Панкрушева Т.А., Автина Н.В., Панкрушев A.A., Нестерова A.B., Медведева O.A. Разработка лекарственных препаратов для лечения воспалительных заболеваний пародонта // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2003. - №2. - С. 214 - 219.

55. Пат. 2181009 Россия A23J1/10, C12N1/00. Пищевой белковый продукт и способ его изготовления / Ермишина И.Г.; Бреславский В.П. № 2000120781/13. Заявл. 10.08.00. Опубл. 10.04.02.

56. Пат. 2094999 Россия МПК6 А 22С 13/00, С 07К 1/36. Способ получения коллагена / Эйнар Шеландер № 93058205/13. Заявл. 04.10.93. Опубл. 10.11.97.

57. Пат. 2214827 Россия. МКИ6 Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма / Л.В. Кухарева, Б.А. Парамонов, И.И. Шамолина, Е.Г. Семенова № 2002107219/13. Заявл. 15. 03.02. Опубл. 27.10.03.

58. Пат. 2031597 Россия. МКИ6 А 23J 1/10, С 09Н 1/00, С 14С 1/08. Способ получения коллагенового золя / Каспарьянц С.А., Сапожникова А.И., Месропова Н.В., Гордиенко И.М. и др. № 5022810/13. Заявл. 12.02.92. Опубл. 27.03.95. Бюл.№9.

59. Пат. 2129805 Россия. МКИ6 Способ получения коллазоля / Каспарьянц С.А., Сапожникова А.И., Белевцова Д.В. №97121210/13. Заявл. 30. 12.97. Опубл. 10.05.99. Бюл.№13.

60. Пат. 1709613 Россия. МКИ6 А 61К 38/17. Способ получения коллагена / Левина О.И., Чернышева Л.З., Истранов Л.П.- № 4801871/14. Заявл. 12.04.90. Опубл. 10.11.95.

61. Пат. 2088240 Россия МКИ А61К35/32. Способ получения препарата для активации репаративного остеогенеза / Соловьев Л.Г., Владимирова Е.В., Чечеткина М.М. № 93055814/14. Заявл. 09.12.93. Опубл. 27.08.97.

62. Пат. ЕР0233429 А61К47/00, 61 КЗ7/12 Фармацевтическая композиция, содержащая смесь коллагена и антисептическое или противовоспалительные вещества и эффективный процесс для ее производства — № ЕР 19860402920. Заявл. 23.12.86. Опубл. 29.09.93.

63. Полонская М.В., Новикова Л.С., Беляева Г.В. Коллаген — вспомогательное вещество в производстве готовых лекарственных средств // Материалы научного форума общественного движения «Здоровый мир». Спб, 1998.-С. 131.

64. Попов Е.М., Демин В.В., Шибанова Е.Д. Проблема белка. В 3 т. Т.2. Пространственное строение белка. М.: Наука, 1996. — 480 с.

65. Попов Е.М., Демин В.В. Проблема белка. В 3 т. Т.З. Структурная «организация белка.— М.: Наука, 1997. — 604с.

66. Преображенский H.A., Гольдман И.И., Шехтер А.Б., Абави М.З. Применение коллагена в реконструктивной хирургии среднего уха // Вестник отоларингологов. — 1973. — № 3. С. 57 — 62.

67. Райх Г. Коллаген. М.: Лёгкая индустрия, 1969. — 327 с.

68. Сапожникова А.И. Биотехнологические возможности использования коллагена / Тез. докладов на IV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство". М.: РЦ "Фармединфо". - 1997. - С. 289-290.

69. Сапожникова А.И. Разработка и оценка качества продукции на основе фибриллярных белков из отходов сырья животного происхождения: Автореферат дисс. . доктора техн. наук: 05.19.08; МГАВМиБ. М., 1999.-50 с.

70. Серов В.В., Шехтер A.B. Соединительная ткань. М.: Медицина, 1981. -312 с.

71. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань: функциональная морфология и общая патология. — М.: Медицина, 1981. — 310 с.

72. Слуцкий Л.И. Матрикс соединительной ткани как механохимическая конструкция // Теоретические вопросы травматологии и ортопедии. — М.,1990. — С. 3 19.

73. Соболев А. Д. Основы вариационной статистики. М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2003.- 112 с.

74. Стешов Г.И. Влияние щелочно-солевых обработок на изменение структуры коллагена и его растворимость: Автореф. дис. . канд. техн. наук. -М., 1965.-21 с.

75. Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты: Получение, состав, применение. — М.: Аграрная наука, 2000. 258 с.

76. Титов Е.И., Апряксина С.К., Митасева Л.Ф., Новикова В.Н. Рациональный способ переработки коллагенсодержащих субпродуктов // Мясная индустрия. 2006. - № 9. - с. 28 - 30.

77. Уварова Е.В., Латыпова Н.Х. Применение препарата Гексикон® в лечении воспалительных заболеваний влагалища неспецифической этиологии // Репродуктивное здоровье детей и подростков. 2007. - № 4. — С. 48-54.

78. Уруджев P.C. Термическая усадка коллагена. М.: Лёгкая индустрия, 1976.- 183 с.

79. Фадеев A.C., Левачев С. М., Измайлова В.Н. Мономолекулярные слои коллагена // Вестник Моск. ун-та. Химия. Сер.2. - 1999. - Т.40. - № 4. -С. 270-275.

80. Филимонов A.A., Колсанов A.B., Толстов A.B. Комбинированные антимикробные средства и коллагенсодержащие раневые покрытия в лечении и профилактике местных инфекционных осложнений при ожоговой травме // Комбустиология. 1999. - № 018868.

81. Френкель С .Я., Гинзбург Б.М. Структурная механика ориентированных полимерных систем. Проблемы физико-химической механики волокнистых и пористых дисперсных систем. Рига: Зинатне, 1967. - С. 45-80.

82. Фридрихсберг Д.А. Курс коллоидной химии: Учеб.для вузов. 2-е изд., перераб. и доп. - Л.: Химия, 1984. - 368 с.

83. Фролов Ю.Г. Курс коллоидной химии. Поверхностные явления и дисперсные системы. М.: Химия, 1989. - 464 с.

84. Хилькин A.M., Шехтер А.Б., Истранов Л.П., Леменев В.Л. Коллаген и его применение в медицине. М.: Медицина, 1976. — 228 с.

85. Хилькин A.M. Шехтер А.Б., Леменев В.Л., Дронов А.Ф. Лечение скальпированных ран и ожогов кожи коллагеновыми пленками в эксперименте // Экспериментальная хирургия. — 1972. — № 6.

86. Чадаев А.Л., Климиашвили А.Д. Современные методики местного медикаментозного лечения инфицированных ран // Хирургия. — 2003. -№ 1.-С. 54-56.

87. Черненок В.В. Лечение случайных ран с применением мази на колла-геновой основе: Автореферат дисс. . канд. вет. наук: 16.00.05; ФГОУ ВПО «БГСХА». Брянск, 2008. - 19 с.

88. Шагаев Д.В., Лукьяновский В.А., Колесниченко И.С. Применение диметола с коллагеновой пастой при дерматитах собак // Ветеринария. 2005. - № 5. - С. 35, 36.

89. Шестакова И.С. Структура и свойства коллагенов. — М.: Легкая индустрия, 1968.

90. Шехтер А.Б., Истранов Л.П. Современные представления о структуре коллагена // Архив патологии. 1970. - Т.32. - № 7. - С. 320.

91. ИО.Янгирова 3.3. Разработка и изучение иммунобиологических свойств нового лекарственного средства Бактиспоринпласта: Автореферат дисс. . канд. биол. наук: 03.00.07, 14.00.25; НПО «Мигроген» МЗ. -Уфа, 2005.-20 с.

92. Barenberg S.A., Filisko F.E., Geil Р.Н. Ultrastructural deformation of collagen // Connect. Tiss. Ree. 1987. - vol. 6. - P. 25 - 35.

93. Benjamin H.B., Palowski E., Becke A.B. Collagen as temporary dressing and blood vessel replacement r // Arch. Surg., 1967. vol. 165. - № 7. P. -186-191.

94. Borasky R., Shiraony C. Collagen fibril structure as deduced from elec-tronoscopic date // J. Am. Leath. Chem. Ass., 1965. Vol. 60. P. 148-154.

95. By ers P.H. Preparation of type III procollagen and collagen from rat skin // Biochemistry. 1974. - Vol. 13. - № 25. - P. 243 - 247.

96. Chen J.M., Kung C.E., Feairheller S.H., Brown E.M. Collagen Structure // J. Protein Chem. 1991. - Vol. 10. - № 7. - P. 535.

97. Cerny L.C., Graus J.D., James H.A. A viscometric study of dilute collagens solutions // J.Biorheology. 1970. - Vol. 6. - P. 161- 168.

98. Chvapil M. Industrial users of collagen / In: Biochemistry of collagen // Ed. by Ramachandran G., Reddi A. New York - London, Plenum Press,1976.- P. 247-269.i

99. Chvapil M., Kroneuthal P.L., van Winkle W. Medical and Surgical Applications of collagens // Inter. Rev. Connect. Res., 1973. Vol. 6. - P. 3 - 6.

100. Chvapil M., Krajicek M. Some chemical and biological characteristics of a new collagen-polymer compound material // J. Biomed. Mat. Res. 1969. -Vol.3.-P. 315 - 332.

101. Copenhagen H. A new collagen tape in reconstructive surgery // Brit I Surg., 1965. Vol. 52. - № 9. - P. 697 - 699.

102. Cotte J., Dumas H. Le collagene et ses possibilités technologiques // J.pharm. belg. 1991. - Vol. 46. - № 3. - P. 201- 210.

103. Cox R.W., Grant R.A., Home R.E. The structure and assembly of collagen fîbrills. I. Native collagen fibrills and their formation from tropocollagen // J. Roy. Micr. Soc.-1967.-Vol. 87. -№ l.-P. 123- 143.

104. Crosby N.T. D.C. Higgs, R. Reed, C. Stainsby. Preparation et propriétés des collagènes solubilises // Revue Technique des Yndustrics du euir, 1963. -№ 3. P. 54-66.

105. Davis N.R., Resin O.M. Nature collagen crosslinks // Biochem. biophys. Res. Comimm. 1974. - Vol. 61. - № 2. - P. 723 - 728.

106. De Balso A.M. Collagen gel in osseous defects Oral Surg. // Oral Med. Oral Pathol. Nov., 1976. № 42(5). - P. 652 - 659.

107. Drake M.P., Davison P.F., Bumps S., Schmitt P.O. Action of Proteolytic Enzymes on Tropocollagen and Insoluble collagene 11 Biochemistry. — 1996. Volt 5. - № 1. - P. 301 - 312.

108. Dunn M.G., Bellincampi L.D., Tria A.J., Zawadsky J.P. Preliminary development. of collagen-PL A composite for ACL reconstruction, // J.Appl.Polym. Science. 1997. - Vol. 63. - № 11. - P. 1423 - 1428.

109. Eastoe J.E. Composition of collagen and allied proteins. Treatise on Collagen // Acad, Press., N. Y., 1967. Vol. 1. - P. 5 - 37.

110. Fietzek P.P., Kuhn K. The primary structure of collagen / In: Int. rev. of connect, tissue res. / Ed. by Hall D.A., Jacksoon D.S. // Academic Press.-New York, London, 1976. Vol. 7. - P. 1-60.

111. Fraser, R.D.B., MacRae T.P., Suzuki E. The molecular and fibrilar structure of collagen / In: Biochemistry of collagen // Ed. by Ramachandran G., Reddi A. New York - London, Plenum Press., 1976. - P. 179-206.

112. Friess W. Collagen biomaterial for drug delivery // Eur J Pharm Biof-harm, 1998.-Vol. 45(2).-P. 113-136.

113. Gallop P.M., Paz M.A. Posttranslational protein modifications with special attention to collagen and elastin // Physiol, Rev., 1975. Vol. 55. - P. 418486.

114. Gallop P.M., Seifter S. Preparation and properties of soluble collagen // Methods in Enzymology, N.Y., 1963. Vol. 6. - P. 635- 641.

115. Greco R.M., Locono J., Ehriich H-R. Hialuronic-acid stimulates human fibroblast proliferation within a collagen matries //J.CM Physiol., 1998. — Vol; 177.-№3.-P. 465 -473.

116. Grillo H.C., Gross J. Thermal reconstitution of collagen from solution anal the responge to its heterologenous implantation // J. Surg. Res., 1962. — Vol. 2.-P. 69-77. '

117. Hashimoto K. ultrastructure of freeze-cleaved dermal collagen // Acta der-mato-venerol., 1974. Vol. 54. - P. 214 - 248.

118. Holmgren S.K., Taylor K.M., Bretscher L.E., Raines P.T. Code for collagens stability deciphered // Nature., 1998. P.666-667.

119. Jeyanthi R., Rao K., Panduranda S. Controlled release of anticancer drugs from collagenpoly (HEMA) hydrogel matrices // J.Cjntr / Release., 1990. -Vol.13.-№ 1.-P. 91-98.

120. Kollagen als hydroplastishes polyampholytmaterial // Leder., 1997. Vol. 48.-№2.-P. 34.

121. Krajicek M., Lastava V., Chvapil M. Collagen fabric vascular prothesis. Biological and morphological experience // J. Surg. Res. 1964. - Vol. 4. -P. 290 - 296.

122. Kuhn K., Schuppler G., Kuhn J. Alteration in the behaviour of collagen with progressive purification and after treatment with proteolytic enzymes // Structure and Function of connective skeletae Tissues — Butterworths, London, 1965.-P. 64-69.

123. Lee C.H., Singla A., Lee Y. Biomedical applications of collagen // Int J Pharm, 2001.-Vol.-221 (1-2).-P. 1-22.

124. Marggrander K. Collagenous proteins as exipients for the improvement of the technological and sensory properties of meat productsand ready meals // Fleishwirtshaft, 1996. Vol. 76. - № 7. - P. 746-753.

125. Miller E.J., Matucas V.J. Biosynthesis of collagen // Fed. Proc., 1974. -Vol. 33. № 5. - P. 1197 - 1204.

126. Parry D.A.D., Craig A.C., Barnes G.R.G. Fibrillar collagen in connective tissue / In: Fibrous proteins: scientific, industrial and medical aspects // Ed. by Parry D.A.D., Creamer L.K. New York-London. Academic Press., 1979.-Vol. 1.- P. 77-88.

127. Pat. 5106949 USA 61 К 35/32. Collagen compositions and methods for preparation thereof // Howard E. Schain, Choon P. Koh, David G. Conlin, Linda M. Buckley -№ 407465. Заявл. 15.09.89. Опубл. 21.04.92.

128. Perlick E. Kollagen und Thrombozyten // Folia haemat., 1969. Bd.92. -№ 4. - S. 533-535.

129. Pinnel Sh.R., Murad S. Collagen / In: Biochemistry and physiology of the skin. Part III. Dermal macromolecules and their metabolism / Ed. by Goldsmith L.A. // Oxford Univ. Press., 1983. Vol. 1. - P. 385-410.

130. Ramachandran G., Ramakrishan C. Molecular structure of collagen / Ed. by Ramachandran G., Reddi A. // In: Biochemistry of collagen New York - London, Plenum Press., 1976. - P. 45 - 84.

131. Ramachandran G.N. Structure of collagen at the molecular lever. Treatise on collagen at the molecular lever - N.Y. Acad. Press., 1967. - V.I. -P.103 -105.

132. Rao K.P. Recent develores of collagen-based materials for medical applications and drug delivery systems // J. Biomater Sci Polim Ed. 1995. № 7 (7).-P. 623-645.

133. Reddi A.H. (1985) Implant-stimulated interface reactions during col-lageous bone matrix-induced bone formation // Biomed. Mater. Res., 1985. -№ 19(3).-P. 233-239.

134. Rich A., Crick F.H.The molecular structure of collagen // J. Mol. Biol., 1961. Vol. 2. - № 2. P. - 483 - 488.

135. Sasaki N., Odajima S. Elongation mechanism of collagen fibrils and forcestrain relations of tendon at each level of structural hierarchy // J. Biomechanics., 1996. Vol. 29. - № 9. - P. 1131 - 1136.

136. Shirai K., Wada K. Uber die struktur von schweine haut kollagen // Das Leder., 1983.-Vol. 34.-№ 12.-P. 197-201.

137. Trelstad R.L. Vertebrate collagen teterogeneity // Developm. Biol., 1976. Vol. 38. - № 2. - P. 13 - 15.

138. Vaculik J. Die kollagenstructur von rindhant und rind leder bei betrachtung mit hilfe der ruster electronenmikroskopie // Leder., 1983. — Vol. 18. — № 3. -P. 132- 138.