Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Сравнительная токсикологическая характеристика антисептических эмульсий для сосков вымени коров

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная токсикологическая характеристика антисептических эмульсий для сосков вымени коров"

На правах рукописи

ГОЛОВИН ИВАН АЛЕКСАНДРОВИЧ

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АНТИСЕПТИЧЕСКИХ ЭМУЛЬСИЙ ДЛЯ СОСКОВ ВЫМЕНИ КОРОВ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005569514

27 САП 2015

Казань 2015

005569514

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П. А. Столыпина»

Научный руководитель доктор ветеринарных наук, профессор

Рахматуллин Эмиль Касымович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, проректор по

научной и инновационной деятельности Башкирского государственного аграрного университета Чудов Иван Владимирович;

кандидат биологических наук, заведующая сектором по производству лекарственных средств Федерального центра

токсикологической, радиационной и биологической безопасности Матросова Лилия Евгеньевна.

Ведущая организация ФГБОУ ВПО «Омский аграрный университет

им. П.А. Столыпина»

Защита диссертации состоится «14» июля 2015 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г. Казань, Научный городок - 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Электронный вариант автореферата и текста объявления о защите размещен на официальном сайте ВАК РФ www.vak.ed.gov.ru. текст диссертации, автореферата и отзыв научного руководителя - на официальном сайте ФГБУ «ФЦТРБ-В1ШВИ» www.vnivi.rf

Автореферат разослан «13» мая 2015 г. Ученый секретарь диссертационного /У* _

совета, кандидат ветеринарных наук в.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Вступление России в ВТО теоретически и фактически открывает широкие возможности для продвижения отечественной молочной продукции на европейский и другие зарубежные рынки пищевых продуктов. В таких условиях для российских молокоперерабатывающих предприятий многократно возрастает необходимость производства безопасной, качественной и конкурентоспособной молочной продукции. Только гарантированно безопасный и качественный продукт может создать достойную конкуренцию на молочном рынке.

Получению молока высокого санитарного качества способствует комплекс санитарно-гигиенических мероприятий, к которым относятся: соблюдение чистоты в коровниках и доильных залах, правильная подготовка доильной посуды и личная гигиена доярок. Повышению санитарного качества молока также способствует применение для обработки вымени коров дезинфицирующих растворов (0,5-1% раствора хлорамина, однохлористого йода, моклцедезинфицирующего средства «Дезмол» и др.). Однако частое их применение вызывает сухость, потерю эластичности, бактерицидных свойств кожи вымени и приводит к появлению трещин. Трещины кожи вымени коров возникают на сосках в результате плохого ухода за выменем, снижения эластичности кожи, при сырой и грязной подстилке, грубом доении. Исследованиями многих авторов показано, что сильное поражение сосков в виде гиперкератоза с радиальными трещинами и зиянием соскового канала составляет от 1,2 до 7% [6,7, 8,10,11].

Непроникающие ранения сосков вымени коров имеют широкое распространение и довольно часто осложняются маститами, приводящими к снижению молочной продуктивности и ухудшению качества молока.

В связи с этим разработка антисептических эмульсий для профилактики сухости кожи, потери эластичности, появления трещин на сосках вымени и изучение их токсикологии являются актуальной задачей ветеринарной науки. В ОАО завод «Ветеринарные препараты» для профилактики, лечения трещин и сухости кожи вымени коров выпускается эмульсия антисептическая и разработана эмульсия СВК.

Степень разработанности темы. Проблема повышения качества и безопасности молока указывает на целесообразность разработки лекарственных средств для профилактики и лечения поражения сосков коров в виде гиперкератоза с радиальными трещинами и зиянием соскового канала [9].

По данным литературы, патологические изменения в области верхушки соска являются широко распространенной проблемой, в связи с чем разработка методов профилактики и лечения сосков молочной железы коров является важной задачей [7,10,11].

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение токсикологических свойств эмульсии антисептической и эмульсии СВК.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Определить параметры острой токсичности, кумулятивные свойства эмульсии антисептической и эмульсии СВК для лабораторных животных.

2. Установить, обладают ли эмульсия антисептическая и эмульсия СВК аллергизирующим, гепатотоксическим свойствами.

3. Изучить действие эмульсии антисептической и эмульсии СВК при многократном введении.

4. Изучить эмбриотоксическое и тератогенное действие эмульсии антисептической и эмульсии СВК.

5. Исследовать в динамике гематологические и биохимические показатели крови коров после применения эмульсии антисептической и эмульсии СВК.

Научная новизна. Впервые проведены комплексные исследования по изучению токсикологических свойств антисептической эмульсии для сосков вымени коров и эмульсии СВК. Показано, что согласно ГОСТу 12.1.007-76 эмульсии относятся к 4-му классу опасности. Установлено отсутствие у эмульсий эмбриотоксических, тератогенных, кумулятивных, аллергизирующих свойств, негативного влияния на организм животных и на антитоксическую функцию печени при многократном введении. Показано, что многократное применение эмульсий не влияет на продуктивность коров.

Теоретическая и практическая значимость работы. В представленной работе на основе экспериментальных исследований решена прикладная задача в области ветеринарной фармакологии, токсикологии и животноводства, имеющая важное народно-хозяйственное значение. Научно обоснованы отбор, применение и токсикологическая безопасность антисептической эмульсии СВК для лечения, профилактики сухости, трещин и ран сосков вымени коров.

Результаты исследований использованы при составлении двух нормативно -технических документов, которые находятся на стадии утверждения в установленном порядке.

Методология и методы исследований. Предметом исследований служила реакция организма животных на накожное применение эмульсии антисептической для сосков вымени коров и эмульсии СВК.

Объектом исследования являлись кровь, эмбрионы, мыши, крысы, морские свинки, кролики, коровы содержавшихся в условиях вивария и животноводческих комплексов.

Исследования проводились с использованием следующих методов:

1) Токсикологических - определение острой токсичности (ЛД5о) при однократном накожном или пероральном введении, кожно-раздражающего действия и местно - раздражающего действия на глаза, для изучения влияния препаратов на антитоксическую функцию печени, выявлению аллергизирующих свойств, изучение эмбриотоксического, тератогенного действия и кумулятивных свойств [1, 3, 5, 13, 16].

2) Клинических - определение температуры тела, числа ударов пульса и дыхательных движений в минуту, изменение массы тела, среднесуточные привесы по данным взвешиваний; визуальный осмотр кожи, волосяного покрова, слизистых оболочек; время, через которое животные после введения гистамина погибали; продолжительность гексеналового сна; беременности и патологоанатомическая картина при вскрытии.

3) Морфо-биохимических - взятие крови у опытных и контрольных животных, осуществляемое путем: декапитации - у белых крыс, из яремной вены - у коров, из ушных сосудов - у кроликов.

Определение количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкоцитарной формулы проводили общепринятыми методами. Содержание общего белка определяли по биуретовой реакции. Определение альбумина в сыворотке крови проводили по реакции с бромкрезоловым зеленым. Содержание глюкозы устанавливали унифицированным глюкозооксидазным методом по окислению ортотолидин. Мочевину устанавливали унифицированным методом по цветной реакции с диацетилмонооксимом. Концентрацию холестерина в сыворотке крови устанавливали унифицированным методом по реакции с уксусным ангидридом (метод Илька). Концентрацию общего билирубина устанавливали колориметрическим методом с 2,4-дихлоранилином, креатинина -по цветной реакции Яффе. Активность щелочной фосфатазы устанавливали унифицированным методом по гидролизу п-нитрофенилфосфата. Активность АлАТ и АсАТ определяли унифицированным динитрофеннлгидразиновым методом. Активность лактатдегидрогеназы в сыворотке крови - по реакции 2,4 -динитрофенилгидрозином (метод Севела - Товарека) [12, 19].

4) Эмбриологических - по методу Вильсона [5] в модификации отдела эмбриологии НИИЭМ АМН СССР [5] и Даусона [20].

5) Математических - обработку экспериментально полученного цифрового материала проводили методом вариационной статистики с применением критерия достоверности по Стъюденту. Для этой цели использовали прикладное программное обеспечение 8ТАТ15Т1СА. Работу проводили согласно практическому руководству для пользователей [14].

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: - токсикологические свойства эмульсии СВК и антисептической эмульсии для сосков вымени коров;

отсутствие у эмульсий эмбриотоксических, тератогенных, кумулятивных, аллергизирующих свойств, негативного влияния на антитоксическую функцию печени и на продуктивность коров.

Степень достоверности и апробация материалов диссертации

Исследования выполнены на большом поголовье животных. Результаты экспериментов не вызывают сомнений как по достоверности полученных данных, так и по выводам, сделанным на их основе. Основные научные положения, выводы и рекомендации диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных заседаниях ученого совета, ежегодных научно-практических конференциях Ульяновской государственной

сельскохозяйственной академии в 2009 - 2011 годах, на Международной научно-практической конференции «Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность» (г. Казань, 2010), на 3 съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармациии» (г. Санкт-Петербург, 2011.), на 2-ой Международной научно - практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути решения» (г. Ульяновск, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 114 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, списка сокращенных терминов, списка использованной литературы и приложений. Работа иллюстрирована 17 таблицами. Список литературы включает 208 источников, в том числе 90 зарубежных авторов.

2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1 Материалы и методы исследований

Тема диссертации является разделом плановой научно-исследовательской работы кафедры морфологии, физиологии и фармакологии Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии им. П.А. Столыпина, имеющей номер государственной регистрации 01.200.31.65.80. Экспериментальная часть работы выполнена в 2009-2013 гг. на кафедре морфологии, физиологии и фармакологии, в лаборатории клинической фармакологии и лекарственной токсикологии факультета ветеринарной медицины.

В работе использовали препараты «Эмульсия антисептическая для сосков вымени коров» и «Эмульсия СВК».

Эмульсия антисептическая для сосков вымени коров (Antiseptic emulsion for udder teats of cows) — это антисептическое лекарственное средство в форме эмульсии для наружного применения, содержащее в 100 г действующего вещества дегмин 0,05 г, а в качестве вспомогательных веществ - кислоту салициловую 1,0 г, нейтральную эмульсионную основу (вазелиновое или парфюмерное масло, ОП-7 или ОП-Ю), спирт этиловый и воду дистиллированную. Лекарственное средство представляет собой эмульсию сметанообразной консистенции, белого или белого со светло-кремовым оттенком цвета.

Эмульсия СВК - лекарственный препарат в форме эмульсии, содержащий в качестве действующего вещества 1% хлоргексидина биглюконата и 1% салициловой кислоты, а в качестве вспомогательных веществ — спирт этиловый, нейтральную эмульсионную основу (вазелиновое или парфюмерное масло, ОП-7

или ОП-10, воду). По внешнему виду эмульсия СВК представляет собой однородную массу белого или светло-желтого цвета со специфическим запахом.

Изучение острой токсичности препаратов проводили на 92 белых беспородных крысах с массой тела 180-200 г и на 108 мышах массой 18-20 г. Для опыта использовались клинически здоровые животные, находившиеся в одинаковых условиях содержания и кормления. Испытуемый препарат вводили внутрижелудочно и накожно. Расчет ЛД50 и других показателей осуществляли методом пробит анализа, предложенного Литчфиддом и Уилкоксоном в модификации 3. Рота [1]. Наблюдения за экспериментальными животными после однократного введения препарата проводили в течение не менее 14 дней.

Изучение кумулятивных свойств эмульсий осуществляли методом субхронической токсичности по методу Лима с соавт. (1961) [21]. В опыте использовали 60 белых мышей массой 18-25 г, разделенных на 2 группы по 30 в каждой. Животным опытных групп эмульсии вводили перорально: в первые 4 дня - 1/10 от ЛД 5о, затем каждые последующие 4 дня дозу повышали в 1,5 раза. Животным контрольной группы вводили физиологический раствор в объеме 0,5 мл. Наблюдение за мышами проводили в течение 28 дней.

Для изучения влияния эмульсий на антитоксическую функцию печени использовали методику Д.Г. Розина (1964) [15]. Были скомплектованы 11 групп самок крыс двухмесячного возраста. Перед применением эмульсий животным опытных групп (48 голов) их тщательно взбалтывали до образования однородной массы и наносили 1 раз в сутки_тонким слоем в дозе 7,5 г/кг в течение 6 дней, слегка втирая в кожу живота легкими массажными движениями. В контрольной группе (22 голов) применяли вазелин. Раствор гексенала готовили непосредственно перед употреблением и инъецировали внутрибрюшинно в дозе 60 мг/кг массы тела через 1, 3, 5 и 24 часа после обработки белых крыс препаратом.

Изучение кожно-раздражающего и оценку интенсивности местно -раздражающего действия эмульсий на глаза проводили согласно методическим указаниям по оценке токсичности и опасности дезинфицирующих средств, разработанной Федеральным центром Госсанэпиднадзора Минздрава России в 2002 году (МУ 1.2.1105-02) [13].

Опыты по выявлению аллергизирующих свойств эмульсий проводили с помощью метода гистаминного шока [4]. Исследования проводили на 60 морских свинках массой 225 - 245 г, разделенных на 7 групп (6 опытных и 2 контрольные). Перед применением эмульсий животным опытных групп (60 голов) их тщательно взбалтывали до образования однородной массы и наносили однократно тонким слоем в дозе 7,5 г/кг, слегка втирая в кожу живота легкими массажными движениями. В контрольных группах (9 голов) применяли вазелин. Водный раствор гистамина вводили подкожно в дозе 5 мг/кг массы тела животного через 1, 2 и 3 часа после применения эмульсии. Мы учитывали время, через которое животные после введения гистамина погибали. Если испытуемое вещество обладает антигистаминным действием, то

предварительное введение его предотвращает смерть животных, при гистаминной активности происходит обратное - гибель животных наступает быстрее.

Действие антисептических эмульсий при многократном применении мы изучали на кроликах и коровах. Изучение действия эмульсий при многократном введении проводили на 18 кроликах породы Шиншилла (самцы, первоначальная масса тела 2,1-2,4 кг). Кролики были разделены на 3 группы. Животным 1-й группы (6 голов) накожно наносили эмульсию антисептическую в дозе 0,5 г/кг, животным 2-й группы (6 голов) накожно наносили эмульсию СВК в дозе 0,5 г/кг, кроликам 3-й группы (контроль, б голов) накожно наносили вазелин в дозе 0,5 г/кг. Препараты применяли в течение двенадцати месяцев путем накожного нанесения в выстриженную боковую область. Для изучения влияния эмульсии на биохимические и гематологические показатели крови коров при многократном применении были скомплектованы 3 группы коров 3-х летнего возраста. Перед применением эмульсию тщательно взбалтывали до образования однородной массы и после доения животных наносили 2 раза в сутки тонким слоем (1,0-1,5 г) на каждый сосок вымени, слегка втирая в кожу легкими массажными движениями. Перед очередным доением проводили санитарную обработку вымени. В 1-ой опытной группе (9 голов) применяли в течение б месяцев эмульсию СВК. Коровам 2-ой опытной группы (8 голов) применяли эмульсию антисептическую в течение 6 месяцев. Коровам контрольной группы (9 голов) в течение 6 месяцев наносили вазелин. Изучение показателей проводили перед введением препаратов и через 30 дней, 3 и 6 месяцев после их применения препаратов. С целью характеристики общего состояния животных во время проведения опытов при изучении действия антисептических эмульсий определяли количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, СОЭ, количество общего белка, альбумина, билирубина, мочевины, холестерина, глюкозы, креатинина, активность аспартат - и аланинаминотрасферазы, щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы. Концентрацию гемоглобина в крови определяли гемиглобинцианидным методом, скорость оседания эритроцитов микрометодом (способ Панченкова). Подсчет эритроцитов и лейкоцитов проводили в камере Горяева, определение общего белка проводили по биуретовой реакции, альбумина в сыворотке крови -по реакции с бромкрезоловым зеленым [12, 19]. Содержание глюкозы устанавливали унифицированным глюкозооксидазным методом по окислению ортотолидина. Мочевину определяли унифицированным методом по цветной реакции с диацетилмонооксимом [12].

Концентрацию холестерина в сыворотке крови определяли унифицированным методом по реакции с уксусным ангидридом (метод Илька). Концентрацию общего билирубина определяли колориметрическим методом с 2,4-дихлоранилином], креатинина - по цветной реакции Яффе [12]. Активность щелочной фосфатазы устанавливали унифицированным методом по гидролизу п-нитрофенилфосфата. Активность АлАТ и АсАТ определяли унифицированным динитрофенилгидразиновым методом. Активность

лактатдегидрогеназы в сыворотке крови устанавливали по реакции 2,4-динитрофенилгидрозином (метод Севела-Товарека) [12].

В основу изучения эмбриотоксического, тератогенного действия антисептических эмульсий и влияния на постнатальное развитие были положены «Методические указания по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию», одобренные фармакологическим комитетом МЗ СССР 10 января 1986 г. [5]. Опыты проводили на 47 белых беспородных крысах-самках массой 185-220 г и 15 самцах массой 230-240 г, что является общепринятым тестом для такого рода исследований. Для опытов использовали крыс только с нормальным эстральным циклом, который является показателем нормального функционирования репродуктивной системы. Эмульсии наносили накожно, ежедневно в дозе 0,5 г/кг. Различным группам животных препарат применяли с 1-го по 19-й день беременности. Контрольным животным с 1-го по 19-й день беременности накожно наносили вазелин. Результаты опытов учитывали на 20-й день беременности. Плоды взвешивали, измеряли их краниокаудальный размер, определяли пол. Затем плоды исследовали на наличие аномалий внутренних органов по методу Вильсона [22] в модификации отдела эмбриологии НИИЭМ АМН СССР [5] и костной системы после ее окрашивания по методу Даусона [20].

Влияние эмульсий на молочную продуктивность коров проводили на 24 лактирующих коровах черно-пестрой породы. Коровам 1 опытной группы (8 голов) применяли эмульсию антисептическую. После доения им наносили эмульсию 2 раза в сутки тонким слоем (1,0-1,5 г) на каждый сосок вымени, слегка втирая в кожу легкими массажными движениями. Коровам 2 опытной группы (8 голов) применяли эмульсию СВК. После доения животным наносили эмульсию СВК 2 раза в сутки тонким споем (1,0-1,5 г) на каждый сосок вымени, слегка втирая в кожу легкими массажными движениями. Перед применением эмульсин тщательно взбалтывали до образования однородной массы. В опытных группах препараты применяли в течение 30 дней. Коровам 3 группы (контрольная) (8 голов) применяли вазелин.

Данные экспериментальных исследований обрабатывали методом вариационной статистики. Для этой цели использовали прикладное программное обеспечение 8ТАТ18Т1СА. Работу проводили согласно практическому руководству для пользователей [14]. Статистическую значимость различий устанавливали по величине критерия Стьюдента.

2.2 Изучение острой токсичности антисептических эмульсий для лабораторных животных

Изучение острой токсичности антисептических эмульсий проводили на белых мышах и крысах при однократном накожном и внутрижелудочном введении. Эмульсию СВК при внутрижелудочном введении мышам изучали в диапазоне доз от 2500 до 10000 мг/кг живой массы. Лабораторным крысам

препарат вводили в диапазоне от 3400 до 10500 мг/кг живой массы. Эмульсию антисептическую для сосков вымени коров при внутрижелудочном введении мышам изучали в диапазоне доз от 1200 до 9500 мг/кг живой массы, лабораторным крысам препарат вводили в диапазоне от 4900 до 6550 мг/кг живой массы. Нормализация клинического состояния у выживших животных проходила в течение 8-10 суток. После накожного нанесения эмульсий явления токсикоза у животных не возникали. Определение показателей ЛД50 при накожном нанесении не представляется возможным, так как нанесение на кожу максимальной дозы не вызывало токсикоза подопытных крыс. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1. Параметры острой токсичности антисептических эмульсий для лабораторных животных

Параметры острой токсичности в мг/кг

ДДо

ЛД,6

ЛДзо'с

доверительными границами

ЛД84

ЛД„

Количество животных в опыте

Эмульсия СВК

Введение в желудок

Мыши

2500

3220 |5283 (4593,9-075,5)

8950

10000

60

__Крысы

3610 |б 100 (4149,7-8967)"

3400

10300

11200

36

Эмульсия антисептическая

Мыши

1200

2200 [ 4660(3538,5-5980) [ 7500

9500

48

Крысы

4900

5150 |5660(5240,7-1112,8)1 6160

6550

36

Дермальная токсичность

Крысы

Эмульсия СВК

>20212,5

10

Эмульсия антисептическая >17969 i

10

Анализируя данные таблицы 2, необходимо отметить то, что наиболее чувствительными к антисептическим эмульсиям являются лабораторные мыши. Наименее токсичной является эмульсия СВК.

На основании проведенных исследований можно сделать заключение, что по величине ЛД50 для лабораторных мышей при оральном и накожном введении эмульсии согласно ГОСТу 12.1.007.76 относятся к 4-му классу опасности [17].

2.3 Изучение кумулятивных свойств антисептических эмульсий

При многократном поступлении через малые интервалы времени вещество может накапливаться в организме (материальная кумуляция - кумуляция вещества) или вызывать суммирование эффекта, т.е. суммирование изменений, связанных с длительным действием яда (функциональная кумуляция). В опыте использовали 60 белых мышей массой 18-25 г, разделенных на 2 группы по 30 в каждой. Животным опытных групп эмульсии вводили перорально: в первые 4 дня - 1/10 от ЛД 5о, затем каждые последующие 4 дня дозу повышали в 1,5 раза. Животным контрольной группы вводили физиологический раствор в объеме 0,5 мл. Наблюдение за мышами проводили в течение 28 дней.

При ежедневном пероральном введении белым мышам эмульсии СВК в суммарной дозе 10038,4 мг на 1 кг массы тела не происходит гибель животных. Начало гибели мышей было отмечено при суммарной дозе эмульсии СВК 17171,6 мг/кг. Коэффициент кумуляции (Ккум) эмульсии СВК составил 7,4.

Ежедневное пероральное введение белым мышам эмульсии для сосков вымени коров в суммарной дозе 4600 мг на 1 кг массы тела не приводит к гибели животных. Начало гибели мышей было отмечено при суммарной дозе препарата 8740 мг/кг. Коэффициент кумуляции (Ккум) эмульсии для сосков вымени коров составил 4,6.

Согласно методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии, если К^тР»!, то это позволяет отнести их к группе лекарственных средств, у которых отсутствуют кумулятивные свойства [3]. Согласно методическим указаниям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ, если Ккум<1, то это кумуляция, если Ксум> 1, то привыкание [16].

2.4 Влияние антисептических эмульсий на антитоксическую функции] печени

Применение эмульсий белым крысам в дозе 7,5 г/кг массы тела в течение 6 дней не вызывало токсических явлений. Продолжительность гексеналового сна у животных в опытной группе через 3 часа после применения эмульсии антисептической была на 13,7% выше, чем в контрольной группе. В опытной группе у крыс через 5 часов после применения эмульсии антисептической длительность гексеналового сна была на 6,5% ниже аналогичного показателя контрольной группы. После применения эмульсии СВК длительность гексеналового сна в опытных группах через 3 и 24 часа была выше соответственно на 8,4% и 3,8%, чем показатель животных в контрольной группе.

Инъекция гексенала через 1, 3, 5 и 24 часа после применения препаратов не приводила к достоверному увеличению продолжительности сна подопытных крыс при сравнении с контрольными животными.

Таким образом, можно сделать заключение о том, что антисептические эмульсии не угнетают антитоксическую функцию печени.

2.5 Изучение кожно-резорбтивного и месгно-раздражающего действия антисептических эмульсий

Кожно-резорбтивное и местно-раздражающее действие антисептических эмульсий изучали на кроликах методом аппликации препарата на здоровую кожу. Изучение местного раздражающего действия антисептических эмульсий проводили на кроликах породы Шиншилла. На подготовленный участок кожи (8 х 9 см) справа наносили испытуемые препараты в дозе 0,5 г на указанную площадь, что составляет 0,25 г на кг веса. На участок кожи слева, который служил контролем, наносили вазелин в этой же дозе. Аппликации проводили ежедневно в течение 30 дней. За указанный период эксперимента ни в одном случае не наблюдали возникновения эритемы или отека. У всех животных было отмечено отсутствие раздражающего действия. Оценка интенсивности местно-раздражающего действия антисептических эмульсий на глаза представлена в таблице 2.

Таблица 2. Выраженность раздражающего действия антисептических эмульсий на

глаза кроликов

Выраженность раздражающего действия Средний суммарный балл Классы Эмульсия СВК Эмульсия штисептическ ая

Резко выраженное более 11 1

Выраженное 7-10 2

Умеренное 4-6 3

Слабое 1-3 4 1 1,5

Отсутствие 0 5

Анализируя данные таблицы 2, необходимо отметить, что антисептические эмульсии согласно классификации по выраженности раздражающих свойств относятся к 4 классу опасности, то есть обладают слабо выраженным раздражающим действием на глаза.

2.6 Изучение аллергизирующих свойств антисептических эмульсий

После накожного применения морским свинкам антисептических эмульсий общее состояние животных было удовлетворительным, явления токсикоза отсутствовали. В группе морских свинок через 1 час после применения эмульсии антисептической время наступления гистаминного шока было выше на 3% показателя животных контрольной группы. Через 3 часа после применения морским свинкам эмульсии антисептической время наступления гистаминного шока было на 4,8% меньше показателя контроля. Через 1 час

после нанесения морским свинкам эмульсии СВК время наступления гистаминного шока было выше на 7,4% показателя контрольной группы. Через 2 и 3 часа после применения морским свинкам эмульсии СВК время наступления гистаминного шока было ниже соответственно на 5,7% и 4,6% аналогичного показателя контрольной группы.

Проведенные исследования по изучению аллергизирующих свойств антисептических эмульсий свидетельствуют о том, что эмульсия СВК и антисептическая эмульсия не предотвращают гибели животных от гистаминного шока, но и не ускоряют ее по сравнению с контролем. Инъецирование гистамина через 1, 2 и 3 часа после введения препарата не приводит к достоверному изменению сроков гибели подопытных животных по сравнению с контрольными (Р>0,05).

Проведенные исследования позволяют сделать заключение о том, что антисептические эмульсии не обладают аллергизирующими свойствами.

2.7 Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия антисептических эмульсий

Применение лекарственных средств во время беременности является одним из факторов риска развития врожденных пороков у плода. Практически во всех странах является обязательным исследование возможного влияния лекарственных препаратов и пестицидов на репродуктивную функцию. Многократное дермальное нанесение антисептических эмульсий в дозе 0,5 г/кг с 1-го по 19-й день беременности не вызывало у животных токсических явлений. При вскрытии крыс на 20-й день беременности установили, что самки, получившие антисептические эмульсии, по числу желтых тел в яичнике, числу мест имплантаций и резорбций в матке, а также по количеству живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных животных. В группе беременных крыс, которым дермально применяли эмульсию антисептическую, предимплантационная и общая эмбриональная смертность была ниже показателей контрольной группы соответственно на 21,9% и 11,3%. Постимплантационная смертность превышала на 46,9% аналогичный показатель контрольной группы. При применении беременным крысам эмульсии СВК предимплантационная и общая эмбриональная смертность была выше аналогичных показателей контрольной группы - соответственно на 16,2% и 9,6%. Постимлантационная смертность была ниже на 36,9% аналогичного показателя контрольной группы. Показатели предимплантационной, постимплантационной и общей эмбриональной смертности в подопытных группах не отличались от показателей контрольной группы (Р>0,05). При изучении длины и массы эмбрионов задержка роста плодов не обнаружена. При внешнем осмотре у извлеченных из матки плодов значительных видимых аномалий развития не отмечено.

При исследовании внутренних органов и скелетов плодов дефектов их развития не выявлено.

На основании полученных данных можно сделать заключение, что при дермальном применении антисептические эмульсии эмбриотоксическим и тератогенным свойствами не обладают.

2.8 Влияние антисептических эмульсий на постнаталыюе развитие крыс

При накожном введении крысам антисептических эмульсий в дозе 0,5 г/кг с 1-го по 19-й день беременности не установлено влияния препарата на количество родившихся крысят и процент мертворожденных плодов. В результате исследований установлено, что роды у подопытных самок наступали, как правило, на 23-й день беременности, как и у контрольных животных. Численность помета у самок, обработанных антисептическими эмульсиями, была такой же, как и в контроле.

Масса тела и длина подопытных крысят мало отличались от контроля на протяжении всего периода изучения. Как в подопытных, так и в контрольных группах шерстный покров у крысят появлялся на 3-4-й день, ушные раковины отлипали на 4-й день, резцы прорезались на 9-й день, глаза открывались на 16 -17-й день.

Проведенные исследования свидетельствуют об отсутствии отрицательного влияния антисептических эмульсий на посгнатальное развитие крысят.

2.9 Изучение действия антисептических эмульсий при многократном

применении животным

Действие антисептических эмульсий при многократном применен™ мы изучали на кроликах и коровах. Двенадцатимесячное накожное нанесение антисептических эмульсий кроликам не вызвало у животных выраженных токсических явлений.

При дермальном применении антисептических эмульсий на протяжении 12 месяцев опыта происходят определенные колебания количества общего белка, мочевины, глюкозы, холестерина, билирубина, креатинина, активности ферментов АсАТ и АлАТ.

При использовании эмульсии СВК количество общего белка сыворотки крови было наиболее высоким через 3 месяца после нанесения препарата, что на 2,2% выше контроля; количество мочевины и холестерина было ниже контроля соответственно на 19,8% и 22,5%. Наиболее низкой активность ферментов АсАТ и АлАТ была через месяц после применения эмульсии, что на 5,9% и 10,4% была ниже показателей контроля. Однако эти колебания недостоверно отличались от показателей животных контрольной группы.

При применении антисептической эмульсии для сосков вымени коров кроликам на протяжении 12 месяцев суток опыта происходили определенные колебания количества общего белка, мочевины, глюкозы, холестерина, билирубина, креатинина, активности ферментов АсАТ и АлАТ. Количество общего белка сыворотки крови было наиболее низким через 6 месяцев после

использования антисептической эмульсии, что на 1,85% ниже контроля. Количество мочевины и АлАТ наиболее низким было через месяц после применения эмульсии, что составляло 1,58% и 23,4% ниже показателей контроля. Количество глюкозы, холестерина, билирубина и АсАТ было наиболее низким по сравнению с контролем после применения препарата в течение 12 месяцев, что составляло соответственно 16,3%, 20,3%, 18,1% и 6% ниже показателей контрольной группы. Однако эти колебания недостоверно отличались от показателей животных контрольной группы.

Таким образом, можно сделать заключение о том, что эмульсия СВК и антисептическая эмульсия не влияют на биохимические показатели крови кроликов при многократном введении.

Нанесение антисептических эмульсий на соски вымени коров в течение 6 месяцев не вызвало у животных токсических явлений. После нанесения антисептических эмульсий на соски вымени коров на протяжении 6 месяцев опыта происходят определенные колебания количества общего белка, альбумина, глюкозы, билирубина, мочевины, креатинина, активности ферментов: АсАТ, АлАТ.ЛДГиЩФ.

После применения эмульсии СВК количество общего белка сыворотки крови было наиболее низким через 3 месяца после использования препарата, что было на 5,6% ниже контроля. Количество глюкозы, мочевины, активность ферментов АлАТ, ЛДГ были низкими соответственно через 1, 3 и 6 месяцев после применения эмульсии СВК. В процентном выражении снижение глюкозы, мочевины, АлАТ и ЛДГ соответственно составило 4,2%, 3,8%, 21,8% и 5,6%. Активность АсАТ, количество билирубина и креатинина были высокими соответственно через 1 и 6 месяцев применения эмульсии. Процентное выражение повышения АсАТ, билирубина и креатинина соответственно составляло 13,8%, 21,7% и 17,8%. Наиболее низкой активность ферментов АсАТ и АлАТ была через месяц после нанесения эмульсии, что на 12,4% и 24% ниже показателей контроля. Однако эти колебания недостоверно отличались от показателей животных контрольной группы.

После применения антисептической эмульсии количество общего белка сыворотки крови было наиболее низким через 1 месяц использования препарата, что на 4,5% ниже контроля. Количество мочевины, активность ферментов ЩФ, АлАТ, АсАТ и креатинина были низкими соответственно через 1, 3 и 6 месяцев после применения антисептической эмульсии. Процентное выражение снижения мочевины, активности ферментов ЩФ, АлАТ, АсАТ и креатинина соответственно составило 3,4%, 3,2%, 15,1%, 6,3%, и 2,1%. Количество билирубина, глюкозы и активность ЛДГ были высокими соответственно через 3 и 6 месяцев применения эмульсии. Процентное повышение количества билирубина, глюкозы и активности ЛДГ относительно контроля соответственно составляло 8,3%, 4,5% и 15,4%. Однако эти колебания недостоверно отличались от показателей животных контрольной группы.

Таким образом, можно сделать заключение о том, что эмульсия СВК и эмульсия антисептическая не влияют на биохимические показатели крови коров при многократном применении.

2.10 Изучение влияния антисептических эмульсий на продуктивность

коров

Применение опытным коровам антисептических эмульсий в течение 30 дней не вызывало у животных токсикоза. Результаты исследований по сравнительному изучению влияния антисептических эмульсий на продуктивность коров представлены в таблице 3.

Таблица 3. Молочная продуктивность коров при использовашш перед их доением

антисептических эмульсий

Показатели Группы

Контрольная Эмульсия СВК Эмульсия антисептическ 1Я

Удой за 30 дней, кг 269,3±7,18 273,4±4Д 270,3±8,0

Среднесуточный удой, кг 8,97±0,24 9,1±0,14 8,91 ±0,32 ;

Стоимость препарата в рублях за кг 360 (вазелин) 365 380

Как видно из таблицы 3, у коров при использовагаш антисептических эмульсий перед доением в течение месяца происходят колебания среднесуточного удоя и удоя за 30 дней. Однако эти колебания были недостоверными при сравнении с продуктивностью коров контрольной группы. На основании проведенных исследований можно сделать заключение о том, что антисептические эмульсии не влияют на молочную продуктивность коров. Данные таблицы свидетельствуют о том, что по стоимости эмульсия СВК дешевле антисептической эмульсии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования являются научным обоснованием к применению и подтверждают полученные нами результаты о безопасности использования эмульсии СВК и эмульсии антисептической для сосков вымени коров. По стоимости эмульсия СВК дешевле эмульсии антисептической.

Подводя итог проведенным исследованиям можно сделать следующие выводы:

1. Величина ЛД50 при внутрижелудочном введении белым мышам: у эмульсии СВК - 5283 (4593,9-^6075,5) мг/кг, у эмульсии антисептической - 3340 4660(3538,5-ь5980) мг/кг. Величина ЛД50 при внутрижелудочном введении крысам: у эмульсии СВК - 6100 (4149,7-^8967) мг/кг, у эмульсии антисептической - 5660 (5240,7^6112,8) мг/кг. Это позволяет отнести эмульсию СВК и эмульсию антисептическую к четвертому классу опасности (согласно

ГОСТу 12.1.007.76).

2. Для эмульсии СВК коэффициент кумуляции при многократном оральном введении белым мышам составляет 7,4, для эмульсии сосков вымени коров - 4,6, что позволяет отнести их к препаратам, у которых отсутствуют кумулятивные свойства (если Ккум>1).

3. Эмульсия СВК и эмульсия для сосков вымени коров не обладают аллергизирующими свойствами; применение эмульсий крысам в дозе 7,5 г/кг массы тела в течение 6 дней не угнетает антитоксическую функцию печени; у эмульсий отсутствует раздражающее действие на кожу, они обладают слабо выраженным раздражающим действием на глаза.

4. Дермальное применение кроликам антисептических эмульсий в течение 12 месяцев не влияет на гематологические и биохимические показатели животных. После использования эмульсии СВК количество общего белка сыворотки крови недостоверно повышается через 3 месяца, что на 2,2% выше контроля; количество мочевины и холестерина несущественно понижается - на 19,8% и 22,5% соответственно ниже контроля. Активность АсАТ и АлАТ понижается через месяц после применения эмульсии -соответственно на 12,4% и 24% ниже показателей контроля. После дермального использования антисептической эмульсии количество общего белка сыворотки крови недостоверно понижается через 6 месяцев на 1,85% ниже контроля. Количество мочевины и АлАТ не существенно понижается через месяц после применения эмульсии - на 1,58% и 23,4% ниже показателей контроля. Количество глюкозы, холестерина, билирубина, АсАТ понижается через 12 месяцев применения -соответственно на 16,3%, 20,3%, 18,1% и 6%.

5. Нанесение антисептических эмульсий на соски коров в течение 6 месяцев не вызывает у животных токсических явлений. Применение антисептических эмульсий не влияет на количество общего белка, альбумина, глюкозы, билирубина, мочевины, креатинина, активности ферментов АсАТ, АлАТ, ДДГ и ЩФ.

5.1. Через 3 месяца применения эмульсии СВК количество общего белка сыворотки недостоверно понижается - на 5,6% ниже контроля. Количество глюкозы, мочевины, активность АлАТ и ЛДГ через 1, 3 и 6 месяцев соответственно снижаются на 4,2%, 3,8%, 21,8% и 5,6%. Активность АсАТ, количество билирубина и креатинина повышаются через 1 и 6 месяцев применения эмульсии. Активность АсАТ, количество билирубина и креатинина соответственно повышаются на 13,8%, 21,7% и 17,8%. Активность ферментов АсАТ и АлАТ понижается через месяц после применения эмульсии на 12,4% и 24% ниже показателей контроля.

5.2. После применения эмульсии антисептической для сосков вымени коров количество общего белка сыворотки крови недостоверно понижается через 1 месяц на 4,5% ниже контроля. Количество мочевины, активность ферментов ЩФ, АлАТ, АсАТ и креатинина недостоверно понижаются через 1, 3 и 6 месяцев после применения антисептической эмульсии соответственно на 3,4%, 3,2%, 15,1%, 6,3%, и 2,1%. Количество билирубина, глюкозы и активность

ЛДГ недостоверно повышаются через 3 и 6 месяцев применения на 8,3%, 4,5% и 15,4%.

6. Многократное дермальное нанесение антисептических эмульсий крысам с 1-го по 19-й день беременности не вызывает эмбриотоксического, тератогенного действия, не повышает показатели предимплантационной, постимплантационной, общей эмбрйональной смертности и не влияет на постнатальное развитие крысят.

7. Применение опытным коровам антисептических эмульсий в течение 30 дней не влияет на молочную продуктивность коров.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

I

1. Для профилактики и лечения сухости, трещин и ран сосков вымени корЬв рекомендуется применять эмульсию СВК и эмульсию антисептическую для сосков вымени коров. |

2. Полученные результаты рекомендуется использовать на курсах повышения квалификации зоотехнических и ветеринарных специалистов, п{ш чтешш лекций, проведении практических занятий со студентами по клинической фармакологии, фармакотерапии, акушерству и гинекологии. !

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В дальнейшем планируется внедрение в производство и в широкую практику эмульсию СВК для профилактики и лечения сухости, трещин и ран сосков вымени коров.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький.- Л.: «Медицина», 1963. - 262 с.

2. Боровкова, Е.И. Риск применения лекарственных средств во время беременности / Е. И. Боровкова // Российские аптеки. - 2006. - № 10/1.- С.26-28.

3. Ветеринарные препараты: Справочник/Составители: Л.П. Маланин, А.П. Морозов, A.C. Селиванова; Под ред. А.Д. Третьякова.- М.: Агропромиздат, 1988.-С. 247-249.

4. Гершанович, М.Л. Воспроизведение заболеваний животных для экспериментальных терапевтических исследований / М.Л.Гершанович. - Л., 1954. 40 с.

5. Дыбан, А.П. Методические указания по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию /А.П. Дыбан, В.Ф. Пучков, H.A. Чеботарь и др. - М.: МЗ СССР, 1986.-21с.

6. Елесин, A.B. Распространение заболеваний сосков в хозяйствах с различным уровнем продуктивности / A.B. Елесин, А. С. Баркова // Аграрный вестник Урала. - 2007. - № 6 (42). - С.76-79.

7. Елесин, A.B. Новое средство лечения при ранениях сосков вымени коров / А.В.Елесин, A.C. Баркова и др. // Аграрный вестник Урала. - 2009. - № 6 (60). - С.52-53.

8. Иванов, А. В. К изучению некоторых отдаленных последствий действия мази «Йодилин-масти» /А.В.Иванов, Г.М. Латыпова // Матер. Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию образования зооинженерного факультета. - Казань, 2005. - С. 297-299.

9. Колчина, А.Ф. Применение композиции с экстрактом календулы на основе "Силативита" при гиперкератозе сосков вымени у коров / А.Ф.Колчина, A.C. Баркова, A.B. Елесин и др. // Аграрный вестник Урала. - 2010. - № 9-10 - С.75-76.

10. Латыпова, Г.М. Фармако-токсикологическая оценка мази подилинмасти и ее применение для профилактики и лечения маститов у коров: Автореф. дис. канд. вет. наук,- Казань, 2007. - 22 е.

11. Латыпова, Г.М. Оценка эффективности мази «йодилин-масти» при профилактике мастита и трещин сосков у коров / Г.М. Латыпова, М.Я. Тремасов // Ветеринарный врач. 2006. - № 3. - С. 34-36.

12. Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики / И. П. Кондрахина. - М.: КолосС, 2004.- 520 с.

13. Оценка токсичности и опасности дезинфицирующих средств: Методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2002,- 36 с.

14. Солнцева, О.В. Анализ статистических данных в пакете STATISTICA / О.В.Солнцева, А.В.Севастьянов. Ульяновск. - ГСХА, 2004,- 43 с.

15. Рознн, Д.Г. Сравнительная оценка токсичности хлорпроизводных углеводородов жирного ряда по гексеналовому тесту на белых мышах / Д.Г.Розин // Фармакол. и токсикол. - 1964. - № 5. - С. 613-614.

16. Хабриев, Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р.У .Хабриев. - М., 2005. -827 с.

17. Хмельницкий, Г.А. Ветеринарная токсикология / Г.А.Хмельницкий, В.Н.Локтионов, Д.Д. Полоз. - 1987. - С. 132-140.

18. Щекина, И.А. Явление стимуляции пролиферации патологически измененной печени млекопитающих низкими дозами кислоты ацетилсалициловой / И.А.Щекива, А.И.Сливкин, Б.А.Гладков // Вестник ВГУ.- 2003. - № 1. - С.109-112.

19. Chromy, V. Codex Alimentarius Clin. Chem / V.Chromy, J. Fischer //.Pesticide Residues in Food,FAO/WHO. - 1993.-P. 107.

20. Dawson, A.B. Note on the staining of the sceletion cleared specimes with alizarin reds / A.B. Dawson // Stain Tecnol. - 1926. - №1. - P. 123-128.

21. Lim, K.S. Method for the evoluation of cumulation and tolezance bu the determination of acute and subchronic median effective doses / K.S.Lim, K.G.Rink, N.J.Jlass, E.A.SoaieEchagne // «Arch, intere. Pharmacodyn». - 1961. -P.130.

22. Wilson, J.G. Embryological considerations in teratology / J.G. Wilson //Teratology principles technigens - 1965. - P. 251 - 277.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Головин, И.А. Показатели естественной резистентности коров после применения эмульсии для сосков вымени / И.А. Головин, Э.К. Рахматушган // Матер. Междун. научно-практич. конф. «Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность». Казань. - 2010. - С .536-538.

2. Головин, И.А. Динамика гематологических показателей коров после применения эмульсии для сосков вымени коров / И.А.Головин // Матер. 2-ой Междун. научно — практич. конф. «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути решения». Ульяновск. -2010,-Том 4.-С.26-28.

3. Головин, И.А. Влияние эмульсии для сосков вымени коров на антитоксическую функцию печени / И.А. Головин // Матер. 3 съезда фармакол. и токсикол. России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармациии». Санкт-Петербург. - 2011. - С. 121-122.

4. Головин, И.А. Изучение аллергизирующих свойств эмульсии для сосков вымени коров / И.А. Головин, Э.К. Рахматуллин // Матер. 3 съезда фармакол. и токсикол. России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации». Санкт-Петербург. - 2011. - С.122-123.

Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК России

; 5. Рахматуллин, Э.К. Обоснование применения эмульсии СВК для профилактики болезни вымени животных / Э.К. Рахматуллин, И.А. Головин // Ветеринарный врач,-2013. -№2. -С.44 -46.

6. Рахматуллин, Э.К. Биохимическое обоснование действия антисептической эмульсии на животных / Э.К. Рахматуллин, И.А. Головин // Вестник РАСХН. -2013.-№2.-С. 76-77.

7. Рахматуллин, Э.К. Биологические аспекты использования антисептической i эмульсии для сосков вымени при машинном доении коров / Э.К. Рахматуллин, ¡И.А. Головин // Зоотехния. -2014. - №10. - С. 18 - 20.