Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Тегенарин, его воздействие на бактерии и фагоцитарный процесс у инфицированных животных

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Тегенарин, его воздействие на бактерии и фагоцитарный процесс у инфицированных животных"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

РОСТОВСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КИРСАНОВ Георгий Павлович УДК 615.33:576.8:616—022.7—08—001.8+612.112.3

ТЕГЕНАРИН, ЕГО ВОЗДЕЙСТВИЕ НА БАКТЕРИИ И ФАГОЦИТАРНЫЙ ПРОЦЕСС У ИНФИЦИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 03.00.07 — Микробиология

к. 4. л/ 069

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Ростов- н/Д

Т 9 б 9 г.

Работа выполнена в Мордовском ордена Дружбы народов государственном университете им. Н. П. Огарева.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор П. П. Денисенко, доктор медицинских наук, профессор А. К. Акатов,

доктор медицинских наук, профессор явшашшвт Х-П.Гл М/1ЕШК0

Ведущее учреждение: Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков.

Защита состоится « » _ 1989 г. в _ ча-

сов на заседании специализированного совета Д.074.20.02 при Ростовском ордена Дружбы народов медицинском институте (344022, Ростов-на-Дону, Нахичеванский пер., 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке мединститута. Автореферат разослан « » _1989 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

Н. Я. «органов

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В «Основных направлениях экономического и социальною развития СССР па 1986—1990 годы и на период до 2000 гола», одобренных на XXY1I съезде КПСС, предусматривается дальнейшее изыскание новых противомикробных эффективных лекарственных средств, препаратов.

Известно, что последние десятилетня ознаменовались открытиями антибиотиков и других биологических активных веществ.

Широкое распространение лекарственно устойчивых форм микроорганизмов, наличие у антибиотиков и химиопре-паратов токсических, аллергических и других побочных свойств диктует необходимость взыскания новых нетоксичных препаратов, обладающих антимикробными действиями и стимулирующим влиянием на макроорганизм. В связи с этим получение из паутины домашних пауков биологического препарата является актуальной задачей современной химиотерапии.

Цель работы

Целью исследований является получение препарата из паутины домашних пауков и изучение его воздействия на бактерии, макроорганизм п фагоцитарный процесс у инфицированных животных.

Задачи исследований

I. Изготовить препарат из паутины домашних пауков Tegenaria domestica, Tegenaria derhamii.

2. Изучить бактериостатическое п бактерицидное денет -пне препарата па различные виды микроорганизмов.

3. Изучить токсическое влияние препарата на организм различных животных.

4. Изучить фармакологическое действие препарата на организм животных.

5. Определить распределение препарата по органам лабораторных животных и пути выведения его из организма животных.

6. Провести лечение тегенарнном экспериментальных инфицированных ран у кроликов.

7. Изучить влияние препарата на клеточные реакции у белых мышей, инфицированных стрептококком.

8. Установить слияние тегенарнна на экспериментально зараженных стрептококком белых мышей.

9. Изучить влияние препарата на экспериментальную паратифозную инфекцию у белых мышей.

Научная новизна

1. Разработан метод получения препарата лз паутины домашних пауков, который назван тегенарнном.

2. Изучено влияние препарата на макроорганизм при различных способах введения его.

3. Установлено, что тегенарин в минимальной и максимальной дозах оказывает бактериостатическое и бактерицидное действие на грамотрицателыше и некоторые грам-положптельные бактерии.

4. Установлено лечебное действие препарата на инфицированные раны у кроликов.

Практическая ценность работы

Внедрение в практик}' препарата ведет к повышению эффективности лечения инфицированных ран у различных сельскохозяйственных животных.

Апробация работы

1. .Антибиотическое вещество из паутины обыкновенных синатроиньгх пауков, его воздействие на бактерии и на фа' гоцнтарный процесс у инфицированных животных. Кафедра эпизоотологии Казанского ветеринарного института им. Н.Э. Баумана. Казань, 1958.

2. Новый антибиотик животного происхождения, его влияние на клеточные реакции у мышей, зараженных стрептококковой инфекцией. Кафедра эпизоотологии Казанского ветеринарного института им. Н. Э. Баумана. Казань, 1959.

3. Новый антибиотик животного происхождения, его влияние на морфологический состав белой крови мышей. Кафедра микробиологии Казанского ветеринарного института им. Н. Э. Баумана. Казань, 1959.

4. Превращение одного типа микробов в другой под влиянием антимикробного вещества. Симпозиум, Томск, Томский университет, 1962.

5. Влияние антимикробного вещества, полученного из па-\тппы домашних пауков, на организм различных лабораторных животных. Симпозиум. Волгоград. Институт микробиологии и гигиены МЗ РСФСР, 1960.

6. Инфицированные рапы у кроликов и их лечение антибиотическим веществом из паутины обыкновенных еннатроп-пых пауков. Кафедра генетики и дарвинизма Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева. Саранск, 1960.

7. 'Гегенарин и его влияние на фагоцитарный процесс.. Ученый совет А^ордовского государственного университета им. Н. П. Огарева, Саранск, 1967.

8. Апробация диссертации проводилась па совместном заседании кафедр генетики и дарвинизма, ветеринарии, фармакологии, терапии, хирургии Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева и кафедры микробиологии Казанского мединститута, 1988.

На защиту выносится

Изготовление тегенарина из паутины, его очистка. Определение срока годности препарата. Изучение его бактерио-статического и бактерицидного действия в разных концентрациях на 206 штаммах и 15 видах микроорганизмов. Лечения ран.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из 9 глав, содержит 350 страниц машинописного текста и 68 таблиц, проиллюстрирована 57 рисунками. Список литературы включает 301 отечественных и 14 иностранных авторов.

II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Отлов, содержание, разведение, выкармливание и получение паутины от пауков

В разные периоды года был проведен отлов пауков на чердаках, складах, элеваторах, в кладовых, подвальных помещениях п жилых домах. После умерщвления отловленных особен эфиром устанавливали видовую принадлежность пауков по совокупности признаков, указанных в таблице-опре-делигеле С. А. Спасского (1968). Среди 920 пауков, отловленных в разное время года, преобладающими видами были домашние пауки.

Известна питательная среда для выкармливания пауков, в состав которой входит мясо животных или яичный белок, нарезанные на куски. Однако эти среды не стимулируют размножение пауков. Нами создана новая ферментативная жидкая питательная среда для выкармливания пауков в лабораторных условиях, стимулирующая размножение пауков. Эта питательная среда содержит мицелиальные биомассы отходов пеннциллпнового и стрептомицннового производства, обез-дрожженную барду — отходы производства пивных дрожжей и воду при следующих соотношениях исходных ингредиентов, вес в проц.: мицелий пенициллинового производства — 1,5—4,0, мицелий стрептомицннового производства — 1,5— 4,0, обездрожженная барда —3—б, вода — остальное.

Эти ингредиенты при рН 5,8—6,0 нужно выдерживать при +50°С в течение 5—6 суток.

Питательная среда готовится в больших количествах и хранится до 2 лет.

Ее применение позволяет стимулировать размножение пауков п получение паутины в максимально возможных количествах.

Температура в комнате н контейнерах, где были рассажены пауки, +26°С, оптимальная влажность 60%. Всего в опыте состояло 600 пауков, из которых 300 контрольных. Выкармливание опытных пауков проводили ежедневно четырехкратно ферментативной средой по 0,1 мл. Контрольная группа пауков выкармливалась пастеризованным коровьим молоком в разнозначных дозах. Опытные и контрольные среды постоянно хранились в холодильнике при +5°С. Пауки на этих средах выкармливались хорошо. Следует подчеркнуть, что контрольные пауки физиологически оставались слабо

развитыми и мало активными. Наблюдение в процессе выкармливания показало, что контрольные пауки за 24 часа продуцировали 230 мг паутины на каждого, тогда как опытные продуцировали 1 г 730 мг. Опытные пауки по сравнению с контрольными откладывали яйца нормально. Приплод и выживаемость потомства составляли 100%. Контрольные откладывали яиц меньше на 60%. Потомства их выживало только 23%.

Таким образом, изготовленная среда из ферментативного гидролизата в соответствующих соотношениях обеспечивает потребности взрослых пауков и их потомства. Она стимулирует продуцирование паутины, из которой по разработанной нами методике получают биологически активный препарат.

Методика изготовления и очистка тегенарина

После того, как был установлен видовой состав отловленных пауков, изучалась продуцированная ими паутина. Для этого поставлено 113 опытов. Отловленных пауков, размещенных по 40 особей в контейнере, выкармливали вышеуказанной средой.

В гомогенизаторе паутина измельчалась. Затем 100 г паутины помещали в 2-литровый стеклянный ферментер и заливали +40° этиловым спиртом (200 г). Смесь оставляли в ферментере при +20°С на 48 часов при непрерывном перемешивании. Далее из этой смеси с помощью ионообменной смолы (КУ-2-20) были получены однородные активные аминокислотные остатки полинептидных цепей белка, которые содержали в 1 мл изотонического раствора сухого вещества 1,8 мг тегенарина.

Для приготовления постоянного концентрированного экстракта (20%) производили сублимационную сушку жидких экстрактов в течение суток при +40°С. Сухой препарат е влажностью 5% получался из 20% экстракта путем высушивания его в вакууме сушильного шкафа при +40°С в течение 24 часов. Приготовленный экстракт имеет рН 7,0.

'Гегенарин является по своему составу постоянным специфическим веществом: представляет собой опалесцирую-щую жидкость коричневого цвета своеобразного запаха. Срок годности до 2-х лет. Условия хранения: в закрытых флаконах емкостью 50—100 мл при комнатной температуре в затемненном месте.

III. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ТЕГЕНАРИНА

Действие тегенарина на микроорганизмы

Для определения активности тегенарина изучено его действие на 206 штаммах, 15 видах микроорганизмов: брюшного тифа—3, паратифа А—3, паратифа В—4, вульгарного протея—10, кишечной палочки—100, дизентерии Григорьева— Шига—30, Флекснера—15, Зонне—6, эпидермального стафилококка—14, золотистого стафилококка—16, стрептококк пневмонии тина 1 — 1, вакцинных штаммов Ланге-45—1, Цен-ковского—1, «СТИ»-49—1, бациллы сибирской язвы—1.

Нами были установлены минимальная для всех микробов (0,001 мг/мл), суббактериостатическая (0,01 мг/мл) и бактериостатическая (0,1 мг/мл) дозы тегенарина.

Изучение бактерицидного действия препарата проводили по следующей методике: в 1 мл изотонического раствора смешивали суточные культуры микробов так, чтобы в каждой пробирке содержалось по два млрд. бактериальных клеток, затем в последовательном порядке добавляли 20% раствор тегенарина, разведенного в пробирках (1:25, 1:75, 1:200). Активность препарата устанавливали при экспозициях 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40 и 60 минут. По истечении указанного времени из каждой пробирки делали высев микропипеткой по 1 мл в 100 мл жидкого МПБ и инкубировали 3 суток при 37"С. Затем из бульона высевали на агар в чашки Петри по 0,5 мл культуры, которые оставляли при 37°С на 24 часа. Эти чашки размещали в стеклянный эксикатор, в который наливали кипяченой воды в объеме 200 мл для поддержания влажности. После указанного времени посевы оставались стерильными.

Установлено, что препарат действует на грамотрица-тельные и некоторые грамположнтельные микробы. Тегена-рин, имеющий в своем составе остатки аминокислот, нарушает структуру бактериальных клеток и ведет к их гибели.

Далее нами изучено влияние тегенарина в разных дозах на различные виды микроорганизмов. Минимальная доза (0,001 мг/мл) препарата при длительном пассаже на обычном агаре обуславливала появление нитевидных форм бактерий. При воздействии суббактериостатической (0,01 мг/мл) дозы у микробов увеличилась длина в 2,0—2,5 раза. Особенно характерные изменения наступали у брюшнотифозных палочек: они постепенно утрачивали подвижность, замедля-

лось их деление, обнаруживались шарообразные формы, прогрессировало удлинение размеров клеток. Несмотря на это, преобладающее большинство в мазках составляли клетки с исходной формой. Минимальная и суббактериостатическая дозы при кратковременном воздействии на микробов не вызывали в бактериальных клетках необратимых морфологических изменений. Пересевы культур на плотную питательную среду при 3 -4-суточном пассировании восстанавливали исходное состояние клеток.

Бактериостатнческая доза (0,1 мг/мл) тегенарина увеличила количество шарообразных клеток, однако, абсолютное большинство в мазках составляли нитевидные формы.

Бактерицидная доза (0,2 мг/мл) препарата in vitro вызывала глубокие изменения морфологической структуры бактерий: утрачивался общий контур, цитоплазма расчленялась на зерна, которые обнаруживались вне клеток.

При десятикратном (10 раз по 20 дней) пассировании возбудителен брюшного тифа, паратифа А, паратифа В, дизентерии Флекснера на обычной плотной питательной среде с тегепарнном в различных концентрациях, культивирование микробов в течение 200 суток наступала утрата агглю-тинабпльности в штаммах, что обусловлено нарушениями метаболических процессов в .микробных клетках. Пассирование микробов па этой среде с суббактериостатической дозой 0,01 мг/мл препарата выявило на агаре после седьмого пассажа мелкие колонии, снизившие ферментативную и агглю-тпнабильную активность. Образовавшийся качественно новый вариант колоний при культивировании в течение 200 суток (при ежедневных пересевах на агар без препарата) не изменяется.

Итак, под влиянием длительного воздействия тегенарина, входящего в состав плотной питательной среды в различных концентрациях, у отдельных бактерий постепенно наступает частичная утрата видовых признаков и отмечается формирование новых качественных биологических свойств микробов.

Изучено воздействие тегенарина на Е. coli при 10, 18, 25-кратном пассировании на плотной питательной среде. Для этого использовали 100 штаммов E.coli, выделенных из организмов животных и человека. В результате опыта установлена изменчивость бактерий в плотной питательной среде с препаратом в минимальной (0,001 мг/мл) и бактериостати-

ческой (0,1 мг/мл) дозах. Параллельно пассировали контрольные культуры на среде без препарата.

В процессе наблюдений установлено, что колонии микробов меняли свою структуру на плотной среде после 6—8-го пассажа п при суббактериостатической дозе препарата (0,01 мг/мл). Изменение развивалось последовательно: вначале наступало потемнение колоний, их ослизнение, затем они становились шероховатыми, увеличилось число мелких колоний. При микроскопии мазков, заготовленных из взвеси микробов в изотоническом растворе и окрашенных по Граму, обнаружено, что длина палочек по сравнению с контрольными штаммами увеличилась в 2,5—3 раза. Преобладали нитевидные бактерии обоих видов, в незначительном количестве выявлялись кокковые формы.

Наряду с указанными морфологическими изменениями у отдельных культур E.coli наступали изменения ферментативных свойств: ослабление ассимиляции лактозы, сахарозы, мальтозы, а также полная задержка образования индола. Так, из 20 штаммов после 10, 20, 25-кратного пассирования на плотной питательной среде с препаратом у 3-х культур имело место непостоянное кислотообразование на сахарозе; из штаммов (№№ 21—40 и 41—60) при аналогичных условиях у 11 культур кислотообразование на лактозе, сахарозе и мальтозе отсутствовало.

В контроле изучаемых микробов изменений ферментативной активности не отмечалось.

Несколько отличные изменения биохимической активности под влиянием указанных выше доз препарата имели место у остальных штаммов E.coli. Из 40 штаммов у 16 после 18, 25-кратного пассирования культуры стали образовывать кислоту на лактозе и приобрели ферментативную активность, характерную для E.coli. Перед исследованиями у E.coli была подтверждена стабильность, то есть они имели устойчивые свойства чистых культур. Необходимо отметить, что в результате длительного воздействия препарата наиболее устойчивые изменения культуральных признаков наступали у названных выше микробов, выделенных из организма человека.

При пассировании на обычной плотной питательной среде в течение 200 суток у измененных микробов риверсни не наступали. Никакие внешние факторы (длительное пассирование через организм белых мышей, культивирование на среде Хоттингера в течение 6—8 месяцев) не могли восстановить исходное свойство микробов.

Итак, под влиянием длительного воздействия тегенари-на на отдельные виды бактерий наступает утрата их отдельных признаков и формирование новых биологических свойств.

Действие тегенарина на макроорганизм

Изучение препарата производили на 25 кроликах, 25 кошках. 150 белых мышах. Определяли влияние тегенарина на сердечно-сосудистую систему и гладкую мускулатуру животных. Влияние препарата на коронарные сосуды исследовали на изолированных по методу Лангендорфа сердцах кошек и кроликов.

Проведенные опыты показали, что разведенный изотопическим раствором 20% препарат (1:25, 1:75, 1:100, 1:200) в различных дозах расширяет коронарные сосуды. Сосудорасширяющее свойство препарата проявляется быстро: максимально выражено через 2—4 минуты и сохраняется 5—10' минут. При четырех—шестиминутном отмывании сердца раствором Рингера сосудорасширяющий эффект полностью исчезает. Чувствительность к препарату коронарных сосудов указанных животных одинакова.

Опытами установлено, что тегенарин в дозах 18 и 26 мг/мл вызывал учащение темпа сокращений сердца животных на 10—15%. После отмывания сердца в течение 1—2 минут раствором Рингера темп сокращений возвращается к норме.

Изучено действие препарата на кишечник 240 кроликов. Отрезки кишок помещали в стеклянную мензурку емкостью 30 мл. Тегенарин добавляли к питательной жидкости с таким расчетом, чтобы конечные дозы препарата составляли 9, 18, 26 мг/мл. Установлено, что при дозах в 9 и 18 мг/мл препарата наблюдается незначительное угнетение маятнпко-образных сокращений кишечника, а дозы тегенарина в 26 мг/мл оказывают выраженное влияние на тонус и амплитуду сокращений кишечника кроликов. После отмывания . кишечника раствором Рингера исходная амплитуда сокращений кишечника быстро восстанавливается.

В опытах на изолированных кишках 100 морских свинок тегенарин в дозах 0,054; 18, 26 мг/мл в большинстве случаев вызвал незначительное ослабление тонуса и уменьшение амплитуды сокращений кишечника.

При изучении воздействия препарата на гладкую мускулатуру изолированной матки 60 кошек по методу Магнуса установлено, что тегенарин, начиная с дозы в 0,054 мг/мл незначительно повышает тонус и усиливает сокращение рога матки. Дозы в 9,18 мг/мл обуславливают повышение тонуса и сокращение матки, которые через 1—2 часа, как правило, снижаются до нормы.

При воздействии на изолированный рог матки 60 морских свинок в дозе 0,054; 0,108 мг/мл препарата отмечается незначительное повышение тонуса мускулатуры.

Влияние тегенарина на температуру тела исследовали па 100 белых крысах. При этом внешняя температура равнялась 15—17°С. Препарат вводили под кожу по 25, 30, 35, 40 мг/мл на каждое животное. Температуру измеряли в прямой кишке до введения, через полчаса, а затем через каждый час после инъекции тегенарина. При введении 25, 30 мг/мл препарата температура тела животных снижалась по сравнению с исходной в среднем на 0,4°С. Максимальное снижение температуры отмечалось через 35—40 минут после инъекции препарата. У большинства крыс после указанной выше инъекции тегенарина температура достигла исходного уровня через 2—4 часа.

В опытах нами изучено воздействие тегенарина на организм животных при различных способах введения (внутривенный, внутримышечный, внутрнбрюшипныи подкожный через рот).

Для этого использовано 847 животных, из них: собак — 50, кроликов - - 57, морских свинок — 140, белых крыс — 200. белых мышей 400. Многократные (85--120 дней) ежедневные инъекции препарата возрастающими дозами (собакам — от 40 до 60 mi/мл, кроликам — от 15 до 25 мг/мл, морским свинкам - от 15 до 20 мг/мл, белым крысам — oí 20 до 25 мг/мл, мышам —- от 9 до 18 мг/мл) не вызывали интоксикации, каких-либо осложнений, местного раздражающего действии и образования опухолей.

При внутривенном введении ни в одном случае не было образований тромбов и тромбофлебитов. Тегенарин не изменяет величину кровяного давления и картину крови. На вскрытии и при патогистологическом исследовании органов животных каких-либо изменений не наблюдалось.

Отдаленные наблюдения: за собаками в течение 6 месяцев, белыми мышами до года показали, что животные развивались нормально, не теряли в весе, были практически здо-

ровыми. После введения тегепарнна местных осложнений (отека, язв, очагов некроза), а также хронической интоксикации и опухолей пе отмечалось. Препарат безвреден для животных.

Распределение тегенарина по органам и пути выведения его из организма

Цель опытов — установить распределение препарата по органам п определить нуги выведения из организма живот-пых. Как быстро всасывается и выводится тегенарин, свидетельствует его концентрация в сыворотке крови, легких, печени, почках, селезенке, .моче.

В опытах находилось 900 белых мышей массой (16—18 i'), 300 белых крыс массой (150—170 г), 90 морских свинок массой (500—600 г), 15 собак массой (3—1 кг), 15 кроликов массой (2—2,5 кг). Мыши были разделены на равные группы (по 300): первой группе животных вводили тегенарин внутривенно в дозах — 2, 3, 4 мг/мл, другой — подкожно — 5, 6, 7 мг/мл, третьей — внутрибрюшипно — 8, 9, 10 мг/мл. Контролем являлась группа мышей (100), не получавших тегенарин. Далее в опытах с крысами и морскими свинками препарат вводили через зонд в желудок в аналогичных дозах 10, 15. 20 мг/мл. Кроме того, крысам подкожно вводили тегенарин в дозах 20, 25, 30 мг/мл, собакам — внутримышечно в дозах 20, 25, 30 мг/мл, а кроликам препарат вводили peros в дозах 10, 15, 25 мг/мл. При введении препарата через 30 минут, 1 час, 2, 3, 5, 7, 9, 12, 24 часа после инъекции с соблюдением асептики у животных забирали отдельно кровь, легкие, печень, селезенку, почки и .мочу. Полученные органы обрабатывали по методу Гров и Рендалл (1958) следующим образом. Кровь удаляли путем многократного промывания ткани водой. Затем материал взвешивали и разводили фосфатным буфером с рП 6,8—7.0 в 2—6 раз, в зависимости от предполагаемого содержания в органах концентрации тегепарнна. Далее ткани гомогенизировали в смесителе. Взвешенным в жидкости частицам ткани давелп отстояться и надосадочную жидкость отсасывали. Для определения концентрации тегепарнна в сыворотке забирали кровь в стерильные пробирки и после образования сгустка сыворотку центрифугировали в течение 30 минут при 4000 об/мин. В пад-осадочпон жидкости выявляли концентрацию тегенарина. В

качестве контроля в аналогичных условиях испытывали орИ

гашл н ткани животных, не получавших препарат. Исследования концентрации тегенарипа проводили методом Флеминга в модификации Е. Ф. Ермольевой.

Исследования проводят стерильно, используется среда Гисса с глюкозой и реактивом Андреде рН = 7,2. Эту среду заражали кишечной палочкой из расчета 1 ООО бактериальных клеток па 1,0 мл среды. Для этого суточную агаровую культуру кишечной палочки смывали стерильным изотоническим раствором и по оптическом)' стандарту готовили одномиллиардную взвесь, а затем эту взвесь разводили изотоническим раствором и добавляли к среде необходимое количество культуры гест-микроба.

Зараженную среду разливали в маленькие стерильные пробирки по 0,2 мл. Для каждого анализа использовали два ряда пробирок по 10 в каждом ряду: первый ряд для разведения раствора-стандарта тегенарина, второй ряд — для исследования концентрации тегенарипа, приготовленный из органов животных. К первой пробирке первого ряда добавляли 0,2 мл раствора-стандарта тегенарина, содержащего бактерицидную концентрацию в миллилитре. Содержимое первой пробирки тщательно смешивали и переносили 0,2 мл во вторую и т. д. до предпоследней. Последняя пробирка служила контролем роста кишечной палочки па этой среде (без тегенарина).

К первой пробирке второго ряда прибавляли 0,2 мл испытуемого раствора тегенарина, хорошо перемешивали и затем переносили 0,2 мл во вторую пробирку и т.д. Таким образом, получали разведения 1:2, 1:4, 1:8 и до 512. Пробирки оставляли при 37°С на 16—18 часов, после чего определяли результаты.

При рН = 7,2 среда Гисса бесцветная, при росте микроорганизмов происходит закнсанне среды, вследствие сбраживания глюкозы, в результате чего среда приобретает розовый цвет. Для определения концентрации тегенарина в 1,0 мл исследуемой из органов жидкости нужно наибольшее разведение исследуемой концентрации раствора препарата, дающее еще задержку роста тест-микроба (т.е. разведение в последней пробирке с прозрачной и не изменившей цвет средой) умножить на наименьшую концентрацию стандартов тегенарина, которая еще задерживает рост тест-микроба.

Наибольшая активность препарата в отношении штамма Е. coli в опытах in vitro выявляется в концентрациях 9—18

мг/мл после 6-часовой инкубации при 37°С. При этом масса микробных клеток подвергается лизису, для которого характерна полная утрата цитоплазмы и разрушение цнтоплазма-тической мембраны.

Влияние тегенарина на фагоцитарный процесс у инфицированных животных

Результаты исследований прказали, что тегснарин, введенный внутрибрюшинно. оказывает существенное возденет вне на фагоцитарный процесс, состав белой крови и клеточные реакции в брюшном экссудате у 1115 инфицированных белых мышей. Дозы 9 и 18 мг/мл препарата в организме животных активизируют фагоцитарный процесс, при этом веду щая роль в захватывании бактериальных клеток принадлежит микро- и макрофагам. Макроорганизм под влиянием тегенарина быстро очищается от микробов.

У мышей контрольной группы, внутрибрюшинно зараженных стрептококком (штамм 11), но не леченных препаратом, наступали быстрое развитие инфекционного процесса. В крови прогрессивно уменьшалось количество лейкоцитов — до 1 ООО в 1 мм3; развивалась септицемия, приводящая животных через 72—96 часов к гибели. У этих животных установлен незавершенный фагоцитоз: виеклеточно расположенные бактериальные клетки сохраняли исходную форму

Тегенарнн вызывал изменения морфологических и тинк-юриальных свойств бактерий, прн этом отмечалось образование гигантских клеток шарообразной формы. В большинстве случаев микробы теряли способность окрашиваться по Граму. Указанные изменения наиболее отчетливо проявлялись при введении максимальной дозы препарата. При введении минимальной и средней доз фагоцитарный процесс раз-виваля одинаково.

Доза 26 мг/мл препарата в белой крови и брюшном экссудате угнетала фагоцитарную реакцию. Несмотря на это, брюшной экссудат быстро освобождался от микробов: последние подвергались внеклеточному разрушению (бактериолизу), о чем свидетельствовало наличие остатков лизирован-ных клеток в виде глыбок. Разрушение микробов сопровождалось высвобождением токсина, который в индивидуальных п единичных случаяг обуславливал гибедьлабораторных животных.

Терапевтическая эффективность тегенарина

г

ю 1 о с; Количество

н 3 с I

<с 5 с Ч в течение

а п о о

О <0 с _ л о Е- т т

Сй н и о с и 2 0) о. с с а сг Ь 8 а о 0) 1-<0

Л <и с с >- 0) с ^ л а. 1 2

с у Ф >, ой 43 1_ ?! 5 о. » т о. <о

с 1§ с. О ч; О « л и о ь* с 01

С; 0 (Р о о <0 О о.

* 5 а са Ч ш С ^ 3 X с

18— 9 1 60 2 — 58(96,7%)

20 2 » 4 — 52(86,7%)

1 300 3 » 8 — 54(90%)

4 » 16 — 17(28,3%)

5 » 32 — —

18— 40 1 » 2 — 43(17,6%)

20 2 » 4 — 50(83,3%)

II 300 3 » 8 — 52(86,7%)

4 » 16 — —

5 » 32 — —

III 90 18— без

контроль- 20 препа-

ная рата

О 00

4=.

й о 8 8 §

ы З8

—* со о* со ю

мышей, первых

ил выздоровевши: пяти дней

■и

т

кол-во павших мышей

Количество

выздоровевших

мышеи

сл а

Тегенарин в различных дозах 0,5--1,0—1,5 мг/мл при внутрибрюшинном введении инфицированным мышам в разные промежутки времени увеличивал общее количество клеток в брюшном экссудате в среднем с 10.00 до 12.00% и лейкоцитов с 32.00 до 34.00%, гистоцитов с 1(100 до 12.00%, лимфоцитов — с 20.00 до 22.00%. При этом в процессе лечения экспериментальной пневмонии у мышей возникали изменения и в лейкоцитарной формуле крови.

Противоположные результаты получены от применения максимальной дозы тегенарина. Введение 26 мг/мл препарата белым мышам в первые 6 часов после инъекции угнетало указанные выше показатели, а затем они через 12—24 часа физиологически нормализовались.

Таким образом, различные дозы тегенарина неодинаков:) действуют на фагоцитарный процесс у зараженных белых мышей: 0,5—1 мг/мл стимулирует, а 1,5 мг/мл угнетает клеточные реакции в брюшном экссудате.

Влияние тегенарина на экспериментальную септическую стрептококковую инфекцию

Опыты проводили на 600 белых мышах массой 18—20 г. Животных заражали в полость носа 0,2 мл сыворочно-буль-онной (18-часовой) культурой стрептококка пневмонии типа — 1, отцентрифугированной и дважды промытой от ток-сипа изотоническим раствором. Взвесь суспензий после разведения содержала в 1,0 мл 10000 бактериальных клеток. Подопытные животные были разделены на две группы (по 300). Зараженным мышам первой группы подкожно вводили 9 мг/мл тегенарина, второй — сульфидина из расчета 40 .мг/мл на общую массу животного. Кроме того, каждая группа была разделена на 5 подгрупп по 60 мышей в каждой. Всем животным вводили дозы препаратов через интервалы 2, 4, 8, 16, 32 часа после заражения.

В контрольной, третьей группе, состоящей из 90 зараженных мышей, лечение не проводилось.

Результаты опытов показали, что тегенарин, примененный на ранних сроках после заражения мышей (2, 4, 8 часов), обладает 100-процентным специфическим лечебным действием. При назначении препаратов в более поздние сроки (32 часа) после заражения отмечается выздоровление мышей в 71,6%. При лечении пневмонии сульфидином через 16 часов количество выздоровленных мышей достигло 90%, а через 32

часа —только 53,3%. Все животные контрольной группы но-гибли (таблица 1).

Установлено, что при введении , тегенарина содержание гемоглобина в процессе всего периода исследования оставалось в пределах индивидуальных колебаний. Следует отметить, что через 12 часов после введения тегенарина отмечалось стойкое увеличение числа белых кровяных клеток, которое достигло максимума через трое суток, а затем постепенно нормализовалось. При этом лейкоцитоз сохранялся даже тогда, когда у животных под влиянием препарата наступало полное выздоровление.

Для гемограммы характерно незначительное увеличение числа лимфоцитов к концу лечения.

Минимальная и средняя дозы препарата, оказывая бак-терностатическое действие, снижают интенсивность размножения бактериальных клеток. При этом ослабляется влияние возбудителя инфекции на организм животных, уменьшается его интоксикация, что способствует активизации фагоцитарной реакции.

Таким образом, при септической стрептококковой инфекции у белых мышей тегенарин оказывает большее лечебное действие, чем сульфидин.

Влияние тегенарина на течение паратифа В у белых мышей

На 300 белых мышах, которые были разделены па 3 группы, по 100 животных, установлена летальная доза культуры паратифа В.

Первой группе белых мышей вводилась взвесь культуры, содержащей в 1 мл 65 млн., второй — 85 млн.. третьей -100 млн. бактерий.

Каждому животному вводилось взвеси культуры. Доза 65 млн. бактерий в 1,0 мл оказалась невирулентпой, а 85 млн. бактерий вызывала несмертельное заболевание с последую щим выздоровлением. При дозе 100 млн. бактерий в 1 "мл все 100 мышей погибли на 2—3 сутки после заражения.

Влияние тегенарина на течение паратифа В изучено па 350 белых мышах, из которых было 300 подопытных п 50 контрольных. Животным вводили смертельную дозу суточной взвеси культуры, содержащей в 1,0 мл 100 млн. бактериальных клеток. Всем подопытным мышам подкожно ипъ-екцировали по 9 мг/мл тегенарина, которые были разделены

Влияние тегенарина на

ф а Ф т

3 £

О *

X

<0 2 3 й> С с; X

Ю ? с ч

а. через ые вво

и Ф с о л с о ей а и ч 1-

X а с с >~ и о о с (О а

со <0 а и У X со а л О и ь ю с

и р> $ Ч с >х о

о о О О V И о а

т 4 о с ЬС 3 ЭГ X с

Количество в течение

I подопытная 300 16—18

1 60 2 — 49(81,7%)

2 » 4 — 44(73,7%)

3 » 8 — —

4 » 16 —

5 32 16 _ —

II контрольная 50

о

исход паратифа В у мышей

Таблица 2

мышеи, выздоровевших 5 дней

0 о> V

а

3 4 кол-во н и О О а >1

5 павших т 0 0>

мышей X Ч э

с п

0 2

ш

11(18,3%) 16(26,3%) 33(55%) 11(18,3%) 7(11,7%)

27(45%) 39(65%) 30(50%)

10(16,7%) 2(3,3%)

21(35%) 50(100%)

60 60 60 60

39(65%)

??

на пять подгрупп: мышам первой подгруппы препарат вводили через 2 часа, второй — 4, третьей — 8, четвертой — 16, пятой — через 32 часа после заражения. Курс лечения продолжался 5 дней.

Контрольной группе инфицированных животных (50) препарат не вводили.

У мышей, лечение которых начинали в ранние сроки после заражения (через 2, 4, 8 часов), интоксикация была выражена незначительно: отмечалось умеренное учащение дыхательных движений и пульса, общее состояние не изменялось, вес не убывал. Когда введение препарата начинали через 16, 32 часа после инфицирования, наблюдалась иная картина: шерсть животных становилась взъерошенной, дыхание резко учащалось, некоторые мыши отказывались от корма. Однако на 2—3 сутки наступало улучшение общего состояния подопытных животных. Результаты опытов суммированы и представлены в таблице 2.

Из таблицы 2 видно, что препарат, введенный мышам через 2, 4, 8, 16 часов после инфицирования, обуславливает выздоровление всех животных. При инъекции тегенарина через 32 часа отмечается выздоровление в 65% случаев.

В контрольной группе все мыши погибли.

Итак, при паратифе В у белых мышей тегеиарип оказывает лечебное действие.

Лечение экспериментальных инфицированных ран у кроликов тегенарином

Изучение раневого процесса и его лечение с древних времен занимало человеческие умы. С тех пор было предложено большое количество разнообразных способов лечения инфицированных ран.

В годы Великой Отечественной войны арсенал препаратов, применяемых при лечении, обогатился. Среди новых лекарственных средств особое внимание заслуживают вещест ва биологического происхождения. Преимущество их, в основном, заключается в том, что они как правило, благотворно влияют на ткани. Химические же антисептики определенной концентрации нарушают целостность клеток и тканей. Кроме бактерицидного действия, биологические препараты стимулируют рост грануляционной ткани, способствуя быстрому заживанию ран. Несмотря на многочисленность методов лечения инфицированных ран, эта проблема до сих пор

окончательно не разрешена. Всестороннее изучение процессов, протекающих в зараженных ранах, имеет теоретическое и практическое значение.

Раневой процесс развивается закономерно. В начале происходит тканевый распад, рН содержимого раны из кислой становится щелочной, затем интенсивно развиваются патогенные микробы. В ответ на это активизируются защитные функции клеток соеденительной ткани. Этот весьма сложный процесс следует рассматривать комплексно,- с учетом клинического течения биологических и физико-химических изменении, происходящих в инфицированных ранах.

В проводимых памп исследованиях поставлена задача: установить влияние тегенарина на заживление инфицированных ран у кроликов.

Кроме того, необходимо- было изучить действие препарата на морфологическую структуру клеток раневого экссудата, проследить изменения рН содержимого раны, установить характер действия экссудата на процесс заживления и выяснит!) его влияние на общую реактивность организма в зависимости от местного применения.

Методика. Опыты проводили на кроликах породы «шиншилла». Среди 130 животных были самцы и самки, масса которых достигала 2—2,5 кг, из них 65 было подопытных и 65 контрольных. На спинке кролика выстригали шерсть, затем наносили рваную рану диаметром 3,5X4,5 см, которую заражали золотистым стафилококком. Инфицирование проводили путем прикладывания к раневой поверхности марлевого тампона, смоченного взвесью, содержащей в 1,0 мл 3 млрд. бактериальных клеток. Как правило, в первые сутки после нанесения ран общее состояние кроликов значительно ухудшалось, резко повышалась их возбудимость. Животные вели себя беспокойно в клетках, ударяли лапами о проволочную сетку. В течение двух суток температура тела повышалась, отмечалось учащение пульса и увеличение количества дыхательных движений. Несмотря на изменения н общем состоянии, кролики полностью поедали корм.

По мере увеличения количества гноя в ранах животные становились менее возбудимыми. Ткани в окружности раны были отечными, имелось местное повышение температуры.

На вторые—третьи сутки после нанесения ран и инфицирования их у подавляющего большинства кроликов отмечалось повышение температуры тела в пределах 40,5—40,8°. На этом уровне температура удерживалась в течение 2-х

дней. Количество ударов пульсовых достигало 180, а дыхательных движении — 73 в 1 минуту.

Для того, чтобы исключить развитие септического состояния у кроликов, было предпринято бактериологическое исследование крови с целью выделения чистой культуры золотистого стафилококка. Из ушной вены брали но 10 мл крови и засевали в 100 мл сахарного бульона. Затем материал инкубировали при 37°С в течение 12 суток. Начиная с 5 дня, ежедневно производили контрольные пересевы на кровяной агар. Роста золотистого стафилококка в крови всех животных не обнаружено.

Таким образом, повышение температуры тела у кроликов обусловлено не септическим процессом, а реактивностью организма в результате интенсивного инфицирования ран.

Для изучения клеток раневого' экссудата готовили мазки методом отпечатка. Полученный на стекле материал вы сушнвали. фиксировали 25 минут метиловым спиртом и в течение часа окрашивали краской Гимза по методу Романовского. После взятия отпечатка из рапы удаляли некроти-пироваипые ткани, затем приступали к лечению препаратом.

Лечение. Животные были разделены на две группы: одна (65 кроликов) подопытных, другая (65) являлась контролем. Рапы у кроликов первой группы лечили тегенарином, второй группы—гипертоническим (10%) раствором NaCl и раствором фурацилина в разведении 1:4200. Орошение ран каждым из растворов, чередуя, производили через день.

Лечение ран было открытым. Прежде чем приступить к лечению, необходимо было установить количественное содержание бактериальных клеток в раневом экссудате. Бактериологической петлей (0,01 мм) на 3—5 день производили засев гноя с поверхности раны в чашкп с кровяным агаром. После 16—24-часовой инкубации при 37°С проверяли результаты роста. При этом обнаруживали сливной рост колоний стафилококков. Далее раневой очаг обильно орошали два раза в день через трехчасовой промежуток времени те-1енарнном. 20-нроцентным раствором препарата в разведении 1:25 воздействовали на рану в первые сутки лечения, а раствором разведением 1:75 раневую поверхность орошали в течение последующих 3 суток. С появлением грануляционной ткани рану обрабатывали раствором с разведением 1:100, одни раз в сутки.

На раневую поверхность препарат в вышеуказанных разведениях наносили 7 дней. Через каждые сутки делали

повторные посевы содержимого раны и производили бактериологический ' контроль.

После однократного орошения препаратом в разведении 1:25 гноя в рапс обнаруживалось меньше, выявлялось бак-герннпдное действие тегенарина на стафилококков. При общем просмотре чашек на поверхности агара имелись колонии, отличающиеся от исходных: мелкие, шероховатые, с неровными краями, 1?-формы. Многократные повторные пересевы (8 раз) на мясопептонную плотную питательную среду обуславливали переход бактерий в Б-форму.

Бактериологический контроль за действием препарата не должен ограничиваться подсчетом количества колоний. Необходимо включать наблюдения за качественным изменением микробных клеток. Это дает возможность наиболее достоверно произвести оценку эффективности препарата при лечении инфицированных ран.

Изучение процессов, происходящих в раневом очаге, позволило выявить в экссудате макрофаги. Проникая в воспалительный участок, они активно захватывают и переваривают бактерии, очищают рану от омертвевших тканей. Клеткам соединительной ткани принадлежит основная роль в заполнении дефекта, образовавшегося в результате ранения.

При воздействии тегенарина на стафилококков, наряду с клиническими изменениями раневого процесса происходят морфологические п биохимические сдвиги в экссудате. Для изучения цитологических изменений в ранах кроликов была применена методика М. П. Покровской, М. С. Макарова (1942). Через сутки после нанесения раны в отпечатках выявлялись измененные нейтрофилы, количество которых уменьшалось по мере лечения препаратом. К моменту очищения рапы от гноя и некротизированных тканей, т. е. к переходу раневого процесса во вторую фазу -— заживления, в отпечатках обнаруживались лишь единичные бактерии. Интенсивное очищение раны и исчезновение микробов из экссудата можно объяснить, во-первых, бактерицидным свойством препарата, во-вторых, активным фагоцитозом клеток соединительной ткани.

В инфицированных ранах, которые лечили гипертоническим раствором \таС1 и фурацилиновым раствором, золотистый стафилококк обнаруживался в ране к моменту заполнения грануляционной тканью в большом количестве.

2а

Для заживления раневого очага имеет значение рН содержимого. Поэтому в проведенных исследованиях изучали изменения рН раневого экссудата при лечении инфицированных ран препаратом и гипертоническим раствором №С1. При этом рН экссудата многократно определяли электропотенциометром. В первые 24 часа после травмы показатели рН колебались в пределах 7,1—7,2. В дальнейшем реакция раневого содержимого сдвигалась в сторону ацидоза. После обработки ран препаратом содержимое приобретало щелочную реакцию. К моменту, когда рана полностью заполнялась грануляционной тканыо, рН приближалась к цифрам кислотности нормального тканевого сока. При обработке ран гипертоническим раствором рН содержимого длительное время оставалась кислой, а сдвиг в сторону щелочности наступал в более поздние сроки.

Изучено действие различных разведений тегепарина на токсигенные свойства золотистого стафилококка в процессе лечения разных инфицированных ран на коже кроликов. После многократной обработки ран препаратом на 7 сутки из содержимого раневой поверхности производили посевы материала на специально изготовленную плотную питательную среду. Через 18—20 часов инкубации при 37СС в чашках дифференцировали колонии л выделяли чистую культуру золотистого стафилококка. Затем определяли его дермоне-кротическне свойства. С этой целью 4 кроликам массой 2,5— 2,8 кг г, спинку после предварительной эпиляции шерсти вводили впутрикожпо по 0,2 мл суточной 2 млрд. взвеси агаровой культуры золотистого стафилококка, изготовленной на изотоническом растворе. Результаты токсигенного действия культуры, выделенной у подопытных кроликов, учитывали через 24, 48, 72, 96, 120 часов. Во всех случаях на местах инъекции покраснения, повышения болевой чувствительности и некроза не отмечалось.

Терапию ран у контрольных животных проводили гипертоническим раствором н раствором фурацилина. У 4 копт-рольных кроликов, которым вводили взвесь культуры, выделенной из раны после орошения ее гипертоническим раствором и фурацилнновым раствором на местах инъекций через 28 часов отмечались покраснение, повышение болевой чувствительности, а через 76 часов появлялся некротический участок размером Ь —9 см.

Идентификацию этого штамма определяли: на коагулаз-

ную, лецитиназную, гиалуронидазную, гемолитическую, фнб-ринолпзпновую активность.

Ыа основании перечисленных данных его относили г. патогенным.

Гипертонический раствор при длительном действий в раневом содержимом не снижает токснгснных свойств золотистого стафилококка.

Тегенарнп при лечении инфицированных ран у кролщ о г. уже на восьмые сутки проявляет полное бактсриостатичеа ос действие на жизнедеятельность золотистого стафилококка.

Тегенарнп, примененный с целыо лечения экспериментальных инфицированных ран у кроликов, действует не только на микроорганизмы, но и оказывает местное (на рану) воздействие на макроорганнзм.

В посевах раневого содержимого на кровяном агаре без применения тегенарина был сливной рост колоний золотистого стафилококка.

После первой обработки раны гегенарнном I олпчество колоний на агаре равнялось — 20, после второй — 9, третьей — 5, четвертой — 3, а после пятой — в раневом содержимом бактерий не обнаружилось.

При воздействии контрольными растворами на рану била иная картина. И после десяти орошений этими растворами отмечался сливной рост колонии золотистого стафилококка. После одиннадцатой обработки число колоний насчитывалось 365, двенадцатой — 297, тринадцатой — 211, четырнадцатой— 160, пятнадцатой — 90, шестнадцатой — ¡6, семнадцатой— 17, восемнадцатой—10, девятнадцатой—8, двадцатой — 6 колоний.

Местное воздействие тегенарина начинает проявляться после первой обработки раны. Раневая поверхность быстро очищается от корочек и участков некротизированных тканей. При этом характер гнойного содержимого также изменяется: консистенция становится более жидкой, запах постепенно утрачивается. На 2—3 сутки от начала лечения отечность тканей в окружности раневого очага исчезает; на периферии раневой поверхности появляются участки грануляционной ткани розового цвета, па 7-е сутки вся раненая поверхность заполняется обильными грануляциями.

Тегенарнп стимулирует гистогенез и фагоцндоз. При изучении отпечатков с раневой поверхности отмечено, что на

5—7 сутки в раневом содержимом появляются лимфоциты, моноциты и макрофаги. Максимальное количество их достигается к моменту заполнения паны грануляционной тканью.

Картина заживления ран у 65 кролш ов контрольной группы, леченных гипертоническим раствором ЫаС1 и раствором фурацплина, была иная. Очищение раневой поверхности от корочек и некротизированных тканей значительно затягивалось, в ране обнаруживалось обильное количество густого гноя. В воспалительный процесс нередко вовлекалась окружающая подкожная клетчатка. Раневая поверхность полностью заполнялась грануляциями лишь на 13—15 день.

Итак, при лечении ран тегснарином окончательное рубцевание наступает через 8—9 суток, а прп лечении контрольными растворами через 21 ^—22 суток.

Проведено исследование отдаленных результатов лечения через год. У кроликов, раны которых лечились тегена-рином, осложнений не было. У животных, раны которых обрабатывались контрольными растворами, были осложнения, вокруг бывшего раневого очага появлялись инфильтраты, в дальнейшем превращающиеся в осумкованные абсцессы величиной с грецкий орех—куриное яйцо. В шприц набирался густой гной, прп посеве его на кровяной агар появлялся росч колоний золотистого стафилококка. Микроорганизмы из раневого очага проникают по ходу лимфатических путей и оседают в тканях, представляя дремлющую инфекцию, которая прп определенных условиях вызывает образование абсцессов Подобные осложнения имели место в 10% случаев.

ВЫВОДЫ

1. 'Гегенарин в минимальной и максимальной дозах оказывает бактериостатическое и бактерицидное действие на грамотрицательные и некоторые грамположительные бакте-рни.

Кратковременное воздействие минимальной и суббакте-рностатической доз препарата обуславливает незначительные морфологические изменения (удлинение размеров) бактериальных клеток. Бактерицидная доза тегенарина вызывает в морфологической .структуре бактерий необратимые изменения: вначале образуются нитевидные формы, затем в микробных клетках контуры становятся неотчетливыми, в цитоплазме появляются зерна.

2. Тегенарин, введенный в организм подопытных животных различными способами, безвреден. Минимальная и максимальная дозы препарата при многократных инъекциях не оказывают общего токсического влияния на организм и не проявляют местного раздражающего действия: на месте введения препарата повышения болевой чувствительности, опухолей, отеков, язв и очагов некроза не отмечается. После многодневных подкожных инъекций препарата морским свинкам в морфологической структуре тканей и органов изменений не обнаружено. Наблюдение за собаками в течение (> месяцев и мышами на протяжении одного года показало, чго животные после опытов развиваются нормально, не теряют массы.

3. Внутривенные и подкожные введения препарата не приводят к существенным изменениям кровяного давления .ч количества дыхательных движений у собак. Препарат не обладает гемолизирующим свойством: при инъекции животным число эритроцитов и содержание гемоглобина остаются в пределах нормы. Незначительные колебания показателей красной крови объясняются индивидуальными особенностями организма. Минимальная и средняя дозы тегенарпна в первые 4 часа после введения вызывают в крови животных лейкоцитоз и умеренную эозинофнлшо. Максимальная доза обуславливает некоторое снижение числа лейкоцитов и эози-нофилов.

Количественный состав лейкоцитов и соотношение форменных элементов в гемограмме зависит от вводимых живот" ным доз препарата.

4. Тегенарин, введенный животным различными способами, обнаруживается в крови в первый час, в органах — через 40 минут — 2 часа после инъекции. Препарат задерживается 7—12 и более часов в крови, печени, почках п селезенке.

При многодневных инъекциях тегенарпна в крови и органах животных постепенно накапливается концентрация препарата (от 1 до 10 мг). Действие препарата зависит от вводимой дозы и проявляем;! по мере его накопления в кропи и органах животных.

5. Лечение инфицированных ран путем обработки разведенным препаратом способствует очищению от гноя ране вого очага и быстрейшему образованию грануляционной ткани на месте дефекта. Анализ отпечатков с раневой поверхности дает возможность проследить морфологические

изменения в клетках раневого экссудата, а также установить значение соединительной ткани в регенеративном процессе. В отпечатках, изготовленных в первые сутки после обработки ран тегенарином, отмечается выраженный фагоцитоз, усиливающийся в последующие .дни лечения. При этом превалирует гистиоцитарная реакция, сопровождающаяся накоплением в раневом экссудате большого количества лимфоцитов, моноцитов и макрофагов. В отпечатках, изготовленных после обработки гипертоническим раствором, имеет место незначительный фагоцитоз. При этом отмечается большое количество бактерий, измененных и распавшихся ней-трофилов.

6. Тегенарин оказывает благоприятное влияние на заживление ран, содействует быстрому исчезновению из экссудата культуры золотистого стафилококка и способствует купированию воспалительного процесса в прилегающих к ра" невому очагу тканях.

7. Введение минимальной и средней доз препарата активизирует фагоцитарную деятельность микро- и макрофагов: в брюшном экссудате постепенно исчезают внеклеточно расположенные бактериальные клетки. В этом случае имеет место завершенный фагоцитоз.

животных, леченных препаратом, после освобождения брюшного экссудата от бактериальных клегок через 24—48 часов выявляются микробы, которые фагоцитируются лейкоцитами. У зараженных животных, не подвергавшихся лечению тегенарином, в брюшном экссудате установлен незавершенный фагоцитоз.

Изменения в морфологической картине брюшного экссудата тождественны сдвигам количественного состава белой крови подопытных животных.

8. Минимальная и средняя дозы тегенарина стимулируют, максимальная — угнетает фагоцитарную реакцию.

После инъекцни мышам минимальной дозы препарата (9 мг/мл) бактерии из брюшного экссудата исчезают через 2 часа, средней (18 мг/мл) — через 6 часов, максимальной (26 мг/мл) — через 14.

9. Под влиянием препарата внеклеточно расположенные и фагоцитированные бактериальные клетки претерпевают существенные изменения: увеличиваются в объеме, нередко утрачивают способность окрашиваться по Граму.

10. Одно- п многодневные введения минимальной и средней доз тегенарнна здоровым мышам обуславливают увеличение в крови количества лейкоцитов, моноцитов и эозино-филов. Эти показатели постепенно нормализуются.

11. У зараженных мышей контрольной группы, не лечен' пых препаратом, в крови прогрессируют лейкопения, септицемия и интоксикация, приводящая через 72—96 часов животных к гибели.

12. У мышей, зараженных стрептококком (штамм № 11), по не леченных препаратом, в брюшном экссудате имеет место уменьшение клеточных элементов и отмечается незавершенный фагоцитоз.

13. В опытах установлено, что после длительного пассирования (от 6 до 8 месяцев) брюшнотифозных и паратифоз" пых штаммов, в некоторых случаях от нитевидных клеток отпочковываются жизнеспособные бактериальные клетки, которые при высевах на агар Хоттингера при 37°С через 16— 20 часов образуют колонии, отличающиеся большей устойчивостью к тегенарнну.

14. Терапевтические дозы препарата, введенные в ранние сроки после инфицирования, предупреждают развитие у мышеи стрептококковой инфекции.

15. .Минимальная и средине дозы препарата, оказывая бактерпостатпческое действие, снижают интенсивность размножения бактериальных клеток. При этом ослабляется влияние возбудителя инфекции на организм животных, что способствует активизации фагоцитарной реакции.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕКОМЕНДАЦИЯ

Выкармливание домашних пауков является основой для их разведения. С этой целью автором предложены питательные среды (авторские свидетельства № 619157, 1978 г. и ЛЬ 644429, 1979 г.). Наиболее рациональным оказалось содержание пауков в специальных контейнерах по 40 штук, т. к. при этом легко обеспечивается выкармливание и контроль выхода весового количества паутины. Выкармливание пауков на ферментативных жидких питательных средах позволяет получить паутины в больших промышленных масштабах с целью приготовления из нее тегенарнна.

Способ лечения гнойно-инфицированных ран тегенарином впервые испытан на 213 животных и внедрен в ветерннар-

tiyio практику Лямбирского района МАССР (см. заключение технического совета /Министерства сельского хозяйства МАССР от 13.11.80 г.).

На основании решения Президиума ветеринарного фармакологического совета от 27/V—82 г. проведено испытание лечебного свойства тегенарина в Казанском ветеринарном институте с положительным лечебным эффектом (см. заключение комиссии от 5/XI—84 г. под председательством профессора В. Г. Бушкова).

Согласно наставлению, утвержденному ветеринарным фармакологическим советом (при Главном ветеринарном управлении Госагропрома СССР от 29/V—84 г. проведено лечение тегенарином колотых, резаных и рваных ран 345 голов сельскохозяйственных животных в совхозах «Старо-Спндровскнй» и «Снвиньский» Краснослободского района МАССР ( см. заключение Госагропрома МАССР от 22/Х/86 г.).

Полученным препаратом тегенарин в течение 3-х лет проводили испытания для лечения ран на различных видах животных в совхозах и колхозах Мордовской АССР. Результаты положительны.

Список опубликованных работ по материалам диссертации

1. Кирсанов Г. П. Антибиотическое вещество из паутины обыкновенных синатропны.х пауков, его воздействие на бактерии и фагоантарныи процесс у инфицированных живот-пых. // Ученые записки Казанского ветеринарйого института им. Н. Э. Бау.м'ана: Сообщение I. — .Казань: Татарское кн. изд-во, 1958. —т. 74.—с. 23—28.

2. Кирсанов Г. П. Антибиотический препарат из паутины обыкновенных синатропных пауков. // Антибиотики.—1959.— т. 1—с. 117—118.

3. Кирсанов Г. П. Новый антибиотик животного происхождения, его влияние на клеточные реакции у мышей, зараженных стрептококковой инфекцией. // Ученые записки Казанского ветеринарного института им. Н. Э. Баумана: Сообщение П.—Казань: Татарское кн. изд-во 1959.—т. 74. — с. 33—38.

4. Кирсанов Г. П. Новый антибиотик животного происхождения, его влияние па морфологический состав белка кропи мышей. // Ученые записки Казанского ветеринарного института им. Н. Э. Баумана: Сообщение III.—Казань: Татарское кн. изд-во, 1959.—т. 74.—с. 39—43.

5. Кирсанов Г. П. Инфицированные раны у кроликов и их лечение антибиотическим веществом из паутины, обыкновенных синатропных пауков. // Ученые записки Мордовского государственного университета.—Саранск: Мордовское книжное изд-во. i960 —Вып. 3,—с. 124—142.

6. Кирсаноп Г. П. Превращение одного типа микробов в другой под влиянием антимикробного вещества. // Проблемы внутривидовых отношений организма: Материалы к освещению по проблемам внутривидовых отношений организма.— Томск: изд-во государственного университета им. В. В. Куйбышева. 1962,—с. "212—214.

7. Кирсанов Г. П. Токсичность и общее . действие антимикробного вещества из паутины. // Научные работы врачей Мордовской АССР.—Саранск: Мордовское книжное изд-во, 1963,—Вып. 2,—с. 377—380.

8. Кирсанов Г. П. К фармакологии антимикробного вещества. // Научные работы врачей Мордовской АССР.—Саранск: Мордовское книжное изд-во, 1963.—Вып. 2.—с. 371 — 376. .

9. Кирсанов Г. П. Тегенарин и его влияния на фагоци-iарный процесс. // Ученые записки Мордовского государственного университета: Серия ветеринария и медицинская.— Саранск: Мордовское книжное изд-во, 1967. — Вып. 58. — с. 197—199.

10. А. С. 644429 СССР. — Питательная среда для выкармливания пауков. Кирсанов Г. П. (СССР).—Заявлено 1977: Опубл. 23.fl.78, Бюл. № 30. // Бюл. института,—1978,—№ 30 —с. 1.

11. А. С. 619157 СССР. Питательная среда для выкармливания наукой. Кирсанов Г. П. (СССР).—Заявлено 1978; Опубл. 23.11,79. Бюл. № 4. // Бюл. института,—1979,—№ 4. -с. 6.

12. Кирсанов Г. П. Лекарство из паутины. // Изобретатель п рамп палнзатор.—1960.—Л» 1.—с. 58.

13. Кирсанов Г. П. Метод культивирования Гриба Sclerotinia па комбинированном ферментативном гндролизаге. // Микология и фитопатология.—1974.—№ 6.—с. 212—214.

14. Кирсанов Г. П. Подкормка норосят-отъемышей ми-нелнальпо дрожжевым гидролизатором. // Животноводство. —1973,—№ 3,—с. 2.

15. Кирсанов Г. П. Питательная среда для выращивания грибков на экстракте из мицелия. // Лабораторное дело. — 1974.—№ 6,—с. 1.