Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Свободнорадикальные процессы в крови у больных инфарктом миокарда, коррегирующее влияние ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Свободнорадикальные процессы в крови у больных инфарктом миокарда, коррегирующее влияние ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента"

На правах рукописи

Петренко Марина Игоревна

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В КРОВИ У БОЛЬНЫХ ИНФАРКТОМ МИОКАРДА, КОРРЕГИРУЮЩЕЕ ВЛИЯНИЕ ИНГИБИТОРОВ АНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА

03.00.04 - биохимия 14.00.06 - кардиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

РОСТОВ-НА-ДОНУ 2004 год

Работа выполнена в Ростовском государственном медицинском университете.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Терентьев Владимир Петрович Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Сторожук Петр Григорьевич доктор медицинских наук, профессор Воробьёв Владимир Борисович

Ведущая организация: Саратовский государственный

медицинский университет

Защита состоится «/ч^г» __2004 г. в. часов

на заседании диссертационного совета Д 208.082.0/ при Ростовском государственном медицинском университете (344022, г. Ростов - на - Дону, пер. Нахичеванский, 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан « _2004 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, профессор

Н.Я. Корганов

2005-4 12276

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Инфаркт миокарда (ИМ) остается одной из актуальнейших проблем здравоохранения. Это связано с тем, что, во-первых, заболеваемость ИМ сохраняется высокой и резко увеличивается с возрастом (Мазур Н.А., 2000), во-вторых, отмечается высокий процент госпитальной смертности при остром инфаркте миокарда (ОИМ) -10-17% (Чазов Е.И., 2003). Несмотря на очевидные успехи последних десятилетий в области изучения патогенеза, диагностики и лечения ИМ, проблема поиска новых подходов к оценке нарушений гомеостаза и оптимизации фармакотерапии сохраняет свою актуальность.

К настоящему времени накоплен обширный клинический и биохимический материал, свидетельствующий о ведущей роли свобод-норадикальных процессов в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний, в том числе, ИМ (Малышев И.Ю. и соавт., 2000; Ланкин В.З. и соавт., 2001; Зенков Н.К. и соавт., 2001; Каленникова Е.И. и соавт., 2003).

Окислительный стресс, сопровождающий развитие ОИМ, проявляется в резком сдвиге динамического равновесия в системе антиок-сиданты-прооксиданты в сторону усиления свободнорадикального окисления (СРО), продукты которого обладают широким спектром повреждающего действия.

Как известно, стационарность процесса иерекисного окисления липидов (ПОЛ) является важнейшим условием стабильности и нормального функционирования биомембран. Установлено, что при усилении ПОЛ уменьшается содержание полиненасыщенных жирных кислот мембранных фосфолипидов и изменяются физико-химические свойства мембран: микровязкость, текучесть, мембранный потенциал, полярность внутренних областей мембран и др.

Можно заключить, что генерация активированных кислородных

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ 1

БИБЛИОТЕКА

метаболитов (АКМ), интенсивность ПОЛ, активность антиоксидан-тной системы (АО- системы) и структурное состояние биомембран выступают как взаимосвязанная и саморегулирующаяся система, обеспечивающая оптимальное функционирование организма, а в определенных условиях являющаяся пусковым и усиливающим механизмом патологического процесса. Однако все еще недостаточно изучено влияние фармакотерапии на свободнорадикальные процессы и структурное состояние биомембран у больных ОИМ.

В соответствии с этим несомненный теоретический и практический интерес представляет изучение интенсивности ПОЛ, активности АО - системы крови и структурно-функционального состояния мембран эритроцитов, как адекватной модели плазматических мембран, у больных ОИМ, а также оценка возможности корригирующего влияния ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (ИАПФ).

Цель работы: изучение свободнорадикальных процессов в крови и структурно-функционального состояния мембран эритроцитов при ОИМ и возможностей корригирующего влияния ИАПФ.

Задачи исследования:

1. Изучить интенсивность генерации активированных кислородных метаболитов (АКМ) в крови у больных с различными формами ишемической болезни сердца (ИБС).

2. Исследовать интенсивность ПОЛ в плазме крови и мембранах эритроцитов но уровню молекулярных продуктов - диеновых конъ-югатов (ДК), малонового диальдегида (МДА) и шиффовых оснований (ШО).

3. Определить активность антиоксидантных ферментов - суперок-сиддисмутазы и каталазы в эритроцитах и оксидазную активность церулоилазмина в плазме крови, окислительную модификацию белков эритроцитов, а также стабильность и структурное состояние мем-2

бран эритроцитов при ОИМ и хронической ИБС.

4. Выявить влияние ИАПФ (периндоирила) на активность анти-оксидантных ферментов, окислительную модификацию белков эритроцитов, а также показатели стабильности и структурного состояния мембран эритроцитов у больных ОИМ.

Научная новизна.

В работе уточнена связь между особенностями патогенеза различных форм ИБС и интенсивностью свободнорадикальных процессов в крови.

Установлено, что развитие окислительною стресса при ОИМ обусловлено резким сдвигом равновесия в системе антиоксиданты-нро-оксиданты (АО-ПО) и усилением свободнорадикального окисления.

Впервые установлено, что применение ИАПФ (периндоприла) в комплексной интенсивной терапии ОИМ нивелирует проявления окислительного стресса и способствует улучшению структуры и функции эритроцитов.

Практическая значимость:

1. Целесообразно применение ИАПФ (периндоирил) в дозе 2-4 мг), начиная с первых суток развития заболевания, с целью улучшения антиоксидантной защиты миокарда, показателей стабильности и структурного состояния мембран эритроцитов, оптимизации проводимой терапии больных с ОИМ.

2. Показатели СГА, ВЭГ и СПА в плазме крови и микровязкости липидного бислоя мембран эритроцитов могут служить маркёрами тяжести патологического процесса и оценки эффективности терапии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Показана информативность определения интенсивности сво-боднорадикального окисления (СРО), структурного состояния мембран эритроцитов и выраженности эндотоксикоза при различных формах ИБС.

з

2. В крови больных ОИМ отмечено достоверное изменение ре-докс-состояния с преобладанием прооксидантной составляющей за счёт избыточной продукции АФК, нероксинитрита и накопления продуктов ПОЛ на фоне истощения резерва антиоксидантной защиты.

3. Проведение комплексной терапии больным ОИМ приводит к уменьшению проявлений окислительного стресса и синдрома эндогенной интоксикации и не сопровождается нормализацией показателей стабильности и структурного состояния мембран эритроцитов.

4. Включение периндоприла в комплексную терапию ОИМ приводит к достоверному антиоксидантному и мембраностабилизирую-щему действию, снижению эндотоксикоза.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 4 в центральной печати.

Апробация работы.

Результаты исследования представлены на XI национальном Российском конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004), Ш Съезде кардиологов Южного Федерального региона (Ростов-на-Дону, 2004), а также конференции «Гомеостаз и эндоэкология» (Египет, Хургада, 2004).

Внедрение результатов работы в практику. Результаты работы внедрены в практику лечебно - профилактических учреждений кардиологического профиля Ростовской области.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста, содержит 45 таблиц, иллюстрирована 10 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы. Указатель литературы включает в себя 234 работы, из них 143 отечественных и 91 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Клиническая характеристика обследованных

Экспериментальные исследования проводились на когорте больных ИМ численностью 355 человек. Когорта формировалась путём срезового тотального исследования больных ИМ. Для выполнения поставленных задач из общей когорты (1руппа 1) была выделена когорта больных с неосложнённым течением ОИМ в количестве 100 больных (группа 2). Возраст больных группы 1 колебался от - от 32 до 79 лет (средний возраст составил 49,87(1,46 года). Возраст больных группы 2 колебался от 31 до 77 лет (средний возраст составил 41,75(3,52 года). Из обследуемых группы 1 226 больных (63,7%) составили мужчины, а 129 (36,3%) - женщины. Аналогичный половой состав отмечался в группе 2 (мужчины - 66,8%, женщины - 33,2%). Диагноз ИМ ставился в стационарных условиях с использованием клинических и лабораторно-инструментальных методов в соответствии с рекомендациями экспертов ВОЗ 1998 года.

С целью сравнения полученных результатов была обследована контрольная группа, в которую вошло 30 практических здоровых лиц из числа доноров, обследованных добровольно. Средний возраст лиц контрольной группы составил 42,11(4,6 лет и достоверно не отличался от возраста группы 2. Среди обследованных группы сравнения было 60% мужчин и 40% женщин.

Помимо контрольной группы для выполнения поставленных задач была обследована группа сравнения (группа 3), состоящая из 30 больных ИБС, стабильной стенокардией напряжения 2 ФК, не страдающих АГ и сахарным диабетом, не перенесших ИМ в анамнезе. Средний возраст больных группы 3 составил 42,15(2,67 лет и достоверно не отличался от возраста больных группы 2 и контрольной группы. Среди обследованных группы сравнения было 70% мужчин и 30% женщин.

Больным группы 2 проводилась комплексная терапия ОИМ. Половине больных группы 2 (50 больных - 50%) к терапии был

5

добавлен периндоприл в дозе 2 мг в первые сутки ОИМ (группа 2А). При отсутствии гипотензивной реакции на третьи сутки дозу периндоприла увеличивали до 4 мг/сутки. Оставшимся 50 больным периндоприл в комплексную терапию не включался (группа 2Б). Повторное биохимическое исследование крови проводилось на 20 сутки.

Методы обследования.

При обследовании групп 2 и 3 использовались следующие биохимические методы исследования: хемилюминесцентный (ХЛ) анализ в системе Н2О2 - люминол (В.А.Шетаков и др., 1979); определение содержания нитрозогемоглобина определяли спектрофотометри-ческим методом (Степуро И.И. и др., 1997); определение перокси-нитрита (ONOOH)., нитрозоглутатиона (NOFSH) и нитротирозина (NOTup) проводили спектрофотометрическим методом (Лобышева И.И. и др., 1999); определение интенсивности ПОЛ: изучение накопления молекулярных продуктов - первичных - диеновых конъюгатов (ДК), вторичных - малонового диальдегида (МДА), конечных - шиф-фовых оснований (ШО). Продукты ПОЛ определяли в липидном экстракте плазмы и гемолизата; получение хлороформных липидных экстрактов проводили по Bliqh E., Dyer W.J. (1959); определение содержания диеновых конъюгатов (ДК) (Стальная И.Д., 1977); определение содержания шиффовых оснований (ШО) (Bidlack, Tappel, 1973) на снектрофлуориметре Hitachi 650-60 (Япония); определение содержания малонового диальдегида (МДА) (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977); определение суммарной пероксидазной активности (Лу-каш А.И. и др., 1996); определение активности церулоплазмина (ЦП) методом Ревина (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982); определение активности супероксиддисмутазы (СОД) (Fried R., 1975); определение супероксидгенерирующей активности (СГА) (Fried R., 1975); определение активности каталазы методом Королюка М.А. и др. (1988); определение содержания молекул средней массы (МСМ) (Николай-чик В.В. и др., 1991); определение активности циркулирующих им-6

мунных комплексов (ЦИК) (Вельбри С.К. и др., 1988); определение структурных параметров мембран эритроцитов (Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., 1980; Добрецов Г.Е., 1989); измерение интенсивности флуоресценции белков суспензии эритроцитов (Gutteridqe, Wilkins, 1983) - для оценки уровня окислительной модификации.

Статистическую обработку полученных результатов осуществляли с помощью статистического пакета Statistica 6,0 (Stat Soft, Inc). Сравнение величин в случае нормального распределения проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Различия между группами считали статистическими значимыми при р<0,05.

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Свободнорадикальное окисление в крови и структурно-функциональные свойства эритроцитов у больных ОИМ.

Повреждение кардиомиоцитов при реперфузии ишемизированно-го миокарда опосредованно множеством взаимозависимых факторов, среди которых свободнорадикальные механизмы занимают ключевое место (Зенков Н.К. и соавт., 2001).

Нами проведён сравнительный анализ состояния прооксидантно-антиоксидантной системы и нарушений структурного гомеостаза в крови больных хронической ИБС и ОИМ. Нами показано, что при разных формах ИБС в крови пациентов наблюдается повышение интенсивности СРП, выраженное в большей степени у больных ОИМ, что подтверждалось нарастающей динамикой параметров ХЛ. В плазме крови больных хронической ИБС, высота быстрой вспышки Н2О2-люминол-индуцируемой ХЛ увеличивалась на 23%, при ОИМ - на 42%. Светосумма ( Sm ) индуцированной ХЛ плазмы крови больных ИБС увеличивалась на 26%, а у больных ОИМ - на 81% относительно доноров. Светосумма ХЛ, по-видимому, указывает на скорость расходования липидных радикалов вследствие их диспропорциони-рования или взаимодействия с эндогенными антиоксидантами.

Другим показателем, адекватно отражающим генерацию АФК, а именно - супероксида (), является супероксидгенерирующая активность (СГА) плазмы крови. Данный показатель экстремально возрастал в плазме крови больных хронической ИБС и ОИМ, с большей выраженностью у последних. Уровень СГАвозрастал на 118% и 170% в группах пациентов с хронической ИБС и ОИМ, соответственно, по сравнению с контролем. Это соответствует данным литературы, согласно которым плазма больных, перенесших инфаркт миокарда, непосредственно стимулирует генерацию нейтрофилами в течение первых 7 дней инфаркта (T.Siminiak et al,1993). СГА является интегральным показателем, который характеризует соотношение между СРП и антиоксидантными механизмами. При оксидативном стрессе, как правило, наблюдается сдвиг в сторону свободнорадикального окисления (СРО), тогда как в плазме здоровых людей преобладают процессы элиминации супероксида.

Содержание первичных продуктов ПОЛ - диеновых коньюгатов (ДК) - в плазме крови и МЭ при хронической ИБС повышалось на 24-43%, уровень вторичного продукта ПОЛ- малонового диальдеги-да (МДА) возрастал на 19-35%, а содержание конечных продуктов ПОЛ -шиффовых оснований (ШО) - оставалось в пределах нормы. Содержание ДК в плазме и МЭ при ОИМ повышалось на 102-109%, уровень МДА увеличивался на 48-64%, а содержание ШО в плазме повышалось на 27%, а в МЭ оставалось близким к контролю.

Таким образом, при хронической ИБС и ОИМ наблюдалось повышение интенсивности СРП в крови, которое находилось в прямой зависимости от тяжести патологического процесса и выраженности ишемического повреждения миокарда.

На фоне повышенной генерации АКМ и активности ПОЛ в плазме крови и МЭ при различных формах ИБС наблюдалось нарушение синергизма действия и ингибирование ключевых звеньев АОС, что являлось важнейшей причиной усиления СРП. В плазме крови больных ИБС наблюдалось увеличение на 28% оксидазной активности 8

ЦП, являющегося реактантом острой фазы и важнейшим антиокси-дантом биологических жидкостей. В плазме больных ОИМ активность ЦП повышалась в большей степени, чем при хронической ИБС, и превосходило контроль на 44%. При этом активность каталазы в плазме больных хронической ИБС и ОИМ понижалась на 39% и на 25% но сравнению с нормой. При хронической ИБС и ОИМ в эритроцитах наблюдалось ингибирование на 37% и 49% активности СОД, активность сопряженного фермента каталазы уменьшается на 16-19%. Как и при исследовании интенсивности СРО, нарушение функционирования компонентов АОС крови в большей степени выражена у больных ОИМ.

Таким образом, при хронической ИБС и ОИМ наблюдалось развитие оксидативного стресса, выраженность которого зависела от степени ишемического повреждения миокарда.

Свободнорадикальные процессы являются важнейшими регуляторами структурного состояния биомембран, оказывая действие на лииидный бислой и мембранные белки. С другой стороны, мембраны осуществляют регуляцию клеточного метаболизма. Система регуляции ПОЛ мембран взаимосвязана с другими системами клеточной регуляции и отвечает за устойчивость клеток к действию повреждающих факторов. Активизация ПОЛ в крови и накопление его продуктов приводит к нарушению структурной организации мембран эритроцитов у больных хронической ИБС и ОИМ. Нами установлено, что при различных формах ИБС наблюдается снижение стабильности и повышение проницаемости мембран эритроцитов. В качестве чувствительных и информативных показателей стабильности МЭ определяли уровни внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) и СПА. В группе сравнения и группе 2 уровень ВЭГ в плазме крови повышался на 60% и 85% но сравнению с контрольной группой. СПА, которая характеризовала состояние нероксидазных компонентов плазмы крови, и, прежде всего, внеэритроцитарного гемоглобина, резко возрастала при ОИМ. В группе сравнения прирост составлял 104%,

9

а у больных ОИМ -189% относительно контроля. Прирост СПА при ОИМ на 41 % выше, чем при хронической ИБС. Это свидетельствовало о том, что у пациентов обеих исследованных клинических групп наблюдается нарушение стабильности и проницаемости МЭ.

Исследование структурного состояния МЭ с помощью флуоресцентного гидрофобного зонда пирена позволило выявить более тонкие изменения структурной организации мембран. Проведенное исследование позволило установить, что при хронической ИБС и ОИМ наблюдалось снижение на 10% и 15% параметра Fэ/Fm (334), характеризующего текучесть липидного бислоя. При этом изменения текучести анулярных (пограничных) липидов имели противоположную направленность. Параметр Fэ/Fm (282) увеличивался на 23% и 37% в суспензии МЭ у больных хронической ИБС и ОИМ, что свидетельствовало о повышении текучести зон белок-липидных контактов, т.е. уменьшение упорядоченности микроокружения мембранных белков. При этом отмечалось снижение на 13% и 27% параметра Fo- F/Fo у больных хронической ИБС и ОИМ по сравнению с контролем. Такие изменения могли указывать на уменьшение степени погружения белков в липидный бислой или их олигомеризации.

Накопление продуктов ПОЛ в МЭ приводило к повышению коэффициентов полярности - КП-1 и КП-2, которые характеризовали полярность липидного бислоя и зон белок-липидных контактов. Величины КП-1 и КП-2 повышались на 6-10% и 4-6% у больных в группе сравнения и группе 2, что свидетельствовало о нарушении термодинамической стабильности МЭ и снижения гидрофобности внутренних областей мембраны и зон белок-липидных контактов.

Таким образом, ишемическое повреждение кардиомиоцитов у больных групп 2 и 3 сопровождалось нарушением стабильности и структурной организации МЭ. Степень нарушения структурного го-меостаза коррелировала с тяжестью патологического процесса и была наиболее выражена у больных ОИМ.

Синдром эндогенной интоксикации (СЭИ) является типовым па-

тологическим процессом и представляет собой структурно-метаболический ответ организма на острую агрессию как эндогенной, так и экзогенной природы (Костюченко А.Л. и др., 1997). Этот синдром является клиническим проявлением, прежде всего, острой эндогенной интоксикации, которая не сдерживается комненсаторно-адапци-онными механизмами.

Для оценки выраженности СЭИ исследования проводились в двух направлениях:

1) исследовался клеточный состав популяции лейкоцитов периферической крови, на основании чего рассчитывался лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) но формуле Химич-Костюченко (Костюченко А.Л. и др., 1997);

2) изучалась динамика пула молекул средней массы (МСМ) по трем фракциям, имеющим максимум поглощения при длинах волн 210 нм, 254нм и 280нм (Николайчик В.В. и др., 1991), а также оценивалось содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в плазме крови.

Проведенное исследование показало, что содержание лейкоцитов в крови больных хронической ИБС остается близким к норме, незначительным колебаниям подвержены также отдельные виды лейкоцитов - нейтрофилы и моноциты, тогда как уровень лимфоцитов понижен на 19% но сравнению с контролем.

В крови больных ОИМ, напротив, отмечены значительные изменения как уровня лейкоцитов, так и лейкоцитарной формулы но сравнению с контролем. При ОИМ в периферической крови наблюдался лейкоцитоз: общее количество лейкоцитов увеличилось на 45% по сравнению с нормой и на 41% по сравнению с группой сравнения. При этом в лейкоцитарной формуле больных ОИМ выявлены достоверные сдвиги: содержание нейтрофилов увеличилось на 23% по сравнению с больными хронической ИБС. Содержание агранулоци-тов-лимфоцитов и моноцитов при ОИМ уменьшалось на 48% и 38% соответственно, по сравнению с нормой, и на 36% и 44% соответ-

п

ственно, по сравнению с больными хронической ИБС. На фоне лейкоцитоза и сдвига лейкоцитарной формулы крови больных ОИМ наблюдались значительные изменения величины ЛИИ. В крови больных ОИМ ЛИИ увеличивался на 165% но сравнению с нормой и на 145% но сравнению с больными хронической ИБС.

Таким образом, лейкоцитоз при ОИМ, имеющий асептическую природу, реализовался за счет нейтрофилии на фоне снижения уровня агранулоцитов, что приводило к резкому увеличению ЛИИ. Состояние пула лейкоцитов у больных хронической ИБС оставалось близким к норме на фоне незначительной лимфонении.

Полученные нами результаты показали, что уровень фракции МСМ (210) в плазме крови больных хронической ИБС и ОИМ незначительно отличается от контроля, тогда как наблюдается значительный прирост фракций МСМ (254) и МСМ(280). Содержание фракции МСМ (254) в плазме крови больных хронической ИБС и ОИМ увеличивается на 39% и 107%, соответственно. Уровень фракции МСМ(280) в плазме крови больных хронической ИБС и ОИМ также увеличивается на 27% и 69% относительно контроля.

Следует отметить, что прирост уровня фракций МСМ(254) и МСМ(280) более выражен при ОИМ и составляет 49% и 34% но сравнению с больными хронической ИБС.

Другим важным показателем СЭИ является уровень ЦИК в плазме крови, который возрастал при хронической ИБС на 55%, при ОИМ - на 105% по сравнению с контролем, что могло свидетельствовать о повышении интенсивности аутоиммунных процессов. По-видимому, одной из вероятных причин усиления аутоиммуногенеза является развитие оксидативного стресса и окислительное повреждение биомолекул при различных формах ИБС.

Таким образом, можно заключить, что прирост пула МСМ как при хронической ИБС, так и при ОИМ происходил за счет фракций МСМ(254) и МСМ(280) и сопровождался возрастанием уровня ЦИК в плазме крови. Причем, величина прироста МСМ и ЦИК находи-12

лась в прямой зависимости от клинической картины заболевания (острая или хроническая ИБС).

Свободнорадикальное окисление в крови и структурно-функциональные свойства эритроцитов при комплексной терапии ОИМ.

Проведение комплексной терапии не вызывало существенных изменений интенсивности СРП в крови больных ОИМ 2А группы. Показатели индуцированной ХЛ - высота быстрой вспышки (Н) и величина светосуммы (Бш) сохранялись на повышенном уровне и к концу лечения на 39% - 29% превосходили норму. Уровень СГА в плазме крови снижался на 40% в процессе лечения, но оставался на 139% выше контроля. Остаются близкими к исходному фону уровни иероксинитрита и продуктов взаимодействия оксида азота с биосубстратами. К концу лечения уровни иероксинитрита (ОМООН) и нит-розогемоглобина -МОНЪ (545) и МОНЪ(418) остаются повышенными на 62%, 57% и 42%, соответственно, но сравнению с нормой. Содержание нитрозоглутатиона (ББМО), нитротирозина в плазме крови также значительно не изменялось в процессе лечения и превосходило норму на 167% и 136% после окончания курса терапии.

Сохранение повышенного уровня нитроироизводных оксида азота в плазме крови пациентов 2А группы могло быть следствием повышенной активности индуцибельной МО-синтазы (¡МОБ), производящей большие количества N0; и применения препаратов (нитратов), являющихся экзогенными донорами N0.

При проведении комплексной терапии в крови больных ОИМ 2А группы интенсивность ПОЛ сохранялась на повышенном уровне, за исключением МЭ. Содержание ДК в плазме крови и МЭ на 108% и 68% превосходило норму. Уровень МДА в плазме крови повышался на 33% к концу лечения, а уровень ШО незначительно изменяется в ходе лечения и на 47% превосходило норму. В МЭ в ходе лечения отмечалась позитивная динамика вторичных и конечных стадий ПОЛ. В процессе лечения уровень МДА нормализовался, а содержание ШО снижалось на 55% к концу лечения, что на 34% ниже нормы. При

этом активность СОД в эритроцитах повышалась на 71% в процессе лечения, но оставалась на 13% ниже нормы. Активность каталазы в эритроцитах к концу лечения оставалась на 27% ниже нормы.

Таким образом, можно заключить, что проведение комплексной терапии во 2А группе больных ОИМ приводит к незначительным позитивным сдвигам в системе СРП-АОС в крови, что способствует незначительному ослаблению признаков оксидативного стресса.

При проведении комплексной терапии в группе 2А пациентов с ОИМ сохранялись повышенные уровни ВЭГ и СПА в плазме крови, которые на 130-138% превосходили норму. Это показывает, что в гетерогенной популяции эритроцитов преобладала фракция клеток с нестабильной мембраной, которые подвергались гемолизу, поддерживая высокий уровень ВЭГ и СПА в плазме крови. Проведение комплексной терапии группе 2А больных ОИМ приводит к некоторому повышению текучести - FЭ/FM (334) - лииидного бислоя, которая однако оставалась на 12% ниже нормы. При этом текучесть аннуляр-ных липидов - FЭ/FM (282) в процессе лечения изменяется незначительно и на 45% превосходило норму к концу курса. К позитивным эффектам комплексной терапии можно отнести нормализацию коэффициента полярности лииидного бислоя - КП-1, тогда как коэффициент полярности зон белок-лииидных контактов-КП-2 - оставалось на 11% ниже контроля. При проведении комплексной терапии к концу лечения уровень окислительной модификации мембранных белков оставался на повышенном уровне.

Таким образом, на фоне комплексной терапии в группе 2А больных ОИМ сохранялись нарушения стабильности и отклонения от нормы большинства параметров структурного состояния МЭ, за исключением нормализации гидрофобности внутренних областей мембран, что могло способствовать повышению их термодинамической резистентности.

Включение периндоприла - липофильного ингибитора ангиотен-зинпревращающего фермента (иАПФ) 2 класса в комплексную тера-14

пию ОИМ проведено с целью оптимизации лечения, которое оказалось недостаточно эффективным, что подтверждается клинико-био-химическими исследованиями в группе 2А пациентов.

Включение периндоприла в стандартную терапию ОИМ приводило к значительному снижению интенсивности СРП в крови группы 2Б.

В процессе лечения снижалась интенсивность Н2О2 - люминол-индуцируемой ХЛ в плазме крови, что выражалось в уменьшении на 18% и 45% высоты быстрой вспышки (Н) и светосуммы ( Sm) ХЛ. Это могло свидетельствовать об уменьшении продукции АФК и ли-пидных радикалов. В результате лечения величина быстрой вспышки (Н) нормализовалась, а светосумма ^щ) ХЛ опускалась на 30% ниже нормы. Антирадикальный эффект лечения подтверждался снижением на 78% уровня СГА в плазме крови больных группы 2Б, но после окончания курса терапии продукция супероксидного анион-радикала оставалась выше контроля.

Применение терапии с включением периндоприла приводило в плазме к снижению на 2 4 % уровня пероксинитрита ^N00^, наиболее реактивной формы оксида азота, обладающей высоким цито-токсическим потенциалом.

В процессе лечения незначительно изменялся уровень нитрозо-гемоглобина - N0^ (545) и N0^ (418) и после курса терапии на 34% и 32% превосходил контроль. Уровень нитрозоглутатиона (^N0) в плазме крови после курса терапии увеличивался на 39 % по сравнению с исходным фоном и на 162% превосходил контроль. Повышение уровня нитрозоглутатиона в результате лечения можно рассматривать как компенсаторную реакцию, т.к. известно, что FSN0 обладает выраженным АО эффектом.

Содержание нитротирозина в плазме крови снижалось на 39% к концу лечения, но оставалось на 48% выше, чем в контроле.

Введение в схему лечения ОИМ периндоприла приводило к значительному снижению интенсивности всех стадий ПОЛ, что под-

15

тверждало падение уровня молекулярных продуктов ПОЛ в плазме крови и МЭ у больных группы 2Б. Содержание ДК в плазме крови и МЭ в результате лечения снижалось на 37% и 26%, но оставалось выше нормы на 25% и 31%, соответственно. Уровень МДА в плазме крови и МЭ в процессе лечения снижался на 19% и 25%. Причем в плазме крови его содержание оставалось на 20% выше контроля, а в МЭ наблюдался нормализация его уровня.

В плазме крови больных группы 2Б к окончанию курса лечения сохранялся повышенный уровень оксидазной активности ЦП, которая на 51% превышал норму. Это можно отнести к положительным эффектам терапии в связи с антиоксидантными свойствами ЦП благодаря его феррооксидазной и СОД - подобной активности. Вместе с тем активность каталазы в плазме крови в процессе лечения снижалась на 39% относительно исходного фона и на 53% относительно контроля. Это явилось косвенным свидетельством в пользу повышения стабильности мембран эритроцитов и других клеток крови, а также мембран гистогематических барьеров.

В процессе лечения группы 2Б ОИМ наблюдалась стимуляция важнейших сопряженных АО ферментов-СОД и каталазы, активность которых увеличивалась на 71% и 38%, но сравнению с исходным фоном и нормализовалась.

Таким образом, полученные результаты свидетельствовали, что применение периндоприла повышает лечебный эффект комплексной стандартной терапии ОИМ, который характеризовался выраженным антиоксидантным действием. Последние реализовывались за счет: уменьшения продукции АКМ в плазме крови; уменьшение уровня ПОЛ в плазме и МЭ; стимуляции компонентов АОС в крови.

Проведение комплексной интенсивной терапии ОИМ с применением периндоприла в группе больных 2Б приводило к повышению стабильности МЭ. После лечения уровни ВЭГ и СПА в плазме крови снижались на 29% и 41 % по сравнению с исходным фоном. Это приводило к нормализации уровня ВЭГ, тогда как СПА оставалось на 45% выше нормы.

16

Исследование структурной организации МЭ методом латеральной диффузии зонда пирена показало, что включение периндоприла в комплексную терапию ОИМ в группе 2Б способствовало восстановлению структурного состояния МЭ по большинству параметров.

В процессе лечения в группе 2Б наблюдалось повышение на 28% текучести липидного бислоя (Тэ ТТМ (334)) относительно исходного фона, что приводило к нормализации данного параметра. После курса терапии текучесть аннулярных липидов (Т3 / ТМ (282)) снижалась на 13 % относительно исходного фона и приближалось к норме, но на 12% её превосходило. При этом эффективность переноса энергии с белков на пирен - ТО - Т/ТО - увеличивалась на 26% по сравнению с исходным фоном и практически не отличалась от нормы. Это демонстрировало снижение уровня структурных перестроек в мембранных белках в результате проведённого лечения. К концу лечения наблюдалась также нормализация полярности липидного бислоя.

Включение периндоприла в терапию ОИМ приводило к снижению уровня окислительной модификации белков МЭ в 2Б группе больных. После проведения лечения уменьшалось на 52% содержание белков с внутри- и межмолекулярными сшивками (параметр Т360/ 440), но оставалось на 155% выше, чем в контроле. В процессе лечения наблюдалось снижение на 2 7 % по сравнению с исходным фоном уровня белков с окисленными гетероциклическими остатками аминокислот и их содержание приближалось к норме.

Комплексная терапия приводила также к нормализации уровня белков, содержащихнитротирозин. Это следует рассматривать какпозитив-ный факт, так как нитрование тирозиновых остатков в белках делает их малодоступными для регуляторного влияния протеинкиназ, которые осуществляют своё действие путём фосфолирирования тирозинилов.

Таким образом, включение липофильного иАПФ периндоприла в комплексную интенсивную терапию ОИМ приводило к выраженному мембранопротекторному действию, которое реализовалось путём (рис.1,2):

Рис. 1. Влияние комплексной терапии ОИМ на интенсивность генерации АКМ и ПОЛ в крови больных двух клинических групп (в % относительно исходного фона, * - р<0,05, ** - р<0,01, *•• - р<0,001).

Рис. 2. Влияние комплексной терапии ОИМ на стабильность и структурное состояние мембран эритроцитов больных двух клинических групп (в % относительно уровню контрольной группы, * -р<0,05): 0 - до лечения, 1 - после лечения.

1) повышения стабильности МЭ;

2) нормализации структурного состояния МЭ;

3) уменьшения уровня окислительной модификации мембранных белков.

Применение ИАПФ (периндоприла) в комплексной терапии ОИМ больным 2Б группы приводило к снижению уровня лейкоцитов и нормализации ЛИИ. При этом происходило снижение уровня фракций МСМ в плазме крови на 26-41% по сравнению с исходным фоном. Одновременно наблюдалась депрессия аутоиммуногенеза, что подтверждалось снижением на 29% уровня ЦИК в плазме крови больных 2Б группы после лечения, но их содержание оставалось на 44% выше нормы.

Таким образом, положительный лечебный эффект терапии ОИМ, включающей нериндоприл, реализовался путём нормализации лейкоцитарных реакций, приближения пула МСМ к стандартному уровню и подавления аутоиммунных процессов.

Можно предположить, что периндоприл оказывал ингибирующее действие на различных этапах ишемического каскада, начиная со снижения вазосиазма, заканчивая обратным развитием гипертрофии миокарда левого желудочка и миокардиофиброза.

Таким образом, можно заключить, что комбинированная терапия ОИМ с применением ИАПФ периндоприла обладала выраженным антиоксидантным, мембранопротекгорным и мембраностабилизиру-ющим действием, существенно снижала проявление или предотвращала развитие патологических реакций эндогенной интоксикации.

Выводы

1. В остром периоде ИМ наблюдается развитие оксидативного стресса, характеризующегося усилением генерации АФК, нескомпен-сированной активацией ПОЛ в крови на фоне нарушения синергизма и сопряжённости работы антиоксидантной системы. 20

2. Установлены увеличение микровязкости линидного бислоя и снижение микровязкости зон белок-липидных контактов, структурные перестройки мембранных белков, а также повышение полярности линидного бислоя и аннулярных липидов, что отражает снижение стабильности и нарушение структурной организации мембран эритроцитов.

3. Увеличение ЛИИ, повышение в плазме крови содержания фракций МСМ(254) и МСМ(280) при ОИМ характеризует развитие синдрома эндогенной интоксикации, свидетельствующего о тяжести патологического процесса.

4. Включение периндоирила в комплексную терапию ОИМ восстанавливает прооксидантно-антиоксидантное равновесие, приводит к ингибированию продукции АКМ и интенсивности ПОЛ в крови, что сопровождается реактивацией СОД и каталазы в эритроцитах, а также способствует повышению стабильности и нормализации большинства показателей структурного состояния мембран эритроцитов.

Практические рекомендации

1. Целесообразно применение иериндоприла в дозе 2-4 мг, начиная с первых суток развития заболевания, с целью повышения эффективности проводимой терапии, улучшения антиоксидантной защиты миокарда больных с ОИМ.

2. Определение уровней СГА, ВЭГ и СПА в плазме крови и микровязкости линидного бислоя мембран эритроцитов может служить дополнительным методом оценки тяжести оксидативного стресса у больных с различными формами ИБС и эффективности терапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Анализ осложнений острого и повторного инфаркта миокарда (Петренко М. И., Беликова Л.Н.). // Материалы Третьего съезда кардиологов Южного федерального округа. - Ростов-на-Дону. - 2004. -С. 225.

2. Антирадикальный эффект периндоирила в крови при остром инфаркте миокарда (Петренко М. И., Терентьев В. П., Милютина Н.П., Ананян А.А., Внуков В.В.). // Успехи современного естествознания. -2004. - № 4 С.

3. Влияние периндоирила на показатели синдрома эндогенной интоксикации при остром инфаркте миокарда (Петренко М. И., Терентьев В.П., Ананян А.А., Милютина Н.П., Внуков В.В.). // Успехи современного естествознания. - 2004. - № 4 С.

4. Мембраноиротекторный эффект периндоприла при остром инфаркте миокарда (Петренко М. И., Терентьев В.П., Милютина Н.П.) // Гомеостаз и эндоэкология: Материалы конференции - Хургада - Египет - Успехи современного естествознания. - 2004. - № 3. - С. 27-28.

5. Состояние свободнорадикальных процессов в крови больных острым инфарктом миокарда, влияние фармакотерапии (Петренко М. И., Милютина Н.П., Терентьев В.П., Батюшин М.М.). //XI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. - М. -2004.- С. 559.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ АГ - артериальная гипертензия АКМ - активированные кислотные метаболиты АО - антиоксиданты АТФ - аденозинтрифосфат АФК - активные формы кислорода ВЭГ - внеэритроцитарный гемоглобин ГПО - глутатионпероксидаза ГТ-глутатионтрансфераза ДАД - диастолическое артериальное давление ДК - диеновые конъюгаты ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИАПФ - ингибиторы АПФ ИБС - ишемическая болезнь сердца ИМ - инфаркт миокарда КП - коэффициент полярности ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации МАО - моноаминоксидаза МДА - малоновый диальдегид МСМ - молекулы средней массы НАДФ - никотинамидцинуклиотидфосфат ОИМ - острый инфаркт миокарда ПО - прооксиданты ПОЛ - перекисное окисление липидов РНК - рибонуклеиновая кислота САД - систолическое артериальное давление СОД - супероксиддисмутаза СПА - суммарная пероксидазная активность СРО - свободнорадикальное окисление СЭИ - синдром эндогенной интоксикации

ФК - функциональный класс

ХЛ - хемилюминесценция

ХСН - хроническая сердечная недостаточность

ХПН - хроническая почечная некдостаточность

ЦНС - центральная нервная система

ЦП - церулоплазмин

ШО - шиффовы основания

ЛР № 061094, выд. Комитетом Российской Федерации по печ. 21.10.97 г. Подписано в печать 2.09.04 г. Формат 60x84/16. Зак. № 960. Объем 1,7 п. л. Тираж 120 экз. Отпечатано: ЗАО «Полиграфист», 346500, г. Шахты Ростовской обл., пер. Красный шахтер, 68.

* 172 0 /

РНБ Русский фонд

2005-4 12276