Свободнорадикальное окисление при различных функциональных состояниях щитовидной железы

Баврина, Анна Петровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Свободнорадикальное окисление при различных функциональных состояниях щитовидной железы
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Свободнорадикальное окисление при различных функциональных состояниях щитовидной железы"

На правах рукописи

0031G6890

БАВРИНА АННА ПЕТРОВНА

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ БЕЛКОВ И ЛИЗЩДОВ В КОЛЛОИДНЫХ УЗЛАХ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА

03.00.04 - биохимия 03.00.13 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 6 ДПР 2008

Нижний Новгород 2008

003166890

Работа выполнена в Нижегородском государственном университете им. Н И Лобачевского и ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия Росздрава»

Научные руководители:

Доктор биологических наук, профессор Конторщикова Клавдия Николаевна Кандидат биологических наук, доцент Корягин Александр Сергеевич

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Ерлыкина Елена Ивановна Доктор биологических наук, профессор Моничев Александр Яковлевич

Ведущая организация:

Казанский государственный медицинский университет

Защита состоится «ЯУу> &Н/1АЛ&- 2008 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 212 166 15 при Нижегородском государственном университете им, Н.И. Лобачевского (603950, Нижний Новгород, пр Гагарина,

23)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ННГУ

Автореферат разослан «<£/» 2008 года

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доцент, кандидат биологических наук

АС Корягин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Проблема диагностики различных функциональных состояний щитовидной железы заслуживает большого внимания клиницистов и экспериментаторов Во всем мире заболевания щитовидной железы являются наиболее распространенной эндокринной патологией. Около 15 миллионов человек, проживающих на территории Российской Федерации, имеют явные или скрытые нарушения функции щитовидной железы Ежегодно около 200 тысяч россиян заболевают гипер- или гипотиреозом Из-за йодной недостаточности в пище в эндемичных районах распространенность зоба или активных узлов щитовидной железы достигает очень высоких цифр (Лабораторная. , 2002).

До сих пор не существует оптимального метода оценки функционального состояния щитовидной железы, все они имеют определенные недостатки. Отделить функционально неактивные узлы ткани щитовидной железы от функционально активных возможно только посредством радиоизотопного сканирования или сцинтиграфии, что требует специального оборудования и несет радиационную нагрузку. Недостатком метода является то, что феномен накопления радиоактивного препарата не всегда позволяет дифференцировать узловой зоб, кисты и опухоли щитовидной железы. В связи с этим выработка рациональных лабораторных стратегий является чрезвычайно важной для проведения дифференциальной диагностики различных состояний, выборе правильного диагноза и лечения

В последнее время все чаще используются методики определения продуктов окисления липидов и белков, так как они являются универсальными для диагностики различных отклонений от нормы.

В литературе отсутствуют сведения о возможной роли свободнорадикальной модификации белков и перекисного окисления липидов

(ПОЛ) в биохимических механизмах становления и прогрессирования нарушений функционирования щитовидной железы, а также об использовании данного механизма в диагностике различных функциональных состояний органа, хотя такое направление исследований представляется интересным и важным

Цель исследования

Целью работы явилась оценка свободнорадикального окисления липидов и белков в слюне и пунктате коллоидных узлов щитовидной железы у людей с нарушением ее функции.

Задачи

1. Определение уровня гормонов щитовидной железы (ТТГ, Тз, Т4) и аутоантител к рецептору ТТГ и тиреопероксидазе в сыворотке крови людей с узловым коллоидным зобом.

2 Измерение уровня перекисного окисления липидов в пунктате коллоидных узлов щитовидной железы.

3. Анализ уровня окислительной модификации белков в пунктате коллоидных узлов щитовидной железы.

4. Исследование уровня перекисного окисления липидов в слюне пациентов с узловым коллоидным зобом

5 Биохемилюминесцентная оценка антиоксидантной активности в слюне людей с узловым коллоидным зобом

Положения, выносимые на защиту

1. Функционально активные («горячие») узлы щитовидной железы характеризуются большей интенсивностью свободнорадикального окисления белков и липидов

2 В слюне людей с «горячими» узлами щитовидной железы процессы ПОЛ идут более интенсивно, чем у лиц с «холодными» узлами У пациентов с «горячими» узлами наблюдается более высокая активность антиоксидантной системы, отмечаемая по показателям Б, 1тах иЩ2а

Научная новизна

В работе впервые проведено комплексное исследование свободнорадикального окисления жидкой части пунктата коллоидных узлов щитовидной железы людей, включающее определение первичных продуктов липопероксидации - диеновых и триеновых конъюгатов (ДК и ТК) и конечных продуктов - оснований Шиффа (ОШ), а также определение продуктов окислительной модификации белков (ОМБ) - альдегид- и кетон-производных нейтрального и основного характера

Полученные данные сопоставлены с результатами морфологического исследования эвакуированной жидкости и уровнем гормонов щитовидной железы в сыворотке крови людей с узловым коллоидным зобом

Впервые проведена оценка параметров перекисного окисления липидов (ПОЛ) слюны лиц с узловым коллоидным зобом, включающая содержание ДК, ТК и ОШ и параметры биохемилюминограммы

Впервые установлена зависимость уровня свободнорадикального окисления (СРО) от функционального состояния щитовидной железы Установлено, что у пациентов с «горячими» узлами в щитовидной железе процессы СРО протекают интенсивнее, чем у людей с «холодными» узлами в щитовидной железе

Предполагается, что определение окислительной модификации белка по уровню карбонильных производных и перекисного окисления липидов можно эффективно использовать для дифференциальной диагностики «холодных» и «горячих» узлов щитовидной железы

Научно-практическая значимость

Полученные результаты расширяют представления о механизмах становления и развития отклонений в функционировании щитовидной железы

Предлагаемые методы позволяют более точно характеризовать функциональную активность щитовидной железы, а также могут стать важным прогностическим критерием развития узловых образований

Методы определения окислительной модификации белков по уровню карбонильных производных и перекисного окисления липидов можно использовать для дифференциальной диагностики по выявлению «холодных» и «горячих» узлов щитовидной железы

Уровень продуктов липопероксидации в слюне пациентов с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы можно использовать в качестве дополнительных неинвазивных критериев для определения функционального состояния щитовидной железы.

Апробация работы

Основные положения работы были доложены на 4-й научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005), XII Нижегородской сессии молодых ученых (Нижний Новгород, 2007), Научно-практической конференции «Научное творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях» (Москва, 2007), где было присуждено 3 место.

По материалам диссертации опубликовано 9 работ Подана заявка на получение патента РФ «Способ оценки функционального состояния щитовидной железы» №2006 139415/15 от 07.11 06 г

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа в объеме /^листов состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка цитированной

литературы Диссертация иллюстрирована Л4 рисунком и 43 таблицами Библиографический указатель включает 225 источников литературы (100 отечественных и 125 иностранных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Материалом для исследования служили биологические жидкости людей с нарушениями функций щитовидной железы (пунктат коллоидных узлов, сыворотка крови и слюна), находящихся на лечении в тиреодологическом центре Нижегородского областного клинического диагностического центра Общее число обследованных составило 182 человека. Все пациенты были разделены на 5 групп в зависимости от результатов сцинтиграфии («горячий» или «холодный» узел) и диагноза после морфологического исследования (коллоидный узел» или «киста» щитовидной железы) Первую группу составили лица с «горячими» узлами, которые представляют собой функционально активные образования, вторую группу - люди с функционально неактивными «холодными» узлами, выключенными из метаболизма, в третью группу вошли пациенты с диагнозом «коллоидный узел», в четвертую -пациенты с диагнозом «киста» и в пятую - лица, у которых функциональная активность узлов не выявлялась.

Общее количество материала и его распределение по этапам исследования представлено в таблице 1

Таблица 1

Общее количество материала и его распределение по этапам исследования

Этапы исследований Виды анализов Количество исследованных образцов

1. Исследование уровня ОМБ в пунктате коллоидных узлов определение степени окислительной модификации белков по уровню карбонильных производных; определение общего белка биуретовым методом 148 148

2. Исследование уровня ПОЛ в пунктате коллоидных узлов - определение содержания ДК, ТКиОШ 151

3. Исследование уровня ПОЛ, интенсивности свободнорадикальных процессов и активности антиоксидантной системы в слюне - определение содержания ДК, ТКиОШ; определение активности антиоксидантной системы биохемилюминесцентным методом 150 76

4. Определение вида новообразований в щитовидной железе - морфологическое исследование 182

5. Исследование гормонов щитовидной железы в сыворотке крови - определение ТТГ; - определение свТ4, - определение оТ4; - определение свТЗ; - определение оТЗ; - определение АТТГ; - определение АТПО 130 90 15 30 21 24 44

Всего 1209

Морфологическое исследование пунктата узлов щитовидной железы осуществлялось врачами-цитологами НОКДЦ. Окрашивание препаратов проводилось по методу Романовского-Гимзы

Гормоны щитовидной железы определяли иммуноферментным методом, основанным на высокой избирательности и специфичности иммунологических реакций «антиген-антитело».

Продукты ОМБ (альдегид- и кетондинитрофенилгидразоны нейтрального и основного характера) определяли по уровню карбонильных производных (Дубинина, 1995)

Уровень общего белка определяли биуретовым методом Количество ДК, ТК и ОШ измеряли в гептан-изопропанольных фракциях (Волчегорский и др , 1989)

Анализ свободнорадикального окисления и активности антиоксидантной системы в слюне проводился биохемилюминесцентным методом (Кузьмина, Нелюбин, Щенникова, 1983)

Статистическая обработка результатов проводилась согласно С Гланду (1999) Достоверность показателей в группах оценивалась по критерию Стьюдента, связь между показателями оценивалась с помощью дискриминантного анализа (множественная линейная регрессия) и параметрического критерия Пирсона (Реброва, 2002) По результатам дискриминантного анализа построены математические модели определения функционального состояния щитовидной железы с помощью компьютерной программы 81айБПса 6 О

Результаты и их обсуждение

Первым этапом работы стало определение содержания алифатических альдегид- и кетон-динитрофенилгидразонов нейтрального характера в пунктате «горячих» и «холодных» узлов щитовидной железы, а также определение общего белка биуретовым методом в этих же пробах (таблица 2)

Таблица 2

Содержание алифатических альдегид- и кетон-динетрофенилгидразонов нейтрального характера в пунктате «горячих» и «холодных» узлов щитовидной

железы

Длина волны «горячие» узлы (ед.оп.пл/г белка) «холодные» узлы (ед.оп.пл/г белка)

356 нм 10,13±0,6* 4,46±0,22

363 нм 10,6±0,64* 4,6±0,22

370 нм 9,6±0,6* 4,2±0,21

Примечание: * - статистически значимые различия (р < 0,05)

Из представленных данных можно сделать вывод, что в «горячих» узлах процесс окислительной модификации белков имеет статистически значимо более выраженный характер, чем в «холодных» неактивных узлах.

Полученные результаты можно объяснить биохимическими процессами, протекающими в тиреоцитах Известно, что для образования гормонов щитовидной железы требуется пероксид водорода, который является сильным окислителем и может приводить к усилению свободнорадикальных процессов Йод, поступающий в тиреоцит, «активируется» путем окисления при участии тиреопероксидазы. Для этого требуется пероксид водорода, образующийся с участием НАДФН-оксидазной системы, подобной той, которая существует в лейкоцитах Вторым ферментом, активирующимся с помощью пероксида водорода, является йодопероксидаза, или «сопрягающий фермент». Он катализирует соединение двух йодтирозиновых оснований с образованием йодтиронилового основания. Сопряжение двух дийодтиронинов (ДИТ) приводит к образованию Т4, сопряжение монойодтиронина (МИТ) и ДИТ - к формированию Тз-компонента в составе тиреоглобулина (Лабораторная.. , 2002).

Следующей частью исследования было определение содержания алифатических альдегид- и кетон-динитрофенилгидразонов основного характера в пунктате «горячих» и «холодных» узлов щитовидной железы, результаты определения которых представлены в таблице 3

Таблица 3

Содержание алифатических альдегид- и кетон- динитрофенилгидразонов основного характера в пунктате «горячих» и «холодных» узлов щитовидной

железы

Длина волны «горячие» узлы (ед.оп пл/г белка) «холодные» узлы (ед оп.пл/г белка)

430 нм 2,37±0,23* 0,99±0,1

530нм 0,29±0,033 0,23±0,078

Примечание- * - статистически значимые различия (р < 0,05)

Уровень алифатических альдегид-динитрофенилгидразонов основного характера в пунктате «холодных» и «горячих» узлов щитовидной железы имеет зависимость, схожую с содержанием производных нейтрального характера, в «холодных» узлах процесс образования алифатических кетон-динитрофенилгидразонов основного характера идет менее интенсивно, чем в «горячих», хотя для продуктов, определяющихся при длине волны 530 нм, различия были статистически не значимыми Вероятно, это связано с небольшим количеством данных продуктов в пунктате узлов щитовидной железы

Дискриминантный анализ различий групп с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы по показателям ОМБ позволил создать модель отличия «горячего» и «холодного» узла щитовидной железы, имеющую вид системы уравнений.

«Горячий» узел = -7,48886+1,29589*ед.опт.пл/г.белка при 356нм+1,29795* ед.опт.пл/г.белка при 363нм-1,53411* ед.опт.пл/г.белка при 370нм+0,62984* ед.опт.пл/г.белка при 440нм+2,00566* ед.опт.пл/г.белка при 530нм

«Холодный» узел = -2,38903+1,16706* ед.опт.пл/г.белка при 356нм+0,24502* ед.опт.пл/г.белка при 363нм-0,85120* ед.опт.пл/г.белка при 370нм+1,98408* ед.опт.пл/г.белка при 430нм-2,38903* ед.опт.пл/г.белка при 530нм

При этом по данной системе уравнений можно определить наличие «холодного» узла в щитовидной железе с достаточно высокой точностью -94,7%, наличие «горячего» узла - с меньшей точностью (74,3%) Точность отличия «холодного» узла от «горячего» составляет 84,4%. Из вышесказанного следует, что показатели ОМБ могут быть использованы для дифференциальной диагностики функционального состояния щитовидной железы, не используя сцинтиграфию

Вторьм этапом исследования стало определение продуктов липопероксидации в пунктате «горячих» и «холодных» узлов щитовидной железы. В результате получены достоверные различия в содержании первичных продуктов ПОЛ (ДК и ТК) и конечных (ОИ1) в «горячих» и «холодных» узлах щитовидной железы. В группе больных с функционально активными коллоидными узлами уровни продуктов липопероксидации были достоверно выше, чем у больных с функционально неактивными узлами и изменялись следующим образом:

холодный узел горячий узел

Рис. 1. Содержание ДК и ТК в пунктате «холодных» и «горячих» узлов щитовидной железы (р < 0,05).

Уровень конечных продуктов ПОЛ (ОШ) также достоверно отличался по группам:

холодный узел

горячий узел

Рис. 2. Содержание ОШ в пунктате «холодных» и «горячих» узлов щитовидной железы (р < 0,05).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в «горячих» узлах щитовидной железы ПОЛ протекает более интенсивно, чем в «холодных». ! Особенно ярко эта динамика выражена для конечных продуктов ПОЛ - ОШ, [ содержание которых в «горячих» узлах в 4 раза выше, чем в «холодных». 1 Полученные результаты можно объяснить биохимическими процессами, протекающими в тиреоцитах, где для активации ферментов требуется пероксид водорода, являющийся сильным окислителем липидов и белков.

Проведенный дискриминантный анализ различий групп с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы по показателям ПОЛ позволил построить модель постановки диагноза «горячий» или «холодный» узел щитовидной железы по данным параметрам (ДК, ТК и ОШ)

«Горячий» узел —30,3651+231,9597*ДК-0,9437*ТК+0,6177*0111

«Холодный» узел =-22,2774+205,6964*ДК-0,3268*ТК+0,2690*ОШ

По результатам дискриминантного анализа различий групп с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы по показателям ПОЛ в пунктате, вероятность постановки верного диагноза «холодный» узел щитовидной железы составляет 89,7%, диагноза «горячий» узел щитовидной железы несколько ниже - 71,4% Точность отделения «холодного» узла от «горячего» по данной системе уравнений составляет 80,2% Таким образом, параметры ПОЛ могут быть использованы для дифференциальной диагностики функционального состояния щитовидной железы.

Определение перекисного окисления липидов и активности антиоксидантной системы в слюне лиц с узловым коллоидным зобом проводилось с целью разработки неинвазивного метода определения функционального состояния щитовидной железы. На этом этапе получены статистически значимые различия в содержании продуктов липопероксидации в слюне людей с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы В группе пациентов с функционально активными коллоидными узлами уровни продуктов липопероксидации были достоверно выше, чем у людей с функционально неактивными узлами и изменялись следующим образом-

Таблица 4

Содержание продуктов ПОЛ в слюне пациентов с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы

Продукт «горячие» узлы «холодные» узлы

(условные единицы) (условные единицы)

ДК 0,25"± 0,0062* 0,204 ±0,0059

ТК 0,Н± 0,045* 0,06210,0072

ош

Примечание: * - статистически значимые различия (р < 0,05)

При исследовании интенсивности свободнорадикальных процессов и активности антиоксидантной системы в слюне пациентов с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы получены различия, представленные в таблице 5

Таблица 5

Показатели хемилюминограммы слюны людей с «горячими» и «холодными»

узлами щитовидной железы

1т„ (ту) Б (ту) Щ2а

«горячие» узлы «холодные» узлы «горячие» узлы «холодные» узлы «горячие» узлы «холодные» узлы

0,89±0,08* 0,69±0,08 7,85±1,13* 6,20±0,63 -0,35±0,054 -0,27±0,068

Примечание. * - статистически значимые различия (р < 0,05)

Анализируя полученные данные, можно отметить, что в слюне лиц с «горячими» узлами щитовидной железы процессы ПОЛ идут более интенсивно, чем у людей с «холодными» узлами. Кроме того, у пациентов с «горячими»

узлами наблюдается более высокая активность антиоксидантной системы, отмечаемая по показателям БХЛ- S, 1гаах и tg 2 а

Выявлена корреляция между содержанием продуктов липопероксидации (ДК, ТК и ОШ) в пунктате узлов щитовидной железы и слюне этих же пациентов (таблица 6)

Таблица 6

Коэффициент корреляции продуктов липопероксидации в слюне и

пунктате щитовидной железы

Показатели пунктата Коэффициент корреляции Показатели слюны

ДК 0,4721 ДК

ТК 0,5264 ТК

ОШ 0,4811 ОШ

Таким образом, статистически значимые различия в содержании продуктов липопероксидации в слюне пациентов с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы позволяют использовать их в качестве дополнительных неинвазивных критериев для диагностики функционального состояния щитовидной железы.

Исходя из полученных результатов, нами были построены две модели постановки диагноза «горячий» или «холодный» узел щитовидной железы по параметрам ДК, ТК, ОШ и ДК, ТК, ОШ, 1тах, Б, 2а в слюне

«Горячий» узел =-22,2172+184,8544*ДК-32,5273*ТК+0,0226*01Н

«Холодный» узел =-16,4691+156,8287*ДК-32,4939*ТК-0,0290*0111

Согласно данной модели, вероятность постановки диагноза «горячий» узел составляет 93,9%, а диагноза «холодный» узел - 50%. Точность отделения

«холодного» узла от «горячего» по данной системе уравнений составляет 82,2%

Результаты исследований показали, что точность диагноза можно повысить, используя не только уровни продуктов липопероксидации (ДК, ТК и ОШ), но и показатели активности антиоксидантной системы - Я, 1тах и Щ 2 а в одной модели, которая имеет вид следующей системы уравнений.

«Горячий» узел =-34,1501+227,8571 *ДК-51,2883*ТК+0,0823*0111-2,0468*1„„Н[+б4,6251*8-82,2143',Чд 2а

«Холодный» узел =-23,5007+189,5486*ДК-45,9357*ТК+0,0187*0111-1,7217*1т„+53,3939*8-68,3729^ 2а

Из результатов дискриминантного анализа можно сделать вывод о том, что при использовании всех показателей ПОЛ и активности антиоксидантной системы в слюне (ДК, ТК, ОШ и ДК, ТК, ОШ, 1тах, Б, tg 2а) точность постановки диагноза «горячий» узел повышается с 93,9% до 95,6% и диагноза «холодный» узел - с 50% до 83,3%. Точность отличия «холодного» узла от «горячего» по данной системе уравнений увеличивается на 9,2% (с 82,2% до 91,4%)

Определение вида новообразований в щитовидной железе путем морфологического анализа позволило выявить людей с диагнозом «коллоидный узел» и «киста» щитовидной железы. Одновременно всем обследованным проводилось исследование свободнорадикального окисления липидов и белков в слюне и пунктате узлов щитовидной железы, у лиц с диагнозом «коллоидный узел» наблюдалась более высокая активность антиоксидантной системы, отмечаемая по показателям 8, 1тах и 2 а, что способствует снижению содержания промежуточных (ДК, ТК) и конечных (ОШ) молекулярных продуктов перекисного окисления липидов в слюне. Достоверные различия

определялись в данных группах только при их разделении на подгруппы с «горячими» и «холодными» узлами

При изучении уровней гормонов щитовидной железы (ТТГ, свТз, оТ3, свТ4, оТ4) в сыворотке крови не было выявлено корреляции между содержанием гормонов щитовидной железы в сыворотке крови и принадлежностью новообразования к группе «горячих» или «холодных» узлов по результатам сцинтиграфии Результаты исследования гормонов представлены в таблице 7.

Таблица 7

Содержание гормонов щитовидной железы в сыворотке крови больных с

«холодными» и «горячими» узлами щитовидной железы

«горячие» узлы «холодные» узлы

ТТГ, мМЕ/л 1,0±0,46 1,78±0,216

оТ3, нмоль/л 2,51±0,68 2,91±1,53

свТз, пмоль/л 3,024±0,536 2.65±0,254

оТ4, нмоль/л 59,0±14,86 53,3±21.09

свТ4, пмоль/л 13,74±1,42 11,17±1,35

Содержание свободных Тэ и Т4 и общего Т4 в «горячих» узлах выше, чем в «холодных», но различия оказались статистически не значимыми, при исследования ТТГ также не наблюдалось различий

Полученные результаты могут быть связаны с разной рецепторной чувствительностью различных клеток к тиреоидным гормонам. Клеточные мембраны соматических и рецепторных клеток несут как минимум два типа и пять подтипов рецепторов к гормонам щитовидной железы (фоторецепторы сетчатки р2, улитки Р и а1, печени (31 и а1, легких РЗ, почек рЗ, головного мозга р и а1, кишечника а1). Поэтому даже при гипертиреозе уровень тиреоидных гормонов может быть искусственно снижен.

Кроме того, уровень тиреоидных гормонов может быть искусственно завышен из-за наличия в сыворотке крови гетерофильных антител и «антиживотных» антител. Гетерофильные антитела - это группа плохо

охарактеризованных антител, которые могут взаимодействовать со множеством молекул, в том числе и с множеством различных иммуноглобулинов животных, они обладают полиспецифичностью Эти слабые по силе антитела присутствуют практически у всех людей. Естественные ревматоидные факторы являются хорошо известными гетерофильными антителами «Анти-животные» антитела человека - это моноспецифичные антитела с высокой аффинностью против специфических иммуноглобулинов животных, которые в норме присутствуют примерно у 15% нормальной популяции Гетерофильные антитела могут появляться в результате иммунной реакции на любую чужеродную молекулу, попавшую в организм Часто причиной их возникновения являются ревматоидные или аутоиммунные заболевания. «Анти-животные» антитела человека появляются в результате иммунной реакции при контактах с белками животных при вакцинации и переливании крови, при введении моноклональных антител в диагностических и терапевтических целях больным раком, при содержании животных

Статистически значимые различия были получены только при определении содержания аутоантител к рецептору ТТГ (АТТГ) в сыворотке крови пациентов с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы. Содержание аутоантител к тиреопероксидазе (АТПО) имело также явные отличия по группам (у людей с «холодными» узлами щитовидной железы содержание АТПО в 1,5 раза выше, чем у людей с «горячими» узлами).

Таблица 8

Содержание АТТГ и АТПО в сыворотке крови людей с «холодными» и

«горячими» узлами щитовидной железы

«горячие» узлы «холодные» узлы

АТТГ, % 48,59±8,36* 15,09±5,17

АТПО, % 13,31±2,7 20,88±5,91

Примечание: * - статистически значимые различия (р < 0,05)

Таким образом, по результатам нашего исследования, для определения функционального состояния щитовидной железы, в первую очередь, необходимы тесты на АТТГ и АТПО, а не на ТТГ, свТз, оТ3, СВТ4, 0Т4, либо исследование гормонов и антител в комплексе. Исходя из полученных данных, в диагностике заболеваний щитовидной железы требуется повышение точности оценки ее функционального состояния

Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о целесообразности использования определения продуктов окисления липидов и белков в пунктате узлов щитовидной железы и слюне, а также целесообразности комплексного подхода в оценке функционального состояния данного органа

ВЫВОДЫ

1. В «горячих» узлах щитовидной железы процессы окислительной модификации белков идут более интенсивно, чем в «холодных»

2. В «холодных» узлах щитовидной железы перекисное окисление липидов менее выражено, чем в «горячих» или функционально активных узлах, что особенно выражено для конечных продуктов - оснований Шиффа

3. В слюне людей с «горячими» узлами щитовидной железы процессы ПОЛ идут более интенсивно, чем у людей с «холодными» узлами. У пациентов с «горячими» узлами наблюдается более высокая активность антиоксидантной системы, отмечаемая по показателям биохемилюминесценции (8,1тах и tg 2 а)

4 Уровень продуктов липопероксидации в слюне пациентов с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы можно использовать в качестве дополнительных неинвазивных критериев для определения функционального состояния щитовидной железы.

5. Определение окислительной модификации белков и перекисного окисления липидов в пунктате узлов щитовидной железы можно использовать для дифференциальной диагностики по выявлению «холодных» и «горячих» узлов щитовидной железы

6 Создана математическая модель, позволяющая определить функциональное состояние щитовидной железы с высокой степенью точности

7. Для диагностики функционального состояния щитовидной железы, в первую очередь, необходимы тесты на аугоантатела к рецептору ТТГ и тиреопероксидазе, а не на тиреотропный гормон, свободный Т3 и общий Тз, свободный Т4 и общий Т4, либо исследование гормонов и антител в комплексе

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Алясова, A.B. Возможности озонотерапии больных раком молочной железы в послеоперационном периоде / AB Алясова, К.Н Конторщикова, Е.О. Селезнева, А.П. Баврина // Вестник физиотерапии и курортологии -2006.-№5 -С 47-48

2. Баврина, А.П. Оценка функционального состояния щитовидной железы с помощью определения уровня свободнорадикального окисления / А.П. Баврина // Матер, научно-практич конф. «Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях». Москва, 2007.-С.259-260.

3. Баврина, А.П. Оценка функционального состояния щитовидной железы по уровню свободнорадикального окисления / А.П Баврина, А С. Корягин, КН. Конторщикова // матер. ХГ1 Нижегородской сессии молодых ученых, естественно-научные дисциплины Н Новгород, 2007.-С.7-8.

4. Биткина, О.А. К вопросу о клинико-лабораторной оценке эффективности озонотерапии при лечении розацеа / О А. Биткина, Н.К. Никулин, Л.И Филиппова, К Н. Конторщикова, А.П. Баврина (! Казанский медицинский журнал -2007 -№4.-С.245

5. Конторщикова, К.Н Окислительная модификация белков при различных функциональных состояниях щитовидной железы / КН. Конторщикова, П С. Зубеев, М А Жуков, А.П. Баврина // Нижегородский медицинский журнал Здравоохранения ПФО -2006 -№2.-С. 203-205

6. Конторщикова, КН. Перекисное окисление жидкой части пунктационного биоптата у больных с коллоидными узлами щитовидной железы / К.Н. Конторщикова, П С. Зубеев, М.А Жуков, А.П. Баврина // Матер. 4-й научно-практич. конф с международ, участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» Смоленск, 2005 -С.213-215.

7. Окрут, И Е. Параметры окислительного стресса в оценке степени тяжести больных с перетонитом / И.Е Окрут, К Н Конторщикова, А.П. Баврина // Клиническая лабораторная диагностика -2005.-№10.-С.51.

8. Окрут, И.Е. Озонотерапия в коррекции окислительного стресса у больных перетонитом / КН. Конторщикова, ЮР. Ефременко, А.П. Баврина // Нижегородский медицинский журнал. 2005 Приложение к НМЖ Озонотерапия.-С. 147-148.

9. Kontorschikova, С. Ozone Korrection of Metabolism Misbalance Induced by Endogen Intoxication in Patients with Burning Injury / S. Peretyagin, I. Okrut, A. Bavrina, J. Efremenko, O. Kostina // 17 th world congress «Ozone & Related Oxidants Innovative & Current Technologies» Strasbourg, France, 2005.-P.44-45.

Подписано к печати 20 03 08 Формат 60х84'Лб Бумага писчая Печать офсетная Гарнитура «Тайме» Уел печ л 1 Тираж 100 экз Заказ 49

Полиграфический участок НГМА 603005, Н Новгород, ул Алексеевская, 1

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Баврина, Анна Петровна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Строение и функция щитовидной железы.

1.2. Заболевания щитовидной железы.

1.3. Проблемы диагностики заболеваний щитовидной железы.

1.4. Свободнорадикальное окисление

1.4.1. Механизм перекисного окисления липидов.

1.4.2. Механизм свободнорадикального окисления белков.

1.4.3. Антиоксиданты.

1.4.4. Патологические изменения, индуцируемые перекисным окислением липидов и окислительной модификацией белков.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ "

2.1. Постановка опыта и объект исследования.

2.2. Методы исследования

2.2.1. Определение степени окислительной модификации белков по уровню карбонильных производных.

2.2.2. Определение общего белка биуретовым методом.

2.2.3. Исследование уровня перекисного окисления липидов с помощью определения содержания ДК, ТК и ОШ.

2.2.4. Морфологическое исследование пунктата узлов щитовидной железы.

2.2.5. Иммуноферментный метод определения гормонов щитовидной железы.

2.2.6. Анализ свободнорадикального окисления и активности антиоксидантной системы в слюне биохемилюминесцентным методом.

2.2.7. Исследование уровня перекисного окисления липидов в слюне с помощью определения содержания ДК, ТК и ОШ.

2.2.8. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Окислительная модификация белков в коллоидных узлах щитовидной железы.

3.2. Перекисное окисление липидов в коллоидных узлах щитовидной железы.

3.3. Перекисное окисление липидов и активность антиоксидантной системы в слюне людей с нарушениями функций щиовидной железы.

3.4. Морфологическое исследование пунктата узлов щитовидной железы.

3.5. исследование гормонов щитовидной железы в сыворотке крови.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Свободнорадикальное окисление при различных функциональных состояниях щитовидной железы"

Актуальность проблемы

Проблема диагностики различных функциональных состояний щитовидной железы заслуживает большого внимания клиницистов и экспериментаторов. Во всем мире заболевания щитовидной железы являются наиболее распространенной эндокринной патологией. Около 15 миллионов человек, проживающих на территории Российской Федерации, имеют явные или скрытые нарушения функции щитовидной железы. Ежегодно около 200 тысяч россиян заболевают гипер- или гипотиреозом. Из-за йодной недостаточности в пище в эндемичных районах распространенность зоба или активных узлов щитовидной железы достигает очень высоких цифр.

Нарушения функции щитовидной железы являются серьезной патологией, могут угрожать жизни пациента, но обычно поддаются лечению, контролю и излечиванию (Лабораторная., 2002).

До сих пор не существует оптимального метода оценки функционального состояния щитовидной железы, все они имеют определенные недостатки. Отделить функционально неактивные узлы ткани щитовидной железы от функционально активных возможно только посредством радиоизотопного сканирования или сцинтиграфии, что требует специального оборудования и несет радиационную нагрузку. Недостатком метода является то, что феномен накопления радиоактивного препарата не всегда позволяет дифференцировать узловой зоб, кисты и опухоли щитовидной железы. В связи с этим выработка рациональных лабораторных стратегий является чрезвычайно важной для проведения дифференциальной диагностики различных состояний щитовидной железы, выборе правильного диагноза и лечения.

В последнее время все чаще используются методики определения продуктов окисления липидов и белков, так как они являются универсальными для диагностики различных заболеваний.

Накоплены многочисленные данные о природе, механизме и значении процесса перекисного окисления липидов, который является непрерывным процессом, протекающим в организме. При определенных концентрациях активных форм кислорода в организме создаются условия для развития патологических процессов. При длительной активации этот процесс приводит к разрушению и дезорганизации мембран. В отличие от свободнорадикального окисления липидов, процесс окисления белков изучен в значительно меньшей степени. Но он вызывает особый интерес, так как белки составляют порядка 50 % массы клетки. Перекисное окисление белков также является обязательным процессом, непрерывно протекающим в организме в норме. Выход перекисного окисления белков из-под контроля приводит к развитию различных патологий. Исходя из данных, полученных за последнее десятилетие, можно сделать вывод, что свободнорадикальное окисление белков лежит в основе таких заболеваний как СПИД, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, ревматоидный артрит, ишемия, эмфизема, мышечная дистрофия, панкреатит, катаракта, варикозное расширение вен, онкологические заболевания и многих других, а также является основой старения. Определение уровней продуктов окислительной модификации белков и перекисного окисления липидов могут использоваться при диагностике различных заболеваний.

В литературе отсутствуют сведения о возможной роли свободнорадикальной модификации белков и перекисного окисления липидов в биохимических механизмах становления и прогрессирования нарушений функционирования щитовидной железы, а также об использовании данного механизма в диагностике различных функциональных состояний органа, хотя такое направление исследований представляется интересным и важным.

Цель исследования Целью работы явилась оценка свободнорадикального окисления липидов и белков в слюне и пунктате коллоидных узлов щитовидной железы у людей с нарушением ее функции.

Задачи

2. Измерение уровня перекисного окисления липидов в пунктате коллоидных узлов щитовидной железы.

3. Анализ уровня окислительной модификации белков в пунктате коллоидных узлов щитовидной железы.

4. Исследование уровня перекисного окисления липидов в слюне пациентов с узловым коллоидным зобом.

5. Биохемилюминесцентная оценка антиоксидантной активности в слюне людей с узловым коллоидным зобом.

Положения, выносимые на защиту

1. Функционально активные («горячие») узлы щитовидной железы характеризуются большей интенсивностью свободнорадикального окисления белков и липидов.

2. В слюне людей с «горячими» узлами щитовидной железы процессы ПОЛ идут более интенсивно, чем у лиц с «холодными» узлами. У пациентов с «горячими» узлами наблюдается более высокая активность антиоксидантной системы, отмечаемая по показателям Б, 1тах и tg 2 а.

Научная новизна

В работе впервые проведено комплексное исследование свободнорадикального окисления жидкой части пунктата коллоидных узлов щитовидной железы людей, включающее определение первичных продуктов липопероксидации - диеновых и триеновых конъюгатов (ДК и ТК) и конечных продуктов - оснований Шиффа (ОШ), а также определение продуктов окислительной модификации белков (ОМБ) альдегид- и кетон-производных нейтрального и основного характера.

Полученные данные сопоставлены с результатами морфологического исследования эвакуированной жидкости и уровнем гормонов щитовидной железы в сыворотке крови больных узловым коллоидным зобом.

Впервые проведена оценка параметров перекисного окисления липидов (ПОЛ) слюны лиц узловым коллоидным зобом, включающая содержание ДК, ТК и ОШ и параметры биохемилюминограммы.

Впервые установлена зависимость уровня свободнорадикального окисления (СРО) от функционального состояния щитовидной железы. Установлено, что у пациентов с «горячими» узлами в щитовидной железе процессы СРО протекают интенсивнее, чем у людей с «холодными» узлами в щитовидной железе.

Предполагается, что методы определения окислительной модификации белка по уровню карбонильных производных и перекисного окисления липидов можно использовать для дифференциальной диагностики «холодных» и «горячих» узлов щитовидной железы.

Научно-практическая значимость

Полученные результаты расширяют представления о механизмах становления и развития заболеваний щитовидной железы.

Предлагаемые методы позволяют более точно характеризовать функциональную активность щитовидной железы, а ■ также могут стать важным прогностическим критерием развития узловых заболеваний.

Апробация работы

По материалам диссертации опубликовано 9 работ. Подана заявка на получение патента РФ «Способ оценки функционального состояния щитовидной железы» №2006 139415/15 от 07.11.06 г.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа в объеме 117 листов состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы. Диссертация иллюстрирована 21 рисунком и 23 таблицами. Библиографический указатель включает 225 источников литературы (100 отечественных и 125 иностранных).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Баврина, Анна Петровна

ВЫВОДЫ

1. В «горячих» узлах щитовидной железы процессы окислительной модификации белков идут более интенсивно, чем в «холодных».

4. Уровень продуктов липопероксидации в слюне пациентов с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы можно использовать в качестве дополнительных неинвазивных критериев для определения функционального состояния щитовидной железы.

6. Создана математическая модель, позволяющая определить функциональное состояние щитовидной железы с высокой степенью точности.

7. Для диагностики функционального состояния щитовидной железы, в первую очередь, необходимы тесты на аутоантитела к рецептору ТТГ и тиреопероксидазе, а не на тиреотропный гормон, свободный Т3 и общий Т3, свободный Т4 и общий Т4, либо исследование гормонов и антител в комплексе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение процессов свободнорадикального окисления представляет неоспоримый интерес. Прежде всего, свободнорадикальное окисление является обязательным и непрерывным процессом, протекающим в организме в норме. Кроме того, накоплено большое количество данных о том, что перекисное окисление белков и липидов индуцирует развитие патологий, ставших заболеваниями 21 века, такими как СПИД, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, рак и многих других. Продукты процесса перекисного окисления могут служить показателями развития различных патологий и могут быть использованы для диагностики заболеваний. Окислительное повреждение приводит к денатурации и агрегации белковых молекул. В результате денатурации белковых молекул нарушается их конформация, и они становятся более уязвимыми к действию протеолитических ферментов. Это и является причиной развития различных патологических процессов.

На основании вышесказанного можно предположить, что при развитии заболеваний щитовидной железы процессы свободнорадикального окисления имеют важное значение.

В настоящей работе определены отличия содержания продуктов свободнорадикального окисления в пунктате коллоидных узлов щитовидной железы с различным функциональным состоянием; отличия параметров интенсивности ПОЛ, свободнорадикальных процессов и активность антиоксидантной системы в слюне больных с различным функциональным состоянием щитовидной железы.

Литературные данные свидетельствуют об активации процесса свободнорадикального окисления белков при различных патологических состояниях. В работе М. А. Флерова, Н. Н. Смирновой, 3. В. Светловой (2003) показано, что при сахарном диабете у детей наблюдается повышение продуктов окисления белков сыворотке крови. Это подтверждается И.А. Бондарем, В.В. Климонтовым, И.А. Поршенниковым

2004) при исследовании крови взрослых людей. Повышение продуктов окисления белков отмечено при психических расстройствах (Дубинина и др., 2000; Выошина и др., 2002), бронхиальной астме (Булатова и др., 2002) и других заболеваниях.

Анализ литературных данных продемонстрировал снижение АОС и интенсификация процессов ПОЛ у больных с заболеваниями щитовидной железы. С.А. Ляликовым и др. (2004) показано повышение содержания конечных продуктов ПОЛ в сыворотке крови детей при недостатке йода. По мнению авторов, перекисные процессы играют важную роль при органификации йода, в свою очередь, гормоны щитовидной железы способны влиять на интенсивность ПОЛ. Т.И. Родионовой и М.А. Костенко (2003) выявлено увеличение уровня ПОЛ сыворотки крови у больных с диффузным токсическим зобом, а также снижение уровня антиоксидантной активности плазмы. E.H. Горбань, Небожина М.В., Топольникова Н.В. (2001) выявили повышенное содержание продуктов ПОЛ у крыс с гипотиреозом.

При узловых заболеваниях щитовидной железы можно выделить новообразования, активно участвующие в метаболизме - «горячие» узлы и неактивные, выключенные из метаболизма - «холодные» узлы. При этом в «горячих» узлах щитовидной железы процессы свободнорадикального окисления (ПОЛ и ПОБ) идут более интенсивно, чем в «холодных». С помощью определения окислительной модификации белков по уровню карбонильных производных установлено, что различия в содержании продуктов ОМБ в пунктате «горячих» и «холодных» узлов щитовидной железы имеют достоверный характер (в частности, в «горячих» узлах содержание продуктов ОМБ достоверно выше). Полученные данные позволили создать модель диагноза «горячий» или «холодный» узел щитовидной железы по показателям ОМБ в пунктате, имеющую вид системы уравнений:

Горячий» узел = -7,48886+1,29589*356нм+1,29795*363нм-1,53411 *370нм+0,62984*440нм+2,00566*530нм

Холодный» узел = -2,38903+1,16706*356нм+0,24502*363нм-0,85120*370нм+1,98408*430нм-2,38903*530нм

При этом по данной системе уравнений можно определить наличие «холодного» узла в щитовидной железе с достаточно высокой точностью — 94,7%, наличие «горячего» узла - с меньшей точностью (74,3%). Точность отличия «холодного» узла от «горячего» составляет 84,4%. Из вышесказанного следует, что использование показателей ОМБ может быть использовано для дифференциальной диагностики функционального состояния щитовидной железы.

С помощью метода определения продуктов ПОЛ по Волчегорскому установлено, что уровень ДК, ТК и ОШ в пунктате «горячих» узлов достоверно превышает содержание в пунктате «холодных» узлов щитовидной железы. На основании данных различий была построена модель постановки диагноза «горячий» или «холодный» узел щитовидной железы по показателям ПОЛ в пунктате, имеющая вид системы уравнений: «Горячий» узел =-30,3651+231,9597ДК-0,9437ТК+0,61770Ш «Холодный» узел =-22,2774+205,6964ДК-0,3268ТК+0,26900Ш По результатам дискриминантного анализа различий групп с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы по показателям ПОЛ в пунктате, вероятность постановки верного диагноза «холодный» узел щитовидной железы составляет 89,7%, диагноза «горячий» узел щитовидной железы несколько ниже - 71,4%. Точность отделения «холодного» узла от «горячего» по данной системе уравнений составляет 80,2%. Таким образом, параметры ПОЛ могут быть использованы для дифференциальной диагностики функционального состояния щитовидной железы.

Полученные результаты можно объяснить биохимическими процессами, протекающими в тиреоцитах. Известно, что для образования гормонов щитовидной железы требуется Н2Ог. Йод, поступающий в тиреоцит, «активируется» путем окисления при участии тиреопероксидазы. Для этого требуется пероксид водорода, образующийся с участием НАДФН-оксидазной системы, подобной той, которая существует в лейкоцитах. Вторым ферментом, активирующимся с помощью пероксида водорода, является йодопероксидаза, или «сопрягающий фермент». Он катализирует соединение двух йодтирозиновых оснований с образованием йодтиронилового основания. Сопряжение двух дийодтиронинов (ДИТ) приводит к образованию Т4, сопряжение монойодтиронина (МИТ) и ДИТ - к формированию Т3-компонента в составе тиреоглобулина (Лабораторная., 2002).

Содержание продуктов липопероксидации в слюне людей с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы также достоверно различалось по группам (например, содержание ОШ в слюне лиц с «горячими» узлами щитовидной железы было в 7 раз выше, чем в слюне лиц с «холодными» узлами). Анализируя полученные данные, можно отметить, что в слюне людей с «горячими» узлами щитовидной железы процессы ПОЛ идут более интенсивно, чем у людей с «холодными» узлами. Кроме того, у пациентов с «горячими» узлами наблюдается более высокая активность антиоксидантной системы, отмечаемая по показателям S, Imax и tg 2 а.

Полученные результаты могут быть связаны с функционированием гематосаливарного барьера. Немногочисленные литературные данные свидетельствуют о том, что содержание метаболических показатей крови коррелирует с таковыми в слюне (Булатов, Зайнетдинова, Рылова, 2003; Ипатов и др., 1997; Трифонов и др., 2003; Постникова и др., 2006; Краснова и др., 2005; Уланова, Григорьев, Новикова, 2001; Nagler, Lischinsky, Diamond, 2000; Schmekel et al., 2001). В перечисленных работах показано, что саливарные тесты отражают процессы гомеостазирования, что позволяет говорить о наличии гематосаливарного барьера, функционирование которого направлено на сохранение интересов целого организма или пораженного органа.

Выявлена корреляция между содержанием продуктов липопероксидации (ДК, ТК и ОШ) в пунктате узлов щитовидной железы и слюне этих же больных:

Исходя из полученных результатов нами были построены две модели постановки диагноза «горячий» или «холодный» узел щитовидной железы по параметрам ДК, ТК, ОШ и ДК, ТК, ОШ, 1тах, 8, tg 2а.

Модель постановки диагноза «горячий» или «холодный» узел щитовидной железы по показателям ПОЛ в слюне:

Горячий» узел =-22,2172+184,8544ДК-32,5273ТК+0,02260Ш «Холодный» узел =-16,4691+156,8287ДК-32,4939ТК-0,02900Ш Согласно данной модели вероятность постановки диагноза «горячий» узел составляет 93,9%, а диагноза «холодный» узел — 50%. Точность отделения «холодного» узла от «горячего» по данной системе уравнений составляет 82,2%.

Результаты исследований показали, что точность диагноза можно повысить, используя не только уровни продуктов липопероксидации (ДК, ТК и ОШ), но и показатели активности антиоксидантной системы - 8, 1тах и tg 2 а в одной модели, которая имеет вид следующей системы уравнений:

Горячий» узел =-34,1501+227,8571ДК-51,2883ТК+0,08230Ш-2,0468 1тах+64,62518-82,2143tg 2а

Холодный» узел =-23,5007+189,5486ДК-45,9357ТК+0,01870Ш-1,7217 1тах+53,39398-68,3729tg 2а

Из результатов дискриминантного анализа можно сделать вывод о том, что при использовании всех показателей перекисного окисления липидов и активности антиоксидантной системы в слюне (ДК, ТК, ОШ и ДК, ТК, ОШ, 1тах, 8, tg 2а) точность постановки диагноза «горячий» узел повышается с 93,9% до 95,6% и диагноза «холодный» узел - с 50% до

83,3%. Точность отличия «холодного» узла от «горячего» по данной системе уравнений увеличивается на 9,2% (с 82,2% до 91,4%).

При исследовании групп людей с диагнозом «киста» и «коллоидный узел» щитовидной железы достоверных различий выявлено не было. Хотя у пациентов с диагнозом «коллоидный узел» наблюдалась более высокая активность антиоксидантной системы, отмечаемая по показателям 8,1гаах и

2 а, что способствует снижению содержания промежуточных (ДК, ТК) и конечных (ОШ) молекулярных продуктов перекисного окисления липидов в слюне. Достоверные различия определялись в данных группах только при их разделении на подгруппы с «горячими» и «холодными» узлами.

В настоящее время считается, что повышенное содержание ТТГ в сыворотке крови является маркером низкой функциональной активности щитовидной железы («холодный» узел) и, напротив, пониженное содержание ТТГ является маркером наличия «горячего» узла щитовидной железы (нормальные значения ТТГ от 0,4 до 5,0 мМЕ/л), хотя нижняя граница нормальных значений для ТТГ четко не определена. У некоторых лиц могут наблюдаться низкие значения ТТГ без клинически выраженных симптомов гипертиреоза. Это связано с разной рецепторной чувствительностью различных клеток к тиреоидным гормонам. Клеточные мембраны соматических и рецепторных клеток несут как минимум два типа и пять подтипов рецепторов к гормонам щитовидной железы (фоторецепторы сетчатки (32, улитки р и а1, печени Р1 и а1, легких рЗ, почек РЗ, головного мозга р и а1, кишечника а1). Поэтому даже при гипертиреозе уровень тиреоидных гормонов может быть снижен (Долгов, Шевченко, 2005).

Кроме того, уровень тиреоидных гормонов может быть искусственно завышен из-за наличия в сыворотке крови гетерофильных антител и «антиживотных» антител. Эти слабые по силе антитела присутствуют практически у всех людей. «Анти-животные» антитела человека - это моноспецифичные антитела с высокой аффинностью против специфических иммуноглобулинов животных, которые в норме присутствуют примерно у 15% нормальной популяции. Гетерофильные антитела могут появляться в результате иммунной реакции на любую чужеродную молекулу, попавшую в организм. Часто причиной их возникновения являются ревматоидные или аутоиммунные заболевания. «Анти-животные» антитела человека появляются в результате иммунной реакции при контактах с белками животных: при вакцинации и переливании крови, при введении моноклональных антител в диагностических и терапевтических целях больным раком, при содержании животных (Based, 1998).

В наших исследованиях не было выявлено корреляции между содержанием ТТГ в сыворотке крови и принадлежностью новообразования к группе «горячих» или «холодных» узлов по результатам сцинтиграфии. Кроме того, содержание свободных Т3 и Т4 и общего Т4 в «горячих» узлах выше, чем в «холодных», но различия оказались статистически не достоверными. Достоверные различия были получены только при определении содержания АТТГ в сыворотке крови больных с «горячими» и «холодными» узлами щитовидной железы. Содержание АТПО имеет также явные отличия по группам (у больных с «холодными» узлами щитовидной железы содержание АТПО в 1,5 раза выше, чем у больных с «горячими» узлами). Таким образом, по результатам нашего исследования, для диагностики функционального состояния щитовидной железы в первую очередь необходимы тесты на АТТГ и АТПО, а не на ТТГ, свТ3, оТ3, свТ4, оТ4, либо исследование гормонов и антител в комплексе. Исходя из полученных данных, в диагностике заболеваний щитовидной железы требуется повышение точности оценки ее функционального состояния.

Суммируя полученные результаты, можно заключить, что использование параметров перекисного окисления липидов и активности антиоксидантной системы в слюне может стать важным дополнительным неинвазивным критерием диагностики функционально состояния щитовидной железы.

Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о целесообразности использования определения продуктов окисления липидов и белков в пунктате узлов щитовидной железы, а также целесообразности комплексного подхода в оценке функционального состояния данного органа.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Баврина, Анна Петровна, Нижний Новгород

1. Абакумова Ю.В., Ардаматский H.A. Свободнорадикальное .окисление при атеросклерозе как патогенный фактор // 2003.http://vvww.folium.ru/ru/ioumals/ekf/contents/2001/2001-04.htm

2. Арцукевич А.Н., Мальцев А.Н., Зинчук В.В. Биохимические аспекты жизнедеятельности биологических систем // Сборник научных трудов съезда биохимиков Белоруссии. Гродно, 2000. С.19-23.

3. Базанов Г.А., Боброва Ю.Б., Соловьева Н.В. Изучение антиоксидантной активности новых производных оснований Шиффа // Свободно-радикальные процессы: Экологические, фармакологические и клинические аспекты: Тез. докл. между нар. конф. СПб., 1999. С.810.

4. Балаболкин М.И. Эндокринология. М.: Медицина, 1989. 416 с.

5. Барабой В.А. Роль перекисного окисления липидов в механизме стресса // Физиологический журнал. 1989. Т.35, №5. С.85-97.

6. Болдырев A.A. Введение в биохимию мембран. М.: Высшая школа, 1986. 178с.

7. Бондарь И.А., Климонтов В.В., Поршенников И.А. Окислительная модификация белков при диабетических макроангиопатиях // 2004. http://www.diabet.ru/Sdiabet/2000-03/2000-03-02.hti-n

8. Булатов В.П., Зайнетдинова М.Ш., Рылова Н.В. // Детская больница. 2003. №4(14). С. 34-36.

9. Ю.Булатова Н.В., Москвичев O.K., Выошина A.B., Ащепкова О.М. Исследование глубины свободно-радикального повреждения белкову детей, больных бронхиальной астмой // 2002. http://www.bashedu.rU/konkurs/lihovsk:ih/russian/sro ob~l.htm

10. П.Бурлакова Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.: Наука, 1981.-С.23-24.

11. Бурумкулова Ф.Ф., Герасимов Г.Н. Заболевания щитовидной железы у беременных // Проблемы эндокринологии. 1998. Т.44, №2. С.27-32.

12. Владимиров Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитиии патологических процессов. // Пат. физ. и экспер. терапия. 1989. - № 4. - С.7-19.

13. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. 1987. - Т. 32, вып.5. - С. 830-844.

14. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И., Козлов А.В., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. «Биофизика». М.: ВИНИТИ, 1991. -Т.6 - 251с.

15. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

16. Волчегорский И.А., Налимов А.Г., Яровинский Б.Г., Лифшиц Р.И. // Вопросы медицинской химии. 1989. №1. С. 127-131.

17. Вонг Ф., Оу В.-Б., Ли LLL, Жоу Х.-М. Влияние пероксида водорода на активность и структуру шаперона Gro EL Escherichia coli // Биохимия. 2002. T.67, №5. C.656-662.

18. Гаин Ю.М., Богдан В.Г., Половинкин JI.B. Продукты окислительной модификации белков в лабораторной диагностике абдоминального сепсиса // 2004.http://siar.ru/index.php?id=168&PHPSESSID=23ec59e5d2222bal9 6937c781daf9b

19. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. 459 с.

20. Гонский Я.И., Корда М.М., Клиц И.Н., Фира J1.C. Роль антиоксидантной системы в патогенезе токсического гепатита // Пат. физиология и экспериментальная терапия. 1996. №2. С.43-45.

21. Горбань E.H., Небожина М.В., Топольникова Н.В. Реакция щитовидной железы и системы свободнорадикального окисления у взрослых и старых крыс с гипотиреозом на действие ионизирующего излучения // Вестник гигиены и эпидемиологии. 2001. Т.5, №1. С.83-86.

22. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Супероксидный радикал и супероксддисмутаза в свободнорадикальной теории старения // Вопросы мед. химии. 1982. Т.28, №4. С.8-24.

23. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Современные концепции свободнорадикальной теории старения // Нейрохимия. 1997. Т. 14, № 1.С. 14-29.

24. Давиденкова Е.Ф., Шафран М.Г. Атеросклероз и процесс перекисного окисления липидов // Вестник АМН СССР. 1998. №3. С.10.

25. Демидов В.П. Гольберт З.В. Ранний рак щитовидной железы. / В кн: Ранняя онкологическая патология. / под ред. Петерсона Б.Е. и Чиссова В.И. М. Медицина. 1985. 138 с.

26. Дзугкоев С.Г., Карсанова З.О., А.Е. Турина А.Е. Перекисное окисление липидов и антиокислительная защита мембраны клеток при сахарном диабете // 2003. http://www.supplements.ru/print.php?sid=380

27. Долгих В.Т., Кочетов A.M., Еремеев С.И., Мальков П.Г. Активация процессов перекисного окисления липидов в постреанимационном периоде //Анестезиол. и реаниматол. 1988. №1. С.24-29.

28. Долгов В.В., Шевченко О.П. Лабораторная диагностика. М.: Издательство «Реафарм», 2005. 440 с.

29. Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Поротов И.Г. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека, метод ее определения // Вопросы медицинской химии. 1995. Т.41, №1. С.24-26.

30. Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Поротов И.Г. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека, метод ее определения // Вопросы медицинской химии. 1995. Т.41, №1. С.24-26.

31. Ипатов Ю.П., Комарова Л.Г., Переслегина И.А., Шабунина Е.И. Ключи к проблеме гастроэнтерологических заболеваний. / Под ред. А.И. Волкова. Н.-Новгород. 1997. 217 с.

32. Казаков С.П., Кушлинский Н.Е. Исследования комбинационных параметров пролиферации и апоптоза в тканях больных сновообразованиями щитовидной железы // Клиническая лабораторная диагностика. №9. 2004. С.8.

33. Кандор В.И., Крюкова И.О., Крайнева С.И. Антитиреоидные антитела и аутоиммунные заболевания // Проблемы эндокринологии. 1997. Т.43, №3. С.28-30.

34. Касаткина Э.П. Йоддефицитные заболевания у детей и подростков // Проблемы эндокринологии. 1997. Т.43, №3. С.3-7.

35. Коган А.Х., Кудрин А.Н., Кактурский JI.B. Свободнорадикальные перикисные механизмы патогенеза ишемии и ИМ и их фармакологическая регуляция // Патофизиология. 1992. №2. С.5-15.

36. Кожевников Ю.Н. Нарушение гомеостаза организма при перекисном окислении // Вопросы медицинской химии. 1990. Т.31, №5. С. 179186.

37. Козлова Н.М., Слобожанина Е.И., Черницкий Е.А. Окисление мембранных белков и изменение поверхностных свойств эритроцитов // Биофизика. 1998. Т.43, №3. С.480-483.

38. Колесова O.E., Маркин A.A., Федорова Т.Н. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липоперокидации в биологических средах // Лаб. дело. 1984. №9. С.540-546.

39. Кольтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: современное состояние и перспективы // Успехи геронтологии. 1998. Т.2. С.37-42.

40. Конторщикова К.Н. Перекисное окисление липидов в норме и патологии: учебное пособие. Н.Новгород: 2000. - 24 с.

41. Корвилайн Б., Ван Санд Дж., Дамонт Дж.Е., Бордо П., Эрманс А.М. Автономия при эндемическом зобе // 1999. http://www.nycomed.ru/index e.jsp

42. Костюк И.П. Рак щитовидной железы // 2003. http://www.lib-online.ru/print.php3?wid=442

43. Краснова Е.Е., Чемоданов В.В., Егорова Е.Ю, Горнаков И.С., Томилова И.К., Алексахина E.JI. Характеристика гемато саливарного барьера у детей с гастродуоденальными заболеваниями // Успехи современного естествознания. 2005. № 8. С. 13-16.

44. Ланкин В.З. Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.: Наука, 1981. -127 с.

45. Ланкин В.З. Роль перекисного окисления липидов в этиологии патогенеза атеросклероза // Вопросы медицинской химии. 1989. № 3. С. 18-24.

46. Ланкин В.З., Вихерт А.И. Перекисное окисление липидов в этиологии и патогенезе атеросклероза // Архивы патологии. 1989. №1. С.80.

47. Ляликов С.А., Гаврилик Л.Л., Ровбуть Т.И., Собеска М., Клочко Н.М. Антиоксидантная активность белков острой фазы у детей в зависимости от- йодной обеспеченности. 2004. http://www.mmm.spb.ru/Cvtokines/2004/4/Art7.php

48. Меерсон Ф, 3. Адаптация, стресс и профилактика. М, Наука, 1981, 277 с.

49. Меньшиков B.B. Клиническая лабораторная аналитика / М.: Агат-Мед, 2002. 860 с.

50. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, вып.4. - С.442-456.

51. Орлов В.И., Каушанская Л.В., Погорелова Т.Н., Агамонова К.Ю., Дурницына O.A. Окислительная деструкция белков у женщин с синдромом поликистозиых яичников после оперативного лечения // Российский вестник акушера-гинеколога. 2004. №3. С. 8-10.

52. Осипов А.Н., Борисенко Г.Г., Казаринов К.Д., Владимиров Ю.А. Оксид азота, гемоглобин и лазерное облучение // Вестник Российской Академии Медицинских Наук. 2000. №4. С. 48-52.

53. Пескин A.B. Взаимодействие активного кислорода с ДНК // Биохимия. 1997. №.62. С. 1571-1578.

54. Подколзин A.A., Мегреладзе А.Г., Донцов В.И., Арутюнов С.Д., Мрикаева О.М., Жукова Е.А. Система антиоксидантной защиты организма и старение // 2002.http://ww\v.bioone.oriz/bioone/?request=get-document&issn=0033-7587&volume=158&issue=01page=0023

55. Постникова Л.Б., Алексеева О.П., Кубышева Н.И., Горшкова Т.Н., Соодаева С.К. Гематосаливарные механизмы в развитии хронической обструктивной болезни легких // Пульмонология. 2006. №3. С.77-80.

56. Прокопьева В.Д., Тюлина О.В., Пытина Л.П., Бохан H.A. Нарушение морфологии эритроцитов и окислительной модификации белков теней эритроцитов и плазмы крови при алкоголизме // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2005. №2. С.13.

57. Рассказова Е.А., Плешакова О.В., Садовников В.Б. Изучение роли окислительной модификации белков в нарушении иммунологической толерантности при старении организма // 2002. http://www.smu.psn.ru/?id=conf&idl==text&id2-2001/dic-molbiol&id3=62

58. Родионова Т.И., Костенко М.А. Изменение перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности плазмы у больных с тяжелой формой диффузного токсического зоба // Проблемы эндокринологии. 2003. Т.49, №5. С.42-44.

59. Рябов Г.А., Палечник И.Н., Азизов Ю.М. Активированные формы кислорода и их роль в некоторых патологических состояниях // Анестезиология и реанимация. 1991. №1. С.63-69.

60. Соколовский В.В. Тиолсульфидные соотношения крови как показатель неспецифической резистентности организма. Спб, 1996. 30 с.

61. Соодаева С.К. Роль свободнорадикального окисления в патогенезе ХОБЛ // 2002. http://www^.rusmedscrv.com/problreprod/2001/5/article 402.html

62. Суплотова A.A., Губина В.В., Карнаухова Ю.Б. Скрининг врожденного гипотиреоза как дополнительный метод изучения йодцефицитных заболеваний // Проблемы эндокринологии. 1998. Т.44, №1. С. 15-19.

63. Старкова Н.Т. Клиническая эндокринология: руководство для врачей. М.: Медицина, 1991. 512 с.

64. Титов В.Н. Атеросклероз как патология полиеновых жирных кислот (Биологические основы терапии атерогенеза). М., Наука, 2002. 98 с.

65. Тишевской И.А. Возрастная и конституционная антропология. Челябинск.: Издательство ЮУрГУ. 2000. 56 с.

66. Трифонов В.Д., Белякова Т.Д., Зубрицкая С.П., Шубин A.C. // Русский медицинский журнал. 2003. Т. 11, №3 (175). С.97-98.

67. Трянкина С.А., Колобова О.И., Варшавский Б.Я. Роль перекисного окисления в патогенезе варикозного расширения вен // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. №6. С. 19-20.

68. Туракулов Я.Х., Ташхотжаева Т.П. Внутритиреоидное дейодирование тироксина: влияние ТТГ и денервации щитовидной железы // Проблемы эндокринологии. 1986. Т.32, №5. С.72-76.

69. Тургунова Л.Г., Муравлева JI.E., Досмагамбетова P.C., Умбеталина Н.С. Состояние окислительной модификации белков при острых и хронических лейкозах // 2006. http://www.rusnauka.com/TIR/All/Medicine/33.html

70. Уланова Е.А., Григорьев И.В., Новикова И.А. Гематосаливарные механизмы регуляции при ревматоидном артрите // Терапевтические архивы. 2001. №11. С.92-94.

71. Фадеев В.В. Диагностика и лечение токсического зоба // 2002. http://medi.ru/doc/700032.htm

72. Флеров М. А., Смирнова H.H., Светлова З.В. Перекисное окисление белков плазмы крови больных сахарным диабетом типа 1 // Проблемы эндокринологии. №4. 2003. С.З.

73. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., Анисимов В.Н. Влияние эпиталамина на свободнорадикальные процессы у человека и животных // 2003 .http://www.medline.ru/thorough/oglav/toml07.shtml

74. Хышиктуев Б.С., Хышиктуева H.A., Иванов В.Н. Методы определения продуктов перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха и их клиническое значение. // Клиническая лабораторная диагностика. 1996. №3. С. 13-15.

75. Цой П.К. Свободнорадикальное окисление в медицине и фармации // 2002. http://www.phannnews.kz/Nomeral53/ct2.html

76. Цыпленкова В.Г., Бескровнова H.H. Апоптоз // Архивы патологии. 1996. №5. С.71-77.

77. Чевари С., Андял Т., Панцел А. Инициирование перекисного окисления липидов в сыворотке крови in vitro. // Клин. лаб. диагностика. 1992. - №11-12. - С.34-37.

78. Чуйкова В.И. Содержание карбонилированных белков в тканях внутренних органов крыс разного возраста при стрессе // 2002. http://www.smu.psn. ru/?id=conf&idl=text&id2:=2003/doc-biomedl&id3=97

79. Шувалова Е.П., Антонова Т.В. Прогностическое значение функционального состояния и интенсивности липопероксидаци мембран эритроцитов при вирусных гепатитах // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997. №2. С.46.

80. Шугалей И.В., Лукогорская С.А., Целинский И.В. Цепной процесс перекисного окисления белков удобная модель для изучения повреждающей способности АФК // 2002. http://www.biomed.spb.ru/cgi-bin/5.pl?n=5&name=21&v=3

81. Юдин Е.Е. Заболевания щитовидной железы // 2003. http://www.rusnauka.com/TIP/All/Medicine/33.html

82. Abu-Zidan F.M., Bonham M.J., Windsor J.A. Severity of acute pancreatitis: a multivariate analysis of oxidative stress markers and modified Glasgow criteria. Br. J. Surg. 2000. V.87. №8 P. 1019-1023.

83. Agarwal S., Sohal R.S. Differential oxidative damage to mitochondrial proteins during aginj Mech. Ageing Dev. 1995. V.85. №1. P.55-63.

84. Alam Z.I., Daniel S.E., Lees A.J., Marsden DC, Jenner P., Halliwell B. A generalised increase in protein carbonyls in the brain in Parkinson's but not incidental Lewy body disease. J. Neurochem. 1997. V69. №3. P.1326-1329.

85. Andrus PK., Fleck T.J., Gurney M.E., HallE.D. Protein oxidative damage in a transgenic mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosis. J. Neurochcm. 1998. V.71. №5. P.2041-2048.

86. Aust S.D., Chignell C.F., Bray T.M., Kalyanaraman B., Mason R.P. Free radicals in toxicology. Toxicol. Appl. Pharmacol. 1993. V.I20. №2. P. 168-178.

87. Based D. Handbook of Diagnostic Endocrinology // Clin. Chem. 1998. №44(3). P.440-454.

88. Bast A.G., Halnen G.R., Doelman C.-S.A. Oxidants and antioxidants: state of the art // American J.Med. 1991; №91. P.7-13.

89. Barnes J. W. Role of oxidative stress in development of complications in diabetes. Diabetes. 1991. V.40. №4. P.405-412.

90. Baynes J. W. Role of metal-catalyzed autoxidation in Maillard reaction damage to proteins in vivo. Redox Report. 1994. V. l. №1. P.31-34.

91. Baynes J.W., Thorpe S.R. Glycoxidation and lipoxidation in atherogenesis // Free Radical Biology & Medicine. 2000. №28. P. 17081716.

92. Baynes J.W., Thorpe S.R. Role of oxidative stress in diabetic complications: a new perspective on an old paradigm. Diabetes. 1999. V.48. №1. P. 1-9.

93. Bautista J., Coipas R., Ramos R., Cremades O., Gutierrez J.F., Alegre S. Brain mitochondrial complex I inactivation by oxydative modification. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. V.275. N3. P.890-894.

94. Beckman KB. Ames B.N. The free radical theory of aging matures. Physiol. Rev. 1998. V.78. №2. P.547-581.

95. Berlett B.S., Stadtman E.R. Protein oxidation in Aging, Disease, and Oxidative Stress // The Journal of Biological Chemistry. 1997. Vol. 272. №33. P.20313-20316.

96. Berliner J.A., Heinecke J.W. The role of oxidized lipoproteins in atherogenesis. Free Radic. Biol. Med. 1996. V.20. №5. P.707-727.

97. B/akcman D.P., Ryan T.P., Jolly R.A., Petry T.W. Diquat-dependent protein carbonyl formation. Identification of lipid-dependent and lipid-independent pathways. Biochem. Pharmacol. 1995. V.50. №7. P.929-935.

98. Bowling A.C., Schulz J.B., Brown R.H.Jr. Beal M.F. Superoxide dismutase activity, oxidative damage, and mitochondrial energy metabolism in familial and sporadic amyotrophie lateral sclerosis. J. Neurochem, 1993. V.61. №6. P.2322-2325.

99. Carney J.M., Carney A.M. Role of protein oxidation in aging and in age-associated neurodegenerative diseases. Life Sei. 1994. V.55. №25/26. P.2097-2103.

100. Carr A., Frei B., The role of natural antioxidants in preserving the biological activity of endothelium-derived nitric oxide // Free Rad. Biol. Med. 2000. Vol. 28. P. 1806-1814.

101. Cecchi C., Fiorillo C., Sorbi S., Latorraca S., Nacmias B., Bagnoli S., Nassi P., Liguri G. Oxidative stress and reduced antioxidant defenses in peripheral cells from familial Alzneimer's patients. Free Radic. Biol. Med. 2002. V.33. №10. P.1372-1379.

102. Chapman M.L., Rubin B.R., Gracy R. W. Increased carbonyl content of proteins in synovial fluid from patients with rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 1989. V.I6. №1. P. 15-18.

103. Cutler R. Human longevity and aging: possible role of reactive oxygen species // Ann. N.Y. Acad.Sci. 1991. Vol.621. P. 1-28.

104. Davies K.J.A. Protein damage and degradation by oxygen radicals. I. General aspects // J. Biol. Chem. 1987. Vol. 262. №20. P. 9895-9901.

105. Davies M. J., Fu S., Wang H., Dean R. T. Stable markers of oxidant damage to proteins and their application in the study of human disease // Free Radic Biol Med. 1999. №27. P.l 151-1163.

106. Dean R.T., Fu S., Stocker R., Davies M. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation // Biochem. 1997. Vol. 324. P. 1-18.

107. Dolle M.E.T., Giese H., Hopkins C.L., Martus H.-J., Hausdorff J.M., Vijg J. Rapid accumultaion of genome rearrangements in liver but not in brain of old mice // Nature Genetics. 1997. Vol.17. P.431-434.

108. Esterbauer H., Schaur R.J., Zollner H. Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malondialdehyde, and related aldehydes. Free Radic. Biol. Med. 1991. V.ll. №1. P.81-128.

109. Esterbauer H., Waeg G., Puhl H., Dieber-Rotheneder M., Tatzber F Inhibition of LDL oxidation by antioxidants. In: Free radicals and aging. I. Emerit, B. Chance. Eds. Basel. Boston. Berlin: Birkrmuser. 1992. P.145-157.

110. Evans P., Lyras L., Halliwell B. Measurement of protein carbonyls in human brain tissue. Methods Enzymol. 1999. V.300. P.145-156.

111. Floor E., Wetzel M.G. Increased protein oxidation in human substantia nigra pars compacta in comparison with basal ganglia and prefrontal cortex measured with an improved dinitrophenylhydrazine method assay. J. Neurochem. 1998. V.70. №1. P.268-275.

112. Frank J., Pompella A., Biesalski H.K. Histochemical visualization of oxidant stress. Free Radic. Biol. Med. 2000. V.29. №11. P. 1096-1105.

113. Friguet B., Bulteau A.L., Chondrogianni N., Conconi M., Petropoulos I. Protein degradation by the proteasome and its implications in aging. Ann. N.Y. Acad. Sei. 2000. V.908. P. 143-154.

114. Frölich L., Riederer P. Free radical mechanisms in dementia of Alzheimer type and the potential for antioxidative treatment. Arzneimittelforschung. 1995. V.45. №3A. P.443-446.

115. Fu S., Davies M.J., Stocker R., Dean R.T. Evidence for roles of radicals in protein oxidation in advanced human atherosclerotic plaque // Biochem J. 1998. Vol. 333. P. 519-520.

116. Gardner H.W. Oxygen radical chemistry of polyunsaturated fatty acid. Free Radic. Biol. Med: 1989. V.7. №1. P.65-86.

117. Garland D. Role of site-specific, metal-catalyzed oxidation in lens-aging and cataract: a hypothesis. Exp. Eye Res. 1990. V.50. №6. P.677-682.

118. Garland D., Russell P., Zigler J.S.Jr. The oxidative modification of lens proteins. In: Oxygen Radicals in Biology and Medicine. Simic M.G., Taylor K.S., Ward J.F., Von Sonntag V. Eds. Plenum Publishing Corp.: New York. 1988. P.347-353.

119. Garland D., Zigler J.S.Jr., Kinoshita J. Structural changes in bovine lens crystallins induced by ascorbate, metal, and oxygen. Arch. Biochem. Biophys. 1986. V.251. №2. P.771-776.

120. Garner W.H., Garner M.H., Spector A. H202-induced uncoupling of bovine lens Na+, K+-ATPase. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1983. V.80. №7. P.2044-2048.

121. Garner M.H., Spector A. Selective oxidation of cysteine and methionine in normal and senile cataractous lenses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. V.77. №3. P. 1274-1277.

122. Gladstone I.M.Jr., Levine R.L. Oxidation of proteins in neonatal lungs. Pediatrics. 1994. V.93. №5. P.764-768.

123. Goto S., Takahashi R., Kumiyama A., Radak Z., Hayashi T., Takenouchi M., Abe R. Implications of protein degradation in aging. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2001. V.928. P.54-64.

124. Greenacre S. A., Ischiropoulos H. Tyrosine nitration: localisation, quantification, consequences for protein function and signal transduction //Free Radic Res. 2001. №34. P.541-581.

125. Halliwell B. Free radicals, reactiv oxygen species and human diseases: a critical evacuation with special reference to atherosclerosis // British J Experim Pathology. 1989. Vol.70, №3. P.737-757.

126. Halliwell B. Reactive oxygen species and the central nervous system. In: Free radical in the brain. Aging, neurological and mentaldisorders. Packer L., Philipko L., Christen Y. Eds. Springer-Verlag, Berlin, N.Y., London. 1992. P.21-40.

127. Halliwell B. Reactive oxygen species and the central nervous system. J. Neurochem. 1992. V.59. №5. P.1609-1623.

128. Harman D. Aging: a theory based on free radical and radiation chemistry. J. Gerontol. 1956. V.l 1. №3. P.298-300.

129. Harman D. Free radical theory of aging: effect of free radical reaction inhibitors on the mortality rate of male LAF mice. J. Gerontol. 1968. V.23. №4. P.476-482.

130. Harman D. Free radicals in aging. Mol. Cell Biochem. 1988. V.84. №2. P.155-161.

131. Harman D. The aging process: major risk factor for disease and death. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V.88. №12. P.5360-5363.

132. Harman D. Free radical theory of aging: History. In: Free radicals and aging. I. Emerit, B. Chance. Eds. Basel. Boston. Berlin: Birkrmuser. 1992. V.62. P. 1-10.

133. Harman D. Free-radical theory of aging. Invreasing the functional life span. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1994. V.717. P.l-15.

134. Harman D. Aging and disease: extending functional life span. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1996. V.786. P.321-336.

135. Heinecke J.W. Mass spectrometric quantification of amino acid oxidation products in proteins: insights into pathways that promote LDL oxidation in the human artery wall. FASEB J. 1999. V.13. №10. P.1113-1120.

136. Hensley K., Floyd R.A. Reactive oxygen species and protein oxidation in aging: a look back, a look ahead. Arch. Biochem. Biophys. 2002. V.397. №2. P.377-383.

137. Jones R.H., Hothersall J.S. The effect of diabetes and dietary ascorbate supplementation on the oxidative modification of rat lens beta L crystallin. Biochem. Med. Metab. Biol. 1993. V.50. №2. P. 197-209.

138. Kato Y., Maruyama W., Naoi M., Hashizume Y., Osawa T. Immunohistochemical detection of dityrosine in lipofiiscin pigments in the aged human brain. FEBS Lett. 1998. V.439. №3. P.231-234.

139. Koltover V.K. Free radical theory of aging: View against the reliability theory. In: Free radicals and aging. I. Emerit, B. Chance. Eds. Basel. Boston. Berlin: Birkrmuser. 1992. P. 11-19.

140. Leeuwenburgh C, Hansen P.A., Holloszy J.O., Heinecke J.W. Hydroxyl radical generation during exercise increases mitochondrial protein oxidation and levels of urinary dityrosine. Free Radic. Biol. Med. 1999. V.27. №1/2. P. 186-192.

141. Levine R.L., Garland D., Oliver C.N. Metods Enzymol // 1990. www.mitoresearch.oriz

142. Levine R.L, Garland D., Oliver C.N., Amici A., Climent L., Lenz A.G., Ahn B.W., Shaltien S., Stadtman E.R. Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins. Methods Enzymol. 1990. V.186. P.464-478.

143. Levine R.L., Williams J.A., Stadtman E.R., Shacter E. Carbonyl assays for determination of oxidatively modified proteins. Methods Enzymol. 1994. V.233. P.346-357.

144. Liu Y., Rosenthal R.E., Starke-Reed P., Fiskum G. Inhibition of postcardiac arrest brain protein oxidation by acetyl-L-carnitine. Free Radic. Biol. Med. 1993. V.15. №6. P.667-670.

145. Lund A.L., Smith J.B., Smith D.L. Modifications of the water-insoluble human lens alpha-crystallins. Exp. Eye Res. 1996. V.63. №6. P.661-672.

146. Lung C.C., Pinnas J.L., Yahya M.D., Meinke G.C., Mooradian A.D. Malondialdehyde modified proteins and their antibodies in the plasma of control and streptozotocin induced diabetic rats. Life Sci. 1993. V.52. №3. P.329-337.

147. Martinez-Cayuela M. Oxygen free radicals and human disease. Biochimie 1995. V.77. №3. P. 147-161.

148. Murphy M.E., Kehrer J.P. Oxidation state of tissue thiol groups and content of protein carbonyl groups in chickens with inherited muscular dystrophy. Biochem. J. 1989. V.260. №2. P.359-364.

149. Musci G., Bonaccorsi di Patti M.C., Fagiolo U., Calabrese L. Age-related changes in human ceruloplasmin. Evidence for oxidative modifications. J. Biol. Chem. 1993. V.268. №18. P. 13388-13395.

150. Nagler R., Lischinsky S., Diamond E. Effect of cigarette smoke on salivary proteins and enzyme activities // Arch.Biochem. Biophys. 2000. №379 P.229-236.

151. Neely M.D., Sidell K.R., Graham D.G., Montine T.J. The lipid peroxidation product 4-hydroxynonenal inhibits neurite outgrowth, disrupts neuronal microtubules, and modifies cellular tubulin. J. Neurochem. 1999. V.72. №6. P.2323-2333.

152. Oliver C.N., Ahn B.-W., Moerman E.J., Goldstein S., Stadtman E.R. Age-related changes in oxidized proteins. J. Biol. Chem. 1987. V.262. №12. P.5488-5491.

153. Pantke V., Volk T., Schmutzler M., Kox W.J., Sitte N., Grune T. Oxidized proteins as a marker of oxidative stress during coronary heart surgery. Free Radic. Biol. Med. 1999. V.27. №9/10. P. 1080-1086.

154. Parihar M.S., Pandit M.K. Free radical induced increase in protein carbonyl is attenuated by low dose of adenosine in hippocampus and mid brain: implication in neurodegenerative disorders. Gen. Physiol. Biophys. 2003. V.22. P.29-39.

155. Quinlan G.J., Evans T.W., Gutteridge J.M. Oxidative damage to plasma proteins in adult respiratory distress syndrome. Free Radic. Res. 1994. V.20.№5. P.289-298.

156. Rice-Evans C., Burdon R. Free radical-lipid interactions and their pathological consequences. Prog. Lipid Res. 1993. V.32. №1. P.71-110.

157. Rouslin W., Ranganathan S. Impaired function of mitochondrial electron transfer complex 1 in canine myocardial ischemia: loss of flavin mononucleotide. J. Mol. Cell. Cardiol. 1983. V. 15. №8. P.537-542.

158. Salo D.S., Pacifici R.E., Lin S.W., Giulivi G., Davies K.J. Superoxide dismutase undergoes proteolysis and fragmentation following oxidative modification and inactivation // J. Biol. Chem. 1990. Vol. 265. №20. P. 11919-11927.

159. Schmekel B. Ahlner J., Malmstr M., Vengr P. Eosinophil cationic protein (ECP) in saliva: a new marker of disease activity in bronchial asthma // Respir. Med. 2001. №95. P.670-675.

160. Shacter E. Quantification and significance of protein oxidation in biological samples // Drug Metab. Rev.-2000.-№32.-P.307-326. http://www.medicinc.uiowa.edu/frrb/VirtualSchool/Shacter DrugMetReviews.pdf

161. Shah G., Pinnas J.L., Lung C.C., Mahmoud S., Mooradian A.D. Tissue-specific distribution of malondialdehyde modified proteins in diabetes mellitus. Life Sci. 1994. V.55. №17. P.1343-1349.

162. Shringarpure II., Grune T., Davies K.J. Protein oxidation and 20S proteasomedependent proteolysis in mammalian cells // Cell Mol Life Sci. 2001. №58. P. 1442-1450.

163. Smith C.D., Carney J.M., Tatsumo T., Stadtman E.R., Floyd R.A., Markesbery W.R. Protein oxidation in aging brain. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1992. V.663. P. 110-119.

164. Sohal R.S. Oxidative stress and Cellular aging. Lipofiiscin 1987: State of the Art. Editor: 1. Zs.-Nagy. Akademiai Kiado, Budapest and Elsevier Science Publishers. Amsterdam. 1988. P. 135-144.

165. Sohal R.S. Role of oxidative stress and protein oxidation in the aging process. Free Radic. Biol. Med. 2002. V.33. №1. P.37-44.

166. Sohal R.S., Agarwal S., Sohal B.H. Oxidative stress and aging in the Mongolian gerbil (Merioms unguiculatus). Mech. Ageing Dev. 1995. V.81. №1. P. 15-25.

167. Sohal R.S., Weindruch R. Oxidative stress, caloric restriction, and aging. Science. 1996. V.273. №5271.P.59-63.

168. Sram R.J., Binkova B., Kocisova J., Topinka J., Fojtikova I., Hanel I., Klaschka J., Kotesovec F., Kubicek V., Gebhart J.A. Antioxidants effect on alcohol, drugs and aging. Prog. Clin. Biol. Res. 1990. V.340C. P.327-337.

169. Stadtman E.R. Protein oxidation in aging and age-related diseases. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2001. V.928. P.22-38.

170. Stadtman E.R., Berlett B.S. Reactive oxygen-mediated protein oxidation in aging and disease. Chem. Res. Toxicol. 1997. V.10. №5. P.485-494.

171. Stadtman E.R., Berlett B.S. Reactive oxygen-mediated protein oxidation in aging and disease. Drug Metab. Rev. 1998. V.30. №2. P.225-243.

172. Stadtman E.R., Levine R.L. Protein oxidation // Ann N Y Acad Sci. 2000. №899. P. 191-208.

173. Stadtman E.R., Oliver C.N., Starke-Reed P.E., Rhee S.G. Age-related oxidation reaction in proteins. Toxicol. Ind. Health. 1993. V.9. №1-2. P. 187-196.

174. Stadtman E.R., Starke-Reed R.E., Oliver C.N., Carney J.M., Floyd R.A. Protein modification in aging. In: Free radicals and aging. I. Emerit, B. Chance. Eds. Basel. Boston. Berlin: Birkhauser. 1992. P.64-72.

175. Taylor J.P., Hardy J., Fischbeck K.H. Toxic proteins in neurodegenerative disease. Science. 2002. V.296. №5575. P.1991-1995.

176. Turi J.L., Yang F, Garrick M.D., Piantadosi C.A., Ghio A.J. The iron cycle and oxidative stress in the lung. Free Rad. Biol. Med. 2004. V.36. №7. P.850-857.

177. Turner J.J., Rice-Evans C.A., Davies M.J., Newman E.S. The formation of free radicals by cardiac myocytes under oxidative stress andthe effects of electron-donating drugs. Biochem. J. 1991.V.277. (Pt 3). P.833-837.

178. Uchida K. Current status of acrolein as a lipid peroxidation product. Trends Cardiovasc. Med. 1999. V.9. №5. P.109-113.

179. Uchida K., Itakura K., Kawakishi S., Hiai H., Toyokuni S., Stadtman E.R. Characterization of epitopes recognized by 4-hydroxy-2-nonenal specific antibodies. Arch. Biochem. Biophys 1995. V.324. №2. P.241-248.

180. Uchida K., Toyokuni S., Nishikawa K., Kawakishi S., Oda H., Hiai H., Stadtman E.R. Michael addition-type 4-hydroxy-2nonenal adducts in modified low-density lipoproteins: markers for artherosclerosis. Biochemistry. 1994. V.33. №41. P. 12487-12494.

181. Valentine J.S. Do oxidatively modified proteins cause ALS? Free Radic. Biol. Med. 2002. V33. №10. P.1314-1320.

182. Vanden Hoek T.L., Shao Z., Li C., Schumacker P.T., Becker L.B. Mitochondrial electron transport can become a significant source of oxidative injury in cardiomyocytes. J. Mol. Cell. Cardiol. 1997. V.29. №9. P.2441-2450.

183. Vinson J.A., Teufel K., Wu N. Red wine, dealcoholized red wine, and especially grape juice inhibit atherosclerosis in a hamster model. Atherosclerosis. 2001. V.156. №1. P.67-72.

184. Wagner G.M., Chiu D.T.-Y., Qju J.M., Heath R.H., Lubin B.H. Blood // 1987. http://www.proniega.com/msds/France/frenchmsds%5CV4201.pdf

185. Witztum J.L., Steinberg D. Role of oxidized low density lipoprotein in atherogenesis. J. Clin, invest. 1991. V.88. №6. P.1785-1792.

186. Yan L-J., Levine R.L., Sohal R.S. Oxidative damage during aging targets mitochondrial aconitase. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. №21. P.I 1168-11172.

187. Yoritaka A., Hattori N., Uchida K., Tanaka M., Stadtman E.R., Mizuno Y. Immunohistochemical detection of 4-hydroxynonenal protein adducts in Parkinson's disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. №7. P.2696-2701.

188. Yu B.P. Aging and oxidative stress: modulation by dietary restriction. Free Radic. Biol. Med. 1996. V.21. №5. P.651-668.

189. Zs.-Nagy I. A proposal for reconsideration of the role of oxygen free radicals in cell differentiation and aging. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1992. V.673. P. 142-148.

190. Zwart L.L., Meerman J.H.N., Commandeur J.N.M., Vermeulen N.P.E. Biomarkers of free radical damage applications in experimental animals and in humans. Free Radic. Biol. Med. 1999. V.26. №1/2. P.202-226.

Информация о работе

Баврина, Анна Петровна
кандидата биологических наук
Нижний Новгород, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Свободнорадикальное окисление при различных функциональных состояниях щитовидной железы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы