Структурно-молекулярная организация и эволюция В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus Peninsulae

Лаухина, Ольга Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Структурно-молекулярная организация и эволюция В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus Peninsulae
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Структурно-молекулярная организация и эволюция В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus Peninsulae"

На правах рукописи

ЛАУХИНА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

структурно-молекулярная организация и эволюция в-хромосом восточноазиатской

лесной мыши аробемия ремтиьае

Генетика-03.00.15

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 2005

Работа выполнена в лаборатории морфологии и функции клеточных структур, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.

Научный руководитель: доктор биологических наук,

Рубцов Николай Борисович, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Жданова Наталья Сергеевна, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

доктор биологических наук, Родионов Александр Владимирович, Ботанический институт им. В.Л.Комарова РАН, г. Санкт-Петербург

Ведущее учреждение: Институт молекулярной биологии

РАН, г. Москва

Защита диссертации состоится " и а^/Уьа. 2005 г. на утреннем заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание учёной степени доктора наук (Д - 003.011.01) в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале института по адресу: 630090, г. Новосибирск, проспект Лаврентьева, 10, т/ф (3832)33-12-78, e-mail: dissov@bionet.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

А.Д. Груздев

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность работы. Среди всех крупных таксономических групп встречаются виды, в геноме которых наряду с А-хромосомами, составляющими основной набор, присутствуют дополнительные или В-хромосомы. В-хромосомы до сих пор считаются одними из наиболее загадочных элементов генома. Исследования В-хромосом разных видов показывают, что в природе существует большое разнообразие этих элементов. Появление В-хромосом в геноме связано с реорганизацией хромосом и характерно для тех групп видов, у которых происходит быстрая кариотипическая эволюция. У большинства видов В-хромосомы представляют собой генетически неактивные элементы генома, не подверженные прессингу отбора и поэтому очень лабильны в эволюционном плане. Благодаря этому В-хромосомы могут служить моделью для анализа некоторых механизмов, определяющих кариотипическую эволюцию, таких как происхождение новых элементов генома, амплификация последовательностей ДНК (Blunden et al., 1993; Reed et al., 1994; Gutknecht et al., 1995; Jamilena et al., 1995), гетерохроматизация и генетическая инактивация элементов генома (Camacho et al., 2000), механизмы аккумуляции хромосом, стабилизация дополнительных хромосом в геноме (Araujo et al., 2001, Hackstein et al., 1996).

До недавнего времени исследования В-хромосом были ограничены методами изучения их морфологии и структурной организации, распределения в популяциях и поведения в мейозе. Изучение молекулярного состава В-хромосом до последнего времени оставалось за рамками исследований. В результате вопросы происхождения и роли В-хромосом и сейчас остаются предметом многочисленных дискуссий.

Широкое внедрение в цитогенетические исследования различных ДНК-проб и разработка метода микродиссекции метафазных хромосом открыли принципиально новые возможности анализа организации В-хромосом, которые могут позволить расшифровать ряд механизмов молекулярной реорганизации хромосом, определить особенности состава ДНК эволюционно лабильных районов, а также расширить современные представления о механизмах и закономерностях формирования малых сверхчисленных хромосом человека.

В-хромосомы восточноазиатской лесной мыши Apodemus peninsulae обладают уникальным набором характеристик, которые делают их весьма удобным и перспективным модельным объектом при изучении происхождения и молекулярной организации В-хромосом млекопитающих. Они присутствуют в большом числе у подавляющего большинства представителей этого вида (Hayata et al., 1970; Krai, 1971, Волобуев, 1979) и варьируют как по размерам, так и по морфологии (Картавцева 2002).

Цели и задачи. Цель данной работы - выяснение основных принципов структурной, молекулярной организации и эволюции В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus peninsulae. Для достижения этой цели были поставлены следующие конкретные задачи.

1) Провести отлов животных из разных, в том числе географически удаленных популяций Apodemus peninsulae.

2) Провести кариотипический анализ всех отловленных животных.

3) Создать набор хромосомо- и районоспецифичных ДНК-библиотек В-хромосом и районов хромосом основного набора Apodemus peninsulae.

4) Провести сравнительный анализ ДНК разных районов В-хромосом.

5) Провести сравнительный молекулярно-цитогенетический анализ В-хромосом животных из разных популяций и из удаленных географических районов.

6) Оценить распределение последовательностей ДНК, гомологичных ДНК В-хромосом, в хромосомах основного набора.

7) Провести оценку видоспецифичности ДНК районов В-хромосом лесной мыши.

Научная новизна и практическая ценность. Представленные в работе данные расширяют наши представления об организации и закономерностях эволюции хромосом млекопитающих.

Продемонстрировано, что наличие активных ядрышкообразующих районов в В-хромосомах лесных мышей - достаточно распространенное явление, характерное для разных значительно удаленных популяций этого вида, что может свидетельствовать о возможном адаптивном значении В-хромосом. Выявлена связь формирования ЯО-районов с определенными типами повторенных последовательностей.

Описан феномен избегания полноценной конденсации некоторых районов В-хромосом в митозе.

Показано, что прицентромерные районы В-хромосом из разных географических районов имеют различный состав ДНК.

Выявлены особенности распределения последовательностей ДНК, гомологичной ДНК В-хромосом в А-хромосомах A.peninsulae и у A.agrarius.

Установлена связь морфологии и состава ДНК В-хромосом.

Полученные данные указывают на независимое и различное происхождение В-хромосом восточноазиатских лесных мышей в различных географических районах. Предложены гипотетические механизмы формирования и эволюции В-хромосом у этого вида.

Апробация работы. Результаты исследования были доложены на Второй международной конференции по В-хромосомам (Бубион, Испания, 27-29 июня 2004) и на III международной научной конференции молодых ученых и студентов (Казахский национальный университет имени аль-Фараби, г. Алматы), на 3-ем съезде ВОГиС (Москва, 2-12 июня 2004), на Сибирской Зоологической Конференции (Новосибирск, 15-22 сентября 2004). Кроме того, результаты были представлены на отчетной сессии Института Цитологии и Генетики СО РАН в феврале 2002 года.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материал и методы, результаты, обсуждение, заключение, выводы, список цитируемой литературы (226 ссылок) и приложение с рисунками (19 рисунков), изложена на 148 страницах машинописного текста и содержит 4 таблицы.

Автор выражает благодарность сотрудникам Биолого-Почвенного Института Дальневосточного Отделения РАН к.б.н. Картавцевой И.В. и Рослик Г.В. за любезно предоставленные суспензии метафазных хромосом Apodemus peninsulae из Дальневосточных популяций, Борисову Ю.М. за отлов восточноазиатских мышей в Бурятии. Автор выражает искреннюю признательность руководителю работы заведующему лабораторией д.б.н. Рубцову Николаю Борисовичу за всестороннюю поддержку при написании данной работы и проведение микродиссекции, сотрудникам лаборатории к.б.н. Т.В. Карамышевой за помощь при проведении экспериментов и к.б.н. М.Н. Бочкареву, проводившему отлов животных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Животные. В работе были использованы животные, отловленные в Западной Сибири, Хакасии и Бурятии. Также были исследованы суспензии метафазных хромосом животных с Дальнего Востока, любезно предоставленные сотрудниками Биолого-Почвенного Института Дальневосточного Отделения РАН к.б.н. Картавцевой И.В. и Рослик Г.В.

Приготовление препаратов метафазных хромосом. Для приготовления препаратов метафазных хромосом из клеток костного мозга использовали стандартную методику (Графодатский, Раджабли, 1988). Суспензию фиксированных клеток раскапывали из пипетки с высоты 30-50 см. на поверхность чистых, холодных и влажных предметных стекол. Препараты для FISH хранили под вакуумом не менее четырех дней. Для микродиссекции метафазных хромосом использовали покровные стекла (24x60 мм).

Получение препаратов из ткани семенников для FISH. Препараты из ткани семенников получали, как описано у Графодатского и Раджабли (Графодатский, Раджабли, 1988).

Дифференциальное окрашивание хромосом. DAPI, GTG, и Ag-NOR окрашивание хромосом проводили по стандартной методике (Verma, Babu, 1995). Для окраски структурного гетерохроматина использовался метод, предложенный Самнером (Sumner, 1972) в модификации Графодатского и Раджабли (Графодатский, Раджабли, 1988). Для обозначения В-хромосом мы использовали номер животного, символ «В» и индивидуальный номер В-хромосомы. Для индивидуального номера все В-хромосомы животного были пронумерованы в порядке уменьшения размера.

Создание микродиссекциоиных ДНК-проб. Микродиссекцию проводили на микроскопе AXIOVERT 10, оснащенном микроманипулятором IR (Zeiss, ФРГ) и механическим позиционером, в полустерильных условиях специально приготовленными для этого микродиссекционными иглами. Диссекгированный материал переносили в микрокаплю, помещенную в оттянутый носик силиконизированной микропипетки (Rubtsov et al., 2000). Амплификацию геномной ДНК с помощью DOP-PCR проводили с праймером MW6 (Telenius et al., 1992), как описано (Rubtsov et al., 2000). ДНК метили

биотин-16-dUTP или дигоксигенин-11-dUTP в дополнительных циклах полимеразной цепной реакции.

ДНК-проба для детекции рибосомальной ДНК. Для детекции рибосомальной ДНК использовалась ДНК-проба, содержащая фрагмент 18S рДНК человека, клонированный в плазмиде рНг13 (Малыгин и др., 1992) и меченная введением биотин-16-дУТФ.

Проба теломериых повторов. ДНК-проба, использованная для детекции теломерных повторов, содержала теломерную повторенную последовательность человека (TTAGGG)n (длина фрагментов до 25 Kb), амплифицированную полимеразной цепной реакцией в отсутствии матрицы с праймерами (TTAGGG)$ и (ССАТТТ)5 (Ijdo et al., 1991). ДНК-проба была мечена введением биотин-16-дУТФ как описано в п. 2.2.3.5.

Флуоресцентная in situ гибридизация. Флуоресцентную in situ гибридизацию (FISH) и детекцию меченых ДНК-проб проводили, как описано у Пинкеля с соавторами (Pinkel et al., 1986).

Микроскопический анализ препаратов метафазных хромосом. Препараты анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа AXIOSCOP 2, для регистрации сигнала использовали CCD-камеру и программное обеспечение "ISIS4" фирмы METASYSTEMS GmbH (Германия).

РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Морфология и дифференциальная окраска В-хромосом Apodemus peninsulae.

Был проведен цитогенетический анализ всех 40 пойманных животных с помощью методов рутинного и дифференциального окрашивания хромосом. В-хромосомы были обнаружены у всех исследованных особей, за исключением двух особей: №1380 (Хабаровской край) и №22 (Алтайский край). У остальных животных их число варьировало от 1 до 11. Максимальное число В-хромосом было выявлено у животного №12, пойманного в окрестностях Новосибирска. В результате С-окрашивания было показано, что В-хромосомы исследованных в работе животных состоят из С-позитивного материала. По морфометрическим характеристикам В-хромосомы варьировали от микроВхромосом с неопределенной морфологией и небольших акроцентрических хромосом до крупных метацентрических.

2. Получение микродиссекционных ДНК-проб

В работе были получены методом микродиссекции метафазных хромосом с последующей амплификацией DOP-PCR следующие хромосомоспецифичные и районоспецифичныеДНК-пробы: ДНК-пробы целых В-хромосом

11В1, 11В2, 11ВЗ, 11В4 и 11В5 - ДНК-пробы, происходящие из соответствующих В-хромосом животного №11 (Центральная Сибирь (Хакасия)); 9В8 и 9В9 - ДНК-пробы, происходящие из микроВ-хромосом животного №9 (Центральная Сибирь (Хакасия));

1505В1, 1505В2, 1507В, 1508В1, 1508В2 - ДНК-пробы, происходящие из соответствующих В-хромосом животных с Дальнего Востока.

ДНК-пробы отдельных районов В-хромосом

11В2р и HB2q - ДНК-пробы, полученные из разных плеч второй по размеру В-хромосомы животного №11 (хромосомы 11В2).

HB2pq - ДНК-проба, полученная из плеч хромосомы 11В2 и представляющая

собой комбинацию ДНК-проб 11В2р и 11B2q;

ДНК-пробы отдельных районов хромосом основного набора

АроС - ДНК-проба, происходящая из прицентромерных районов аутосом

АроБ - ДНК проба эухроматинового района одной из аутосом

3. Паттерны сигнала FISH микродиссекционных ДНК-проб в хромосомах Apodemus pentnsulae

При проведении FISH паттерны сигналов некоторых ДНК-проб оказались одинаковыми, что позволило выделить несколько групп ДНК-проб (таблица 1). Таблица 1.Паттерны сигнала FISH созданных микродиссекционных ДНК-проб.

ДНК- пробы Локализация сигнала:

аутосомы половые хромосомы В-хромосомы

Зап. Сиб. и Центр. Сиб. Вост. Сиб. Дальний Восток

11В1, 11В2, 11ВЗ, 11В4 и 9В9 П/ценгр. Эухр.* С+ районы Эухр.* Макро и микро-В: п/центр., районы плеч Макро-В: районы плеч, Микро-В: п/центр. Макро-В: районы плеч

11В2р, 1 lB2q, 1 lB2pq Эухр.* Эухр.* Макро-В: районы плеч Макро-В: районы плеч Макро-В: районы плеч

АроС П/ценгр. Эухр* С+ районы Эухр.* Макро-В: п/центр., районы плеч м:п/центр. Макро-В: районы плеч Микро-В: п/центр. В большинстве хромосом отсутствует**

11В5 и 9В8 П/центр. С+ районы Макро и микро-В: п/центр., районы плеч Макро-В: районы плеч Микро-В: п/цешр. районы плеч Сигнал не выявлен

1505В1, 1505В2, 1507В, 1508В1, 1508В2 Эухр.* Эухр.* Макро-В: районы плеч Макро-В: районы плеч Макро-В: п/центр., районы плеч

АроЕ Эухр* Эухр.* Макро-В: районы плеч* Макро-В: районы плеч* Макро-В: районы плеч*

* Сигнал, не значительно превышающий фоновый уровень

**Сигнал выявлен лишь в одном случае в прицентромерном районе акроцентрической В-хромосомы (животное №1491 из Приморского края).

Макро-В: макроВ-хромосомы, Микро-В: микроВ-хромосомы. П/центр. - прицентромерные районы, эухр. — эухроматиновые районы

4. Паттерны сигнала FISH ДНК-проб теломерных повторов и рибосомальной ДНК

ДНК-проба (TTAGGG)n

Кластеры теломерных повторов выявлены как в хромосомах основного набора, так и во всех В-хромосомах исследованных животных.

Проба рДНК

Кластеры рДНК были выявлены в теломерных районах двух пар акроцентрических аутосом. Заметим, что эти данные несколько отличаются от данных, представленных в литературе. Ранее сообщалось, что в популяциях лесных мышей Тувы, Приморья и о-ва Сахалин выявлено до четырех аутосом с ЯОР, однако только два из них локализованы теломерно, а два — прицентромерно (Боескоров и др, 1995; Картавцева, 2002). Есть основания полагать, что эти данные были получены в результате ошибочной интерпретации положения центромеры аутосом с ЯОР, окрашенными серебром. Проведение одновременной гибридизации проб рДНК и АроС позволило нам гарантированно определить положение кластеров рибосомальной ДНК относительно центромеры аутосом.

Кроме аутосом, мы также выявили кластеры рДНК в интеркалярном или теломерном положении в некоторых В-хромосомах лесных мышей, отловленных на Алтае, в Бурятии, в Хабаровском и Приморском краях. Следует отметить, что сигнал был выявлен только в тех районах, которые окрашиваются ДНК-пробами HB2pq, 1В1, 11В2, 11ВЗ, 11В4 и 9В9), никогда не выявлялся в районах, окрашиваемых ДНК-пробами 11В5 и 9В8.

5. Классификация повторов В-хромосом восточноазиатсткой лесной мыши по их локализации в геноме

Попытка обобщения полученных данных привела нас к заключению о наличии в составе В-хромосом и хромосом основного набора восточноазиатсткой лесной мыши нескольких разных типов повторенных последовательностей. Анализ картины распределения повторенных последовательностей по В-хромосомам, аутосомам и половым хромосомам Apodemus peninsulae позволил нам классифицировать выявленные повторы в соответствии с их гомологией и преимущественной локализацией.

1) Повторы прицентромерных районов аутосом. Большое число копий этих повторов присутствует в прицентромерных районах всех аутосом. В В-хромосомах они обычно составляют кластеры меньшего размера в прицентроменых районах и в некоторых районах плеч. Они также присутствуют в теломерном С-блоке Y хромосомы и интеркалярном С-блок Х-хромосомы.

Кроме того, эти повторы присутствуют в плечах аутосом в диспергированном виде или в виде небольших кластеров.

2) Повторы, специфичные для плеч В-хромосом, 1-го типа, окрашиваемые ДНК-пробами 11В2р и 11B2q. Они составляют основную массу плеч большинства В-хромосом восточноазиатской лесной мыши. Этот класс повторов присутствует также в эухроматиновых районах хромосом основного набора в диспергированном виде. По-видимому, он представляет собой набор нескольких типов повторенных последовательностей, присутствующих в различных комбинациях в разных районах В-хромосом. Об этом свидетельствует сложный паттерн сигнала при гибридизации ДНК-проб, содержащих эти повторы, на В-хромосомах.

3) Повторы, специфичные для плеч В-хромосом, 2-го типа. Эти повторы были выявлены в отдельных районах плеч некоторых макро-В-хромосом и в микро-В-хромосомах. Они не выявляются в составе хромосом основного набора. Основное свойство этих повторов состоит в том, что содержащие их районы В-хромосом не подвергаются нормальной компактизации при в митозе. К сожалению, из-за маленького размера районов, содержащих повторы, специфичные для плеч В-хромосом, 2-го типа нам не удалось получить ДНК-пробу, содержащую только эти повторы. Поэтому анализ локализации в хромосомах повторов, специфичных для плеч В-хромосом, 2-го типа был основан на сравнении результатов гибридизации ДНК-пробы 9В8, содержащей этот тип повторов вместе с прицентромерными повторами и ДНК-пробы АроС, содержащей только прицентромерные повторы.

4) Кластеры рибосомальной ДНК. Они были выявлены в теломерных районах четырех аутосом (две пары акроцентриков среднего размера), а также в одном или обоих плечах 17-ти В-хромосом животных из Сибири и Дальнего Востока в их теломерных и интеркалярных районах. Ag-окрашивание подтвердило, что В-хромосомы содержат функционально активные кластеры рибосомальных генов.

5) Теломерные повторы. Повторы (TTAGGG)n были выявлены в теломерных районах всех А и В-хромосом.

6) Прицентромерные повторы В-хромосом мышей Дальнего Востока и Восточной Сибири, не имеющие гомологии с прицентромерными повторами аутосом. Происхождение этих последовательностей пока остается невыясненным.

7) Прочие повторы. Некоторые районы В-хромосом не окрашивались ни одной из полученных нами ДНК-проб. Это говорит о том, что в таких районах присутствуют последовательности, которые не вошли в состав ДНК-проб. Для того, чтобы охарактеризовать эти последовательности по локализации в А и В-хромосомах, требуются дальнейшие исследования, включающие создание ДНК-проб соответствующих районов В-хромосом.

В таблице 2 представлена характеристика микродиссекционных ДНК-проб по содержанию выявленных типов повторенных последовательностей.

Таблица 2. Характеристика микродиссекционных ДНК-проб хромосом лесных мышей по составу входящих в них повторенных последовательностей. Классы повторов обозначены цифрами, расшифрованными в предложенной выше классификации.

ДНК-проба Классы повторов, входящие в состав ДНК-пробы

11В1,11В2,11ВЗ, 11В4.9В9 1,2,5

9В8,11В5 1,3,5

11В2ря, 11В2р, 11В2я 2,5

АроС 1

АроЕ 1,2

1505В1,1505В2, 1507В, 1508В1, 1508В2 2,4,5,6

б.Характер распределения последовательностей ДНК в В-хромосомах восточноазиатской лесной мыши.

6.1. Организация прицентромерных районов В-хромосом.

Анализ результатов гибридизации ДНК-проб целых В-хромосом животных из Хакасии и ДНК-пробы прицентромерного района аутосомы (АроС) с метафазными хромосомами мышей из Западной и Центральной Сибири позволили нам предположить, что организация прицентромерных районов В-хромосом лесных мышей из этих географических районов аналогична организации прицентромерных районов аутосом. Эти данные позволяют сделать вывод о наиболее вероятном происхождении В-хромосом исследуемых мышей из аутосом. Однако необходимо отметить, что размер окрашенных пробой АроС прицентромерных районов В-хромосом был значительно - в 5-10 раз - меньше, чем крупных аутосом. Гибридизация ДНК-пробы АроС с метафазными хромосомами мышей из других географических районов показала, что прицентромерные районы макро-В-хромосом животных, отловленных на Дальнем Востоке и в Восточной Сибири, не содержат последовательностей ДНК, гомологичных повторам прицентромерных районов аутосом. Это также подтвердилось при гибридизации ДНК-проб В-хромосом животных с Дальнего Востока, так как они не окрашивали прицентромерные районы аутосом. Вопрос о происхождении этих В-хромосом остается открытым. В то же время, прицентромерные районы микро-В-хромосом животных из Восточной Сибири по молекулярной организации не отличались от прицентромерных районов В-хромосом животных из Западной и Центральной Сибири.

6.2. Молекулярная организация плеч В-хромосом

Высокая интенсивность сигнала, выявляемого в В-хромосомах при гибридизации микродиссекцтонных ДНК-проб, позволила нам сделать вывод, что В-хромосомы насыщены повторенными последовательностями. Этот вывод может быть сделан благодаря тому, что использованный метод получения ДНК библиотек был предварительно калиброван по оценке уровня специфичного сигнала ДНК проб, полученных из разного числа копий эухроматинового района.

В плечах В-хромосом животных из популяций Западной и Центральной Сибири выявлено несколько типов районов, обогащенных одним или несколькими типами повторенных последовательностей, рассмотренных выше. Наиболее распространенными в плечах В-хромосом являются повторы плеч В-хромосом первого типа. Повторы плеч В-хромосом второго типа и последовательности ДНК, гомологичные прицентромерным повторам аутосом, встречаются сравнительно редко в составе плеч макро-В-хромосом как дополнительные к первому типу повторов плеч В-хромосом.

Вероятно, некоторые метацентрические В-хромосомы этого вида являются изохромосомами. Это предположение подтверждается идентичностью профилей интенсивности сигналов ДНК проб индивидуальных плеч метацентрической В-хромосомы 11В2 животного №11 (ДНК-проб 11В2р и 1 lB2q) на хромосомах. Следует отметить, что далеко не все метацентрические В-хромосомы Apodemus peninsulae являются изохромосомами. У многих особей этого вида, отловленных в разных географических районах, одновременная гибридизация двух ДНК-проб показала разный состав плеч метацентриков.

Особыми свойствами характеризуются районы В-хромосом, содержащие ДНК, гомологичную ДНК проб 9В8 и 11В5, но не АроС. В результате гибридизации ДНК-пробы 9В8 с метафазными хромосомами животного №9 были выявлены дистальные районы двух крупных метацентрических В-хромосом, которые не выявлялись при окрашивании красителями DAPI и Гимза. ДНК проба 9В8 выявляла эти районы в виде своеобразных «метелок» с высокой интенсивностью сигнала. Это явление можно объяснить, предположив, что хроматин, локализованный в дистальных частях этих хромосом, по каким-то причинам не подвергается нормальной компактизации при переходе от интерфазы к метафазе и остается в «рыхлом» состоянии. В таком виде ДНК оказывается легко доступной для гибридизации с ДНК пробы и дает сильный сигнал, но низкая плотность хроматина в таких разрыхленных районах не позволяет получить заметное окрашивание при использовании красителей Гимза и DAPI. Проведение FISH с теломерным повтором показало локализацию блока теломерных повторов в основании «метелки». В результате проведения гибридизации ДНК-пробы 9В8 с хромосомами других особей гомологичные последовательности были выявлены в микро-Вхромосомах и некоторых районах плеч метацентрических макро-Вхромосом животных из Западной и Центральной Сибири и в микроВхромосомах животных из Восточной Сибири. Эти районы также характеризовались слабой конденсацией хроматина.

6.3. Выявление активных ЯО-районов и последовательностей рибосомальной ДНК в В-хромосомах Apodemuspeninsulae

Для выявления активных ЯО-районов и кластеров рДНК в А и В-хромосомах лесных мышей мы использовали, соответственно, метод Ag-окрашивания и FISH с рДНК-пробой. Серебро интенсивно окрашивало теломерные районы четырех аутосом (две пары акроцентриков среднего размера). Кроме того, были выявлены маленькие активные ЯО-районы на одном или обоих плечах 17-ти В-хромосом у 15 из 24 проанализированных животных из популяций Сибири и Дальнего Востока. Размер Ag-позитивных районов в В-хромосомах был значительно меньше, чем в хромосомах основного набора. FISH рДНК-пробы с метафазными хромосомами всех животных, выявила кластеры рДНК в Ag-позитивных районах. Как и районы В-хромосом, окрашиваемые серебром, сигналы рДНК пробы в В-хромосомах были значительно меньше, чем сигналы в ЯО-районах А-хромосом. Следует отметить, что все ЯО-районы и кластеры рДНК, обнаруженные в В-хромосомах, были локализованы в районах, содержащих повторы, специфичные для плеч В-хромосом, 1-го типа (районы, окрашиваемые пробой 9В9) (рисунок 1).

' Л л Л т> * ' J *-«" - Ял jt+x чт ♦ %.? <«№Ч

Т \ »

^х i * » * „ * ' - J * .„ „ "Ч Z* * W * " „ *

* г 'г /" • / > •Wv' * W * . * . е Г- 1? - - * Л" * Я. * * V 2 * * ' * » / ■

«> ! £ » / ' ft * Jf ,1 % ' «'" « Ъ г* ♦ '

i I

Рисунок 1. Два цветовых канала двухцветной FISH ДНК-проб рДНК (слева) и 9В9 (справа) с хромосомами животного №1510 с Дальнего Востока (негативное изображение). Стрелки указывают на кластеры рДНК в В-хромосомах, головки от стрелок - на кластеры рДНК в аутосомах. Кластеры рибосомальной ДНК локализованы на теломерных концах В-хромосом и связаны с повторами плеч В-хромосом 1-го типа.

6.4. МикроВ-хромосомы

Анализ результатов проведенных экспериментов по in situ гибридизации позволил выявить некоторые особенности организации микро-В-хромосом

восточноазиатской лесной мыши. Отнесение мелких В-хромосом к микрохромосомам принято в том случае, если при анализе этих хромосом не выявляется никаких плеч. В соответствии с этим критерием и результатами гибридизации мы разбили В-хромосомы этого вида, размер которых позволяет считать их кандидатами в микро-В-хромосомы, на две группы:

1) точечные В-хромосомы, не содержащие повторов, специфичных для плеч В-хромосом, 1-го типа. Все выявленные нами точечные В-хромосомы содержат, кроме прицентромерных последовательностей, повторы плеч В-хромосом 2-го типа, характеризующиеся неконденсированным состоянием в митозе. Микро-В-хромосомы, содержащие этот тип повторов, распластываются по препарату до очень тонкого слоя и выявляются при гибридизации специфических проб в виде ярких неоформленных метелок. Благодаря своей разрыхленности они не могут визуализироваться с помощью окрашивания красителем Гимза или DAPI. В результате размер микро-В-хромосом недооценивается при цитологическом анализе методами рутинного окрашивания, а их морфологию невозможно правильно описать без проведения FISH со специальными ДНК-пробами. Ни у одной особи из Дальневосточного региона мы не выявили таких микро-В-хромосом.

2) мелкие В-хромосомы, которые представляют собой, вероятно, маленькие макро-В-хромосомы. Они не содержали повторов, специфичных для плеч В-хромосом, 2-го типа. Кроме того, в нескольких метафазных пластинках с очень хорошим качеством распластывания хромосом в их составе были выявлены небольшие плечи. Плечи этих хромосом, также как и основная масса плеч макрохромосом, состоли из повторов, специфичных для плеч В-хромосом, 1-го типа.

К сожалению, эти группы В-хромосом практически невозможно надежно различить без использования FISH. В сумме мы обнаружили 25 типичных микро-В-хромосом у восьми животных из популяций Западной, Центральной и Восточной Сибири и 5 очень мелких макро В-хромосом у 5 особей из Западной и Центральной Сибири и с Дальнего Востока, морфологию которых удалось определить только на нескольких пластинках с хорошим качеством распластывания.

7. Характер распределения повторенных последовательностей ДНК В-хромосом в А-хромосомах восточноазиатской лесной мыши

Последовательности, гомологичные повторам В-хромосом, были выявлены как в гетерохроматиновых, так и эухроматиновых районах А-хромосом (рисунок 2). Так, в прицентромерных районах аутосом, интеркалярном С-гетерохроматиновом блоке Х-хромосомы и теломерном С-гетерохроматиновом блоке Y-хромосомы были обнаружены последовательности, гомологичные повторенным последовательностям прицентромерных районов В-хромосом мышей из Западной и Центральной Сибири и некоторых районов плеч В-хромосом мышей из Западной, Центральной и Восточной Сибири. При гибридизации ДНК-пробы HB2pq, происходящей из плеч В-хромосомы животного №11, был выявлен сигнал низкой интенсивности в эухроматиновых районах всех хромосом основного

набора по всей длине хромосом. Это позволило предположить, что, ДНК, гомологичная ДНК плеч второго по размеру метацентрика животного №11 и многих других В-хромосом, присутствует в виде диспергированного повтора или небольших кластеров в эухроматиновых районах хромосом основного набора.

При анализе результатов гибридизации ДНК-пробы 11Б2рд с хромосомами животных из разных популяций лесных мышей была обнаружена обогащенность некоторых эухроматиновых районов половых хромосом этих животных последовательностями ДНК, гомологичными повторам плеч В-хромосом первого типа. К таким районам относится практически весь эухроматиновый материал У-хромосомы и эухроматиновый район X-хромосомы, расположенный между прицентромерным районом и интеркалярным С-гетерохроматиновым блоком.

8. Сравнение В-хромосом лесных мышей из географически удаленных районов.

В результате проведенной работы выявлены существенные различия в системе В-хромосом удаленных популяций Apodemus pemnsulae, касающиеся не только встречаемости разных морфологических вариантов, но и молекулярного состава морфологически сходных В-хромосом. Наибольшие различия выявлены между наиболее удаленными районами - Западной Сибирью и Дальним Востоком, тогда как в Восточной Сибири обнаружен промежуточный вариант системы В-хромосом (рисунок 3) Так, в Западной и Восточной Сибири в формировании В-хромосом, кроме теломерных повторов и кластеров рибосомальной ДНК, выявленных в В-хромосомах во всех этих географических

районах, участвуют еще три типа повторов, тогда как у мышей на Дальнем Востоке в составе В-хромосом выявлен только один из этих типов повторов. Повторы плеч В-хромосом 1-го типа являются общими для макро-В-хромосом всех исследованных популяций. У животных из Западной и Восточной Сибири обнаружены микро-В-хромосомы, состоящие из прицентромерных повторов и повторов неконденсируемых районов. Неконденсируемый тип повторов у мышей из Западной Сибири выявлен также в некоторых районах плеч макро-В-хромосом. Однако в макро-В-хромосомах мышей из Восточной Сибири эти повторы отсутствуют. Макро-В-хромосомы животных из Восточной Сибири, видимо, имеют происхождение, отличное от В-хромосом животных из Западной Сибири. На это указывает разная организация прицентромерных районов этих хромосом: прицентромерные районы В-хромосом мышей из Восточной Сибири не содержат, в отличие от В-хромосом животных из Западной Сибири последовательностей, гомологичных прицентромерным повторам аутосом. Эти повторы были выявлены в макро-В-хромосомах животных из Восточной Сибири только в некоторых районах плеч. Не исключено, что макро-В-хромосомы животных из Восточной Сибири имеют общее происхождение с В-хромосомами мышей с Дальнего Востока, центромеры которых также не содержат прицентромерных повторов аутосом. Отсутствие сигнала в некоторых районах В-хромосом животных из популяций Восточной Сибири и Дальнего Востока при гибридизации ДНК-проб, специфичных для хромосом западносибирских мышей, свидетельствует о наличии у них своих специфичных последовательностей.

9. Пространственная организация мейотических ядер Apodemus peninsulae.

Результаты FISH ДНК-проб HB2pq и АроС с препаратами семенников восточноазиатских лесных мышей показали, что в пахитенных ядрах В-хромосомы в основном располагаются группой в непосредственной близости от полового бивалента на периферии ядра. Следует отметить, что мы не выявили каких-либо заметных отличий в расположении В-хромосом в пахитенных ядрах животных из Сибири и Дальнего Востока несмотря на то, что центромеры этих В-хромосом имеют разное происхождение. Поэтому можно предположить, что в специфическом расположении В-хромосом в мейотическом ядре большую роль играют повторы плеч В-хромосом 1-го типа, составляющие основную массу плеч макро-В-хромосом лесных мышей из всех проанализированных районов.

Наши данные показывают, что плечи всех макро-В-хромосом этого вида состоят главным образом из повторов, которые встречаются в диспергированном виде в хромосомах основного набора. Однако этот тип повторов отсутствует в микро-В-хромосомах. Возможно, именно этим объясняется неспаривание микрохромосом между собой и с половым бивалентом в мейозе и характерное для них нерегулярное поведение.

Рисунок 3. Некоторые варианты В-хромосом, выявленные: а) в Западной и Центральной Сибири; б) в Восточной Сибири; в) на Дальнем Востоке.

WCлaбoкoндeнcиpoвaнныe районы, содержащие повторы плеч В-хромосом 2-го типа

ЕЕЕ Районы, содержащие повторы плеч В-хромосом 1-го типа

н Районы, содержащие повторы, гомологичные повторенной ДНК ™ поиценпюмеоных районов аутосом

^ Районы, содержащие как повторы плеч В-хромосом 1-го типа, так и повторы, гомологичные повторам прицентромерных районов аутосом

Районы, не окрашивающиеся ни одной из созданных ДНК-проб, показаны белым цветом без заливки

10. Анализ видоснецифичности выявленных повторов В-хромосом лесных мышей

Чтобы провести анализ видоспецифичности выявленных типов повторенных последовательностей ДНК В-хромосом восточноазиатских лесных мышей, три ДНК пробы, каждая из которых содержала преимущественно один тип повтора, были использованы для гибридизации с хромосомами полевой

мыши (Apodemus agrarius). У этого вида В-хромосомы обнаруживаются крайне редко (Картавцева, 1994; Картавцева, Павленко, 2000). В кариотипе животного, использованного в наших экспериментах, В-хромосомы отсутствовали. В результате проведенных экспериментов мы сделали вывод, что последовательности, гомологичные повторам прицентромерных районов аутосом лесных мышей, распространены в диспергированном виде в эухроматиновых районах аутосом полевых мышей, но отсутствуют в их прицентромерных районах. При этом в половых хромосомах обоих видов эти последовательности формируют нецентромерные гетерохроматиновые блоки. Аналогично распределены в хромосомах полевых мышей последовательности, гомологичные повторам плеч В-хромосом лесных мышей 1-го типа. При гибридизации ДНК пробы микро-В-хромосомы 9В8 животного №9, включающей второй тип повторов плеч В-хромосом, вообще не было выявлено какого-либо сигнала в хромосомах полевой мыши. Эти данные указывают на то, что прицентромерные повторы и повторы плеч В-хромосом 1-го типа являются общими для обоих видов мышей и, видимо, унаследованы ими от общего предка. Однако повторы плеч В-хромосом лесных мышей 2-го типа не встречаются в геноме полевых мышей. Для дальнейшего анализа происхождения этих последовательностей потребуется аналогичный анализ геномов других близких видов.

ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенные исследования позволили описать основные принципы структурно-молекулярной организации В-хромосом Apodemus penimulae и выявить существенные различия в системе В-хромосом удаленных популяций этого вида, касающиеся не только встречаемости разных морфологических вариантов, но и молекулярного состава морфологически сходных В-хромосом. По ряду различий в организации В-хромосом мы выделили три географические зоны: Западная и Центральная Сибирь, Восточная Сибирь и Дальний Восток. Мы полагаем, что наиболее вероятными являются два варианта происхождения и дальнейшего распространения В-хромосом. Один из вариантов предполагает, что Западная или Центральная Сибирь и Дальний Восток могли быть центрами происхождения В-хромосом, из которых с миграцией животных В-хромосомы распространились к центру ареала. На это указывают наибольшие различия в организации В-хромосом этих удаленных районов и смешанный вариант системы В-хромосом, представленный в центре ареала. Однако нельзя исключить обратного развития событий, в соответствии с ранее высказанным предположением, что центром (или одним из центров) расселения лесной мыши является район Забайкалья (Борисов, 1990). В этом случае мы должны допустить, что в сторону Западной Сибири и Дальнего Востока распространились разные варианты В-хромосом.

Полученные в работе результаты привели нас к выводу, что В-хромосомы, обнаруженные у животных из Западной и Центральной Сибири, по-видимому, произошли из аутосом, в то время как В-хромосомы животных с Дальнего Востока могли произойти из половых хромосом. В кариотипе животных из Восточной Сибири присутствуют микро-В-хромосомы, наиболее вероятно

произошедшие из аутосом и макро-В-хромосомы, которые могли произойти из половых хромосом. Дальнейшая эволюция В-хромосом, в соответствии с выявленной нами молекулярной организацией В-хромосом, по-видимому, состояла в интеграции разных типов последовательностей и их амплификации.

Разное происхождение В-хромосом в разных популяциях одного и того же вида мышей позволяет сделать вывод о том, что в ряду поколений могут наследоваться не только сами В-хромосомы, но и способность генома их генерировать и поддерживать в популяции. Какие именно особенности генома делают это возможным, остается не ясным. Из обзора многочисленных исследований В-хромосом разных классов организмов становится понятно, что В-хромосомы, как правило, свойственны группам видов с высокими темпами кариотипической эволюции. Род Лроёвшш относится к быстро эволюционирующей группе мышевидных грызунов. У многих видов этого рода выявлены В-хромосомы. Исходя из наших данных, более вероятным представляется, что В-хромосомы этих видов имеют независимое происхождение.

ВЫВОДЫ

1. Выявлено, что В-хромосомы восточноазиатской лесной мыши состоят из нескольких типов повторенных последовательностей, одни из которых являются общими с хромосомами основного набора, тогда как другие специфичны для В-хромосом.

2. Открыт феномен избегания конденсации некоторых районов В-хромосом, содержащих определенный тип повторенных последовательностей.

3. Некоторые повторы В-хромосом восточноазиатской лесной мыши выявлены в хромосомах близкого вида мышь полевая.

4. Подтверждено, что некоторые метацентрические В-хромосомы лесных мышей являются изохромосомами.

5. Показано, что системы В-хромосом удаленных популяций Лроёвшш рвпШыШв существенно различаются по встречаемости разных морфологических вариантов и молекулярному составу морфологически сходных В-хромосом. Один из выявленных типов повторенных последовательностей В-хромосом является общим для всех проанализированных популяций.

6. Показано, что по крайней мере некоторые В-хромосомы в удаленных популяциях восточноазиатской лесной мыши имеют разное происхождение.

5. Высказано предположение, что два района - Дальний Восток и Западная Сибирь - являются центрами происхождения В-хромосом, так как в этих районах обитают мыши с различающимися системами В-хромосом, в то время как в районах расположенных между ними встречаются разные варианты В-хромосом

7. На В-хромосомах лесных мышей из разных популяций выявлены активные ядрышкообразующие районы. В этих районах обнаружены кластеры повторенных последовательностей, гомологичных рибосомальной ДНК.

Список публикаций по теме работы

1. Karamysheva T.V., Andreenkova О.У.. Bochkaerev M.N., Borisov Y.M., Bogdanchikova N.,.Borodin P.M, Rubtsov N.B. В chromosomes of Korean field mouse Apodemus peninsulae (Rodentia, Mammalia) analysed by microdissection and FISH. Cytogenet Genome Res 2002,96: 154-160

2. Rubtsov, N.B., Karamysheva, T.V., Andreenkova. O.V.. Bochkaerev, M.N., Kartavtseva, I.V., Roslik,G.V., Borissov, Y.M. Comparative analysis of micro and macro В chromosomes in the Korean field mouse Apodemus peninsulae (Rodentia, Murinae) performed by chromosome microdissection and FISH Cytogenet Genome Res 2004;106:289-294

3. Рубцов Н.Б., Рубцова Н.В., Карамышева Т.В., Андреенкова О.В.. Бочкарев М.Н., Борисов Ю. Транспозиции и амплификация последовательностей ДНК в создании геномного и кариотипического разнообразия у млекопитающих. Всероссийское совещание. СОВРЕМЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ ЭВОЛЮЦИИ И ФИЛОГЕНИИ ЖИВОТНЫХ, 13-15 ноября 2001, Москва.

4. Андреенкова О.В.. Карамышева Т.В., Бочкарев М.Н., Борисов Ю.М., Картавцева И.В., Рослик Г.В., Рубцов Н.Б. Молекулярно-цитогенетический анализ организации В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus peninsulae. II HI международная научная конференция молодых ученых и студентов. Актуальные вопросы современной биологии и биотехнологии. Казахстан. Алматы. Казахский национальный университет имени аль-Фараби, 23-25 апреля 2003, с. 140.

5. Рубцов Н.Б., Рубцова Н.В., Карамышева TJ3., Андреенкова О.В., Бочкарев М.Н., Картавцева И.В., Рослик Г.В. Морфологическая и молекулярная реорганизация хромосом в эволюции млекопитающих. Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития. 3-й съезд ВОГИС, Москва, 2-12 июня 2004, т. 2, с. 169.

6. Rubtsov NB, Karamysheva TV, Andreenkova OV. Bochkarev MN, Kartavtseva IV, Roslik GV. A and В chromosome DNA diversity in Korean field mouse Apodemus peninsulae (Rodentia, Murinae) in geographically distant populations. Second В chromosome Conference, Bubion (Granada, Spain) June 26-29, 2004, p.37.

7. Рубцов Н.Б., Карамышева Т.В., Андреенкова O.B.. Бочкарев М.Н., Картавцева И.В., Рослик Г.В. Повторенные последовательности ДНК и их* локализация в А- и В-хромосомах восточноазиатской мыши. Сибирская зоологическая конференция, 15-22 сентября 2004. Новосибирск 2004.

Подписано к печати 27. 01.2005.

Формат бумаги 60 x 90 1/16. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 0,7

Тираж 100 экз. Заказ 14.

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН

630090, Новосибирск, проспект академика М.А. Лаврентьева, 10.

1633

16 ФЕВ 2005

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лаухина, Ольга Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Распространение В-хромосом в природе.

Полиморфизм числа В-хромосом.

Морфология В-хромосом.

Молекулярная организация В-хромосом.

Особенности стркуктурно-функциональной организации хроматина В-хромосом.

Состав ДНК В-хромосом.

Ш Мобильные элементыВ-хромосом.

Рибосомальная ДНК В-хромосом.

Происхождение и дальнейшая молекулярная эволюция В-хромосом разных видов.

Внутривидовое происхождение из аутосом.

Внутривидовое происхождение из половых хромосом.

Гибридное происхождение.

Гипотеза экстрахромосомного происхождения В-хромосом.

Эволюция В-хромосом.

Роль амплификации последовательностей ДНК в эволюции В-хромосом.

Эффекты В-хромосом на носителя.

Поведение В-хромосом в мейозе.

Механизмы накопления В-хромосом.

Премейотический механизм.

Мейотическое накопление.

Постмейотическое накопление.

Амейотическое накопление.

Организация В-хромосом у представителей разных таксономических групп.

В-хромосомы растений.

В-хромосомы беспозвоночных. j) В-хромосомы позвоночных.

Вид Apodemus peninsulae как объект исследования В-хромосом.

Таксономическое положение вида Apodemus peninsulae.

Кариотип Apodemus peninsulae.

Дифференциальное окрашивание В-хромосом.

Варьирование числа В-хромосом.

В-хромосомы в клеточных культурах.

Лабораторные популяции.

Исследование мейоза Apodemus peninsulae.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

2.1. Материал.

2.1.1. Животные.

2.1.2. Номенклатура В-хромосом, использованная в работе.

2.2.Метод ы.

2.2.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом для цитогенетического анализа.

2.2.2. Методы окрашивания хромосом.

Щ 2.2.2.1. С-окрашивание хромосом.

2.2.2.2. Ag-окраска ядрышкообразующих районов хромосом.

2.2.2.3. GTG-дифференциальное окрашивание метафазных хромосом.

2.2.2.4. DAPI-окрашивание.

2.2.3. Создание ДНК-проб.

2.2.3.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом для микродиссекции.

2.2.3.2. Подготовка микропипеток и игл для микродиссекции.

2.2.3.3. Микродиссекция метафазных хромосом.

2.2.3.4. ПЦР с частично вырожденным праймером.

2.2.3.5. Введение метки в ДНК микродиссекционных ДНК-библиотек.

2.2.3.6. ДНК-проба для детекции рибосомальной ДНК.

2.2.3.7. Проба теломерных повторов.

2.2.4.Флуоресцентная in situ гибридизация.

2.2.4.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом для FISH.

2.2.4.2. Получение препаратов из ткани семенников для FISH.

2.2.4.3. Флуоресцентная in situ гибридизация.

2.2.5. Детекция на цитологических препаратах меченого ДНК-зонда.

2.2.5.1. Детекция на цитологических препаратах ДНК-зонда меченого биотином.

2.2.5.2. Детекция на цитологических препаратах ДНК-зонда меченого дигоксигенином.

2.2.5.3. Совместное выявление двух гаптен-меченых ДНК-проб на одном препарате.

2.2.6. Микроскопический анализ препаратов метафазных хромосом.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Морфология и дифференциальная окраска В хромосом Apodemus peninsulae.

3.2. Получение микродиссекционных ДНК-проб.

ДНК-пробы целых В-хромосом.

ДНК-пробы отдельных районов В-хромосом.

3.3. Паттерны сигнала FISH полученных ДНК-проб в хромосомах.

ДНК-проба АроС.

ДНК-проба (TTAGGG)n.

Проба рДНК.

3.4. Классификация выявленных повторов В-хромосом лесных мышей по локализации гомологичных последовательностей в геноме.

3.5. Характер распределения последовательностей ДНК в В-хромосомах восточноазиатской лесной мыши

3.5.1. Анализ индивидуального полиморфизма В-хромосом животных №11 и №9.

3.5.2. Организация прицентромерных районов В-хромосом.

3.5.3. Молекулярная организация плеч В-хромосом.

3.5.4. Выявление активных ЯО-районов и последовательностей рибосомальной ДНК в В-хромосомах

Apodemus peninsulae.

3.5.5. МикроВ-хромосомы.

3.6. Характер распределения повторенных последовательностей ДНК В-хромосом в А-хромосомах восточноазиатской лесной мыши.

3.7. Сравнение В-хромосом лесных мышей из географически удаленных районов.

3.7.1. Особенности организации В-хромосом Дальневосточных популяций.

3.7.2,Особенности организации В-хромосом животных из Восточной Сибири.

3.8. Пространственная организация мейотических ядер Apodemus peninsulae.

3.9. Анализ видоспецифичности выявленных повторов В-хромосом лесных мышей.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Эволюция В-хромосом восточноазиатских лесных мышей.

4.2. Гипотеза распространения повторов в геномах двух видов Apodemus и гипотетический механизм формирования В-хромосом лесных мышей. т 4.3. Связь морфологии и молекулярного состава В-хромосом.

4.4. Роль ЯОР в эволюции В-хромосом Apodemus peninsulae.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурно-молекулярная организация и эволюция В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus Peninsulae"

Актуальность работы

В большинстве крупных таксономических групп встречаются виды, в геноме которых наряду с А-хромосомами, составляющими основной набор, присутствуют дополнительные или В-хромосомы. В-хромосомы до сих пор считаются одними из наиболее загадочных элементов генома. Исследования В-хромосом разных видов показывают, что в природе существует большое разнообразие этих элементов. Для В-хромосом многих видов были предложены гипотезы, объясняющие их происхождение, например в результате случайных ошибок мейоза, приводящих к трисомии, из центрических фрагментов, образовавшихся в результате слияния А-хромосом и так далее. Большую роль в их формировании могут играть мобильные элементы. В любом случае появление В-хромосом в геноме связано с реорганизацией хромосом и характерно для тех групп видов, у которых происходит быстрая кариотипическая эволюция. У большинства видов В-хромосомы, вероятно, представляют собой генетически неактивные элементы генома, не подверженные прессингу отбора и поэтому очень лабильны в эволюционном плане. Благодаря перечисленным особенностям В-хромосомы могут служить моделью для анализа ряда механизмов, определяющих кариотипическую эволюцию, таких как происхождение новых элементов генома, амплификация последовательностей ДНК (Blunden et al., 1993; Reed et al., 1994; Gutknecht et al., 1995; Jamilena et al., 1995), гетерохроматизация и генетическая инактивация элементов генома (Camacho et al., 2000), механизмы аккумуляции хромосом, стабилизация дополнительных хромосом в геноме (Hackstein et al., 1996, Araujo et al., 2001).

До недавнего времени исследования В-хромосом были ограничены методами изучения их морфологии и структурной организации, распределения в популяциях и поведения в мейозе. Изучение молекулярного состава В-хромосом оставалось за рамками исследований. В результате вопросы происхождения и роли В-хромосом и сейчас остаются предметом многочисленных дискуссий.

Широкое внедрение в цитогенетические исследования различные ДНК-проб и разработка метода микродиссекции метафазных хромосом открыли принципиально новые возможности анализа организации В-хромосом, которые могут позволить расшифровать ряд механизмов молекулярной реорганизации хромосом, определить особенности состава ДНК эволюционно лабильных районов, а также расширить современные представления о механизмах и закономерностях формирования малых сверхчисленных хромосом человека.

Цели и задачи исследования

Цель данной работы - выяснение основных принципов структурной, молекулярной организации и эволюции В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus peninsulae. Для достижения этой цели были поставлены следующие конкретные задачи.

1) Провести отлов животных из разных, в том числе географически удаленных популяций Apodemus peninsulae.

2) Провести кариотипический анализ всех отловленных животных.

4) Провести сравнительный анализ ДНК разных районов В-хромосом.

7) Провести оценку видоспецифичности ДНК районов В-хромосом лесной мыши.

Научная новизна и практическая ценность

Представленные в работе данные расширяют наши представления об организации и закономерностях эволюции хромосом млекопитающих.

Описан феномен избегания полноценной конденсации некоторых районов В-хромосом в митозе.

Установлена связь морфологии и состава ДНК В-хромосом.

Апробация работы

Результаты исследования были доложены на Второй международной конференции по В-хромосомам (Бубион, Испания, 27-29 июня 2004) и на III международной научной конференции молодых ученых и студентов (Казахский национальный университет имени аль-Фараби, г. Алматы), на 3-ем съезде ВОГиС (Москва, 2-12 июня 2004), на Сибирской Зоологической Конференции (Новосибирск, 15-22 сентября 2004). Кроме того, результаты были представлены на отчетной сессии Института Цитологии и Генетики СО РАН в феврале 2002 года. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Вклад автора

Автор участвовала в отлове мышей на территории Западной Сибири. Ею были получены суспензии хромосом восточноазиатских лесных мышей, отловленных в Бурятии и Западной Сибири; проведен анализ метафазных хромосом с использованием различных методов дифференциального окрашивания. Автором выполнено фиксирование канальцев семенников и приготовление их препаратов для FISH. Автор принимала участие в создании ДНК-проб методом микродиссекции и DOP-PCR, в экспериментах по флуоресцентной in situ гибридизации, в планировании и обсуждении результатов экспериментов.

Структура и объем диссертации

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Лаухина, Ольга Владимировна

выводы

1. В-хромосомы восточноазиатской лесной мыши состоят из нескольких типов повторенных последовательностей, одни из которых являются общими й хромосомами основного набора, тогда как другие специфичны для В-хромосом.

2. Часть районов В-хромосом, содержащих определенный тип повторенных последовательностей, остаются слабоконденсированными в митозе.

3. Два типа повторов В-хромосом восточноазиатской лесной мыши выявлены в хромосомах близкого вида Apodemus agrarius (мышь полевая).

4. Показано, что двуплечие В-хромосомы восточноазиатской лесной мыши могут являться как изохромосомами, так и иметь различные плечи.

5. Показано, что системы В-хромосом удаленных популяций Apodemus peninsulae существенно различаются по встречаемости разных морфологических вариантов и молекулярному составу морфологически сходных В-хромосом. Один из выявленных типов повторенных последовательностей В-хромосом является общим для всех проанализированных популяций.

6. Показано, что В-хромосомы могут иметь различное происхождение. В-хромосомы популяций Западной и Центральной Сибири, наиболее вероятно, происходят из аутосом, в то время как В-хромосомы популяций Дальнего Востока, вероятно, поисходят из половых хромосом.

5. Высказано предположение, что два района - Дальний Восток и Западная Сибирь - могли бытьт центрами происхождения В-хромосом, так как в этих районах обитают мыши с различающимися системами В-хромосом, в то время как в районах расположенных между ними встречаются оба варианта В-хромосом

7. В В-хромосомах лесных мышей из разных популяций выявлены активные ядрышкообразующие районы. В этих районах обнаружены кластеры повторенных последовательностей, гомологичных рибосомальной ДНК.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные за последние годы исследования В-хромосом многих видов животных и растений позволили выяснить некоторые общие принципы организации этих элементов генома. Показано, что В-хромосомы, как правило, состоят из повторенных последовательностей разных типов, как общих с последовательностями хромосом основного набора, так и специфичных для В-хромосом. Выявлены последовательности, которые участвуют в формировании дополнительных хромосом разных организмов. К таким последовательностям относятся прицентромерные, теломерные повторы, кластеры рибосомальных генов, последовательности мобильных элементов различных классов. С точки зрения молекулярной организации В-хромосомы млекопитающих остаются пока слабо изученными по сравнению с Э-хромосомами растений и некоторых беспозвоночных.

В-хромосомам восточноазиатской лесной мыши, послужившей объектом данного исследования, посвящено множество исследований. Системы В-хромосом разных популяций этого вида достаточно хорошо изучены цитогенетическими методами. Наши исследования позволили дополнить эти данные некоторыми молекулярными характеристиками В-хромосом лесных мышей, отловленных в нескольких достаточно удаленных географических районах. В результате проведенных исследований была выявлена связь между молекулярным составом и морфологией В-хромосом.

Полученные нами результаты показывают перспективность подхода микродиссекции метафазных хромосом и использования метода FISH для исследования молекулярной организации В-хромосом. Благодаря этому методу мы выяснили, что В-хромосомы восточноазиатских лесных мышей Apodemus peninsulaр, как и В-хромосомы большинства исследованных видов животных и растений, сформированы кластерами повторенных последовательностей ДНК. Мы выявили несколько типов повторенных последовательностей, формирующих дополнительные хромосомы лесных мышей и проанализировали распределение гомологичных последовательностей ДНК в хромосомах основного набора этого вида, а также в хромосомах близкого вида полевая мышь. Анализ показал, что в составе В-хромосом лесных мышей присутствуют последовательности ДНК, гомологичные некоторым последовательностям основного набора, а также специфичные для В-хромосом. Из-за обогащенности В-хромосом высоко повторенными последовательностями использованный метод, к сожалению, не применим к анализу содержащихся в В-хромосомах низкокопийных и уникальных последовательностей. Кроме того, за рамками наших исследований осталась детальная характеристика выявленных последовательностей. Это поднимает вопрос об актуальности исследований данного объекта другими молекулярными методами, клонирования и сиквенирования выявленных повторенных последовательностей. Так, полученные нами данные позволяют предположить значительную роль мобильных элементов в формировании В-хромосом лесных мышей. Чтобы проверить это предположение, в будущем будет весьма интересно проанализировать распространение различных мобильных элементов в геноме этого, а также близких видов.

Проведенные нами исследования позволили выявить в В-хромосомах большого числа лесных мышей активные ядрышкообразующие районы. Поэтому нельзя исключить возможной адаптивной роли В-хромосом этого вида. Хотя тот факт, что у лесных мышей ранее была показана аккумуляция В-хромосом в сперматоцитах, а также тот факт, что эти В-хромосомы состоят в основном из некодирующих высокоповторенных последовательностей ДНК, свидетельствуют в пользу паразитической природы этих элементов. Возможно, последовательности рибосомальной ДНК играют роль в формировании морфологического полиморфизма по В-хромосомам как наиболее мобильные последовательности в геноме.

В целом, представленные в настоящей работе результаты в сравнении с имеющимися литературными данными демонстрируют на примере восточноазиатских лесных мышей, что молекулярная организация В-хромосом млекопитающих имеет много общих черт с молекулярной организацией В-хромосом растений и различных классов животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лаухина, Ольга Владимировна, Новосибирск

1. Ананьев Е.В., Чернышев А.И. Молекулярная организация генома растений. // Организация генома. Ред.: Богданов Ю.Ф., Прозоров А.А. Москва. Наука. 1989. С. 218-236.

2. Бекасова Т.С., Воронцов Н.Н. Популяционный хромосомный полиморфизм у азиатских лесных мышей Apodemus peninsulae, // Генетика. 1975, Т. 11. С, 8994.

3. Беляев Д.К., Волобуев В.Т., Раджабли С.И., Трут JI.H. Полиморфизм и мозаицизм по добавочным хромосомам у серебристо-черных лисиц. // Генетика. 1974. Т. 10. С. 58-67.

4. Белянина С.И. О добавочных микрохромосомах у хирономид из Волги. // Цитология. 1975. Т. 17. С. 208-209.

5. Бирштейн В.Я. Цитогенетические и молекулярные аспекты эволюции позвоночных. Москва. Наука. 1987.288 с.

6. Богданов Ю.Ф., Коломиец O.JI. Кариотипирование на основе синаптонемных комплексов и применение этого метода в цитогенетике. // Генетика. 1985. Т. 21. № 5. с. 793-802.

7. Боескоров Г.Г., Картавцева И.В., Загороднюк И.В., Белянин А.Н., Ляпунова Е.А. Ядрышкообразующие районы и В-хромосомы лесных мышей (Mammalia, Rodentia, Apodemus). //Генетика. 1995. Т. 31. С. 185-192.

8. Борбиев Т.Э., Коломиец O.JL, Борисов Ю.М., Сафронова А.Д., Богданов Ю.ф. Синаптонемные комплексы А- и В-хромосом сперматоцитов восточноазиатской мыши Apodemus peninsulae. // Цитология. 1990. Т. 32. С. 193-197.

9. Борбиев Т.Э. В-хромосомы восточноазиатской мыши (Apodemus peninsulae). Изменчивость и поведение в мейозе. Автореф. Канд. Дис. Москва. 1991. 21с.

10. Борисов Ю.М. Цитогенетическая структура популяции Apodemus peninsulae (Rodentia, Muridae) на побережье Телецкого озера (Алтай). // Генетика. 1990а. Т. 26. №7. С. 1212-1220.

11. Борисов Ю.М. Изменчивость цитогенетической структуры популяций Apodemus peninsulae (Rodentia, Muridae) в Западных Саянах. // Генетика. 19906. Т. 26. №8. С. 1484-1491.

12. И.Борисов Ю.М. Цитогенетическая дифференцировка популяций Apodemus peninsulae (Rodentia, Muridae) в Восточной Сибири. // Генетика. 1990в. Т. 26. № 10. С. 1828-1839.

13. Борисов Ю.М. Система В-хромосом — маркер популяции Apodemus peninsulae (Rodentia, Muridae) в Прибайкалье. // Генетика. 1990г. Т. 26. № 12. С. 22152225.

14. Борисов Ю.М., Малыгин В.В. Юганальная изменчивость системы В-хромосом восточноазиатской мыши Apodemus peninsulae из Бурятии и Монголии. // Цитология. 1991. Т. 33. № 33. С. 106-111.

15. Буторина А.К., Богданова Е.В. Адаптивное значение и возможное происхождение В-хромосом у ели колючей. // Цитология. 2001. Т. 43. С. 809814.

16. Волобуев В.Т., Тимина Н.Ю. Необычно высокое число В-хромосом и мозаицизм по ним у азиатской лесной мыши A. peninsulae (Rodentia, Muridae). // Цитология и генетика. 1980. Т. 14. № 3. С. 43-45.

17. Волобуев В.Т. В-хромосомы млекопитающих. // Усп. Совр. Биол. 1978. Т. 86. С. 387-398.

18. Волобуев В.Т. Кариологический анализ трех сибирских популяций азиатской лесной мыши Apodemus peninsulae (Rodentia, Muridae). // Докл. АН СССР. 1979. Т. 248. С. 1452-1454.

19. Волобуев В.Т. Система В-хромосом азиатской лесной мыши Apodemus peninsulae (Rodentia, Muridae). Сообщение 1. Структура кариотипа, G- и С-полосы и характер вариации числа В-хромосом, Генетика, 1980. Т. 16. С. 12771284.

20. Воронцов Н.Н., Бекасова Т.С., Крал Б., Коробицына К.В., Иваницкая Е.Ю. О видовой принадлежности азиатских мышей рода Apodemus (Rodentia, Muridae) Сибири и Дальнего Востока. // Зоол. журн. 1977. Т. 56. № 3. С. 437-450.

21. Гилева Э.А. В-хромосомы, необычное наследование половых хромосом и соотношение полов у копытного лемминга Dicrostonyx torquatus torquatus (Pallas, 1779). //Докл. АН СССР. 1973. Т. 213. С. 952-955.

22. Графодатский А.С., Раджабли С.И. Хромосомы сельскохозяйственных и лабораторных животных. Атлас. Новосибирск. Наука. 1988. 128 с.

23. Жиров С.В. Дополнительные хромосомы (В-хромосомы) в кариотипах некоторых видов хирономид из Псковской области. // Цитология. 1999. Т. 41. С. 91-95.

24. Ильинская Н.Б., Петрова Н.А. В-хромосомы Chironomus plumosus (Diptera, Chironomidae). //Генетика. 1985. Т. 21. С. 1671-1679.

25. Картавцева И.В., Борисов Ю.М., Воронцов Н.Н., Ляпунова Е.А., Кораблев В.П. Добавочные хромосомы крысовидного хомячка и его систематическое положение. // Зоол. Журн. 1979. Т. 59. С. 899-904.

26. Картавцева И.В. Описание В-хромосом в кариотипе полевой мыши Apodemus agrarius. // Цитология и генетика. 1994. Т. 28. С. 96-97.

27. Картавцева И.В. Добавочные хромосомы, мозаицизм и динамика численности в двух популяциях восточноазиатской мыши (Apodemus peninsulae, Rodentia) Приморского края в различные сезоны года. // Генетика. 1999. Т. 35. С. 949955.

28. Картавцева И.В., Павленко М.В. Хромосомная изменчивость полевой мыщи Apodemus agrarius. // Генетика. 2000. Т. 36. С. 223-236.

29. Картавцева И.В. Кариосистематика лесных и полевых мышей (Rodentia, Muridae). Владивосток. Дальнаука. 2002. 142 с.

30. Кикнадзе И.И., Истомина А.Г., Салова Т.А. Функциональная морфология политенных хромосом хирономиды Chironomuso pilicomis F. из водоемов криолитозоны. // Цитология. 2002. Т. 44. С. 89-96.

31. Малыгин А.А., Грайфер Д.М., Зенкова М.А., Мамаев С.В., Карпова Г.Г. Аффинная модификация 80S рибосом из плаценты человека производными три- и гексауридилатов в качестве аналогов мРНК. // Молекулярная биология. 1992. Т. 26. С. 369-377.

32. Мисейко Г.Н., Кикнадзе И.И., Минсаринова Б.Х. Добавочные микрохромосомы у хирономид. // Генетика. 1971. Т. 200. С. 709-711.

33. Раджабли С.И., Исаенко А.А., Волобуев В.Т. Исследование природы и роли добавочных хромосом серебристо-черных лисиц. Сообщение IV. Поведение добавочных хромосом в мейозе. // Генетика. 1978. Т. 14. С. 438-443.

34. Раджабли С.И., Борисов Ю.М. Варианты системы добавочных хромосом у континентальных форм Apodemus peninsulae. // Докл. Акад. Наук СССР. 1979. Т. 248. С. 979-981.

35. Сиирин М.Т., Рубцов Н.Б., Карамышева Т.В., Катохин А.В., Карагодин ДА., Кикнадзе И.И. Молекулярно-цитогенетическая характеристика В-хромосом хирономид (Diptera, Chironomidae). // Цитология. 2003. Т. 45. С. 582-589.

36. Чубарева JI.A. К вопросу о добавочных хромосомах и параллелизме наследственной изменчивости у некоторых двукрылых насекомых. // Докл. Акад. Наук СССР. 1971. Т. 196. С. 695-699.

37. Abe S., Han S.H., Kojima Н., Ishibashi Y., Yoshida M.C. Differential staining profiles of B-chromosomes in the East-Asiatic wood mouse Apodemus peninsulae. Chrom. Sci. 1997. V. 1. P. 7-12.

38. Adam R.D. Chromosome-size variation in Giardia lamblia: the role of rDNA repeats. //Nucl. Acids Res. 1992. V. 20. P. 3057-3061.

39. Alfenito M.R., Birchler H. W. Molecular characterization of a maize В chromosome centric sequence. // Genetics. 1993. V. 135. P. 589-597

40. Amos A., Dover G. The distribution of repetitive DNAs between regular and supernumerary chromosomes in species of Glossina (tsetse): a two-step process in the origin of supernumeraries. // Chromosoma. 1981. V. 81. P. 673-690.

41. Araujo S.M.S.R., Pompolo S.G., Perfectti F., Camacho J.P.M. Integration of а В chromosome into the A genome of a wasp. // Proc. R. Soc. Lond. B. 2001. V. 268. P. 1127-1131.

42. Arnheim N., Krystal M., Sdhmickel R., Wilson G., et al. Molecular evidence for genetic exchanges among ribosomal genes on nonhomologous chromosomes in man and ape // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1980. V. 77. P. 7323-7327.

43. Bakkali M., Cabrero J., Camacho J.P.M. B-A interchanges are an unlikely pathway for В chromosome integration into the standard genome. // Chromosome research. 2003. V. 11. P. 115-123.

44. Batistoni R., Pesole G., Marracci S., Nardi I. A tandemely repeated DNA family originated from SINE-related elements in the Europian plethodontid salamanders (Amphibia, Urodela). // J. Mol. Evol. 1995. V. 40. P. 608-615.

45. Battaglia E. Cytogenetics of В chromosomes. // Caryologia. 1964. V. 17. P. 245-299.

46. Bedbrook J.R., O'Dell M., Flavell R.B. Amplification of rearranged repeated DNA sequences in cereal plants. //Nature. 1980. V. 288. P. 133-137.

47. Bekasova T.S., Vorontsov N.N., Korobitsyna K.V., Korablev V.P. B-chromosomes and comparative caryology of the mice of the genus Apodemus. // Genetica (Ned). 1980. V. 52-53. P. 33-43.

48. Benazzi Lentati G. Gametogenesis and egg fertilization in planarians. // Int. Rev. CytoL 1970. V.27.P. 101-179.

49. Beukeboom L.W. Bewildering Bs: an impression of the 1st В-chromosome conference. //Heredity. 1994. V. 73. P. 328-336.

50. Beukeboom L.W., Seif M., Mettenmeyer Т., Plowman A.B., Michiels N.K. Paternal inheritance of В chromosomes in a parthenogenetic hermaphrodite. // Heredity. 1996. V. 77. P. 646-654.

51. Beukeboom L.W. and Vrijenhoek R.C. Evolutionary genetics and ecology of sperm-dependent parthenogenesis. // J. Evol. Biol. 1998. V. 11. P. 755-782.

52. Bigot Y., Hamelin M.-H., Periquet G. Heterochromatin condensation and evolution of unique satellite-DNA families in two parasitic wasp species: Diadromus pulchellus and Eupelmus vuilleti (Hymenoptera). // Mol. Biol. Evol. 1990. V. 7. P. 351-364.

53. Blackman R.L. Cytogenetics of two species Euceraphis (Homoptera, Aphididae). II Chromosoma. 1976. V. 56. P. 393-408.

54. Blunden R., Wilkes T.J., Forster J.W., Jimenez M.M., Sandery M.J., Jarp A., Jones R.N. Identification of the E3900 family, second family of rye В chromosome specific repeated sequences. // Genome. 1993. V. 36. P. 706-711.

55. Bonn L.A., Martins-Santos I.C. Karyotype characterization of three species of the genus Trichomycterus (Teleostei, Siluriformes) from Igua9u river basin. // Genetica. 1999. V. 106. P. 215-221.

56. Brinkman J.N., Sessions S.K., Houben A., Green D.M. Structure and evolution of supernumerary chromosomes in the Pacific giant salamander, Dicamptodon tenebrosus. II Chromosome Res. 2000. V. 8. P. 477-485.

57. Brockhouse C., Bass J.A.B., Fereday R.M., Strauss N.A. Supernumerary chromosomes evolution in the Simulium vernum group (Diptera: Simulidae). // Genome. 1989. V. 32. P. 516-521.

58. Butler D.K., Metzenberg R.L. Premeiotic change of nucleolus organizer size in Neurospora. // Genetics. 1989. V. 122. P. 783-791.

59. Cabrero J., Alche J.D., Camacho J.P.M. Effects of В chromosomes of the grasshopper Eyprepocnemis plorans on nucleolar organizer regions activity.

60. Activation of a latent NOR on а В chromosome fused to an autosome. // Genome. 1987. V. 29. P. 116-121.

61. Cabrero J., Bakkali M., Bugrov A., Warchalowska-SIiwa E., Lopez-Leon M.D.,

62. Perfectti F., Camacho J.P. Multiregional origin of В chromosomes in the grasshopper Eyprepocnemis plorans. // Chromosoma. 2003. V. 112. № 4. P. 207-211.

63. Camacho J.P.M., Sharbel T.F., Beukeboom L.W. В chromosome evolution. // Phil. Trans. R. Soc. Lond. 2000. V. 355. P. 163-178.

64. Cano M.I. and Santos J.L. Cytological basis of the В chromosome accumulation mechanism in the grasshopper Heteracris littoralis (Ramb). // Heredity. 1989. V. 62.• P. 91-95

65. Carr G.D. and Carr R.L. Micro- and nucleolar-organising B-chromosomes in Calycadenia (Asteraceae). // Cytologica. 1982. V. 47. P. 79-87.

66. Carter C.R. and Smith-White S. The cytology of Brachycome lineariloba. 3. Accessory chromosomes. // Chromosoma. 1972. V. 39. P. 361-379.

67. Cavallaro Z.I., Bertollo L.A.C., Perfectti F., Camacho J.P.M. Frequency increase and mitotic stabilization of а В chromosome in the fish Prochilodus lineatus. // Chromosome Res. 2000. V. 8. P. 627-634.

68. Chandley A. A model for effective pairing and recombination at meiosis based on early replicating sites (R-bands) along chromosomes. // Hum. Genet. 1986. V. 72. P. 50-57.

69. Ф 74. Charlesworth B. Model for evolution of Y chromosomes and dosage compensation. //

70. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1978. V. 75. P. 5618-5622.

71. Charlesworth В., Sniegowski. P., Stephan W. The evolutionary dynamics of repetitive DNA in eukaryotes. // Nature. 1994. V. 371. P. 215-220.

72. Costanzi C. and Pehrson J.R. Histone macroH2Al is concentrated in the inactive X chromosome of female mammals. // Nature. 1998. V. 393. P. 599-601.m

73. Counce S.J., Meyer G.F. Differentiation of the synaptonemal complex and the kinetochore in Locusta spermatocytes studied by whole mount electron microscopy. // Chromosoma. 1973. V. 44. P. 231-253.

74. Darlington C.D. "Chromosome Botany". Allen and Unwin, London. 1956.

75. Dhar M.K., Friebe В., Koul A.K., Gill B.S. origin of an apperent В chromosome by mutation, chromosome fragmentation and specific DNA sequences amplification. // Chromosoma. 2002. V. 111. P. 332-340.

76. Dherawattana A., Sadanaga K. Cytogenetics of a crown rust-resistant hexaploid oat with 42 + 2 fragment chromosomes. // Crop. Sci. 1973. V. 13. P. 591-594.

77. Donald T.M., Houben A., Leach C.R., Timmis J.N. Ribosomal RNA genes specific to the В chromosomes in Brachycome dichromosomatica are not transcribed in leaf tissue. // Genome. 1997. V. 40. P. 674-681.

78. Donn G., Tischer E., Smith J.A., Goodman H.M. Herbicide resistant alfalfa cells: an example of gene amplification in plants. // J. Mol. Appl. Genet. 1984. V. 2. P. 621635.

79. Eickbush D.G., Eickbush Т.Н., Werren J.H. Molecular characterization of repetitive DNA sequences from а В chromosome. // Chromosoma. 1992. V. 101. P. 575-583.

80. Evans H.J., Buckland R.A., Pardue M.L. Location of the genes coding for 18S and 28S ribosomal RNA in the human genome. // Chromosoma. 1974. V. 48. P. 405-42)6.

81. Fontana P.G. and Vickery V.R. The B-chromosome system of Tettigidea lateralis (Say). П. New karyomorphs, patterns of pycnosity and giemsa-banding. // Chromosoma. 1975. V. 50. P. 371-391.

82. Fox D.P., Hewitt G.M., Hall D.J. DNA replication and RNA transcription of euchromatic and heterochromatic chromosome regions during grasshopper meiosis. // Chromosoma. 1974. V. 45. P. 43-62.

83. Franks Т.К., Houben A., Leach C.R., Timmis J.N. The molecular organization of а В chromosome tandem repeat sequence from Brachycome dichromosomatica. // Chromosoma. 1996. V. 105. P. 223-230.

84. Garrido M.A., Jamilena M., Lozano R., Ruis Rejon C., Ruts Rej6n M., Parker J.S. RDNA site number polymorphism and NOR inactivation in natural populations of Allium shoenoprasum. // Genetica. 1994. V. 94. P. 67-71.

85. Geiser D.M., Arnold M.L., Timberlake W.E. Wild chromosomal variants in Aspergillus nidulans. // Curr. Genet. 1996. V. 29. P. 293-300.

86. Giardino D, Finelli P, Russo S, Gottardi G, Rodeschini O, Atza MG, Natacci F, Larizza L. Small familial supernumeraiy ring chromosome 2: FISH characterization and genotype-phenotype correlation // Am. J. Med. Genet. 2002. V. 111. № 3. P. 319-323.

87. Gonz&lez-Fernandez A., Navarrete M.H., De La Torre G. Role of early replicating DNA in preventing nucleologenesis in proliferating plant cells. // Protoplasma. 1993. V. 175. P. 138-143.

88. Graf MD, Schwartz S. Molecular approaches for delineating marker chromosomes // Methods Mol. Biol. 2002. V. 204. P.211-218.

89. Green D.M. Cytogenetics of the endemic New Zealand frog, Leiopelma hochstetteri: extraordinary supernumerary chromosome variation and a unique sex-chromosome system. // Chromosoma. 1988. V. 97. P. 55-70.

90. Green D.M. Muller's ratchet and the evolution of supernumerary chromosomes. // Genome. 1990. V. 33. P. 818-824.

91. Green D.M. Supernumerary chromosomes in amphibians. In: Amphibian Cytogenetics and Evolution (ed. Green D.M., Sessions S.K.). San Diego. Academic Press. California. Inc. P. 333-358. 1991.

92. Green D.M., Zeyl C.V., Sharbel T.F. The evolution of hypervariable sex and supernumerary (B) chromosomes in the relict New Zealand frog, Leiopelma hochstetteri. // J. Evol. Biol. 1993. V. 6., P. 417-441.

93. Griego M.L., Bidau C.J. The dicentric nature of the metacentric В chromosome of Metaleptea brevicornis adspersa (Acridinae, acrididae). // Heredity. 2000. V. 84. P. 639-646.

94. Gutknecht J., Sperlich D., Bachmann L. A species specific satellite DNA family of Drosophila subsilvestris appearing predominantly in В chromosomes. // Chromosoma. 1995. V. 103. P. 539-544.

95. Hackstein J.H.P., Hochstenbach R., Hauschteck-Jungen E., Beukeboom L.W. Is the Y chromosome of Drosophila an evolved supernumerary chromosome? // BioEssays. 1996. V. 18. P. 317-323.

96. Hayata I., Shimba H., Kobayashi Т., Makino S. Preliminary accounts on the chromosomal polymorphism in the field mouse, Apodemus giliacus, a new form from Hokkaido. // Proc. Jpn. Acad. 1970. V. 46. P. 567-571.

97. Hayata I. Chromosomal polymorphism caused by supernumerary chromosomes in the field mouse, Apodemus giliacus. // Chromosoma. 1973. V. 42. P. 403-414.

98. Henderson A.S., Eicher E.M., Yu M.T., Atwood K.C. Variation in ribosomal RNA gene number in mouse chromosomes. // Cytogenet. Cell Genet. 1976. V. 17. P. 307-316.

99. Hewitt G.M. The integration of supernumerary chromosomes into the orthopteran genome. // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1973. V. 38. P. 183194.

100. Hewitt G.M. Meiotic drive for B-chromosomes in the primary oocytes of Myrmeleotettix maculatus (Orthoptera: Acrididae). // Chromosoma. 1986. V. 56. P. 381-391.

101. Hewitt G.M., East T.M., Shaw M.W. Sperm dysfunction produced by В chromosomes in the grasshoppers Myrmeleotettix maculatus. // Heredity. 1987. V. 58. P. 59-68.

102. Hillis D.M., Dixon M.T. Ribosomal DNA: molecular evolution and phylogenetic interference // Quart. Rev. Biol. 1991. V. 66. P. 411-453.

103. Hliscs R, Muhlig P., Claussen U. The spreading of metaphases is a slow process which leads to a stretching of chromosomes. // Cytogenet. Cell Genet. 1997. V. 76. P. 167-171.

104. Houben A., Leach C.R., Verlin D., Rofe R., Timmis J.N. A repetitive DNA sequence common to the different В chromosomes of the genus Brachycome. // Chromosoma. 1997a. V. 106. P. 513-519.

105. Houben A., Belyaev N.D., Leach C.R., Timmis J.N. Differences in histone H4 acetylation and replication timing between A and В chromosomes of Brachycome dichromosomatica. // Chromosome Res. 1997b. V. 5. P. 233-237.

106. Howard-Peebles P.N. A familial bisatellited extra metacentric microchromosome in man. // J. Hered. 1979. V. 70. P. 347-348.

107. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver staining of nucleolus organizer region with a protective colloidal developer: a 1 step method. // Experientia. 1980. V. 36. P. 1014-1015.

108. Ijdo J.W., Wells R.A., Baldini A., Reeders S.T. Improved telomere detection using a telomere repeat probe (TTAGGG)n, generated by PCR. // Nucleic Acids Research. 1991. V. 19. № 17. P. 4780.

109. Ishak В., Jaafar H., Maetz J.L., Rumpler Y. Absence of transcriptional activity of the В chromosomes of Apodemus peninsulae during pachytene. // Chromosoma. 1991. V. 100. P. 278-281.

110. Jackson R.C. and Newmark K.P. Effects of supernumerary chromosomes on production of pigment in Haplopappus gracilis. // Science. 1960. V. 132. P. 13161317.

111. Jamilena M., Ruis Rejon C., Ruis Rejon M. A molecular analysis of the origin of the Crepis capillaris В chromosome. // J. Cell. Sci. 1994. V. 107. P. 703-708.

112. Jamilena М., Garrido-Ramos M., Ruis Rej6n M., Ruis Rejon C., Parker J.S. Characterisation of repeated sequences from microdissected В chromosomes of Crepis capillaris. // Chromosoma. 1995. V. 104. P. 113-120.

113. John U.P., Leach C.R., Timmis J.N. A sequence specific to В chromosomes of Brachycome dichromosomatica. // Genome. 1991. V. 34. P. 739-744.

114. Jones R.N., Puertas MJ. The В chromosomes of rye (Secale cereale L). In Frontiers in plant science research (ed. K.K. Dhir & T.S. Sareen). P. 81-112. Dellji: Bhagwati Enterprises. 1993.

115. Jones R.N. and Rees H. В chromosomes. New York: Academic Press. 1982.

116. Jones R.N. Are В chromosomes selfish? In The evolution of genome size (ed. T. Cavalier-Smith). P. 397-425. London: Wiley. 1985.

117. Jones R.N. Tansley review no. 85: В chromosomes in plants. // New Phytol. 1995. V. 131. P. 411-434.

118. Kartavtseva I.V., Roslik G.V., Pavlenko M.V., Amachaeva E.Yu., Sawaguchi S., Obara Y. The B-chromosome system of the Korean field mouse Apodemus peninsulae in the Russian Far East. // Chrom. Sci. 2000. V. 4. P. 21-29.

119. Kayano H. Cytogenetic studies in Lilium callosum. III. Preferential segregation of a supernumerary chromosome in EMCs. // Proc. Jap. Acad. 1957. У. 33. P. 553-558.

120. Keyl H.G. and H&gele К. В chromosomen bei Chironomus. // Chromosoma. 1971.V. 35 P. 403-417.

121. Krai B. Chromosome characteristics of certain Murinae Rodents (Muridae) of the Asiatic Part of the USSR. // Zool. Listy. 1971. V. 20. P. 331-347.

122. Kupriyanova L.A. B-chromosomes in the karyotype of Lacerta parva. // Boul. Genetica. 1980. V. 52/53. P. 223-226.

123. Langdon Т., Seago C., Jones R.N., Ougham H., Thomas H., Forster J.W^, Jenkins G. De Novo evolution of satellite DNA on the rye В chromosome. // Genetics. 2000. V. 154. P. 869-884.

124. Leach C.R., Donald T.M., Franks Т.К., Spiniello S.S., Hanrahan C.F., Timmjs J.N. Organization and origin of а В chromosome centromeric sequence from Brachycome dichromosomatica. // Chromosoma. 1995. V. 103. P. 708-714.

125. Leclair S., Ansan-Melayah D., Rouxel Т., Balesdent M. Meiotic behavior of the minichromosome in the phytopathogenic ascomycete Leptosphaeria maculans. // Curr. Genet. 1996. V. 30. P. 541-548.

126. Lopez-Leon M.D., Cabrero J., Camacho J.P.M., Cano M.I., Santos J.L. A widespread В chromosome polymorphism maintained without apparent drive. // Evolution. 1992. V. 46 P. 529-539.

127. L6pez-Leon M.D., Neves N., Schwarzacher Т., Heslop-Harrison T.S., Hewitt G.M., Camacho J.P.M. Possible origin of а В chromosome deduced from its DNA composition using double FISH technique. // Chromosome Res. 1994. V. 2. P. 87-92.

128. Lopez-Leon M.D., Cabrero J., Camacho J.P.M. Changes in DNA methylation during development in the В chromosome NOR of the grasshopper Eyprepocnemis plorans. // Heredity. 1995. V. 74. P. 296-302.

129. Maistro E.L., Oliveira C., Foresti F. Cytogenetic characterization of a supernumerary chromosome segment and of В chromosomes in Astyanax scabripinnis (Teleostei, Charasidae). // Genetica. 2001. V. 110. P. 177-183.

130. Maluszynska J. and Schweizer D. Ribosomal RNA genes in В chromosomes of Crepis capillaris detected by non-radioactive in situ hybridization. // Heredity. 1989. V. 62. P. 59-65.

131. Matsuda T. On the accessory chromosomes of Aster I. The accessory chromosomes of Aster ageratoides group, // J. Sci. Hiroshima Univ., Ser. B. Div. 2 (Bot). 1970a. V. 13. P. 1-63.

132. Matsuda T. On the accessory chromosomes of Aster II. The origin and homology of accessory chromosomes in Aster ageratoides group. // J. Sci. Hiroshima Univ., Ser. B. Div. 2 (Bot.). 1970b. V. 13. P. 65-79.

133. Matsuda T. On the accessory chromosomes of Aster III. The accessory chromosomes of Aster scaba. // J. Sci. Hiroshima Univ., Ser. B. Div. 2 (Bot.). 1970c. V. 13. P. 81-90.

134. McAllister B.F. Isolation and characterization of a retroelement from В chromosome (PSR) in the parasitic wasp Nasonia vitripennis. // Insect. Mol. Biol. 1995. V. 4. P. 253-262.

135. McAllister B.F. and Werren J.H. Hybrid origin of а В chromosome (PSR) in the parasitic wasp Nasonia vitripennis. // Chromosoma. 1997. V. 106. P. 243-253.

136. Melander Y. Accessory chromosomes in animals, especially in Polycelis tenuis. //Hereditas. 1950. V. 50. P. 19-38.

137. Miao V.P., Covert S.F., VanEtten H.D. A fungal gene for antibiotic resistance on a dispensable ("B") chromosome. // Science. 1991a. V. 254. P. 1773-1776.

138. Miao V.P., Matthews D.E., VanEtten H.D. Identification and chromosomal locations of a family of cytochrome P-450 genes for pisatin detoxification in the fungus Nectriahaematococca. //Mol. Gen. Genet. 1991b. V. 226. P. 214- 223.

139. Mitas M., Yu., A., Dill J., Kamp T.J., Chambers E.J., Haworth I.S. Hairpin properties of single-stranded DNA containing a GC-reach triplet repeat: (GTG)15. // Nucl. Acids Res. 1995. V. 23. P. 1050-1059.

140. Moses M.J. Synaptonemal complex karyotyping inspermatocytes of the Chinese hamster (Cricetulus griseus). II Morphology of the XY pair in spread preparations. //Chromosoma. 1977. V. 70. P. 127-137.

141. Moss J.P. The adaptive significance of В chromosomes in rye. // Chromosomes Today. 1966. V. 1. P. 15-23.

142. Murphy W.J., Staynon R., O'Brien S.J. Evolution of mammalian genome organization inferred from comparative gene mapping. // Genome Biology. 2001. y. 2. № 6. P. 1-8.

143. Nemirov K., Henttonen H., Vaheri A., Plyusnin A. Phylogenetic evidence for host switching in the evolution of hantaviruses carried by Apodemus mice. // Virus Res. 2002. V. 90. P. 207-215.

144. Neo D.M., Moreira-Filho О., Camacho J.P.M. Altitudinal variation for В chromosomes frequency in the characid fish Astyanax scabripinnis. // Heredity. 2000. V. 85. P. 136-141.

145. Neves N., Barao A., Castilho A., Silva M., Morais L., Carvalho V., Viegas W., Jones R.N. Influence of DNA methylation on rye B-chromosome nondisjunction. // Genome. 1992. V. 35.650-652.

146. Nur U. A supernumerary chromosome with an accumulation mechanism in the lecanoid genetic system. // Chromosoma. 1962. V. 13. P. 249-271.

147. Nur U. Mitotic instability leading to an accumulation of B-chromosomes in grasshoppers. Chromosoma. 1969. V. 27. P. 1-19.

148. Obara Y., Sasaki S. Fluorescent approaches on the origin of B-chromosomes of Apodemus argenteus hokkaidi. // Chrom. Sci. 1997. V. 1. P. 1-5.

149. Oliver J.L., Posse F., Martfnez-Zapater J.M., Enriquez A.M., Ruis Rejon M. В chromosomes and El isoenzyme activity in mosaic bulbs of Scilla autumnallis. // Chromosoma. 1982. V. 85. P. 399-403.

150. Olmo E., Odierna G., Cobror O. C-band variability and phylogeny of Lacertidae. // Genetica. 1986. V. 71. P. 63-74.

151. Page B.T., Wanous M.K., Birchler J.A. Characterization of a Maize Chromosome 4 Centromeric Sequence: evidence for an evolutionary relationship with the В chromosome centromere. // Genetics. 2001. V. 159. P. 291-302.

152. Paliwal R.L. and Hyde B.B. The association of a single В chromosome with male sterility in Plantago coronopus. // Am. J. Bot. 1959. V. 46. P. 460-466.

153. Pardo M.G., Lopez-Le6n M.D., Cabrero J., Camacho J.P.M. Transmission analysis of mitotically unstable В chromosomes in Locusta migratoria. // Genome. 1994. V. 37. P. 1027-1034.

154. Patton J.L. В chromosome systems in the pocket mouse, Perognathus baileyi: meiosis and C-band studies. // Chromosoma. 1977. V. 60. P. 1-14.

155. Peppers J.A., Wiggins L.E., Baker R.J. Nature of В chromosomes in the harvest mouse Reithrodontomys megalotis by fluorescence in situ hybridization (FISH). // Chromosome Res. 1997. V. 5. P. 475-479.

156. Perfectti F., Werren J.H. The interspecific origin of В chromosomes: experimental evidence. // Evolution Int. J. Org. Evolution. 2001. V. 55. P. 10691073.

157. Phillips R.L., Kaeppler S.M., Olhoft P. Genetic instability of plant tissues culture: breakdown of normal controls. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 5222-5226

158. Pigozzi M.I., Solari A.J. Germ cell restriction and regular transmission of an accessory chromosome that mimics a sex body in the zebra finch Taeniopygia guttata. // Chromosome Res. 1998. V. 6. P. 105-113.

159. Pinkel D., Straume Т., Gray J.W. Cytogenetic analysis using quantitative high sensitivity fluorescence hybridization. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. P. 2934-2938.

160. Plowman A.B. and Bougourd S.M. Selectively advantageous effects of В chromosomes on germination behavior in Allium schoenoprasum L. // Heredity. 1994. V. 72. P. 587-593.

161. Procunier W.S. В chromosomes of Cnephia dacotensis and C. ornithophilia (Diptera, Simuliidae). // Can. J. Zool. 1975. V. 53. P. 1638-1647.

162. Pukkila PJ. and Skrzynia C. Frequent changes in the number of reiterated ribosomal RNA genes throughout the life cycle of the basidiomycete Coprinus cinereus. // Genetics. 1993. V. 133. P. 203-211.

163. Qi Z.X., Zeng H., Li X.L., Chen C.B., Song W.Q., Chen R.Y. The molecule-characterization of maize В chromosome specific ALFPs. // Cell Res. 2002. V. 12. P. 63-68.

164. Raman R. and Sharma T. DNA replication, G- and С-bands and meiotic behavior of supernumerary chromosomes of Rattus rattus. // Chromosoma. 1974. V. 45. P. 111-119.

165. Reed K.M., Beukeboom L.W., Eickbush D.G. Werren J.H. Junctions between repetitive DNAs on the PSR chromosome of Nasonia vitripennis: association of palindromes with recombination. II J. Mol. Evol. 1994. V. 38. P. 352-362.

166. Rhoades M.M. and Dempsey E. On the mechanism of chromatin loss induced by the В chromosome of maize. // Genetics. 1972. V. 71. P. 73-96.

167. Rhoades M.M. and Dempsey E. Chromatin elimination induced by the В chromosome of maize. // J. Heredity. 1973. V. 64. P. 13-18.

168. Robertson S.M., Ling V., Stanners C.P. Co-amplification of double minute chromosomes, multiple drug resistance, and cell surface P-glycoprotein in DNA-mediated transformants of mouse cells. // Mol.Cell Biol. 1984. V. 4. P. 500-506.

169. Rodland K.D. and Russell P.J. Regulation of ribosomal RNA cistron number in a strain of Neurospora with a duplication of the nucleolus organizer region. // Biochim. Biophys. Acta. 1982. V. 697. P. 162-169.

170. Russell P.J. and Rodland K.D. Magnification of rRNA gene number in Neurospora crassa strain with a partial deletion of the nucleolus organizer. // Chromosoma. 1986. V. 93. P. 337-340.

171. Russell P.J. and Wilkerson W.M. The structure and biosynthesis of fungal cytoplasmic ribosomes. // Exp. Mycol. 1980. V. 4. P. 281-337.

172. Salvador L.B., Moreira-Filho O. B-chromosomes in Astyanax scabripinnis (Pishes, Characidae). // Heredity. 1992. V. 69. P. 50-56.

173. Sandery M.J., Forster J.W., Blunden R., Jones R.N. Identification of a family of repeated sequences on the rye В chromosome. // Genome. 1990. V. 33. P. 90j8-913.

174. Sapre A.B., Deshpande D.S. Origin of В chromosomes in Coix L. through spontaneous interspecific hybridization. // J. Heredity. 1987. V. 78. P. 191-196.

175. Sawaguchi S., Obara Y., Kartavtseva I.V., Roslik G.V., Shin H.E., Han S.H. Novel maintenance mode of the В chromosomes in Apodemus peninsulae from 4 areas bordering on the Sea of Japan. // Intern. Symp. MAPEEG. Abstr. Vladivostok-1998a. P. 16-17.

176. Sawaguchi S., Obara Y., Kartavtseva I.V., Roslik G.V., Shin H.E., Han S.H. Maintenance mode of the В chromosomes in Apodemus peninsulae from four areas bordering on Sea of Japan. // Chrom. Sci. 1998b. V. 2. Abstr. of 49th Meet. Hiroshima P. 161.

177. Schartl M., Nanda I., Schlupp I., Wilde В., Epplen J.T., Schmidt M., Parzefall J. Incorporation of subgenomic amounts of DNA as compensation for mutational load in a gynogenetic fish. //Nature. 1995. V. 373. P. 68-71.

178. Serizawa K., Suzuki H., Tsuchiya K. A phylogenetic view on species radiation in Apodemus inferred from variation of nuclear and mitochondrial genes. // Biochem. Genet. 2000. V. 38. P. 27-40.

179. Sessions S.K. Cytogenetics and Evolution in Salamanders. // PhD dissertation. University of California. Berkeley. 1984.

180. Sharbel T.F., Pijnacker L.P., Beukeboom L.W. Multiple supernumerary chromosomes in the pseudogamous parthenogenetic flatworm, Polycelis nigra: lineage markers or remnants of genetic leakage? // Genome. 1997. V. 40. P. 850-856.

181. Sharbel T.F., Green D.M., Houben А. В chromosome origin in the endemic New Zealand frog Leiopelma hochstetteri through sex chromosome devolution. // Genome. 1998. V. 41. P. 14-22.

182. Shaw M.W. and Hewitt G.M. В chromosomes, selfish DNA and theoretical models: where next? In Oxford surveys in evolutionary biology. V. 7. (ed. D. Futuyma & J. Antonovics). P. 197-223. Oxford University Press. 1990.

183. Staub R.W. Leaf striping correlated with the presence of В chromosomes in maize. // J. Hered. 1987. V. 78. P. 71-74.

184. Steinemann M., Steinemann S., Lottspeich F. How Y chromosomes become genetically inert. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90. P. 5737-5741.

185. Stephens R.T. and Bregman A.A. The B-chromosome system, of the grasshopper Melanoplus femur-rubrum. // Chromosoma. 1972. V. 38. P. 297-311.

186. Stitou S., Diaz de la Guardia R„ Jimenez R., Burgos M. Inactive ribosomal cistrons are spread throughout the В chromosomes of Rattus rattus (Rodentia, Muridae). Implications for their origin and evolution. // Chromosome Res. 2000. V. 8. P. 305-311.

187. Sumner A.T. A simple technique for demonstrating centromeric heterochromatin. //Exp. Cell. Res. 1972. V. 75. P. 304-306.

188. Switonski M., Gustavsson I., HOjer К., Pl6en L. Synaptonemal complex analysis of the B-chromosomes in spermatocytes of the silver fox (Vulpes fulvus Desm). // Cytogenet. Cell Genet. 1987. V. 45. P. 84-92.

189. Telenius H., Pelmear A.H., TunnaclifFe A., et al. Cytogenetic analysis by chromosome painting using DOP-PCR amplified flow-sorted chromosomes. // Genes Chromosomes Cancer. 1992. V. 4. P. 257-266.

190. Tiersch T.R., Wachtel S.S. on the evolution of genome size in birds. // J. Heredity. 1991. V. 82. P. 363-368.

191. Tres L.L. Extensive pairing of the XY bivalent in mouse spermatocytes as visualized by whole-mount electron microscopy. // J. Cell Sci. 1977. V. 25. P. 1-15.

192. Van Etten W.J., Steen R.G., Nguyen H., et al. Radiation hybrid map of the mouse genome. // Nat. Genet. 1999. V. 22. № 4. P. 384-7.

193. Volleth M. Differences in the location of nucleolus organizing regions щ Europian vespertilionid bats. // Cytogenet. Cell Genet. 1987. V. 44. P. 186-197.

194. Vujosevic M., Zivkovic S. Numerical chromosome polymorphism in Apodemus flavicollis and A. sylvaticus (Mammalia, Rodentia) caused by supernumerary chromosomes. // Acta Veterinaria (Beograd). 1987. V. 37. P. 115121.

195. Vujosevic M. В chromosome polymorphism in Apodemus flavicollis (Rodentia, Mammalia) during five years. // Caryologia. 1992. V. 3-4. P. 347-352.

196. Vujosevic M., Blagoevic J. Seasonal changes of В chromosome frequencies within the population of Apodemus flavicollis (Rodentia) on Cer Mountain in Yugoslavia. //Acta. Theriol. 1995. V. 2. P. 131-137.

197. Wandstrat A.E., Schwartz S. Isolation and molecular analysis of inv dup(15) and construction of a physical map of a common breakpoint in order to elucidate their mechanism of formation // Chromosoma. 2000. V. 109. № 7. P. 498-505.

198. Warburton D., Atwood K.C., Henderson A.S. Variation in the number of genes for rRNA among human acrocentric chromosomes: correlation with frequency of satellite association. // Cytogenet. Cell Genet. 1976. V. 17. P. 221-230.

199. Watanabe K., Carter C.R., Smith-White S. The cytology of Brachycome lineariloba. 5. Chromosome relationships and phylogeny of the race A cytodemes (n = 2). // Chromosoma. 1975. V. 52. P. 383-397.

200. Waugh O'Neill R.J., O'Neill M.J., Graves J.A. Undermethylation associates with retroelement activation and chromosome remodeling in an interspecific mammalian hybrid. // Nature. 1998. V. 393. P. 68-72.

201. Werren J.H. The paternal-sex-ratio chromosome of Nasonia. // Am. Nat. 1991. V. 137. P. 392-402.

202. Werren J.H., StouthammerR. PSR (paternal sex ratio) chromosomes: the ultimate selfish genetic elements. // Genetica. 2003. V. 117. P. 85-101.

203. White MJ.D. Animal cytology and evolution. 3rd edn. London: Cambridge University Press. 1973.

204. Wojcik J.M., Wojcik A.M. В chromosome polymorphism in yellow-necked mouse. Abstr. 3-rd European Congr. Of Mam. P. 234. Finland. 1999.

205. Wurster-Hill D.H., Ward O.G., Kada H., Whittemore S. Banded chromosome studies and В chromosomes in wild-caught raccoon dogs, Nyctereutes procynoides viverrinus. // Cytogenet. Cell Genet. 1986. V. 42. P. 85-93.

206. Yonenaga-Yassudal Y. and Rodrigues M.T. Supernumerary chromosome variation, heteromorphic sex chromosomes and banding patterns in microteiid lizards of the genus Micrablepharus (Squamata, Gymnophthalmidae). // Chromosome Res. 1999. V. 7. P. 21-29.

207. Yosida Т.Н. A comparative study on nucleolus organizing region (NORs) in rattus special emphasis on the organizer differenciation and species evolution. // Proc. Japan Acad. 1979. V. 55. P. 10-15

208. Ziegler C.G., Lamatsch D.K., Steinlein C., Engel W., Schartl M., Schmid M. The giant В chromosome of the cyprinid fish Alburnus alburnus harbours the retrotransposon-derived repetitive DNA sequence. // Chromosome Res. 2003. V. 11. P. 23-35.

209. Zima J., Macholan M. B-chromosomes in the wood mice (genus Apodemus). // Acta. Theriologica. 1995. V. 3. P. 75-86.

Информация о работе

Лаухина, Ольга Владимировна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2005
ВАК 03.00.15

Диссертация

Структурно-молекулярная организация и эволюция В-хромосом восточноазиатской лесной мыши Apodemus Peninsulae - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы