Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурно-функциональное изучение участков инициации трансляции

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Нгуен Куанг Винь, 0

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Прокариотические рибосом-связывамцие сайты и их роль в эксцрессии генов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурно-функциональное изучение участков инициации трансляции"

В настоящее время интенсивное развитие генетической инженерии позволяет цроизводить в бактериальной системе большое количество важных биологически активных белков, таких как интерфе -рон, инсулин, гормон роста человека и т.п. Для оптимальной экспрессии клонированных генов в бактерии необходимо обеспечить следующие элементы: I. Сильные цромоторы, способные активно цроизводить транскрипцию для получения большого количества мЕНК. 2. Эффективные участки инициации трансляции, или рибосом-связы-вающие сайты, обеспечивающие оптимальную трансляцию полученных мИЖ в бактериальной клетке. Два этих элемента составляет основу регуляции экспрессии генов на двух уровнях: транскрипция и трансляция. Трансляционная регуляция, главным образом осуществляется на стадии инициации, по объему цроведенных исследований и изучен ности значительно уступает транскрипционной регуляции, хотя она также способна сильно влиять на экспрессию генов. Поэтому актуальной - задачей являются поиск и исследование оптимальных участков инициации трансляции, с помощью которых можно создать более эффективные векторы для экспрессии генов в бактерии.

Такие исследования стали возможными благодаря развитию современных методов генетической инженерии и нуклеотидного синтеза, позволяющих исследователям выделять из генома бактерии или химически синтезировать различные рибосом-связывающие сайты, а также направленно варьировать их размер и нуклеотидный состав.

В связи с этим целью настоящей работы являлось изучение влияния различных рибосом-связывающих сайтов, химически синтезированных и целенаправленно измененных по величине и нуклеотид-ному составу, на экспрессию клонированного гена.

Для этого необходимо было создать специальную векторную плазмиду, позволяющую легко клонировать и точно определять функциональную активность исследуемых рибосом-связывающих сайтов. В структуру этой векторной плазмиды входят синтетические цромотор и участок инициации трансляции, а также lacz, продукт которого. £-галактозидаза - легко тестируется биохимически. Штамм е.coli - хозяин для плазмид выбран такой, у которого lac -оперон делетирован и таким образом уровень jb-галактозидазы в клетке полностью обусловлен экспрессией плазмидного гена. Благодаря наличию удобных рестриктных сайтов в векторной плазмиде можно вводить различные рибосом-связывающие сайты и исследовать их влияние на экспрессию р>-галактозидазы.

Диссертационная работа выполнена в период 1982-1985 года и является частью комплексных исследований, проводимых в лаборатории химии генов Института биоорганической химии им.М.М.Шемякина АН СССР под руководством академика М.Н.Колосова, которому автор искренне признателен за постоянное внимание и поддержку. Автор выражает глубокую благодарность старшему научному сотруднику лаборатории кандидату химических наук В.Г.Коробко за научное руководство настоящей диссертацией и практическую помощь на протяжении всего периода ее выполнения, а также кандидату химических наутс В.Н.Добрынину и его сотрудникам за синтез олигонук-леотидов, использованных в этой работе.

- б

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Нгуен Куанг Винь, 0

ВЫВОДЫ

1. Химико-ферментативными методами синтезировано два варианта последовательности Шайна-Далгарно: так называемая идеальная последовательность бб и последовательность бб липопротеинового гена е.сои. На их основе создано 7 полностью синтетических функционально активных участков инициации трансляции различной структуры.

2. Сконструирована векторная плазмида с синтетическим регуляторным участком и полусинтетическим геном ]Ъ-галактози~ дазы, позволяющая количественно тестировать эффективность исследуемых рибосом-связывающих сайтов.

3. Осуществлено клонирование полученных участков инициации трансляции в этой плазмиде и цроведен количественный анализ их влияния на экспрессию гена (Ь-галактозидазы.

4. Показано, что самую высокую функциональную активность имеют участки инициации трансляции с липоцротеиновым эо. При увеличении размера спейсера и особенно цри уничтожении инициирующего кодона резко уменьшается экспрессия 1асг. Наоборот, цри-сутствие дополнительного 5-лидерного участка мРБК в виде операторной последовательности цриводит к повышению уровня биосинтеза р>-галактозидазы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Нгуен Куанг Винь, 0, Москва

1. Steitz J.A. Polypeptide chain initiation: Nucleotide sequence of the three ribosomal binding sites in bacteriophage R17 RNA. Nature, 1969, v. 224, N 5223, p. 957-964.

2. Hindley J., Staples D.H. Sequence of ribosome binding site in bacteriophage Qß RNA. Nature, 1969, v. 224, N 5223, p. 964967.

3. Gupta S.L., Chen J., Schaefer L., Lengyel P., Weissman S.M. Nucleotide sequence of a ribosome attachment site of bacteriophage f2 RNA. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1970, v. 39, N 5, p. 883-888.

4. Gold L., Pribnow D., Schneider Т., Shinedling S., Singer B.S., Stormo G. Translational initiation in prokaryotes. Ann. Rev. Microbiol., 1981, v. 35, p. 365-403.

5. Gren E.J. Recognition of messenger RNA during translational initiation in Escherichia coli BIOCHIMIE, 1984, v. 66, N 1, p. 1-29.

6. Грен Э.Я. Узнавание матричных РЖ цри инициации трансляции у прокариот. Мол. биол., 1981, т. 15, вып. 4, с. 725-751.

7. Steitz J.А. RNA.RNA interactions during polypeptide chain initiation. In: Ribisomes. Univ. Park Press USA, 1979, p. 479-495.

8. Atkins J.F., Steitz J.A., Anderson C.W., Model P. Binding of mammalian ribisomes to MS2 phage RNA reveals an overlapping gene encoding a lysis function. Cell, 1979, v. 18, N 2,p. 247-256.

9. Beremand M.N., Blumenthal Т. Overlapping genes in RNA phage: a new protein implicated in lysis. Cell, 1979, v. 18, N 2, p. 257-266.

10. Model P., Webster R.E., Zinder N.D., Characterizatien of Op3, a lysis-defective mutant of bacteriophage f2. Cell, 1979, v. 18, N 2, p. 235-246.

11. Murialdo H., Siminovitch L. The morphogenesis of bacteriophage lambda. IV. Identification of gene products and control of the expression of the morphogenetic information. Virology, 1972, v. 48, N 3, p. 785-832.

12. Ray P.N., Pearson 11.L. Functional inactivation of bacteriophage ^ morphogenetic gene mRNA. Nature, 1975, v. 253, N 5493, p. 647-650.

13. Ray P.N., Pearson M.L. Evidence for post-transcriptional control of the morphogenetic genes of bacteriophage lambda. J. Mol. Biol., 1974, v. 85, N 1, p. 163-175.

14. Dunn J.J., Studier F.W. Nucleotide sequence from the genetic left end of bacteriophage T7 DNA to the begining of gene 4 -J. Mol. Biol., 1981, v. 148, N 4, p. 303-330.

15. Монастырская Г.С., Губанов B.B., Гурьев С.О., Липкин В.М., Свердлов Е.Д. Первичная структура фрагмента ecori-f генов гро в, с и соответствующих областей р>— и р-субъ-единиц РНК-полимеразы E.coii. Биоорган, химия, 1980, т. 6, й 7, с. 1106-1109.

16. Mackie G.A. Nucleotide sequence of the gene for ribosomal protein S20 and its flanking regions. J. Biol. Chem., 1981, v. 256, N 15, p. 8177-8182.

17. Young I.G., Rogers B.L., Campbell H.D., Jaworowski A. and Shaw D.C. Nucleotide sequence coding for the respiratory NADH dehydrogenase of E.coli. UUG initiation codon. Europ. J. Biochem., 1981, v. 116, N 1, p. 165-170.

18. Buchel D.E., Gronenborn B. and Muller-Hill B. Sequence of the lactose permease gene. Nature, 1980, v. 283, N 5747, p. 541-545.

19. Files J.G., Weber K., Coulondre C. and Miller J.H. Identification of the UUG-codon as a translational initiation codon in vivo. J. Mol. Biol., 1975, v. 95, N 2, p. 327-330.

20. Steege D.A. 5'-Terminal nucleotide sequence of E.coli lactose repressor mRNA: features of translational initiation and reinitiation sites. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1977, v. 74, N 10, p. 4163-4167.

21. Napoli C., Gold L. and Singer B.S. Translational reinitiation in the rllB cistron of bacteriophage T4. J. Mol. Biol., 1981, v. 149, N 3, p. 433-449.- n

22. Cory S., Dube S.K., Clark B.F.C. and Marker K.A. Separation of two initiator tRNAs from E.coli FEBS lett., 1968, v. 1, N 4, p. 259-261 .

23. Abraham J., Mascarenhas D., Fischer R., Benedik M., Campbell A., Echols H. DNA sequence of regulatory regionfor integration gene of bacteriophage A . Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N 5, p. 2477-2481.

24. Dunn J.J., Buzash-Pollert E., Studier F.W. Mutations of bacteriophage T7 that affect initiation of synthesis of gene 0.3 protein Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v. 75, N 6, p. 2741-2745.

25. Belin D. Bacteriophage T4 rllB protein synthesis with a temperature-sensitive mutation in the rllB initiation codon. Mol. Gen. Genet., 1979, v. 171, N 1, p.35-42.

26. Belin D., Hedgpeth J., Selzer G.B., Epstein R.H. Temperature-sensitive mutation in the initiation codon of the rllB gene of bacteriophage T4 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979,v. 76, N 2, p. 700-704.

27. Ohsawa H., Herrlich P. and Gualerzi C. In vitro template activity of 0.3 mRNA from wild type and initiation mutants of bacteriophage T7 Mol. Gen. Genet., 1984, v. 196, N 1, p. 53-58.

28. Hoess R.H., Foeller C., Bidwell K. and Landy A. Site-specific recombination functions of bacteriophage A : DNA sequenceof regulatory regions and overlapping structural genes for int and xis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N 5, p. 2482-2486.

29. Taniguchi T., Weissmann C. Site-directed mutation in the initiator region of the bacteriophage Qp> coat cistron and their effect on ribosome binding. J. Mol. Biol., 1978, v. 118, N 4, p. 533-565.

30. Ganoza M.C., Fraser A.R. and Neilson T. Nucleotides contiguous to AUG affect translational initiation. Biochemistry, 1978, v. 17, N 14, p. 2769-2775.

31. Schmitt M., Kyriatsoulis A. and Gassen H.G. The context theory as applied to the decoding of the initiator tRNA by E.coli ribosomes. Europ. J. Biochem., 1982, v. 125, N 2, p. 389-394.

32. Ganoza M.C., Sullivan P., Cunnigham C., Hader P., Kofoid E.C. and Neilson T. Effect of bases contiguous to AUG on translation initiation. J. Biol. Chem., 1982, v. 257, N 14,p. 8228-8232.

33. Eckhardt H. and Liihrmann R. Recognition by initiator tRNA of a Uridine 5' adjacent to the AUG codon: Different conformational states of formylatable methionin-accepting tRNA at the ribosomal P-site. Biochemistry, 1981, v. 20, N 8, p. 2075-2080.

34. Hui A., Hayflick J., Dinkelspiel K. and de Boer H.A. Mutagenesis of the three bases preceding the start codon of the-galactosidase mRNA and its effect on translation in E.coli EMBO J., 1984, v. 3, N 3, p. 623-629.

35. Schmitt M., Mandershied U., Kiriatsoulis A., Brinckmann U. and Gassen H.G. Tetranucleotides as effectors for the binding of initiator tRNA to E.coli ribosomes. Europ. J. Biochem., 1980, v. 109, N 1, p. 291-299.

36. Robertson H.D., Barrell B.G., Weith H.L. and Donelson J.E. Isolation and sequence analysis of a ribosome-protected fragment from bacteriophage (pX174 DNA. Nature New Biol., 1973, v. 241, N 106, p. 38-40.

37. Jay E., Seth A.K., Jay G. Specific binding of a chemically synthesized prokaryotic ribosome recognition site. J. Biol. Chem., 1980, v. 255, N 9, p. 3809-3812.

38. Shine J., Dalgarno L. The 3'-terminal sequence of E.coli 16S ribosomal RNA: complementarity to nonsense triplets and ribosome binding sites Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, N 4, p. 1342-1346.

39. Shine J. and Dalgarno L. Determinant of cistron specificity in bacterial ribosomes. Nature, 1975, v. 254, N 5495,p. 34-38.

40. Steitz J.A. and Jakes K. How ribosomes select initiator regions in mRNA: Basepair formation between the 31 terminusof 16S rRNA and the mRNA during initiation of protein synthesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v. 72, N 12, p. 4734-4738.

41. Steitz J.A., Steege D.A. Characterization of two mRNA.rRNA complex implicated in the initiation of protein biosynthesis. J. Mol. Biol., 1977, v. 114, N 4, p. 545-548.

42. Singer B.S., Gold L., Shinedling S.T., Colkitt M., Hunter L.R., Pribnow D. and Nelson M.A. Analysis in vivo of translational mutants of the rllB cistron of bacteriophage T4. J. Mol. Biol., 1981, v. 149, N 3, p. 405-432.

43. Schwartz M., Roa M., Debarbouille M. Mutations that affect lam B gene expression at a posttranscriptional level. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, v. 78, N 5, p. 2937-2941.

44. Casabadan M.J., Chou J. and Cohen S.N. Overproduction of the Tn3 transposition protein and its role in DNA transposition. Cell, 1982, v. 28, N 2, p. 345-354.

45. Backman K. and Ptashne M. Maximizing gene expression on a plasmid using recombination in vitro Cell, 1978, v. 13, N 1, p.65-71.

46. Goeddel D.V., Heyneker H.L., Hozumi T., Arentzen R., Ita-kura K., Yansura D.G., Ross M.J., Miozzari G.,Crea R. and Seeburg P.H. Direct expression in E.coli of DNA sequence coding for human growth hormone. Nature, 1979, v. 281, N 5732, p. 544-548.

47. Thummel C.S., Burgess T.L., Tjian R. Properties of Simian Virus 40 small t-antigen overproduced in Bacteria J. Virol., 1981, v. 37, N 2, p. 683-697.

48. Gheysen D., Iserentant D., Derom C. and Fiers W. Systematic alteration of the nucleotide sequence preceding the translation initiation codon and effects on bacterial expression of the cloned SV40 small t-antigene Gene, 1982, v. 17,1. N 1 , p. 55-63.

49. Johston H.M., Roth J.R. DNA sequence changes of Mutations altering attenuation control of the histidine operon of Salmonella typhimurium. J. Mol. Biol., 1981, v. 145, N 4, p. 735-736.

50. Schottel J.L., Sninsky J.J. and Cohen S.N. Effects of alterations in the translation control region on bacterial gen expression: use of cat gene constructs transcribed from! the lac promotor as a model system Gene, 1984, v. 28, N 2, p. 177-193.

51. Jay E., Seth A.K., Rommens J., Sood A., Jay G. Gene expression: chemical synthesis of E.coli ribosome binding sites and their use in directing the expression of mammalian proteins in bacteria Nucl. Acids Res., 1982, v. 10, N 20, p. 6319-6329.

52. Roberts T.M., Bikel I., Yocum R.R., Livingston D.M., and Ptashne M. Synthesis of simian virus 40 t antigen in E.coli Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v. 76, N 11, p. 55965600.

53. Guarente L., Laurer G., Roberts T.M. and Ptashne M. Improved methods for maximizing expression of a cloned gene: a bacterium that synthesizes rabbit jS-globin. Cell, 1980,v. 20, N 2, p. 543-553.

54. Thomas D.Y., Dubuc G., Narang S. Escherichia coli plasmid vectors containing synthetic translational initiation sequences and ribosome binding sites fused with the lac Z gene -Gene, 1982, v. 19, N 2, p. 211-219.

55. Jay G., Khoury G., Seth A.K. and Jay E. Construction of a general vector for efficient expression of mammalian proteins in bacteria: use of a synthetic ribosome binding site Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, v. 78, N 9, p. 5543-5548.

56. Matteucci M.D. and Heyneker H.L. Targeted random mutagenesis: the use of ambiguously synthesized oligonucleotides tomutagenize sequences immediately 5' of an ATG initiation codon Nucl. Acids Res., 1983, v. 11, N 10, p. 3113-3121.

57. Derom C., Gheysen D. and Fiers W. High-level synthesis in E.coli of the SV40 small-t antigen under control of the bacteriophage lambda PL promoter. Gene, 1982, v. 17, N 1, p. 45-54.

58. Roberts T.M., Kacich R. and Ptashne M. A general method for maximizing the expression of a cloned gene Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v. 76, N 2, p. 760-764.

59. Iserentant D. and Fiers W. Secondary structure of mRNA and efficiency of translation initiation Gene, 1980, v. 9,1. N 1, p. 1-12.

60. Meyer T.F., Beyreuther K. and Geider K. Recognition of two initiation codons for the synthesis of phage fd gene 2 protein Mol. Gen. Genet., 1980, v. 180, N 3, p. 489-494.

61. Chang A.C.Y., Nunberg J.H., Kaufman R.J., Erlich H.A., Schimke R.T. and Cohen S.N. Phenotypic expression in E.coli of a DNA sequence coding for mouse dihydrofolate reductase. Nature, 1978, v. 275, N 5681, p. 617-624.

62. Scherer G.F.E., Walkinshaw M.D., Arnott S., Morre D.J. The ribosome binding sites recognited by E.coli ribosome haveregions with signal character in both the leader and protein coding sequences Nucl. Acids Res., 1980, v. 8, N 17, p. 3895-3907.

63. Stormo G., Schneider T., Gold L. Characterization of trans-lational initiation sites in E.coli Nucl. Acids Res., 1982, v. 10, N 9, p. 2971-3011.

64. Band L. and Henner D.J. Bacillus subtilis requires a "stringent" Shine-Dalgarno region for gen expression DNA, 1984, v. 3, N 2, p. 17-21.

65. Jay E., Jay F. and Jay G. Comparison of synthetic ribosome binding sites for the efficient expression of eukaryotic proteins in E.coli. In: Gen amplification and analysis. Elsevier, New York, USA, 1983, p. 90-101.

66. Wulff D.L., Beher M., Izumi S., Beck J., Mahoney M., Shi-matake H. , Brady C'. , Court D. and Rosenberg M. Structure and function of the cy control region of bacteriophage Lambda J. Mol. Biol., 1980,v. 138, N 2, p. 209-230.

67. Taniguchi T., Guarente L., Roberts T.M., Kimelman D., Douhan I.J. and Ptashne M. Expression of the human fibroblast interferon gene in Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N 9, p. 5230-5233.

68. Goeddel D.V., Shepard H.M., Yelverton E., Leung D., Crea R., Sloma A. and Pestka S. Synthesis of human fibroblast interferon by E.coli. Nucl. Acids Res., 1980, v. 8, N 18,p. 4057-4074.

69. Gilmer T.M., Parsons J.Т. and Erikson R.L. Construction ofplasmids for expression of Rus sarcoma virus transforming sr сprotein, p60 , in E.coli Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1982, v. 79, N 7, p. 2152-2156.

70. Yelverton E., Leung D., Week P., Gray P.W. and Goeddel D.V. Bacterial synthesis of a novel human leukocyte interferon. Nucl. Acids Res., 1981, v. 9, N 3, p. 731-741.

71. Week P.K., Apperson S., Stelbing N., Gray P.W., Leung D., Shepard H.M. and Goeddel D.V. Antiviral activities of hybrids of two major human leukocyte interferons. Nucl. Acids Res., 1981, v. 9, N 22, p. 6153-6166.

72. Windass J.D., Newton C.R., de Mayer-Guignard J., Moore V.E., Markham A.F. and Edge M.D. The construction of a synthetic E.coli trp promoter and its use in the expression of a synthetic interferon gene. Nucl. Acids Res., 1982, v. 10, N 21 , 6639-6657.

73. Lawn R.M., Adelman J., Bock S.C., Franke A.E., Houck C.M., Najarian R.C., Seeburg P.H. and Wion K.L. The sequence ofhuman serum albumin cDNA and its expression in E.coli. -Nucl. Acids Res., 1981, v. 9, N 22, p. 6103-6114.

74. Edman J.C., Hallewell R.A., Valenzuela P., Goodman H.M. and Rutter W.J. Synthesis of hepatitis B surface and core antigens in E.coli. Nature, 1981, v. 291, N 5815,p. 503-506.

75. Cannistrato V.J. and Kennell D. Escherichia coli lac operator mRNA affects translation initiation of -galacto-sidase mRNA Nature, 1979, v. 277, N 5695, p. 407-409.

76. Queen C. and Rosenberg M. Differential translation efficiency explains discoordinate expression of the galactose operon Cell, 1981, v. 25, N 1, p. 241-249.

77. Porter A.G. and Hindley J. The binding of Qj?> initiator fragments to E.coli ribosomes. FEBS Letters, 1973, v. 33, N 3, p. 339-342.

78. Berzin V., Borisova G.P., Cielens I., Gribanov V.A., Jansone I., Rosenthal G. and Gren E.J. The regulatory region of MS2 phage RNA replicase cistron. Functional activity of individual MS2 RNA fragments. J. Mol. Biol., 1978, v. 119, N 1, p. 101-131.

79. Jansone I., Berzin V. , Gribanov V. and Gren E.J. The regulatory region of MS2 phage RNA replicase cistron. III. Characterization of fragments resulting from S1 nuclease digestion. Nucl. Acids Res., 1979, v. 6, N 5, p. 1747-1760.

80. Backendorf C., Overbeek G.P., van Boom J.H., van der Marel G., Veeneman G., van Duin J. Role of 16S RNA in ribosome messenger recognition. Eur. J. Biochem., 1980, v. 110, N 2, p. 599-604.

81. Eckhardt H. and Luhrmann R. Blocking of the initiation of protein biosynthesis by a pentanucleotide complementary to the 3' end of E.coli 16S rRNA. J. Biol. Chem., 1979,v. 254, N 22, p. 1185-1188.

82. Schoner B.E., Hsiung H.M., Belagaje R.M., Mayne N.G. and Schoner R.G. Role of mRNA translational efficiency in bovine growth hormone expression in E.coli Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1984, v. 81, N 17, p. 5403-5407.

83. Berzin V., Cielens I., Jansone I. and Gren E.J. The regulatory region of phage fr replicase cistron. III. Initiation activity of specific fr RNA fragments. Nucl. Acids Res., 1982, v. 10, N 23, p. 7763-7775.

84. Ganoza M.C. Novel factors in protein biosynthesis. Canad. J. Biochem., 1977, v. 55, N 2, p. 267-281.

85. Shine J. and Dalgarno L. Terminal-sequence analysis of bacterial ribosomal RNA. Europ. J. Biochem., 1975, v. 57, N 1, p. 221-230.

86. Atkins J. Is UAA or UGA part of the recognition signal for ribosomal initiation? Nucl. Acids Res., 1979, v. 7, N 4, p. 1035-1041.

87. Kaempfer R. Ribosomal subunit exchange during protein synthesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1968, v. 61, N 1, p. 106-113.

88. Martin J. and Webster R.E. The in vitro translation of a terminating signal by a single Escherichia coli ribosome.- J. Biol. Chem., 1975, v. 250, N 20, p. 8132-8139.

89. Piatt T. and Yanofsky C. An intercistronic region and ribosome binding site in bacterial messenger RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v. 72, N 6, p. 2399-2403.

90. Tinoco I.J., Borer P.N., Dengler B., Levine M.D. Improved estimation of secondary structure in ribonucleic acids -Nature New Biol., 1973, v. 246, p. 40-41.

91. Summers W.C. The process of infection with coliphage T7. IV. Stability of RNA in bacteriophage-infected cells. -J. Mol. Biol., 1970, v. 51, N 3, p. 671-678.

92. Krisch H.M. and Allet B. Nucleotide sequences involved in bacteriophage T4 gene 32 translational self-regulation.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 79, N 16, p. 49374941 .

93. Movva N.R., Nakamura K. and Inouye M. Regulatory regionof the gene for the omp A protein, a major outer membrane I protein of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N 7, p. 3845-3849.

94. Nakamura K., Pirtle R.M., Pirtle I.L., Takeishi K. and Inouye M. Messenger ribonucleic acid of the Lipoprotein of the E.coli outer membrane. J. Biol. Chem., 1980, v. 255, N 1, p. 210-216.

95. Min Jou W., Haegeman G., Ysebaert M. and Fiers W. Nucleotide sequence of the gene coding for the bacteriophage MS2 coat protein. Nature, 1972, v. 237, N 5350, p. 82-88.

96. Lodish H.F. Secondary structure of bacteriophage f2 ribonucleic acid and the initiation of in vitro protein biosynthesis. J. Mol. Biol., 1970, v. 50, N 3, p. 689-702.

97. Merril C.R., Gottesman M.E. and Adhya S.L. Escherichia coli gal operon proteins made after prophage Lambda induction -J. Bact., 1981, v. 147, N 2, p. 875-887.

98. Ambulos N.P., Chow J.H., Mongkolsuk S., Preis L.H., Vol-lmar W.R. and Lovett P.S. Constitutive variants of the pC 194 cat gene exhibit DNA alterations in the vicinityof the ribosome binding site sequence Gene, 1984, v. 28, N 2, p. 171-176.

99. Hall M.N., Gabay J., De Barbouille M. and Schwartz M. A role for mRNA secondary structure in the control of translation initiation Nature, 1982, v. 295, N 5851, p. 616-618.

100. Savagean M.A. Genetic regulatory mechanisms and the ecological niche of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, N 6, p. 2453-2455.

101. Dube S.K., Rudland P.S. Control of translation by T4 phage:-altered binding of disfavoured messengers. Nature, 1970, v. 226, N 5248, p. 820-824.

102. Rahmsdorf H.J., Herrlich P., Pai S.H., Schweiger M., Wittmann H.G. Ribosomes after infection with bacteriophage T4 and T7. Mol. Gen. Genet., 1973, v. 127, N 3, p. 259-271.

103. Gold L., O'Farrell Z.P. and Russel M. Regulation of gene 32 expression during bacteriophage T4 infection of E.coli

104. J. Biol. Chem., 1976, v. 251, N 22, p. 7251-7270.

105. Lemaire G., Gold L. and Yarus M. Autogenous translational repression of bacteriophage T4 gene 32 expression in vitro j. Mol. Bio., 1978, v. 126, N 1, p. 73-90.

106. Trojanowska M., Miller E.S., Karam J., Stormo G. and Gold L. The bacteriophage T4 reg A gene: primary sequence of a translational repressor Nucl. Acids Res., 1984, v. 12,1. N 14, p. 5979-5993.

107. Spahr P.F., Farber M., Gesteland R.F. Binding site on R17 RNA for coat protein. Nature, 1969, v. 222, N 5192, p. 455-458.

108. Gralla J., Steitz J.A. and Crothers D.M. Direct physical evidence for secondary structure in an isolated fragment of R17 bacteriophage mRNA. Nature, 1974, v. 248, N 5445, p. 204-208.

109. Konings R.N.H., Ward R. , Francke B. and Hofschneider P.H. Gene order of RNA bacteriophage MS2 Nature, 1970, v. 226, N 5245, p. 604-607.

110. Iserentant D. and Fiers W. Secondary structure of the 51 end of bacteriophage MS2 RNA Eur. J. Biochem., 1979,v. 102, N 2, p. 595-604.

111. Уотсон Дж. Только растущие отрезки (+)-цепи служат матрицами для синтеза А-белка В кн. Молекулярная биология гена. Москва, Мир, 1978, с. 427.

112. Horinouchi S. and Weisblum B. Posttranscriptional modification of mRNA conformation: Mechanism that regulates ethythromycin-induced resistance. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N 12, p. 7079-7083.

113. Kolakofsky D., Weissmann C. Qjb replicase as repressor of Q|b RNA-directed protein synthesis. Biochim. Biophys. Acta, 1971, v. 246, N 3, p. 596-599.

114. Nomura M., Yates J.L., Dean D. and Post L.E. Feedback regulation of ribosomal protein gen expression in E.coli -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N 12, p. 7084-7088.

115. Brot N., Caldwell P., Weissbach H. Autogenous control of E.coli ribosomal protein L10 synthesis in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N 5, p. 2592-2595.

116. Pumpen P., Kozlovskaya T.M., Borisova G.P., Bichko V.V., Dishler A., Kalis J., Kukaine R.A. and Gren E.J. Expression of hepatitis В virus surface antigen gene in E.coli. Gene, 1984, v. 30, N 3, p. 201-210.

117. Власов В.П. Ферментативный синтез искусственного гена пептида сна. Автореф. дис. на соискание уч. ст. канд. хеш. наук. Москва, Институт биоорганической химии АН СССР, 1984.

118. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике. Москва, Мир, 1976, с. 324-327.

119. Чувпило С.А., Кравченко В.В. Твердофазный метод определения нуклеотидной последовательности ДНК. Биоорган, химия, 1983, т. 9, JS 12, с. 1634-1637.

120. Welply J., Fonler A., Backwith J. and Zabin I. Position of early nonsense and deletion mutations in lacZ. J. Bacterid., 1980, v. 142, N , p. 732-734.

121. Muller-Hill B. and Kania J. Lac repressor can be fused to P> -galactosidase. Nature, 1974 , v. 249, N , p. 561562.

122. Scherer G.E.F., Walkinshaw M.D., Arnott S. A computer aided oligonucleotide analysis provides a model sequence for RNA polymerase promoter recognition in E.coli. Nucl. Acids Res., 1978, v. 5, N 10, p. 3751-3777.

123. Коробко В.Г., Добрынин B.H., Чувпило С.А., Северцова И.В., Колосов М.Н. Промоторные векторы с синтетическим участком узнавания рибосомы. Биоорган, химия, 1981, т. 7, J^ 12, с. 1877-1879.

124. Hirashima A., Wang S., Inouye М. Cell-free synthesis ofa specific lipoprotein of the E.coli outer membrane directed by purified messenger RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, N 10, p. 4149-4153.

125. Коробио В.Г., Добрынин В.Н., Северцова И.В., Власов В.П., Колосов М.Н. Полностью синтетические искусственные гены брадикинина и пептида сна. Биоорган, химия, 1981, т. 7, lb 12, с. I88I-I884.

126. Munson L.M., Stormo G.D., Niece R.L. and Reznikoff W.S. LacZ translation initiation mutations. J. Mol. Biol., 1984, v. 177, N 4, p. 663-684.

127. Maniatis Т., Fritsch E.E., Sambrook J. In: Molecular cloning. A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory, USA, 1982.

128. Thayer R.E. An improved method for detecting foreign DNA in plasmids of E.coli. Analyt. Biochem., 1979, v. 98, p. 60-63.

129. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction method for screening recombinant plasmid DNA. Nucl. Acids Res., 1979, v. 7, N 6, p. 1513-1523.

130. Maxam A.M., Gilbert W. A new method for sequencing DNA. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v. 74, N 2, p. 560-564.